CZ20021020A3

CZ20021020A3 - Sloučeniny pro léčení ischemie

Info

Publication number: CZ20021020A3
Application number: CZ20021020A
Authority: CZ
Inventors: Hiroko Masamune; Michael Paul Deninno; Robert William Scott
Original assignee: Pfizer Products Inc.
Priority date: 1999-09-30
Filing date: 2000-09-22
Publication date: 2003-04-16
Also published as: TR200200843T2; CR6592A; ATE312117T1; ZA200202461B; MY133996A; ECSP003682A; CN1374967A; NZ517177A; IS6286A; HUP0202807A2; GT200000161A; HK1049011A1; KR20020034206A; PE20010696A1; OA12021A; NO20021474D0; EA005422B1; NO20021474L; EP1216257B1; PA8503301A1

Description

Vynález se týká agonistů receptoru adenosinu A-3, farmaceutických kompozic, které takové inhibitory obsahují a použití těchto inhibitorů pro léčení například ischemie, zejména perioperačního ischemického poškození myokardu, u savců, včetně lidí.

Dosavadní stav techniky

Ischemické poškození myokardu se vyskytuje u ambulatních pacientů a také jako perioperační okolnost a může se vyvinout v náhlou smrt, infarkt myokardu nebo městnavé srdeční selhání. V medicíně stále přetrvává potřeba ischemickému poškození myokardu, zejména perioperačnímu, zabránit nebo ho minimalizovat. O takové terapii lze předpokládat, že bude terapií zachraňující život, která sníží hospitalizaci, zvýší kvalitu života a sníží celkové náklady zdravotní péče o ohrožené pacienty.

Farmakologická kardioprotekce by snížila incidenci a progresi infarktu a dysfunkce myokardu, k nimž dochází při operaci (perioperačně). Kromě snížení poškození myokardu a zlepšení postischemické funkce myokardu u pacientů s ischemickou chorobou srdeční by kardioprotekce také snížila incidenci srdeční morbidity a mortalitu, jejíž příčinou jsou infarkty a dysfunkce myokardu, u ohrožených pacientů (tj. pacientů, kteří jsou starší 65 let, nesnášejí námahu, trpí chorobou koronárních artérií, diabetes mellitus nebo hypertenzí), u nichž je třeba provést nesrdeční operaci.

• ·

V US patentu č. 5 604 210 je popsáno použití určitých sloučenin adenosinového typu pro prevenci nebo léčení edému mozku, nitrolebečního krvácení a mozkového infarktu.

V US patentu č. 5 688 774 jsou popsány selektivní agonisty A₃ , konkrétně adeninové sloučeniny se zvolenými substituenty v polohách 2, 6 a 9 a příbuzné substituované sloučeniny, zejména sloučeniny, které obsahují substituenty na benzylové a/nebo uroamidové skupině, jako činidla, která aktivují receptor A₃.

V US patentu č. 5 773 423 je popsán N⁶-benzyladenosin-5'-N-uroamid a jemu příbuzné substituované sloučeniny, zejména sloučeniny, které obsahují substituenty na benzylové a/nebo uroamidové skupiny, a modifinované xanthinribosidy pro aktivaci receptoru adenosinu A₃.

V J. Med. Chem. 1994, 37, 636 až 646, Structurez:

-Activity Relationships of N -Benzyldenosine-5'-uroamides as A₃-Selective Agonists je popsána syntéza analog adenosinu modifikovaných v 5' poloze jako uroamidy a/nebo jako N⁶-benzylderiváty, které jsou potenciálně užitečné jako farmakologické a biochemické sondy pro receptory A₃.

V J. Med. Chem. 1995, 38, 1174 až 1188, Search for New Purine- and Ribose-Modified Adenosine Analogues as Selective Agonists and Antagonists at Adenosine Receptors se uvádí, že byla stanovena vazebná afinita řady různých derivátů adenosinu v místech receptorů adenosinu A₁, A₂ a

A₃. Konkrétně se zjistilo, že 3'-β-aminosloučeniny nevykazují žádnou aktivitu.

• ·

V J. Med. Chem. 1995, 38, 1720 až 1735, Structure-Activity Relationship of 9-Alkyladenine and Ribose-Modified

Adenosine Derivatives at Rat A₃ Adenosine Receptors je popsána syntéza 9-alkyladeninových derivátů a ribosa£ modifikovaných derivátu N -benzyladenosinu vedoucí k vyvinutí nových agonistů potkaního receptoru adenosinu A₃ .

V US patentu č. 5 817 760 jsou popsány rekombinantní lidské receptory adenosinu Al, A2a, A2b a A3, které byly připraveny postupy klonování cDNA a polymerasou katalyzované řetězové reakce. Rekombinantní receptory adenosinu je možno využít při zkouškách prováděných za účelem identifikace a hodnocení entit, které se vážou nebo podporují vazbu k receptorům adenosinu.

Ačkoliv tedy došlo k určitému pokroku, je zjevné, že potřeba léčení perioperační ischemie myokardu přetrvává.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I

kde

X představuje oxy, methylen nebo thioskupinu;

Y představuje skupinu CH nebo N;

Z představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkyloxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, trifluormethylskupinu nebo halogen;

R¹ představuje hydroxymethylskupinu, alkoxymethylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkoxylové části, cykloalkoxymethylskupinu se 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkoxylové části, karboxyskupinu, alkoxykarbonylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkoxylové části, cykloalkoxykarbonylskupinu se 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkoxylové části, 1,1-aminoiminomethylskupinu, l,l-(mono-N- nebo di-N,N-alkylamino ) iminomethylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, 1,l-(mono-N- nebo di-N,N-cykloalkylamino)iminomethylskupinu se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí, karbamoylskupinu, mono-N- nebo di-N,Ν-alkylaminokarbonylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupinu se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí nebo N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové a 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylová části;

R² představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku nebo cykloalkylskupinu se 3 až 5 atomy uhlíku;

• · ·· ·· ♦ · ♦ • · · • · ♦ · • · · ·♦ ····

R³ představuje halogen, trifluormethylskupinu, kyanoskupinu, alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkyloxyskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, ethenylskupinu nebo ethynylskupinu;

D představuje oxyskupinu, thioskupinu, NH, alkyloxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylthioskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylaminoskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

G představuje zčásti nasycený, zcela nasycený nebo zcela nenasycený pěti- až osmičlenný kruh, který popřípadě obsahuje 1 až 3 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, nebo bicyklický kruh tvořený dvěma anelovanými zčásti nasycenými, zcela nasycenými nebo zcela nenasycenými tří- až šestičlennými kruhy, bráno nezávisle, popřípadě s 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolenými z dusíku, síry a kyslíku; přičemž G je popřípadě mono-, di- nebo trisubstituovaný substituenty nezávisle zvolenými z halogenu, alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku, trifluormethylskupiny, trifluormethoxyskupinu, nitroskupiny, kyanoskupiny, cykloalkylskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku, hydroxyskupiny nebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku, nebo

G představuje kyanoskupinu, alkoxykarbonylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části, cykloalkoxykarbonylskupinu se 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, skupinu C(O)NR⁴R⁵, C(S)NR⁴R⁵, C(NH)NR⁴R⁵, C(N-alkyl)NR⁴R⁵ s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylové části nebo C(N-cykloalkyl)NR⁴R⁵ se 3 až 10 atomy uhlíku v cykloalkylové části;

• ·

R⁴ představuje vazbu, vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, cykloalkoxyskupinu se 3 až 10 atomy uhlíku nebo zčásti nasycený, zcela nasycený nebo zcela nenasycený pěti- až osmičlenný kruh, který je popřípadě vázán přes alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahuje 1 až 3 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, nebo bicyklický kruh nebo bicyklický kruh s případným můstkem s 1 až 3 atomy uhlíku (například adamantan) popřípadě vázaný přes alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, přičemž tento bicyklický kruh nebo přemostěný bicyklický kruh popřípadě obsahuje 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené z dusíku, síry a kyslíku, a přičemž alkylskupina s 1 až 10 atomy uhlíku, alkoxyskupina s 1 až 10 atomy uhlíku, cykloalkoxyskupina se 3 až 10 atomy uhlíku nebo kruh nebo kruhy uvedené v definici R⁴ jsou popřípadě mono-, di- nebo trisubstituovány substituenty nezávisle zvolenými z halogenu, alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku, trifluormethylskupiny, nitroskupiny, kyanoskupiny, cykloalkylskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku, hydroxyskupiny nebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku;

R⁵ představuje vazbu, vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku nebo cykloalkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku; nebo

R⁴ a R⁵ brány dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří zbytek zvolený ze zcela nasycených nebo zčásti nenasycených čtyř- až devítičlenných kruhů, které jsou popřípadě přemostěné a popřípadě obsahují 1 až 3 přídavné heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku a jsou popřípadě • · ·· ·· • · · • · ♦ • · · · ♦ · · ·* ··· · ··· «

mono- nebo disubstituovány substituenty nezávisle zvolenými z oxoskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylskupiny s 1 až 8 atomy uhlíku, aminoskupiny, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí, N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové a 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,N-cykloalkylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí, N-alkyl-N-cykloalkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové a 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, formylaminoskupiny, alkylkarbonylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, cykloalkylkarbonylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, alkoxykarbonylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části, N-alkoxykarbonyl-N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alifatických částí, sulfa moylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylsulfonylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, cykloalkylsulfonylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku a zčásti nasycených, zcela nasycených nebo zcela nenasycených pěti- až osmičlenných kruhů, které jsou popřípadě vázány prostřednictvím alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahují 1 až 3 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, a bicyklických kruhů tvořených dvěma anelovanými zčásti nasycenými, zcela nasycenými nebo zcela nenasycenými tří- až šestičlennými kruhy, bráno nezávisle, popřípadě vázanými • · * · ·· · Λ • · · · ·« _β;

• · · · 9 • ··: ’ : :

····- ·δ - ......

·· ·· • * • 9

9

9 9 •9 9999 prostřednictvím alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku, popřípadě obsahujícími 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené z dusíku, síry a kyslíku a popřípadě mononebo disubstituovanými halogenem, trifluormethylskupinou, trifluormethoxyskupinou, alkylskupinou s 1 až 3 atomy uhlíku nebo alkoxyskupinou s 1 až 3 atomy uhlíku;

a jejich proléčiva a farmaceuticky vhodné soli těchto sloučenin a proléčiv.

Skupina přednostních sloučenin, která je označena jako skupina A, obsahuje sloučeniny obecného vzorce I, znázorněného výše, kde

X představuje oxy;

Y představuje dusík;

Z představuje vodík;

R¹ představuje alkylkarbamoylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části;

R² představuje vodík;

R³ představuje halogen, trifluormethylskupinu, kyanoskupinu, alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkyl oxyskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, ethenylskupinu nebo ethynylskupinu;

D představuje oxyskupinu, thioskupinu, alkyloxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylthioskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

• · φ · · • · · · φ φ · • · · φ • ··· φ · • · φ _ ··· · • Φ φφ • φ φ • φ φ

9 9 · • * Φ

ΦΦ ΦΦΦ·

G představuje fenyl-, pyridyl-, pyrimidinyl-, pyrazinyl·-, thiazolyl-, oxazolyl-, isoxazolyl-, pyridazi nyl-, tetrazolyl-, isothiazolyl-, thiofenyl-, furyl-, 1,2,4-oxadiazolyl-, 1,2,4-thiadiazolyl-, pyrazolyl-, pyrrolyl-, indolyl-, naftyl-, chinolyl isochinolyl-, benzo[b]furyl-, benzo[b]thiofenyl-, benzothiazolyl-, tetrahydrofuryl-, pyrrolidinyl-, piperidinyl-, tetrahydropyranyl- nebo morfolinylskupinu, přičemž G je popřípadě mono-, di- nebo trisubstiutován substituenty nezávisle zvolenými z halogenu, alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku nebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.

Ze skupiny A se dává přednost sloučeninám, které tvoří skupinu B. Skupina B obsahuje sloučeniny, kde

R¹ představuje methylkarbamoylskupinu;

R³ představuje halogen;

D představuje alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

G představuje fenyl-, pyridyl-, thiazolyl-, oxazolyl-, isoxazolyl-, isothiazolyl-, furyl-,

1,2,4-oxadiazolyl-, 1,2,4-thiadiazolyl-, pyrazolyl- nebo pyrrolylskupinu, přičemž G je popřípadě mono-, di- nebo trisubstituován substituenty nezávisle zvolenými z halogenu, alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku, trifluormethoxyskupiny nebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.

·· • · · • · ···· ··* ··♦ ·

Ze skupiny B se dává přednost sloučeninám, které tvoří skupinu C. Skupina C obsahuje sloučeniny, kde

D představuje alkoxyskupinu s 1 až 2 atomy uhlíku;

G představuje fenyl-, thiazolyl-, oxazolyl-, isoxazolyl-, tetrahydrofuryl-, pyrrolidinyl-, piperidinylnebo morfolinylskupinu, přičemž G je popřípadě mono-, di- nebo trisubstituován substituenty nezávisle zvolenými z halogenu, alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku nebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.

Ze skupiny B se zvláštní přednost dává sloučeninám, kde

a) R³ předstvuje chlor, D představuje methylenoxyskupinu a G představuje fenylskupinu;

b) R³ představuje chlor, D představuje methylenoxyskupinu a G představuje 3-furylskupinu;

c) R³ představuje chlor, D představuje methylenoxyskupinu a G představuje 2-furylskupinu;

d) R³ představuje chlor, D představuje methylenoxyskupinu a G představuje 2-thiazolylskupinu;

e) R³ představuje chlor, D představuje methylenoxyskupinu a G představuje 5-(3-methylisoxazolyl)skupinu;

a jejich farmaceuticky vhodným solím.

• 99 9 •·9· 99

- 11 9 »9*9

Ze sloučenin podle vynálezu se zvláštní přednost dává sloučeninám zvoleným ze souboru sestávajícího z methylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzyloxy-5-chlorbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny;

methylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(furan-3-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny;

methylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-[5-chlor-2-(furan-2-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny;

methylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(thiazol-2 -ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny;

methylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(3-methylisoxazol-5-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrof uran- 2-karboxylové kyseliny;

a jejich farmaceuticky vhodným solím.

Skupina přednostních sloučenin, která je označena jako skupina D, obsahuje sloučeniny obecného vzorce I, znázorněného výše, kde

X představuje oxy;

Y představuje dusík;

představuje vodík;

• •»4 ··· • 444

R² představuje vodík;

D představuje alkyloxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylthioskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ nebo C(S)NR⁴R⁵, kde

R⁴ a R⁵ brány dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří zbytek zvolený ze zcela nasycených čtyř- až devítičlenných kruhů, které popřípadě obsahují 1 až 3 přídavné heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku a jsou popřípadě mono- nebo disubstituovány substituenty nezávisle zvolenými z oxoskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylskupiny s 1 až 8 atomy uhlíku, aminoskupiny, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí, N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové a 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylová části, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,N-cykloalkylaminoskupiny se 3 až atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí, N-alkyl-N-cykloalkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy

Φ

Φ· •

• ' · ·· ···

Φ· • «

9 • 9 • · ·*·« uhlíku v alkylové a 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, formylaminoskupiny, alkylformylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, cykloalkylformylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, sulfamoylskupiny, alkylsulfonylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, cykloalkylsulfonylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku a zčásti nasycených, zcela nasycených nebo zcela nenasycených pěti- až osmičlenných kruhů, které jsou popřípadě vázány prostřednictvím alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahují 1 až 3 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, a bicyklických kruhů tvořených dvěma anelovanými zčásti nasycenými, zcela nasycenými nebo zcela nenasycenými tří- až šestičlennými kruhy, bráno nezávisle, popřípadě připojenými prostřednictvím alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku, popřípadě obsahujícími 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené z dusíku, síry a kyslíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.

Ze skupiny D se dává přednost sloučeninám, které tvoří skupinu E. Skupina E obsahuje sloučeniny, kde

R¹ představuje methylkarbamoylskupinu;

R³ představuje halogen;

D představuje alkoxyskupinu s 1 až 2 atomy uhlíku;

G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ nebo C(S)NR⁴R⁵, kde

R⁴ a R⁵ brány dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří zbytek zvolený z piperidinylskupiny,

piperazinylskupiny, morfolinylskupiny, azetidinylskupiny a pyrrolidinylskupiny, přičemž uvedený kruh je popřípadě mono- nebo disubstituován substituenty nezávisle zvolenými z oxoskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylskupiny s 1 až 8 atomy uhlíku, aminoskupiny, karbamoylskupiny, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí, N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové a 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylová části, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminoskupiny s l až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,N-cykloalkylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí nebo N-alkyl-N-cykloalkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové a 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, formylaminoskupiny, alkylformylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, cykloalkylformylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, sulfamoylskupiny, alkylsulfonylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, cykloalkylsulfonylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku a zčásti nasycených, zcela nasycených nebo zcela nenasycených čtyř- až osmičlenných kruhů, které jsou popřípadě vázány prostřednictvím alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahují 1 až 2 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, a jejich farmaceuticky vhodné soli.

Ze skupiny E se dává přednost sloučeninám, které tvoří skupinu F. Skupina F obsahuje sloučeniny, kde iá představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵;

R⁴ a R⁵ brány dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří zbytek zvolený z piperidinylskupiny, piperazinylskupiny, morfolinylskupiny, azetidinylskupiny a pyrrolidinylskupiny, přičemž uvedený kruh je popřípadě mono- nebo disubstituován substituenty nezávisle zvolenými z hydroxyskupiny, oxoskupiny alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylskupiny s 1 až 8 atomy uhlíku, aminoskupiny, karbamoylskupiny, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, a zčásti nasycených, zcela nasycených nebo zcela nenasycených čtyř- až osmičlenných kruhů, které jsou popřípadě vázány prostřednictvím alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahují 1 až 2 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, a jejich farmaceuticky vhodné soli.

Ze skupiny F se zvláštní přednost dává sloučeninám kde

a) R³ představuje chlor; D představuje methylenoxyskupinu; G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵, kde R⁴ a R⁵ brány dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří piperazinylskupinu, která je v poloze 4 substituována methylskupinou;

o

b) R představuje chlor; D představuje methylenoxy skupinu; G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵, kde R⁴ a R⁵ brány

....._Ί <

• *-16 • · · · · · · dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří piperaz inylskupinu;

c) R³ představuje chlor; D představuje methylenoxyskupinu; G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵, kde R⁴ a R⁵ brány dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří piperidinylskupinu, která je v poloze 4 substituována N,N-dimethylaminoskupinou;

d) R³ představuje chlor; D představuje methylenoxy skupinu; G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵, kde R⁴ a R⁵ brány dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří piperidinylskupinu, která je v poloze 4 substituována piperidin-l-ylskupinou;

e) R³ představuje chlor; D představuje methylenoxy skupinu; G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵, kde R⁴ a R⁵ brány dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří piperidinylskupinu, která je v poloze 4 substituována methylaminoskupinou;

a jejich farmaceuticky vhodným solím.

Skupina přednostních sloučenin, která je označena jako skupina G, obsahuje sloučeniny obecného vzorce I, znázorněného výše, kde

X představuje oxy;

Y představuje dusík;

Z představuje vodík;

·· .· ···_· i?-. .

.... ·· >»· ··· *

R představuje vodík;

G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ nebo C(S)NR⁴R⁵, kde

R⁴ představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, cykloalkoxyskupinu se 3 až 10 atomy uhlíku nebo zčásti nasycený, zcela nasycený nebo zcela nenasycený pěti- až osmičlenný kruh, který je popřípadě vázán přes alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahuje 1 až 3 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, nebo bicyklický kruh tvořený dvěma anelovanými zčásti nasycenými, zcela nasycenými nebo zcela nenasycenými tří- až šestičlennými kruhy, bráno nezávisle, který je popřípadě vázaný přes alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahuje 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené z dusíku, síry a kyslíku,

R⁵ představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku nebo cykloalkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.

Ze skupiny G se dává přednost sloučeninám, které tvoří skupinu H. Skupina H .obsahuje sloučeniny, kde **•-*18

Ί

R představuje methylkarbamoylskupinu;

O

R představuje halogen;

D představuje alkoxyskupinu s 1 až 2 atomy uhlíku;

G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ nebo C(S)NR⁴R⁵;

R⁴ představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, cykloalkoxyskupinu se 3 až 10 atomy uhlíku nebo zčásti nasycený, zcela nasycený nebo zcela nenasycený pěti- až osmičlenný kruh, který je popřípadě vázán přes alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahuje 1 až 3 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.

Ze skupiny H se dává přednost sloučeninám, které tvoří skupinu I. Skupina I obsahuje sloučeniny, v nichž

G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵;

R⁴ představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, cykloalkylskupinu se 3 až 6 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku nebo cykloalkoxyskupinu se 3 až 10 atomy uhlíku;

R⁵ představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku nebo cykloalkylskupinu se 3 až 10 atomy uhlíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.

Ze skupiny I se zvláštní přednost dává sloučeninám, v nichž

R'

R' představuje představuje představuje představuje představuje chlor;

methylenoxyskupinu;

skupinu C(O)NR⁴R⁵;

vodík; a vodík;

a jejich farmaceuticky vhodným solím.

Skupina přednostních sloučenin, která je označena jako skupina J, obsahuje sloučeniny obecného vzorce I, znázorněného výše, kde

G představuje fenyl-, pyridyl-, pyrimidinyl-, pyrazi nyl-, thiazolyl-, oxazolyl-, isoxazolyl-, pyridinazinyl-, tetrazolyl-, isothiazolyl-, thiofenyl-, furyl-, 1,2,4-oxadiazolyl-, 1,2,4-thiadiazolyl-, pyrazolyl-, pyrrolyl-, indolyl-, naftyl-, chinolyl isochinolyl-, benzo[b]furyl-, benzo[b]thiofenyl-, ► 99 • 9 9

I »99

2«4-.

benzothiazolyl-, tetrahydrofuryl-, pyrrolidinyl-, piperidinyl-, tetrahydropyranyl- nebo morfolinylskupinu, přičemž G je popřípadě mono-, di- nebo trisubstiutován substituenty nezávisle zvolenými z halogenu, alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku nebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.

Ze skupiny J se dává přednost sloučeninám, které tvoří skupinu K. Skupina K obsahuje sloučeniny, v nichž

D představuje alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

G představuje fenyl-, pyridyl-, thiazolyl-, oxazolyl-, isoxazolyl-, isothiazolyl-, furyl-, 1,2,4-oxadiazolyl-, 1,2,4-thiadiazolyl-, pyrazolyl- nebo pyrrolylskupinu, přičemž G je popřípadě mono-, dinebo trisubstituován nezávisle halogenem, alkylskupinou s 1 až 3 atomy uhlíku nebo alkoxyskupinou s 1 až 3 atomy uhlíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.

Skupina přednostních sloučenin, označená jako skupina L, obsahuje sloučeniny obecného vzorce I znázorněného výše, kde

G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ nebo C(S)NR⁴R⁵, kde

R⁴ a R⁵ brány dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří zbytek zvolený ze zcela nasycených

• · « ·· čtyř- až devítičlenných kruhů, které popřípadě obsahují 1 až 3 přídavné heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku a jsou popřípadě mono- nebo disubstituovány substituenty nezávisle zvolenými z oxoskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylskupiny s 1 až 8 atomy uhlíku, aminoskupiny, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí, N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové a 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,N-cykloalkylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí, N-alkyl-N-cykloalkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové a 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, formylaminoskupiny, alkylformylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, cykloalkylformylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, sulfamoylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylsulfonylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, cykloalkylsulfonylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku a zčásti nasycených, zcela nasycených nebo zcela nenasycených pěti- až osmičlenných kruhů, které jsou popřípadě vázány prostřednictvím alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahují 1 až 3 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, a bicyklických kruhů tvořených dvěma anelovanými zčásti nasycenými, zcela nasycenými nebo zcela nenasycenými tří- až šestičlennými kruhy, bráno nezávisle, popřípadě připojenými *· ·* • · · · • · · • ·*· 4 ··«· ·· »« ♦ * * • « · • · · «· ·*·· prostřednictvím alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku, popřípadě obsahujícími 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené z dusíku, síry a kyslíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.

Ze skupiny L se dává přednost sloučeninám, které tvoří skupinu M. Skupina M obsahuje sloučeniny, kde

D představuje alkoxyskupinu s 1 až 2 atomy uhlíku;

G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ nebo C(S)NR⁴R⁵, kde

R⁴ a R⁵ brány dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří zbytek zvolený z piperidinylskupiny, piperazinylskupiny, morfolinylskupiny, azetidinylskupiny a pyrrolidinylskupiny, přičemž uvedený kruh je popřípadě mono- nebo disubstituován substituenty nezávisle zvolenými z oxoskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylskupiny s 1 až 8 atomy uhlíku, aminoskupiny, karbamoylskupiny, mono-Nnebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-Nnebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí, N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 1 až atomy uhlíku v alkylové a 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylová části, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,N-cykloalkylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí a N-alkyl-N-cykloalkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové a 3 až atomy uhlíku v cykloalkylové části, formylaminoskupiny, alkylformylaminoskupiny s 1 až 4 atomy

uhlíku v alkylové části, cykloalkylformylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, sulfamoylskupiny, alkylsulfonylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, cykloalkylsulfonylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku a zčásti nasycených, zcela nasycených nebo zcela nenasycených čtyř- až osmičlenných kruhů, které jsou popřípadě vázány prostřednictvím alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahují 1 až 2 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, a jejich farmaceuticky vhodné soli.

Ze skupiny M se dává přednost sloučeninám, které tvoří skupinu N. Skupina N obsahuje sloučeniny, kde

G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵; kde

R⁴ a r5 brány dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří zbytek zvolený z piperidinylskupiny, piperazinylskupiny, morfolinylskupiny, azetidinylskupiny a pyrrolidinylskupiny, přičemž uvedený kruh je popřípadě mono- nebo disubstituován substituenty nezávisle zvolenými z oxoskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylskupiny s 1 až 8 atomy uhlíku, aminoskupiny, karbamoylskupiny, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí a zčásti nasycených, zcela nasycených nebo zcela nenasycených čtyř- až osmičlenných kruhů, které jsou popřípadě vázány prostřednictvím alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahují 1 až 2 • · — 34··— ··* heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, a jejich farmaceuticky vhodné soli.

Skupina přednostních sloučenin, která je označena jako skupina 0, obsahuje sloučeniny obecného vzorce I, znázorněného výše, kde

G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ nebo C(S)NR⁴R⁵, kde

R⁴ představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, cykloalkoxyskupinu se 3 až 10 atomy uhlíku nebo zčásti nasycený, zcela nasycený nebo zcela nenasycený pěti- až osmičlenný kruh, který je popřípadě vázán přes alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahuje 1 až 3 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, nebo bicyklický systém tvořený dvěma anelovanými zčásti nasycenými, zcela nasycenými nebo zcela nenasycenými tří- až šestičlennými kruhy, bráno nezávisle, který je popřípadě vázaný přes alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahuje 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené z dusíku, síry a kyslíku,

a jejich farmaceuticky vhodné soli.

Ze skupiny O se dává přednost sloučeninám, které tvoří skupinu P. Skupina P obsahuje sloučeniny, kde

D představuje alkoxyskupinu s 1 až 2 atomy uhlíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.

Ze skupiny P se dává přednost sloučeninám, které tvoří skupinu Q. Skupina Q obsahuje sloučeniny, v nichž

G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵;

·· ·· a jejich

26.- .

• ·· · ·· farmaceuticky vhodné soli.

Předmětem vynálezu jsou dále sloučeniny obecného vzorce C kde

0 91

R a R^ÍJ- představuji kazdy nezávisle alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, vodík, fenylskupinu, fenylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, nebo jsou spolu spojeny za vzniku piperidinylového, pyrrolidinylového nebo morfolinylového kruhu;

2 9 Ί >

R a R představuji každý nezávisle alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, nebo jsou spolu spojeny za vzniku pěti- až šestičlenného karbocyklického kruhu; a

R²⁴ představuje alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, fenylskupinu nebo fenylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, přičemž fenylskupina nebo fenylalkylskupina je popřípadě mono-, di- nebo trisubstituována na fenylovém zbytku nezávisle nitroskupinou, halogenem nebo trifluormethylskupinou.

Dalším předmětem vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce Cl

4 4

kde n q η η

R a R představuje každý nezávisle alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, vodík, fenylskupinu, fenylaikylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, nebo jsou spolu spojeny za vzniku piperidinylového, pyrrolidinylového nebo morfolinylového kruhu; a

Předmětem vynálezu jsou dále sloučeniny obecného vzorce Cil kde

• ···· · ···· · • · · · · · · ···· ·· ··· ··· ·· ····

21

R a R představuje kazdy nezávisle alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, vodík, fenylskupinu, fenylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, nebo jsou spolu spojeny za vzniku piperidinylového, pyrrolidinylového nebo morfolinylového kruhu;

R²⁴ představuje alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, fenylskupinu nebo fenylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, přičemž fenylskupina nebo fenylalkylskupina je popřípadě mono-, di- nebo trisubstituována na fenylovém zbytku nezávisle nitroskupinóu, halogenem nebo trifluormethylskupinou; a

R²⁵ a R²⁶ představuje každý nezávisle alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo fenylskupinu.

Předmětem vynálezu jsou také sloučeniny obecného vzorce Clil

R³ představuje halogen, trifluormethylskupinu, kyanoskupinu, alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkyloxyskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, ethenylskupinu nebo ethynylskupinu.

Ze sloučenin obecného vzorce Clil se zvláštní přednost dává sloučeninám, kde ,· **f29

a) R³ představuje trifluormethylskupinu;

o

b) R^J představuje fluor; a *5

c) R^J představuje chlor.

Předmětem vynálezu jsou dále sloučeniny obecného

kde

O

R představuje halogen, trifluormethylskupinu, kyanoskupinu, alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkyl oxyskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, ethenylskupinu nebo ethynylskupinu.

Ze sloučenin obecného vzorce CIV se zvláštní přednost dává sloučeninám, kde

a) R³ představuje trifluormethylskupinu;

b) R představuje fluor; a

c) R³ představuje chlor.

Předmětem vynálezu jsou dále sloučeniny obecného vzorce CV

kde

Ze sloučenin obecného vzorce CV se zvláštní přednost dává sloučeninám, kde

O

a) R představuje trifluormethylskupinu;

b) R³ představuje fluor; a

c) R³ představuje chlor.

·· ·· · 9 ·' ·· • · · · 99 ·· « * <

999 9 9 99 ·

Předmětem vynálezu jsou dále sloučeniny obecného vzorce CVI

kde

R² představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku nebo cykloalkylskupinu se 3 až 5 atomy uhlíku; a

Ze sloučenin obecného vzorce CVI se zvláštní přednost dává sloučeninám, kde

a) R² představuje vodík; a R³ představuje chlor;

b) R² představuje vodík; a R³ představuje fluor; a

c) R² představuje cyklopropylskupinu? a R³ představuje fluor.

- 32·- « ·· ·· ‘ · · » • · ·

Předmětem vynálezu je také způsob výroby sloučenin obecného vzorce CVII

kde

T představuje alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku;

R představuje halogen, trifluormethylskupinu, kyanoskupinu, alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkyl oxyskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, ethenylskupinu nebo ethynylskupinu;

jehož podstata spočívá v tom, že se alkylamin s 1 až 4 atomy uhlíku acyluje sloučeninou obecného vzorce CVI • 9 99 9 9 ·· ·· • · · · 99 9 9 9 « «

9 9 · 9 9 · • ··· 9 9 9*999 _ Ο Ο · _ < 9 · 9 · 9

D » 9 99 99 999 999 9 · 999

kde η

R představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku nebo cykloalkylskupinu se 3 až 5 atomy uhlíku; a

Přednost se dává výše uvedenému způsobu, při němž

R představuje vodík nebo cyklopropylskupinu; R představuje fluor, chlor nebo trifluormethylskupinu; a kyselina obecného vzorce se před acylací alkylaminu s 1 až 4 atomy uhlíku esterifikuje na alkylester s 1 až 6 atomy uhlíku.

Podle zvláště přednostního provedení způsobu popsaného bezprostředně výše se sloučenina obecného vzorce CVI esterifikuje alkoholem za přítomnosti kyseliny při teplotě okolí až teplotě zpětného toku během asi 1 až asi 12 hodin.

• 4 ·· ·· • 4 4 4 • · · 4 444

- 34··-*

Podle zvláště přednostního provedení způsobu popsaného bezprostředně výše se ester nechá reagovat s aminem přibližně při teplotě okolí až teplotě zpětného toku po dobu asi 1 až asi 12 hodin v alkoholickém rozpouštědle.

Podle zvláště přednostního provedení způsobu popsaného bezprostředně výše, které je dále označováno jako způsob X, se esterifikace provádí při teplotě asi 50°C a acylace se provádí při teplotě asi 50°C.

Ve zvláště přednostním provedení způsobu X je alkoholem methanol; kyselinou je kyselina chlorovodíková; aminem je methylamin; R² představuje vodík; a R³ představuj chlor.

Ve zvláště přednostním provedení způsobu X je alkoholem methanol; kyselinou je kyselina chlorovodíková; aminem je methylamin; R představuje cyklopropylskupinu;

O a R představuje fluor.

Ve zvláště přednostním provedení způsobu X je alkoholem methanol; kyselinou je kyselina chlorovodíková; aminem je methylamin; R představuje vodík; a R představuje trifluormethylskupinu.

Předmětem vynálezu je dále způsob léčení savce, například člověka, který trpí chorobou nebo stavem mediovaným receptorem adenosinu A₃, jehož podstata spočívá v tom, že takovému savci podává terapeuticky účinné množství slou čeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo jejího proléčiva.

Dalším předmětem vynálezu je způsob snižování poškození tkáně (například v podstatě zabránění poškození tkáně, indukování ochrany tkáně), které je následkem • · ·· ·* » 9 9 9 • · ♦ • ···

- 35·*· ·· ischemie nebo hypoxie, jehož podstata spočívá v tom, že se savci (například člověku ženského nebo mužského pohlaví), který takové léčení potřebuje, podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo jejího proléčiva.

Přednostními ischemickými/hypoxickými tkáněmi, bráno jednotlivě nebo jako skupina, jsou ischemické/hypoxické tkáně srdce, mozku, jater, ledvin, plic, střev, kosterního svalstva, sleziny, slinivky, nervů, míchy, retiny, vaskulatura nebo intestinální tkáň.

Zvláště přednostní ischemickou/hypoxickou tkání je tkáň srdce.

Ve zvláště přednostním provedení se sloučeniny podávají za účelem zabránění perioperačnímu ischemickému poškození myokardu.

Sloučeniny podle vynálezu se přednostně podávají profylakticky.

K ischemickému/hypoxickému poškození může dojít během transplantace orgánu.

Sloučeniny podle vynálezu se přednostně podávají před operací, během operace nebo krátce po ní (například tří- až čtyřdenní infuzí), přičemž operace může být srdeční nebo nesrdeční.

Podle jednoho provedení tohoto vynálezu se sloučenina obecného vzorce I podává lokálně.

• ·

3Θ·Sloučeniny obecného vzorce I, jejich proléčiva a farmaceuticky vhodné soli těchto sloučenin nebo proléčiv se přednostně podávají v denních dávkách od asi 0,001 do asi 100 mg/kg, zvláště přednostně v denních dávkách od asi 0,01 do asi 50 mg/kg.

Dalším předmětem vynálezu je způsob snižování poškození tkáně myokardu (například v podstatě zabránění poškození tkáně, indukce ochrany tkáně) během operace (například transplantační bypass operace koronární artérie (CABG), operace cév, perkutánní transluminální koronární angioplastiky (PTCA) nebo jakékoliv perkutánní transluminální koronární intervence (PTCI), transplantace orgánů nebo jiné nesrdeční operace), jehož podstata spočívá v tom, že se savci (například člověku ženského nebo mužského pohlaví) podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo proléčiva.

Předmětem vynálezu jsou dále způsoby snižování poškození tkáně myokardu (například v podstatě zabránění poškození tkáně, indukce ochrany tkáně) u pacientů s probíhající příhodou doprovázející pokročilou srdeční ischemii (akutní koronární syndrom, například infarkt myokardu nebo nestabilní angína) nebo mozkovou ischemii (například mrtvice), jejichž podstata spočívá v tom, že se savci (například člověku ženského nebo mužského pohlaví) podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo proléčiva.

Předmětem vynálezu jsou dále dlouhodobé způsoby sni žování poškození tkáně myokardu (například v podstatě zabránění poškození tkáně, indukce ochrany tkáně) u pacientů s diagnostikovanou chorobou koronárních artérií (například • to • to to • ·

- 3?..to· to •

··· ·» to· tototo· prodělaný infarkt myokardu nebo nestabilní angína) nebo pacientů ohrožených infarktem myokardu (například pacientů starších 65 let a pacientů vykazujících alespoň dva rizikové faktory koronární srdeční, choroby) jejichž podstata spočívá v tom, že se savci (například člověku ženského nebo mužského pohlaví) podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo proléčiva.

Předmětem vynálezu jsou dále způsoby prevence ischemického/hypoxického poškození, jejichž podstata spočívá v tom, že se savci, který takové léčení potřebuje, dlouhodobě perorálně podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo proléčiva.

Předmětem vynálezu jsou dále způsoby léčení kardiovaskulárních chorob, jejichž podstata spočívá v tom, že se savci (například člověku ženského nebo mužského pohlaví) podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo proléčiva.

Předmětem vynálezu jsou dále způsoby léčení arteriosklerosy, jejichž podstata spočívá v tom, že se savci (například člověku ženského nebo mužského pohlaví) podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo proléčiva.

Předmětem vynálezu jsou dále způsoby léčení arytmie, jejichž podstata spočívá v tom, že se savci (například člověku ženského nebo mužského pohlaví) podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, jejího • 4 «4 ·· • 4 · i • · · * ··· * · - 31?*- ”

4 lil 4 «4 • 4 • 4

4 • 4 4

444« proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo proléčiva.

Předmětem vynálezu jsou dále způsoby léčení angíny pectoris, jejichž podstata spočívá v tom, že se savci (například člověku ženského nebo mužského pohlaví) podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo proléčiva.

Předmětem vynálezu jsou dále způsoby léčení hypertrofie srdce, jejichž podstata spočívá v tom, že se savci (například člověku ženského nebo mužského pohlaví) podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo proléčiva.

Předmětem vynálezu jsou dále způsoby léčení renální choroby, jejichž podstata spočívá v tom, že se savci (například člověku ženského nebo mužského pohlaví) podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo proléčiva.

Předmětem vynálezu jsou dále způsoby léčení komplikací diabetes, jejichž podstata spočívá v tom, že se savci (například člověku ženského nebo mužského pohlaví) podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo proléčiva.

Předmětem vynálezu jsou dále způsoby léčení restenosy, jejichž podstata spočívá v tom, že se savci (například člověku ženského nebo mužského pohlaví) podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I,

4» • ·

- 35··-*

4« • # · 4 • · · • 444 4 • · ·· ·«·

4·

444 *· • * • · • 4 • · 4444 jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo proléčiva.

Předmětem vynálezu jsou dále způsoby léčení hypertrofií nebo hyperplasií orgánů, jejichž podstata spočívá v tom, že se savci (například člověku ženského nebo mužského pohlaví) podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo proléčiva.

Předmětem vynálezu jsou dále způsoby léčení septického šoku nebo jiných zánětlivých chorob (septikémie, endotoxikémie), jejichž podstata spočívá v tom, že se savci (například člověku ženského nebo mužského pohlaví) podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo proléčiva.

Předmětem vynálezu jsou dále způsoby léčení cerebrochemických poruch, jejichž podstata spočívá v tom, že se savci (například člověku ženského nebo mužského pohlaví) podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo proléčiva.

Předmětem vynálezu jsou dále způsoby léčení omrání myokardu, jejichž podstata spočívá v tom, že se savci (například člověku ženského nebo mužského pohlaví) podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeny nebo proléčiva.

Předmětem vynálezu jsou dále způsoby léčení dysnkce myokardu, jejichž podstata spočívá v tom, že se savci (například člověku ženského nebo mužského pohlaví) podává • ··· · • · • · · · · terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeny nebo proléčiva.

Předmětem vynálezu jsou dále způsoby léčení cerebrovaskulárních chorob, jejichž podstata spočívá v tom, že se savci (například člověku ženského nebo mužského pohlaví) podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo proléčiva.

Předmětem vynálezu jsou také farmaceutické kompozice, jejichž podstata spočívá v tom, že obsahují terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo proléčiva a farmaceuticky vhodný nosič, vehikulum nebo ředidlo.

Dále jsou předmětem vynálezu farmaceutické kompozice pro snižování poškození tkáně vyvolaného ischemií nebo hypoxií, jejichž podstata spočívá v tom, že obsahují terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo proléčiva a farmaceuticky vhodný nosič, vehikulum nebo ředidlo.

Předmětem vynálezu je také kit pro použití spotřebitelem, který trpí nebo je ohrožen chorobou nebo stavem • ·

- 41 vyvolaným například ischemií nebo hypoxií, který lze zlepšit agonistou A₃. Tento kit obsahuje a) vhodnou dávkovači formu, jako roztok pro injekční parenterální podávání, která je zvláště přizpůsobena pro intravenosní nebo intramuskulární injekční podávání a obsahuje sloučeninu obecného vzorce I; a b) instrukce, které popisují způsob jakým použít dávkovači formu za účelem snižování poškození tkáně vyvolaného ischemií nebo hypoxií.

Ve farmaceutických kompozicích a při způsobech popsaných výše se přednostně používá sloučenin obecného vzorce I ze shora uvedených skupin přednostních sloučenin označených jako skupiny A až Q.

Předmětem vynálezu jsou dále kombinace sloučenin obecného vzorce I, jejich proléčiv nebo farmaceuticky vhodných solí těchto sloučenin a proléčiv, s jinými sloučeninami, které jsou uvedeny dále.

Předmětem vynálezu je také farmaceutická kombinační kompozice, jejíž podstata spočívá v tom, že obsahuje: terapeuticky účinné množství kompozice obsahující první sloučeninu, přičemž první sloučeninou je sloučenina obecného vzorce I, její proléčivo nebo farmaceuticky vhodná sůl této sloučeniny nebo proléčiva;

druhou sloučeninu, přičemž druhou sloučeninou je kardiovaskulární činidlo; a popřípadě farmaceutický nosič, vehikulum nebo ředidlo.

Dále je předmětem vynálezu způsob snižování poškození tkáně (například v podstatě zabránění poškození tkáně, indukce ochrany tkáně) které je, nebo by mohlo být, vyvoláno • · ischemií nebo hypoxií, jehož podstata spočívá v tom, že se savci (například člověku ženského nebo mužského pohlaví) podává

a) první sloučenina, kterou je sloučenina obecného vzorce I, její proléčivo nebo farmaceuticky vhodná sůl této sloučeniny nebo proléčiva; a

b) druhá sloučenina, kterou je kardiovaskulární činidlo;

přičemž množství první a druhé sloučeniny vedou k terapeutickému účinku.

Předmětem vynálezu je dále kit, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje

a) sloučeninu obecného vzorce I, její proléčivo nebo farmaceuticky vhodnou sůl této sloučeniny nebo proléčiva, a farmaceuticky vhodný nosič, vehikulum nebo ředidlo v první jednotkové dávkovači formě;

b) kardiovaskulární činidlo a farmaceuticky vhodný nosič, vehikulum nebo ředidlo ve druhé jednotkové dávkovači formě; a

c) prostředky pro obalení první a druhé dávkovači formy, přičemž množství první a druhé sloučeniny vede k terapeutickému účinku.

Ve výše popsaných kombinačních kompozicích, kombinačních způsobech a kitech jsou přednostními kardiovaskulárními činidly a jejich solemi (například činidly s kardio• « · · • · · · »· · · ·

- 43 vaskulárním účinkem) například β-blokátory (například acebutolol, atenolol, bopindolol, labetolol, mepindolol, nadolol, oxprenol, pindolol, propranolol, sotalol), blokátory vápníkového kanálu (například amlodipin, nifedipin, nisoldipin, nitrendipin, verapamil), otevírače draslíkového kanálu, adenosin, agonisté adenosinu, inhibitory sodíko-vodíkových měničů typu 1 (NHE-1), inhibitory ACE (například kaptopril, enalapril), nitráty (například isosorbid dinitrát isosorbid 5-mononitrát, glyceryl trinitrát), diuretika (například hydrochlorthiazid, indapamid, piretanid, xipamid), glykosidy (například digoxin, mitildigoxin), thrombolytika (například tPA), inhibitory destiček (například reopro), aspirin, dipyridamol, chlorid draselný, klonidin, prazosin, inhibitory pyruvát-dehydrogenasa kinasy (například dichloracetát), aktivátory pyruvát-dehydrogenasového komplexu, biguanidy (například metformin) nebo jiné agonisty adenosinu A₃. Jako jiná kardiovaskulární činidla je možno uvést antagonisty receptoru angiotensinu II (AII), inhibitory C5a, solubilní receptor komplementu typu 1 (sCRl) nebo jeho analoga, parciální inhibitory oxidace mastných kyselin (PFOX) (zejména ranolazin), aktivátory acetyl CoA karboxylasy, inhibitory malonyl CoA dekarboxylasy, inhibitory 5'AMP-aktivovaný protein kinasy (AMPK), inhibitory adenosin nukleosidu, antiapoptotická činidla (například inhibitory kaspasy), monofosforyl lipid A nebo jeho analoga, aktivátory/inhibitory oxid dusnatý synthasy, aktivátory protein kinasy C (zejména protein kinasy epsílon), inhibitor protein kinasy delta, inhibitory póly (ADP ribosa) synthetasy (PARS, PARP), metformin (inhibitory glukoneogenese, látky zvyšující citlivost na inzulín), inhibitory enzymu konvertujícího endothelin (ECE), antagonisty receptoru endothelinu ETA, inhibitory TAFI (fibrinolytické inhibitory aktivované thrombinem) a modulátory měničů Na/Ca.

• · • · ··*· “ ·

Jako inhibitorům NHE-1 se zvláštní přednost dává sloučeninám zvoleným ze souboru sestávajícího z [1-(8-bromchinolin-5-yl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbo· nyl]guanidinu;

[1-(6-chlorchinolin-5-yl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(indazol-7-yl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(benzimidazol-5-yl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbony1]guanidinu;

[1-(l-isochinolyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[5-cyklopropyl-l-(4-chinolyl)-lH-pyrazol-4-karbonyljguani dinu;

[5-cyklopropyl-l-(chinolin-5-yl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[5-cyklopropyl-l-(chinolin-8-yl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(indazol-6-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu [1-(indazol-5-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu [1-(benzimidazol-5-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

• · ·· »4» · • · · • 999 9 » · » · · ··

- 45 [1-(l-methylbenzimidazol-6-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

1-(5-chinolyl)-5-n-propyl-lH-pyrazol-4-karbonylJguanidinu;

1-(5-chinolyl)-5-isopropyl-lH-pyrazol-4-karbonylJguanidinu;

[5-ethyl-l-(6-chinolyl)-lH-pyrazol-4-karbonylJguanidinu;

[1-(2-methylbenzimidazol-5-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbonylJguanidinu;

[1-(1,4-benzodioxan-6-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(benzotriazol-5-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(3-chlorindazol-5-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(5-chinolyl)-5-butyl-lH-pyrazol-4-karbonylJguanidinu;

[5-propyl-l-(6-chinolyl)-lH-pyrazol-4-karbonylJguanidinu;

[ 5-isopropyl-l-(6-chinolyl) -lH-pyrazol-4-^karbonyl Jguanidinu [1-(2-chlor-4-methylsulfonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol -4-karbonylJguanidinu;

[1-(2-chlorfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonylJguani dinu;

[1-(2-trifluormethyl-4-fluorfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol -4-karbonylJguanidinu;

·· • * · · • · · • ··· · • · • ·♦ · ··

- 46 • * * · » • · · · • · · • · · · · · · [1-(2-bromfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(2-fluorfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonylJguanidinu;

[1-(2-chlor-5-methoxyfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbony1]guanidinu;

[1-(2-chlor-4-methylaminosulfonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(2,5-dichlorfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[i-(2,3-dichlorfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(2-chlor-5-aminokarbonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[i-(2-chlor-5-aminosulfonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(2-fluor-6-trifluormethylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbony1]guanidinu;

[1-(2-chlor-5-methylsulfonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbony1]guanidinu;

[i-(2-chlor-5-dimethylaminosulfonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(2-trifluormethyl-4-chlorfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbony1]guanidinu;

• · · · · • · • · · · · ·

- 47 [1-(2-chlorfenyl)-5-methyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[5-methyl-l-(2-trifluormethylfenyl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[5-ethyl-l-fenyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[5-cyklopropyl-l-(2-trifluormethylfenyl)-lH-pyrazol-4-karbony1]guanidinu;

[5-cyklopropyl-l-fenyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[5-cyklopropyl-l-(2,6-dichlorfenyl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

a jejich farmaceuticky vhodných solí.

Z hlediska výše popsaných kombinačních kompozic, kombinačních způsobů a kitů se dává přednost sloučeninám obecného vzorce I, které náleží do skupin přednostních sloučenin označených jako A až Q.

druhou sloučeninu, přičemž druhou sloučeninou je inhibitor glykogen fosforylasy; a popřípadě farmaceutický nosič, vehikulum nebo ředidlo.

·· ·· • ♦ · · • · · • · ·· · • · « · · · · ·

- 48 ·· Φ ·« ·· » f ·

9 ·

Φ Φ · · 9

Φ· 9999

Dále je předmětem vynálezu způsob snižování poškození tkáně (například v podstatě zabránění poškození tkáně, indukce ochrany tkáně) které je, nebo by mohlo být, vyvoláno ischemií nebo hypoxií, jehož podstata spočívá v tom, že se savci (například člověku ženského nebo mužského pohlaví) podává

b) druhá sloučeninu, kterou je inhibitor glykogen fosforylasy;

a) sloučeninu obecného vzorce I, její proléčivo nebo farmaceuticky vhodnou sůl této sloučeniny nebo proléčiva, a farmaceuticky vhodný nosič, vehikulura nebo ředidlo v první jednotkové dávkovači formě;

b) inhibitor glykogen fosforylasy a farmaceuticky vhodný nosič, vehikulum nebo ředidlo ve druhé jednotkové dávkovači formě? a

4 ·· • ♦ · · · • 4 · • · · · ♦ • · • · • · · 4 ·

Z hlediska výše popsaných kombinačních kompozic, kombinačních způsobů a kitů jako inhibitorům glykogen fosforylasy dává přednost sloučeninám zvoleným ze souboru sestávajícího z [(1S)-((R)-hydroxydimethylkarbamoylmethyl)-2-fenylethyl]amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, {(1S)-[(R)-hydroxy(methoxymethylkarbamoyl)methyl]-2-fenylethyl} amidu 5,6-dichlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, {(lS)-[(R)-hydroxy(methoxymethylkarbamoyl)methyl]-2-fenylethyl} amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, ((1S)-{(R)-hydroxy-[(2-hydroxyethyl)methylkarbamoyl]methyl}-2-fenylethyl)amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, {(1S)-t(R)-hydroxy(methylpyridin-2-ylkarbamoy1)methyl]-2-fenylethyl}amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, ((1S)-{(R)-hydroxy-[(methyl-(2-pyridin-2-ylethyl)karbamoyl]methyl}-2-fenylethy1)amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, hydrochloridu [(1S)-benzyl-(2R)-hydroxy-3-(4-methylpiperazin -1-yl)-3-oxopropyl]amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyše liny, [(1S)-benzyl-(2R)-hydroxy-3-(3-hydroxyazetidin-l-yl)-3-oxopropyl]amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny,

99 β 9 · 9

9 9 • 999 ♦ »999 94

9· 9999 ((1S)-benzyl-(2R)-hydroxy-3-isoxazolidin-2-yl-3-oxopropyl)amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, ((1S)-benzyl-(2R)-hydroxy-3-[1,2]oxazinan-2-yl-3-oxopropyl) amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, [(1S)-benzyl-(2R)-hydroxy-3-((3S)-hydroxypyrrolidin-l-yl)-3-oxopropyl]amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, [(1S)-benzyl-3-((3S,4S)-dihydroxypyrrolidin-l-yl)-(2R)-hydroxy-3-oxopropyl]amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, [(1S)-benzyl-3-((3R,4S)-dihydroxypyrrolidin-l-yl)-(2R)-hydroxy-3-oxopropyl]amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, ((1S)-benzyl-(2R)-hydroxy-3-morfolin-4-yl-3-oxopropyl)amidu -5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, [(1S)-benzyl-2-(3-hydroxyiminopyrrolidin-l-yl)-2-oxoethyl]amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, [2-(cis-3,4-dihydroxypyrrolidin-l-yl)-2-oxoethyl]amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, [2-((3S,4S)-dihydroxypyrrolidin-l-yl)-2-oxoethyl]amidu 5-chlor-1H-indol-2-karboxylové kyseliny, [(1S)-benzyl-2-(cis-3,4-dihydroxypyrrolidin-l-yl)-2-oxoethyljamidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, [2-(1,l-dioxothiazolidin-3-yl)-2-oxoethyl]amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny,

4 44 « · ·« .4 • « · · «· »· 4 4 4 ··· ♦ · ·· · • ···· « ·»·· 4 • _ „· ♦ · »·« ·^Μ·53.· - *·· *·· ·♦ ···· (2-oxo-2-thiazolidin-3-ylethyl)amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, [(1S)-(4-fluorbenzyl)-2-(4-hydroxypiperidin-l-yl)-2-oxoethyl]amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, [(1S)-benzyl-2-((3RS)-hydroxypiperidin-l-yl)-2-oxoethyl]amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, [2-OXO-2-((1RS)-oxo-l-thiazolidin-3-yl)ethyl]amidu 5-chlor-1H-indol-2-karboxylová kyseliny, [(1S)-(2-fluorbenzyl)-2-(4-hydroxypiperidin-l-yl)-2-oxoethyl]amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, [(1S)-benzyl-2-((3S,4S)-dihydroxypyrrolidin-l-yl)-2-oxoethyl]amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, [(1S)-benzyl-2-(3-hydroxyazetidin-l-yl)-2-oxoethyl]amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, [(1S)-benzyl-2-(3-hydroxyiminoazetidin-l-yl)-2-oxoethyl] amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny, [(1S)-benzyl-2-(4-hydroxyiminopiperidin-l-yl)-2-oxoethyl]amidu 5-chlor-lH-indol-2-karboxylové kyseliny.

44 • · · 9 • 4 4

999

9

9999 99 •4 ·44·

- 52 druhou sloučeninu, přičemž druhou sloučeninou je inhibitor aldosa reduktasy; a popřípadě farmaceutický nosič, vehikulum nebo ředidlo.

b) druhá sloučeninu, kterou je inhibitor aldosa reduktasy;

b) inhibitor aldosa reduktasy a farmaceuticky vhodný nosič, vehikulum nebo ředidlo ve druhé jednotkové dávkovači formě; a

44

• 4 • 4

4444 4·

- 53 c) prostředky pro obalení první a druhé dávkovači formy, přičemž množství první a druhé sloučeniny vede k terapeutickému účinku.

Z hlediska výše popsaných kombinačních kompozic, kombinačních způsobů a kitů se jako inhibitoru aldosa reduktasy dává přednost zopolrestatu, 3,4-dihydro-4-oxo-3-[[5-trifluormethyl)-2-benzothiazolyl]methyl]-l-ftalazinoctové kyselině.

Při způsobech léčení za použití výše popsaných kombinací se dává přednost způsobům podávání atd., které jsou uvedeny dále.

Zvláště přednostní ischemickou/hypoxickou tkání je tkáň srdce.

Ve zvláště přednostním provedení se kombinace podávají za účelem zabránění perioperačnímu ischemickému poškození myokardu.

«0

0 0 0 0 0 0 0

000 0 0 ·

0000 00 · - 54 Kombinace podle vynálezu se přednostně podávají profylakticky.

Kombinace podle vynálezu se přednostně podává před operací, během operace nebo krátce po ní, přičemž operace může být srdeční nebo nesrdeční.

Podle jednoho provedení tohoto vynálezu se kombinace podává lokálně.

Podle jednoho provedení se poškození tkáně myokardu snižuje během operace nebo po ní.

Podle dalšího provedení tohoto vynálezu se poškození tkáně myokardu snižuje u pacientů s probíhajícími srdečními nebo mozkovými příhodami.

Podle jiného provedení tohoto vynálezu se poškození tkáně myokardu snižuje dlouhodobým podáváním výše popsaných kombinací pacientovi s diagnostikovanou koronární srdeční chorobou.

Pod pojmem snížení se kromě úplného zabránění rozumí prevence částečná či prevence, která méně než 100%, ale vyšší než hodnota, které by se dosáhlo za použití placeba.

Pod pojmem poškození vyvolané ischemií nebo hypoxií nebo poškození, které je následkem ischemie nebo hypoxie se rozumí stavy přímo spojené se sníženým prokrvením nebo sníženou dodávkou kyslíku do tkání, které jsou například následky vzniku sraženiny nebo obstrukce v cévách • · • 999 9

9

9999 99

- 55 99 9999 zásobujících danou tkáň a které m j . vedou ke sníženému transporu kyslíku k takové tkáni, zhoršení činnosti tkáně, její dysfunkci a/nebo nekrose a/nebo apoptose. V jiném případě může být prokrvení nebo perfuse orgánu kvantitativně adekvátní, ale může být snížena kapacita krve nebo perfusního média pro transport kyslíku, jak je tomu například v hypoxickém prostředí, takže dojde ke snížení dodávky kyslíku do tkáně a následně ke zhoršení její činnosti, dysfunkci a/nebo nekrose a/nebo apoptose.

Pod pojmem léčení nebo léčba se také rozumí léčení preventivní (například profylaktické) a paliativní.

Přívlastku farmaceuticky vhodný se používá pro označení nosičů, ředidel, excipientů a/nebo solí, které musí být kompatibilní s dalšími složkami formulace a nepoškozují recipienta.

Pod pojmem proléčiva se rozumí sloučeniny, které jsou prekursory léčiv, které po podání působením určitého chemického nebo fyziologického mechanismu uvolňují léčivo in vivo (například se proléčivo vystaví fyziologickému pH nebo se na požadovanou formu léčiva převede enzymatickým působením) .

Jako příklady pěti- až šestičlenných aromatických kruhů, které popřípadě obsahují 1 nebo 2 heteroatomy nezávisle zvolené ze souboru sestávajícího z kyslíku, dusíku a síry, je možno uvést fenyl-, furyl-, thienyl-, pyrrolyl-, oxazolyl-, thiazolyl-, imidazolyl-, pyrazolyl-, isoxazolyl-, isothiazolyl-, pyridyl-, pyridazinyl-, pyrimidinyl- a pyrazinylskupinu.

Jako příklady částečně nasycených, zcela nasycených nebo zcela nenasycených pěti- až osmičlenných kruhů, které

4«

4 4 4

4 4 • 444

4

44*4 44 «

44

4

4 4

4

44· 444

4« 44

4 4

4444 popřípadě obsahují 1 až 3 heteroatomy nezávisle zvolené ze souboru sestávajícího z kyslíku, síry a dusíku, je možno uvést cyklopentyl-, cyklohexyl-, cykloheptyl-, cyklooktyla fenylskupinu. Jako další příklady pětičlenných kruhů je možno uvést furyl-, thienyl-, pyrrolyl-, 2-pyrrolinyl-, 3-pyrrolinyl-, pyrrolidinyl-, 1,3-dioxolany.l-, oxazolyl-, thiazolyl-, iraidazolyl-, 2H-imidazolyl-, 2-imidazolinyl-, imidazolidinyl-, pyrazolyl-, 2-pyrazolinyl-, pyrazolidinyl-, isoxazolyl-, isothiazolyl-, 1,2-dithiolyl-, 1,3-dithiolyl-, 3H-1,2-oxathiolyl-, 1,2,3-oxadiazolyl, 1,2,4-oxadiazolyl,

1,2,5-oxadiazolyl, 1,3,4-oxadiazolyl-, 1,2,3-triazolyl,

1.2.4- triazolyl, 1,3,4-thiadiazolyl-, 3H-1,2,3-dioxazolyl-,

1.2.4- dioxazolyl-, 1,3,2-dioxazolyl, 1,3,4-dioxazolyl-,

5H-1,2,5-oxathiazolyl- a 1,3-oxathiolylskupinu.

Jako další příklady šestičlenných kruhů je možno uvést 2H-pyranyl-, 4H-pyranyl-, pyridyl-, piperidyl-, 1,2-dioxinyl-, 1,3-dioxinyl-, 1,4-dioxanyl-, morfolinyl-, 1,4-dithianyl-, thiomorfolinyl-, pyridazinyl-, pyrimidinyl-, pyrazinyl-, piperazinyl-, 1,3,5-triazinyl-, 1,2,4-triazinyl-, 1,2,3-triazinyl-, 1,3,5-trithianyl-, 4H-1,2-oxazinyl-, 2H-1,3-oxazinyl-, 6H-1,3-oxazinyl-, 6H-1,2-oxazinyl-, 1,4-oxazinyl-, 2H-1,2-oxazinyl-, 4H-1,4-oxazinyl-, 1,2,5-oxathiazinyl, 1,4-oxazinyl, o-isoxazinyl, p-isoxazinyl-,

1.2.5- oxathiazinyl-, 1,2,6-oxathiazinyl- a 1,4,2-oxadiazinylskupinu.

Jako další příklady sedmičlenných kruhů je možno uvést azepinyl-, oxepinyl-, thiepinyl- a 1,2,4-diazepinylskupinu.

Jako další příklady osmičlenných kruhů je možno uvést cyklooktyl-, cyklooktenyl- a cyklooktadienylskupinu.

• 4 ··· «4 *· 4 • · * 4 · 4 · · «4 4444

- 57 Jako příklady bicyklických kruhů, které sestávají ze dvou anelovaných nezávisle zčásti nasycených, zcela nasycených nebo zcela nenasycených pěti- a/nebo šestičlenných kruhů a které brány nezávisle popřípadě obsahují 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené ze souboru sestávajícího z dusíku, síry a kyslíku, je možno uvést indolizinyl-, indolyl-, isoindolyl-, 3H-indolyl-, lH-isoindolyl-, indolinyl-, cyklopenta(b)- pyridinyl-, pyrano(3,4-b)pyrrolyl-, benzofuryl-, isobenzofuryl-, benzo(b)thienyl-, benzo(c)thienyl-, ΙΗ-indazolyl-, indoxazinyl-, benzoxazolyl-, anthranilyl-, benzimidazolyl-, benzthiazolyl-, purinyl-, 4H-chinolizinyl-, chinolyl-, isochinolyl-, cinnolinyl-, ftalazinyl-, chinazolinyl-, chinoxalinyl-, 1,8-naftyridinyl-, pteridinyl-, indenyl-, isoindenyl-, naftyl-, tetralinyl-, dekalinyl 2H-l-benzopyranyl-, 1,4-benzodioxanyl-, pyrido(3,4-b)pyridinyl-, pyrido(3,2-b)pyridinyl-, pyrido(3,4-b)pyridinyl-, 2H-1,3-benzoxazinyl-, 2H-1,4-benzoxazinyl-, lH-2,3-benzoxazinyl-, 4H-3,1-benzoxazinyl-, 2H-1,2-benzoxazinyla 4H-1,4-benzoxazinylskupinu.

Pod pojmem alkylen se rozumí nasycený uhlovodíkový zbytek s řetězcem přímým nebo rozvětveným, z jehož obou terminálních atomů uhlíku je odstraněn vodíkový atom. Jako příklady takových skupin (které berou v úvahu stanovenou délku řetězce) je možno uvést methylen-, ethylen-, propylen-, butylen-, pentylen-, hexylen- a heptylenskupinu.

Takové vazebné skupiny lze samozřejmě také označovat názvy bez sufixu en (například methyl), což odborníci v tomto oboru často činí. Pod tímto názvem se však stále rozumí vazebná skupina.

Pod pojmem halogen se rozumí chlor, brom, jod nebo fluor.

·* • · « · • · · • ··· · • · ···· ··

- 58 ·* ♦· < · * • · · • · · · • · · • ·· ····

Pod pojmem alkyl se rozumí nasycený uhlovodíkový zbytek s přímým nebo rozvětveným řetězcem. Jako příklady takových alkylskupin (které berou v úvahu stanovenou délku řetězce) je možno uvést methyl-, ethyl-, propyl-, isopropyl-, butyl-, sek-butyl-, terc-butyl-, pentyl-, isopentyl-, neopentyl-, terc-pentyl-, 1-methylbutyl-, 2-methylbutyl-, 3-methylbutyl-, hexyl-, isohexyl-, heptyl- a oktylskupinu.

Pod pojmem alkoxy se rozumí nasycená alkylskupina s řetězcem přímým nebo rozvětveným, která je vázána přes atom kyslíku. Jako příklady takových alkoxyskupin (které berou v úvahu stanovenou délku řetězce) je možno uvést methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy-, isobutoxy-, terč.butoxy-, pentoxy-, isopentoxy-, neopentoxy-, terč.pentoxy-, hexoxy-, isohexoxy-, heptoxy- a oktoxyskupinu.

V uvedených mono-N- nebo di-N,N-alkylových skupinách s 1 až x atomy uhlíku v každé z alkylových částí (kde x představuje celé číslo), je počet atomů uhlíku každé z alkylových částí brán nezávisle.

Jestliže karbocyklický nebo heterocyklický zbytek může být vázán nebo jinak připojen k uvedenému substrátu prostřednictvím různých atomů kruhu a konkrétní místo takového připojení není uvedeno, potom přicházejí v úvahu všechna možná místa připojení, ať již prostřednictvím atomu uhlíku, nebo například trojvazného atomu dusíku. Tak se například pod pojmem pyridyl rozumí 2-, 3- nebo 4-pyridylskupina, pod pojmem thienyl 2- nebo 3-thienylskupina atd.

Pod pojmem farmaceuticky vhodné soli se rozumějí soli obsahující netoxické anionty. Jako neomezující příklady takových solí je možno uvést chlorid, bromid, jodid, sulfát,

- £&·-···* hydrogensulfát, fosfát, acetát, maleát, fumarát, oxalát, laktát, tartrát, citrát, glukonát, methansulfonát a 4-toluensulfonát. Pokud sloučenina obsahuje více než jeden bázický zbytek, spadají do tohoto pojmu také vícenásobné soli (například di-soli). Do rozsahu pojmu farmaceuticky vhodné soli rovněž spadají soli s netoxickými kationty.

Jako neomezující příklady takových solí je možno uvést soli, které obsahují kationty sodíku, draslíku, vápníku, hořčíku, amonia nebo protonovaného benzathinu (N,N'-dibenzylethylendiaminu), cholinu, ethanolaminu, diethanolaminu, ethylendiaminu, megluminu (N-methylglukaminu), benethaminu (N-benzylfenylethylaminu), piperazinu nebo tromethaminu (2-amino-2hydroxymethyl-1,3-propandiolu).

Pod pojmem rozpouštědlo inertní vůči reakci nebo inertní rozpouštědlo se v tomto textu rozumí rozpouštědlo, které neinteraguje s výchozími látkami, reakčními činidly, meziprodukty nebo produkty způsobem, který by měl nepříznivé účinky na výtěžek požadovaného produktu.

Odborníku v oboru chemie bude jasné, že určité sloučeniny podle tohoto vynálezu budou obsahovat jeden nebo více atomů, které mohou být ve zvláštních stereochemických nebo geometrických konfiguracích za vzniku stereoisomerů, a konfiguračních isomerů. Všechny takové isomery a jejich směsi jsou předmětem tohoto vynálezu.

Do rozsahu vynálezu také spadají hydráty a solváty sloučenin podle vynálezu.

Zkratkou DMF se označuje Ν,Ν-dimethylformamid a zkratkou DMSO se označuje dimethylsulfoxid a zkratkou THF tetrahydrofuran.

- řfí.Do rozsahu vynálezu také spadají sloučeniny značené isotopy, které jsou identické se sloučeninami obecného vzorce I až na to, že v nich je jeden atom nebo více atomů nahrazeno atomem s atomovou hmotností nebo hmotnostním číslem odlišným od atomové hmotnosti nebo hmotnostního čísla s jakým se obvykle nacházejí v přírodě. Jako příklady isotopů, které je možno začlenit do nových meziproduktů podle tohoto vynálezu je možno uvést isotopy vodíku, uhlíku, dusíku, kyslíku, fosforu, fluoru a chloru, jako je ²H, ³H, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁸O, ¹⁷0, ³¹P, ³²P, ³⁵S, ¹⁸F a ³⁶C1. Sloučeniny podle vynálezu, jejich proléčiva a farmaceuticky vhodné soli těchto sloučenin, a pro léčiv, které obsahují výše uvedené isotopy a/nebo jiné isotopy jiných atomů rovněž spadají do tohoto vynálezu.

Určité isotopově značené sloučeniny podle vynálezu, napři, o klad sloučeniny značené radioaktivními isotopy, jako H nebo ¹⁴C, jsou užitečné při zkouškách distribuce léčiva nebo substrátu v tkáních. Zvláštní přednost se dává tritiovaným isotopům tj. ³H, a ¹⁴C isotopům, jelikož je lze snadno připravovat a detekovat. Nahrazením těžšími isotopy, jako deuteriem, tj. ²H, je možno dosáhnout určitých terapeutických výhod vyplývajících z vyšší metabolické stability, například prodloužení poločasu in vivo nebo snížení potřebných dávek, čemuž se za určitých okolností dává přednost. Isotopově značené sloučeniny obecného vzorce I a jejich proléčiva lze obvykle připravovat prováděním způsobů znázorněných ve schématech a/nebo popsaných v příkladech provedení nebo preparativních postupech, při nichž se reakční činidlo neznačené isotopem nahradí snadno dostupným činidlem značeným isotopem.

Další znaky a výhody vynálezu budou zřejmé z tohoto popisu a připojených nároků.

Následuje podrobnější popis vynálezu.

- 61 Sloučeniny podle vynálezu je obvykle možno připravovat za použití způsobů, které jsou analogické způsobům o sobě známým, zejména ve světle tohoto popisu. Některé způsoby výroby sloučenin podle vynálezu představují další znaky tohoto vynálezu a jsou ilustrovány v následujících reakčních schématech. Jiné způsoby jsou popsány v příkladech provedení.

• · • ··· · ···· ··

- 62 • · · • · · • · · · • · · • · · · · ·

Schéma I

R¹<

III

Schéma II

N₃

OR

XXII

Schéma III

XXXIV • ·

- 65 Schéma IV

G

LI

LIV

- 66 Sloučeniny podle tohoto vynálezu je obvykle možno vyrobit kopulací požadovaného chlorpurinribosidu a benzylaminu a následnou redukcí azidu. Podrobnější popis je uveden v následujícím textu, který se vztahuje k předcházejícím schématům.

Při postupu podle schématu I je požadovanou sloučeninu obecného vzorce I, kde R¹, R², R³ , X, Y, Z, D a G mají výše uvedený význam, je možno snadno připravit redukcí azidu v odpovídající sloučenině obecného vzorce II. Typicky se tato redukce provádí tak, že se sloučenina obecného vzorce

II uvádí do styku s trialkyl- nebo triarylfosfinem, přednostně trifenylfosfinem, v rozpouštědle inertním vůči reakci, jako tetrahydrofuranu, při teplotě od asi 0 do asi 65°C, typicky při teplotě okolí, po dobu asi 30 minut až asi 2 hodin. Na reakční směs se poté působí bází, přednostně aminovou bází, nejvýhodněji hydroxidem amonným, po dobu asi 6 hodin až asi 48 hodin, při teplotě od asi 0 do asi 65’C, přednostně při teplotě okolí.

o

Požadovanou sloučeninu obecného vzorce II, kde R , R³, X, Y, Z, D a G mají výše uvedený význam a R¹ představuje ester, je možno připravit z odpovídající sloučeniny vzorce

III a benzylaminového derivátu (kde R³, D a G mají význam uvedený výše). Kondenzační reakce se obvykle provádí v polárním rozpouštědle, jako ethanolu, za přítomnosti báze, přednostně aminové báze, nejvýhodněji triethylaminu, při zvýšené teplotě od asi 40 do asi 75 °C, po dobu asi 2 až asi 24 hodin.

Podobně je požadovanou sloučeninu obecného vzorce II, kde R², R³, X, Y, Z, D a G mají výše uvedený význam a R¹představuje amid, možno připravit z odpovídající sloučeniny vzorce VI a benzylaminového derivátu (kde R³, D a G mají výše uvedený význam). Kondenzační reakce se obvykle provádí v ··· to • · ···· ·· « to • · · • · • to· ····

- 67 polárním rozpouštědle, jako ethanolu, za přítomnosti báze, přednostně aminové báze, výhodněji triethylaminu, při zvýšené teplotě od asi 40 do asi 75 °C, po dobu asi 2 až asi 24 hodin.

Amid obecného vzorce VI lze připravit z odpovídajícího esteru obecného vzorce III reakcí s aminem. Typicky se tato reakce provádí tak, že se vhodný amin nechá reagovat s esterem obecného vzorce III při teplotě od asi 15 do asi 50 °C po dobu asi 1 hodiny až asi 24 hodin, v polárním rozpouštědle, jako methanolu.

Některé způsoby užitečné při výrobě popsaných sloučenin mohou vyžadovat chránění vzdálených funkčních skupin (tj. primárních aminoskupin, sekundárních aminoskupin a karboxyskupin v prekursorech sloučenin obecného vzorce I). Potřeba takového chránění se může měnit v závislosti na druhu vzdálené funkční skupiny a podmínkách použitých při přípravě. Potřebu takového chránění může odborník v tomto oboru snadno určit. Používání metod zavádění/odštěpování chránících skupin leží v rozsahu zkušeností běžného odborníka. Obecný popis chránících skupin a jejich používání je možno nalézt v publikaci T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, USA, 1991.

Tak je například požadovanou sloučeninu obecného vzorce I, kde R¹, R², R³ , X, Y, Z, D a G mají výše uvedený význam, možno z odpovídající sloučeniny obecného vzorce VI alternativně vyrobit tak, že se zavede ochrana, provede se reakce s aminem a následně deprotekce. Sloučenina vzorce VI, kde R¹, R², X, Y a Z mají výše uvedený význam se tedy podrobí redukci azidu. Obvykle se tato redukce provádí tak, že se sloučenina obecného vzorce VI nechá reagovat s trialkyl- nebo triarylfosfinem, přednostně trifenylfosfinem, v rozpouštědle inertním vůči reakci, jako tetrahydrofuranu, • 0 · • ··· 0 · 0000 ♦· ··

0 0

0 ·

0*

0* 0000

- 68 při teplotě od asi 0 do asi 65 °C, typicky při teplotě okolí, po dobu asi 30 minut až asi 2 hodin. Reakční směs se nechá reagovat s bází, přednostně aminovou bází, nejvýhodněji hydroxidem amonným, po dobu asi 6 až asi 48 hodin, při teplotě od asi 0 do asi 65°C. Po redukci se zavede ochrana aminového zbytku (P¹).

Amin se přednostně chrání terc-butoxykarbonylskupinou. Zavedení této skupiny se dosáhne tak, že se amin nechá reagovat s terc-butoxykarbonylanhydridem a bází, přednostně aminovou bází, nejvýhodněji triethylaminem, v bezvodém rozpouštědle, jako dichormethanu, při teplotě okolí po dobu od asi 5 hodin do asi 24 hodin.

Požadovanou sloučeninu obecného vzorce IV, kde R ,

R , R , X, Y, Z, Dag mají výše uvedený význam, je možno připravit z vhodné sloučeniny obecného vzorce V a benzylaminového derivátu (kde R³, D a G mají výše uvedený význam). Tato kondenzační reakce se typicky provádí v polárním rozpouštědle, jako ethanolu, za přítomnosti báze, přednostně aminové báze, nejvýhodněji triethylaminu, při zvýšené teplotě od asi 40 do asi 75 °C, po dobu asi 2 hodin až asi 24 hodin.

Po reakci s aminem je požadovanou sloučeninu obecného vzorce I možno připravit z odpovídající chráněné sloučeniny obecného vzorce IV vhodně katalyzovanou deprotekční reakcí. V typickém provedení se chráněná (například ve formě terc-butylesteru) sloučenina nechá reagovat se silnou kyselinou, přednostně trifluoroctovou kyselinou, při 10 až 50°C, přednostně při teplotě okolí, po dobu asi 1 hodiny až asi 8 hodin, čímž se odstraní chránící skupina.

Při postupu podle reakčního schématu II je požadované sloučeniny obecného vzorce IA, kde R¹, R², R³, X, Y, Z, • · «·*· ♦ ·

- 69 4 5-R a R mají výše uvedený význam a D představuje oxyskupinu, thioskupinu nebo skupinu NH, možno připravovat reakcí azidu v odpovídající sloučenině obecného vzorce XX. Obvykle se tato redukce provádí tak, že se sloučenina obecného vzorce XX nechá reagovat s trialkyl- nebo triarylfosfinem, přednostně trifenylfosfinem, v rozpouštědle inertním vůči reakci, jako tetrahydrofuranu, při teplotě od asi 0 do asi 65°C, typicky při teplotě okolí, po dobu asi 30 minut až asi 2 hodin. Reakční směs se poté nechá reagovat s bází, přednostně aminovou bází, nejvýhodněji hydroxidem amonným, po dobu asi 6 až asi 48 hodin, při teplotě od asi 0 do asi 65°C.

Ester obecného vzorce XXI (po konverzi na kyselinu) se kopuluje s vhodným aminem za přítomnosti vhodného kopulačního činidla za vzniku požadované sloučeniny obecného vzorce XX. Vhodným kopulačním činidlem je činidlo, které převádí karboxylovou kyselinu na reaktivní entity, které při reakci s aminem tvoří amidovou vazbu.

Kopulačním činidlem může být činidlo, které umožňuje provést kondenzační reakci postupem v jedné reakční nádobě, kde se spolu smísí karboxylové kyselina a amin. Jako příklady kopulačních činidel je možno uvést hydrochlorid 1—(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu/hydroxybenzotriazol (EDC/HOBT), dicyklohexylkarbodiimid/hydroxybenzotriazol (HOBT), 2-ethoxy-l-ethoxykarbonyl-l,2-dihydrochinolin (EEDQ) a diethylfosforylkyanid. Kopulace se provádí v inertním rozpouštědle, přednostně aprotickém rozpouštědle, při teplotě od asi -20 do asi 50°C, po dobu asi 1 hodiny až asi 48 hodin, za přítomnosti nadbytku aminu, jako báze. Jako příklady rozpouštědel je možno uvést acetonitril, dichlormethan, dimethylformamid a chloroform a jejich směsi.

• ·

Φ * · * · ···· ··

- 70 ··· · «· »

·· · ·» ·· • * · • · * • · · · • « · ·· ·· . ·

Kopulačním činidlem také může být činidlo, které karboxylovou kyselinu převádí na aktivovaný meziprodukt, který se izoluje a/nebo vznikne v prvním stupni, a ve druhém stupni se nechá reagovat s aminem. Jako příklady takových kopulačních činidel a aktivovaných meziproduktů je možno uvést oxalylchlorid při převádění na chlorid kyseliny, fluorid kyseliny kyanurové při převádění na fluorid kyseliny nebo alkylchlorformiát, jako je isobutyl- nebo isopropenylchlorformiát, nebo anhydrid propanfosfonové kyseliny (PPA) (za přítomnosti terciární aminové báze) (tímto činidlem se karboxylová kyselina převádí na směsný anhydrid karboxylové kyseliny) nebo karbonyldiimidazol, kterým se kyselina převádí na acylimidazol. Pokud se jako kopulačního činidla používá oxalylchloridu, s výhodou se jako pomocného rozpouštědla, které se přidává k jinému rozpouštědlu (jako je například dichlormethan), používá malého množství dimethylformamidu za účelem katalýzy tvorby chloridu kyseliny. Tento aktivovaný derivát kyselina je možno podrobit kopulační reakci s nadbytkem aminu ve vhodném rozpouštědle za přítomnosti vhodné báze. Jako příklady vhodných kombinaci rozpouštědlo/báze je možno uvést dichlormethan, dimethylformamid nebo acetonitril nebo jejich směsi za přítomnosti nadbytku aminu, jako báze. Jako jiné vhodné kombinace rozpouštědlo/ /báze přicházejí v úvahu kombinace obsahující vodu nebo alkohol s 1 až 5 atomy uhlíku nebo jejich směsi spolu s pomocným rozpouštědlem, jako dichlormethanem, tetrahydrofuranem nebo dioxanem a bází, jako sodíkem, draslíkem, hydroxidem lithným v množství, které je dostatečné pro spotřebování kyseliny uvolněné při reakci. Používání těchto kopulačních činidel a vhodná volba rozpouštědel a teplot leží v rozsahu zkušeností odborníků v tomto oboru a lze je také snadno určit na základě literárních údajů. Tyto a jiné příkladné podmínky, které jsou vhodné pro kopulace karboxylových kyselin, jsou popsány v publikaci Houben-Weyl, sv.

XV, část II, E. Winsch, Ed., G. Thieme Verlag, 174,

-’^:7Ύ ··· ·

444 4

4· ·· • 4 · • · ·

4 · * • 4 4 • ·« ····

Stuttgart a Μ. Bodansky, Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag Berlin, 1984 a The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology (ed. E. Gross a J. Meienhofer), sv.

až 5 (Academie Press, NY, USA, 1979 až 1983).

Sloučeniny obecného vzorce XXI je možno na odpovídající kyseliny převést kysele katalyzovanou deprotekcí. Typicky se chráněná (například ve formě terc-butylesteru) sloučenina nechá reagovat se silnou kyselinou, přednostně trifluoroctovou kyselinou při teplotě 10 až 50°C, přednostně při teplotě okolí, po dobu asi 1 hodiny až asi 8 hodin, za vzniku odpovídající kyseliny.

Požadovanou sloučeninu obecného vzorce XXI, kde R¹, R², R³ , X, Y, Z, D mají výše uvedený význam a R účelně představuje esterový zbytek (alkyl) je možno připravit z vhodné sloučeniny obecného vzorce XXII, kde R¹, R², R³, X, Y, Z a D mají výše uvedený význam, alkylační reakcí (zbytek D, který je před alkylací součástí skupiny DH, obvykle představuje oxyskupinu, thioskupinu nebo iminoskupinu). Sloučenina obecného vzorce XXII se obvykle nechá reagovat s alkylbromacetátem za přítomnosti silné báze, jako hydridu sodného, v polárním aprotickém rozpouštědle, jako dimethylformamidu, při teplotě od asi 0 do asi 30°C p dobu asi 1 hodiny až asi 24 hodin.

Sloučeniny obecného vzorce XXII, kde R¹, R², R³, X, Y, Z a D mají výše uvedený význam, je možno připravovat z vhodných sloučenin obecného vzorce III a vhodného benzylaminového derivátu. Typicky se tato kondenzační reakce provádí v polárním rozpouštědle, jako ethanolu, za přítomnosti báze, přednostně aminové báze, nejvýhodněji triethylaminu, při zvýšené teplotě asi 40 až asi 75°C, po dobu asi 2 až asi 24 hodin.

- 72 Při postupu podle schématu III je sloučeniny obecného vzorce XXX, kde X a Y mají výše uvedený význam, možno připravovat glykosidační reakcí vhodné sloučeniny XXXI a silylovaného 6-chlorpurinu. Typicky je tato reakce katalyzována Lewisovou kyselinou, přednostně trimethylsilyltrifluorraethansulfonátem, a provádí se v rozpouštědle inertním vůči reakci, jako dichlorethanu nebo acetonitrilu, při teplotě od asi 30 do asi 75“C, typicky při 60 °C, po dobu asi 30 minut až asi 6 hodin.

Požadované sloučeniny obecného vzorce XXXI, kde X má výše uvedený význam, je možno připravovat hydrolýzou vhodné sloučeniny obecného vzorce XXXII katalyzovanou kyselinou. Tato reakce se typicky provádí za použití silné minerální kyseliny, přednostně kyseliny sírové, v protické rozpouštědlové směsi kyseliny octové a acetanhydridu při teplotě od asi 5 do asi 40°C po dobu asi 2 až asi 24 hodin.

Podobně je požadované sloučeniny obecného vzorce XXXVI, kde Y a X mají výše uvedený význam, možno připravit z odpovídající sloučeniny obecného vzorce XXXIII za použití shora popsaných glykosidačních a hydrolytických reakcí.

Požadované sloučeniny obecného vzorce XXXII, kde X má výše uvedený význam, se připravují z odpovídajících sloučenin obecného vzorce XXXIII aktivací karboxylové kyseliny a následnou reakcí s aminem. Sloučeninu obecného vzorce XXXIII je typicky možno aktivovat převedením na chlorid kyseliny, například reakcí s oxalylchloridem v nepolárním aprotickém rozpouštědle, přednostně dichlormethanu, za přítomnosti katalytického množství dimethylformamidu, při teplotě asi 0°C s následným zahřátím na teplotu místnosti, po dobu asi 2 až asi 8 hodin. Chlorid kyseliny se poté nechá reagovat s nadbytkem vhodného aminu při teplotě od asi 0 do asi 30°C.

·4 ·4 ·

4 4

444 *

•444 44

44 • 4 ·

4 · * ♦4 4444

- 73 Požadovanou sloučeninu obecného vzorce XXXIII, kde X má výše uvedený význam, je možno připravit oxidací vhodné sloučeniny obecného vzorce XXXIV. Oxidačním činidlem je obvykle oxid rutheničitý, připravený za použití katalytického množství chloridu ruthenitého a stechiometrického množství jodistanu sodného v rozpouštědlové směsi chloroformu, acetonitrilu a vody. Reakce se účelně provádí při teplotě okolí po dobu asi 4 až asi 24 hodin.

Požadovanou sloučeninu obecného vzorce XXXIV, kde X má výše uvedený význam, je možno připravit z odpovídající sloučeniny obecného vzorce XXXV reakcí s kyselinou jodistou, která hydrolyzuje isopropylidenovou skupinu a štěpí glykol za vzniku aldehydu. Reakce se provádí v etherových rozpouštědlech, typicky v diethyletheru, účelně při teplotě okolí po dobu asi 2 hodin až asi 24 hodin.

Požadovanou sloučeninu obecného vzorce XXXV je možno připravit z odpovídající hydroxylové sloučeniny aktivací a vytěsněním hydroxylové skupiny azidovým iontem. Aktivace se typicky provádí tak, že se hydroxylová skupina reakcí s anhydridem trifluromethansulfonové kyseliny za přítomnosti aminové báze, přednostně pyridinu, při asi -30 až asi 0°C po dobu asi 30 minut až asi 2 hodin převede na odpovídající trifluormethansulfonátový derivát. Výsledný trifluormethansulfonát se nechá reagovat s azidem alkalického kovu, přednostně azidem sodným, v polárním aprotickém rozpouštědle, přednostně dimethylformamidu, přibližně při teplotě okolí až asi 50°C po dobu asi 6 až asi 24 hodin.

Ve schématu IV jsou znázorněny způsoby výroby benzylaminových meziproduktů podle tohoto vynálezu.

O _z

Benzylaminy obecného vzorce L, kde D, G a R mají výše uvedený význam (zbytek D, který je před alkylací

• ·

součástí skupiny DH, obvykle představuje oxyskupinu, thioskupinu nebo iminoskupinu) se připraví například jedním ze tří způsobů. Podle prvního způsobu se z odpovídající aromatické sloučeniny obecného vzorce LI imidoalkylační reakcí připraví imid obecného vzorce Lil. Vhodná sloučenina obecného vzorce LI se tedy nechá reagovat s N-chlormethylftalimidem a kyselinou nebo katalytickou Lewisovou kyselinou, například chloridem zinečnatým, v aprotickém rozpouštědle inertním vůči reakci, jako tetrahydrofuranu, při teplotě od teploty okolí do asi 100°C, přednostně asi 50°C.

Výsledná sloučenina obecného vzorce Lil se alkyluje za vzniku odpovídající sloučeniny obecného vzorce L tak, že se uvádí do styku s vhodným alkylačním činidlem v polárním aprotickém rozpouštědle, jako dimethylformamidu, při teplotě od asi 0 do asi 50°C, po dobu od asi 2 do asi 24 hodin. Alternativně alkylaci lze provádět za Mitsunobuho podmínek za použití vhodného alkoholu, trifenylfosfinu, diethylazadikarboxylátu v etherovém rozpouštědle, přednostně tetrahydrofuranu, při teplotě okolí, po dobu asi 2 až asi 24 hodin.

Získaný ftalimid obecného vzorce LIX se podrobí deprotekční reakci s hydrátem hydrazinu v protickém rozpouštědle, jako ethanolu, při teplotě okolí až asi 100°C, přednostně si 50°C, po dobu asi 1 hodiny až asi 6 hodin. Alternativně se deprotekce může provést tak, že se imid redukuje reakcí s hydridovým redukčním činidlem, přednostně tetrahydroboritanem sodným, a následně se zahřívá s kyselinou octovou při asi 50 až asi 100°C po dobu asi 10 až asi 24 hodin.

Alternativně je sloučeniny obecného vzorce L, kde L představuje benzylamin, možno připravovat za použití • · ♦ ί • * · • ··· · • · ···· »·

- 75 «· ** » · · • · · • · · · • · · • ·· ···· následující reakčni sekvence. Z odpovídající sloučeniny obecného vzorce Lili se dvoustupňovým způsobem zahrnujícím alkylaci a následnou redukci hydridem kovu připraví sloučenina vzorce LV. Sloučeninu LV je také možno získat z odpovídající sloučeniny obecného vzorce LIV reakcí s boronovou kyselinou, přednostně fenylboronovou kyselinou, a formaldehydem a kyselým katalyzátorem, jako kyselinou propionovou, v aprotickém rozpouštědle, jako benzenu, při teplotě od asi 30 do asi 100°C po dobu asi 1 hodiny až asi 24 hodin.

Sloučeninu obecného vzorce LVI, kde D, G a R³ má výše uvedený význam, lze připravit z odpovídající sloučeniny obecného vzorce LV. Benzylalkohol obecného vzorce LV se obvykle nechá reagovat s difenylfosforylazidem a bázi, přednostně silnou aminovou bází, jako diazobicykloundekanem (DBU), v aprotickém rozpouštědle, přednostně toluenu, při teplotě od asi 0 do asi 50°C, nejvýhodněji při teplotě okolí, po dobu asi 1 hodiny až asi 24 hodin.

Vzniklý azid je možno redukovat za vzniku sloučeniny obecného vzorce L. Tato redukce se obvykle provádí tak, že se odpovídající azid obecného vzorce XVI smísí s hydrogenačním katalyzátorem, přednostně palladiovým katalyzátorem, nejvýhodněji 10% palladiem na uhlíku, v rozpouštědle inertním vůči reakci, jako alkoholickém rozpouštědle, přednostně ethanolu. Reakčni nádoba se umístí pod atmosféru plynného vodíku, přednostně o tlaku asi 103 až 344 kPa, účelně při teplotě okolí, na dobu asi 30 minut až asi 4 hodin. Azid lze redukovat také tak, že se nechá reagovat s trialkyl- nebo triarylfosfinem, přednostně trifenylfosfinem, v rozpouštědle inertním vůči reakci, jako tetrahydrofuranu, při teplotě od asi 0 do asi 65°C, typicky při teplotě okolí, po dobu asi 0,5 hodiny až asi 2 hodin. Na reakčni směs se poté působí bází, přednostně aminovou bází, • · nejvýhodněji hydroxidem amonným, po dobu asi 6 až asi 48 hodin.

Při třetím způsobu se sloučenina obecného vzorce L získá z nitrilu obecného vzorce LVII katalytickou hydrogenací nebo redukcí hydridem kovu. Katalytická hydrogenace se obvykle provádí tak, že se vhodná sloučenina obecného vzorce LVII smísí s hydrogenačním katalyzátorem, přednostně Raneyovým niklem, v rozpouštědle inertním vůči reakci, jako alkoholu, přednostně ethanolu obsahujícím asi 1% vodný roztok hydroxidu amonného. Reakční nádoba se umístí pod atmosféru plynného vodíku, přednostně o tlaku asi 103 až 344 kPa, účelně při teplotě okolí, na dobu asi 30 minut až asi 4 hodin. Alternativně lze redukci provést za použití redukčního činidla na bázi hydridu kovu, přednostně lithiumaluminiumhydridu v etherovém rozpouštědle, přednostně tetrahydrofuranu, při teplotě od asi 0 do asi 60 °C, přednostně při teplotě okolí, po dobu asi 1 až asi 6 hodin. Sloučeniny obecného vzorce LVII se připravují alkylací odpovídajících sloučenin obecného vzorce LVIII za použití způsobů, které jsou odborníkům v tomto oboru známy a jsou popsány v souvislosti se sloučeninami obecného vzorce LIX.

Výchozí látky a reakční činidla pro sloučeniny popsané výše jsou také snadno dostupné, nebo je lze snadno syntetizovat běžnými metodami organické syntézy známými odborníkům v tomto oboru. Tak například mnohé používané sloučeniny jsou příbuzné přírodním sloučeninám nebo se jedná o jejich deriváty. Na látky tohoto typu se upírá značný vědecký zájem a existuje po nich značná obchodní potávka, a v důsledku toho jsou mnohé z těchto meziproduktů obchodně dostupné nebo jsou popsány v literatuře nebo jsou snadno připravitelné z jiných běžně dostupných látek metodami citovanými v literatuře.

-”77·Některé sloučeniny podle vynálezu obsahují asymetrické atomy uhlíku, a proto se mohou vyskytovat ve formě enantiomerů nebo diastereomerů. Diasteromerické směsi je možno dělit na individuální diastereomery na základě jejich fyzikálně chemických odlišností o sobě známými metodami, například chromatografii a/nebo frakční krystalizací. Enantiomery je možno dělit tak, že se enantiomerická směs převede na diasteromerní směs reakcí s vhodnou opticky aktivní sloučeninou (například alkoholem), potom se oddělí diastereomery a jednotlivé diastereomery se převedou (například hydrolýzou) na odpovídající čisté enantiomery. Do rozsahu vynálezu spadají všechny takové isomery, včetně diastereomerů a enantiomerů, jakož i jejich směsi. Některé ze sloučenin podle vynálezu jsou také atropoisomery (například substituované biaryly), které rovněž spadají do rozsahu tohoto vynálezu.

Odborníkům v tomto oboru bude zřejmé, že sloučeniny obecného vzorce I se mohou vyskytovat v několika tautomerních formách. Všechny tyto tautomerní formy spadají do rozsahu tohoto vynálezu. Do jeho rozsahu také spadají sloučeniny obecného vzorce I ve formě enolových forem i ketoforem.

Některé sloučeniny podle vynálezu jsou kyselé, a mohou tvořit soli s farmaceuticky vhodnými kationty. Všechny sloučeniny podle vynálezu jsou bázické a mohou tvořit soli s farmaceuticky vhodným aniontem. Všechny takové soli, včetně di-solí, spadají do rozsahu tohoto vynálezu a je možno je připravovat konvenčními metodami. Tak například je možno je připravit jednoduše tak, že se kyselé a zásadité složky smíchají, obvykle ve stechiometrickém poměru, ve vodném, nevodném nebo zčásti vodném prostředí. Soli se izolují bud filtrací nebo srážením nerozpouštědlem • · · · • · · ·

- 78 s následující filtrací, nebo odpařením rozpouštědla nebo v případě vodných roztoků také lyofilizací.

Pokud sloučeniny podle vynálezu tvoří metabolity, hydráty nebo solváty, potom tyto formy také spadají do rozsahu tohoto vynálezu.

Spolu se sloučeninami podle vynálezu je možno použít také jiných kardiovaskulárních činidel (například činidel s kardiovaskulárním účinkem), které jsou odborníkům v tomto oboru známé. Takové sloučeniny jsou popsány výše v tomto textu.

Při kombinační terapii se jak sloučeniny podle vynálezu, tak ostatní sloučeniny, savcům (například lidem, ženského nebo mužského pohlaví) podávají za použití obvyklých způsobů.

Při kombinační terapii podle vynálezu je jako druhé sloučeniny možno použít jakéhokoliv inhibitoru NHE-1. Pod pojmem inhibitor NHE-1 se rozumí sloučeniny, které inhibují transportní systém výměny sodík/proton (Na+/H+) a jsou tedy užitečné jako terapeutická nebo profylaktická činidla pro léčení chorob vyvolaných nebo zhoršujících se zrychlením transportního systému výměny sodík/proton (Na+/H+). Takovou inhibici je odborník v tomto oboru schopen snadno stanovit na základě standardních zkoušek, které jsou popsány dále, a na základě obvyklých předklinických zkoušek kardioprotekce [zkouška in vivo viz Klein, H. et al., Circulation 92: 912 až 917 (1995); zkouška na izolovaném srdci viz Scholz, W. et al., Cardiovascular Research 29: 260 až 268 (1995); antiarythmická zkouška viz Yasutake M. et al., Am. J. Physiol., 36: H2430-H2440 (1994); NMR zkouška viz Kolke et al., J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 112: 765 až 775 (1996)]. Různé inhibitory jsou popsány a uvedeny dále. Odborníkům v ···· · · ····

- 79 tomto oboru však budou známy i jiné inhibitory NHE-1, jako jsou sloučenin popsané ve WO99/43663, zveřejněné 2. září 1999. Jako příklady inhibitorů NHE-1 užitečných v kompozicích a při způsobech podle tohoto vynálezu, je tedy možno uvést sloučeniny zvolené ze souboru sestávajícího z [1-(8-bromchinolin-5-yl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(6-chlorchinolin-5-yl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbony1]guanidinu;

[1-(indazol-7-yl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(benzimidazol-5-yl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbony1]guanidinu;

[1-(1-isochinolyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[5-cyklopropyl-l-(4-chinolyl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[5-cyklopropyl-l-(chinolin-5-yl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[5-cyklopropyl-l-(chinolin-8-yl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(indazol-6-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[l-(indazol-5-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

·· ·« ♦ · ·· ·· • ···· · · · · · · • · · · · · · ···· ·· ··· «·· ·· ····

- 80 [1-(benzimidazol-5-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(l-methylbenzimidazol-6-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbony1]guanidinu;

1-(5-chinolyl)-5-n-propyl-lH“pyrazol-4-karbonyljguanidinu;

1-(5-chinolyl)-5-isopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyljguanidinu;

[5-ethyl-l-(6-chinolyl)-lH-pyrazol-4-karbonyljguanidinu;

[1-(2-methylbenzimidazol-5-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbony1j guanidinu;

[1-(1,4-benzodioxan-6-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(benzotriazol-5-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbonyljguanidinu;

[1-(3-chlorindazol-5-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(5-chinolyl)-5-butyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[5-propyl-l-(6-chinolyl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[5-isopropyl-l-(6-chinolyl)-lH-pyrazol-4-karbonyljguanidinu;

[1-(2-chlor-4-methylsulfonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbony1jguanidinu;

[1-(2-chlorfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyljguanidinu;

• · · · • · · · • * · • · · · • · * · · · · ·

- 81 [1-(2-trifluormethyl-4-fluorfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol -4-karbonylJguanidinu;

[1-(2-bromfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1—(2-fluorfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonylJguani dinu;

[1-(2-chlor-5-methoxyfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbony1]guanidinu;

[1-(2-chlor-4-methylaminosulfonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonylJguanidinu;

[1-(2,5-dichlorfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(2,3-dichlorfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(2-chlor-5-aminokarbonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonylJguanidinu;

[1-(2-chlor-5-aminosulfonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonylJguanidinu;

[1-(2-fluor-6-trifluormethylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol -4-karbonylJguanidinu;

[1-(2-chlor-5-methylsulfonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol -4-karbonylJguanidinu;

[1-(2-chlor-5-dimethylaminosulfonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonylJguanidinu;

·· · 9

999 9

- 82 [1-(2-trifluormethyl-4-chlorfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonylJguanidinu;

[1-(2-chlorfenyl)-5-methyl-lH-pyrazol-4-karbonylJguanidinu;

[5-methyl-l-(2-trifluormethylfenyl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[5-ethyl-l-fenyl-lH-pyrazol-4-karbonylJguanidinu;

[5-cyklopropyl-l-(2-trifluormethylfenyl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[5-cyklopropyl-l-fenyl-lH-pyrazol-4-karbonylJguanidinu;

[5-cyklopropyl-l-(2,6-dichlorfenyl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

a jejich farmaceuticky vhodných solí.

Jako druhé sloučeniny (účinné látky) podle tohoto vynálezu je možno použít jakéhokoliv inhibitoru aldosa reduktasy. Pod pojmem inhibitor aldosa reduktasy se rozumí sloučeniny, které inhibují biokonverzi glukosy na sorbitol katalyzovanou enzymem aldosa reduktasou. Takovou inhibici odborník v tomto oboru snadno stanoví za použití standardních zkoušek (J. Malone, Diabetes, 29: 861 až 864, 1980, Red Cell Sorbitol, an Indicator of Diabetic Control). Různé inhibitory aldosa reduktasy jsou uvedeny dále s příslušnými odkazy. Odborníkům v tomto oboru však budou známy ještě další takové látky. US patenty jsou zde uváděny náhradou za přenesení celého jejich obsahu do tohoto textu. Spolu s odkazy na příslušnou patentovou literaturu, která se týká daných sloučenin, jsou tyto látky popsány za použití • · • ♦ · · « i » ··· · > · · ·

- 83 chemického názvosloví USÁN a dalších označení v závorkách, pokud je lze použít.

Aktivitu inhibitoru aldosa reduktasy v tkáni je možno stanovit tak, že se zkouší množství inhibitoru aldosa reduktasy, které je potřebné pro snížení tkáňového sorbitolu (tj. inhibici další produkce sorbitolu následkem blokování aldosa reduktasy) nebo snížení tkáňové fruktosy (inhibici produkce sorbitolu následkem blokování aldosa reduktasy a následkem toho produkce fruktosy). Aniž bychom se chtěli vázat jakoukoliv konkrétní teorií nebo mechanismem, máme za to, že inhibitor aldosa reduktasy inhibici aldosa reduktasy zabraňuje poškození následkem ischemie nebo je snižuje, jak je popsáno dále.

Jako příklady inhibitorů aldosa reduktasy, které jsou užitečné v kompozicích a při způsobech podle vynálezu, je tedy možno uvést:

1. 3-(4-brom-2-fluorbenzyl)-3,4-dihydro-4-oxo-l-ftalazinoctovou kyselinu (ponalrestat, US 4 251 528);

2. N-{[(5-trifluormethyl)-6-methoxy-l-naftalenyl]thioxomethyl)-N-methylglycin (tolrestat, US 4 600 724);

3. 5-[(Z,E)^-methylcinnamyliden]-4-oxo-2-thioxo-3-thiazolidenoctovou kyselinu (epalrestat, US 4 464 382,

US 4 791 126, US 4 831 045);

4. 3-(4-brom-2-fluorbenzyl)-7-chlor-3,4-dihydro-2,4-dioxo-l(2H)-chinazolinoctovou kyselinu (zenarestat,

US 4 734 419 a 4 883 800);

5. 2R,4R-6,7-dichlor-4-hydroxy-2-methylchroman-4-octovou kyselinu (US 4 883 410);

·· 00 • * · · * 0 0 0

000 0 0 0

0000 ·0 0 - 84 0· *

0

0 0 ·

· 0 ·

6. 2R,4R-6,7-dichlor-6-fluor-4-hydroxy-2-methylchroman-4-octovou kyselinu (US 4 883 410)

7. 3,4-dihydro-2,8-diisopropyl-3-oxo-2H-l,4-benzoxazin-4-octovou kyselinu (US 4 771 050);

8. 3,4-dihydro-3-oxo-4-[(4,5,7-trifluor-2-benzothiazolyl)methyl]-2H-1,4-benzothiazin-2-octovou kyselinu (SPR-210, US 5 252 572);

9. N-[3,5-dimethyl-4-[(nitromethyl)sulfonyl]fenyl]-2-methylbenzenacetamid (ZD5522, US 5 270 342 a US 5 430 060);

10. (S)-6-fluorspiro[chroman-4,4'-imidazolidin]-2,5'-dion (sorbinil, US 4 130 714);

11. d-2-methyl-6-fluorspiro(chroman-4',4'-imidazolidin)-2',5'-dion (US 4 540 704);

12. 2-fluorspiro(9H-fluoren-9,4'-imidazolidin)2',5'-dion (US 4 438 272);

13. 2,7-difluorspiro(9H-fluoren-9,4'-imidazolidin)-2',5'-díon (US 4 436 745, US 4 438 272);

14. 2,7-difluor-5-methoxyspiro(9H-fluoren-9,4'-imidazolídin)-2',5'-dion (US 4 436 745, US 4 438 272);

15. 7-fluorspiro(5H-indenol[1,2-b]pyridin-5,3'-pyrrolidin)-2,5'-dion (US 4 436 745, US 4 438 272);

16. d-cis-6’-chlor-2',3'-dihydro-2’-methylspiro(imidazolidin-4,4'-4'-H-pyrano(2,3-b)pyridin)-2,5-dion (US 4 980 357);

• · · · ♦	• 9·	·«

9 9 9	9	9	9	• *
• ··· 9	9	•	• 9	• ·
• ·	•	•	9	9 «
9 9 9 9 9 9	9 9 9	• 9 9	9 9	9 9 9 9

- 85 17. spiro[imidazolidin-4,5'(6H)chinolin]-2,5-dion-3'-chlor-7',8'-dihydro-7'-methyl-(5'-cis) (US 5 066 659);

18. (2S, 4S)—6—fluor-2',5'-dioxospiro(chroman-4, 4' -imidazolidin)-2-karboxamid (US 5 447 946) a

19. 2-[(4-brom-2-fluorfenyl)methyl]-6-fluorspiro[isochinolin-4(1H),3'-pyrrolidin]-1,2',3,5'(2H)tetron (ARI-509, US 5 037 831)

Jako příklady jiných inhibitorů aldosa reduktasy je možno uvést sloučeniny obecného vzorce IB

kde

Z představuje kyslík nebo síru;

R představuje hydroxyskupinu nebo skupinu, kterou je možno odstranit in vivo za vzniku sloučeniny obecη ného vzorce I, kde R představuje hydroxyskupinu; a

X a Y jsou stejné nebo různé a představují každý nezávisle vodík, trifluormethylskupinu, fluor nebo chlor;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.

Z výše uvedených inhibitorů aldosa reduktasy se dává přednost sloučeninám číslo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 10 ·· 4 · • » · 4 9 · »· • 4 4 4 4

4·· 444 · · 4

4444 44 444 444

- 86 a 17 a následujícím sloučeninám obecného vzorce IB:

20. 3,4-dihydro-3-(5-fluorbenzothiazol-2-ylmethyl)-4-oxoftalazin-l-yloctové kyselině [R¹ = hydroxy, X = F, Y = H]

21. 3-(5,7-difluorbenzothiazol-2-ylmethyl)-3,4-dihydro-4-oxoftalazin-l-yloctové kyselině [R¹ = hydroxy, X = = Y = F];

22. 3-(5-chlorbenzothiazol-2-ylmethyl)-3,4-dihydro-4-oxof talazm-l-yloctove kyselině [R^x = hydroxy, X = Cl,

Y = H];

23. 3-(5,7-dichlorbenzothiazol-2-ylmethyl)-3,4-dihydro-4-oxoftalazin-l-yloctové kyselině [R¹ = hydroxy, X = = Y = Cl];

24. 3,4-dihydro-4-oxo-3-(5-trifluormethylbenzoxazol -2-ylmethyl)ftalazin-l-yloctové kyselině [R¹ = hydroxy, X = CF₃, Y = H];

25. 3,4-dihydro-3-(5-fluorbenzoxazol-2-ylmethyl)-4-oxoftalazin-l-yloctové kyselině [R¹ = hydroxy, X = F, Y =

H];

26. 3-(5,7-difluorbenzoxazol-2-ylmethyl)-3,4-dihydro-4-oxoftalazin-l-yloctové kyselině [R¹ = hydroxy, X = = Y = F];

28. 3-(5,7-dichlorbenzoxazol-2-ylmethyl)-3,4-di27. 3-(5-chlorbenzoxazol-2-ylmethyl)-3,4-dihydro-4-oxoftalazin-l-yloctové kyselině [R¹ = hydroxy, X = Cl,

Y = H];

444 4

4

4444 44

4 44 ·« ·4 4 · 4 « 4 4 4 ·

4 4 4 4 4

4 4 4 4

444 444 44 4444

- 87 hydro-4-oxoftalazin-l-yloctové kyselině [R¹ = hydroxy,

X = Y = Cl] a

29. zopolrestatu, 3,4-dihydro-4-oxo-3-[[5-(trifluormethyl)-2-benzothiazolyl]methyl]-1-ftalazinoctové kyselině [R¹ = hydroxy, X = trifluormethyl, Y = H].

Ve sloučeninách 20 až 23 a 29 Z představuje síru a ve sloučeninách 24 až 28 Z představuje kyslík.

Z výše uvedené podskupiny přednostních sloučenin se větší přednost dává sloučeninám 20 až 29 a zvláštní přednost se dává sloučenině 29.

Z inhibitorů aldosa reduktasy se dává přednost zejména 3,4-dihydro-4-oxo-3-[[5-(trifluormethyl)-2-benzothiazolylJmethyl]-1-ftalazinoctové kyselině.

Sloučeniny, které jsou inhibitory aldosa reduktasy podle vynálezu, jsou snadno dostupné nebo je odborník v tomto oboru může snadno syntetizovat za použití obvyklých postupů syntézy organických sloučenin, zejména s ohledem na popisy obsažené v relevantní patentové literatuře.

Inhibitoru aldosa reduktasy se může použít v množství, které je účinné při aktivitách podle tohoto vynálezu. Účinná dávka inhibitoru aldosa reduktasy v kombinačních kompozicích, způsobech a křtech podle tohoto vynálezu typicky leží v rozmezí od asi 0,1 do 100 mg/kg/den, přednostně od 0,1 do 20 mg/kg/den, a lze ji podávat jednorázově nebo ve formě několika dílčích dávek.

Jako druhou sloučeninu podle vynálezu je možno použít jakéhokoliv inhibitoru glykogen fosforylasy. Pod pojmem inhibitor glykogen fosforylasy se rozumí jakákoliv • ·

9999

♦ 9

999· látka, činidlo nebo kombinace látek a/nebo činidel redukující, retardující nebo eliminující enzymatické působení glykogen fosforylasy. Enzymatické působení glykogen fosforylasy, které je v současné době známo, spočívá v degradaci glykogenu katalýzou reversibilní reakce makromolekuly glykogenu a anorganického fosfátu na glukosa-l-fosfát a makromolekulu glykogenu, která je o jeden glukosylový zbytek kratší než původní makromolekula glykogenu (při reakci probíhající ve směru glykogenolýzy). Takové účinky odborník v tomto oboru snadno stanoví za použití standardních zkoušek (jaké jsou například popsány dále). Různé takové sloučeniny jsou popsány ve zveřejněných PCT přihláškách WO 96/39384 a WO 96/39385. Odborníkům v tomto oboru však budou známy ještě další takové inhibitory glykogen fosforylasy.

Jako inhibitorům glykogen fosforylasy se dává přednost sloučeninám obecného vzorce IC kde

Rl₀ R_1X přerušovaná čára představuje případnou vazbu;

(IC) představuje skupinu obecného vzorce -C(H)=,

-C(alkyl)= s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části nebo -C(halogen)=, když přerušovaná čára představuje vazbu; nebo A představuje methylenskupinu nebo skupinu obecného vzorce -CH(alkyl)- s 1 až 4 atomy ·» ·· ·

9 9 9 · · • · · « • 999 9 9

9 9

9999 99 999 • ♦· ·· ·· · < » • 9 9 · • · · * 9

9 9 9

9 · » 9 9 99 uhlíku v alkylové části, když přerušovaná čára nepředstavuje vazbu;

^Rl' ^R10 ^{a R}11 představuje nezávisle vždy atom vodíku, atom halogenu, 4-, 6- nebo 7-nitroskupinu, kyanoskupinu, alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, fluormethylskupinu, difluormethylskupinu nebo trifluormethylskupinu;

R₂ představuje atom vodíku;

R₃ představuje atom vodíku nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku;

R₄ představuje atom vodíku, methylskupinu, ethylskupinu, n-propylskupinu, hydroxyalkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkoxyalkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkoxylové a 1 až 3 atomy uhlíku v alkylové části, fenylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, fenylhydroxyalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, fenylalkoxyalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové a 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, thien-2- nebo -3-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části nebo fur-2- nebo -3-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, přičemž kruh obsažený v R₄je popřípadě substituován na uhlíku jedním, dvěma nebo třemi substituenty nezávisle zvolenými ze souboru zahrnujícího atom vodíku, atom halogenu, alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, trifluormethylskupinu, hydroxyskupinu, aminoskupinu a kyanoskupinu; nebo • · · · 9 ·· 9

999 9 9 9999 9

9 9 9 9 9 9

9999 99 999 999 99 9999

- 90 R₄ představuje pyrid-2-, -3- nebo -4-ylalkylskupinu s až 4 atomy uhlíku v alkylové části, thiazol-2-, -4- nebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, imidazol-1-, -2-, -4- nebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, pyrrol-2- nebo -3-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, oxazol-2-, -4- nebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, pyrazol-3-, -4- nebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, isoxazol-3-, -4- nebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, isothiazol-3-, -4- nebo -5-ylalkyl skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, pyridazin-3- nebo -4-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, pyrimidin-2-, -4-, -5nebo -6-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, pyrazin-2- nebo -3-ylalkylskupinu : 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části nebo 1,3,5triazin-2-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, přičemž heterocyklický kruh obsažený ve zbytku R₄ je popřípadě substituován na uhlíku jedním nebo dvěma substituenty nezávisle zvolenými ze souboru zahrnujícího atom halogenu, trifluormethylskupinu, alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, aminoskupinu a hydroxyskupinu;

R₅ představuje atom vodíku, hydroxyskupinu, atom fluoru, alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxy skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, alkanoylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, aminoalkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminoalkoxy skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových a 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkoxylových částí karboxyalkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alko44 ·· 4 * >4 44 «44« 44 4 · 4 44

444 4 4 44 4 • 444 4 4 44444

4 4 4 4 4 4

4444 44 444 ··♦ 44 4444

- 91 xylové části, alkoxykarbonylalkoxyskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku v první a 1 až 4 atomy uhlíku ve druhé alkoxylové části, benzyloxykarbonylalkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části nebo karbony loxyskupinu, přičemž tato karbonyloxyskupina je prostřednictvím vazby uhlík-uhlík připojena k fenylovému, thiazolylovému, imidazolylovému, lH-indolylovému, furylovému, pyrrolylovému, oxazolylovému, pyrazolylovému, isoxazolylovému, isothiazolylovému, pyridazinylovému, pyrimidinylovému, pyrazinylovému nebo 1,3,5-triazinylovému kruhu a přičemž kruh obsažený ve zbytku R₅ je popřípadě substituován na atomu uhlíku jedním substituentem zvoleným ze souboru zahrnujícího atom halogenu, alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, aminoskupinu a trifluormethylskupinu;

R₇ představuje atom vodíku, atom fluoru nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku; nebo

R₅ a Ry dohromady popřípadě představují oxoskupinu;

R₆ představuje karboxyskupinu, alkoxykarbonylskupinu s až 8 atomy uhlíku v alkoxylové části nebo skupinu vzorce C(O)NRgR_g nebo C(O)R₁₂, kde

Rg představuje atom vodíku, alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, hydroxyskupinu nebo alkoxyskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku; a

R₉ představuje atom vodíku, alkylskupinu s 1 až 8 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 8 atomy uhíku, methylen-perfluorovanou alkylskupinu s 1 až 8 atomy uhlíku v alkylové části, • · · · · • 4 4 • · · · · • «

4444 44 ·

- 92 ·9> ·4 • 4 » • 4 · • > « · • · · • 44 1«*· fenylskupinu, pyridylskupinu, thienylskupinu, furylskupinu, pyrrolylskupinu, pyrrolidinylskupinu, oxazolylskupinu, thiazolylskupinu, imidazolylskupinu, pyrazolylskupinu, pyrazolinylskupinu, pyrazolidinylskupinu, isoxazolylskupiňu, isothiazolylskupinu, pyranylskupinu, piperidylskupinu, morfolinylskupinu, pyridazinylskupinu, pyrimidinylskupinu, pyrazinylskupinu, piperazinylskupinu nebo 1,3,5-triazinylskupinu, přičemž kruh obsažený v R_g je připojen prostřednictvím vazby uhlík-dusík; nebo

R_g představuje alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, která je substituována jedním, dvěma nebo třemi substituenty nezávisle zvolenými ze souboru zahrnujícího atom vodíku, hydroxyskupinu, aminoskupinu, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminoskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku v každé z alkylových částí; nebo

Rg představuje alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, která je substituována jedním nebo dvěma substituenty nezávisle zvolenými ze souboru zahrnujícího fenylskupinu, pyridylskupinu, furylskupinu, pyrrolylskupinu, pyrrolidinylskupinu, oxazolylskupinu, thiazolylskupinu, imidazolylskupinu, pyrazolylskupinu, pyrazolinylskupinu, pyrazolidinylskupinu, isoxazolylskupiňu, isothiazolylskupinu, pyranylskupinu, pyridylskupinu, piperidylskupinu, morfolinylskupinu, pyridazinylskupinu, pyrimidinylskupinu, pyrazinylskupinu, piperazinylskupinu nebo 1,3,5-triazinylskupinu, přičemž nearomatický kruh obsahující atom dusíku, který je součástí R_g, je popřípadě na atomu dusíku substituován jednou alkylskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, benzylskupinou, benzoylskupinou nebo

9» « 9 · • 9 •

• •99 • 9 •

999 9 9 • 9 ·* ·· · 9 • · e·· ··· «9 •

• ••9

- 93 alkoxykarbonylskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku v alkoxylové části a přičemž dále kruh obsažený v Rg je popřípadě na atomu uhlíku substituován jedním substituentem zvoleným ze souboru zahrnujícího atom halogenu, alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, aminoskupinu a mono-N- a di-N,Nalkylaminoskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, s tou podmínkou, že nezahrnuje kvaternizovaný atom dusíku a žádnou vazbu dusík-kyslík, dusík- dusík nebo dusík-halogen;

R₁₂ představuje piperazin-l-ylskupinu, 4-alkylpiperazin-l-ylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, 4-formylpiperazin-l-ylskupinu, morfolinoskupinu, thiomorfolinoskupinu, 1-oxothiomorfolinoskupinu, 1,1-dioxothiomorfolinoskupinu, thiazolidin-3-ylskupinu, l-oxothiazolidin-3-ylskupinu, 1,l-dioxothiazolidin-3-ylskupinu, 2alkoxykarbonylpyrrolidin-l-ylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkoxylové části, oxazolidin-3-ylskupinu nebo 2(R)-hydroxymethylpyrrolidin-l-ylskupinu; nebo

R₁₂ představuje 3- a/nebo 4-mono- nebo -disubstituovanou oxazetidin-2-ylskupinu, 2-, 4- a/nebo 5-mononebo -disubstituovanou oxazolidin-3-ylskupinu, 2-, 4- a/nebo 5-mono- nebo -disubstituovanou thiazolidin-3-ylskupinu, 2-, 4- a/nebo 5-mono- nebo -disubstituovanou l-oxothiazolidin-3-ylskupinu, 2-, 4a/nebo 5-mono- nebo -disubstituovanou 1,1-dioxothiazolidin-3-ylskupinu, 3- a/nebo 4-mono- nebo -disubstituovanou pyrrolidin-l-ylskupinu, 3-, 4a/nebo 5-mono-, -di- nebo -trisubstituovanou piperidin-l-ylskupinu, 3-, 4- a/nebo 5-mono-, -dinebo -trisubstituovanou piperazin-l-ylskupinu, 3• ·

- 94 substituovanou azetidin-l-ylskupinu, 4- a/nebo 5nono- nebo -disubstituovanou 1,2-oxazinan-2-ylskupinu, 3- a/nebo 4-mono- nebo -disubstituovanou pyrazolidin-l-ylskupinu, 4- a/nebo 5-mono- nebo -disubstituovanou isoxazolidin-2-ylskupinu, 4a/nebo 5-mono- a/nebo -disubstituovanou isothiazolidin-2-ylskupinu, přičemž každý ze substituentů je nezávisle zvolen ze souboru zahrnujícího atom vodíku, atom halogenu, alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, aminoskupinu, mono-N- s di-N,N-alkylaminoskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, formylskupinu, oxoskupinu, hydroxyiminoskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, karboxyskupinu, karbamoylskupinu, mono- N- a di-N,N-alkylkarbamoylskupinu s l až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, alkoxyiminoskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxymethoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části, alkoxykarbonylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkoxylové části, karboxyalkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku v alkylové části a hydroxyalkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku;

přičemž však pokud R₄ představuje atom vodíku, methylskupinu, ethylskupinu nebo n-propylskupinu, potom R₅ představuje hydroxyskupinu a/nebo pokud R₅ a R₇ představují atomy vodíku, potom R₄ nepředstavuje atom vodíku, methylskupinu, ethylskupinu, n-propylskupinu, hydroxyalkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku nebo alkoxyalkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkoxylové a 1 až 3 atomy uhlíku v alkylové části a R_g představuje skupinu ·· ·· • ♦ · • ·

C(O)NRgRg nebo C(0)R^2 nebo alkoxykarbonylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části;

a jejich farmaceuticky vhodným solím a proléčivům.

Jako přednostní inhibitory glykogen fosforylasy lze také uvést sloučeniny obecného vzorce ID

(ID) přerušovaná čára představuje případnou vazbu;

A představuje skupinu obecného vzorce -C(H)=,

-C(alkyl)= s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, -C(halogen)= nebo -N=, když přerušovaná čára předsta vuje vazbu; nebo A představuje methylenskupinu nebo skupinu obecného vzorce -CH(alkyl)- s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, když přerušovaná čára nepředstavuje vazbu;

R_lř R₁₀ a R_1]l představuje nezávisle vždy atom vodíku, atom halogenu, kyanoskupinu, 4-, 6- nebo 7-nitroskupinu, alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, fluormethylskupinu, difluormethylskupinu nebo trifluormethylskupinu;

představuje atom vodíku;

- 96 R₃ představuje atom vodíku nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku;

R₄ představuje atom vodíku, methylskupinu, ethylskupinu, n-propylskupinu, hydroxyalkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkoxyalkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkoxylové a 1 až 3 atomy uhlíku v alkylové části, fenylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, fenylhydroxyalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, fenylalkoxyalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové a 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, thien-2- nebo -3-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části nebo fur-2- nebo -3-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, přičemž kruh obsažený v R₄je substituován na uhlíku jedním, dvěma nebo třemi substituenty nezávisle zvolenými ze souboru zahrnujícího atom vodíku, atom halogenu, alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, trifluormethylskupinu, hydroxyskupinu, aminoskupinu, kyanoskupinu a 4,5-dihydro-lH-imidazol-2-ylskupinu; nebo

R₄ představuje pyrid-2-, -3- nebo -4-ylalkylskupinu s až 4 atomy uhlíku v alkylové části, thiazol-2-, -4- nebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, imidazol-2-, -4- nebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, pyrrol-2- nebo -3-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, oxazol-2-, -4- nebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, pyrazol-3-, -4- nebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, isoxazol-3-,

-4- nebo -5-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, isothiazol-3-, -4- nebo -5-ylalkyl• · • · · · · · skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, pyridazin-3- nebo -4-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, pyrimidin-2-, -4-, -5nebo -6-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, pyrazin-2- nebo -3-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, 1,3,5triazin-2-ylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části nebo indol-2-alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, přičemž heterocyklický kruh obsa- žený ve zbytku R₄ je popřípadě substituován na uhlíku jedním nebo dvěma substituenty nezávisle zvolenými ze souboru zahrnujícího atom halogenu, trifluormethylskupinu, alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, aminoskupinu, hydroxyskupinu a kyanoskupinu; nebo

R₄ představuje skupinu R₁₅-karbonyloxymethyl, kde R₁₅ představuje fenylskupinu, thiazolylskupinu, imidazolylskupinu, ΙΗ-indolylskupinu, furylskupinu, pyrrolylskupinu, oxazolylskupinu, pyrazolylskupinu, isoxazolylskupinu, isothiazolylskupinu, pyridyl skupinu, pyridazinylskupinu, pyrimidinylskupinu, pyrazinylskupinu nebo 1,3,5-triazinyskupinu, přičemž výše uvedené kruhy obsažené ve skupině R₁₅jsou popřípadě substituovány na uhlíku jedním nebo dvěma substituenty nezávisle zvolenými ze souboru zahrnujícího atom halogenu, aminoskupinu, hydroxyskupinu, alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a trifluormethylskupinu;

R₅ představuje atom vodíku, methylskupinu, ethylskupinu, n-propylskupinu, hydroxymethylskupinu nebo hydroxyethy1skup inu;

- 98 R₆ představuje karboxyskupinu, alkoxykarbonylskupinu s až 8 atomy uhlíku v alkoxylové části; benzyloxykarbonylskupinu nebo skupinu vzorce C(O)NRgRg nebo C(O)R₁₂, kde

R_g představuje atom vodíku, alkylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylskupinu se 3 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylalkylskupinu se 3 až 6 atomy uhlíku v cykloalkylové a 1 až 5 atomy uhlíku v alkylové části, hydroxyskupinu nebo alkoxyskupinu s 1 až 8 atomy uhlíku; a

R₉ představuje atom vodíku, cykloalkylskupinu se 3 až atomy uhlíku, cykloalkylalkylskupinu se 3 až 8 atomy uhlíku v cykloalkylové a 1 až 5 atomy uhlíku v alkylové části, cykloalkenylskupinu se 4 až 7 atomy uhlíku, cykloalkylalkoxyskupinu se 3 až 7 v cykloalkylové a 1 až 5 atomy uhlíku v alkoxylové části, cykloalkyloxyskupinu se 3 až 7 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, methylen-perfluorovanou alkylskupinu s 1 až 8 atomy uhlíku v alkylové části, fenylskupinu nebo heterocyklickou skupinu, zvolenou ze souboru zahrnujícího pyridylskupinu, furylskupinu, pyrrolylskupinu, pyrrolidinylskupinu, oxazolylskupinu, thiazolylskupinu, imidazolylskupinu, pyrazolylskupinu, pyrazolinylskupinu, pyrazolidinylskupinu, isoxazolylskupinu, isothiazolylskupinu, pyranylskupinu, pyridinyl, piperidylskupinu, morfolinylskupinu, pyridazinylskupinu, pyrimidinylskupinu, pyrazinylskupinu, piperazinylskupinu,

1,3,5-triazinylskupinu, benzothiazolylskupinu, benzoxazolylskupinu, benzimidazolylskupinu, thiochromanylskupinu a tetrahydrobenzothiazolylskupinu, přičemž tato heterocyklická skupina je připojena prostřednictvím vazby uhlík-dusík; nebo ·· ·· • · · · • · · • · · · « • · • · · · · ·

- 99 • · * • *

• · · · · ♦

R_g představuje alkylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkoxyskupinu s 1 až 8 atomy uhlíku, z nichž každá je popřípadě substituována jedním substituentem zvoleným ze souboru zahrnujícího cykloalken-l-ylskupinu se 4 až 7 atomy uhlíku, fenylskupinu, thienylskupinu, pyridylskupinu, furylskupinu, pyrrolylskupinu, pyrrolidinylskupinu, oxazolylskupinu, thiazolylskupinu, imidazolylskupinu, pyrazolylskupinu, pyrazolinylskupinu, pyrazolidinylskupinu, isoxazolylskupinu, isothiazolylskupinu, pyranylskupinu, piperidylskupinu, morfolinylskupinu, thiomorfolinylskupinu, 1-oxothiomorfolinylskupinu, 1,1-dioxothiomorfolinylskupinu, pyridazinylskupinu, pyrimidinylskupinu, pyrazinylskupinu, piperazinylskupinu, 1,3,5triazinylskupinu nebo indolylskupinu a každá z výše uvedených alkylskupin s 1 až 6 atomy uhlíku a alkoxyskupin s 1 až 8 atomy uhlíku je popřípadě přídavně substituována jedním nebo dvěma substituenty nezávisle zvolenými ze souboru zahrnujícího atom halogenu, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, aminoskupinu, mono-N- a di-N,Nalkylaminoskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, kyanoskupinu, karboxyskupinu a alkoxykarbonylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části;

a přičemž každý z kruhů v R_g je na uhlíku popřípadě substituován jedním nebo dvěma substituenty nezávisle zvolenými ze souboru zahrnujícího atom halogenu, alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, hydroxyalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, aminoalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, mono-N- a diΝ,Ν-alkylaminoalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku * · • ··· · ; , . · .

.« ··· ··· ·· ····

- 100 v každé z alkylových části, alkoxyalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové a 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, aminoskupinu, mono-Na di-N,N-alkylaminoskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, kyanoskupinu, karboxyskupinu, alkoxykarbonylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku v alkoxylové části, karbamoylskupinu, formylskupinu nebo trifluormethylskupinu a každý z kruhů v R_g je popřípadě přídavně substituován jedním nebo dvěma substituenty nezávisle zvolenými ze souboru zahrnujícího alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku a atom halogen;

s tou podmínkou, že v žádném z heterocyklů v R_gnení obsažen kvaternizovaný atom dusíku;

R₁₂ představuje morfolinoskupinu, thiomorfolinoskupinu,

1-oxothiomorfolinoskupinu, 1,1-dioxothiomorfolinoskupinu, thiazolidin-3-ylskupinu, 1-oxothiazoiidin3-ylskupinu, 1,l-dioxothiazolidin-3-ylskupinu, pyrrolidin-l-ylskupinu, piperidin-l-ylskupinu, piperazin-l-ylskupinu, piperazin-4-ylskupinu, azetidin-l-ylskupinu, 1,2-oxazinan-2-ylskupinu, pyrazolidin-l-ylskupinu, isoxazolidin-2-ylskupinu, isothiazolidin-2-ylskupinu, 1,2-oxazetidin-2-ylskupinu, oxazolidin-3-ylskupinu, 3,4-dihydroisochinolin-2-ylskupinu, 1,3-dihydroisoindol-2-ylskupinu, 3,4-dihydro-2H-chinol-l-ylskupinu, 2,3dihydrobenzo[1,4]oxazin-4-ylskupinu, 2,3-dihydrobenzo[l,4]thiazin-4-ylskupinu, 3,4-dihydro-2Hchinoxalin-l-ylskupinu, 3,4-dihydrobenzo[c][1.2] oxazin-l-ylskupinu, 1,4-dihydrobenzo[d][1.2] oxazin-3-ylskupinu, 3,4-dihydrobenzo[e][1.2] oxazin-2-ylskupinu, 3H-benzo[d]isoxazol#4 4944

- 101 2-ylskupinu, 3H-benzo[c]isoxazol-l-yl nebo azepan-l-ylskupinu;

kde každý kruh v R^₂ je popřípadě substituován jedním, dvěma nebo třemi substituenty nezávisle zvolenými ze souboru zahrnujícího atom halogenu, alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, aminoskupinu, mono-N- a di-N,N-alkylaminoskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, formylskupinu, karboxyskupinu, karbamoylskupinu, mono-Na di-N,N-alkylkarbamoylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, alkoxyalkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v první a 1 až 3 atomy uhlíku ve druhé z alkoxylových částí, alkoxykarbonylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku v alkoxylové části, benzyloxykarbonylskupinu, alkoxykarbonylalkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku v alkoxylové a 1 až 5 atomy uhlíku alkylové části, alkoxykarbonylaminoskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části, karboxyalkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku v alkylové části, karbamoylalkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku v alkylové části, mono-N- a di-N,N-alkylkarbamoylalkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, hydroxyalkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové a 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, aminoalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, mono-N- a di-N,N-alkylaminoalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, oxoskupinu, hydroxyiminoskupinu a alkoxyiminoskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, přičemž ne více než dva substituenty jsou zvoleny ze souboru zahrnujícího oxoskupinu, hydroxyiminoskupinu a alkoxyiminoskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku a oxo4

4

44

4 4

4 ·

4 4

44 4444

- 102 skupina, hydroxyiminoskupinu nebo alkoxyiminoskupina s 1 až 6 atomy uhlíku je připojena k nearomatickému atomu uhlíku; a kde každý z kruhů v R₁₂ je popřípadě přídavně substituován jedním nebo dvěma substituenty nezávisle zvolenými ze souboru zahrnujícího alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku a atom halogenu;

s tou podmínkou, že když Rg představuje alkoxykarbonylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku v alkoxylové části nebo benzyloxykarbonylskupinu, potom R₃ představuje skupinu 5-halogen, 5-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku nebo 5-kyano a R₄ představuje (fenyl)(hydroxy)alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, (fenyl)(alkoxy)alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové a 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, hydroxymethylskupinu nebo Ar-alkylskupinu s 1 až 2 atomy uhlíku v alkylové části, kde Ar představuje thien-2- nebo -3-ylskupinu, fur-2- nebo -3-ylskupinu nebo fenylskupinu, přičemž uvedený zbytek Ar je popřípadě substituován jedním nebo dvěma substituenty nezávisle zvolenými ze souboru zahrnujícího atomy halogenu; s tím, že když R₄ představuje benzylskupinu a R₅ představuje methylskupinu, potom R₁₂nepředstavuje 4-hydroxypiperidin-l-ylskupinu, nebo když R₄představuje benzylskupinu a R₅ představuje methylskupinu, potom Rg nepředstavuje skupinu vzorce C(O)N(CH₃)₂;

s tou podmínkou, že když R.^ a R₁₀ a R_i;l představují atomy vodíku, potom R₄ nepředstavuje imidazol-4-ylmethylskupinu, 2-fenylethylskupinu nebo 2-hydroxy-2-fenylethylskupinu;

s tou podmínkou, že když oba z R₈ a R_g představují n-pentyskupiny, potom žádná ze skupin R^^ nepředstavuje 5-chlor,

5-brom, 5-kyano, 5-alkyl s 1 až 5 atomy uhlíku, 5-alkoxy s 1 až 5 atomy uhlíku nebo trifluormethylskupinu;

• · • ·· · ··

- 103 •4 ···· s tou podmínkou, že když R₁₂ představuje 3,4-dihydroisochinol-2-ylskupinu, potom tato 3,4-dihydroisochinol-2-ylskupina není substituována karboxyalkylskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části;

s tou podmínkou, že když R_g představuje atom vodíku a R_gpředstavuje alkylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, potom R_gnení na atomu uhlíku, který je připojen k atomu dusíku skupiny NHR_g, substituován karboxyskupinou nebo alkoxykarbonylskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části; a s tou podmínkou, že když R_g představuje karboxyskupinu a každý z R·^, R₁₀, Rj^ a R₅ představuje atom vodíku, potom R₄nepředstavuje benzylskupinu, atom vodíku, (fenyl)(hydroxy)methylskupinu, methylskupinu, ethylskupinu nebo n-propylskupinu;

a jejich farmaceuticky vhodné soli a proléčiva.

Účinná denní dávka kompozic na bázi farmákologické kompozice podle tohoto vynálezu, například v případě kombinací obsahujících inhibitor glykogenfosforylasy podle vynálezu snižujících ischemické poškození, leží v rozmezí od 0,005 do 50 mg/kg, přednostně od 0,01 do 25 mg/kg a nejvýhodněji od 0,1 do 15 mg/kg.

Jako druhé sloučeniny podle tohoto vynálezu je možno použít jakýkoliv inhibitor glykogen fosforylasy. Pod pojmem inhibitor glykogen fosforylasy se rozumí jakákoliv látka nebo činidlo nebo kombinace látek a/nebo činidel snižující, zpomalující nebo eliminující enzymatické působení glykogen fosforylasy. Podle současných poznatků enzymatické působení glykogen fosforylasy spočívá v degradaci glykogenu katalýzou reversibilní reakce makromolekuly glykogenu a ·· • · · ♦ • · · • ··· · • 9 *♦ ► · · ► · « » · · ·· ·»«

- 104 anorganického fosfátu na glukosa-l-fosfát a makromolekulu glykogenu, která je o jeden glukosylový zbytek kratší než původní molekula glykogenu (ve směru glykogenolýzy). Tuto aktivitu je odborník v tomto oboru schopen snadno stanovit za použití standardních zkoušek (například zkoušek popsaných dále). Různé takové sloučeniny jsou uvedeny v následujících zveřejněných mezinárodních patentových přihláškách: PCT přihlášce WO 96/39384 a WO96/39385. Odborníkům v tomto oboru však budou známy i jiné inhibitory glykogen fosforylasy.

Jako druhou sloučeninu podle vynálezu je možno použít jakýkoliv inhibitor sorbitol dehydrogenasy. Takové sloučeniny inhibují tvorbu sorbitol dehydrogenasy. Tuto aktivitu je odborník v tomto oboru schopen snadno stanovit za použití standardních zkoušek (například zkoušek, jaké jsou popsány dále). Odborníkům v tomto oboru budou známy různé sloučeniny vykazující výše uvedenou aktivitu (viz například US patent č. 5 728 704).

Sloučeniny podle tohoto vynálezu farmakologicky napodobují kardioprotektivní účinky ischemického prekondiciování aktivací receptorů adenosinu A-3, a jsou tedy užitečné jako terapeutická nebo profylaktická činidla pro léčení chorob, které jsou vyvolány nebo které se zhoršují ischemií nebo hypoxií nebo ischemií/reperfusí. Jako příklady takových chorob je možno uvést kardiovaskulární choroby (například arteriosklerosu, arytmii (například ischemickou arytmii, arytmii vyvolanou infarktem myokardu, omráčení myokardu, dysfunkci myokardu, arytmii po PTCA nebo thrombolýze atd.), angínu pectoris, hypertrofii srdce, infarkt myokardu, srdeční selhání (například městnavé srdeční selhání, akutní srdeční selhání, hypertrofii srdce atd), restenosu po PTCA, PTCI, šok (například hemoragický šok, endotoxinový šok atd.)), choroby ledvin (například diabetes mellitus, diabetickou nefropatii, ischemické akutní selhání

4·4 • 444 • · 4444 44

- 105 • 4 4 •

4 * ·· 44

4 · * • 4 · · · · 4 4 «44 ·4 4444 ledvin atd.), poruchy orgánů spojené s ischemií nebo ischemickou reperfusí (například poruchy spojené s ischemicku reperfusí srdečního svalu, akutní selhání ledvin nebo choroby indukované chirurgickým zákrokem, jako je transplantační bypass operace koronární artérie (CABG), operace cév, transplantace orgánu, nekardiální operace nebo perkutánní transluminální koronární angioplastika (PTCA)), cerebrovaskulární choroby (například ischemickou mrtvici, hemoragickou mrtvici atd.), cerebroischemické poruchy (například poruchy spojené s mozkovým infarktem, poruchy po mozkové apoplexii, jako její následky, nebo mozkový edém. Sloučeniny podle vynálezu je také možno používat pro ochranu myokardu během transplantačních bypass operací koronárních artérií (CABG), operací cév, nebo perkutánní transluminální koronární angioplastice (PTCA), PTCI, transplantace orgánu nebo nekardiálních operacích.

Přednostně je sloučeniny podle tohoto vynálezu možno používat jako činidla pro ochranu myokardu před, v průběhu nebo po transplantačních bypass operacích koronární artérie (CABG), operacích cév, perkutánní transluminální koronární angioplastice (PTCA), transplantacích orgánů nebo nekardiálních operacích.

Přednostně je sloučeniny podle tohoto vynálezu možno používat jako činidla pro ochranu myokardu u pacientů, u kterých probíhá srdeční (akutní koronární syndromy, například infarkt myokardu nebo nestabilní angína) nebo mozková ischemická příhoda (například mrtvice).

Přednostně je sloučeniny podle tohoto vynálezu možno používat jako činidla pro dlouhodobou ochranu myokardu u pacientu s diagnostikovanou chorobou koronárních artérií (například prodělaný infarkt myokardu nebo nestabilní angína) nebo pacientů ohrožených infarktem myokardu (například ··· · ·· • · · • · »··· ··

- 106 ·* «

* *· ·♦ « · · « · · • · · • · · >· »»»· pacientů starších 65 let a pacientů vykazujících alespoň dva rizikové faktory koronární srdeční choroby).

Sloučeniny podle tohoto vynálezu tedy snižují mortalitu.

Užitečnost sloučenin podle vynálezu jako léčivých látek při léčení chorob u savců (například lidí), které jsou podrobné uvedeny výše, jako je například ochrana myokardu během operace nebo ochrana myokardu u pacientů, u nichž probíhá srdeční nebo mozková ischemická nebo hypoxická příhoda, nebo dlouhodobá kardioprotekce u pacientů s diagnostikovanou koronární srdeční chorobou, nebo pacientů, kteří jsou jí ohroženi, srdeční dysfunkcí nebo omráčením myokardu je možno demonstrovat jako aktivitu při obvyklých předklinických zkouškách kardioprotekce [viz zkouška in vivo viz Klein, H. et al., Circulation 92: 912 až 917 (1995); zkouška na izolovaném srdci viz Scholz, W. et al., Cardiovascular Research 29: 260 až 268 (1995); antiarythmická zkouška viz Yasutake M. et al., Am. J. Physiol., 36: H2430-H2440 (1994); NMR zkouška viz Kolke et al., J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 112: 765 až 775 (1996)] a dalších zkoušek in vitro a in vivo, které jsou popsány dále. Tyto zkoušky také poskytují prostředky, jimiž lze aktivitu sloučenin podle vynálezu porovnat s aktivitami jiných známých sloučenin. Výsledky těchto porovnání jsou užitečné při stanovení úrovní dávek u savců, jako lidí, při léčení takových chorob.

Zkouška s lidským receptorem adenosinu Al a A3

Látky cDNA lidských receptorů adenosinu Aj a A₃ o plné délce subklonované do eukaryontního expresního vektoru pRcCMV (Invitrogen) pocházejí od The Garvan Institute,

4« »* • · · · ♦ · * 4 44» • · 44 ·· ·· ·

· ·

• 4

44»·

- 107 Sydney, Austrálie. Buňky vaječníků čínského křečka (CHO-K1) byly získány ze sbírky American Type Tissue Collection (Rockville, MD, USA). Kultivační média DMEM a DMEM/F12 a fetální telecí sérum byly získány od firmy Gibco-BRL (Grand Island, NY, USA). Agonista receptoru adenosinu A1/A3,

N6-(4-amino-3-[1251]jodbenzyl)adenosin (¹²⁵I-ABA), byl připraven společností New England Nuclear (Boston, MA, USA). Adenosin deaminasa (ADA) byla získána od firmy Boehringer Mannheim (Indianapolis, IN, USA). Inhibitor fosfodiesterasy RO-20-1724 byl získán od firmy Research Biochemicals International (Matick, MA, USA).

Exprese lidských receptorů adenosinu AI a A3

Za účelem stabilní expresní studie receptoru adenosinu Aj a A₃ se expresní plasmidy (20 gg) transfekují do buněk CHO-K1 (A-^) nebo buněk HEK 293s (A₃) pěstovaných v DMEM/F12 (CHO) nebo DMEM (HEK 293s) s 10% fetálním telecím sérem za použití kalciumfosfátového kitu pro transfekci do savčích buněk (5 Prime-3 Prime). Stabilní transfektanty se získají selekcí v úplném médiu obsahujícím 500 μg/ml (CHO) nebo 700 μg/ml (HEK 293s) aktivního neomycinu (G418) a podrobí screeningu na expresi podle vazby [¹²⁵I]-ABA.

Příprava receptorové membrány

Buňky stabilně exprimující lidské receptory Α_χ nebo A₃ se shromáždí pětiminutovou centrifugací při 300 x g. Supernatant se odstraní a buněčná peleta se resuspenduje v buněčném pufru, který obsahuje HEPES (10 mmol/1), síran hořečnatý (5 mmol/1), PMSF (0,1 mmol/1), bacitracin (100 μg/ml), leupeptin (10 μg/ml), DNAsu I (100 μg/ml), ADA (2 U/ml) o pH 7,4. Surové buněčné membrány se získají opakovaným odsátím injekční jehlou 21, shromáždí desetiminutovou ·· v* ♦ » » * • · · < ··· · • · ···· ·· ti ·· · ·*· · »· ·* :* * • « • ·

1· ··<·

- 108 centrifugací při 60 000 x g a skladují v buněčném pufru při -80°C.

Výpočet konstant vazebné aktivity sloučenin

Receptorové membrány se resuspendují v inkubačním pufru, který obsahuje HEPES (10 mmol/1), EDTA (1 mmol/1), síran hořečnatý (5 mmol/1) o pH 7,4. Vazebné reakce (10 až 20 μg membránového proteinu) se provádějí 1 hodinu při teplotě místnosti ve 250 μΐ inkubačního pufru obsahujícího 0,lnM ¹²⁵I-ABA (2200 Ci/mmol) se zvyšující se koncentrací sloučeniny (0,lnM až 30μΜ). Reakce se zastaví rychlou filtrací s ledově chladným PBS přes filtry ze skleněných vláken (předem máčené v 0,6% polyethyleniminu) za použití sklízecího zařízení pro 96 jamek Tomtec (Orange, CT, USA). Filtry se spočítají v kapalinovém scintilačním počítači Wallac Mircobeta (Gaithersberg, MD, USA). Nespecifická vazba se stanoví za přítomnosti 5μΜ I-ABA. Inhibiční konstanty sloučenin (K^) se vypočítají tak, že se vazebná data prostřednictvím nelineární regresní analýzy nejmenších čtverců dosadí do rovnice:

Inhibice (%) = 100/[l+10^C/10^X)^D] kde X = log [koncentrace léčiva]

C (IC_5Q) = log [koncentrace léčiva při 50% inhibici] a D = Hillova směrnice

Při koncentraci radioligandu použité při dané zkoušce (10 x < K_D), ic₅₀ = Ki·

Stanovení agonistické aktivity vůči lidskému receptoru adenosinu A3 • · · · · · · * ·· ··· · · ·· * • · · · · · ···· · • · · · · · · ···· ·· ··· ··· ·· ····

- 109 Aktivita agonisty adenosinu A3 se stanoví prostřednictvím inhibice isoproterenolem stimulovaných hladin cAMP sloučeninou. Buňky HEK293S stabilně transfekované lidskými receptory A3 (výše popsaným způsobem) se promyjí fosfátem pufrovaným solným roztokem (PBS) (bez Ca/Mg) a oddělí za použití l,0mM EDTA/PBS. Buňky se shromáždí pětiminutovou centrifugací při 300 x g a supernatant se odloží. Buněčná peleta se disperguje a resuspenduje v buněčném pufru (DMEM/F12 obsahujícím lOmM HEPES, 20μΜ RO-20-1724 a 1 U/ml ADA). Po preinkubaci buněk (100 000/jamka) po dobu 10 minut při 37°C (1 μΜ isoproterenol, se zvyšujícími se koncentracemi (0,lnM až 300nM) zkoušených sloučenin nebo bez nich), se v inkubaci pokračuje dalších 10 minut. Reakce se zastaví přídavkem 1,0M kyseliny chlorovodíkové, načež se provede desetiminutová centrifugace při 2000 x g. Vzorky supernatantů (10 μΐ) se oddělí a radioimunologickým stanovením (New England Nuclear, Boston, MA, USA) se zjistí hladiny cAMP. Bazální a kontrolní akumulace cAMP stimulovaného isoproterenolem (pmol/ml/100 000 buněk) je běžně 3 (bazální) a 80 (kontrolní). Daty se za použití nelineární regresní analýzy metodou nejmenších čtverců a rovnice cAMP =

100/[l+(10^C/10^X)^D], kde X = log [koncentrace léčiva],

C (IC_5Q) = log [koncentrace léčiva při 50% inhibici] a D = Hillova směrnice, proloží vyhlazená křivka.

Jako základní informaci je třeba uvést, že krátké periody ischemie myokardu po reperfusi koronárních artérií chrání srdce před následnou závažnou ischemií myokardu (Murry et al., Circulation 74: 1124 až 1136, 1986).

Terapeutické účinky sloučenin podle tohoto vynálezu při prevenci poškození srdeční tkáně vyvolaného ischemickým inzultem je možno demonstrovat in vitro podle Tracey et al., Cardiovasc. Res., 33: 410 až 415, 1997, jak je podrobně popsáno dále. Kardioprotekce, kterou indikuje zmenšení • · · · • · »· · ·

- 110 • · · • · ···« infarktu myokardu, lze farmakologicky dosáhnout za použití agonistů receptorů adenosinu v izolovaném retrográdně perfundovaném králičím srdci, jako in vitro modelu ischemického prekondiciování myokardu (Tracey et al., Cardiovasc. Res.,

33: 410 až 415, 1997). In vitro zkouška popsaná dále ukazuje, že zkoušená sloučenina (tj. sloučenina uvedená v patentových nárocích) také může indukovat kardioprotekci, tj. snižovat velikost infarktu myokardu po podání do izolovaného králičího srdce. Účinky zkoušené sloučeniny se porovnají s ischemickým prekondiciováním. Přesná metodologie této zkoušky je popsána dále.

Protokol použitý při následujících zkouškách je popsán v Tracey et al.l, Cardiovasc. Res., 33: 410 až 415, 1997. Samci novozélandského bílého králíka (3 až 4 kg) se anestetizují sodnou solí pentobarbitalu (30 mg/kg, i.v.). Po dosažení hluboké anestezie (zjištěné na základě absence mrkacího reflexu) se zvíře intubuje a ventiluje 100% kyslíkem za použití ventilátoru s pozitivním tlakem. Provede levá throrakotomie, srdce se exponuje a okolo prominující větve levé koronární artérie se volně umístí smyčka (hedvábí 2-0), asi 2/3 vzdálenosti od srdečního hrotu. Srdce se vyjme z hrudi a rychle (<30 s) se umístí do Langendorfova přístroje. Srdce se retrográdně necirkulačně perfunduje modifikovaným Krebsovým roztokem (118,5 mM chlorid sodný, 4,7mM chlorid draselný, l,2mM síran hořečnatý, l,2mM fosforečnan draselný, 24,8mM hydrogenuhličitan sodný, 2,5mM chlorid vápenatý a lOmM glukosa) při konstantním tlaku 10664 Pa a teplotě 37°C. Hodnota pH perfusátu se aerací směsí 95%C>2/5%CO2 udržuje na 7,4 až 7,5. Teplota srdce se úzce reguluje za použití zahřívaných nádrží pro fyziologické roztoky a vodního pláště jak okolo perfusních trubiček, tak srdce. Srdeční frekvence a tlak v levém ventrikulu se stanoví za použití latexového balonu, který se vloží do levého ventrikula a pomocí nerezových trubiček spojí s tla• ·

- 111 koměrem. Intraventrikulární balon se nafoukne tak, aby se dosáhlo systolického tlaku 10 664 až 13 330 Pa a diastolického tlaku < 1333 Pa. Průběžně se také monitoruje srdeční průtok za použití přímé průtokové sondy a normalizuje se na hmotnost srdce.

Srdce se 30 minut nechá ekvilibrovat a v průběhu eklibrace musí stabilní tlak v levém ventrikulu vykazovat parametry spadající do výše uvedeného rozmezí. Pokud kdykoliv před 30minutovým obdobím místní ischemie srdeční frekvence poklesne pod 180 tepů/min, srdce se po zbytek zkoušky stimuluje na frekvenci asi 200 tepů/min. Ischemické prekondiciování se indukuje tak, že se na dobu 5 minut zcela přeruší perfuse srdce (globální ischemie) a poté se v ní pokračuje po dobu asi 10 minut. Místní ischemie se dosáhne tak, že se okolo větve koronární artérie upevní smyčka. Po 30 minutách místní ischemie se smyčka uvolní a srdce se reperfunduje po dobu dalších 120 minut.

Farmakologická kardioprotekce se indukuje 5minutovou infusí zkoušené sloučeniny v předem stanovených koncentracích, která se ukončí 10 minut před 30minutovou místní ischemií. Srdce ošetřená zkoušenými sloučeninami se ischemickému prekondiciování nepodrobí.

Po 120minutové reperfusi se smyčka okolo koronární artérie utáhne a srdce se perfunduje fluorescentními částicemi síranu zinečnato-kademnatého (1 až 10μΜ) (Duke Scientific Corp., Palo Alto, CA, USA), které barví celý myokard s výjimkou plochy ohrožené infarktem (ohrožené oblasti). Srdce se vyjme z Langendorffova přístroje, osuší savým materiálem, zabalí do hliníkové folie a skladuje přes noc při -20°C. Následující den se nařeže na 2mm příčné řezy směrem od hrotu k horní části ventrikul. Řezy se barví 1% trifenyltetrazoliumchloridem (TTC) ve fosfátem pufrovaném • 4

- 112 solném roztoku 20 minut při 37C. Jelikož TTC reaguje s živou tkání (obsahující NAD-dependentní dehydrogenasy), tkáň se tímto barvením rozliší na živou (červená barva) a mrtvou (neobarvená tkáň postižená infarktem). Pro každý řez levého ventrikula se za použití předem kalibrovaného analyzátoru obrazu vypočítá plocha infarktu (nebarvená) a ohrožená plocha (bez fluoreskujících částic). Aby se normalizovalo ischemické poškození z hlediska rozdílů ohrožené plochy mezi srdci, údaje se vyjádří jako poměr plocha infarktu versus ohrožená plocha (%IA/AAR). Všechny údaje se vyjádří jako střední hodnota ± SE a statisticky se porovnají za použití Mann-Whitneyova neparametrického testu s Monferroniho korekcí pro vícečetnou komparaci. Počítá se s hladinou významnosti p < 0,05.

Výsledky výše popsané in vitro zkoušky ukazují, že sloučeniny podle tohoto vynálezu ve srovnání s kontrolní skupinou indukují významnou kardioprotekci.

Terapeutické účinky sloučenin podle vynálezu při prevenci poškození srdeční tkáně vyvolaného ischemickým inzultem je také možno demonstrovat in vivo za použití postupu popsaného v Liu et al., Circulation, sv. 84: 350 až 356, 1991, který je v konkrétnějším provedení popsán dále. Při této in vivo zkoušce se zkoumá kardioprotekce dosažená za použití zkoušené sloučeniny vzhledem ke kontrolní skupině, které se podá pouze vehikulum (solný roztok). Kardioprotekci, která se projeví jako zmenšení infarktu myokardu, lze u intaktních anestetizovaných králíků, jako in vivo modelu ischemického prekondicionování myokardu, farmakologicky indukovat intravenosním podáváním agonistů receptoru adenosinu (Liu et al., Circulation 84: 350 až 356, 1991). Při této in vivo zkoušce se zkoumá, zda sloučeniny mohou farmakologicky indukovat kardioprotekci, tj. zmenšit velikost infarktu myokardu, při parenterálním • ·

113 podávání intaktním anestetizovaným králíkům. Účinky sloučenin podle vynálezu lze srovnat s ichemickým prekondicionováním. Metodologie je uvedena dále.

Chirurgický výkon

Samci novozélandského králíka (3 až 4 kg) se anestetizují podáním sodné soli pentobarbitalu ve formě bolu (30 mg/kg i.v.) a dále infuze (100 mg/kg/h, i.v.), kterou se udržuje hloubka anestezie pro chirurgický výkon. Cervikálním řezem vedeným ventrální střední čárou se provede tracheotomie. Králíci se ventilují 100% kyslíkem za použití ventilátoru s pozitivním tlakem. Ventilace se nastaví tak, aby se hodnoty pH a PCO₂ udržely ve fyziologickém rozmezí. Za použití vyhřívací podušky se udržuje stálá tělesná teplota 38°C. Katétry se zavedou do levé jugulární vény (podávání léčiva) a do levé karotidy (měření krevního tlaku). Srdce se exponuje levou thorakotomií a okolo prominující levé větve levé koronární artérie se asi 2/3 vzdálenosti od srdečního hrotu umístí smyčka (hedvábí 00). Utažením smyčky se indukuje ischemie a její uvolnění umožní reperfusi ischemické oblasti. Ischemie myokardu se projeví jako místní cyanosa a reperfuse se projeví jak reaktivní hyperémie.

Protokol

Zkouška se zahájí poté, co se jsou arteriální tlak a srdeční frekvence alespoň 120 minut stabilizované. Ischemické prekondicionování se indukuje Sminutovou okluzí koronární artérie a následnou lOminutovou reperfusi. Farmakologické prekondicionování se indukuje infusí zkoušené sloučeniny, například po dobu 5 minut, s lOminutovou prodlevou před další intervencí. Po ischemickém prekondicionování, farmakologickém prekondicionování nebo nulovém kondicionování (kontrolní vehikulum) se artérie na 30 minut okluduje a poté ••44 ··

114 reperfunduje po dobu 2 hodin, čímž se indukuje infarkt myokardu.

Po 2hodinové reperfusí se srdeční orgány rychle vyjmou, umístí do Langendorffova přístroje a 1 minutu perfundují normálním solným roztokem zahřátým na tělesnou teplotu (38°C). Hedvábí použité jako smyčka se pevně utáhne, čímž se vyvolá reokluze artérie. Spolu s perfusátem se infusí podá 0,5% suspenze fluorescentních částic síranu zinečnato-kademnatého (1 až 10 μκι) (Duke Scientific Corp. , Palo Alto, CA, USA), které barví celý myokard s výjimkou plochy ohrožené infarktem (nefluoreskující ventrikulum). Srdce se vyjmou z přístroje, osuší savým materiálem, zabalí do hliníkové folie a skladují přes noc při -20°C. Následující den se venrikula nařežou na 2mm příčné řezy směrem od hrotu k bázi. Řezy se barví 1% trifenyltetrazoliumchloridem (TTC) ve fosfátem pufrovaném solném roztoku 20 minut při 38°C. Jelikož TTC reaguje s živou tkání (obsahující NAD-dependentní dehydrogenasy), tato barvení rozliší živou (červená barva) a mrtvou (neobarvená tkáň postižená infarktem) tkáň. Pro každý řez se za použití předem kalibrovaného analyzátoru obrazu vypočítá plocha infarktu (nebarvená) a ohrožená plocha (bez fluoreskujících částic). Aby se normalizovalo ischemické poškození z hlediska rozdílů ohrožené plochy mezi srdečními orgány, údaje se vyjádří jako poměr plocha infarktu versus ohrožená plocha (%IA/AAR). Všechny údaje se vyjádří jako střední hodnota ± SEM a statisticky se porovnají za použití jednofaktorové analýzy ANOVA nebo Mann-Whitneyova neparametrického testu. Počítá se s hladinou významnosti p < 0,05.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu je možno zkoušet na užitečnost při snižování nebo prevenci ischemického nebo hypoxického poškození nesrdečních tkání, například mozku nebo jater, za použití postupů popsaných ve vědecké litera• · · · 9 9 99 · · • · · 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 · · · * • · · · · · · 9 9 · · • · · · · · ·

9999 ·9 999 999 99 9999

- 115 túře. Sloučeniny podle vynálezu se při takových zkouškách podávají přednostním způsobem, za použití přednostního vehikula a v přednostní dobu, před ischemickou episodou, během ischemické nebo hypoxické episody (období reperfuse) nebo v průběhu kteréhokoliv z dále uvedených stádií zkoušky.

Užitečnost sloučenin podle vynálezu při snižování ischemického nebo hypoxického poškození je možno u savců demonstrovat například za použití postupu popsaného v Park et al. (Ann. Neurol. 1988, 24: 543 až 551). Při tomto postupu se dospělí samci potkana Sprague Dawley anestetizují 2% halothanem a poté se ventilují směsi oxidu dusného a kyslíku (70 % : 30 %) obsahující 0,5 až 1 % halothanu. Poté se provede tracheostomie. Zdvihový objem ventilátoru se nastaví tak, aby se arteriální tlak oxidu uhličitého udržoval asi na 4 kPa a aby se zachovalo odpovídající arteriální okysličení (PaO₂ > 12 kPa). Tělesnou teplotu je možno monitorovat rektálním teploměrem a normální tělesná teplota zvířat se v případě nutnosti udržuje za použití vnějšího zdroje tepla. Zvířata se poté podrobí subtemporální kraniektomii, kterou se pod spuštěným mikroskopem exponuje hlavní kmen levé střední mozkové artérie (MCA). Exponovaná artérie se okluduje mikrobipolární koagulací, čímž dojde ke vzniku velkých ischemických lézí v mozkové kůře a bazálním gangliu. Po 3 hodinách okluze MCA se potkani hluboce anestetizují 2% halothanem a za účelem infusního podání heparinizovaného solného roztoku do levého ventrikula se u nich provede se thorakotomie. Vytékající kapalina se shromažďuje pomocí řezu vedeného pravým atriem. Po promytí solným roztokem se perfuse provádí za použití asi 200 ml roztoku 40% formamidu, ledové kyseliny octové a absolutního methanolu (FAM, v poměru 1:1:8 objemově). Poté se zvířata dekapitují a hlava se skladuje ve fixativu po dobu 24 hodin. Mozek se vyjme, oddělí, uloží do parafinového vosku a nařeže (asi 100 0,2mm řezů/mozek). Řezy se barví hematoxylin-eosinem

- 116 nebo kombinací violeti Cresyl a modři Luxol^^R^ a podrobí mikroskopickému zkoumání za účelem identifikac a kvantifikace ischemického poškození za použití předem kalibrovaného analyzátoru obrazu. Objem a plocha ischemie se vyjádří v absolutních jednotkách (mm³ a mm²) a jako procentuální podíl celkové zkoumané oblasti. Účinek sloučenin, kompozic a způsobů podle tohoto vynálezu při snižování ischemického poškození mozku indukovaného okluzí MCA se zaznamená na základě zmenšení plochy nebo objemu (relativního nebo absolutního) ischemického poškození na řezech z mozku potkanů z ošetřené skupiny ve srovnání s řezy z mozků potkanů z kontrolní skupiny, jimž bylo podáno placebo.

Pro demonstraci užitečnosti kompozic a způsobů podle vynálezu při snížení ischemického poškození mozku je alternativně možno použít například postupů popsaných v Nakayama et al., Neurology 1988, 38: 1667 až 1673,

Memezawa et al., Stroke 1992, 23: 552 až 559, Folbergrova et al., Proč. Nati. Acad. Sci. 1995, 92: 5057 až 5059 a Gotti et al., Brain Res. 1990, 522: 290 až 307.

Užitečnost kompozic a způsobů podle vynálezu při snižování ischemického poškození jater u savců je možno demonstrovat například za použití postupu popsaného v Yokoyama et al., Am. J. Physiol. 1990, 258: G564 až G570. Stručně lze tento postup popsat takto: Dospělí samci potkana Sprague Dawley se nalačno anestetizují sodnou solí pentobarbitalu (40 mg/kg i.p.). Poté se zvířata tracheotomizují a mechanicky ventilují vzduchem z místnosti. Játra se vyjmou a uchovávají v komoře s řízeným prostředím při konstantní teplotě 37°C. Následně se játra promyjí portální vénou za konstantního tlaku 147 Pa modifikovaným Krebsovým-Henseleitovým pufrem bez hemoglobinu (118mM chlorid sodný, 4,7mM chlorid draselný, 27mM hydrogenuhličitan sodný, 2,5mM chlorid vápenatý, l,2mM síran hořečnatý, l,2mM dihydrogen• 9

- 117 fosforečnan draselný, 0,05mM EDTA a llmM glukosa s přídavkem 300 U heparinu). Hodnota pH perfusátu se udržuje na 7,4 tak, že se pufr aeruje směsí kyslíku a oxidu uhličitého v poměru 95 : 5. Každá játra se promývají jednocestným způsobem rychlostí 20 ml/min po dobu 30 minut za účelem promytí a ekvilibrace (preischemické období), poté po dvouhodinové období celkové ischemie a po další dvouhodinové období reperfuse za podmínek jaké jsou popsány pro preischemické období. Během preischemického období, bezprostředně po oklusivním ischemickém období a každých 30 minut dvouhodinového reperfušního období se shromáždí alikvoty (20 ml) perfusátu. Vzorky perfusátu se zkoušejí na přítomnost hepatocelulárních enzymů, například aspartát aminotransferasu (AST), alanin aminotransferasu (ALT) a laktát dehydrogenasu (LDH). Tyto vzorky se odebírají, aby kvantitativně reflektovaly stupeň ischemického poškození tkáně jater během postupu. Aktivitu AST, ALT a LDH v perfusátu je možno stanovit několika postupy, například reflektometrickým postupem za použití automatického analyzátoru Kodak Ektachem 500 (viz Nakano et al., Hepatology 1995, 22: 539 až 545). Účinek kompozic a způsobů podle vynálezu při snižování ischemického poškození jater indukovaného oklusí se zaznamenává na základě snížení uvolňování hepatocelulárních enzymů bezprostředně po oklusivním období a/nebo během postischemického-reperfusního období v perfundovaných játrech u potkanů z léčené skupiny ve srovnání s perfundovanými játry potkanů z kontrolní skupiny ošetřované placebem.

Další postupy a parametry, kterých je možno alternativně využít pro demonstraci účinku kompozic a způsobů podle vynálezu při snižování ischemického poškození jater je například možno nalézt v Nakano et al., Hepatology 1995, 22: 539 až 545.

· • 4 ·· • 4 · • « · • · · • · 4

9· 44··

- 118

Měření inhibiční aktivity vůči lidskému NHE-1

Metodologie měření aktivity lidského NHE-1 a účinnosti inhibitoru je založena na postupu popsaném ve Watson et al., Am. J. Physiol., 24: G229 až G238, 1991, při němž se měří obnovení intracelulárního pH mediované NHE po intracelulárním okyselení. Postupuje se tedy takto: fibroblasty stabilně exprimující lidský NHE-1 (Counillon, L. et al., Mol. Pharmacol., 44: 1041 až 1045, 1993) se navzorkují na 96jamkové plotny potažené kolagenem (50 000/jamka) a v růstovém médiu (DMEM s vysokou glukosou, 10% fetální hovězí sérum, 50 u/ml penicilín a streptomycin) se nechají růst až do konfluence. Plotny s konfluentním nárůstem se 30 minut inkubují při 37°C spolu s fluorescenční sondou citlivou na pH BCECF (5μΜ, Molecular Probes, Eugene, OR,

USA). Buňky se zavedenou BCECF se 30 minut inkubují při 37°C v kyselinovém zaváděcím médiu (70mM chlorid cholinu, 50mM chlorid amonný, 5mM chlorid draselný, lmM chlorid hořečnatý, l,8mM chlorid vápenatý, 5mM glukosa, lOmM HEPES, pH 7,5) a umístí do snímacího zařízení Fluorescent Imaging Plate Reader (Molecular Devices, CA, USA). Fluorescence BCECF se monitoruje za použití excitační vlnové délky 485 nm a emisní vlnové délky 525 nM. Intracelulární okyselení se vyvolá rychlým nahrazením kyselinového zaváděcího média izolačním médiem (120mM chlorid sodný, 5mM chlorid draselný, lmM chlorid hořečnatý, l,8mM chlorid vápenatý, 5mM glukosa, lOmM HEPES, pH 7,5) ± zkoušená sloučenina. Obnovení intracelulárního pH mediované NHE se monitoruje jako následné zvýšení BCECF fluorescence v závislosti na čase. Účinnost inhibitorů lidského NHE-1 se vypočítá jako koncentrace, která snižuje obnovení intracelulárního pH o 50 % (IC₅₀). Za těchto podmínek vykazují referenční inhibitory NHE, amilorid a NOE-642, IC_5Q hodnoty pro lidský NHE-1 50μΜ a 0,5μΜ (v uvedeném pořadí).

«4 · · ·· ·4 • «« · · · · · · · · • · 4 4 · 44 · *44· 4 4 4 4 4 4 • 4 4 4 4 4 4

4444 *4 444 4*4 ·· 4444

- 119 Zkouška inhibiční účinnosti na aldosa reduktasu

U samců potkana Sprague-Dawley se i.v. injekčním podáním streptozocinu v dávce 55 mg/kg v citrátovém pufru o pH 4,5 vyvolá diabetes. Potkani jsou krmeni ad libitum za řízených chovných, teplotních a světelných podmínek. Po 5 týdnech diabetes se potkani anestetizují předávkováním pentobarbitalem, tkáně se rychle odeberou a analyzují na sorbitol a fruktosu.

Hladiny sorbitolu se analyzují postupem popsaným v Donald M. Eades et al., Rapid Analysis of Sorbitol, Galactitol, Mannitol and Myoinositol Mixtures From Biological Sources, Journal of Chromátography, 490, 1 až 8, 1989.

Fruktosa se stanoví enzymaticky za použití modifikovaného postupu popsaného v Ameyama, Methods in Enzymology, 89: 20 až 29, 1982, přičemž se ferrikyanid. nahradí resazurinem, barvivém, které se redukuje na vysoce fluorescentní resorufin. Množství resorufinové fluorescence je ve stechiometrickém poměru k množství fruktosy oxidované fruktosa dehydrogenasou. Zkušební směs obsahuje 0,1 ml neutralizovaného extraktu z nervů, získaného za použití 6% kyseliny chloristé, v konečném objemu 1,5 ml. Po 60minutové inkubaci při teplotě místnosti v uzavřeném prostoru se stanoví fluorescence vzorku při excitaci 560 nm, emisi 580 nm s 5mm štěrbinami ve fluorescenčním spektrometru Perkin-Elmer model 650-40. Koncentrace fruktosy se vypočítá porovnáním se sérií známých fruktosových standardů.

Měření aktivity SDH

Tyto zkoušky se provádějí na samcích potkana Sprague -Dawley o hmotnosti 350 až 400 g. U některých potkanů se φφ • φ φφ φ φ φ φ φφφφ φ φ φφ φφ φφ φ φ • φ · · φ φφφφ φ φ φ φ φφφ φφφ φφ φφφφ

- 120 injekcí streptozocinu do ocasní vény (85 mg/kg) vyvolá diabetes. Po 24 hodinách po injekci se čtyřem skupinám diabetických potkanů perorálně žaludeční sondou podá jediná dávka zkoušené sloučeniny (0,001 až 100 mg/kg). Po 4 až 6 hodinách po podání se zvířata usmrtí a shromáždí se jejich krev a sciatické nervy. Tkáně a buňky se extrahují 6% kyselinou chloristou.

Sorbitol v erythrocytech a nervech se měří modifikovaným postupem popsaným v R. S. Clements et al., Science, 166: 1007 až 1008, 1969. Alikvoty tkáňových extraktů se přidají do zkušebního systému s následujícími koncentracemi reagentů: 0,033M glycin, pH 9,4, 800mM β-nikotinadenindinukleotid a 4 jednotky/ml sorbitol dehydrogenasa. Po 30minutové inkubaci při teplotě místnosti se za použití fluorescenčního spektrofotometru s excitací při 366 nm a emisí při 452 nm stanoví fluorescence vzorku. Po odečtení odpovídajících hodnot naměřených při slepém pokusu se na základě lineární regrese sorbitolových standardů podrobených stejnému postupu jako tkáňové extrakty, stanoví množství sorbitolu v každém vzorku.

Fruktosa se stanoví enzymaticky za použití modifikovaného postupu popsaného v Ameyama, Methods in Enzymology, 89: 20 až 25, 1982, přičemž se ferrikyanid. nahradí resazurinem. Alikvoty tkáňových extraktů se přidají do zkušebního systému, který obsahuje (konečné koncentrace): 1,2M kyselinu citrónovou, pH 4,5, 13mM resazurin, 3,3 jednotek/ml fruktosa dehydrogenasu a 0,068% Triton X-100. Po 60minutové inkubaci při teplotě místnosti se za použití fluorescenčního spektrofotometru s excitací při 560 nm a emisí při 580 nm stanoví fluorescence vzorku. Po odečtení odpovídajících hodnot naměřených při slepém pokusu se na základě lineární regrese fruktosových standardů podrobených »9 9 9

9 9

9 9999 «· 4» ·

9999 99 • 99 9 • 9999 9 • 9 9 ···· ·· · * - 121 stejnému postupu jako tkáňové extrakty, stanoví množství fruktosy v každém vzorku.

SDH aktivita se měří modifikovaným postupem popsaným v U. Gerlach, Methodology of Enzymatic Analyses, ed. H. U. Bergmeyer, 3, 112 až 117 (1983). Alikvoty séra nebo moči se přidají do zkušebního systému, který obsahuje (konečné koncentrace): 0,1M pufr obsahující fosforečnan draselný, pH 7,4, 5mM NAD, 20mM sorbitol a 0,7 jednotek/ml sorbitol dehydrogenasa. Po 10 minutové inkubaci při teplotě místnosti se při 340 nm stanoví průměrná změna absorbance vzorku. SDH aktivita se vyjádří jako miliOD₃₄₀ jednotek/min (OD₃₄₀ = optická hustota při 340 nm).

Zkouška inhibiční účinnosti na glykogenfosforylasu

Dále popsanými postupy je možno připravit tři různé purifikované isoenzymy glykogen fosforylasy (GP), v nichž je glykogenfosforylasa v aktivovaném a stavu. V dalším popisu jsou tyto enzymy označeny jako glykogen fosforylasa a nebo pod zkratkou GPa), konkrétně glykogen fosforylasu a z lidských jater (HLGPa), glykogen fosforylasu a z lidských svalů (HMGPa) a glykogen fosforylasu a z lidského mozku (HBGPa).

Exprese a fermentace

HLGP a HMGP cDNA se exprimují z plasmidu pKK233-2 (Pharmacia Biotech. Inc. Piscataway, New Jersey, USA) v E. coli kmene XL-1 Blue (Stratagene Cloning Systems, LaJolla, Kalifornie, USA). Tímto kmenem se inokuluje LB médium (které se skládá z 10 g tryptonu, 5 g kvasinkového extraktu, 5 g chloridu sodného a 1 ml 1M hydroxidu sodného, vztaženo na 1 litr média) s přísadou 100 mg/litr ampicilinu, 100 mg/litr pyridoxinu a 600 mg/litr chloridu manganatého. Buňky se nechají růst při 37°C do optické density OD₅₅₀ = 1,0. Potom se ·* * • « > » • · * • *·· * • 9 «Η» ·» «« ♦« • · *

9 * • · · « · · «· ····

- 122 buňky indukují lmM isopropyl-l-thio-p-D-galaktosidem (IPTG). Tři hodiny po indukci se buňky sklidí centrifugací a buněčná peleta se zmrazí při -70°C. V tomto stavu se skladuje až do následné purifikace.

HBGP cDNA lze exprimovat několika postupy, například postupem popsaným v Crerar et al., J. Biol. Chem. 270: 13748 až 13756. Postup pro expresi HBGP popsaný v Crerar et al., J. Biol. Chem. 270: 13748 až 13756 je následující: HBGP cDNA je možno exprimovat z plasmidu pTACTAC v E. coli kmene 25A6. Tímto kmenem se inokuluje LB médium (které se skládá z 10 g tryptonu, 5 g kvasinkového extraktu, 5 g chloridu sodného a 1 ml 1M hydroxidu sodného, vztaženo na 1 litr média) s přísadou 50 mg/litr ampicilinu. Buňky se nechají růst přes noc a poté resuspendují v čerstvém LB médiu s přísadou 50 mg/litr ampicilinu. Buněčnou suspenzí se zaočkuje 40násobný objem média LB/amp s obsahem 250μΜ isopropyl-l-thio-p-D-galaktosidu (IPTG), 0,5mM pyridoxinu a 3mM chloridu hořečnatého. Buňky se 48 až 50 hodin nechají růst při 22°C a poté je lze sklidit centrifugací. Buněčná peleta se zmrazí při -70°C a v tomto stavu skladuje až do purifikace.

HLGP cDNA se exprimuje z plasmidu pBlue Bac III (Invitrogen Corp., San Diego, CA, USA), který je kotransfekován lineární virovou DNA BaculoGold (Pharmingen, San Diego, CA, USA) do buněk Sf9. Rekombinantní virus se poté purifikuje přes plaky. Buňky Sf9 pěstované v médiu bez séra se za účelem produkce proteinu infikují při multiplicitě infekce (moi) 0,5 a densitě buněk 2 x 10⁶ buněk/ml. Po 72 hodinovém růstu při 27°C se buňky centrifugují, buněčné pelety se zmrazí na -70'C a při této teplotě skladují až do purifikace.

···· ··· ·

123

Purifikace glykogen fosforylasy exprimované v E. coli

Buňky E. coli z pelet popsaných výše se resuspendují ve 25mM β-glycerofosfátu (pH 7,0) s přísadou DTT (0,2mM), chloridu hořečnatého (lmM) a následujících inhibitorů proteasy:

pepstatin A leupeptin fenylmethylsulfonylfluorid (PMSF)

EDTA

0,7 pg/ml 0,5 μg/ml

0,2mM 0,5mM

Provede se lyže buňek předběžným zpracováním 200 μg/ml lysozymu a 3 μg/ml DNAasy s následným zpracováním ultrazvukem na ledu (vždy 5 x 1,5 minuty za použití 250ml várky) v ultrazvukovém zařízení pro rozbíjení buněk Branson Model 450 (Branson Sonic Power Co., Danbury, CT, USA). Lyzáty buněk E. coli se vyčeří centrifugací při 35 000 x g po dobu 1 hodiny a potom se přefiltrují přes filtry s průměrem otvorů 0,45 μπι. GP v rozpustné frakci lyzátu (odhadem se jedná o množství pod 1 % celkového proteinu) se purifikuje monitorováním enzymatické aktivity (jak je to popsáno v části Zkoušení aktivity GPa, uvedené dále, ve vzorcích získaných sérií chromatografických stupňů, která je podrobně popsána dále.

Imobilizovaná kovová afinitní chromatografie (IMAC)

Tento stupeň je založen na metodě Luonga et al.

(Luong et al., Journal of Chromatography (1992) 584, 77 až 84). 500 ml přefiltrované rozpustné frakce buněčného lyzátu (připravené asi ze 160 g až 250 g původní buněčné pelety) se nanese na 130ml sloupec IMAC Chelating-Sepharose (Pharmacia LKB Biotechnology, Piscataway, New Jersey, USA), který byl předběžně upraven ekvilibračním pufrem o pH 7 s obsahem • · * · • · · · · ·

124 chloridu měďnatého (50mM), β-glycerofosfátu (25mM), chloridu sodného (250mM) a imidazolu (lmM). Sloupec se promývá ekvilibračním pufrem tak dlouho, dokud se hodnota A₂₈₀nevrátí na základní linii. Potom se vzorek eluuje ze sloupce stejným pufrem, který však obsahuje imidazol v lOOmM koncentraci, aby se odstranil vázaný GP a jiné vázané proteiny. Frakce obsahující aktivitu GP se shromáždí (přibližně 600 ml) a přidá se k ní ethylendiamintetraoctová kyselina (EDTA) do 0,3mM koncentrace, DL-dithiothreitol (DTT) do 0,2mM koncentrace, fenylmethylsulfonylfluorid (PMSF) do 0,2mM koncentrace, leupeptin do 0,5 gg/ml a pepstatin A do 0,7 gg/ml. Spojená GP frakce se odsolí na sloupci Sephadex G-25 (Sigma Chemical Company, St.Louis, Missouri, USA) ekvilibrovaném pufrem A (pufr A: 25mM Tris-HCl (pH 7,3),

3mM DTT), aby se odstranil imidazol. Takto zpracovaná frakce se až do provedení druhého chromatografického stupně skladuje na ledu.

Chromatografie na 5'-AMP-Sepharose

Odsolený shromážděný vzorek GP (přibližně 600 ml) se potom smísí se 70 ml 5’-AMP Sepharose (Pharmacia LKB Biotechnology, Piscataway, New Jersey, USA), která byla ekvilibrována s pufrem A (viz výše). Směs se 1 hodinu jemně míchá při 22C a potom se uloží do kolony. Kolona se promývá pufrem A tak dlouho, dokud se hodnota Α₂θθ nevrátí na základní linii. GP a jiné proteiny se ze sloupce eluují pufrem B (pufr B: 25mM Tris-HCl, 0,2mM DTT a lOmM adenosin-5'-monofosfát (AMP), pH 7,3). Frakce obsahující GP se spojí po jejich identifikaci stanovením aktivity enzymu (viz dále) a vizualizuje se M, přibližně 97kDa GP proteinový pás elektroforézou na polyakrylamidovém gelu s natriumdodecylsulfátem (SDS-PAGE) a následným obarvením stříbrem (2D-silver Stain II Daiichi Kit, Daiichi Pure Chemicals Company, Ltd., Tokyo, Japonsko a GP se shromáždí. Shromáž·· · · • · • · · • · • * · · · ··· ···· ·· ··· ··· ·· ····

- 125 děný GP se dialyzuje do pufru C (pufr C: 25mM β-glycerofosfát, 0,2mM DTT, 0,3mM EDTA, 200mM chlorid sodný, pH 7,0) a potom skladuje na ledu až do následujícího použití.

Před použitím se GP enzym převede z neaktivní formy exprimované v E. coli kmene XL-1 Blue (označené GPb) (Stratagene Cloning Systems, La Jolla, Kalifornie, USA) na aktivní formu (označenou GPa) postupem popsaným v části (A) aktivace GP, která je uvedena dále.

Purifikace glykogen fosforylasy exprimované v buňkách Sf9

Buňky Sf9 z pelet popsaných výše se resuspendují ve 25mM β-glycerofosfátu (pH 7,0) s přísadou DTT (0,2mM), chloridu hořečnatého (lmM) a následujících inhibitorů proteasy:

pepstatin A 0,7 μg/ml leupeptin 0,5 μg/ml fenylmethylsulfonylfluorid (PMSF) 0,2mM

EDTA 0,5mM

Provede se lyže buňek předběžným zpracováním za použití 3 μg/ml DNAasy s následným zpracováním ultrazvukem (3x1 min na ledu) po dávkách za použití ultrazvukového zařízení pro rozbíjení buněk Branson Model 450 (Branson Sonic Power Co., Danbury, CT, USA). Lyzáty buněk Sf9 se vyčeří centrifugací při 35 000 x g po dobu 1 hodiny a potom se přefiltrují přes filtry s průměrem otvorů 0,45 μιη. GP v rozpustné frakci lyzátu (odhadem se jedná o množství 1,5 % celkového proteinu) se purifikuje monitorováním enzymatické aktivity (jak je to popsáno v části Zkoušení aktivity GPa uvedené dále) ve vzorcích získaných sérií chromatografických stupňů, která je podrobně popsána dále.

* ·

- 126 Imobilizovaná kovová afinitní chromatografie (IMAC)

Imobilizovaná kovová afinitní chromatografie se provádí způsobem popsaným výše. Shromážděná odsolená GP se až do dalšího zpracování skladuje na ledu.

Aktivace GP:

Před další chromatografií se frakce inaktivního enzymu převede z inaktivní formy, v níž je exprimován buňkami Sf9 (tato forma se označuje zkratkou GPb) na aktivní formu (tato forma se označuje zkratkou GPa) postupem popsaným dále v části (A) nazvané Aktivace GP.

Chromatografie na anexu

Aktivace IMAC purifikované GPb na GPa se provádí reakcí s imobilizovanou fosforylasa kinasou. Shromážděné frakce GPa se dialyzují proti 25mM Tris HC1, pH 7,5, s obsahem 0,5mM DTT, 0,2mM EDTA, l,OmM fenylmethylsulfony1fluoridu (PMSF), 1,0 μg/ml leupeptinu a 1,0 μg/ml pepstatinu A. Vzorek se umístí na sloupec pro anexovou chromatografii MonoQ (Pharmacia Biotech. Inc., Piscataway, New Jersey,

USA). Sloupec se poté promývá ekvilibračním pufrem, dokud se ^a280 ^nevrátí na základní linii. Vzorek se ze sloupce eluuje lineárním gradientem 0 až 0,25M chloridu sodného, aby se odstranila GP a další navázané proteiny. Frakce obsahující GP se eluují při koncentračním rozmezí chloridu sodného 0,1 až 0,2M, jak se stanoví monitorováním eluantu na pík absorbance proteinu při A₂₈q. GP protein se identifikuje vizualizací M_r přibližně 97kDa GP proteinového pásu elektroforézou na polyakrylamidovém gelu s natriumdodecylsulfátem (SDS-PAGE) a následným obarvením stříbrem (2D-Silver Stain II Daiichi Kit, Daiichi Pure Chemicals Company, Ltd., Tokyo, Japonsko) a poté shromáždí. Shromážděná GP se dialy···· · · ··· ···

- 127 zuje do pufru (pufr: 25mM N,N-bis[2-hydroxyethyl]-2-aminoethansulfonová kyselina, l,OmM DTT, 0,5mM EDTA, 5mM chlorid sodný, pH 6,8) a potom skladuje na ledu až do následujícího použití.

Stanovení enzymatické aktivity GP

A) Aktivace GP: Konverze GPb na GPa

Před stanovením enzymatické aktivity GP se enzym převede z inaktivní formy, v níž je exprimován E. coli kmene XL-1 (tato forma se označuje zkratkou GPb) (Stratagene Cloning Systems, LaJolla, Kalifornie, USA) na aktivní formu (tato forma se označuje zkratkou GPa) fosforylací GP za použití fosforylasa kinasy postupem popsaným dále. Frakce inaktivního enzymu, jak je exprimován v buňkách Sf9 (tato forma se označuje zkratkou GPb) se rovněž převede na aktivní formu (která se označuje zkratkou GPa) za použití následujícího postupu.

Reakce GP s imobilizovanou fosforylasa kinasou

Fosforylasa kinasa (Sigma Chemical Company,

St.Louis, Missouri, USA) se imobilizuje na afinitním gelu Affi-Gel 10 (BioRad Corp. Melvile, New York, USA) podle instrukcí výrobce. V krátkosti lze použitý postup popsat takto: Enzym fosforylasa kinasa (10 mg) se inkubuje s promytými perlami Affi-Gelu (1 ml) ve 2,5 ml lOOmM HEPES a 80mM chloridu vápenatého o pH 7,4 4 hodiny při 4°C. Potom se perly Affi-Gelu jednou promyjí stejným pufrem, načež následuje blokování jednohodinovým působením 50mM HEPES a 1M methylesteru glycinu o pH 8,0 při teplotě místnosti. Blokovací pufr se odstraní a nahradí se 50mM HEPES (pH 7,4), lmM β-merkaptoethanolem a 0,2% azidem sodným pro skladování. Před použitím na konverzi GPb na GPa se fosforylasa kinasa

- 128 imobilizovaná na perlách Affi-Gelu ekvilibruje promýváním pufrem použitým pro provedení reakce s kinasou, který se skládá z β-glycerofosfátu (25mM), DTT (0,3mM) a EDTA (0,3mM) a má pH 7,8 (pufr pro stanovení kinasy).

Zčásti purifikovaný inaktivní GPb získaný při výše uvedené chromatografií na 5'-AMP-Sepharose (z E. coli) nebo směs GPa a GPb získaná chromatogragií IMAC (z buněk Sf9) se zředí v poměru 1 : 10 pufrem pro stanovení kinasy a potom smísí s výše popsaným enzymem fosforylasa kinasou, který je imobilizován na perlách Affi-Gelu. Ke směsi se přidá NaATP (do 5mM koncentrace) a chlorid hořečnatý (do 6mM koncentrace). Vzniklá směs se 30 až 60 minut jemně míchá při 25°C. Vzorek se oddělí od perel a stanoví se aktivace (v %) spočívající v konverzi GPb na GPa. Stupeň aktivace se odhaduje na základě stanovení aktivity enzymu GP za přítomnosti a nepřítomnosti 3,3mM AMP. Procentická aktivita celkového GP, tj. aktivita enzymu GPa (aktivita nezávislá na AMP) se potom vypočítá pomocí následujícího vzorce:

Aktivita HLGP - AMP Podíl HLGPa (%) = Aktivita HLGP + AMP

Alternativně je konverzi GPb na GPa možno monitorovat isoelektrickou fokusací na základě posunu v elektroforetické mobilitě, která je zaznamenána po konverzi GPb na GPa. Vzorky GP se analyzují isoelektrickou fokusací (IEF) za použití Pharmacia PfastGel System (Pharmacia Biotech. Inc., Piscataway, New Jersey, USA) za použití předlitých gelů (pí v rozmezí 4 až 6,5) a podle pokynů výrobce. Pásy rozdělené GPa a GPb se vizualizují na gelu následným obarvením stříbrem (2D-silver Stain II Daiichi Kit, Daiichi Pure Chemicals Company, Ltd., Tokyo, Japonsko). GPa a GPb se identifikují porovnáním se standardy GPa a GPb z E. coli, • ··· • · · · • · ·

- 129 které se získají paralelně na stejných gelech, jako u experimentálních vzorků.

B) Stanovení aktivity GPa

Kurativní a profylatickou účinnost proti uvedeným chorobám nebo chorobným stavům je u sloučenin podle vynálezu možno nepřímo stanovit zjištěním účinku sloučenin podle vynálezu na aktivitu aktivované formy glykogen fosforylasy (GPa) za použití některé ze dvou dále uvedených metod. Bud' se aktivita glykogen fosforylasy měří při reakci probíhající ve směru tvorby glukosa-l-fosfátu z glykogenu (štěpná reakce) na základě sledování obsahu glukosa-l-fosfátu nebo se měří při reversní reakci (syntetická reakce), při níž se syntetizuje glykogen z glukosa-l-fosfátu, na základě sledování uvolňování anorganického fosfátu. Všechny reakce se provádějí se třemi replikacemi v 96-jamkových mikrotitrových miskách a měří se změna absorbance vlivem tvorby reakčního produktu při vlnové délce uvedené dále za použití čtecího zařízení MCC/340 MKII Elisa Reader (Lab Systems, Finsko) připojeného k zařízení Titertech Microplate Stacker (ICN Biomedical Co., Huntsville, Alabama, USA).

Pro měření aktivity enzymu GPa při reakci probíhající ve směru štěpení se sleduje tvorba glukosa-l-fosfátu z glykogenu multienzymovým spojeným obecným postupem, který popsali Pesce et al. (Pesce M. A., Bodourian S. Η. , Harris R. C. a Nicholson J. F. (1977) Clinical Chemistry 23, 1711 až 1717), který je modifikován takto: 1 až 100 μg GPa, 10 jednotek fosfoglukomutasy a 15 jednotek glukosa-6-fosfát dehydrogenasy (Boehringer Mannheim Biochemicals, Indianapolis, IN, USA) se zředí na 1 ml pufrem A (pufr A: pH 7,2, 50mM HEPES, 100mM chlorid draselný, 2,5mM ethylenglykoltetraoctová kyselina (EGTA), 2,5mM chlorid hořečnatý,

3,5mM dihydrogenfosforečnan draselný a 0,5mM dithiothreitol).

- 130 • ·· ·· ·· φ φ φ • · · * φφφφ * φ φ φ φ • ··· φφ φφφφ μΐ zásobního vzorku se přidá k 80 μΐ pufru A s obsahem 0,47 mg/ml glykogenu, 9,4mM glukosou a 0,63mM oxidovanou formou nikotinamidadenindinukleotid fosfátu (NADP⁺).

Zkoušená sloučenina se přidá vždy v podobě 5 μΐ roztoku v 14% dimethylsulfoxidu před přidáním enzymu. Základní hodnota aktivity enzymu HLGPa za nepřítomnosti inhibitorů se stanoví za použití přídavku 5 μΐ 14% dimethylsulfoxidu a plně inhibovaná hodnota aktivity enzymu GPa se stanoví za použití přídavku 20 μΐ 50mM roztoku pozitivní kontrolní zkušební látky, kofeinu. Reakce se sleduje při teplotě místnosti měřením konverze oxidovaného NADP⁺ na redukovaný NADPH při 340 nm.

Při měření aktivity enzymu GPa při reversní reakci (tj. syntetické reakci), při níž z glukosa-l-fosfátu vzniklá glykogen a anorganický fosfát, se používá obecného způsobu, který popsali Engers et al. (Engers H. D.,

Shechosky, S. a Madsen N. B. (1970) Can. J. Biochem. 48,

746 až 754), který je modifikován takto: 1 až 100 μg GPa se zředí na 1 ml pufrem B (pufr B: pH 7,2, 50mM HEPES, lOOmM chlorid draselný, 2,5mM ethylenglykoltetraoctová kyselina (EGTA), 2,5mM chlorid hořečnatý a 0,5mM dithiothreitol). 20 μΐ zásobního vzorku se přidá k 80 μΐ pufru B s obsahem 1,25 mg/ml glykogenu, 9,4mM glukosou a 0,63mM glukosa-l-fosfátem. Zkoušená sloučenina se přidá vždy v podobě 5 μΐ roztoku v 14% dimethylsulfoxidu před přidáním enzymu. Základní hodnota aktivity enzymu GPa za nepřítomnosti přidaných inhibitorů se stanoví za použití přídavku 5 μΐ 14% dimethylsulfoxidu a hodnota úplné inhibice aktivity enzymu GPa se stanoví za použití přídavku 20 μΐ 50mM roztoku kofeinu. Směs se inkubuje 1 hodinu při teplotě místnosti a anorganický fosfát uvolněný z glukosa-l-fosfátu se měří obecným postupem, který popsali Lanzetta et al. (Lanzetta P. A., Alvarez L. J., Reinach P. S. a Candia O. A. (1979) Anal. Biochem. 100, 95 až 97), který je modifikován takto: ke 100 μΐ směsi obsahující enzym se přidá 150 μΐ roztoku molybdenanu amonného o koncentraci 10 mg/ml a malachitová zeleň (0,38 mg/ml) v 1M kyselině chlorovodíkové. Vzniklá směs se 20 minut inkubuje při teplotě místnosti a měří se absorbance při 620 nm.

Výše uvedené zkoušky prováděné v rozmezí koncentrací zkoušených sloučenin umožňují stanovit hodnotu IC₅₀(koncentraci zkoušené sloučeniny potřebnou pro 50% inhibici) pro in vitro inhibici aktivity enzymu GPa těmito zkoušenými sloučeninami.

9· 99 · 9 9

132* -♦·ϊ 9 «9 99 » 9 9

Sloučeniny podle vynálezu se mohou podávat jakoukoliv metodou, pomocí které je možno je dodat přednostně do požadované tkáně, (například do tkání jater a/nebo srdce)

Tyto metody zahrnují perorální, parenterální, intraduodenální cestu atd. Sloučeniny podle vynálezu se obvykle podávají v jediné dávce, například jednou denně, nebo v několika dávkách, nebo konstantní infusí.

Sloučeniny podle vynálezu jsou užitečné při snižování nebo minimalizaci přímého poškození všech tkání, které mohou být suspceptibilní k ischemickému/reperfusnímu poškození nebo poškození vyvolanému hypoxií (například srdce, mozek, plíce, ledviny, játra, střeva, kosterní svalstvo a retina) následkem ischemické nebo hypoxické příhody (například infarktu myokardu). Účinné sloučeniny podle vynálezu se tedy s výhodou využívají profylakticky za účelem zabránění, tj. (prospektivního nebo profylaktického) zmírnění nebo zastavení poškození tkání (například tkáně myokardu) u pacientů, kteří jsou ohroženi ischemií nebo hypoxií (například ischemií myokardu).

Sloučeniny podle vynálezu se obvykle podávají perorálně nebo parenterálně (například intravenosně, intramuskulárně, subkutánně nebo intramedulárně podávání). Také může být indikováno topické podávání, například když pacient trpí gastrointestinálními poruchami nebo když lékař dojde k závěru, že nejvhodnější způsob aplikace léčiva je na povrch tkáně nebo orgánu.

Množství a doba podávání sloučenin budou samozřejmě závislé na léčeném subjektu, na závažnosti postižení, způsobu podávání a úsudku ošetřujícího lékaře. S ohledem na značnou variabilitu pacientů je třeba považovat dále uvedené dávkování pouze za vodítko, přičemž lékař může dávku léčiva upravit tak, aby dosáhl účinnosti, kterou považuje pro • * 4 ·

4 4 ·

4 ·

- 13.3 -··· ♦

4 4 0 44

4··

44

4 4

4··

4 4

4 4 4·4 pacienta za vhodnou. Při úvahách o požadovaném stupni účinku, jehož se má dosáhnout, musí lékař zvážit nejrůznější faktory, jako je věk pacienta, dříve prodělané choroby, jakož i přítomnost dalších chorob (například kardiovaskulární choroby).

Tak například při jednom režimu podávání je kombinaci podle vynálezu možno podat těsně před operací (například během 24 hodin před operací, například operací srdce), kdy dochází k ohrožení ischemií, například ischemií myokardu. Při alternativním režimu je sloučeniny možno podat v úvodní zaváděcí dávce (například injekce nebo infuse bolu), po níž následuje konstantní infuse, a to před operací, během operace nebo po ní. Sloučeniny podle vynálezu lze rovněž podávat v denním dlouhodobém režimu.

Sloučenin podle tohoto vynálezu se používá v množství, které je účinné pro ochranu před ischemií nebo hypoxií. Přednostní denní dávka sloučeniny podle tohoto vynálezu leží v rozmezí od asi 0,001 do asi 100 mg/kg, výhodněji od asi 0,01 do asi 50 mg/kg.

Sloučeniny podle vynálezu se obvykle podávají v podobě farmaceutických kompozic obsahujících přinejmenším jednu sloučeninu podle vynálezu a dále též farmaceuticky vhodné vehikulum nebo ředidlo. Sloučeniny podle vynálezu je tedy možno podávat jednotlivě nebo v společně v jakýchkoliv vhodných perorálních, parenterálních (tj. intravenosních nebo intramuskulárních), rektálních nebo transdermálních dávkovačích formách.

V případě perorálního podávání se může používat farmaceutických kompozic v podobě roztoků, suspenzí, tablet, pilulí, tobolek, prášků apod. Tablet obsahujících různé excipienty, jako je citrát sodný, uhličitan vápenatý a fos-

• · ·» · ** · 4 « Φ « 4 · · ·

Φ 4 Φ Φ

- 13.4 -··: · :

ΦΦ* · Φ 4 ΦΦΦ Φ forečnan vápenatý, se používá spolu s různými rozvolňovadly, jako je škrob, přednostně bramborový nebo tapiokový škrob a určité komplexní silikáty a různými pojivý, jako je polyvinylpyrrolidon, sacharosa, želatina a klovatina. Pro tabletovací účely se dále také hodí lubrikanty, jako je stearan hořečnatý, natriumlaurylsulfát a mastek. Podobných kompozic se také může používat jako náplní pro měkké a tvrdé želatinové tobolky. Přednostní kompozice tohoto typu obsahují také laktosu a vysokomolekulární polyethylenglykoly. Má-li se pro perorální podávání použít vodných suspezí a/nebo elixírů, mohou se sloučeniny podle vynálezu mísit s různými sladidly, ochucovadly, barvicími činidly, emulgátory a/nebo suspenzními činidly, jakož i jinými ředidly, jako je voda, ethanol, propylenglykol, glycerol a jejich různé kombinace.

Pro účely parenterálního podávání se může použít roztoků v sesamovém nebo arašídovém oleji nebo ve vodném propylenglykolu, jakož i sterilních vodných roztoků odpovídajících vodorozpustných solí. Takové vodné roztoky mohou být účelně pufrovány a kapalné ředidlo je předem isotonizováno dostatečným množstvím roztoku chloridu sodného nebo glukosy. Takové vodné roztoky se zvláště hodí pro intravenosní, intramuskulární, subkutánní a intraperitoneální injekční podávání. Sterilní vodná média vhodná pro tyto aplikace je možno snadno vyrobit standardními technologiemi které jsou dobře známé odborníkům v tomto oboru.

Pro účely transdermálního (například topického) podávání se může použít zředěných sterilních vodných nebo zčásti vodných roztoků (obvykle o přibližné koncentraci 0,1 až 5 % hmotnostních). Jinak jsou tyto roztoky podobné výše uvedeným parenterálním roztokům.

• 4

4 4 *

4 4

135 -··: ·

4444 44 ₄ 44 44 • 4 · 4 ·

4 · · · 4 · >

>44

444 44 444·

Způsoby výroby různých farmaceutických kompozic s určeným množstvím účinné přísady jsou známé nebo jsou zřejmé odborníkům v tomto oboru na základě tohoto popisu. Jako vhodné vodítko lze použít standardní farmaceutické příručky, jako je Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easter, PA, USA, 15. vydání, z roku 1975).

Farmaceutické kompozice podle vynálezu mohou obsahovat například 0,0001 až 95 % sloučeniny nebo sloučenin podle vynálezu. V každém případě je vhodné zajistit, aby podávaný prostředek obsahoval sloučeninu nebo sloučeniny podle vynálezu v množství, které je účinné pro léčení choroby stavu léčeného subjektu.

Předmětem vynálezu jsou také kity pro použití spotřebitelem, který trpí nebo je ohrožen chorobou nebo stavem vyvolaným například ischemií nebo hypoxií, který lze léčit agonistou A₃ . Součástí takového kitu jsou vhodná dávkovači forma, jako je roztok pro parenterální injekce zvláště přizpůsobený pro intravenosní nebo intramuskulární injekční podávání a instrukce, ve kterých je popsán způsob, jakým má spotřebitel takovou dávkovači formu použít za účelem snížení rizika poškození tkáně. Instrukce by spotřebiteli nebo zdravotnickému personálu měly poskytnout pokyny pro podání parenterálního roztoku v souladu se způsoby podávání, které jsou známy odborníkům v tomto oboru. Kity mohou s výhodou být baleny a prodávány ve formě jednotek pro jednorázové nebo několikanásobné podávání.

Dvě různé sloučeniny podle vynálezu je možno podávat současně nebo postupně v jakémkoliv pořadí, nebo je možno podávat jedinou farmaceutickou kompozici, která obsahuje výše popsanou sloučeninu obecného vzorce I a výše popsaný inhibitor aldosa reduktasy nebo výše popsaný inhibitor

- 136.·glykogen fosforylasy nebo inhibitor sorbitol dehydrogenasy nebo kardiovaskulární činidlo.

Jelikož vynález obsahuje aspekt, který se týká například léčení chorob/stavů uvedených v tomto textu za použití kombinace účinných složek, které mohou být podávány odděleně, je předmětem vynálezu také kombinace oddělených farmaceutických kompozic ve formě kitu. Kit zahrnuje dvě oddělené farmaceutické kompozice: na bázi sloučeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo soli takové sloučeniny nebo proléčiva a výše popsané druhé sloučeniny. Součástí kitu je obalový prostředek pro oddělené kompozice, jako kontejner, rozdělenou lahvičku nebo rozdělený foliové balení. Kit obvykle obsahuje pokyny pro podávání oddělených složek. Forma kitu je zvlášť výhodná, když se oddělené složky přednostně podávají v různých dávkovačích formách (například perorálně a parenterálně), s různými intervaly podávání nebo když předepisující lékař vyžaduje odměřování jednotlivých složek kombinace.

Jako příklad takového kitu je možno uvést tzv. blistrová (protlačovací) balení. V obalovém průmyslu jsou blistry dobře známy a ve velkém měřítku se jich používá pro balení farmaceutických jednotkových dávkovačích forem (tablet, tobolek apod.). Blistry obvykle sestávají z listu relativně tuhého materiálu potaženého folií přednostně z transparentního plastového materiálu. Během balicího procesu se v plastové folii vytvarují dvorce. Dvorce mají velikost a tvar balených tablet nebo tobolek. Poté se do dvorců umístí tablety nebo tobolky a na opačnou stranu (vzhledem ke směru v němž byly vytvořeny dvorce) plastové folie se připevní list relativně tuhého materiálu. Výsledkem je, že tablety nebo tobolky jsou uzavřeny ve dvorcích mezi plastovou folií a listem. Pevnost listu je přednostně taková, že tablety nebo tobolky je možno z blistru vyjímat • ·

- 137

tak, že se rukou zatlačí na dvorec, přičemž otvor v listu vznikne v místě dvorce. Tablety nebo tobolky je možno vyjímat výše popsaným postupem.

Do blízkosti tablet nebo tobolek je vhodné umístit pomůcku usnadňující kontrolu odebírání dávkových forem z balení. Tato pomůcka může mít podobu čísel, která odpovídají dnům režimu, v němž mají být tablety brány. Jako další příklad je možno uvést kalendář, jako První týden, pondělí, úterý ... atd., Druhý týden, pondělí, úterý ... atd. Další varianty takových pomůcek jsou zcela zřejmé. Denní dávku je možno podávat ve formě jediné tablety nebo tobolky nebo ve formě několika pilulí nebo tobolek, které se berou v daný den. Denní dávka první sloučeniny může sestávat z jedné tablety nebo tobolky, zatímco denní dávka druhé sloučeniny může sestávat z několika tablet nebo tobolek, nebo naopak. Tento případ by měl být zohledněn v pomůckách usnadňujících kontrolu odebírání dávkových forem z balení.

Podle jiného konkrétního provedení se používá dávkovače léků (dispenzéru) uzpůsobeného pro dávkování denních dávek v určitou dobu v zamýšleném pořadí. Dávkovač je přednostně vybaven pomůckou usnadňující odebírání dávkových forem, pokud to napomáhá zvyšování kompliance s režimem.

Jako příklad pomůcky usnadňující kontrolu odebírání dávkových forem je možno uvést mechanické počítadlo oddělených denních dávek. Jiným přikladen takové pomůcky je mikročipová paměř napájená z baterie spojená s displejem s tekutými krystaly nebo zvukovým upomínacím signálem, který například ukazuje datum, kdy byla odebrána poslední dávka a/nebo připomíná kdy se má brát další dávka.

Sloučeniny podle vynálezu samotné nebo ve vzájemné kombinaci nebo v kombinaci s jinými sloučeninami se budou podávat ve formě obvyklých formulací. Dále uvedené příklady

138 • · · · formulací mají pouze ilustrativní charakter a rozsah vynálezu nijak neomezují.

Pod pojmem účinná složka se rozumí sloučenina nebo sloučeniny podle vynálezu.

Formulace 1: Želatinové tobolky

Tvrdé želatinové tobolky se připraví za použití následujících složek:

Složka Množství (mg/tobolka)

Účinná složka	0,25	až	100
Škrob, NF	0	až	650
Škrobový sypký prášek	0	až	50
Kapalný silikon
o kinetické viskositě 350.10^-6 m².s^-1	0	až	15

Za použití dále uvedených složek se připraví tabletová formulace:

Formulace 2: Tablety

Složka Množství (mg/tableta)

Účinná složka	0,25	až	100
Mikrokrystalická celulosa	200	až	650
Sublimovaný oxid křemičitý	10	až	650
Kyselina stearová	5	až	15
Složky se smísí a vzniklá směs	se lisuje	na

tablety.

• ·

Tablety, z nichž každá obsahuje 0,25 až 100 mg účinných složek se alternativně připraví následujícím postupem:

Formulace 3: tablety

Složka

Množství (mg/tableta)

Účinná složka 0,25 až 100

Škrob 45

Mikrokrystalická celulosa 35

Polyvinylpyrrolidon (jako 10% roztok ve vodě) 4

Sodná sůl karboxymethylcelulosy 4,5

Stearan hořečnatý 0,5

Mastek 1

Účinné složky, škrob a celulosa se protlačí sítem o velikosti ok 355 μιη a důkladně promísí. Výsledný prásek se smísí s roztokem polyvinylpyrrolidonu a vzniklá směs se protllačí přes síto o velikosti ok 1400 μη. Takto připravené granule se vysuší při 50 až 60°C a protlačí přes síto o velikosti ok 1000 μιη. Ke granulím se přidají sodná sůl karboxymethylcelulosy, stearan hořečnatý a mastek, prosáté přes síto o velikosti ok 250 μιη. Složky se promísí a na tabletovacím stroji se lisují tablety.

Suspenze obsahující 0,25 až 100 mg účinné složky na 5ml dávku se připraví následujícím způsobem:

♦ 4 · ·

- 140.·-*··: · • 4 4 4 4 4 4 • 4 44 • 4 4 • 4 4

Složka

Formulace 4: suspenze

Množství (mg/5 ml)

Účinná složka

Sodná sůl karboxymethylcelulosy Sirup

Roztok benzoové kyseliny Látka upravující aroma nebo chuť Barvicí látka

Purifikovaná voda

0,25 až 100 mg 50 mg 1,25 mg 0,10 ml

q.v.

do 5 ml

Účinná složka se protlačí sítem o velikosti ok 355 μπι a smísí se sodnou solí karboxymethylcelulosy a sirupem za vzniku hladné pasty. Roztok kyseliny benzoové, látka upravující aroma nebo chuť a barvicí látka se zředí vodou a za míchání přidají k pastě. Ke vzniklé směsi se přidá voda v množství dostatečném pro dosažení požadovaného objemu.

Aerosolový roztok se připraví za použití následujících složek:

Formulace 5: aerosol

Složka Množství (% hmot.)

Účinná složka 0,25

Ethanol 25,75

Hnací látka 22 (chlordifluormethan) 70,00

Účinná složka se smísí s ethanolem a vzniklá směs se přidá k části hnací látky 22, výsledná směs se ochladí na

30’C a převede do plnicího zařízení. Nerezová nádoba se naplní požadovaným množstvím a její obsah se zředí zbývající hnací látkou. Nádoba se poté opatří ventilem.

• · ΐ4ΐ·- ··: ’ • · · · · ·

Čípky se připraví následujícím postupem:

Formulace 6: Čípky

Složka

Množství (mg/čípek)

Účinná složka 250

Glyceridy nasycených mastných kyselin 2000

Účinná složka se protlačí sítem o velikost ok 250 μιη a suspenduje v glyceridech nasycených mastných kyselin roztavených za použití minimálně nezbytného tepla. Směs se poté nalije do licí formy pro čípky o nominální kapacitě 2 g a nechá zchladnout.

Intravenosní formulace se připraví následujícím postupem:

Formulace 7: Intravenosní roztok

Složka

Množství

Účinná složka 25 až 10 000 mg

Isotonický solný roztok 1000 ml

Roztok výše uvedených složek se pacientu podává intravenosně.

Do rozsahu pojmu účinná složka také spadají kombinace činidel.

Vynález je blíže objasněn v následujících příkladech provedení. Tyto příklady mají výhradně ilustrativní charakter a rozsah vynálezu v žádném ohledu neomezují.

Příklady provedení vynálezu

Obecné experimentální postupy

NMR spektra se pořizují na spektrometru VARIAN XL 300 (Varian Co., Palo Alto, Kalifornie, USA), Bruker AM-300 (Bruker Co., Billerica, Massachusetts, USA) nebo Varian Unity 400 při teplotě asi 23°C a frekvenci 300 nebo 400 MHz v případě protonů. Chemický posun se vyjadřuje jako díly na milion dílů směrem dolů od trimethylsilanu. Tvary píků jsou vyjádřeny následujícím způsobem: s = singlet, d = dublet, t = triplet, q = kvartet, m = multiplet a bs = široký singlet. Resonance označené jako zaměnitelné se nevyskytly v separátním NMR pokusu, když byl vzorek protřepán s několika kapkami D₂O ve stejném rozpouštědle. Hmotnostní spektra s chemickou ionizací za atmosférického tlaku (APCIMS) byla získána za použití spektrometru Fisons Platform II a hmotnostní spektra s chemickou ionizací (CIMS) se měří na přístroji Hewlett-Packard 5989 (Hewlett-Packard Co., Palo Alto, Kalifornie, USA) (amoniová ionizace, PBMS). Pokud je popisována intenzita iontů obsahujících chlor nebo brom, byl pozorován očekávaný poměr intenzit (přibližně 3 : 1 pro ionty s obsahem ³⁵C1/³⁷C1 a 1 : 1 pro ionty s obsahem ⁷⁹Br/⁸¹Br) a základem pro M je ³⁵C1 a ⁷⁹Br. V některých případech jsou v ^H NMR a APCIMS uvedeny pouze reprezentativní píky.

Sloupcová chromatografie se provádí za použití silikagelu Baker Silica Gel (40 μιη) (J. T. Baker, Philipsburg, N. J., USA) nebo Silica Gel 60 (EM Sciences, Gibbstown,

N. J. ve skleněné koloně nebo koloně Flash 40^^R^ nebo Flash 12^^r^ (Biotage Charlottesville, VA, USA) pod tlakem dusíku. Radiální chromatografie se provádí za použití Chromatron (Harrison Research, Palo Alto, CA, USA). Pokud není uvedeno jinak, používá se reakčních činidel z obchodních zdrojů. Dimethylformamidu, 2-propanolu, tetrahydrofuranu a dichlor- 14.3

methanu (reakční rozpouštědla) se používá v bezvodém stavu a jedná se o produkty získané od Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin, USA). Mikroanalýzy byly provedeny v laboratoři Schwarzkopf Microanalytical Laboratory (Woodside, NY, USA). Pokud jsou v příkladech zmiňovány koncentrační a odpařovací postupy, jedná se o postupy odstraňování rozpouštědel za podtlaku vodní vývěvy v rotačním odpařováku při teplotě lázně nižší než 50 °C.

Do rozsahu pojmu hydrochloridová sůl použitého v názvech sloučenin v příkladech provedení spadají jak mono-, tak i disoli.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Odštěpení BOC

Methylamid (2S, 3S , 4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(3-methylisoxazol-5-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny terč.Butylester (5—(6—[5-chlor-2-(3-methylisoxazol -5-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxy-2-methylkarbamoyltetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny (1,0 mmol) se rozpustí v bezvodém tetrahydrofuranu (10 ml). Ke vzniklému roztoku se přidá voda (10 ml) a poté methansulfonová kyselina (1,5 ml, 15 mmol). Reakční směs se 6 hodin míchá při 70C a poté 15 hodin při teplotě místnosti, načež se z ní v rotačním odpařováku odstraní organické rozpouštědlo. Výsled ný vodný roztok se 1M roztokem hydroxidu sodného zneutralizuje na pH 7, načež se vysráží titulní sloučenina, která se odfiltruje. Teplota tání: 152,0 až 155,0°C; [a]₂₂ ⁼ -30,5° (c = 0,56, MeOH) • · · · ♦ » · · • · · · _π . . · · * ~ 14 4·“··· • · • ·· · ♦ · ^C23^H25^CIN8°5· ^mw 528,96. MS 529,1 (M+H)⁺.

^ίΗ NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,57 (s, 1H); 8,45 (q , 1H, J = 4,6 Hz); 8,35 (bs,

1H), 8,19 (s, 1H); 7,23 (dd, 1H, J = 8,5 Hz, J = 2,4 Hz); 7,11 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 7,07 (bs, 1 H); 6,48 (s, 1H); 5,99 (d, 1H, J = 3,7 Hz); 5,87 (d, 1H, J = 4,2 Hz); 5,29 (s, 2H); 4,62 (bs, 2H); 4,38 - 4,32 (mult, 1H); 4,08 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,58 - 3,51 ímult, 1H); 2,64 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 2,19 (s, 3H); 1,73 (bs, 2H).

Příklad 2

Acetonidové štěpení

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6- [5-chlor-2-(3,4,5,6-tetrahydropyran-2-ylmethoxy)benzylaminoJpurin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

K roztoku methylamidu 3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(2,2,7,7-tetramethyltetrahydrobis[1,3]dioxolo[4,5-b;4',5'-d] pyran-5-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny (59 mg, 0,09 mmol) v chloroformu (7 ml) se přidá trifluoroctová kyselina (0,7 ml). Reakční směs se 2 hodiny míchá za bezvodých podmínek při teplotě místnosti, načež se k ní přidá voda (10 ml). Vodná směs se 5 dní míchá při teplotě místnosti, načež se z ní v rotačním odpařováku odstraní rozpouštědlo. Pevný zbytek se trituruje s diethyletherem. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu ve formě béžového prášku (60 mg) o teplotě tání 212,0 až 218,0°C. C₂₄H₃qC1N₇O₉. MW 596,00. MS 596,1 (M+H)⁺.

’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,52 - 8,36 (mutt, 5H); 8,35 - 8,24 (mult, 1H); 8,13 (s, 1H); 7,25 - 7,16 (mult, 1H); 7,10 - 6,90 (mult, 2H); 6,88 - 6,78 (mult, 1H); 6,21 6,16 (mult, 1H); 5,2 - 4,4 (mult, 2H); 5,02 - 4,88 (mult, 2H); 4,71 - 4,59 (mult, 2H);

4,53 (d, 1H, J = 5,0 Hz); 4,30 (d, 1H, J = 6,8 Hz); 4,26 - 4,20 (mult, 1H); 4,20 - 4,11 (mult, 1H); 4,10-3,99 (mult, 1H); 3,95 -3,88 (mult, 1H); 3,84 -3,76 (mult, 1H);

3,62 - 3,55 (mult, 1H); 3,34 - 3,25 (mult, 1H); 2,61 (d, 3H, J = 4,4 Hz).

• ···

143..- ».· • · » • · · « • · · ·· ····

Příklad 3

Redukce azidu

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzyloxy-5-chlorbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[ 6- (2-benzyloxy-5-chlorbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny (456 mg, 0,83 mmol) se rozpustí v bezvodém tetrahydrofuranu (50 ml). Reakční směs se ochladí na 0’C a přidá se k ní trifenylfosfin (304 mg, 1,2 mmol). Reakční směs se 30 minut míchá při 0°C a přidá se k ní koncentrovaný hydroxid amonný (0,4 ml) a voda (0,5 ml). Reakční směs se nechá pomalu zahřát na teplotu místnosti a při této teplotě 15 hodin míchá, načež se z ní v rotačním odpařováku odstraní rozpouštědlo. Produkt se předem naadsorbuje na silikagel a přečistí mžikovou chromatografií (SiO₂, 5% a poté 18% methanol v dichlormethanu). Získá se sloučenina uvedená v nadpisu ve formě bezbarvé pevné látky.

Teplota tání 114,2 až 115,2°C [a]₂2 = -34,34° (c = 0,265, MeOH)

C₂5^h26^cin7°4· MW 523,98. MS 524,1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,58 (s, 1H); 8,47 (q, 1H, J = 4,6 Hz); 8,35 (bs,

1H); 8,22 (s, 1H); 7,48 - 7,46 (mult, 2H); 7,38 - 7,33 (mult, 2H); 7,33 - 7,25 (mult,

1H); 7,25 - 7,20 (mult, 1H); 7,10 - 7,05 (mult, 2H); 6,01 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 5,95 5,85 (mult, 1H); 5,17 (s, 2H); 4,85 - 4,75 (mult, 2H); 4,38 - 4,34 (mult, 1H); 4,11 (d,

1H, J = 5,8 Hz); 3,56 (t, 1H, J = 5,8 Hz); 2,66 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 1,9 -1,7 (mult,

2H).

Následující sloučeniny uvedené v nadpisech příkladů 4 až 93 se vyrobí podobnými způsoby, jaké jsou popsány v předcházejícím příkladu 3.

· 9 9 ·

9 9

999 9

14β.r .,· .

·9 » · 9

Příklad

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(2-morfolin-4-ylethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 99,0 až 108,0°C [a]₂2 = -29,64° (c = 0,280, MeOH)

C24H31CIN8O5. MW 547,02. MS 547,2 (M+H)+.

’H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,57 (s, 1H); 8,45 (q, 1H, J = 4,6 Hz); 8,28 (bs,

1H); 8,21 (s, 1H); 7,22 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,4 Hz); 7,05 (bs, 1H); 7,01 (d. 1H, J = 8,7 Hz); 6,02 (d, 1H, J = 3,7 Hz), 6,05 - 5,80 (mult, 1H); 4,63 (bs, 2H); 4,40 - 4,30 (mult, 1H); 4,12 (t, 3H. J = 5,5 Hz); 3,55 - 3,50 (mult, 5H); 2,70 - 2,60 (mult, 5H);

2,55 - 2,45 (mult, 4H); 2,25 - 1,95 (mult, 2H).

Příklad 5

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[5-(5-chlor-2-cyklobutyl methoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 107,0 až 117,0°C í«)21.5 = ³¹,²⁸° (^c = °/³⁹⁰- MeOH) ^C23^H28^CIN7°4· MW 501,98. MS 501,9 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,55 (s, 1H); 8,45 - 8,40 (mult, 1H); 8,25 (bs, 1H);

8,19 (s, 1H); 7,18 (dd, 1H, J = 8,5 Hz, J = 2,7 Hz); 7,05 - 7,00 (mult, 1H); 6,95 (d,

1H, J = 8,5 Hz); 5,99 (d, 1H, J = 3,7 Hz); 5,90 - 5,80 (mult, 1H); 4,65 - 4,60 (mult, 2H); 4,35 - 4,30 (mult, 1H); 4,09 (d, 1H, J = 5,8 Hz); 3,95 (d, 2H, J = 6,2 Hz); 3,53 (t, 1H, J = 5,8 Hz); 2,75 - 2,65 (mult, 1H); 2,63 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 2,05 -1,95 (mult, 2H); 1,90 - 1,80 (mult; 4H); 1,80- 1,70 (mult, 2H).

·· ··

9 9 9

9 9 » 147,·» ··: · •♦·9 99

999

99 · 9

9 · • · · · 9

9· 9999

Příklad

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(3-methoxy benzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 102,0 až 108,0°C [a]21,5 = -28,89° (c = 0,450, MeOH) ^c26^h28^cin7O5· MW 554,01. MS 553,8 (M+H)+.

'^H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,56 (s, 1H); 8,46 (q , 1H, J = 4,4 Hz); 8,35 (bs,

1H);8,20 (s, 1H);7,26 (t, 1H,J = 8,1 Hz); 7,25 (dd, 1H,J = 8,8 Hz, J = 2,6 Hz);

7,10 - 7,05 (mult, 1H); 7,05 - 7,00 (mult, 3H); 6,84 (d, 1H, J = 7,3 Hz); 5,99 (d, 1H,

J = 3,7 Hz); 5,95 - 5,85 (mult, 1H); 5,13 (s, 2H); 4,75 - 4,65 (mult, 2H); 4,37 - 4,30 (mult, 1H); 4,09 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,71 (s, 3H); 3,54 (t, 1H, J = 4,9 Hz); 2,64 (d,

3H, J = 4,4 Hz); 1,80 - 1,75 (mult, 2H).

Příklad 7

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(2,5-dimethoxybenzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrof uran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 112,0 až 115,0°C [a]2i ,5 =-30,48° (c = 0,420, MeOH) ^C27^H3O^CIN7°6· MW 584,04. MS 583,8 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,59 (s, 1H); 8,50 (q, 1H, J = 3,7 Hz); 8,37 (bs,

1H); 8,22 (s, 1H); 7,22 (dd, 1H, J = 8,9 Hz, J = 2,7 Hz); 7,10 - 7,05 (mutt,1 H); 7,05 7,00 (mult, 2H); 6,97 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,86 (dd, 1H, J = 8,9 Hz, J = 2,7 Hz); 6,02 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 5,95 - 5,90 (mult, 1H); 5,10 (s, 2H); 4,75 - 4,65 (mult, 2H); 4,40 - 4,35 (mult, 1H); 4,12 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 3,78 (s, 3H); 3,67 (s, 3H); 3,60 - 3,55 (mult, 1H); 2,67 (d, 3H, J = 3,7 Hz); 1,85 - 1,75 (mult, 2H).

• · ·· ·· « · 4 · • · ·

148* - ·*! · ··♦· 44 • 4 ♦»

4 ·

• *

I · 4

4* 4444

Příklad 8

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(3-chlor— benzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran

-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 85,0 až 90,0°C

C25^H25^CI2^N7O4· MW 558,43. MS 557,8 (M+H)+

Ή NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,59 (s, 1H); 8,48 (q, 1H, J = 4,8 Hz); 8,40 (bs,

1H); 8,24 (s, 1H); 7,55 (s, 1H); 7,50 - 7,35 (mult, 3H); 7,24 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J =

2,7 Hz); 7,17 - 7,12 (bs, 1H); 7,05 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,02 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 5,95 - 5,85 (mult, 1H); 5,21 (s, 2H); 4,75 - 4,65 (mult, 2H); 4,40 - 4,35 (mult,1H); 4,12 (d, 1H, J = 5,8 Hz); 3,57 (t, 1H, J = 5,8 Hz); 2,67 (d, 3H, J = 4,8 Hz); 1,85 - 1,75 (mult, 2H).

Příklad 9

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-[5-chlor-2-(4-chlorbenzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran

-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 88,0 až 92,0°C

C25^H25^CI2^N7O4· MW 558,43. MS 558,1 (M+H)+.

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 8,61 (s. 1H); 8,49 (q , 1H, J = 4,4 Hz); 8,39 (bs,

1H); 8,24 (s, 1H); 7,53 (d, 2H, J = 8,9 Hz); 7,45 (d, 2H J = 8,9 Hz); 7,23 (dd, 1H, J = 8.7 Hz, J = 3,6 Hz); 7,09 (bs, 1H); 7,02 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,04 (d, 1H, J = 6,3 Hz); 5,95 - 5,87 (mult, 1H); 5,19 (s, 2H); 4,75 - 4,68 (mult, 2H); 4,41 - 4,36 (mult, 1H); 4,13 (d, 1H, J = 5,1 Hz); 3,58 (t, 1H, J = 5,1 Hz); 2,68 (d, 3H, J = 4,4 Hz); 1,91 - 1,77 (mult, 2H).

Příklad 10

444 ·«·

4« • 4 4 4

4 4

- 149,·- ··:

• 44 · 4« • 4 4

4 *

4 4 · 4 ·♦ 444·

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(2-chlorbenzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 88,0 až 92,0°C [a)₂4 = -16,67° (c = 0,36, DMSO)

C25H25CI2N7O4. MW 558,43. MS 558,1 (M+H)+ ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 8,60 (s, 1H); 8,49 (q, 1H, J = 4,6 Hz); 8,36 (bs,

1H); 8,23 (s, 1H); 7,70 - 7,65 (mult, 1H); 7,55 - 7,50 (mult, 1H); 7,42 - 7,36 (mult,

2H); 7,27 (dd, 1H, J =8,5 Hz, J = 2,6 Hz); 7,17 - 7,09 (mult, 2H); 6,03 (d, 1H, J =

4,4 Hz); 5,95 - 5,88 (mult, 1H); 5,24 (s, 2H); 4,79 - 4,67 (mult, 2H); 4,40 - 4,36 (mult, 1H); 4,15 (d, 1H, J = 6,3 Hz); 3,58 (t, 1H, J = 6,3 Hz); 2,67 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 1,87- 1,77 (mult, 2H).

Příklad 11

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6 —[5-chlor-2-(tetrahydrofuran-3-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrof uran- 2-karboxy lové kyseliny

Teplota tání: 114,0 až 118,0°C ^C23^H28^CIN7O5· MW 517,98. MS 518,0 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,58 (s, 1H); 8,47 (d, 1H, J = 4_r4 Hz); 8,31 (bs,

1H); 8,22 (s, 1H); 7,21 (dd, 1H, J = 8,5 Hz, J = 2/ Hz); 7,06 (bs, 1H); 6,99 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,01 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 5,89 (bs, 1H); 4,64 (bs, 2H); 4,36 (bs, 1H); 4,11 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 4,00 - 3,87 (mult, 2H); 3,80 - 3,70 (mult, 2H); 3,67 - 3,60 (mult,

1H); 3,59 - 3,50 (mult, 2H); 2,66 (d, 3H, J = 4,4 Hz); 2,60 (bs, 1H); 2,04 - 1,96 (mult, 1H); 1,78 (bs, 2H); 1,74- 1,62 (mult, 1H).

Příklad 12

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(4-methylbenzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny • · — 15j3«r4

444 4 •4 4*44

Teplota tání: 82,0 až 86,0°C ^C26^H28^C1N7°4· MW 538,01. MS 538,2 (M+H)+.

H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,58 (bs, 1H); 8,48 (q , 1H, J = 4,8 Hz); 8,36 (bs, 1H); 8,20 (s, 1H); 7,45 (d, 1H, J = 7,3 Hz); 7,27 - 7,15 (mult, 4H); 7,14 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 7,09 (bs, 1H); 6,01 (d, 1H, J = 3,7 Hz); 5,90 (bs, 1H);-5-,-15 (s, 2H); 4,68 (bs, 2H); 4,38 (bs, 1H); 4,11 (d, 1H, J = 5,8 Hz); 3,56 (t, 1H, J = 5,8 Hz); 2,66 (d,

3H, J = 4,8 Hz); 2,34 (s, 3H); 1,82 (bs, 2H).

Příklad 13

Methylamid (2S,3S,4R,5R) -3-amino-5- (6- [ 5-chlor-2- ( 2-met.hyl benzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran

-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 76,0 až 80,0°C ^C26^H29^C1N4°4’ ⁵³⁸'⁰¹· ^MS 538,2 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,59 (s, 1H); 8,48 (q, 1H, J = 4,6 Hz); 8,35 (bs,

1H); 8,22 (s, 1H); 7,35 (d, 2H, J = 8,1 Hz); 7,21 - 7,15 (mult, 3H); 7,22 - 7,17 (mult, 2H); 6,01 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 5,88 (bs, 1H); 5,12 (s, 2H); 4,70 (bs, 2H); 4,37 (bs,

1H); 4,11 (d, 1H, J = 5,8 Hz); 3,56 (t, 1H, J = 5,8 Hz); 2,66 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 2,28 (s, 3H); 1,79 (bs, 2H).

Příklad 14

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(3-methyl benzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran

-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 92,0 až 97,0’C

C26^H28^CIN7°4· MW 538,01. MS 538,2 (M+H)⁺.

'H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,56 (s, 1H); 8,45 (q, 1H, J = 4,6 Hz); 8,32 (bs,

1H); 8,19 (s, 1H); 7,25 - 7,21 (mult, 3H); 7,21 - 7,16 (mult, 1H); 7,11 - 7,00 (mult,

99

9 9 · • · ·

- 151*-··: ·

99 9 99

99

9 « · • ·

9

9999

3H); 5,99 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 5,87 (bs, 1H); 5,10 (s, 2H); 4,67 (bs, 2H); 4,34 (bs, 1H); 4,09 (d, 1H, J = 5,8 Hz); 3,54 (t, 1H, J = 5,8 Hz); 2,63 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 2,25 (s, 3H); 1,84

Příklad 15

Methylamid ( 2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(2-methoxybenzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 102,0 až 123,0C [a]₂i = -49,39° (c = 0,225, MeOH) ^C26^H28^CIN7°5- MW 554,01. MS 554,1 (M+H)+.

NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,58 (s, 1H); 8,48 (q, 1H, J = 4,6 Hz); 8,34 (bs,

1H);8,21 (s,1H);7,44 (dd, 1H,J = 7,5 Hz, J = 1,5 Hz); 7,30 (td, 1H,J = 7,5 Hz, J =

1,5 Hz); 7,22 (dd, 1 H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,08 - 7,01 (mult, 3H); 6,94 (t, 1 H, J = 7,5 Hz); 6,02 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 5,91 (bs, 1H); 5,12 (s, 2H); 4,68 (bs, 2H); 4,37 (t, 1H, J = 4,1. Hz); 4,11 (d, 1H, J = 5,8 Hz); 3,82 (s, 3H); 3,57 (t, 1H,J = 5,8 Hz);

2,66 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 1,91 (bs, 2H).

Příklad 16

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(furan-3-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran -2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 93,0 až 97,0°C ^C2 3^H24^ClN7°5' Μ** 513,94. ^MS 513,8 (M+H) ⁺ .

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,59 (s, 1H): 8,48 (q, 1H, J = 4,6 Hz); 8,34 (bs,

1H); 8,21 (S, 1H); 7,80 (s, 1H); 7,66 (s, 1H); 7,22 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,5 Hz);

7,10 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 7,06 (bs, 1H); 6,60 (s, 1H); 6,01 (d, 1H, J = 3,7 Hz); 5,90 (bs, 1H); 5,03 (s, 2H); 4,64 (bs, 2H); 4,36 (bs, 1H); 3,56 (t, 1H, J = 4,5 Hz); 3,14 (d,

1H, J = 5,2 Hz); 2,66 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 1,77 (bs, 2H).

·♦ ♦* • 4 4 4 4

4 4 4

4 4 · 4 * · ♦ • 44· ·* ····

444 4

- 15d«

Příklad 17

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(4-methoxybenzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C26^h28^CIN7°5· MW 554,01. MS 553.8 (M+H)⁺.

Ή NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,55 (s, 1H); 8,44 (q, 1H, J = 4,4 Hz); 8.32 (bs,

1H); 8,19 (s, 1H); 7,37 (d, 2H, J = 8,7 Hz); 7,18 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz);

7,11 - 7,04 (mult, 2H); 6,89 (d, 2H, J = 8,7 Hz); 6,00 (d, 1H, J = 3,7 Hz); 6,95 (bs,

1H); 5,06 (s, 2H); 4,62 - 4,59 (mult, 2H); 4,37 (bs, 1H); 4,11 (d, 1H, J = 5,4 Hz);

3,70 (s, 3H); 3,60 - 3,56 (mult, 1H); 2,63 (d, 3H, J = 4,4 Hz).

Příklad 18

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(5-chlor-2-cyklopentylmethoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 110,6 až 116,2°C [a]₂2 = ‘25,88 ° (c = 0,255, MeOH) ^C24^H3O^CIN7°4· MW 516,00. MS 515,8 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,58 (s, 1H); 8,47 (q , 1H, J = 4,2 Hz); 8,29 (bs,

1H); 8,21 (s, 1H); 7,19 (dd, 1H, J = 8,5 Hz, J = 2,3 Hz); 7,03 (bs, 1H); 6,97 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 6,01 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 5,91 (bs, 1H); 4,64 (bs, 2H); 4,37 (bs, 1H); 4,11 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,87 (d, 2H, J = 6, 4 Hz); 3,60 - 3,55 (mult, 1H); 2,65 (d, 3H, J =

4,2 Hz); 2,36 - 2,22 (mult, 1H); 2,22 - 1,90 (mult, 2H); 1,80 - 1,70 (mult, 2H); 1,62 1,44 (mult, 4H); 1,39 - 1,28 (mult, 2H).

Příklad 19

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlor-2-[3-(2-morfolin-4-ylethoxy)benzyloxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylová kyseliny ··

999 9 • 9 • 9 *♦

9 · · · · · • 99

9999 ^C31^H37^C1N8°6· 653,14. MS 653,0 (M+H)⁺ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,57 (s, 1H); 8,45 (q, 1H, J = 4,4 Hz); 8,37 (bs,

1H); 8,22 (s, 1H); 7,26 (t, 1H, J = 8,5 Hz); 7,21 (dd, 1H, J = 8,5 Hz, J = 2,5 Hz);

7,09 (bs, 1H); 7,06 - 7,00 (mult, 3H); 6,87 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 6,02 (d, 1H, J = 3,7 Hz); 5,95 (bs, 1H); 5,14 (s, 2H); 4,70 (bs, 2H); 4,42 - 4,36 (mult, 1H); 4,14 (d. 1H, J = 5,4 Hz); 4,06 (t, 2H, J = 5,4 Hz); 3,62 - 3,57 (mult, 1H); 3,53 (mult, 4H); 2,67 2,61 (mult, 5H); 2,42 - 2,38 (mult, 4H).

Příklad 20

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(tetrahydrofuran-3-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 132,0 až 161,0°C [a]₂i = -16,47° (c = 0,170, MeOH)

C23H28CIN7O5. MW 517,98. MS 518,1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,53 (s, 1 H); 8,42 (q, 1H, J = 4,4 Hz); 8,29 (bs,

1H); 8,19 (s, 1H); (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,04 (s, 1H); 6,97 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,11 (bs, 1H), 6,01 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 4,61 (bs, 2H); 4,44 - 4,40 (mult, 1H);

4,15 (d, 1H, J = 5,0 Hz); 3,99 - 3,92 (mult, 1H); 3,91 - 3,85 (mult, 1H); 3,78 - 3,65 (mult, 2H); 3,64 - 3,58 (mult, 2H); 3,57 - 3,50 (mult, 1H); 2,95 (q, 1H, J = 7,3

Hz); 2,69 - 2,58 (mult, 5H); 2,02 - 1,93 (mult, 1H); 1,70 - 1,59 (mult, 1H).

Příklad 21

C23H28CIN7O5. MW 517,98. MS 518,0 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,54 (s, 1H); 8,47 - 8,40 (mult, 1H); 8,29 (bs, 1H);

8,19 (s, 1H); 7,18 (dd, 1H, J =8,5 Hz, J = 2,3 Hz); 7,03 (bs, 1H); 6,97 (d, 1H, J = ·<·

- 154··»«· • t ·· • · • · • 9 • · •· ····

8,5 Hz); 5,99 (d, 1H, J = 3,7 Hz); 5,97 (bs, 1H); 4,61 (bs, 2H); 4,40 - 4,35 (mult, 1H); 4,11 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 3,98 - 3,92 (mult, 1H); 3,91 - 3,83 (mult, 1H); 3,78 3,68 (mult, 2H); 3,62 - 3,48 (mult, 3H); 2,87 - 2,82 (mult, 1H); 2,65 - 2,57 (mult, 5H); 2,02 - 1,93 (mult, 1H); 1,69 - 1,59 (mult, 1H).

Příklad 22

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(furan-2-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran

-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 187,0 až 192,0°C ^C23^H24^C1N7°5· ⁵¹³'⁹⁵· ^MS 514,1 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-ds) δ 8,55 (s, 1H); 8,44 (q, 1H, J = 4,4 Hz); 8,27 (bs,

1H); 8,20 (s, 1H); 7,67 (d, 1H, J = 1,9 Hz); 7,21 (dd, 1H, J = 8,9 Hz, J = 2,7 Hz);

7,15 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 7,02 (bs, 1H); 6,57 (d, 1H, J = 3,3 Hz); 6,44 (dd, 1H, J =

3,3 Hz, J = 1,9 Hz); 5,99 (d, 1H, J = 4,0 Hz); 5,86 (bs, 1H); 5,11 (s, 2H); 4,58 (bs,

2H); 4.39 - 4,32 (mult, 1H); 4,09 (d, 1H, J = 5,8 Hz); 3,59 - 3,53 (mult, 1H); 2,63 (d,

3H, J = 4,4 Hz); 1,85 (bs, 2H).

Příklad 23

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(2,2,7,7-tetramethyltetrahydrobis[1,3]dioxolo[4,5-b;4',5'-djpyran-5-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

C30H38CIN7O9. MW 676,13. MS 676,1 (M+H)+.

’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,55 (s, 1H); 8,47 (q , 1H, J = 4,4 Hz); 8,26 (bs,

1H); 8,22 (s, 1H); 7,22 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,3 Hz); 7,06 (bs, 1H); 7,02 (d, 1H, J ·· ·· » « «

- 155 η* • · · • · · • · · ·· ·

8,7 Hz), 6,02 (d, 1H, J - 3,9 Hz); 5,48 (d, 1H, J — 4,8 Hz); 4,65 (bs, 2H); 4,60 (dd,

1H, J = 7,9 Hz, J = 2,3 Hz); 4,42 -4,39 (mult, 1H); 4,39 - 4,37 (mult, 1H); 4,37 4,28 (mult, 2H); 4,20 - 4,13 (mult, 2H); 4,09 - 3,98 (mult, 2H); 3,62 (t, 1H, J = 5,4 Hz); 2,65 (d, 3H, J = 4,4 Hz); 1,37 (s, 3H); 1,34 (s, 3H); 1,25 (s, 6H).

Příklad 24

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(2,5-dimethylfuran-3-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 85,0 až 88,0°C ^C25^H28^CIN7°5· MW 542,00. MS 542,1 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,58 (s, 1H); 8,48 (q , 1H, J = 4,6 Hz); 8,29 (bs,

1H); 8,20 (s, 1H); 7_r22 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,3 Hz); 7,07 (d, 1H, J = 8,7 Hz);

7,05 (bs, 1H); 6,07 (s, 1H); 6,01 (d, 1H, J = 3,7 Hz); 5,89 (bs, 1H); 4,88 (s, 2H);

4,60 (bs, 2H); 4,36 (bs, 1H); 4,10 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 3,55 (t, 1H, J = 5,0 Hz); 2,66 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 2,23 (s, 3H); 2,16 (s, 3H); 1,77 (bs, 2H).

Příklad 25

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(pyridin-3 -ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran -2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 200,0 až 218,0°C ^C24^H25^C1N8°4- ⁵²⁴'⁹⁷· ^MS 525,0 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,69 (s, 1H); 8,52 (q, 1H, J = 4,6 Hz); 8,45 (s,

1H); 8,45 - 8,39 (mult, 1H); 8,35 (d, 1H, J = 5,0 Hz); 8,20 (s, 1H); 7,89 (d, 1H, J =

7,7 Hz); 7,40 (dd, 1H, J = 7,7 Hz, J = 4,8 Hz); 7,24 (dd, 1H, J = 8,5 Hz, J = 2,3 Hz);

7,11 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 6,17 (d, 1H, J = 4,4 Hz); 5_f22 (s, 2H); 4,90 - 4,84 (mult,

1H); 4,76 - 4,63 (mult, 2H); 4,60 - 4,56 (mult, 1H); 4,55 - 4,51 (mult, 1H); 4,18 4,09 (mult, 2H); 2,61 (d, 3H, J = 4,6 Hz).

Příklad

6 • · · · • * · • · · · · ·

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(5-dimethylaminomethylfuran-2-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl)

-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 78,0 až 81,0°C ^c26^H3lCIN₈O₅. MW 571,04. MS 571,1 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8,35 (s, 1H); 8,25 (s, 1H); 7,24 (bs, 1H); 7,20 (dd,

1H, J = 8,7 Hz, J = 2,5 Hz); 7,10 (d, 1H, J = 8_r7 Hz); 6,43 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 6,26 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 6,06 (d, 1H, J = 4,2 Hz); 5,08 (s, 2H); 4,73 (bs, 2H); 4,59 (t, 1H, J = 4,8 Hz); 4,30 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,74 (t, 1H, J = 5,4 Hz); 3,48 (s, 2H); 2_;82 (s, 3H); 2,20 (s, 6H).

Příklad 27

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(thiazol-2-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 208,0 až 209,0°C [a]₂i = -32,08° (c = 0,265, MeOH) ^C22^H23^CIN8°4^S· MW 531,00. MS 531,0 (M+H)+.

Ή NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,57 (s, 1H); 8,45 (q, 1H, J = 4,2 Hz); 8,38 (bs,

1H); 8,20 (s, 1H); 7,82 (d, 1H, J = 3,2 Hz); 7,75 (d, 1H, J = 3,2 Hz); 7,23 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,3 Hz); 7,13 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 7,07 (s, 1H); 5,99 (d, 1H, J = 3,5 Hz); 5,90 - 5,84 (mult, 1H); 5,49 (s, 2H); 4,69 (bs, 2H); 4,34 (bs, 1H); 4,09 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,59 - 3,50 (mult, 1H); 2,64 (d, 3H, J = 4,2 Hz); 1,74 (bs, 2H).

··

Příklad 28

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[2-(benzothiazol-2-ylmethoxy)-5-chlorbenzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 127,0 až 129,0°C ^c26^h25^cin8°4S· MW 581,06. MS 581,0 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,58 (s, 1H); 8,51 - 8,39 (mult, 2H); 8,21 (s, 1H);

8,09 (d, 1H, J = 8,1 Hz); 8,00 (d, 1H, J = 8,1 Hz); 7,50 (t, 1H, J = 8,1 Hz); 7.42 (í,

1H, J = 8,1 Hz); 7,25 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,5 Hz); 7,16 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 7,09 (bs, 1H); 6,00 (d, 1Η, J = 3,7 Hz); 5,91 - 5,84 (mult, 1H); 5,65 (s, 2H); 4,78 (bs,

2H); 4,34 (bs, 1H); 4,09 (d, 1H, J = 5,8 Hz); 3,59 - 3,50 (mult, 1H); 2,64 (d, 3H, J =

4,8 Hz); 1,74 (bs, 2H).

Příklad 29

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[2-(benzofuran-2-ylmethoxy)-5-chlorbenzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 127,0 až 130,0°C ^c27^h26^cin7°5- MW 564,01. MS 564,0 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,57 (s, 1H); 8,46 (q, 1H, J = 4,4 Hz); 8,33 (bs,

1H);8,16(s, 1H); 7,61 (d, 1H,J = 7,5 Hz); 7,56 (d, 1H, J = 8,3 Hz); 7,32 - 7,24 (mult, 1H); 7,24-7,19 (mult, 3H); 7,08-7,01 (mult, 2H); 5,99 (d, 1H, J = 3,5 Hz);

5,87 (d, 1H, J = 4,8 Hz); 5,33 (s, 2H); 4,63 (mult, 2H); 4,38 - 4,30 (mult, 1H); 4,08 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,59 - 3,48 (mult, 1H); 2,63 (d, 3H, J = 4,4 Hz); 1,73 (bs, 2H).

Příklad 30

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(isothiazol-5-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny • ·

- 1,58.4

Teplota tání: 180,0 až 183,0°C ^C22^H23^CIN8°4^S· MW 531,00. MS 531,1 (M+H)+.

Ή NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,59 (s, 1H); 8,53 (d, 1H, J = 1,5 Hz); 8,47 (q,

1Η, J = 4,8 Hz); 8,39 (bs, 1 H); 8,22 (s, 1H); 7,47 (d, 1H, J = 1,5 Hz); 7,26 (dd,' 1H, J = 8,7 Hz, J =2,7Hz); 7,15 - 7,08 (mult, 2H); 6,02 (d, 1H, J =3,7 Hz); 5,90 (bs, 1H); 5,59 (s, 2H); 4,69 (bs, 2H); 4,36 (bs, 1H); 4,11 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,56 (t, 1H, J =

5,6 Hz); 2,66 (d, 3H, J = 4,8 Hz); 1,79 (bs, 2H).

Příklad 31

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(thiofen-2 -ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran -2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 135,0 až 141,0°C

C23H24CIN7O4S. MW 530,01. MS 530,1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,58 (s, lH);8,47(q, 1H, J = 4,6 Hz); 8,35 (bs,

1H); 8,21 (s, 1H); 7,55 (dd, 1H, J = 5,0 Hz, J = 1,2Hz); 7,27 - 7,19 (mult, 2H); 7,15 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 7,09 - 7,00 (mult, 2H); 6,07 - 5,87 (mult, 1H); 6,02 (d, 1H, J =

3,3 Hz); 5,36 (s, 2H); 4,64 (bs, 2H); 4,41 (bs, 1H); 4,14 (d, 1H, J = 5,8 Hz); 3,66 3.56 (mult, 1H); 2,65 (d, 3H, J = 4,6 Hz).

Příklad 32

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(chinolin-2-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 130,0 až 134,0°C

C₂8^h27^cin8°4· MW 575,03. MS 575,1 (M+H)+. ' ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,57(s, 1H); 8,50 - 8,36 (mult, 3H); 8,21 (s, 1H);

8,02 - 7,93 (mult, 2H); 7,78 - 7,67 (mult, 2H); 7,62 - 7,53 (mult, 1H); 7,18 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 7,13 (bs, 1H); 7,06 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,00 (d, 1H, J = 3,7 Hz); 5,88 (d,

1H, J = 4,6 Hz); 5,42 (s, 2H); 4,78 (bs, 2H); 4,34 (bs, 1H); 4,09 (d, 1H, J = 5,6 Hz);

3.57 - 3,48 (mult, 1H); 2,64 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 1,73 (bs, 2H).

Příklad 33

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(4-methyl [1,2,3]thiadiazol-5-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 107,0 až 110,0°C

C22H24CIN9O4S. MW 546,01. MS 546,1 (M+H)+.

Ή NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,60 (s, 1H); 8,48 (bs, 1H); 8,39 (bs, 1H); 8,20 (s,

1H); 7,36 - 7,23 (mult, 1H); 7,18 (d, 1H, J = 8,1 Hz); 7,13 (bs, 1H); 6,02 (bs, 1H);

5,92 (bs, 1H); 5,60 (s, 2H); 4,66 (bs, 2H); 4,36 (bs, 1H); 4,12 (bs, 1H); 3,57 (bs, 1H); 2,68 (bs, 6H); 1,78 (bs, 2H).

Příklad 34

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(naftalen -1-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 115,0 až 119,0°C ^C29^H28^C1N7°4· ^W 574,04. ^MS 574,9 (M+H)⁺ 'H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,58 (s, 1H); 8,53 - 8,45 (mult, 1H); 8,34 (bs, 1H);

8,19 (s, 1H); 8,16 (d, 1H, J = 7,9 Hz); 7,99 - 7,86 (mult, 2H); 7,72 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 7,63 - 7,45 (mult, 3H); 7,35 - 7,23 (mult, 2H); 7,09 (bs, 1H); 6,01 (bs, 1H); 5,90 (bs, 1H); 5,63 (s, 2H); 4,64 (bs, 2H); 4,36 (bs, 1H); 4,11 (d, 1H, J = 5,0 Hz); 3,56 (bs, 1H); 2,66 (d, 3H, J = 4,2 Hz); 1,77 (bs, 2H).

Příklad 35

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(3,5-di methylisoxazol-4-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

160 • · · · · · • · « • · · • · ··« ^C24^H27^C,N8°5- ^mw 542,99. MS 543,2 (M+H)+.

’H NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ 8,55 (bs, 1H); 8,44 (bs, 1H); 8,31 (bs, 1H); 8/6 (s,

1H); 7,25 (d, 1H, J = 8,.5 Hz); 7,11 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 7,08 (bs, 1H); 5,98 (bs, 1H);

5,83 (bs, 1H); 4,95 (s, 2H); 4,58 (bs, 2H); 4,37 (bs, 1H); 4,11 (d, 1H, J = 4,9 Hz);

3,57 (bs, 1H); 2,64 (d. 3H, J = 3,8 Hz); 2,39 (s, 3H); 2,22 (s, 3H), 1,15 (bs, 2H).

Příklad 36

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(2-oxo-2-piperidin-l-ylethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

C25H₃₁CIN₈O₅ M.W. 567.00. MS 567 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8,34 (s, 1H); 8,29 (bs, 1H); 7,3 (bs, 1H); 7,18 (d,

1H, J = 8,9 Hz); 6,89 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,07 (d, 1H, J = 4,1 Hz); 4,91 (s, 2H);

4,82 (bs, 2H); 4,64 (t, 1H, J = 4.,3 Hz); 4,38 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,79 (t, 1H, J = 5,4 Hz); 3,51 (m, 4H); 2,8 (s, 3H); 1,6 (m, 6H).

Příklad 37

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(5-chlor-2-fenylkarbamoylmethoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C26^H27^CIN8°5 M.W. 567,00. MS 567 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, D6 DMSO) δ 8,6 (bs, 1H); 8,5 (bd, 1H, J = 5,5 Hz); 8,4 (bs, 1H); 7,6 (d, 2H, J = 8,2 Hz); 7/3 (t, 2H, J = 8,2 Hz); 7,23 (d, 1H, J = 8,8 Hz);

7,12 (bs, 1H); 7,03 (t, 1H, J = 8,2 Hz); 6,96 (d, 1H, J = 8,8 Hz); 6,0 (d, 1H, J = 4,0 Hz); 5,9 (bs, 1H); 4,8(s, 2H); 4,78 (bs, 2H); 4,39 (bs, 1H); 4,1 (d, 1H,J = 5,5 Hz); 3_r59 (m, 1H); 2,62 (d, 3H, J = 4,0 Hz); 1,94 (bs, 2H).

Π ·ζ «1 · · · · *

- 161 -» ·

Příklad 38

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(5-chlor-2-dimethylkarbamoylmethoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^22^27^'^8θ5 M.W. 518,96. MS 519 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,31 (s, 1H); 8,26 (bs, 1H); 7,28 (bs, 1H); 7,17 (dd, 1H, J = 8,9, 2,5 Hz); 6,83 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,03 (d, 1H, J = 4,0 Hz); 4,9 (s, 2H); 4,82 (bs, 2H); 4,6 (t, 1H, J = 4,6 Hz); 4,26 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3.7 (t, 1H, J =

5,6 Hz); 3,02 (s, 3H); 2,9 (s, 3H); 2,8 (s, 3H).

Příklad 39

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[2-(benzylkarbamoylmethoxy)-5-chlorbenzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C27^H29^CIN8°5 M.W. 581,04. MS 581 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,3 (s, 1H); 8,2 (s, 1H); 7,3 d, 1H, J = 2,5Hz); 7,19 (dd, 1H, J = 8,8, 2,6 Hz); 6,9 (d, 1H, J = 8,8 Hz); 6,02 (d, 1H, J = 4,1 Hz); 4,82 (bs, 2H); 4,64 (s, 2H); 4,58 (t, 1H, J = 4,5 Hz); 4,4 (s, 2H); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,78 (t, 1H, J = 4,8 Hz); 2,78 (s, 3H).

Příklad 40 (2R,3R,4S,5S)-(2-{[9-(4-Amino-3-hydroxy-5-methylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]methyl}-4-chlorfenoxy)octová kyselina ^c20^H22^C1N7°6 ^M,W· ⁴⁹¹/⁹⁰· ^{MS 492} (M+H⁺).

Příklad

1 ·« ·· • · · · • · · ο*·· · •16 2 -» ···· ··

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6»[5-chlor-2-[2-(4-methylpiperazin-l-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C25^H32^C1N9°5 ^M-^W· ⁵⁷⁴/⁰⁴· 574 (M+H⁺) ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8,34 (s, 1H); 8,29 (bs, 1H); 7,29 (bs, 1H); 7,19 (d,

1H, J = 8,9 Hz); 6,92 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,06 (d, 1H, J = 4,1 Hz); 4,91 (s, 2H);

4,82 (bs, 2H); 4,59 (t, 1H, J = 5,3 Hz); 4,30 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,79(t, 1H, J = 5,6 Hz); 3,6 (m, 4H); 2,80 (m, 3H); 2,4 (m, 4H); 222 (s, 3H).

Příklad 42

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(5-chlor-2-propylkarbamoylmethoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C23^H29^C1N8^C1N8°5^{: m}-^w· ⁵³²/⁹⁹· ^{MS 533} (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,37 (s, 1H); 8,29 (s, 1H); 7,27 d, 1H, J = 2,5 Hz);

7,2 (dd, 1 H, J = 8,8, 2,6 Hz); 6,95 (D, 1H, J = 8,8 Hz); 6,07 (d, 1H, J = 4,0 Hz);

4,82 (bs, 2H); 4,6 (m, 3H); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,8 (t, 1H, J = 5,6 Hz); 3,2 (t. 2H,

J = 7,1 Hz); 2,8 (s, 3H); 1,5 (m, 1H); 0,83 (t, 3H, J = 7,1 Hz).

Příklad 43

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(2-morfolin-4-yl-2-oxoethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C24^H29^CIN8°6 ^M-^W· 561,00. MS 561 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,35 (s, 1H); 8,28 (bs, 1H); 7,3 (bs, 1H); 7,2 (d,

1H, J = 8,9 Hz); 6,94 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,07 (d, 1H, J = 4,1 Hz); 4.94 (s, 2H);

4,82 (bs, 2H); 4,63 (t, 1H, J = 5,3 Hz); 4,35 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,92 (t, 1H, J = 5_Z6 Hz); 3,65 (m, 4H); 3,58 (m, 4H); 2,8 (s, 3H).

3»δ5··-· · • · • » · · ·

Příklad

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6 - [5-chlor-2-(2-oxo-2-pyrrolidin-l-ylethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

C24H29CIN8O5 M.W. 545,00. MS 545 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,28 (s, 1H); 8,25 (s, 1H); 7,24 (bs, 1H); 7,18 (d,

1H, J = 8,9 Hz); 6,89 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,07 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 4.82 (bs, 2H);

4,8 (s, 2H); 4,64 (t, 1 H, J = 5,3 Hz); 4,38 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,92 (t, 1H, J = 5.6 Hz); 3,51 (t, 2H, J = 6,7 Hz); 3,41 (t, 3H, J = 6,7 Hz); 2,8 (s, 3H); 1,92 (m, 2H);

1,82 (m, 2H).

Příklad 45

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(5-chlor-2-dipropylkarbamoylmethoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C26^H35^CIN8°5 M.W. 575,07. MS 575 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,32 (s, 1H); 8,27 (bs, 1H); 7,28 (bs, 1H); 7,2 (d,

1H, J = 8,9 Hz); 6,86 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,04 (d, 1H, J = 3,8 Hz); 4,92 (s, 2H);

4,82 (bs, 2H); 4,6 (t, 1H, J = 5,5 Hz); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,8 (t, 1H, J = 5,6 Hz); 3,3(m, 4H); 2,8 (s, 3H); 1,65 (m,1H); 1,48 (m,1H); 0,97 (t, 3H, J = 7,2 Hz);

0,88 (t, 3H, J = 7,2 Hz).

Příklad 46

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlor-2-[(2-methoxy ethylkarbamoyl)methoxyJbenzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny • 4 • 4 ·· • 4 4 4

4 ·

- «1*64**-* •444 ·4 ··

4 4

4 ·

4 4

4 4 »· 4444 ^C23^h29^CIN8C>6 M.W. 548,99. MS 549 (M+H)⁺.

¹ H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8,37 (s, 1H); 8,3 (s, 1H); 7,3 (d, 1H, J = 2,5 Hz);

7,2 (dd, 1H, J = 8,8, 2,5 Hz); 6,95 (d, 1 H, J = 8,8 Hz); 6,07 (d, 1H, J = 4,0 Hz);

4,82 (bs, 2H); 4.6 (m, 3H); 4,3 (d, 1H, J = 5,8 Hz); 3,8 (m, 1H); 3,41 (s, 3H); 3,3 (m, 4H); 2,8 (s, 3H).

Příklad 47

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(5-chlor-2-methylkarba moylmethoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

C21^H25^C,N8°5 M.W. 504,93. MS 505 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,32 (s, 1H); 8,26 (s, 1H); 7,24 (d, 1H, J = 2,5 Hz);

7,2 (dd, 1H, J = 8,9, 2,5 Hz); 6,83 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,04 (d, 1H, J = 3,9 Hz);

4,82 (bs, 2H); 4,6 (t, 1H, J = 5,5 Hz); 4,58 (s, 2H); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,8 (t,

1H, J = 5,6 Hz); 2,8 (s, 6H).

Příklad 48

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(5-chlor-2-cyklohexylkarbamoylmethoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrof uran- 2-karboxylové kyseliny ^C26^H33^CIN8°5 ^M-^W· ⁵⁷³f°⁵· MS ⁵⁷³ (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, D6 DMSO) d 8,6 (s, 1H); 8,43 (m, 1H); 8,4 (bs, 1H); 8,2 (s, 1H); 7,8 (bd, 1H,J =

Hz); 7,2 (d, 1H, J = 8,8 Hz); 7,1 (bs, 1H); 6,82 (d, 1H, J = 8,8 Hz); 6,0 (d, 1H, J = 4.0 Hz); 5,95 (bs, 1H); 4,7 (bs, 2H); 4,52 (s, 2H); 4,4 (m, 1H); 4,1 (d,1H, J =

5,7 Hz); 3,6 (m, 2H); 2.62 (d, 3H, J = 4,2 Hz); 1,65 (m,4H); 1,5 (m, 1H); 1,.2 (m, 5H).

Příklad

9 ·· • · · · * · ·

- Α·6 5*·4 ·♦·· ♦· • ♦· ·· ·· · · · • · ♦ * • · · · · • · · · ··· ·♦ ··♦·

Ethylester (2R,3R,4S,5S)-[(2-{[(9-(4-amino-3-hydroxy-5-methyl karbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]methyl}-4-chlorfenoxy)acetyl]piperazin-1-karboxylové kyseliny ^c27^h34^cin9O7 M.W. 632,07. MS 632 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8,33 (s, 1H); 8,28 (s, 1H); 7,3 (bs, 1H); 7,2 (d, 1H, J = 8,7 Hz);

6,93 (d, 1H, J - 8,7 Hz); 6,07 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 4,93 (s, 2H); 4,82 (bs, 2H); 4,6 (t, 1H, J = 5.5 Hz); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 4,1 (q, 2H, J = 7,1 Hz); 3,79 (t, 1H, J = 5,5 Hz); 3,6 (m, 4H); 3,42 (m, 4H); 2,8 (s, 3H); 1.22 (t, 3H, J = 7,1 Hz).

Příklad 50

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[2-(2-azetidin-l-yl-2-oxoethoxy)-5-chlorbenzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C23^H27^CIN8°5 M.W. 530,97. MS 531 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,33 (s, 1 H); 8,27 (s, 1 H); 7,3 (s, 1H); 7,2 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,85 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,07 (d, 1H, J = 4,1 Hz); 4,82 (bs, 2H); 4,63 (s, 2H); 4,61 (t, 1H, J = 5,3 Hz); 4,37 (m, 3H); 4,02 (m, 2H); 3,82 (t, 1H, J = 5,6 Hz); 2,8 (s, 3H); 2,3 (m, 2H).

Příklad 51

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlor-2-[(2-morfolin-4-ylethylkarbamoyl)methoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C26^H34^CIN9°6 M.W. 604,07. MS 604 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,36 (s, 1H); 8,29 (s, 1H); 7,3 (s, 1H); 7,2 (d, 1H,

J = 8,7 Hz); 6,93 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,08 (d, 1H, J = 3,7 Hz); 4,84 (bs, 2H); 4,63 (t. 1H, J = 5,5 Hz); 4,6 (s, 2H); 4,38 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,9 (t, 1H, J = 5,3 Hz);

3,55 (m, 4H); 3,4 (t, 2H, J = 6,4 Hz); 2,8 (s, 3H); 2,42 (t, 2H, J = 6,4 Hz); 2,4 (m, 4H).

• · • 9 ·· • 9 * 9 • 9 ·

- J*66·

9·

9

9 ·· ·«··

Příklad 52

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlor-2-[2-oxo-2-(4-fenylpiperazin-l-yl)ethoxy]benzylamino)purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

C30H34CIN9O5 M.W. 636.12. MS 636 (Μ+ΗΓ.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,32 (s, 1H); 8,26 (s, 1H); 7,3 (s,..lH); 7,2 (m, 3H)

6,9 (m, 4H); 6,07 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 4.92 (s, 2H); 4,82 (bs, 2H); 4,59 (t, 1H, J =

5,3 Hz); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,72(m, 5H); 3,11 (m, 4H); 2, 8 (s, 3H).

Příklad 53

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlor-2-[2-(4-cyklohexylpiperazin-l-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino)purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C30^H40^C1N9°5 ^M-^W· 642,16. MS 642 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,33 (s, 1H); 8,29 (s, 1H); 7,3 (s, 1H); 7,2 (dd, 1H,

J = 8A 2,6 Hz); 6,93 (d, 1H, J = 8,8 Hz); 6,08 (d, 1H, J = 3,8 Hz); 4,93 (s, 2H);

4,82 (bs, 2H); 4,63 (t, 1H, J = 5,5 Hz); 4,38 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,83(m, 1H); 3,6 (m, 4H); 2,8 (s, 3H); 2,6 (m, 4H); 2,32 (m, 1H); 1,8-1,2 (m, 10H).

Příklad 54

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlor-2-[2-(4-ethylpiperazin-l-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

C26H34CIN9O5 M.W. 588,07. MS 588 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) 8,32 (s, 1H); 8,28 (s, 1H); 7,3 (bs, 1H); 7,2 (d, 1H, J • 4

- J67**-Í • 444 *4

4* »4

4 *

4 4

4 4 •4 4444 = 8,7 Hz); 6,93 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,07 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 4,93 (s, 2H); 4.82 (s, 2H); 4.64 (t, 1H, J = 5,3 Hz); 4,38 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 3,9 (t, 1H, J = 5,5 Hz); 3,6 (bs, 4H); 2,8 (s, 3H); 2,45 (m, 6H); 1,05 (t, 3H, J = 7,3 Hz).

Příklad 55

Methylamid (2S,3S, 4R,5R)-3-amino-5-[6-(5-chlor-2-cyklopropylkarbamoylmethoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrof uran- 2-karboxy lové kyseliny

C23H₂7CIN₈O₅ M.W. 530,98. MS 531 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8,37 (s, 1H); 8,31 (s, 1H); 7,3 (bs, 1H); 7,2 (dd, 1H, J = 8,6, 2,6

Hz); 6,85 (d, 1H, J = 8,6 Hz); 6,07 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 4,82 (bs, 2H); 4,58 (m,

3H); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,75 (t, 1H, J = 5,6 Hz); 2,8 (s, 3H); 2,63 (m, 1H); 0,7 (m, 2H); 0,5 (m, 2H).

Příklad 56

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-karbamoylmethoxy-5-chlorbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^c20^H23^clN8°5

M.W. 490,91. MS 491 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,37 (s, 1H); 8,31 (s, 1H); 7,36 (d, 1H, 2,65 Hz);

7,25 (dd, 1H, J = 8,6, 2,6 Hz); 6,96 (d, 1H, J = 8,6 Hz); 6,09 (d, 1H, J = 4,28 Hz); 4,88 (s, 2H); 4,62 (m, 3H); 4,33 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,77 (t, 1H, J = 5,6 Hz); 2,84 (s, 3H).

· · · ·ζ

- 1& $*** ♦ * ♦ * »999 9 · 99· *

999

Příklad 57

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlor-2-[2-(4-cykl propylpiperazin-l-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4

-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C27^H34^C1N9°5 ^M*^W· ^60θ/θ⁸· MS 600 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,32 (s, 1H); 8,28 (s, 1 H); 7,3 (bs, 1H); 7,2 (dd,

1H, J = 8,8, 2,8 Hz); 6,93 (d, 1H, J = 8,8 Hz); 6,07 (d, 1H, J = 4,06 Hz); 4,89 (s, 2H); 4,83 (bs, 2H); 4,64 (t, 1H, J = 4,9 Hz); 4,35 (d, 1H, J = 5,8 Hz); 3,86 (t, 1H, J = 5,7 Hz); 3,53 (m, 4H); 2.,80 (s, 3H); 2,60 (m, 4H); 1,63 (m,lH); 0,47 (m, 2H); 0,42 (m, 2H).

Příklad 58

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlor-2-[2-(4-isopropylpiperazin-l-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4

-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

C27H36CIN9O5 M.W. 602,1. MS 602 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,28 (s, 1H); 8,27 (s, 1H); 7,29 (bs, 1H); 7,2 (dd,

1H, J = 8,8, 2,6 Hz); 6,9 (d, 1H, J = 8,8 Hz); 6,11 (d, 1H, J = 3,2 Hz); 4,93 (s, 2H);

4,9 (m, 1H); 4,82 (s, 2H); 4,53 (d, 1H, J = 6,2 Hz); 4,28 (t, 1H, J = 5,5 Hz); 3,74 (bs, 4H); 3,04 (m, 1H); 2,84 (m, 4H); 2,75 (s, 3H); 1,66 (d, 6H, J = 6,4 Hz).

Příklad 59

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlor-2-[2-oxo-(4-propylpiperazin-l-yl)ethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

C27H36CIN9O5 M.W. 602,1. MS 602 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,26 (s, 2H); 7,28 (bs, 1H); 7,2 (dd, 1H, J = 8,4, 2,2 Hz); 6,93 (d, 1H, J = 8,4 Hz); 6,1 (d, 1H, J = 3,2 Hz); 4,92 (s, 2H); 4,9 (m. 1H);

« · » • · · » ···

-.549./ • · > · * » · ·

I · ♦

*.* ·««·

4,82 (s, 2H); 4,54 (cl, 1H, J = 6,4 Hz); 4,33 (t, 1H, J = 6,19 Hz); 3,66 (bs, 4H); 2,74 (s, 3H); 2,66 (m, 4H); 2,49 (t, 2H, J = 7,9 Hz); 1,57 (m, 2H); 0,93 (t, 3H, J = 7_f2 Hz).

Příklad 60

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlor-2-[2-(4-cyklopentylpiperazin-l-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C29^H38^CIN9°5 M.W. 628,14. MS 628 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8,31 (s, 1H); 8,28 (s, 1H); 7,3 (s, 1H); 7,2 (dd, 1H, J = 8,6, 2,6 Hz); 6,93 (d, 1H, J = 8,6 Hz); 6,08 (d, 1H, J = 3,8 Hz); 4,89 (s, 2H);

4,82 (s. 2H); 4,70 (t, 1H, J = 4,8 Hz); 4,4 (d, 1H, J = 5,9 Hz); 3,98(t, 1H, J = 5,.6 Hz); 3,6 (m, 4H); 2,78 (s, 3H); 2,55 (m, 4H); 1,9-1,2 (m, 9H).

Příklad 61

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{2-[2-(4-benzylpiperazin-l-yl)-2-oxoethoxy]-5-chlorbenzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C31^H36^CIN9°5 M.W. 650,1. MS 650 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,30 (s, 1H); 8,27 (s, 1H); 7,27 (m, 7H); 6,90 (d,

1H, J = 8,9 Hz); 6,06 (d, 1H, J = 4,1 Hz); 4,85 (s, 2H); 4,81 (s, 2H); 4,61 (t. 1H, J = 4,5 Hz); 4,32 (d, 1H, J = 5,7 Hz); 3,79(t, 1H, J = 5,6 Hz); 3,56 (m, 4H); 3,5 (s,

2H); 2,79 (s, 3H); 2,43 (m, 4H).

Příklad 62

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlor-2-[2-oxo-(3-oxopiperazin-1-y1)ethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny »· o '* · * • · ·

Ό·Μ ·<·· ·Ί

J?7í ·· ·» • · • · • · te« ··· ·· • · · • « • · ····

C24^H28^CIN9°6 M.W. 574,00. MS 574 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8,32 (s, 1H); 8,27 (s, 1H); 7,30 (s, 1H); 7,2 (m,

1H); 6,94 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,06 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 4,93 (s, 2H); 4,82 (bs, 2H); 4,62 (t, 1H, J = 4,5 Hz); 4,33 (d, 1H, J = 5,7 Hz); 4,13(s, 1H); 3,80 (m, 1H);

3,8 (t, 1H, J = 4,5 Hz); 3,76 (bs, 2H); 3,38 (m,1H); 3,30 (m,1H); 2,80 (s, 3H).

Příklad 63

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(2-oxo-2piperazin-l-ylethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrof uran- 2-karboxylové kyseliny ^C24^H3O^CIN9°5 M.W. 560,01. MS 560 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,34 (s, 1H); 8,28 (s,1H); 7,29 (s,1H); 7,19 (dd,

1H, J = 8,6, 2,6 Hz); 6,92 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,06 (d, 1H, J = 4,3 Hz); 4,89 (s, 2H); 4,82 (s, 2H); 4,59 (dd, 1H, J = 5,0, 4,.5 Hz); 4,30 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,74(d, 1H,J = 5,6Hz); 3,54 (m, 4H); 2,80 (m, 7H).

Příklad 64

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlor-2-[2—(4— -ethyl-3-oxopiperazin-l-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C26^H32CIN₉O₆ M.W. 602,1. MS 602 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz. CD3OD) δ 8,33 (s, 1H); 8,28 (s, 1H); 7,30 (m, 1H); 7.2 (t, 1H, J = 6,2 Hz); 6,94 (dd, 1H, J = 8,7, 3,9 Hz); 6,06 (d, 1H, J = 4,1 Hz); 4,92 (s, 2H):

4,83 (m, 2H); 4,61 (t, 1H, J = 4,2 Hz); 4,32 (d, 1H, J = 5,7 Hz); 4,22 (s, 1H); 4,13 (s,1H); 3,8 (m, 3H); 3.46 (m, 4H); 2,81 (s, 3H); 1,12 (q, 3H, J = 7,3).

• φ φ

Φ· ΦΦΦΦ

- 171 • Φφφ • φ • ΦΦΦ φφ

Příklad 65

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(5-chlor-2-{2-[4-(2-chlorfenyl)piperazin-l-yl]-2-oxoethoxy}benzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C30^H33^CIN9O5 M.W. 670,55. MS 670 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,29 (s, 1H); 8,23 (s,1H); 7,33 (m, 2H); 7,2 (m, 2H); 6,97 (m,

3H); 6,03 (d, 1H, J = 4,2 Hz); 4,92 (s, 2H); 4,83 (s, 2H); 4^6 (t, 1H, J = 4,6 Hz); 4,28 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,73(m, 5H); 2,98 (m, 4H); 2,77 (s, 3H).

Příklad 66

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(fenethylkarbamoylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrof uran- 2 -karboxylová kyseliny

C2₈H₃₁CIN₈O₅ M.W. 595,06. MS 595 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz. CD3OD) δ 8,37 (s, 1H); 8,27 (s, 1H); 7,3 (d, 1H, J = 2,5 Hz);

7,2-7,02 (m, 6H); 6,83 (d, 1H, J = 8,8 Hz); 6,06 (d, 1H, J = 4,3 Hz); 4_r76 (s, 2H);

4,57 (m, 3H); 4,3 (d, 1H, J = 5,7 Hz); 3,74 (t, 1H, 5,6 Hz); 3,5 (t, 4H, 7 Hz); 2,80 (s, 3H); 2,76 (t, 1H, J = 7 Hz).

Příklad 67

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(5-chlor-2-fenethyloxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

C26H28CIN7O4. M.W. =

538,01. M.S. 538 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,35 (s,1H); 8,27 (s, 1H); 7,3-7,05 (m, 7H); 6,92 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 6,05 (d, 1H, J = 4,2 Hz); 5,45 (s, 2H); 4,65 (bs, 2H); 4,59 (m, 1H); 4,25 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 4,2 (dd, 2H, J = 6,5, 6,0 Hz); 3,74 (m,1H); 3,02 (dd, 2H, J = 6,5, 6,0 Hz); 2,8 (s, 3H).

- 172 Příklad 68

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6 - {5-chlor-2-[2-(3,5-dimethylpiperazin-l-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C26^H34^CIN9°5 M.W. 588.1. MS 588 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz. CD₃OD) δ 8,34 (s, 1H); 8,28 (s, 1H); 7,28 (S, 1H); 7,18 (dd,

1H, J = 8,7, 2,6 Hz); 6,92 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,06 (d, 1H, J = 4,1 Hz); 4,81 (m,

2H); 4,60 (t, 1H, J = 4,8 Hz); 4,4 (d, 1H, J = 12 Hz); 4,31 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,83 (d, 1H, 12.9 Hz); 3,76 (m, 1H); 3,13 (m, 1H); 2,81 (s, 3H); 2,72 (m, 2H); 2,51 (s,

1H); 2,27 (t, 1H, J = 12 Hz); 1,27 (s,1H); 1,09 (d, 6H, J = 6,4 Hz).

Příklad 69

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlor-2-[4-(4-dimethylaminopiperidin-l-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C27^H36^CIN9°5 M.W. 602,09. MS 602 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz. CD3OD) δ 8,32 (s, 1H); 8,26 (s, 1H); 7,28 (s, 1H); 7,16 (dd, 1H, J = 8,7, 2,4 Hz); 6,90 (dd, 1H, J = 8,7, 2,4 Hz); 6,06 (d, 1H, J = 4,0 Hz); 4,81 (s, 2H); 4,58 (t,

1H, J = 4,8 Hz); 4,55 (d, 1H, J = 12,0 Hz); 4,28 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 4,0 (d, 1H, J 13 Hz); 3,72 (s, 1H); 3,05 (t, 1H, J = 5,7 Hz); 2,79 (s, 3H); 2,62 (t, 1H, J = 13 Hz); 2,39 (m,1H); 2,21 (s, 6H); 1,87 (s,2H); 1,4-1,25 (m, 4H).

Příklad 70

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-5-(6-{2-[2-(4-adamantan-2-ylpiperazin-l-yl)-2-oxoethoxy]-5-chlorbenzylamino}purin-9-yl}-3-amino-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny • · ·

- 173 ··· ·

C34H44CIN9O5 M.W. 694.24. MS 694 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,35 (s, 1 H); 8,29 (s, 1H); 7,31 (d, 1H, J = 2,1 Hz);

7,2 (dd, 1H, J = 8,7, 2,6 Hz); 6,93 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,06 (d, 1H, J = 4,3 Hz);

4,83 (m, 2H); 4,58 (t, 1H, J = 4,8 Hz); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,74 (t, 1H, 5,48 Hz); 3,59 (t, 4H, 4,87 Hz); 2,82 (s, 3H); 2,4 (s, 4H); 2,1-1,27 (m, 17H).

Příklad 71

Amid (2R,3R,4S,5S)-1-[(2-{[9-(4-amino-3-hydroxy-5-methy1karbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino jmethyl}-4-chlorfenoxy)acetyl]piperidin-4-karboxylové kyseliny ^C26^H32^CIN9O6 M.W. 602,05. MS 602 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz. CD3OD) δ 8,33 (s, 1H); 8,29 (s,1H); 7,29 (s,1H); 7,18 (dd, 1H, J = 8,7, 2,6 Hz);

6,93 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,06 (d, 1H, J = 4,3 Hz); 4,90 (s, 3H); 4,61 (t, 1H, J = 4,3 Hz); 4,4 (d, 1H); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 4,05 (d, 1H); 3,76 (t, 1H); 3,28 (m, 1H); 2,81 (s, 3H); 2,75 (m,1H); 2,5(m, 1H); 1,83 (d,2H); 1,63 (m,3H).

Příklad 72

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlor-2-[2-(4-cykloheptylpiperazin-l-yl) - 2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

C31 H42 Cl Ng O₅ M.W. 656,19. CIMS 656.1 (M+H)+. ¹H NMR (400 MHz. CD3OD) δ 8,31 (s, 1H); 8,29 (s, 1H); 7,31 (s, 1H); 7,20 (dd, 1H, J 8,71,2,69Hz); 6,94 (d, 1H, J = 8,71 Hz); 6,08 (d, 1H, J = 3,74Hz); 4,90 (s, 2H); 4,82 (s, 2H); 4,72 (t, 1H J = 4,56Hz); 4,42 (d, 1H, J = 6,02Hz); 4,03 (t, 1H, J = 4,56Hz); 3,62 (s, 4H); 2,78 (s, 3H); 2,66 (s, 5H); 1,81-1,38 (m, 12H) • * · · · ·

- 174 Příklad 73

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-5-{6-[2-(adamentan-2-ylkarbamoylmethoxy)-5-chlorbenzylamino]purin-9-yl}-3-amino-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

C30H37CI N₈O₅ M.W. 625,13. CIMS 625.0 (M+1). ¹H NMR (400 MHz. CD₃OD) δ 8,36 (s, 1H); 8,28 (s, 1H); 7,34 (d, 1H, J = 2,49Hz); 7,24 (dd, 1H, J = 8,72,

2,49Hz); 6,94 (d, 1H, J = 8,93Hz); 6,06 (d, 1H, J = 4,15); 4,83 (s, 2H); 4,64 (s, 2H);

4,58 (t, 1H, J = 4,77Hz), 4,30 (d, 1H, J = 5,61 Hz); 4,01 (s, 1H); 3,74 (t, 1H, í.....

5,61 Hz); 2,81 (s, 3H); 1,81-1,43 (m, 14H). J· • · · » • 4 • ’ • · · ♦

Příklad74 i*. !

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(1-fenylethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C26^H28^C1N7°4* ^M,W· 538,01. M.S. 538 (M+H)⁺ = 538,01. M.S. 538 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,37 (s, 1H); 8,25 (s,

1H); 7,42-7,08 (m, 6H); 7,0 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 6,74 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 6,05 (d, 1H, J = 4,2 Hz); 5,4 (q, 1H, J = 6,8 Hz); 4,82 (bs, 2H); 4,59 (m, 1H); 4,3 (d, 1H, J = 5,5 Hz); 3,73 (m, 1H); 2,8 (s, 3H); 1,58 (bs, 3H).

Příklad 75 terc-Butylester (2R,3R,4S,5S)-4-[(2-{[9-(4-amino-3-hydroxy-5-methylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]methyl}-4-chlorfenoxy)acetyl]piperazin-l-karboxylové kyseliny ^C29^H38^C|N9°7 M.W. 660,13. MS 660 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,33 (s, 1H); 8,28 (bs, 1H); 7,3 (bs, 1H); 7,2 (d, 1H, J = 8,9

Hz); 6,93 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,07 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 4,91 (s, 2H); 4,82 (bs, 2H);

4,6 (t, 1H, J = 4,5 Hz); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,81 (t, 1H, J = 5,0 Hz); 3,6 (m,

4H); 3,42 (m, 4H); 2,8 (s, 3H); 1,42 (s, 9H).

··· · ·· • · · ·

- 175 Příklad 76

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(5-chlor-2-kyanomethoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C20^H21^C1N8°4 ^M-^W· 472,89. MS 473 (M+H)⁺ ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8,36 (s, 1H); 8,29 (s, 1H); 7,32 (bs, 1H); 7,28 (dd, 1H, J = 8,9, 2,5 Hz); 7,08 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,07 (d, 1H, J = 4,1 Hz); 5,05 (s,

2H); 4,8 (bs, 2H); 4,6 (t, 1H, J = 4,9 Hz); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,78 (t, 1H, J 5.5 Hz); 2,8 (s, 3H).

Příklad 77

Methylester (2R,3R,4S,5S)-(2-{[9-(4-amino-3-hydroxy-5-methylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]methyl}-4-chlorfenoxy)octové kyseliny ^C21^H38^CIN7°6 M.W.505,92. MS 506 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,35 (s, 1H); 8,29 (s, 1H); 7,3 (bs, 1H); 7/ (dd,

1H, J = 8,9, 2,5 Hz); 6,9 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,04 (d, 1H, J = 4,0 Hz); 4,8 (m, 4H);

4.6 (t, 1H, J = 4,5 Hz); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,78 (m, 4H); 2,8 (s. 3H).

Příklad 78

Ethylester (2R,3R,4S,5S)-(2-{[9-(4-amino-3-hydroxy-5-methylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]methyl}-4-chlorfenoxy)octové kyseliny θ22^Η26θ^ΙΝ7θ6 M.W .519,95. MS 520 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,35 (s, 1H); 8,29 (s, 1H); 7,3 (bs, 1H); 7,2 (dd,

1H, J = 8,9, 2,5 Hz); 6,9 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,04 (d, 1H, J = 4,0 Hz); 4,82 (s, 2H);

4,8 (s, 2H); 4,6 (t, 1H, J = 4,5 Hz); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 4,21 (q, 2H, J = 7,1 Hz); 3,78 (t, 1H, J = 5,4 Hz); 2,8 (s, 3H); 1 /2 (t, 3H, J = 7/ Hz).

• ·

- 176 Příklad 79

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(4,5-dihydro-lH-imidazol-2-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny • ·

9 9

C22H26CIN9O4 M.W.515,96. MS516(M+H)⁺. ¹ *;:* * · · • · · ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 8,4 (s, 1H); 8,3 (s, 1H); 7,32(bs, 1H); 7,2(d, 1H,J *?’ = 8,9 Hz); 6,97 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,05 (d, 1H, J = 3,8 Hz); 4,84 (m, 4H); 4,6 (t, ;···^:·

1H, J = 4,5 Hz); 4,3 (d, 1H. J = 5,6 Hz); 3,75 (t, 1H, J = 5,4 Hz); 3,62 (m, 4H); 2,.8 (s, 3H).

• · · · • · • ·

99 · ·

• · e

Příklad80 Ϊ’. ’

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[l-(2-benzyloxy-5-chlorfenyl)ethylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C26^H28^C1N7°4’

M.W. = 538,01. M.S. 538 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) 8 8,39 (bs, 1H); 8,2 (d, 1H, J = 4,5 Hz); 7,5-7,22 (m, 5H); 7,18 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 7,0 (d, 2H, J =

8,6 Hz); 6,05 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 5,79 (bs, 1H); 5,18 (s, 2H); 4,6 (t, 1H, J = 4,5 Hz); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,7 (m, 1H); 2,8 (s, 3H); 1,6 (d, 3H, J = 6,8 Hz).

Příklad 81

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzyloxy-5-chlorbenzylamino)-2-chlorpurin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

M.W. = 558,43. M.S. 558 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, D6DMSO) δ 8,82 (m, 1H); 8,6 (bs, 1H); 8,2 (bs, 1H); 7,43-7,02 (m, 7 H); 5,95 (bs, 2H); 4,62 (bs, 2H); 4,3 (bs, 1H); 4,1 (m, 2H); 3,52 (m, 1H); 3,1 (d, 3H, J = 5,0 Hz); 2,42 (bs, 2H); 1,75 (bs,2H).

• · · ·

- 177 • ·· ·

Příklad 82

Methylamid (2S,3S,4R, 5R) --3-amino-5-[ 6-(2-benzylsulfanyl-5-chlorbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny • · ·· · • · * • · * c₂5^h26^c1n7°4^s· ^M-^w· :

• · · · = 540,05. M.S. 540 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,35 (s,1H); 8,27 (s, 1H); 7,4-7,1 (m, 8H); 6,07 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 4,8 (bs, 2H); 4,61 (m, 1H); 4,35 J (d, 1H, J = 5,8 Hz); 4,08 (s, 2H); 3,82 (m, 1H); 2,8 (s, 3H).

• · · · • ·

Příklad83 í, *, • · · * ·

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzyloxy-5-brombenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

C₂5^H26^BrN7°4’ ^M· ^W* =

568.43. M.S. 568 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,35 (s,1H); 8,25 (s, 1H); 7,42-7^23 (m, 7H); 6,97 (d, 1H, J = 9,3 Hz); 6,06 (d, 1H,J = 4,1 Hz); 5,13 (s, 2H); 4,8 (bs, 2H); 4,6 (m, 1H); 4,3 (d, 1H, J = 5,5 Hz); 3,79 (m,1H); 2,8 (s,

3H).

Příklad 84

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzyloxy-5-fluor-benzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C25^H26^FN7°4* ^M· ^W· =

507,53. M.S. 508 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,32 (s, 1H); 8,26 (s, 1H); 7,42-7,22 (m, 4H); 7,1-6,9 (m, 4H); 6,06 (d, 1H, J = 4,2 Hz); 5,13 (s,2H);

4,8 (bs, 2H); 4,5 (m, 1H); 4,3 (d, 1H, J = 5,5 Hz); 3,79 (m,lH); 2,8 (s, 3H).

·· 4· • ·

- 178 •9 ♦ * ·· · • · « ·· · ··

Příklad 85

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzyloxy-5-jodbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny • · ^C25^H26^IN7°4· ^m-^w· = · ’::^J

615,43. M.S. 490 (M-l)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,32 (s, 1H); 8,21 (s,

1H); 7,42-7,18 (m, 5H); 7,02-6,82 (m, 3H); 6,05 (d, 1H, J = 4,2 Hz); 5,1 (d, 2H, J . . ..

= 4,9 Hz); 4,83 (bs, 2H); 4,55 (m,1H); 4,29 (d, 1H, J = 5,5 Hz); 3,7(m, 1H); 2,8 . , (s, 3H).

• · · *

Příklad 86 *....· • · ·· · • · · • ·

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzyloxy-5-trifluormethylbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C26^H26^F3^N7°4·

M.W. = 557,54. M.S. 558 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,36 (s, 1H); 8,24 (s, 1H); 7,6-7,18 (m, 8H); 6,06 (d, 1H, J = 4,1 Hz); 5,21 (s, 2H); 4,83 (bs, 2H); 4,6 (m, 1H); 4,3 (d, 1H, J = 5,7 Hz); 3,75 (m,1H); 2,8 (s. 3H).

Příklad 87

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzyloxy-5-kyanobenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C26^H26^N8^O4‘ ^M’ ^{w> =}

514,55. M.S. 515 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,36 (s,1H); 8,24 (s, 1H); 7,63-7,2 (m, 8H); 6,06 (d, 1H, J = 4,1 Hz); 5,24 (s, 2H); 4,83 (bs, 2H); 4,6 (m, 1H); 4,32 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 3,76 (m, 1H); 2,8 (s, 3H).

• ·

- 179 Příklad 88

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzyloxy-5-methylbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C26^H29^N7°4* ^M· ^w· =

503,56. M.S. 504 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,31 (s, 1H); 8,22 (s, 1H); 7,4-6,9 (m, 8H); 6,03 (d, 1H, J = 4,3 Hz); 5,04 (s, 2H); 4,8 (bs, 2H); 4,58 (m, 1H); 4,3 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 3,7 (m, 1H); 2,8 (s, 3H); 2,2 (s, 3H).

Příklad 89

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzyloxy-5-vinylbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C27^H29^N7°4- ^M· ^W· ⁼

515,57. M.S. 516 (M+H)⁺. H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,33 (s,1H); 8,22 (s,

1H); 7,42-7,2 (m, 7H); 6,98 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 6,6 (dd, 1H, J = 8,2, 6,0 Hz);

6,03 (d, 1H, J = 4,2 Hz); 5,58 (d. 1H, J = 8,2 Hz); 5,1 (s, 2H); 4,8 (bs, 2H); 4,58 (m, 1H); 4,26 (d, 1H, J = 5,5 Hz); 3,72 (m, 1H); 2,8 (s, 3H).

Příklad 90

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benzyloxy-5-ethynylbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C27^H27^N7°4- ^M· ^W· ⁼

513,56. M.S. 514 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,36 (s,1H); 8,26 (s, 1H); 7,7-7,23 (m, 7H); 7,0 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 6,06 (d, 1H, J = 4,2 Hz); 5,18 (s,

2H); 4,8 (bs, 2H); 4,6 (m, 1H); 4,3 (d, 1H, J = 5,5 Hz); 3,75 (m, 1H); 3,3 (s, 1H);

2,8 (s, 3H).

•0« » 0

- 180 Příklad 91

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(2-OXO-2-(4-piperidin-l-yl)piperidin-l-ylethoxy)benzylamino]purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

0 00 0 ^C30^H40^CIN9°5 M.W. 642,18. MS 642 (M+H)⁺. ^: * * 0 ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8, 4 (s, 1H); 8,32 (bs, 1H); 7,35 (bs, 1H); 7,22 (d,

1H, J = 8,9 Hz); 6,96 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,07 (d, 1H, J = 4,1 Hz); 4,91 (s, 2H);

4,82 (bs, 2H); 4,6 (m, 2H); 4,33 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 4,2 (bd, 1H, J = 10,5 Hz);

3,79 (t, 1H, J = 5,4 Hz); 3,18 (m, 1H); 2,82 (s, 3H); 2,6 (m, 6H); 1,9 (m, 2H);

1,65-1,3 (m,8H).

0

0 0 0 0 0

Příklad 92

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlor-2-[2-(4-methylaminopiperidin-l-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

C26^H34CIN₉O₅ M.W. 588,07. MS 588 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz. CD3OD) δ 8,39 (s, 1H); 8,33 (s, 1H); 7,35 (s, 1H); 7,22 (dd, 1H, J = 8,7, 2,4

Hz); 6,94 (dd, 1H, J = 8,7, 2,4 Hz); 6,06 (d, 1H, J = 4,0 Hz); 4,95 (s, 2H); 4,81 (s, 2H); 4,62 (t, 1H, J = 4,8 Hz); 4,5 (bd, 1H, J = 12,0 Hz); 4,36 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 4,02 (bd, 1H, J = 13 Hz); 3,79 (t, 1H, J = 5,7 Hz); 3,2 (m, 1H); 2,82 (s, 3H); 2,.79 (t, 1H, J = 13 Hz); 2,62 (m,1H); 2,4 (s, 3H); 1,97 (m,2H); 1,4-1,15 (m, 2H).

Příklad 93

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-{5-chlor-2-[2-(4-aminopiperidin-l-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

- 181 ^C25^H32^C|N9O₅ M.W. 57.4,04. MS 574 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz. CD₃OD) δ 8_r37 (s, 1H); 8,28 (s, 1H); 7_r3 (s, 1H); 7,2 (dd, 1H,

J = 8,7, 2,4 Hz); 6,92 (dd, 1H, J = 8,7, 2,4 Hz); 6,06 (d, 1H, J = 4,0 Hz); 4,95 (s, 2H); 4,81 (s, 2H); 4,6 (t, 1H, J = 4,8 Hz); 4,4 (bd, 1H, J = 12,0 Hz); 4,3 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 3,95 (bd, 1H, J = 13 Hz); 3,75 (t, 1H, J = 5,7 Hz); 3,1 (m, 1H); 2,8 (s, 3H); 2,79 (m,2H); 2,62 (m, 1H); 1,82 (m, 2H); 1,4-1,15 (m, 2H).

• · 4· 4 · * • 4 4

4 4 «4 ·

44*4

Preparativní postup Al

Štěpení BOC

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(2-oxo-2-piperazin-l-ylethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrof uran- 2-karboxylové kyseliny

K trifluoroctová kyselině (30 ml) se při teplotě okolí přidá methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(2-OXO-2-(4-terc-butyloxykarbonyl)piperazin-l-ylethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny (3 g, 4,5 mmol). Vzniklá směs se po 1 hodině zkoncentruje. Zbytek se třikrát rekoncentruje z chloroformu. Surový produkt se rozpustí v methanolu (80 ml) a dichlormethanu (100 ml). Výsledný roztok se zneutralizuje pryskyřicí Amberlite IR 400 (OH), směs se přefiltruje a zkoncentruje. Zbytek se nechá projít přes vrstvu silikagelu (7,5 až 10% methanol/dichlormethan/0,1% hydroxid amonný). Získá se 2,24 g sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě bezbarvé pevné látky.

Podobným způsobem se z odpovídajících chráněných aminů vyrobí sloučeniny z dále uvedených preparativních postupů A2 až A3.

··♦ ·

- 182 Preparativní postup A 2

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlor-2-[2-(4-aminopiperidin-l-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup A3 • 4

4 • 4 0 • 4« 44

4 4 • 4 4

44*4

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlor-2-[2-(4-methylaminopiperidin-l-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B1

Kopulace amidu

4 • 44444 4 • 4 444444 • 444 «444

4· 4

4 4

4

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlor-2-[2-oxo-2-(3-oxopiperazin-l-yl)ethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

EDCI (44 mg, 0,23 mmol), HOBT (30 mg, 0,22 mmol) a DMAP (40 mg) se přidají ke směsi (2R,3R,4S,5S)-(2-([9—(4-azido-3-hydroxy-5-methylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]methyl}-4-chlorfenoxy)octové kyseliny (60 mg, 0,116 mmol) a piperizin-2-onu (35 mg, 0,35 mmol) v bezvodém dimethylformamidu (3 ml). Po 20 hodinách při teplotě místnosti se směs zkoncentruje. Zbytek se předem naadsorbuje na silikagel a přečistí mžikovou chromatografií (6 až 8% methanol v dichlormethanu). Získá se sloučenina uvedená v nadpisu ve formě bezbarvé pevné látky. MS: 600 (M+H)⁺

Podobným způsobem, jaký je popsán v preparativním postupu B1, se z odpovídajících aminů vyrobí sloučeniny uvedené v následujících preparativních postupech B2 až B38.

• ♦ * 9 »♦* • ♦'

- 183 Preparativní postup

B 2

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(2-oxo-2piperidin-l-ylethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylová kyseliny

Preparativní postup B3

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlor-2-fenylkarbamoylmethoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrof uran- 2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B4

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlor-2-dimethylkarbamoylmethoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrof uran- 2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B5

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6—[2-(benzylkarbamoylmethoxy)-5-chlorbenzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrof uran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B6

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azÍdo-5-(6-{5-chlor-2-[2-(4-methylpiperazin-l-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B7

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlor-2-propylkarbamoylmethoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyšelíny ·· ’ * * » 9 I • · · 9 • * · * · · · * · ···· ··

- 184 Preparativní postup

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(2-morfo1in-4-y1-2-oxoethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B9

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(2-oxo-2-pyrrolidin-l-ylethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup BIO

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlor-2-dipropylkarbamoylmethoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrof uran- 2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup Bil

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlor-2-[(2-methoxyethylkarbamoyl)methoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrof uran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B12

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlor-2-methylkarbamoylmethoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrof uran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B13

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlor-2-cyklohexylkarbamoylmethoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrof uran- 2-karboxylové kyseliny

- 185 Preparativní postup B 1 4

Ethylester (2R,3R,4S,5S)-4-[(2—{[9—(4-azido-3-hydroxy-5-methylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]methyl}-4-chlorfenoxy)acetyl]piperazin-l-karboxylové kyseliny • · · • · · • · * • ·

Preparativní postup B15 Ϊ i X • · · · •

Methylamid ( 2S , 3S , 4R, 5R)-3-azido-5- {6- [ 2- ( 2-azetidin-l-yl-2oxoethoxy) -5-chlorbenzylamino ] purin-9-yl} -4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny • · · · • · • · • · · ·

Preparativní postup B16 i. *.

· · ·

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlor-2-[(2-morfolin-4-ylethylkarbamoyl)methoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B17

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlor-2-(2-oxo-2-(4-fenylpiperazin-l-yl)ethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B18

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlor-2-[2-(4-cyklohexylpiperazin-l-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup

- 186 • · · ··

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlor-2-[2-(4-ethylpiperazin-l-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B20

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlor-2-cyklopropyl- ··.

• · ♦ karbamoylmethoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydro- . .··.

• · · furan-2-karboxylové kyseliny ’’’*

Preparativní postup B21

Methylamid ( 2S , 3S , 4R, 5R) -3-azido-5-[ 6- ( 2-karbamoylmethoxy-5- .··’·.

• ·

-chlorbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2• · *

-karboxylová kyseliny ί ’

Preparativní postup B22

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlor-2-[2-(4-cyklopropylpiperazin-l-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl)4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B23

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlor-2-[2-(4-isopropylpiperazin-l-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B24

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlor-2-[2-oxo-2-(4-propylpiperazin-l-yl)ethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny • ·· · ♦ toto · «· * · ♦ to ♦ · ·· to · · ·«· ·♦ ·♦♦·

187

Preparativní postup B25

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlor-2-[2-(4-cyklopentylpiperazin-l-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B26

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{2-[2-(4-benzylpiperazin-l-yl)-2-oxoethoxy]-5-chlorbenzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B27

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlor-2-[2-(4-ethyl-3-oxopiperazin-l-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B28

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlor-2-{2-[4-(2-chlorfenyl)piperazin-l-yl]-2-oxoethoxy}benzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B29

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-[5-chlor-2-(fenethylkarbamoylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B30

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlor-2-[2-(3,5-dimethylpiperazin-1-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny » ·· · • 9

- 188 9

999 • * , • · · ·♦<

Preparativní postup B31

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlor-2-[2-(4-dimethylaminopiperidin-l-yl) -2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B32

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-5-(6-{2-[2-(4-adamantan-2-ylpiperazin-2-yl)-2-oxoethoxy]-5-chlorbenzylamino}purin-9-yl)-3-azido-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B33

Amid (2R,3R,4S,5S)-1-[(2-{[9-(4-azido-3-hydroxy-5-methylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]methyl}-4-chlorfenoxy)acetyl]piperidin-4-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B34

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlor-2-[2-(4-cykloheptylpiperazin-l-yl)-2-oxoethoxyjbenzylaminoJpurin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B35

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-5-{6-[2-(adamantan-2-ylkarbamoylmethoxy)-5-chlorbenzylamino]purin-9-yl}-3-azido-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B36

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(2-oxo-2-(4-terc-butyloxykarbony1)pipera z in-l-ylethoxy)benzylamino]-purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny • 9

- 189 Preparativní postup

Β 3 7 « · *

Φ Φ ·

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlor-2-[2-(4-terc-butyloxykarbonylaminopiperidin-l-yl)-2-oxoethoxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup B38

Methylamid ( 2S, 3S , 4R, 5R) - 3-azido-5- ( 6-{5-chlor-2- [ 2- (4-terc- ;...· -butyloxykarbonylmethylaminopiperidin-l-yl)-2-oxoethoxy]- , .

benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxy- * lové kyseliny .’*** • · · · Φ · φ Φ

Preparativní postup Cl ·*·

Deprotekce terc-butylesteru (2R,3R,4S,5S)-(2-{[9-(4-azido-3-hydroxy-5-methylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino Jmethyl}-4-chlorfenoxy)octová kyselina terc-Butylester (2R,3R,4S,5S)-(2-{[9-(4-azido-3-hydroxy-5-methylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]methyl}-4-chlorfenoxy)octové kyseliny (1 g, 1,9 mmol) se přidá k trifluoroctové kyselině (15 ml). Vzniklá směs se 3 hodiny míchá při teplotě místnosti a poté zkoncentruje. Zbytek se třikrát rekoncentruje z chloroformu. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu ve formě pěny. MS. 518 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,5 (m, 2H); 7,38 (bs, 1H); 7,25 (d, 1H, J = 8,0 Hz); 6,95 (d, 1H, J = 8,0 Hz); 6,0 (d, 1H, J = 4,0 Hz); 5,0 (m, 1H); 4,85 (m, 2H); 4,75 (s, 2H); 4,4 (m, 2H); 2,8 (s, 3H).

• · ·♦♦♦·· 9 9 * · ♦ · ·»·· .· ...

- 190 Preparativní postup Dl

Alkylace fenolu

Ethylester (2R,3R,4S,5S)-(2-{[9-(4-azido-3-hydroxy-5-methylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino Jmethyl}-4- .. ..

-chlorfenoxy)octové kyseliny · ’··*

9 9

9999

Hydrid sodný (115 mg, 4,8 mmol) se za chlazení v ledové lázni přidá k roztoku methylamidu (2S,3S,4R,5R)- ϊ.....

-3-azido-5- {6- [ 5-chlor-2-hydroxybenzylamino ]purin-9-yl} - !...í.

-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny (2,06 g,

4,37 mmol) v bezvodém dimethylformamidu (30 ml). Po 30 *....* • » minutách se ke vzniklé směsi přidá ethylbromacetát (0,58 í*. :

· ml, 5,25 mmol). Reakčni směs se zahřeje na teplotu okolí, přes noc míchá, rozloží methanolem a zkoncentruje. Zbytek se předem naadsorbuje na silikagel a přečistí mžikovou chromatografií (2 až 6% methanol v dichlormethanu). Získá se 1,7 g produktu ve formě bezbarvé pevné látky. MS 546 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8,34 (bs, 1H); 8,3 (s, 1H); 7,32 (bs, 1H);

7,22 (dd, 1H, J = 8,9, 2,6 Hz); 6,9 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,02 (d, 1H, J = 7,1 Hz);

5,07 (dd, 1H, J = 7,1,4,.9 Hz); 4,85 (bs, 2H); 4,8 (s, 2H); 4,42 (m, 2H); 4,25 (q,

2H, J = 6,9 Hz); 3,0 (s, 1H); 2,85 (s, 3H); 1,28 (t, 3H, J = 6,9 Hz).

Podobným způsobem, jaký je popsán v preparativním postupu Dl, se z vhodných výchozích látek vyrobí sloučeniny uvedené v preparativních postupech D2 až D3.

Preparativní postup D2

Methylester (2R,3R,4S,5S)-(2-{[9-(4-azido-3-hydroxy-5-methylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]methyl}-4-chlorfenoxy)octové kyseliny • ♦ · » » 9

9 9

9999 • » 9 · • · · * »♦« • « ·««« «·

191

Preparativní postup D3

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlor-2-kyanomethoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny • ·

Preparativní postup El í*. Ϊ ^X 9 99

9 9

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-Azido-5-{6-[5-chlor-2-(2-morfo- » lin-4-ylethoxy )benzy lamino] pur in-9-yl }-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny . .

Ke směsi methylesteru 4-acetoxy-3-azido-5-(6-chlor- ·*”*» purin-9-yl)tetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny (485 mg, ·. \ 1,27 mmol) a v bezvodém methanolu (20 ml) se přidá tri- · * ethylamin (0,51 ml, 3,8 mmol). Reakční směs se za bezvodých podmínek zahřeje na 50°C, poté 15 hodin hodin míchá při teplotě zpětného toku, načež se k ní přidá methylamin (3,8 ml, l,0M v methanolu). Reakční směs se dalších 15 hodin míchá při teplotě místnosti, načež se z ní v rotačním odpařováku odstraní rozpouštědlo. Produkt se předem naadsorbuje na silikagel a přečistí mžikovou chromatografií (SiO₂, 2,5% methanol v ethylacetátu). Získá se sloučenina uvedená v nadpisu.

^C24^H29^CIN1O°5- MW 573,02. MS 573.1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,64 (q, 1H, J = 4,6 Hz); 8,46 (s, 1H); 8,35 (bs,

1H); 8,23 (s, 1H); 7,21 (dd, 1H, J =8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,05 (bs, 1H); 7,01 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,30 (d, 1Ή, J = 5,6 Hz); 5,98 (d, 1H, J = 6,2 Hz) 4,98 (q, 1H, J = 5,5

Hz); 4,64 (bs, 2H); 4,50 - 4,45 (mult, 1H); 4,31 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 4,12 (t, 2H, J =

5,7 Hz); 3,57 - 3,51 (mult, 4H); 2,72 - 2,62 (mult, 5H); 2,51 - 2,45 (mult, 4H).

• •φ · ·<« ·

- 192 Preparativní postup E2

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-benzyloxy-5-chlorbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny • · • · ♦ ^C25^H24^C1N9°4· ^W 549,98. MS 550,1 (M+H)⁺. ¹

Φ · Φ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,65 (q, 1H, J = 4,6 Hz); 8,47 (s, 1H); 8,42 (bs, *····*

1H); 8,23 (s, 1H); 7,49 - 7,45 (mult, 2H);7,40 - 7,35 (mult, 2H); 7,30 (t, 1H, J = 7,1 Hz); 7,21 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,5 Hz); 7,20 (d, 2H, J = 8,9 Hz); 6,31 (d, 1H, J =

5,4 Hz); 5,98 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 5,17 (s, 2H); 4,96 (quart, 1H, J = 5.8 Hz); 4.71 (bs, 2H); 4.52 - 4.45 (mult, 1H); 4.35 - 4.30 (mult, 1H); 2,66 (d, 3H, J = 4,6 Hz).

• · • · · • · · • ·

Preparativní postup E3

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlor-2-cyklobutylmethoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C23^H26^CIN9°4- MW 527,97. MS 527.7 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,65 (q, 1H, J = 4,6 Hz); 8,47 (s, 1H); 8,35 (bs,

1H); 8,23 (s, 1H); 7,20 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,03 (bs, 1H); 6,98 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,31 (d, 1H, J = 5,0 Hz); 5,98 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 4,96 (q, 1H, J = 5,2

Hz); 4,64 (bs, 2H); 4,48 (bs, 1H); 4,30 - 4,32 (mult, 1H); 3,97 (d, 2H, J = 6_r2 Hz); 2_r71 (bs, 1H); 2,66 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 2,03 (bs, 2H); 1,86 (bs, 4H).

Preparativní postup E4

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(3-methoxybenzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny • 99 ·* ·»·· ► »·

- 193 ^C26^H26^CIN9°5- MW 580,01. MS 579.8 (M+H)+.

H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,65 (q, 1H, J = 4,6 Hz); 8,47 (s, 1H); 8,43 (bs,

1H); 8,24 (s, 1H); 7,28 (t, 1H, J = 8,2 Hz); 7,21 (dd, 1H, J = 8,6 Hz, J = 2,5 Hz); 7,10 - 7,00 (mult, 4H); 6,86 (d, 1H, J = 6,8 Hz); 6,31 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,98 (d,’ 1H, J = 6,4 Hz); 5,15 (s, 2H); 4,96 (q , 1H, J = 5,5 Hz); 4,71 (bs, 2H); 4,50 - 4,45 (mult, 1H); 4,31 (d, 1H, J = 2,9 Hz); 3,72 (s, 3H); 2,66 (d, 3H, J = 4,6 Hz).

Preparativ postup E5

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(2,5-dimethoxybenzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrof uran- 2-karboxylové kyseliny

C27^H28^CIN9°6- MW 610,03. MS 609.9 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,66 (q, 1H, J = 4,8 Hz); 8,47 (s, 1H); 8,41 (bs,

1H); 8,23 (s, 1H); 7,21 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,07 (bs, 1H); 7,05 - 7,00 (mult, 2H); 6,96 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,86 (dd, 1H, J = 8,9 Hz, J = 3,1 Hz); 6,31 (d,

1H, J = 5,4 Hz); 5,98 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 5,10 (s, 2H); 4,95 (q, 1H, J = 5,8 Hz);

4,69 (bs, 2H); 4,49 - 4,48 (mult, 1H); 4,31 (d, 1H, J =2,9 Hz); 3,77 (s, 3H); 3,75 (s, 3H); 2,66 (d, 3H, J = 4,6 Hz).

Preparativní postup E6

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(3-chlorbenzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 89,0 až 95,0°C

C25H23CI2N9O4. MW 584,43. MS 583,8 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,63 (q 1H, J = 4,4 Hz); 8,45 (s, 1H); 8,45 (bs,

1H); 8,23 (s, 1H); 7,52 (s, 1H); 7,45 - 7,32 (mult, 3H); 7,21 (dd, 1H, J = 8,9 Hz, J =

2,7 Hz); 7,10 (bs, 1H); 7,02 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,29 (d, 1H, J = 5,2 Hz); 5,96 (d.

1H, J = 6,4 Hz); 5,17 (s, 2H); 4,98 - 4,90 (mult, 1H); 4,69 (bs, 2H); 4,48 - 4,44 (mult, 1H); 4,30 (d, 1H, J = 2,9 Hz); 2,64 (d, 3H, J = 4,4 Hz).

- 194 Preparativní postup

E 7 »··· ·« *·»· *«*

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(4-chlorbenzyloxy )benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 79,0 až 84,0°C ^C25^H23^CI2^N9°4- ^mw 584.43. MS 584.1 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,66 (q, 1H, J = 4,4 Hz); 8,47 (s, 1H); 8,44 (bs,

1H), 8,24 (s, 1H); 7,50 (d, 2H, J = 8,3 Hz); 7,47 - 7,41 (mult, 2H); 7,25 - 7,20 (mult, 1H), 7,15-7,05 (mult, 2H); 6,32 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,99 (d, 1H, J = 7,7 Hz); 5,17 (s, 2H); 4,96 (q , 1H, J = 5,2 Hz); 4,70 (bs, 2H); 4,49 (bs, 1H); 4,32 (d, 1H, J =

2,9 Hz); 2,67 <d, 3H, J = 4,4 Hz).

« 4 · • ·· ·· • * « • · « ····

Preparativní postup E8

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(2-chlorbenzyloxy ) benzy lamino ]purin-9-yl } -4-hydroxytetrahydrof uran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 66,0 až 70,0°C

C25H23CI2N9O4. MW 584,43. MS 584,1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.66 (q , 1H, J = 4,8 Hz); 8,47 (s,1 H); 8,42 (bs,

1H); 8,22 (s, 1H); 7,67 - 7,61 (mult, 1H); 7,52 - 7,48 (mult, 1H); 7.41 - 7,34 (mult,

2H); 7,27 - 7,18 (mult, 1H); 7,11 (d, 2H, J = 9,1 Hz); 6,32 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,98 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 5,22 (s, 2H); 4,96 (q , 1H, J = 5,8 Hz); 4,70 (bs, 2H); 4,50 4,45 (mult, 1H); 4,32 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 2,66 (d, 3H, J = 4,8 Hz).

Preparativní postup E9

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(tetrahydrofuran-3-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

- 195 ·«·· ··· 0 99

- « · · • · 0 · · 0 • · 0 0 0 ··· ··· «· ···· ^C23^H26^C'N9O₅. MW 543.97. MS 544.1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8.65 (q, 1H, J = 4,6 Hz); 8,47 (s, 1H); 8,38 (bs,

1H); 8,24 (s, 1H); 7,21 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,06 (bs, 1H); 6,99 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,31 (dd, 1H, J = 5,4 Hz, J = 2,1 Hz); 5,99 - 5,97 (mult,1H); 4,97 - 4,95 (mult, 1H); 4,65 (bs, 2H); 4,50 - 4,45 (mult, 1H); 4,35 - 4,29 (mult, 1H); 4,01 - 3,88 (mult, 2H); 3,83 - 3,72 (mult, 2H); 3,65 - 3,60 (mult, 1H); 3,59 - 3,53 (mult, 1H);

2,70 - 2,60 (mult, 4H); 2,05 - 1,95 (mult, 1H); 1,75 -1,62 (mult, 1H).

► • 0 ··

0 • 0 ····

Preparativní postup E10 • ·

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(4-methyl- ***** «

benzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran- _φ·»·»

-2-karboxylové kyseliny .***’

Teplota tání: 88,0 až 95,0°C ^c26^H26^ctN9O4· MW 564,01. MS 564,2 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,66 (q, 1H, J = 4,8 Hz); 8,47 (s,1 H); 8,42 (bs,

1H); 8,22 (s, 1H); 7,45 (d, 1H, J = 7,1 Hz); 7,27 - 7,16 (mult, 4H); 7,14 (d, 1H, J =

8,7 Hz); 7,06 (bs, 1H); 6,32 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,99 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 5,15 (s, 2H); 4,96 (q , 1H, J = 5,5 Hz); 4,68 (bs, 2H); 4,50 - 4,45 (mult, 1H); 4,32 (d, 1H,

J = 2,9 Hz); 2,67 (d, 3H, J = 4,8 Hz); 2,34 (s, 3H).

Preparativní postup Eli

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(2-methylbenzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 58,0 až 62,0°C θ26^Η26^0,Ν9°4· MW 564,01. MS 564,2 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz. DMSO-dg) δ 8.66 (q, 1H, J = 4,8 Hz); 8,48 (s, 1H); 8,41 (bs,

1H); 8,24 (s, 1H); 7,35 (d, 1H, J = 7,9 Hz); 7,21 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 7,20 - 7,15 (mult, 3H); 7,06 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,99 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,32 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,99 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 5,12 (s, 2H); (q , 1H, J = 5,8 Hz); 4,68 (bs, 2H);

4,50 - 4,47 (mult, 1H); 4,32 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 2,67 (d, 3H, J = 4.8 Hz); 2,28 (s, 3H).

9999

- 196 Preparativní postup E12 • ··· · • · •••r ·· ··· • w • * · • · ··· ··

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(3-methylbenzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 80,0 až 84,0°C *’ • 99 ^C26^H26^CIN9°4· MW 564.01. MS 564.2 (M+H)+. SJ**!

¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,66 (q , 1H, J = 4,8 Hz); 8,48 (s,1H); 8,41 (bs,

1H); 8,24 (s, 1H); 7,28 - 7,24 (mult, 3H); 7,22 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,5 Hz); 7,13 f ’

- 7,05 (mult, 3H); 6,31 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,99 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 5,13 (s, 2H);

4,96 (q, 1H, J = 5,7 Hz); 4,69 (bs, 2H); 4,50 - 4,45 (mult, 1H); 4,32 (d, 1H, J = f'”

3,1 Hz); 2,67 (d, 3H, J = 4,8 Hz); 2,28 (s, 3H).

• Φ ·

Preparativní postup E13

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(2-methoxybenzyloxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C26^H26^CIN9°5- MW 580,01. MS 580,1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8.63 (q , 1H, J = 4,8 Hz); 8,45 (s, 1H); 8,36 (bs,

1H); 8,21 (s, 1H); 7,41 (dd, 1H, J = 7,7 Hz, J = 1,7 Hz); (t, 1H, J = 7,2 Hz); 7,19 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,05 - 6,99 (mult, 3H); 6,92 (t, 1H, J = 7,5 Hz);

6,28 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,96 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 5,09 (s, 2H); 4,98 - 4,90 (mult,

1H); 4,65 (bs, 2H); 4,48 - 4,42 (mult, 1H); 4,29 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 3,80 (s, 3H);

2,64 (d, 3H, J = 4,8 Hz).

Preparativní postup E14

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(furan-3-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny • ·

Teplota tání: 86,0 až 90,0°C ^C23^H22^C,N9°5- MW 539,94. MS 540,1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,66 (q, 1H, J = 4,6 Hz); 8,48 (s, 1H); 8,39 (bs,

1H), 8,24 (s, 1H); 7,80 (s, 1H); 7,66 (s, 1H); 7,22 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,5 Hz); 7,11 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 7,06 (bs, 1H); 6,60 (s, 1H); 6,31 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,99 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 5,03 (s, 2H); 4,96 (q, 1H, J = 5,6 Hz); 4,64 (bs, 2H); 4,49 4,47 (mult, 1H); 4,32 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 2,67 (d, 3H, J = 4,6 Hz).

Preparativní postup

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(4-methoxy benzyloxy)benzylamino]purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny θ26^Η26θ^ΙΝ9°5· MW 580,01. MS 580,0 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,63 (q , 1H, J = 4,6 Hz); 8,45 (s, 1H); 8,37 (bs,

1H); 8,21 (s, 1H); 7,37 (d, 2H, J = 8,5 Hz); 7,19 (dd, 1H, J = 8,5 Hz, J = 2,5 Hz);

7,05 (d, 2H, J = 8,9 Hz); 6,89 (d, 2H, J = 8,7 Hz); 6,28 (d, 1H, J = 4,8 Hz); 5,96 (d, 1H, J = 6,2 Hz); 5,06 (s, 2H); 4,98 - 4,90 (mult, 1H); 4,63 (bs, 2H); 4*46 - 4,42 (mult, 1H); 4,29 (d, 1H, J = 2,9 Hz); 3,70 (s, 3H); 2,64 (d, 3H, J = 4,6 Hz).

Preparativní postup E16

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlor-2-cyklopentylmethoxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny θ24^Η28θ^ΙΝ9°4· MW 542,00. MS 541,8 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,64 (q, 1H, J = 4,8 Hz); 8,45 (s, 1H); 8,33 (bs,

1H); 8,21 (s, 1H);7,17(dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,9 Hz); 7,00 (bs, 1H),6,95 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,29 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 5,96 (d, 1H, J = 6,2 Hz); 4,95 - 4,90 (mult, 1H); 4,62 (bs, 2H); 4,47 - 4,43 (mult, 1H); 4,29 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 3,85 (d, 2H, J - 6,9 Hz); 2.64 (d, 3H, J = 4,8 Hz); 2,32 - 2,21 (mult, 1H); 1,78 -1,66 (mult, 2H); 1,60 1,42 (mult, 4H); 1,37 -1,25 (mult, 2H).

• ·

Preparativní postup Ε 1 7

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-{5-chlor-2-[3-(2-morfolin-4-ylethoxy)benzyloxy]benzylamino}purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C31^H35^CIN1O°6· MW 679,14. MS 678,7 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,62 (q , 1H, J = 5,0 Hz); 8,45 (s, 1H); 8,40 (bs,

1H); 8,22 (s, 1H); 7,27 - 7,17 (mult, 2H); 7,05 - 7,03 (mult, 1H); 7,03 - 6.98 (mult,

3H); 6,84 (d, 1H, J = 8,3 Hz); 6,30 - 6,25 (mult, 1H); 5,99 - 5,92 (mult, 1H); 5,12 (s, 2H); 4,95 - 4,88 (mult, 1H); 4,73 - 4,65 (mult, 2H); 4,45 - 4,41 (mult, 1H); 4,30 4,26 (mult, 1H); 4,07 - 4,00 (mult, 2H); 3,55 - 3,45 (mult, 4H); 2,67 - 2,60 (mult,

5H); 2,42 - 2,37 (mult, 4H).

Preparativní postup E18

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(2,2,7,7-tetramethyltetrahydrobis[l,3]dioxolo[4,5-b;4',5']pyran-5-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^C3O^H36^CIN9°9· MW 702,13. MS 702,1 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,72 - 8,65 (mult, 1H); 8,47 (s, 1H); 8,38 (bs, 1H);

8,25 (s, 1H); 7,21 (dd, 1H, J = 8,5 Hz, J = 2,3 Hz); 7,06 (bs, 1H); 7,03 (d, 1H, J =

8,5 Hz); 6,38 (bs, 1H); 5,98 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 5,48 (d, 1H, J = 4,8 Hz); 4,95 (t,

1H, J = 5,8 Hz); 4,65 (bs, 2H); 4,60 (d, 1H, J = 7,9 Hz); 4,51 - 4,45 (mult, 1H); 4_f39 - 4,35 (mult, 1H); 4,35 - 4,29 (mult, 2H); 4,21 - 4,16 (mult, 1H); 4,08 - 3,99 (mult, 2H); 2,67 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 1,35 (d, 6H, J = 11 _?4 Hz); 1,25 (s, 6H).

Preparativní postup F1 terc-Butylester (5-{6-[5-chlor-2-(3-methylisoxazol-5-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxy-2-methylkarbamoyl tetrahydrofuran-3-yl)karbamové kyseliny

- 13?,

Ke směsi terc-butylesteru [5-(6-chlorpurin-9-yl)-4-hydroxy-2-methylkarbamoyltetrahydrofuran-3-ylJkarbamové kyseliny (500 mg, 1,2 mmol) a (3-methylisoxazol-5-ylmethoxy)benzylaminu (1,4 mmol) v bezvodém ethanolu (10 ml) se přidá triethylamin (0,5 ml, 3,6 mmol). Reakční směs se zahřeje na 65°C a poté 15 hodin míchá při teplotě zpětného toku za bezvodých podmínek, načež se z ní v rotačním odpařováku odstraní rozpouštědlo. Produkt se předem naadsorbuje na silikagel a přečistí mžikovou chromatografií. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu.

Teplota tání: 135,0 až 137,0°C θ28^Η33^ΟΙΝ8°7· MW 629,08. MS 629,2 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,55 (bs, 1H); 8,41 - 8,33 (mult, 2H); 8,19 (s, 1H);

7,23 (dd, 1H. J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,12 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 7,07 (bs, 1H); 6,96 (d, 1H, J = 6,0 Hz); 6,47 (s, 1H); 5,98 (d, 1H, J =4,6 Hz); 5,91 (bs, 1H); 5,29 (s,

2H); 4,63 (bs, 2H); 4,55 - 4, 43 (mult, 1H); 4,28 - 4,17 (mult, 2H); 2,63 (d, 3H, J =

4,6 Hz); 2,20 (s, 3H); 1,35 (s, 9H).

Preparativní postup G1 terc-Butylester (2R,3R,4S,5S)-(2-{[9-(4-azido-3-hydroxy-5-methylkarbamoyltetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-ylamino]methyl}-4-chlorfenoxy)octové kyseliny

Triethylamin (0,3 ml, 2,1 mmo) se při teplotě místnosti přidá k roztoku methylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-chlorpurin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny (302 mg, 0,9 mmol) a terc-butylesteru 2-aminomethyl-4-chlorfenoxyoctové kyseliny (290 mg, 1,07 mmol) v ethanolu. Reakční směs se 2,5 hodiny zahřívá na 70°C, poté ochladí a vytvořená pevná látka se promyje chladným ethanolem a vysuší. Získá se 420 mg (81 %) sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě bezbarvé pevné látky. Alternativně lze produkt přečistit mžikovou chromatografii (2 až 5% methanol v dichlormethanu). MS 574 (M+H) ⁺ . -^H NMR • 0 ·· • «« ·

(400 MHz, CD3OD) δ 8,28 (bs, 1H); 8,24 (s, 1H); 7,32 (bs, 1H); 7,18 (dd, 1H, J = 8,9, 2,6 Hz); 6,92 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 5,95 (d, 1H, J = 7,1 Hz); 5,03 (dd, 1H, J =

7,1,4,9 Hz); 4,82 (bs, 2H); 4,83 (s, 2H); 4,39 (m, 2H); 3,0 (s, 1H); 2,8 (s, 3H);

1,4 (s, 9H).

Podobným způsobem, jaký je popsán v preparativním postupu Gl, se za použití vhodných výchozích látek vyrobí sloučeniny uvedené v preparativních postupech G2 až G30.

Preparativní postup G2

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(3-methyl isoxazol-5-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 94,0 až 98,0°C ^C23^H23^ClN10°5· ⁵⁵⁴z⁹⁶· MS 55,1 (M+H)⁺ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,63 (q, 1H, J = 4,6 Hz); 8,46 (s, 1H); 8,41 (bs,

1H); 8,21 (s, 1H); 7,23 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,5 Hz); 7,11 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 7,06 (bs, 1H); 6,48 (s, 1H); 6,29 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 5,97 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 5,29 (s, 2H); 4,94 (q , 1H, J = 5,6 Hz); 4,63 (bs, 2H); 4,48 - 4,42 (mult, 1H); 4,30 (d,

1H, J = 2,7 Hz); 2,64 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 2,19 (s, 3H).

Preparativní postup G3

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(tetrahydrofuran-3-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny C₂3^H26^CIN9°5· ^MW 543,97. MS 544,1 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,65 (q, 1H, J = 4,6 Hz); 8,47 (s, 1H); 8,38 (bs,

1H); 8,24 (s, 1H); 7,21 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,06 (bs, 1H); 6,99 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,31 (dd, 1H, J = 5,4 Hz, J ~ 2,1 Hz); 5,99 - 5,97 (mult,1 H); 4,97 - 4,95 (mult, 1H); 4,65 (bs, 2H); 4,50 - 4,45 (mult, 1H); 4,35 - 4,29 (mult, 1H); 4,01 - 3,88 (mult, 2H); 3,83 - 3,72 (mult, 2H); 3,65 - 3,60 (mult, 1H); 3,59 - 3,53 (mult, 1H);

2,70 - 2,60 (mult, 4H); 2,05 -1,95 (mult, 1H); 1,75-1,62 (mult, 1H).

201

9·· 9

Preparativní postup G4

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(tetrahydrofuran-3-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrof uran- 2-karboxylové kyseliny ^C23^H26^CIN9°5- MW 543,97. MS 544,1 (M+H)+.

’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,65 (quart, 1H, J = 4.6 Hz); 8,47 (s, 1H); 8,38 (bs,

2,70 - 2,60 (mult, 4H); 2,05 - 1,95 (mult, 1H); 1,75 - 1,62 (mult, 1H).

Preparativní postup G5

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(furan-2-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 18 2,0 až 185,0°C

C23H22CIN9O5. MW 539,94. MS 540,1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,66 (d, 1H, J = 4.6 Hz); 8,47 (s, 1H); 8,38 (bs,

1H); 8,23 (s, 1H); 7,68 (d, 1H, J = 1,9 Hz); 7,23 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,17 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 7,03 (bs, 1H); 6,60 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 6,45 (dd, 1H, J =

3,1 Hz, J = 1,9 Hz); 6,31 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,98 (d, 1H, J = 6,2 Hz); 5,13 (s, 2H); 4,96 (q, 1H, J = 6,0 Hz); 4,60 (bs, 2H); 4,51 - 4,45 (mult, 1H); 4,31 (d, 1H, J =

3,1 Hz); 2,66 (d, 3H, J = 4,6 Hz).

·· ·· · 4 ·

2· *—* · · · ·

Preparativní postup G 6

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(2,5-dimethylfuran-3-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 85,0 až 87,0°C ^25^26^!NgO5. MW 568,00. MS 568,1 (M+H)+.

’H NMR (400 MHz, DM5O-d₆) δ 8,63 (q, 1H, J = 4,6 Hz); 8,45 (s, 1H); 8,33 (bs,

1H); 8,20 (s, 1H); 7,19 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,05 (d, 1H, J = 8,7 Hz);

7,02 (bs, 1H); 6,28 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 6,06 (s, 1H); 5,96 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 4,93 (q_? 1H, J = 5,2 Hz); 4,86 (s, 2H); 4,59 (bs, 2H); 4,47 - 4,42 (mult, 1H); 4,29 (d,

1H, J = 3,1 Hz); 2,64 (d, 3H, J = 4,6 Hz); 2,21 (s, 3H); 2,14 (s, 3H).

Preparativní postup G7

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(5-dimethyl aminomethylfuran-2-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ^c26^H29CINio0₅. MW 597,04. MS 597,1 (M+H)⁺.

’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,63 (q, 1H, J = 4,6 Hz); 8,45 (s, 1H); 8,34 (bs,

1H); 8,20 (s, 1H); 7,22 - 7,16 (mult, 1H); 7,13 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 7,00 (bs, 1H);

6.,49 (d, 1H, J = ^.7 Hz); 6,29 (bs, 1H); 6,22 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 5,96 (d, 1H, J = 6,0 Hz); 5,06 (s, 2H); 4,92 (bs, 1H); 4,56 (bs, 2H); 4,48 - 4,41 (mult, 1H); 4,36 - 4,22 (mult, 1H); 3,28 (bs, 2H); 2,63 (d, 1H, J = 4,6 Hz); 2,14 - 2,04 (mult, 6H).

Preparativní postup G8

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(thiazol-2-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 88,0 až 92,0°C θ22^Η21θ^ΙΝ10θ4θ· MW 556,99. MS 557,1 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,66 (q, 1H, J = 4,4 Hz); 8,52 - 8,40 (mult,

2H); 8,24 (s, 1H); 7,84 (d, 1H, J = 2,9 Hz); 7,77 (d, 1H, J = 2,9 Hz); 7,25 (d, 1H, J =

8,5 Hz); 7,15 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 7,08 (bs, 1H); 6,31 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,98 (d,

1H, J = 6,4 Hz); 5,51 (s, 2H); 5,00 - 4,91 (mult, 1H); 4,72 (bs, 2H); 4,49 (bs, 1H);

4.32 (bs, 1H); 2,66 (d, 3H, J = 4,4 Hz).

Preparativní postup G9

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[2-(benzothiazol-2-yl methoxy)-5-chlorbenzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydro furan-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 95,0 až 100,0°C ^C26^H23^CIN1O°4^S· MW 607,05. MS 607,0 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,66 (q, 1H, J = 4,4 Hz); 8,49 (bs, 2H); 8,24 (s,

1H); 8,11 (d, 1H, J = 8,1 Hz); 8,01 (d, 1H, J = 8,1 Hz); 7,52 (t, 1H, J = 7,7 Hz); 7,44 (t, íH, J = 7,7 Hz); 7,26 (d, 1H, J = 8,3 Hz); 7,17 (d, 1H, J = 8_f3 Hz); 7,10 (bs, 1H);

6.32 (d, 1H, J = 5,2 Hz); 5,99 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 5,67 (s, 2H); 5,00 - 4,96 (mult,

1H); 4,80 (bs, 2H); 4,49 (bs, 1H); 4,32 (bs, 1H); 2,66 (d, 3H, J = 4,4 Hz).

Preparativní postup G10

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[2-(benzofuran-2-ylmethoxy)-5-chlorbenzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrof uran- 2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 89,0 až 100,0°C

C27H24CIN9O5. MW 590,00. MS 590,1 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,65 (q, 1H, J = 4,4 Hz); 8,47 (s, 1H); 8,41 (bs,

1H); 8,20 (s, 1H); 7,63 (d, 1H, J = 7,9 Hz); 7,57 (d, 1H, J = 7,9 Hz); 7,31 (t, 1H, J =

7,5 Hz); 7,26 - 7,20 (mult, 3H); 7,07 (mult, 2H); 6,31 (d, 1H, J = 5,2 Hz); 5,98 (d,

1H, J = 6,4 Hz); 5,35 (s, 2H); 4,95 (q , 1H, J = 5,8 Hz); 4,66 (bs, 2H); 4,48 (bs,

1H « · » 99 9 9

Preparativní postup Gll

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(isothiazol-5-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrof uran- 2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 96,0 až 99,0°C

C22H2lCIN₁₀O₄S. MW 556.,99. MS 557,1 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,63 (q, 1H, J = 4,6 Hz); 8,51 (s, 1H); 8,46 (s,

1H); 8,42 (bs, 1H); 8,22 (s, 1H); 7,45 (s, 1H); 7,24 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,5 Hz); 7,12 - 7,07 (mult, 2H); 6,29 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,97 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 5,57 (s,

2H); 4,94 (q , 1H, J = 5,8 Hz); 4,67 (bs, 2H); 4,49-4,41 (mult, 1H); 4,30 (d, 1H,

J = 3,1 Hz); 2,65 (d, 3H, J = 4,6 Hz).

Preparativní postup G12

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(thiofen-2-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 91,0 až 112,0°C ^C23^H22^C,N9°4^S· MW 556,01. MS 556,1 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.63 (q , . 1H, J = 4,6 Hz); 8,46 (s, 1H); 8,42 (bs,

1H); 8,22 (s, 1H); 7,52 (d, 1H, J = 5,0 Hz); 7,25 - 7,18 (mult, 2H); 7,13 (d, 1H, J =

8,9 Hz); 7,03 (bs, 1H); 7,01 - 6,98 (mult, 1H); 6,30 (bs, 1H); 5,97 (d, 1H, J = 6j.2 Hz); 5,34 (s, 2H); 4,97 - 4,90 (mult, 1H); 4,62 (bs, 2H); 4,48 - 4,41 (mult, 1H); 4,30 (d, 1H, J = 3,1 Hz);,2,64 (d, 3H, J = 4,6 Hz).

Preparativní postup G13

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-[5-chlor-2-(chinolin

-2-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny . *· ·« * * · • < · · • . · · · . . · ♦

... ♦· ···· ·· ·* ♦ · · *

205.·-···: .

• · ·«·· ··

Teplota tání: 117,0 až 120,0°C

C2₈H₂5CIN₁₀O₄. MW. 601,03. MS 601,1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,64 (q , 1H, J = 4,6 Hz); 8,47 (bs, 1H), 8,46 (s,

1H); 8,37 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 8,24 (s, 1H); 8,03 - 7,92 (mult, 2H); 7,80 - 7,67 mult, 2H); 7,58 (t, 1H, J = 7_f 1 Hz); 7,18 (dd, 1H, J = 8,5 Hz, J = 2,1 Hz); 7,12 (bs, 1H); 7,07 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 6,30 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,97 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 5,42 (s, 2H); 4,95 (q·, 1H, J = 5,2 Hz); 4,78 (bs, 2H); 4,51 - 4,44 (mult, 1H); 4,30 (d, 1H,

J = 3,1 Hz); 2,64 (d, 3H, J = 4,6 Hz).

Preparativní postup G14

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(4-methyl-[1,2,3]thiadiazol-5-ylmethoxy)benzylamino}purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 105,0 až 107,0°C ^C22^H22^CIN11°4^S· MW 572,01. MS 572,0 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,63 (q, 1H, J = 4,8 Hz); 8,46 (s, 1H); 8,42 (bs,

1H); 8,20 (s, 1H); 7,27 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,16 (d, 1H, J = 8,7 Hz);

7,09 (bs, 1H); 6,30 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,96 (d, 1H, J = 6,6 Hz); 5,57 (s, 2H); 4,94 (q t 1H, J = 5,2 Hz); 4,63 (bs, 2H); 4,49 - 4,42 (mult, 1H); 4,30 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 2,70 - 2,60 (mult, 6H).

Preparativní postup G15

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(naftalen-1-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Teplota tání: 115,0 až 119,0°C C₂₉H₂₆CIN₉O₄. MW 600,04. MS 600,1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,63 (q, 1H, J = 4,8 Hz); 8,44 (s, 1H); 8,38 (bs,

1H); 8,19 (s, 1H); 8,14 (d, 1H, J = 7,9 Hz); 7,98 - 7,86 (mult, 2H); 7,70 (d, 1H, J = • ·

6,6 Hz); 7,59 - 7,43 (mult, 3H); 7,32 - 7,21 (mult, 2H); 7,06 (bs, 1H); 6,29 (d, 1H, J = 5,2 Hz); 5,96 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 5,61 (s, 2H); 4,93 (q , 1H, J = 5,6 Hz); 4,62 (bs, 2H); 4,49 - 4,42 (mult, 1H); 4,30 (d, 1H, J = 2,9 Hz); 2,64 (d, 3H, J = 4,8 Hz).

Preparativní postup G16

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlor-2-hydroxybenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10,04 (bs, 1H); 8.63 (q , 1H, J =4,6 Hz); 8,45 (s, 1H); 8,40 (bs, 1H); 8,25 (s, 1H); 7,05 (dd, 1H, J = 8,5 Hz, J = 2,5 Hz); 7,00 (bs,

1H); 6,77 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 6,30 (d, 1H, J = 5,4 Hz); 5,96 (d, 1H, J = 6,2 Hz);

4,94 (q1H, J = 5,8 Hz); 4,56 (bs, 2H); 4,49 - 4,43 (mult, 1H); 4,30 (d, 1H, J =

2,9 Hz); 2,65 (d, 3H, J = 4,6 Hz).

Preparativní postup G17

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-benzyloxy-5-chlorbenzylamino)-2-chlorpurin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2karboxylové kyseliny

Preparativní postup G18

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-chlor-2-fenethyloxy benzylamino)-2-chlorpurin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2karboxylové kyseliny

Preparativní postup G19

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(1-fenylethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

207 _ ·

Preparativní postup G20

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(4,5-dihydro-lH-imidazol-2-ylmethoxy)benzylamino}purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup G21

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[1-(2-benzyloxy-5-chlorfenyl)ethylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup G22

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-benzyloxy-5-brombenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxy lové kyseliny

Preparativní postup G 2 3

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-benzyloxy-5-fluor behzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxy lové kyseliny

Preparativní postup G24

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-benzyloxy-5-jodbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxy lové kyseliny

Preparativní postup G 2 5

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-benzyloxy-5-trifluormethylbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny • «

- 208 -.

• · · ·

Preparativní postup G26

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-benzyloxy-5-kyanobenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup G27

Methylamid (2S,3S ,4R,5R)-3-azido-5-[ 6-(2-benzyloxy-5-methylbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup G28

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-benzyloxy-5-vinylbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup G29

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-benzyloxy-5-ethynylbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup G30

Methylamid 3-azido-5-{6-[5-chlor-2-(3,5-dimethylisoxazol-4-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran -2-karboxylové kyseliny

C24^H25^C1N1O°5- MW 568.98. MS 569.1 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,69 (quart, 1H, J = 4,8 Hz); 8,40 (s, 1H); 8,35 (bs,

1H); 8,14 (s, 1H); 7,25 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,11 (d, 1H, J = 8,7 Hz);

7,07 (bs, 1H); 6,28 (d, 1H, J = 5,6 Hz); 6,05 (d, 1H, J = 6,6 Hz); 4,95 (s, 2H); 4,85 4,77 (mult, 1H); 4,67 - 4,52 (mult, 2H); 4,49 - 4,42 (mult, 1H); 4,39 - 4,32 (mult,

1H); 2,65 (d, 3H, J = 4,8 Hz); 2,38 (s, 3H); 2,22 (s, 3H).

• ·

- 209

Preparativní postup H1

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-chlorpurin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Triethylamin (4,4 ml, 0,032 ml) se přidá k roztoku methylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-chlorpurin-9-yl)-4-acetoxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny (4 g, 0,011 mmol) v methanolu (80 ml). Vzniklá směs se 15 hodin míchá a poté zkoncentruje. Zbytek se přečistí mžikovou chromatografií (5% methanol v dichlormethanu). Získá se 2,7 g (77 %) sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě bezbarvé pevné látky. MS 339 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDClg) δ 8,72 (s, 1H), 8,2 (s, 1H), 7,62 (bs, 1H), 5,98 (d, 1H, J = 6,7 Hz), 5,07 (t, 1H, J = 6,2 Hz), 4,65 (dd, 1H, J = 5,4, 2,7 Hz), 4,58 (m, 1H), 4,2 (bs, 1H), 2,88 (d, 1H, J = 4,9 Hz), 1,67 (bs, 1H)

Preparativní postup II

Alternativní příprava methylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-chlorpurin-9-yl)-5-methylkarbamoyltetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

K roztoku 4-azido-2-(6-chlorpurin-9-yl)-5-methylkarbamoyltetrahydrofuran-3-ylesteru octové kyseliny (1,1 g,

2,9 mmol) v bezvodém methanolu (100 ml), ochlazenému na 0°C se přidá methylamin (1,2 ml, 8,6 mmol). Výsledný roztok se 2 hodiny míchá při teplotě místnosti za bezvodých podmínek, načež se z něj v rotačním odpařováku odstraní rozpouštědlo. Pevný zbytek se přečistí mžikovou chromatografií (7% methanol v dichlormethanu). Získá se sloučenina uvedená v nadpisu ve formě bílé pěny.

C11HHCIN8O3. MW 338,72. MS 339,1 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 9,01 (s, 1H); 8,81 (s, 1H); 8,22 <qi, 1H, J = 4,2 Hz); 6,41 (dd, 1H, J = 5,2 Hz, J = 2,1 Hz); 6,12 (d, 1H, J = 5,2 Hz); 5,03 (q>, . 1H,

J = 5,2 Hz); 4,57 - 4,47 (mult, 1H); 4,41 (d, 1H, J = 3,9 Hz); 2,61 (d, 3H, J = 4,2 Hz).

• ·

210

Preparativní postup JI

Glykosidace

Methylamid (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-chlorpurin-9-yl)-4-acetoxyfuran-2-karboxylové kyseliny

6-Chlorpurin (20,4 g, 0,132 mmol) se suspenduje v hexamethyldisilazanu (165 ml). Vzniklá suspenze se zahřeje na 110°C a po 2 hodinách se vzniklá homogenní směs zkoncentruje. Pevný zbytek se dvakrát rekoncentruje z toluenu a na 1 hodinu umístí do vysokého vakua. Získaná pevná látka se smísí s methylamidem 1,2-bis-0-acetyl-3-azido-3-deoxy-D-ribofuranuronové kyseliny (12,7 g, 0,044 mol) a výsledná směs se rozpustí v bezvodém dichlorethanu (350 ml). Ke směsi se přidá molekulární síto 4A (15 g), směs se 15 minut míchá a přidá se k ní TMSOTf (16,0 ml, 0,088 mol). Reakční směs se 2 hodiny zahřívá na 60°C, ochladí a rozloží opatrným přídavkem nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (200 ml). K výsledné směsi se přidá ethylacetát (350 ml) a ethylacetátová směs se přefiltruje přes skleněnou fritu. Filtrát se extrahuje ethylacetátem (3x). Spojené organické vrstvy se promyjí vodným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem sodným, přefiltrují a filtrát se zkoncentruje. Zbytek se přečistí mžikovou chromatografií (15% a poté 20% aceton v dichlormethanu). Získá se sloučenina uvedená v nadpisu (10,6 g) ve formě špinavě bílé pěny. MS 381 (M+H) ⁺ . -^H NMR (CDC1₃) δ 8,8 (s, 1H), 8,2 (s, 1H), 7,6 (bs, 1H), 6,13 (d, 1H, J = 7,0 Hz), 5,87 (dd, 1H, J = 7,0, 5,6 Hz), 4,85 (dd, 1H, J = 5,6, 3,0 Hz), 4,58 (d, 1H, J = 3,0 Hz), 2,9 (d, 1H, J = 4,9 Hz), 2,11 (s, 3H).

Za použití podobného způsobu, jaký je popsán v preparativním postupu JI, se z odpovídajících výchozích látek vyrobí sloučenina z preparativního postupu J2.

- 211

Preparativní postup J2

Methylamid (2S, 3S,4R,5R)-3-azido-5-(2,6-dichlorpurin-9-yl)-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny

Preparativní postup K1

Methylamid 1,2-bis-0-acetyl-3-azido-3-deoxy-D-ribofuranuronové kyseliny

Methylamid 3-azido-3-deoxy-l,2-O-isopropyliden-a-D-ribofuranuronové kyseliny (12 g, 0,05 mmol) se rozpustí v kyselině octové (150 ml) a acetanhydridu (50 ml). Výsledná směs se ochladí v ledové lázni a přidá se k ní roztok kyseliny sírové (1 ml v 5 ml kyseliny octové). Výsledná směs se nechá zahřát na teplotu místnosti, 18 hodin míchá a přikape k nasycenému roztoku hydrogenuhličitanu sodného (2 litry). Vzniklá směs se extrahuje chloroformem (3x). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (2x) a nasyceným hydrogenuhličitanem sodným (2x) a vodným roztokem chloridu sodného (lx), vysuší síranem sodným, přefiltrují a filtrát se zkoncentruje. Získá se směs anomerních acetátů ve formě zlatohnědého oleje.

Preparativní postup LI

Methylamid 3-azido-3-deoxy-l,2-O-isopropyliden-a-D-ribofuranuronové kyseliny

Oxalylchlorid (15 ml) se při 0°C přidá k roztoku 3-azido-3-deoxy-a-D-ribofuranuronové kyseliny (30 g) v bezvodém tetrahydrofuranu (250 ml). Ke vzniklé směsi se přidá dimethylformamid (1 ml). Reakční směs se nechá zahřát na teplotu místnosti, při níž se začne vyvíjet plyn. Po 5 hodinách se směs zkoncentruje a zbytek se rozpustí v di• · ·

212 r- ·.

···· ·* ···· chlormethanu (100 ml). Dichlormethanový roztok se ochladí na 0°C a pomalu se k němu přidá roztok methylaminu v tetrahydrofuranu (260 ml 2M roztoku). Po 30 minutách se reakční směs zředí vodou (500 ml) a vodná směs se extrahuje chloroformem (3x). Spojené organické vrstvy se vysuší síranem sodným, přefiltrují a zkoncentruji. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu ve formě světle hnědé pevné látky. NMR (400 MHZ, CDC1₃) δ 6,39 (bs, 1H), 5,80 (d, 1H, J = 3,7 Hz),

4,67 (dd, 1H, J = 4,0, 3,7 Hz), 4,42 (d, 1H, J = 9,3 Hz),

3,6 (dd, 1H, J = 9,3, 4,0 Hz), 2,9 (d, 3H, J = 5,0 Hz), 1,54 (S, 3H), 1,34 (s, 3H)

Preparativní postup Ml

Methylester (2S,3S,4R,5R)-4-acetoxy-3-azido-5-(6-chlorpurin-9-yl)tetrahydrofuran-2-karboxylově kyseliny

Roztok 6-chlorpurinu (4,96 g, 32 mmol) a hexamethyl disilazanu (40 ml) se 3 hodiny zahřívá na 100°C za bezvodých podmínek. Výsledná směs se nechá zchladnout na teplotu místnosti a zkoncentruje v rotačním odpařováku za použití toluenu (3 x 50 ml) pro usnadnění odstranění rozpouštědla. Pevný zbytek se na 15 minut umístí pod vysoké vakuum, načež se k němu přidá bezvodý acetonitril (50 ml). Methylester 1,2-bis-0-acetyl-3-azido-3-deoxy-D-ribofuranuronové kyseliny (3,09 g, 10,7 nmol) se rozpustí v bezvodém acetonitrilu (20 ml) a přidá k reakční směsi. K reakční směsi se přidá trimethylsilyltrifluormethansulfonát (7,5 ml, 41,4 mmol). Reakč ní směs se 15 hodin míchá za bezvodých podmínek při 70°C, poté rozloží nasyceným vodným hydrogenuhličitanem sodným (200 ml) a přidá se k ní voda (160 ml). Výsledná směs se extrahuje ethylacetátem (4 x 100 ml), vysuší síranem sodným a zkoncentruje v rotačním odpařováku. Pevný zbytek se přečistí mžikovou chromatografií (hexan : ethylacetát, 7:3).

- 213 ·• ·

Získá se sloučenina uvedená v nadpisu (2,88 g) ve formě bílé pěny.

Teplota tání 94,0 až 96,0°C.

Ή NMR (400 MHz, CDCI₃) δ 8,73 (s, 1H); 8,60 (s, 1H); 6,36 (d, 1H, J = 5,4 Hz);

5,83 (t, 1H, J = 5,4 Hz); 4,83 - 4_r77 (mult, 1H); 4,65 (d, 1H, J = 4/ Hz); 3,84 (s, 3H);2,14(s, 3H).

Preparativní postup NI

Methylester 1,2-bis-0-acetyl-3-azido-3-deoxy-4-ribofuranuronovékyseliny

Smísí se ethylester 3-azido-3-deoxy-l,2-O-isopropyliden-a-D-ribofuranuronové kyseliny (4,85 g, 20 mmol), koncentrovaná kyselina sírová (5,5 ml), ledová kyselina octová (65 ml) a acetanhydrid (18 ml, 20 mmol). Výsledná směs se 15 hodin míchá při teplotě místnosti za bezvodých podmínek a poté vyjme do vody (500 ml). Vodná směs se pevným hydroxidem sodným zneutralizuje na pH 7 a extrahuje ethylacetátem (3 x 250 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí nasyceným vodným chloridem sodným (500 ml), vysuší síranem sodným a zkoncentrují v rotačním odpařováku. Pevný zbytek se přečistí mžikovou chromatografií za použití směsi hexanu a ethylacetátu vpoměru 2:1. Získá se 3,09 g titulní sloučeniny ve formě čirého bezbarvého oleje.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃) δ 6,18 (s, 1H); 5,33 (d, 1H, J = 5,0 Hz); 4,53 (d, 1H, J = 7,5 Hz); 4,44 - 4,38 (mult, 1H);,3,83 (s, 3H); 2,17 (s, 3H); 2,08 (s, 3H).

Preparativní postup Ol

Methylester 3-azido-3-deoxy-l,2-O-isopropyliden-a-D-ribofuranuronové kyseliny

214 *

K roztoku 3-azido-3-deoxy-l,2-isopropyliden-a-D-ribofuranuronové kyseliny (4,23 g, 18 mmol) v dimethylformamidu (50 ml) se přidá uhličitan draselný (3 g, 22 mmol) a jodmethan (2,3 ml, 37 mmol). Reakční směs se 15 hodin míchá při teplotě místnosti za bezvodých podmínek a poté vyjme do ethylacetátu (500 ml). Ethylacetátová směs se promyje vodou (500 ml), nasyceným vodným hydrogenuhličitaném sodným (2 x 50 ml) a nasyceným vodným chloridem sodný (500 ml). Spojené organické vrstvy se vysuší síranem sodným a zkoncentrují v rotačním odpařováku. Olejovitý zbytek se přečistí mžikovou chromatografií za použití směsi hexanu a ethylacetátu v poměru 7:3. Získá se 4,45 g sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě čirého bezbarvého oleje.

¹H NMR (400 MHZ, CDCl₃) δ 5,89 (d, 1H, J = 3,3 Hz), 4,74 4.68 (mult, 1H), 4,53 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 3,82 (s, 3H),

3.69 - 3,63 (mult, 1H), 1,55 (s, 3H), 1,34 (s, 3H)

Preparativní postup PÍ

3-Azido-3-deoxy-l,2-isopropyliden-a-D-ribofuranuronová kyselina

Roztok 3-azido-l,2,5,6-bis-0-isopropyliden-3-deoxy-D-alofuranosy (451 g, 1,58 mol) v diethyletheru (4,5 litru) se při teplotě okolí, která se udržuje pomocí vodní lázně, smísí s kyselinou jodistou (540 g, 2,37 mol). Po 24 hodinách se vysrážená sůl odfiltruje a promyje etherem. Filtrát se zkoncetruje a surový aldehyd se přidá ke směsi chloroformu (2,5 litru), acetonitrilu (2,5 litru) a vody (3,4 litru). Ke vzniklé směsi se za intenzivního míchání při teplotě místnosti udržované za použití vodní lázně přidá jodistan sodný (1211 g, 5,67 mol) a hydrát chloridu ruthenitého (14,5 g, 0,69 mol). Po 20 hodinách se vzniklá směs zředí chloroformem (4 litry) a vodou (4 litry).

Výsledná směs se přefiltruje přes pomocnou filtrační látku »«t *· • >

• · • * • · · ·· ··*·

w ·

Celit. Vrstvy se oddělí a vodná fáze se extrahuje chloroformem. Spojené organické vrstvy se zkoncentrují za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný (2 litry) a ethylacetát (3 litry). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (2 litry). Vodná vrstva se okyselí 2M kyselinou chlorovodíkovou a extrahuje ethylacetátem (3x3 litry). Spojené organické vrstvy se vysuší síranem sodným, přefiltrují a zkoncentrují. Získá se 208 g sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě špinavě bílé pevné látky. Tento produkt je podle tle a NMR Čistý. ^XH NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,5 (bs, 1H), 5,95 (d, 1H,

J = 3,7), 4,8 (dd, 1H, J = 4,0, 3,7 Hz), 4,6 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 3,72 (dd, 1H, J = 9,5, 4,0 Hz), 1,58 (s, 3H), 1,38 (s,

3H)

Preparativní postup Q1

3-Azido-l,2,5,6-bis-0-isopropyliden-3-deoxy-D-alofuranosa

Anhydrid trifluormethansulfonové kyseliny (1500 g,

5,3 mmol) se při -15°C přikape k roztoku pyridinu (493 g,

6,2 mol) v dichlormethanu (7,5 litru). Po 30 minutách se ke vzniklé směsi přidá roztok 1,2,5,6-bis-O-isopropyliden-D-glukofuranosy (735 g, 2,84 mol) ve formě roztoku v dichlormethanu (2,5 litru). Po 1 hodině se reakční směs rozloží přikapáním vody (4 litry) a nechá zahřát na 0°C. Vrstvy se oddělí a organická vrstva se vysuší síranem sodným, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje na červený olej. Vzniklý trifluormethansulfonát se ihned rozpustí v dimethylformamidu (8 litrů). Výsledný roztok se smísí s azidem sodným (554 g, 8,5 mol). Získaná směs se zahřeje na 35°C a po 18 hodinách nalije do vody (12 litrů). Vodná směs se extrahuje ethylacetátem (3x4 litry). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (2x3 litry) a vodným roztokem chloridu sodného (1x3 litry), vysuší síranem sodným,

216 přefiltrují a filtrát se zkoncentruje. Zbytek se předem naadsorbuje na silikagel a přečistí mžikovou chromatografii za použití směsi hexanu a ethylacetátu nejprve v poměru 6 :

a poté 4:1. Získá se 228 g sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě bezbarvého oleje. ¹H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 5,77 (d, IH, J = 3,7 Hz), 4,7 (dd, IH, J = 4,4, 3,7 Hz), 4,15 (m, 2H), 4,0 (m, 2H), 3,5( dd, IH, J = 9,1, 4,4 Hz), 1,56 (s,

3H), 1,47 (s, 3H), 1,37 (s, 3H), 1,34 (s, 3H)

Preparativní postup R1

5-Chlor-2-(4,5-dihydro-lH-imidazol-2-ylmethoxyJbenzylamin

30% roztok chlorovodíku v etheru (0,5 ml) se přidá k roztoku terc-butylesteru [5-chlor-2-(4,5-dihydro-lH-imidazol-2-ylmethoxy)benzyl]karbamové kyseliny (146 mg, 0,43 mmol) v methanolu (5'ml). Vzniklá směs se přes noc míchá, poté zkoncentruje a zbytek se trituruje s etherem, odfiltruje, promyje etherem a vysuší. Získá se 76 mg sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě bezbarvé pevné látky. -^H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,4 (m, 2H), 7,04 (m, IH), 4,91 (s, 2H), 4,12 (s, 2H), 4,00 (s, 2H), 3,79 (s, 3H)

Preparativní postup SI terc-Butylester (5-chlor-2-kyanomethoxybenzyl)karbamové kyseliny

Diterc-butyldikarbonát (0,45 g, 2,03 mmol) se při teplotě okolí přidá k roztoku (2-aminomethyl-4-chlorfenoxy)acetonitrilu (0,2 g, 1,01 mmol) a triethylaminu (0,57 ml, 4 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (10 ml). Po 4 hodinách se reakční směs zředí ethylacetátem (30 ml). Ethylacetátová směs se promyje 1M roztokem kyseliny chlorovodíkové (lx), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (lx) a vodným

217 • · · · · · · · *♦ ···· · ···· · • · · · · · · ···· ·· ··· «·· ·· ···· roztokem chloridu sodného (lx), vysuší síranem sodným, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje. Zbytek se přečistí mžikovou chromatografii za použití 5 až 20% ethylacetátu v hexanu. Získá se 218 mg (74 %) sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě bezbarvé pevné látky, ¹H NMR (400 MHz, CDC1₃): 7,3 (m, 2H), 6,92 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 4,91 (bs, 1H), 4,78 (s, 2H), 4,28 (s, 2H), 1,41 (s, 9H)

Preparativní postup TI terc-Butylester 2-aminomethyl-4-chlorfenoxyoctové kyseliny

Raneyův nikl (asi 0,5 g) se přidá k míchanému roztoku terc-butylesteru 2-kyano-4-chlorfenoxyoctové kyseliny (560 mg, 0,21 mmol) v methanolu (25 ml) obsahujícím 1 ml nasyceného hydroxidu amonného. Výsledná směs se umístí pod atmosféru vodíku o tlaku 275 kPa, 2 hodiny třepe, poté přefiltruje a filtrát se zkoncentruje. Zbytek se rozdělí mezi ÍM kyselinu chlorovodíkovou a ether. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje etherem. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se znovu extrahuje etherem. Vodná vrstva se roztokem uhličitanu draselného zalkalizuje na pH asi 10 a extrahuje etherem (3x). Spojené organické vrstvy se vysuší síranem hořečnatým, přefiltrují a filtrát se zkoncentruje. Získá se 360 mg sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě oleje. MS 272 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,22 (s, 1H), 7,12 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 6,61 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 4,5 (s, 2H), 3,85 (s, 2H), 2,62 (bs, 2H), 1,41 (s, 9H)

Preparativní postup U 1 terc-Butylester 2-kyano-4-chlorfenoxyoctové kyseliny

Hydrid sodný (96 mg, 4,1 mmol) se při -10°C přidá k roztoku 2-kyano-4-chlorfenolu (0,5 g, 3,26 mmol) v bezvodém

218 dimethylformamidu (6 ml). Po 15 minutách vznikne homogenní směs, k níž se přikape terc-butylbromacetát. Po 2 hodinách se směs rozloží vodou a vodná směs se extrahuje ethylacetátem (2x). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (2x), vodným roztokem chloridu sodného (lx), vysuší síranem sodným, přefiltrují a filtrát se zkoncentruje. Zbytek se přečistí mžikovou chromatografii za použití 10% ethylacetátu v hexanech. Získá se 850 mg sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě bezbarvého sirupu (97 %). ¹H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,53 (d, 1H, J = 2,7 Hz), 7,46 (dd, 1H, J = 9,1, 2,7, Hz),

6,78 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 4,63 (s, 3H), 1,46 (s, 9H)

Preparativní postup VI (-)-5-Chlor-2-(tetrahydrofuran-3-ylmethoxy)benzylamin

Hydrochlorid 5-chlor-2-(tetrahydrofuran-3-ylmethoxy)benzylaminu se nejprve převede na volnou bázi, která se podrobí chirální HPLC. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu.

[a]22 = -23,57° (c = 0,140, MeOH) ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,35 (bs, 3H); 7,49 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,37 (dd,

1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,07 (d, 1H, J = 8_r7 Hz); 4,00 - 3,90 (mult, 4H); 3,80 3,70 (mult, 2H); 3,65 - 3,60 (mult, 1H); 3,60 - 3,55 (mult, 1H); 2,75 - 2,71 (mult,

1H); 2,05 - 1,95 (mult, 1H); 1,77 -1,63 (mult, 1H).

Podobným způsobem, jaký je popsán v preparátivním postupu VI, se vyrobí sloučenina z následujícího preparativního postupu V2.

Preparativní postup V 2 (+)-5-Chlor-2-(tetrahydrofuran-3-ylmethoxy)benzylamin • ·

- 219

[a]₂2 = +16,32° (c = 0,190, MeOH) ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,35 (bs, 3H); 7,49 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,37 (dd,

1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,07 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 4,00 - 3,90 (mult, 4H); 3,80 3,70 (mult, 2H); 3,65 - 3.,60 (mult, 1H); 3,60 - 3,55 (mult, 1H); 2,75 - 2,71 (mult,

1H); 2,05 -1,95 (mult, 1H); 1,77 -1,63 (mult, 1H).

Preparativní postup W1

Hydrochlorid 5-chlor-2-(2-morfolin-4-ylethoxy)benzylaminu

Roztok 5-chlor-2-(2-morfolin-4-ylethoxyJbenzonitrilu (412 mg, 1,54 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (15 ml) se při teplotě místnosti přidá k roztoku lithiumaluminiumhydridu (3,53 ml, l,0M v tetrahydrofuranu). Reakční směs se 15 hodin míchá při teplotě místnosti za bezvodých podmínek, poté ochladí na 0°C a přidá se k ní 1M vodný hydroxid sodný (0,54 ml). Vzniklá směs se 0,5 hodiny míchá při 0°C, načež se z ní odfiltruje pevná látka, která se promyje tetrahydrofuranem. Filtrát se zkoncentruje v rotačním odpařováku a vzniklá pevná látka se rozpustí ve 30 ml absolutního ethanolu. K reakční směsi se přidá vodný HC1 roztok (l,0M,

1,7 ml). Ze vzniklé směsi se v rotačním odpařováku odpaří rozpouštědlo a výsledná pevná látka se trituruje s diethyletherem. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu.

C13H19CIN2O2. MW 270,76. MS 271,2 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 7,45 - 7,40 (mult, 2H); 7,13 (d, 1H, J = 5.9); 4,34 (bs,

2H); 4,15 (s, 2H); 3.79 (bs, 4H); 3,35 - 3,25 (mult, 4H); 3,08 (bs, 2H); 2,83 (bs, 2H)

Podobným způsobem, jaký je popsán v preparátivním postupu Wl, se z odpovídajících výchozích látek vyrobí

220 ·· ·Φ · « ·· ·· • ♦ · · · · · · ·«· _ · · · · · · · · • ··· · · ···· « • · · · · · · ···· ·· ··· ··· ·« ···· sloučeniny uvedené v následujících preparativních postupech W2 až W26.

Preparativní postup W 2

Hydrochlorid 2-benzyloxy-5-chlorbenzylaminu

Teplota tání 150,5 až 152,5°C ^C14^H14^C1N°. MW 247,73. MS 248,1 (M+H)⁺ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,34 (bs, 3H); 7,49 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,47 - 7,38 (mult, 2H); 7,43 - 7,33 (mult, 3H) 7,32 - 7,25 (mult, 1H); 7,10 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 5,14 (s, 2H); 3,96 (s, 2H).

Preparativní postup W3

Hydrochlorid 5-chlor-2-cyklobutylmethoxybenzylaminu

Teplota tání: 168,0 až 170,0°C

C₁₂H₁₆CINO. MW 225,72. MS 225,8 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,36 (bs, 3H); 7,48 (d, 1H, J = 2,5 Hz); 7,36 (dd,

1H, J = 8,7 Hz, J = 2,5 Hz); 7,06 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 3,97 (d, 2H, J = 6,4 Hz); 3,92 (bs, 2H); 2,76 - 2,71 (mult, 1H); 2,09 - 1,97 (mult, 2H); 1,97 -1,77 (mult, 4H).

Preparativní postup W4

Hydrochlorid 5-chlor-2-(3-methoxybenzyloxy)benzylaminu

Teplota tání: 159,0 až 160,0°C

C-,₅H₁₆CINO₂. MW 277,75. MS 277,9 (M+H)+

Ή NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,37 (bs, 3H); 7,51 (d, 1H, J = 2_t7 Hz); 7,38 (dd,

1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7Hz); 7,28 (t, 1H, J = 8,0 Hz); 7,10 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 7,06 7,00 (mult, 2H); 6,87 (d, 1H, J = 8,3 Hz); 5,13 (s, 2H); 3,99 (s, 2H); 3,74 (s, 3H).

221

Preparativní postup W5

Hydrochlorid 2-chlor-2-(2,5-dimethoxybenzyloxy)benzylaminu

Teplota tání: 212,0 až 213,0°C ^c16^h18^cino3· MW 307,78. MS 307,8 (M+H)+.

'H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,30 (bs, 3H); 7,50 (d. 1H, J = 2,7 Hz); 7,38 (dd,

1H, J = 8,9 Hz, J = 2,7 Hz); 7,11 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 7,02 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 6,96 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,86 (dd, 1H, J = 8,9 Hz, J = 3,1 Hz); 5,09 (s, 2H); 3,98 (s, 2H); 3,75 (s, 3H); 3,68 (s, 3H).

Preparativní postup W6

Hydrochlorid 5-chlor-2-(3-chlorbenzyloxy)benzylaminu

Teplota tání: 164,0 až 166,0°C ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,31 (bs, 3H); 7,58 (s 1H); 7,52 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,50 - 7,37 (mult, 4H); 7,11 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 5,19 (s, 2H); 4,02 (bs, 2H).

Preparativní postup W7

Hydrochlorid 5-chlor-2-(2-chlorbenzyloxy)benzylaminu ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 8,33 (bs, 3H); 7,85 - 7,80 (mult, 1H); 7,55 - 7,45 (mult, 2H); 7,45 - 7,35 (mult, 3H); 7,17 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 5,22 (s, 2H); 4,00 (d, 2H, J = 5,2 Hz).

Preparativní postup W8

Hydrochlorid 5-chlor-2-(tetrahydrofuran-2-ylmethoxy)benzylaminu

222 - .

··· • ·

Teplota tání: 105,5 až 108,0°C ’H NMR (400 MHz. DMSO-d₆) δ 8,35 (bs. 3H); 7,49 (d, 1H. J = 2,7 Hz); 7,37 (dd,

1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,07 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 4,00 - 3,90 (mult, 4H); 3,80 3,70 (mult, 2H); 3,65 - 3,60 (mult, 1H); 3,60 - 3,55 (mult, 1H); 2,75 - 2,71 (mult,

1H); 2,05 - 1,95 (mult, 1H); 1,77 - 1,63 (mult, 1H).

Preparativní postup W9

Hydrochlorid 5-chlor-2-(4-methylbenzyloxy)benzylaminu

Teplota tání: 155,0 až 157,0°C ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,33 (bs, 3H); 7,50 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,40 - 7,35 (mult, 3H); 7,17 (d, 2H, J = 7,7 Hz); 7,12 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 5,11 (s, 2H); 3,96 (bs, 2H); 2,28 (s, 3H).

Preparativní postup W10

Hydrochlorid 2-chlor-2-(2-methylbenzyloxy)benzylaminu

Teplota tání: 176,0 až 178,0C ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,38 (bs, 3H); 7,53 (d, 1H, J = 2,7Hz); 7,45 - 7,38 (mult, 2H); 7,25 - 7,17 (mult, 4H); 5,15 (s, 2H); 3,97 (d, 2H, J = 5,4 Hz); 2,31 (s, 3H).

Preparativní postup Wll

Hydrochlorid 5-chlor-2-(3-methylbenzyloxy)benzylaminu

Teplota tání: 137,0 až 140,0°C ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,26 (bs, 3H); 8,49 (d, 1H, J = 2,5 Hz); 7,39 (dd,

1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,29 - 7,22 (mult, 3H); 7,12 (d, 2H, J = 8,9 Hz); 5,12 (s 2H); 4,02 - 3,97 (mult, 2H); 2,30 (s, 3H).

223 ··· · · · · · ··· · · · · · · · • 9 9 9 9 9 9

9999 99 999 999 99 9999

Preparativní postup W12

Hydrochlorid 5-chlor-2-(2-methoxybenzyloxy)benzylaminu

Teplota tání: 199,5 až 200,5°C ^C15^H16^C1NO2· ²⁷⁷/⁷⁵· MS 278,1 (M+H)⁺ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,37 (bs, 3H); 7,51 (d, 1H, J = 2,3 Hz); 7,41 (d,

1H, J = 7,5 Hz); 7,37 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,5 Hz); 7,33 (dd, 1H, J = 8,3 Hz, J = 7,5 Hz); 7,12 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 7,04 (d, 1H, J = 8,3 Hz); 6,94 (t, 1H, J = 7,5 Hz); 5,12 (s, 2H); 3,97 (bs, 2H); 3,81 (s, 3H).

Preparativní postup W13

Hydrochlorid 5-chlor-2-(furan-3-ylmethoxy)benzylaminu

Teplota tání: 137,0 až 140,0°C

C₁₂H-i2CINO2. MW 237,7. MS 238,1 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,33 (bs, 3H); 7,80 (s, 1H); 7,66 (S,1 H); 7,49 (d,

1H, J = 2,7 Hz); 7,39 (dd, 1H, J = 8,9 Hz, J = 2,7 Hz); 7,17 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,62 (s, 1H); 5,03 (s, 2H); 3,92 (q, 2H, J = 5,7 Hz).

Preparativní postup W14

5-Chlor-2-(4-methoxybenzyloxy)benzylamin

Teplota tání: 142,0 až 147,0°C

Ci5H₁₆CINO₂. MW 277,75. MS 278,1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,38 (bs, 2H); 8,25 (bs, 1H); 7,50 (d, 1H, J = 2,1 Hz); 7,43 - 7,36 (mult, 3H); 7,14 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,95 - 6,90 (mult, 2H); 5,07 (s, 2H); 3,96 - 3,90 (mult, 2H); 3,73 (s, 3H).

»« ·· • · • « • « • · · • · ·· · « • ·

Preparativní postup W15

224 • ··· · » · ► ·· ··

5-Chlor-2-cyklopentylmethoxybenzylamin

Teplota tání: 155,0 až 157,0°C ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,34 (bs, 3H); 7,47 (d, 1H, J = 2,5 Hz); 7,36 (dd,

1H, J = 8,9 Hz, J = 2,5 Hz); 7,06 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 3,94 (bs, 2H); 3,88 (d, 2H, J = 6,8 Hz); 2,32 (sept, 1H, J = 7,5 Hz); 1_r80 -1,70 (mult, 2H); 1,62 -1,45 (mult, 4H); 1,38-1,28 (mult, 2H).

Preparativní postup W 1 6

Hydrochlorid 5-chlor-2-[3-(2-morfolin-4-ylethoxy)benzyloxy] benzylaminu

C20^H25^CIN2°3- ^{MW 376},⁸⁹· ^{MS 377}/¹ (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,39 (bs, 3H); 7,51 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,39 (dd,

1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,31 (t, 1H, J = 7,9 Hz); 7,12 (d, 2H, J = 8,9 Hz); 7_z07 (d. 1H, J = 7,5 Hz); 6,93 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 5,14 (s, 2H); 4,47 - 4,27 (mult, 2H);

4,02 - 3,98 (mult, 2H); 3,98 - 3,70 (mult, 4H); 3,59 - 3,39 (mult, 4H); 3,35 - 3,25 (mult, 2H).

Preparativní postup W17

Hydrochlorid 5-chlor-2-(tetrahydrofuran-3-ylmethoxy)benzylaminu

Teplota tání: 105,5 až 108,0’C ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,35 (bs, 3H); 7,49 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,37 (dd,

1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,07 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 4,00 - 3,90 (mult, 4H); 3,80 3,70 (mult, 2H); 3,65 - 3,60 (mult, 1H); 3,60 - 3,55 (mult, 1H); 2,75 - 2,71 (mult, 1H); 2,05 - 1,95 (mult, 1H); 1,77 - 1,63 (mult, 1H).

99

9

9 9

999 9 • 9

225

99

9 9 9

9 9

999

9

9999 99

99

9

999 999

Preparativní postup W18

Hydrochlorid 5-chlor-2-(tetrahydrofuran-3-ylmethoxyJbenzylaminu

Teplota tání: 105,5 až 108,0°C

Ή NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,35 (bs, 3H); 7,49 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,37 (dd,

1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,07 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 4,00 - 3,90 (mult, 4H); 3,80 3,70 (mult, 2H); 3,65 - 3,60 (mult, 1H); 3,60 - 3,55 (mult, 1H); 2,75 - 2,71 (mult, 1H);.2,05 - 1,95 (mult, 1H); 1,77 - 1,63 (mult, 1H).

Preparativní postup W19

Hydrochlorid 5-chlor-2-(furan-2-ylmethoxy)benzylaminu

Teplota tání: 145,0 až 150,0°C ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,35 (bs, 3H); 7,69 (s, 1H); 7,50 (d, 1H, J = 2,5

Hz); 7,39 (dd, 1H, J = 8,9 Hz, J = 1,9 Hz); 7,25 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 6,60 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 6,46 (bs, 1H); 5,14 (s, 2H); 3,89 (d, 2H, J = 4,4 Hz).

Preparativní postup W20

Hydrochlorid 5-chlor-2-(2,2,7,7-tetramethyltetrahydrobis[1,3]dioxolo[4,5-b;4',5']pyran-5-ylmethoxy)benzylaminu ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,23 (bs, 3H); 7,48 - 7,42 (mult, 1H); 7,34 (dd, 1H

J = 8,,9 Hz, J =2,7 Hz); 7,13 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 5,43 (d, 1H, J = 5,0 Hz); 4,59 (dd, 1H, J = 8,1 Hz, J = 2,3 Hz); 4,36 - 4,40 (mult, 2H); 4,01 (s, 2H); 4,05 - 3,80 (mult, 3H); 1,30 (d, 6H, J = 6,6 Hz); 1,23 (d, 6H, J = 11,0 Hz).

9 ·

• ·

999

Preparativní postup W21

226 ·« ·« • · · · • · 9 • ··· • ·

9 9 99

9 9 •

999

5-chlor-2-(5-dimethylaminomethylfuran-2-ylmethoxyJbenzylamin

C₁₅Hi9CIN₂O2. MW 294.78. MS 295.2 (M+H)+.

Ή NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 8,49 (bs, 3H); 7,52 (d, 1H, J = 2,4 Hz); 7,43 (dd,

1H, J = 9,0 Hz, J = 2,4 Hz); 7,29 (d, 1H, J = 9,0 Hz); 6,77 - 6,68 (mult, 2H); 5,18 (s, 2H); 4,39 - 4,34 (mult, 2H); 3,93 (d, 2H, J = 5,6 Hz); 2,76 - 2,61 (mult, 6H).

Preparativní postup W22

Hydrochlorid 5-chlor-2-(naftalen-l-ylmethoxyJbenzylaminu

Teplota tání: 196,0 až 198,0°C

C₁₈H₁₆CINO. MW 297,79. MS 297,9 (M+H)+.

¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 8,35 (bs, 3H); 8,14 (dd, 1H, J = 8,9 Hz, J = 2,7 Hz); 8,03 - 7,92 (mult, 2H); 7,72 (d, 1H, J = 6,9 Hz); 7,63 - 7,41 (mult, 5H); 7/0 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 5,66 (s, 2H); 3,95 (d, 2H, J = 5,6 Hz).

Preparativní postup W23

Hydrochlorid 5-chlor-2-(4-chlorbenzyloxy)benzylaminu ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,35 (bs, 3H); 7,54 - 7,47 (mult, 3H); 7,46 - 7,35 (mult, 3H); 7,10 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 5,16 (s, 2H); 3,99 (bs, 2H).

Preparativní postup W24

5-Chlor-2-(2,5-dimethylfuran-2-ylmethoxy)benzylamin

Modifikací způsobu popsaného v preparativním postupu Wl, při níž se namísto hydrochloridové soli izoluje

- 227 - ’ .· ·· * 0 0« 00

0 00 00 0 · 0

0 0 0 ··« *0· 0 · 0 « · 0 · • ♦ 0 0 0 0 ♦· 000 00· ·· 00·· sloučenina uvedená v nadpise ve formě volné báze, se volná báze, 5-chlor-2-(2,5-dimethylfuran-3-ylmethoxy)benzonitril, převede na titulní sloučeninu. Po rozložení směsi hydroxidem sodným a filtraci se pevná látka promyje tetrahydrofuranem a filtrát se zkoncentruje v rotačním odpařováku. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu ve formě světle žlutého oleje. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 7/31 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,15 (dd, 1H, J = 8,7 Hz J = 2,7 Hz); 6,98 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,00 (s, 1H); 4,78 (s, 2H); 3,56 (s, 2H); 2,18 (s, 3H); 2,14 (s, 3H); 1,65 (bs, 2H).

Preparativní postup W25

5-Chlor-2-benzylamin

Modifikací způsobu popsaného v preparativním postupu Wl, při níž se namísto hydrochloridové soli izoluje sloučenina uvedená v nadpisu ve formě volné báze, se 5-chlor-2-methoxybenzonitril převede na titulní sloučeninu. Po rozložení směsi hydroxidem sodným a filtraci se pevná látka promyje tetrahydrofuranem. Filtrát se zkoncentruje v rotačním odpařováku. Výsledný viskosní olej se vyjme do diethyletheru (100 ml) a vody (100 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje ještě dvakrát diethyletherem. Spojené organické vrstvy se promyjí vodnou nasycenou kyselinou chlorovodíkovou, vysuší síranem sodným, přefiltrují a z filtrátu se v rotačním odpařováku odpaří rozpouštědlo. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu ve formě žlutého oleje.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,43 - 7,38 (mult, 1H); 7,25 - 7,15 (mult, 1H); 6_Z92 (td, 1H, J =11 Hz, J = 8,7 Hz ); 3,75 (d, 3H, J = 7,2 Hz); 3,65 - 3,55 (mult, 2H);

1,72 (bs, 2H).

228 • · 4 · 4 4 4 4 · 4 C

444 4 4 44 -4 ·44 4 4 44444

4 4 4 4 4 4 • 444 44 444 »·4 44 4444

Preparativní postup W26 [3-(2-Morfolin-4-ylethoxy)fenyl]methanol

Modifikací způsobu popsaného v preparativním postupu Wl, při níž se namísto přidání vodného HC1 roztoku titulní sloučenina extrahuje jako alkohol, se 3-(2-morfolin-4-ylethoxy)benzaldehyd převede na titulní sloučeninu. Po rozložení směsi hydroxidem sodným a filtraci se pevná látka promyje tetrahydrofuranem. Filtrát se zkoncentruje v rotačním odpařováku. Výsledný viskosní olej se vyjme do diethyletheru (100 ml) a vody (100 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje ještě dvakrát diethyletherem. Spojené organické vrstvy se promyjí vodným nasyceným chloridem sodným, vysuší síranem hořečnatým, přefiltrují a z filtrátu se v rotačním odpařováku odstraní rozpouštědlo. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu ve formě žlutého oleje.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,18 (t, 1H, J = 7,9 Hz); 6,87 - 6,81 (mult, 2H);

6,76 (d, 1H, J = 8,1 Hz); 5,17 - 5,09 (mult, 1H); 4,43 (d, 2H, J = 5,5 Hz); 4,04 (t, 2H,

J = 5,6 Hz); 3,59 - 3,51 (mult, 4H); 2,70 - 2,62 (mult, 2H); 2,50 - 2,38 (mult, 4H).

Preparativní postup XI

5-Chlor-2-(3-methylisoxazol-5-ylmethoxy)benzylamin

Do nádoby obsahující bezvodý 2-propanol (40 ml), hydrát hydrazinu (4 ml) a bezvodý tetrahydrofuran (60 ml) se při teplotě místnosti přidá 2-[5-chlor-2-(3-methylisoxazol-5-ylmethoxy)benzyl]isoindol-l,3-dion (5 g, 13 mmol).

Reakční směs se 3 hodiny míchá při 50°C. Pevná látka se odfiltruje a promyje tetrahydrofuranem. Filtrát se zkoncentruje a zbytek se rozpustí v etheru (100 ml). Etherový roztok se promyje ÍM hydroxidem sodným (lx) a chloridem sodným, vysuší síranem hořečnatým a zkoncentruje. Získá se »« aa a a « a a a • ·

229 • a »4 a a a a a ·* a • * a · • 999 9 9 • · · eaae aa aaa a aaa a a aaa a sloučenina uvedená v nadpisu ve formě pevné látky.

Teplota tání: 32,0 až 35,0°C ^C12^H13^C1N2°2· ²⁵²<⁷⁰· ^MS 253,1 (M+H)⁺ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 7,37 (d, 1H, J = 2,6 Hz); 7,18 (dd, 1H, J = 8,8 Hz,

J = 2,6 Hz); 7,04 (d, 1H, J = 8,8 Hz); 6,42 (s, 1H); 5,21 (s, 2H); 3,60 (s, 2H); 2,18 (s,3H); 1,71 (bs, 2H).

Podobným způsobem, jaký je popsán v preparativním postupu XI, se z vhodných výchozích látek vyrobí sloučeniny uvedené v preparativních postupech X2 až X6.

Preparativní postup X 2

5-Chlor-2-(pyridin-3-ylmethoxy)benzylamin ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,63 (d, 1H, J = 1,5 Hz); 8,50 (dd, 1H, J = 4_Z8 Hz,

J =1,5 Hz); 7,83 (dd, 1H, J = 6,0 Hz, J = 3,1 Hz); 7,42 - 7,35 (mult, 2H); 7,20 (dd,

1H, J = 8,7 Hz, J = 2,9 Hz); 7,02 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 5,13 (s, 2H); 3,67 (s, 2H).

Preparativní postup X3

5-Chlor-2-(thiazol-2-ylmethoxy)benzylamin

Teplota tání: 74,0 až 76,0°C c-nHuCiNaOS. mw 254,74. ms 255,1 (m+h)+ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 7,80 (d, 1H, J = 3,3 Hz); 7,74 (d, 1H, J = 3,3 Hz); 7,39 (d, 1H, J = 2,7Hz); 7,19 (dd, 1H, J = 8,3 Hz, J = 2,7 Hz); 7,05 (d, 1H, J = 8/ Hz); 5,41 (s, 2H); 3,68 (s, 2H); 1,78 (bs, 2H).

Preparativní postup X 4

2-(Benzothiazol-2-ylmethoxy)-5-chlorbenzylamin

230

Φ* «4 • « « » « · · _ * 999

9

9999 99 «· ** **

9 9 9 9

9 9 9

9 9 9 9

9 9 9

9 9 9 99 9 9

Teplota tání: 72,0 až 79,0°C C15H13CIN2OS. MW 304,80. MS 305,1 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,09 (d, 1H, J = 7,9 Hz); 7,97 (d. 1H, J = 7,9 Hz);

7,49 (dd, 1H, J = 8,1 Hz, J =7,3 Hz); 7,44 - 7,39 (mult, 2H); 7,20 (dd, 1H, J = 8,6 Hz, J = 2,6 Hz); 7,07 (d, 1H, J = 8,6 Hz); 5,57 (s, 2H); 3,75 (s, 2H); 1,83 (bs, 2H).

Preparativní postup X 5

2-(Benzofuran-2-ylmethoxy)-5-chlorbenzylamin

Teplota tání: 75,5 až 77,0°C θ16^Η14°^ΙΝΟ2· MW 287,75. MS 288,0 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,60 (d, 1H, J = 7,9 Hz); 7,54 (d, 1H, J = 7,9 Hz);

7,36 (d, 1H, J = 2,1 Hz); 7,28 (t, 1H, J = 7,3 Hz); 7,25 - 7,16 (mult, 2H); 7.,13 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 6,99 (s, 1H); 5,25 (s, 2H); 3,61 (s, 2H); 1,78 (bs, 2H).

Preparativní postup X 6

5-Chlor-2-(thiofen-2-ylmethoxy)benzylamin

C12H12CINOS. MW 253,75. MS 254,0 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,53 (dd, 1H, J = 5,0 Hz, J = 1,2 Hz); 7,40 - 7,36 (mult, 1H); 7,22 - 7,16 (mult; 2H); 7,07 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,3 Hz); 7,04 - 6,98 (mult, 1H); 5,29 (s, 2H); 3,62 (s, 2H); 1,79 (bs, 2H).

Preparativní postup Yl

5-Chlor-2-(isothiazol-5-ylmethoxy)benzylamin

Ke směsi 2-[5-chlor-2-(isothiazol-5-ylmethoxy)benzyl]isoindol-1,3-dionu (464 mg, 1,20 mmol), 2-propanolu (20 ml), vody (2,5 ml) a tetrahydrofuranu (25 ml) se přidá tetra ··

231 »· • ·« • · ···· ·« >

··· · «· ·· • f · *· • * • · • · • · ··»· hydroboritan sodný (295 mg, 7,80 mmol). Reakční směs se 16 hodin míchá při teplotě místnosti, načež se z ní v rotačním odpařováku odstraní rozpouštědlo. Olejovitý zbytek se vyjme do dichlormethanu (50 ml). Organická vrstva se promyje vodou (50 ml), nasyceným vodným chloridem sodným (50 ml), vysuší síranem sodným, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje v rotačním odpařováku. Zbytek se vyjme do 2-propanolu (20 ml), ledové kyseliny octové (1,2 ml) a vody (1,0 ml). Reakční směs se v uzavřené nádobě 24 hodin zahřívá na 80°C, načež se z ní v rotačním odpařováku odstraní organické rozpouštědlo. Olejovitý zbytek se vyjme do dichlormethanu (50 ml). Organická vrstva se promyje vodou (50 ml), nasyceným vodným chloridem sodným (50 ml), vysuší síranem sodným a zkoncentruje v rotačním odpařováku. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,50 (s, 1H); 7,42 - 7,38 (mult, 2H); 7,19 (dd, 1H,

J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,02 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 5,50 (s, 2H); 3,65 (s, 2H); 1,73 (bs, 2H).

Podobným způsobem, jaký je popsán v preparátivním postupu Yl, se z vhodných azidů vyrobí sloučeniny uvedené v preparativních postupech Y2 a Y3.

Preparativní postup Y2

5-Chlor-2-(chinolin-2-ylmethoxy)benzylamin

C17H15CIN2O. MW 298,77. MS 299,2 (M+H)+ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,40 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 8,03 - 7,96 (mult, 2H);

7,76 (t, 1H, J = 6,8 Hz); 7,65 (d, 1H, J = 8,3 Hz); 7,60 (t 1H, J = 6,8 Hz); 7,42 (s,

1H); 7,18 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 7,01 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 5,37 (s, 2H); 3,78 (s. 2H).

• ·

- 232 • ·

Preparativní postup Y3

5-Chlor-2-(4-methyl-[1,2,3]thiadiazol-5-ylmethoxy)benzylamin

Teplota tání: 64,0 až 66,0°C

CnH₁₂CIN₃OS. MW 269,75. MS 270,1 (M+H)⁺.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,42 (d, 1H, J = 2,3 Hz); 7,25 (dd, 1H, J = 8,7 Hz,

J = 2,3 Hz); 7,10 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 5,53 (s, 2H); 3,65 (s, 2H); 2.66 (s, 3H); 1,84 (bs, 2H).

Preparativní postup Z1

2-Benzyloxy-5-kyanobenzylamin

Trifenylfosfin (1,64 g, 6,24 mmol) se při 0’C přidá k roztoku 2-benzyloxy~5-kyanobenzylazidu (1,1 g, 4,16 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (10 ml). Po 1 hodině se ke vzniklé směsi přidá hydroxid amonný (0,5 ml). Výsledná směs se zahřeje na teplotu místnosti, přes noc míchá a poté zkoncentruje. Zbytek se přečistí mžikovou chromatografii za použití 3% methanolu v dichlormethanu. Získá se 677 mg (69 %) sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě bezbarvého oleje.

¹H NMR (400 MHz, CDCl-j) δ 7,6 - 7,3 (m, 7H) , 6,95 (d, IH, J = 9,1 Hz), 5,18 (S, 2H), 3,9 (s, 2H)

Podobným způsobem, jaký je popsán v preparátivním postupu Zl, se z odpovídajících azidů vyrobí sloučeniny uvedené v preparativních postupech 72 až 74.

Preparativní postup Z2

2-Benzyloxy-5-ethenylbenzylamin

Preparativní postup Z3

2-Benzyloxy-5-ethynylbenzylamin

Preparativní postup Z4 (2-Aminomethyl-4-chlorfenoxy)acetonitril

Preparativní postup AA1

2-Benzyloxy-5-trifluormethylbenzylamin

Lithiumaluminiumhydrid (136 mg, 3,58 mmol) se při 0°C přidá k roztoku 2-benzyloxy-5-trifluormethylbenzylazidu (1,1 g, 3,58 mmol). Po 1 hodině se reakční směs rozloží postupným přídavkem vody (136 μΐ), 15% hydroxidu sodného (136 μΐ) a vody (400 μΐ), zředí dichlormethanem, vysuší síranem hořečnatým, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje. Zbytek se přečistí mžikovou chromatografii za použití 3% methanolu v dichlormethanu. Získá se 825 mg (82 %) sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě bezbarvého oleje. MS 282 (M+H) ⁺ . ^H NMR (400 MHz, CDClg) δ 7,6 - 7,3 (m, 7H) , 6,92 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 5,18 (s, 2H), 3,9 (s, 2H), 2,65 (bs, 2H)

Podobným způsobem, jaký je popsán v preparátivním postupu AA1, se z vhodných azidů vyrobí sloučeniny uvedené v preparativních postupech AA2 až AA5.

Preparativní postup AA2

2-Benzyloxy-5-brombenzylamin » ·

- 234.1«

Preparativní postup A A 3

2-Benzyloxy-5-fluorbenzylamin

Preparativní postup AA4

2-Benzyloxy-5-jodbenzylamin

Preparativní postup AA5

2-Benzyloxy-5-methylbenzylamin

Preparativní postup BB1

2-Benzyloxy-5-trifluormethylbenzylazid

DBU (1 ml, 6,62 mmol) a difenylfosforylazid (1,6 ml, 7,5 mmol) se při teplotě místnosti přidají k roztoku 2-benzyloxy-5-trifluormethylbenzylalkoholu (1,24 g, 4,41 mmol) v bezvodém toluenu (10 ml). Po 3 hodinách se ke vzniklé směsi přidá voda a vodná směs se extrahuje ethylacetátem (3 x). Spojené organické vrstvy se promyjí 1M kyselinou chlorovodíkovou (lx), vodným chloridem sodným (lx), vysuší síranem sodným, přefiltrují a filtrát se zkoncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se přečistí mžikovou chromatografií za použití 3% ethylacetátu v hexanech. Získá se 1,14 g sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě bezbarvého oleje (84 %). MS 280 (M-N₂). NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,6 7,3 (m, 7H), 7,01 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 5,18 (s, 2H), 4,42 (s, 2H)

Podobným způsobem, jaký je popsán v preparativním postupu BB1, se z vhodných alkoholů vyrobí sloučeniny uvedené v preparativních postupech BB2 až BB7.

235.

Preparativní postup BB2

2-Benzyloxy-5-brombenzylazid

Preparativní postup BB3

2-Benzyloxy-5-fluorbenzylazid

Preparativní postup BB4

2-Benzyloxy-5-methylbenzylazid

Preparativní postup BB5

2-Benzyloxy-5-kyanobenzylazid

Preparativní postup BB6

2-Benzyloxy-5-jodbenzylazid

Preparativní postup BB7 (2-Azidomethyl-4-chlorfenoxy)acetonitril

Preparativní postup CC1

2-Benzyloxy-5-trifluormethylbenzylalkohol

Uhličitan česný (2,24 g, 6,9 mmol) se při teplotě místnosti přidá k roztoku 2-hydroxy-5-trifluormethylbenzylalkoholu (886 mg, 4,6 mmol) a benzylbromidu (547 μΐ, 4,6 mmol) v bezvodém dimethylformamidu (8 ml). Reakční směs se 2 hodiny zahřívá na 50°C, ochladí a zředí ethylacetátem (25 ml). Ethylacetátová směs se promyje vodou (3 x 25 ml) a vodným chloridem sodným (1 x 25 ml), vysuší síranem sodným, • · ·· ··.

» ♦ · i • · · ··· · přefiltruje a filtrát se zkoncentruje. Získá se 1,3 g sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě bezbarvé pevné látky.

NMR (400 MHZ, CDC1₃) δ 7,6 - 7,3 (m, 7H), 7,01 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 5,18 (s, 2H), 4,79 (s, 2H), 2,8 (bs, 1H)

Preparativní postup DD1

2-Hydroxy-5-trifluormethylbenzylalkohol

Paraformaldehyd (3,4 g, 0,114 mol) se během 6 hodin po 0,5g dávkách přidá k refluxující směsi 4-trifluormethylfenolu (2,3 g, 0,0142 mol), fenylboronové kyseliny (2,1 g, 0,017 mol) a propionové kyseliny (530 μΐ, 7 mmol) v benzenu za azeotropického odstraňování vody (Dean-Starkův odlučovač). Po dokončení přídavku se reakční směs další hodinu zahřívá, poté ochladí v ledové lázni a zředí tetrahydrofuranem. Tetrahydrofuranová směs se smísí s 5 ml 30% roztoku peroxidu vodíku. Po jednohodinovém míchání se směs rozdělí mezi vodu (50 ml) a ethylacetát (50 ml). Organická vrstva se promyje roztokem hydrogensiřičitanu sodného (1 x 50 ml), vodným roztokem chloridu sodného (1 x 50 ml), vysuší síranem sodným, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje.

Zbytek se přečistí mžikovou chromatografií za použití 30% ethylacetátu v hexanech. Získá se 950 mg (35 %) sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě bezbarvé pevné látky. NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,42 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 7,3 (s, 1H), 6,95 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 4,89 (s, 2H)

Podobným způsobem, jaký je popsán v preparativním postupu DD1, se z odpovídajícího fenolu vyrobí sloučenina uvedená v preparativním postupu DD2.

Preparativní postup DD2

2-Hydroxy-5-kyanobenzylalkoho1 ··

237 ·• ·· ·

Preparativní postup EE1

2-Benzyloxy-5-fluorbenzylalkohol

Lithiumaluminiumhydrid (226 mg, 5,95 mmol) se při 0°C přidá k roztoku benzylesteru 2-benzyloxy-5-fluorbenzoové kyseliny (2 g, 5,95 mmol). Reakční směs se zahřeje na teplotu místnosti a po 1 hodině rozloží postupným přídavkem vody (225 μΐ), 15% hydroxidu sodného (226 μΐ) a vody (760 μΐ). Výsledná směs se zředí ethylacetátem. Ethylacetátová směs se vysuší síranem hořečnatým, přefiltruje a zkoncentruje. Zbytek se přečistí mžikovou chromatografii za použití 10% ethylacetátu v hexanech. Získá se 1,13 g (82 %) sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě bezbarvého oleje. MS 250 (M+NH₄)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,4 (m, 5H), 7,05 (dd, 1H), J = 9,1, 4,3 Hz), 6,92 (m, 2H), 5,08 (s, 2H), 4,65 (s, 2H), 2,2 (bs, 1H).

Podobným způsobem, jaký je popsán v preparativním postupu EE1, se z vhodných alkoholů vyrobí sloučeniny uvedené v preparativních postupech EE2 až EE3.

Preparativní postup EE2

2-Benzy1oxy-5-jodbenzylalkoho1

Preparativní postup EE3

2-Benzyloxy-5-methylbenzylalkohol

Preparativní postup FF1

2-Benzyloxy-5-ethynylbenzylazid a 2-benzyloxy-5-ethenylazid

Lithiumaluminiumhydrid (95 mg, 2,49 mmol) se při 0°C přidá k roztoku benzylesteru 2-benzyloxy-5-ethynylbenzoové kyseliny (680 mg, 1,99 mmol) v tetrahydrofuranu (5 ml). Po 15 minutách se reakční směs rozloží postupným přídavkem vody (100 μΐ), 15% hydroxidu sodného (100 μΐ) a vody (300 μΐ). Výsledná směs se zředí ethylacetátem (10 ml), vysuší síranem hořečnatým, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje. Zbytek se přečistí mžikovou chromatografii za použití 10% ethylacetátu v hexanech. Získá se 600 mg směsi 2-benzyloxy-5-ethynylbenzylalkoholu a 2-benzyloxy-5-ethenylbenzylalkoholu v poměru přibližně 1:1. Tato směs se rozpustí v toluenu (8 ml). Toluenový roztok se při teplotě místnosti smísí s DBU (0,7 ml, 4,52 mmol) a difenylfosforylazidem (1,1 ml, 5,12 mmol). Po 18 hodinách se ke směsi přidá voda a vodná směs se extrahuje ethylacetátem (3 x). Spojené organické vrstvy se promyjí 1M kyselinou chlorovodíkovou (1 x) a vodným chloridem sodným (1 x), vysuší síranem sodným, přefiltrují a filtrát se zkoncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se přečistí mžikovou chromatografii za použití 3,5% tetrahydrofuranu v hexanech. Směsné frakce se podrobí další chromatografii za použití 3% etheru v petroletheru. Získá se 206 mg 2-benzyloxy-5-ethenylbenzylazidu jako rychleji eluované frakce. MS 238 (M-N₂)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,4 (m, 7H), 6,95 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 6,62 (dd, 1H, J = 17,5, 10,5 Hz), 5,61 (d, 1H, J = 17,5 Hz), 5,15 (m, 3H),

4,40 (s, 2H). Další elucí se získá 135 mg 2-benzyloxy-5-ethynylbenzylazid. MS 236 (M-N₂)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,4 (m, 7H), 7,95 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 5,1 (s, 2H), 4,39 (s, 2H), 3,0 (s, 1H).

Preparativní postup GG1

Benzylester 2-benzyloxy-5-ethynylbenzoové kyseliny • ·

39···*·

Tetrabutylamoniumfluorid (2,97 ml 1M roztoku v tetrahydrofuranu, 2,97 mmol) se při teplotě místnosti přidá k roztoku benzylesteru 2-benzyloxy-5-(2-trimethylsilylethynyl)benzoové kyseliny (1,07 g, 2,58 mmol) v tetrahydrofuranu (10 ml). Po 30 minutách se směs zředí etherem (20 ml). Etherová směs se promyje vodou (3 x 30 ml) a vodným roztokem chloridu sodného (1 x 30 ml), vysuší síranem hořečnatým, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje. Zbytek se přečistí mžikovou chromatografii za použití 5% ethylacetátu v hexanech. Získá se 687 mg (78 %) produkt ve formě světle oranžového oleje. ^ΧΗ NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,98 (d, 1H, J = 2 Hz), 7,52 (dd, 1H, J = 9,1, 1 Hz), 7,38 (m, 10H), 6,95 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 5,35 (s, 2H), 5,19 (s, 2H), 3,0 (s, 1H)

Preparativní postup HH1

Benzylester 2-benzyloxy-5-(2-trimethylsilylethynyl)benzoové kyseliny

Chlorid difenylfosfinpalladnatý (194 mg, 0,277 mmol), jodid měďný (106 mg, 0,554 mmol) a triethylamin (0,8 ml, 5,44 mmol) se při teplotě místnosti přidají k roztoku benzylesteru 2-benzyloxy-5-jodbenzoové kyseliny (1,23 g,

2,77 mmol) a trimethylsilylacetylenu (0,5 ml, 3,32 mmol) v bezvodém dimethylformamidu (15 ml). Reakční nádoba se zakryje hliníkovou folií a vzniklá směs se přes noc míchá, poté zředí ethylacetátem (50 ml) a promyje vodou (3x), 1M kyselinou chlorovodíkovou (lx) a vodným chloridem sodným (lx), vysuší síranem sodným, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje. Zbytek se přečistí mžikovou chromatografii za použití 5% ethylacetátu v hexanech. Získá se 1,07 g (93 %) η

sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě oleje. ^XH NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,98 (d, 1H, J = 2 Hz), 7,52 (dd, 1H, J = 9,1, 1 Hz), 7,38 (m, 10H), 6,95 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 5,31 (s,

2H), 5,17 (S, 2H), 0,1 (s, 9H)

Preparativní postup III

Benzylester 2-benzyloxy-5-fluorbenzoové kyseliny

Benzylbromid (0,86 ml, 7,2 mmol) a uhličitan česný (2,6 g, 8 mmol) se při teplotě místnosti přidá k roztoku 2-hydroxy-5-fluorbenzoové kyseliny (0,5 g, 3,2 mmol) v bezvodém dimethylformamidu (8 ml). Reakční směs se 2 hodiny zahřívá na 80 °C, ochladí a zředí vodou (50 ml). Vodná směs se extrahuje ethylacetátem (3 x 40 ml), spojené organické vrstvy se promyjí vodou (1 x 50 ml) a vodným chloridem sodným (1 x 50 ml), vysuší síranem sodným, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje. Získá se 1,02 g sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě bezbarvého oleje (93 %). MS: 337 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDC1₃) & 7,55 (dd, 1H, J = 8,7, 3,1 Hz), 7,35 (m, 10H), 7,1 (m, 1H), 6,97 (dd, 1H, J = 9,1, 4,3 Hz), 5,3 (S, 2H), 5,1 (s, 2H)

Podobným způsobem, jaký je popsán v preparativním postupu III, se z vhodných výchozích látek vyrobí sloučeniny uvedené v preparativních postupech 112 a 113.

Preparativní postup 112

Benzylester 2-benzyloxy-5-jodbenzoové kyseliny

Preparativní postup 113

Benzylester 2-benzyloxy-5-methylbenzoové kyseliny

Preparativní postup JJ1

2-Benzyloxy-5-brombenzylalkohol

Tetrahydroboritan sodný (339 mg, 8,93 mmol) se při 0°C přidá k roztoku 2-benzyloxy-5-brombenzaldehydu (2,6 g, 8,93 mmol) v bezvodém ethanolu (20 ml). Reakční směs se nechá zahřát na teplotu místnosti a po 3 hodinách zkoncentruje. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu (50 ml) a ethylacetátový roztok se promyje vodou (1 x 25 ml), 1M kyselinou chlorovodíkovou (1 x 25 ml) a vodným chloridem sodným (1 x 25 ml), vysuší síranem sodným, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje. Zbytek se přečistí mžikovou chromatografii za použití 8% ethylacetátu v hexanu. Získá se 2,58 g sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě bezbarvého oleje (98 %).

MS 292 (M+H) ⁺ . ³Η NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,39 (m, 9H) , 6,9 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 5,06 (s, 2H), 4,62 (s, 2H), 2,2 (bs,

1H)

Preparativní postup KK1

2-Benzyloxy-5-brombenzaldehyd

Benzylbromid (18 ml, 14,9 mmol) a uhličitan česný (8,1 g, 24,9 mmol) se při teplotě místnosti přidají k roztoku 2-hydroxy-5-brombenzaldehydu (2 g, 9,95 mmol) v bezvodém dimethylformamidu (25 ml). Reakční směs se 2 hodiny zahřívá na 80°C, poté ochladí a zředí vodou (50 ml). Vodná směs se extrahuje ethylacetátem (3 x 40 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí vodou (1 x 50 ml) a vodným chloridem sodným (1 x 50 ml), vysuší síranem sodným, přefiltrují a filtrát se zkoncentruje. Zbytek se přečistí mžikovou chromatograf ií za použití 10% ethylacetátu v hexanu. Získá se 2,67 g sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě bezbarvého oleje (92 %). MS 291 (M+H)⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,94 (s, 1H), 7,6 (dd, 1H, J = 8,9, 2,7 Hz), 7,39 (m, 6H), 6,92 (d, 1H, J = 8,9 Hz), 5,18 (s, 2H) • · ·· » · · • ·

- 242 ·♦··

Preparativní postup LL1

2-[5-Chlor-2-(3-methylisoxazol-5-ylmethoxy)benzyl]isoindol-1,3-dion

Ke směsi 2-[5-chlor-2-hydroxybenzyl]isoindol-1,3dionu (800 mg, 2,78 mmol), 5-hydroxymethyl-3-methylisoxazolu (373 mg, 3,3 mmol) a trifenylfosfinu (1,0 g, 4,2 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (10 ml) se přidá diethylazodikarboxylát (0,657 ml, 4,7 mmol). Vzniklý roztok se 15 hodin míchá při teplotě místnosti za bezvodých podmínek, načež se z něj v rotačním odpařováku odstraní rozpouštědlo. Produkt se předem naadsorbuje na silikagel a přečistí mžikovou chromatografií. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu (555 mg, 52 % ) .

C20H15CIN2O4. MW 382,81. MS 382,2 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,85 - 7,79 (mult, 4H); 7,28 (dd, 1H, J = 8,8 Hz, J = 2,6 Hz); 7,18 (d, 1H, J = 2,6 Hz); 7,16 (d, 1H, J = 8,8 Hz); 6,39 (s, 1H); 5,25 (s, 2H); 4,67 (s, 2H); 2,17 (s, 3H).

Podobným způsobem, jaký je popsán v preparativním postupu LL1, se reakcí výchozí látky s vhodným alkoholem vyrobí sloučeniny uvedené v preparativních postupech LL2 až LL3 2.

Preparativní postup LL2

5-Chlor-2-(2-morfolin-4-ylethoxy)benzonitril

Teplota tání: 78,0 až 80,0°C

C₁₃Hi₅CIN2O₂. MW 266,73. MS 267,2 (M+H)+.

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃) δ 7,55 - 7,45 (mult, 2H); 6,92 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 4,20 (t, 2H, J = 5,6 Hz); 3,72 (t, 4H, J = 4,6 Hz); 2,86 (t, 2H, J = 5,6 Hz); 2,62 (t, 4H, J = 4,6 Hz).

··

Preparativní postup LL3

2-Benzyloxy-5-chlorbenzonitril

Teplota tání: 75,0 až 76,5°C ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,88 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,68 (dd, 1H, J = 9,1 Hz, J = 2,7 Hz); 7,45 - 7,36 (mult, 4H); 7,35 - 7,,28 (mult, 2 H); 5,25 (s, 2H).

Preparativní postup LL4

5-Chlor-2-cyklobutylmethoxybenzonitril ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,84 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,65 (dd, 1H, J = 8,7 Hz,

J = 2,7 Hz); 7,45 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 4,06 (d, 2H, J = 6,4 Hz); 2,75 - 2,63 (mult, 1H); 2,05 - 1,95 (mult, 2H); 1,92 - 1,75 (mult, 4H).

Preparativní postup LL5

5-Chlor-2-(3-methoxybenzyloxy)benzonitril

Teplota tání: 90,0 až 92,0°C ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,91 (d, 1H, J = 2,5 Hz); 7,70 (dd, 1H, J = 8,9 Hz, J = 2,5 Hz); 7,35 - 7,25 (mult, 2H); 7,05 - 6,95 (mult, 2H); 6,88 (dd, 1H, J = 8,3 Hz, J = 2,5 Hz); 5,25 (s, 2H); 3,73 (s, 3H).

Preparativní postup LL6

5-Chlor-2-(2,5-dimethoxybenzyloxy)benzonitril

Teplota tání: 99,0 až 102,0°C ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,90 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,69 (dd, 1H, J = 8,9 Hz,

J = 2,7 Hz); 7,33 (d, 1H, J = 9,1 Hz); 7,02 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 6,97 (d, 1H, J = 8,9 Hz); 6,87 (dd, 1H, J = 8,9 Hz, J = 3,1 Hz); 5,17 (s, 2H); 3,75 (s, 3H); 3,68 (s, 3H).

• ·

Preparativní postup

L L 7 ·· ··.

» ♦ · · · · • ··· ·

999

- 244**-¹

5-chlor-2-(3-chlorbenzyloxy)benzonitril

Teplota tání: 101,0 až 104,0'C

Ή NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,93 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,73 (dd, 1H, J = 8,9 Hz,

J = 2,7 Hz); 7,53 (d, 1H, J = 1,5Hz); 7,47 - 7,36 (mult, 2H); 7,33 (d, 1H, J = 9,1 Hz); 7,25 - 6,95 (mult, 1H); 5,30 (s, 2H).

Preparativní postup LL8

5-Chlor-2-(4-chlorbenzyloxyJbenzonitril ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,92 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,71 (dd, 1H, J = 9,1 Hz, J = 2,7 Hz); 7,46 (s, 4H); 7,33 (d, 1H, J = 9,1 Hz); 5,27 (s, 2H).

Preparativní postup LL9

5-Chlor-2-(2-chlorbenzyloxyJbenzonitril ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,93 (d, TH, J = 2,6 Hz); 7,73 (dd, 1H, J = 9,1 Hz,

J = 2,6 Hz); 7,64 - 7,59 (mult, 1H); 7,54 - 7,49 (mult, 1H); 7,45 - 7,37 (mult, 3H); 5,32 (s,2H).

Preparativní postup LL10

5-Chlor-2-(tetrahydrofuran-2-ylmethoxy)benzonitril ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,89 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,70 (dd, 1H, J = 9_Z1 Hz,

J = 2,7 Hz); 7,28 (d, 1H, J = 9,1 Hz); 4,13 - 4,00 (mult, 2H); 3,80 - 3,70 (mult, 2H);

3,65 (dd, 1H, J = 7,7 Hz, J = 6,6 Hz); 3,55 - 3,50 (mult, 1H); 2,70 - 2,60 (mult, 1H); 2,05- 1,95 (mult, 1H); 1,70-1,61 (mult, 1H).

·

Preparativní postup ·· ·’.

I 0 · >

· · ··« · >« ·· • ·

245··*· ** ·· ·

5-Chlor-2-(4-methylbenzyloxy)benzonitril

Teplota tání: 106,0 až 108,0°C ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,89 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,69 (dd, 1H, J = 9,1 Hz, J = 2,7 Hz); 7,35 - 7,30 (mult, 3H); 7,19 (d, 2H, J = 8,1 Hz); 5,21 (s, 2H); 2,28 (s, 3H).

Preparativní postup LL12

5-Chlor-2-(2-methylbenzyloxy)benzonitril 'H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,88 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,70 (dd, 1H, J = 9,1 Hz, J = 2,7 Hz); 7,39 (d, 2H, J = 9,1 Hz); 7,25 - 7,15 (mult, 3H); 5,23 (s, 2H); 2,30 (s, 3H).

Preparativní postup LL13

5-Chlor-2-(3-methylbenzyloxy)benzonitril ¹H NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 7,91 (d, 1H, J = 2,5 Hz); 7,71 (dd, 1H, J = 9,2 Hz, J = 2,5 Hz); 7,40 - 7,12 (mult, 5H); 5,24 (s, 2H); 2,31 (s, 3H).

Preparativní postup LL14

5-Chlor-2-(2-methoxybenzyloxy)benzonitril

Teplota tání: 114,0 až 115,0°C ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,89 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,69 (dd. 1H, J = 9,1 Hz,

J = 2,7 Hz); 7,40 (d, 1H, J = 7,5 Hz); 7,39 - 7,31 (mult, 2H); 7,05 (d, 1H, J = 8,3 Hz); 6,97 (t, 1H, J = 7,5 Hz); 5,20 (s, 2H); 3,80 (s, 3H).

♦ *

Preparativní postup LL15

5^-Chlor-2-(furan-3-ylmethoxy)benzonitril

Teplota tání: 72,0 až 74,0°C ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,89 (d,1H, J = 2,7 Hz); 7,81 (s, 1H); 7,73 - 7,67 (mult, 2H); 7,38 (d, 1H, J = 9,1 Hz); 6,56 (s, 1H); 5,13 (s, 2H).

Preparativní postup LL16

5-Chlor-2-(4-methoxybenzyloxy)benzonitril

Teplota tání: 84,0 až 85,0°C ¹H NMR (400 MHz, DMSO~d₆) δ 7,88 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,69 (dd, 1H, J = 9,1 Hz,

J = 2,7 Hz); 7,41 - 7,30 (mult, 3H); 6,98 - 6,92 (mult, 2H); 5,18 (s, 2H); 3,73 (s, 3H).

Preparativní postup LL17

5-Chlor-2-cyklopentylmethoxybenzonitril ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 7,86 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,67 (dd, 1H, J = 9,1 Hz, J = 2,7 Hz); (d, 1H, J = 9,1 Hz); 3,99 (d, 2H, J = 6,8 Hz); 2,30 (sept, 1H, J = 7,4 Hz); 1,80 - 1,68 (mult, 2H); 1,65 -1,48 (mult, 4H); 1,38 - 1,26 (mult, 2H).

Preparativní postup LL18

3-(2-Morfolin-4-ylethoxy)benzaldehyd Ci3H₁₇NO₃. MW 235,29. MS 236,1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 9,94 (s, 1H); 7,51 - 7,43 (mult, 2H); 7,42 (bs, 1H); 7,29 - 7,22 (mult, 1H); 4,14 (t, 2H, J = 5,6 Hz); 3,55 (t, 4H, J = 3,7 Hz); 2,72 - 2,63 (mult, 2H); 2,50 - 2,43 (mult, 4H).

··*· ·, *» ’ :: .

. ··· ·

247**-* ·· «

··· ·« *

Preparativní postup

5-chlor-2-[3-(2-morfolin-4-ylethoxy)benzyloxyjbenzonitrii °20^Η21θ^ΙΝ2θ3· MW 372,86. MS 373,1 (M+H)+.

’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,89 (d, 1H, J = g.7 Hz); 7,68 (dd, 1H, J = 9,1 Hz, J = 2,7 Hz); 7,29 (d, 1H, J = 9,1 Hz); 7,25 (d, 1H, J = 7,7 Hz); 7,00 (bs, 1H); 6,96 (d, 1H, J = 7,5 Hz); 6,87 (d, 1H, J = 7,5 Hz); 5,21 (s, 2H); 4,04 (t, 2H, J = 5,8 Hz); 3,57 - 3,49 (mult, 4H); 2,67 - 2,58 (mult, 2H); g.42 - 2,38 (mult, 4H).

Preparativní postup LL20

5-Chlor-2-(tetrahydrofuran-3-ylmethoxyjbenzonitrii ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,89 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,70 (dd, 1H, J = 9,1 Hz,

Preparativní postup LL21

5-Chlor-2-(tetrahydrofuran-3-ylmethoxy)benzonitri1 ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,89 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,70 (dd, 1H, J = 9,1 Hz,

J = 2,7 Hz); 7,28 (d, 1H, J = 9,1 Hz); 4,13 - 4,00 (mult, 2H); 3,80 - 3_z70 (mult, 2H);

3,65 (dd, 1H, J = 7,7 Hz, J = 6,6 Hz); 3,55 -3,50 (mult, 1H); 2,70 - 2,60 (mult, 1H); 2,05 - 1,95 (mult, 1H); 1,70 -1,61 (mult, 1H).

Preparativní postup LL22

5-Chlor-2-(furan-2-ylmethoxy)benzonitril ♦· ··.

» »· £ • 9 · • ··· *

- 248^ ’·’ ·· *

9·· · • 9 *· · · ♦ · <

···

Teplota tání: 85,0 až 88,0°C ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,89 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,78 - 7,69 (mult, 2H);

7,44 (d, 1H, J = 9,1 Hz); 6,64 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 6,46 (bs, 1H); 5,.25 (s, 2H).

Preparativní postup LL23

5-Chlor-2-(2,2,7-7-tetramethyltetrahydrobis[1,3 Jdioxolo[4,5-b;4',5'-d]pyran-5-ylmethoxy)benzonitril ’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,88 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,67 (dd, 1H, J = 9,1 Hz,

J = 2,7 Hz); 7,31 (d, 1H, J = 9,1 Hz); 5,44 (d, 1H, J = 5,0 Hz); 4,64 (dd, 1H, J = 7,9 Hz, J = 1,9 Hz); 4,37 - 4,32 (mult, 2H); 4,30 (dd, 1H, J = 10,4 Hz, J = 4,2 Hz); 4,19 4,11 (mult, 1H); 4,08 - 4,02 (mult, 1H); 1,34 (d, 6H, J = 1,5 Hz); 1,26 (d, 6H, J =

10,2 Hz).

Preparativní postup LL24

5-Chlor-2-(2,5-dimethylfuran-3-ylmethoxy)benzonitril

Teplota tání: 103,0 až 105,0°C ’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,87 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,70 (dd, 1H, J = 9,1 Hz,

J = 2,7 Hz); 7,33 (d, 1H, J = 9,1 Hz); 6,03 (s, 1H); 5,00 (s, 2H); 2,23 (s, 3H); 2.,17 (s, 3H).

Preparativní postup LL25

5-Chlor-2-(5-dimethylaminomethylfuran-2-ylmethoxy)benzonitril ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 7,86 (dd, 1H, J = 2,7Hz, J = 1,0 Hz); 7,69 (ddd,

1H, J = 9,1 Hz, J = 2,7 Hz, J = 1,0 Hz); 7,40 (d, 1H, J = 9,1 Hz); 6,54 (d, 1H, J =

3,1 Hz); 6,23 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 5,18 (s, 2H); 3,36 (s, 2H); 2,06 (d, 6H, J = 1,0 Hz).

• · • · • · • ·

- 249 - .

Preparativní postup LL26

2-[5-Chlor-2-(thiazol-2-ylmethoxy)benzyl]isoindol-1,3-dion

Teplota tání: 205,0 až 205,5°C

C19H13CIN2O3S. MW 384,84. MS 385,1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,90 - 7,80 (mult, 4H); 7,78 (d, 1H, J = 3,1 Hz);

7,74 (d, 1H, J = 3,1 Hz); 7,29 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,5 Hz); 7,19 (d, 1H, J = 2,5 Hz); 7,16 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 5,48 (s, 2H); 4,74 (s, 2H).

Preparativní postup LL27

2-[2-(Benzofuran-2-ylmethoxy)-5-chlorbenzyl]isoindol-1,3-dion

Teplota tání: 155,0 až 156,0°C ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,83 - 7,75 (mult, 4H); 7,59 (d, 1H, J = 7,5 Hz);

7,37 (d, 1H, J = 7,5 Hz); 7.33 - 7,17 (mult, 5H); 6,98 (s, 1H); 5,29 (s, 2H); 4,69 (s,

2H).

Preparativní postup LL28

2-[5-Chlor-2-(isothiazol-5-ylmethoxy)benzyl]isoindol-1,3-dion ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,48 (s, 1H); 7,89 - 7,79 (mult, 4H); 7,42 (s, 1H);

7,30 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,5 Hz); 7,20 (d, 1H, J = 2,5 Hz); 7,14 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 5,56 (s, 2H); 4,73 (s, 2H).

Preparativní postup LL29

2-[5-Chlor-2-(thiofen-2-ylmethoxyJbenzyl]isoindol-1,3-dion ··

- 250

999 9

Teplota tání: 135,0 až 137,0°C ^c20^H14^CINO3^S· MW 383,86. MS 383,1 (M+H)+ ¹H MNR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,84 - 7,78 (mult, 4H); 7,47 (dd, 1H, J = 5,0 Hz, J = 1,2 Hz); 7,27 - 7,22 (mult, 1H), 7,19 - 7,12 (mult, 3H); 6,95 (dd, 1H, J = 5,0 Hz, J = 3,5 Hz); 5,31 (s, 2H); 4,65 (s, 2H).

Preparativní postup LL30

2-[5-Chlor-2-(chinolin-2-ylmethoxyJbenzyl]isoindol-1,3-dion

Teplota tání: 190,0 až 192,0°C ^C25^H17^CIN2°3- MW 428,89. MS 429,1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃) δ 8,20 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 8,06 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 7,90 - 7,80 (mult, 3H); 7,79 - 7,67 (mult, 4H); 7,56 (t, 1H, J = 7,3 Hz); 7,17 - 7,08 (mult, 2H); 6,86 (d, 1H, J = 8,5 Hz); 5,42 (s, 2H); 5,02 (s, 2H).

Preparativní postup LL31

2-[5-Chlor-2-(4-methyl-[1,2,3]thiadiazol-5-ylmethoxy)benzyl] isoindol-1,3-dion

Teplota tání: 205,0 až 208,0°C CigHi4CIN₃O₃S. MW 399,86. MS 400,1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,82 (s, 4H); 7,36 (d. 1H, J = 8,7 Hz); 7,26 (bs,

1H); 7,19 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 5,55 (s, 2H); 4,69 (s, 2H); 2,61 (s, 3H).

Preparativní postup LL32

5-Chlor-2-(naftalen-l-ylmethoxyJbenzonitril

Teplota tání: 128,0 až 130,0°C • ·

- 251 • · · ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,12 - 8,05 (mult, 1H); 7,97 - 7,85 (mult, 3H); 7,74 (dd, 1H, J = 9,1 Hz, J = 2,7 Hz); 7,68 (d, 1H, J = 6,9 Hz); 7,60 - 7,44 (mult, 4H); 5,71 (s, 2H).

Preparativní postup MM1

2-[5-Chlor-2-(pyridin-3-ylmethoxy)benzyl]isoindol-1,3-dion

K roztoku 2-[5-chlor-2-hydroxybenzyl]isoindol-1,3-dionu (300 mg, 1,04 mmol) a hydrochloridu 3-pykolylchloridu (171 mg, 1,04 mmol) v bezvodém N,N-dimethylformamidu (10 ml) ochlazenému na 0’C se přidá 60% disperze hydridu sodného v oleji (104 mg, 2,6 mmol). Reakční směs se 15 hodin míchá při teplotě místnosti za bezvodých podmínek, poté rozloží přídavkem vody (5 ml) a nalije do dělicí nálevky a přidá se k ní nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (50 ml). Vodná vrstva se extrahuje 3 x 50 ml dichlormethanu.

Organické vrstvy se spojí a promyjí nasyceným vodným roztokem chloridu sodného (100 ml), vysuší síranem hořečnatým, přefiltrují a filtrát se zkoncentruje v rotačním odpařováku. Zbytek se trituruje s etherem, odfiltruje a vysuší. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu.

Teplota tání: 173,0 až 175,0°C

C21H15CIN2O3. MW 378,82. MS 379,1 (M+H)⁺.

Ή NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,61 (s, 1H); 8,49 (d, 1H, J = 5,0 Hz); 7,84 - 7,78 (mult, 5H); 7,34 (dd, 1H, J = 7,9 Hz, J = 4,8 Hz); 7,27 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,1 Hz); 7,17 (d, 1H, J = 1,9 Hz); 7,11 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 5,15 (s, 2H); 4,70 (s, 2H).

Podobným způsobem, jaký je popsán v preparativním postupu MM1, se z odpovídající výchozí látky vyrobí sloučenina uvedená v preparativním postupu MM2.

Preparativní postup MM2 ·· ·· » « ♦

252

2-[2-(Benzothiazol-2-ylmethoxy)-5-chlorbenzyl]isoindol-1,3-dion

Teplota tání: 209,0 až 211,0°C ^c23^h15^cin2°3S- MW 434,90. MS 435,1 (M+H)+.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,03 (d, 1H, J = 8,0 Hz); 7,93 (d, 1H, J = 8,0 Hz);

7,88 - 7,76 (mult, 4H); 7,49 (td, 1H, J = 7,7 Hz, J = 1,2 Hz); 7,41 (td, 1H, J = 7,7 Hz, J = 1,2 Hz); 7,29 (dd, 1H, J = 8,7 Hz, J = 2,7 Hz); 7,20 (d, 1H, J = 2,7 Hz); 7,17 (d, 1H, J = 8,7 Hz); 5,63 (s, 2H); 4,80 (s, 2H).

Preparativní postup NN1

4-Methyl[1,2,3]thiadiazol-5-yl)methanol

Ke směsi methylesteru 4-methyl-[1,2,3]thiadiazol-5-karboxylové kyseliny (923 mg, 5,84 mmol) v bezvodém ethanolu (32 ml) se přidá tetrahydroboritan sodný (993 mg,

26,2 mmol. Reakční směs se 15 hodin míchá při teplotě místnosti za bezvodých podmínek, poté ochladí na 0°C a přidá se k ní nasycený vodný chlorid amonný (25 ml). Výsledná směs se nalije do vody (25 ml) a vodná směs se extrahuje dichlormethanem (4 x 40 ml), vysuší síranem hořečnatým a zkoncentruj e v rotačním odpařováku na olej.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 6,00 (bs, 1H), 4,78 (s, 2H),

2,51 (s, 3H)

Preparativní postup 001

Methylester 4-methyl-[1,2,3]thiadiazol-5-karboxylové kyseliny

4-Methyl-[1,2,3]thiadiazol-5-karboxylová kyselina (1,0 g, 6,94 mmol), koncentrovaná kyselina sírová (866 μΐ) a methanol (12 ml) se smísí a vzniklá směs se 15 hodin zahřívá ke zpětnému toku, načež se zkoncentruje odpařením rozpouštědla v rotačním odpařováku. Zbytek se nalije na 15 g ledu.

• ·

- 253 • ·· • ·

Výsledná směs se zneutralizuje nasyceným vodným hydrogenuhličitanem sodným a vzniklý roztok se extrahuje dichlormethanem (4 x 35 ml). Spojené organické vrstvy se vysuší síranem hořečnatým, přefiltrují a filtrát se zkoncentruje v rotačním odpařováku. Produkt se předem naadsorbuje na silikagel a přečistí mžikovou chromatografií. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu ve formě žlutého oleje. C₅H₆N₂O₂S. MW 158,18. MS 159,0 (M+H)⁺ ¹H NMR (400 MHz, DMSO-dg) δ 3,87 (s, 3H), 2,85 (s, 3H)

Preparativní postup PPI

3-Deoxy-l,2-0-(1-methylethyliden)-3-[(fenylmethyl)amino]-5-0-(trifenylmethyl)-a-ribofuranosa (třístupňový způsob)

Stupeň 1:

Do čisté a plynem promyté reakční nádoby vyložené sklem se předloží dichlormethan (49,2 litru), k němuž se přidá 1,2-0-(1-methylethyliden)-a-D-xylofuranosa (7,0 kg, 36,8 mmol) a poté pyridin (4,5 litru). Reakční směs ochladí na 10 až 15°C a přidá se k ní tritylchlorid (10,8 kg, 38,6 mol; je pozorována určitá exotermická reakce). Reakční směs se poté 5 hodiny míchá při 20 až 25°C. Úplnost reakce se posoudí pomocí TLC. Surová reakční směs se promyje 5% vodným roztokem kyseliny octové (2 x 43,5 litru) a vodou (83,3 litru). Organická vrstva obsahující 1,2-0-(1-methylethyliden )-5-0- (trif enylmethyl )-a-D-xylofuranosu se bez vysušení a izolace podrobí zpracování podle stupně 2.

Stupeň 2:

K surové organické vrstvě obsahující 1,2-O-(1-methyl ethyliden)-5-0-(trifenylmethyl)-α-D-xylofuranosu v dichlormethanu se při 25 až 30°C přidá bromid draselný (877 g, • · ·«·<

- 254 • · · · · . · •··· ·*

7,36 mmol) a poté voda (64,4 litru) a hydrogenuhličitan sodný (15,4 kg). Reakční nádoba se ochladí na 0 až 5’C a přidá se do ní volný radikál 2,2,6,6-tetramethyl-l-piperidinyloxy (TEMPO) (280 g). Při chlazení na 0 až 5°C na plášti se do reakční nádoby za intenzivního míchání během 4 hodin přidá 49,2 litrů bělidla Clorox (které vyvolává silnou exotermickou reakci, takže se přídavek provádí takovou rychlostí, aby se vnitřní teplota udržela v rozmezí 0 až 5°C). Vzorek reakční směsi se analýzou ^ΧΗ NMR (CDC1₃) zkouší na úplnost reakce. Poté, co je reakce považována za úplnou, se reakční směs zředí dichlormethanem (144 litrů) a vodou (91 litrů). Fáze se oddělí a dichlormethanová fáze se promyje vodou (2 x 113,6 litru) a vodným chloridem sodným (60,6 litru). Organická vrstva se zkoncentruje za atmosférického tlaku na objem 37,9 až 56,8 litru a přímo se jí použije ve stupni 3.

Stupeň 3:

K produktu ze stupně 2 v dichlormethanu se přidá kyselina octová (1,7 litru). Do reakční nádoby se během 30 minut přidá benzylamin (6 litrů, 56,31 mol), přičemž se roztok chladí na 15°C (na plášti reakční nádoby) (při přídavku zpočátku dojde k velmi exotermické reakci, obsah se udržuje na < 30°C). Do reakční nádoby se během 15 minut přidá triacetoxynatriumborhydrid (11,6 kg, 51,5 mol).

Reakční směs se 12 hodin míchá, načež se pomocí HPLC vzorku posoudí úplnost reakce. Reakční směs se při teplotě 4 až 14°C během 30 minut zředí dichlormethanem (98,4 litru) a 2M hydroxidu sodného (98,4 litru). Fáze se oddělí a organická vrstva se extrahuje vodou (37,9 litru) a vodným chloridem sodným (37,9 litru). Organická vrstva se za atmosférického tlaku zkoncentruje na objem 56,8 litru a přidá se k ní methanol (75,7 litru). Methanolická směs se za atmosférického tlaku a při konečné tepotě par 65°C znovu zkoncentruje ··

- 255 na objem 64,4 litru, ochladí na 10 až 20°C a přes noc nechá granulovat. Krystalická pevná látka se odfiltruje. Získá se 18,4 kg 3-deoxy-l,2-0-(1-methylethyliden)-3-[(fenylmethyl)amino]-5-0-(trifenylmethyl)-a-D-ribofuranosy, která podle výpočtu obsahuje 16% hmotn. methanolu (výtěžek 80 % korigovaný vzhledem ke zbytkovému rozpouštědlu ze třech stupňů). Tato látka je vhodná pro další transformaci v následujícím stupni bez dalšího sušení.

[a]_D: +70,75 (c = 1, CH₂C1₂)

Teplota tání: 116,2 až 116,3°C ¹H NMR (400 MHz. d₆-DMSO): 1,31 (s, 3), 1,47 (s, 3), 2,06 (br s, 1), 2,93 (br s, 1), 3,02 (d, 1, J=5,3,10,4), 3,27 (d, 1, J=9), 3,61 (brd, 1, J=13,7), 3,76 (m, 1), 3,80 (br d, 1, J=13,5), 4,65 (t, 1, J=4,2), 5,82 (d, 1, J=3,9), 7,16-7,42 (m, 20).

¹³C NMR (100 MHz, d₆-DMSO): 26,94, 51,13, 60,60, 63,70, 77,04, 79,12, 86,24, 104,75, 111,32, 127,07, 127,43, 128,07, 128,29, 128,49, 128,78, 140,81,144,17.

Analýza pro C₃₄H₃₅NO₄: vypočteno: C 78,28, H 6,76, N 2,69, nalezeno: C 77,89, H 6,55, N 2,56

Preparativní postup QQ1

3-Deoxy-l,2-0-(1-methylethyliden)-3-[(4-nitrobenzoyl)amino] -α-D-ribofuranosa (třístupňový způsob)

Stupeň 1:

K roztoku 3-deoxy-l,2-0-(1-methylethyliden)-3-[(fe nylmethyl)amino]-5-0-(trifenylmethyl)-α-D-ribofuranosy (200 g, 0,383 mol) v toluenu (1000 ml) se přidá kyselina octová (30 ml) a poté 10% palladium na uhlíku (48 g). Reakčni směs se hydrogenuje v Parrově třepaném zařízení a po 20 hodinách ještě vykazuje 5% obsah výchozí látky. Ke směsi se tedy přidá další dávka katalyzátoru (9,6 g) a v hydrogenaci se pokračuje dalších 20 hodin. Vzniklý roztok se přefiltruje • · • « ·· ·« ·♦ ··· • · ♦ * • · · .

« · · · ·

- 256 přes celit a katalyzátor se promyje toluenem (200 ml). Roztoku surové 3-amino-3-deoxy-l,2-0-(1-methylethyliden)-5-0-(trifenylmethyl)-a-D-ribofuranosy se přímo použije v následujícím stupni.

Stupeň 2:

K roztoku získanému ve stupni 1 se přidá voda (2 litry) a hydrogenuhličitan sodný (128,8 g). K výsledné směsi se za důkladného míchání postupně, aby se zabránilo pěnění, během 5 minut přidá p-nitrobenzoylchlorid (71,1 g, 0,383 mol). Po dalších 5 minutách je reakce podle HPLC úplná. Fáze se oddělí a organická vrstva se vysuší síranem hořečnatým a přefiltruje. Získá se surová 3-deoxy-l,2-0-(1-methylethyliden)-3-[(4-nitrobenzoyl)amino]-5-0-(trifenylmethyl)-a-ribofuranosa, které se přímo použije v následujícím stupni.

Stupeň 3:

K surovému 3-deoxy-l,2-0-(1-methylethyliden)-3-[(4-nitrobenzoyl)amino]-5-0-(trifenylmethyl)-a-ribofuranosovému roztoku ze stupně 2 se přidá methanol (890 ml) a koncentrovaná kyselina chlorovodíkovoá (0,6 ml). Průběh reakce se monitoruje pomocí HPLC. Po 3,5 hodiny směs ještě obsahuje několik procent výchozí látky a také několik procent vedlejších produktů. Reakční směs se rozloží přídavkem hydrogenuhličitanu sodného (18,5 g). Roztok se zkoncentruje, přičemž pro úplné odstranění methanolu se využije vakua. Ke konci se roztok za atmosférického tlaku zahřívá na vnitřní teplotu 60°C, přidá se k němu voda a vodná směs se ochladí na teplotu místnosti a nechá přes noc granulovat. Pevná látka se odfiltruje, promyje toluenem (200 ml) a vysuší za vakua při 40 až 45°C. Získá se 117,5 g 3-deoxy-l,2-0-(1-methylethyliden)-3-[(4-nitrobenzoyl)amino]-a-D-ribofuranosy s 8,7% obsahem popelovin (zbytkový hydrogenuhličitan sodný). To • · vede ke korigovanému výtěžku 107 g (83 %). čistota získaného produktu je dostatečná, aby ho bylo možno použít v následujících stupních syntézy. Analyticky čistý produkt lze získat po resuspendování ve směsi toluenu a vody.

[a]_D: +53,25 (c = 1, CH₂C1₂)

Teplota tání: 187,2 až 187,6°C 'H NMR (400 MHz, CDCI₃): 1,38 (s, 3), 1,58 (s, 3), 3,18 (dd, 1, J=6,6, 7,7), 3,723,80 (m, 1), 3,87-3,94 (m, 2), 4,43 (ddd, 5,1,9,0, 9,0), 4,72 (dd, 1, J=4,0, 4,9), 5,93 (d, 1, J=3,8), 6,77 (d, 1, J=8,1), 7,96 (d, 2, J=8_f8), 8,30 (d, 2, J=8,9).

^,3C NMR (75 MHz, CDCI₃): 26,38, 26,51, 52,32, 60,77, 78,96, 80,41, 104,24,

112,89, 124,05, 128,40, 138,59, 149,97, 166,08.

M.S. (AP-) = 337,2

Analýza pro C₁₅H₁₈N₂O₇: vypočteno: C 53,25, H 5,36, N 8,28, nalezeno: C 53,28, H 5,62, N 8,33

Preparativní postup RR1

1-[3-deoxy-l,2-0-(1-methylethyliden)-3-[(4-nitrobenzoyl)amino]-α-D-ribofuranuronoylJpiperidin (dvoustupňový způsob)

Ke směsi dichlormethanu (2700 ml) a vody (1800 ml) se přidá 3-deoxy-l,2-0-(1-methylethyliden)-3-[(4-nitrobenzoyl ) amino ]-a-D-ribofuranosa (300 g, 0,887 mol), bromid draselný (21,1 g, 0,177 mol), hydrogenuhličitan sodný (408 g, 4,86 mmol) a Et₄NCl (12,3 g, 0,044 mol). Vzniklý roztok se ochladí na 0 až 5°C, načež se k němu přidá TEMPO. K výsledné směsi se kapací nálevkou během 80 minut přidá obchodně dostupné bělidlo Clorox (4400 ml, 5,25% NaOCl) takovou rychlostí, aby se vnitřní teplota udržela pod 5°C. Po další 1 hodině se reakční směs zředí vodou (7500 ml). Vodná směs se zahřeje na teplotu místnosti. Organická fáze se odstraní. Hodnota pH vodné vrstvy se přídavkem koncentrované kyseliny chlorovodíkové (560 ml) upraví na 2,4 a ke směsi se přidá • · ethylacetát (4000 ml). Po smísení se vrstvy oddělí. Vodná vrstva se extrahuje znovu ethylacetátem (200 ml). Spojené ethylacetátové extrakty se vysuší síranem hořečnatým, přefiltrují a filtrát se zkoncentruje za sníženého tlaku. Získá se řídký olejovitý produkt (který stále obsahuje zbytkový ethylacetát). Tohoto oleje se použije přímo v následujícím stupni.

Stupeň 2:

K surové 3-deoxy-l,2-0-(l-methylethyliden)-3-[(4-nitrobenzoyl)amino]-a-D-ribofuranuronové kyselině se přidá di chlormethan (3100 ml). Vzniklý roztok se ochladí na 0 až 5°C a přikape se k němu triethylamin (310 ml) a poté dimethylformamid (34 ml). K výsledné směsi se pomalu přidá oxalylchlorid (85 ml), což vyvolá značný vývoj plynu. Oxalylchlorid se přidává takovou rychlostí, aby teplota reakční směsi nepřesáhla 5°C (doba přídavku = 1 hodina). K reakční směsi se po dalších 15 minutách přidá piperidin (114 ml) takovou rychlostí, aby se vnitřní teplota udržela pod 5°C (doba přídavku = 45 minut). Po další 1 hodině se reakční směs zředí vodou (3 litry). Fáze se oddělí a organická vrstva se extrahuje vodným hydrogenuhličitanem sodným (1,5 litru vody, 100 g hydrogenuhličitanu sodného). Vrstvy se oddělí a organická vrstva se vysuší síranem hořečnatým, přefiltruje a filtrát se umístí do nádoby vybavené pro destilaci.

Destilací se odstraní většina rozpouštědla (3200 ml) a ke směsi se přidá heptan (500 ml). Heptanová směs se dále zahřívá, dokud teplota destilátu nedosáhne 58°C, přidá se další heptan (1 litr) a v zahřívání se pokračuje dokud teplota destilátu nedosáhne 65°C. Dalších 300 ml destilátu se odstraní za mírného vakua, směs se poté ochladí a přidá se k ní dichlormethan (45 ml). Dichlormethanový roztok se přes noc míchá. Vzniklá pevná látka je stále poměrně lepivá, takže se k ní přidá další dichlormethan (120 ml) a směs se ·*

• ·

- 259 ··♦ ·· hodiny míchá při teplotě místnosti. Pevná látka se odfiltruje a promyje heptanem (80 ml). Získá se 242 g (výtěžek 65 % ze dvou stupňů) l-[3-deoxy-l,2-0-(1-methylethyliden)-3-[(4-nitrobenzoyl)amino]-a-D-ribofuranuronoyl]piperidinu. Odhadnuté složení roztoku pro resuspendování: 12 až 14% dichlormethan v heptanu.

[a]_D:+72.1 (c 1, CH₂CI₂) ’H NMR (400 MHz, CDCI₃): 1/6 (s, 3), 1,57 (s, 3), 1,51-1,68 (m, 6), 3/0-3,45 (m,

2), 3,60-3,74 (m, 2), 4,67 (d, 1, J=8,7), 4,84 (dd, 1, J=3,7, 5,0), 4,90 (ddd, 1, J=5,0, 7,9, 8,3), 5,95 (d, 1, J=3,3), 6,69 (d, 1, J=7,5), 7,94 (d, 2, J=8,7), 8,26 (d, 2, J=9,1). 13C NMR (100 MHz, CDCI₃); 24,68, 25,64, 26,57, 26,74, 27,16, 43,79, 46,88,

54,76, 78,79, 105,16, 113,23, 124,00, 128,68, 139,66, 149,90, 165,17, 165,67.

Preparativní postup SS1

1-[1,2-di-0-acetyl-3-deoxy-3-[(4-nitrobenzoyl)amino]-D-ribofuranuronoyl]piperidin - směs anomerů (dvoustupňový způsob)

Stupeň 1:

K roztoku trifluoroctové kyseliny (345 ml) a vody (85 ml) se přidá 1-[3-deoxy-l,2-0-(1-methylethyliden)-3-[(4-nitrobenzoyl)amino]-α-D-ribofuranuronoyljpiperidin (150 g, 0,357 mol). Reakční směs se 5,5 hodiny udržuje při teplotě místnosti a poté pomalu přidá ke zhášecímu roztoku, kterým je směs obsahující vodu (7,5 litru), chlorid sodný (2250 g), hydrogenuhličitan sodný (450 g) a dichlormethan (3,75 litru). Po zastavení reakce se směs dalších 15 minut míchá a oddělí se fáze. Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (1,5 litru) Spojené organické vrstvy se vysuší síranem hořečnatým a přefiltrují. Získaného roztoku se použije přímo v následujícím stupni.

• ·

- 260 ·♦··

Stupeň 2:

K roztoku získanému výše popsaným způsobem se přidá triethylamin (225 ml) a poté acetanhydrid (137 ml, po kapkách tak, aby se teplota udržela pod 30°C). Po 45 minutách se úplnost reakce potvrdí analýzou HPLC. K reakční směsi se pomalu přidá 2M hydroxid sodný (1 litr), přičemž se směs vodou chladí tak, aby se její teplota udržela pod 30°C. Po dokončení přídavku se oddělí fáze a organická vrstva se extrahuje vodou (800 ml) a zkoncentruje. Ke tmavému olejovitému zbytku se přidá ethylacetát (500 ml) a ethylacetátový roztok se přefiltruje přes oxid křemičitý (120 g) a promyje ethylacetátem (200 ml). Eluenty se zkoncentruji. Získá se 132 g (80 % ze dvou stupňů) l-[1,2-di-0-acetyl-3-deoxy-3-[(4-nitrobenzoyl)amino]-D-ribofuranuronoyl]piperidinu ve formě žluté pěny.

Poznámka: Poměr anomerů je asi 3:2. NMR data jsou uvedena pro směs a pro jednoduchost byly integrační hodnoty aproximovány tak, jako by poměr byl 1:1.

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): 1,44-1,74 (m, 12), 2,08 (s, 3), 2,09 (s, 3), 2,12 (s, 3), 2,16 (s, 3), 3,22-3,80 (m, 8), 4,84 (d, 1, J=6,8), 5,05 (s, 1), 5,11 (dd, 1, J=6,2, 7,5), 5,45 (d, 1, J=5,35), 5,52-5,60 (m, 2), 6,18 (s, 1), 6,48 (d, 1, J=7,3), 6,60 (d, 1, J=4,5), 6,96 (d, 1, J=7,5), 7,88-7,94 (m, 4), 8,26-8,36 (m, 4).

¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃): 20,61,20,93, 21,22, 21,43, 24,57, 24,63, 25,64, 25_;80, 26,62, 26,68, 27,15, 43,70, 43,96, 46,87, 46,98, 47,07, 52,20, 52,61,70,51,75,92, 78,81,80,06, 81,51,94,94, 98,56; 105,17, 124,01, 124,10, 124,34,128,19, 128,54, 128,64, 139,43, 139,56, 150,00, 150,12,165,26, 165,39, 165,62,165,66, 168,59,

168,90, 169,52, 169,55.

Hi Res MS (M+H): calc: 464.1669; found: 464.1674.

MS (M+H) s vysokým rozlišením: vypočteno 464,1669, nalezeno

464,1674

Analýza pro C₂₁H₂₅N₃O_g: vypočteno: C 54,42, H 5,44, N 9,07, nalezeno: C 54,21, H 5,80, N 9,06 ·· • · » ♦ • · • · * ····

261 »·· ·

Preparativní postup

N-[[5-chlor-2-[(3-methyl-5-isoxazolyl)methoxy]fenylJmethyl]-lH-purin-6-amin (dvoustupňový způsob)

Stupeň 1:

K roztoku 2-[[5-chlor-2-[(3-methyl-5-isoxazolyl)methoxy]fenyl]methyl]-lH-isoindol-l,3(2H)dionu (3000,0 g, 7,837 mol) v tetrahydrofuranu (42 litrů) a isopropylalkoholu (31,5 litru) se přidá 54% vodný hydrazin (1500 ml). Vzniklý roztok se 5 hodin zahřívá na 50°C. Úplnost reakce se poté posoudí analýzou HPLC. Roztok se ochladí na teplotu místnosti. Objemná pevná bílá pevná látka se odfiltruje a promyje tetrahydrofuranem (2500 ml). Filtrát se zkoncentruje a k olejovitému zbytku se přidá TMBE (36 litrů). (Poznámka: destilát obsahující nadbytek hydrazinu se rozloží bělicím činidlem). K MTBE směsi se přidá 1M hydroxid sodný (35 litrů). Výsledná směs se 10 minut míchá a vrstvy se oddělí. Organická fáze se extrahuje vodným chloridem sodným (18 litrů), vysuší síranem sodným, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje na olejovitý zbytek. Tento postup se opakuje a surový 5-chlor-2-[(3-methyl-5-isoxazolyl)methoxy]benzenmethanamin z obou frakcí se spojí (teorie 15,674 mol).

Stupeň 2

K olejovitému produktu získanému výše popsaným způsobem se přidá isopropylalkohol (79 litrů), triethylamin (4 litry) a 6-chlorpurin (2620 g, 16,95 mol). Vzniklý roztok se zahřívá na 75°C a přibližně po 30 minutách začne vznikat pevná sraženina. Po uplynutí celkové reakční doby 22 hodin se úplnost reakce posoudí HPLC analýzou. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti a hustá suspenze se zředí isopropylalkoholem (15 litrů), přefiltruje a filtrační koláč ·· ·♦ • · • ·

- 262 • · > · · .♦ ·♦·· se promyje isopropylalkoholem (2 x 20 litrů). Pevná látka se vysuší za vakua. Získá se 4700 g (výtěžek ze dvou stupňů 81 %) N-[[5-chlor-2-[(3-methyl-5-isoxazolyl)methoxy]fenyl]methyl]-lH-purin-6-aminu ve formě špinavě bílé pevné látky.

¹H NMR (500 MHz, d₆-DMSO): 2,25 (s, 3), 4,68 (br s, 2), 5,35 (s, 2), 6,52 (br s, 1), 7,14 (br s, 1), 7,17(d, 1, J=8,8), 7,28 (dd, 1,3=2,0, 8,6), 8,17 (br s, 2) ¹³C NMR (125 MHz, d₆-DMSO): 11,6, 38,6, 61,7, 105,4, 114,3, 119,3, 125,6, 12^4, 127,8, 131,2, 140.0, 150,7, 153,04, 154,4, 154,7, 160.4, 167,9.

Teplota tání: 264,2 až 265,8°C

Analýza pro C₁₇H₁₅N₆O₂C1: vypočteno: C 55,07, H 4,08, N 22,67, Cl 9,56, nalezeno: C 54,98, H 4,18, N 22,54, Cl 9,74

1-[2-O-Acetyl-l-[6-[[[5-chlor-2-[(3-methyl-5-isoxazolyl)methoxy]fenyl]methyllamino]-9H-purin-9-yl]-1,3-dideoxy-3-[(4-nitrobenzoyl)aminoΙ-β-D-ribofuranuronoyl]piperidin

K roztoku N-[[5-chlor-2-[(3-methyl-5-isoxazolyl)~ methoxy]fenylmethyl]-lH-purin-6-aminu (36,54 g, 0,0985 mol) v DME (175 ml) se přidá trimethylsilyltrifluormethansulfonát (TMSOTf) (50,00 g, 0,2250 mol). Výsledný roztok se zahřívá na 65°C. V oddělené nádobě se l-[1,2-di-O-acetyl-3-deoxy-3-[(4-nitrobenzoyl)amino]-D-ribofuranuronoyl]piperidin (surový, z předchozího stupně, 51,46 g, 0,1110 mol) rozpustí v DME (80 ml). l-[1,2-di-0-acetyl-3-deoxy-3-[(4-nitrobenzoyl)amino]-D-ribofuranuronoyl]piperidinový roztok se přemístí do kapací nálevky a během 30 minut přikape k horkému roztoku N-[[5-chlor-2-[(3-methyl-5-isoxazolyl)methoxy]fenylmethyl]-lH-purin-6-aminu a TMSOTf. Po dalších 15 minutách se zahřívání přeruší a reakční roztok se přidá k dichlormethanu (750 ml) a nasycenému hydrogenuhličitanu sodnému (750 ml). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje jednou dichlormethanem (200 ml). Spojené organické vrstvy se vysuší síranem hořečnatým, přefiltrují a filtrát

263 • 4 4 4 ♦

444 se zkoncentruje. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu (250 ml), ethylacetátový roztok se přefiltruje a promyje ethylacetátem (150 ml). Ethylacetátová vrstva (celkový objem 400 ml) se přes noc skladuje při 5°C, což umožní pomalou tvorbu krystalického produktu. Krystaly se odfiltrují a promyjí chladným ethylacetátem (200 ml). Produkt je stále mírně zbarvený, takže se 1 hodinu míchá v ethylacetátu (400 ml), odfiltruje a promyje ethylacetátem (100 ml). Získá se 46,76 g (54 %) sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě bílé pevné látky. Tohoto produktu (o 85% čistotě podle analýzy HPLC) se použije bez dalšího přečištění. Vzorek o analytické čistotě se získá chromatografií za použití 5% isopropylalkoholu v dichlormethanu.

[a]_D: -51,8 (c 1,CH₂CI₂) ¹H NMR (500 MHz, d₆-DMSO): 1,40-1,56 (m, 6), 2,02 (s, 3), 2,25 (s, 3), 3,40-3,55 (m, 4), 4,69 (br s, 1 / 2), 5,20 (d, 1, J=5,6), 5,35 (s, 2), 5,35-5,40 (m, 1), 5,93 (~ t, 1, J=5,4), 6,52 (br s, 2), 7,15 (br s, 1), 7,17 (d, 1, J=8,8), 7,29 (dd, 1, J=2,5, 8,.7), 8,10 (d, 2, J=8,7), 8,24 (s, 1), 8,37 (d, 2, J=8,7), 8,42 (brs, 1), 8,51 (brs, 1). 9,18 (d, 1,J=7,9).

¹³C NMR (125 MHz, D₆-DMSO): 10,94, 20,43, 23,83, 25,21,26,14, 37,94, 42,76, 46,04, 52,42, 61,07, 74,00, 77,81,86,33,104,77,113,77,119,27,123,64,124,97, 126,71, 127,24, 129,05, 130,26, 139,25, 139,49, 148,82, 149,24, 152,92, 153,70, 154,43, 159,71, 165,21, 165,53, 167,22, 169,22.

M.S. (AP+)=774,2

Analýza pro C₃₆H₃₆N₉O_gCl: vypočteno: C 55,85, H 4,69, N 16,28, Cl 4,58, nalezeno: C 55,82, H 4,77, N 16,28, Cl 4,63

Preparativní postup UU1

3-Amino-l-[6-[[[5-chlor-2-[(3-methyl-5-isoxazolyl)methoxy]fenyl]methyllamino]-9H-purin-9-yl]-l,3-dideoxy-p-D-ribofuranuronová kyselina

264 , *4

Κ 1—[2-(O-acetyl-1-[6-[[[5-chlor-2-[(3-methyl-5-isoxazoly1)methoxy]feny1]methyl]amino]-9H-purin-9-yl]-1,3-dideoxy-3-[(4-nitrobenzoyl)amino]-β-D-ribofuranuronoyljpiperidinu (250,0 g, 0,3229 mol, o 88% čistotě) se přidá tetrahydrofuran (1250 ml), voda (650 ml), methanol (350 ml) a pevný hydroxid draselný (85 %, 127,9 g). Výsledný roztok se 23 hodin zahřívá na 65°C, nechá zchladnout na teplotu místnosti a přidá se k němu voda (1250 ml) a MTBE (1250 ml). Fáze se oddělí a MTBE vrstva se odloží. K vodné vrstvě se přidá koncentrovaná kyselina chlorovodíková, kterou se hodnota pH upraví na 5,6. Vytvoří se charakteristická sraženina. Po dvouhodinové granulaci se suspenze přefiltruje. Filtrační koláč se vloží zpět do nádoby s vodou (200 ml) a tetrahydrofuranem (1800 ml). Výsledná směs se 1 hodinu míchá, vzniklá suspenze se přefiltruje a vlhký filtrační koláč se znovu přidá do nádoby s vodou (1 litr). K vodné suspenzi se přidá koncentrovaná kyselina chlorodovíkové, dokud se nedosáhne pH = 1,2 a dále tetrahydrofuran (2 litry) a ethylacetát (1 litr). Dále se přidá další tetrahydrofuran (1 litr), aby se usnadnila separace. Vzhledem k tomu, že vznikne emulze se přidá další tetrahydrofuran (500 ml) a dvojvrstva se přefiltruje přes celit. Fáze se oddělí a organická fáze se extrahuje vodou (2 x 500 ml). Všechny vodné fáze se spojí a přidá se k nim 6M hydroxid sodný (asi 100 ml), čímž se pH upraví na 5,0. Pevná látka se odfiltruje a promyje roztokem vody a tetrahydrofuranu v poměru 10 : 90 (celkem 1300 ml). Pevná látka se vysuší ve vakuové sušárně. Získá se 91,02 g (55 %) sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě špinavě bílého prášku.

MS s vysokým rozlišením = 516,1390 (M+H). Vypočteno 516,1398 ¹H NMR (500 MHz, d₆-DMSO): 2,24 (s, 3), 3,82 (brs, 1), 4,34 (brd, 1, J=5,1), 4,66 (br s, 2), 5,34 (s, 2), 6,14 (d, 1, J=2,9), 6,52 (s, 1), 7,11 (br s, 1), 7,15 (d, 1, J=8.8),

7,27 (dd, 1, J=2,3, 8,7), 8,20 (s, 1), 8,34 (br s, 1), 8,.88 (br s, 1).

¹³C NMR (125 MHz, d₆-DMSO): 10,94, 37,88, 55,31,61,05, 73,82, 81,57, 88.61,

104,76, 113,73,119,34,124,95, 126,61, 127,16, 130,39, 139,97, 148,70, 152,49, 153,67, 154,33, 159,71, 167,20, 172,06.

265

• · • ·

Preparativní postup VV1

3-Amino-l-[6-[[[5-chlor-2-[(3-methyl-5-isoxazolyl)methoxy]fenyljmethyl]amino]-9H-purin-9-yl]-1, 3-dideoxy-N-methyl-p-D-ribofuranuroamid

Roztok chlorovodíku v methanolu se připraví tak, že se acetylchlorid (8,5 ml, 0,12 mol) pomalu přidá k methanolu (1 litr). Ke vzniklému roztoku se po 10 minutách přidá 3-amino -l-[6-[[[5-chlor-2-[(3-methyl-5-isoxazolyl)methoxy]fenyl]methyl]amino]-9H-purin-9-yl]-1,3-dideoxy-p-D-ribofuranuronová kyselina (40,03 g, 0,0776 mol) za použití methanolu, jako promývací kapaliny (100 ml). Získaný roztok se 15 hodin zahřívá na 50°C. Poté se konverze kyseliny na methylester potvrdí pomocí HPLC. Roztok se ochladí na 37°C, načež se k němu přidá methylamin (600 ml 2,0M roztoku v methanolu). Reakční směs se 5,5 hodiny znovu zahřívá na 50°C a konverze esteru na methylamid se potvrdí pomocí HPLC. Reakční směs se připraví na destilaci a za použití sníženého tlaku se z ní odstraní 250 ml rozpouštědla, přičemž se vnitřní teplota udržuje mezi 45 až 50°C. Teplota roztoku se za atmosférického tlaku zvýší na 65°C a k roztoku se přidá Darco (6,0 g) a voda (10 ml). Po 5 minutách se roztok za horka přefiltruje přes celit a filtrační vrstva se promyje methanolem (100 ml). Filtrát se za míchání přes noc nechá zchladnout na teplotu místnosti. Vzniklý krystalický produkt se přefiltruje a promyje methanolem (200 ml). Získá se 30,73 g (72 %) sloučeniny uvedené v nadpisu ve formě hydrátu. HPLC analýza tohoto produktu ukáže více než 98% čistotu.

Vynález se neomezuje na konkrétní provedení uvedená v tomto textu. Tato provedení lze různě obměňovat a modifikovat, aniž by došlo k odklonu od ducha a úniku z rozsahu tohoto nového konceptu, který je definován v následujících patentových nárocích.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY kde

X představuje oxy, methylen nebo thioskupinu;

Y představuje skupinu CH nebo N;

Z představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkyloxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, trifluormethylskupinu nebo halogen;

R¹ představuje hydroxymethylskupinu, alkoxymethylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkoxylové části, cykloalkoxymethylskupinu se 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkoxylové části, karboxyskupinu, alkoxykarbonylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkoxylové části, cykloalkoxykarbonylskupinu se 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkoxylové části, 1,l-aminoiminomethylskupinu, 1,1-(mono-N- nebo di-N,N-alkylamino)iminomethylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v každé ·· ···<

z alkylových částí, 1,1-(mono-N- nebo di-N,N-cykloalkylamino)iminomethylskupinu se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí, karbamoylskupinu, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupinu se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí nebo N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové a 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části;

o

R představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku nebo cykloalkylskupinu se 3 až 5 atomy uhlíku;

O

R představuje halogen, trifluormethylskupinu, kyanoskupinu, alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkyloxyskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, ethenylskupinu nebo ethynylskupinu;

D představuje oxyskupinu, thioskupinu, NH, alkyloxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylthioskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylaminoskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

G představuje zčásti nasycený, zcela nasycený nebo zcela nenasycený pěti- až osmičlenný kruh, který popřípadě obsahuje 1 až 3 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, nebo bicyklický kruh tvořený dvěma anelovanými zčásti nasycenými, zcela nasycenými nebo zcela nenasycenými tří- až šestičlennými kruhy, bráno nezávisle, popřípadě s 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolenými z dusíku, síry a kyslíku; přičemž G je popřípadě mono-, di- nebo trisubstituovaný substituenty • · • · • · « ·· ♦ « nezávisle zvolenými z halogenu, alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku, trifluormethylskupiny, trifluormethoxyskupinu, nitroskupiny, kyanoskupiny, cykloalkylskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku, hydroxyskupiny nebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku, nebo

G představuje kyanoskupinu, alkoxykarbonylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části, cykloalkoxykarbonylskupinu se 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, skupinu

C(O)NR⁴R⁵, C(S)NR⁴R⁵, C(NH)NR⁴R⁵, C(N-alkyl)NR⁴R⁵ s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylové části nebo C(N-cykloalkyl)NR⁴R⁵ se 3 až 10 atomy uhlíku v cykloalkylové části;

R⁴ představuje vazbu, vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, cykloalkoxyskupinu se 3 až 10 atomy uhlíku nebo zčásti nasycený, zcela nasycený nebo zcela nenasycený pěti- až osmičlenný kruh, který je popřípadě vázán přes alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahuje 1 až 3 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, nebo bicyklický kruh nebo bicyklický kruh s případným můstkem s 1 až 3 atomy uhlíku popřípadě vázaný přes alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, přičemž tento bicyklický kruh nebo přemostěný bicyklický kruh popřípadě obsahuje 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené z dusíku, síry a kyslíku, a přičemž alkylskupina s 1 až 10 atomy uhlíku, alkoxyskupina s 1 až 10 atomy uhlíku, cykloalkoxyskupina se 3 až 10 atomy uhlíku nebo kruh nebo kruhy uvedené v definici R⁴ jsou popřípadě mono-, di- nebo trisubstituovány substituenty nezávisle zvolenými z halogenu, alkyl• ·

- 2&9 «’ skupiny s 1 až 3 atomy uhlíku, trifluormethylskupiny, nitroskupiny, kyanoskupiny, cykloalkylskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku, hydroxyskupiny nebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku;

R⁵ představuje vazbu, vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku nebo cykloalkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku; nebo

5

R a R braný dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří zbytek zvolený ze zcela nasycených nebo zčásti nenasycených čtyř- až devítičlenných kruhů, které jsou popřípadě přemostěné a popřípadě obsahují 1 až 3 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku a jsou popřípadě mono- nebo disubstituovány substituenty nezávisle zvolenými z oxoskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylskupiny s 1 až 8 atomy uhlíku, aminoskupiny, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí, N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové a 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,N-cykloalkylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí N-alkyl-N-cykloalkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové a 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, formylaminoskupiny, alkylkarbonylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, cykloalkylkarbonylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylová části, alkoxykarbo• · • · • · · · • ···
2&9 -* nylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části, N-alkoxykarbonyl-N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alifatických částí, sulfamoylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylsulfonylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, cykloalkylsulfonylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku a zčásti nasycených, zcela nasycených nebo zcela nenasycených pěti- až osmičlenných kruhů, které jsou popřípadě vázány prostřednictvím alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahují 1 až 3 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, a bicyklických kruhů tvořených dvěma anelovanými zčásti nasycenými, zcela nasycenými nebo zcela nenasycenými tří- až šestičlennými kruhy, bráno nezávisle, popřípadě vázanými prostřednictvím alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku, popřípadě obsahujícími 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené z dusíku, síry a kyslíku a popřípadě mononebo disubstituovanými halogenem, trifluormethylskupinou, trifluormethoxyskupinou, alkylskupinou s 1 až 3 atomy uhlíku nebo alkoxyskupinou s 1 až 3 atomy uhlíku;

a jejich proléčiva a farmaceuticky vhodné soli těchto sloučenin a proléčiv.

2. Sloučeniny podle nároku 1 obecného vzorce I, kde představuje oxy;

představuje dusík;

představuje vodík;

• · • · · • · · ·* ··« η

R představuje alkylkarbamoylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části;

o

R představuje vodík;

R³ představuje halogen, trifluormethylskupinu, kyanoskupinu, alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkyloxyskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, ethenylskupinu nebo ethynylskupinu;

D představuje oxyskupinu, thioskupinu, alkyloxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylthioskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

G představuje fenyl-, pyridyl-, pyrimidinyl-, pyrazinyl-, thiazolyl-, oxazolyl-, isoxazolyl-, pyridazinyl-, tetrazolyl-, isothiazolyl-, thiofenyl-, furyl-, 1,2,4-oxadiazolyl-, 1,2,4-thiadiazolyl-, pyrazolyl-, pyrrolyl-, indolyl-, naftyl-, chinolylisochinolyl-, benzo[b]furyl-, benzo[b]thiofenyl-, benzothiazolyl-, tetrahydrofuryl-, pyrrolidinyl-, piperidinyl-, tetrahydropyranyl- nebo morfolinylskupinu, přičemž G je popřípadě mono-, di- nebo trisubstiutován substituenty nezávisle zvolenými z halogenu, alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku nebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.
3. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 2, kde

R¹ představuje methylkarbamoylskupinu;

představuje halogen;

- 4?·ι • « · •X

D představuje alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

G představuje fenyl-, pyridyl-, thiazolyl-, oxazolyl-, isoxazolyl-, isothiazolyl-, furyl-, 1,2,4-oxadiazolyl-, 1,2,4-thiadiazolyl-, pyrazolyl- nebo pyrrolylskupinu, přičemž G je popřípadě mono-, dinebo trisubstituován substituenty nezávisle zvolenými z halogenu, alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku, trifluormethoxyskupiny nebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.
4. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 3, kde

D představuje alkoxyskupinu s 1 až 2 atomy uhlíku;

G představuje fenyl-, thiazolyl-, oxazolyl-, isoxazolyl-, tetrahydrofuryl-, pyrrolidinyl-, piperidinylnebo morfolinylskupinu, přičemž G je popřípadě mono-, di- nebo trisubstituován substituenty nezávisle zvolenými z halogenu, alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku nebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.
5. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 3, kde

R³ předstvuje chlor, D představuje methylenoxyskupinu a G představuje fenylskupinu; a jejich farmaceuticky vhodné soli.
6. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 3, kde

O

R představuje chlor, D představuje methylenoxyskupinu a G představuje 3-furylskupinu; a jejich farmaceuticky vhodné soli.

• · • · · • *··
7. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 3, kde

O

R představuje chlor, D představuje methylenoxyskupinu a G představuje 2-furylskupinu; a jejich farmaceuticky vhodné soli.
8. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 3, kde

R představuje chlor, D představuje methylenoxyskupinu a G představuje 2-thiazolylskupinu; a jejich farmaceuticky vhodné soli.
9. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 3, kde

O

R představuje chlor, D představuje methylenoxyskupinu a G představuje 5-(3-methylisoxazolyl)skupinu; a jejich farmaceuticky vhodné soli.
10. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1, kde

X představuje oxy;

Y představuje dusík;

Z představuje vodík;

R¹ představuje alkylkarbamoylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části;

R² představuje vodík;

R³ představuje halogen, trifluormethylskupinu, kyanoskupinu, alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkyloxyskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, ethenylskupinu nebo ethynylskupinu;

D představuje alkyloxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylthioskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

• ·

G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ nebo C(S)NR⁴R⁵, kde

R a R braný dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří zbytek zvolený ze zcela nasycených čtyř- až devítičlenných kruhů, které popřípadě obsahují 1 až 3 přídavné heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku a jsou popřípadě mono- nebo disubstituovány substituenty nezávisle zvolenými z oxoskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylskupiny s 1 až 8 atomy uhlíku, aminoskupiny, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí, N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové a 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylová části, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,N-cykloalkylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí, N-alkyl-N-cykloalkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové a 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, formylaminoskupiny, alkylformylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, cykloalkylformylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, sulfamoylskupiny, alkylsulfonylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, cykloalkylsulfonylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku a zčásti nasycených, zcela nasycených nebo zcela nenasycených pěti- až osmičlenných kruhů, které jsou popřípadě vázány prostřednictvím alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahují 1 až 3 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, a bicyklických kruhů tvořených dvěma • · ·· ·· • · » · ·· · anelovanými zčásti nasycenými, zcela nasycenými nebo zcela nenasycenými tří- až šestičlennými kruhy, bráno nezávisle, popřípadě připojenými prostřednictvím alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku, a popřípadě obsahujícími 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené z dusíku, síry a kyslíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.
11. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 10, kde

R představuje methylkarbamoylskupinu;

R představuje halogen;

D představuje alkoxyskupinu s 1 až 2 atomy uhlíku;

G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ nebo C(S)NR⁴R⁵, kde

R a R braný dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří zbytek zvolený z piperidinylskupiny, piperazinylskupiny, morfolinylskupiny, azetidinylskupiny a pyrrolidinylskupiny, přičemž uvedený kruh je popřípadě mono- nebo disubstituován substituenty nezávisle zvolenými z oxoskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylskupiny s 1 až 8 atomy uhlíku, aminoskupiny, karbamoylskupiny, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí, N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové a 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, mono-N- nebo di-N,N-alkyl• · • · ·♦ » · · · .· .

aminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,N-cykloalkylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí nebo N-alkyl-N-cykloalkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové a 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, formylaminoskupiny, alkylformylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, cykloalkylformylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, sulfamoylskupiny, alkylsulfonylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, cykloalkylsulfonylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku a zčásti nasycených, zcela nasycených nebo zcela nenasycených čtyř- až osmičlenných kruhů, které jsou popřípadě vázány prostřednictvím alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahují 1 až 2 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, a jejich farmaceuticky vhodné soli.
12. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 11, kde

G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵;

R⁴ a R⁵ brány dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří zbytek zvolený z piperidinylskupiny, piperazinylskupiny, morfolinylskupiny, azetidinylskupiny a pyrrolidinylskupiny, přičemž uvedený kruh je popřípadě mono- nebo disubstituován substituenty nezávisle zvolenými z hydroxyskupiny, oxoskupiny alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylskupiny s 1 až 8 atomy uhlíku, aminoskupiny, karbamoylskupiny, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, ·· ·· > » · • · ··· mono-N- nebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, a zčásti nasycených, zcela nasycených nebo zcela nenasycených čtyř- až osmičlenných kruhů, které jsou popřípadě vázány prostřednictvím alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahují 1 až 2 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, a jejich farmaceuticky vhodné soli.
13. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 12,

O kde R představuje chlor; D představuje methylenoxyskupinu; G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵, kde R⁴ a R⁵ brány dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří piperazinylskupinu, která je v poloze 4 substituována methylskupinou; a jejich farmaceuticky vhodné soli.
14. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 12, kde R³ představuje chlor; D představuje methylenoxyskupinu; G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵, kde R⁴ a R⁵ brány dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří piperazinylskupinu; a jejich farmaceuticky vhodné soli.
15. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 12, kde R³ představuje chlor; D představuje methylenoxyskupinu; G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵, kde R⁴ a R⁵ brány dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří piperidinylskupinu, která je v poloze 4 substituována N,N-dimethylaminoskupinou; a jejich farmaceuticky vhodné soli.
16. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 12,

O kde R představuje chlor; D představuje methylenoxyskupinu; G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵, kde R⁴ a R⁵ brány dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří • · piperidinylskupinu, která je v poloze 4 substituována piperidin-l-ylskupinou; a jejich farmaceuticky vhodné soli.
17. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 12, kde R představuje chlor; D představuje methylenoxyskupinu; G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵, kde R⁴ a R⁵ brány dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří piperidinylskupinu, která je v poloze 4 substituována methylaminoskupinou; a jejich farmaceuticky vhodné soli.
18. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1, kde

X představuje oxy;

Y představuje dusík;

Z představuje vodík;

R¹ představuje alkylkarbamoylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části;

R² představuje vodík;

O

R představuje halogen, trifluormethylskupinu, kyanoskupinu, alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkyl oxyskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, ethenylskupinu nebo ethynylskupinu;

D představuje alkyloxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylthioskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ nebo C(S)NR⁴R⁵, kde •t ·* *·I * · * • · · • · · · · :· < • ·

I ♦ ♦ «t ··*·

R⁴ představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, cykloalkoxyskupinu se 3 až 10 atomy uhlíku nebo zčásti nasycený, zcela nasycený nebo zcela nenasycený pěti- až osmičlenný kruh, který je popřípadě vázán přes alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahuje 1 až 3 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, nebo bicyklický kruh tvořený dvěma anelovanými zčásti nasycenými, zcela nasycenými nebo zcela nenasycenými tří- až šestičlennými kruhy, bráno nezávisle, který je popřípadě vázaný přes alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahuje 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené z dusíku, síry a kyslíku,

R⁵ představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku nebo cykloalkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.
19. Sloučeniny obecného zvorce I podle nároku 18, kde

R představuje methylkarbamoylskupinu;

R³ představuje halogen;

D představuje alkoxyskupinu s 1 až 2 atomy uhlíku;

G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ nebo C(S)NR⁴R⁵;

R⁴ představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, cykloalkoxyskupinu se 3 až 10 atomy • * « ·· ·· · »

• V 9 • 9 ** « 9 a* ··»· uhlíku nebo zčásti nasycený, zcela nasycený nebo zcela nenasycený pěti- až osmičlenný kruh, který je popřípadě vázán přes alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahuje 1 až 3 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku;

R⁵ představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku nebo cykloalkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.
20. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 19, kde

G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵;

R⁴ představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, cykloalkylskupinu se 3 až 6 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku nebo cykloalkoxyskupinu se 3 až 10 atomy uhlíku;

R⁵ představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku nebo cykloalkylskupinu se 3 až 10 atomy uhlíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.
21. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 20, kde

R³ představuje chlor;

D představuje methylenoxyskupinu;

- 2#β *·· ·**

9» » · * i ^: • · · 'I ···«

G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵;

R⁴ představuje vodík; a

R představuje vodík;

a jejich farmaceuticky vhodným soli.
22. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1, kde

D představuje oxyskupinu, thioskupinu, alkyloxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylthioskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

G představuje fenyl-, pyridyl-, pyrimidinyl-, pyrazi nyl-, thiazolyl-, oxazolyl-, isoxazolyl-, pyridinazinyl-, tetrazolyl-, isothiazolyl-, thiofenyl-, furyl-, 1,2,4-oxadiazolyl-, 1,2,4-thiadiazolyl-, pyrazolyl-, pyrrolyl-, indolyl-, naftyl-, chinolyl isochinolyl-, benzo[b]furyl-, benzo[b]thiofenyl-, benzothiazolyl-, tetrahydrofuryl-, pyrrolidinyl-, piperidinyl-, tetrahydropyranyl- nebo morfolinylskupinu, přičemž G je popřípadě mono-, di- nebo trisubstiutován substituenty nezávisle zvolenými z halogenu, alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku nebo alkoxyskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.
23. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 22, kde

D představuje alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

·♦ ·

- i to —

G představuje fenyl-, pyridyl-, thiazolyl-, oxazolyl-, isoxazolyl-, isothiazolyl-, furyl-,

1,2,4-oxadiazolyl-, 1,2,4-thiadiazolyl-, pyrazolylnebo pyrrolylskupinu, přičemž G je popřípadě mono-, di- nebo trisubstituován nezávisle halogenem, alkylskupinou s 1 až 3 atomy uhlíku nebo alkoxyskupinou s 1 až 3 atomy uhlíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.
24. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1, kde

D představuje alkyloxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylthioskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ nebo C(S)NR⁴R⁵, kde

R⁴ a R⁵ brány dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří zbytek zvolený ze zcela nasycených čtyř- až devítičlenných kruhů, které popřípadě obsahují 1 až 3 přídavné heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku a jsou popřípadě mono- nebo disubstituovány substituenty nezávisle zvolenými z oxoskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylskupiny s 1 až 8 atomy uhlíku, aminoskupiny, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí, N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové a 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových

282 částí, mono-N- nebo di-N,N-cykloalkylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí, N-alkyl-N-cykloalkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové a 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylová části, formylaminoskupiny, alkylformylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, cykloalkylformylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, sulfamoylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylsulfonylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, cykloalkylsulfonylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku a zčásti nasycených, zcela nasycených nebo zcela nenasycených pěti- až osmičlenných kruhů, které jsou popřípadě vázány prostřednictvím alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahují 1 až 3 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, a bicyklických kruhů tvořených dvěma anelovanými zčásti nasycenými, zcela nasycenými nebo zcela nenasycenými tří- až šestičlennými kruhy, bráno nezávisle, popřípadě připojenými prostřednictvím alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku, popřípadě obsahujícími 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené z dusíku, síry a kyslíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.
25. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 24, kde

D představuje alkoxyskupinu s 1 až 2 atomy uhlíku;

G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵ nebo C(S)NR⁴R⁵, kde

R⁴ a R⁵ brány dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří zbytek zvolený z piperidinylskupiny, piperazinylskupiny, morfolinylskupiny, azetidinylskupiny a pyrrolidinylskupiny, přičemž uvedený kruh je popřípadě mono- nebo disubstituován substituenty nezávisle zvolenými z oxoskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylskupiny s 1 až 8 atomy uhlíku, aminoskupiny, karbamoylskupiny, mono-Nnebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-Nnebo di-N,N-cykloalkylaminokarbonylskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí, N-alkyl-N-cykloalkylaminokarbonylskupiny s 1 až atomy uhlíku v alkylové a 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,Ν-cykloalkylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v každé z cykloalkylových částí a N-alkyl-N-cykloalkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové a 3 až atomy uhlíku v cykloalkylové části, formylaminoskupiny, alkylformylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, cykloalkylformylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku v cykloalkylové části, sulfamoylskupiny, alkylsulfonylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, cykloalkylsulfonylaminoskupiny se 3 až 5 atomy uhlíku a zčásti nasycených, zcela nasycených nebo zcela nenasycených čtyř- až osmičlenných kruhů, které jsou popřípadě vázány prostřednictvím alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahují 1 až 2 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, a jejich farmaceuticky vhodné soli.

25. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 25, kde ·· ·*.

• ♦ · · • · ·

- 28^·- ··:

• · · · · · • 9 • · 9999

G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵; kde

R a R braný dohromady s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny, tvoří zbytek zvolený z piperidinylskupiny, piperazinylskupiny, morfolinylskupiny, azetidinylskupiny a pyrrolidinylskupiny, přičemž uvedený kruh je popřípadě mono- nebo disubstituován substituenty nezávisle zvolenými z oxoskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylskupiny s 1 až 8 atomy uhlíku, aminoskupiny, karbamoylskupiny, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminokarbonylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, mono-N- nebo di-N,N-alkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí a zčásti nasycených, zcela nasycených nebo zcela nenasycených čtyř- až osmičlenných kruhů, které jsou popřípadě vázány prostřednictvím alkylskupiny s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahují 1 až 2 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, a jejich farmaceuticky vhodné soli.
27. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1, kde

D představuje alkyloxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylthioskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

G představuje skupinu C(O)NR⁴R^ nebo C(S)NR⁴R⁵, kde

R⁴ představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, cykloalkoxyskupinu se 3 až 10 atomy uhlíku nebo zčásti nasycený, zcela nasycený nebo

285·-*··· zcela nenasycený pěti- až osmičlenný kruh, který je popřípadě vázán přes alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahuje 1 až 3 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku, nebo bicyklický systém tvořený dvěma anelovanými zčásti nasycenými, zcela nasycenými nebo zcela nenasycenými tří- až šestičlennými kruhy, bráno nezávisle, který je popřípadě vázaný přes alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahuje 1 až 4 heteroatomy nezávisle zvolené z dusíku, síry a kyslíku,

R⁵ představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku nebo cykloalkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.
28. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 27, kde

D představuje alkoxyskupinu s 1 až 2 atomy uhlíku;

R⁴ představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, cykloalkoxyskupinu se 3 až 10 atomy uhlíku nebo zčásti nasycený, zcela nasycený nebo zcela nenasycený pěti- až osmičlenný kruh, který je popřípadě vázán přes alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a popřípadě obsahuje 1 až 3 heteroatomy nezávisle zvolené z kyslíku, síry a dusíku;

R⁵ představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku nebo cykloalkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.

·· ·· • · · · • · ·

286*- ”í • · · · · ·
29. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 28, kde

G představuje skupinu C(O)NR⁴R⁵;

R⁴ představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, cykloalkylskupinu se 3 až 6 atomy uhlíku hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku nebo cykloalkoxyskupinu se 3 až 10 atomy uhlíku;

R⁵ představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku nebo cykloalkylskupinu se 3 až 10 atomy uhlíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.

R² představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku nebo cykloalkylskupinu se 3 až 5 atomy uhlíku; a ·· ♦· · • * · * · • · ·

- 287·- ··: ·

.......

• · ·♦· ·

R³ představuje halogen, trifluormethylskupinu, kyanoskupinu, alkylskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkyloxyskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, ethenylskupinu nebo ethynylskupinu.
31. Sloučeniny podle nároku 30 obecného vzorce CVI, kde R představuje vodík; a R představuje chlor.
32. Sloučeniny podle nároku 30 obecného vzorce CVI, kde ~R představuje vodík; a R^J představuje fluor.
33. Sloučeniny podle nároku 30 obecného vzorce CVI,

9 kde R představuje cyklopropylskupinu; a R představuje fluor.
34. Způsob snižování poškození tkáně, které je následkem ischemie nebo hypoxie, vyznačuj ící se t i m , že se savci, který takové léčení potřebuje, podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo jejího proléčiva.
35. Způsob podle nároku 34, vyznačující se t i m , že tkání je tkáň srdce, mozku, jater, ledvin, plic, střev, kosterního svalstva, sleziny, slinivky, nervů, míchy, retiny, vaskulatura nebo intestinální tkáň.
36. Způsob podle nároku 34, vyznačující se t i m , že se sloučenina obecného vzorce I podává v množství od asi 0,01 mg/kg/den do 50 mg/kg/den.
37. Způsob podle nároku 34, vyznačující se t i m , že se sloučenina podává před operací, během operace nebo po operaci.

* ·
38. Farmaceutická kompozice, vyznačuj ιοί se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství sloučeniny podle nároku 1 obecného vzorce I, jejího proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli této sloučeniny nebo proléčiva a farmaceuticky vhodný nosič, vehikulum nebo ředidlo.
39. Farmaceutická kombinační kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje: terapeuticky účinné množství kompozice obsahující první sloučeninu, přičemž první sloučeninou je sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, její proléčivo nebo farmaceuticky vhodná sůl této sloučeniny nebo proléčiva;

druhou sloučeninu, přičemž druhou sloučeninou je kardiovaskulární činidlo; a popřípadě farmaceutický nosič, vehikulum nebo ředidlo.
40. Farmaceutická kompozice podle nároku 39, vyznačující se tím, že kardiovaskulárním činidlem je β-blokátor, blokátor vápníkového kanálu; otevírač draslíkového kanálu; adenosin; agonista adenosinu; inhibitor ACE; nitrát; diuretikum; glykosid; thrombolytikům; inhibitor destiček; aspirin; dipyridamol; chlorid draselný; klonidin; prazosin; inhibitor pyruvát dehydrogenasa kinasy; inhibitor pyruvát dehydrogenasového komplexu; biguanid; inhibitor NHE-1; antagonista receptoru angiotensinu II, AII; inhibitor C5a; solubilní receptor komplementu typu 1, sCRl, nebo jeho analog; parciální inhibitor oxidace mastných kyselin PFOX; aktivátor acetyl CoA karboxylasy; inhibitor malonyl CoA dekarboxylasy; inhibitor 5¹AMP-aktivovaný protein kinasy AMPK; inhibitor adenosin nukleosidu; antiapoptotické činidlo, například inhibitor kaspasy; monofosforyl lipid • · ·· · • * * 1

289 -»·: ···· ·♦

A nebo jeho analog; aktivátor/inhibitor oxid dusnatý synthasy; aktivátor protein kinasy C, zejména protein kinasy epsílon59 inhibitor protein kinasy delta, inhibitor póly (ADP ribosa) synthetasy, PARS, PARP; metformin, inhibitor glukoneogenese, látka zvyšující citlivost na inzulín; inhibitor enzymu konvertujícího endothelin, ECE; antagonista receptoru endothelinu ETA; inhibitor TAFI nebo modulátor měničů Na/Ca.
41. Farmaceutická kompozice podle nároku 40, vyznačující se tím, že inhibitorem NHE-1 je sloučenina zvolená ze souboru sestávajícího z [ l-(8-bromchinolin-5-yl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazo1-4-karbony 1]guanidinu;

[1-(6-chlorchinolin-5-yl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonylJguanidinu;

[1-(indazol-7-yl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(benzimidazol-5-yl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl ]guanidinu;

[1-(1-isochinolyl) - 5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[5-cyklopropyl-l-(4-chinolyl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[5-cyklopropyl-l-(chinolin-5-yl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

_v 9 9 ·

- 29.δ’«· ’ • ·«·· ·* [5-cyklopropyl-l-(chinolin-8-yl)-lH-pyrazol-4-karbonyljguanidinu;

[l-(indazol-6-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbonyljguanidinu;

[1-(indazol-5-yl)-5-ethy1-lH-pyrazol-4-karbony1jguanidinu;

[1-(benzimidazol-5-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(l-methylbenzimidazol-6-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbonyljguanidinu;

1-(5-chinolyl)-5-n-propyl-lH-pyrazol-4-karbonyljguanidinu;

1-(5-chinolyl)-5-isopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyljguanidinu;

[5-ethyl-l-(6-chinolyl)-lH-pyrazol-4-karbonyljguanidinu;

[l-(2-methylbenzimidazol-5-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbonyljguanidinu;

[1-(1,4-benzodioxan-6-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbony1jguanidinu;

[1-(benzotriazol-5-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbony1jguanidinu;

[1-(3-chlorindazol-5-yl)-5-ethyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(5-chinolyl)-5-butyl-lH-pyrazol-4-karbonyljguanidinu;

[5-propyl-l-(6-chinolyl)-lH-pyrazol-4-karbony1jguanidinu;

« · ·« • · ♦

- 29·ί ·♦·· [ 5-isopropyl-l-(6-chinolyl)-lH-pyrazo1-4-karbony1] guanidinu [ 1- ( 2-chlor-4-methylsulfonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol -4-karbonyljguanidinu;

[ 1- ( 2-chlorfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyljguani dinu;

[1-(2-trifluormethyl-4-fluorfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol -4-karbonyljguanidinu;

t1-(2-bromfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyljguanidinu;

[1-(2-fluorfenyl)-5-cyklopropyl-ΙΗ-pyrazol-4-karbonylJguani dinu;

[1-(2-chlor-5-methoxyfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyljguanidinu;

[1—(2-chlor-4-methylaminosulfonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbonyljguanidinu;

[1-(2,5-dichlorfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbony1J guanidinu;

[l-(2,3-dichlorfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol-4-karbony1] guanidinu;

[1-(2-chlor-5-aminokarbonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol -4-karbonyljguanidinu;

[1-(2-chlor-5-aminosulfonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol -4-karbonyljguanidinu;

• · ·· « ♦

- 29^ • ·· ·

-··· ··· t1~(2-fluor-6-trifluormethylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol -4-karbonyl] guanidinu;

[1-(2-chlor-5-methylsulfonylfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol -4-karbonylJguanidinu;

[1-(2-chlor-5-dimethylaminosulfonylfenyl)-5-cyklopropyl-iH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[1-(2-trifluormethy1-4-chlorfenyl)-5-cyklopropyl-lH-pyrazol -4-karbonyl]guanidinu;

[l^-(2-chlorfenyl)-5-methy1-ΙΗ-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[5-methyl-l-(2-trifluormethylfenyl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[5-ethyl-l-fenyl-lH-pyrazol-4-karbonylJguanidinu;

[5-cyklopropyl-l-(2-trifluormethylfenyl)-lH-pyrazol-4-karbo nyl]guanidinu;

[5-cyklopropyl-l-fenyl-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

[5-cyklopropyl-l-(2,6-dichlorfenyl)-lH-pyrazol-4-karbonyl]guanidinu;

a jejich farmaceuticky vhodných solí.
42. Způsob snižování poškození tkáně, které je následkem ischemie nebo hypoxie, vyznačuj ící se t í m , že se savci, který takové léčení potřebuje, podává • ·

- 2¾ ·$·«·. . . · ···· *^r první sloučenina, kterou je sloučenina obecného vzorce I, její proléčivo nebo farmaceuticky vhodná sůl této sloučeniny nebo proléčiva; a druhá sloučenina, kterou je kardiovaskulární činidlo;

přičemž množství první a druhé sloučeniny vedou k terapeutickému účinku.
43. Způsob podle nároku 42, vyznačující se t í m , že kardiovaskulárním činidlem je β-blokátor, blokátor vápníkového kanálu; otevírač draslíkového kanálu; adenosin; agonista adenosinu; inhibitor ACE; nitrát; diuretikum; glykosid; thrombolytikum; inhibitor destiček; aspirin; dipyridamol; chlorid draselný; klonidin; prazosin; inhibitor pyruvát dehydrogenasa kinasy; aktivátor pyruvát dehydrogenasového komplexu; biguanid; inhibitor NHE-1; antagonista receptoru angiotensinu II, AII; inhibitor C5a; solubilní receptor komplementu typu 1, sCRl, nebo jeho analog; parciální inhibitor oxidace mastných kyselin PFOX; aktivátor acetyl CoA karboxylasy; inhibitor malonyl CoA dekarboxylasy; inhibitor 5'AMP-aktivovaný protein kinasy AMPK; inhibitor adenosin nukleosidu; antiapoptotické činidlo, například inhibitor kaspasy; monofosforyl lipid A nebo jeho analog; aktivátor/inhibitor oxid dusnatý synthasy; aktivátor protein kinasy C, zejména protein kinasy epsílon59 inhibitor protein kinasy delta, inhibitor póly (ADP ribosa) synthetasy, PARS, PARP; metformin, inhibitor glukoneogenese, látka zvyšující citlivost na inzulín; inhibitor enzymu konvertujícího endothelin, ECE; antagonista receptoru endothelinu ETA; inhibitor TAFI nebo modulátor měničů Na/Ca.

• :: : 29¾ -·: * • · * * · ® •4 ·**·
44. Kit, že obsahuje vyznačuj ící tím

a) první sloučeninu, kterou je sloučenina obecného vzorce I podle nároku 1, její proléčivo nebo farmaceuticky vhodnou sůl této sloučeniny nebo proléčiva, a farmaceuticky vhodný nosič, vehikulum nebo ředidlo v první jednotkové dávkovači formě;

b) druhou sloučeninu, kterou je kardiovaskulární činidlo a farmaceuticky vhodný nosič, vehikulum nebo ředidlo ve druhé jednotkové dávkovači formě; a

c) prostředky pro obalení první a druhé dávkovači formy, přičemž množství první a druhé sloučeniny vede k terapeutickému účinku.
45. Kit podle nároku 44, vyznačující se t i m , že kardiovaskulárním činidlem je β-blokátor, blokátor vápníkového kanálu; inhibitor ACE; nitrát; diuretikum; glykosid; thrombolytikum; inhibitor destiček; aspirin; dipyridamol; chlorid draselný; klonidin; prazosin; inhibitor pyruvát dehydrogenasa kinasy; aktivátor pyruvát dehydrogenasového komplexu; biguanid nebo inhibitor NHE-1.
46. Sloučenina zvolená ze souboru sestávajícího z methylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[ 6— (2-benzyloxy-5-chlorbenzylamino)purin-9-yl]-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny;

- 29Č τ»· φ

·· ·* φ* ’· ·* .· *· ·« · * methylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(furan-3-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl} -4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny;

methylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(furan-2-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny;

methylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-[5-chlor-2-(thiazol-2 -ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrofuran-2-karboxylové kyseliny;

methylamidu (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[5-chlor-2-(3-methylisoxazol-5-ylmethoxy)benzylamino]purin-9-yl}-4-hydroxytetrahydrof uran-2-karboxylové kyseliny;

a jejich farmaceuticky vhodných solí.

01-399-02-Ma