CZ20032233A3

CZ20032233A3 - Derivát 2,4-disubstituovaného pyrimidin-5-karboxamidu jako modulátor draslíkového kanálku KCNQ

Info

Publication number: CZ20032233A3
Application number: CZ20032233A
Authority: CZ
Inventors: Pierre Dextraze; Valentin K. Gribkoff; Gene G. Kinney; Steven I. Dworetzky; Piyasena Hewawasam; Dharmpal S. Dodd; Charles D. Weaver
Original assignee: Bristol-Myers Squibb Company
Priority date: 2001-02-20
Filing date: 2002-02-14
Publication date: 2004-12-15
Also published as: MXPA03007395A; JP2005508833A; WO2002066036A1; US20020183335A1; NO20033683D0; NO20033683L; EP1361879A1; CA2438231A1; HUP0303841A2; PL372944A1

Description

Oblast techniky

Vynález se týká použití derivátů 2,4-disubstituovaného pyrimidin-5-karboxamidu, které jsou modulátory draslíkového kanálku KCNQ a jsou proto užitečné pro ošetřování poruch zodpovědných za modulaci draslíkových kanálků. Vynález se týká způsobu ošetřování poruch zodpovědných za modulaci draslíkových kanálků KCNQ podáváním savcům v případě potřeby terapeuticky účinného množství derivátu pyrimidin-2,4-disubstituovaného 5-karboxamidu.

Dosavadní stav techniky

Draslíkové <K⁺) kanálky se považují za nejrozmanitéjší třídu iontových kanálků a mají několik rozhodujících úloh ve funkci buněk- Bylo to doloženo na neuronech, kde K⁺ kanálky zodpovídají zčásti za určení buněčné drážditelnosti přispěním k membránové repolarizaci následující po depolarízaci, za zbývající membránový potenciál a za regulaci uvolňování neurotransmiterů. M-proud byl dávno popsán elektrofyziologickými sledovacími metodami a farmakologií jako dominantní vodivost při řízení neuronové drážditelnosti. Farmakologleká aktivace nebo potlačení M-proudů malými molekulami by mohla mít hluboké účinky v ovládání neuronové drážditelnosti. Podle Wang a kol. (Science 282, str. 1890 až 1893, 1998) soubor draslíkových kanálků KCNQ2 a KCNQ3 je podkladem jednoho typu nativního Mproudu v neuronech.

Aktivace nebo otevření kanálku (nebo kanálků) KCNQ, obzvláště kanálků KCNQ2 nebo KCNQ3 mutovaného nebo standardního typu se může ukázat jako výhodné ve zvyšování hyperpolarizace neuronů, vedoucí k ochraně před abnormálním synchronním zapálením během migrénového záchvatu- Vynález poskytuje řešení problému abnormálního synchronního zapálení neuronfl souvisejícího s bolestmi hlavy předvedením. že modulátory, s výhodou otevírače draslíkových kanálků KCNQ, zvyšují hyperpolarizaci neuronfl, která chrání proti abnormálnímu synchronnímu zapálení neuronfl účastnících se migrénových záchvatfl.

Ačkoli se mezi lidmi, trpícími migrénou, model symptomů liší, je podnětem úpornost migrénové bolesti k potřebě energického, avšak bezpečného a účinného léčení a terapie pro velkou většinu případů. V oboru je potřeba činidel, kterých mflže být použito ke snižování a úlevě migrény (a chorob podobných a mechanicky příbuzných migréně) a navíc k zabránění opakování migrény- Potřebná jsou protimigrénová činidla, která jsou účinná v léčení akutní migrémy stejně jako předcházející fázi migrénového záchvatu. Zřetelným cílem v oboru tedy je nalézt nové, bezpečné, netoxické a účinné protimigrénové sloučeniny k použití jako drogy a v protimigrénových prostředcích a při léčbě migrény.

Jelikož migréna postihuje velkou část populace, je třeba nalézt sloučeniny a činidla, která jsou vhodná k ošetřování a léčbě a jako složky farmaceutických prostředků ke snižováni a zmírňování bolesti nebo úlevě od bolesti a ke zmírňování nepříjemností migrénového záchvatu a ostatních symptomů migrény. Vynález takové nové potřeby splňuje poskytováním sloučenin, které fungují jako otevírače rodiny proteinů draslíkového kanálku KCNQ sloužících jako protimigrénová činidla nebo drogy a poskytuje prostředky k léčení migrényBucker a kol. (americký patentový spis číslo 4 250 178,

10. února 1981) popsal řadu karboxy-5-pyrimidnových sloučenin jako neuroleptických činidel. Způsob léčení zánětlivých stavů, jako jsou imunozánět1ivé a autoimunní nemoci, a léčení teplokrevných živočichů v případě potřeby deriváty pyrimidinkarbox• · · · amidu popsal 5 811428. 22 popsal Suto a

Suto a kol. (americký patentový spis číslo září 1998). Substituované pyrimidinkarboxyláty kol. (americký patentový spis číslo 5 852 028.

22. prosince 1998; a 5 935966, 10. srpna 1999) jako protizánětlivá činidla vhodná k prevenci a/nebo k léčení imunozánětlivých a autoimunních nemocí. Sloučeniny, známé ze stavu techniky. a jejich použití popsané v těchto patentech jsou tedy odlišné od nového použití podle vynálezu.

Podstata vynálezu

Vynález se týká způsobu léčení poruch souvisejících s otevřením draslíkových kanálků KCNQ u savců v případě potřeby, při kterém se podává těmto savcům terapeuticky účinné množství 2,4-dlsubstltutlaného derivátu pyrimidin-5-karboxamidu obecného vzorce I

(I) kde symboly R¹ , R² , R³ , R⁴ a R⁵ mají dále uvedený význam. Vynález se týká také farmaceutického prostředku obsahujícího otevírače nebo aktivátory draslíkových kanálků KCNQ a způsobu léčení chorob citlivých na účinky otevírání draslíkového kanálku KCNQ, jako je migréna.

Způsob léčení nebo úlevy od poruch spojených s polypeptidy draslíkového kanálku KCNQ a zejména s polypeptidy lidského draslíkového kanálku KCNQ, . které se obzvláště podílejí na snižování nebo úlevě od migrény nebo migrénového záchvatu, spočívá podle vynálezu v tom, že se podává spolu s obvyklým adjuvantem, nosičem nebo ředidlem terapeuticky účinnéo množství sloučeniny obecného vzorce I ····· ·· ··· · · • · · · · ····

kde znamená

R¹ atom vodíku, atom halogenu, skupinu alkylovou s 1 až 8 atomy uhlíku, fenylovou, fenylaikylovou, heterocyklickou se 3 až 6 atomy uhlíku, heterocykllekomethylovou se 3 až 6 atomy uhlíku, -CN, -OR, -NRR, -NRNCOR nebo -CF3,

R² atom halogenu, skupinu alkylovou s 1 až 8 atomy uhlíku, cykloalkýlovou se 3 až 7 atomy uhlíku, fenylovou, fenylalkylovou, heterocyklickou se 3 až 6 atomy uhlíku, heterocyk1 lekomethy loWiu se 3 až 6 atomy uhlíku, CN, OR, -NRR, -NRNCOR nebo -S-R,

R³ atom vodíku, atom halogenu, nebo skupinu alkylovou s 1 až 8 atomy uhlíku,

R⁴ atom vodíku, skupinu methylovou nebo -CH2C6H5,

R5 atom vodíku, skupinu alkylovou s 1 až 8 atomy uhlíku, cykloalkylovou se 3 až 7 atomy uhlíku, fenylovou, fenylalkylovou, heterocyklickou se 3 až 6 atomy uhlíku nebo heterocykl i ckomethy lovou se 3 až β atomy uhlíku, a každý R na sobě nezávisle skupinu alkylovou s 1 až 8 atomy uhlíku, alkinylovou se 3 až 7 atomy uhlíku, fenylovou, fenylalkylovou, heterocyklickou se 3 až 6 atomy uhlíku nebo heterocykl lekomethy lovou se 3 až 6 atomy uhlíku.

Výrazem skupina alkylová s 1 až 4 atomy uhlíku a skupina alkylová s 1 až 8 atomy uhlíku se vždy míní přímá nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující i až 8 atomfl uhlíku.

·· · · · · · · · ·· · • · · · 9 · · · · • · · · · · · · « ··· ·· · · · · · · · • ···· ···· • ·· ·· · · « · ·· jako je skupina methylová, ethylová, propylová, isopropylová, butylová, sek-butylová, isobutylová, terc-butylová, pentylová, isopentylová, amylová, hexylová a isohexylová- S výhodou obsahují tyto skupiny 1 až 4 atomy uhlíku. Výrazem cykloalkyl se 3 až 7 atomy uhlíku se vždy cyklická uhlíková skupina, jako je skupina cyklopropylová, cyklobutylová, cyklopentylová, cyklohexylová a cykloheptylová- Výrazem alkinyl se 3 až 7 atomy uhlíku se vždy míní alkinylová skupina s přímým nebo s rozvětveným řetězcem se 3 nebo 7 atomy uhlíku, jako je skupina 2-propin-l-ylová, 4-pentin-l-ylová, 2-butin-l-ylová, 2-methyl-3-butin-2-ylová a 3-butin-2-ylová. Výrazem halogen se míní atom bromu, chloru, jodu a fluoru. Výrazem fenylalkyl se míní alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující aromatický fenylový podíl, jako je skupina fenylmethylová, fenylethylová a feny1butylová. Výrazem heterocyklický se 3 až 6 atomy uhlíku” se míní heterocyklický kruhový systém obsahující 3 až 6 atomů uhlíku a jeden nebo několik heteroatomů, jako je skupina pyrrolylová, furanylová, thienylová, imidazolylová, oxazolylová, thiazolylová, pyrazolylová, pyrrolidiny1, pyridinyl, pyrimidinyl a purinylová skupina.

Vvýrazen terapeuticky účinné množství se vždy míní celkové množství každé účinné složky, které postačí k dosažení významného pacientova zlepšení, tedy zmírnění nebo vyléčení stavu, který zodpovídá za modulaci draslíkových kanálků KCNQ. Pokud je účinná složka podána pacientovi samotná, týká se výraz této složky samotné- Pokud je podána v kombinaci, vztahuje se výraz na kombinovaná množství účinných složek, jejichž výsledkem je terapeutický efekt, at je podání v kombinaci postupné nebo současné. Výrazem KCNQ se vždy míní rodina polypeptidů draslíkových kanálků KCNQ2, KCNQ3, KCNQ4 a KCNQ5 stejně jako odlišných jednotlivých členů rodiny, k nimž patří příkladně, tedy bez záměru na jakémkoliv omezení, KCNQ2/3, KCNQ2/5 a KCNQ3/5. Výrazem ošetřování, léčba, léčení se vždy • ·« ·« ·· ♦· ···· • · · · 9 · t · · · · ··· · · · · · · · • ····· · · ··· · · • · ···· ····

999 ·· ·· ·· · · 99 míní prevence, úleva nebo zmírnění poruch nebo symptomů spojených s dysfunkcí buněčné membránové polarizace a konduktance lidských polypeptidfl draslíkového kanálku KCNQ2, KCNQ3, KCNQ4 a KCNQ5 a obzvláště migrény a/nebo symptomů, které předcházejí plnému propuknutí migrénového záchvatu.

Vynález se týká způsobu léčení poruch zodpovědných za modulaci draslíkových kanálků KCNQ podáváním savcům v případě potřeby terapeuticky účinného množství derivátu 2,4-disubstituovaného pyrimidin-5-karboxamidu. Způsob přípravy derivátů 2,4-disubstituovaného pyrimidin-5-karboxamidu popsal Suto a kol. (americký patentový spis číslo 5 811428, 22. září 1998).

Obecné postupy, použité k syntese sloučenin obecného vzorce I, jsou objasněny ve schématech 1 až 7 a v příkladech. Vynález zahrnuje také obměny popsaných postupů, které jsou zřejmé pracovníkům v oboru.

Deriváty 2-aminopyrimidin-5-karboxamidu obecného vzorce I lze připravit z β-ketoesterů obecného vzorce II obecným postupem podle schéma 1.

Reakční schéma 1

IV

O O

II (R = Me, Et)

V

VI • · · ··

ΦΦΦ ·« φ · • φ ♦ · φ φ φ • · φφ · φ · ······· φ • φ · · φφφφ • · · · φφ φφ φφ ··· ·

Ve stupni A reakčního schéma 1 se připravuje enaminonový meziprodukt obecného vzorce III, kde symbol R znamená skupinu methylovou- Meziprodukt obecného vzorce III se připravuje následujícím způsobem^: Do roztoku vhodného methy1-3-oxopropionátového meziproduktu obecného vzorce II (R znamená methylovou skupinu, 18,8 mmol) a aduktu dimethylforraamid/dimethylsulfát (5,0 g, 25,1 mmol, připraveného reakcí směsi 1,05 mol dimethylformamidu a 1,0 mol dimethylsulfátu v průběhu čtyř hodin při tepíW-ě 40 C a 48 hodin při teplotě místnosti) v dichlormethanu (30 ml) se přidá triethylamin (3,8 ml, 27,3 mmol) při teplotě 0 C. Reakční směs se michá 16 hodin při teplotě místnosti, postupně se promývá 10^ kyselinou vinnou a vodou, organická vrstva se vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje se a filtrát se zkoncentruje ve vakuu. Izolovaný surový produkt se čistí bleskovou sloupcovou chromatografii (silikagel, eluční činidlo 1=2 hexan/ethylacetát), Čímž se získá enaminonový meziprodukt obecného vzorce III (R znamená methylovou skupinu).

Ve stupni B reakčního schéma 1 se připravuje 2-(methylthio)pyrimidin-5-karboxylová kyseliny, methy1esterový meziprodukt obecného vzorce vzorce IV, kde R znamená methylovou skupinu. Meziprodukt obecného vzorce IV se připravuje následujícím zpflsobem^: Do směsi síranu 2-raethylisothiomočoviny (1,85 g, 6,66 mmol) a octanu sodného (.2,28 g, 27,75 mmol) v dimethylformamidu (20 ml) se přidá enaminonový meziprodukt obecného vzorce III (R znamená methylovou skupinu, 11,1 mmol). Reakční směs se udržuje 16 hodin na teplotě 80 až 90 C. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti a zředí se vodou. Vysrážená • ·· ·

··· · · špinavě bílá pevná látka se shromáždí, čímž se získá meziprodukt obecného vzorce IV.

Ve stupni C reakčního schéma 1 se připravuje 2-(methylsulfinyl)pyrimidin-5-karboxylová kyseliny, methylesterový meziprodukt obecného vzorce vzorce V, kde R znamená methylovou skupinu. Meziprodukt obecného vzorce IV se připravuje následujícím způsobem: Do roztoku meziproduktu obecného vzorce IV (5,63 mmol) v dichlormethanu <30 ml) se přidá 3-chlorperoxybenzoová kyselina (1,17 g, 6,76 mmol) při teplotě -78 C. Reakční směs se míchá tři hodiny na ledové lázni. Reakční směs se promyje postupně nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Organická vrstva se vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje se a filtrát se zkoncentruje ve vakuu, čímž se získá meziprodukt obecného vzorce V.

Ve stupni D reakčního schéma 1 se připravuje 2-(substituovaná amino)pyrimidin-5-karboxylová kyselina, methylesterový meziprodukt obecného vzorce VI, kde R znamená methylovou skupinu- Meziprodukt obecného vzorce VI se připravuje následujícím způsobem: Do roztoku meziproduktu obecného vzorce V (1,41 mmol) v tetrahydrofuranu (3 ml) se přidá odpovídající primární nebo sekundární amin obecného vzorce HNR^R⁷ (2,83 mmol). Reakční směs se udržuje tři hodiny na teplotě zpětného toku. Rozpouštědlo a přebytek aminu se odstraní ve vakuu. Výsledný zbytek se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, čímž se získá meziprodukt obecného vzorce VI.

Ve stupni E reakčního schéma 1 se přiravuje 2-(substituovaná amino)pyrimidin-5-karboxylová kyselina, meziprodukt obecného vzorce VII. Meziprodukt obecného vzorce VII se připravuje následujícím způsobem: Roztok meziproduktu obecného vzorce VI (0,68 mmol) v ION roztoku hydroxidu sodného <5 ml) a v methanolu <5 ml) se udržuje tri hodiny na teplotě zpětného toku. Rozpouštědla se odstraní ve vakuu. Vodný zbytek se neu9 ·· ···· • ·· ·· ·· ·· · · « · · · · · · • · · · · ·· 9 9 9

99999 99 999 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 99 a 9 9 9 9 9 9 9 tralizuje IN kyselinou chlorovodíkovou na hodnotu pH 7. Karboxylová kyselina jakožto meziprodukt obecného vzorce VII se shromáždí v podobě pevné látky Ve stupni F reakčního schéma 1 se přiravuje 2-Csubstituovaný amino)pyrimidin-5-karboxamid obecného vzorce la. Sloučenina obecného vzorce la se připravuje následujícím způsobem: Do roztoku meziproduktu obecného vzorce VII CO.08 mmol) v dichlormethanu C2 ml), se přidá jakožto polymerní nosič l-C3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidovaná pryskyřice (457 mg, 0.64 mmol) a vhodný primární nebo skundární amin obecného vzorce HNR⁴R^& CO,16 mmol). Reakční směs se míchá 16 hodin při teplotě místnosti. Pryskyřice se odfiltruje a rozpouštědlo se odst-rani ve vakuu. Zbytek se čistí preparativní chromatografií HPLC, čímž se \získá sloučenina obecného vzorce la jako TFA sůl. Sloučeniny příkladů 1 až 18 se připravují obecně způsoby podle stupně A až F reakčního schéma 1.

Deriváty 2-(substituovaného amino)pyrimidin-5-karboxamidu obecného vzorce la se mohou připravovat ze 2-chlorpyrimidin-5karbonylchloridu obecného vzorce VIII následujícími obecnými postupy popsanými v reakčním schéma 2.

Reakční schéma 2

CA) R⁴R⁵NH. nasycený vodný roztok NaHCCb , CH2CI2

CB) NHR⁶R⁷, K2CO3. CH3CN • ·« • · · · · · · · ·· · • · · »··· · · · • ··· ·· · · · · · · » • · · · · · ···« ··· *· ·· ·· ·· ··

Ve stupni A reakčního schéma 2 se připravuje meziprodukt obecného vzorce IX zpracováním roztoku 2-chlorpyrimidin-5-karbonylchloridu obecného vzorce VIII (3 mmol) v dichlomethanu (5 ml) nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (5 ml) a odpovídajícím primárním, nebo sekundárním aminem obecného vzorce R⁴R^&NH (3,3 mmol). Reakční směs se míchá tři hodiny při teplotě místnosti. Vysrážený meziprodukt obecného vzorce IX se odfiltruje a rozpustí se v acetonitrilu (10 až 15 ml). Do získaného roztoku se přidá uhličitan draselný (0,62 g, 4,5 mmol) a odpovídající amin obecnéhoo vzorce HNR⁶R⁷ (6 mmol). Reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Anorganické soli se odfiltrují a filtrát se zkoncentruje k získání sloučeniny obecného vzorce Ia. Sloučeniny příkladů 19 až 30 se připravují obecným postupem popsaným v reakčním schéma 2.

Reakční schéma 3 objasňuje konverzi 2,4-dlhydroxypyrimidin-5-karboxylové kyseliny obecného vzorce X na derivát 2-(substituovaného amino)pyrimidin-5-karboxamidu obecného vzorce Ia.

Reakční schéma 3

IX

Ia • » φφ φφφ» »· Φ· φ φ φφφφ φ · · ♦ · φ φ φ φ · a φ φ φφ φ φ φ φ φφφ φ φ • φφφφ φ · · · φ · φ « φ φφ φφ φφ ··

Ve stupni Ά reakčního schéma 3 se převádí kyselina 2,4-dihydroxypyrimidin-5-karboxylová na 2,4-dichlorpyrimidin-5-karbonylchlorid udržováním suspenze 2,4-dihydroxypyrimidin-5-karboxylové kyseliny obecného vzorce X <0.128 mol) v oxychloridu fosforečném <700 ml) 11 hodin na teplotě zpětného toku. Reakční směs se ochladí na teplotu 23 C, zpracuje se chloridem fosforečným a udržuje se dalších 16 hodin na teplotě zpětného toku. Reakční směs se ochladí na teplotu 23 Ca zkoncentruje se za sníženého tlaku na hustý sirup. Stopy těkavých derivátů fosforu se společně oddestilují dvakrát s toluenem <2x250 ml), čímž se získá meziprodukt obecného vzorce XI v podobě hustého sirupu <též Stogryn, E.L., J. Med. Chem. 15 <2), str. 200 až 201, 1972)- Surový meziprodukt obecného vzorce XI se použije bez dalšího čištění ve stupni B.

Ve stupni B reakčního schéma 3 se připravuje derivát 2,4-dichlorpyrimidin-5-karboxamidu obecného vzorce XII. Surový 2,4-dichlorpyrimidin-5-karbonylchlorid obecného vzorce XI <0,047 mol) se zředí suchým tetrahydrofuranem <200 ml), rozo tok se ochladí na teplotu -78 C, přidá se najednou triethylamin <20 ml, 0,142 mol). Studená směs se po kapkách zpracuje jedním ekvivalentem příslušného aminu obecného vzorce R⁴R^&NH <0,047 mol), míchá se jednu hodinu, zředí se kyselinou chlorovodíkovou <0,5N, 200 ml) a extrahuje se ethylacetátem. Organická vrstva se vysuší síranem hořečnytým, zfiltruje se a filtrát se zkoncentruje ve vakuu za získání surového 2,4-dichlorpyrimidin-5-karboxamidu obecného vzorce XII. Rekrystalizací surového produktu obecného vzorce XII ze směsi rozpouštědel, jako je systém tetrahydrofuran/hexany, se získá čistý 2,4-dichlorpyrimidin-5-karboxamid obecného vzorce XII.

Ve stupni C reakčního schéma 3 se připravuje 2-chlor-4<substituovaného amino)pyrimidin-5-karboxamid z odpovídajícího derivátu 2.4-dichlorpyrimidin-5-karboxamidu. Derivát 2,4-dichlorpyrimidin-S-kar-boxamidu se nechá reagovat s odpovídajícím * ·« <« ·· « · 4 * ·

9 9 · 9 99

9 99 9 9 9 9

9 9 9 9 * tf aminem obecného vzorce R^H (kde znamená R¹ disubstituovaný dusík aminu) v příslušném rozpouštědle, jako v tetrahydrofuranu, v přítomnosti zásady, jako je triethylamin, a dalším zpracováním se získá meziproduktu obecného vzorce IX.

Meziprodukt obecného vzorce IX se může nechat reagovat s odpovídajícím aminem obecného vzorce HNR⁶R⁷ k získání sloučeniny obecného vzorce Ia. Pokud znamená HNR⁶R⁷ amoniak, může se použít následujícího postupu. Roztok meziproduktu obecného vzorce IX <1,56 mmol) v 1-methy1-2-pyrrolIdinonu <25 ml) se ochladí na teplotu O Ca nasytí se amoniakem v ocelové bombě. Ocelová bomba se uzavře a udržuje se 24 hodin na teplotě 120 o o

C. Po ochlazení na teplotu 23 C se směs zředí vodou a extrahuje se ethylacetátem. Spojené organické extrakty se proroyjí vodou, suší se síranem hořečnatým, zfiltrují se a filtrát se zkoncentruje ve vakuu. Zbytek se trituruje s diethyletherem a zfiltruje se k získání sloučeniny obecného vzorce Ia (kde znamená R⁶ a R⁷ vždy atom vodíku) jako pevné látky. Alternativně se mohou sloučeniny obecného vzorce Ia připravovat reakcí meziproduktu obecného vzorce IX s aminy obecného vzorce HNR⁶R⁷(kde oba R⁶ a R⁷ neznamenají atom vodíku) následujícím způsobem. Do roztoku meziproduktu obecného vzorce IX <0,025 mmol) v 1-methy1-2-pyrrolidinonu (0,5 ml) se přidá 1,0 M roztok aminu obecného vzorce HNR⁶R⁷ (0,125 ml, 0,125 mmol, 5 ekv.) v 1-methy1-2-pyrrolidinonu. Výsledná směs se udržuje 18 hodin na teplotě 100 až 135 C. Surová směs se čistí HPLC (PRIMESPHERE C18, sloupec 21,1 mm x 100 mm), mobilní fáze: A 10/90 acetonitri 1/voda + 5mMol octanu amonného, B 90/10 acetonitril/ voda -»-5mMol octanu amonného: gradient: 40 % až O % Ά během 5 minut; detektor: UV 220 nM; průtočná rychlost=20,0 ml/min. Čistota vzorků se zjištuje LCNS:HPLC (LUNA C8, sloupec 5 pm, 4,6 mm x 30 mm): mobilní fáze: A 10/90 acetonltri 1/voda + SmMol octanu amonného, B 90/10 acetonitri 1/voda + 5ra Mol octanu amonného: gradient 100 % až O A během 4 minut; detektor: UV.250 nM, průtočná rychlost: 4,0 ml/rain, nebo (PRIMESPHERE • ·* »► ·« ·· « · » «· · ··« ···« ··· • ··· » » ·· · · · * · • · ···· ···· ··» ·· ·♦ ·· β*· ·· »· ···· « · ·

C18-HC, sloupec 4,6 mm χ 30 mm) mobilní fáze: a 10/90 acet-onl trii/voda 5mMol octanu amonného, B90/10 aceton i tr i 1/voda ·+· 5mM o1octanu amonného; gradient: 100 t až 0 t A během 3 minut, detektor: UV 250 nM, prfltočná rychlost.: 4,0 ml/min.

Deriváty 2-aryloxypyriraidin-5-karboxamidu obecného vzorce Ib se mohou připravovat reakcí meziproduktu obecného vzorce IX s draselnou solí příslušného fenolového derivátu podle reakční ho schéma 4Reakční schéma 4 (K^N-R³

ΝγΝ

Cl

ArOH t-BuOK

IX

Ib

Do roztoku meziproduktu obecného vzorce IX (0,025 mmol) v l-methyl-2-pyrrolidinonu (0,5 ml) se postupně přidá 0,1 M roztok příslušného fenolového derivátu obecného vzorce ArOH (0,125 ml, 0,125 mmol, 5 ekv.) v 1-methy1-2-pyrrolidinonu a roztok t-erc-butoxidu draselného v tetrahydrofuranu (1,0 M, 0,125 ml, 0,125 mmol, 5 ekv.). Výsledná směs se udržuje 15 hoo o din na teplotě 85 C. Po vychladnutí na teplotu 23 C se směs rychle zchladí přísadou vodného roztoku natriuradihydrogenfosfátu <l,0M, 0,25 ml) a zfiltruje se přes filtr PTFE před čištěním chromatografií HPLC (PRIMESPHERE C18-HC, sloupec 21,2 mm x 100 mm), mobilní fáze^: A je. 10/90 acetonitri 1/voda -»· 5mMol octanu amonného, B je 90/10 acetoni tri 1/voda 5mMol octanu amonného, gradient: 40 % až 0 % A během 5 minut, detektor: UV, 220 nM, prfltočná rychlost 20,0 ml/min. Čistota každého vzorku se zjištuje LCMS:HPLC (PRIMESPHERE C18-HC, sloupec 4,6 x 30 mm).

• · ft · · · mobilní fáze: A je 10/90 aceton!tri 1/voda ·+· 5 mMol octanu amonného, B je 90/10 aceton!tri 1/voda + 5mMol octanu amonného, gradient: 100 % až 0 % A během 3 minut, detektor: UV 250 nM, průtočná rychlost: 4,0 ml/min.

Deriváty 2-alkoxypyrimidin-5-karboxaraidu obecného vzorce Ic se mohou připravovat reakcí meziproduktu obecného vzorce IX se sodnou solí příslušného alkoholového derivátu ROH podle reakčního schéma 5.

Reakčni schéma 5

JX Ic

Do roztoku meziproduktu obecného vzorce IX (0,050 mmol) v dioxanu (0,6 ml) se postupně přidá 1,0 M roztok žádaného alkoholu (0,40 ml, 0,40 mmol, 8 ekv.) v dioxanu a 1,0 M roztok hexamethyldisilazidu sodného (NaHMDS) v tetrahydrofuranu (0,25 ml, 0,250 mmol, 5 ekv.). Výsledná směs se udržuje dvě hodiny na teplotě 70 C. Po vychladnutí na teplotu 23 C se směs rychle zchladí přísadou vodného roztoku chloridu amonného (1,0 N, 0,40 ml) a zfiltruje se přes filtr PTFE. Lepkavý produkt se odstraní z fiol přísadou methanolu a výsledný roztok se zfiltruje. Surové filtráty se spojí a čistí se chromatografií HPLC (PRIMESPHERE C18-HC, sloupec 21,2 mra x 100 mm), mobilní fáze: A je 10/90 acetonitri 1/voda + 5mMol octanu amonného, B je 90/10 acetonitri 1/voda + 5mMol octanu amonného, gradient: 40 % až 0¾ A během 5 minut, detektor: UV, 220 nM, průtočná rychlost 20,0 ml/min. Čistota každého vzorku se zjišťuje LCMS: HPLC <YMC ODS-AC 18, 4,6 mm x 33 mm), mobilní fáze: A je 10/90 aceton! tri 1 /voda *· 5 mMol octanu amonného C, B je 90/10 acetonitríl/voda + 5mMol octanu amonného, gradient: 100 % až 0 % A během 3 minut, detektor: UV 220 nM, prfltočná rychlost: 4,0 ml/min.

Deriváty 2-arylpyrimidin-5-karboxamidu obecného vzorce Id se mohou připravovat Pd<0) zprostředkovanou kopulací meziproduktu obecného vzorce IX s odpovídajícím derivátem arylborité kyseliny, ArB<0H)2 podle reakčního schéma 6.

Reakční schéma 6

IX

Id

Do roztoku meziproduktu obecného vzorce IX <0,052 mmol) v 1-methy1-2-pyrrolidinonu (1,0 ml) se postupně přidá odpovídající derivát kyseliny borlté ArB(0H)2 <1,17 mmol, 2,25 ekv.) a vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného <2,0 M. 0,10 ml). Výsledná směs se promývá argonem před přísadou tetrakistrifenylfosfinu palladia [Pd(PPh3)4, <0,003 g)l a udržuje se dvě o a hodiny na teplotě 110 C. Po vychladnutí na teplotu 23 C se směs čistí chromatografií HPLC (PRIMESPHERE C18-HC, sloupec 21,2 mra x 100 mm), mobilní fáze'· A je 10/90 aceton!tri 1/voda + 5inMol octanu amonného. B je 90/10 acetonitri 1/voda + 5i»Mol octanu amonného, gradient: 70 % až 0 % A během 8 minut,detektor: UV, 220 nM, prfltočná rychlost 20,0 ml/min. Čistota každého vzorku se zjišťuje LCMS: HPLC (PRIMESPHERE C 18-HC sloupec 4,6 mm x 30 mm), mobilní fáze: A je 10/90 acetoni tri 1/voda ·► 5 mMol octanu amonného, B je 90/10 aceton i t.r i 1/voda 5mMol oc16 • · • · • · · · · ·

tanu amonného, gradient: 100% až O % A během 3 minut, detektor: UV 250 nM, průtočná rychlost: 4,0 ml/min.

Reakční schéma 7

Podle reakčního schéma 7 se nechává' reagovat meziprodukt obecného vzorcé^IX s odpovídajícím thiolem v přítomnosti vhodné zásady, jako je terc-butoxid draselný, k získání sloučeniny obecného vzorce Ie. Reakce se může provádět následujícím způsobem: Do roztoku meziproduktu obecného vzorce IX (0,025 mmol) v 1-methy1-2-pyrrolidinonu (0,5 ml) se přidá 1,0 M roztok thlolového derivátu vzorce RSH (0,125 ml, 0,125 mmol, 5 ekv.) v 1-methyl-2-pyrrolidinonu a roztok terc-butoxidu draselného v tetrahydrofuranu (1,0 M, 0,125 ml, 0,125 mmol, 5 ekv.). Výo sledna směs se udržuje dvě hodiny na teplotě 80 C. Po vychladnutí na teplotu 23 C se směs rychle zchladí přísadou vodného roztoku chloridu amonného (1.0 M, 0,3 ml), čistí se chromatografií HPLC (PRIMESPHERE C18-HC, sloupec 21,2 mm x 100 mm), mobilní fáze: ft je 10/90 acetonitri 1/voda + 5mMol octanu amonného, B je 90/10 acetonitr11/voda + 5mMol octanu amonného, gradient: 40 % až 0 % Λ během 5 minut, detektor: UV, 220 nM, průtočná rychlost 20,0 ml/min. Čistota každého vzorku se zjišťuje LCMS: HPLC (PRIMESPHERE C 18-HC sloupec 4,6 mm x 30 mra), mobilní fáze= A je 10/90 acetonitri 1 /voda ·► 5 mMol NH^OAC, B je 90/10 acetonitri 1/voda +· SraMol octanu amonného, gradient: 100 % až 0 & A během 3 minut, detektor: UV 250 nM, průtočná rychlost: 4,0 ml/min.

• ····· ·· ··· « · • · · · · · ···· • · · · » «· · · f · ·

Biologická aktivita

Testy KCNQ oocytu a jejich výsledky

Draslíkové kanálky (K⁺) jsou strukturálně a funkčně odlišné rodiny proteinů K⁺-selektivního kanálku, které jsou obsaženy v buňkách, vyznačují jejich centrální významnost v regulování počtu funkcí klíčových buněk (Rudy B., Neuroscience 25, str. 729 až 749, 1988). Zatímco jsou široce rozptýleny jako třída, jsou kanálky K* různě rozděleny jako jednotlivé členy této třídy nebo jako rodiny (Gehlert a kol., Neuroscience 52, str. 191 až 205, 1993). Obecně vede aktivace K'^F kanálků v buňkách a zejména v excitovatelných buňkách, jako jsou neurony a svalové buňky, k hyperpolarizaci buněčné membrány, nebo v případě depolarizovaných buněk k repolarízaci. Kromě toho k působení jako endogenní membránová napětová svorka mohou K⁺kanálky zodpovídat za významné buněčné příhody, jako jsou změny v intracelulární koncentraci ATP nebo intracelulární koncentraci vápníku (Ca²⁺). Ústřední úloha K⁺ kanálků v regulaci četných buněčných funkcí z nich činí obzvlášť významný cíl pro terapeutický vývoj (Cook N.S., Potassium channels: Structure, clasification, function and terapeutic potentíal- El lis Horwood.Chinchester, 1990). Jednou třídou K⁺ kanálků je rodina KCNQ představovaná KCNQ2, KCNQ2/3 heteromultimery a KCNQ5, regulovaná transmembránovým napětím a má potenciálně významnou úlohu v regulaci neuronální drážditelnosti (Biervert a kol.. Science 279, str. 403 až 406, 1998; Lerche a kol., J. Biol. Chem. 275, str. 22395 až 22400, (2000; Wang a kol., Science 282, str. 1890 až 1893, 1998).

Otevírač kanálků KCNQ, jako je otevírač kanálků KCNQ2 a KCNQ2/3 retigabin, vykonává své buněčné účinky zvyšováním pravděpodobnosti otevírání těchto kanálků (Main J., Mol.Pharmacol 58(2) str. 253 až 262, 2000; Wickenden a kol., Mol. Pharm 58, str. 591 až 600, 2000). Tento nárůst otevírání jednotlivých ·· ··· · •· ·· ·· • · · * · · · · • · · · · ·· ·· · • ····· · · · · · · · • · · · · · ···· ··· ·· ·· ·· ·· ·· kanálků KCNQ kolektivně vede k hyperpolarizaci buněčných membrán, obzvláště v depolarizovaných buňkách, vykonávané významným zvyšováním vodivosti zprostředkované KCNQ v plných buňkách .

Schopnost sloučenin podle vynálezu otevírat kanálky KCNQ a zvyšovat (K^)KCNQ zprostředkované proudy z celých buněk se posuzuje za podmínek napěťové svorky určováním jejich schopnosti zvyšovat klonované myší KCNQ2 (mKCNQ2) zprostředkovávané, heteromultimerní KCNQ2/3 (mKCNQ2/3) zprostředkovávané a lidské KCNQ5 (mKCNQ5) zprostředkovávané vystupující proudy heterologicky expresované v oocytech Xenopus. Oocyty se připravují injektováním pomocí standardních technik; každý oocyt se injekt-uje s přibližně 50 nl mKCNQ2 nebo hKCNQS cRNA. V případě mKCNQ2/3 heteromultimerní kanálkové exprese se společně injektují stejná množství (25 až 50 nl) každé cRNA. Injektování ekvivalentních množství vody (50 nl) nevede k expresi vnějších proudů při napěťových krocích použitých k detekci exprese KCNQ4»

Po injekci se oocyty udržují na teplotě 17 C v prostředí ND96 obsahujícím: 90 mM chloridu sodného; 1,0 mM chloridu draselného; 1,0 mM chloridu vápenatého; 1,0 mM chloridu hořečnatého: 5,0 mM HEPES; hodnota pH je7,5. Do inkubačního prostředí se přidá koňské sérum (5 %), systém pěnici 11in/streptomycin (5 %). Zaznamenávání se započne 2 až 6 dní po injekci mRNA. Před začátkem testu se oocyty umístí do záznamové komory a inkubují se v modifikovaném Barthově roztoku (Modified Barth's Solution, MBS) obsahujícím: 88 mM chloridu sodného; 2,4 mM hydrogenuhličitanu sodného; 1,0 mM chloridu draselného; 10 mM HEPES; 0,82 mM síranu hořečnatého; 0,33 mM dusičnanu vápenatého; 0,41 mM chloridu vápenatého; hodnota pH je 7,5.

Oocyty se opatří elektrodami (1-2 Mohm) a standardní technikou dvouelektrodových napěťových svorek k záznamu membránových proudů plných buněk. Záznam se provede standardní technikou dvouelektrodových napěťových svorek (Stuhmer a kol., ·· ··· · • ·♦ ·· 9 9

9 9 9 9999 99 9

9 9 9 9 99 9 9 9 • 999 9 · · · · · · · · • · ···· ····

9 99 99 99 99 99

Methods In Enzymology, sv. 207, str. 319 až 339, 1992). Protokoly napěťových svorek typicky sestávají z rady napěťových kroků o trvání 1 až 5 sekund, v -+-10mV krocích od drženého potenciálu přibližně -90 mV až do maximálního potenciálu -»-40 mV: záznamy se digitalizují při 5 kHz a ukládají se do počítače za použití softweru pClamp data acquisition a analýzis software (Axon Instruments). Sloučeniny se vyhodnocují při jediné koncentraci (10 nebo 20 jjM; účinek vybraných sloučenin obecného vzorce I na KCNQ2 je vyjádřen jako procento kontrolního proudu a je uveden v tabulce I.

Tabulka I

Vliv vybraných sloučenin na kanálky KCNQ2

Příklad č.	Proud ~ KCNQ2
1	4-4-4-
4	4-4-4-
9	4-4-4-
19	+4-XX
37	4-4-
39	4-

* pokud není uvedeno jinak při 20jliM expresovaný jako procento nárůstu oproti proudu KCNQ v kontrolách, χχ při 5 μΜ + = 125-150%

-»-+ = 151-200% +-»-»- = >200 %

Elektrofyziologie in vivo

K testům popsaným v tomto případě je použito Long-Evansových krys (Harlan, 250-400 g). Před testem mají krysy přístup k potravě a vodě ad libitum a udržují se v cyklu 12-'12 světlo:

tma. Krysy se chovají ve skupinách v klecích za přísného dodržování předpisů flssocíation for Assessment and Acreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC).

Stimulace horního longitudinálního sinu (SSS) a záznam se provádějí způsobem podle dříve popsaných metod používajících zvířecích modelů kočky (Hoskin a kol- 1996) a krysy (Cumberbatch a kol., 1998, 1999). Krysy se anestetizují 1,2 g/kg i.p. uretanu (#U-25OO, Sigma Chemical Company, St.Louis, M0) a popřípadě dodatečnou močovinou. V případě intravenosního podání (i.v.) se kanylou opatří jugulární žíly krys pomocí sylastických trubiček předem plněných nosičem.

Krysy se umístí do stereotaxického přístroje (#1730, David Kopf Instruments, Tujunga.CA) a incise se provádí k odkrytí celé lebky, která pokračovala ocasem do úrovně spojení obratlů C1/C2. Pomocí mikrovrtáčku (#770, Dřeme1, Racine, WI) a #4 karbidového hrotu (Henry Schein, Melville.NY) se odejme polovina lebky od polohy bregma rostrálně do lambda polohy kaudální- Podlehlá důra mater se bilaterálně nařízne do SSS a malý kousek Parafilmu⁸ (American National Can, Neenah, WI) se vsune pod SSS k izolaci stimulační elektrody. SSS se stimuluje pomocí izolovaných stříbrných elektrod zahnutých na konci do tvaru háčku. Dorsální oblast pátere odpovídající C2 se odejme k získání přístupu k nervu trigeminal nucleus caudalis.

Zaznamenávají se stimulované odezvy pole v trigeminal nucleus caudalis mikroelektrodami z nerezavějící oceli povlečenými teflonem (impedance 5 megaohmů, Frederick Haer, Brunswick, ME) zesílí se a zfiltrují (0,1 Hz-10 kHz) pomocí diferenciálného zesilovače (#isoDAM8, World Precision Instruments, Sarasota, FL)- Stimulační napětí (250 tis, 4O-13OV) se přivádí stimulátorem Grass S88 (Grass Medical Instruments, Quincy, MA) a stimulační isolovanou jednotkou (Grass #SIU5) rychlostí 0,3 Hz. Zesílené potenciály se zachycují analogo-digitálním kon21 ·· ···· ·· • · · · 9 · · · · ·· ···· · · · •·· · · · · · · · · · • · · · · · · · · · ··· ·· ·· 99 99 99 vertorem <#1401 plus, Cambridge Electronic Design, Cambridge , UK) a obchodně dostupným softwerem (ttSignal, Cambridge Electronic Design). K zabránění dehydratace se použije nízkoteplotního vosku na jak na záznamovém tak na stimulačním místě.

Tři základní měření (to je 100¾ kontrola), sestávající vždy ze 100 vyvolaných potenciálů trigeminálního pole, se provedou před injekcí drogy. První měření pro účinnost se mění v aplitudě potenciálu trigeminálního pole po injekci testované sloučeniny- Pokles odezvové amplitudy v trigeminálním poli se považuje za důkaz protimigrénové aktivity. Po injektování testovaných látek, se data shromažďují 1 hodinu, průměrně v 5 minutových intervalech (90 vyvolaných potenciálů) a vyjadřují se jako procento změny oproti hodnotám základní čáry pro účele statistické analýzy. Data se analyzují opakovaným měřením kolísání porovnáváním účinků nosiče a drogy. Rozdíly jsou považovány za významné, je-li p menší než 0,05.

V jednom provedení vynálezu se zjistilo, že jsou otevírače nebo aktivátory proteinu draslíkového kanálku KCNQ2 účinné ve shora popsaném modelu migrény zahrnujícím vasculotrigerainální systémy podílející se na přenosu migrénové bolesti. Příkladně, tedy bez záměru na jakémkoliv omezení, sloučenina podle příkladu 19, použitá v SSS-stimulováném trigeminálním modelu migrény, přináší na dávce závislou redukci v SSS-stimulováné odezvě trigeminálního pole (overal1 ANOVA, p menší než 0,001). Sloučenina podle příkladu 19 se připraví jako roztok ve 100¾ polyethylenglykolu (MV=400) za použití sonikace k podpore rozpuštění a podává se i.v. za použití shora popsaného katetru při maximálním objemu 0,3 cm³- Při dávce 1 mg/kg i.v. produkuje sloučenina podle příkladu 19 statisticky významný 25,2¾ <P=G,OO5) pokles potenciálu pole ve srovnání s nosičem při 60 minutách následující i.v. injekci ve vrchním sagitálním sinu (SSS) modelu migrény.

♦ · ··· · ·» ·· • · · · « · · • · ·· · · · ··· ·· ·· ··· · · • ···· ····

Výsledky shora popsaných otevíračů draslíkového kanálku KCNQ ukazují, že sloučeniny podle vynálezu vedou k hyperpolarizaci buněčných membrán a pokusy in vivo SSS-polní potenciál dokládají, že otevárače KCNQ2 jsou užitečné pro modulaci neuronální aktivity a mohou vést k ochraně před abnormálním synchronním zápalem během migrénového záchvatu. Podle toho shora popsané otevíračové nebo aktivátorové sloučeniny podle vynálezu jsou schopny omezovat neuronální ayktivitu v trigeminovaskulárním systému a jsou tedy obzvlášť, vhodné pro léčení migrénové bolesti hlavy a migrénového záchvatu u jedinců trpících bolestí a nepři jemností migrény. Sloučeniny podle vynálezu se proto hodí k léčení akutní migrény, stejně jako k profylaktickému léčení migrény, jak doloženo účinností v modelu kortikálně se šířící deprese. Kromě toho sloučeniny podle vynálezu by mohly redukovat, zmírňovat, zlepšovat, eliminovat nebo preventivně působit proti jednomu nebo několika charakteristickým souborům symptomů, jmenovitě nevolnosti, fotofobie, fonofobie a základním funkčním nepříjemnostem, jež jsou dále spojeny s migrénou a migrénovou bolestí, ke kterým dochází po prodroraové fázi migrénové bolesti hlavy.

V jiném provedení se vyanález týká způsobu léčení nebo prevence poruch zodpovědných za otevírání draslíkových kanálků KCNQ u savců v případě potřeby, který spočívá v podávání těmto savcům terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce I.

Pro terapeutické použití se farmakologicky účinné sloučeniny obecného vzorce I zpravidla podávají jako ve formě farmaceutického prostředku obsahujícího jako nutnou účinnou složku alespoň jednu sloučeninu podle vynálezu spolu s pevným nebo s tekutým farmaceuticky přijatelným nosičem a případně s farmaceuticky přijatelnými adjuvanty a excipient-y za použití standardních a obvyklých technik23 • fcfc • · · · • fcfc • ··· « • · fcfc· fcfc fc* fcfc • fcfc fc • · fcfc • · · · • · · fc • fc fcfc • fc fc··· • · • ♦ • · • fc · fcfc

Farmaceutické prostředky zahrnují vhodné dávkovači formy pro orální, parenterální (včetně subkutánního, intramuskulárního, intradermálního a intravenosního) bronchiální nebo nasál ní podání. Pouzí je-li se tedy pevného nosiče, může být prostředek tabletován, uzavírán do tvrdých želatinových kapslí, v práškové nebo v peletové formě nebo ve formě sáčkfl nebo pastilek. Jakožto pevný nosič se uvádějí obvyklé excipienty, jako jsou pojivá, plnidla, tabletová mazadla, desintegrátory a smáčedla- Tableta může být případně povlečená filmem obvyklou technikou- Pouzí je-li se kapalného nosiče, může být prostředek ve formě sirupu, emulse, měkké želatinové kapsle, sterilního nosiče pro injekci, vodné nebo nevodné kapalné suspenze, nebo může být ve formě suchého produktu pro rekonstituci s vodou nebo s jiným vhodným nosičem před použitím. Tekuté prostředky mohou obsahovat běžné aditivy, jako jsou suspenzační činidla, emulgátory, smáčedla, nevodné nosiče (včetně jedlých olejů), konzervačních přísad, ochucovačfl nebo barviv. Pro parenterální podání je nosičem obvykle sterilní voda, ačkoli může být použito solných roztoků nebo roztoků glukózy. Může být též použito injektovatelných suspenzí, ve kterých se používá obvyklých suspenzačních činidel. Běžné konzervační prostředky a pufry a podobná činidla se mohou přidávat do parenterálních dávkovačích forem. Obzvlášť výhodné je podávání sloučenin obecného vzorce I přímo v parenterálnich prostředcích. Farmaceutické prostředky se připravují obvyklými způsoby, vhodnými k žádané přípravě, za použití vhodného množství účinné složky, kterou je sloučenina obecného vzorce I podle vynálezu (například Remington s Pharmaceutical Sciences Mack Publishing Company, Easton, PA, 17. vydání, 1985.

Dávka sloučenin obecného vzorce I k dosažení terapeutického efektu závisí nejenom na faktorech jako je věk, hmotnost a pohlaví pacienta a způsob podání, ale také na stupni požadované, aktivační aktivitě draslíkového kanálku a na potenci příslušné sloučeniny, použité pro příslušné onemocnění nebo

9999 • ** ·9 9 9 • · 9 · · 9 9 9 9« 9

9 9 9 9 99 99 9

999 99 99 999 9 9 • 9 9999 9999 ♦♦· ·· ·· 99 99 99 poruchu. Je také záměrem, aby léčba a dávka příslušné sloučeniny byla podávána ve formě jednotkové dávky a aby forma jednotkové dávky byla stanovena pracovníkem v oboru, aby odpovídala relativní úrovni aktivity. Rozhodnutí o patřičné dávce, které má být použito <a počtu podání za den) je na rozhodnutí lékaře a může se měnit titrací dávky pro příslušné okolnosti podle vynálezu k dosažení žádoucího léčebného efektu.

Vhodná dávka sloučeniny obecného vzorce I nebo prostředku pro savce včetně člověka, trpícího nebo pravděpodobně trpícího zde popsaným stavem je množství účinné složky 0,01 pg/kg až 10 mg/kg tělesné hmotnosti. Pro parenterální podání může být dávka 0,01 pg/kg až 1 mg/kg tělesné hmotnosti pro intravenosní podání. Pro orální podání může dávka činit 0,01 pg/kg až 5 mg/kg tělesné hmotnosti. Účinnou složku lze s výhodou podávat ve stejných dávkách jednou až třikrát denně. Obvykle se však podává malé dávkování a dávka se postupně zvětšuje až do určení optimálního dávkování pro léčeného pacienta.

Je však zřejmé, že množství sloučeniny aktuálně podávané stanoví lékař podle relevantních okolností, včetně léčeného stavu, volby podávaného prostředku, zvolené cestě podání, věku, hmotnosti a odezvě jednotlivého pacienta a závažnosti symptomů .

Vynález objasňují, nijak však neomezují následující příklady praktického provedení.

Příklady provedení vynálezu

Popis specifických provedení

Pokud není uvedeno jinak, používá se jako rozpouštědel a reakčních činidel přímo obchodních produktů a reakce se provádějí v prostředí dusíku. Blesková chromatografie se provádí na ·· ··· · silikagelu 60 (o velikosti částic 0,040 až 0,063, produkt společnosti EM Science). Spektra ¹H NMR se zaznamenávají na přístroji Bruker DRX-500f při 500 MHz, Bruker DPX-300B při 300 MHz nebo Varian Gemini 300 při 300 MHz. Chemické posuvy se uvádějí v ppm na delta stupnici vůči deltaTMS =0. Následující mezinárodní označení se používají pro zbytkové protony v následujících rozpouštědlech CDCI3 (deltaH 7,26), CD3OD (deltaH 3,30) a DMSO-de (deltan 2.,50). K popisu násobných obrazců je použito standardního označení s (singlet), d (dublet), t (triplet), q (kvartet), m (multiplet), b(široký), app (zdánlivý). Kopulační konstanta (J) je v herzích. LC/MS se provádí na kapalinovém chromatografu Shimadzu LC-10AS pomocí detektoru SPD-10AV UV-VIS s daty hmatové spektrometrie zjištěnými za použití Micromass LC Platform, v pozitivním modu elektrosprejové ionizace (ESI-»-). Data hmotové spektrometrie (MS) se získala technikou standardní průtokové injektáže na Micromass LC Platform v pozitivním modu elektrospre jové ionizace (ESI-*-), pokud není uvedeno jinak. Data hmotové spektrometrie s vysokou rozlišitelností (HRMS) se získají technikou standardní průtokové injektáže (ESI) na hmotovém spektrometru Finnigan MAT 900. Pokud není uvedeno jinak, jsou podmínky analytické reversní fázové chromatografie HPLC následující: Sloupec YMC ODS-A C18 S7 (3,0 x 50 mm), Start % B=O, konečné % B=í00, doba gradientu = 2 min, průtočná rychlost 5 ml/min. Délka vlny=220 nm, rozpouštědlo A =10 % methanolu - 90 % vody - 0,1 % trifluoroctové kyseliny, rozpouštědlo B = 90% methanolu- 10 % vody - 0,1% trifluoroctové kyseliny a Rt v minutách. Reversní fázová preparativní chromatografií HPLC se provádí za použití automatizovaného systému Shimadzu LC-8A automatické preparativní chromatograf ie HPLC s detektorem (SPD-10AV UV-VIS) délka vlny a systém rozpouštědel (A a B) stejný jako shora, pokud není uvedeno jinak. Teploty tání se zjištují za použití přítroje standard Mel-temp za tlaku okolí a jsou neopravené.

• · ftft * • · · · · · • · · · · ftftftft • · · • · ft · • · ftft

Příprava meziproduktů

Příprava 1

Příprava enamlnonu vzorce lila

O

Clila)

N(CH₃>2

Do roztoku methy1-3-cyklohexy1-3-oxopropionátu, připraveného způsobem, který popsal Taber a kol. (J. Araer. Chem. Soc. 109, str. 7488 až 7494, 1987), <3,46 g, 18,8 mmol) a aduktu dimethy1formamid/dimethy1su1fát <5,0 g, 25,1 mmol. připraveného reakcí směsi 1,05 mol dimethylformamidu a 1,0 mol dimethyl su 1 f átu za míchání po dobu čtyř hodin při teplotě 40 C a 48 hodin při teplotě místnosti) v dichlormethanu <30 ml) se přidá triethylamin <3,8 ml, 27,3 mmol) při teplotě 0 C. Reakční směs se míchá 16 hodin při teplotě místnosti a promyje se postupně 10% kyselinou vinnou a vodou a organická vrstva se vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje se a filtrát se zkoncentruje ve vakuu. Izolovaný surový produkt se čistí bleskovou sloupcovou chromatografií (silikagel, 1:2 hexany:ethy1acetát), čímž se záská jako meziprodukt enaminon obecného vzorce lila. Příprava 1, v podobě žluté pevné látky (2,6 g).

Příprava 2

Příprava methy1 esteru 4-cyk1ohexy1-2-(methy1thio)pyrimidin-5karboxylové kyseliny

Do směsi sulfátu 2-methy1isothiomočoviny (1,85 g, 6,66 mmol) a octanmu sodného <2,28 g, 27,75 mmol) v dimethy1 formamidu (20 ml) se přidá enaminon obecného vzorce lila (Příprava 1, 2,66 g, 11,1 mmol). Reakčni směs se udržuje 16 hodin na teplotě 80 až 90 C. Reakčni směs se ochladí na teplotu míst27

• 99 • · 9	9	99 9	99	9	99 9	9 99 9 9
• 999 9	9	9	9 9	9 9	9	9
• 9	•	9	9 9	9	9	9 9
99· 9·		9 9	99		99	99

nosti a zředí se vodou. Získaná sraženina se shromáždí, čímž se získá žádaná sloučenina <1,9 g, 38 % teorie) v podobě špinavě bílé pevné látky.

MS m/e 267 (MH+). NMR (CDC1₃): 6 8,87 <s,lH), 3,91 (s, 3H) , 3,59 (m,lH), 2,60 (s,3H), 1,30 - 1,86 <m,10H).

Příprava 3

Příprava methylesteru 4-cyklohexy1-2-(methy1sulfinyl)pyrimidin5-karboxylové kyseliny

Do roztoku methylesteru 4-cyklohexy1-2-(methylthio)pyrlmidin-5-karboxylové kyseliny (Příprava 2, 1,5 g, 5,63 mmol) v dichlormethanu (30 ml) se přidá 3-chlorperoxybenzoová kyšeo lina <l,17g, 6,76 mmol) při teplotě -78 C. Reakční směs se míchá tři hodiny na ledové lázni. Reakční směs se promyje postupně nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou- Organická vrstva se vysuší šíraném hořečnatým a filtrát se zkoncentruje ve vakuu, čímž se získá Žádaná sloučeninma <1,4 g, 88 % teorie) v podobě žluté pevné látky.

MS m/e 283 (MHO. NMR (CDCl3)^: 6 9,19 <s,lH), 3,99 (s, 3H), 3,61 (m,lH), 2,96 (s,3H), 1,27 - 1,84 (m.lOH).

Příprava 4

Příprava methylesteru 4-cyklohexyl-2-(morfolin-l-yl)pyriraidin5-karboxylové kyseliny

Do roztoku methylesteru 4-cyklohexy1-2-(methylsulfinyl)pyrimidin-5-karboxylové kyseliny (Příprava 3, 0,4 g, 1,41 mmol) v tetrahydrofuranu <3 ml) se přidá morfolin (0,247 g, 2,83 mmol). Reakční směs se udržuje tři hodiny na teplotě zpětného toku. Reakční směs se zkoncentruje ve vakuu k odstranění rozpouštědla a přebytečného aminu. Výsledný zbytek se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, čímž se

• «< • · ·	99	·· •	9	9	99 999 9
*	•
9 9 99 9	•	•	•	9	9 9	9
• · • « ··	•	• ··	• 99	9	9	9 · 99 99

získá žádaná sloučeninma (0,4 g, 93 % teorie) v podobě bílé pevné látky. MS m/e 306 (MH*).

Příprava 5

Příprava 4-cyklohexy1-2-(morfolin-l-y1)pyrimidin-5-karboxylové kyseliny

Roztok methylesteru 4-eyklohexyl-2-(morfolin-l-y1)pyrimidin-5-karboxylové kyseliny (Příprava 4, 0,21 g, 0,68 mmol) v ION roztoku hydoxidu sodného (5 ml) a v methanolu (5 ml) se udržuje tři hodiny na teplotě zpětného toku. Rozpouštědla se odstraní ve vakuu. Výsledný vodný zbytek se neutralizuje IN kyselinou chlorovodíkovou na hodnotu pH 7. Čistá žádaná sloučenina (0,15 g, 76 % teorie) se získá v podobě bílé pevné látky. MS m/e 292 (MH*).

Příprava 6

Příprava 2,4-dichlor-N-t[4-(trifluormethy1)feny11methyl1 pyrimidin-5-karboxamidu

Suspenze 2,4-dlhydroxypyrimidin-5-karboxylové kyseliny (20 g, 0,128 mol) v oxychloridu fosforečném (700 ml) se udržuje 11 o

hodin na teplotě zpětného toku, ochladí se na teplotu 23 Ca zpracuje se chloridem fosforečným. Reakční směs se udržuje 16 hodin na teplotě zpětného toku. Směs se ochladí na teplotu 23

C a zkoncentruje se za sníženého tlaku, čímž se získá hustý sirup. Stopy těkavých derivátů fosforu se společně oddestilují dvakrát s toluenem (2x250 ml), čímž se získá 18,9 g (70 SE teorie) hustého červeného sirupu (E.L. Stogryn, J. Med. Chem. 15(2), str. 200 až 201, 1972). Surového produktu se použije bez dalšího čištění. Surový 2,4-dichlor-5-pyrlmidinkarbonylchlorid (10 g) se zředí bezvodýra tetrahydrofuranem (200 ml), ochladí se na teplotu -78 C a přidá se najednou triethylamin (20 ml, 0,142 mol). Studená směs se zpracuje po kapkách 4-(trifluormethy1)benzylamínem (6,74 rol, 0,047 mol), míchá se 1 ·* «· • · · « · · • » · • « ·· φ ♦ ·

• · · · · • 9 9 9 9 ·· ·*·· • * * · • · · hodinu a zředí se kyselinou chlorovodíkovou (0,5N, 200 ml). Reakční směs se extrahuje ethylacetátem, spojené organické vrstvy se vysuší síranem horečnatým, zfiltrují se a filtrát se zkoncentruje ve vakuu, čímž se získá 11,9 g (71 % teorie) surové žádané sloučeniny. Rekrystaližací surového produktu ze systému tetrahydrofuran/hexany se získá čistá žádaná sloučenina v podobě krystalické pevné látky.

Příprava 7

Příprava 2-chlor-4-(pyrrolidin-l-y1)-N-[[4-(trifluormethy1)fenyl3 methyl 3 pyrimidin-5-karboxamidu

Studený (O C) roztok 2,4-dichlor-N-tí4-(trifluormethyl)feny13methy13pyrimidin-5-karboxamidu (Příprava 6, 8,35 g, 0,238 mmol) a triethylamin (5 ml, 35,7mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (60 ml) se po kapkách zpracuje pyrrolidinem (2,2 ml, 26,2 o

mmol). Směs se míchá 1,5 hodiny při teplotě O Ca reakce se ukončí přísadou kyseliny chlorovodíkové (IN, 40 ml) a vody (100 ml). Směs se extrahuje několikrát ethylacetátem. Organické extrakty se vysuší síranem sodným, zfiltrují se a filtrát se zkoncentruje ve vakuu, čímž se získá 7,9 g (86 % teorie) surové žádané sloučeniny. Rekrystalizací surového produktu ze systému tetrahydrofuran/hexany se získá čistá žádaná sloučenina v podobě krystalické pevné látky o teplotě tání 170 až 171 o

c.

*H NMR (CDC13) δ 8,08 (s, pyrimidin Η, 1H), 7,65 (d, J=8Hz, 2H), 7,51 (d, J=8 Hz, 2H), 6,52 (bs, NH, 1H), 4,66 (d, J=5,9 Hz, benzylické Η, 2H), 3,46 (bt, J=6.7 Hz, NCH2CH2 , 4H) , 1,93 (bt, J=6,7 Hz, NCH2CH2 , 4H);

IR 3273, 1654, 1585, 1539, 1389, 1326, 1212, 1175, 1111, 1066, 1011 cm“;

Anal7ya pro C17H16CIF3N4O vypočteno; C 53,07 H 4,19 N 14,56 nalezeno; C 53,34 H 4,28 N 14,36 >· ···· • ·· *· «« ·· · « ···· ·· « + *···«· 9 · · · ·* · · · · (3·· · · • · · · · · · · « « #*· «I» ·· ·· ·« ··

HRMS/ESI pro C17H17Ο3>U^3&C1 (M+H)⁺; 385,10431 nelezeno: 385,10450.

Příprava sloučenin obecného vzorce I

Následující příklady objasňují obecné způsoby přípravy sloučenin obecného vzorce IPříklad 1

4-Cyklohexy1-2-(morfo1in-l-yl)-N-[(4-fluorfenyl)methy1]pyrimid i n-5-karboxam id

Do roztoku 4-cyklohexy1-2-(morfolin-l-y1)pyrimidin-5-karboxylové kyseliny (Příprava 5, 23,3 mg, 0,08 mmol) v dichlormethanu (2 ml) se přidá jako polyraerní nosič l-(3-dimethylaminopropy1)-3-ethy1karbodximidová pryskyřice (P-EDC pryskyřice, 457 mg, 0,64 mmol) a 4-fluorbenzylamin (18,3 μΐ, 0,16 mmol). Reakční směs se míchá 16 hodin při teplotě místnosti. Pryskyřice se odfiltruje a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Zbytek se čistí preparativní chromatografií HPLC a produkt se izoluje v podobě soli TEA^: MS m/e 399 (MH⁺).

Příklady 2 až 18

Sloučeniny příkladu 2 až 18 se připravují obecným níže popsaným způsobem. Meziprodukty obecného vzorce VII se získají z odpovídajících vhodných výchozích produktů způsobem podle schéma 1 a způsoby dále popsanými v Přípravě 1 až 5.

Obecný způsob přípravy 2-(substituovaných amino)pyrimidin-5-karboxamidových sloučenin obecného vzorce Ia (příklady 1 až 18) ·· • ·

Do roztoku meziproduktu obecného vzorce VII CO,08 mmol) v dichlormethanu (2 ml) se přidá jako polymerní nosič l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethy1karbodimidová pryskyřice C457 mg, 0,64 mmol) a vhodný primární nebo sekundární amin obecného vzorce HNR^R⁵ (0.16 mmol). Reakční směs se míchá 16 hodin při teplotě mistnosti. Pryskyřice se odfiltruje a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Z zbytek se čistí preparativní chromatografií HPLC, čí^ž se získá sloučenina obecného vzorce Ia, která se izoluje v podobě TFA soli. Sloučeniny podle příkladu 2 až 18 se připravují z odpovídajícího meziproduktu obecného vzorce VII podle tohoto obecného způsobu.

Příklad Chemický název číslo

Hmotové spektrum m/e

2	4-cyklohexy1-2-(morfolin-l-yl)-N-(f eny1raethy1)pyr i m i d i n-5-karboxam1d	381	(MH+)
3	4-cyklohexy1-2-(piperidin-l-yl)-N-[(4-fluorfenyl)methyl]pyrimidin-5-karboxamid	397	CMH+)
4	4-cyklohexyl-2-(pyrrolidin-l-yl)-N-[(4-f luorf enyl )raethyl] pyríjaidin-5-karboxamid	383	(MH⁺)
5	4-cyklohexy1-2-(ethyl(fenylraethyl)amino]-N-<cyklohexylmethy1)pyrimidin-5-karboxamid	435	(MH⁺)

• 999 9 9 ·· ··· 9 ·

9 9999 9999

99999 99 99 99 99

6	4-cyklohexy1-2-1ethy1(fenylmethy1lamino]-N-(fenylmethy1Ipyrlmidin-5-karboxamid	429	<Miri
7	4-cyklohexy1-2-[ethy1(fenylmethy1lamino]-N-1<fluorfenyllmethy1]pyrimidin-5karboixamid	447	(Mm
8	< ±1-4-cyk1ohexy1-2-1(2-methylpi peridlnl-1-yll-N-(cyklohexylmethy1)pyrimidin-5-karboxam i d	399	(MHO
9	4-(1-propy1)-2-(pyrrolidin-l-yl)-N-f¢4-fluorfenyllmethy11pyrimidin-5-karboxamid	343	(Mm
10	4-<1-propyl)-2-(piperidin-l-yl)-N-[(4-fluorfenyllmethy11pyrlmidin-5-karboxamid	357	<MH*)
11	4-(2-propyl)-2-(pyrrolidin-l-yl1-N-I(4-fluorfenylImethyllpyrimidin-5-karboxamid	343	(Mim
12	4-(2-propyl)-2-(piperidin-l-yll-N-C(4-f1uorfeny1Imethyllpyrimidin-5-karboxamid	357	(Mm
13	4-(2-propyl)-2-(morfolin-l-yll-N-í(4-fluorfenylImethyllpyriraidin-5-karboxamid	359	(Mim
14	4-(2-propyl)-2-[ethyl(fenylmethy1)amino-N-f eny1methy11pyr i m i d i n -5-karboxam i d	389	(Mm
15	4-(2-fluorfenyl)-2-(pyrrolidin-l-yl)-N-1C4-(trifluorraethy1lfeny1lmethy11pyrtrnití i n-5 -karboxam i d	445	(Mim
16	4-(2-fluorfenyl)-2-(morfolin-l-yl)-N-[14-(tr1f1uormethy11f eny11methy11pyr im i d i n-5-karboxam i d	461	(Mm
17	4-(4-fluorfenyl)-2-(pyrrolidin-l-yl)-N-[[3-(trifluormethylIfenyllmethylIpyrimid i n-5-karboxam1d	445	(Mim

• ·

• · · · • · ··· ·

4-(2-fluorfenyl)-2-(morfolin-l-y1)-N[[3-(trifluormethy1)feny11 methyl)pyrimi461 (MH*) d i n-5-karboxami d

Příklad 19

2-(Pyrrolidin-l-yl)-4-(trifluormethy1)-N-([4-(trifluormethy1)fenyl]methyl1pyrimidi n-5-karboxamid

Do roztoku 2-ch1or-4-(trifluormethy1)pyrimidin-5-karbony1chloridu (0,74 g, 3,0 mmol) v dichlormethanu (5 ml), se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (5 ml) a 4-(trifluormethy1)benzylamin (0,58 g, 3,3 mmol). Reakční směs se míchá tři hodiny při teplotě místnosti. Vysrážená bílá pevná látka , 2-chlor-4-(trifluormethy1)-N-[[4-(trifluormethy1)fenyllmethyl]pyrimidin-5-karboxamid, se odfiltruje a rozpustí se v acetonitrilu (10-15 ml). Přidá se uhličitn draselný (0,62 g, 4,5 mmol) a pyrrolidin (0,43 g, 6 mmol). Reakční směs se míchá pres noc při teplotě místnosti. Anorganické soli se odfiltrují a filtrát se zkoncentruje ve vakuu, čímž se získá čistá žádaná sloučenina

MS m/e 419 (MH*). *H NMR (DMSO-de): delta 9,10 (t,J=5,9 Ηζ,ΙΗ), 8,68 (s.lH), 7,71 (d, J=8,1 Hz,2H), 7,55 (d, J=8,0 Hz,2H),

4,51 (d, J=6,l Hz,2H), 3,5 až 3,55 (ra.br,4H), 1,93 až 1,98 (m, 4H) .

Příklady 20 až 30

Obecný způsob přípravy 2-(substituovaných amino)pyrimidin-5-karboxamidových sloučenin obecného vzorce la (příklady 20 až 30) • ····· ·· · • 9 9 9 9 9 ··· · · · · · ·

(a) R⁴R^&NH, nasycený vodný roztok NaHCCte , CH2CI2 (b) NHR⁶ R⁷ , K2 CO3 . CH3CN

Do roztoku 2-chlor-4-(trifluormethyl)pyrimidin-5-karbony1chloridu (obecného vzorce Vlila, 0,74 g, 3,0 mmol) v dichlormethanu (5 ml) se přidá nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného (5 ml) a odpovídající amin obecného vzorce R⁴R⁵NH <3,3 mmol). Reakční ^měs se míchá tři hodiny při teplotě místnosti, vysrážený pevný derivát 2-chlor-4-(trifluormethyl)-N-pyriraidin-5-karboxamidu obecného vzorce IXa se odfiltruje a rozpustí se v acetonltrilu <10 až 15 ml). Přidá se uhličitan draselný (0,62 g, 4,5 mmol) a odpovídající amin obecného vzorce NHR⁶R⁷(6 mmol). Reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Anorganické soli se odfiltrují a filtrát se zkoncentruje ve vakuu za získání čisté žádané sloučeniny.

Sloučeniny podle příkladu 20 až 30 se připraví ze sloučeniny obecného vzorce Vlila za použití vhodných aminů shora popsaným způsobem.

Příklad číslo	Chemický název	Hmotové spektrum m/e
20	4-(trifluormethyl)-2-(pyrrolidin-l-yl )-H-t[3-(trifluormethyl)fenyl]methyl]pyrimld1n-5-karboxara1d	419 (MH*)

·· ·· ·· · · ···· • ····· ·· ··· · · • · · · · · ···· ····· ·· ·· ·· ··

21	4-<trif1uormethy1)-2-(pyrrolidin-l-y1)-H-[ (4-chlorfeny1 )raethy 1 ] pyr imidin-5-karboxaraid	385	(MH⁺)
22	4-(trif luormethyl )-2-(morfol in-4-yl )-N-C(4-chlorfeny1)methyl]pyrimidin-5-karboxamid	401	(MH⁺)
23	4-(trifluormethyl)-2-<hexamethylenimin-1-yl)-N~[(4-methylfeny1)methyl]pyrimidin-5-karboxamid	393	(MH*)
24	4-(trifluormethyl)-2-(pyrrolidin-l-yl)-N-C[4-(trifluormethoxy)feny1Imethy1]pyrimid i n-5-karboxam i d	435	(MH*)
25	4-(trifluormethyl)-2-(morfolin-l-y1)-M-1[4-(trifluormethoxylfeny1]methyl]pyr i midin-5-karboxamid	451	(MH*)
26	4-(trifluormethyl)-2-(piperidin-l-y1) -N-[[4-(trifluormethoxy)feny11 methyl]pyrimi d i n-5-karboxam i d	449	(MH*)
27	4-(trifluormethyl)-2-(dlethylam ino)-H[[4-(trifluormethoxy)feny1Imethy1]pyri mid in-5-karboxamid	437	(MH*)
28	4-(trifluormethyl)-2-(pyrrolidin-l-yl)-N-[(4-brorafenyl)methyl]pyrimidin-5-karboxamid	431	(MH*)
29	4-(trifluormethyl)-2-(pyrrolidin-l-yl)-N-([4-(di methy1am i no)feny1]methy1]pyr i m i din-5-karboxamid	394	(MH*)

• ♦ • · ··· ·

4-(trifluormethyl)-2-(morfolin-l-yl)-N- 467 (MH⁺)

-[[4-(trif1uormethylthio)fenyl]methy13 pyrimidin-5-karboxamid

Příklad 31

2-Amino-4-(pyrrolidin-í-yl)-N-t[4-(trifluormethyl)fenyl]methy 13pyrimidin-5-karboxamid

Roztok 2-chlor-4-(pyrrolidin-l-yl)-N-[[4-(trif1uormethy1)feny1]methyl1pyrimidin-5-karboxamidu (Příprava 7, 0,60 g, 1,56 mmol) v 1-methy1-2-pyrrolidinonu (25 ml) se ochladí na teplotu přibližně 0 Ca nasytí se plynným amoniakem v ocelové bombě. Ocelová bomba se uzvře a udržujese 24 hodin na teplotě 120 C.

Po vychladnutí na teplotu 23 C se směs zředí vodou a extrahuje se ethylacetátem- Spojené organické extrakty se promyjí vodou, vysuší se síranem hořečnatým, zfiltrují se a filtrát se zkoncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se trituruje s diethyletherem a odfiltruje se, čímž se získá žádaná sloučenina v podobě tříslově zbarvené pevné látky (0,41 g, 72 % teorie) o teplotě tání 227 až 228 *C.

¹H NMR (CDCl3)^; S 8,76 (t, J=6,13 Hz, NH, 1H). 7.90 (s.pyrimidin Η, 1H), 7,71 (d, J=8,1 Hz, 2H), 7,54 (d, J-8,1 Hz, 2H), 6,26 (s, NH2, 2H), 4,44 (d, J=6.1 Hz, benzylické Η, 2H), 3,27 (bt, J=6,5 Hz, NCH2CH2 , 4H), 1,77 (bt, J-6,5 Hz, NCH2CH2 , 4H); IR 3476, 3279, 1629, 1585, 1529, 1456, 1377, 1330, 1160, 1069 cm“.

Příklady 32 až 46

Obecný způsob přípravy 2-lalky1(ary1)aminol-4-(pyrrolidin-1yl)-N~[(4-(trifluormethy1)f eny13 methy13 pyr i m i d in-5-karboxara i dů • · · · • · · · · ♦ · · · · · ······· ··· · · 9 · 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

Do roztoku 2-chlor-4-(pyrrolidin-l-yl)-N-tí4-(trifluormethyl)fenylImethy1]pyrimidin-5-karboxamidu (Příprava 7, 9,6 mg, 0,025 mmol) v 1-methy1-2-pyrrol1donu (0,5 ml) se přidá l,0M roztok příslušného derivátu aminu obecného vzorce (0,125 ml, 0,125 mmol, 5 ekv.) v 1-methyl-2-pyrrolidonu. Výo o sledná směs se udržuje 18 hodin na teplotě 100 C až 135 C (100 C když je HNR^R⁷ alkylamin a 135 C, když je HNR^R⁷ derivát anilinu). Surová směs se čistí chromatografií HPLC (PRIMESPHERE C18, sloupec 21,1 mm x 100 mm), mobilní fáze: A 10/90 acetonitri 1/voda + 5mMol octanu amonného, B 90/10 acetonitril/voda + 5mMol octanu amonného: gradient: 40 % až 0 % A během 5 minut; detektor: UV 220 nM; průtočná rychlost:20,0 ml/min. Čistota vzorků se zjišťuje LCNS=HPLC (prvních 9 sloučenin) (LUNA C8, sloupec 5 um, 4,6 mm x 30 mm)^: mobilní fáze: A 10/90 aceton!tri 1/voda + 5mM oloctanu amonného, B 90/10 acetonitri 1/voda 5mMol octanu amonného; gradient 100 % až 0 % A během 4 minuty; detektor: UV,250 nM, průtočná rychlost=4,0 ml/min; (posledních 7 sloučenin) (PRIMESPHERE C18-HC, sloupec 4,6 mm x 30 mm) mobilní fáze; A 10/90 acetonitri 1/voda -*· 5mMol octanu amonného, B 90/10 acetoni tri 1/voda SmMoloctanu amonného; gradient: 100 % až O % Ά během 3 minut, detektor: UV 250 nM, průtočná rychlost: 4,0 ml/min.

Sloučeniny podle příkladu 32 až 46 jsou připraveny shora popsaným obecným způsobem.

Příklad Chemický název Hmotové číslo spektrum m/e

2-(3-pentylamino)-4-(pyrrolidin-l-yl)-N- 436(MH⁺)

-t[4-(trifluormethy1)fenyl3methyl]pyrímidin-5-karboxamld ·· · ·· · ·» ·* ·· • · · · * · · · · ·· · · ·· ··· ····« * · « 9 · · · • 9 9 9 · 9 9 9 9 ·· ·· ·· 9 9 9 9

33	2- [ et hy1 - < 2-hydroxyethy1anino]-4-( pyrro1 i d i n-l-yl)-N-[[4-(trIfluormethy1)fenylIraethy11pyrimidin-5-karboxamid	438(MH*)
34	2-[methyl-(1-pentyl)amino]-4-(pyrro1idinl-yl)-N-[[4-Ctrifluormethyl)feny1lmethy11 pyrimidin-5-karboxamid	450<MH*)
35	2-4-bis-(pyrro1idin-l-yl)-N-[[4-(trif1uormethy1)fenyl]methyl]pyrim idin-5-karboxamid	420ÍMH*)
36	2-(cyklopentylamino)-4-(pyrrolidin-l-yl)-N-[[4-(trifluormethy1)feny1lmethy1]pyrimidin-5-karboxamid	434<MH*)
37	2-(feny1methy1am i no)-4-(pyrrolidin-l-yl-N-[[4-(trif1uormethyl)feny11methy11 pyr imidin-5-karboxam i d	456ÍMH*)
38	2-(methy1-(fenylmethy1)amino]-4-(pyrrolidin-1-y1)-N-[[4-(trifluormethy1)feny11methy11 pyrimidin-5-karboxamid	470(MH*)
39	2-1(4-chlorfeny1)methylamino]-4-<pyrrolidin-1-yl)-N-[[4-(trifluormethy1)fenyllmethy1]pyrimid in-5-karboxamid	490(MH*)
40	2-(methy1-(2-propyn-l-y1)amino]-4-(pyrrolidin-1-y1)-M-[[4-(trifluormethy1)fenyllmethy11 pyrimid in-5-karboxamid	418(MH*)
41	2-(diethylamino)-4-(pyrrolidin-l-yl)-N-[14-(trifluormethy1)feny1Iraethy11pyrimidin-5-karboxam i d	422(MH*)

99 ·· ·· 99 9999

9 9 9 9 9 9 9 9 9 · ··· · 9 9 · · · · • · 9 9 9 · 9 · · 9 · · 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 99 99 9 1 99 19

2-1 methyl-í (4-t.r i f1uormethoxy)feny1 3 amino] - 540(MH⁺)

-4-(pyrrolidin-l-yl)-N-[[4-(trifluormethyl)f eny13methy13 pyrimidin-5-karboxami d

2-Imethyl-(4-nitrofenyl)amino]-4-(pyrro- 501(MH⁺)

1idin-l-yl)-N-[[4-(trifluormethy1)fenylimet.

hy13 pyrimidin-5-karboxamid

2-t(2-propyn-l-yl)amino]-4-(pyrrolidin-l-yl)- 404(MH⁺)

-N-i[4-(trifluormethy1)feny13methyl]pyrimídin-5-karboxam i d

2-[(3-chlorfeny1)methylamino]-4-(pyrrolidin- 490(MH+)

-l-yl)-N-[[4-(trifluormethy1)feny13methyl 3 pyrimidin-5-kar*boxamid

2-[(3,4-dichlorfenyl)methylaminol-4- 524(MH⁺)

-(pyrrolidin-l-yl)-N-C[4-(trifluormethyl)feny13 methyl 3 pyrimidin-5-karboxamid

Příklad 47

2-(4-Fluorfenoxy)-4-(pyrrolidin-l-yl)-N-t í4-trifluormethy1)feny13methyl 3 pyrimidin-5-karboxamid

Do roztoku 2-chlor-4-(pyrrolidin-l-yl)-N-[(4-(trifluormethy 1)feny13 methyl 3pyrimidin-5-karboxamidu (Příprava 7, 9,6 mg,0,025 mmol) v 1-methy1-2-pyrrolidínonu (0,5 ml) se přidá 1M roztok 4-fluorfenolu (0,125 ml,0,125 mmol, 5 ekv.) v 1-methyl2-pyrrolidínonu a roztok terc-butoxidu draselného v tetrahydrofuranu (l,0M, 0,125 ml, 0,125 mmol, 5 ekv.).Výsledná směs se udržuje 15 hodin na teplotě 85 C. Po vychladnutí na teplotu 23 °C se směs ochladí přísadou vodného roztoku natriuradihydrogenfosfátu (l.OM, 0,25 ml) a zfiltruje se přes filtr PTFE před čištěním chromatografií HPLC (PRIMESPHERE C18-HC, sloupec 21,2 fc · • fc ·fcfc · • fcfc fcfcfcfc fcfcfcfc fcfc · fc fcfcfcfc· ·· fc fc fc · · • · fcfcfcfc fcfcfcfc fcfc· · » fcfc fcfc fcfc fcfc mm x 1OO mm), mobilní fáze’- A 10/90 aceton i tri 1/voda + 5mMol octanu amonného, B 90/10 acetonitri 1/voda + 5mMol octanu amonného: gradient: 40 & až 0 £ fl během 5 minut; detektor: UV 220 nM; průtočná rychlost:20,0 ml/min. Čistota vzorků se zjišťuje LCNS-HPLC (PRIMESPHERE C18-HC, sloupec 4,6 mm x 30 mm): mobilní fáze: A 10/90 acetonitri 1/voda + 5mMol octanu amonného, B 90/10 acetonitri 1/voda + 5mMol octanu amonného; gradient 100 % až 0 % A během 3 minut; detektor-' UV, 250 nM, průtočná rychlost: 4,0 ml/min. MS m/e 461 (MH⁺);

*H NMR (CDC1₃): 6 8,22 (s.pyrimidin Η, 1H), 7,61 (d, J=7,8 Hz, 2H), 7,51 (d, J=7.8 Hz, 2H), 7,38 (bs, NH, 1H), 7,17-6,96 (m,4H), 4,64 Cd, J=3,1 Hz, benzylické Η, 2H), 3,35 (bt, J-6.3 Hz, NCH2CH2 , 4H), 1,86 (bs, NCH2CH2 , 4H).

Příklad 48

2-[(2-Methoxy)fenoxy)-4-(pyrrolidin-l-yl)-N-([4-trifluormethyl)fenylJmethy13 pyrimidin-5-karboxamid

Do roztoku 2-chlor-4-(pyrrolidin-l-yl)-N-[[4-(trifluormethyl)feny13methyl]pyrimidin-5-karboxamidu (Příprava 7, 9,6 mg, 0,025 mmol) v 1-methy1-2-pyrrolidinonu (0,5 ml) se přidá 1M roztok 2-methoxyfenolu (0,125 ml,0,125 mmol, 5 ekv.) v 1-methy 1 -2-pyrrol idinonu a roztok terc-butoxidu draselného v tetrahydrofuranu (l,0M, 0,125 ml, 0,125 mmol, 5 ekv.).Výsledná směs o

se udržuje 15 hodin na teplotě 85 C. Po vychladnutí na teplotu 23 C se směs náhle zchladí přísadou vodného roztoku natři umd i hydrogenfosf átu (l,0M, 0,25 ml) a zfiltruje se přes filtr PTEE před čištěním chromatografií HPLC (PRIMESPHERE C18-HC, sloupec 21,2 mm x 100 mm), mobilní fáze^; A 10/90 acetonitril/voda ·+· 5mMol octanu amonného, B 90/10 acetoni tri 1/voda + 5mMol octanu amonného; gradient: 40 % až 0 % A během 5 minut; detektor: UV 220 nM; průtočná rychlost: 20,0 ml/min. Čistota vzorků se zjišťuje LCNS:HPLC (PRIMESPHERE C18-HC, sloupec 4,6 ·· ·· ·· ··♦♦·· • · ·«·· ·· · • · · · · * · · · · · · • · · · · · · « · •♦ ·· ·· ·· ·· mm x 30 mm)^: mobilní fáze: A 10/90 acetonitri 1/voda + 5mMol octanu amonného, B 90/10 acetoni tri 1/voda + 5mMol octanu amonného: gradient 100 % až 0 % A během 3 minut: detektor: UV, 250 nM, průtočná rychlost: 4,0 ml/min. MS m/e 673 <ΜΗ⁺).

Příklady 49 až 51

Deriváty 2-alkoxy-4-<pyrrolidin-l-yl)-N-[C4-(trifluormethyl )f enyl 1 methyl 1 pyrimidin-5-karboxamidu (příklady 49 až 51) se připraví reakcí 2-chlor-4-(pyrrolidin-l-yl)-N-Ct4-<trifluormethyl)fenyl3 methyl 3pyrimidin-5-karboxamidu se sodnou solí derivátu příslušného alkoholu následujícím obecným způsobem.

Obecný způsob přípravy sloučenin podle příkladu 49 až 51

Do roztoku 2-ch1or-4-(pyrrolidin-l-y1)-N-í[4-(trifluormethyl )feny 1 3 methyl 3 pyrimid in-5-karboxamidu (Příprava 7, 19,2 mg, 0,050 mmol) v dioxanu <0,6 ml) se přidá l,0M roztok odpovídajícího alkoholu <0,40 ml,0,40 mmol, 8 ekv.) v dioxanu a následně 1,0M roztok hexamethyldisilazidu sodného (NaHMDS) v tetrahydrofuranu (0,250 ml,0,250 mmol, 5 ekv.).Výsledná směs se udržuje dvě hodiny na teplotě 70 C. Po vychladnutí na teplotu 23 C se směs rychle zchladí přísadou vodného roztoku chloridu amonného (l,0M, 0,40 ml) a zfiltruje se přes filtr PTFE. Reakční nádoba se promyje methanolem a výsledný roztok se také zfiltruje. Surové filtráty se spojí a čistí se chromatografií HPLC (PRIMESPHERE C18-HC, sloupec 21,2 mra x 1OO mm), mobilní fáze'- A 10/90 acetonitri 1/voda + 5mMol octanu amonného, B 90/10 acetoni tri 1/voda 5mMol octanu amonného; gradient:

% až 0 % A během 5 minut; detektor: UV 220 nM; průtočná rychlost.: 20,0 ml/min. Čistota vzorků se zjištuje LCNS:HPLC (YMC ODS-A C18, sloupec 4,6 mm x 30 mm): mobilní fáze= A 10/90 acetonitri 1/voda ·+ 5mMol octanu amonného, B 90/10 ácetonitril/ voda *· 5mMol octanu amonného; gradient 100 % až 0 % Ά během 3 ftft·· .<

• ft ft · • · • · • ft minut; detektor: UV,220 nM, průtočná rychlost: 4,0 ml/min.

Příklad 49

2“(Propin-3yloxy)-4-<pyrrolldln-1-y1>-N»[[4-Ctrlfluormethy1)f eny1]methy1]pyrimidin-5-karboxam1d ¹H NMR (CDCI₃) δ 8.19 (s, pyrimidin· Η, 1H), 8,0 (bs, NH, 1H), 7,58 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,51 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 4,92 (d, J = 2,5 Hz,OCH₂, 2H),

4,60 (d, J = 5,8 Hz, benzyli ké Η, 2H), 3,47 (bt, J = 6,6 Hz, NCH2CH2,

4H), 2,44 (d, J = 2,5 Hz, ynyl Η, 1H), 1,87 (bt, J = 6,6 Hz, NCH2CH2, 4H); HRMS/ESI C20H20O2F3N4 (M+H)⁺; 405,15384 nalezeno: 405,15480

Příklad 50 \

2-[(2-Thienyl)methoxy]-4-(pyrrolidin-l-y1)-N-[C4-(trlfluormethy1)f eny11methy11pyr1m i d i n-5-karboxami d ¹H NMR (CDCI3) δ 8.10 (s, pyrimidin Η, 1H), 7,56 <d, J = 8_;.1 Hz, 2H),

7,46 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,27 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 3,.5 Hz, 1H), 6,95 (dd, J = 1,5 Hz, J = 3,.5 Hz, 1H), 5,49 (s, OCH₂, 2H), 4,57 (d, J = 5,8 Hz, benzylické Η, 2H), 3,47 (bs, NCH₂CH₂, 4H), 1,.87 (bs, NCH2CH2, 4H); HRMS/ESI C22H22O2F3N4S (M+H)⁺; 463.14157 nalezeno: 463,14350

Příklad 51

2-tl-(4-fluorfeny1lethoxy]-4-(pyrrolidin-l-y1)-N-[[4-(trifluormethy1)feny11methyl]pyrimidln-5-karboxami d ¹H NMR (CDCI3) δ 8.20 (s, pyrimidin Η, 1H), 7,58 (d, J = 8,3 Hz, 2H),

7,49 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,34 (dd, J = 5,4 Hz, J = 2,0 Hz, 2H), 6,99 (t, J =

8,7 Hz, 2H), 6,02 (q, J = 6,6 Hz, PhCH(CH₃)O, 1H), 4,49 (d, J = 6,1 Hz,

PhCH₂N, 2H), 3,5-3,25 (m, NCH2CH2, 4H), 1,95-1,80 (m, NCH₂CH₂, 4H),

1,63 (s, J = 6,6 Hz, PhCH(CH₃)O, 3H); HRMS/ESI C₂₅H₂₅O₂F4N4 (M+H)*;

489,19138 nalezeno: 489,19070

4444 * 4

4 4 ·« » 4

44 * 4 4

4 4 4

44

4 ♦

4

Příklady 52 až 55

Deriváty 2-aryl-4-(pyrrolidin-l-yl)-N-i[4-(trifluormethyl )fenyl3methyl3pyrimidin-5-karboxamidu (příklady 52 až 55) se připraví Pd(O) zprostředkovanou kopulací 2-chlor-4-(pyrrolidin-l-yl)-N-[[4-(trifluormethy1)feny13methyl3 pyrimid in-5-karboxamídu s odpovídajícím derivátem kyseliny arylborité následujícím obecným způsobem.

Obecný způsob přípravy sloučenin podle příkladu 52 až 55

Do roztoku 2-chlor-4-(pyrrolidin-l-yl)-N-[[4-(trifluormethyl)fenyl]methyl]pyrimidin-5-karboxamidu (Příprava 7, 20,0 mg, 0,052 mmol) v 1-methyl-2-pyrrolidinonu (1,0 ml) se přidá roztok odpovídající kyseliny borité, a to [3,4-dimethoxyfenylbori té, 2-methoxyfenylborité, 3-thienylborité a 2-thienylbori té, pro přípravu sloučenin podle příkladu 52 až 55 (1,17 mmol, 2,25 ekv.) a vodný roztok hydrogenuhlIčitanu sodného (2,0M, 0,10 ml). Výsledná směs se promyje argonem před přidáním tetrakistrifenylfosfinu paladičitého (Pd(PPh3)^ (0,003 g) a udro žuje se dvě hodiny na teplotě 110 C. Po vychladnutí na teplotu 23 C se směs čistí chromatografií HPLC (PRIMESPHERE C18-HC, sloupec 21,2 mm x 100 mm), mobilní fáze: A 10/90 acetonitril/voda + 5mMol octanu amonného, B 90/10 aceton i t-r i 1/voda ·♦· 5mMol octanu amonného: gradient: 70 % až 0 % A během 8 minut; detektor: UV 220 nM; průtočná rychlost: 20,0 ml/min. Čistota vzorků se zjišťuje LCNS=HPLC (PRIMESPHERE C18-HC, sloupec 4,6 mm x 30 mm): mobilní fáze= A 10/90 acetonitri 1/voda ·+· 5mMol octanu amonného, B 90/10 acetonitri 1/voda + SmMol octanu amonného; gradient 100 % až 0 % A během 3 minut; detektor: UV, 250 nM, průtočná rychlost: 4,0 ml/min.

99

Příklad číslo	1 Chemický název	Hmotové spektrum m/e
52	2-(3,4-dimethoxyfenyl)-4-(pyrrolidin)-1-yl )-N-[ [4-(trif luonnethy 1 ) fenyl 3 methyl 3 pyrimidin-5-karboxamid	487(MH*)
53	2-(2-methoxyfenyl)-4-(pyrrolidin)-l-yl)-N-[[4-(trifluormethy1)feny13 methyl 3 pyriraidin-5-karboxamid	457 (MH*)
54	2-(3-thienyl)-4-(pyrrolidin)-l-yl)-N-1Ϊ 4-(tr i f1uormethy1)f eny13 methy13pyrimidin-5-karboxamid	433(MH*)
55	2-(2-thienyl)-4-(pyrrolidin)-l-y1)-N-[[4-(trifluormethyl)feny13methyl3 pyr i m i d i n-5-karboxam i d	433(MH*)

Příklady 56 až 64

Deriváty 2-alky1(aryl)thio-4-(pyrrolidin-l~yl)-N-([4-(trifluormethyl)fenyl3methyl3pyrimidin-5-karboxamidu (příklady 56 až 64) se připraví reakcí 2-chlor-4-(pyrralidin-l-yl)-N-[(4(trifluormethyl)fenyl3methyl3pyrimidin-5~karboxamidu s draselnou solí odpovídajícího derivátu thiolů následujícím obecným způsobem.

Obecný způsob přípravy sloučenin podle příkladu 56 až 64

Do roztoku 2-chlor-4-(pyrrolidin-l-yl)-N-[I4-(trifluormethyl )fenyl]methyl3pyrimidin-5-karboxamidu (Příprava 7, 9,6 mg, 0,025 mmol) v 1-methy1-2-pyrrolidinonu (0,5 ml) se přidá 1M roztok odpovídajícího derivátu thiolů (0,125 ml, 0,125 mmol, • ft · · ftft·· ftft · • ftft · * ftft ftftft • *·· ««ft····· · • · · » « · ftftftft ftft· ·· ftft ftft ftft ftft ekv.) v 1-methy1-2-pyrrolidinonu a roztok terc-butoxidu draselného v tetrahydroforánu (1,OM, 0,125 ml, 0,125 mmol,5 ekv.). Výsledná směs se udržuje dvě hodiny na teplotě 80 C. Po vyo chladnutí na teplotu 23 C se směs rychle zchladí přidáním vodného roztoku chloridu amonného (1M, 0,3 ml). Směs se čistí chromatografií HPLC (PRIMESPHERE C18-HC, sloupec 21,2 mm x ÍOO mm), mobilní fáze'- A 10/90 aceton i tr i 1/voda + 5mM oloctanu araonného, B 90/10 acetonitri 1/voda + 5mMol octanu amonného: gradient: 40 % sžž. 0 % A během 5 minut: detektor: UV 220 nM; průtočná rychlost: 20,0 ml/min. Čistota vzorků se zjišťuje LCNS:HPLC (PRIMESPHERE C18-HC, sloupec 4,6 mm x 30 mm): mobilní fáze: A 10/90 acetonitri 1/voda + 5mMol octanu amonného, B 90/10 acetoni tri 1/voda ·+· 5mMol octanu amonného: gradient 100 % až 0 % A během 3 minut; detektor: UV, 250 nM, průtočná rychlost: 4,0 ml/min.

Příklad číslo	Chemický název spěl	Hmotové ctrum m/e
56	2-[(4-chlorfenyl)methylthio]-4-(pyrrolidin)-l-yl)-N-[[4-(trifluormethyl)feny 1 ] methyl]pyrimidin-5-karboxaraid	507(MH‘)
57	2-[(furan-2-yl)methylthio]-4-(pyrrolidin)-1-y1)-N-[[4-(trifluormethyl)feny13 methy13 pyrimidin-5-karboxamid	463<MH*)
58	2-C(4-nitrofeny1)thio3-4-<pyrrolidin)-l-y1)-N-[í4-<trifluormethyl)fenyl3methy13 pyrimidin-5-karboxamid	504(MH+)
59	2-[(3-methylfeny1)methylthiol-4-(pyrro1idin)-l-yl)-N-[t4-(trifluormethyl)fenyllmethyl 3 pyrimidin-5-karboxamid	487(MH⁺)

• *· »« ·· ·«·«·· · · ··»· · · f • · · <·· • ·«« 99 99 999 9 « ♦ * · * · · « « 9 9

999 99 99 99 99 99

60	2-[(2-chlorfeny1)thio]-4-(pyrrolidin-l-yl)-N-[[4-(trifluormethy1)feny1]methyl]pyrimidin-5-karboxamid	493(MH*)
61	2- (cyk1opropy1th i o)-4-(pyrrolidin-1-yl)-N-[[4-(trifluormethy1)feny11 methyl]pyrimidin-5-karboxam id	451(MH*)
62	2-[(2-thienyl)thio]-4-(pyrrolidin-1-y1)-N-[[4-(trifluormethy1jfenyl]methyl]pyrimidin-5-karboxamid	465(MH*)
63	2-[(2-methy1-1-propy1)thio]-4-(pyrrolidin-l-yl)-N-([4-(trifluormethy1)feny1]methyl]pyrimidin-5-karboxamid	439(MH*)
64	2-(f eny1methy11 h i o ) -4 - (pyrrolidin-l-yl)-N-[[4-(trifluormethy1)fenyl]methyl]pyrimidin-5-karboxamid	473ÍMH*)
Příklady 65 až 67
Sloučeniny podle příkladu 65 až 67 se připravují obecným způsobem popsaným v příkladu 2 až 18.
Příklad Chemický název Hmatové číslo spektrum m/e
65	4-(trifluormethy1)-2-(diethylamino)-N-[(5-methylfuran-2-y1)methyl]pyrimidin-5-karboxamid	357(MH*)

·· ·*· · ♦ ·» ·· · · · • * · · • ··« · 9 • 9 9

999 9 9

I ·* «9 9

99

9 9

9 9 9

99

66	4-Cti'if luormethyl )-2-<pyrrol idin-l-yl )-N-t (f uran-2-yl )met.hyl 1 pyrimidin-5-karboxamid	341(0)
67	4-Ctrifluormethyl)-2-<morfolin-4-yl)-N-((5-methylfuran-2-y1jmethy11pyrimidin-5-karboxamid	371(0)

Průmyslová využitelnost

Derivát 2,4-disubstituovaného pyrimidin-5-karboxamidu pro výrobu farmaceutických prostředků k léčení poruch citlivých na aktivitu otevírání draslíkového kanálku KCNQ, jako je migréna.

Claims

PATENTOVÉ

NÁROKY

1. Způsob ošetřování v případě potřeby poruch zodpovědných za otvírání draslíkových kanálků KCNQ u savců, vyznačující se tím, že se savcům podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I kde znamená

R¹ atom vodíku, atom halogenu, skupinu alkylovou s 1 až 8 atomy uhlíku, fenylovou, fenylaiky1ovou, heterocyklíckou se 3 až 6 atomy uhlíku, heterocyklickomethylovou se 3 až 6 atomy uhlíku, -CN, -OR, -NRR, -NRNCOR nebo -CF3 ,

R² atom halogenu, skupinu alkylovou s 1 až 8 atomy uhlíku, cykloalkýlovou se 3 až 7 atomy uhlíku, fenylovou, fenylalkylovou, heterocyklickou se 3 až 6 atomy uhlíku, heterocyk1 ickomethylovou se 3 až 6 atomy uhlíku, CN, OR, -NRR, -NRNCOR nebo -S-R,

R³ atom vodíku, atom halogenu, nebo skupinu alkylovou s 1 až 8 atomy uhlíku,

R⁴ atom vodíku, skupinu methylovou nebo -CH2C6H5.

R5 atom vodíku, skupinu alkylovou s 1 až 8 atomy uhlíku, cykloalkylovou se 3 až 7 atomy uhlíku, fenylovou, fenylalkylovou, heterocykl1ckou se 3 až 6 atomy uhlíku nebo hetero9 9«

9 9

9 9

999 ··

9 9

9

9 9 9

9*9

9

999 99 « 9 9

9

9 9

9 9 •9 9999 cyklickomethylovou se 3 až 6 atomy uhlíku, a každý R na sobě nezávisle skupinu alkylovou s 1 až 8 atomy uhlíku, alkinylovou se 3 až 7 atomy uhlíku, fenylovou, fenylalkýlovou, heterocyklickou se 3 až 6 atomy uhlíku nebo heterocyklickomethylovou se 3 až 6 atomy uhlíku.
2. Způsob podle nároku i,vyznačující se t í m , že se savcům podává terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I (I) kde znamená

R¹ atom vodíku,

R² skupinu NR⁶!?⁷, SR⁸, OR⁹, fenylovou a thienylovou, přičemž skupina fenylová je případně substituována jednou nebo dvěma alkoxyskupinami s 1 až 3 atomy uhlíku,

R³ skupinu alkylovou s 1 až 6 atomy uhlíku, trifluormethylovou, cykloalkylovou se 3 až 7 atomy uhlíku, cykloalkylmethylovou se 3 až 7 atomy uhlíku, fenylovou, aminoskuplmu, dlalkylaminoskupinu s i až 3 atomy uhlíku v každém alkylovém podíle a skupinu pyrrolidinylovou, přičemž je fenylová skupina popřípadě substituována atomem halogenu,

R^-4 skupinu fenyl methy lovou, f urany 1 methy lovou a cykloal99 99

9 9 9

9 99 • * · 9

9 9

9 9

999

9

9 9 9 ·· ·#»» kylmethylovou se 3 až 7 atomy uhlíku, přičemž je fenylový podíl feny1methylové skupiny případně substituován jedním substituentem voleným ze souboru zahrnujícího atom halogenu, skupinu alkylovou s 1 až 3 atomy uhlíku, dialkylaminoskuplnu s 1 až 3 atomy uhlíku v každém alkylovém podíle, skupinu trif1uormethylovou, trifluormethoxyskupinu a trif1uormethylthioskupinu a furanylový podíl furany1methylové je případně substituován alkylovou skupinou s 1 až 3 atomy uhlíku,

R5 atom vod í ku,

R⁶ a R⁷ na sobě nezávisle atom vodíku, skupinu alkylovou s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkýlovou se 3 až 7 atomy uhlíku, alkinylovou se 3 až 7 atomy uhlíku, fenylovou a feny lmethy lovou , přičemž skupina alkylová s 1 až 6 atomy uhlíku je popřípadě substituováná hydroxyskupinou a skupina fenylová je případně substituovaná jedním nebo dvěma substituenty volenými ze souboru zahrnujícího atoro halogenu, trifluormethoxyskupinu a nitroskupinou nebo R⁶ a R⁷ tvoří spolu s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, heterocyklickou skupinu ze souboru zahrnujícího skupinu pyrrolidinylovou, morfolinylovou, piperidinylovou, homopiperidinylovou, methylpiperidinylovou , a 1,2,3,4-tetrahydroisochinolinylovou,

R⁸ skupinu alkylovou s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylovou se 3 až 7 atomy uhlíku, fenylovou a fenylmethylovou, furanylmethylovou a thienylovou, přičemž skupina fenylová je případně substituovaná jedním atomem halogenu nebo nitroskupinou a fenylový podíl skupiny fenylmethylové je případně substituován jedním atomem halogenu nebo skupinou alkylovou s 1 až 3 atomy uhlíku a

R⁹ skupinu alkinylovou se 3 až 7 atomy uhlíku, fenylovou, ·» ··*· • *· 99 99

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 99 9 9 9

999 99 99 999 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 » 99 99 «* ·· »·

1-(4-fluorfenylMethylovou a thienylmethylovou, přičemž skupina fenylová je případně substituovaná atomem halogenu nebo alkoxyskupínou s 1 až 3 atomy uhlíku.
3. Způsob podle nároku 1,vyznačuj ící se tím, že nemocí je migréna nebo migréně podobný záchvat.
4. Způsob podle nároku 2,vyznačující se tím, že nemocí je migréna nebo migréně podobný záchvat.
5- Farmaceutický prostředek k léčení poruch zodpovědných za optevírání draslíkových kanálků KCNQ .vyznačující se t í m, že obsahuje terapeuticky účinné množství sloučeniny podle nároku 1, spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem, adjuvantem nebo redilem.
6. Farmaceutický prostředek k léčení poruch zodpovědných za optevírání draslíkových kanálků KCNQ .vyznačující se t í B , že obsahuje terapeuticky účinné množství sloučeniny podle nároku 2. spolu s farmaeeutíčky přijatelným nosičem, adjuvantem nebo ředilem.