CZ20011979A3

CZ20011979A3 - Preparát pro léčbu rakoviny a způsob pouľití přirozených rostlinných olejů

Info

Publication number: CZ20011979A3
Application number: CZ20011979A
Authority: CZ
Inventors: Steven M. Bessette; Essam E. Enan
Original assignee: Ecosmart Technologies, Inc.
Priority date: 1998-12-07
Filing date: 1999-12-07
Publication date: 2001-10-17
Also published as: CA2353476A1; DE69928000D1; AU2167000A; EP1137427A1; US20030108622A1; BR9916879A; IL143488A0; AU2167100A; MXPA01005598A; HUP0104674A3; ZA200104611B; US7008649B2; MXPA01005545A; PL349028A1; ATE307601T1; MXPA01005641A; DE69928000T2; US20030108623A1; AU1841900A; WO2000033857A9

Description

Předkládaný vynález se týká obecně terapeuticky účinných farmaceutických preparátů obsahujících rostlinné esenciální olejové sloučeniny, a způsobů použití těchto sloučenin pro profylaxi nebo léčbu rakoviny měkkých tkání, jako je například rakovina prsu, u savců včetně člověka.

Dosavadní stav techniky

Rakovina prsu je proliferativní onemocnění savčích epiteliálních buněk a bylo prokázáno, že estrogeny stimuluj i proliferaci těchto buněk v kultivaci in vitro i u myší (Soto a

Sonnenschein, 1985; Osborne 1988).

Bylo navrženo, že xenoestrogeny stimulují buněčnou proliferaci vazby a aktivace estrogenových receptorů (ER) prostřednictvím (Miller et al.,

1993; Hoffman, 1992)

Incidence rakoviny prsu se stále zvyšuje během posledních dvou nebo tří dekád, což je trend charakterizovaný zvýšením výskytu na estrogeny odpovídajících nádorů, pokračujícím zvyšováním výskytu u starších žen a zvyšováním výskytu v rozvinutých i rozvojových zemích (Harris et al. , 1992) . Mezi roky 1973-1980 se incidence rakoviny prsu ve Spojených státech zvýšila u žen pod 50 let mírně (8%), zatímco u žen nad 50 let se zvýšila o 32,1% (Ries et al. , 1991) . Tento posun do vyšších věkových kategorií je ve shodě s historickými důvody akumulace reziduí organochlórových insekticidů (xenoestrogeny) v životním prostředí (Mussalo·· · ·

Rauhamaa et al., 1990, Wolff et al., 1993;

Davis et al. ,

1993). Rakovina prsu je také druhou nej častěj ši příčinou úmrtí na rakovinu u žen a bylo odhadnuto, že v roce

1998 rakovinou prsu bude způsobeno dalších 43900 úmrtí.

Bylo navrženo, že estrogeny v životním prostředí, nebo látky narušující endokrinní činnost hrají roli v etiologii nebo podporování vzniku rakoviny prsu (Davis et al., 1993;

Dewailly et al. ,

1995) . Experimentální důkazy odhaluj i, že xenoestrogeny ovlivňují tvorbu estrogenů a metabolismus a patří mezi rizikové faktory, které způsobují rakovinu prsu

Berthois et al., 1986; Henderson et al., 1993; Jobling

1996; Dees et

1997) .

Většina známých rizikových faktorů pro rakovinu prsu, které vysvětluj i alespoň 30% případů (Henderson et

1993), je spojena s dlouhodobou expozicí reprodukčním chemickým látkám, jako j sou například estrogeny a xenostrogeny.

Zdá se zřejmé, že výskyt rakoviny měkkých tkání se u savců zvyšuje každým rokem jako důsledek zvýšených hladin estrogenů a zvyšující se expozice xenoestrogenům zevního prostředí. Například se rychle zvyšuje počet estrogenů předepsaných ženám v menopause, v současnosti je tento počet odhadovaný na 50 000 000 předpisů ročně jen ve Spojených státech. Narůstající používání estrogenů vysvětluje vyšší riziko vzniku rakoviny prsu u mladých žen i žen středního věku. Estrogeny jsou přítomny u všech savců a jsou nezbytné u žen pro reprodukční orgány, jako jsou například vaječníky, děloha, prsa, atd. U mužů jsou estrogeny nezbytné pro tvorbu spermií a jejich vyzrávání. Nadměrné používání estrogenů předepisovaných ženám je alespoň částečně zodpovědné za rozvoj rakoviny měkkých tkání, obzvláště rakoviny prsu. Je proto žádoucí antagonizovat nebo neutralizovat nežádoucí účinky estrogenů i žen.

V současnosti používaná léčba ve Spojených státech schválená FDA, například tamoxifen, je účinná do určité míry u některých z ženských pacientek, co se týká antagonizace nežádoucích účinků estrogenů. Naneštěstí není tato léčba není úplně účinná a může sama o sobě způsobit další účinky na zdraví, jako je například rakovina dělohy. Proto pokud by někdo byl schopen identifikovat sloučeniny, které by současnou léčbu zefektivnit, nebo které by mohly účinkovat spolu se současnou léčbou, nebo na místo současných léčebných prostředků, bylo by možno zmírnit, nebo dokonce eliminovat tyto nežádoucí vedlejší účinky. Možnými alternativními léčebnými prostředky jsou přirozené netoxické sloučeniny. Je předpoklad, že tyto sloučeniny by mohly být výhodnými bezpečnějšími a účinnějšími léčebnými prostředky.

Jako potenciální léčba pro rakovinu prsu je navrhováno použití určitých monoterpenoidních rostlinných esenciálních olejů (alfa-terpineol, linalol a limonen). Tyto monoterpenoidy však nejsou zcela účinné a bylo prokázáno, že mají slabý antiproliferační protinádorové účinky. Navíc výsledky nenaznačují schopnost těchto sloučenin antagonizovat účinek estrogenů. To může vést k otázce, jak může tento produkt interagovat u žen suplementovaných estrogeny.

Z tohoto důvodu existuje velká potřeba nových farmaceutických preparátů obsahujících netoxické složky, které mohou být účinně použity u savců v prevenci nebo léčbě rakoviny měkkých tkání.

Popis vynálezu

Primárním cílem předkládaného vynálezu je poskytnout nové preparáty, které obsahují určité rostlinné esenciální oleje, přirozené nebo syntetické, nebo jejich směsi či deriváty, pro profylaxi nebo léčbu rakoviny měkkých tkání.

Výše uvedený cil i další cíle jsou dosaženy předkládaným vynálezem, který je namířen na nové farmaceutické preparáty obsahující alespoň jednu sloučeninu na bázi rostlinného esenciálního oleje, zahrnující její směsi a deriváty, které jsou synteticky vyrobeny nebo získány z přirozených zdrojů. Předkládaný vynález je také namířen na metody’ používající takové nové farmaceutické preparáty pro profylaxi nebo léčbu rakoviny měkkých tkání.

Další cíle a doprovodné výhody předkládaného vynálezu budou vyloženy v popisu, který následuje, nebo mohou být poznány z provádění nebo používání předkládaného vynálezu. Cíle a výhody mohou být realizovány a dosaženy prostřednictvím prostředků a kombinací obzvláště patentových nárocích. Je rozuměno, citovaných v připojených že předcházející obecný popis a následující detailní popis slouží pouze jako příklady a nemělo by na ně být pohlíženo jako na omezující vynález, jak je uvedeno v patentových nárocích.

Detailní popis vynálezu

Všechny patenty, patentové přihlášky a literatura citovaná v tomto vynálezu jsou začleněny do vynálezu jako reference v plné své délce. V případě nesrovnalostí převažuje předkládané uvedení včetně definic.

V přednostní formě vynálezu je poskytnut nový farmaceutický preparát pro prevenci nebo léčbu rakoviny, preparát zahrnující alespoň jednu sloučeninu na bázi rostlinného esenciálního oleje zahrnující směsi nebo deriváty sloučenin na bázi rostlinného esenciálního oleje odvozené buďto z přirozených nebo syntetických zdrojů.

Specifické rostlinné esenciální oleje zde uvedené, nebo jejich deriváty zahrnují sloučeniny s monocyklickým, karbocyklickým kruhem majícím šest atomů substituovaných alespoň jednou oxygenovanou nebo hydroxylovou funkční skupinou. Příklady rostlinných esenciálních olejů obsažených v předkládaném vynálezu zahrnují, ale nejsou omezeny na sloučeniny vybrané ze skupiny obsahující C16 aldehyd (čistý), amylaldehyd kyseliny skořicové, amylsalicylát, aldehyd kyseliny anisové, benzylalkohol, benmzylacetát, aldehyd kyseliny skořicové, alkohol kyseliny skořicové, α-terpineol, carvacrol, citral, citronellal, citronellol, p-cymen, dietylftalát, dimetylsalicylát, dipropylenglykol, eukalyptol (cineol), eugenol, iso-eugenol, galaxolid, geraniol, guaiacol, ionon, dlimonen, mentol, metylantranilát, metylionon, metylsalicylát, α-felandren, perillaldehyd penyrojalového oleje, 1- nebo 2fenyl etyl alkohol, 1- nebo 2- fenyl etyl propionát, piperonal, piperonyl acetát, piperonyl alkohol, D-pulegon, terpinen-4-ol, terpinyl acetát, 4-tert butylcyklohexyl acetát, tymiánový olej, thymol, metabolity trans-anetolu, vanilin, etylvanilin a podobně. Protože tyto sloučeniny na bázi rostlinných esenciálních olejů jsou známy a používány pro jiné účely, mohou být připraveny zkušenou osobou za použití známých způsobů.

Výše zmíněné sloučeniny na bázi rostlinných esenciálních olejů, které jsou předmětem předkládaného vynálezu mohou být zakoupeny z konvenčních zdrojů, mohou být snadno izolovány ze specifických rostlin nebo stromů a purifikovány (izolovány), nebo mohou být syntetizovány za použití konvenčních technik. Tyto sloučeniny mohou být s výhodou pohodlně syntetizovány ze snadno dostupných výchozích materiálů. Relativní jednoduchost, s kterou mohou být preparáty, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, syntetizovány, představuje obrovskou výhodu pro výrobu těchto sloučenin ve velkém měřítku.

aktivní sloučeniny na bázi

Bude oceněno, že terapeuticky olejů, které jsou předmětem rostlinných esenciálních předkládaného vynálezu, mohou být modifikovány nebo derivati zovány připoj enim vhodných funkčních skupin biologických vlastnosti.

Takové modifikace jsou známy v biologický průnik oboru a zahrnují modifikace, které zvyšuj i do daného biologického kompartmentu krve, lymfatického systému, centrálního nervového systému) aby se , zvyšují perorální umožnilo injekční dostupnost, zvyšují rozpustnost, podání, narušují metabolismus a vylučování. Navíc mohou být stupeň rostlinných esenciálních olejů pozměněny takže požadovaná terapeuticky aktivní vytvořena z proléku v těle pacienta jako výsledek účinku sloučeniny na bázi na prolékovou formu, forma sloučeniny je metabolických jiných biochemických procesů. Některé příklady prolékových forem zahrnují ketalové, acetalové, oximové a hydrazonové formy sloučenin, které obsahují ketonové nebo aldehydové skupiny.

Navíc bázi rostlinných esenciálních olejů, j sou nebo sloučeniny na předmětem předkládaného vynálezu, mohou obsahovat více asymetrických uhlíkových atomů a mohou se které j eden tedy vyskytovat jako racemáty nebo racemické diastereomerické směsi, jednotlivé enantiomery, směsi individuální diastereomery.

Každý stereogenní uhlík může být v R nebo

S konfiguraci.

Všechny takové izomerní formy těchto sloučenin jsou výslovně zahrnuty v rozsahu předkládaného vynálezu.

Jak bude oceněno, preparáty a způsob, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, zahrnují farmaceutické preparáty, které obsahují alespoň jeden rostlinný esenciální olej a jeho farmaceuticky přijatelné soli, v kombinaci s jakýmkoli farmaceuticky přijatelným nosičem, adjuvantní látkou nebo nebo ·· vehikulem.

Termín famaceuticky přijatelný nosič adjuvantní látka se týká nosiče nebo adjuvantni látky, které mohou být podány pacientovi spolu se sloučeninou na bázi rostlinných esenciálních olejů, která je předmětem předkládaného vynálezu, a která neničí svojí farmakologickou aktivitu a je netoxická, pokud je podána v dávkách dostatečných k dopravení terapeutického množství sloučeniny.

Farmaceuticky přijatelné soli sloučenin na bázi rostlinných esenciálních olejů, které jsou předmětem tohoto vynálezu zahrnují sloučeniny odvozené od farmaceuticky přijatelných anorganických a organických kyselin a zásad. Příklady vhodných kyselých solí zahrnují, bez omezení, acetát, adipát, alginát, aspartát, benzoát, benzensulfonát, bisulfát, butyrát, citrát, kamforát, kamforosulfonát, cyklopentanopropionát, diglikonát, dodecylsulfát, etansulfonát, formát, fumarát, glukoheptanoát, glycerofospát, glykolát, hemisulfát, heptanoát, hexanoát, hydrochlorid, hydrobromid, hydroj odid,

2-hydroxyetansulfonát, laktát, maleát, malonát, nikotinát, nitrát, oxalát, metansulfonát, 2-naftalensulfonát, palmoát, pektinát, persulfát, 3 fenylpropionát, fosfát, pikrát, pivalát, salicylát, sukcinát, sulfát, tartarát, thiocyanát, tosylát a undekanoát. Další kyseliny, jako je například oxalová, která sama o sobě není farmaceuticky přijatelná, může být použita pro přípravu solí, které jsou užitečné jako meziprodukty pro získání sloučenin, které jsou předmětem vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelných kyselých adičních solí.

Soli odvozené od příslušných zásad zahrnují alkalické kovy (například sodík), kovy alkalických zemin (například hořčík), amonium a N-(Ci_₄ alkyl) 4+ soli. Předkládaný vynález také zahrnuje kvarternalizaci všech zásaditých dusík obsahujících skupin zde uvedených sloučenin. Touto kvarternalizaci mohou být získány ve vodě nebo v oleji rozpustné nebo disperzní produkty.

Farmaceuticky přijatelné nosiče, adjuvantní látky a vehikula, které mohou být použity ve farmaceutických preparátech, dále zahrnují, ale nejsou omezeny na, ionexy, hliník, aluminium stearát, lecitin, samo-emulzifikující systémy pro dopravení léku (SEDS), j ako j e například d . alfa-tokoferol polyetylenglykol 1000 sukcinát, nebo jiné podobné polymerní matrice a systémy pro dopravení léku, sérové bílkoviny, jako je například sérový albumin, pufrové složky, jako jsou například fosfáty, glycin, kyselina sorbová, sorbát draselný, částečné glyceridové směsi nasycených rostlinných mastných kyselin, vodu, soli nebo elektrolyty, jako je například protamin sulfát, dvojsodný hydrogen fosfát, draselný hydrogen fosfát, chlorid sodný, zinkové soli, koloidální siliku, magnézium trisilikát, polyvinyl pyrolidon, látky na bázi celulózy, polyetylenglykol, karboxymetylcelulózu sodnou, polyakrylát, vosky, poletylen-polyoxypropylen-blokové polymery, polyetylenglykol a tuk z vlny. Ke zvýšení účinnosti dopravení terapeuticky účinných sloučenin na bázi rostlinných esenciálních olejů, které jsou předmětem předkládaného vynálezu mohou být také s výhodou použity cyklodextriny, jako jsou například alfa, beta, a gama cyklodextriny, nebo jejich chemicky modifikované deriváty, jako například hydroxyalkylcyklodextriny, zahrnující 2- a 3-hydroxypropylbeta-cyklodextriny nebo jiné solubilizované deriváty.

Farmaceutické preparáty, které jsou předmětem tohoto vynálezu, mohou podávány perorálně, parenterálně, inhalačním sprejem, topicky, rektálně, nazálně, prostřednictvím implantovaného způsobem je podání perorální bukálně, vaginálně, nebo rezervoáru, avšak přednostním nebo injekční. Farmaceutické preparáty, které jsou předmětem tohoto vynálezu mohou • φ φφ φφφφ φφ · φφ φφ φ φ φ φ · φφ φ φ φ φ φ φ φ φ φ ΦΦΦΦ· φφφ φ

Φ φφφ φφ«

ΦΦΦ ΦΦΦ φφ Φ *φ ·_:φ· ' obsahovat jakékoli konvenční netoxické farmaceuticky přijatelné nosiče, adjuvantni látky nebo vehikula. V některých případech může být pH preparátu upraveno pomocí farmaceuticky přijatelných kyselin, zásad nebo pufrů ke zvýšení stability připravené sloučeniny nebo její formy určené k dopravení léku. Termín parenterální, jak je zde používán, zahrnuje subkutánní, intrakutánní, intramuskulární, intraartikulární, intrasynoviální, intrasternální, intrathekální, intralézní a intrakraniální injekční nebo infúzní techniky.

Farmaceutické preparáty mohou být ve formě sterilního injekčního preparátu, například jako sterilní injekční vodná nebo olejová suspenze. Tato suspenze může být formulována podle technik známých v oboru za použití vhodných disperzujicích a zvlhčujících látek (jako je například Tween 80) a látek rozpouštěcích. Sterilní injekční preparát může být také sterilní injekční roztok nebo suspenze v netoxické parenterálně přijatelné ředící nebo rozpouštěcí látce, například jako roztok v 1,3-butandiolu. Mezi přijatelná vehikula a rozpouštěcí látky, které mohou být použity, patří manitol, voda, Ringerův roztok a izotonický roztok chloridu sodného. Jako rozpouštěcí médium jsou konvenčně navíc používány sterilní fixní oleje. Pro tento účel může být použit jakýkoli nedráždivý fixní olej zahrnující syntetické mononebo diglyceridy. Mastné kyseliny, jako jsou kyselina olejová a její glyceridové deriváty, jsou užitečné v přípravě injekčních preparátů, protože to jsou přirozené farmaceuticky přijatelné oleje, jako je například olivový nebo kastorový olej, zejména jejich polyoxyetalované formy. Tyto olejové roztoky nebo suspenze mohou také obsahovat ředící látku na bázi alkoholu s dlouhým řetězcem nebo disperzní látku, jako je například Ph. Helv nebo podobný alkohol.

·♦ 9999 ·9 9

9 9 9 99

9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 999 999 99 9 99 ·««

Farmaceutické preparáty, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, mohou podávány perorálně v jakékoli perorálně přijatelné dávkové formě zahrnující, ale neomezující se na, kapsle, tablety, vodné suspenze a roztoky. V případě tablet pro perorální použití zahrnují běžně používané nosiče laktózu a kukuřičný škrob. Typicky jsou přidávány také lubrikační látky, jako je například magnézium stearát. Užitečné ředící látky pro perorální podání ve formě kapslí zahrnují laktózu a vysušený kukuřičný škrob. Pokud jsou podávány vodné suspenze perorálně, je aktivní složka kombinována s emulzifikující a rozpouštěcí látkou. Pokud je to požadováno, mohou přidány určité sladící a/nebo dochucující a/nebo barvící látky.

Farmaceutické preparáty, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, mohou být také podávány ve formě čípků pro rektální podání. Tyto preparáty mohou být připraveny smíšením sloučeniny, která je předmětem vynálezu, s vhodnou nedráždivou excipientní látkou, která je v pevném stavu při pokojové teplotě, ale která je ve stavu kapalném při rektální teplotě, a proto v rektu se rozpouští a uvolňuje aktivní složky. Takové materiály zahrnují, ale nejsou omezeny na, kakaové máslo, včelí vosk a polyetylenglykoly.

Ačkoliv se topické podáni farmaceutických preparátů, které jsou předmětem předkládaného vynálezu používá vzácně, je toto podání obzvláště užitečné, pokud se požadovaná léčba týká oblastí nebo orgánů snadno přístupných pro topické podání. Pro topické podáni na kůži by farmaceutický preparát měl být formulován s vhodnou mastí obsahuj ící aktivní složky rozpuštěné v nosiči. Nosiče pro topické podání sloučenin tohoto vynálezu zahrnují, ale nej sou omezeny na, minerální olej, tekutý petrolej, propylen glykol, polyoxyetylén polyoxypropylen, emulzifikující vosk a vodu. Alternativně může být farmaceutický preparát formulován s vhodnou pleťovou vodou • 9 99 9999 99 9

9 9 9 9 9 9999

9 9 9 9 9 9 9

999 999 99 9 99 999 nebo krémem obsahujícími aktivní sloučeninu rozpuštěnou v nosiči. Vhodné nosiče zahrnují, ale nejsou omezeny na, minerální olej, sorbitan monostearát, polysorbát 60, vosk na bázi cetyl esterů, cetearyl alkohol, 2-oktyldodekanol, benzylalkohol a vodu. Farmaceutické preparáty, které jsou předmětem tohoto vynálezu, mohou být také topicky podávány do dolní části střevního traktu pomocí rektálních čípků nebo ve vhodných nálevech. Topické transdermálni náplasti jsou v tomto vynálezu také zahrnuty.

Farmaceutické preparáty, které jsou předmětem tohoto vynálezu, mohou být podávány nosním aerosolem nebo inhalačně. Takové preparáty jsou připraveny podle technik dobře známých v oboru přípravy farmaceutických preparátů a mohou být připraveny jako roztoky ve fyziologickém roztoku za použití benzylalkoholu nebo jiných vhodných konzervačních látek, látek podporujících absorpci za účelem zvýšení biodostupnosti, fluorouhlíků, a/nebo dalších solubilizačních nebo disperzních látek známých v oboru.

Dalším přijatelným farmaceutickým preparátem by byla enkapsulovaná forma rostlinných esenciálních olejů jako taková, nebo modifikovaná, jak je popsáno v předchozím popisu. Stěny kapsle mohou být navrženy, aby rychle uvolňovaly rostlinné esenciální oleje, tj . během jedné minuty, hodiny, nebo dne, nebo mohou být navrženy, aby uvolňovaly tyto látky po navrženou dobu, tj. dny, týdny nebo měsíce. Materiály stěny mohou být přirozené nebo syntetické polymery přijatelné pro US FDA, nebo tvořené lipidy nebo jinými vhodnými materiály. Tyto kapsle mohou být dopraveny buďto perorálně nebo injekčně, mohou být buďto vodného nebo olejového charakteru v závislosti na požadovaném způsobu použití nebo vyžadovaném stupni uvolňování.

• · «

Φ

ΦΦ

Pro prevenci a léčbu rakoviny měkkých tkáni jsou užitečné dávky mezi zhruba 0,001 a zhruba 100 mg/kg tělesné váhy za den, přednostně mezi zhruba 0,5 a zhruba 75 mg aktivní složky na kg tělesné váhy za den. Farmaceutické preparáty, které jsou předmětem tohoto preparátu budou typicky podávány zhruba 1 až 5 krát denně nebo alternativně jako kontinuální infúze. Takové podávání může být používáno jako chronická nebo akutní léčba. Množství aktivní složky, která může být zkombinována s nosičovým materiálem, potřebné ke vzniku jedné dávkové formy se liší v závislosti na typu léčby a způsobu podání. Typický preparát bude obsahovat od zhruba 5% do zhruba 95% aktivní sloučeniny (w/w). Takové preparáty obsahují přednostně od zhruba 20% do zhruba 80% aktivní sloučeniny.

Po zlepšení stavu pacienta může, je-li to nutné, být podávána udržovací dávka sloučeniny, preparátu nebo kombinací, které jsou předmětem tohoto vynálezu. Následně může být dávkování, častost podávání, nebo obojí sníženy v závislosti na příznacích, a to na úroveň, při které je zlepšený stav udržen. V případě, že příznaky byly zmírněny na požadovanou úroveň, měla by být léčba ukončena. Pacienti však mohou vyžadovat dlouhodobou intermitentní léčbu při rekurenci jakéhokoli z příznaků.

Profylaktické použití předkládaného vynálezu může vyžadovat denní příjem profylakticky účinného množství.

Zkušená osoba ocení, že mohou být vyžadovány nižší nebo vyšší dávky než ty, které byly uvedeny. Specifické dávkovači a léčebné režimy pro jakéhokoli konkrétního pacienta budou záviset na celé řadě faktorů zahrnujících aktivitu použité specifické sloučeniny, věk, tělesnou váhu, celkový zdravotní stav, pohlaví, dietu, dobu podání, stupeň vylučování, kombinaci léků, závažnost a průběh rakovinného onemocnění, ·· ♦ « · ·

a posouzeni ·♦ ···· • · · • « · • · • ·· dispozici pacienta k rakovinnému onemocněni lékařem.

Preparáty a způsoby, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, budou dále ilustrovány následuj ícich, neomezujících Příkladech. Příklady jsou pouze ilustrací různých forem vynálezu a neomezují nárokovaný vynález, co se týká materiálů, onemocněni, poměrů váhy, parametrů procesu a podobně, jak je zde uváděno. Při čtení následujících

Přikladu bude oceněno, že růst a proliferace buněk MCF-7 je striktně estrogen dependentní. V přítomnosti estrogenů buňky rostou, splývají a vytvářejí ložiska, nádor. Při absenci estrogenů což j e j e růs parametr t těchto diagnostikující buněk pomalý a tvorba ložisek je vzácná.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Antiproliferativní efekt na buňky lidského epiteliálního karcinomu prsu (MCF-7)

Buňky MCF-7 byly kultivovány v růstovém médiu suplementovaném 10% fetálním bovinním sérem (FBS). Při 85% splývání byly buňky subkultivovány v ochuzeném médiu obsahujícím 5% FBS sérum bez fenolové červeně po dobu 24 hodin před léčbou testovanou chemickou látkou. Po 24 hodinách léčby byla buněčná proliferace měřena za použití inkorporace ³H-thymidinu. Tyto testované chemické látky byly testovány v přítomnosti nebo za absence estrogenů, aby se zjistilo, jestli mají antiestrogenní aktivitu navíc k jejich antiproliferačním účinkům. Studie byla provedena v tripletu a kontroly byly léčeny pouze rozpouštěcí látkou. Kontrolám byla podávána rozpouštěcí látka s etanolem v koncentraci pouze pod 0,1%. Estrogeny byly testovány při koncentraci 1 nM ( = 0,27 ng E₂/ml) . Exemplární sloučeniny na bázi rostlinných esenciálních olejů byly testovány v koncentraci 50 ug/ml. Výsledky jsou uvedeny v Tabulce 1.

Φ · φ

• ···

Tabulka 1
Testovaná chemická látka	Inkor	porace ³H thymidinu
Dpm/ug bílkoviny	% kontrolní hodnoty	% hodnoty estrogenů
Kontrola	414,2	100
Estrogen	658, 6	158	100
a-terpineol	480,5	116
a-terpineol + estrogen	679,1	164	103
Trans-anetol	434,9	105
Trans-anetol + estrogen	589, 8	142	89
Carvacrol	207, 2	50
Carvacrol + estrogen	181,7	43	28
Alkohol kyseliny skořicové	18,5	4
Alkohol kyseliny skořicové + estrogen	220,8	53	34
Eugenol	215, 6	52
Eugenol + estrogen	289,1	70	44
Izo-eugenol	119	29
Izo-eugenol + estrogen	164	40	25
Thymol	97, 3	23
Thymol + estrogen	108,2	26	16
Citronelal	85,2	20
Citronelal + estrogen	284,0	69	43
p-cymen	419,0	101
p-cymen + estrogen	632,0	152	96
Eucalyptol	398,0	96
Eucalyptol + estrogen	568,0	137	86
Metyl salicylát	44,0	107
Metyl salicylát + estrogen	693,9	168	106

Příklad 2

Antiproliferativní efekt

Buňky MCF-7 byly kultivovány v růstovém médiu suplementovaném 10% fetálním bovinním sérem (FBS). Při 85% splývání byly buňky subkultivovány v ochuzeném médiu obsahujícím 5% FBS sérum bez fenolové červeně po dobu 24 hodin před léčbou testovanou chemickou látkou. Po 24 hodinách léčby byla buněčná proliferace měřena za použití inkorporace ³H-thymidinu. Tyto testované chemické látky byly testovány v přítomnosti nebo za absence estrogenů, aby se zjistilo, jestli mají antiestrogenní aktivitu navíc k jejich antiproliferačním účinkům. Studie byla provedena v tripletu a kontroly byly léčeny pouze rozpouštěcí látkou. Kontrolám byla podávána rozpouštěcí látka s etanolem v koncentraci pouze pod 0,1%. Estrogeny byly testovány při koncentraci 1 nM (=0,27 ng E2/ml) . Sloučeniny ha bázi rostlinných esenciálních olejů byly testovány v koncentraci 50 ug/ml. Výsledky jsou uvedeny v Tabulce 2.

• ·· •	• ·· •	* •	·· «>··· • · • ·	• · • · • ·	• · *
• • · ·	• ···	•	• · ·· ·	• · • ·	• • · ·

Tabulka 2
Testovaná chemická látka	Inkor	porace ³H thymidinu
Dpm/ug bílkoviny	% kontrolní hodnoty	% hodnoty estrogenů
Kontrola	438,1	100
Estrogen	664,2	151, 6	100
a-terpineol	490,7	112,0
a-terpineol + estrogen	636,7	145,3	96
Guajakol	712,3	162,6
Guajakol + estrogen	788,8	180,1	119
R-(+)-Limonen	393,1	89,7
R-(+)-Limonen + estrogen	522, 6	119,3	79
a-felandren	348,4	79,5
α-felandren + estrogen	635,3	145, 0	96

Příklad 3

Účinek závislý na dávce na buněčný růst indukovaný E₂

Buňky MCF-7 byly kultivovány v růstovém médiu suplementovaném 10% fetálnim bovinním sérem (FBS). Při 85% splývání byly buňky subkultivovány v 6-jamkových Petriho miskách a suplementovány ochuzeným médiem obsahujícím 5% FBS sérum bez fenolové červeně po dobu 24 hodin před léčbou testovanými chemickými látkami o různých koncentracích. Po 5 dnech léčby byly buňky trypsinizovány a sbírány za použití mikrocentrifugy Eppendorf. Buněčné pelety byly resuspendovány v 1% trypanové modři a za použití hemocytometrického stanovení byly spočítány tři alikvóty (10 ul každá) suspenze s živými buňkami. Každý vzorek byl poté třikrát spočítán a uvedené údaje jsou průměrem ze tří stanovení. Tyto testované chemické látky byly testovány v přítomnosti 10 nM estrogenu (= 2,7 ng estrogenu/ml) . Byly použity dvě jamky na testovanou koncentraci. Tento experiment byl dvakrát opakován. Kontroly obdržely pouze rozpouštědlo v koncentraci etanolu pouze méně než 0,1%. Výsledky jsou uvedeny v Tabulce 3.

toto ·· «·«· to · to > to · to to ··· to « · to ··♦

Tabulka 3
Léčba	Počet buněk x (10⁴)/ml
Jamka č. 1	Jamka č. 2	Průměr	% kontrol
5. den
Kontrola	22	22	22,0	100
E₂ (10 nM)	36	28	32,0	145
				%anti E₂
E₂/thymol (20 ug/ml)	10	14	12,0	62,50
E₂/thymol (10 ug/ml)	12	12	12,0	62,50
E₂/thymol (5 ug/ml)	20	18	19,0	40,60
E₂/thymol (1 ug/ml)	32	32	32,0	00,00
E₂/izoeugenol (20 ug/ml)	10	10	10,0	69, 00
E₂/izoeugenol (10 ug/ml)	6	10	8, 0	75, 00
E₂/izoeugenol (5 ug/ml)	18	23	21,0	35,60
Ej/izoeugenol (1 ug/ml)	21	21	21,0	35, 60
E₂/eugenol (20 ug/ml)	10	16	13,0	60,40
E₂/eugenol (10 ug/ml)	18	14	16,0	50, 00
E₂/eugenol (5 ug/ml)	19	19	19,0	41,70
E₂/eugenol (1 ug/ml)	¹⁹	29	24,0	25,00
E₂/benzyl alkohol (50 ug/ml)	24	18	21, 0	35,40
E₂/aldehyd kyseliny skořicové (50 ug/ml)	00	02	01,0	96,90

Naše údaje ukazují na dávce závislý vztah mezi sloučeninami na bázi rostlinných esenciálních olejů a jejich antiestrogenními účinky na E2~indukovaný buněčný růst a proliferaci buněk lidského epiteliálního karcinomu prsu (MCF-7) . Tato data ukazují, že thymol v nízké dávce (5 ug/ml) poskytuje 40% ochranu před E₂-indukovaným abnormálním růstem buněk karcinomu prsu. Navíc tato data také ukazují, že eugenol (1 ug/ml) a izoeugenol (1 ug/ml) poskytují 35%, respektive 25% ochranu před E₂-indukovaným abnormálním růstem buněk karcinomu prsu (viz příklad 3). Dále aldehyd kyseliny skořicové poskytl

	Φ • · •	• •	φφ φφφφ φ Φ φ ♦	φφ φ φ	φ φ	φ φ
	•	«	φ Φ	φ	φ
• Φ	φφφ		φφ ♦	φ φ		φ φ

přibližně 96% kontroly před E₂~indukovaným abnormálním růstem buněk karcinomu prsu v koncentraci 50 ug/ml (viz příklad 3).

Tato data ukazují, inter alia, že určité rostlinné esenciální oleje a jejich kombinace jsou užitečné jako antiproliferativní, antiestrogenní a/nebo antimitogenní sloučeniny, které jsou užitečné pro profylaxi nebo léčbu rakoviny měkkých tkání.

Ačkoli ilustrativní formy předkládaného vynálezu byly popsány detailně, mělo by být rozuměno, že předkládaný vynález není omezen na tyto přesné formy vynálezu, a že různé změny a modifikace mohou být provedeny osobou znalou oboru bez odchýlení od rozsahu a charakteru vynálezu, jak je definováno v připojených patentových nárocích.

Claims

PATENTOVÉ

NÁROKY prevenci a léčbu rakoviny

Farmaceutický preparát pro měkkých tkání u savců, kterýžto preparát obsahuje alespoň jednu sloučeninu na bázi rostlinných esenciálních olejů. Farmaceutický preparát podle patentového nároku 1 sloučenina na bázi skupiny kyseliny rostlinných obsahuj ící skořicové, vybraná ze amylaldehyd kyseliny anisové, benzylalkohol, , kde esenciálních olejů je (čistý),

C16 aldehyd amylsalicylát, benmzylacetát, aldehyd aldehyd kyseliny skořicové, terpineol, carvacrol, cymen, dietylftalát, eukalyptol (cineol), geraniol, guaiacol, alkohol kyseliny skořicové, acitral, citronellal, citronellol, pdimetylsalicylát, dipropylenglykol, eugenol, iso-eugenol, galaxolid, ionon, d-limonen, mentol,

1- nebo 2- fenyl etyl piperonal, terpinenacetát, metylantranilát, metylionon, metylsalicylát, a-felandren, penyrojalový olej, perillaldehyd, alkohol, 1- nebo 2- fenyl etyl propionát, piperonyl acetát, piperonyl alkohol, D-pulegon,

4-ol, terpinyl acetát, 4-tert butylcyklohexyl tymiánový olej, thymol, metabolity trans-anetolu, a etylvanilin. Farmaceutický preparát podle patentového obsahující farmaceuticky přijatelný nosič. Farmaceutický preparát rakovinou měkkých tkání Farmaceutický preparát sloučeninou na bázi podle patentového je rakovina prsu.

podle patentového rostlinného esenciálního oleje nároku nároku nároku vanilin lz
2, dále kde kde je eugenol.

Farmaceutický preparát podle patentového nároku 2, sloučeninou na bázi rostlinného esenciálního oleje kde je thymol.

6.

• · «· ···· • 4 * ♦ 4 4 • 4 • 4 · • • • • • 4 • • • • • • 4 4 • • • « · 4 4 · 4· • • · ··
7. Farmaceutický preparát podle patentového nároku 2, kde sloučeninou na bázi rostlinného esenciálního oleje je izoeugenol.
8. Farmaceutický preparát podle patentového nároku 2, kde sloučeninou na bázi rostlinného esenciálního oleje je benzylalkohol.
9. Farmaceutický preparát podle patentového nároku 2, kde sloučeninou na bázi rostlinného esenciálního oleje je carvacrol.
10. Farmaceutický preparát podle patentového nároku 2, kde sloučeninou na bázi rostlinného esenciálního oleje je alkohol kyseliny skořicové.
11. Farmaceutický preparát podle patentového nároků 2, kde sloučeninou na bázi rostlinného esenciálního oleje je aldehyd kyseliny skořicové.
12. Farmaceutický preparát podle patentového nároku 2, kde sloučeninou na bázi rostlinného esenciálního oleje je citronelal.
13. Farmaceutický preparát podle patentového nároku 2, kde sloučeninou na bázi rostlinného esenciálního oleje je trans-anetol.
14. Způsob léčby rakoviny zahrnující podání terapeuticky účinného množství preparátu podle patentového nároku 1 pacientovi potřebujícímu tuto léčbu.