CZ2002968A3 - Modulátor imunitní odpovědi - Google Patents

Modulátor imunitní odpovědi Download PDF

Info

Publication number
CZ2002968A3
CZ2002968A3 CZ2002968A CZ2002968A CZ2002968A3 CZ 2002968 A3 CZ2002968 A3 CZ 2002968A3 CZ 2002968 A CZ2002968 A CZ 2002968A CZ 2002968 A CZ2002968 A CZ 2002968A CZ 2002968 A3 CZ2002968 A3 CZ 2002968A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
response
activated
weight
increase
tnf
Prior art date
Application number
CZ2002968A
Other languages
English (en)
Inventor
Robert Tam
Original Assignee
Ribapharm Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ribapharm Inc. filed Critical Ribapharm Inc.
Publication of CZ2002968A3 publication Critical patent/CZ2002968A3/cs

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33Heterocyclic compounds
    • A61K31/395Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/41961,2,4-Triazoles
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/7056Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing five-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • A61P31/14Antivirals for RNA viruses
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • A61P31/14Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18Antivirals for RNA viruses for HIV
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02Immunomodulators
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07HSUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/044Pyrrole radicals
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07HSUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/056Triazole or tetrazole radicals

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Description

Modulátor imunitní odpovědi
Oblast techniky
Předložený vynález se týká použití sločeniny pro výrobu léčiva pro modulaci exprese lymfokinů v buňce, které je vhodné pro léčbu virových infekcí.
Dosavadní stav techniky
Mnoho virových infekcí je spojeno s posunem v cytokinovém profilu od Thl buněčné odpovědi směrem k Th2 buněčné odpovědi a nedávné výzkumy naznačují, že ovlivnění rovnováhy mezi Thl odpovědí a TH2 odpovědí by mohlo být výhodné z hlediska navození a/nebo udržení imunity proti virové infekci. Zvýšená Thl odpověď se zdá být zvlášť významná u infekce HIV, kde dlouho přežívající pacienti vykazují dominující Thl odpověď, zatímco v případě progrese onemocnění dominuje Th2 odpověď. Například, Barker a kol., předpokládá, že progrese onemocnění v případě HIV vyplývá z posunu produkce cytokinů u infikovaného hostitele od Thl směrem k obrazu Th2 (Barker E, Mackewicz CE, Levý JA Proč Nati Acad' Sci USA 1995 Nov 21; 92(24) : 11135-9) . Podobně, snížení Th2 odpovědi se zdá mít terapeutický význam, s ohledem na to Reiser a kol. popisuje, že Th2 cytokinové hodnoty jsou zvýšené u chronické virové hepatitidy ,C (Reiser, M. et al. ; J. Hepatol 1997 Mar; 26(3) :471-8) . Jsou známy různé způsoby ovlivňování Thl/Th2 rovnováhy a mohou být přibližně členěny na metody spojené s použitím cytokinů a na metody, které se s použitím cytokinů nepoj í.
V případě způsobů lěčby spojených s použitím cytokinů, jsou cytokiny podány s cílem ovlivnit rovnováhu směrem k Thl nebo naopak k Th2 typu odpovědi. Například, Knight et al. stanovil, že lěčba za užití IL-12 (interleukin-12), cytokinů podporujícího vývoj Thl buněk, může být využita jako lěčba u
AIDS, na základě toho, že podání IL-12 se ukázalo jako efektivní v obnově buňkami zprostředkované imunity u myší infikovaných myší formou viru AIDS nebo Rauscherovým • ·
- la leukemickým virem (RLV) (Knight, S.C. and Patterson, S.ř Annu. Rev. Immunol. 1994, 15: 593-615); V jiném příkladě, Grácie, J.A. a kol. popisuje, že podání IL-18 myši vykazuje různorodé účinky kritické pro vývoj Thl odpovědi (Grácie a kol.J. Clin. Invest. 1999 Nov 15; 104(10):1393-1401). Ačkoliv podání cytokinů typicky vede k relativně specifickému zvýšení požadovaných Thl cytokinů, dlouhodobé podávání cytokinů může být z mnoha důvodů • · • ·· · problematické. Například výroba rekombinantních cytokinů je poměrně drahá a izolace nonrekombinantních cytokinů z přirozeného zdroje je obecně obtížná, vzhledem k velmi nízké koncentraci cytokinů v přirozeném zdroji. Dalším problémem je požadavek na vysoký stupeň čistoty cytokinových preparátů s cílem zabránit alergické reakci po opakovaném podání. Navíc, v závislosti na původu cytokinů, nemusí pacient cytokiny dobře tolerovat.
U způsobu léčby, který není spojen s použitím cytokinů, jsou k ovlivňování rovnováhy mezi Thl a Th2 odpovědí využívány jiné imunomodulační látky než cytokiny. Například, Sprietsma J.E. předpokládá (Sprietsma J.E.; Med Hypotheses 1999 Jul;53(l):6-16), že zinkové ionty (Zn++) a oxid dusnatý (NO), spolu s glutathionem (GSH) a jeho oxidovanou formou, GSSG, mohou pomoci regulovat imunitní odpověď na antigen. Autor ve větších detailech popisuje, že deplece Zn++, NO a/nebo GSH posouvá Thl/Th2 rovnováhu směrem k Th2 a že doplnění Zn++, NO a/nebo GSH může posunout Thl/Th2 rovnováhu směrem k Thl. Podávání Zn++ nebo GSH/GSSG je zvláště výhodné, vzhledem k tomu, že tyto látky nejsou toxické ani ve zvýšené koncentraci a jejich výroba není drahá. Navíc, Zn++ a GSH/GSSG mohou být podávány perorálně, čímž významně snižují riziko alergických reakcí, zvláště v případě, kdy preparáty nejsou extrémně čisté. Zdá se však, že podávání Zn++ a/nebo GSH/GSSG je prospěšné pouze k obnovení Thl/Th2 rovnováhy ze stavu Th2 dominance, zatímco není jasné, zda může podání Zn++ a/nebo GSH/GSSG zvýšit Thl odpověď ze stavu normální Thl/Th2 rovnováhy.
V jiném příkladě, patentové přihlášce US 09/156 646, zmíněné zde formou odkazu, je popisován postup, ve kterém vynálezce využívá nukleosidový analog Ribavirin (l-(5-deoxy-p•D-ribofuranosyl)-l,2,4-triazol-3-karboxamid) k ovlivnění rovnováhy Thl/Th2 odpovědi. Použití Ribavirinu je zvláště výhodné u léčby virových infekcí, protože Ribavirin nejenom posouvá imunitní odpověď směrem k Thl odpovědi, ale působí také jako činidlo inhibující replikaci viru. Ribavirin byl, například, úspěšně použit v léčbě Hepatitis C. Část tohoto efektu byla připisována antivirovým účinkům a část cytokinové balanci.
Ačkoliv Ribavirin vykazoval požadovaný vliv na množství viru a stav imunity, dlouhodobé podávání Ribavirinu v poměrně vysokých dávkách bylo často spojeno s množstvím nežádoucích účinků, zahrnujících leukopenii a hemolytickou anémii. S cílem redukovat četné nežádoucí účinky, bylo zavedeno společné podávání Ribavirinu s IFNa-2B (Reichert, O., et al. 1998; Lancet 351:83-87). Společné podávání Ribavirinu s IFNa -2B však výrazně prodražilo léčbu. Navíc, dlouhodobé podávání IFNa -2B zvýšilo riziko vzniku nových vedlejších účinků spojených s IFNa -2B.
Navzdory poměrně úspěšnému podávání Ribavirinu při léčbě virových onemocnění, zůstává použití Ribavirinu problematické vzhledem ke vzniku různých vedlejších účinků. Proto zde • · ·
vzniká potřeba poskytnout lepší způsoby a prostředky ovlivňující Thl/Th2 rovnováhu s relativně nízkými nebo žádnými toxickými vedlejšími účinky vzniklými při léčbě virových infekcí.
Podstata vynálezu
Předložený vynález se zaměřuje na použití látky Levovirin™ (1-(β-L-ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-karboxamid) pro přípravu léčiva pro léčení virové infekce, kde virovou infekcí je HIV, HCV nebo HBV infekce.
Je popsáno použití sloučeniny se strukturou I pro výrobu léčiva pro modulaci exprese lymfokinů v buňce, ve kterém se buňce dodává sloučenina v koncentraci účinné pro modulaci exprese lymfokinů, přičemž strukturou I je
kde modulace je účinná pro ošetření podmínky, která je spojená s expresí cytokinů Thl.
Jedním z hledisek zkoumané problematiky je, že Levovorin™ zvyšuje u pacientů Thl odpověď v poměru k Th2 odpovědi a že, což se zejména předpokládá, Thl odpověď roste absolutně. Dalším hlediskem předmětu vynálezu je podávání Levovirnu™ in vivo, přednostně intravenózní injekcí nebo perorálně, přičemž doporučená dávka Levovirinu™ je mezi 0,1 mg/kg a 1,0 mg/kg.
V použití podle předloženého vynálezu je Thl odpověď vybrána ze skupiny sestávající z průměrného píkového nárůstu hodnoty IL-2 vzhledem k hodnotě aktivované kontroly nejméně o 70 % hmotn,,. průměrného píkového nárůstu hodnoty IFN-γ vzhledem k hodnotě aktivované kontroly nejméně o 20 % hmotn., průměrného píkového nárůstu hodnoty TNF-α vzhledem k hodnotě aktivované kontroly nejméně o 50 % hmotn., a průměrného
3a
píkového nárůstu hodnoty vzhledem k hodnotě aktivované kontroly IL-2, IFN-γ a TNF-a 42 % hmotn., 125 % hmotn. a případně 72 % hmotn.
Ve výhodném provedení vynálezu nárůst v Thl odpovědi zahrnuje průměrný píkový nárůst vzhledem k hodnotě aktivované kontroly IL-2 alespoň 70 % hmotn.
V dalším výhodném provedení nárůst v Thl odpovědi zahrnuje průměrný píkový nárůst vzhledem k hodnotě aktivované kontroly IL-2 alespoň 20 % hmotn.
V dalším výhodném provedení nárůst v Thl odpovědi zahrnuje průměrný píkový nárůst vzhledem k hodnotě aktivované kontroly TNF-α alespoň 50 % hmotn.
V dalším· výhodném provedené nárůst v Thl odpovědi zahrnuje průměrný píkový nárůst vzhledem k hodnotě aktivované kontroly IL-2, IFN-γ a TNF-a 42 % hmotn., 125 % hmotn. a případně 72 % hmotn.
Různé záměry, znaky, ohledy a výhody předloženého vynálezu se stanou více zřejmé z následujícího podrobného popisu výhodných provedení vynálezu spolu s předloženými výkresy, ve kterých jsou jednotlivé složky reprezentovány číslicemi.
Výraz virová infekce se vztahuje k jakémukoliv stadiu virové infekce, včetně inkubační doby, latentního nebo dormantního stadia, aktutního stadia a vzniku a přetrvání imunity proti viru, jak bude použit i dále. V této souvislosti, má výraz ošetření zahrnovat aspekty vzniku nebo navození imunity imunitního systému pacienta, stejně jako potlačení nebo inhibici virové replikace.
Jak bude chápáno i dále, lymfokiny jsou podskupinou cytokinů, kterou produkují pomocné T lymfocyty, a obecně se soudí, že spadají do dvou podtříd, Thl a Th2. Thl buňky (nověji známé jako buňky typu 1) produkují interleukin 2 (IL2), tumor-nekrotizující faktor (TNF-α) a interferon γ (IFN-γ) a jsou primárně odpovědné za buňkami zprostředkovanou imunitu, jako je hypersenzitivíta oddáleného typu nebo protivirová imunita. Ve srovnání s tím/ Th2 buňky jako hypersenzitivíta ·« ····
3b· ·· ···· (nověji nazývané buňky typu 2) produkují interleukiny IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10 a IL-13 a primárně se angažují v podpoře humorální odpovědi, kterou vidíme při reakci na alergeny, např. IgE a IgG4 izotypový přesmyk (Mosmann, 1989, Annu Rev Iirmunol, 7:145-173) .
Termíny Thl a Th2 odpověď mají zahrnovat celý rozsah účinků vyplývající z aktivace Thl a Th2, respektive, jak bude užito i dále. Mimo jiné, tyto odpovědi zahrnuji zvýšenou produkci odpovídající cytokinů, zvýšenou proliferací odpovídajících lymfocytů a další následky spojené • · · · • · • · se zvýšenou produkcí cytokinu, včetně migračního efektu. Thl odpověď je obecně charakterizována zvýšením IL-2, TNF-α a IFN-γ, zatímco Th2 odpověď je typicky charakterizována zvýšením EL-4, IL-5, IL-6 a IL-10.
V doporučené dávce obdrží pacienti infikovaní HIV s počtem CD4+ lymfocytů okolo 500 buněk na mikrolitr jednou denně, po dobu třiceti dní, jednu injekci vodného roztoku Levovirinu™ v celkové dávce 0,5 mg/kg tělesné hmotnosti.
Z dalšího možného hlediska zkoumané problematiky, HIV infekce nemusí být limitována na počet CD4+ lymfocytů okolo 500 buněk na mikrolitr, ale může zahrnovat i nižší počet CD4+ lymfocytů, včetně hodnot mezi 500 a 300, 300 až 150 a méně než 150 CD4+ lymfocytů. Podobně se zvažují i vyšší hodnoty CD4+ lymfocytů (např>500). Mělo by se dále připomenout, že přijatelné mohou být různé další klinické markéry, jiné než titr protilátek a hodnota CD4+ lymfocytů, včetně přímých a nepřímých metod určení přítomnosti HIV. Přímé metody jsou, například, kvantitativní kultivace PBMCs a plasmatického HIV, kvalitativní a kvantitativní metody PCR a atp. Nepřímé metody zahrnují kvalitativní a kvantitativní ELISA metody, atd.
S ohledem na typ virové infekce se předpokládá, že léčba virové infekce není omezena na specifický typ nebo subtyp HIV viru a je vhodné si uvědomit, že jsou zvažovány také jiné viry než HIV. Obecně se předpokládá, že jiné virové infekce zahrnují ty infekce, které mohou být léčeny Ribavirinem, D-ízomerem Levovirinu™. Jiné, zvláště zamýšlené virové infekce, zahrnují HCV a HBV infekci.
Mezi další pohledy nově popsané problematiky patří, že aplikace Levovirinu™ nemusí být omezena na jednodenní injekce podávané po dobu třiceti dní, ale může zahrnovat jiné frekvence i formy aplikace. V případě potřeby podání poměrně vysokého množství Levovirinu™ se uvažuje o dvou až čtyřech nebo i více injekcích za den. Podobně v případě, kde jsou požadovány vysoké plazmatícké koncentrace Levovirinu™ po delší období, se zvažuje permanentní aplikace. Stálý přísun může, například, zahrnovat použití kontinuální infuze, osmotické pumpy nebo implantátu s usnadněným uvolňováním. Mělo by se zdůraznit, že forma podání není omezena na formu injekční, ale vhodné podání může zahrnovat aplikaci perorální, transdermální, intranazální, inhalační, atd. V souvislosti s tím, přípravky možných preparátů Levovirinu™ mohou zahrnovat tablety, sirupy, gely, aerosole, atd. Dále se také zvažuje možnost podání Levovirinu™ in vitro. Určené množství celé krve nebo krevních derivátů tak může být, například, preinkubováno s Levovirinem™ in vitro, s cílem buď podpořit nebo navodit imunitní reakci směřující k imunitní obraně.
S, ohledem na dávkování Levovirinu™ se zvažuje, že jsou přípustné i různé možnosti dávkování zahrnující dávky mezi 0,5 mg/kg a 0,1 mg/kg a méně, ale také dávky mezi 0,5 a 1,0 « · · · mg/kg a více. Obecně bude vhodné dávkování záviset na mnoha faktorech, včetně typu vírové infekce, stádiu virové infekce, požadované plazmatické koncentraci Levovirinu™, trvání léčby, atd. Zatímco u některých virových infekcí může být, například, dosaženo úspěšné léčby při poměrně malých plazmatických koncentrací Levovirinu™, jiné virové infekce mohou vyžadovat dávky poměrně vysoké.
Mezi další pohledy nově popsané problematiky ještě patří možnost kombinace Levovirinu™ s jinými farmaceuticky aktivními látkami podporujícími léčbu virové infekce. Přídatné farmaceuticky aktivní látky, které jsou zvažovány, zahrnují antivirová činidla a imunomodulátory. Příkladem antivirových činidel jsou inhibitory proteázy, nukleotidy nebo nukleosidové analogy a imunomodulátory mohou zahrnovat cytokiny.
Ačkoliv není žádoucí omezit se na nějakou konkrétní teorii, předpokládá se, že podání Levovirinu™ koreluje u pacientů se zvýšením odpovědi Thi relativně k odpovědi Th2 a zvláště se předpokládá, že poměrné zvýšení Thi odpovědi vzhledem k Th2 odpovědi se děje na základě absolutního nárůstu Thi odpovědi. Hladiny cytokinů mohou tak být zvýšeny jednotlivě nebo společně. Předpokládá se například, že ošetření aktivovaných lidských PBMCs Levovirinem™ může vést k průměrnému píkovému nárůstu hodnoty IL-2 nejméně o 70 hmotn. % vyššímu, než je hodnota aktivované kontroly. Případně se předpokládá, že přidání Levovirinu™ k aktivovaným PBMCs může vést k průměrnému píkovému nárůstu hodnoty IFN-γ nejméně o 20 hmotn. % vyššímu, než je hodnota aktivované kontroly nebo k průměrnému píkovému nárůstu hodnoty TNF-α nejméně o 50 hmotn. % vyššímu, než je hodnota aktivované kontroly (viz také obr. 3 A-C). V jiném příkladě se předpokládá, že zvýšení Thi odpovědi může zahrnovat průměrný píkový nárůst oproti hodnotám aktivované kontroly u IL-2, IFN-γ a TNF-α o 42 hmotn. %, 125 hmotn. % a 72 hmotn. %, respektive.
Mělo by se zvláště zdůraznit, že zatímco spektrum léčitelných virových infekcí se mezi Ribavirinem a Levovirinem™ poněkud překrývá, Levovirin™ má podstatně sníženou toxicitu. Například, zatímco perorální podání Ribavirinu krysám v dávce 180 mg/kg po dobu čtyř týdnů vedlo k vážné hemolytické anémii a leukopenii, Levovirin™ nezpůsobil žádnou klinicky pozorovatelnou patologii. Dále se zvláště posuzuje, že léčba virových onemocnění Levovirinem™ je přednostně založena na ovlivnění Thl/Th2 rovnováhy ve prospěch převažující Thi odpovědi a nezakládá se hlavně na přímém antivirovém účinku. Výraz „přímý antivirový“ účinek nebo aktivita, jak je užito i dále, se vztahuje k bezprostřednímu účinku nebo aktivitě na přežití viru nebo replikaci. Naproti tomu, potlačení virové aktivity nebo replikace aspoň částečně zprostředkované jednou nebo více složkami imunitního systému, není považováno za „přímý protivirový“ účinek nebo aktivitu. Podobně je dobré zdůraznit, že relativní redukce Th2 • 000 • 0
• « ·
0
0 0 0 ·· odpovědi během léčby odpovídající zkoumané problematice, by mohla být zvláště výhodná u chorob spojených se zvýšenou odpovědí Th2 (např. HCV infekce).
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1 ukazuje strukturu Levovirinu™.
Obr. 2 ukazuje schéma syntézy Levovirinu™.
Obr. 3 A-C ukazují grafy zobrazující různé biologické účinky Levovirinu™ a Ribavirinu na jednotlivé součásti Thi odpovědi.
Obr. 4 ukazuje graf zobrazující sérové hodnoty ALT u myší injikovaných Con A v závislosti na léčbě Levovirinem™ a Ribavirinem.
Příklady provedení vynálezu
Následující příklady ilustrují ukázkovou syntézu a různé aplikace Levovirinu™.
Příklad 1: Syntéza Levovirinu™ l,2,3,5-tetra-O-acetyl-P-L-ribofuranóza (1): Do roztoku L-ribózy (50,0 g, 333,33 mmol) v neředěném methanolu (500 ml) rozmíchaného při pokojové teplotě byla přidána čerstvě připravená suchá methanolovaná HCl (40 ml, připravená probubláváním suchého plynu HCl methanolem při 0 °C do hmotnostního přírůstku 4g) pomocí stnkačky, během 15 minut, v prostředí argonové atmosféry. Po přidání methanolované HCl byla reakční směs ponechána při pokojové teplotě ve třepačce, po dobu 3 až 4 hodin. Byl přidán suchý pyridin (100 ml) a odpařen do vysušení při vysoké hodnotě vakua s teplotou pod 40 °C. Tento postup byl opakován podruhé s přidaným suchým pyridinem (100 ml). Zůstatek byl rozpuštěn v suchém pyridinu (250 ml) a ochlazen v ledové lázni na 0 °C v prostředí argonové atmosféry. K tomuto vychlazenému, protřepanému roztoku byl přidán acetanhydrid (100 ml) po kapkách pomocí nálevky během 15 minut. Po přidání acetanhydridu byla reakce ponechána ve třepačce při pokojové teplotě za vyloučení přístupu vlhkosti po dobu 24 hodin. Reakční směs byla odpařena až do vysušení. Zbytek byl rozdělen mezi ethylacetát (400 ml) a vodu (400 ml) a extrahován v EtOAc. Vodná vrstva byla opět oddělena pomocí EtOAc (100 ml). Celkový EtOAc extrakt byl promýván vodou (400 ml), nasyceným NaHCO3 (2x300 ml), vodou (300 ml) a fyziologickým roztokem (200 ml). Organický extrakt byl vysoušen pomocí anhydrogenního Na2SO4, přefiltrován a filtrát odpařen do sucha. Zbytek byl odpařován v přítomnosti suchého toluenu (2x150 ml) při vysoké hodnotě • · · · vakua. Vysušený olejnatý zbytek (92g, 95%) byl jako takový, bez další charakterizace, použit pro následující reakci.
Sirup (92 g) z výše popsané reakce byl rozpuštěn ve vychlazené kyselině octové (300 ml) a smíchán s acetanhydridem (75 ml) při pokojové teplotě. Roztok byl ochlazen v ledové lázni na 0 až 5 °C v prostředí argonové atmosféry. Byla pomalu přidána během časové periody 15 minut koncentrovaná EfeSCU^l ml). Po přidání H2SO4 byla reakční směs 14 hodin protřepávána při pokojové teplotě a nalita na ledovou tříšť (500 g) a míchána dokud led neroztál. Byla přidána voda (500 ml) a extrahována pomocí CHCI3 (2x300ml). Chloroformový extrakt byl promýván vodou (3x400 ml), nasyceným NaHCCb (2x300 ml), vodou (200 ml) a fyziologickým roztokem (200 ml). Promytý organický extrakt byl vysoušen pomocí anhydrogenního MgSO4, přefiltrován a odpařen do sucha za vzniku olejnatého zbytku (99 g). Zbytek byl odpařován v přítomnosti suchého toluenu (200 ml) a rozpuštěn v ethyletheru (200 ml), který následně po chlazení na 10 °C po jeden den vytvořil bezbarvé krystaly. Krystaly byly filtrovány, promývány směsí hexan:etheru (2:1, 50 ml) a vysušeny za vzniku 60,5 g produktu.
Methyl-l-(2,3,5-tri-O-acetyl-P-L-ribofuranosyl)-l,2,4-triazol-3-karboxylát (3) a methyl-1(2,3,5-tri-O-acetyl-p-L-riboíuranosyl)-l,2,4-triazol-5-karboxylát (4): Směs methyl-1-2,4-triazol•3-karboxylátu (25,4 g, 200 mmol), l,2,3,5-tetra-O-acetyl-P-L-ribofuranózy (63,66 g, 200mmol) a bis(p-nitrofenyl)fosfátu (lg) byla umístěna do RB-láhve (500 ml). Láhev byla na dobu 25 minut vložena do olejové lázně předehřáté na 165 až 175 °C do podmínek vakua vytvořeného vodní vývěvou a byla protřepávána. Vytěsněná kyselina octová byla zachytávána ve vychlazeném lapači umístěném mezi aspirátor vývěvy a RB-láhev. Láhev byla vyjmuta z olejové lázně a chlazena. Když teplota láhve dosáhla přibližně 60 až 70 °C, byly smíšeny EtOAc (300 ml) a nasycený NaHCO3 (150 ml) a extrahovány v EtOAc. Vodná vrstva byla extrahována opět pomocí EtOAc (200 ml). Společný EtOAc extrakt byl promyt nasyceným NaHCO3 (300 ml), vodou (300 ml) a fyziologickým roztokem (200 ml). Organický extrakt byl vysušen v prostředí anhydrogenního Na2SO4, přefiltrován a filtrát byl odpařen do sucha. Zbytek byl rozpuštěn v EtOH (100 ml) a zředěn MeOH (60 ml), který po ochlazení na 0 °C po dobu 12 hodin vytvořil bezbarvé krystaly. Pevná fáze byla přefiltrována, promývána minimálně vychlazeným EtOH (20 ml) a vysoušena při vysokých hodnotách vakua nad pevným NaOH za vzniku 60 g (78 %). Filtrát byl odpařen do sucha a čištěn na křemičitém nosiči za použití CHCI3' >EtOAc (9:1) jako eluátu. Z filtrátu byly izolovány dva produkty: rychle se pohybující 8,5 g (11 %) produkt a pomalu se pohybující 5 g (6,5 %) produkt. Pomalu se pohybující produkt se shodoval s produktem krystalizace. Rychle se pohybující produkt byl identifikován jako (4) a byl získán ve formě pěny. Celkový zisk (3) byl 65 g (84 %).
• ·· · l-P-ribofuranosyl-l,2,4-triazol-3-karboxamid (5): Methyl-l-(2,3,5-tri-O-acetyl-P-Lribofuranosyl)-l,2,4-triazol-3-karboxylát (62 g, 161 mmol) byl umístěn do ocelové bomby a ošetřen s čerstvě připraveným metanolovaným amoniakem (350 ml, připraven pasáží suchého HCI plynu suchým methanolem při 0 °C do nasycení). Ocelová bomba byla uzavřena a protřepávána při pokojové teplotě 18 hodin. Ocelová bomba byla poté ochlazena na 0 °C, otevřena a obsah byl odpařen do sucha. Zbytek byl ošetřen suchým ethanolem (100 ml) a odpařen do sucha. Získaný zbytek byl rozmělněn s acetonem za vzniku pevné fáze, která byla filtrována a promyta acetonem. Pevná fáze byla sušena přes noc při pokojové teplotě a rozpuštěna ve směsi horkého EtOH (600 ml) a vody (10 ml). Objem roztoku EtOH byl snížen na 150 ml jeho ohříváním a mícháním na horké plotně. Horký roztok EtOH po ochlazení poskytl bezbarvé krystaly, které byly filtrovány, promývány acetonem a sušeny v podmínkách vakua. Další koncentrace filtrátu poskytla další materiál. Celkový zisk představoval 35g (89%) produkt.
Příklad 2: Určení cytokinového profilu v odpovědi na Levovirin™ a Ribavirin
Od zdravého dárce byly pomocí centrifugace podle hustotního gradientu izolovány mononukleární buňky periferní krve s následným obohacením T buňkami za použití Lymphokwiku (One Lambda, Canoga Park, CA). Kontaminující monocyty byly odstraněny pomocí adheze na plast. Čisté T buňky představovaly >99 % CD2+, <1 % HLA-DR+, <5 % CD25+ a byly udržovány v RPMI-AP5 (mediu RPMI1640 obsahujícím 5% autologní plasmu,
1% glutamin, 1% penicilin/streptomycin a 0,05% 2-merkaptoethanol). Pro určení hodnot cytokinových proteinů byly T buňky (0,2*106 v objemu 0,2 ml) aktivovány přidáním 80 ng stafylokokového enterotoxinu B (SEB, Sigma, St. Louis, MI) a inkubovány v přítomnosti 0 až 10 μΜ Levovirinu™ nebo Ribavirinu v 96-jamkových plotnách po dobu 48 hodin při 37 °C. Po následné aktivaci byly supernatanty analyzovány na buněčnou cytokinovou produkci. Určení cytokinů bylo provedeno užitím ELISA kitů specifických pro IL-2, IFN-γ, TNF-α (Biosource, Camarillo, CA). Všechny výsledky ELISA metody byly vyjádřeny v pg/ml. Data jsou zobrazena jako procenta aktivovaných kontrol, počítaná jako poměr cytokinů aktivovaných T buněk nacházejících se v přítomnosti Levovirinu™ nebo Ribavirinu proti hodnotám cytokinů neošetřených aktivovaných T buněk násobený 100 %. Nulový efekt na cytokinové hodnoty by tak vykazoval procentuální hodnotu aktivovaných kontrol 100 %. Obrázek 3 A-C ukazuje podobnost na dávce závislých odpovědí T buněk ošetřených Ribavirinem nebo Levovirinem™ a různými Thi cytokiny. Tabulka 1 ukazuje efekt Ribavirinu a Levovirinu™ u SEB stimulovaných T buněk na expresi Thi cytokinů IL-2, IFN-γ a TNF-α. Přítomná data jasně naznačují, že
Levovirin™ poskytuje významný potenciál k léčbě těch onemocnění, kde hrají kritickou roli cytokiny typu 1.
Léčba IL-2 IFN-γ TNF-a
SEB 100 100 100
SEB + Ribavirm 143±18 131±6 124±4
SEB + Levovirin™ 131±12 122±3 144±7
Tabulka 1: Všechna data jsou společně ukázána jako průměrné procentuální hodnoty aktivovaných kontrol (+/standardní odchylka - dále st.o.) pro všechny cytokiny. Celkové hodnoty (pg/ml +/- st.o.) SEB indukované sekrece cytokinů typu 1 byla pro IL-2 640+/-36, pro IFN-γ 462+/-37 a pro TNF-α 223+/-27. Klidové hodnoty byty u všech cytokinů <30 pg.
Příklad 3: Metody určení přímé antivirové aktivity a cytotoxicity
In vitro testování přímé antivirové aktivity Levovirinu™ a Ribavirinu proti infleunze A a B, parainfluenze 1 a 2 a respiračním syncytiálním viru bylo provedeno stejně, jako popisuje Huffman, J.H. et al. Antiviral Chem. and Chemother. 1997, 8:75-83 a Bernard, D.L. et al. Antiviral Chem. and Chemother. 1997, 8:223-233. Určení Anti-HIV aktivity provedl National Cancer Institute, který používá postupy navrhované na detekci agens působícího v jakémkoliv stadiu reprodukčního cyklu viru (Weislow, O.W. et al., J. Nati. Cancer Inst. 1989, 81:577-586). Aktivita proti hepatitidě B byla sledována za použití metod, které popisuje Marion et al., Hepatology 1987, 7:724-731. Anti-HIV aktivita a cytotoxicita Ribavirinu byla určena z dříve známých dat (McCormíck, J.B., Lancet 1998, II: 1367-1369).
♦ ··♦ ·· ·
Tabulka 2 ukazuje srovnání přímé antivirové aktivity a cytotoxicity Levovirinu™ a
Ribavirinu na buňky infikované různými viry.
Přípravek Účinek HBV HIV INFL.A INFL.B PARA1 PARA 3 RSV
Levovirin™ Přímý antivirový >100 >600 >200 >200 >1000 >1000 >1000
Cytotoxický >100 >600 >200 >200 >1000 >1000 >1000
Ribavirin Přímý antivirový >100 40 6,1 1,9 40 4 5
Cytotoxický 53 >40 56 40 >1000 480 100
Tabulka 2: Testovány byly viry hepatitis B (HBV), virus lidského imunodeficitu (HIV), influenza (INFL) A a B, parainfluenza (PARA) 1 a 3 a respirační syncytiální virus (RSV). Antivirová aktivita (EC50) nebo cytotoxicity (CC50) jsou znázorněny v μΜ.
Příklad 4: Protizánětlivý účinek Levovirinu™ u hepatitidy indukované Concavalinem A
BALB/c myši (6 ve skupině) byly intraperitoneálně injikovány jednou dávkou 20 pg (1 mg/kg) Ribavirinu nebo Levovirinu™ nebo 200 μΐ PBS, 1 hodinu před intravenózní injekcí 0,3 mg Concavalinu A (Con A, Calbiochem, San Diego, CA) aplikovanou do ocasní žíly. Po 24 hodinách byly myši anestezovány Penthranem a kardiální punkcí jim byla odebrána všechna krev (exsanguinace). Sérum získané ze sražené krve bylo použito k určení sérové hladiny alaninaminotransferázy (ALT). Sérové hodnoty ALT byly určeny použitím metody stanovení enzymové aktivity (Sigma) založené na kalorimetrickém měření produktů (kyseliny pyrohroznové a glutamové) vzniklých při katalýze substrátů, alaninu a kyseliny a-ketoglutarové. Obrázek 4 ukazuje množství sérové ALT v závislosti na Ribavirinu nebo Levovirinu™ nebo PBS. Oba, Ribavirin a Levovirin™, byly schopny podstatně snížit Con A-indukované hodnoty ALT z asi 1900 U/ml na 969 U/ml ±192 u Ribavirinu a na 954 U/ml ±179 u Levovirinu™.
Takto byly ozřejměny specifické podoby a aplikace sloučenin a způsobů léčby virové infekce pomocí Levovirinu™. Mělo by být však zřejmé, vzhledem ke znalostem v oboru, že vedle běžně popisovaných, jsou možné mnohé další modifikace, bez odchýlení se od nově popsaného pojetí. Nově popsaný objev proto není omezen jinak, než ve smyslu připojených nároků. Navíc, v interpretaci obojího, přesného popisu a nároků, by měly být všechny výrazy interpretovány nejširším možným způsobem v souladu s kontextem. Zejména výrazy „obsahuje“ a „obsahující“ by měly být interpretovány jako odkazující na součásti, složky nebo postupy nevylučujícím způsobem ukazujícím, že zmíněné součásti, složky nebo postupy mohou být prezentovány nebo • ·· · ·
využity nebo kombinovány spolu s jinými součástmi, složkami nebo postupy, které nebyly přímo uvedeny.

Claims (8)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1 . Použiti sloučeniny se strukturou I pro výrobu léčiva pro modulaci exprese lymfokinů v buňce, ve kterém se buňce dodává sloučenina v koncentraci účinné pro modulaci exprese lymfokinů, přičemž strukturou I je kde modulace je účinná pro ošetření podmínky, která je spojená s expresí cytokinu Thl.
  2. 2. Použití podle nároku 1, ve kterém dodávaní sloučeniny zvyšuje Thl odpověď u pacienta relativně k Th2 odpovědi.
  3. 3. Použití podle nároku 2, ve kterém Thl odpověď je vybrána ze skupiny sestávájící . z průměrného píkového nárůstu hodnoty IL-2 vzhledem k hodnotě aktivované kontroly nejméně o 70 % hmotn., průměrného píkového nárůstu hodnoty IFN-γ vzhledem k hodnotě aktivované kontroly nejméně o 20 % hmotn., průměrného píkového nárůstu hodnoty TNF-α vzhledem k hodnotě aktivované kontroly nejméně o 50 % hmotn., a průměrného píkového nárůstu hodnoty vzhledem k hodnotě aktivované kontroly IL-2, IFN-γ a TNF-a 42 % hmotn., 125 % hmotn. a případně 72 % hmotn.
  4. 4. Použití podle nároku 2, ve kterém nárůst v Thl odpovědi zahrnuje průměrný píkový nárůst vzhledem k hodnotě aktivované kontroly IL-2 alespoň 70 % hmotn.
  5. 5. Použití podle nároku 2, ve kterém nárůst v Thl odpovědi zahrnuje průměrný píkový nárůst vzhledem k hodnotě aktivované kontroly IFN-γ alespoň 20 % hmotn.
  6. 6. Použití podle nároku 2, ve kterém nárůst v Thl odpovědi zahrnuje průměrný píkový nárůst vzhledem k hodnotě aktivované kontroly TNF-α alespoň 50 % hmotn.
    φ φφ φφφφ φ φ φ φ
    Ί. Použití podle nároku 2, ve kterém nárůst v Thi odpovědi zahrnuje průměrný píkový nárůst vzhledem k hodnotě aktivované kontroly IL-2, IFN-γ a TNF-a 42 % hmotn., 125 % hmotn. a případně 72 % hmotn.
  7. 8. Použití podle nároku 1, ve kterém krok dodávaní zahrnuje in vivo dodávaní.
  8. 9. Použití podle nároku 1, ve kterém podmínkou je virusová infekce vybrána ze skupiny sestávající z HIV infekce, HCV infekce a HBV infekce.
CZ2002968A 1999-12-23 2000-12-15 Modulátor imunitní odpovědi CZ2002968A3 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/471,513 US6518253B1 (en) 1999-11-19 1999-12-23 Treatment of viral infections using the L-isomer of ribavirin

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ2002968A3 true CZ2002968A3 (cs) 2003-10-15

Family

ID=23871906

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2002968A CZ2002968A3 (cs) 1999-12-23 2000-12-15 Modulátor imunitní odpovědi

Country Status (22)

Country Link
US (2) US6518253B1 (cs)
EP (1) EP1246832A1 (cs)
JP (1) JP2003518134A (cs)
KR (1) KR20030016213A (cs)
CN (1) CN1409721A (cs)
AU (1) AU2281601A (cs)
BR (1) BR0016163A (cs)
CA (1) CA2384110A1 (cs)
CZ (1) CZ2002968A3 (cs)
HK (1) HK1050011A1 (cs)
HR (1) HRP20020486A2 (cs)
HU (1) HUP0400500A2 (cs)
IL (1) IL148510A0 (cs)
MX (1) MXPA02006259A (cs)
NO (1) NO20022816L (cs)
PL (1) PL356640A1 (cs)
RU (1) RU2002112248A (cs)
SI (1) SI21042A (cs)
SK (1) SK6252002A3 (cs)
WO (1) WO2001046212A1 (cs)
YU (1) YU47702A (cs)
ZA (1) ZA200202739B (cs)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7638496B2 (en) 2000-02-15 2009-12-29 Valeant Pharmaceuticals North America Nucleoside analogs with carboxamidine modified monocyclic base
WO2002032920A2 (en) 2000-10-18 2002-04-25 Pharmasset Limited Modified nucleosides for treatment of viral infections and abnormal cellular proliferation
ATE322500T1 (de) * 2002-08-12 2006-04-15 Hoffmann La Roche Verfahren zur herstellung von einem ribofuranose
CN1742018A (zh) * 2002-12-10 2006-03-01 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 抗病毒的核苷衍生物
AU2003302275A1 (en) * 2003-01-07 2004-08-10 Kemin Pharma Europe Bvba Bicyclic carbohydrate compounds useful in the treatment of infections caused by flaviviridae sp., such as hepatitis c and bovine viral diarrhea viruses
US6930093B2 (en) * 2003-07-10 2005-08-16 Valeant Research & Development Use of ribofuranose derivatives against inflammatory bowel diseases
US20050009848A1 (en) * 2003-07-10 2005-01-13 Icn Pharmaceuticals Switzerland Ltd. Use of antivirals against inflammatory bowel diseases
US20050182252A1 (en) 2004-02-13 2005-08-18 Reddy K. R. Novel 2'-C-methyl nucleoside derivatives
US20140010783A1 (en) * 2012-07-06 2014-01-09 Hoffmann-La Roche Inc. Antiviral compounds
AU2015217221A1 (en) 2014-02-13 2016-08-11 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Prodrug compounds and their uses
CN106687118A (zh) 2014-07-02 2017-05-17 配体药物公司 前药化合物及其用途
CA3087932A1 (en) 2018-01-09 2019-07-18 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Acetal compounds and therapeutic uses thereof

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5767097A (en) * 1996-01-23 1998-06-16 Icn Pharmaceuticals, Inc. Specific modulation of Th1/Th2 cytokine expression by ribavirin in activated T-lymphocytes
US6150337A (en) * 1996-01-23 2000-11-21 Icn Pharmaceuticals, Inc. Specific modulation of Th1/Th2 cytokine expression by Ribavirin in activated T-lymphocytes
ATE238328T1 (de) * 1996-10-16 2003-05-15 Ribapharm Inc Monozyklische l-nukleoside, analoga und ihre anwendungen

Also Published As

Publication number Publication date
WO2001046212A1 (en) 2001-06-28
SK6252002A3 (en) 2003-02-04
KR20030016213A (ko) 2003-02-26
EP1246832A1 (en) 2002-10-09
RU2002112248A (ru) 2004-01-20
HUP0400500A2 (hu) 2004-07-28
US20030092644A1 (en) 2003-05-15
CN1409721A (zh) 2003-04-09
HK1050011A1 (zh) 2003-06-06
IL148510A0 (en) 2002-09-12
HRP20020486A2 (en) 2004-08-31
ZA200202739B (en) 2003-09-23
JP2003518134A (ja) 2003-06-03
MXPA02006259A (es) 2003-01-28
PL356640A1 (en) 2004-06-28
BR0016163A (pt) 2002-08-13
US6518253B1 (en) 2003-02-11
SI21042A (sl) 2003-04-30
YU47702A (sh) 2005-11-28
CA2384110A1 (en) 2001-06-28
AU2281601A (en) 2001-07-03
NO20022816D0 (no) 2002-06-13
NO20022816L (no) 2002-06-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5253204B2 (ja) カルボキサミジンで修飾した単環式塩基を有するヌクレオシドアナログ
CZ2002968A3 (cs) Modulátor imunitní odpovědi
US20090176721A1 (en) Nucleoside analogs with carboxamidine modified monocyclic base
ZA200206468B (en) Nucleoside analogs with carboxamidine modified monocyclic base.