CZ20021094A3 - Pouľití polypeptidu kódovaného genem PRV-1 nebo jeho fragmentu pro výrobu léku působícího jako růstový faktor - Google Patents
Pouľití polypeptidu kódovaného genem PRV-1 nebo jeho fragmentu pro výrobu léku působícího jako růstový faktor Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20021094A3 CZ20021094A3 CZ20021094A CZ20021094A CZ20021094A3 CZ 20021094 A3 CZ20021094 A3 CZ 20021094A3 CZ 20021094 A CZ20021094 A CZ 20021094A CZ 20021094 A CZ20021094 A CZ 20021094A CZ 20021094 A3 CZ20021094 A3 CZ 20021094A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- sequence
- amino acids
- nucleotides
- prv
- polypeptide
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 72
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 71
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 69
- 239000012634 fragment Substances 0.000 title claims description 39
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims description 17
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 title claims description 12
- 101000980845 Homo sapiens CD177 antigen Proteins 0.000 title abstract 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 90
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 55
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 55
- 240000006711 Pistacia vera Species 0.000 claims description 26
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 22
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 22
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 22
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 15
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 14
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 claims description 8
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 8
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 7
- 208000032027 Essential Thrombocythemia Diseases 0.000 claims description 6
- 208000014767 Myeloproliferative disease Diseases 0.000 claims description 6
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 claims description 5
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 claims description 5
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 206010033661 Pancytopenia Diseases 0.000 claims description 4
- 206010028537 myelofibrosis Diseases 0.000 claims description 4
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 claims description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 10
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims 2
- 241000543381 Cliftonia monophylla Species 0.000 claims 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 60
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 25
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 abstract description 4
- 102100024209 CD177 antigen Human genes 0.000 abstract 1
- 208000037244 polycythemia vera Diseases 0.000 description 98
- 208000017733 acquired polycythemia vera Diseases 0.000 description 97
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 89
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 30
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 29
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 27
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 24
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 23
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 18
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 17
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 16
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 14
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 13
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 210000003013 erythroid precursor cell Anatomy 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 8
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 6
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 6
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 6
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 6
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 6
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 5
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 5
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 5
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 5
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 5
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 5
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 4
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 4
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 4
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 229930004094 glycosylphosphatidylinositol Natural products 0.000 description 4
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 3
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 3
- IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 3
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- OQSQCUWQOIHECT-YJRXYDGGSA-N Ser-Tyr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OQSQCUWQOIHECT-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 2
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 2
- 206010051379 Systemic Inflammatory Response Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 2
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 1-oxidanylurea Chemical compound N[14C](=O)NO VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- UWIQWPWWZUHBAO-ZLIFDBKOSA-N Ala-Leu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 UWIQWPWWZUHBAO-ZLIFDBKOSA-N 0.000 description 1
- IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N Ala-Ser Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- OGUPCHKBOKJFMA-SRVKXCTJSA-N Arg-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N OGUPCHKBOKJFMA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- AQPVUEJJARLJHB-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N AQPVUEJJARLJHB-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- LVMUGODRNHFGRA-AVGNSLFASA-N Arg-Leu-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O LVMUGODRNHFGRA-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- VVJTWSRNMJNDPN-IUCAKERBSA-N Arg-Met-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(O)=O VVJTWSRNMJNDPN-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- KSUALAGYYLQSHJ-RCWTZXSCSA-N Arg-Met-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KSUALAGYYLQSHJ-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- DQTIWTULBGLJBL-DCAQKATOSA-N Asn-Arg-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N DQTIWTULBGLJBL-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- NLRJGXZWTKXRHP-DCAQKATOSA-N Asn-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O NLRJGXZWTKXRHP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- MKJBPDLENBUHQU-CIUDSAMLSA-N Asn-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MKJBPDLENBUHQU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ZUFPUBYQYWCMDB-NUMRIWBASA-N Asn-Thr-Glu Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZUFPUBYQYWCMDB-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- PGUYEUCYVNZGGV-QWRGUYRKSA-N Asp-Gly-Tyr Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 PGUYEUCYVNZGGV-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- IVPNEDNYYYFAGI-GARJFASQSA-N Asp-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N IVPNEDNYYYFAGI-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- JSNWZMFSLIWAHS-HJGDQZAQSA-N Asp-Thr-Leu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O JSNWZMFSLIWAHS-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- RGTVXXNMOGHRAY-WDSKDSINSA-N Cys-Arg Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N RGTVXXNMOGHRAY-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- KIQKJXYVGSYDFS-ZLUOBGJFSA-N Cys-Asn-Asn Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KIQKJXYVGSYDFS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- YZFCGHIBLBDZDA-ZLUOBGJFSA-N Cys-Asp-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YZFCGHIBLBDZDA-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- XLLSMEFANRROJE-GUBZILKMSA-N Cys-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N XLLSMEFANRROJE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- SRIRHERUAMYIOQ-CIUDSAMLSA-N Cys-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SRIRHERUAMYIOQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 101150066002 GFP gene Proteins 0.000 description 1
- 102000002702 GPI-Linked Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010043685 GPI-Linked Proteins Proteins 0.000 description 1
- JJKKWYQVHRUSDG-GUBZILKMSA-N Glu-Ala-Lys Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O JJKKWYQVHRUSDG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- NKSGKPWXSWBRRX-ACZMJKKPSA-N Glu-Asn-Cys Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N NKSGKPWXSWBRRX-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- PAQUJCSYVIBPLC-AVGNSLFASA-N Glu-Asp-Phe Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PAQUJCSYVIBPLC-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- AUTNXSQEVVHSJK-YVNDNENWSA-N Glu-Glu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O AUTNXSQEVVHSJK-YVNDNENWSA-N 0.000 description 1
- LRPXYSGPOBVBEH-IUCAKERBSA-N Glu-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LRPXYSGPOBVBEH-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- ITBHUUMCJJQUSC-LAEOZQHASA-N Glu-Ile-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O ITBHUUMCJJQUSC-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- SJJHXJDSNQJMMW-SRVKXCTJSA-N Glu-Lys-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O SJJHXJDSNQJMMW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- IDEODOAVGCMUQV-GUBZILKMSA-N Glu-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IDEODOAVGCMUQV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- YQAQQKPWFOBSMU-WDCWCFNPSA-N Glu-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O YQAQQKPWFOBSMU-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- JVWPPCWUDRJGAE-YUMQZZPRSA-N Gly-Asn-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O JVWPPCWUDRJGAE-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- IWAXHBCACVWNHT-BQBZGAKWSA-N Gly-Asp-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IWAXHBCACVWNHT-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- MFBYPDKTAJXHNI-VKHMYHEASA-N Gly-Cys Chemical compound [NH3+]CC(=O)N[C@@H](CS)C([O-])=O MFBYPDKTAJXHNI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- YDWZGVCXMVLDQH-WHFBIAKZSA-N Gly-Cys-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O YDWZGVCXMVLDQH-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- IANBSEOVTQNGBZ-BQBZGAKWSA-N Gly-Cys-Met Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O IANBSEOVTQNGBZ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- QCTLGOYODITHPQ-WHFBIAKZSA-N Gly-Cys-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O QCTLGOYODITHPQ-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- VNBNZUAPOYGRDB-ZDLURKLDSA-N Gly-Cys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)CN)O VNBNZUAPOYGRDB-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- CCQOOWAONKGYKQ-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)CN CCQOOWAONKGYKQ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Ala Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N Gly-Leu-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- UHPAZODVFFYEEL-QWRGUYRKSA-N Gly-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CN UHPAZODVFFYEEL-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- NNCSJUBVFBDDLC-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NNCSJUBVFBDDLC-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- LHYJCVCQPWRMKZ-WEDXCCLWSA-N Gly-Leu-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LHYJCVCQPWRMKZ-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- UWQDKRIZSROAKS-FJXKBIBVSA-N Gly-Met-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O UWQDKRIZSROAKS-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 1
- WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N Gly-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Lys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- TVTZEOHWHUVYCG-KYNKHSRBSA-N Gly-Thr-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O TVTZEOHWHUVYCG-KYNKHSRBSA-N 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N Glycyl-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 206010018690 Granulocytosis Diseases 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 1
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- ZIMTWPHIKZEHSE-UWVGGRQHSA-N His-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O ZIMTWPHIKZEHSE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- AKEDPWJFQULLPE-IUCAKERBSA-N His-Glu-Gly Chemical compound N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O AKEDPWJFQULLPE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- WPUAVVXYEJAWIV-KKUMJFAQSA-N His-Phe-Cys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N WPUAVVXYEJAWIV-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- MQFGXJNSUJTXDT-QSFUFRPTSA-N Ile-Gly-Ile Chemical compound N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O MQFGXJNSUJTXDT-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 1
- CMNMPCTVCWWYHY-MXAVVETBSA-N Ile-His-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)N CMNMPCTVCWWYHY-MXAVVETBSA-N 0.000 description 1
- KEKTTYCXKGBAAL-VGDYDELISA-N Ile-His-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N KEKTTYCXKGBAAL-VGDYDELISA-N 0.000 description 1
- FGBRXCZYVRFNKQ-MXAVVETBSA-N Ile-Phe-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N FGBRXCZYVRFNKQ-MXAVVETBSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N L-leucyl-L-arginine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N Leu-Ala-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- DKEZVKFLETVJFY-CIUDSAMLSA-N Leu-Cys-Asn Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N DKEZVKFLETVJFY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HYMLKESRWLZDBR-WEDXCCLWSA-N Leu-Gly-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O HYMLKESRWLZDBR-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- IFMPDNRWZZEZSL-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O IFMPDNRWZZEZSL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- FAELBUXXFQLUAX-AJNGGQMLSA-N Leu-Leu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C FAELBUXXFQLUAX-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 1
- AMSSKPUHBUQBOQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Ser-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N AMSSKPUHBUQBOQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- PPGBXYKMUMHFBF-KATARQTJSA-N Leu-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PPGBXYKMUMHFBF-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- LINKCQUOMUDLKN-KATARQTJSA-N Leu-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N)O LINKCQUOMUDLKN-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- CNWDWAMPKVYJJB-NUTKFTJISA-N Leu-Trp-Ala Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)=CNC2=C1 CNWDWAMPKVYJJB-NUTKFTJISA-N 0.000 description 1
- QUCDKEKDPYISNX-HJGDQZAQSA-N Lys-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QUCDKEKDPYISNX-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- JYVCOTWSRGFABJ-DCAQKATOSA-N Lys-Met-Ser Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N JYVCOTWSRGFABJ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N Lys-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 1
- GILLQRYAWOMHED-DCAQKATOSA-N Lys-Val-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN GILLQRYAWOMHED-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- CNUPMMXDISGXMU-CIUDSAMLSA-N Met-Cys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CNUPMMXDISGXMU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- YORIKIDJCPKBON-YUMQZZPRSA-N Met-Glu-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O YORIKIDJCPKBON-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- OSZTUONKUMCWEP-XUXIUFHCSA-N Met-Leu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC OSZTUONKUMCWEP-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- KZKVVWBOGDKHKE-QTKMDUPCSA-N Met-Thr-His Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 KZKVVWBOGDKHKE-QTKMDUPCSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- 101100205189 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-5 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000000447 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Human genes 0.000 description 1
- 108010055817 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 241001387976 Pera Species 0.000 description 1
- QPVFUAUFEBPIPT-CDMKHQONSA-N Phe-Gly-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QPVFUAUFEBPIPT-CDMKHQONSA-N 0.000 description 1
- AFNJAQVMTIQTCB-DLOVCJGASA-N Phe-Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 AFNJAQVMTIQTCB-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- KDBHVPXBQADZKY-GUBZILKMSA-N Pro-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 KDBHVPXBQADZKY-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 108010079005 RDV peptide Proteins 0.000 description 1
- 108010003201 RGH 0205 Proteins 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CO SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N Ser-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- YQHZVYJAGWMHES-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ala-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YQHZVYJAGWMHES-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- BGOWRLSWJCVYAQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BGOWRLSWJCVYAQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- FFOKMZOAVHEWET-IMJSIDKUSA-N Ser-Cys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O FFOKMZOAVHEWET-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- PPCZVWHJWJFTFN-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PPCZVWHJWJFTFN-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- ILZAUMFXKSIUEF-SRVKXCTJSA-N Ser-Ser-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ILZAUMFXKSIUEF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- NADLKBTYNKUJEP-KATARQTJSA-N Ser-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NADLKBTYNKUJEP-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010041660 Splenomegaly Diseases 0.000 description 1
- VUKVQVNKIIZBPO-HOUAVDHOSA-N Thr-Asp-Trp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N)O VUKVQVNKIIZBPO-HOUAVDHOSA-N 0.000 description 1
- CUTPSEKWUPZFLV-WISUUJSJSA-N Thr-Cys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O CUTPSEKWUPZFLV-WISUUJSJSA-N 0.000 description 1
- WDFPMSHYMRBLKM-NKIYYHGXSA-N Thr-Glu-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N)O WDFPMSHYMRBLKM-NKIYYHGXSA-N 0.000 description 1
- HEJJDUDEHLPDAW-CUJWVEQBSA-N Thr-His-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O HEJJDUDEHLPDAW-CUJWVEQBSA-N 0.000 description 1
- GFRIEEKFXOVPIR-RHYQMDGZSA-N Thr-Pro-Lys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O GFRIEEKFXOVPIR-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- VGNLMPBYWWNQFS-ZEILLAHLSA-N Thr-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N)O VGNLMPBYWWNQFS-ZEILLAHLSA-N 0.000 description 1
- NHQVWACSJZJCGJ-FLBSBUHZSA-N Thr-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O NHQVWACSJZJCGJ-FLBSBUHZSA-N 0.000 description 1
- ZMYCLHFLHRVOEA-HEIBUPTGSA-N Thr-Thr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZMYCLHFLHRVOEA-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 1
- XEVHXNLPUBVQEX-DVJZZOLTSA-N Thr-Trp-Gly Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)NCC(=O)O)N)O XEVHXNLPUBVQEX-DVJZZOLTSA-N 0.000 description 1
- 208000005485 Thrombocytosis Diseases 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- DZHDVYLBNKMLMB-ZFWWWQNUSA-N Trp-Lys Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 DZHDVYLBNKMLMB-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- YBRHKUNWEYBZGT-WLTAIBSBSA-N Trp-Thr Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(O)=O)=CNC2=C1 YBRHKUNWEYBZGT-WLTAIBSBSA-N 0.000 description 1
- QZOSVNLXLSNHQK-UWVGGRQHSA-N Tyr-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 QZOSVNLXLSNHQK-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 108010069495 cysteinyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000022811 deglycosylation Effects 0.000 description 1
- 239000013578 denaturing buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 108010006664 gamma-glutamyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 108010079547 glutamylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 230000001279 glycosylating effect Effects 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000009422 growth inhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 108010036413 histidylglycine Proteins 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 108010027338 isoleucylcysteine Proteins 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 108010000761 leucylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010091871 leucylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- MIKKOBKEXMRYFQ-WZTVWXICSA-N meglumine amidotrizoate Chemical compound C[NH2+]C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.CC(=O)NC1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C([O-])=O)=C1I MIKKOBKEXMRYFQ-WZTVWXICSA-N 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 208000004235 neutropenia Diseases 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 108010073101 phenylalanylleucine Proteins 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010093296 prolyl-prolyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- -1 secondary antibodies Substances 0.000 description 1
- 208000013213 secondary polycythemia Diseases 0.000 description 1
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 230000014599 transmission of virus Effects 0.000 description 1
- 108010045269 tryptophyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 1
- 102000009816 urokinase plasminogen activator receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040001269 urokinase plasminogen activator receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/04—Antipruritics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/10—Antioedematous agents; Diuretics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká kódující gen PRV-1, rekombinantní nukleotidové sekvence DNA obsahující tuto obsahujících tuto nukleotidovou sekvenci, vektorů rekombinantní DNA a buněk, které jsou transformovány takovými vektory, a také se týká polypeptidu PRV-1. Především se vynález týká použití polypeptidu kódovaného genem PRV-1 nebo jeho fragmentu a/nebo použití nukleotidové sekvence genu PRV-1 pro výrobu léku působícího jako růstový faktor. Dále se vynález týká protilátek proti polypeptidu PRV-1, způsobu detekce polypeptidu PRV-1 a léčiv, která obsahují polypeptid PRV-1 nebo protilátky, které jsou namířeny proti polypeptidu PRV-1.
Dosavadní stav techniky
Polycythemia rubra vera (erytrémie), také nazývaná polycythemia vera nebo zkráceně p. vera, je maligní hematologické onemocnění, při kterém dochází ke zvýšené tvorbě erytroidů, granulocytů a megakaryocytů. Nemoc je klonálního původu a vzniká v důsledku mutace jediné hematopoetické prekurzorové buňky. V Německu je incidence p. vera 4 až 6 na 1 milion obyvatel. Pokud zůstane nemoc neléčena, vede ke smrti během 18 měsíců. Léčení odebíráním krve nebo užitím chemoterapie prodlužuje průměrnou dobu přežití na více než 13 let.
| • 4 | 4444 | «4 | 4444 | 44 | 44 | ||
| 4 4 · | • | • | • | 4 | 4 | 4 4 | |
| • | 4 | • | 4 | β | • | • | 4 |
| • | • | • 4 | 4 | 4 | • 4 | 4 | 4 |
| • · | • | 4 | 4 4 | 4 | 4 | 4 | |
| 4444 | • | 44 | 44 | 44 | 4444 |
| P. | vera se | diagnostikuje | na základě | klinických |
| kritérií. Do | klinického | obrazu patří | bolesti hlavy, | pruritus, |
| splenomegalie | u dvou třetin pacientů, | krvácení nebo | trombózy, | |
| hypertenze u | třetiny | pacientů, dna, která je | způsobena |
zvýšenou tvorbou kyseliny močové, a v některých případech také septické vředy. Nejdůležitějším laboratorním nálezem je zvýšení hodnot pro hemoglobin, hematokrit, počet erytrocytů a celkový objem erytrocytů, a také v mnoha případech neutrofilní granulocytóza nebo trombocytóza. Jelikož na jedné straně je většina kritérií značné difuzních, a na druhé straně, ne všichni pacienti splňují tato kritéria, je často velmi obtížné odlišit p. vera od jiných myeloproliferativních nemocí, jako je např. chronická granulocytární leukémie nebo esenciální trombocytóza, a tudíž potvrdit diagnózu. Molekulární příčiny p. vera jsou dosud naprosto neznámé. Jelikož však má p. vera, pokud není léčena, velmi těžký průběh, přesná diagnóza je velmi důležitá.
Podstata vynálezu
Cílem předkládaného vynálezu bylo zjistit molekulární příčinu onemocnění polycythemia rubra vera a nalézt vhodný způsoby diagnózy této nemoci.
Tohoto cíle bylo dosaženo tím, že byl izolován gen, jehož exprese je specificky asociována s p. vera a u kontrolních zdravých jedinců k ní nedochází. Tento gen byl pojmenován PRV-1 (polycythemia rubra vera).
Podobná nukleotidová sekvence byla popsána v mezinárodní patentové přihlášce WO 98/50552.
Jeden předmět předkládaného vynálezu se proto týká polynukleotidu, který kóduje gen PRV-1 a v podstatě obsahuje sekvenci id. č. 1. Polynukleotidy podle předkládaného vynálezu jsou jednořetězcové nebo dvoj řetězcové DNA nebo RNA. Pokud jsou to RNA, pak je odborníkovi zřejmé, že nukleotidy U” jsou zde přítomny místo nukleotidů T. Termín polynukleotid v předkládaném popisu znamená nukleovou kyselinu, která obsahuje 15 nebo více nukleotidů.
Nukleotidová sekvence podle předkládaného vynálezu je znázorněna na obr. 1. Vynález se týká polynukleotidu, který odpovídá sekvenci uvedené na obr. 1 a také polynukleotidu, jehož nukleotidová sekvence vykazuje menší odlišnosti. Termínem sekvence vykazující menší odlišnosti se v popisu předkládaného vynálezu rozumí takové sekvence, ve kterých je změněno několik nukleotidů, výhodně ne více než 50 a zvláště výhodně ne více než 25 nukleotidů, přičemž funkce genu kódovaného nukleotidovou sekvencí není ovlivněna. Odborníkovi je známa skutečnost, že triplet baží kódující aminokyselinu může být nahrazen jiným tripletem, který kóduje stejnou aminokyselinu. Navíc méně důležité úseky mohou být deletovány (odstraněny) a/nebo mutovány na sekvence vykazující menší odlišnosti.
V jednom specifickém provedení vynálezu polynukleotid obsahuje nukleotidy 36 až 1346 ze sekvence č. 1, což je kódující úsek genu PRV-1. V jiných provedeních vynálezu polynukleotid obsahuje nukleotidy 36 až 1262 nebo 36 až 1238 ze sekvence Č. 1. Tento úsek je považován za úsek kódující aktivní úsek polypeptidu PRV-1. Nakonec polynukleotid podle předkládaného vynálezu může také obsahovat nukleotidy 39 až 1346, 39 až 1262 nebo 39 až 1238 ze sekvence č. 1, takže kodon, který kóduje počáteční methionin, chybí. Výhodným provedením vynálezu je polynukleotid, který obsahuje nukleotidy 99 až 1346, 99 až 1262 nebo 99 až 1238 ze sekvence • · · φ · φφ · • · ··· φφφφ · • φ φ φ φ φ φ φ · ···· · φφ φφ φ· φφφφ
č. 1. Výsledkem je to, že kodony na 5'-konci kódující signální peptid polypeptidu PRV-1 nejsou přítomny.
Polynukleotid podle předkládaného vynálezu může být také fragmentem genu PRV-1. Zpravidla fragment obsahuje více než 100 nukleotidů, avšak výhodně více než 300 nukleotidů. Fragmenty mohou být užity jako primery nebo jako sondy, zejména pro PCR; v takovém případě se mohou fragmenty zkrátit, aby vyhovovaly požadovanému účelu. Primery jsou obvykle dlouhé 10 až 30 nukleotidů a sondy jsou obvykle dlouhé 15 až 50 nukleotidů.
Gen PRV-1 je endogenní gen, jehož exprese je však u zdravých jedinců omezena na několik málo orgánů. Normálně je exprimován hlavně v orgánech hematopoezy, tj. v kostní dřeni a fetálních játrech, a slabě je exprimován ve slezině, ale není exprimován v srdci, ve svalech pankreatu nebo ledvinách. U pacientů trpících p. vera je tento gen velmi silně nadměrně exprimován zejména v hematopoetických buňkách.
Gen PRV-1 kóduje protein, který má sekvenci uvedenou na obr. 2. Signální peptid, který je přítomen v proteinové sekvenci všech povrchových molekul a normálně je odstraněn v průběhu opracování proteinu v buňce (processing) , je oddělen pomlčkou. Protein má sekvenci uvedenou zde jako sekvence id. č. 2.
Další aspekt předkládaného vynálezu se tudíž týká v podstatě čistého polypeptidu majícího sekvenci č. 2 nebo polypeptidu majícího sekvenci č. 2, ale postrádajícího signální peptid (tj. aminokyseliny 22 až 437 ze sekvence č.
2) . K dalším provedením vynálezu patří polypeptidy obsahující aminokyseliny 1 až 409, 22 až 409, 1 až 401 nebo 22 až 401 ze sekvence č. 2 (což jsou pravděpodobně aktivní úseky proteinu).
S ohledem na biologickou aktivitu je polypeptid podle předkládaného vynálezu výhodně glykosylován; nejvýhodněji je • · · · · · · · • · · · · · · · · ···· · ·· ·· ·· ····
N-glykosylovaný. Může být glykosylován na alespoň jedné z aminokyselin Asn-46, Asn-189 a Asn-382 polypeptidů PRV-1 (čísla aminokyselina odpovídají číslování v sekvenci č. 2) .
Vynález se také týká fragmentů polypeptidů podle předkládaného vynálezu, které jsou N-glykosylovány. Fragmenty jsou dlouhé alespoň 50 aminokyselin, výhodně alespoň 100 aminokyselin a nejvýhodněji alespoň 150 aminokyselin. V jiném provedení vynálezu je polypeptid O-glykosylován.
Odborníkovi je zřejmé, že určité aminokyseliny mohou být nahrazeny jinými aminokyselinami, aniž by byla poškozena biologická aktivita proteinu. Takové modifikované formy polypeptidů podle předkládaného vynálezu jsou také předmětem předkládaného vynálezu (jde o varianty). Náhrady aminokyselin v tomto případě jsou takové náhrady, které nemají negativní účinek na biologickou aktivitu proteinu. Odborník snadno využije známá pravidla pro výběr aminokyselin, které se nahradí.
V závislosti na způsobu přípravy může polypeptid PRV-1 např. obsahovat také glykosylfosfatidylinositolovou (GPI) kotvu. Ta je pak navázána na aminokyseliny odpovídající aminokyselinám 407 až 409 v sekvence id. č. 2. GPI kotva slouží k ukotvení proteinu prostřednictvím lipidů na vnější straně buněčné membrány. Často však bylo pozorováno, že i proteiny navázané prostřednictvím GPI (GPI-vázané proteiny) jsou uvolňovány do média, avšak pro tento jev nebylo dosud předloženo žádné vysvětlení. Tento jev se nazývá odlupování (shedding). Dosud nebylo objasněno, zda se jedná o specifický proces, tj. zda jsou proteiny odštěpovány z membrány řízeným způsobem pomocí enzymu, nebo zda se jedná o nespecifickou ztrátu kotvy.
Je tudíž velmi pravděpodobné, že PRV-1 se bude vyskytovat jak na buněčné membráně, tak i extracelulárně (mimo • · · · • •ftft ·· · · · · · * • · · · · ···· · • · · · · · ··· ···· · ·· ·· ·· ···· buňku). Secernovaná forma, která není vázaná na membránu, je pravděpodobně důležitější pro působení peptidu jakožto růstového faktoru a růstového inhibitoru, neboť tato forma je schopná difúze a tak může zasahovat ostatní buňky.
Odborníkovi je zřejmé, že může ovlivnit připojení proteinu k buněčné membráně právě manipulací s C-koncovými aminokyselinami. To se zejména týká přípravy definovaných konstruktů DNA, které jsou určeny pro expresi polypeptidu PRV-1 nebo jeho fragmentů. Kodony kódující tyto aminokyseliny mohou být mutovány nebo deletovány.
Gen kóduje povrchový receptor z rodiny uPAR/Ly6. Tato receptorová rodina přenáší mitogenní signály, tj. signály stimulující dělení buněk. Předpokládá se proto, že nadměrná exprese genu PRV-1, kromě jiného, v buňkách kostní dřeně u pacientů s p. vera, přispívá k nadměrné proliferaci (hyperproliferaci) těchto buněk.
Bylo zjištěno, že PRV-1 není exprimován na granulocytech zdravých jedinců nebo u pacientů trpících jiným myeloproliferativním onemocněním jako je např. chronická granulocytární leukémie, akutní granulocytární leukémie, esenciální trombocytóza nebo sekundární erytrocytóza.
Aby bylo možné polypeptid kódovaný genem PRV-1 použít pro analytické a detekční metody, je pohotově připravován pomocí rekombinantní DNA, přičemž výhodně rekombinantní DNA obsahuje nukleotidovou sekvenci id. č. 1 nebo alespoň kódující úsek genu PRV-1, tzn. nukleotidy 36 až 1346 ze sekvence id. č. 1, nebo v jiném případě alespoň nukleotidy 39 až 1262 nebo 39 až 1238, funkčně spojené s promotorem. Avšak rekombinantní DNA může také obsahovat jen fragment sekvence č. 1.
Vynález se dále týká vektoru obsahujícího rekombinantní DNA pro polypeptid PRV-1, nebo jeho fragment, ·»· · • · a hostitelské buňky, která je transfekovaná nebo transformovaná tímto vektorem. Hostitelské buňky jsou prokaryotické buňky, jako např. baktérie jako je E. coli. Avšak v takovém případě polypeptidy, které jsou exprimovány, nejsou glykosylovány. Výhodné jsou proto eukaryotické hostitelské buňky, které jsou schopny posttranslačnš glykosylovat exprimovaný protein a případně ho modifikovat i jiným způsobem. K příkladům eukaryotických hostitelských buněk patří hmyzí buňky, jako např. Sf9 buňky, pro expresi, ke které dochází po infekci rekombinantními bakuloviry, a savčí buňky, jako např. 293 buňky, COS buňky, CHO buňky a HeLa buňky. Tyto příklad však rozsah vynálezu nijak neomezují. Jako hostitelské buňky mohou být využity i kvasinkové buňky. Odborníkovi je zřejmé, že glykosylační profily se liší v závislosti na typu hostitelských buněk. Tudíž biologická aktivita výsledného produktu je také různá. Zvláště výhodné jsou hostitelské buňky, které glykosylují exprimovaný produkt takovým způsobem, že je zachována biologická aktivita proteinu.
Další aspekt předkládaného vynálezu se týká způsobu přípravy polypeptidu podle předkládaného vynálezu. Tento způsob spočívá v tom, že DNA kódující vynálezu se exprimuje v hostitelské buňce, nebo buňky se pak užijí k následné izolaci polypeptidu v závislosti na tom, zda je exprimovaný polypeptid secernován hostitelskými buňkami do kultivačního média nebo zda zůstává v buňce. Pak se polypeptid podle předkládaného vynálezu koncentruje a/nebo purifikuje, a sice postupy, které jsou odborníkovi známy, např. chromatografickými metodami. Metody purifikace byly popsány např. v publikaci Scopes, R., Protein Purification: Principles and Practice (3rd edition), Springer Verlag (1994). Jedním výhodným provedením vynálezu je způsob, který obsahuje krok, kdy je glykosylovaný polypeptid polypeptid podle Kultivační médium *·· · • · · ♦ * · ···· ·· · · · · · · • · · · · · · · · ···· · ·· ·· ·· ···· koncentrován a/nebo purifikován. Tento krok může proběhnout před tím, než je polypeptid podle předkládaného v podstatě purifikován nebo po té, co již byl v podstatě purifikován.
V tomto druhém případě je glykosylovaná část purifikovaného polypeptidu separována a izolována. V nejvýhodnéjším provedení způsobu podle předkládaného vynálezu se specificky izoluje Nglykosylovaný polypeptid. V jiném provedení způsobu podle vynálezu se izoluje polypeptid, který je glykosylovaný na alespoň jedné z aminokyselin Asn-46, Asn-189 a Asn-382 ze sekvence č. 2.
Polypeptid PRV-1, který byl izolován z granulocytů nebo připraven rekombinantním způsobem může být využit jak pro diagnostiku polycythemia vera tak i při léčení této nemoci.
Jednou z terapeutických možností je tzv. antisense terapie. Při tomto léčení se využívá molekula antisense RNA, což je RNA, která je komplementární k PRV RNA. Jelikož PRV-1 RNA má na svém začátku sekvenci 5'AAAAGCAGAAAGAGATTACCAGCC-3' (sekvence id. č. 3), příslušná antisense RNA namířená proti této sekvenci by měla následující nukleotidovou sekvenci:
5'-GGCTGGTAATCTCTTTCTGCTTTT-3' (sekvence id. č. 4). Tato antisense RNA se vloží do vektoru a vnese do buněk s p. vera. Tato RNA se např. vnese transfekci, prostřednictvím vektoru pro transfekci, kdy vektor je výhodné konfigurován tak, aby vstupoval specificky do buněk s p. vera. Exprese antisense RNA vede k tomu, že PRV-1 mRNA již není nadále translatována do polypeptidu. Buňky, které byly léčeny tímto způsobem, pak nevytvářejí protein PRVÍ.
Vynález se také týká způsobu detekce p. vera, který spočívá v tom, že se detekuje polypeptid PRV-1 nebo jeho epitop, a stanoví se rozsah jeho exprese.
Nadměrná exprese (overexpression) tohoto receptorů na zralých buňkách mimo kostní dřeň, např. na granulocytech, ·· ··· · ·· • · a aa a a · a a aa aaa a · · • a a a a a aaa ···· a aa aa aa aeaa je silnou indikací přítomností nemoci p. vera. Tato nadměrná exprese se pohotově detekuje pomocí imunotestu s využitím protilátek, které jsou namířeny proti PRV-1 receptoru.
K vhodným testovacím metodám patří odborníkům známé varianty imunotestu, kde se užívají protilátky specifické pro polypeptid PRV-1 společně s dalšími značenými protilátkami, které jsou buďto imobilizované nebo jsou v roztoku.
Značení se provádí metodami, které jsou odborníkům známy, např. pomocí radioaktivních izotopů, s využitím fluorescence nebo luminescence, užitím enzymů, pomocí reakcí vytvářejících berevný produkt nebo užitím jiných skupin, které jsou vhodné pro detekci. Tyto varianty jsou odborníkům dobře známy a není třeba je zde podrobně vysvětlovat. Zvláště výhodný je pro potřeby podle předkládaného vynálezu test ELISA.
Protilátky, které jsou potřebné pro specifickou detekci PRV-1 receptoru mohou být připraveny způsoby, které jsou odborníkům známy. Jak monoklonální tak polyklonálni protilátky jsou vhodné při realizaci předkládaného vynálezu, přičemž výhodnější jsou monoklonální protilátky.
Pro přípravu protilátek mohou být užity také peptidy získané z proteinu. Podle předkládaného vynálezu bylo dosaženo úspěchu s peptidy majících sekvenci:
a) KVSDLPRQWTPKN (aminokyseliny 34 až 46) [sekvence id. č. 5], a
b) SAREKRDVQPPASQH (aminokyseliny 391 až 405) [sekvence id. č. 6] .
Polyklonálni protilátky se normálně připravují imunizací vhodného příjemce (např. králíka) polypeptidem PRV-1, který je v případě potřeby navázán imunologický nosič (adjuvans), a který vyvolá imunitní reakci. Monoklonální protilátky se připravují technikami hybridomů, které jsou toto ··· · • ·
odborníkům známy. Protilátky mohou být purifikovány pomocí afinitní purifikace. Příprava a purifikace protilátek byly publikacích, např. Harlow and Lané, v Antibodies: A Cold Spring Harbor monoklonální popsány v odborných Laboratory Manual,
Laboratory Press.
Navíc takové polyklonální nebo protilátky, které jsou namířeny proti PRV-1, mohou být využity i pro léčení nemoci.
V jiném provedení vynálezu může být PRV-1 receptor detekován pomocí metody RT-PCR. Při této metodě se nejdříve izoluje RNA z buněk nadměrně exprimujících PRV-1, což jsou zpravidla granulocyty. Reverzní transkripce se provádí způsobem, který je odborníkům znám, a sice užitím tzv. RT primerů. RT primer je výhodně primer, který má následující nukleotidovou sekvenci (sekvence id. č. 7) :
ATTAGGTTATGAGGTCAGAGGGAGGTT.
Tímto způsobem se PRV-1 RNA specificky převede na DNA. Tato DNA se pak amplifikuje v reakci PCR způsobem, který je odborníkům znám. Pro amplifikační cykly se výhodně použijí následující primery, a sice jako sense primer (sekvence id. č. 8) :
GCAGAAAGAGATTACCAGCCACAGACGG.
A jako antisense primer (sekvence id. č. 9) :
GAATCGTGGGGGTAATAGAGTTAGCAGG.
Odborník je schopen okamžitě a snadno užít sekvenci podle předkládaného vynálezu k tomu, aby nalezl sekvence pro jiné primery, které budou také vhodné k realizaci vynálezu.
Jelikož se jako výchozí materiál v tomto postupu užívá RNA, PCR signál je pozitivní pouze tehdy, když je gen PRV-1 exprimován. Jak bylo již vysvětleno výše, to je pouze v případě, že pacient trpí p. vera. PRV není exprimován «φ φφφφ φφ φφφφ φφ φφ φφ φ φφ φ φφφφ φφ φφφ φφ φ • · · φ φ φ φ φ φ φ φ φ φφφφ φφφ φφφφ φ φφ φφ φφ φφφφ v granulocytech zdravých jedinců. Tudíž nepřítomnost RT-PCR signálu nepřítomnost p. vera. Metoda RT-PCR se výhodně provádí užitím TaqMan® technologie. Kvantifikace vyžaduje užít k primerům navíc ještě sondu. Výhodná sekvence sondy je následující (sekvence id. č. 10:)
5’-TTCTTGTTGAACCACACCAGACAAATCGG-3'
Kvantitativní RT-PCR pro detekci transkriptu PRV-1 je proto také předmětem předkládaného vynálezu.
Jinou alternativou diagnostiky p. vera je využití metody přenosu a hybridizace (blotting), výhodně metody northern přenosu (Northern blotting). Při užití této metody se RNA izoluje z granulocytů a pak se vyšetřuje na expresi PRV-1 užitím přenosu, např. Northern přenosu. cDNA sekvence mající sekvenci id. č. 1 nebo segment z této sekvence se může užít jako sonda. K hybridizaci se sondou dojde pouze v takovém případě, kdy granulocyty pocházely z pacienta trpícího p. vera, neboť jen v takovém případě je v granulocytech nějaké exprese. Absence hybridizace indikuje, že jedinec, ze kterého pocházely testované granulocyty, nemá nemoc p. vera.
Pro hybridizaci Northern blotů je možné užít také fragmenty genu. Takové fragmenty jsou normálně delší než 100 baží, výhodně jsou delší než 300 baží. Alternativně se mohou připravit různé fragmenty genu, které se užijí jako sondy pro Northern blot, naštěpením genu pomocí restrikčních endonukleáz. Pokud fragmenty pocházejí z cDNA, pak jsou ve formě dvoj řetězce a pro hybridizaci musí být separovány na jednotlivé řetězce. K vhodným příkladům patří fragment BamHI-Pstl obsahující páry baží 420 až 831, nebo fragment Pstl-Pstl obsahující páry baží 831 až 1900.
PRV-1 mRNA, a tudíž i exprese PRV-1, se může detekovat v RT-PCR nejdříve reverzní transkripcí mRNA a pak amplifikací ·· ···· ·♦ ···· ·· ·· ·· · ·· · · · · • to · to · ·· · « · ···· ··· ···· · ·> ·· ·· ·««· cDNA, a amplifikovanou DNA pak detekovat sondou metodou hybridizace.
V případě pozitivní diagnózy je třeba nemoc léčit, neboť jinak vede během velmi krátké doby k úmrtí. Pro léčení je možné využít specifické protilátky, které jsou namířeny proti PRV-1, na které může být v případě potřeby navázána cytotoxická složka.
Vynález se dále týká léku, který kromě obvyklých excipientů obsahuje protilátky, které jsou namířeny proti receptoru PRV-1.
Jelikož je PRV-1 receptor nadměrně exprimován při p. vera, mnohé protilátky se naváží na povrch postižených granulocytů, když se dostanou do kontaktu s protilátkou anti-PRV-1. Navázání mnoha protilátek na tyto buňky stimuluje imunologické buňky k likvidaci těchto granulocytů. Takovým způsobem je tedy možné specificky eliminovat p. vera buňky.
Překvapivě bylo také zjištěno, že polypeptid PRV-1 vykazuje hematopoetickou aktivitu. Polypeptid PRV-1 je schopen stimulovat určité hematopoetické prekurzorové buňky k vytváření erytroidních kolonií. Je to zejména N-glykosylovaný polypeptid PRV-1, který projevuje tuto funkci. Polypeptidy podle předkládaného vynálezu, které jsou proto výhodné, jsou tudíž N-glykosylované polypeptidy PRV-1 jejich fragmenty, které vykazují aktivitu růstového faktoru.
Další aspekt předkládaného vynálezu se tudíž týká léku, který, kromě farmaceuticky tolerovaných excipientů, obsahuje polypeptid PRV-1 nebo jeho biologicky aktivní fragment. Polypeptid PRV-1 je výhodně glykosylovaný polypeptid PRV-1, výhodněji N-glykosylovaný polypeptid PRV-1 nebo jeho biologicky aktivní fragment. Vynález se týká také léčiv, která obsahují alespoň jeden polynukleotid podle předkládaného vynálezu.
φφ φ· φ » 9 · » » φ * · » φφ φφφ φφ φ • φ «φφφ φφφ ···· φ φφ φφ φφ φφφφ *» φφφφ φφ φφφφ
Předkládaný vynález se dále týká použití polypeptidu PRV-1, nebo jeho biologicky aktivního fragmentu nebo jeho biologicky aktivní varianty jakožto růstového faktoru in vivo a ex vivo. Polypeptid PRV-1, nebo jeho biologicky aktivní fragment nebo jeho biologicky aktivní varianta, může být využit při léčení všech typů pancytopenií a pancytopatií kostní dřeně i krevního oběhu (změna buněčných složek periferní krve a kostní dřeně). Polypeptidy podle předkládaného vynálezu se využijí např. při léčení anemií v případě selhání ledvin, chemoterapie nebo celotělového ozařování, při léčení neutropenií trombocytopenií v průběhu chemoterapie nebo celotělového ozařování, pro ex vivo ošetření buněk periferní krve nebo kmenových buněk kostní dřeně pro jejich expanzi (multiplikaci) a retransfúzi pacientovi, a také při léčení sepse, syndromu systémové zánětlivé reakce (SIRS) nebo lokálních zánětlivých reakcí. Polypeptidy podle předkládaného vynálezu, nebo léčiva, která je obsahují, mohou být podávány různými způsoby. K vhodným způsobům podávání patří např. intravenózní, intramuskulární, subkutánní, intraperitoneální, perorální, transdermální a transmukozální.
Polynukleotidy podle předkládaného vynálezu mohou být použity také při léčení pancytopenií a pancytopatií. V takovém případě je cílem exprimovat polypeptid PRV-1 nebo jeho funkční fragment v buňkách postiženého pacienta. V této souvislosti se především a nej častěji užívají metody genové terapie. Buňky mohou být izolovány z pacienta a transfekovány polynukleotidem podle předkládaného vynálezu (ex vivo manipulace), a pak zase vráceny pacientovi. Lze si také představit metodu, kdy polynukleotidy podle předkládaného vynálezu budou vneseny do cílových buněk prostřednictvím virového přenosu. Exprese vložených nukleových kyselin pak povede k hematopoetické aktivitě.
φ» φφφφ
Φ * * · · • 9 « ·
Φ Φ Φ Φ Φ Φ Φ Φ Φ
ΦΦΦΦ * Φ*
Φ· 19*1
9Φ *9 Φ 9 9 ♦ · φ φ φ » φφφ φ φ • φφφ Μ ΦΦ ΦΦΦΦ
Překvapivě bylo také zjištěno, že při vyšších koncentracích polypeptid PRV-1 má inhibiční účinek na růst buněk. Tak např. bylo pozorováno, že přidání zvýšeného množství proteinu PRV-1 skutečně úplně zastavilo vytváření kolonií erytroidů a granulocytů/monocytů. Tento účinek připomíná působení interferonu-α, který se, kromě jiného, terapeuticky využívá při léčení chronické myeloidní leukémie (CML) a p. vera. Endogenní inhibiční látka má velkou výhodu ve srovnání s chemickými cytostatiky, jako je např. hydroxymočovina, která byla užívána, dokud nebyl dostupný interferon-α, a do jisté míry se užívá dodnes. Nevýhodou interferonu-α je to, že tato účinná látka má velmi silné vedlejší účinky. Pacienti se cítí, jako-by měli silnou chřipku. Předkládaný vynález tak poskytuje látku inhibující hematopoezu, jejíž inhibiční účinek je koncentračně závislý.
Další aspekt předkládaného vynálezu se proto týká použití polypeptidu PRV-1, jak je popsán v této přihlášce, pro inhibici růstu buněk, zejména použití jakožto cytostatika. Výhodně se polypeptid podle vynálezu užívá pro inhibici růstu hematopoetických buněk. Vynález se také týká použití polypeptidu podle předkládaného vynálezu pro výrobu léků k léčení proliferativních nemocí. K těmto nemocen patří zejména myeloproliferativní nemoci, p. vera, esenciální trombocytémie, myelofibróza, CML a také leukémie, lymfomy a solidní nádory.
Další aspekt předkládaného vynálezu se týká použití polynukleotidu, jak je popsán v této přihlášce, jeho biologicky aktivního fragmentu nebo jeho biologicky aktivní varianty, pro inhibici růstu buněk. Polynukleotid může být vložen do vhodného vektoru a transfekován do vhodné cílové buňky. Po té, co byl polypeptid PRV-1, nebo jeho biologicky aktivní fragment nebo jeho biologicky aktivní varianta, exprimován ve vhodné koncentraci, dostaví se účinek inhibující růst. Stejně tak může být polynukleotid vložen do virového vektoru, kterým jsou pak infikovány vhodné cílové buňky, což vede k expresi PRV-1. Vynález se také týká použití polynukleotidu podle vynálezu pro výrobu léku léků k léčení proliferativních nemocí, jako jsou např. myeloproliferativní nemoci, p. vera, esenciální trombocytémie, myelofibróza, CML a také leukémie, lymfomy a solidní nádory.
Vynález se dále týká soupravy (kitu) pro detekci buďto polycythemia vera nebo onemocnění hematopoetického systému.
e—
Tyto soupravy podle předkládaného vynálezu obsahují polynukleotid podle vynálezu a/nebo polypeptid podle vynálezu a/nebo jednu nebo více protilátek podle vynálezu. Tyto soupravy navíc mohou obsahovat nádobu nebo přípravky vhodné pro provádění detekčních reakcí. K příkladům takových přípravků patří pufrovací roztoky, reagencie na blokování membrán, hybridizační roztoky, sekundární protilátky, roztoky substrátu pro detekční reakce atd. Souprava podle vynálezu se výhodně užívá k provádění reakcí typu PCR, RT-PCR, Northern přenos (Northern blot), Southern přenos (Southern blot), Western přenos (Western blot), ELISA, RIA nebo podobných reakcí.
Následující příklady slouží k podrobnějšímu vysvětlení předkládaného vynálezu.
Příklady provedeni vynálezu
Příklad 1
Charakterizace genu PRV
Pro charakterizaci genu PRV byly provedeny následující experimenty:
Pro izolaci granulocytů z uskladněné krve nebo z čerstvé krve odebrané pacientům s p. vera byl užit následující postup:
- ke krvi byl přidán shodný objem 3% roztoku dextranu v 0,9% NaCl a směs byla ponechána stát při teplotě místnosti (RT) po 20 minut,
- směs se rozdělila na dvě fáze. Horní, slabě zbarvená fáze byla odstraněna centrifugací po 10 minut při 1800 g a při teplotě místnosti, supernatant byl odstraněn a buněčný pelet byl resuspendován ve shodném objemu 0,9% NaCl,
- v každém případě bylo 35 ml buněk v NaCl navrstveno na 15 ml Ficoll-Hypaque,
- buňky na vrstvě Ficoll-Hypaque pak byly centrifugovány po 60 minut při 1800 g a při teplotě místnosti, bez brzdění,
- vzniklo tak rozvrstvení na buněčný pelet a dvě vrstvy s mezifází, vrstvy a mezifáze byly odsáty buněčný pelet byl resuspendován po 30 vteřin v 10 ml ledového 0,2% NaCl, a 10 ml ledového 1,6% NaCl bylo přidáno ihned po 30 vteřinách,
- buňky byly centrifugovány po 10 minut při 1800 g a při teplotě místnosti, pak byly promyty jednou v 10 ml PBS a opět centrifugovány, buněčný pelet obsahoval z 95 až 99 % čisté granulocyty,
RNA byla izolována z těchto buněk standardními metodami,
- 10 mg této RNA bylo pak vyšetřeno na expresi PRV-1 metodou Northern přenosu. Celá cDNA sekvence uvedená zde jako sekvence id. č. 1 byla užita jako sonda.
Tento experiment byl proveden se vzorky 39 pacientů s p. vera a 29 kontrolními vzorky z uskladněné krve. Bylo zjištěno, že sonda PRV-1 hybridizovala silně v případě vzorků z pacientů s p. vera. Žádná hybridizace nebyla pozorována u kontrolních vzorků ze zdravých jedinců.
Příklad 2
PRV-1 projevuje aktivitu růstového faktoru
Z pregnantních myší byla 13. Den po fertilizaci vyjmuta embrya. Z nich byla odebrána fetální játra. Buňky v nich obsažené byly obarveny pomocí protilátek a pomocí chromatografie na koloně obohaceny o buňky konkrétního buněčného typu a naopak zbaveny buněk jiných typů. Tak byla získána směs obohacená o určité hematopoetické prekurzorové buňky (erytroidní progenitorová/prekurzorová buňka vytvářející kolonie, CFU-E). Takže zatímco CFU-E představují přibližně 2 % fetálních jater, obohacená směs obsahovala 30 až 40 % buněk CFU-E.
Buňky CFU-E byly transfekovány pomocí retrovirů. Sbalovací buněčná linie, označovaná 293-T, byla transfekována 48 předem. Buňky 293-T jsou buňky zavedené buněčné linie humánních embryonálních ledvin. Buňky 293-T jsou stabilně transfekovány několika geny z retrovirů. Jestliže se nyní tyto • ·· · retrovirus, a °C v přítomnosti fetální jaterní buňky 293-T transfekují dvěma plasmidy, označenými pOS a pKAT, pak buňky 293-T produkují retrovirus, který je schopen infikovat buňky myších fetálních jater. Když jsou buňky 293-T transfekovány prázdnými vektory pOS a pKAT, je produkován retrovirus divokého typu, který exprimuje pouze retrovirové proteiny. Na druhé straně, klonování humánního genu, jako je např. PRV-1, do vektoru pOS vede po infekci buňky retrovirem k produkci retroviru, který exprimuje tento protein. Buňky 293-T secernují retrovirus do kultivačního média.
Po dvou dnech se buněčné kultivační médium z transfekovaných buněk 293-T obsahující retrovirus sklidí a přefiltruje přes 0,45μπι filtr. Pro transfekci fetálních jaterních buněk se tyto buňky smíchají s přefiltrovaným buněčným kultivačním médiem obsahujícím centrifugují po 2 hodiny při 1800 rpm a 20 přidaného činidla Polybren. Transfekované buňky se pak kultivují v médiu (Methocult, od firmy Cell Systems) obsahujícím, kromě obvyklých solí a aminokyselin, fetální telecí sérum, 0,0001 až 0,4 IU erytropoetinu (EPO)/ml a methylcelulózu (0,8%). Buňky CFU-E vyžadují EPO, aby vytvářely hematopoetické kolonie. Methylcelulóza ztužuje médium do gelovité podoby, a tím fixuje jednotlivé buňky v tomto gelu, takže se na rozdíl od tekutého média nemohou pohybovat. Lze tudíž pozorovat, zda se z jednotlivých buněk vytvářejí nebo nevytvářejí hematopoetické kolonie. CFU-E tvoří erytroidní kolonie, tj. kolonie obsahující červené krvinky a jejich prekurzorové buňky.
Po třech dnech se spočítají hematopoetické kolonie, které se vytvořily. Přitom se porovnávají různé směsi. Všechny směsi nebyly vyšetřovány ve všech experimentech, směsi 1 až 3 jsou velmi podobné kontroly a každá z nich byla individuálně porovnána se směsí 4.
0000
9 0 00 0
Směs 1: Buňky, které nebyly transfekovány retrovirem;
Směs 2: Buňky, které byly transfekovány prázdným vektorem pOS; Směs 3: Buňky, které byly transfekovány genem GFP pro zelený fluoreskující protein (green fluorescent protein), t j.
proteinem, který není hematopoeticky účinný,
Směs 4: Buňky, které byly transfekovány pOSPRV-1 (vektor + gen podle předkládaného vynálezu).
Tabulka 1: shrnuje výsledky získané ve třech experimentech, které byly provedeny, jak je výše popsáno. Čísla ukazují pro každý případ počet vytvořených kolonií.
| Směs 1 | Směs 2 | Směs 3 | Směs 4 | |
| Netransfekované | Prázdný vektor (pOS) | GFP (pOS-GFP) | PRV-1 (pOS-PRV-1) | |
| Experiment 1 | 116 | 156 | 80 | 326 |
| Experiment 2 | 271 | 273 | 410 | |
| Experiment 3 | 120 | 131 | 291 |
Tento experiment ukázal, že buňky CFU-E, které byly transfekovány PRV-1 vytvářejí mnohem více kolonií (až třikrát více) než různé kontrolní buňky. Výsledek ukazuje na to, že PRV-1 je růstový faktor pro CFU-E.
Příklad 3
Rozpustnost růstového faktoru PRV-1
Další experiment byl proveden proto, aby se zjistilo, zda je PRV-1 rozpustný růstový faktor nebo zda je nutný kontakt mezi buňkami (kontakt buňka-buňka). Ve sbalovací to ·· · • · * ···· · buněčné linii 2 93-T není po transfekci vektory pOS a pKAT produkován jen retrovirus. Navíc buňky 293-T také syntetizují protein kódovaný genem klonovaným do pOS, t j. v daném případě genem PRV-1. Jestliže je genový produkt rozpustný protein, je secernován do média, ve kterém je sbalovací buněčná linie 293T. jestliže jsou buňky 293-T transfekovány jen vektorem pOS bez vektoru pKAT, nevytváří se žádný retrovirus. Buněčné kultivační médium pak obsahuje jen rozpustný protein produkovaný buňkami. Médium pocházející z kultivace buněk transfekovaných pOS-PRV-1, neobsahující retrovirus, se smíchá s CFU-E a směs je vyseta methylcelulózové médium, pak se spočítají vzniklé kolonie. V tomto pokusu byly získány následující výsledky:
Tabulka 2: Rozpustnost PRV-1. Uváděná čísla představují počet kolonií.
| Směs 1 | Směs 2 | Směs 3 | Směs 4 | |
| Netransfekované | Prázdný vektor (pOS) | GFP (pOS-GFP) | PRV-1 (pOS-PRV-l) | |
| Experiment 4 | 137 | 187 | 557 |
V tomto pokusu buňky CFU-E, které byly ošetřeny médiem obsahujícím PRV-1 vytvářely mnohem více hematopoetických kolonií než kontrolní buňky. Z tohoto výsledku lze usoudit, že PRV-1 je rozpustný růstový faktor.
9 999 9 ·· 9 99 9 9 9 9 9
9 9 9 * 9 9 9 9 9 • 9 999 99 9
9 9 9
9999 9 99
Příklad 4
PRV-1 má také inhibiční, cytostatický účinek
Experiment byl proveden s buňkami periferní krve. Jelikož u zdravých jedinců malý počet prekurzorových buněk cirkuluje také v periferní krvi, je možné vykultivovat ve vhodném médiu (s methylcelulózou) hematopoetické kolonie z buněk periferní krve. Zdravým dárcům bylo odebráno 40 ml krve z periferní žíly (přičemž byl užit heparin nebo EDTA jako antikoagulační činidlo) . Ke krvi bylo přidáno 15 ml Ficoll/Hypaque a tato směs byla centrifugována při 1600 ot./min (rpm) po 40 minut bez brždění. Výsledkem byl hustotní gradient, který frakcionoval krev na buněčné složky. Po centrifugací se v mezifázi mezi sérem a Ficollem nacházejí buňky zvané mononukleární buňky, které zahrnují i kmenové buňky. Tato mezifáze byla odebrána a promyta v PBS (isotonický roztok soli). Tak byly získány purifikované mononukleární buňky, z nichž přibližně 0,1 % tvoří hematopoetické kmenové buňky.
Mononukleární buňky byly přeneseny do zvláště bohatého média (IMDM) obsahujícího přídavek 3 % FCS (fatálního telecího séra). Toto médium 3% FCS/IMDM pak bylo modifikováno, tj. bylo užito s přídavkem PRV-1 nebo bez.
Mononukleární buňky v IMDM byly přidány, v hustotě 7 x 105 buněk/ml, ke komerčně dostupnému médiu od firmy Stem Cells Technologies (Methocult) , obsahujícímu IMDM a 30% FCS, 1% BSA (hovězí sérový albumin), merkaptoethanol, 2 mM L-glutamin, 3 IU EPO (erytropoetin)/ml a 1,0% methylcelulózu. Buňky v tomto médiu rostly 14 dní. Z několika kmenových buněk přítomných v této směsi se vyvinuly hematopoetické kolonie.
·· «·
Obvykle se na každých 7 χ 105 buněk vyvinulo 100 až 200 hematopoetických kolonií.
Byla zkonstruována také buněčná linie exprimující velmi vysoké množství PRV-1. PRV-1 produkovaný těmito buňkami byl změněn tak, že již neobsahoval lipidovou kotvu. Expresní produkt sestával z aminokyselin 1 až 401 ze sekvence id. č. 2, tedy aminokyseliny 402 až 437 chyběly. Takto změněný PRV-1 proto není, na rozdíl od PRV-1 divokého typu, inkorporován do buněčné membrány pomocí lipidové kotvy, ale je plně secernován z buňky. Stejně jako v příkladu 3 buněčná linie sestával z buněk 293, které neprodukují žádný retrovirus, ale exprimují protein (PRV-1).
Pro test na hematopoetické kolonie byly přeneseny mononukleární krevní buňky buďto do média IMDM, které bylo inkubováno 48 hodin s netransfekovanými buňkami (293), nebo do média, které bylo inkubováno 48 hodin s buňkami, které exprimovaly změněný PRV-1 (označeny „293-GPI-less-PRV-l) . Schopnost těchto buněk tvořit hematopoetické kolonie pak byla zkoumána. Počet kolonií erytroidních (červených) a myeloidních (bílých) krevních buněk byl stanoven po 14 dnech. Experiment byl opakován třikrát a byl také proveden v různé dny a s různými dárci krve. Opakování byla také vyhodnocena v rámci tohoto pokusu. Byly získány následující výsledky:
Experiment 1
| supernatant | Dárce 1 | Dárce 2 | ||
| Červené kolonie | Bílé kolonie | Červené kolonie | Bílé kolonie | |
| 293 | 248/221 | 70/114 | 127/161 | 25/66 |
| 293-GPI- less-PRV-1 | 7/3 | 0/0 | 31/19 | 0/0 |
φ φ ·
Experiment 2
| supernatant | Dárce 1 | Dárce | 2 | |
| Červené kolonie | Bílé kolonie | Červené kolonie | Bílé kolonie | |
| 293 | 99/91 | 20/19 | 49/33 | 8/1 |
| 293-GPI- less-PRV-1 | 0/0 | 0/0 | 4/0 | 0/0 |
Experiment 3
| supernatant | Dárce | 1 | Dárce 2 | |
| Červené kolonie | Bílé kolonie | Červené kolonie | Bílé kolonie | |
| 293 | 107/207 | 22/30 | 24/32 | 5/8 |
| 293-GPI- less-PRV-1 | 4/3 | 0/6 | 0/1 | 3/0 |
Z těchto dar lze uzavřít, že dávka PRV-1 vyšší, než která byla užita v příkladu 3, projevuje cytostatický účinek.
Příklad 5
Růstový faktor PRV-1 je N-glykosylován
Z pacientů trpících p. vera byly izolovány granulocyty, a z těchto buněk byly připraveny proteinové extrakty standardními postupy. Proteinové extrakty byly dále zpracovány podle protokolu pro soupravu N-Glycosidase F Deglycosylation Kit od firmy Boehringer Mannheim. To znamená, že denaturační pufr ze soupravy byl přidán k proteinovým extraktům a směsi pak byly zahřátý na 95 °C na 3 minuty, a pak bylo dále užito buďto reakčního pufru nebo reakčního
44·· 44 ··<· 44 4»
4 4 4 4 4*44 · 444 44 4 « · 4 4 · 4 444 ••44 4 44 44 44 4444 pufru s N-glykosidázou. Každá směs byla inkubována přes noc ve 37 °C a proteiny pak byly analyzovány PAGE gelové elektroforéze následované Western blotem. protein PRV-1 byl detekován pomocí protilátky namířené proti proteinu majícímu aminokyselinovou sekvenci id. č. 5. Výsledky ukázaly, že zatímco protein PRV-1 purifikovaný z granulocytů má velikost 60 až 65 kDa, po naštšpení N-glykosidázou má velikost jen 40 kDa. To jasně dokazuje, že PRV-1 je glykosylován na asparaginovém zbytku (asparagin = N).
·9 *
SEZNAM SEKVENCI
| <210> | 1 |
| <211> | 1600 |
| <212> | DNA |
| <213> | homo |
| <220> | |
| <223> | |
| <400> | 1 |
| aaaagcagaa agagattacc agccacagac gggtcatgag cgcggtatta ctgctggccc | 60 |
| tcctggggtt catcctccca ctgccaggag tgcaggcgct gctctgccag tttgggacag | 120 |
| ttcagcatgt gtggaaggtg tccgacctgc cccggcaatg gacccctaag aacaccagct | 180 |
| gcgacagcgg cttggggtgc caggacacgt tgatgctcat tgagagcgga ccccaagtga | 240 |
| gcctggtgct ctccaagggc tgcacggagg ccaaggacca ggagccccgc gtcactgagc | 300 |
| accggatggg ccccggcctc tccctgatct cctacacctt cgtgtgccgc caggaggact | 360 |
| tctgcaacaa cctcgttaac tccctcccgc tttgggcccc acagccccca gcagacccag | 420 |
| gatccttgag gtgcccagtc tgcttgtcta tggaaggctg tctggagggg acaacagaag | 480 |
| agatctgccc caaggggacc acacactgtt atgatggcct cctcaggctc aggggaggag | 540 |
| gcatcttctc caatctgaga gtccagggat gcatgcccca gccaggttgc aacctgctca | 600 |
| atgggacaca ggaaattggg cccgtgggta tgactgagaa ctgcaatagg aaagattttc | 660 |
| tgacctgtca tcgggggacc accattatga cacacggaaa cttggctcaa gaacccactg | 720 |
| attggaccac atcgaatacc gagatgtgcg aggtggggca ggtgtgtcag gagacgctg. | 80 |
| tgctcataga tgtaggactc acatcaaccc tggtggggac aaaaggctgc agcactgttg | 840 |
ft »ft ftft ft · ftftftft • •ftft
| gggctcaaaa | ttcccagaag | accaccatcc | actcagcccc | tcctggggtg | cttgtggcct | 900 |
| cctataccca | cttctgctcc | tcggacctgt | gcaatagtgc | cagcagcagc | agcgttctgc | 960 |
| tgaactccct | ccctcctcaa | gctgcccctg | tcccaggaga | ccggcagtgt | cctacctgtg | 1020 |
| tgcagcccct | tggaacctgt | tcaagtggct | ccccccgaat | gacctgcccc | aggggcgcca | 1080 |
| ctcattgtta | tgatgggtac | attcatctct | caggaggtgg | gctgtccacc | aaaatgagca | 1140 |
| ttcagggctg | cgtggcccaa | ccttccagct | tcttgttgaa | ccacaccaga | caaatcggga | 1200 |
| tcttctctgc | gcgtgagaag | cgtgatgtgc | agcctcctgc | ctctcagcat | gagggaggtg | 1260 |
| gggctgaggjg | cctggagtct | ctcacttggg | gggtggggct | ggcactggcc | ccagcgctgt | 1320 |
| ggtggggagt | ggtttgccct | tcctgctaac | tctattaccc | ccacgattct | tcaccgctgc | 1380 |
| tgaccaccca | cactcaacct | ccctctgacc | tcataaccta | atggccttgg | acaccagatt | 1440 |
| ctttcccatt | ctgtccatga | atcatcttcc | ccacacacaa | tcattcatat | ctactcacct | 1500 |
| aacagcaaca | ctggggagag | cctggagcat | ccggacttgc | cctatgggag | aggggacgct | 1560 |
| ggaggagtgg | ctgcatgtat | ctgataatac | agaccctgtc | 1600 |
| <2 | 10> | 2 |
| <2 | 11> | 437 |
| <2 | 12> | PRT . |
| <2 | 13> | homo |
| <4 | 00> | 2 |
| Met 1 | Ser | Ala | Val | Leu 5 | Leu | Leu Ala | Leu Leu Gly Phe 10 | Ile | Leu | Pro 15 | Leu | ||||
| Pro | Gly | Val | Gin | Ala | Leu | Leu | Cys | Gin | Phe | Gly | Thr | Val | Gin | His | Val |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Trp | Lys | Val | Ser | Asp | Leu | Pro | Arg | Gin | Trp | Thr | Pro | Lys | Asn | Thr | Ser |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Cys | Asp | Ser | Gly | Leu | Gly | Cys | Gin | Asp | Thr | Leu | Met | Leu | Ile | Glu | Ser |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Gly | Pro | Gin | Val | Ser | Leu | Val | Leu | Ser | Lys | Gly | Cys | Thr | Glu | Ala | Lys |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Asp | Gin | Glu | Pro | Arg | Val | Thr | Glu | His | Arg | Met | Gly | Pro | Gly | Leu | Ser |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Leu | Ile | Ser | Tyr | Thr | Phe | Val | Cys | Arg | Gin | Glu | Asp | Phe | Cys | Asn | Asn |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Leu | Val | Asn | Ser | Leu | Pro | Leu | Trp | Ala | Pro | Gin | Pro | Pro | Ala | Asp | Pro |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Gly | Ser | Leu | Arg | cys | Pro | Val | Cys | Leu | Ser | Met | Glu | Gly | Cys | Leu | Glu |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Gly | Thr | Thr | Glu | Glu | Ile | cys | Pro | Lys | Gl y | Thr | Thr | His | Cys | Tyr | Asp |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Gly | Leu | Leu | Arg | Leu | Arg | Gly | Gly | Gly | Ile | Phe | Ser | Asn | Leu | Arg | Val |
| 165 | 170 | 175 |
9 ·«·· ·· ·· • · 9 9 9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 · • · · » 9 9 ·· 9 9 ♦ · ··»·
| Gin | Gly | Cys | Met | Pro | Gin | Pro | Gly | Cys | Asn | Leu | Leu | Asn | Gly | Thr | Gin |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| Glu | Ile | Gly | Pro | Val | Gly | Met | Thr | Glu | Asn | Cys | Asn | Arg | Lys | Asp | Phe |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Leu | Thr | Cys | His | Arg | Gly | Thr | Thr | Ile | Met | Thr | His | Gly | Asn | Leu | Ala |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Gin | Glu | Pro | Thr | Asp | Trp | Thr | Thr | Ser | Asn | Thr | Glu | Met | Cys | Glu | Val |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| Gly | Gin | Val | Cys | Gin | Glu | Thr | Leu | Leu | Leu | Ile | Asp | Val | Gly | Leu | Thr |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| Ser | Thr | Leu | Val | Gly | Thr | Lys | Gly | Cys | Ser | Thr | Val | Gly | Ala | Gin | Asn |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| Ser | Gin | Lys | Thr | Thr | Ile | His | Ser | Ala | Pro | Pro | Gly | Val | Leu | Val | Ala |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||||
| Ser | Tyr | Thr | His | Phe | Cys | Ser | Ser | Asp | Leu | Cys | Asn | Ser | Ala | Ser | Ser |
| 290 | 295 | 300 | |||||||||||||
| Ser | Ser | Val | Leu | Leu | Asn | Ser | Leu | Pro | Pro | Gin | Ala | Ala | Pro | Val | Fro |
| 305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
| Gly | Asp | Arg | Gin | Cys | Pro | Thr | Cys | Val | Gin | Pro | Leu | Gly | Thr | Cys | Ser |
| 325 | 330 | 335 | |||||||||||||
| Ser | Gly | Ser | Pro | Arg | Met | Thr | Cys | Pro | Arg | Gly | Ala | Thr | His | Cys | Tyr |
| 340 | 345 | 350 | |||||||||||||
| Asp | Gly | Tyr | Ile | His | Leu | Ser | Gly | Gly | Gly | Leu | Ser | Thr | Lys | Met | Ser |
| 355 | 360 | 365 | |||||||||||||
| Ile | Gin | Gly | Cys | Val | Ala | Gin | Pro | Ser | Ser | Phe | Leu | Leu | Asn | His | Thr |
| 370 | 375 | 380 | |||||||||||||
| Arg | Gin | Ile | Gly | Ile | Phe | Ser | Ala | Arg | Glu | Lys | Arg | Asp | Val | Gin | Pro |
| 385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
| Pro | Ala | Ser | Gin | His | Glu | Gly | Gly | Gly | Ala | Glu | Gly | Leu | Glu | Ser | Leu |
| 405 | 410 | 415 | |||||||||||||
| Thr | Trp | Gly | Val | Gly | Leu | Ala | Leu | Ala | Fro | Ala | Leu | Trp | Trp | Gly | Val |
| 420 | 425 | 430 | |||||||||||||
| Val | Cys | Pro | Ser | Cys | |||||||||||
| 435 |
<210> 3 <21l> 24 <212> RHA <213> Umělá sekvence <220>
<223> 5'-konec sekvence PRV-1 <400> 3 aaaagcagaa agagattacc agcc 24 <210> 4 <211> 24 <212> RHA <213> Umělá sekvence <220>
<223> antisense molekula ·· ··· · •· ···· <400> 4 ggctggtaat ctctttctgc tttt <210> 5 <211> 13 <212> PRT <213> Umělá sekvence <220>
<223> aminokyseliny 34 až 46 z PRV-1 <400> 5
Lys Val Ser Asp Leu Pro Arg Gin Trp Thr Pro Lys Asn 15 10 <210> 6 <211> 15 <212> PRT <213> Umělá sekvence <220>
<223> aminokyseliny 391 až 405 z PRV-1 <400> 6
Ser Ala Arg Glu Lys Arg Asp Val Gin Pro Pro Ala Ser Gin His 15 10 15 <210> 7 <211> 27 <212> DNA <213> Umělá sekvence <220>
<223> RT-primer <400> 7 attaggttat gaggtcagag ggaggtt <210> 8 <211> 28 <212> DNA <213> Umělá sekvence <220>
<223> sense primer • to ···· • · ·· to · • · tototo · ·· ·· • ·· · ···· • · · » ·· ♦ • · · · to to to · to • ···· toto· <400> 8 gcagaaagag attaccagcc acagacgg <210> 9 <211> 28 <212> DMA <213> Umělá sekvence <220>
<223> antisense primer <400> 9 gaatcgtggg ggtaatagag ttagcagg <210> 10 <211> 29 <212> DMA <213> Umělá sekvence <220>
<223> sonda <400> 10 ttcttgttga accacaccag acaaatcgg ·· »·· ·
0· *·
9 9 4 9 4 9
9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 99 99 >» 0«0·
Claims (11)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Použití N-glykosylovaného polypeptidu obsahujícího v podstatě jednu z následujících aminokyselinových sekvencí:
aminokyseliny 1 až 437 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 1 až 409 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 1 až 401 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 437 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 409 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 401 ze sekvence id. č. 2; nebo jeho fragmentu s nejméně 50 aminokyselinami, nebo polypeptidu obsahujícího v podstatě jednu z následujících aminokyselinových sekvencí:aminokyseliny 1 až 437 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 1 až 409 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 1 až 401 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 437 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 409 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 401 ze sekvence id. č. 2; nebo jeho biologicky aktivního fragmentu nebo jeho biologicky aktivní varianty, pro výrobu léku působícího jako růstový faktor. - 2. Použití N-glykosylovaného polypeptidu obsahujícího v podstatě jednu z následujících aminokyselinových sekvencí:
aminokyseliny 1 až 437 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 1 až 409 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 1 až 401 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 437 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 409 ze sekvence id. č. 2;• ti ti* ·· ti · · · ti · · ti ·· tititi titi · * · tititi titititi · • · tititi* ti · ti ti· *et»ti * ti* * aminokyseliny 22 až 401 ze sekvence id. č. 2; nebo jeho fragmentu s nejméně 50 aminokyselinami, nebo polypeptidu obsahujícího v podstatě jednu z následujících aminokyselinových sekvencí:aminokyseliny 1 až 437 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 1 až 409 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 1 až 401 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 437 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 409 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 401 ze sekvence id. č. 2; nebo jeho biologicky aktivního fragmentu nebo jeho biologicky aktivní varianty, pro výrobu léku k léčení pancytopenií a pancytopatií v kostní dřeni a v krevním oběhu. - 3. Použití polynukleotidu obsahujícího v podstatě jednu z následujících nukleotidových sekvencí:nukleotidy 1 až 1600 ze sekvence id. č. 1;
nukleotidy 36 až 1346 ze sekvence id. č. 1; nukleotidy 36 až 1262 ze sekvence id. č. 1; nukleotidy 36 až 1238 ze sekvence id. č. -1; nukleotidy 39 až 1346 ze sekvence id. č. l; nukleotidy 39 až 1262 ze sekvence id. č. 1; nukleotidy 39 až 1238 ze sekvence id. č. 1; nukleotidy 99 až 1346 ze sekvence id. č. 1; nukleotidy 99 až 1262 ze sekvence id. č. 1; nukleotidy 99 až 1238 ze sekvence id. č. 1; nebo jeho fragmentu nebo jeho varianty pro výrobu léku k léčení pancytopenií a pancytopatií v kostní dřeni a v krevním oběhu.• 4 4· • · « · ···· • 4 · • 4 · 4 • 4 4 4 - 4« 444 · · • 44 •4 44444. Použití N-glykosylovaného polypeptidu obsahujícího v podstatě jednu z následujících aminokyselinových sekvencí:
aminokyseliny 1 až 437 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 1 až 409 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 1 až 401 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 437 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 409 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 401 ze sekvence id. č. 2; nebo jeho fragmentu s nejméně 50 aminokyselinami, nebo polypeptidu obsahujícího v podstatě jednu z následujících aminokyselinových sekvencí:aminokyseliny 1 až 437 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 1 až 409 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 1 až 401 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 437 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 409 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 401 ze sekvence id. č. 2; nebo jeho biologicky aktivního fragmentu nebo jeho biologicky aktivní varianty, pro výrobu léku k léčení a/nebo zmnožení buněk, které jsou tělu vlastní a/nebo buněk zavedených buněčných linií ex vivo nebo in vitro. - 5. Použití N-glykosylovaného polypeptidu obsahujícího v podstatě jednu z následujících aminokyselinových sekvencí:
aminokyseliny 1 až 437 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 1 až 409 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 1 až 401 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 437 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 409 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 401 ze sekvence id. č. 2; • · • · nebo jeho fragmentu s nejméně 50 aminokyselinami, nebo polypeptidu obsahujícího v podstatě jednu z následujících aminokyselinových sekvencí:aminokyseliny 1 až 437 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 1 až 409 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 1 až 401 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 437 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 409 ze sekvence id. č. 2 ; aminokyseliny 22 až 401 ze sekvence id. č. 2; nebo jeho biologicky , aktivního fragmentu nebo jeho biologicky aktivní varianty, pro výrobu léku k inhibici růstu buněk. - 6. Použití podle nároku 5, kdy se polypeptid užije jako cytostatikum.
- 7. Použití N-glykosylovaného polypeptidu obsahujícího v podstatě jednu z následujících aminokyselinových sekvencí:
aminokyseliny 1 až 437 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 1 až 409 ze sekvence id. č.· 2; aminokyseliny 1 až 401 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 437 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 409 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 401 ze sekvence id. č. 2; nebo jeho fragmentu s nejméně 50 aminokyselinami, nebo polypeptidu obsahujícího v podstatě jednu z následujících aminokyselinových sekvencí:aminokyseliny 1 až 437 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 1 až 409 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 1 až 401 ze sekvence id. č. 2; • · φ · · φ φ φaminokyseliny 22 až 437 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 409 ze sekvence id. č. 2; aminokyseliny 22 až 401 ze sekvence id. č. 2; nebo jeho biologicky aktivního fragmentu nebo jeho biologicky aktivní varianty, pro výrobu léku k léčení proliferativních onemocnění. - 8. Použití podle nároku 7, kde proliferativních onemocnění je vybráno ze skupiny obsahující myeloproliferativní nemoci, p. vera, esenciální trombocytémii, myelofibrózu, CML, všechny leukémie, lymfomy a solidní nádory.
- 9. Použití polynukleotidu obsahujícího v podstatě jednu z následujících nukleotidových sekvencí:nukleotidy 1 až 1600 ze sekvence id. č. 1;
nukleotidy 36 až 1346 ze sekvence id. č. 1; nukleotidy 36 až 1262 ze sekvence id. č. 1; nukleotidy 36 až 1238 ze sekvence id. č. 1; nukleotidy 39 až 1346 ze sekvence id. č. 1; nukleotidy 39 až 1262 ze sekvence id. č. 1; nukleotidy 39 až 1238 ze sekvence id. č. l; nukleotidy 99 až 1346 ze sekvence id. č. 1; nukleotidy 99 až 1262 ze sekvence id. č. 1; nukleotidy 99 až 1238 ze sekvence id. č. 1; nebo jeho fragmentu nebo jeho varianty pro výrobu léku k potlačení růstu buněk. - 10. Použití polynukleotidu obsahujícího v podstatě jednu z následujících nukleotidových sekvencí:• · · · • · »5 ·· · · <···
nukleotidy 1 , až 1600 ze ; sekvence : id. č. 1; nukleotidy 36 až 1346 ze sekvence id. č. 1; nukleotidy 36 až 1262 ze sekvence id. č. 1; nukleotidy 36 až 1238 ze sekvence id. č. 1; nukleotidy 39 až 1346 ze sekvence id. č. 1; nukleotidy 39 až 1262 ze sekvence id. č. 1; nukleotidy 39 až 1238 ze sekvence id. č. 1; nukleotidy 99 až 1346 ze sekvence id. č. 1; nukleotidy 99 až 1262 ze sekvence id. č. l; nukleotidy 99 až 1238 ze sekvence id. č. l; nebo jeho fragmentu nebo jeho varianty pro výrobu léku k léčení proliferativních onemocnění. - 11. Použití podle nároku 10, kde proliferativních onemocnění je vybráno ze skupiny obsahující myeloproliferativní nemoci, p. vera, esenciální trombocytémii, myelofibrózu, CML, všechny leukémie, lymfomy a solidní nádory.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19947010A DE19947010A1 (de) | 1999-09-30 | 1999-09-30 | Das Gen PRV-1 und dessen Verwendung |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20021094A3 true CZ20021094A3 (cs) | 2002-06-12 |
Family
ID=7923937
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20021094A CZ20021094A3 (cs) | 1999-09-30 | 2000-09-29 | Pouľití polypeptidu kódovaného genem PRV-1 nebo jeho fragmentu pro výrobu léku působícího jako růstový faktor |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1220920A1 (cs) |
| JP (1) | JP2003510077A (cs) |
| KR (1) | KR20020047191A (cs) |
| CN (1) | CN1377408A (cs) |
| AU (1) | AU1132401A (cs) |
| BG (1) | BG106554A (cs) |
| BR (1) | BR0014444A (cs) |
| CA (1) | CA2387702A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ20021094A3 (cs) |
| DE (1) | DE19947010A1 (cs) |
| EA (1) | EA200200286A1 (cs) |
| EE (1) | EE200200168A (cs) |
| HR (1) | HRP20020269A2 (cs) |
| HU (1) | HUP0203080A2 (cs) |
| IL (1) | IL148770A0 (cs) |
| MX (1) | MXPA02002800A (cs) |
| NO (1) | NO20021498L (cs) |
| PL (1) | PL354184A1 (cs) |
| SK (1) | SK4262002A3 (cs) |
| WO (1) | WO2001023554A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA200202379B (cs) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL158599A0 (en) * | 2003-10-26 | 2004-05-12 | Yeda Res & Dev | Methods of modulating hematopoiesis |
| WO2013177062A2 (en) | 2012-05-21 | 2013-11-28 | Genentech, Inc. | Methods for improving safety of blood-brain barrier transport |
| CN111094547B (zh) * | 2017-06-14 | 2024-02-09 | 德国亥姆霍兹慕尼黑中心健康与环境研究中心（有限公司） | 用于纯化源自人胚胎干细胞的内胚层和胰腺内胚层细胞的方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2289118A1 (en) * | 1997-05-06 | 1998-11-12 | Zymogenetics, Inc. | Novel tumor antigens |
| CA2328895A1 (en) * | 1998-06-02 | 1999-12-09 | Genentech, Inc. | Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same |
| DE19849044A1 (de) * | 1998-10-23 | 2000-04-27 | Univ Ludwigs Albert | Das Gen PRV-1 und dessen Verwendung |
| CA2348757A1 (en) * | 1998-12-16 | 2000-06-22 | Genentech, Inc. | Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same |
-
1999
- 1999-09-30 DE DE19947010A patent/DE19947010A1/de not_active Withdrawn
-
2000
- 2000-09-29 CA CA002387702A patent/CA2387702A1/en not_active Abandoned
- 2000-09-29 AU AU11324/01A patent/AU1132401A/en not_active Abandoned
- 2000-09-29 BR BR0014444-4A patent/BR0014444A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-09-29 IL IL14877000A patent/IL148770A0/xx unknown
- 2000-09-29 EA EA200200286A patent/EA200200286A1/ru unknown
- 2000-09-29 EE EEP200200168A patent/EE200200168A/xx unknown
- 2000-09-29 KR KR1020027004095A patent/KR20020047191A/ko not_active Withdrawn
- 2000-09-29 CN CN00813580A patent/CN1377408A/zh active Pending
- 2000-09-29 WO PCT/EP2000/009594 patent/WO2001023554A1/de not_active Ceased
- 2000-09-29 JP JP2001526936A patent/JP2003510077A/ja active Pending
- 2000-09-29 CZ CZ20021094A patent/CZ20021094A3/cs unknown
- 2000-09-29 HR HR20020269A patent/HRP20020269A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2000-09-29 MX MXPA02002800A patent/MXPA02002800A/es unknown
- 2000-09-29 EP EP00972665A patent/EP1220920A1/de not_active Withdrawn
- 2000-09-29 HU HU0203080A patent/HUP0203080A2/hu unknown
- 2000-09-29 PL PL00354184A patent/PL354184A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-09-29 SK SK426-2002A patent/SK4262002A3/sk unknown
-
2002
- 2002-03-25 ZA ZA200202379A patent/ZA200202379B/en unknown
- 2002-03-26 NO NO20021498A patent/NO20021498L/no not_active Application Discontinuation
- 2002-03-27 BG BG106554A patent/BG106554A/bg unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA200202379B (en) | 2003-10-29 |
| MXPA02002800A (es) | 2002-07-22 |
| CN1377408A (zh) | 2002-10-30 |
| NO20021498D0 (no) | 2002-03-26 |
| KR20020047191A (ko) | 2002-06-21 |
| NO20021498L (no) | 2002-05-23 |
| WO2001023554A1 (de) | 2001-04-05 |
| EE200200168A (et) | 2003-04-15 |
| DE19947010A1 (de) | 2001-04-05 |
| PL354184A1 (en) | 2003-12-29 |
| AU1132401A (en) | 2001-04-30 |
| IL148770A0 (en) | 2002-09-12 |
| BG106554A (bg) | 2003-01-31 |
| EP1220920A1 (de) | 2002-07-10 |
| JP2003510077A (ja) | 2003-03-18 |
| CA2387702A1 (en) | 2001-04-05 |
| HUP0203080A2 (hu) | 2002-12-28 |
| HRP20020269A2 (en) | 2003-06-30 |
| BR0014444A (pt) | 2002-06-11 |
| EA200200286A1 (ru) | 2002-12-26 |
| SK4262002A3 (en) | 2002-09-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2002516103A (ja) | インターロイキン２１およびインターロイキン２２ | |
| JP2001524814A (ja) | ２８種類のヒト分泌タンパク質 | |
| JP2001522239A (ja) | ８７個のヒト分泌タンパク質 | |
| KR20030093316A (ko) | 혈관 내피 성장 인자 ２ | |
| JP2002533058A (ja) | ９７個のヒト分泌タンパク質 | |
| CA2129423A1 (en) | Hepatic growth factor receptor | |
| JPH06503949A (ja) | 新規インシュリン様成長因子結合タンパク質ｉｇｆｂｐ―５ | |
| JP2002532092A (ja) | プロスタサイクリン刺激因子−２ | |
| JP2001514885A (ja) | ７０個のヒト分泌タンパク質 | |
| JPH06503947A (ja) | Ｉｇｆｂｐ―５をコードする遺伝物質 | |
| JP2003524366A (ja) | ６４個のヒト分泌タンパク質 | |
| CN111135311A (zh) | Ecm1在预防和/或治疗肝纤维化相关疾病中的应用 | |
| JP2002514925A (ja) | １９個のヒト分泌タンパク質 | |
| CZ20021094A3 (cs) | Pouľití polypeptidu kódovaného genem PRV-1 nebo jeho fragmentu pro výrobu léku působícího jako růstový faktor | |
| US6686153B1 (en) | PRV-1 gene and the use thereof | |
| CN110713544A (zh) | 融合基因plekha6-ntrk3及其在lch中的应用 | |
| JP2003509472A (ja) | Ｍ３ポリペプチドの治療的使用 | |
| JP2002502601A (ja) | 樹状富化分泌リンパ球活性化分子 | |
| US20030148952A1 (en) | Methods and materials for the recruitment of endothelial cells | |
| WO1999032609A1 (en) | Molecules associated with the human fused gene | |
| JPWO2001066734A1 (ja) | 好中球刺激活性を有するポリペプチド | |
| JP2002510192A (ja) | １８６個のヒトの分泌タンパク質 | |
| CN101289504A (zh) | 骨髓再生调控蛋白brrg-1、其编码基因及其应用 |