CZ20021136A3

CZ20021136A3 - Způsob výroby rapamycinového derivátu

Info

Publication number: CZ20021136A3
Application number: CZ20021136A
Authority: CZ
Inventors: Chia-Cheng Shaw; John Hamilton Sellstedt; Razzak Noureldin; Gloria Karen Cheal; Genevieve Fortier
Original assignee: American Home Products Corporation
Priority date: 1999-09-29
Filing date: 2000-09-27
Publication date: 2002-06-12
Also published as: HK1044774A1; WO2001023395A3; CZ300368B6; MXPA02003243A; DE60001510D1; JP2003510329A; PL354461A1; HUP0202609A3; CA2385461C; BR0014433A; ATE233269T1; TWI256395B; HUP0202609A2; EP1216251A2; NZ517644A; CN1402731A; EP1216251B1; KR100754236B1; CN1176925C; AU782234B2

Description

Způsob výroby rapamycinového derivátu

Oblast techniky

Vynález se týká regioselektivní (jeden směr vytvářené vazby je upřednostňován) syntézy derivátů rapamycinu v poloze 42, které se hodí k indukci imunosuprese a k léčbě odvržení po transplantaci, reakce štěpu vůči hostiteli, k léčbě autoimunitních chorob, zánětlivých chorob, T-buněčné leukemie/lymfomu u dospělých, masivních tumorů, plísňových onemocnění a prolyferativních cévních poruch. Konkrétněji se tento vynález týká v podstatě selektivního způsobu výroby 31-silylových chráněných etherů rapamycinu, použitelných jako meziprodukty k výrobě 42-esterů a etherů rapamycinu.

Rapamycin je makrocyklické trienové antibiotikum, produkované Streptomyces hydroscopicus, u něhož byla ověřena antifungální aktivita, zejména vůči Candida albicans, a to jak v podmínkách in vitro, tak i in vivo (C.Vezina a spol., J. Antibiot. 28. 721, 1975; S. N. Sehgal a spol., J. Antibiot. 28, 727, 1975; H. A. Baker a spol., J. Antibiot. 31, 539, 1978; patent US 3 929 992; patent US 3 993 749).

U rapamycinu samotného (patent US 4 885 171) nebo v kombinaci s picibanilem (patent US 4 401 653) byla prokázána protinádorová aktivita. R. Martel a spol. (Can. J. Physiol. Pharmacol. 55. 48, 1977) prokázali, že rapamycin je účinný u experimentálního modelu alergické encefalomyelitidy, u modelu roztroušené sklerózy, u modelu adjuvantní artritidy, revmatoidní arthritidy a účinně inhibuje vytváření protilátek podobných IgE.

Imunosupresivní účinky rapamycinu byly předloženy ve FASEB 3, 3411, 1989. Jako účinná imunosupresivní činidla, vhodná k prevenci odvržení transplantátu, byly prokázány také cyklosporin A a FK-506, jiné

makrocyklické molekuly (FASEB 3, 3411, 1989; FASEB 3, 5256, 1989; R.Y. Calne a spol., Lanpet 1183, 1978; a patent US 5 100 899).

Bylo také prokázáno, že rapamycin je vhodný k prevenci nebo léčbě systémového lupus erythematodes (patent US 5 078 999), zánětu plic (patent US 5 080 899), na inzulínu závislého diabetes mellitus (patent US 5 321 009), buněčné proliferace hladkých svalů a intimálního ztluštění po cévním poškození (patent US 5 516 781), T-buněčné leukemie/lymfomu dospělých (evropská patentová přihláška 525 960 A1) a očních zánětů (patent US 5 387 589).

Rapamycinových derivátů, substituovaných v poloze 42, je známo větší množství. Typicky se jedná o estery (na bázi uhlíku a síry) nebo ethery hydroxylové skupiny rapamycinu v poloze 42, které jsou vyráběny esterifikací nebo etherifikací polohy 42. Esterifikace rapamycinu v poloze 42 byla běžně prováděna přímou reakcí rapamycinu s acyíačními činidly k získání požadovaného produktu. Chemicky se jedná o spíše jednoduchý děj. Ovšem vzhledem k tomu, že rapamycin obsahuje dvě sekundární hydroxylové skupiny v polohách 31 a 42, pokusy rozlišovat mezi těmito dvěma funkčními centry k dosažení selektivní syntézy 42-monoacylovaného produktu, představovaly obtížnou výzvu. Tento typ neregioselektivní reakce rovněž vytvářel 31,42-bisacylovaný vedlejší produkt a v reakční směsi zbývalo také určité množství nezreagovaného rapamycinu. Konečným výsledkem byl nižší výsledek, který vyžadoval rozsáhlé čištění k zisku čistého 42-monoacylovaného produktu. Problémy mohou být ozřejměny vzhledem k syntéze 42-monoesteru, jako je rapamycinový 42-ester s 2,2-bis(hydroxymethyl)propionovou kyselinou (uváděnou zde jako sloučenina [C]). Například syntéza rapamycinového 42-esteru s 2,2-bis(hydroxymethyl)propionovou kyselinou, popsaná v patentu US 5 362 718, příkladu 10, byla neregioselektivní; současně vznikl 31,42-bisesterový vedlejší produkt. Výsledkem bylo, že surový produkt [B] po zpracování obsahoval požadovaný produkt [B],

31,42-bisesterový vedlejší produkt a nezreagovaný rapamycin. Ve snaze spotřebovat zbývající výchozí rapamycin byla reakce ponechána probíhat po delší dobu, ovšem se zápornými výsledky, množství 31,42-bisesteru významně vzrostlo. Výsledný surový produkt [B] byl kontaminován nezreagovaným rapamycinem a 31,42-bisesterem a bylo ověřeno, že následné čištění kolonovou chromatografií je obtížné, neboť

31,42-bisester má retenční čas velmi podobný jako produkt [Bj. Celkově je hlavní překážkou výroby sloučeniny [Bj ve velkém měřítku neregiospecifická reakce, kterou dále komplikují obtíže při vyčištění produktu.

Existuje tedy potřeba regioselektivní syntézy 42-esterů či etherů rapamycinu. .

Existuje také potřeba způsobu selektivní výroby 42-esterů či etherů rapamycinu, který by se hodil pro obchodní výrobu nebo výrobu ve velkém měřítku a mohl být efektivně prováděn.

Podstata vynálezu

V prvním ohledu tento vynález poskytuje regioselektivní způsob výroby 31-silyletheru rapamycinu, například sloučeniny o vzorci IA

·· ·· ·♦· • · · · · ♦ • · · · · · • · · · · · · • · · · · ···· ·· · * ··

kde každý R', R a R' jsou organické skupiny, jako jsou alkylové skupiny, s výhodou obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, například 1 až 4 uhlíkové atomy, nejvýhodněji methyl, ethyl a propyl, který zahrnuje:

a) ovlivnění rapamycinu silylačním činidlem k vytvoření

31,42-bis-silyletheru; a

b) hydrolyzování 42-silyletherové skupiny ve studené zředěné kyselině k poskytnutí 31 -silyletheru rapamycinu, například sloučeniny o výše uvedeném vzorci (I).

-silylether rapamycinu může být acylován nebo etherifikován na 42-hydroxyskupině s následujícím odstraněním 31-silylové chránící skupiny a jakékoliv jiné chránící skupiny, která může být přítomna, k poskytnutí požadovaných 42-esterů nebo etherů rapamycinu.

Ve druhém ohledu tento vynález poskytuje regíoselektivní způsob výroby 42-esteru nebo etheru rapamycinu o struktuře (I)

kde R je ester nebo ether, který zahrnuje:

a) ovlivnění rapamycinu silylačním činidlem k vytvoření

31,42-bis-silyletheru rapamycinu;

b) hydrolyzování 42-silyletheru ve studené zředěné kyselině k poskytnutí 31 -silyletheru rapamycinu;

c) působení vhodným esterifikačním nebo etherifikačním činidlem na 31-silylether rapamycinu k vytvoření 31 -silylether,42-silylesteru nebo etheru rapamycinu;

d) hydrolyzování 31-silyletheru ve studené zředěné kyselině a pokud je to žádoucí, odstranění jakékoliv chránící skupiny na substituentu R, souběžně nebo následně, k poskytnutí požadovaného 42-esteru nebo etheru rapamycinu.

Upřednostňované 42-estery a ethery rapamycinu, které lze připravit způsobem poskytovaným tímto vynálezem, jsou uvedeny v následujících patentech, které jsou zde všechny začleněny jako odkazy: alkylestery (patent US 4 316 885); aminoalkylestery (patent US 4 650 803); fluorované estery (patent US 5 100 883); amidové estery (patent US 5 118 677); karbamátové estery (patent US 5 118 678); silylové ethery (patent US 5 120 840); aminoestery (patent US 5 130 307); acetály (patent US 5 51 413); aminodiestery (patent US 5 162 333); sulfonátové a sulfátové estery (patent US 5 177 203); estery (patent US 5 221 670); alkoxyestery (patent US 5 233 036); O-arylové, -alkylové, -alkenylové a -alkynylové ethery (patent US 5 258 389); karbonátové estery (patent US 5 260 300); arylkarbonylové a alkoxykarbonylové karbamáty (patent US 5 262 423); karbamáty (patent US 5 302 584); hydroxyestery (patent US 5 362 718; WO 95/28406); blokované estery (patent US 5 385 908); hydrocyklické estery (patent US 5 385 909); gem-disubstituované estery (patent US 5 385 910); aminoalkanoové estery (patent US 5 389 639); fosforylkarbamátové estery (patent US 5 391 730); karbamátové estery (patent US 5 411 967); karbamátové estery (patent US 5 434 260); amidinokarbamátové estery (patent US 5 463 048); karbamátové estery (patent US 5 480 988), karbamátové estery (patent US 5 480 989); karbamátové estery (patent US 5 489 680), blokované N-oxidové estery • * *· ··· · ··*< 94 · 4 4 · 9

64* *449 99 9 949 ♦ · _ · 999999·· ···· 99 ·· ·· ·· ·♦·· (patent US 5 491 231); biotinové estery (patent US 5 504 091) a O-alkylové ethery (patent US 5 665 772). Tyto patenty rovněž předkládají různé hodnoty pro ekvivalent substituentu R ve výše uvedeném vzorci (I) a způsoby esterifikace či etherifikace, použité ve výše uvedeném kroku (c).

Zvláště upřednostňované hodnoty pro R ve výše uvedeném vzorci (I) jsou:

a) -O-C=O.CR⁷R⁸R⁹; (tj. estery), kde:

R⁷ je vodíkový atom, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, alkenyl o 2 až 7 atomech uhlíku, alkynyl o 2 až 7 atomech uhlíku, -(CR³R⁴)fOR¹⁰, -CF3, -F, nebo -CO₂R¹¹;

R⁸ a R⁹ jsou každý nezávisle vodíkový atom, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, nebo -(CR³R⁴)_fOR¹⁰; nebo R⁸ a R⁹ mohou být brány dohromady k vytvoření X;

R¹⁰ je vodíkový atom, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, alkenyl o 2 až 7 atomech uhlíku, alkynyl o 2 až 7 atomech uhlíku, trifenylmethyl, benzyl, alkoxymethyl o 2 až 7 atomech uhlíku, chlorethyl nebo tetrahydropyranyl;

X je 5-(2,2-di-(alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku))[1,3]dioxanyl; 5-(2-spiro(cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku))[1,3]dioxanyl; 4-(2,2-dí-(alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku))[1,3]dioxanyl; 4-(2-spiro(cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku))[1,3]dioxanyl; (2-spiro(cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku))[1,3]dioxalanyl; nebo 4-(2-spiro(cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku))[1,3]dioxalanyl;

R³ a R⁴ jsou každý nezávisle vodíkový atom, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, alkenyl o 2 až 7 atomech uhlíku, alkynyl o 2 až 7 atomech uhlíku, -CF₃, nebo -F; a f = 0 až 6; za podmínky, že R obsahuje alespoň jednu skupinu -(CR³R⁴)_fOR¹⁰ nebo skupinu X; a

b) -OR¹ (tj. ethery), kde R¹ je alkyl, thioalkyl, arylalkyl, hydroxyalkyl, dihydroxyalkyl, hydroxyalkylarylalkyl, dihydroxyalkylarylalkyl, alkoxyalkyl, • ti titititi • ti · ti · • ti ·« • ti ti * • ti ti • titi tititi • ti titititi acyloxyalkyl, aminoalkyl, alkylaminoalkyl, alkoxykarbonylaminoalkyl, acylaminoalkyl, arylsulfonamidoalkyl, allyldihydroxyalky lallyl a dioxolanylallyl, karbalkoxyalkyl, kde alk- nebo alkyl představují CMalkyl, rozvětvený nebo rovný, s výhodou C₁.₃alkyl, u něhož může být uhlíkový řetězec volitelně přerušen etherovou (-O-) vazbou; acyl představuje alkylkarbonyl a aryl má 6-10 uhlíkových atomů a zahrnuje fenyl, naftyl a podobně.

R¹ se nejvýhodněji zvolí z hydroxyalkylu, hydroxyalkoxyalkylu, acylaminoalkyiu a aminoalkylu; zejména 40-O-(2-hydroxy)ethylrapamycinu, 40-O-(3-hydroxy)propylrapamycinu, 40-O-[2-(2-hydroxyjethoxyjethylrapamycinu a 40-O-(2-acetaminoethyl)rapamycinu.

R ve vzorci I je nejvýhodněji 2,2-bis(hydroxymethyl)propionyloxyskupina nebo 2,2,5-trimethyl [1,3]-dioxan-5-karbonyloxyskupina.

Vzhledem ke kroku (a) může být silylace prováděna v inertním rozpouštědle, například ethylacetátu; s výhodou přítomnosti vhodné báze, například imidazolu. Reakce může být prováděna při nízké teplotě, například při teplotě místnosti nebo nižší, například při 0 °C; s výhodou při teplotě v rozmezí 0 až 5 °C. Přednost se dává tomu, aby 31- a 42hydroxylové skupiny byly chráněny jako trialkylsilylethery. 42-silylem chráněná hydroxylová skupina 31,42-bis-silylovaného rapamycinu může být selektivně odštěpena v mírně kyselém prostředí k poskytnutí 31-silyl rapamycinu. Silylační činidla, používaná pro tuto transformaci, jsou známé, obchodně dostupné chloralkylsilany, jako chlortrimethylsilan, chlortriethylsilan nebo chlortripropylsilan. Ovšem čím objemnější je trialkylsilan, tím více času je potřeba k odstranění chránící skupiny v kyselém prostředí během předposledního chemického kroku k regeneraci 31-hydroxylové skupiny. Delší reakční doba v kyselém prostředí také poskytuje více degradačních vedlejších produktů. I když k výrobě 31 -O-trialkylsilyletherů rapamycinu mohou být použity chlortrimethylsilan, chlortriethylsilan nebo chlortripropylsilan, upřednostňovaným silylačním

9· ···· • to ·· ···· · · to · to · · · • ·· · · · · • · · · · ·· to · ·· ·· *·

činidlem je chlortrimethylsilan. Trimethylsilylová skupina je v kyselém prostředí labilnější a snadněji se proto odstraňuje během transformace, což minimalizuje vytváření degradačních produktů. V upřednostňovaném způsobu se rapamycin ovlivňuje nadbytkem chlortrimethylsilanu v ethylacetátu při teplotě 0 až 5 °C a v přítomnosti organické báze. 42- a 31-hydroxylové skupiny rapamycinu se silylují k vytvoření

31,42-bis-O-trimethylsilyletheru rapamycinu s kvantitativním výtěžkem. K obecné silylační reakci se mohou použít běžné organické báze, jako imidazol 1-methylimidazol, triethylamin a Ν,Ν-diisopropylethylamin. Bylo však zjištěno, že nejvýhodnější bází pro silylaci rapamycinu je imidazol, neboť reakce může být dokončena během 30 minut.

Pokud se týká kroku (b), autoři překvapivě zjistili, že zbavení ochrany k odstranění 42-silyletherové skupiny 31,42-bis-O-silyletheru rapamycinu k vytvoření 31 -O-silyletheru rapamycinu může být prováděno v studené zředěné kyselině v podstatě kvantitativně za vzniku pouze velmi malých množství vedlejších produktů, jako je rapamycin (tj. produkt úplného zbavení ochrany), a například menších než 20 %, ale obecně menších než 10 %, pokud se týká 31-sílyletheru. Jak je zde ukázáno, produkt odstranění ochranné skupiny v kroku (b) může obsahovat až přibližně 80 % nebo více 31-silyletherem chráněného rapamycinu a méně než přibližně 10 % rapamycinu, přičemž existuje možnost snížení hladiny rapamycinu přibližně až na 1 %. Toto selektivní zbavení ochrany se výhodně provádí za použití zředěné organické nebo anorganické kyseliny, zvláště anorganických kyselin, jako je kyselina sírová, chlorovodíková nebo fosforečná, například < 2,5 N, s výhodou 0,8 N až 2,5 N, nejvýhodněji 0,1 N až 1 N roztoku. Zvláštní přednost se dává kyselině sírové. Reakce se výhodně provádí ve dvoufázovém systému vodné kyseliny/organického rozpouštědla, například za použití ethylacetátu jako druhé fáze, zejména tam, kde se jako chránící skupina používá trimethylsilyl, který lze selektivně odstranit například během 2 až 3 hodin. Používají se dostatečně nízké teploty reakce, například přibližně 25 °C nebo nižší, s výhodou přibližně 15 °C nebo nižší, jako přibližně -5 °C až φφ ·Φ· e »φ φ« • · φ · φ φ · φ φφφ φ φ φφφφ φ φ φ φ φ φφφ « φ · φ φ φ φ φφ φφ φ φ φ φ φ φ φ • φ φ φφφ φ φ φφφφ °C, nejlépe od 0 °C do 5 °C. Odstranění ochranné skupiny se nejlépe provádí po silylační reakci in šitu, při 0 až 5 °C, s ethanolem, směsmi ethanolu a vody, vodou a zředěnými anorganickými nebo organickými kyselinami. Zvláště se upřednostňuje kyselina sírová (0,5 N), neboť reakce je čistá a může být dokončena v průběhu 2 až 5 hodin, což je výhodné pro komerční výrobu. Ovšem jako nezbytné mohou být shledány i delší reakční doby, pokud jsou použity méně reaktivní silylové chránící skupiny, například triethylsilyl či tripropylsilyl a v takových případech lze použít k selektivnímu odstranění ochranné skupiny jednofázový systém rozpouštědla, například kyselina/aceton.

Pro silylaci lze použít množství organických rozpouštědel a v literatuře je často zmiňován zejména DMF (dimethylformamid). V tomto vynálezu je však upřednostňovaným rozpouštědlem v kroku (a) ethylacetát, neboť pro následující krok (b) odstranění ochranné skupiny se používá dvoufázové reakční prostředí.

Pokud se týká kroku (c), esterifikace nebo etherifikace 31-chráněného rapamycinu se může provádět za podmínek, které jsou uvedeny ve výše zmíněných patentech. Například, ve schématu I uvedeném dále, byla acylace 31-trimethylsilyletheru rapamycinu uskutečněna za použití 2,4,6-trichlorbenzoylového směsného anhydridu kyseliny 2,2,5-trimethyl[1.3-dioxan]-5-karboxylové v přítomnosti 4-dimethylaminopyridinu nebo podobného reakčního činidla. Nadto bylo zjištěno, že účinným acylačním činidlem je v tomto vynálezu chlorid 2,2,5-trimethyl[1.3-dioxan]-5-karboxylové kyseliny v přítomnosti 4-dimethylaminopyridinu nebo podobného reakčního činidla. Pro podmínky acylace se spíše než tetrahydrofuran, který byl popsán v dosavadním stavu techniky, jako rozpouštědlo upřednostňuje methylenchlorid. Reakce se může provádět při teplotě přibližně od -50 °C do +25 °C. Ovšem teploty reakce nižší než 0 °C, s výhodou od -20 °C do -15 °C, poskytují lepší výsledky než acylace při teplotě místnosti, popsaná v patentu US 5 362 718.

9999

4«

- 10 • ·9 9 4 ♦ «··

99 9 • 9

9 9

9 9 ·

9 99

99

9 9 9 · 9

9 9 9

9 9

9 9999

Pokud se týká kroku (d), odstranění 31-silylové chránící skupiny z 42-esterifikovaného nebo etherifikovaného-31-silylrapamycinu může být prováděno hydrolýzou, například za použití zředěné kyseliny, jak bylo popsáno výše, s výhodou zředěné anorganické kyseliny jako kyseliny sírové, chlorovodíkové nebo fosforečné. V závislosti na tom, zda je žádoucí odstranit současně další chránící skupiny, může být roztok kyselinypřibližně 0,1 N až 3 N; s výhodou přibližně od 0,2 N do 2 N a nejlépe přibližně 0,5 N. Krok (d) se s výhodou provádí v jednofázovém systému vodné kyseliny/organického rozpouštědla, kde organickým rozpouštědlem je například aceton. Reakce se může provádět při teplotě 25 °C nebo nižší, například přibližně od -5 °C do 10 °C a s výhodou přibližně od 0 °C do 5 °C.

V následujícím schématu I mohou být acylační produkty, 31-O-TMS, 42-(chráněné hydroxyjestery (tj. sloučenina [E]; TMS = trimethylsilyl), dále ovlivněny zředěnou kyselinou k jejich přeměně na 42-(chráněné hydroxy)estery (sloučeninu [B]), nebo být přímo použity k vytvoření konečného produktu, 42-hydroxyesterů (konečný produkt [Cj). Tato metodika může být použita k výrobě jiných esterů nebo etherů rapamycinu pouhou změnou použitého esterifikačního nebo etherifikačního činidla.

Následující schéma rovněž znázorňuje regioselektivní výrobu rapamycinového 42-esteru s 2,2-bis-(hydroxymethyl)propionovou kyselinou jako reprezentativního 42-esteru rapamycinu, který lze vyrobit způsobem poskytnutým v tomto vynálezu. Původní syntéza rapamycinového 42-esteru s 2,2-bis-(hydroxymethyl)propionovou kyselinou je poskytnuta v patentu US 5 362 718.

chema

Rapamycin 31-OTMS [D]

Schéma I - pokračovaní

o

X

- 13 • ·

Konverse sloučeniny [B] na rapamycinový 42-ester s 2,2-bis-(hydroxymethyl)propionovou kyselinou [C] může být ve schématu I uskutečněna za mírně kyselých podmínek. Upřednostňuje se použití vodné kyseliny sírové, neboť minimalizuje vytváření nečistot, vznikajících, pokud se použije kyselina chlorovodíková, jak je popsáno v patentu US 5 362 718. Bylo uvedeno, že tetraenové znečištění, vznikající za použití kyseliny chlorovodíkové, je kolonovou chromatografií obtížně oddělitelné od požadovaného produktu (Caufield a spol., Tetrahedron Lett. 37, 6835, 1994). Rovněž se upřednostňuje provádění hydrolýzy spíše při 0 až 5 °C než při teplotě místnosti, jak je popsáno v patentu US 5 362 718.

Tento vynález rovněž poskytuje způsob výroby sloučeniny o vzorci (C):

který zahrnuje hydrolýzu sloučeniny o vzorci (B):

• ·

u níž R₂ je vodík nebo -SiR'RR', kde R', R a R' jsou stejné nebo odlišné, zvolené z alkylu o 1 až 6 atomech uhlíku, fenylu a benzylu; za použití zředěné kyseliny sírové, například za použití 1 N až 3 N kyseliny sírové. Reakce se s výhodou provádí při teplotě -5°C až +10°C a jako rozpouštědlo se s výhodou používá tetrahydrofuran.

Způsob syntézy, předložený v tomto vynálezu, poskytuje několik určitých výhod oproti způsobu syntézy, zveřejněnému k výrobě rapamycinových esterů či etherů; zejména se týkajících výtěžku a snadnosti čištění požadovaných 42-esterů nebo etherů. Vzhledem k tomu, že se jedná o regioselektivní syntézu, celkové výtěžky požadovaných 42-esterů nebo etherů jsou dramaticky zvýšené. Syntetická metoda, poskytnutá v patentu US 5 362 718 například poskytuje sloučeninu [Bj s 35% výtěžkem, zatímco za použití metodiky uvedené v tomto vynálezu je syntéza [B] uskutečňována s 85% výtěžkem. Nadto je konverse na rapamycinový 42-ester s 2,2-bis-(hydroxymethyl)propíonovou kyselinou z [B] uskutečňována s přibližně 75% výtěžkem, zatímco za použití metodiky podle patentu US 5 362 718 se získá pouze 20% konverse.

- 15 • · * · · · · • · · · · · « • · · · · · ····

Za použití stejné metodiky mohou být 42-ethery rapamycinu vyráběny regioselektivním způsobem. Jako příklad, patent US 5 665 772 předkládá výrobu 40-O-alkyletherů rapamycinu neregioselektivním způsobem. Vzhledem k nomenklaturním rozdílům je poloha 42 rapamycinu (jak je označována v tomto vynálezu) v patentu US 5 665 772 označována jako poloha 40. Tyto polohy jsou identické. Za použití zde předkládané metodiky může být 31-O-trimethylsilylový ether rapamycinu ovlivněn například 2-(t-butyldimethylsilyl)oxyethyltriflátem) k poskytnutí 31-O-trimethylsilyl,42-O-[2-(t-butyldimethylsilyl)oxy]ethylrapamycinu.

Odstranění silylových chránících skupin z 31-hydroxylové skupiny rapamycinu z-42-hydroxyethylu může být prováděno za mírně kyselých podmínek, jako za použití zředěné kyseliny sírové, k poskytnutí 42-O-(2-hydroxy)ethylrapamycinu. Neregioselektivní formování jiných 42-etherů rapamycinu je popsáno v patentu US 5 665 772. Mohou být rovněž připraveny regioselektivně prostřednictvím 31-O-trimethylsilyletheru rapamycinu.

Tento vynález také zahrnuje 31-silylethery rapamycinu a 31 -silylethery 42-esterifikovaných či etherifikovaných derivátů rapamycinu, které jsou vhodné k přípravě 42-esterů a etherů rapamycinu, jak je zde popsáno. Silikonová částice, představovaná -SiR'RR', obsahuje 3 skupiny, jež mohou být stejné nebo rozdílné. Typické silylové ethery podle tohoto vynálezu obsahují částice R', R, nebo R', kterými jsou alkylové skupiny o 1 až 6 atomech uhlíku, fenylové nebo benzylové skupiny. Alkylové skupiny mohou mít rozvětvený nebo rovný řetězec. Upřednostňuje se, aby R', R a R' byly alkylové skupiny a více se upřednostňuje, aby R', R a R' byly methyl nebo ethyl. Ještě více se upřednostňuje, aby 31 -silylether byl 31-O-trimethylsilylether rapamycinu.

Tento vynález tedy poskytuje 31-silylethery o vzorci (IA) a (IB):

• ·

I ι

OB) • · · · · · · · · · ·· · · « · ♦

- 17 • ····· · · · · · · • · · · · · · · · ···· ·· ·· ·· 99 ···· kde R je esterová nebo etherová skupina, jak byly popsány výše a R', R a R' jsou stejné nebo odlišné, zvolené z alkylu o 1 až 6 atomech uhlíku, fenylu a benzylu.

Následující příklady dokreslují výrobu 31-silyietherů rapamycinu a 42-esterů rapamycinu, jež představují sloučeniny, které lze vyrobit způsobem podle tohoto vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

31-O-trimethylsilylether rapamycinu

Roztok rapamycinu (92,4%, 25,0 g, 25,28 mmol) v 750 ml ethylacetátu, byl ochlazen na 0 až 5 °C, poté bylo přidáno 110,20 mmol imidazolu a mícháno k vytvoření roztoku. K tomuto studenému roztoku bylo v průběhu 30 minut po kapkách přidáno 11,0 g (101,25 mmol) chlortrimethylsilanu a mícháno dalších 30 minut při teplotě 0 až 5 °C k dokončení vzniku 31,42-bis-O-trimethylsilyletheru rapamycinu. V průběhu 10 minut bylo po kapkách přidáno 50 ml 0,5 N roztoku kyseliny sírové a směs byla míchána 2,5 hodiny při teplotě 0 až 5 °C. Reakční směs byla převedena do dělicí nálevky a vodná vrstva byla oddělena a extrahována 125 ml ethylacetátu. Organické vrstvy byly spojeny a následně promyty solným roztokem (125 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml), vodou (2x125 ml) a nakonec solným roztokem k získání pH o hodnotě 6 až 7. Organická vrstva byla vysušena nad bezvodým síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku k poskytnutí béžového pěnového produktu v množství 28,5 g (teoreticky 24,94 g). Analýza pomocí HPLC prokázala, že obsahuje 86 % (procenta plochy píku), 31 -O-trimethyIsiíyíetheru rapamycinu a 7 % rapamycinu. Produkt byl přímo použit pro následující reakci.

- 18 • · · · · • · · • ·

LC/MS elektrorozprašovací (+) uspořádání (Μ - H) = 985. ¹H NMR (400 MHz, d-6 DMSO) δ 4,60 (m, 1H, (42C)OH), 4,10 (m,1H, C(31)H), 3,09(m, 1H, (42)H), -0,027(s, 9H, 31-O-TMS).

Příklad 2

Chlorid 2,2,5-trimethyl[1,3-dioxan]-5-karboxylové kyseliny

Roztok 2,2,5-trimethyl[1.3-dioxan]-5-karboxylové kyseliny (17,42 g, 0,1 mol) v 200 ml vysušeného toluenu byl zahříván na 40 °C, v průběhu 30 minut bylo po kapkách přidáno 26,0 ml oxalyichloridu (37,83 g, 0,3 mol) a vzniklý, roztok byl míchán 2,5 hodiny při 40 °C. Reakční směs byla odpařena za sníženého tlaku k odstranění rozpouštědla o nadbytku oxalyichloridu. Výsledný produkt byl dvojnásobně odpařen s vysušeným toluenem (200 ml), poté byl vysušen pod vysokým vakuem v průběhu 2 hodin při 40 °C k získání 19,75 g produktu ve formě oranžově zbarvené kapaliny. ¹H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 4,28 (2H, d, J = 10,5 Hz), 3,76 (2H, d, J = 10,5 Hz), 1,46 (3H, s), 1,29 (3H, s). ¹³C NMR (75 MHz, CDCI3), δ, 176,43, 98,76, 66,06, 52,07, 25,82, 21,20, 18,10.

Příklad 3

Rapamycinový 31-O-trimethylsilylether, 42-ester s kyselinou

2,2,5-trimethyl[1.3-dioxan]-5-karboxylovou.

Metoda A:

K roztoku kyseliny 2,2,5-trimethyl[1.3-dioxan]-5-karboxylové (9,77 g, 56,08 mmol) a N, N-diisopropylethylaminu (12,00 g, 92,80 mmol) v 200 ml methylenchloridu byl při teplotě místnosti pod dusíkovou atmosférou přidán 2,4,6-trichlorbenzoylchlorid (13,35 g, 54,73 mmol) a výsledná směs byla míchána 5 hodin při teplotě místnosti. Reakční směs byla ochlazena na -20 až -15 °C a přidán byl roztok 31-O-trimethylsilyletheru rapamycinu • · ··· · ·· ··

- 19 (28,50 g, surový, vyrobený z 25,28 mmol rapamycinu) ve 120 ml methylenchloridu. V průběhu 2 hodin byl po kapkách přidán roztok 4-dimethylaminopyridinu (11,68 g, 95,60 mmol) v 110 ml methylenchloridu. Reakční směs byla dále míchána 16 hodin při teplotě -15 až -16 °C. Reakce byla zastavena přídavkem 100 ml vody a organická vrstva byla oddělena a promývána 0,5 N roztokem kyseliny sírové (180 ml), následně solným roztokem (100 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml), vodou (2x100 ml) a solným roztokem (100 ml) až k pH 6 až 7. Organická vrstva byla vysušena nad bezvodým síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku k poskytnutí sloučeniny uvedené v nadpise (33,18 g) ve formě béžové zbarvené pěny.

LC/MS elektrorozprašovací (+) uspořádání (M+NH₄) = 1 160. ¹H NMR (400 MHz, d-6 DMSO) δ 4,57 (m, 1H, C(42)H), 4,10 (m, 1H, C(31)H), 4,03 (d, 2H), 3,57 (d, 2H), 1,34 (s, 3H), 1,24 (s, 3H), 1,13 (s, 3H),-0,023 (s, 9H, 31-O-TMS).

Metoda B:

Roztok 31-O-trimethylsilyletheru rapamycinu (11,00 g; od 10,0 g rapamycinu; 11,15 mmol) v 120 ml methylenchloridu, obsahující 2 ml N,N-dimethylformamidu, byl míchán pod dusíkovou atmosférou a ochlazen na -15 °C. Poté byl přidán 4-dimethylaminopyridin (4,80 g, 39,29 mmol) a směs byla míchána k vytvoření roztoku. Do tohoto studeného roztoku byl v průběhu 2 hodin po kapkách přidán 7,5% roztok chloridu 2,2,5-trimethyl [1,3-dioxan]-5-karboxylové kyseliny (42,18 g; 16,42 mmol) v methylenchloridu. Roztok byl dále míchán 1 hodinu při teplotě -15 °C a v průběhu 30 minut byl přidán další 7,5% roztok kyselého chloridu (14,06 g, 5,47 mmol) v methylenchloridu. Reakční směs byla dále míchána 16 hodin při teplotě -15 až -16 °C. Reakce byla zastavena přídavkem 100 ml solného roztoku, organická vrstva byla oddělena a promývána 0,5 N roztokem kyseliny sírové (100 ml), solným roztokem (100 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml), vodou (100 ml) a solným • · • «I on ♦ ··· · · 9 909,9 9 “ ^.V ~ · 9 9909 909 ···· ·· ·· ·· ·« ···· roztokem (100 ml) až k pH 6 až 7. Organická vrstva byla vysušena nad bezvodým síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku k poskytnutí produktu (12,15 g) ve formě žluté pěny.

Příklad 4

Rapamycinový 42-ester s 2,2,5-trimethyl[1,3-dioxan]-5-karboxylovou kyselinou

Roztok rapamycinového 31-O-trimethylether,42-esteru s 2,2,5-trimethyl[1.3-dioxan]-5-karboxylovou kyselinou (33,18 g; z příkladu 3, metody A) ve.100 ml acetonu byl míchán a ochlazen na 0 až 5 °C. K tomuto studenému roztoku bylo během 10 minut po kapkách přidáno 17 ml 0,5 N roztoku kyseliny sírové a směs byla míchána 2,5 hodiny při teplotě 0 až 5 °C. V průběhu 20 minut byl přidán roztok hydrogenuhličitanu sodného (1,44 g) ve 20 ml vody a následně bylo v průběhu 30 minut přidáno 33 ml vody; produkt se začal srážet přibližně po 1 hodině míchání. Směs byla míchána přes noc při teplotě 0 až 5 °C a po filtraci byl pevný produkt promyt 60 ml soustavy aceton-voda (1:1). Produkt byl vysušen ve vakuové peci při 30 °C k získání 28,85 g produktu (83,9 %, 89,3% celkový výtěžek z rapamycinu). ¹H NMR spektrum produktu bylo stejné jako u produktu, popsaného v patentu US 5 362 718, v příkladu 10.

Příklad 5

Rapamycinový 42-ester s 2,2-bis-(hydroxymethyl)propionovou kyselinou

Metoda A:

Roztok rapamycinového 42-esteru s 2,2,5-trimethyl[1,3-dioxan]-5-karboxylovou kyselinou (28,85 g; z příkladu 4) v 276 ml tetrahydrofuranu byl míchán a ochlazen na 0 až 5 °C. K tomuto

4 4 4 • ·

- 21 4444 44 studenému roztoku bylo v průběhu 30 minut přidáno 83 ml studeného 2 N roztoku kyseliny sírové a směs byla míchána 60 hodin při teplotě 0 až 5 °C. Reakční směs byla zředěna 600 ml ethylacetátu a promyta 120 ml solného roztoku. Vodná vrstva byla jednou extrahována 120 ml ethylacetátu a organické extrakty byly spojeny a promyty nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (120 ml), vodou (2x200 ml) a solným roztokem (120 ml) až k pH 6 až 7. Organická fáze byla vysušena nad bezvodým síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku při teplotě místnosti k získání produktu (28,42 g) ve formě béžové zbarvené pěny. Surový produkt byl chromatografován na koloně silikagelu a eluován 30% acetonem v heptanu k poskytnutí 18,06 g čistého produktu ve formě bílé pevné látky (.69,4% celkový výtěžek z rapamycinu). ¹H NMR spektrum produktu bylo stejné jako u produktu, popsaného v patentu US 5 362 718, v příkladu 11.

Metoda B:

Roztok 31-O-trimethylether,42-esteru rapamycinu s 2,2,5-trímethyl-[1,3-dioxan]-5-karboxylovou kyselinou (23,25 g, připraveného z 20,06 g rapamycinu, 92,7%, 20,34 mmol) v 230 ml tetrahydrofuranu byl míchán a ochlazen na 0 až 5 °C. K tomuto studenému roztoku byl v průběhu 45 minut po kapkách přidán 2 N roztok kyseliny sírové (115 ml) a směs byla míchána 88 hodin při teplotě 0 až 5 °C. Reakční směs byla zředěna 500 ml ethylacetátu a promyta 100 ml solného roztoku. Vodná vrstva byla jednou extrahována 100 ml ethylacetátu a organické extrakty byly spojeny a promývány nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (80 ml), vodou (2x80 ml) a solným roztokem (100 ml) až k pH 6 až 7. Organická fáze byla vysušena nad bezvodým síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku při teplotě místnosti k poskytnutí produktu (22,48 g) ve formě béžové zbarvené pěny. Surový produkt byl chromatografován na koloně silikagelu a eluován 30% acetonem v heptanu k poskytnutí 16,50 g surového produktu ve formě bílé pevné látky (78,4% celkový výtěžek z rapamycinu). ¹H NMR spektrum produktu bylo stejné jako u produktu, popsaného v patentu US 5 362 718, v příkladu 11.

• ·

Příklad 6

31,42-bis-O-trimethylsilylether rapamycinu

Roztok rapamycinu (94,3%; 10,0 g, 10,3 mmol) v 150 ml ethylacetátu byl ochlazen na 0 až 5 °C a 3,0 g (44 mmol) imidazolu bylo přidáno a mícháno k vytvoření roztoku. K tomuto studenému roztoku byly v průběhu 20 minut přidány 4,4 g (40,5 mmol) chlortrimethylsilanu a poté byl roztok míchán při teplotě 0 až 5 °C dalších 30 minut. Reakční směs byla zfiltrována k odstranění imidazol-HCI a filtrát byl odpařen za sníženého tlaku k získání žluté pěny. Poté byl přidán heptan (200 ml) a směs byla při teplotě místnosti míchána 20 minut; následně byla zfiltrována. Filtrát byl promyt 40 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného vodou (2x80 ml) a solným roztokem (50 ml). Organická vrstva byla vysušena nad bezvodým síranem sodným a odpařena k získání produktu ve formě žluté pěny (11,42 g; 98,6 %).

LC/MS elektrorozprašovací (+) uspořádání (Μ - H) = 1 057. ¹H NMR (400 MHz, d-6 DMSO) δ 4,10 (m, 1H, C(31) H), 3,31 (m, 1H, C(42) H), 0,057 (s, 9H, 42-O-TMS), -0,027 (s, 9H, 31-O-TMS).

Příklad 7

31-O-triethylsilylether rapamycinu

Roztok rapamycinu (92,7%, 5,00 g, 5,07 mmol) v 75 ml ethylacetátu byl ochlazen na 0 až 5 °C; pak bylo přidáno 1,50 g (22,03 mmol) imidazolu a mícháno k vytvoření roztoku. K tomuto studenému roztoku bylo v průběhu 10 minut přidáno 3,05 g (20,23 mmol) chlortriethylsilanu. Směs byla míchána 30 minut při teplotě 0 až 5 °C a poté byla míchána při teplotě místnosti přes noc k dokončení formace

31,42-bis-O-triethylsilyletheru rapamycinu. Po zfiltrování reakční směsi byl filtrát odpařen za sníženého tlaku při teplotě místnosti k odstranění

- 23 většiny rozpouštědla. Zbytkový roztok (přibližně 10 ml) byl rozpuštěn v 60 ml acetonu a 15 ml 0,15 N roztoku kyseliny sírové bylo přidáno před tím, než byla směs míchána 25 hodin při teplotě 0 až 5 °C. V tomto stupni vymizel 31,42-bis-O-triethylsilylether rapamycinu. Reakční směs byla zředěna 80 ml ethylacetátu a následně byla promývána solným roztokem (2x60 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (40 ml), vodou (2x60 ml) a solným roztokem (60 ml) až k pH 6 až 7. Organická vrstva byla vysušena nad bezvodým síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku k získání produktu ve formě světle žluté gumy (6,92 g, teoreticky 5,21 g). Analýza pomocí HPLC prokázala, že produkt obsahoval 95,2 % (procenta plochy píku) 31 -O-triethylsilyletheru rapamycinu a 0,9 % rapamycinu.

Příklad 8

31-O-tripropylsilylether rapamycinu

Roztok rapamycinu ( 92,7%; 5,00 g,5,07 mmol) v 75 ml ethylacetátu byl ochlazen na teplotu 0 až 5°C; poté bylo přidáno 1,5 g (22,03 mmol) imidazolu a mícháno k vytvoření roztoku. K tomuto studenému roztoku byl v průběhu 10 minut po kapkách přidán chlortripropyIsilan (3,91 g, 20,3 mmol). Směs byla míchána 30 minut při teplotě 0 až 5 °C a poté 21 hodin při teplotě místnosti k dokončení formace 31,42-bis-O-tripropylsilyletheru rapamycinu. Po filtraci reakční směsi byl filtrát odpařen za sníženého tlaku při teplotě místnosti k odstranění většiny rozpouštědla a zbylý roztok byl rozpuštěn v 60 ml acetonu. Poté bylo přidáno 15 ml 0,25 N roztoku kyseliny sírové a směs byla míchána 45 hodin při teplotě 0 až 5 °C; v tomto kroku vymizel 31,42-bis-O-tripropylsilylether rapamycinu. Reakční směs byla zředěna 100 ml ethylacetátu a následně promývána solným roztokem (2x40 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (40 ml), vodou (2x40 ml) a solným roztokem (50 ml) až k pH 6 až 7. Organická vrstva byla vysušena nad bezvodým síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku k získání produktu ve formě světle žluté • · ·4 4 · 4 ♦ * . · · ·» • ♦ 4 4 4 4 · ♦ ♦ · *

4 4 · 4 4 »4 ♦

Λ _λ 4 4»4 · 4 4 4.444

- >4 “ · 4444444» » 444 44 »4 * · 444.44 gumy (8,07 g, teoreticky 5,43 g). Analýza pomocí HPLC prokázala, že produkt obsahoval 96,7 % (procenta plochy píku) 31-O-tripropylsilyletheru rapamycinu a 1 % rapamycinu.

Zastupuje:

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Způsob výroby 31-silyletheru rapamycinu, vyznačující se t i m, že zahrnuje kroky, v nichž se;

a) ponechá reagovat rapamycin se silylačním činidlem k vytvoření

31,42-bis-silyletheru rapamycinu; a

b) hydrolyzuje 31,42-bis-silylether se studenou zředěnou kyselinou k poskytnutí 31 -silyletheru rapamycinu.
2. Způsob výroby 42-esteru nebo etheru rapamycinu o struktuře (I) kde R je ester nebo ether, vyznačující se tím, že zahrnuje kroky, v nichž se:

a) ponechá reagovat rapamycin se silylačním činidlem k vytvoření

31,42-bis-silyletheru rapamycinu;

b) hydrolyzuje 31,42-bis-silylether ve studené zředěné kyselině k poskytnutí 31-silyletheru rapamycinu;

0 0 0 00 9

0» 0* • 0 0 « 0 · · * 0 · 0

0 » 0 0 0 0 00 ·

ΛΛ « 000 ·00 « ♦ ♦ » ·

- 2ϋ - · 00000900

9000 0· · · · · · * · · · ·

c) ponechá reagovat 31-silylether rapamycinu s vhodným esterifikačním nebo etherifikačním činidlem k vytvoření 31 -silyletheru, 42-esteru nebo etheru rapamycinu; a

d) hydrolyzuje 31 -silylether ve studené zředěné kyselině k poskytnutí požadovaného 42-esteru nebo etheru rapamycinu, přičemž se, pokud je to žádoucí, následně nebo současně odstraní jakékoliv jiné přítomné chránící skupiny.
3. Způsob výroby podle nároku 2, vyznačující se t í m, že R ve sloučenině o vzorci (I) se zvolí buď z (i) -O-C=Ó.CR⁷R⁸R⁹; tj. esterů, kde

R⁷ je vodíkový atom, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, alkenyl o 2 až 7 atomech uhlíku, alkynyl o 2 až 7 atomech uhlíku, -(CR³R⁴)fOR¹⁰, -CF3, -F, nebo -CO₂R¹¹;

R⁸ a R⁹ jsou každý nezávisle vodíkový atom, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, nebo -(CR³R⁴)_fOR¹⁰; nebo R⁸ a R⁹ mohou být brány dohromady k vytvoření X;

R¹⁰ je vodíkový atom, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, alkenyl o 2 až 7 atomech uhlíku, alkynyl o 2 až 7 atomech uhlíku, trifenylmethyl, benzyl, alkoxymethyl o 2 až 7 atomech uhlíku, chlorethyl nebo tetrahydropyranyl; X je 5 - (2,2 - di - (alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku))[1,3]dioxanyl; 5 -(2-spiro(cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku))[1,3]dioxanyl; 4-(2,2-di-(alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku))[1,3]dioxanyl; 4-(2-spiro(cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku))[1,3]dioxanyl; (2-spiro(cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku))[1,3]dioxalanyl; nebo 4-(2-spiro(cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku))[1,3] dioxalanyl;

R³ a R⁴ jsou každý nezávisle vodíkový atom, alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, alkenyl o 2 až 7 atomech uhlíku, alkynyl o 2 až 7 atomech uhlíku, -CF₃, nebo -F; a φφ φφ φ φφφφ • φ φ φ φφφφ

- 27 φ φφφφφ φ φ · « · φ φ φ φφφφ φ φφ φφφφ φφ φφ φφ *· φφφφ f = Ο až 6; za podmínky, že R obsahuje alespoň jednu skupinu -(CR³R⁴)_fOR^{7 * * 10} nebo skupinu X;

nebo z ii) -OR¹ tj. etherů, kde R¹ je alkyl, thioalkyl, arylalkyl, hydroxyalkyl, dihydroxyalkyl, hydroxyalkylarylalkyl, dihydroxyalkylarylalkyl, alkoxyalkyl, acyloxyalkyl, aminoalkyl, alkylaminoalkyl, alkoxykarbonylaminoalkyl, acylaminoalkyl, arylsulfonamidoalkyl, allyldihydroxyalkylallyl a dioxolanylallyl, karbalkoxyalkyl, kde alk- nebo alkyl představují C₁_₆alkyl, rozvětvený nebo rovný, s výhodou C^alkyl, u něhož může být uhlíkový řetězec volitelně přerušen etherovou (-O-) vazbou; acyl představuje alkylkarbonyl a aryl má 6-10 uhlíkových atomů.
4. Způsob výroby podle nároku 3, vyznačující se tím, že R¹ se zvolí z hydroxyalkylu, hydroxyalkoxyalkylu, acylaminoalkylu a aminoalkylu.
5. Způsob výroby podle nároku 4, vyznačující se tím, že R¹ se zvolí z 2-hydroxyethylu; 3-hydroxypropylu; 2-[(2-hydroxy)ethoxyjethylu a 2-acetaminoethylu.
6. Způsob výroby podle nároku 2, v y z n a č u j í c í se t í m, že jako R ve sloučenině o vzorci (I) se používá 2,2-bis(hydroxymethyl)propionyloxyskupina nebo 2,2,5-trimethyl-[1.3-dioxan]-5-karbonyloxyskupina.
7. Způsob výroby podle nároku 6, v y z n a č u j í c í s e t í m, že krok (c) esterifikace se provádí za použití chloridu

2,2,5-trimethyl[1.3-dioxan]-5-karboxylové kyseliny nebo 2,4,6-trichlorbenzoylového směsného anhydridu 2,2,5-trimethyl[1.3-dioxan]-5-karboxylové kyseliny.
8. Způsob výroby podle nároku 7, vyznačující se provádí v rozpouštědle zahrnujícím methylenchlorid.

se t í m, že

- 28 Μ 44 ♦ 4 4 4

4 4 4

4 ·44

4 · •444 44

44 44 4 4 • 4 4

4 4 4 • 4 · 4

4 4 4 4 • 4 44

4 4 4 · • 4 4

4 4 4

4 4 4 «4 4444
9. Způsob výroby podle nároku 7 nebo 8, vyznačující se t í m, že se provádí při teplotě přibližně od -50 °C do 25 °C.
10. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 2 až 9, v y z n a č uj í c í se t í m, že jako kyselina v kroku (d) se použije zředěná anorganická kyselina.
11. Způsob výroby podle nároku 10, vyznačují cí se tím, že jako kyselina se použije kyselina sírová, chlorovodíková nebo fosforečná.
12. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 2 až 11,vyznačující se t i m, že jako kyselina v kroku (d) se používá přibližně 0,1 normální až 3 normální roztok kyseliny.
13. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 2 až 11, v y z n a č u j i c i se t i m, že jako kyselina v kroku (d) se používá přibližně 0,2 normální až 2 normální roztok kyseliny.
14. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 2 až 11,vyznačující se t í m, že jako kyselina v kroku (d) se používá přibližně 0,5 normální roztok kyseliny.
15. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 2 až 14, v y znáčů j i c i se t i m, že krok (d) se provádí v jednofázovém systému vodná kyselina/organické rozpouštědlo.
16. Způsob výroby podle nároku 15, vyznačující se tím, že jako organické rozpouštědlo se používá aceton.

- 29 99 99 » 9 9 9

9 9 9

9 999

9 9

99 9 9 99
17. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 2 až 16, vyznačuj í c í se t í m, že krok (d) se provádí při teplotě přibližně 25 °C nebo nižší.
18. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 2 až 16, v y z n a č u j í c í se t í m, že krok (d) se provádí při teplotě přibližně od -5 °C do 10 °C.
19. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 2 až 16, vyznačující se t í m, že krok (d) se provádí při teplotě přibližně od 0 °C do 5 °C .
20. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 1 až 19, v y z n a č u j í c í s e t í m, že 31 -silyiether připravený v kroku (b) má vzorec IA:

kde R', R a R' jsou stejné nebo rozdílné a zvolí se z alkylu o 1 až 6 atomech uhlíku, fenylu a benzylu.

• 4 * · 4 4 · ··

4· ·»··

- 30 • · 9 4 · 4 · ··· · 9 • · 4 · · 4 · · ·

444· 44 9« 44 ·· ··♦·
21. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 1 až 20, vyznačující se t í m, že jako silylační činidlo v kroku (a) se používá tri-(C_naž C₆) alkylsilylhalogenid.
22. Způsob výroby podle nároku 21,vyznačující se tím, že jako silylační činidlo v kroku (a) se používá trimethylsilylchlorid.
23. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 1 až 22, vyznačující se tím, že silylační krok (a) se provádí v inertním rozpouštědle v přítomnosti vhodné báze.
24. Způsob výroby podle nároku 23, vyznačující se tím, že jako báze se používá imidazol, 1-methylimidazol, trimethylamin nebo N, N-diisopropylethylamin.
25. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 1 až 24, vyznačující se t í m, že jako kyselina v kroku (b) se používá zředěná anorganická kyselina.
26. Způsob výroby podle nároku 25, vyznačující se tím, že jako kyselina se používá kyselina sírová, chlorovodíková nebo fosforečná.
27. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 1 až 26, vyznačující se t í m, že jako kyselina v kroku (b) se používá přibližně 0,08 normální až 2,5 normální roztok kyseliny.
28. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 26, vyznačující se t í m, že jako kyselina v kroku (b) se používá přibližně 0,1 normální až 1 normální roztok kyseliny.
29. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 26, vyznačující se t í m , že jako kyselina v kroku (b) se používá přibližně 0,5 normální

00 00

I « 0 1 » 0 « ··» · 0

- 31 00 • * 0 • 0

0000 00 roztok kyseliny.
30. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 1 až 29, vyznačující se t i m, že krok (b) se provádí ve dvoufázovém systému vodná kyselina/s vodou nemísitelné organické rozpouštědlo.
31. Způsob výroby podle nároku 30, v y z n a č u j i c i se tím, že jako organické rozpouštědlo nemísitelné s vodou se používá ethylacetát.
32. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 1 až 31, v y znáčů j i c í se ti m, že krok (b) se provádí při teplotě přibližně 25 °C nebo nižší.
33. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 1 až 31, vyznačující se t i m, že krok (b) se provádí při teplotě přibližně od -5 °C do 10 °C.
34. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 1 až 31, v y znáčů j i c i se t i m, že krok (b) se provádí při teplotě přibližně od 0 °C do 5 °C.
35. Způsob výroby rapamycinového 42-esteru s 2,2-bis-(hydroxymethyl)propionovou kyselinou, vyznačující se t i m, že zahrnuje kroky v nichž se:

a) rapamycin ponechá reagovat se silylačním činidlem k vytvoření 31,42-bis-silyletheru rapamycinu;

b) selektivně hydrolyzuje 42-silylether ve studené zředěné kyselině k poskytnutí 31 -silyletheru rapamycinu;

c) acyluje 31-silylether rapamycinu s chloridem 2,2,5-trimethyl[1,3-dioxan]-5-karboxylové kyseliny nebo 2,4,6-trichlorbenzoylovým • to to···

- 32 • · toto to ·♦ · to· o a ··· • · to··· · · ·· to • toto ·· ·« to to· a • to to* *· • to • to to ♦ to · směsným anhydridem 2,2,5-trimethyl[1.3-dioxan]-5-karboxylové kyseliny k poskytnutí rapamycinového 31-O-trimethylsilylether,42-esteru s 2,2,5-trimethyl[1,3-dioxan]-5-karboxylovou kyselinou; a

d) buď

i) selektivně hydrolyzuje 31-silylether ve studené zředěné kyselině k poskytnutí rapamycinového 42-esteru s 2,2,5-trimethyl[1.3-dioxanj-5-karboxylovou kyselinou a následně se na rapamycinový 42-ester s 2,2,5-trimethyl[1.3-dioxan]-5-karboxylovou kyselinou působí zředěnou kyselinou k poskytnutí 42-esteru s 2,2-bis-(hydroxymethyl)propionovou kyselinou; nebo ii) se na rapamycinový 31-O-trimethylsilylether,42-ester s 2,2,5-trimethyl[1.3-dioxan]-5-karboxylovou kyselinou působí zředěnou kyselinou k poskytnutí 42-esteru s 2,2-bis-(hydroxymethyl)propionovou kyselinou.
36. Způsob výroby podle nároku 35, vyznačující se tím, že acylační krok (c) se provádí při teplotě nižší než 0 °C.
37. Způsob výroby 42-O-(2-hydroxy)ethylrapamycinu, vyznačující se t í m, že zahrnuje kroky, v nichž se:

a) rapamycin ponechá reagovat se silylačním činidlem k vytvoření 31,42-bis-siIyletheru rapamycinu;

b) selektivně hydrolyzuje 42-silylether ve studené zředěné kyselině k poskytnutí 31-silyletheru rapamycinu;

c) 31-silylether rapamycinu ponechá reagovat s ethylenglykolovým ekvivalentem, obsahujícím chránící skupinu v kyselině labilního hydroxylu, chráněnou na jednom konci ethylenglykolového ekvivalentu a uvolnitelnou skupinu, vhodnou k alkylaci hydroxylové skupiny jako druhého konce ethylenglykolového ekvivalentu;

- 33 19 11 11 1911 19 19

1111 111 1111 • * · · 1 · · 19 1 φ φ

Φ Φ φφφφ φΦφ φφφφ ·· φφ ΦΦ · φφ ΦΦΦΦ

d) hydrolyzují chránící skupiny v poloze 31 a na hydroxyethylu v poloze 42 za mírně kyselých podmínek.
38. Způsob výroby podle nároku 37, vyznačující se tím, že jako silylační činidlo se používá trialkylsilylhalogenid.
39. Způsob výroby podle nároku 38, v y z n a č u j í c í se tím, že jako silylační činidlo se používá chlortrimethylsiian.
40. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 37 až 39, vyznačující se t í m, že jako ethylenglykolový ekvivalent se používá 2-(t-buty Idimethylsilyl )oxyethyltriflát).
41. Způsob výroby podle nároku 40, vyznačující se tím, že jako kyselina se v krocích (b) a (d) používá kyselina sírová.
42. Sloučenina, kterou je 31 -O-silylether rapamycinu.
43. Sloučenina podle nároku 42, mající vzorec IA nebo IB:

I

I

- 34 44 44

4 4 4 4 ·· 4

4 4 4 4*

4 4 •444 44
44 444 4

4 4 4

4 4 4

4 4 4

4 4 4 4

4 4 * 4

44 44

4 4 4 4

4 4 4 • 44

4 4 4

44 4444 a v těchto vzorcích je

R esterová nebo etherová skupina, a R¹, R a R' jsou stejné nebo odlišné, zvolené z alkylu o 1 až 6 uhlíkových atomech, fenylu a benzylu.

44. Sloučenina podle nároku 42, kde R odpovídá definici, uvedené v nároku 3.
45. Sloučenina podle nároku 42 nebo 43, kde 31-O-silyletherem je tri-(C₁-C₆)alkylsilylether.
46. Sloučenina podle nároku 42, kterou je 31-O-trimethylsilylether rapamycinu.
47. Sloučenina podle nároku 42, která má vzorec (D) toto ·♦«·

- 35 to· toto • * · · • to to • · ·· • · toto·· toto to · • to t · ·· «

« to · ·· «to • ·· · • to · « to · · • · · toto totototo kde R', R a R' jsou stejné nebo odlišné, zvolené z alkylu o 1 až 6 uhlíkových atomech, fenylu a benzylu.
48. Sloučenina podle nároku 42, kterou je rapamycinový 31-O-trimethylsilylether,42 ester s 2,2,5-trimethyl[1.3-dioxan] - 5-karboxylovou kyselinou
49. Způsob výroby sloučeniny o vzorci (C):

• φ φ · φ φ · • φφφφ • · ···· φφ

- 36 φφ φφφφ • φ φ φ · φ • φ · • φ φ · • Φ φ· φφ ·· φ φ φ φ φ φ · φφφ φφφ φφ φφφφ vyznačující se tím, že zahrnuje krok, v němž se hydrolyzuje sloučenina o vzorci (B):

* [B] kde R₂ je vodík nebo -SiR'RR', přičemž R', R a R' jsou stejné nebo odlišné, zvolené z alkylu o 1 až 6 uhlíkových atomech, fenylu a benzylu; za použití zředěné kyseliny sírové.
50. Způsob výroby podle nároku 49, vyznačující se tím, že se provádí za použití 1 normálního roztoku až 3 normálního roztoku kyseliny sírové.
51. Způsob výroby podle nároku 49 nebo 50, vyznačující se t í m, že se provádí za teploty -5 °C až +10 °C.
52. Způsob výroby podle kteréhokoliv z nároků 49 až 51, v y z n a č u j í c í se t í m, že se provádí v přítomnosti tetrahydrofuranového rozpouštědla.