CZ2004189A3

CZ2004189A3 - Název neuveden

Info

Publication number: CZ2004189A3
Application number: CZ2004189A
Authority: CZ
Inventors: Mahleráhanns@Christian; Müllerárobert; Martini@Marráulrike; Haasáudo; Bachmannáchristiane
Original assignee: Merckápatentágmbh
Priority date: 2001-07-13
Filing date: 2002-06-18
Publication date: 2004-05-12
Also published as: CN1231264C; PL364599A1; EP1406658A1; BR0211060A; HUP0401046A2; CN1527724A; RU2004102395A; MXPA04000340A; CA2453342A1; AR039358A1; KR20040018458A; HUP0401046A3; ZA200401161B; JP2004536129A; SK862004A3; PE20030433A1; US20040170632A1; DE10133394A1; WO2003007988A1

Description

Kapalný prostředek obsahující Cetuximab a ester polyoxyethylensorbitanmastné kyseliny

Oblast techniky

Vynález se týká stabilního kapalného farmaceutického prostředku obsahujícího chimerní monoklonální protilátku C225 (Cetuximab®) proti receptorů epidermalního růstového faktoru (EGF receptor).

Dosavadní stav techniky

Četné studie in vitro a in vivo ukázaly, že blokování receptoru EGF protilátkami působí proti nádorům různým způsobem, například inhibováním proliferace rakovinových buněk, snížením ancfiogenese zprostředkované nádorem, vyvoláváním apoptózy rakovinových buněk a zvyšováním toxických účinků radioterapie a konvenční chemoterapie. Cetuximab¹⁴ je velmi slibná protilátka, která se váže na receptor EGF. Cetuximab® neboli C225 je rekombinován z DNA různých druhu a popsal ho poprvé Naramura a kol. (Cancer Immunol. Immunotherapy 37, str. 343 až 349, 1993). Způsob přípravy Cetuximabu® je popsán v uvedené vědecké literatuře .

Podobně jako jiné protilátky se Cetuximab® podává parenterálně v podobě roztoku pro terapeutickou aplikaci. Zvláštním problémem roztoků, obsahujících protilátky, je jejich sklon ke shlukování a k vytváření proteinových multimerů- V případě redukovatelných multimerů se to může přičítat nezáměrnému vytváření mezimolekulárních disulfidických můstků interakcí mezi sousedními podíly. Hydrofobní interakce a s nimi spojené vytváření neredukovatelných multimerů jsou také možné. Kromě toho dochází k deamidačním reakcím, které vedou k následným reakcím odbourání proteinů.

V důsledku uvedeného sklonu ke shlukování dochází při skladování k vysrážení proti látkových roztoků a následně je zpochybňováno reprodukovatelné vyprazdňování obalu obsahujícího roztok. Kromě toho se může vytvářet embolismus při parenterálním podání roztoku obsahujícího částice. Proto není zaručeno reprodukovatelné podávání pacientovi dávky nutné ve všech případech a při aplikaci není možné dodržet s nezbytnou bezpečnost. I když mohou být agregáty odfiltrovány před injektováním, představuje takový způsob další stupeň a je proto složitý a ne příliš vhodný pro klinickou praxi. Problém reprodukovatelnosti dávek zůstává nevyřešený také proto, že je z roztoku vždy oddělen neznámý podíl protilátek a vytváření částic po filtraci nadále představuje bezpečnostní riziko.

Známým způsobem stabilizování monoklonálních protilátek je sušení vymrazováním roztoků obsahujících protilátky a pomocná činidla. Lyofilizace je však časově náročná a spotřebovává energii a je proto nákladná- Kromě toho se musí lyofilizat před použitím rekonstituovat.

V evropském patentovém spise číslo EP-0 073371 se popisují imunoglobulinové prostředky, které se mohou podávat intravenozně a pro stabilizaci mají hodnotu pH nastavenou na 3,5 až 5,0. Tak nízké hodnoty pH vedou však k nežádoucím reakcím, nesnášeni ivosi v místě injekce.

Americký patentový spis číslo US 6 171586 B1 se týká použití acetátového pufru s hodnotou pH 4,48 až 5,5, povrchově aktivního činidla a polyolu v kapalných prostředcích protilátek, přičemž chlorid sodný pro zavedení isotonicity je vyloučen. Vlivem nízké hodnoty pH a nedostatku isotonicity se mohou podobně vyskytnout reakce nesnášeniivosi v místě injekce.

V literatuře jsou popsány příklady dalších prostředků, obsahujících specifické protilátky (například evropský paten tový spis číslo EP 0 280358 a EP 0 170983 a americký patentový spis číslo US 5 945098).

Například v evropském patentovém spise EP 0 280358 se popisuje přísada dextranu do roztoku protilátky pro stabilizaci pi'oti určitým hormonům, přičemž se dosahuje stability po dobu devíti měsíců.

V evropském patentovém spise EP 0 170983 se popisuje stabilizace tepelně labilní monoklonálni protilátky zahříváním společně s hydrolyžovaným ovalbuminem, čímž se protilátka stává stabilní při uskladnění 7 dní při teplotě 45 C. Avšak přidávání proteinů jiných druhů do prostředků určených k parenterálnímu podávání je nežádoucí vzhledem k problémům s tím spojeným, obzvlášť jejich možné antigeneity.

Americký patentový spis číslo US 5 945 098 popisuje použití glycinu, polysorbátu 80 a polyethylenglykolu pro stabilizaci kapalných formulací imunoglobul inu G.

Úkoleia vynálezu je nalézt, obzvláště pro Cetuximab®, kapalnou formulaci, která je vhodná pro parenterální podávání, dobře se snáší a je stálá po dobu nejméně jednoho roku při skladování při teplotě místosti. Prostředek by měl mít jednoduché složení a neiaá obsahovat žádné pomocné látky, které jsou sporné z toxikologického hlediska.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je kapalný farmaceutický prostředek obsahující Cetuximab®, fosfátový pufr s hodnotou pH v rozmezí 6 až 8 a ester polyoxyethylensorbitanmastné kyseliny.

Podle vynálezu byl tedy s překvapením nalezen prostředek ve formě roztoku splňující úkol vynálezu, který, vedle Cetuxi

- 4 mabu®, obsahuje fosfátový pufr s hodnotou pH v rozmezí přibližně 6 až přibližně 8 a ester polyoxyethylensorbitanmastné kyseliny. Vynález se proto týká stabilního kapalného farmaceutického prostředku, který obsahuje fosfátový pufr s hodnotou pH v rozmezí 6 až 8a ester polyoxyethylensorbitanmastné kyseliny. Hodnota pH je s výhodou v rozmezí 6,5 až 7,5, především 7,2.

Fosfátovými pufry, kterých je možno použít, jsou roztoky monosodných a/nebo dlsodných a draselných solí kyseliny fosforečné, jako jsou dinatriummhydrogenfosfát nebo kaliumdihydrogenfosfát a směsi sodných a draselných solí, jako jsou například směsi dinatriummhydrogenfosfátu a kaliumdihydrogenfosfátu. Fosfátový pufr může být v prostředku podle vynálezu obsažen v množství v rozmezí 2 mM až 100 mM. Přednost se dává rozsahu množství 5 mM až 20 mM, obzvláště přibližně 10 mM.

Cetuximab® může být v prostředku podle vynálezu obsažen v množství v rozmezí 0,1 mg/ml až 25 mg/ml, s výhodou v rozmezí 2 mg/ml až 10 mg/ml, obzvláště přibližně 5 mg/ml.

Estery polyethylensorbitanmastné kyseliny jsou známy také pod obchodním názvem Tween. Prostředky podle vynálezu mohou obsahovat zejména polyoxyethylenC20)sorbitanmonolaurát, polyoxyethy 1en C 20)sorb i tanmonopa1m i tát a po1yoxyethy1en(20) sorb i tanmonostarát. Přednost se dává polyoxyethylen(20)sorbitanmonolaurátu a polyoxyethylenC20)sorbitanmonooleátu, především však polyoxyethylenC20)sorbitanmonooleátu. Estery polyethylensorbitan mastné kyseliny mohou být v prostředku podle vynálezu obsaženy ve hmotnostním množství v rozmezí 0,001 až 1,0 Výhodným je obsah v rozmezí 0,005 % až 0,1 obzvláště přibližně 0,01

Prostředek podle vynálezu obsahuje s výhodou přídavně iso- 5 -

tonické činidlo, s výhodou fyziologicky přijatelnou sůl, jako je například chlorid sodný nebo draselný nebo fyziologicky přijatelný polyol, jako je například glukóza nebo glycerol v koncentraci potřebné k nastavení isotonicity. Vynález se proto týká kapalného prostředku obsahujícího Cetuximab®, fosfátový pufr s hodnotou pH v rozmezí 6 až přibližně 8, ester polyethylensorbitan mastné kyseliny a isotonické činidlo v koncentraci nutné k nastavení isotonicity. Prostředek obsahuje s výhodou chlorid sodný jako isotonicklé činidlo.

Podle nejvýhodnějšího provedení vynálezu obsahuje kapalný prostředek přibližně 5 mg/ml Cetuximabu®, přibližně 10 mM fosfátového pufru s hodnotou pH přibližně 7,2, 145 mM chloridu sodného a 0,01 % polyoxyethylen(20)sorbitanmonooleátu.

Prostředek podle vynálezu se může připravovat přidáním uvedených složek do roztoku obsahujícího Cetuximab¹⁸. Za tímto účelem definované objemy zásobních roztoků obsahujících uvedené další složky v definované koncentraci se s výhodou přidají do připraveného roztoku majícího definovanou koncentraci Cetuximabu® a směs se popřípadě zředí vodou na předem vypočtenou koncentraci. Alternativně mohou být složky jako pevné látky také přidány do Cetuximab® obsahujícího výchozího roztoku- Pokud je Cetuximab^R v pevné formě, například ve formě lyofilizátu, může se prostředek podle vynálezu připravit tak, že se napřed rozpustí Cetuximab® ve vodě nebo ve vodném roztoku obsahujícím jednu nebo několik dalších složek a pak se vždy přidá potřebné množtví zásobních roztoků obsahujích další složky, další složky v pevné formě a/nebo voda. S výhodou se může Cetuximab® také rozpuštět přímo v roztoku obsahujícím všechny další složky.

Jedna nebo několik složek prostředku podle vynálezu se může s výhodou přidávat jak na začátku tak během způsobu přípravy Cetuximab®u nebo na jeho konci. S výhodou se to může

- 6 provést rozpuštěním Cetuximabu^u přímo ve vodném roztoku obsahujícím jednu nebo několik složek nebo všechny další složky v konečném stupni čištění prováděném po přípravě Cetuximabu^R. K přípravě prostředku se pak příslušné další složky mají přidat v menším množství a/nebo se nepřidají vůbec. Je obzvláště výhodné rozpouštět příslušnou složku přímo ve vodném roztoku obsahujícím všechny další složky v konečném stupni čištění prováděném po přípravě Cetuximabu^R, takže se prostředek podle vynálezu získá přímo.

Vynález blíže objasňují, nijak však neomezují následující příklady praktického provedení- Procenta jsou míněna vždy hmotnostně, pokud nejí uvedeno jinak.

Příklady provedení

Příklad 1

Vodný roztok obsahující:

mg/ml Cetuximabu^B mM natriumfosfátového pufru o hodnotě pH 7,2 mM chloridu sodného

0,01 % polyoxyethylen(20)sorbitanmonooleátu

Prostředek se připravuje smísením definovaných objemů vodných roztoků obsahujících příslušné složky v definované koncentraci- Použije se následujících roztoků:

Rozok ft (roztok účinné látky) obsahující:

9,7 mg/ml Cetuximabu^B mM natriumfosfátového pufru o hodnotě pH 7,2 (sestáva- jícího z 2,07 g/1 dlnatriumhydrogenfosfát-7-hydrátu a 0,31 g/1 natriumdihydrogenfosfátmonohydrátu)

145 mM chloridu sodného.

(Roztok se získá eluováním účinné látky ze sloupce roztokem B

v konečném stupni čištění účinné látky chromatografii po její přípravě.

Roztok B (roztok systému pufr/sfil): odpovídá roztoku ft, neobsahuje však žádnou účinnou látku.

Roztok C (roztok esteru polyoxyethylensorbitanmastné kyseliny): odpovídá roztoku B, obsahuje však přídavně 1 % polyoxyethylen(20)sorbitanmonooleátu.

K přípravě prostředku podle vynálezu se navzájem smíchá 10 ml roztoku ft, 9,8 ml roztoku B a 0,2 ml roztoku C.

Připravený roztok se zfiltruje za použití sterilního filtru před plněním do lékovek. Do každé lékovky se vnesou pipetou 2 ml roztoku. Lékovky se uzavřou zátkami a utěsní se.

Příklad 2 (Srovnávací pros tředek)

Vodný roztok obsahující:

mg/ml Cetuximabu® lOmM natriumfosfátového pufru o hodnotě pH 7,2 145 mM chloridu sodného

K přípravě srovnávacího prostředku se navzájem smísí 10 ml každého roztoku ft a B popsaných v příkladu 1.

Příklad 3

Vodný roztok obsahující:

mg/ml Cetuximabu^R

0,1 % polyoxyethylen(20)sorbitanmonolaurátu mM dinatriumhydrogenfosfátu % glukózy

Prostředek se připravuje smísením definovaných objemů vodných roztoků obsahujících příslušné složky v definované koncentraci. Použije se následujících roztoků:

Roztok A

Vodný roztok obsahující:

mg/ml Cetuximabu¹¹ mM dinatriumhydrogenfosfátu (Roztok se získá eluováním účinné látky ze sloupce roztokem B v konečném stupni čištění účinné látky chromatografi i po její přípravě.)

Roztok B (roztok systému ester polyoxyethylensorbitanmastné kyseliny/glukóza):

0,2% po1yoxyethy1en(20)sorb i tanmono1aurátu % glukózy mM dinatriumhydrogenfosfátu

Prostředek se připravuje vzájemným smíchám 10 ml roztoku A a 10 ml roztoku B.

Příklad 4

Stabilita prostředků podle vynálezu se testuje stresovým testem. Za tímto účelem se lékoveky obsahující roztok podle příkladu 1 a pro porovnání lékovky obsahující roztok podle příkladu 2 uskladní při teplotě 40 °C a 75% relativní vlhkosti. Před uskladněním a po definované době uskladnění, se vždy tři lékovky posoudí vizuálně za přímého osvětlení studeným světelným zdrojem a stanoví se absorpce roztoku pri 350 a

550 nm, což představuje míru zakalení. Kromě toho se vždy odeberou tři lékovky a analyzují se se zřetelem na obsah Cetuximabu^K a rozkladných produktů chromatografickou HPLC gelovou f i 1trac í.

Při chromatografické gelové filtraci HPLC se použije fosfátového pufru o hodnotěpH 7,2 jako mobilního prostředí. Sloupec-· Toso Haas TSKgel G 3000 SWXL Cvnitřní průměr 7,8 mm, délka 300 mm) průtočná rychlost 0,5 ml/min. Detekce se provede při 280 nm.

Výsledky testu stability jsou v tabulce I. Tabulka I

Test. Uskladnění	Cetuximab E%]	Sec. zóny m	Produkty Zákal rozkladu při	Zákal Vizuální při posouze 550 ní nm
roztok 1	[týdny]
1¾]	350 nm
Příklad	1 0	99,72	0,11	0,17	0,0128	0,0016 čiré
Příklad	1 4	98,60	0,84	0,56	0,0200	0,0022 čiré
Příklad	1 8	96,49	1,30	2,21	0,0280	0,0033 čiré
Příklad	2 0	99,69	0,15	0,16	0,0130	0,0021 čiré
Příklad	2 4	92,00	7,38	0,62	0,0232	0,0047 malé částice

Výsledky jasně dokazují, že prostředek podle vynálezu má výrazně zvětšenou stabilitu ve srovnání se srovnávacím roztokem .

Průmys1ová využi te1nost

Složky pro výrobu tekutého farmaceutického prostředku obsahu jícího Cetuximab^R s podstatně zvýšenou stabilitou.

Claims

1. Kapalný farmaceutický prostředek, vyznačující se t í m, že obsahuje Cetuximab^R, fosfátový pufr s hodnotou pH v rozmezí 6 až 8 a ester polyoxyethylensorbitanmastné kyse liny.

2- Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku 1, v y - značující se tím, že má hodnotu pH 6,5 až 7,'.

3. Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku 2, v y - značující se tím, že má hodnotu pH přibližně 7,2.

4. Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku 1 až 3, vyznačující se tím, že fosfátový pufr je obsažen v množství v rozmezí 2mM až 100 mM.

5. Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku 4, vy- značující se tím, že fosfátový pufr je obsažen v množství v rozmezí 5 mM až 20 mM, s výhodou 10 mM.

6. Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku 1 až 5, vyznačující se tím, že obsahuje jako ester polyoxethy1en C 20)sorbi tanmastných kyse1 in po1yoxyethylen(20)sorbitanmonooleát nebo polyoxyethylen(20) sorbitanmonolaurát.

7. Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku 1 až 6, vyznačující se tím, že ester polyoxethylen (20)sorbitanmastné kyseliny je obsažen v množství 0,005 % až

0,1 %, zvláště v koncentraci 0,01

8. Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku 1 až 7, vyznačující se tím, že dále obsahuje isototonické činidlo v množství potřebném k nastavení iotonicity.

- 11. -

9. Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku 8» vy- značující se tím, že obsahuje chlorid sodný jako isotonické činidlo.

10. Kapalný farmaceutický prostředek podle nároku 1 až 9, vyznačující se tím, že obsahuje přibližně 5 mg/ml Cetuximabu^K, přibližně 10 mM fosfátového pufru majícího hodnotu pH přibližně 7,2, přibližně 145 mM chloridu sodného a přibližně 0,01 % polyethylenC20)sorbitanmonooleátu.