CZ2012538A3 - Inhibitory pro léčbu B-buněčné chronické lymfocytární leukémie - Google Patents
Inhibitory pro léčbu B-buněčné chronické lymfocytární leukémie Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2012538A3 CZ2012538A3 CZ2012-538A CZ2012538A CZ2012538A3 CZ 2012538 A3 CZ2012538 A3 CZ 2012538A3 CZ 2012538 A CZ2012538 A CZ 2012538A CZ 2012538 A3 CZ2012538 A3 CZ 2012538A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- cells
- cll
- inhibitor
- casein kinase
- migration
- Prior art date
Links
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 title claims abstract description 45
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 title claims abstract description 44
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 title claims abstract description 44
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims abstract description 18
- 102000008122 Casein Kinase I Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 108010049812 Casein Kinase I Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 9
- 229940076606 Casein kinase 1 inhibitor Drugs 0.000 claims description 18
- 108010047048 Casein Kinase Idelta Proteins 0.000 claims description 6
- 102100037402 Casein kinase I isoform delta Human genes 0.000 claims description 6
- 102100037398 Casein kinase I isoform epsilon Human genes 0.000 claims description 6
- 101001026376 Homo sapiens Casein kinase I isoform epsilon Proteins 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 43
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 20
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 20
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 10
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 10
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 10
- 101000713106 Homo sapiens C-C motif chemokine 19 Proteins 0.000 description 8
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 102100036842 C-C motif chemokine 19 Human genes 0.000 description 6
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 101000713085 Homo sapiens C-C motif chemokine 21 Proteins 0.000 description 5
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 5
- DEGAKNSWVGKMLS-UHFFFAOYSA-N calcein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(CN(CC(O)=O)CC(O)=O)=C(O)C=C1OC1=C2C=C(CN(CC(O)=O)CC(=O)O)C(O)=C1 DEGAKNSWVGKMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 5
- 229960002378 oftasceine Drugs 0.000 description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 5
- 102100036846 C-C motif chemokine 21 Human genes 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 101000896024 Rattus norvegicus Enoyl-CoA delta isomerase 1, mitochondrial Proteins 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 4
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000010162 Tukey test Methods 0.000 description 3
- 101150109862 WNT-5A gene Proteins 0.000 description 3
- 102000043366 Wnt-5a Human genes 0.000 description 3
- 108700020483 Wnt-5a Proteins 0.000 description 3
- BQRGNLJZBFXNCZ-UHFFFAOYSA-N calcein am Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(CN(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(C)=O)=C(OC(C)=O)C=C1OC1=C2C=C(CN(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(=O)C)C(OC(C)=O)=C1 BQRGNLJZBFXNCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 210000001700 mitochondrial membrane Anatomy 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 102100028728 Bone morphogenetic protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 2
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000010972 statistical evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000004736 B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 1
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 1
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 1
- 101710150820 Cellular tumor antigen p53 Proteins 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000617130 Homo sapiens Stromal cell-derived factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001229889 Metis Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 102100021669 Stromal cell-derived factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000013814 Wnt Human genes 0.000 description 1
- 108050003627 Wnt Proteins 0.000 description 1
- 230000031712 Wnt receptor signaling pathway, planar cell polarity pathway Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 230000016571 aggressive behavior Effects 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000005667 attractant Substances 0.000 description 1
- 230000004709 cell invasion Effects 0.000 description 1
- 230000004640 cellular pathway Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000008497 endothelial barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 229960000390 fludarabine Drugs 0.000 description 1
- GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N fludarabine phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC(F)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000000021 kinase assay Methods 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004987 nonapoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007427 paired t-test Methods 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 230000009822 protein phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 1
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
- A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
- A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
- A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Řešení přináší nová léčiva pro léčbu B-buněčné chronické lymfocytární leukémie, kterými jsou inhibitory kasein kinázy 1.
Description
Inhibitory pro léčbu B-buněčné chronické lymfocytámí leukémie
Oblast techniky
Vynález se týká inhibitorů kasein kinázy 1 pro použití pro léčbu B-buněčné chronické lymfocytámí leukémie.
Dosavadní stav techniky
B-buněčná chronická lymfocytámí leukémie (CLL) je klinicky velmi heterogenní onemocnění s dosud nejasnou patogenezí. Z dosavadních poznatků vyplývá, že se jedná o monoklonální expanzi B-lymfocytů, které se následně hromadí jak v periferní krvi, tak v lymfatických orgánech, s čímž jsou spojené další komplikace v podobě zvětšení orgánů, snížené funkce imunitního systému, anémie a dalších. Předpokládá se, že nemoc vzniká v důsledku narušení apoptózy a změny migrace B lymfocytů.
CLL se vyznačuje hromaděním nefunkčních nádorových monoklonálních B-lymfocytů v krvi a jejich migrací do lymfatických uzlin, jater, sleziny a kostní dřeně. Agrese nemoci pak závisí na interakci těchto nefunkčních buněk se svým bezprostředním okolím (mikroprostředím). Tato interakce pak vede k nekontrolovatelnému dělení nádorových buněk.
CLL je nevyléčitelné onemocnění. Pacienti jsou pravidelně sledováni a léčba je zahajována až při výrazné progresi klinických příznaků. Standardem je kombinace chemo- a imunoterapie (FCR; fludarabin+cyklofosfamid a rituximab, monoklonální protilátka proti povrchovému receptoru B-lymfocytů), která vede při první léčbě u velké části pacientů k ústupu příznaků. U všech pacientů se však onemocnění znovu vrací a další terapie je často méně účinná. Účinek FCR je velmi omezený u pacientů s agresivní CLL s defektem nádorového supresoru p53.
V současné době je vynakládáno velké úsilí na vývoj a testování léčiv cílených na buněčné dráhy zapojené do interakce CLL buněk s mikroprostředím lymfatických orgánů. Léčiva jsou cílena zejména na dráhy aktivované po interakci buňky s antigenem (signalizace přes Bbuněčný receptor, BCR), mezi adhezivními molekulami a po interakci buněčných receptorů s tzv. chemotaktickými cytokiny - chemokiny, které řídí migraci buněk imunitního systému v organizmu a uvnitř lymfatických orgánů. Podle prvních výsledků vykazují některé z těchto látek velmi dobré výsledky a to i u pacientů, kteří na FCR neragují (Wayach JA et al., Blood
2012 Jun 12; Honigberg LA et al., PNAS 2010 Jul 20; 107(29): 13075-80; Herman SE et al., Blood. 2011 Jun 9;117(23):6287-96;Herman SE et al. Blood. 2010 Sep 23;116(12):2078-88). Dosud však v praxi neexistuje efektivní terapie založená na léčbě příčiny onemocnění.
Přihláška vynálezu PV 2009-518 popisuje vztah mezi nekanonickou Wnt-PCP dráhou a CLL. Je popsáno využití stanovení míry exprese, funkčnosti či aktivity komponent této signální dráhy pro určení stupně závažnosti CLL a prognostiku. Stav nekanonické signální dráhy WntPCP pro diagnostiku a prognostiku CLL lze také zjistit stanovením migrace CLL buněk v gradientu chemokinu v přítomnosti Wnt5a.
Podstata vynálezu
Předmětem předkládaného vynálezu jsou inhibitory kasein kinázy 1 (CK1) pro použití pro léčbu B-buněčné chronické lymfocytámí leukémie (CLL).
Předmětem předkládaného vynálezu je použití inhibitoru kasein kinázy 1 (CK1) pro přípravu léčiva pro léčbu B-buněčné chronické lymfocytámí leukémie (CLL).
Předmětem předkládaného vynálezu je také způsob léčby B-buněčné lymfocytámí leukémie, zahrnující podání alespoň jednoho inhibitoru kasein kinázy 1 (CK1) subjektu trpícímu Bbuněčnou chronickou lymfocytámí leukémií (CLL).
Kasein kináza 1 je s výhodou vybrána ze skupiny zahrnující kasein kinázu 1 delta (CK15) a kasein kinázu 1 epsilon (CKla).
Za inhibitor CK1 lze považovat látku, která omezi aktivitu CK1 na 10 % a méně ve srovnání s kontrolou. Kontrola je rozpouštědlo, v němž je inhibitor testován, použité ve stejném množství, ale bez vlastního inhibitoru. Inhibiční aktivitu vůči CK1 lze stanovit například s použitím in vitro kinázového eseje podle Bain et al. Biochem. J. (2007) 408, 297-315.
Inhibice CK1 zabrání migraci buněk CLL v chemokinovém gradientu, a tím znemožní buňkám dostat se do mikroprostředí, které je aktivuje. Inhibitory CK1 jsou schopny účinně zabránit migraci leukemických buněk do lymfatických orgánu a tím zabránit jak interakci leukemických buněk v mikroprostředí těchto orgánů, tak zamezit narušení funkčnosti těchto orgánů a rozvoji CLL. Většina komponent nekanonické signální dráhy Wnt/PCP je navíc exprimována v dospělém organismu velmi málo a je proto pravděpodobné, že léčba podle předkládného vynálezu bude velice specifická pro nádorové buňky.
Ve výhodném provedení vynálezu je inhibitorem CK1 látka D4476 (CAS No. 301836-43-1).
V jiném výhodném provedení vynálezu je inhibitorem CK1 látka PF670462 (CAS No
V dalším výhodném provedení vynálezu je inhibitorem CK1 látka IC261 (CAS No: 186611
52-9):
CH3
V ještě dalším výhodném provedení vynálezu je inhibitorem CK1 látka PF 4800567 (CAS
No: 1188296-52-7):
Předmětem vynálezu je dále léčivo pro léčbu B-buněčné chronické lymfocytámí leukémie, obsahující inhibitor kasein kinázy 1, s výhodou inhibitor kasein kinázy 1 delta nebo kasein kinázy 1 epsilon, nej výhodněji je inhibitor kasein kinázy 1 vybrán ze skupiny zahrnující látky D4476, PF670462, IC261, PF 4800567.
Přehled obrázků
Obrázek 1: Migrace buněk MEČI, která reprezentuje model CLL in vitro, byla zkoumána v přítomnosti chemokinů CCL19 a CCL21 (200 ng/ml) s použitím migrační komůrky Transwell. Míra migrace je vyjádřena migračním indexem. Migrace MEČI iniciována chemokiny CCL21 a CCL19 je blokována inhibitory CK1 - D4476 (CK1 inh. I; 100 μΜ) a PF670462 (CK1 inh. II; 50 μΜ). Hodnoty na obr. A a B představují průměr a standardní chybu. Statistická významnost byla testována pomocí One-way ANOVA a Tukey post-hoc testem (*p<0,05, **p<0,01, ***p<0,001).
Obrázek 2: Transendoteliální invazivita buněk MEČI byla testována na migrační komůrce Transwell v uspořádání, kdy byla svrchní komůrka porostlá jednou vrstvou endotehalmch buněk HUVEC. Míra invazi vity (určená jako migrační index) buněk MEČI byla analyzována v přítomnosti chemokinů CCL19, Wnt5a nebo při kombinaci obou látek. Pozitivní efekt CCL19 na transendoteliální migraci MEČI byl blokován přidáním D4476 (CK1 inh. I). Statistická významnost byla testována testem one-way ANOVA a Tukey post-hoc testem (***p<0?001). Každý experiment byl nezávisle opakován třikrát.
Obrázek 3: CK1 kontroluje migraci buněk CLL in vivo. (A) Schéma pokusu: Buňky CLL byly získány přečištěním ze vzorků čerstvé krve od pacientů, stimulovány a in vitro obarveny pomocí zeleného calceinu. Následně byly intraperitoneálně injikovány do NSG myší. Po 24 hodinách byla myší tkáň zkoumána na přítomnost calcein-pozitivních buněk CLL pomocí flow-cytometrie (viz. výřez G1 v typickém rozložení dot plot). (B) Míra apoptózy v primárních buňkách CLL po přidání DMSO/D4476 (CK1 inh. I) byla stanovena analýzou membránového potenciálu mitochondrií pomocí flow-cytometrie za použití tetramethylrhodamin ethyl esteru (TMRE) barveného zelenou calceinovou barvou. Grafy ukazují, že stimulace inhibitory kasein kinázy 1 nemění míru apoptózy (průměr+standardní chyba). (C) Efekty inhibice CK1 na infiltraci myší tkáně buňkami CLL. Grafy ukazuji poměr buněk CLL (množství pozitivních buněk/celkové množství buněk v orgánu) ošetřených DMSO nebo D4476 (CK1 inh. I), které byly odebrány ze sleziny (G), jater (Gi) a kostní dřeně (Gn) u myší s transplantovanými buňkami. Jeden symbol v grafu odpovídá jednomu pacientovi. * p<0,05 - Wilcoxonův párový t-test.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1: Vliv inhibitorů CK1 na migraci CLL buněk
V tomto příkladu byla použita buněčná linie MEČI, což je dobře definované buněčná linie získaná z CLL pacienta v prolymfocytické transformaci. Linie MEČI je používána jako transplantační model CLL. MEČI byly získány ze sbírky DSMZ (Braunschweig, Německo) a kultivovány v RPMI1640 suplementováném 10% FBS a antibiotiky při 37 °C a 5% CO2.
V horní vložce HTS Transwell® 96-jamkových destiček (Corning Incorporated, Mexico) s polykarbonátovými membránami s 5,0 pm velikostí pórů bylo vyseto 0,5x106 MEČI buněk. Buňky byly ošetřeny přes noc látkami D4476 (inhibitor CK1, 100 pM, Calbiochem, San Diego, CA, USA) v DMSO nebo PF670462 (inhibitor CK1, 50 μΜ; Tocris Biosciences, Ellisville, Missouri, USA) v DMSO nebo DMSO (dimethylsulfoxid; kontrola - rozpouštědlo inhibitorů výše, použito ve stejném množství jako v experimentálních jamkách) a inkubovány v úplném médiu (včetně 10% FCS) při 37 °C a 5% CO2. Migrace k chemokinú pak byla analyzována přístrojem Coulter Counter (model FN, Coulter Electronics, Florida, USA). Migrační index byl vypočten jako počet buněk (ošetřených nebo neošetřených) migrujících k chemokinú dělený počtem buněk migrujících jen ke kontrolnímu médiu.
V tomto příkladu je testována inhibice CKls kinázy, která je vyžadována pro PCP signalizaci díky své roli ve fosforylaci proteinu Dvl. Inhibice CKle pomocí D4476 (CK1 inh. I) zablokovala chemotaktickou odpověď MEČI buněk na CCL21 a CCL19 (Obrázek 1), což ukazuje, že CKla je nutný pro migraci CLL k CCL21 a CCL19. Pro vyloučení účinků nespecifických pro CKls jsme zopakovali stejné pozorování s dobře definovaným inhibitorem PF670462 specifickým pro CK15 and CKls s téměř shodnými výsledky.
Statistické metody:
Pro statistické vyhodnocení byly používány T-test nebo Mann-Whitney test k posouzení rozdílu mezi dvěma kontinuálními proměnnými, jednorozměrný ANOVA test (následovaný Tukeyovým post-hoc testem) k posouzení rozdílu mezi více než dvěma proměnnými. Standardní hladina statistické významnosti byla 0,05. Všechna statistická hodnocení byla prováděna za použití GraphPad Prism 5 (GraphPad Software Inc., La Jolla, California).
Příklad 2: Vliv inhibitoru CK1 na chemokinem řízenou transendotheliální invazi CLL buněk
V komplexním prostředí lidského těla buňky reagují na atraktanty a musí procházet extracelulámí matrix nebo endotheliální bariérou, což je proces nazývaný invaze. Bylo testováno, zda CK1 inhibitory ovlivňují invazi přes vrstvu lidských pupečníkových endotheliálních buněk (HUVEC).
V horní vložce HTS Transwell® 96-jamkových destiček (Corning Incorporated, Mexico) s polykarbonátovými membránami s velikostí pórů 5,0 pm, potaženými HUVEC (human umbilical vein endothelial cells monolayer), bylo vyseto 0,5x106 MEČI buněk. Buňky byly ošetřeny přes noc látkami D4476 (inhibitor CK1, 100 pM, Calbiochem, San Diego, CA, USA) nebo DMSO a inkubovány v úplném médiu (včetně 10% FCS) při 37 °C a 5% CO2. Migrace k chemokinu pak byla analyzována přístrojem Coulter Counter (model FN, Coulter Electronics, Florida, USA). Migrační index byl vypočten jako počet buněk (ošetřených nebo neošetřených) migrujících k chemokinu dělený počtem buněk migrujících jen ke kontrolnímu médiu.
Nejprve byla charakterizována schopnost CXCL12, CCL19 a CCL21 indukovat invazi buněk MEČI v Transwell jamkách pokrytých HUVEC. Z těchto tří testovaných chemokinů byl pouze CCL19 schopen indukovat transendotheliální migraci buněk MEČI. Tato odpověd nebyla zvýšena Wnt5a, ale byla výrazně snížena inhibitorem CK1 (Obrázek 2).
Příklad 3: Inhibice migrace CLL buněk do tkání in vivo
NOD SCID IL2R gamma null (NSG) myši získané z The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA) byly drženy ve speciálním bezpatogenovém zařízení pro chov zvířat. Tyto myší postrádají dospělé T buňky, B buňky a funkční NK buňky. Pro transplantace byly použity neozářené myši (ve věku 8 až 16 týdnů), experimenty byly prováděny v souladu se zákonnými ustanoveními ČR.
Primární B buňky z dosud neléčených pacientů s CLL byly odděleny gradientovou centrifugací následovanou deplecí non-B-buněk (RosetteSep® B Cell Enrichment Kit a Human CD3+ Depletion Kit; StemCell Technologies, Vancouver, Canada; nebo MACS B cell Isolation Kit II; Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany) podle instrukcí výrobce. Vyhodnocení expresního profilu CD5 a CD 19 přečištěných buněk bylo provedeno průtokovou cytometrií (tříbarevný panel: CD45-TRI-COLOR, MHCD45065, Invitrogen, CD5-FITC, A08932, CD19-PE, A07769, Beckman Coulter). Pro další analýzy byly použity vzorky s čistotou vyšší než 95 % B buněk.
Čerstvě izolované lidské CLL lymfocyty (25 x 106 z pacienta) byly po dobu 20 hodin předošetřeny inhibitorem CK1 (100 μΜ, D4476, Calbiochem) a dimethylsulfoxidem (DMSO, Sigma-Aldrich) jako kontrolou. Buňky pak byly obarveny Calceinem AM (200 nM, Invitrogen) po dobu 45 minut a promyty dvakrát sterilním PBS. Část předošetřených a Calceinem AM obarvených buněk (5 x 106) byla použita pro analýzu FACS (FACScalibur) snížení potenciálu mitochondriální membrány spojeného s apoptózou (2 μΜ TMRE (tetramethylrhodamin ethyl ester), Invitrogen, 20 minut barvení při laboratorní teplote). Transplantace myším byla prováděna intraperitoneální injekcí 20 x 106 předošetřených a Calceinem AM obarvených lidských CLL lymfocytů v 120 μΐ sterilního PBS. Vzorky sleziny, jater a femorální kostní dřeně myší byly odebrány 24 hodin po injekci a analyzovány. Migrace calcein-pozitivních CLL buněk do těchto tkání byla stanovena analýzou FACS (FACScalibur).
V tomto experimentu byla paralelně stanovována míra apoptózy ošetřených buněk průtokovou cytometrií potenciálu mitochondriální membrány za použití TMRE barviva v kombinaci se zeleným calceinovým barvením značícím živé buňky. Dvojitě pozitivní buňky byly považovány za živé a neapoptotické.
Primární CLL buňky v NSG myších aktivně migrují do odpovídajících tkání a mohou být detekovány zejména ve slezině, játrech a kostní dřeni. Ošetření inhibitorem CK1 D4476 snížilo migraci do sleziny, jater a kostní dřeně, aniž byla detekována zvýšená apoptóza buněk (Obrázek 3). Tento experiment ukazuje, že inhibice CK1 snižuje schopnost CLL buněk migrovat a kolonizovat myší tkáně.
Claims (6)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Použití inhibitoru kasein kinázy 1 pro přípravu léčiva pro léčbu B-bunecné chronické lymfocytámí leukémie.
- 2. Použití podle nároku 1, vyznačené tím, že kasein kináza 1 je vybrána ze skupiny zahrnující kasein kinázu 1 delta a kasein kinázu 1 epsilon.
- 3. Použití podle nároku 1, vyznačené tím, že inhibitor kasein kinázy 1 je vybrán ze skupiny zahrnující D4476, PF670462, IC261, PF 4800567.
- 4. Léčivo pro léčbu B-buněčné chronické lymfocytámí leukémie, vyznačené tím, ze obsahuje inhibitor kasein kinázy 1.
- 5. Léčivo podle nároku 4, vyznačené tím, že obsahuje inhibitor kasein kinázy 1 delta nebo kasein kinázy 1 epsilon.
- 6. Léčivo podle nároku 4, vyznačené tím, že inhibitor kasein kinázy 1 je vybrán ze skupiny zahrnující látky D4476, PF670462, IC261, PF 4800567.
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2012-538A CZ2012538A3 (cs) | 2012-08-08 | 2012-08-08 | Inhibitory pro léčbu B-buněčné chronické lymfocytární leukémie |
| CA2876908A CA2876908C (en) | 2012-08-08 | 2013-08-05 | Casein kinase 1 inhibitors for the treatment of b-cell chronic lymphocytic leukemia |
| US14/414,828 US20150209354A1 (en) | 2012-08-08 | 2013-08-05 | Casein kinase 1 inhibitors for the treatment of b-cell chronic lymphocytic|leukemia |
| EP13752573.9A EP2882437B1 (en) | 2012-08-08 | 2013-08-05 | Casein kinase 1 inhibitors for the treatment of b-cell chronic lymphocytic leukemia |
| PCT/CZ2013/000090 WO2014023271A1 (en) | 2012-08-08 | 2013-08-05 | Casein kinase 1 inhibitors for the treatment of b-cell chronic lymphocytic|leukemia |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2012-538A CZ2012538A3 (cs) | 2012-08-08 | 2012-08-08 | Inhibitory pro léčbu B-buněčné chronické lymfocytární leukémie |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2012538A3 true CZ2012538A3 (cs) | 2014-02-19 |
Family
ID=49028869
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2012-538A CZ2012538A3 (cs) | 2012-08-08 | 2012-08-08 | Inhibitory pro léčbu B-buněčné chronické lymfocytární leukémie |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20150209354A1 (cs) |
| EP (1) | EP2882437B1 (cs) |
| CA (1) | CA2876908C (cs) |
| CZ (1) | CZ2012538A3 (cs) |
| WO (1) | WO2014023271A1 (cs) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2015212341A1 (en) | 2014-02-03 | 2016-09-08 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Use of Casein kinase I inhibitors for depleting stem cells |
| WO2016149756A1 (en) | 2015-03-23 | 2016-09-29 | The University Of Melbourne | Treatment of respiratory diseases |
| JP2016193861A (ja) * | 2015-03-31 | 2016-11-17 | 国立大学法人山梨大学 | マスト細胞活性化を抑制するための医薬組成物 |
| JP7788128B2 (ja) * | 2017-05-03 | 2025-12-18 | ティアンリ バイオテック プロプライエタリ リミテッド | 呼吸器疾患の治療のための化合物 |
| CA3085967C (en) | 2018-03-29 | 2022-10-18 | Masarykova Univerzita | 4-(1h-imidazol-5-yl)-1h-pyrrolo[2,3-b]pyridines for use in the treatment of leukaemias, lymphomas and solid tumors |
| CA3111848A1 (en) | 2018-09-09 | 2020-03-12 | Qanatpharma Ag | Use of casein kinase 1 inhibitors for treating vascular diseases |
| JP7614646B2 (ja) | 2018-11-07 | 2025-01-16 | ティアンリ バイオテック プロプライエタリ リミテッド | 呼吸器疾患の処置のための化合物及び組成物 |
| WO2026062521A2 (en) | 2024-09-18 | 2026-03-26 | Institute Of Molecular And Clinical Ophthalmology Basel (Iob) | Methods and compounds for promoting survival of photoreceptors |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2918061B1 (fr) * | 2007-06-28 | 2010-10-22 | Sanofi Aventis | Derives de 6-cycloamino-3-(pyridin-4-yl)imidazo°1,2-b!- pyridazine,leur preparation et leur application en therapeutique. |
-
2012
- 2012-08-08 CZ CZ2012-538A patent/CZ2012538A3/cs unknown
-
2013
- 2013-08-05 CA CA2876908A patent/CA2876908C/en not_active Expired - Fee Related
- 2013-08-05 WO PCT/CZ2013/000090 patent/WO2014023271A1/en not_active Ceased
- 2013-08-05 EP EP13752573.9A patent/EP2882437B1/en not_active Not-in-force
- 2013-08-05 US US14/414,828 patent/US20150209354A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP2882437A1 (en) | 2015-06-17 |
| CA2876908C (en) | 2016-11-08 |
| EP2882437B1 (en) | 2016-12-14 |
| US20150209354A1 (en) | 2015-07-30 |
| WO2014023271A1 (en) | 2014-02-13 |
| CA2876908A1 (en) | 2014-02-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ2012538A3 (cs) | Inhibitory pro léčbu B-buněčné chronické lymfocytární leukémie | |
| Xia et al. | Autophagic adaptation to oxidative stress alters peritoneal residential macrophage survival and ovarian cancer metastasis | |
| Agarwal et al. | G-CSF promotes neuroblastoma tumorigenicity and metastasis via STAT3-dependent cancer stem cell activation | |
| Bam et al. | Role of Bruton's tyrosine kinase in myeloma cell migration and induction of bone disease | |
| Lopez et al. | Inhibition of lactate transport by MCT-1 blockade improves chimeric antigen receptor T-cell therapy against B-cell malignancies | |
| Tirino et al. | Cancer stem cells in solid tumors: an overview and new approaches for their isolation and characterization | |
| Costa et al. | Expression of CD38 in myeloma bone niche: A rational basis for the use of anti-CD38 immunotherapy to inhibit osteoclast formation | |
| Matas-Céspedes et al. | The human CD38 monoclonal antibody daratumumab shows antitumor activity and hampers leukemia–microenvironment interactions in chronic lymphocytic leukemia | |
| Janovska et al. | Casein kinase 1 is a therapeutic target in chronic lymphocytic leukemia | |
| Tiemessen et al. | Lack of suppressive CD4+ CD25+ FOXP3+ T cells in advanced stages of primary cutaneous T-cell lymphoma | |
| Xargay-Torrent et al. | The splicing modulator sudemycin induces a specific antitumor response and cooperates with ibrutinib in chronic lymphocytic leukemia | |
| Natoni et al. | Sialyltransferase inhibition leads to inhibition of tumor cell interactions with E-selectin, VCAM1, and MADCAM1, and improves survival in a human multiple myeloma mouse model | |
| Xu et al. | TNF causes changes in glomerular endothelial permeability and morphology through a Rho and myosin light chain kinase‐dependent mechanism | |
| Veiga et al. | Leukemia-stimulated bone marrow endothelium promotes leukemia cell survival | |
| Zhou et al. | Tumor cell-released autophagosomes (TRAPs) induce PD-L1-decorated NETs that suppress T-cell function to promote breast cancer pulmonary metastasis | |
| Nimmanapalli et al. | Expression of Concern: HSP70 inhibition reverses cell adhesion mediated and acquired drug resistance in multiple myeloma | |
| Groen et al. | N-cadherin-mediated interaction with multiple myeloma cells inhibits osteoblast differentiation | |
| WO2008070616A2 (en) | METHODS AND COMPOSITIONS RELATED TO HIF-1α | |
| Zhang et al. | Sialyltransferase7A, a Klf4-responsive gene, promotes cardiomyocyte apoptosis during myocardial infarction | |
| Zhang et al. | Activated platelets inhibit hepatocellular carcinoma cell differentiation and promote tumor progression via platelet-tumor cell binding | |
| Voltan et al. | Ibrutinib synergizes with MDM-2 inhibitors in promoting cytotoxicity in B chronic lymphocytic leukemia | |
| US11242566B2 (en) | Sialyltransferase ST3GAL6 as a marker for multiple myeloma | |
| Yamada et al. | Genetically engineered humanized anti‐ganglioside GM2 antibody against multiple organ metastasis produced by GM2‐expressing small‐cell lung cancer cells | |
| Tsai et al. | Annexin A1 mediates the anti‐inflammatory effects during the granulocytic differentiation process in all‐trans retinoic acid‐treated acute promyelocytic leukemic cells | |
| Peru et al. | Cutaneous lymphocyte antigen is a potential therapeutic target in cutaneous T-cell lymphoma |