CZ2000788A3

CZ2000788A3 - Použití ribavirinu pro výrobu farmaceutických prostředků, použití interferonů alfa pro výrobu farmaceutických prostředků a farmaceutické výrobky

Info

Publication number: CZ2000788A3
Application number: CZ2000788A
Authority: CZ
Inventors: Janie K. Albrecht
Original assignee: Schering Corporation
Priority date: 1998-09-16
Filing date: 1998-09-16
Publication date: 2000-06-14

Abstract

Řešení poskytuje způsob léčby pacientů s chronickou infekcí hepatitidou C, kteráje rezistentní na léčení interferonemalfa, pomocí použití kombinace ribavirinu a interferonů alfa. Kombinovanáterapieje účinnější než léčbatěmito látkami jednotlivě.

Description

Použití ribavirinu pro výrobu farmaceutických prostředků, použití interferonu alfa pro výrobu farmaceutických prostředků a farmaceutické výrobky

Obiast techniky

Chronická infekce virem hepatitidy C je zákeřná a pomalu postupující nemoc, která má významný dopad na kvalitu života. Může nakonec vyústit vcirhózu jater, dekompenzaci jater anebo hepatoceiulární karcinom.

Dosavadní stav techniky

Pro léčení chronické infekce hepatitidou C je obyčejně používána monoterapie interferonem alfa. Avšak toto léčení není vždy efektivní a někdy má za následek nesnesitelné vedlejší účinky úměrné dávce a době trvání léčení. Pro léčení chronické infekce hepatitidou C byla navržena monoterapie ribavirinem (Thomas a kol., AASLD Abstracts, Hepatology sv. 20, č. 4, část 2, str. 440, 1994). Avšak bylo zjištěno, že tato monoterapie byla obvykle relativně neúčinná a měla vlastni nežádoucí vedlejší účinky. Byla navržena kombinovaná terapie interferonem alfa a ribavirinem (Lai a kol., Symposium to the 9^th Biennial Scientific Meeting Asian Pacific Association for the Study of the Liver, 1994). Předběžné výsledky naznačují, že kombinovaná terapie může být účinnější než kterákoli z obou monoterapií. Hayden FG, Schlepushkin AN. Interferon2a, hydrochlorid rimantadinu a ribavirin společně inhibují replikaci chřipkového viru in vitro. Antimicrob Agents Chemother. 1984;25:53-57. Schvarcz R, Ando Y, S'nnerborg A, Weiland O. Kombinovaná terapie chronické hepatitidy C interferonem alfa-2b a ribavirinem u pacientů, u kterých nebylo dosaženo trvalé odpovědi na samotný interferon: švédská zkušenost. J Hepatology, 1995;232 (dopl. 2):17-21. Brouwer JT, Nevens F, Michielsen P, a kol. Jaké jsou možnosti, když hepatitida C neodpovídá na interferon? Placebem kontrolovaný test srovnávající monoterapií ribavirinem sjeho kombinací s interferonem, provedený vmulticentru v Beneluxu. J Hepatol. 1994;212 (dopl. 1):S17. Abstrakt WP2/08. Chemello L, Cavalletto L, Bernardinello E a kol. Odpověď na ribavirin, na interferon a na jejich kombinaci u pacientů s chronickou hepatitidou C a její vztah k genotypům HCV. J Hepatol. 1994;212 (dopl. 1):S12.

0000

0« ·

0« ···· « • 0

0000 ·

9 ·

9 9 t t • 9 9 9 ·· »0 0* • 9 9 9

9 9 <

• 0 «0 » • 0 0 0 »0

Abstrakt GS5/29. Nikdo však nepopsal metody, které užívají interferon alfa a ríbavirin a jsou schopny vymýtit HCV-RNA efektivním způsobem s dlouhodobým účinkem.

Existuje výrazná potřeba nalézt způsob léčení chronické infekce hepatitidou C s kombinací interferonu alfa a ribavirinu, který je schopen vymýtit efektivně a dlouhodobě HCV-RNA.

Podstata vynálezu

Z jednoho hlediska vynález poskytuje metodu použití ribavirinu pro výrobu farmaceutických přípravků k léčení pacientů s chronickou infekci hepatitidou C a vymýcení detekovatelné HCV-RNA takovou metodou, která sestává z podání účinného množství ribavirinu ve spojení s účinným množstvím interferonu alfa u pacienta, který neodpovídal na dřívější průběh léčby interferonem alfa.

Z jiného hlediska vynález poskytuje metodu použití interferonu alfa pro výrobu farmaceutických přípravků k léčení pacientů s chronickou infekcí hepatitidou C a vymýcení detekovatelné HCV-RNA takovou metodou, která sestává z podání účinného množství interferonu alfa ve spojení s účinným množstvím ribavirinu u pacienta, který neodpovídal na dřívější průběh léčby interferonem aifa.

Vynález dále poskytuje metodu použití jak ribavirinu tak interferonu alfa pro výrobu farmaceutických přípravků k léčení pacientů s chronickou infekcí hepatitidou C a vymýcení detekovatelné HCV-RNA takovou metodou, která sestává z podání účinného množství ribavirinu ve spojení s účinným množstvím interferonu alfa u pacienta, který neodpovídal na dřívější průběh léčby interferonem alfa.

Farmaceutické přípravky jsou zvláště užitečné pro léčení pacienta s chronickou infekcí hepatitidou C a vymýcení detekovatelné HCV-RNA takovou metodou, která sestává z podání účinného množství ribavirinu a účinného množství interferonu alfa po dobu 20 až 30 týdnů tak, že přinejmenším 30 % pacientů, kteří nemají detekovatelnou HCV-RNA na konci uvedeného 20 až 30 týdenního období, také nemají detekovatelnou HCV-RNA přinejmenším 24 týdnů po konci podávání uvedených léků.

Je výhodné, když přinejmenším 40 % pacientů kteří nemají detekovatelnou HCVRNA na konci uvedeného 20 až 30 týdenního období, také nemá detekovatelnou HCVRNA přinejmenším 24 týdnů po konci podávání uvedených léků.

• · · ······ · · · · • · · · · · ···· • · · · · · · · · · • ····♦· · ··· ·· · • · ···· ···· ϊ 2 ···········♦*

V jiném provedení mohou být použity pro léčení pacienta s chronickou infekcí hepatitidou C a vymýcení detekovatelně HCV-RNA takovou metodou, která sestává z podání účinného množství ribavirinu a účinného množství interferonu alfa po dobu 40 až 50 týdnů tak, že přinejmenším 40 % pacientů, kteří nemají detekovatelnou HCVRNA na konci uvedeného 40 až 50 týdenního období, také nemá detekovatelnou HCVRNA přinejmenším 24 týdnů po konci podávání uvedených léků.

Je výhodné, když přinejmenším 50 % pacientů kteří nemají detekovatelnou HCVRNA na konci uvedeného 40 až 50 týdenního období, také nemá detekovatelnou HCVRNA přinejmenším 24 týdnů po konci podávání uvedených léků.

V jiném provedení mohou být použity pro léčení pacienta s chronickou infekcí hepatitidou C a vymýcení detekovatelně HCV-RNA takovou metodou, která sestává z podání účinného množství ribavirinu a účinného množství interferonu alfa po dobu 60 až 80 týdnů tak, že přinejmenším 50 % pacientů, kteří nemají detekovatelnou HCVRNA na konci uvedeného 60 až 80 týdenního období, také nemá detekovatelnou HCVRNA přinejmenším 24 týdnů po konci podávání uvedených léků.

Je výhodné, když přinejmenším 60 % pacientů kteří nemají detekovatelnou HCVRNA na konci uvedeného 60 až 80 týdenního období, také nemá detekovatelnou HCVRNA přinejmenším 24 týdnů po konci podávání uvedených léků.

V jiném provedení mohou být použity pro léčení pacienta s chronickou infekcí hepatitidou C, jejíž genotyp se liší od typu 1 a který má virové zatížení menší než anebo rovné 2 milionům kopií na mililitr séra, měřeno kvantitativní HCV-RNA PCR, a vymýcení detekovatelně HCV-RNA takovou metodou, která sestává z podání účinného množství ribavirinu a účinného množství interferonu alfa po dobu 20 až 30 týdnů tak, že přinejmenším 60 % pacientů a výhodněji přinejmenším 70 % pacientů, kteří nemají detekovatelnou HCV-RNA na konci uvedeného 20 až 30 týdenního období, také nemá detekovatelnou HCV-RNA přinejmenším 24 týdnů po konci podávání uvedených léků.

Je výhodné, když přinejmenším 80 % pacientů kteří nemají detekovatelnou HCV-RNA na konci uvedeného 20 až 30 týdenního období, také nemá detekovatelnou HCV-RNA přinejmenším 24 týdnů po konci podávání uvedených léků.

V jiném provedení mohou být použity pro léčení pacienta s chronickou infekcí hepatitidou C, jejíž genotyp se liší od typu 1 a který má virové zatížení větší než 2 miliony kopií, měřeno HCV-RNA/qPCR, a vymýcení detekovatelně HCV-RNA takovou metodou, která sestává z podání účinného množství ribavirinu a účinného množství • · ·

interferonu alfa po dobu 20 až 30 týdnů tak, že přinejmenším 50 % pacientů, kteří nemají detekovatelnou HCV-RNA na konci uvedeného 20 až 30 týdenního období, také nemá detekovatelnou HCV-RNA přinejmenším 24 týdnů po konci podávání uvedených léků. Je výhodné, když přinejmenším 60 % pacientů kteří nemají detekovatelnou HCVRNA na konci uvedeného 20 až 30 týdenního období, také nemá detekovatelnou HCVRNA přinejmenším 24 týdnů po konci podávání uvedených léků.

V jiném provedení mohou být použity pro léčení pacienta s chronickou infekcí hepatitidou C genotypu typu 1 a který má virové zatížení menší než anebo rovné 2 milionům kopií, měřeno HCV-RNA/qPCR, a vymýcení detekovatelné HCV-RNA takovou metodou, která sestává z podání účinného množství ribavirinu a účinného množství interferonu alfa po dobu 20 až 30 týdnů tak, že přinejmenším 30 % pacientů, kteří nemají detekovatelnou HCV-RNA na konci uvedeného 20 až 30 týdenního období, také nemá detekovatelnou HCV-RNA přinejmenším 24 týdnů po konci podávání uvedených léků. Je výhodné, když přinejmenším 40 % pacientů kteří nemají detekovatelnou HCVRNA na konci uvedeného 20 až 30 týdenního období, také nemá detekovatelnou HCVRNA přinejmenším 24 týdnů po konci podávání uvedených léků.

V jiném provedení mohou být použity pro léčení pacienta s chronickou infekcí hepatitidou C genotypu typu 1 a který má virové zatížení větší než 2 miliony kopií, měřeno HCV-RNA/qPCR, a vymýcení detekovatelné HCV-RNA takovou metodou, která sestává z podání účinného množství ribavirinu a účinného množství interferonu alfa po dobu 20 až 30 týdnů tak, že přinejmenším 15 % pacientů, kteří nemají detekovatelnou HCV-RNA na konci uvedeného 20 až 30 týdenního období, také nemá detekovatelnou HCV-RNA přinejmenším 24 týdnů po konci podávání uvedených léků. Je výhodné, když přinejmenším 20 % pacientů kteří nemají detekovatelnou HCV-RNA na konci uvedeného 20 až 30 týdenního období, také nemá detekovatelnou HCV-RNA přinejmenším 24 týdnů po konci podávání uvedených léků.

Je výhodné, když množství podávaného ribavirinu je v rozmezí od 400 až 1200 mg za den. Ještě výhodnější je, když množství podávaného ribavirinu je v rozmezí od 800 až 1200 mg za den.

Je výhodné, když je podávaný interferon-alfa vybírán ze skupiny interferon alfa2a, interferon alfa-2b, konsenzuální interferon, čištěný produkt interferonu alfa nebo pegylovaný („pegyiated“) interferon alfa. Ještě výhodnější je, když je podávaný interferon-alfa vybírán ze skupiny interferon alfa-2a, interferon alfa-2b nebo čištěný • · • ······ ·· ·, • · ·· · · · » ' ··· ·· · · · · · • ···· ·· · · · · · · · * · ···· ···· _ ······.··..., produkt interferonu alfa a množství podaného interferonu-alfa je od 2 do 10 milionů IU za týden, podáváno týdně, TIW, QOD nebo denně. Ve výhodném provedení je podávaným interferonem-alfa interferon alfa-2b a množství podaného interferonu-alfa je 3 miliony IU TIW.

Jinou možností je, že podávaným interferonem-alfa je konsenzuální interferon a množství podaného interferonu-alfa je od 1 do 20 pg za týden, podáváno týdně, TIW, QOD nebo denně. V jiném provedení je podávaným interferonem-alfa pegylovaný („pegylated“) interferon alfa-2b a množství podaného interferonu-alfa je od 0,5 do 2,0 pg/kg za týden, podáváno týdně, TIW, QOD nebo denně. Jinou možností je, že podávaný interferon-alfa je pegylovaný („pegylated“) interferon alfa-2a a množství podaného interferonu-alfa je od 20 do 250 pg/kg za týden, podáváno týdně, TIW, QOD nebo denně.

V rámci předloženého vynálezu bylo překvapivě zjištěno, že ve srovnání s léčením samotným interferonem-alfa nebo samotným ribavirinem, léčba pomocí kombinace léčebně účinné dávky ribavirinu a léčebně účinné dávky interferonu-alfa po dobu přinejmenším 20 až 30 týdnů má za následek 10křát více pacientů, u kterých není detekovatelná HCV-RNA v jejich séru přinejmenším 24 týdnů po konci léčení, ve srovnání s kteroukoli z obou monoterapií.

Detailní popis

Termín „interferon-alfa“ je zde použit pro označení skupiny vysoce homologických, druhově specifických proteinů, které inhibují virovou replikaci, množení buněk a upravují imunní odpověď. Typickými vhodnými interferony-alfa jsou mimo jiné rekombinantní interferon alfa-2b, jako je interferon Intron-A, který je možno získat od Schering Corporation, Kenilworth, N.J., rekombinantní interferon alfa-2a, jako je interferon Roferon, který je možno získat od Hoffmann-La Roche, Nutley, N.J., rekombinantní interferon alfa-2C, jako je interferon Berofor alfa 2, který je možno získat od Boehringer Ingelheim Pharmaceutical, lne., Ridgefield, CT., interferon alfa-n1, čištěná směs přirozených alfa interferonů, jako je Sumiferon, který je možno získat od Sumitomo, Japonsko nebo jako je Wellferon interferon alfa-n1 (INS), který je možno získat od Glaxo-Wellcome Ltd., Londýn, Velká Británie, nebo konsensuální interferon alfa, jako jsou popsané v U.S. patentech č. 4 897 471 a 4 695 623 (zvláště jejich příklady 7, 8 a 9) a specifický produkt, který je možno získat od Amgen, lne., Newbury Park, CA, nebo interferon alfa-n3, směs přirozených alfa interferonů alfa, vyráběných • · · • · · • ···· · · v Interferon Sciences a který je možno získat od Purdue Frederick Co., Norwalk, CT., pod obchodním jménem Alferon. Je dávána přednost používání interferonů alfa-2a nebo alfa-2b. Protože interferon alfa 2b má ze všech interferonů po světě nejširší souhlas pro použití chronické infekce hepatitidou C, je mu dávána největší přednost. Příprava interferonů alfa 2b je popsána v U.S. patentu č. 4 530 901.

Ribavirin, 1- -D-ribofuranosyl-1H-1,2,4-triazol-3-karboxamid, který je možno získat od ICN Pharmaceuticals, Inc., Costa Mesa, Kalifornie je popsán v devátém vydání rejstříku firmy Merck jako sloučenina č. 8199. Jeho výroba a příprava je popsána v U.S. patentu č. 4 211 771.

Termínem „neodpovídal na předchozí průběh léčby“ je zde míněno, že pacient buď naprosto neodpovídal na předchozí průběh léčby (v oboru obecně označováno jako „osoba nereagující“) nebo že pacient sice odpovídal na předchozí průběh léčby, ale následně se dostavila recidiva (v oboru obecně označováno jako „osoba, u které reakce nebyla trvalá“).

Termínem „obtížně léčitelný pacient“ je zde míněn pacient, který byl dříve klasifikován jako osoba, která nesnadno odpovídá na léčbu; například protože má vysokou virovou zátěž nebo protože jeho infekce HCV má genotyp, jehož léčba je obtížná, jako je typ 1, například typ 1b. Pro další podrobnosti, týkající se klasifikace HCV na jednotlivé genotypy, viz například „Classification of hepatitis C virus into six major genotypes and a senes of subtypes by phylogenetic analysis of the NS-5 region“, Simmonds, P. a kol., J. Gen. Virol., (1993), 74, 2391-2399 a „A Proposed System for the Nomenclature of Hepatitis C Viral Genotypes“, Simmonds, P. a kol., Hepatology, 19(5) (1994), 1321-1323.

Osoba trpící chronickou infekcí hepatitidou C může vykazovat jeden nebo více následujících známek nebo příznaků;

(a) zvýšenou ALT, (b) pozitivní test na anti-HCV protilátky, (c) přítomnost HCV, prokázanou pozitivním testem na HCV-RNA, (d) klinické znaky chronické nemoci jater, (e) hepatocelulární poškození.

Při praktickém provádění vynálezu jsou interferon alfa (zde α-IFN) a ribavirin podávány pacientovi, který vykazuje jeden nebo více z výše uvedených známek nebo příznaků, v množstvích postačujících pro eliminaci nebo alespoň zmírnění jednoho • · · nebo více z výše uvedených známek nebo příznaků. Ve výhodném provedení je kombinovaná terapie podle vynálezu uplatňována u pacienta, který se po monoterapii interferonem alfa nezbavil detekovatelně HCV-RNA.

Ribavirin je podáván pacientovi spolu s α-IFN, tj., dávka α-IFN je podávána v tomtéž období, kdy pacient dostává dávky ribavirinu. Většina přípravků, obsahujících α-IFN není účinná při orálním podávání, tedy je dávána přednost parenterálnímu podávání α-IFN, výhodně subkutánní, IV a IM injekce. Ribavirin může být podáván orálně ve formě kapslí nebo tablet ve spojení s parenterálním podáváním α-IFN. Je počítáno i s jinými typy podávání obou léčiv, pokud se stanou dostupné, jako jsou například nosní sprej, transdermálně, pomocí čípků, pomocí způsobů průběžného uvolňování dávky léku atd. Jakákoli forma podávání bude účinná tak dlouho, pokud budou podávány vhodné dávky bez toho, že by došlo ke zničení aktivních složek.

Detekovatelná HCV-RNA v rámci předkládaného vynálezu znamená, že v 1 ml pacientova séra je přítomno méně než 100 jejích kopií, měřeno metodou kvantitativní PCR pomocí reverzní transkriptázy. HCV-RNA je v předkládaném vynálezu přednostně měřena postupem, který je popsán níže. Tento postup je zde označován jako HCVRNA/qPCR.

RNA je ze séra pacienta extrahována pomocí směsi guanidium izothiokyanátfenol-chloroform a poté sražena pomocí ethanolu za přítomnosti octanu amonného. Vysrážená RNA je centrifugována a výsledný sediment sušen v zařízení Centrivap (Labconco, Kansas City, Mo.). Suchý sediment je resuspendován v 30 μΙ směsi Rnasinu (Promega Corp., Madison, Wl), dithiothreitolu a vody ošetřené diethylpyrokarbonátem. Vzorky byly uloženy při teplotě -20 °C nebo nižší až do provedení reverzní transkripce RNA (RT) a PCR.

Aby byla v RT reakci celá RNA sekvence převedena do cDNA, jsou pro syntézu prvního cDNA řetězce jako primery použity náhodné hexadeoxyribonukleotidy (Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ). Z resuspendovaného vzorku byly dva odběry o objemu 3 μΙ přidány ke 3 μΙ náhodných primerů o koncentraci 100 ng/ I, denaturovány při 70 °C, potom reverzně transkribovány při 40 °C po dobu 1 hodiny za pomoci reverzní transkriptázy M-MLV (USB, Cleveland, OH) ve standardním pufru, který obsahoval 5 mM MgCI₂. Konečný reakční objem RT je 26 I. PCR je započata bezprostředně po reverzní transkripci.

Pozměněná verze PCR metody pro amplifikaci cDNA se provádí pomocí tepelně stabilní Taq polymerázy. Sedmdesát pět pi PCR směsi je přidáno k celému reakčnímu objemu RT (26 I) do celkové konečné koncentrace MgCI₂1,5 mM v celkovém objemu 101 I. Každý 101 I vzorek je potom rozdělen na 50,5 I a na povrch je umístěna vrstva minerálního oleje, aby se zabránilo vypařování.

Cyklus PCR se skládá z teplotní hybridizace po dobu 90 vteřin při 55 °C, prodlužovací fáze po dobu 90 vteřin při 74 °C a denaturační fáze po dobu 90 vteřin při 94°C. U termocyklovaných vzorků proběhne závěrečná prodlužovací fáze po dobu 7 minut při 74 °C. Jsou použity čtyři různé soubory cyklů. Nanesením vzorku ve dvojím provedení a rozpůlením těchto vzorků po RT, jsou z každého vzorku získány čtyři zkumavky. Každá z těchto čtyř zkumavek prodělala jiný počet cyklů, což zvyšuje citlivost a přesnost v kvantifikačním procesu. Účinnost termocyklování bude hodnocena podle uspokojivé ampiifikace známého počtu kopií standardní RNA, která je obsažena v každém souboru 60 zkumavek. Pro amplifikaci jsou použity dva soubory primerů, oba z 5'-nepřekládané oblasti genomu HCV. Oba tyto dva soubory primerů jsou vysoce konzervativní a detekují všechny známé subtypy HCV. Soubor primerů č.1: proti směru exprese 5-GTG GTC TGC GGA ACC GGT GAG T-3', po směru exprese 5-TGC ACG GTC TAC GAG ACC TC-3', který tvoří produkt dlouhý 190 párů bází. Soubor primerů č.2: proti směru exprese 5'-CTG TGA GGA ACT ACT GTC TTC-3', po směru exprese 5'-CCC TAT CAG GCA GTA CCA CAA-3', který tvoří produkt dlouhý 256 párů bází.

S amplifikovanou cDNA je potom provedena elektroforéza v 3% agarózovém gelu a je přenesena na nylonovou membránu. Cílová DNA je detekována pomocí metody Southern blotting a imunologickým barvením pomocí neradioaktivní DNA sondy, označené digoxigeninem. Tyto postupy jsou prováděny za pomoci automatických přístrojů pro PCR termocyklování, agerózovou gelovou elektroforézu, vakuový přenos pro Southern blot, hybridizaci a imunologické barvení. Každá membrána obsahuje známý počet kopií sériově ředěných standardů, které jsou použity při konstrukci křivek pro kvantitativní měření zón u vzorků. Původní standardní křivky jsou vytvořeny z pečlivě ředěných HCV-RNA z transkribovaných klonů. U transkriptů jsou provedeny studie inkorporace radioaktivity, elektroforéza v gelu a měření OD 260, aby se určilo, zda mají očekávanou délku. Po produkci RNA transkriptů z kvantifikovaných standardních klonů jsou vytvořeny „směsné standardy, které lépe reprezentují heterogenní podstatu HCV, kterou lze v případě přirozené infekce očekávat. Tyto směsi jsou utvořeny spojením velkých množství séra nebo plazmy ze známých infikovaných jedinců. Směsi séra či plazmy jsou pomocí PCR kalibrovány a to proti transkriptům z klonů a poté jsou zředěny v tekutině, o která je známo, že je v PCR negativní. Na závěr jsou ty směsné vzorky, které mají vysoký počet kopií, kontrolovány soupravou cDNA Quantiplex nucleic acid detection systém od Chiron lne. (Emeryville, CA). Tyto „dvojitě kvantifikované“ směsi byly rozděleny na alikvoty a uloženy při -70 °C. V každém pokusu jsou použita ředění 5 000 000, 1 000 000, 500 000, 100 000, 10 000 a 1000 kopií/ml.

Každá membrána pro Southern blot je naskenována do počítače pomocí automatického skeneru spojeného s denzitometrem v intervalech během vyvíjení, aby bylo možno určit, kdy je standardní křivka nejvíce lineární. Výsledné elektronické obrázky jsou pak měřeny a zjišťovány oblasti zón a průměrná hustota zón. Všechny odečtené hodnoty jsou standardizovány k integrované hustotě zón a porovnány se standardní křivkou, aby byla získána číselná hodnota počtu virových kopií v každé zóně.

Byly provedeny následující klinické protokoly:

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1:

Obecné uspořádání a plán studie

Tento pokus byl prospektivní, provedený v mnoha centrech, náhodný, dvojitý slepý a s paralelními skupinami. Studie srovnávala léčbu kombinací INTRON® A plus ríbavirin s léčbou kombinací INTRON® A plus placebo po dobu 24 měsíců u pacientů s kompenzovanou chronickou infekcí hepatitidy C, kteří odpovídali na předchozí léčbu jedním nebo dvěma cykly interferonu alfa (INTRON® A, Roferon®-A nebo Wellferon®) (minimálně 3 MU až maximálně 6 MU QOD nebo TIW po dobu minimálně 20 týdnů až maximálně 18 měsíců) a u kterých se dostavila recidiva po posledním cyklu léčby interferonem alfa. Vhodní pacienti měli chronickou hepatitidu C potvrzenu sérem pozitivním na HCV-RNA, jaterní biopsií a laboratorními testy.

Pacienti byli náhodně rozděleni na skupiny léčené kombinací INTRON® A plus ríbavirin a kombinací INTRON® A plus placebo. Dávka INTRON® A byla 3 MU SC TIW; dávka ribavirinu 1000 nebo 1200 mg PO denně (v závislosti na hmotnosti) byla rozdělena do dvou dávek. Určení léčebných skupin bylo provedeno ve stejných ·

• 9 •9 9999

...........

poměrech v Centru pro náhodné rozdělení. Postup náhodného rozdělení vzorků byl navržen tak, aby se u léčebných skupin pokusil udržet rovnováhu s ohledem na přítomnost nebo nepřítomnost cirhózy vjaterních biopsiích, odebraných před léčbou, hladinu zjištěnou HCV-RNA/qPCR a genotyp HCV.

Studovaný způsob léčení byl prováděn po dobu 24 týdnů. Celková doba studia byla 48 týdnů, aby byly zjištěny dlouhodobé účinky léčby.

Během léčby a doby po ní následující byla prováděna biochemická (ALT), virologická (HCV-RNA) a histologická (jaterní biopsie) zkoumání, aby bylo možno zhodnotit podstatu a trvání odpovědi na studované léčby. Prvotní sledovaná proměnná, týkající se účinnosti, byla všeobecná odpověď, definovaná jako ztráta HCV-RNA/qPCR v séru (<100 kopií/ml) naměřená 24 týdnů po konci léčby, spojená se zlepšením stavu jaterní biopsie odebrané po konci léčby a měřené pomocí Knodeliova histologického indexu aktivity (HAI). Jako druhotná proměnná, týkající se účinnosti, byla zjišťována normalizace ALT. Bezpečnost studovaných léčení byla hodnocena sledováním vybraných laboratorních parametrů a také zaznamenáváním a zhodnocením objevení se jakékoli nepříznivé události.

Léčebné režimy

Studované léčebné režimy byly buď:

INTRON® A 3 MU SC TIW plus ribavirin 1000 nebo 1200 mg/den PO rozdělen do dvou dávek po dobu 24 týdnů; nebo INTRON® A 3 MU SC TIW plus placebo namísto ribavirinu rozděleno do dvou dávek po dobu 24 týdnů.

Studované léčebné režimy byly aplikovány po dobu 24 týdnů. Standardní INTRON® A (interferon alfa-2b, rekombinantní) režim pro hepatitidu C byl podáván ve stabilní dávce 3 MU TIW. Každý pacient obdržel návody týkající se přípravy a subkutánního podávání INTRON® A. Ribavirin byl podáván dvakrát denně, ráno a večer. Dávka byla určována podle hmotnosti pacienta při vstupní prohlídce. Pacienti o hmotnosti =75 kg obdrželi 1000 mg denně jako dvě 200 mg kapsle ráno a tři 200 mg kapsle večer. Pacienti o hmotnosti >75 kg obdrželi 1200 mg denně jako tři 200 mg kapsle ráno a večer.

Náhodné rozdělení pacientů na skupiny bylo navrženo tak, aby skupiny byly v rovnováze s ohledem na následující základní charakteristiky:

A. histologie jater před léčbou (cirhóza nebo bez cirhózy)

B. stav HCV-RNA/qPCR v séru (HCV-RNA/qPCR 2 000 000 nebo HCVRNA/qPCR >2 000 000 kopií/ml); a

C. HCV genotyp (1 nebo jiný). Pacienti se smíšenými genotypy (pokud obsahují typ 1) budou pro účely rovnováhy mezi skupinami klasifikováni jako typ 1.

Účinnost

Prvotní z hlediska účinnosti bylo porovnání dvou léčených skupin s ohledem na všeobecný rozsah odpovědi, definované jako pokles HCV-RNA/qPCR v séru v období 24 týdnů po konci léčby na nedetekovatelnou úroveň nebo na úroveň <100 kopií/ml, společně se zlepšením stavu jaterních biopsií v období po konci léčby, jak je definováno zánětlivým indexem HAI podle Knodeiia. Také byly zkoumány druhotné známky účinnosti:

Druhotné známky účinnosti na konci testu:

D. podíly pacientů s normalizovanou ALT po 24 týdnech sledováni;

E. podíly pacientů se zlepšením stavu biopsií (spojené hodnoty kategorií I + li + lil);

F. odchylky od základní hodnoty indexů biopsií (spojené hodnoty kategorií I + II + lil);

G. rozsahy odpovědí na konci léčení, založené na HCV-RNA/qPCR;

H. podíl pacientů s normalizovanou ALT na konci léčení.

I. rozsahy odpovědí po 24 týdnech sledování, založené na HCV-RNA/qPCR. Virologie: Vstupní stav a jeho změny

Testování séra metodou HCV-RNA/qPCR bylo provedeno v centrální laboratoři. Byl požadován pozitivní výsledek HCV-RNA testu; pro účast byli vhodní pouze pacienti pozitivní na HCV-RNA. Opakované testy byly naplánovány na týdny 4, 12, 24 a na týdny 12 a 24 po skončení léčby.

Odpověď byla hodnocena tak, jak je definováno níže:

Osoba reagující: Pacient byi klasifikován jako osoba reagující vdaném časovém intervalu, pokud HCV-RNA/qPCR byla v této době negativní (<100 kopií/ml).

Osoba, u které je reakce trvalá: Pacient byl klasifikován jako osoba, u které je reakce trvalá pokud byl pacient osoba reagující v době 24 týdnů po skončení léčby.

» · · I ·♦ ··

Povšimněte si, že pacienti, kteří neodpovídali těmto kritériím, včetně pacientů, kteří přerušili účast dříve než bylo získáno požadované hodnocení HCV-RNA/qPCR, byli klasifikováni jako osoba nereagující.

Osoba celkově odpovídající: Založeno jak na testu HCV-RNA/qPCR v séru, tak na změně histologie jater, hodnocené zánětlivým indexem HAI podle Knodelia. Pacient byl klasifikován jako osoba celkově odpovídající na léčení, pokud on/ona byli osoba, u které je reakce trvalá a současně jeho/její zánětlivý index HAI podle Knodelia (součet kategorií I + II + III) se v období následujícím po léčbě zlepšil o 2 nebo více jednotek vzhledem k hodnotě, zjištěné před léčením.

Histologie jater

Jaterní biopsie byly získávány v průběhu šesti měsíců před přibráním pacienta do pokusu a v 24. týdnu, následujícím po skončení léčby. Hodnocení biopsií bylo provedeno jedním patologem pomoci klasifikace histologické aktivity podle Knodelia. Patologovi nebyla známa pacientova totožnost, léčebná skupina a doba odběru biopsie vzhledem k období léčby (před a po léčení). Účinnost studovaných léčení byla hodnocena porovnáním stupně zánětlivé aktivity pozorované při základním vyšetření s zánětlivou aktivitou, přítomnou v 24. týdnu, následujícím po skončení léčby.

Výsledky.

V 31 mezinárodním centru bylo přihlášeno 195 pacientů a náhodně rozděleno pro léčení bud kombinací INTRON® A plus ribavirin (N=98) nebo kombinací INTRON® A plus placebo (N=97). Tři pacienti, dva náhodně přiděleni pro léčení kombinací INTRON® A plus ribavirin a jeden náhodně přidělen pro léčení kombinací INTRON® A plus placebo léčeni nebyli; tedy všechny léčené skupiny obsahovaly 192 pacientů (96 pacientů jak pro kombinac INTRON® A plus ribavirin, tak pro kombinaci INTRON® A plus placebo). Dva ze třech pacientů nebyli léčeni, protože si nepřáli pokračovat, třetí protože nebyla splněna kritéria protokolu. Všechny diskuse týkající se účinnosti a bezpečnosti v této zprávě, jsou založeny na údajích ze všech léčených skupin.

Účinnost

Účelem této studie bylo porovnat kombinaci INTRON® A plus ribavirin s kombinací INTRON® A plus placebo s ohledem na všeobecný rozsah odpovědi a • 9 • · 9 • · · · • · 9 · t 9999 · # • 9 9

9 9 9 » rozsah virologické odpovědi (založeno na HCV-RNA (qPCR). Primární hledisko účinnosti pro tuto studii je všeobecný rozsah odpovědi.

Závěr, pokud se týká účinnosti je následující:

J. Kombinace ribavirinu s INTRON® A může dramaticky zvýšit podíl pacientů, u kterých vymizí HCV-RNA a mají významné snížená jaterního zánětu.

Na konci období následujícího po skončení léčení je všeobecný rozsah odpovědi souhrnem ztráty HCV-RNA(qPCR) v séru a změny v histologii jater konci období (24 týdnů po skončení léčení). Pacient byl klasifikován jako osoba celkově odpovídající, pokud HCV-RNA(qPCR) byla negativní ve 24. týdnu hodnocení po skončení léčení a současně zánětlivý index HAI podle Knodella (součet kategorií I + II + III) se v období následujícím po léčbě zlepšil o 2 nebo více jednotek vzhledem k hodnotě, zjištěné před léčením. Konečné hodnoty virologické odpovědi na konci období následujícího po skončení léčení, histologická odpověď a všeobecné rozsahy odpovědi jsou souhrnně uvedeny v tabulkách 1, 2 a 3.

Konečné hodnoty HCV-RNA na konci sledovaného období: Trvalá ztráta HCVRNA 24 týdnů po skončení léčby.

Podíl pacientů s vymizelou HCV-RNA v séru 24 týdnů po skončení léčby byl 10křát větší (p<0,001) ve skupině pacientů léčených kombinací INTRON® A plus ribavirin ve srovnání stěmi, kterým byl podáván INTRON® A jako monoterapie. V tabulce 1 jsou souhrnně uvedeny odpovědi pacientů na konci sledovaného období, jak to ukazuje úroveň HCV-RNA v séru.

Tabulka 1 Stav HCV-RNA v séru na konci sledovaného období: Podíl pacientů s vymizelou HCV-RNA v séru 24 týdnů po skončení léčby, odpovědi _Počet (%) pacientů

pacientů	INTRON® A plus ribavirin	INTRON® A plus placebo	hodnota p
všichni léčení	50/96 (52)		5/96 (5)	< 0,001
pacienti 95% interval spolehlivosti pro			1 %-10%
každý způsob
léčby:		4 % - 58 %
pro rozdíly mezi	42 % - 62 %
způsoby léčby: Osoby reagující na konci léčby	49/80 (61)		5/41 (12)

4 » 4 4

4 4

4444

4

4 4 4 4 ♦4 444»

44 • 4 4 4

4 4 4 • 4 4 4

4 4 4

44

Biopsie z období před a po léčení byly dostupné pro 81 % (78/96) pacientů léčených kombinací INTRON® A plus ribavirin a pro 77 % (74/96) pacientů léčených kombinací INTRON® A plus placebo. Tabulka 2 uvádí souhrnně účinek léčby na zánět jater u pacientů s výsledky jaterních biopsif jak před, tak po léčbě. Jako v případě trvalé ztráty replikace HCV-RNA, podíl pacientů se zlepšením stavu zánětu jater byl významně vyšší (p<0,001) u pacientů, kteří obdrželi kombinovanou léčbu, ve srovnání s těmi, kteří byli léčeni monoterapicky pomocí INTRON® A.

Tabulka 2 Stav jaterní histologie na konci sledovaného období: Zlepšení stavu jaterní histologie 24 týdnů po skončení léčby, založeno na HAI indexu (I + II + III) podle Knodella.

stav pacientů		Počet (%) pacientů”
INTRON A plus ribavirin (n=78)	INTRON A plus placebo (n=74)	hodnota” p
Zlepšený stav biopsie*	49 (51)	30 (31)	< 0,001

b Pacienti s jaterními biopsiemi jak před, tak po léčbě.

c Fischerův exaktní test.

d Změny vKnodellově histologickém indexu (HAI) v období před a po léčení (součet I + II + Ul), zařazeny v případě, že došlo ke snížení o 2 nebo více jednotek vzhledem k hodnotě před léčením.

Celková odpověď

Když byla studie navrhována, bylo zřejmé, že protože odběr jaterní biopsie je invazivní postup, bude nepravděpodobné získat od všech pacientů jaterní biopsie v období po skončení léčení. Proto protokol a statistická analýza byl plánován tak, že analýza pro celkovou odpověď bude založena na údajích pro všechny léčené pacienty a bude hodnocena metodou maximální pravděpodobnosti (MLE) u pacientů, jejichž stav celkové odpovědi nemůže být zjištěn, tj. u pacientů s negativní HCV-RNA a chybějícím vyhodnocením biopsie (z období po skončení léčby). Protokol také stanovil, že dodatečná analýza bude provedena u pacientů, u kterých jsou k dispozici výsledky biopsií jak z období před léčbou, tak z období po skončení léčby (tj. u pacientů s kompletními údaji). Celková odpověď je souhrnně uvedena v tabulce 3, založené na následujících analýzách:

0

0 0 • 0 · • 000« ·

• 000 0 •0 00 • ·· 0

0 0 0 • ·0 0

0 0 0 • 0 00 »0 0000

K. hodnocení maximální pravděpodobnosti (MLE);

L. pacienti s kompletními údaji (výsledky pro biopsie jak z období před léčbou, tak z období po skončení léčby);

M. pacienti s chybějícími údaji (chybí některý nebo obojí údaje pro HCV/biopsie), uvažováno jako neúspěšná léčba.

Tabulka 3 Podíl celkových odpovědí

analyzované	INTRON® A plus	INTRON® A plus	hodnota*⁵ d
údaje	ribavirin	placebo
hodnocení maximální	43%	5%	< 0,001
pravděpodobnosti
pacienti s kompletními	39/78 (50 %)	4/74 (5 %)	< 0,001
údaji^c
léčby považované	39/96 (41 %)	4/96 (4 %)^e	< 0,001
za neúspěšné“

1. MLE založená na logistické regresi.

1. Fischerův exaktní test.

1. Kompletní údaje = výsledky biopsií jak před, tak po léčbě.

1. Pacienti, kteří neměli buď virologické nebo bioptické údaje nebo obojí, byli považováni za neúspěšně léčené.

Jak mohlo být předvídáno z jednotlivých výsledků, týkajících se účinku léčby na vymizení HCV-RNA na konci sledovaného období a zlepšení stavu zánětu jater, podíl celkových odpovědí ve skupině léčené kombinací INTRON® plus ribavirin byl výrazně větší (<0,001) spolu s 10 až 14 násobným zlepšením, než jak bylo pozorováno ve skupině INTRON® plus placebo, při všech použitých metodách hodnocení.

Logistická regresní analýza byla provedena u všech vstupních demografických proměnných a charakteristik nemoci. Jediné z výchozích charakteristik, které byly statisticky významné pro předpověď trvalé odpovědi na konci sledovaného období, byly genotyp jiný než typ 1 a virové zatížení 2 miliony.

Pro počet virových kopií (2 miliony, >2 miliony) byly rozdíly statisticky významné ve prospěch vyšších podílů odpovědí u pacientů s 2 miliony kopií (tabulka 4).

Když jsou kombinovány genotyp a výchozí virové zatížení, je pozorována v odpovědích hierarchie. Pacienti s virovým genotypem jiným než 1 a výchozím virovým • · 9 • · · • · 4

4«·· <

9

9 9 9 9 ♦ 4 9449 • 49 •4 9

4 9 9 • 4 49 •4 44 • 4 9 9

4 9 4

4 4 4 • 4 4 9 • 4 9 9 zatížením 2 miliony kopií měli nejlepší odpověď na konci sledovaného období; pacienti s virovým genotypem 1 a výchozím virovým zatížením >2 miliony kopií měli nejslabší odpověď na konci sledovaného období.

Tabulka 4 Charakteristiky nemoci versus trvalá odpověď: Všichni léčení pacienti

Charakteristiky nemoci^b	Počet (%) pacientů
INTRON A plus ribavirin (n=96)	INTRON A plus placebo (n=96)
HCV-RNA/qPCR
2 miliony	24/36 (67)	5/29(17)
2 miliony	26/60 (43)	0/67 (0)
Genotyp HCV
1	16/53 (30)	2/53 (4)
jiný	34/43 (79)	3/19(7)
Genotyp/výchozí HCV-RNA/qPCR
jiný/2 miliony kopií	15/16(93)	3/14(21)
jiný/>2 miliony kopií	18/27(67)	0/29 (0)
1/2 miliony kopií	8/20 (40)	0/15 (0)
1/>2 miliony kopií	7/23 (21)	0/38 (0)

Pří vstupu byli pacienti rozvrstveni podle počtu virových kopií (2 miliony, >2 miliony), genotypu (1 nebo jiný) a cirhózy (přítomna nebo nepřítomna).

Příklad 2.

Druhá studie 2 byla provedena v podstatě pomocí stejné metodologie, která byla popsána výše ve studii 1. Výsledky jsou souhrnně uvedeny níže.

Účinnost

Celková odpověď na konci sledovaného období nastává v případech, kdy dojde současně k vymizení HCV-RNA(qPCR) a ke změnám v histologii jater na konci sledovaného období (24 týdnů po konci léčby). Pacient byl klasifikován jako osoba s celkovou odpovědí, pokud HCV-RNA(PCR) byla negativní při hodnocení 24 týdnů po skončení léčby a zánětlivý index HAI podle Knodella (součet kategorií I + II + III) se zlepšil o 2 či více jednotek vzhledem k indexu před léčbou. Výskyty vtrologické odpovědi na konci sledovaného období, histologické odpovědi a celkové odpovědi jsou souhrnně uvedeny v tabulkách 5,6 a 7.

HCV-RNA odpověď na konci sledovaného období: Trvalá ztráta HCV-RNA 24 týdnů po skončeni léčby.

♦ ft 9 • 9 9 • · · • ···» • · ···· ft »♦ ···· • · · • · · • ftft · • ftft · • ft ft* ·· ftft • « · ft • ftft 6 • · ftft · • ·· · t ft ftft

Podíl pacientů u kterých došlo k vymizení HCV-RNA v séru 24 týdnů po skončení léčby byl 10násobný (p<0,001) ve skupině pacientů léčených kombinací INTRON® A plus ribavirin ve srovnání s těmi, kterým byl podáván INTRON® A jako monoterapie. V tabulce 5 jsou souhrnně uvedeny odpovědi pacientů na konci sledovaného období, jak to ukazuje úroveň HCV-RNA v séru.

Tabulka 5 Stav HCV-RNA v séru na konci sledovaného období: Podíl pacientů s vymizelou HCV-RNA v séru 24 týdnů po skončení léčby.

odpovědi pacientů všichni léčení pacienti 95% interval spolehlivosti pro každý způsob léčby:

pro rozdíly mezi způsoby léčby: Osoby reagující na konci léčby⁰

INTRON A plus ribavirin

34/77 (44) % - 56 %

34/54 (63)

Počet (%) pacientů_

INTRON A plus placebo

3/76 (4) % - 8 % % - 52 % hodnota p < 0,001

3/32 (9)

Biopsie z období před a po léčení byly dostupné pro 79 % (61/77) pacientů léčených kombinací INTRON® A plus ribavirin a pro 84 % (64/76) pacientů léčených kombinací INTRON® A plus placebo. Tabulka 6 uvádí souhrnně účinek léčby na zánět jater u pacientů s výsledky jaterních biopsií jak před, tak po léčbě. Jako v případě trvalé ztráty replikace HCV-RNA, podíl pacientů se zlepšením stavu zánětu jater byl významně vyšší (p<0,001) u pacientů, kteří obdrželi kombinovanou léčbu, ve srovnání s těmi, kteří byli léčeni monoterapicky pomocí INTRON® A.

Tabulka 6 Stav jaterní histologie na konci sledovaného období: Zlepšení stavu jaterní histologie 24 týdnů po skončení léčby, založeno na HAI indexu (I + II + III) podle Knodella.

stav pacientů		Počet (%) pacientů³
INTRON A plus ribavirin (n=61)	INTRON A plus _hodnotab . placebo (n=64) ^μ
Zlepšený stav biopsie⁰	38 (49)	27 (36) < 0,001

2. Pacienti s jaterními biopsiemi jak před, tak po léčbě.

2. Fischerův exaktní test.

2. Změny vKnodellově histologickém indexu (HAI) v období před a po léčení (součet I + II + III), zařazeny v případě, že došlo ke snížení o 2 nebo více jednotek vzhledem k hodnotě před léčením.

Celková odpověď

Celková odpověď je souhrnně uvedena v tabulce 7, založené na následujících analýzách:

N. hodnocení maximální pravděpodobnosti (MLE);

O. pacienti s kompletními údaji (výsledky pro biopsie jak z období před léčbou, tak z období po skončení léčby);

P. pacienti s chybějícími údaji (chybí některý nebo obojí údaje pro HCV/biopsie), uvažováno jako neúspěšná léčba.

Tabulka 7 Podíl celkových odpovědí

analyzované	INTRON A plus	INTRON A plus	hodnota“ p
údaje	ribavirin	placebo
ML hodnocení⁸	36,5 %	2,7 %	<0,001
pacienti
s kompletními	25/61 (41,0 %)	2/64 (3,1 %)	< 0,001
údaji⁰
léčby považované	25/77 (32,5 %)	2/76 (2,6 %)	< 0,001
za neúspěšné“

1. MLE založená na logistické regresi.

1. Fischerův exaktní test.

1. Kompletní údaje - výsledky biopsií jak před, tak po léčbě.

Jak mohlo být předvídáno z jednotlivých výsledků, týkajících se účinku léčby na vymizení HCV-RNA na konci sledovaného období a zlepšení stavu zánětu jater, podíl celkových odpovědí ve skupině léčené kombinací INTRON® plus ribavirin byl výrazně větší (<0,001) s 10 až 14 násobným zlepšením zánětu, než jak bylo pozorováno ve skupině INTRON® plus placebo, při všech použitých metodách hodnocení.

» 19 ............

Logistická regresní analýza byla provedena u všech vstupních demografických proměnných a charakteristik nemoci. Jediná výchozí charakteristika, která byla statisticky významná pro předpověď trvalé odpovědi na konci sledovaného období, byl genotyp jiný než typ 1.

Pro počet virových kopií (2 miliony, >2 miliony) byly rozdíly statisticky významné ve prospěch vyšších podílů odpovědí u pacientů s 2 miliony kopií (tabulka 8). Když jsou kombinovány genotyp a výchozí virové zatížení, je pozorována v odpovědích hierarchie. Pacienti s virovým genotypem jiným než 1 a výchozím virovým zatížením 2 miliony kopií měli nejlepší odpověď na konci sledovaného období; pacienti s virovým genotypem 1 a výchozím virovým zatížením >2 miliony kopií měli nejslabší odpověď na konci sledovaného období.

Tabulka 8 Charakteristiky nemoci versus trvalá odpověď: Všichni léčení pacienti

Charakteristiky nemoci	Počet (%) pacientů
INTRON®Aplus ribavirin (n=77)	INTRON®Aplus placebo (n=76)
HCV-RNA/qPCR
2 miliony	6/9 (67)	1/12 (8)
>2 miliony	28/68 (41)	2/64 (3)
Genotyp HCV
1	12/46(28)	1/42 (2)
jiný	21/31 (68)	2/34 (6)
Genotyp/ výchozí HCV-RNA/qPCR
jiný/2 miliony kopií	4/4 (100)	0/3 (0)
jiný/>2 miliony kopií	17/27 (62)	2/31 (6)
1/2 miliony kopií	2/5 (40)	1/9(11)
1/>2 miliony kopií	11/39(28)	0/32 (0)

Popsaná provedení byla uvedena pouze jako příklad a vynález je omezen pouze termíny připojených patentových nároků, spolu s plným rozsahem ekvivalentů k nimž tyto patentové nároky opravňují.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Použití ribavirinu pro výrobu farmaceutických prostředků pro léčení pacientů s chronickou infekcí hepatitidou C za účelem odstranění detekovatelně HCV-RNA, které spočívá v podávání účinné dávky ribavirinu spolu s účinnou dávkou interferonů alfa, přičemž se jedná o pacienta, který nereagoval ne předchozí průběh léčby interferonem alfa, charakteristického tím, že se jedná o obtížně léčitelného pacienta s virovou zátěží větší než 2 miliony kopií na mililitr séra, měřeno pomocí HCV-RNA kvantitativní PCR a o obtížně léčitelnou infekci HCV s genotypem typu 1.
2. Použití interferonů alfa pro výrobu farmaceutických prostředků pro léčení pacientů s chronickou infekcí hepatitidou C za účelem odstranění detekovatelně HCV-RNA, které spočívá v podávání účinné dávky interferonů alfa spolu s účinnou dávkou ribavirinu, přičemž se jedná o pacienta, který nereagoval ne předchozí průběh léčby interferonem alfa, charakteristického tím, že se jedná o obtížně léčitelného pacienta s virovou zátěží větší než 2 miliony kopií na mililitr séra, měřeno pomocí HCV-RNA kvantitativní PCR a o obtížně léčitelnou infekci HCV s genotypem typu 1.
3. Použití jak ribavirinu tak interferonů alfa pro výrobu farmaceutických prostředků pro léčení pacientů s chronickou infekcí hepatitidou C za účelem odstranění detekovatelně HCV-RNA, které spočívá v podávání účinné dávky ribavirinu spolu s účinnou dávkou interferonů alfa, přičemž se jedná o pacienta, který nereagoval ne předchozí průběh léčby interferonem alfa, charakteristického tím, že se jedná o obtížně léčitelného pacienta s virovou zátěží větší než 2 miliony kopií na mililitr séra, měřeno pomocí HCV-RNA kvantitativní PCR a o obtížně léčitelnou infekci HCV s genotypem typu 1.
4. Použití podle kteréhokoli předchozího patentového nároku, přičemž interferon-alfa je vybrán ze skupiny interferon alfa-2a, interferon alfa-2b, konsenzuální interferon, čištěný vyrobený interferon alfa nebo pegylovaný („pegylateď) interferon-alfa.

• · · • · · · • · · · · · · • ·· · ···· • · · · · · · · ·· · • ···· · · · · • · · · · «· · ·
5. Použití podle kteréhokoli z předchozích patentových nároků, přičemž použitý interferon alfa je alfa-2b interferon.
6. Použití podle kteréhokoli z předchozích patentových nároků, přičemž množství podávaného ribavirinu je 400 až 1200 mg za den, výhodně 800 až 1200 mg za den a množství podávaného interferonu alfa je 2 až 10 milionů IU týdně, podáváno týdně, TIW, QOD nebo denně, výhodně 3 miliony IU TIW.
7. Použití podle kteréhokoli z předchozích patentových nároků, přičemž podávání se provádí po časové období 20 až 30 týdnů.
8. Použití podle patentového nároku 11, přičemž podávání se provádí dále po celkové časové období 40 až 50 týdnů.
9. Použití podle patentového nároku 11, přičemž podávání se provádí dále po celkové časové období 60 až 80 týdnů.
10. Farmaceutické výrobky, vyznačující se tím, že obsahují ribavirin a interferon alfa vzájemně oddělené, ale přilehlé formě.
11. Farmaceutické výrobky podle patentového nároku 10, vyznačující se tím, že interferon alfa je ve formě vhodné pro parenterální injekci, výhodně pro subkutánní injekci a ribavirin je v pevné dávkovači formě, výhodně v dávkovači formě vhodné pro orální podávání.
12. Farmaceutické výrobky podle patentových nároků 10 nebo 11, vyznačující se t í m, že obsahují množství ribavirinu postačující přinejmenším pro jednodenní léčbu a množství interferonu alfa postačující přinejmenším pro jednu injekční dávku.
13. Farmaceutické výrobky podle patentového nároku 12, vyznačující se tím, že množství ribavirinu je od 400 do 1200 mg, výhodně 800 až 1200 mg a množství interferonu alfa je 3 miliony IU nebo přinejmenším 3 miliony IU.

« · • · · · • · · · • · · ·· · ···· • · · · · · · · · « ······· · · · · · · · » 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9999 9 9 9 99 9 9 99
14. Farmaceutické výrobky podle kteréhokoli patentového nároku 10 až 13, vyznačující se t í m, že jsou ve formě soupravy s návodem pro kombinované použití při léčení chronických infekcí hepatitidou C.