CZ20021265A3

CZ20021265A3 - Nové deriváty fusidové kyseliny

Info

Publication number: CZ20021265A3
Application number: CZ20021265A
Authority: CZ
Inventors: Tore Duvold; Daehne Welf Von
Original assignee: Leo Pharmaceutical Products Ltd. A/S (Lovens Kemis
Priority date: 1999-10-15
Filing date: 2000-10-12
Publication date: 2003-02-12
Also published as: DE60003074T2; RU2257391C2; ATE241640T1; HK1050203A1; BR0014751A; AU777352B2; PL203312B1; ES2199867T3; KR20030022760A; JP2003512386A; EP1232173A1; CA2387600A1; US6593319B1; EP1232173B1; NZ518034A; DK1232173T3; CN1157404C; DE60003074D1; KR100795321B1; HUP0203454A2

Description

Nové deriváty fusidové kyseliny

Oblast techniky

Vynález se týká nové řady derivátů 17,20-dihydrofusidové kyseliny, jejich soli a jejích snadno hydrolyzovatelných esterů, přípravy těchto sloučenin, farmaceutických kompozic obsahujících tyto sloučeniny a použití těchto sloučenin v medicíně. Tyto sloučeniny zejména projevují antimikrobiální aktivitu, tedy jsou užitečné pro léčbu infekcí. Sloučeniny podle předloženého vynálezu se mohou použít v systémově léčbě infekcí a při topické léčbě infekcí kůže a očí.

Dosavadní stav techniky

Antibakteriální vlastnosti fusidové kyseliny jsou dobře známy. Rovněž je známo, že strukturní variace mohou způsobovat významnou nebo úplnou ztrátu této aktivity (Godtfredsen et al., J. Med. Chem., sv. 9, str. 15-22, 1966). Až dosud se obecně akceptovalo, že dvojná vazba mezi atomy uhlíku C-17 a C-20, která spojuje postranní řetězec s tetracyklickým kruhovým systémem, byla důležitá pro jakoukoliv antibakteriální aktivitu. Redukce dvojné vazby mezi C-24 a C-25 fusidové kyseliny na jednoduchou vazbu má za následek nepatrný účinek na antibakteriální aktivitu molekuly, zatím co přídavná redukce dvojné vazby mezi C-17 a C-20 tetrahydrofusidové kyseliny způsobuje téměř úplnou ztrátu aktivity. Dva epimery v řadě tetrahydrofusidových kyselin se dříve připravovaly katalytickou hydrogenací fusidové kyseliny nebo její izomerní lumi-fusidové kyseliny s konfiguracemi 17(R),20(S) a 17(R),20(R) (Daehne et al., • ·

Adv. Appl. Microbiol., 25, str. 95-146, 1979 a zde citované odkazy).

Podstata vynálezu

Cílem vynálezu je poskytnutí polosyntetických analogů fusidové kyseliny s antibakteriální aktivitou. Tohoto cíle se dosahuje prostřednictvím sloučenin podle předloženého vynálezu náležejících do řady dihydrofusidových a tetrahydrofusidových kyselin s důležitou konfigurací 17(S),20 (S), které projevují in vitro vysokou antimikrobiální aktivitu, výhodnou stabilitu a farmakokinetičké vlastnosti, v důsledku čeho se sloučeniny podle vynálezu mohou použít při léčbě infekcí u lidí a zvířat.

Předložený vynález poskytuje sloučeniny obecného vzorce

Ia:

kde

Qi, Q2 a Q3 jsou stejné nebo odlišné a nezávisle představují skupinu -(CO)-, -(CHOH)-, -(CHOŘ)-, -(CHSH)-, -(NH)-, -(CHNH₂)- nebo -(CHNHR)-,' kde R představuje alkylový zbytek s 1 až 4 atomy uhlíku nebo acylový zbytek s 1 až 4 atomy uhlíku a kde Q₂ a Q3 mohou rovněž nezávisle představovat s kupinu -(CH₂) -;

• · • · · · ··

Y představuje vodík, hydroxy, alkylový zbytek s 1 až 4 atomy uhlíku nebo acylový zbytek s 1 až 4 atomy uhlíku;

A představuje atom kyslíku nebo síry;

Rx představuje alkylový zbytek s 1 až 4 atomy uhlíku, olefinickou skupinu se 2 až 4 atomy uhlíku, (Ci-Ce) acylovou skupinu, (C3-C7) cykloalkylkarbonylovou skupinu nebo benzoylovou skupinu, Ri je popřípadě substituován jedním nebo více atomy halogenu a/nebo skupinou hydroxy, alkoxy nebo azidc;

a jejich farmaceuticky přijatelné soli a snadno hydrolyzovatelné estery.

Tečkované čárky mezi C-l a G-2 a/nebo C-24 a C-25 ve vzorci Ia a dalších vzorcích zde znamenají, že tyto atomy jsou spojeny dvojnou vazbou nebo jednoduchou vazbou.

Následuje podrobný popis vynálezu.

Přednostními sloučeninami podle vynálezu jsou sloučeniny vzorce I

kde

Qi a Q₂ jsou stejné nebo odlišné a oba představují skupinu -(CHOH)-, -(CO)- nebo -(CHSH)-;

A představuje atom kyslíku nebo síry;

Rx představuje alkylový zbytek s 1 až 4 atomy uhlíku, olefinickou skupinu se 2 až 4 atomy uhlíku, (Οχ-Οβ) acylovou ·· ·· · · ·· ·· • * « ·» · · · · · ···· · · ·· · • · · · « ···· · ··· ····· ···· ·· ··· *·· ·· ···· skupinu, (C1-C7) cykloalkylkarbonylovou skupinu nebo, benzoylovou skupinu, Ri je popřípadě substituován jedním nebo více atomy halogenu a/nebo skupinou hydroxy, alkoxy nebo azido;

a jejich farmaceuticky přijatelné soli a snadno hydrolyzovatelné estery.

Přednostně jsou Q_x a Q2 zvoleny ze souboru zahrnujícího -(CO)- a -(CHOHj-. Více přednostními sloučeninami podle vynálezu jsou sloučeniny vzorce I, kde Qi a Q₂ oba představují skupinu HO nebo Qi nebo Q₂ představuje -(CO)-; A představuje kyslík; R_x představuje (C1-C4) alkylovou skupinu popřípadě, substituovanou jedním nebo více substituenty zvolenými ze souboru zahrnujícího skupinu azido, hydroxy a halogen zvolený ze souboru zahrnujícího fluor, chlor a brom nebo Ri představuje acylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo benzoylovou skupinu, přičemž obě jsou popřípadě substituovány jedním nebo více atomy halogenu přednostně zvolenými ze souboru zahrnujícího fluor a chlor. Ri je přednostně zvolen ze souboru zahrnujícího ethyl, 2,2,2-trifluorethyl, 2,2,2-tri-chlorethyl, 2-azidoethyl, 2-hydroxyethyl, propyl a isopropyl, 1,3-difluorisopropyl, acetyl, propionyl, chloracetyl a trifluoracetyl nebo je Ri zvolen z přednostního souboru zahrnujícího ethyl, 2,2,2-trichlorethyl, 2-azidoethyl, isopropyl, terč.butyl a acetyl. Přednostní jsou rovněž sloučeniny vzorce I a Ia, ve kterých je vazbou mezi C-24 a C-25 dvojná vazba.

Příklady sloučenin podle vynálezu, které se mohou připravovat způsoby popsanými níže, jsou:

(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

17(S),20(S),24,25-tetrahydrofusidová kyselina, ll-dehydro-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

3-dehydro-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

4

4 4 4

4*4 44 44 ··«

4444 · · ·· ·

444· 4 4 · · 4 · b ·.· ·· ···

4444 44 444 «44 ·· 444#

16-deacetoxy-16p-propionyloxy-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16p-(3'-chlorpropionyloxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16p-(2'-methylpropionyloxy)-17(S), 20(S)-dihydrofusidová kyselina, l'6-deacetoxy-16p-cyklopropylkarbonyloxy-17 (S) ,20 (S) -dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16p-chloracetoxy-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16p-bromace-toxy-17 (S) ,20 (S) -dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16p-benzoyloxy-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16p-(4'-fluorbenzoyloxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16p-cyklohexylkarbonyloxy-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16p-akryloyloxy-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16p-isopropylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16p-ethylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16p-(2', 2 ', 2 '-trichlorethylthio)-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16P~terc.butylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16p-methoxymethylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina, ·· ·· • ♦ ♦ • · · · • · « • · « • ·· · · · ·«

16-deacetoxy-16p-isopropylthio-17(S),20(S);24,25-tetrahydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16p-acetyíťhio-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16p-benzoylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16P~ethoxy-17 (S),20 (S)-dihydrofusidová kyselina, 16-deacetoxy-16p-(2 ', 2', 2'-trifluorethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16p-propoxy-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16p-isopropoxy-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16p-(1',3'-difluorisopropoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16p-methoxymethoxy-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16p~(2',2',2'-trichlorethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16p~(2'-azidoethoxy)-17(S) ,20(S)-dihydrofusidová kyselina,

16-deacetoxy-16p-(2'-hydroxyethoxy)-17(S), 20(S)-dihydrofusidová kyselina a jejich farmaceuticky přijatelné soli a snadno hydrolyzovatelné estery.

Na rozdíl od přírodní fusidové kyseliny 1, ve které jsou C-17 a C-20 spojeny dvojnou vazbou, všechny sloučeniny popsané v tomto textu a představované vzorcem I a la mají mezi C-17 a C-20 jednoduchou vazbu. Konfigurace těchto dvou asymetrických atomů uhlíku je 17(S) a 20 (S). Tento epimer je jedním ze čtyř možných epimerů odlišujících se pouze • « · · · · · · «··· ·· ··· ··· ·♦ *··* konfigurací C-17 a C-20 a biologické testy ukázaly, že tento má být jediným epimerem projevujícím velmi silnou aktivitu.

Sloučeniny podle vynálezu se mohou použít samotné nebo ve formě solí nebo snadno hydrolyzovatelných esterů (definovaných v tomto textu). Solemi těchto sloučenin ,j sou zejména farmaceuticky přijatelné soli, jako jsou například soli alkalických kovů a soli kovů alkalických zemin, například sodné, draselné, hořečnaté nebo vápenaté soli, a rovněž stříbrné soli a soli se zásadami, například s amoniakem nebo vhodnými netoxickými aminy, jako jsou například nižší alkylaminy, například triethylamin, hydroxy-nižší alkylaminy, například 2-hydroxyethylamin, bis-(2-hydroxyethyl)amin, cykloalkylaminy,.....například dicyklohexylamin, nebo benzylaminy, například Ν,Ν'-dibenzylethylendiamin a dibenzylamin. Stříbrné soli těchto sloučenin jsou užitečné zejména pro lokální léčbu.

(

Výraz „snadno hydrolyzovatelné estery se v tomto popisu používá pro označení alkanoyloxyalkyl-, aralkanoyloxyalkyl-, aroyloxyalkyl-, například acetoxymethyl-, pivaloyloxymethyl-, benzoyloxymethylesterů a příslušných 1'-oxyethylderivátů nebo alkoxykarbonyloxyalkylesterů, například methoxykarbonyloxymethylesterů a ethoxykarbonyloxymethylesterů a příslušných 1'-oxyethylderivátů, nebo laktonylesterů, například ftalidylesterů, nebo dialkylaminoalkylesterů, například diethylaminoethylesterů. Výraz „snadno hydrolyzovatelné estery zahrnuje in vivo hydrolyzovatelné , estery sloučenin podle vynálezu. Takové estery se mohou připravit za použití způsobů známých odborníkům v tomto oboru, srovnej GB patent č. 1 490 852, který je tímto začleněn pomocí, odkazu.

Jak se používá v tomto opisu, pokud není uvedeno jinak, následující výrazy mají následující významy, srovnej rovněž * « · · ♦· • · · * · · · • · · · · • · · · · · • · · · · • · · ··· ·* ♦···

IUPAC Recommendations 1994 http://www.chem.qmw.ac.uk/iupac/class/.

„Alkyl znamená jakoukoliv jednovaznou skupinu odvozenou od alkanu odnětím atomu vodíku z kteréhokoliv atomu uhlíku a zahrnuje podskupiny normálních alkylových skupin (n-alkylů) a primárních, sekundárních a terciárních alkylových skupin se specifickým počtem atomů uhlíku,- například (C1-C4) alkyl, (C1-C3) alkyl, (Ci-C₂) alkyl, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sek.butyl a terč.butyl. Alkan označuje. acyklický rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodík obecného vzorce C_nH_2n+₂, kde n představuje celé číslo, a tedy alkan obsahuje pouze atomy vodíku a nasycené atomy uhlíku.

„Olefinická skupina označuje přímý nebo rozvětvený acyklický uhlovodík s jednou nebo více dvojnými vazbami uhlík-uhlík s E- nebo Z-stereochemií, kde je to vhodné, a se specifickým počtem atomů uhlíku. Tento výraz zahrnuje například (C₂-C4) olef inickou skupinu, přednostně (C₂-C₄) alkenyl; (C₂-C₃) olefinickou skupinu, přednostně (C₂-C₃)alkenyl; vinyl; allyl; 1-butenyl; 2-butenyl; a 2-methyl-2-propenyl. Dále „olefinická skupina označuje přímý nebo rozvětvený alkinyl s alespoň jednou trojnou vazbou. Tento výraz by zahrnoval například krotyl a propargyl. Přednostní jsou olefinické skupiny pouze s jednou dvojnou vazbou uhlíkuhlík, v tomto textu nazývané alkenyl.

„Aryl označuje skupiny odvozené od monocyklických a polycyklických aromatických uhlovodíků odnětím atomu vodíku z kruhového atomu uhlíku, například o-tolyl, fenyl, naftyl. Počet atomů uhlíku v arylové skupině je obvykle 6, 7, 8, 9 nebo 10.

„Acyl označuje zbytek vzorce R-CO-, kde R je alkyl definovaný výše, například (Ci-C₆)alkyl.

• · · » * • ♦ · » y ·’·· · 9 · · ·

9999 99 999 «·· ·· 9999 „Alkoxy označuje zbytek vzorce -0R, kde R je alkyl definovaný výše, například (C1-C5)alkoxy, (C1-C3)alkoxy, methoxy, ethoxy, n-propoxy, terc.butoxy apod.

„Halogen znamená stejné nebo odlišné skupiny zvolené ze souboru zahrnujícího fluor, chlor, brom a jod; užitečnější v předložených sloučeninách je fluor, chlor a brom.

„Alkanoyl označuje zbytek vzorce -R-CO-, kde R je alkyl definovaný výše, například (Ci-C₈)alkyl, acetyl, propionyl, isopropionyl, butyryl. „Aralkanoyl označuje zbytek vzorce -R (CH₂) η-CO-, kde R je aryl definovaný výše a n je celé číslo, přednostně zvolené ze souboru zahrnujícího 1, 2, 3 a 4. „Aroyl označuje R-CO-, kde R je arylová skupiny definovaná výše.

„Alkanoyloxyalkyl nebo „aroyloxyalkyl označuje zbytek vzorce -CH₂-O-CO-R, kde R představuje (Ci-C₆) alkyl nebo (C6-Cs)aryl. Aryl a alkyl jsou definovány výše.

„Alkoxykarbonyl a „aryloxykarbonyl označuje skupinu -CO-O-R nebo „acyloxy- označuje skupinu R-CO-O-, kde R je alkyl nebo aryl definovaný výše.

Ve sloučeninách podle vynálezu se nachází několik chirálních center v důsledku přítomnosti asymetrických atomů uhlíku. Přítomnost několika asymetrických atomů uhlíku způsobuje, že existuje jistý počet stereoizomerů s R- nebo Skonfigurací na každém chirálním centru. Má se rozumět, že obecný vzorec I a Ia a (pokud není uvedeno jinak) všechny ostatní vzorce v tomto popisu zahrnují všechny takové stereoizomery v čistém stavu a jako směsi (například stereoizomerní směsi) kromě případů, kdy je konfigurace jednoznačně určena.

Ve sloučeninách vzorce I a Ia je obecně přednostní stereochemie následující: když Qi a Q₂ označují skupinu

IU ♦ « · « • · ♦ ♦ · ·* • · ··

s.

HO'' , konfigurace na C-3 a C-ll ve sloučeninách vzorce

I a la je 3a a 11a. Atom C-16 nesoucí skupinu A má S-konfiguraci, zde označenou 16β. Ve vzorcích zde jednoduché čárky znázorňují vazby přibližně v rovině výkresu; vazby k atomům nad rovinu jsou znázorněny tučným klínem vycházejícím od atomů v rovině výkresu u úzkého konce klínu; a vazby k atomům pod rovinou jsou znázorněny krátkými rovnoběžnými čárkami (tvořícími klín). Substituenty nad rovinou jsou označeny jako β a znázorněny jako tučný klín, substituenty pod rovinou jsou označeny jako a a znázorněny krátkými rovnoběžnými čárkami (tvořícími klín).

Biologická aktivita

Výzkumy in vitro dokázaly vysokou účinnost sloučenin podle vynálezu proti některým baktériím včetně stafylokoků, streptokoků, korynebaktérií a mykobaktérií. Biologické testy ukázaly, že antibaktertiální aktivita 17 (S),20(S)-dihydrofusídové kyseliny (10) (sloučeniny 101) je srovnatelná s aktivitou fusidové kyseliny (1), jak je možno vidět v tabulce 1 na základě hodnot MIC těchto dvou sloučenin vůči jistému počtu baktérií. Biologické testy se prováděly na mikrotitračních plotnách za použití kapalného média obsahujícího masový bujón.

Fusidová kyselina (S),20(S)-Dihydrofusidová kyselina

Tabulka 1

Název baktérie/kmene:	Poznámka .	..Hodnoty MIC (koncentrace v gg/mlpotřebné pro 90% inhibici)
'Sloučenina 101-	Fusidová kyselina (1)
S. aureus/i Aus-pé	FusS, MRSA	1 ..	1
S. aureusíATCC 29213	FusS, MSSA	, ¹	' 1
5. aureus!22 DK	FusS.MSSA	1	0.5
S. aureus/54 USA-br	FusR, MSSA	8	8
E. faecalis/V583 P.Gour.	VanR	¹⁶	16
C. diphteria/62QQ1		0.063	0.063
Streptococcus -gr.A/67011		64	16
Sireptococcus -gr.B/61		>64'	32
Streptococcus -gr.C/68		4	2
Streptocočcus -gc.G/59		8	4
Staphylococcus/291-2*	FusS	¹ ’	1
Staphylococcus/379-2*	FusR	64	64 .
P. acnesl 1060		0.5	0.125
N. gonorrhoea/Cl		4 ·	1
N. meningitidisUCl		1	0.25
M. tuberculosisfP. 498		16	' >16

A* ·« A A AA A A

AAA AA AA AAA

AAAA A A AA · • AAA A · · · « · i Z AAA A · A AAA

AAAA AA AAA «ΑΑ A· ·»«·

FusS - senzitivní na fusidovou kyselinu; FusR - rezistentní na fusidovou kyselinu; MRSA - ·Staphylococcus aureus rezistentní na methicilin; MSSA - Staphylococcus aupeus senzitivní na methicilin; VanR - rezistentní na vankomycirt;

* koaguláza negativní.

Rovněž jiné sloučeniny podle vynálezu projevují vysokou, in vitro aktivitu vůči některým baktériím. Antibakteriální aktivita některých z těchto sloučenin ve srovnání s fusidovou kyselinou vyplývá z z tabulky 2 znázorňující hodnoty MIC pro sloučeniny podle vynálezu. Použitou metodu doporučuje European Pharmacopoeia 3. vyd. (1997) pro testování účinnosti antibiotik. Je to agarová difúzní metoda, při které se stejné objemy testovaného_roztoku přidávají do dutin v agsru. Inhibiční oblasti jsou funkcí koncentrace použitého analogu fusidové kyseliny. Všechny zkoušky se provádějí s fusidovou kyselinou (1) jako referenční sloučeninou. Výsledky v tabulce 2 se odlišují od výsledků v tabulce 1 v důsledku odlišných použitých experimentálních metod.

Tabulka 2

		Hodnoty MIC (koncentrace v	pg/ml potřebné pro 90% inhibici);
Kmen	Fusidová kyselina 101 (1)	102	105	113	123	128
5. aureus ATCC6538P	0.013	0.002	0.016	0.22	16	0.02	0.26
S. aureuS* Leoid. CJ232	0.012	0.003	0.12	0.24	16	0.005	>64
S. aureus** Leoid CJ234(R)	o.oi -	0.001	0.009	0.063	16	0.007	>64
S. aureus A.7CC2971	0.01	0.001	0.02 .	0.19	16	0.02	0.19
Střep, epidermis A. ATCC12228	0.01	0.001	0.015	0.08	>64	0.5	0.5
Střep, faecalis ATCC10541	4.9	3.7	MIC>64	>64	>64	16	16
Štrep. faecíum*** Leoid. El 19(P).	2.7	1.2	3.9	3.9	>64	16	16
Střep. sp. Gr.B Leo id. EF6	4:9	3.5	3.4	>64	4	16	16

'MRSÁ * *rez.isten_tní na MRS A a rifampicin * * *rezistentní na penicilín »4 * 4 ·· 44 • ♦ · ·· ·· 4 4 4 •··· 4 · 4 4

IJ • 44 · · · · 4 • 444 ·4 444 444 ·· ···

Dále mají sloučeniny podle vynálezu několik výhod ve srovnání s příslušnými sloučeninami obsahujícími dvojnou vazbu 17,20, jako například fusidová kyselina:

- Sloučeniny vzorce I a la jsou chemicky stabilnější, možná v důsledku nižší kyselosti nasycené vazby 17,20 a nepřítomnosti konjugace karboxylové kyseliny s dvojnou vazbou uhlíkuhlík. ..··,

- Sloučeniny vzorce I a lase při vystavení slunečnímu záření méně snadno degradují.

- Sloučeniny vzorce I á la jsou stabilnější v roztoku; roztok Ά sloučeniny vzorce 10, znázorněný níže, v ethanolu skladovaný při 0 °C si uchovává > 80 % počáteční aktivity, přičemž příslušný, roztok fusidové kyseliny si uchovává pouze přibližně 70 % počáteční aktivity.

- Sloučeniny vzorce Ί a la jsou více lipofiiní, a tedy . vhodnější pro topické přípravky.

- Polosyntetické sloučeniny vzorce I se mohou připravit z nezpracovaného materiálu obsahujícího relativně surovou fusidovou kyselinu, který jinak není vhodný pro lékařské účely.

následující standardní zkratky:

V tomto popisu se používají

AcOH	octová kyselina
Ac₂0	acetanhydrid
Ac	acetyl
Bu	n-butyl
^ťBu, tBu	terč.butyl
Et	ethyl
ether	diethylether
Me	methyl
MOM	methoxymethyl
MOMO	methoxymethyl-0
Ph	fenyl

* ·4 * · 44 44

444 44 ·4 444

4494 9 9 44 4 • 4 44 4 4 4 « 4 4 • 4 4 4 4 4 4 4 •444 44 444 444 4» 4444

TBAF	tetra-n-butylamoniumfluorid
TBS	terč.butyldimethylsilyl
TBSC1	terč.butyldimethylsilylchlorid
THF .	tetrahydrofuran
TLC	chromatografie na tenké vrstvě
TMS	trimethylsilyl
Přípravy	sloučenin podle vynálezu

17(S),20(Sj-Dihydrofusidová kyselina (10) se může připravit z přírodní fusidové kyseliny postupem podle schématu 1 znázorněného níže: Fusidová kyselina (1) se nejdříve převede na lakton (2) deaoetylací a následnou acidífikací. Dvojná vazba mezi C-17 a C-20 v (2) se redukuje působením NaBH₄ ve vodném roztoku methanolu cis-atakem z α-strany molekuly za vzniku laktonu (3). Inverze na C-20 se dosáhne kvantitativně zahříváním laktonu (3) v přítomnosti 28% vodného roztoku hydroxidu sodného. Hydroxyskupiny na C-3 a C-ll v laktonu (4) se potom chrání jako methoxymethylethery (MOM). Redukcí chráněného laktonu (5) působením LiAlH₄ se získá diol (6), který se nejdříve chrání selektivně na primární hydroxyskupině na C-21 pomocí difenylmethylsilylskupiny a potom acetylací hydroxyskupiny na C-16. Po desilylaci (7) za použití tetrabutylamoniumbromidu (TBA⁺F~) pufrovaného octovou kyselinou se může volná hydroxyskupina v (8) oxidovat nejdříve na aldehyd působením Dessova-Martinova periodinanu a dále na karboxylovou kyselinu (9) působením chloritanu sodného. Sloučenina (10) se získá v posledním stupni odštěpením skupin MOM v (9) reakcí s trimethylsilylbromidem (TMSBr) v bezvodém dichlormethanu.

Sloučeninou vzorce 10 je sloučenina podle vynálezu (sloučenina 101) a dále obecná výchozí sloučenina pro analogy odpovídající vzorci I, jak se popisuje dále.

1b

Schéma 1 «« φφ • · · • φφφ • φφφ ·· φ

Φ ΦΦ ¹ ‘ φ φ φΓ ·

ΜΟΜΟ • Φ ··

4 · 9« « 9 99 9 · «·« 99 49 * 4 ·

4449 9 9 99 9

9 94 4. '9. .49 4 9

449 9 9 949

9499 49 499 44· 44 4444

a) aq. NaOH v EtOH, reflux; AcOH, b) aq. NaBH₄ v MeOH; AcOH, c) aq. NaOH (28%) v EtOH, reflux, d) diisopropylethylamin, MOMC1, CH₂C1₂, reflux; e) LiAlH₄, THF, reflux; f) (i) Ph₂MeSiCl, Et₃N, CH2CI2, 0 °C; (ii) Ac₂O/pyridin; g) TBA⁺F, AcOH, THF, reflux; h) (i) Dessův-Martinův periodinan, CH2Cl₂/pyridin; (ii) NaClO₂, terc.BuOH; i) TMSBr, CH₂C1₂.

Sloučenina 101 se může alternativně připravit za použiti TBS-chránicí skupiny pro maskování 3-hydroxyskupiny ve sloučenině 4 za ponechání nechráněné 11-hydroxyskupiný. Sloučenina 11 chráněná .pomocí TBS (schéma 2) potom reaguje způsobem znázorněným ve schématu 1. Konečného odštěpení TBSskupiny se dosáhne reakcí sloučeniny 16 se zředěnou kyselinou fluorovodíkovou za vzniku sloučeniny vzorce 10 (sloučenina 101) . ·.......·<

Schéma 2 ·· ·· » 9 9 • 9 · 4 • 9 9 • 9 4

a) imidazol, TBSCl, CH2CI2; b) LÍAIH4, THF, reflux; i)

Ph₂MeSiCl, Et₃N, CH₂C1₂, 0 °C; d) Ac20/pyridin; e) TBA⁺F, AcOH,

THF, reflux; f) (i) Dessův-Martinův periodinan, CH₂Cl₂/pyridin; (ii) NaC10₂, terc.BuOH; g) aq. HF, acetonitril/THF.

Sloučeniny obecného vzorce I se mohou připravit způsobem zahrnujícím první stupeň, ve kterém sloučeniny obecného vzorce II se převádějí na 16-brom-sloučeniny vzorce III jak se znázorňuje níže.

kde Qi' a Q₂' představují skupinu -(CO)-, skupinu jjq nebo skupinu

R₃ představuje běžnou chránící skupinu, jako je například alkanoyl, aralkanoyl, alkanóyloxyalkyl nebo aroyl, nebo trisubstituovaný silylový zbytek substituovaný alkylovou, oxyalkylovou, arylovou nebo oxyarylovou skupinou; R₂ je přímý nebo rozvětvený alkylový zbytek s 1 až 6 atomy uhlíku, například methyl, ethyl, terč.butyly-nesubstituovaný nebo substituovaný aralkylový zbytek, například benzyl, nitrobenzyl, alkanoylmethylový nebo aroylmethylový zbytek, například acetonyl nebo fenacyl> alkanoyloxyalkýlový nebo aroyloxyalkylový zbytek, například acetoxymethyl, pivaloýloxymethyl nebo benzoyloxyměthyl, alkoxymethylový zbytek nebo iy ·< ·»· · • · · ·· »··> * » · · s · • 9 · · • ••9 99 9*9

9*9 *♦

9 · • * • 99

9999 kyanomethylový zbytek, silylový zbytek substituovaný alkylovou, alkenylovou, oxyalkylovou, oxyalkenylovou, arylovou nebo oxyarylovou.skupinou, například triethylsilyl, triisopropylsilyl, difenylmethylsilyl, terč.butyldimethylsilyl, terc.butyldifenylsilyl, terc.butoxydifenylsilyl; tečkovaná čárka mezi C-24 a C-25 má výše uvedený význam.

Konverze se provádí reakcí sloučeniny vzorce II s tetrabrommethanem/trifenylfosfinem nebo s N,N-dimethylformimidat-bromidem v inertním rozpouštědle, jako je například ether, tetrahydrofuran nebo dimethylformamid, a při teplotě místnosti nebo nižší teplotě (viz Daehne, W. and Rasmussen, P. 1975, GB patent č. 1 523 803).

Sloučeniny vzorce II se připravují ze sloučenin ve schématu 1 způsoby známými z literatury (viz GB patent č. 1 490 852 a GB patent č. 1 523 803) nebo podobnými způsoby. Výchozí sloučeniny vzorce III se mohou připravit například ze sloučeniny vzorce 10 nebo výhodněji ze sloučeniny 9, jak se znázorňuje ve schématu 3.

Schéma 3

·· ·· • · · • · · ·

9 9 • ·

2U • · • · 99 9 • · · • · · · • · · · ··· 999

a) W,N-dimethylformamid-bis-terc.butylacetát, benzén, reflux;

b) 2N vodný roztok NaOH, EtOH; reflux, c) CBr₄, PPh₃, CH₂C1₂.

V následujícím stupni meziprodukty vzorce III reagují se sloučeninami vzorce IV za inverze konfigurace na C-16 a za vzniku sloučenin vzorce V:

výše uvedený význam. Konverze se provádějí podle postupů známých z- literatury (viz Daěhne, W. and Rasmussen, P. 1975, GB patent č. 1 523 803). Když A ve vzorci V představuje kyslík a Ri neznamená acyl, reagující sloučeniny vzorce IV se přednostně používají jako rozpouštědla a reakce se provádí v přítomnosti soli stříbra nebo rtuti, například uhličitanu •stříbrného, trifluoracetátu stříbrného nebo octanu rtuťného, nebo.zásady, jako je například uhličitan draselný,hydrogenuhličitan sodný nebo (C1-C5)alkoholát sodný, přednostně methoxid sodný nebo ethoxid sodný, a při teplotě místnosti nebo při nepatrně zvýšené teplotě. Pokud Á ve vzorci V představuje síru a Ri neznamená acyl, reakce se provádí v inertním organickém rozpouštědle,' přednostně v ethanolu nebo dimethylformamidu,v přítomnosti zásady, jako je například hydroxid draselný nebo hydrid sodný,, a při teplotě místnosti nebo při nižší teplotě, než je teplota místnosti • nebo při nepatrně zvýšené- teplotě.

• ·

Když A ve vzorci V představuje kyslík a R_x představuje acyl, reakce se provádí s příslušnými stříbrnými solemi sloučenin vzorce IV v inertním rozpouštědle, například v benzenu, a při teplotě místnosti nebo při nepatrně zvýšené teplotě. Když A ve vzorci V představuje síru a Ri představuje acyl, reagující sloučeniny vzorce IV se přednostně používají jako jejich draselné nebo sodné soli a reakce se provádí v inertním rozpouštědle, jako je například dimethylformamid, a při teplotě místnosti.

Sloučeniny vzorce V, kde A představuje kyslík a R_xpředstavuje (Ci-Ce)acyl nebo benzoyl, se mohou připravit ze sloučenin vzorce II reakcí s reaktivním derivátem karboxylové kyseliny vzorce IV, jako je například chlorid kyseliny nebo anhydrid kyseliny. Reakce se provádí v přítomnosti zásady, přednostně pyridinu, v inertním rozpouštědle, jako je například dimethylformamid nebo pyridin, a pří teplotě místnosti nebo při nižší teplotě, .než je teplota místnosti.

V posledním stupni se sloučeniny vzorce V mohou převádět na sloučeniny vzorce I hydrolýzou v přítomnosti zásady, jako je například hydroxid sodný nebo draselný nebo uhličitan sodný nebo draselný, ve vodném roztoku methanolu nebo ethanolu, nebo v přítomnosti kyseliny, jako je například kyselina chlorovodíková nebo kyselina p-toluensulfonová, ve vodném roztoku tetrahydrofuranu, v závislosti na povaze Qi,

Q2', Ri a R2.

Sloučeniny vzorce V, ve kterých QU , Q₂' představují skupinu nebo -(CO)- a R₂ představuje zbytek snadno hydrolyzovatelného esteru, jsou bez další konverze sloučeninami podle vynálezu.

Sloučeniny vzorce V, ve kterých Q_x' a/nebo Q₂ ^Zpředstavuje skupinu

HO’ • · • · · · · ·

RP nebo -(CO)- á R₃ představuje alkánoyl, alkoxyalkyl, aralkanoyl nebo aroyl, se mohou převádět na sloučeniny podle vynálezu hydrolýzou ve vodném roztoku methanolu, ethanolu nebo THF v přítomnosti kyseliny, jako je například kyselina chlorovodíková, kyselina octová a kyselina p-toluensulfonová, nebo v bezvodých aprotických organických rozpouštědlech, například v dichlormethanu, v přítomnosti Lewisovy kyseliny, například trimethylsilylbromidu. Pokud R₃ představuje zbytek alkoxy nebo aryloxy, sloučeniny vzorce V se mohou převádět na sloučeniny podle vynálezu hydrolýzou ve vodném roztoku methanolu nebo ethanolu a v přítomnosti zásady, jako je například hydroxid sodný nebo draselný nebo uhličitan sodný nebo draselný.

Sloučeniny vzorce V, ve kterých Qi' a rovněž Q₂' představuje skupinu

HO nebo -(CO)- a R₂ představuje nesubstituovaný nebe substituovaný benzyl, kyanomethyl, alkanoylmethyl nebo aroylmethyl, se mohou přeměňovat na sloučeniny vzorce I také redukcí. V případě, že R₂ představuje benzyl nebo kyanomethyl, je přednostní katalytická hydrogenace, přičemž když R₂představuje acetonyl, fenacyl nebo trichlorethyl, může se použít redukce zinkem v kyselině octové. Když R₂ je substituovaný silylový zbytek, může se použít kyselá hydrolýza za použití zředěných kyselin, jako je například kyselina chlorovodíková, kyselina octová a kyselina p-toluensulfonová, nebo štěpení za účasti fluoridu, například fluorovodíku v acetonitrilu nebo tetrabutylamoniumfluoridu v THF.

Sloučeniny obecného vzorce I, ve kterých A představuje kyslík, se mohou alternativně připravit způsobem zahrnujícím • * první stupeň, ve kterém se sloučeniny obecného vzorce VI přeměňují na 16-acyloxy- nebo 16-0-alkylsloučeniny vzorce VII, jak se popisuje níže:

kde Qi', Q2⁷/ Ri a tečkovaná čárka mezi C-24 a C-25 má výše uvedený význam; a R₄ představuje běžnou chránící skupinu, jako je například alkanoyl, aralkanoyl, alkanoylóxyaíkyl nebo aroyl, nebo trisubstituovaný silylový zbytek substituovaný alkylovou, oxyalkylovou, arylovou nebo oxyarylovou skupinou;

R₄ je přednostně silylová chránící skupina, jako je například difenylmethylsilyl nebo terc.buoxyldifenylsilyl, nebo acylová chránící skupina, jako je například acetyl nebo pivaloyl.

U sloučenin vzorce VII, ve kterých Ri představuje alkylový zbytek definovaný výše, še konverze provádí reakcí sloučeniny vzorce VI s alkylhalogenidem nebo álkyltriflátem podle obecných metod příprav etherů, které jsou odborníkům v tomto oboru známy. U sloučenin vzorce VII, ve kterých Ri představuje acylovou skupinu, se konverze provádí reakcí sloučeniny vzorceVI s acylchloridem nebo příslušnými anhydridy kyselin v přítomnosti slabé zásady podle obecných acylačních metod,, které jsou odborníkům v tomto oboru známy. Sloučeniny vzorce VII se mohou přeměňovat na sloučeniny vzorce I odstraněním chránící skupiny R₄ známými metodami a • · potom stejnými reakčními stupni f a g, jak se popisuje ve schématu 2 nebo podobnými způsoby.

Sloučeniny vzorce I, ve kterých Qi a/nebo Q₂ představuje -(CO)-, se mohou připravit rovněž z příslušných sloučenin vzorce I, ve kterých Qi a Q₂ představují skupinu

oxidačními metodami, které jsou odborníkům v tomto oboru známy.

Vynález se dále týká způsobu výroby sloučeniny vzorce I, při kterém se inverze C-20 dosáhne kvantitativně zahříváním laktonu vzorce 3 v přítomnosti koncentrovaného roztoku hydroxidu sodného.

Snadno hydrolyzoyatelné estery sloučenin vzorce I a la se mohou připravit známými způsoby popsanými v literatuře.

Sloučeniny podle vynálezu, ve kterých jsou C-24 a C-25 spojeny jednoduchou vazbou, se mohou připravit z příslušných nenasycených analogů redukcí, například katalytickou hydrogenací za použití katalyzátorů, jako je například palladium nebo platina. Sloučeniny, jako je například helvolová kyselina a cefalosporin Ρ_χ, se mohou použít jako výchozí látky pří přípravě dalších sloučenin obecného vzorce la.

Dalším předmětem předloženého vynálezu je poskytnutí farmaceutických kompozic, která jsou užitečné při léčbě infekčních onemocnění v humánní a veterinární praxi.

• · • · • 9 • · ··

2b

Vzhledem k tomuto předmětu obsahuje kompozice podle vynálezu jako účinnou složku alespoň jeden člen zvolený ze souboru zahrnujícího sloučeniny vzorce Ia a vzorce I (zde označované jako účinná složka) včetně jejich přijatelných solí a snadno hydrolyzovatelných esterů společně s přijatelnými farmaceutickými nosiči a/nebo ředidly.

V uvedené kompozici se může podíl terapeuticky účinné látky k nosičové látce měnit od 0,5 % hmotn. do 95 % hmotn. Kompozice se mohou zpracovávat na rozličné farmaceutické podávači formy, jako jsou.například granule, tablety, pilulky, dražé, čípky, kapsle, tablety s kontinuálním uvolňováním, suspenze, injekce, a mohou se plnit do lahviček nebo trubiček nebo podobných nádobek. Pro výrobu kompozic obsahujících předložené sloučeniny se mohou používat farmaceutické organické nebo anorganické, pevné nebo kapalné nosiče a/nebo ředidla vhodné pro orální, enťěrální, parenterální nebo topické podávání: voda, želatina, laktóza, škrob, stearan hořečnatý, mastek, rostlinné a živočišné oleje a tuky, benzylalkohol, pryskyřice, polyalkylenglykol, vazelína, kakaové máslo, lanolin a jiná emulgační činidla, soli měniči osmotický tlak nebo pufry pro zajištění vhodné hodnoty pH kompozice se mohou použít jako nosiče.

Dále může kompozice obsahovat jiné terapeuticky účinné složky, které se mohou náležitě podávat společně se sloučeninami podle vynálezu při léčbě infekčních onemocnění, jako jsou například jiná vhodná antibiotika, zejména taková antibiotika, která mohou zvyšovat aktivitu a/nebo zabraňovat rozvoji rezistence. Taková antibiotika zahrnují peniciliny, cefalosporiny, tetracykliny, rifamyciny, erythromyciny, linkomycin, klindamycin a fluorochinolony. Jiné sloučeniny, které se mohou výhodně kombinovat se sloučeninami podle vynálezu, zejména v topických přípravcích, zahrnují například kortikosteroidy, jako je například hydrokortison nebo • · ♦ · • 9 9 · ·· triamcinolon. Alternativně se mohou takové terapeuticky účinné složky (složka) podávat současně (buď souběžně nebo za sebou) s kompozicí podle vynálezu.

Farmaceutická kompozice pro granule, tablety, kapsle nebo dražé obsahuje výhodně 25 % až 98 % účinné složky podle vynálezu a v orálních suspenzích je příslušné množství výhodně 2 % až 20 % účinné složky.

Když se tyto sloučeniny podávají ve formě solí s farmaceuticky přijatelnými netoxickými zásadami, přednostní jsou například soli snadno rozpustné ve vodě nebo nepatrně rozpustné ve vodě, aby se dosáhlo zvláštní a vhodně rychlosti absorpce.

Jak se uvádí výše, sloučeniny vzorce I a la a jejich soli se mohou zpracovávat na farmaceutické formy podávání včetně suspenzí, mastí a krémů. Farmaceutický přípravek pro orální podávání může být rovněž ve formě suspenze účinné složky samotné nebo ve formě farmaceuticky přijatelné soli obtížně rozpustné ve vodě, přičemž přípravek obsahuje 20 až 100 mg účinné složky na ml vehikula. Farmaceutický přípravek pro topickou léčbu může být ve formě masti nebo krému obsahujícího účinnou složku v množství 0,5 až 50. % vzhledem k přípravku. Topické přípravky jsou výhodné vzhledem k stabilitě vůči slunečnímu záření a relativní lipofiiní povaze předložených sloučenin.

Jiný předmět vynálezu spočívá ve volbě dávky sloučenin podle vynálezu, přičemž tato dávka se může podávat tak, aby se dosáhlo požadované aktivity bez současných sekundárních účinků. V humánní systémové terapii se tyto sloučeniny a jejich soli obvykle podávají (dospělým) v dávkovačích jednotkách obsahujících ne méně než 50 mg a až do 1 000 mg, přednostně 200 až 750 mg, vypočteno na sloučeninu vzorce I.

Výraz „dávkovači jednotka znamená jednotkovou, tj. jednotlivou dávku, která je vhodná pro podávání pacientovi a • ·

se kterou je možno snadno manipulovat a balit, přičemž zůstává jako fyzikálně a chemicky stabilní jednotková dávka' obsahující účinnou látku nebo její směs s pevnými nebo kapalnými ředidly nebo nosiči.

Sloučenina ve formě dávkovači jednotky se může podávat jednou nebo vícekrát denně ve vhodných intervalech, ale vždy v závislosti na stavu pacienta a podle předpisu praktického lékaře.

Při systémové léčbě tedy bude denní dávka přednostně 0,5 až 3 g účinné složky.

Výraz „dávkovači jednotka v souvislosti s topickými aplikačními prostředky znamená jednotlivou, tj. samostatnou dávku schopnou topického podávání pacientoviv aplikaci na čtvereční centimetr infikované oblasti od 0,1 mg do 10 mg a přednostně 0,2 mg do 1 mg účinné složky.

Pokud se kompozice má injektovat, může se poskytnout zatavená ampulka, lahvička nebo podobná nádobka obsahuj lei parenterálně přijatelný vodný nebo olejový injikovatelný roztok nebo disperze účinné složky jako dávkovači jednotky.

Parenterální přípravky jsou užitečné zejména při léčbě stavů, při kterých je potřebná rychlá odpověď na léčbu. Při kontinuální terapii pacientů trpících infekčními onemocněními mohou být vhodnou formou farmaceutického přípravku tablety nebo kapsle pro prodloužený účinek dosažený, když se léčivo podává orálně, zejména ve formě tablet s kontinuálním uvolňováním.

Při léčbě infekčních onemocnění mohou takové tablety výhodně obsahovat jiné účinné složky, jak se uvádí výše.

Ještě dalším předmětem vynálezu je poskytnutí způsobu léčby pacientů trpících infekčními onemocněními, který zahrnuje podávání pacientům 0,03 g až 0,7 g/kg tělesné hmotnosti za den v 1 nebo 3 dávkách, přednostně 0,5 g až 3 g za den sloučeniny vzorce I nebo Ia nebo ekvivalentního ·· »»

2ti

množství soli sloučeniny vzorce I nebo Ia definované výše. Přednostně se účinná složka podává ve formě dávkovačích jednotek, jak se uvádí výše.

Příklady provedení vynálezu

Nyní bude předložený vynález popsán podrobněji v následujících příkladech a přípravách, které však předložený vynález v žádném ohledu neomezují.

Obecně

Všechny teploty tání jsou nekorigovány. Hodnoty chemických posunů (δ) (v ppm) spektra (75,6 MHz) ¹³C nukleární magnetické rezonance (NMR) jsou uvedeny, pokud není uvedeno jinak, pro roztoky deuterochloroformu vzhledem k internímu tetramethylsilanu (δ = 0,00) nebo deuterochloroformu (δ = 76,81 pro ¹³C NMR). Chromatografie se prováděla na silikagelu za použití ethylacetátu a nízkovroucího petroletheru jako eluentu. Bezvodá rozpouštědla se připravila skladováním rozpouštědel s analytickou kvalitou nad 0,4 nm molekulovými síty po dobu několika dnů před použitím.

Přípravy

Příprava 1: Lakton 16-deacetyl-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny (4)

Lakton 3 (20,2 g, 44 mmol) se rozpustil ve 100 ml ethanolu a přidal se 28% vodný roztok hydroxidu sodného (100 ml). Výsledný žlutý roztok se 1 hodinu zahříval při 60 °C. Reakční směs se nechala ochladit na teplotu místnosti a směs se okyselila na pH 4 koncentrovanou octovou kyselinou za vzniku téměř bezbarvého roztoku. Za nepřetržitého míchání se pomalu přidávala voda (přibližně 100 ml), dokud se nevysrážely bezbarvé krystaly. Míchání pokračovalo přes noc ♦ · • * ♦ ··· ·· ·· « · · • · · • · · • · · φ φ <

zy při teplotě místnosti a krystaly se shromáždily filtrací za vzniku 20,0 g laktonu 16-deacetyl-17 (S) , 20(S)-dihydrofusidové kyseliny (4). Překrystalováním ze směsi vody a methanolu se získalo 18,5 g, teplota tání 167 až 169 °Č.

^l3C NMR (CDC1₃): 181,0,132,9, 122,9, 84.2, 71.4, 68,7, 49,7,48.7,46.8,42.4,41.4, 40.0, 38.8, 37.4, 36.6,36.1,33.9,33.0, 32.9, 30.4, 30.0, 25.7, 25.7,23.8,22.6,21.0,17.8,17.5,16.0.

Příprava 2: Lakton 3,ll-bis-0-methoxymethyl-16-deacetyl-17(S), 20(S)-dihydrofusidové kyseliny (5)

Lakton (4) (34,4 g, 75 mmol) se rozpustil v bezvodém dichlormethanu (350 ml) pod argonem v absolutně suché dvojhrdlé baňce s kulatým dnem vybavené chladičem. Přidal se N,N-diisopropylethylamin (52,3 ml, 300 mmol) a výsledný roztok se míchal 5 min při teplotě místnosti a potom se pomalu injekční stříkačkou vstřikl methoxyrňethyichlorid (22,8 ml, 300 mmol). Reakční směs _:s.e míchala 15 min při. teplotě místnosti a potom za refluxu, dokud se monitorováním pomocí TLC (přibližně 4 hodiny) nezjistilo ukončení reakce. Reakční směs se nechala vychladit na teplotu místnosti a přenesla do dělicí nálevky se 650 ml dichlormethanu. Organický roztok se postupně promyl vodou (500 ml), nasyceným roztokem h.ydrogenuhličitanu sodného (500 ml), dvakrát vodou (2 x 200 ml) a dvakrát nasyceným roztokem chloridu sodného (2x500 ml) . Organický-roztok se Vysušil naď bezvodým síranem sodným a zkoncentroval ve vakuu za vzniku žlutého oleje,- který· za stání vykrystaloval. Krystalická sloučenina se překrystalovala z horkého methanolu (200 .ml) — Bezbarvé krystaly se shromáždily filtrací za vzniku 31,5 g laktonu 3,11-bis-Omethoxymethyl-16-deacetyl-17 (S) , 20 (-£) -dihydrofusidové kyseliny (5) s teplotou tání- 123 až 125 °C. Krystalizací matečného louhu se dále získalo 6,5 g stejné sloučeniny s teplotou tání 119 až 121 °C. ’ . · .

13(jNMR (CDCI3): 180.9, 132.8, 123.0, 97.6, 95.3, 84.3, 77.7, 77.2, 55.8, 55.4, 50.1, 48.5, 47.1, 42.6,

41.6,40.0, 39.4, 37.1, 36.9, 36.4, 34.0, 32.3, 30.2, 30.1, 26.8, 25.9, 25.7, 23.3, 23.1,21.3, 17.8, 17.7,

16.1 • ·

Příprava'3: 16β,21-ϋίο1 (6)

Hydrid hlinito-lithný (3,8 g, 100 mmol) se suspendoval v bezvodém THF (175 ml) pod argonem v absolutně suché dvojhrdlé baňce s kulatým dnem vybavené chladičem. K míchané suspenzi se přidával roztok laktonu (5) (26,7 g, 48,9 mmol) v bezvodém THF (150 ml) tak rychle, aby se zajistil mírný reflux. Reakční směs se refluxovala za bouřlivého míchání 3 hodiny a potom se nechala ochladit na teplotu místnosti. Přebytečný hydrid hlinito-lithný se rozložil ethyiacetátem (125 ml) a potom se pomalu přidala voda (125 ml). Výsledná suspenze se okyselila zředěnou kyselinou chlorovodíkovou na pH 5. Suspenze se přenesla do dělicí nálevky s ethylace-tátem (1000 ml) a vodou (750 ml). Vytřepaly se dvě vrstvy a oddělily. Vodná vrstva se extrahovala ethyiacetátem (1000 ml) a spojené organické vrstvy se promyly dvakrát nasyceným roztokem chloridu sodného (2 x 500 ml). Organická vrstva se vysušila nad bezvodým síranem sodným a zkoncentrovala ve vakuu za vzniku 26,6 g v podstatě čisté sloučeniny uvedené v názvu - diolu (6)~ ve formě bezbarvého prášku. Analyticky čistý vzorek se získal překrystalováním z horkého methanolu, teplota tání 120 až 131 °Č.

¹³C ŇMR, (CDCI3):131.5,124.5, 97.3, 95.3, 78.0, 77.3, 74.7, 64.8, 55.7, 55.4, 50.5, 49.1, 48.5, 43.5, 41.3,40.5, 39.5, 36.9,36.6, 32.0, 31.8,31.4, 30.0, 26.8, 25.9, 25.7,23.5, 22.9, 21.5, 18.6, 17.7, 16.1

Příprava 4: 2í-Dífenylmethylsilyl-chráněný 16β,2ί-άίο1 (7)

Diol 6 (5,5 g, 10 mmol) se rozpustil v bezvodém dichlormethanu (50 ml) a ťriethylaminu (2,8 ml, 20'mmol) pod argonem v-absolutně suché dvojhrdlé baňce a ochladil na -10 °C. K ochlazenému roztoku se během 15 minut přidával roztok difenylmethylchlorsilanu (2,3 ml, 11 mmol) v bezvodém dichlormethanu (20 ml) tak, aby teplota nepřekročila 0 °C a míchání pokračovalo 15 minut. Reakční směs se přenesla do dělicí nálevky se 100 ml dichlormethanu. Organický roztok se ·· ·« • · * • · ·· • a a ♦ · · • · · * · · αα αα ► * A postupně promyl nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml), vodou (100 ml) a nasyceným roztokem chloridu sodného (100 ml). Organický roztok se vysušil nad bezvodým síranem sodným a rozpouštědla se odpařila za sníženého tlaku za vzniku 9 g bezbarvého sirupu. Surová směs se bez čištěni acetylovala rozpuštěním v pyridinu (15 ml) a acetanhydridu (15 ml). Výsledná .směs se míchala přes noc při teplotě místnosti v uzavřené láhvi. Potom se reakční směs zkoncentrovala ve vakuu za vzniku bledě žlutého oleje. Po kolonové chromatografii za použití směsi ethylacetátu a nízkovroucího petroletheru jako eluentu se získala v podstatě čistá sloučenina 7 (6,2 g) uvedená v názvu ve formě bezbarvého .sirupu.

¹³C NMR, (CDC1₃): 170.1,134.2,129.5,127.6,124.6,97.1,95.0,77.6,77.1, 77.0,64.9, 55.5,55.1,

50.0,48.3.42.5,40.9,40.6,38.9,36.7,36.3,36.2,31.7,31.2, 30.3,29.8,26.6,25.6,25.5,23.1,22.8, 21.2,21.1,17.8,17.5,15.9,14.0,-3.3 - - V-—^:

Příprava 5: 16β,21-Ďiol-16-acetát (8)

21-Difenylmethylsilyl-chráněný 16β,21-diol (7) (6,2 g,

7,9 mmol) se rozpustil v tetrahydrofuranu (100 ml) a ledové kyselině octové (0,75 ml). K tomuto roztoku se.přidal hydrát tetrabutylamoniumfluoridu (4 g, 15,8 mmol) a reakční směs se míchala při teplotě místnosti 10 minut. Reakční směs se potom přenesla do dělicí nálevky s 200 ml ethylacetátu. Organický roztok se promyl dvakrát vodou (2 x 100 ml) a nasyceným roztokem chloridu sodného (100 ml). Organická vrstva se.

-vysušila nad bezvodým síranem sodným a zkoncentrovala ve vakuu za vzniku bezbarvého sirupu. Po kolonové chromatografii za použití směsi ethylacetátu a nízkovroucího petroletheru _?jako eluentu se získala čistá sloučenina 8 (4,3 g) uvedená v názvu ve formě bezbarvého sirupu.

1³C NMR, (CDCI3): 170.3,131.7,124.4, 97.4, 95.3, 77.9, 77.3, 64.9, 55.8, 55.4, 50.4, 48,6,43;7_ř 41,3,

16.1.

40.8, 39,1, 37.0, 36.6, 36.5, 31.9, 31.6, 30.9, 30.1, 26.8, 25.9, 25.7, 23.4, 23.1, 21.6,-21.3, 18.3, 17.8, • · ♦ ··♦

Příprava 6: 3,ll-Bis-O-methoxymethyl-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (9)

Dessův-Martinův periodinan (3,7 g, 8,7 mmol) v bezvodém dichlormethanu se přidal k 16β,21-diol-16-acetátu (8) (4 g,

6,7 mmol) v dichlormethanu (50 ml) při teplotě místnosti nebo při nižší teplotě. Reakční směs se míchala 15 minut. Po této době se do reakční směsi vlil 1N roztok hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a 1N 1N roztok thiosíranu sodného (50 ml) a 10 minut se bouřlivě míchaly dvě vrstvy. Tyto dvě vrstvy se přenesly do dělicí nálevky s ethylacetátem (100 ml). Vrstvy se oddělily a organická vrstva se promyla nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) á nasyceným roztokem chloridu sodného (100 ml). Organická vrstva se vysušila nad bezvodým síranem sodným a zkoncentrovala ve vakuu za vzniku .3,7 g bezbarvého sirupu. Surový aldehyd (3,7 g, 6,2 mmol) se bez čištění, rozpustil v terc.butylalkóholu (50 ml) . K tomuto roztoku se přidal 2-methyl-2~buten (1,48 ml, 16,8 mmol), 1N roztok dihydrocfenfosforečnanu sodného (16 ml) a chloritan sodný (1,44 g, 16 mmol) ve vodě (20 ml) a výsledná reakční směs se bouřlivě míchala přibližně 3 hodiny při teplotě místnosti. Reakční směs se okyselila na pH 4. octovou kyselinou a přenesla do dělicí nálevky s ethylacetátem (200 ml). Vytřepaly se dvě vrstvy aoddělily. Vodná vrstva se reextrahovála dvakrát ethylacetátem (2 x 100 ml). Spojené organické extrakty se promyly dvakrát nasyceným roztokem chloridu sodného (2 x 100 ml), vysušily nad bezvodým síranem sodným a zkoncentrovaly ve vakuu za vzniku 3,4 g bledě žlutě pěny. Čištěním kolonovou chromatografií zá použití směsi ethylacetátu,. nízkovroucího petroletheru a stop mravenčí kyseliny jako eluentu se získalo 2,9 g čisté kyseliny 9, sloučeniny uvedené v názvu ve formě semikrystalické sloučeniny.

13C NMR, (CDČ1₃):1822, 170.1.132,4. 123,2,97,6, 95,3, 77,9,77.3,76.4, 55.8,55.4,49.9,49.1,

45.2, 44.5,40.9,40.6, 38.8, 36.9, 36.6, 36.5, 32.6, 31.9, 31.5, 20.6, 17.7, 17.6, 16.1

30.1, 26.8, 25.7, 25.2,23.4, 23.2, 21.2, ♦ 4 • · · • «4« • 4 ·

· · · · ·

Příprava 7: Terc.butylesťer 3,11-bis-O-methoxymethyl-17(S) , 20(S).-dihydrofusidové kyseliny (17)

3,ll-Bis-O-methoxymethyl-17(S),20(S)-dihýdrofusidová kyselina (9) (6,2 g, 10,8 mmol) se rozpustila v bezvodém benzenu (40 ml). Roztok se zahříval při refluxu a po 4 hodinách se přidal N, N-dimet-hylformamid-terc.butylacetát (10,4 ml, 43,2 mmol) rozpuštěný v bezvodém benzenu (20 ml). Reakční směs se refluxovala další 1 hodinu, ochladila, přenesla do dělicí nálevky a zředila ethylacetátem (150 ml). Organický roztok se promyl vodou (30 ml), nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (30 ml) a nasyceným roztokem chloridu sodného (30 ml). Organická vrstva se vysušila nad bezvodým síranem sodným a zkoncentřovala ve vakuu za vzniku bezbarvé pěny, která se čistila kolonovou chromatografií na silikagelu'~za vzniku sloučeniny uvedené v názvu - terc.butylesteru_.lX've formě bezbarvé pěny.

/ 13c NMR, (CDCI3): 174.3,170.5,131.9,123.8, 97.6,95.3, 79.8,77.9,77.3, 77.2,55.8,55.4,49.7, í 492,47.3,43.8,40.9,40.7,39.0, 36.9, 36.7, 36.3, 32.5,32.0,31.5,30.1, 28.0, 26.8,25.7, 25.2,23.4,

23.2,21.5,21.2,17.8,17.7,16.1

Příprava 8: Terc.butylester 3yil-bis-0-methoxymethyl-16.-deacetyl-17(S) ,20(S)-dihydrofusidové kyseliny (18)

Terc.butylester 17 (4 g, 6,8 mmol) se rozpustil -· v ethanolu a 4N vodném roztoku hydroxidu sodného (10 ml). Výsledná směs se refluxovala 1 hodinu, ochladila a okyselila na pH 4 kyselinou chlorovodíkovou. Přidala se voda (50 ml) a ethylacetát (50 ml) a směs se přenesla do dělicí nálevky’. Oddělily se dvě : vrstvy a vodná- vrstva se znovu extrahovala třikrát ethylacetátem (3 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se vysušily nad bezvodým' .síranem: sodným a zkoncentrovaly ve vakuu za vzniku sloučeniny-uvedené v názvu, terč.butylesteru (18).

·« • · ·

·· ·· * · · ♦ · ♦ • · · »· ····

Příprava 9: Teřc.butylester 3,ll-bis-0-methoxymethyl-16-deacetoxy-16a-brom~Í7(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny (19)

Terc.butylester (18) (2 g, 3,4 mmol) a tetrabrommethan (1,32 g, 4 mmol) se rozpustil v dichlormethanu (50 ml) a ochladil na 0 °C. K ochlazenému roztoku se přidal po malých částech pevný trifenylfosfin (1,05 g, 4 mmol). Reakce se po 1 hodině ukončila přidáním triethylaminu (3 ml). Přidal se diethýlether (50 ml) pro vysrázení trifenylfosfinoxidu, který se potom odfiltroval. Organický roztok se přenesl do dělicí nálevky a promyl vodou (20 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) a nasyceným roztokem chloridu sodného (20 ml). Organický roztok se vysušil nad bezvodým síranem sodným a.....zkoncentroval ve vakuu za vzniku sloučeniny uvedené v názvu, terč.butylesteru (19).

Příprava 10: Lakton 3-O-TBS-16-deacetyl-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny (11)

Lakton .(4) (15,25 g, 33,2 mmol) se rozpustil v bezvodém

DMF (75 ml) pod argonem v absolutně suché dvojhrdlé baňce s kulatým dnem. K roztoku se přidal imidazol (4,5 g, 66,4 mmol) a potom TBSC1 (10 g, 66,4 mmol). Výsledná bledě žlutá reakční směs se míchala přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs se zředila ethylacetátem a postupně promyla vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného. Organický roztok se vysušil nad bezvodým síranem sodným a zkoncentroval ve vakuu za vzniku žlutého oleje, který za stání krystalizoval. Krystalická sloučenina se překrystalovala z methanolu (100 ml). Bezbarvé krystaly se shromáždily filtrací za vzniku 14,7 g laktonu 3-O-TBS-16-deacetyl-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny (11) s teplotou tání 138,5 až 140 °C.

Příprava 11: 16β,21-ϋίο1 (12) • ·· • « ·> toto to· ·· · · · • · · ·

Hydrid hlinito-lithný (2,5 g, 65 mmol) se suspendoval v bezvodém THF (125 ml) pod argonem v absolutně suché dvojhrdlé baňce, s kulatým dnem vybavené chladičem. K míchané suspenzi se přidával roztok laktonu 11 (8,4 g, 48,9 mmol) v bezvodém THF (150 ml) tak rychle, aby se zajistil mírný reflux. Reakční směs se refluxovala za bouřlivého míchání 3 hodiny a potom se nechala ochladit na teplotu místnosti. Přebytečný hydrid hlinito-lithný se rozložil ethylacetátem (125 ml) a potom se pomalu přidala voda (125 ml). Výsledná suspenze se okyselila zředěnou kyselinou chlorovodíkovou na pH 5. Suspenze se přenesla do dělicí nálevky s.ethyl-acetátem (500 ml) a vodou (400 ml). Vytřepaly se dvě vrstvy a oddělily. Vodná vrstva se extrahovala ethylacetátem (500 ml) a spojené organické vrstvy se promyly dvakrát nasyceným roztokem chloridu sodného (2 x 500 ml). Organická vrstva se vysušila nad bezvodým síranem sodným a zkoncentrovala ve vakuu za vzniku 19 g téměř čisté sloučeniny uvedené v názvu diolu (12) ve formě bezbarvého prášku. Diol se vykrystaloval ze směsi vody a methanolu a bezbarvé krystaly se shromáždily filtrací za vzniku 14,7 g diolu (12) po lyofilizaci, teplota tání 122 až 124 °C.

Příprava 12: 21-Difenylmethylsilyl-chrán.ěný 16β,21-άίο1 (13)

Diol (12) (14,05 g, 24,4 mmol) se rozpustil v bezvodém dichlormethanu (125 ml) a triethylaminu (6,8 ml, 48,8 mmol) pod argonem v absolutně suché dvojhrdlé baňce a ochladil na -20 °C. K ochlazenému roztoku se během 1 hodiny přidával roztok difenylmethylchlorsilanu (25,7 ml, 26,8 mmol) v bezvodém dichlormethanu (50 ml). Míchání pokračovalo 15 minut. Reakční směs se přenesla do dělicí nálevky a zředila 500 ml dichlormethanu. Organický roztok se postupně promyl nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (250 ml) , vodou (250 ml) a nasyceným roztokem chloridu sodného (250 ml).

* 4 ·

3b ♦ · 44 • · · • 4 44 4 4 · ♦ • · ·

44*4 ♦·

Organický roztok se vysušil nad bezvodým síranem sodným a rozpouštědla se odpařila za sníženého tlaku za vzniku 17 g bezbarvého sirupu. Surový bledě žlutý sirup se čistil kolonovou chromatografií za použití směsi ethylacetátu a nízkovroucího petroletheru jako eluentu za vzniku 14,7 g 21-difenylmethylsilyl-chrá.něného 16β, 21-diolu (13) ve formě bezbarvé pěny.

Příprava 13: Sloučenina 14

21-Difenylmethylsilyl-chráněný 16β,21-άίο1 (13) (9 g,

11,0 mmol) se acetyloval rozpuštěním v pyridinu (30 ml) a acetanhydridu (15 ml). Výsledná směs se míchala 20 hodin při teplotě místnosti v uzavřené láhvi. Po této době se reakční směs zkoncentrovala ve vakuu za vzniku 11 g bledě žlutého oleje. Kolonová chromatografie za použití směsi ethylacetátu a nízkovroucího petroletheru jako eluentu poskytla 7,9 g čisté acetylované sloučeniny (14).

Příprava 14: 16β,21-Diol-16-acetát (15)

Sloučenina 14 (7,5 g, 9,2 mmol) se rozpustila v 100 ml tetrahydrofuranu. K tomuto roztoku se přidala octová kyselina (3,2 ml) a TBAF (4,69 g, 18,4 mmol) a výsledná reakční směs se míchala při teplotě místnosti 5 minut. Potom se přidala voda (100 ml) a ethylacetát (200 ml) a dvě vrstvy se přenesly do dělicí nálevky. Tyto dvě vrstvy se oddělily a vodná vrstva se znovu extrahovala EtOAc (200 ml). Spojené organické vrstvy se promyly dvakrát vodou (2 x 100 ml) a nasyceným roztokem chloridu sodného (100 ml). Organická vrstva se vysušila nad bezvodým síranem sodným a zkoncentrovala ve vakuu za vzniku bezbarvého sirupu.' Po kolonové chromatografii za použití směsi ethylacetátu a nízkovroucího petroletheru jako eluentu se získala čistá • t • v *♦ **· sloučenina (15) (5,73 g) uvedená v názvu ve formě bezbarvého sirupu.

Příprava 15: 3-O-TBS-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (16)

A. Dessův-Martinův periodinan (3,72 g, 8,75 mmol) se po malých dávkách během hodiny přidával k 16β,21-diol-16-acetátu (15) (5,4 g, 8,75 mmol) v bezvodém THF (125 ml) ochlazeném na °C. Reakční směs se míchala 3 hodiny při 0 °C. Po této době se do reakční směsi vlil 1N roztok hydrogenuhličitanu sodného (90 ml) a 1N roztok thiosíranu sodného (90 ml) a 10 minut se bouřlivě míchaly dvě vrstvy. Tyto dvě vrstvy se přenesly do dělicí nálevky s dichlormethanem (400 ml). Vrstvy se oddělily a organická vrstva se promyla nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (200 ml) a vodou (200 ml). Organická vrstva se vysušila nad bezvodým síranem sodným a zkoncentrovala ve vakuu za vzniku 5,4 g sirupu. Čistý aldehyd (5 g) se získal ve formě bezbarvého sirupu po kolonové chromatografii za použití směsi ethylacetátu a nízkovroucího petroletheru jako eluentu.

B. Aldehyd z přípravy 15A (5,18 g, 8,4 mmol) se bez čištění rozpustil v terc.butylalkoholu (50 ml). K tomuto roztoku se přidal 2-methyl-2-buten (3,55 ml, 33,6 mmol), 1N roztok dihydrogenfosforečnanu sodného (34 ml) a chloritan sodný (3,84 g, 34 mmol)...ve vodě (20 ml) a výsledná reakční směs se bouřlivě míchala přibližně přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs se okyselila na pH 4 octovou kyselinou a přenesla do dělicí nálevky s ethylacetátem (200 ml). Vytřepaly se dvě vrstvy a oddělily. Vodná vrstva se reextrahovala dvakrát ethylacetátem (2 x 200 ml). Spojené organické extrakty se promyly dvakrát nasyceným roztokem chloridu sodného (2 x 100 ml), vysušily nad bezvodým síranem sodným a zkoncentrovaly ve vakuu za vzniku 6 g bledě žluté pěny. Čištěním kolonovou chromatografií za použití směsi ethylacetátu, nízkovroucího petroletheru a stop mravenčí kyseliny jako eluentu se získalo 4,2 g čisté kyseliny (16), sloučeniny uvedené v názvu ve formě semikrystalické sloučeniny.

Jtí ·· • ·» ·· ··»·

Příklady

Příklad 1: 17(S),20(S)-Dihydrofusidová kyselina (10) (sloučenina 101)

Sloučenina vzorce 9 (2 g, 3,3 mmol) se rozpustila v bezvodém dichlormethanu (50 ml) pod argonem v absolutně suché dvojhrdlé baňce, s kulatým dnem a ochladila na -20 °C. K roztoku se přidalo 0,4 nm molekulové síto (6 g) a za kontinuálního míchání se pomalu vstříkl trimethylbromsiian (2,7 ml, 20 mmol). Reakční směs se míchala do ukončení reakce (přibližně 5 hodin). Reakční. směs se potom přenesla do dělicí nálevky s ethylacetátem a vodou a vytřepaly a oddělily se dvě vrstvy. Vodná vrstva se extrahovala třikrát ethylacetátem (3 x 20 ml) a spojené organické vrstvy se promyly nasyceným roztokem chloridu sodného (30 ml). Organický roztok se vysušil nad bezvodým síranem sodným a zkoncentroval ve vakuuza vzniku 1,4 g sloučeniny 101 ve formě bezbarvé pevné látky. Překrystalováním ze směsi methanolu a vody se získalo 1,2 g bezbarvých krystalů, t.t. 195 až 195,5 °C.

¹³C NMR, (CD₃OD), 173.1, 131.8, 126.2,78.3,72.6, 69.4, 50.8, 50.6,46.6,41.9,41.8, 39.6, 38.2, 38.0,37.1,36.2,35.2,33.1,31.1,27.2,25.9,23.7,23.6,22.6,21.2, 17.9, 16.5

Příklad la: Alternativní příprava 17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny (10) (sloučeniny 101)

Sloučenina vzorce 16 (3,6 g, 5,7 mmol) se rozpustila v THF (15 ml) a 40% vodném roztoku fluorovodíku (10 ml) v teflonové baňce s kulatým dnem. Výsledná reakční směs se • 4 jy

4* ·* · · .

• * * · · < *

44»· míchala dva dny při teplotě místnosti. Reakčni směs se potom neutralizovala na pH'8 27% roztokem hydroxidu sodného a nakonec nastavila na pH 4 octovou kyselinou. Reakčni směs se potom přenesla do dělicí^nálevky s ethylacetátem a vodou a vytřepaly a oddělily se dvě vrstvy. Vodná vrstva se extrahovala třikrát ethylacetátem (3 x 50 ml) a spojené organické vrstvy se promyly nasyceným roztokem chloridu sodného (50-ml). Organický roztok se vysušil nad bezvodým síranem sodným a zkoncentroval ve vakuu za vzniku 4 g surové sloučeniny 101 ve formě bezbarvé pevné látky. Čištěním kolonovou chromatografií za použiti směsi ethylacetátu, nízkovroucího petroletheru a stop mravenčí kyseliny jako eluentu se získalo 3,1 g čisté 17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny (10) (sloučenina 101), sloučeniny uvedené v názvu ve formě krystaJ ické látky. Překrystalovánírn zě směsi methanolu a vody se získalo 2,9 g bezbarvých krystalů, t.t. 195 až 196...........

°C. ' ' S 13c NMR, (CD3OD), 173.1,131.8,126.2, 78.3, 72.6,69.4,50.8,50.6,46.6,41.9,41.8,39.6,38.2,

38.0,37.1, 36.2, 35.2, 33.1, 31.1,27.2,25.9, 23.7,23.6,22.6, 21.2,17.9,16.5

Příklad 2: 17(S),20(S),24,25-Tetrahydrofusidová kyselina (sloučenina 102) ”· ' ' · . ’

Roztok sloučeniny 101 (280 mg, 0,54mmol) v ěthanolu (3 ml) se hydrogenoval pod vodíkem (100 kPaj v přítomnosti 5% palladia na uhličitanu vápenatém (30 mg). Reakčni směs se bouřlivě míchala, dokud se nespotřebovalo teoretické množství vodíku a katalyzátor sě odstranil filtrací. K. filtrátu se po kapkách přidala, .voda za vzniku '255 mg krystalické 17(S),20(S),24,25-tetrahydrofusidově kyseliny, t.t. 138,5 až 140 °C. \ ‘ ¹³CNMR, (DMSO-dg): 210.7, 176.6, Í69.1, 131.2, 123.7,753', 69.0, 57.7, 48.9,43:8, 43.6,43.3, 41.8, 4L7, 37.7, 37.2, 34.4, 32.6, 30.1, 27.9, 25.3, 24.8, 22.7, 20.6, 20.4, 20.1, 17.4, 16.3, 16.0 «» ·· · · • ·4· ···· ·· ·· ·· • 4 ·

• 4 • 4 44··

Příklad 3: ll-Dehydro-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 103)

A. 3-0-Formyl-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina

17(S),20(S)-Dihydrofusidová kyselina (260 mg, 0,5 mmol) se rozpustila v roztoku smíšených anhydridů připravených z acetanhydridu a mravenčí kyseliny (2:1, v/v) při 5 °C -» 50 °C obsahujícím anhydrid mravenčí kyseliny, dichlormethan (4,4 ml) a dimethylaminopyridin (30 mg) a míchala při teplotě místnosti 20 hodin. Směs se zkoncentrovála ve vakuu a olejovitý zbytek se rozpustil v ethylacetátu (25 ml), promyl vodou (10 ml) a nasyceným roztokem chloridu sodného (10 ml). Organická vrstva se vysušila nad bezvodým síranem sodným a zkoncentrovala ve vakuu za vzniku 250 mg 3-O-formyl-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny ve formě olejovitého produktu, který za stání vykrystaloval.

B. 3-0-Formyl-ll-dehydro-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina

K surové 3-0-formyl-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny ze stupně A, rozpuštěné v octové kyselině (2,5 ml) se přidal roztok kyseliny chromové (65 mg, 0,65 mmol) ve vodě (0,65 ml) a výsledná zelená reakční směs se míchala 3 hodiny při teplotě místnosti. Reakční směs se zředila diethyletherem (40 ml), promyla vodou (20 ml) a dvakrát nasyceným roztokem chloridu sodného (2 x 10 ml), vysušila nad bezvodým síranem sodným a zkoncentrovala ve vakuu za vzniku 255 mg 3-O-formyl-ll-dehydro-17(S),20(S)-dihydrofúsidové kyseliny ve formě bezbarvého oleje.

C. ll-Dehydro-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina

K roztoku surové 3-0-formyl-ll-dehydro-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny ze stupně B v methanolu (3 ml) ochlazenému na 0 °C se přidal tuhý uhličitan draselný (130 mg) a výsledná suspenze se bouřlivě míchala 1 hodinu. Reakční směs se okyselila na pH 3 2N kyselinou chlorovodíkovou, zředila ethylacetátem (40 ml), přenesla do dělicí nálevky a promyla vodou (15 ml) a dvakrát nasyceným roztokem chloridu sodného (2 x 10 ml). Organická vrstva se vysušila nad bezvodým síranem sodným a zkoncentrovala ve vakuu za vzniku bledého olej ovitého produktu, který se vyčistil kolonovou chromatografií za použití směsi nízkovroucího petroletheru, ethylacetátu a stop mravenčí kyseliny jako eluentu. Bezbarvý semikrystalický produkt ll-dehydro-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny se získal ze směsi methanolu a vody.

;13cNMR, (CD₃OD): 180.5, 172.1, 77.9, 72.5, 69.2, 50.8, 50.6, 47.2, 46.2,41.8, 40.2, 39.6, 38.2, 38.0, 37.0,36.0, 34.5, 33.0, 31.1, 29.1, 25.7, 23.7,23.6, 23.1, 23.0, 22.6, 20.8, 17.7, 16.5

Příklad 4: 3-Dehydro-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 104)

17(S),20(S)-Dihydrofusidová kyselina (260 mg, 0,5 mmol) se rozpustila v tetrahydrofuranu (10 ml) a ochladila na 0 °C. Po malých částech se přidal pevný Dessův-Martinův periodinan (250 mg, 0,59 mmol) a reakční směs se míchala 5 hodin.

Reakční směs se potom zředila ethylacetátem (40 ml) a přenesla do dělicí nálevky. Organický roztok se bouřlivě vytřepal s 10% vodným roztokem thiosíranu sodného (15 ml), promyl vodou (10 ml) a nasyceným roztokem chloridu sodného (10 ml). Organická vrstva se vysušila nad bezvodým síranem sodným a zkoncentrovala ve vakuu za vzniku bezbarvého sirupu. Čištění kolonovou chromatografií za použití směsi petrolether - ethylacetát - mravenčí kyselina jako eluentu poskytla 215 mg 3-dehydro-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny.

Příklad 5: 16-Deacetoxy-16P~propionyloxy-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 105)

A. 3,ll-Bis-0-methoxymethyl-16-deacetoxy-16p-propionyloxy-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina • · ·· ··

Sloučenina 18 (288 mg, 0,5 mmol) se rozpustila ve směsi díchlormethanu (2 ml), propionanhydridu (2 ml) a pyridinu (2 ml) a míchala přes noc při teplotě místnosti. Rozpouštědla se odpařila ve vakuu za vzniku bezbarvého oleje téměř čisté 3,ll-bis-0-méthoxymethyl-16-deacetoxy-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny.

B. 16-Deacetoxy-16p-propionyloxy-17(S) , 20(S)-dihydrofusidová kyselina

K roztoku terc.butylesteru z A v tetrahydrofuranu (5 ml) se přidal 2N roztok kyseliny chlorovodíkové (5 ml) a směs se míchala přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs se potom zředila ethylacetátem (25 ml) a přenesla do dělicí nálevky. Oddělily se dvě vrstvy a organická vrstva se promyla dvakrát vodou (2x5 ml) a dvakrát nasyceným roztokem chloridu sodného (2 x 5 ml). Organická vrstva se vysušila nad bezvodým síranem sodným a zkoncentróvala ve vakuu za vzniku 16deacetoxy-ΐββ-propionyloxy-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny.

¹³C NMR, (CDC1₃): 180.9, 173.4, 132.4,123.3, 76.2,71.4, 68.8, 49.4,45.2, 44.3,40.7,40.6, 38.3 37.2, 36.4, 36.2, 34.4, 32.8, 32.6, 30.4, 30.0, 27.4,25.7, 25.4, 23.9, 22.6,20.9, 17.7,17.3,15.9, 8.9

Příklad 6: 16-0β3θθίοχγ-16β-(3'-chlorpropionyloxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 106)

A. Terč.butylester 3,ll-bis-0-methoxymethyl-16-deacetoxy-lββ-(3'-chlorpropionyloxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny

Ke sloučenině 18 (588 mg, 1 mmol) rozpuštěné v pyridinu (3 ml) se přidal 3-chlorpropionylchlorid (0,29 ml, 3 mmol) a směs se míchala přes noc při teplotě místnosti. Rozpouštědla se odpařila ve vakuu za'vzniku bezbarvého oleje téměř čistého terc.butylesteru 3,ll-bis-0-methoxymethyl-16-deacetoxy-16β- (3'-chlorpropionyloxy)-17(S) ,20(S)-dihydrofusidové kyseliny.

• 9 ·

« ·

Β. 16-Deacetoxy-16P~(3'-chlorpropionyloxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina

K roztoku terc.butylesteru z A v tetrahydrofuranu (5 ml) se přidala 2N kyselina chlorovodíková (5 ml) a směs se míchala přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs se potom zředila ethylacetátem (25 ml) a přenesla do dělicí nálevky. Oddělily se dvě vrstvy a organická vrstva se promyla dvakrát vodou (2 x 5 ml) a dvakrát nasyceným roztokem chloridu sodného (2 x 5 ml). Organická vrstva se vysušila nad bezvodým síranem sodným.a zkoncentrovala ve vakuu za vzniku 16~deacetoxy-16p~

-(3'-chlorpropionyloxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny.

„Příklad 7 až 14: 16-Deacetoxy-16P-acyloxy-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny (sloučeniny 107 až 114)

A. 16p-Acyloxyderiváty terc.butylesteru 3,11-bis-O-methoxymethyl-16-deacetoxy-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny

Postupem uvedeným v příkladu 6A a použitím acylchloridů uvedených v tabulce 3 místo 3-chlorpropionylchloridu se připravily 16p-acyloxyderiváty terc.butylesteru 3,Il-bis-O-‘ -methoxymethyl-16-deacetoxy-17 (S), 20 (S)'-dihydrofusidové kyseliny uvedené v tabulce 3.

·· « »

Příklad	Acylchlorid	Výsledná sloučenina, R
7A	2'-Methylpropionylchlorid	CH(CH₃)₂
8A	Cyklopropylkarbonylchlorid	C3H5
9A	Chloracetylchlořid	CH₂C1
10A	Bromacetylchlorid	CH₂Br
11A	Benzoylchlorid.	c₆h₅
12A	4-Fluorbenzoylchlorid	c₆h₄f
13 A	Cyklohexylkarbonylchlorid	CgHn
14A	Akryloylchlorid	ch=ch₂

B. Ιββ-Acyloxyderiváty 16-deacetoxy-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny

Postupem uvedeným v příkladu 6B a nahrazením terc.butylesteru 3,ll-bis-0-methoxymethyl-16-deacetoxy-16p-(3'-chlorpropionyloxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny za Ιββ-acyloxyestery terc.butylesteru 3,11-bis-O-methoxymethyl-16-deacetoxy-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny uvedené v tabulce 2 se připravily 16-deacetoxy-16β-acyloxy-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny uvedené v tabulce 4.

Tabulka 4

Přiklad	Výsledná sloučenina
Č.	R
7B	107	2'-Methylpropionyl
8B	108	Cyklopropylkarbony!
9B	109	Chloracetyl
1ΌΒ	110	Bromacetyl
11B	líl	Benzoyl
12B	112	4'-Fluorbenzoyl
13B	113 .	Cyklohexylkarbonyl
14B	114	Akryloyl

¹³CNMR data pro sloučeniny 107 až 113:

Sloučenina J07,1¾NMR, (CDjOD): 180.7,175.9, 132.3, 123.4, 76.3,71.4,68 8 49 4 45 2 aa n

40.8,40.6,38.3,37.2,36.4, 36.2, 34.5,33.6,32.7,32.6,30.4, 30.0,25.7,25.3 23 9 22 7 20 q’ ,o7 18.1,17,8, 17.5,15.9 ~ zj.y, 22.7,20.9, 19.1,

Sloučenina 108, 13qNMR, (CHC1₃): Í8Ó.3,173.9; 132.3, 123.4,76.4,71.4,68.9,49.4,45.2,44.3,

40.7,40.6,38.3,37.2, 36.4,36.2,34.5, 32.7,32.6,30.4, 30.0,25.7,25.4,23.9,22.7, 21.0,17.7,17.4, : 15.9,12.7, 8.0

Sloučenina 109,13_C NMR, (CD3OD): 180.1,168.0,133.2,124.7,79.9,72.5,69.1, 50.8,.50.7,46.7, 46.2,41.8,41.7, 41.6, 39.7, 38.1, 38.0, 37.1, 35.9,34.4/33.1, 31.1, 26.4,25.9, 23.7,23.6,22.5,17.8, ‘ I7.7’ 16.5 ' ..... '

Sloučenina HO, 13eNMR,(CHCI3): 180.5,166.4,154.3,.132,4,123.3,78.7,71.5,68.8,49.5,49.3, .45.2,44.5,40.7,40.6, 38.4,37.2, 36.4,36.2, 34.3,32.7,32.5, 30.4,29.9,25.7,25.4,23.8, 22 7 20 9 17.7,17.4,15.9 . ’ ' ’

- ' ! ' - ,

Sloučenina 111, ¹³C-NMR, (CD3OD): 179.8,167.2,134.1, 133.1,131.6,131.0,129.4,124.9, 78.7, ! 72.5, 69:2, 50.8, 5Q.7, 46.7, 45.9,42.2, 41.9, 39.8,38.1, 38.0, 37.1/36.1, 34.4, 33.1, 31.1, 26.3, 25.9, 23.7,23:6,22.5,18.1,17.8,16.5

Sloučenina._112> 13_C NMR, (CD3OD): 179.8, 166.2, 167.3,133.8,133.1,128.0,124.8, 116.3,78.9,

72.5, 69.2, 50,8, 50.7,46.7,46.0, 42.1,41.9739.8/3SÍ1, 38.0, 37.1, 36.1, 34.4, 33.1, 31.1,26.4, 25.9, ' 23.7,23.6,22.5, 18.2,17.8,16.5 . . .

4b

Sloučenina 113, 13q NMR, (CHCI3): 180.0,174.9,132.3,123.4,76.1,71.4, 68.8,49.4,49.3,45.2, i 44.0,42.7,40.9, 40.5, 38.4, 37.2, 36.4, 36.1, 34.5, 32.7, 30.4, 30.0, 29.1,28.1, 25.8, 25.7,25.3, 25.1, 23.9, 22.6, 20.9,17.8, 17.5, 15.9

Příklad 15: 16-Deacetoxy-16p-isopropylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 115)

A. Terč.butylester 3,ll-bis-0-methoxymethyl-16-deacetoxy-16p-isopropylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny

Terč .butylester 3, ll-bis-O-methoxymethyl-16-deacetoxy-16a-brom-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny (19) (700 mg, mmol) se přidal k roztoku hydroxidu draselného (250 mg) a isopropylmerkaptanu (0,75 ml, 8 mmol) v ethanolu (25 ml) a suspenze se míchala čtyři dny. Potom se přidávala voda (přibližně .10 ml) do ukončení vysrážení požadované sloučeniny. Sraženina se shromáždila filtrací a promyla chladnou směsí ethanolu a vody (2:1) a vysušila za vzniku terc.butylesteru 3,ll-bis-0-methoxymethyl-16-deacetoxy-T6p-isopropylthio-17(S),20 (S)-dihydrofusidové kyseliny.

B. 16-Deacetoxy-16p-isopropylthio-17(S) , 20(S)-dihydrofusidová kyselina

K roztoku výše uvedeného terc.butylesteru v tetrahydrofuranu (5 ml) se přidala 2N kyselina chlorovodíková (5 ml) a směs se míchala přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs se potom zředila ethylacetátem (25 ml) a přenesla do dělicí nálevky. Oddělily se dvě vrstvy a organická vrstva se promyla dvakrát vodou (2 x 5 ml) a dvakrát nasyceným roztokem chloridu sodného (2x5 ml). Organická vrstva se vysušila nad bezvodým síranem sodným a zkoncentrovala ve vakuu za vzniku 16-deacet-oxy-163-isopropylthio-17(S) , 20(S)-dihydrofusidové kyseliny.

44 • · «

4 44 • 4 44 ·· • · · · · » » • 4 · · · • · · 4 ♦ • 44 ··· ·< 4444

Příklad 16 až 19: Ιδβ-Thioethery 16-deacetoxy-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny (sloučeniny 116 až 119)

A. Ιδβ-ΤΙτίοΘίΙτθΓγ terc.butylesterů 3,11-bis-O-methoxymethyl-16-deacetoxy-17(S), 20(S)-díhydrofusidové kyseliny

Podle postupu z příkladu 15A a použitím merkaptanů uvedených v tabulce 5 místo isopropylmerkaptanu se připravily Ιδβ-thioethery terc.butylesterů 3,ll-bis-O-methoxymethyl-16deacetoxy-17(Sj,20(S)-díhydrofusidové kyseliny uvedené v tabulce 5.

Příklad	Merkaptan	Výsledná sloučenina
R
16A	Ethylmerkaptan	CH₂CH₃
17A	2,2,2-Trichlorethylmerkaptan	CH2CCI3
18A	Terč.butylmerkaptan	C(CH₃)₃
19A	Methoxymethylmerkaptan	CH2OCH3

B. Ιββ-Thioethery 16-deacetoxy-17(S) , 20(S)-díhydrofusidové kyseliny

Postupem z příkladu 15B a použitím Ιββ-thioetherů terc.butylesterů 3,ll-bis-0-methoxymethyl-16-deacetoxy-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny uvedených v tabulce 5 místo terc.butylesteru 3,ll-bis-0-methoxymethyl-16-deacetoxy-16p-isopropylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny se získaly 16-deacetoxy-16p-alkylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny uvedené v tabulce 6.

4tí ·· to· i · · • · ·· ··· ···

Tabulka 6

Příklad	Výsledná sloučenina
Č.	R
16B	116	CH₂CH₃
17B	117	CH2CCI3
18B	118	C(CH₃)₃
19B	119	CH2OCH3

Příklad 20: 16-Deacetoxy-16p-isopropylthio-17(S),20(S);24,25-tetrahydrofusidová kyselina (sloučenina 120)

Postupem podle příkladu 2a náhradou 17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny 16-deacetoxy-16p-isopropylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidovou kyselinou se připravila

16-deacetoxy-16P~isopropylthio-17(S),20(S),24,25-tetrahydrofusidová kyselina.

• «4 • »·· • · · · • · · • »·· · · • · ·· • «

Příklad 21: 16-Deacetoxy-16P~acetylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 121)

A. Terč.butylester 3,ll-bis-0-methoxymethyl-16-deacetyl-16p-acetylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny

K roztoku terc.butylesteru 3,ll-bis-O-methoxymethyl-16deacetoxy-16a-brom-17(S), 20(S)-dihydrofusidové kyseliny (19) (700 mg, 1 mmol) v dimethylformamidu (6 ml) se přidal pevný thioacetát draselný (228 mg, 2 mmol) a reakční směs se míchala při teplotě místnosti 20 hodin. Potom se reakční směs zředila diethyletherem (50 ml), přenesla do dělicí nálevky a promyla dvakrát vodou (2 x 10 ml) a nasyceným roztokem chloridu sodného (10 ml). Organická vrstva se vysušila nad bezvodým síranem sodným a zkoncentrovala ve vakuu za vzniku terc.butylesteru 3,ll-bis-O-methoxymethyl-16-deacetyl-16P~acetylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny.

B. 16-Deacetoxy-16p-acetylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina

K roztoku terc.butylesteru ze stupně A v tetrahydrofuranu (5 ml) se přidala 2N kyselina chlorovodíková (5 ml) a směs se bouřlivě míchala při 60 °C 4 hodiny. Reakčni směs se nechala ochladit na teplotu místnosti, zředila ethylacetátem (25 ml) a přenesla do dělicí nálevky. Oddělily se dvě vrstvy a organická vrstva se promyla dvakrát vodou (2x5 mi) a dvakrát nasyceným roztokem chloridu sodného (2 x 5 ml). Organická vrstva se vysušila nad bezvodým síranem sodným a zkoncentro-vala ve vakuu za vzniku 16-deacetoxy-16pacetylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny ve formě bezbarvé pěny.

Příklad 22: 16-Deacetoxy-16p-benzoylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 122) • 4

5U • · # • «44 4 4 • 4 4 · • 444 44 ·<· <· ··

4 * · *

4 · ·

4·· · · 4 · · • 44 44 ·«··

A. Terč.butylester 3,ll-bis-0-methoxymethyl-16-deacetoxy-16p-benzoylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny

Postupem podle příkladu 17A, ale náhradou thioacetátu draselného thiobenzoátem draselným se.získal terč.butylester 3,ll-bis-0-methoxymethyl-16-deacetoxy-16p-benzoylthio17(S),2Q(S)-dihydrofusidové kyseliny.

B. 16-Deacetoxy-16p-benzoylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina .. ..

Postupem podle příkladu 17B, ale náhradou terč.butylesteru 3,ll-bis-0-methoxymethyl-16-deacetoxy~16p-acetylťhio17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny za terč.butylester 3,ll-bis-0-methoxymethyl-16-deacetoxy-16p-benzoylthio17 (S) , 20 (-S) -dihydrofusidové kyseliny se získala 16-doacetoxy16P~benzoylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina.

Příklad 23: 16-Deacetoxy-16p-ethoxy-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 123)

Uhličitan stříbrný (550 mg, 2 mmol) se přidal k suspenzi fenacylesteru 3, ll-<?-bis-methoxymethyl-16-deacetoxy-16a-brom-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny (750 mg, 1 mmol) v ethanolu (10 ml) a potom se reakční směs chráněná před světlem míchala při teplotě místnosti 18 hodin. Nerozpustné látky se odfiltrovaly a promyly dvakrát ethanolem (2 x 2 ml). K spojenému filtrátu a roztokům z promývání se přidal 5N vodný roztok hydroxidu sodného (4 ml) a směs se refluxovala 2 hodiny. Reakční směs se nechala ochladit na teplotu místnosti a okyselila se 4N kyselinou chlorovodíkovou. Větší část ethanolu se odstranila ve vakuu a ke zbytku se přidal ethylacetát (50 ml) a voda (50 ml). Dvě vrstvy se bouřlivě míchaly 30 minut, přenesly do dělicí nálevky a oddělily.

Vodná vrstva se extrahovala ethylacetátem (50 ml). Spojené • A ·· I * · • · · · organické extrakty se promyly vodou (20 ml) a nasyceným roztokem chloridu sodného (20 ml), vysušily naďbezvodým síranem sodným a zkoncentrovaly ve vakuu za vzniku olejovitého zbytku. Surový produkt se rozpustil v bezvodém dichlormethanu pod argonem a ochladil na 0 °C. K ochlazené směsi se přidalo 0,4 nm molekulové síto (1 g) a trimethylbromsilan (1,1 ml, 8,8 mmol) a výsledná směs se míchala 5 hodin. Potom se reakční směs zředila ethylacetátem (50 ml) a vodou (20 ml) a přenesla do dělicí nálevky. Vytřepaly a oddělily se dvě vrstvy. Vodná vrstva se extrahovala ethylacetátem (50 ml) a spojené organické extrakty se promyly nasyceným roztokem chloridu sodného (30 ml), vysušily nad bezvodým.. síranem.sodným a zkoncentrovaly-ve vakuu ža vzniku 16-deacetoxy-16p-ethoxy-17(S), 20(S)-dihydrofusidové kyseliny.

' ¹³CNMR, (CD₃OD): 181.2,132.8,125.1, 82.9,72.5, 69.4,66.4,50.8,47.5,46.6,41.9,39.3, 39.1, 38.2,37.9,37.1, 36.1,34.4,33.1,31.1,26.5,25.9,23.8,23.6,22.7,17.8,17.3,16.5,15.2

Příklad 24 až 29: 16-Deacetoxy-16p-alkyloxy-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny (sloučeniny 124 až 129)

Nahrazením ethanolu v postupu z příkladu 21 alkoholy uvedenými v tabulce 6 se získaly 16-deacetoxy-16p-alkyloxy~ -17 (S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny uvedené v tabulce 7.

(XII) • · ·· ·· • ·

Příklad	Alkohol	Výsledná sloučenina
Č.	R
24	2,2,2-Trifluorethanol	124	CH₂CF₃
25	Propanol	125	CH2CH2CH3
26	Isopropylalkohól	126	CH(CH₃)₂
27	1, 3-Difluorisopropylalkohol	127	CH(CH₂F)₂
28	Methoxymethanol	128	CH2OCH3
.29	2,2,2-Trichlorethanol	129	CH2CCI3

Sloučenina, 126,¹³C NMR, (CD3OD): 181.1,132.9,125.0,99.3, 83.6, 72.5,69.4, 56.3,50.9,50.6,

47.7,46.7,41.9,41.3,39.3, 38.2, 37.9, 37.0, 36.2, 34.2,33.1, 31.1, 26.5, 25.9, 23.8,23.5, 22.7,17.8 17.3,16.5

Příklad 30: 16-Deacetoxy-16p-(2'-azidoethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 130)

A. Terc.butylester 3,ll-bis-0-methoxymethyl-16-deacetoxy-16p-(2'-hydroxyethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny

K roztoku terc.butylesteru 3,ll-bis-0-methoxymethyl-16-deacetoxy-16a-brom-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny (19) (1400 mg, 2 mmol) ve směsi ethylenglykolmonoacetátu a ethylenglykoldíacetátu (1:1, 8 ml) se přidal uhličitan stříbrný (1,1 g, 4 mmol). Směs se míchala chráněná před světlem tři dny při teplotě místnosti. Po odstranění rozpouštědel za sníženého tlaku se kapalný zbytek zředil methanolem (40 ml), přidal se uhličitan draselný a směs se míchala 30 minut při teplotě místnosti. Směs se zkoncentrovala ve vakuu a výsledný olejovitý zbytek se rozpustil v diethyletheru (40 ml) a vodě (40 ml) a neutralizoval zředěnou kyselinou chlorovodíkovou. Oddělily se dvě vrstvy a vodná vrstva se • · znovu extrahovala diethyletherem (20 ml). Spojené organické extrakty se promyly vodou (20 ml) a nasyceným roztokem chloridu sodného (2 ml), vysušily nad bezvodým síranem sodným a zkoncentrovaly ve vakuu. Surový produkt se čistil kolonovou chromatografií za použití ethylacetátu a nízkovroucího petroletheru jako eluentu a vznikl terč.butylester 3,11-bis0-methoxymethyl-16-deacetoxy-16p-(2'-hydroxyethoxy)17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny.

B. Terč.butylester 3,ll-bis-0-methoxymethyl-16-deacetoxy-16P-(2'-bromethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny

Fenyl-N,N-dimethylformimidat-bromid (740 mg, 3,2 mmol) se přidal k roztoku terc.butylesteru 3,11-bis-O-methoxymethyl-16-deacetoxy-16p-(2'-hydroxyethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny ze stupně A (670 mg) a výsledná směs se míchala 16 hodin při teplotě místnosti. Po zředění diethyletherem (30 ml) se směs přenesla do dělicí nálevky a promyla třikrát vodou (3 x 10 ml) a nasyceným roztokem chloridu sodného (10 ml). Organická vrstva se vysušila nad bezvodým síranem sodným a zkoncentróvala ve vakuu. Bledě červený zbytek se čistil kolonovou chromatografií za použití ethylacetátu a nízkovroucího petroletheru jako eluentu za vzniku terc.butylesteru 3,ll-bis-O-methoxymethyl-16-deacetoxy-16P~(2'-bromethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny.

C. Terč.butylester 3,ll-bis-0-methoxymethyl-16-deacetoxy-16p-(2'-azidoethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny

Roztok terc.butylesteru 3,ll-bis-0-methoxymethyl-16-deacetoxy-ΐββ-(2'-bromethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny ze stupně B (370 mg, 0,5 mmol) a azid lithný (125 mg, 2,5 mmol) v dimethylformamidu (8 ml) se míchal 18 hodin • · · · při teplotě místnosti. Potom se roztok zředil diethyletherem (40 ml), promyl třikrát vodou (3 x 10 ml) a nasyceným roztokem chloridu sodného (10 ml). Organická vrstva se vysušila nad bezvodým síranem sodným a zkoncentrovala ve vakuu za vzniku terc.butylesteru 3,ll-bis-O-methoxymethyl-16-deacetoxy-ΐββ-(2'-azidoethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny.

D. 16-0θ3θΘίοχγ-16β-(2'-azidoethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina

K roztoku terc.butylesteru 3,ll-bis-O-methoxymethyl-16-deacetoxy- 16β- (2'-azidoethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny (300 mg, 0,4 mmol) v tetrahydrofuranu (5 ml) se přidala 2N kyselina chlorovodíková (5 ml) a směs se zahřívala při 60 °C 4 hodiny. Reakční směs se nechala ochladit na teplotu místnosti, zředila ethylacetátem (25 ml) a přenesla do dělicí nálevky. Oddělily se dvě vrstvy a organická vrstva se promyla dvakrát vodou (2x5 ml) a dvakrát nasyceným roztokem chloridu sodného (2 x 5 ml). Organická vrstva se vysušila nad bezvodým síranem sodným a zkoncentrovala ve vakuu za vzniku 16-deacetoxy-16p-(2'-azidoethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny.

Příklad 31: lβ-Deacetoxy-lββ-(2'-hydroxyethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyselina (sloučenina 131)

Podle postupu z příkladu 30D s nahrazením terc.butylesteru 3,ll-bis-0-methoxymethyl-lβ-deacetoxy-16β-(2'-azidoethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny terč.butylesterem 3,ll-bis-0-methoxymethyl-lβ-deacetoxy-16β4 4

-(2'-hydroxyethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny z příkladu 30A se získala 16-deacetbxy-16p-(2'-hydroxyethoxy) -17 (S) , 20 (S) -dihydrofusidová kyselina.

Příklad 32: Sodná sůl 17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny

17(S),20(S)-Dihydrofusidová kyselina (400 mg, 0,77 mmol) se rozpustila v methanolu (0,4 ml) a acetonu (1,2 ml) a neutralizovala 4N hydroxidem sodným. Pomalu se přidával diethylether, dokud se nevysrážely bezbarvé krystaly. 350 mg bezbarvých krystalů se shromáždilo filtrací a vysušilo na vzduchu.

13c NMR, (CD₃OD), 173.1,131.8, 126,2,78.3, 72.6, 69.4, 50.8, 50.6,46.6,41.9,41.8, 39.6, 38.2,

38.0,37.1, 36.2, 35.2, 33.1, 31.1, 27)2,25.9, 23.7, 23.6, 22.6, 21.2, 17.9, 16.5

Příklad 33: DieLhanoiaminová sůl 17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny

17(S),20(S)-Dihydrofusidová kyselina (450 mg, 0,87 mmol) se rozpustila v acetonu (1 ml) a diethanolamínu (0,1 ml, 1 mmol) a skladovala při teplotě místnosti 24 hodin. Potom se pomalu přidal diethylether a výsledný roztok se několik dnů skladoval při 2 °C za vzniku 380 mg semikrystalické sloučeniny.

Příklad 34: Krém

Sodná sůl 16-deacetoxy-16p-ethoxy-17(S) , 20(S)-dihydrofusidové kyseliny 1g Vazelína 7,5 g Tekutý parafin 7,5 g Spermacet 2,5 g Sorbitan-monopalmitát 2,5 g Polyoxyethylensorbitanmonopalmitát

2,5 g bb ·· ♦ • · ·· · • · · · · .

• · · · • · * • «· ··· ♦

Voda 26,5 g g

Vazelína, parafin, spermacet, sorbitan-monopalmitát a polyoxyethylensorbitan-monopalmitát se zahřívají na 70 °C a pomalu se přidá voda za stálého míchání. Míchání pokračuje, dokud se krém neochladí. Sodná sůl l6-deacetoxy-163~ethoxy-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny se trituruje do krémového základu a homogenizuje za použití válcového mlýnu. Krém se plní do hliníkových stlačitelných tubiček.

Příklad 35: Mast

Sodná sůl 16-deacetoxy-16p-ethoxy-17(S) , 20(S)-

-dihydrofusidové kyseliny	1	g
Tekutý parafin	6,9	g
Cetanol	0,2	g
Bezvodý lanolin	2,3	g
Vazelína	39, 6	g

g

Parafin, cetanol, lanolin a vazelína se roztaví při 70 °C. Po ochlazení na teplotu nižší, než 40 °G se trituruje sodná sůl 16-deacetoxy-16p-ethoxy-17(S), 20(S)-dihydrofusidové kyseliny. Mast se plní do lakovaných hliníkových stlačitelných tubiček.

Příklad 36: Kapsle

Sodná sůl 16-deacetoxy-16p-acetylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny 25 g

Mikrokrystalická celulóza 14,5 g

Stearan hořečnatý 0,5 g g

Složky se protlačí přes síto (60 mesh) a míchají 10 minut. Směs se plní do tvrdých želatinových kapslí s hmotností plnění 400 mg.

Příklad 37: Tablety

Sodná sůl 16-deacetoxy-16p-(2',2',2'-trifluorethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny 25 g Avicel™ . .... 12 g STA-Rx 1500 12 g Stearan hořečnatý 1 g ' - 50 g

Sodná sůl 16-deacetoxy-16P~(2',2',2'-trifluorethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny, Avicel™ a STA-Rx se smíchají dohromady, prosejí přes 0,7 mm síto a potom smíchají se stearanem hořečnatý. Směs se slisuje do tablet o hmotnosti 500 mg.

Příklad 38: Suspenze

Sodná sůl 16-deacetoxy-16p-acetylthio-17(S),20(S)-

-dihydrofusidové kyseliny	i g
Citrónová kyselina	0,09 g
Hydrogenfosforečnan sodný	0,14 g
Sacharóza	5 g
Tween™ 80	0,01 g
Sorbát draselný	0,04 g
Sodná sůl karboxymethylcelulózy	0,1 g
Voda q.s. do 100 ml	suspenze.
Krystaly se mikronizují a suspendují v roztoku	citrónové
kyseliny, hydrogenfosforečnanu sodného, sacharózy,	sorbátu

draselného a Tween™ 80 v 10 ml vody za nepatrného zahřívání, pokud je to potřebné. Sodná sůl karboxymethylcelulózy se rozpustí ve 4 ml vroucí vody. Po ochlazení se přidá k ostatním složkám. Suspenze se homogenizuje v míchači a nakonec se přidá voda do celkového objemu 100 ml.

Příklad 39: Mast

A: Sodná sůl 16-deacetoxy-16P~(2',2',2'-trifluor• 9 · 9 • 9 9 9 99 dtí ethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny 1 g B: Jedna ze sloučenin: hydrokortizon, triamcinolon nebo fluocinolon 0,5 g Tekutý parafin 6, 9 g Cetanol 0,2 g Bezvodý lanolin 2,3 g Vazelína 39,1 g g

Parafin, cetanol, lanolin a vazelína se roztaví při 70 °C. Po ochlazení na teplotu nižší než 40 °C se trituruje A a B. Mast se plní do lakovaných hliníkových stlačitelných tubiček.

Příklad 40: Mast

A: Sodná sůl 16-deacetoxy-16p-(2',2',2'-trifluorethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny 1,5 g B: Tetracyklin 1,5 g Tekutý parafin 13,8 g Cetanol 0,4 g Bezvodý lanolin 4,6 g Vazelína 78,2 g

100 g

• 4 4 4 *4

4 44.

u u 4 4 4 4 □ y 4 4 4

4444 44

Příklad 41: Oční gel

17(S),20(S)-Dihydrofusidová kyselina 10 g

Benzalkoniumchlorid 0,1 g

Karbomer 5 g

Mannitol 50 g

Edetat sodný 0,5 g

Hydroxid sodný q.s.

Sterilní voda do 100 g

Edetat disodný a mannitol se rozpustí ve vodě pro injekce v.nádobě z nerezové oceli vybavené míchadlem a vmontovaným homogenizátorem. Přidá se karbomer 934P, nádoba se evakuuje a disperze se autoklávuje za pomalého míchání a homogenizace při velké rychlosti. Teplota se sníží na 70 °C, míchadlo a homogenizátor se zastaví. Přidá se mikronizovaná 17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina, nádoba se steriluje a evakuuje a 17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina se nechá klesnout ke dnu za pomalého míchání. Homogenizace se provádí za vysoké rychlosti po dobu 10 minut při 70 °C. Teplota se nechá klesnout pod 30 °C během míchání a homogenizace při nízké rychlosti. Přidá se sterilní roztok benzaikoniumchloridu ve vodě pro injekce za pomalého míchání. Karbomer 934P se neutralizuje přidáním sterilního roztoku hydroxidu sodného (1,050 kg ve vodě pro injekce). Míchání a homogenizace pokračuje při nízké rychlosti 5 minut. Pokud je to potřebné, pH se nastaví na 5,4 až 5,8. Oční gel se přenese do kontejnerů pro skladování za použití tlaku dusíku a přenosového systému s homogenizací s nízkou rychlostí. Oční bU • · • ·· gel se skladuje při teplotě místnosti do té doby, než se bude plnit. Potom se plní za aseptických podmínek do sterilních tub za použití hmotnosti plnění 3,5 g.

Claims

PATENTOVÉ N

1. Sloučenina obecného vzorce la (la) nezávisle představují fCHSHl-. -(NH1-.

kde

Qx, Q2 a Q3 jsou stejné nebo odlišné a skupinu -(00)-, - (C-HOH)-(CHOP.)-(CHNH₂)- nebo -(CHNHR)-, kde R představuje alkylový zbytek s 1 až 4 atomy uhlíku nebo acylový zbytek.s 1 až 4 atomy uhlíku a kde Q2 a Q3 mohou rovněž nezávisle představovat skupinu -(CH2)-;

Y představuje vodík, hydroxy, alkylový zbytek s 1 až 4 atomy uhlíku nebo acylový zbytek s 1 až 4 atomy uhlíku;

A představuje atom kyslíku nebo síry;

Ri představuje alkylový zbytek s 1 aš 4 atomy uhlíku, olefinickou skupinu se 2 až 4 atomy uhlíku, (Οχ-Οβ) acylovou skupinu, (C3-C7) cykloalkylkarbonylovou skupinu nebo benzoylovou skupinu, Rx je popřípadě substituován jedním nebo více atomy halogenu a/nebo skupinou hydroxy, alkoxy nebo azido;

a její farmaceuticky přijatelné soli a snadno hydrolyzovatelné estery.
2. Sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I • · Φ· · · »» »» • · · · · ·· · · · kde

Qi a Q₂ jsou stejné nebo odlišné a oba představují skupinu -(CHOH)-, -(CO)- nebo -(CHSH)-;

A představuje atom kyslíku nebo síry;

Ri představuje aikylový zbytek s 1 až 4 atomy uhlíku, olefinickou skupinu se 2 až 4 atomy uhlíku, (Ci-Ce) acylovou skupinu, (C3.-C7) cvkloalkylkarbonylovou skupinu nebo benzoylovou skupinu, Ri je popřípadě substituován jedním nebo více atomy halogenu a/nebo skupinou hydroxy, alkoxy nebo azido;

a její farmaceuticky přijatelné soli a snadno hydrolyzovatelné estery.
3. Sloučenina podle nároku 1 nebo 2, kde Qi a Q₂ oba představují skupinu
4. Sloučenina podle předcházejícího nároku, kde stereochemie atomů uhlíku C-3 a C-ll, když ' Qi a Q₂ 'S představují skupinu jjo‘ ' 3^e 3a-0H a lla-OH a atom C-16 nesoucí skupinu A má konfiguraci -(S) označenou 16β.
5. Sloučenina podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, kde Qi nebo Q₂ představuje -(CO)-.

·· AA A A AAAA ••A AA AA AAA

AAAA A A AA A

AAAA A AAAA A •AA A A AAA •AAA AA AAA AAA AA ·Α·Α
6. Sloučenina podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, kde A představuje kyslík.
7. Sloučenina podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, kde R_x představuje (Ch-CJ alkylovou skupinu popřípadě substituovanou jedním nebo více substituenty zvolenými ze souboru zahrnujícího skupinu azido, hydroxy a halogen zvolený ze souboru zahrnujícího fluor, chlor a brom.
8. Sloučenina podle předcházejícího nároku, kde R_xpředstavuje (C1-C4)alkylovou skupinu substituovanou jedním nebo více halogeny zvolenými ze souboru zahrnujícího fluor a chlor.
9. Sloučenina podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, kde Ri je zvolen ze souboru zahrnujícího ethyl,

2.2.2- trifluorethyl, 2,2,2-trichlorethyl, 2-azidoethyl, 2-hydroxyethyl, propyl a isopropyl, 1,3-difluorisopropyl, terc.butyl, acetyl, propionyl, chloracetyl a trifluoracetyl.
10. Sloučenina podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, kde R_x je zvolen ze souboru zahrnujícího ethyl,

2.2.2- trichlorethyl, 2-azidoethyl, isopropyl, terc.butyl a acetyl.
11. Sloučenina podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, kde vazbou mezi C-24 a C-25 je dvojná vazba.
12. Sloučenina vzorce I zvolená ze souboru, který tvoří 17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 101),

17(S) , 20(S),24,25-tetrahydrofusidová kyselina (sloučenina

102) , ll-dehydro-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina

103) ,

3-dehydro-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina

104) ,

16-deacetoxy-16p-propionyloxy-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 105),

1β-deacetoxy-l6β-(3'-chlorpropionyloxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 106), lβ-deacetoxy-16β-(2'-methylpropionyloxy)-17(S),20(S)-dihydro fusidová kyselina (sloučenina 107),

16-deacetoxy-16p-cyklopropylkarbonyloxy-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 108),

16-deacetoxy-16p-chloracetoxy-17 (S) , 20 (S) -dihydrofusidová kyselina (sloučenina 109),

16-deacetoxy-16P-bromacetoxy-17 (S),20 (S) -dihydrofusidová kyselina (sloučenina 110),

16-deacetoxy-16p-benzoyloxy-17 (S) , 20 (S) -dihydrofusidová kyselina (sloučenina 111),

16-deacetoxy-16p- (4 '-fluorbenzoyloxy) -17 (S) , 20 (S) -dihydrofusidová kyselina (sloučenina 112),

16-deacetoxy-16p-cyklohexylkarbonyloxy-17 (S) , 20 (S) -dihydrofusidová kyselina (sloučenina 113),

16-deacetoxy-16P-akryloyloxy-17 (S) , 20 (S) -dihydrofusidová kyselina (sloučenina 114),

16-deacetoxy-16P-isopropylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 115),

16-deacetoxy-16P-ethylthio-17 (S) , 20 (S) -dihydrofusidová kyselina (sloučenina 116),

16-deacetoxy-16p- (2 ' ,2' ,2 '-trichlorethylthio) -17 (S) , 20 (S) -di hydrofusidová kyselina (sloučenina 117), bb

16-deacetoxy-16p-terc.butylthio-17(S) ,20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 118),

16-deacetoxy-163-methoxymethylthio-17(S) ,20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 119),

16-deacetoxy-163-isopropylthio-17(S),20(S);24,25-tetrahydrofusidová kyselina (sloučenina 120),

16-deacetoxy-16p-acetylthio-17(S) , 20(S) -dihydrofusidová kyselina (sloučenina 121),

16-deacetoxy-16p-benzoylthio-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 122),

16-deacetoxy-16p-ethoxy-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 123),

16-deacetoxy-163-(2',2',2'-trifluorethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 124),

16-deacetoxy-16p-propoxy-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 125),

16-deacetoxy-16p-isopropoxy-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 126),

16-deacetoxy-16p-(1', 3'-difluorisopropoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 127),

16-deacetoxy-16p-methoxymethoxy-17(S) , 20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 128),

16-deacetoxy-16p-(2',2',2'-trichlorethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 129),

16-deacetoxy-16p-(2'-azidoethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 130),

16-deacetoxy-16p-(2'-hydroxyethoxy)-17(S),20(S)-dihydrofusidová kyselina (sloučenina 131) a jejich farmaceuticky přijatelné soli a snadno hydrolyzovatelné estery.

6b
13. Sloučenina podle nároku 12 zvolená ze souboru zahrnujícího sodnou sůl 17(S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny a diethanolaminovou sůl 17 (S),20(S)-dihydrofusidové kyseliny.
14. Stereoizomer sloučeniny vzorce I nebo Ia v čistém stavu nebo směs takových stereoizomerů.
15. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 14 samotnou nebo s farmaceuticky přijatelným, netoxickým nosičem a/nebo pomocnou látkou a popřípadě společně s jednou nebo více jinými terapeuticky účinnými složkami.
16. Farmaceutická kompozice obsahující 17(S),20(S)-dihydrofusidovou kyselinu vzorce 10 samotnou nebo společně s farmaceuticky přijatelným, netoxickým nosičem a/nebo pomocnou látkou, samotnou nebo společně s farmaceuticky přijatelnými, netoxickými nosiči a/nebo pomocnými látkami a popřípadě společně s jednou nebo více jinými terapeuticky účinnými složkami.
17. Farmaceutická kompozice podle nároku 15 nebo 16 ve formě topického přípravku.
18. Farmaceutická kompozice podle předcházejícího nároku ve formě masti.
19. Způsob léčby pacienta v případě potřeby antimikrobiální léčby, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání pacientovi účinného množství jedné nebo více sloučenin podle kteréhokoliv z nároků 1 až 14, popřípadě společně nebo současně s jednou nebo více jinými terapeuticky účinnými složkami.
20. Použití sloučeniny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 14 při výrobě léčiva.
21. Použití sloučeniny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 14 při výrobě léčiva pro systémovou léčbu infekcí.
22. Použití sloučeniny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 14 při výrobě léčiva pro topickou léčbu infekcí kůže a/nebo očí.
23. Použití podle nároku 22, v y z n ač u j i c í se tím, že léčivo přídavně obsahuje jednu nebo více jiných terapeuticky účinných složek.
24. Použití podle nároku 22 nebo 23, vyznačuj i c í se tím, že léčivo je určeno pro podávání současně s jednou nebo více jinými terapeuticky účinnými složkami.