CZ2013105A3 - Zpusob zvýsení úcinku aktivované potencované formy protilátky - Google Patents

Zpusob zvýsení úcinku aktivované potencované formy protilátky Download PDF

Info

Publication number
CZ2013105A3
CZ2013105A3 CZ20130105A CZ2013105A CZ2013105A3 CZ 2013105 A3 CZ2013105 A3 CZ 2013105A3 CZ 20130105 A CZ20130105 A CZ 20130105A CZ 2013105 A CZ2013105 A CZ 2013105A CZ 2013105 A3 CZ2013105 A3 CZ 2013105A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
leu
antibody
ala
gly
arg
Prior art date
Application number
CZ20130105A
Other languages
English (en)
Inventor
Iliich Epshtein@Oleg
Original Assignee
Iliich Epshtein@Oleg
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from RU2010129292/15A external-priority patent/RU2523557C2/ru
Priority claimed from RU2010129294/15A external-priority patent/RU2542414C2/ru
Priority claimed from RU2010129290/15A external-priority patent/RU2525155C2/ru
Priority claimed from RU2010129295/15A external-priority patent/RU2531049C2/ru
Priority claimed from RU2010129291/15A external-priority patent/RU2525156C2/ru
Priority claimed from RU2010129298/15A external-priority patent/RU2526153C2/ru
Priority claimed from RU2010130348/15A external-priority patent/RU2531048C2/ru
Priority claimed from RU2010130358/15A external-priority patent/RU2519695C2/ru
Priority claimed from RU2010130356/15A external-priority patent/RU2542453C2/ru
Priority claimed from RU2010130353/15A external-priority patent/RU2542445C2/ru
Priority claimed from RU2010130355/15A external-priority patent/RU2530638C2/ru
Priority claimed from RU2011110106/15A external-priority patent/RU2523451C2/ru
Priority claimed from RU2011127051/15A external-priority patent/RU2509572C2/ru
Priority claimed from RU2011127059/15A external-priority patent/RU2536234C2/ru
Priority claimed from RU2011127058/15A external-priority patent/RU2536232C2/ru
Priority claimed from RU2011127053/15A external-priority patent/RU2565400C2/ru
Priority claimed from RU2011127055/15A external-priority patent/RU2536230C2/ru
Priority claimed from RU2011127052/15A external-priority patent/RU2503462C2/ru
Application filed by Iliich Epshtein@Oleg filed Critical Iliich Epshtein@Oleg
Publication of CZ2013105A3 publication Critical patent/CZ2013105A3/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/0004—Homeopathy; Vitalisation; Resonance; Dynamisation, e.g. esoteric applications; Oxygenation of blood
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/08—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for nausea, cinetosis or vertigo; Antiemetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/10—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for impotence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/10—Antioedematous agents; Diuretics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2869—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against hormone receptors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Obesity (AREA)

Abstract

Zpusob zvýsení úcinku aktivované potencované formy protilátky proti endogenní biologické molekule spojením uvedené endogenní biologické molekuly s aktivovanou potencovanou formou protilátky proti endotelové NO-syntáze. Uvedené resení také poskytuje farmaceutický prípravek obsahující a) aktivovanou potencovanou formu protilátky proti endogenní biologické molekule a b) aktivovanou potencovanou formu protilátky proti NO-syntáze.

Description

OBLAST TECHNIKY
Předkládaný vynález se týká způsobu zvýšení účinku aktivované potencované formy protilátky a farmaceutické formulace obsahující aktivovanou potencovanou formu protilátky proti endogenní biologické molekule a aktivovanou potencovanou formu protilátky proti endotelové NO-syntáze.
DOSAVADNÍ STAV TECHNIKY
Oxid dusnatý (NO) je plynná molekula, u níž bylo prokázáno, že působí v signalizaci různých biologických procesů. Z endotelu odvozený NO je klíčovou molekulou při regulaci cévního tonu a jeho spojení s cévním onemcněním bylo rozpoznáno již dávno. NO inhibuje mnoho procesů, účastných při tvorbě aterosklerotického plaku, včetně adheze monocytů, agregace destiček a buněčné proliferace cévního hladkého svalstva. Další důležitou roli endotelového NO je ochrana cévní stěny před oxidačním stresem, vyvolaným vlastními produkty látkové výměny a oxidačními produkty lipidů a lipoproteinů. Endotelová dysfunkce se vyskytuje u velmi časných stadií aterosklerózy. Je proto možné, že místní nedostupnost NO může být konečnou společnou cestou, která urychluje aterogenezi u lidí. Kromě jeho role v cévním endotelu bylo prokázáno, že dostupnost NO moduluje metabolismus lipoproteinů. Byla zaznamenána negativní korelace mezi koncentracemi metabolických produktů NO v plazmě a mezi cholesterolem jak celkovým tak i lipoproteinem o nízké hustotě [LDL], zatímco lipoprotein o vysoké hustotě [HDL] zlepšuje cévní funkci při hypercholesterolémii. Úbytek NO má výrazný vliv na vývoj nemoci. Diabetes mellitus je spojen se zvýšenou nemocností a úmrtností způsobenou především tím, že urychluje rozvoj aterosklerotického onemocnění. Navíc zprávy ukazují, že diabetici mají zhoršenou funkci plic. Bylo navrženo, že resistence k insulinu vede k zánětu dýchacích cest. Habib et al., Nitric oxide measurement from blood to lungs, is there a link? Pak. J. Physiol. 2007; 3 (1).
Oxid dusnatý je syntetizován endotelem syntézou oxidu dusnatého (NO-syntáza) z L-argininu. NO-syntáza se vyskytuje v různých izoformách, mezi nimi konstitutivní formě (kNOS) a inducibilní formě (iNOS). Konstitutivní forma je přítomna v normálních bunňkách endotelu, v neuronech a v některých dalších tkáních.
Léčebný efekt velmi zředěné (neboli ultra-nízké) formy protilátek potencovaných homeopatickou technologií (aktivovaná potencovaná forma) objevil Dr. Oleg I. Epshtein. US Patent číslo 7,700,096 popisuje homeopaticky potencovanou formu protilátky proti endotelové NO-syntáze. Homeopatickypotencovaná forma protilátek proti endotelové NO-syntáze je uváděna na trh v Ruské federaci a dalších zemích pod názvem Impaza®.
Trvá potřeba způsobu zvýšení účinku aktivované potencované formy protilátky.
PODSTATA VYNÁLEZU
V souladu s jedním aspektem je předmětem vynálezu způsob zvýšení účinku aktivované potencované formy protilátky proti endogenní biologické molekule, který zahrnuje kombinování uvedené endogenní biologické molekuly s aktivovanou potencovanou formou protilátky proti endotelové NO-syntáze. Tento aspekt vynálezu zahrnuje přednostně podávání řečené kombinace pacientovi, který potřebuje léčbu uvedenou aktivovanou nnou formou protilátky.
V jedné z variant je uvedenou aktivovanou potencovanou formou protilátky proti endogenní biologické molekule protilátka proti proteinu S-100. V jiné variantě je uvedenou aktivovanou potencovanou formou protilátky proti endogenní biologické molekule protilátka proti specifickému prostatickému antigenu. V další variantě je uvedenou aktivovanou potencovanou formou protilátky proti endogenní biologické molekule protilátka proti receptoru insulinu. V další variantě je uvedenou aktivovanou potencovanou formou protilátky proti endogenní biologické molekule protilátka proti receptoru antigiotensinu II.
V souladu s dalším aspektem vynález poskytuje farmaceutický přípravek obsahující a) aktivovanou potencovanou formu protilátky proti endogenní biologické molekule a b) aktivovanou potencovanou formu protilátky proti NO-syntáze. Farmaceutickým přípravkem je přednostně farmaceuticky přijatelný pevný nosič.
Aktivovaná potencovaná forma protilátek proti endotelové NO-syntáze obsahuje přednostně směs C12, C30 a C200 homeopatických ředění, impregnovaných na pevném nosiči. Aktivovanou potencovsnou formou protilátek proti endogenní biologické molekule může být monoklonální, polyklonální nebo přírodní protilátka. Protilátkou proti receptoru lidského insulinu je přednostně polyklonální protilátka.
Předpokládá se, že farmaceutický přípravek obsahuje aktivovanou potencovanou formu protilátky proti endogenní biologické molekule, připravenou postupným setinným ředěním, spojeným s protřepáním každého ředění. Uvažuje se také, že protilátkou proti endotelové NO-syntáze je monoklonální, polyklonální nebo přírodní protilátka. Je zvláště výhodné, aby protilátkou proti endotelové NO-syntáze byla polyklonální protilátka. Předpokládá se, že aktivovaná potencovaná forma protilátky proti endotelové NO-syntáze se připravuje postupných setinným ředěním spolu s protřepáváním každého ředění.
PŘEHLED OBRÁZKŮ NA VÝKRESECH
Obrázek 1 objasňuje vliv testovaných přípravků na hladinu glukózy v krevní plazmě krys se streptozotocinem indukovaným diabetem mellitus.
Obrázek 2 objasňuje vliv testovaných přípravků ve 14. den po injekci na indikátory plochy pod křivkou koncentrace-čas (AUC) v testu glukózové tolerance u krys se streptozotocinem indukovaným diabetem mellitus.
Obrázek 3 objasňuje vliv testovaných přípravků na hladinu glukózy v krevní plazmě krys se spontánním diabetem mellitus, nezávislým na insulinu.
Obrázek 4 objasňuje vliv testovaných přípravků v 28. den po injekci na indikátory plochy pod křivkou koncentrace-čas (AUC) v testu glukózové tolerance u krys se spontánním diabetem mellitus, nezávislým na insulinu.
PODROBNÝ POPIS
Vynález je definován s odkazem na připojené patentové nároky. Dále jsou s ohledem na patentové nároky vysvětleny příslušné definice.
Výrazem „protilátka“, jak je použit v tomto dokumentu, se rozumí imunoglobulin, která se specificky váže, a tím je definován jako komplementární, na konkrétní prostorovou a polární organizaci další molekuly. Protilátky, jak se uvádějí v nárocích, mohou obsahovat kompletní imunoglobulin nebo jeho fragment, mohou být přirozené, polyklonální nebo monoklonální, a mohou zahrnovat různé třídy a izotypy, jako je IgA, IgD, IgE, IgG^ lgG2a, lgG2b a lgG3, IgM atd. Jejich fragmenty mohou zahrnovat Fab, Fv a F(ab') 2> Fab', a podobně. Singulár „protilátka“ zahrnuje i množné číslo „protilátky“.
Výraz „aktivovaná potencovaná forma“ nebo „potencovaná forma“ s ohledem na zmiňované protilátky se používá k označení produktu homeopatické potenciace jakéhokoli počátečního roztoku protilátek. „Homeopatická potenciace“ označuje použití metod homeopatie k předání homeopatické potence počátečnímu roztoku příslušné látky. I když ne výlučně, „homeopatická potenciace“ může zahrnovat například opakovaná po sobě jdoucí ředění v kombinaci s vnějším působením, zejména svislým (mechanickým) protřepáním. Jinými slovy, výchozí roztok protilátek je podroben řadě opakovaných ředění a mnohonásobného vertikálního protřepání každého získaného roztoku podle homeopatické technologie. Přednostní koncentrace počátečního roztoku protilátek v rozpouštědle, přednostně vodě nebo směsi voda/ethanol je v rozmezí od asi 0,5 do asi 5,0 mg/ml. Přednostním postupem pro přípravu jednotlivých komponent, tj. roztoku protilátek, je použití směsi tří vodných nebo vodné alkoholových zředění primárního základního roztoku (matečné tinktury) protilátek ředěných 10012, 10030 a 1002°°krát, což je ekvivalentní setinnému homeopatickému ředění (C12, C30, resp. C200) nebo použití směsi tří vodných nebo vodně-alkoholových ředění primárního základního roztoku protilátek zředěného 10012, 10030 a 10050 krát, což je ekvivalentní setinnému homeopatickému ředění (C12, C30, resp. C50). Příklady homeopatické potenciace jsou popsány v patentech U. S. číslo 7,572,441 a 7,582,294, na něž zde pro uvedený účel v plném rozsahu odkazujeme. Zatímco v patentových nárocích se používá výraz „aktivovaná potencovaná forma“, v příkladech je použit výraz „ultranízká dávka. Výraz „ultranízké dávky“ se stal odborným výrazem v oblasti pokusů a užití homeopaticky zředěných a potencovaných forem látky. Výraz „ultranízká dávka“ nebo „ultranízké dávky“ je míněn jako plná podpora a především synonymum výrazu „aktivovaná potencovaná forma, používaného v nárocích.
Jinými slovy, protilátka je v „aktivované potencované“ nebo „potencované “ formě, pokud jsou přítomny tři faktory. Předně, „aktivovaná potencované“ forma protilátky je produkt procesu přípravy uznávaného v homeopatické technice. Zadruhé, „aktivovaná potencované“ forma protilátky musí mít biologickou aktivitu určenou metodami uznávanými v moderní farmakologii. A zatřetí, biologickou aktivitu, kterou vykazuje „aktivovaná potencované“ forma protilátek, není možno vysvětlit přítomností molekulární formě protilátky v konečném výrobku homeopatického procesu.
Aktivovaná potencované forma protilátek může být například připravena podrobením počáteční izolované protilátky v molekulární formě následným opakovaným ředěním spolu s externím působením, jako je mechanické třepání. Vnější působení v průběhu snižování koncentrace může být také dosaženo například působením ultrazvuku, elektromagnetických, nebo jiných fyzikálních! faktorů. Publikace V. Schwabe „Homeopathic medicines“, Μ., 1967, U.S. patenty číslo 7,229,648 a 4,311,897, na něž odkazujeme v celém rozsahu k uvedenému účelu, popisují takové procesy, které jsou dobře zavedenými postupy homeopatické potenciace v homeopatické praxi. Tento postup vede k rovnoměrnému poklesu molekulární koncentrace počáteční molekulární formě protilátky. Tato procedura se opakuje, dokud se nezíská požadovaná homeopatické účinnost. Pro jednotlivé protilátky může být žaádaná homeopatické potence určena podrobením mezilehlých ředění biologickému testování v požadovaném farmakologickém modelu. I když ne výlučně, „homeopatické potenciace“ může zahrnovat například opakovaná po sobě jdoucí ředění v kombinaci s vnějším působením, zejména svislým (mechanickým) protřepáním. Jinými slovy, výchozí roztok protilátek je podroben řadě opakovaných ředění a mnohonásobného vertikálního protřepáni každého získaného roztoku podle homeopatické technologie. Přednostní koncentrace počátečního roztoku protilátek v rozpouštědle, nejlépe vodě nebo směsi voda/ethanol, je v rozmezí od asi 0,5 do asi 5,0 mg/ml. Přednostním postupem pro přípravu jednotlivých komponent, tj. roztoku protilátek, je použití směsi tří vodných nebo vodné alkoholových zředění primárního základního roztoku (matečné tinktury) protilátek ředěných 10012, 10030 a 100 200 krát, což je ekvivalentní setinnému homeopatickému ředění (C12, C30, resp. C200), nebo použití směsi tří vodných nebo vodně-alkoholových ředění primární základního roztoku protilátek zředěného 10012, 10030 a 1005°krát, které je ekvivalentní setinnému homeopatickému ředění (C12, C30, resp. C50). Příklady, jak získat požadovanou potenci, jsou také například v U.S. patentech číslo 7,229,648 a 4,311,897, které jsou začleněny s ohledem na uvedené účely. Postupy které lze uplatnit na „aktivované potencované“ formě protilátek popsaných v tomto dokumentu jsou podrobněji popsány níže.
Pokud jde o homeopatickou léčbu lidských subjektů, je dosud předmětem značných kontroverzí. Zatímco vynález se opírá o uznávané homeopatické postupy při získání „aktivované potencované“ formy protilátek, k důkazu účinnosti u lidí nelze spoléhat pouze na homeopatii. Původcem tohoto vynálezu bylo překvapivě objeveno a v uznávaných farmakologických modelech dostatečně prokázáno, že rozpouštědlo získané nakonec z opakovaných ředění výchozí molekulární formy protilátky má konečnou aktivitu, která nesouvisí s přítomnosti stop molekulární formy protilátky v cílovém ředění. Zde uváděné „aktivované potencované“ formy protilátky, jsou testovány na biologickou aktivitu v uznávaných farmakologických modelech účinnosti, a to buď ve vhodných pokusech in vitro, nebo in vivo na vhodných zvířecích modelech. Pokusy, které zde jsou dále uvedeny, poskytují důkaz biologické aktivity v těchto modelech. Klinické studie na lidech, rovněž uvedené zde níže, prokazují mimo jiné, že účinek pozorovaný na zvířecím modelu lze dobře převést na léčbu lidí. Studie na lidech rovněž poskytly důkaz o schopnosti „aktivovaných potencovaných“ forem popsaných v tomto dokumentu léčit uvedené lidské choroby nebo poruchy, dobře známé lékařské vědě jako patologické stavy.
Nárokovaná „aktivovaná potencované“ forma protilátky také zahrnuje pouze roztoky nebo pevné přípravky s biologickou aktivitou, kterou nelze vysvětlit přítomností molekulární formy protilátky, zbylou z původního výchozího roztoku. Jinými slovy, jestliže se předpokládá, že „aktivovaná potencované“ forma protilátky může obsahovat stopy počáteční molekulární formy protilátky, kvalifikovaný odborník nemůže přisoudit pozorovanou biologickou aktivitu v přijatých farmakologických modelech zbývající molekulární formě protilátky s jakýmkoliv stupněm pravděpodobnosti kvůli extrémně nízké koncentraci molekulární formy protilátky, zbývající po sobě jdoucích ředěních. Zatímco vynález není omezen žádnou specifickou teorií, biologickou aktivitu „aktivované potencované“ formy protilátek podle vynálezu není možné přisoudit počáteční molekulární formě protilátky. Preferovaná je „aktivovaná potencované“ forma protilátky v kapalném nebo pevném stavu, ve kterém je koncentrace počáteční molekulární formy protilátky pod hranicí detekce přijatých analytických technik, jako jsou kapilární elektroforéza a vysokoúčinná kapalinová chromatografie. Zvláště výhodná je „aktivovaná potencovaná“ forma protilátky v kapalném nebo pevném stavu, ve kterém je koncentrace počáteční molekulární formy protilátky nižší než Avogadrovo číslo. Ve farmakologii molekulárních forem terapeutických látek je obecnou praxí vytvořit křivku dávka-odezva, kde je úroveň farmakologické odpovědi vynesena proti koncentraci aktivní látky podávané subjektu nebo testované in vitro. Minimální dávka léčiva, která produkuje jakoukoli zjistitelnou reakci, je známa jako prahová dávka. Je zvláště výhodné, aby uvažovaná „aktivovaná potencovaná“ forma protilátky obsahovala molekulární protilátku, pokud vůbec, v koncentraci nižší než je prahové dávka pro molekulární formu protilátky v daném biologickém modelu.
Kombinovaný farmaceutický přípravek podle tohoto provedení vynálezu může být v kapalné formě nebo v pevné formě. Každá z aktivovaných potencovaných forem protilátek obsažených ve farmaceutickém přípravku je připravena z počáteční molekulární formy protilátky prostřednictvím procesu uznávaného homeopatickou technikou. Výchozí protilátky mohou být monoklonální nebo polyklonální protilátky připravené v souladu se známými postupy, například jak je popsáno v publikacích Immunotechniques, G. Frimel, M„ „Meditsyna“, 1987, str. 9-33; „Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after“ od autorů Laffly E., Sodoyer R. - 2005 - sv. 14. - N 1 -2. str. 33-55, které zde obě uvádíme jako odkaz.
Monoklonální protilátky mohou být získány například prostřednictvím hybridomové technologie. Počáteční fáze procesu zahrnuje imunizaci na základě zásad již vytvořených v průběhu přípravy polyklonálních antisér. Další fáze práce jsou spojeny s výrobou hybridních buněk vytvářejících klony protilátek s identickou specificitou. Jejich samostatná izolace se provádí s použitím stejné metody jako v případě přípravy polyklonálního antiséra.
Polyklonální protilátky lze získat prostřednictvím aktivní imunizace zvířat. Pro tento účel například vhodná zvířata (např. králíci) obdrží sérii injekcí příslušného antigenu, například endotelové NO-syntázy. Imunitní systém zvířat vytváří odpovídající protilátky, které jsou shromažďovány od zvířat známým způsobem. Tento postup umožňuje přípravu séra, bohatého na monospecifické protilátky.
V případě potřeby může být krevním sérum, které obsahuje protilátky vyčištěno, např. použitím afinitní chromatografíe, frakcionovaným srážením solí nebo iontoměničovou chromatografií. Výsledné vyčištěné sérum, obohacené protilátkou, může být použito jako výchozí materiál pro přípravu aktivované potencované formy protilátek. Preferovaná koncentrace výsledného počátečního roztoku protilátek v rozpouštědle, nejlépe ve vodě nebo ve vodně-alkoholové směsi, se pohybuje v rozmezí od asi 0,5 do asi 5,0 mg/ml.
Přednostním postupem pro přípravu jednotlivých komponent kombinovaného léku podle vynálezu je použití směsi tří vodně-alkoholových roztoků primárního základního roztoku protilátek ředěného 10012, 10030 a 10050 krát, což odpovídá setinnému homeopatickému ředění C12, C30, resp. C50, nebo ředěním 10012, 10030 a 100 200 krát, což odpovídá setinnému homeopatickému ředění C12, C30, resp. C200. K přípravě pevné lékové formy je pevný nosič napuštěn požadovanou zředěním, získaným prostřednictvím homeopatického procesu. Pro získání pevné jednotkové lékové formy kombinace podle vynálezu je pevný nosič napuštěn každým z ředění. Pro přípravu požadované kombinované lékové formy jsou vhodná obě pořadí impregnace.
Výchozí látkou pro přípravu aktivované potencované formy, kterou obsahuje kombinace podle vynálezu, je přednostně polyklonální, ze zvířat pocházející protilátka k odpovídajícímu antigenu, a to NO-syntáze a endogenní biologické molekule. K získání aktivované potencované formy polyklonální protilátky proti NOsyntáze může požadovaný antigen být aplikován jako imunogen do laboratorního zvířete, nejlépe králíka. Polyklonální protilátky proti NO-syntáze mohou být získány použitím celé molekuly hovězí NO-syntázy s následující sekvencíi:
SEQ ID NO: 1
Met Gly Asn Leu Lys Ser Val Gly Gin Glu Pro Gly Pro ProCys
1015
Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Cys Gly Lys GinGly
20 2530
Pro Ala Ser Pro Ala Pro Glu Pro Ser Arg Ala Pro Ala Pro Ala
31 35 40 45
Thr Pro His Ala Pro Asp His Ser Pro Ala Pro Asn Ser Pro Thr
46 50 55 60
Leu Thr Arg Pro Pro Glu Gly Pro Lys Phe Pro Arg Val Lys Asn
5 61 65 70 75
Trp Glu Leu Gly Ser Ile Thr Tyr Asp Thr Leu Cys Ala Gin Ser
76 80 85 90
Gin Gin Asp Gly Pro Cys Thr Pro Arg Cys Cys Leu Gly Ser Leu
91 95 100 105
10 Val Leu Pro Arg Lys Leu Gin Thr Arg Pro Ser Pro Gly Pro Pro
106 110 115 120
Pro Ala Glu Gin Leu Leu Ser Gin Ala Arg Asp Phe Ile Asn Gin
121 125 130 135
Tyr Tyr Ser Ser Ile Lys Arg Ser Gly Ser Gin Ala His Glu Glu
15 136 140 145 150
Arg Leu Gin Glu Val Glu Ala Glu Val Ala Ser Thr Gly Thr Tyr
151 155 160 165
His Leu Arg Glu Ser Glu Leu Val Phe Gly Ala Lys Gin Ala Trp
166 170 175 180
20 Arg Asn Ala Pro Arg Cys Val Gly Arg Ile Gin Trp Gly Lys Leu
181 185 190 195
Gin Val Phe Asp Ala Arg Asp Cys Ser Ser Ala Gin Glu Met Phe
196 200 205 210
Thr Tyr Ile Cys Asn His Ile Lys Tyr Ala Thr Asn Arg Gly Asn
25 211 215 220 225
Leu Arg Ser Ala Ile Thr Val Phe Pro Gin Arg Ala Pro Gly Arg
226 230 235 240
Gly Asp Phe Arg Ile Trp Asn Ser Gin Leu Val Arg Tyr Ala Gly
241 245 250 255
30 Tyr Arg Gin Gin Asp Gly Ser Val Arg Gly Asp Pro Ala Asn Val
256 260 265 270
Glu Tle Thr Glu Leu Cys Ile Gin His Gly Trp Thr Pro Gly Asn
271 275 280 285
Gly Arg Phe Asp Val Leu Pro Leu Leu Leu Gin Ala Pro Asp Glu
286 290 295 300
Ala Pro Glu Leu Phe Val Leu Pro Pro Glu Leu Val Leu Glu Val
301 305 310 315
5 Pro Leu Glu His Pro Thr Leu Glu Trp Phe Ala Ala Leu Gly Leu
316 320 325 330
Arg Trp Tyr Ala Leu Pro Ala Val Ser Asn Met Leu Leu Glu lie
331 335 340 345
Gly Gly Leu Glu Phe Ser Ala Ala Pro Phe Ser Gly Trp Tyr Met
10 346 350 355 360
Ser Thr Glu lie Gly Thr Arg Asn Leu Cys Asp Pro His Arg Tyr
361 365 370 375
Asn lie Leu Glu Asp Val Ala Val Cys Met Asp Leu Asp Thr Arg
376 380 385 390
15 Thr Thr Ser Ser Leu Trp Lys Asp Lys Ala Ala Val Glu lie Asn
391 395 400 405
Leu Ala Val Leu His Ser Phe Gin Leu Ala Lys Val Thr lie Val
406 410 415 420
Asp His His Ala Ala Thr Val Ser Phe Met Lys His Leu Asp Asn
20 421 425 430 435
Glu Gin Lys Ala Arg Gly Gly Cys Pro Ala Asp Trp Ala Trp lie
436 440 445 450
Val Pro Pro lie Ser Gly Ser Leu Thr Pro Val Phe His Gin Glu
451 455 460 465
25 Met Val Asn Tyr lie Leu Ser Pro Ala Phe Arg Tyr Gin Pro Asp
466 470 475 480
Pro Trp Lys GLy Ser Ala Thr Lys Gly Ala Gly lie Thr Arg Lys
481 485 490 495
Lys Thr Phe Lys Glu Val Ala Asn Ala Val Lys lie Ser Ala Ser
30 496 500 505 510
Leu Met Gly Thr Leu Met Ala Lys Arg Val Lys Ala Thr lie Leu
511 515 510 525
Tyr Ala Ser Glu Thr Gly Arg Ala Gin Ser Tyr Ala Gin Gin Leu
526 530 535 540
Gly Arg Leu Phe Arg Lys Ala Phe Asp Pro Arg Val Leu Cys Met
541 545 550 555
Asp Glu Tyr Asp Val Val Ser Leu Glu His Glu Ala Leu Val Leu
5 556 560 565 570
Val Val Thr Ser Thr Phe Gly Asn Gly Asp Pro Pro Glu Asn Gly
571 575 580 585
Glu Ser Phe Ala Ala Ala Leu Met Glu Met Ser Gly Pro Tyr Asn
586 590 595 600
10 Ser Ser Pro Arg Pro Glu Gin His Lys Ser Tyr Lys lie Arg Phe
601 605 610 615
Asn Ser Val Ser Cys Ser Asp Pro Leu Val Ser Ser Trp Arg Arg
616 620 625 630
Lys Arg Lys Glu Ser Ser Asn Thr Asp Ser Ala Gly Ala Leu Gly
15 631 635 640 645
Thr Leu Arg Phe Cys Val Phe Gly Leu Gly Ser Arg Ala Tyr Pro
646 650 655 660
His Phe Cys Ala Phe Ala Arg Ala Val Asp Thr Arg Leu Glu Glu
661 665 670 675
20 Leu Gly Gly Glu Arg Leu Leu Gin Leu Gly Gin Gly Asp Glu Leu
676 680 685 690
Cys Gly Gin Glu Glu Ala Phe Arg Gly Trp Ala Lys Ala Ala Phe
691 695 700 705
Gin Ala Ser Cys Glu Thr Phe Cys Val Gly Glu Glu Ala Lys Ala
25 706 710 715 720
Ala Ala Gin Asp lie Phe Ser Pro Lys Arg Ser Trp Lys Arg Gin
721 725 730 735
Arg Tyr Arg Leu Ser Thr Gin Ala Glu Gly Leu Gin Leu Leu Pro
736 740 745 750
30 Gly Leu Tle His Val His Arg Arg Lys Met Phe Gin Ala Thr Val
751 755 760 765
Leu Ser Val Glu Asn Leu Gin Ser Ser Lys Ser Thr Arg Ala Thr
766 770 775 780
He 781 Gin 796 Leu Vai Arg Asp Leu Asp Thr Ala Gly Gin Glu Gly Leu Gin Tyr
785 Gly He Cys 790 795
Pro Gly His 800 lie Pro 805 Pro Asn Arg Pro Gly
810
5 Leu Vai Glu Ala Leu Leu Ser Arg Vai Glu Asp Pro Pro Pro Pro
811 Thr Glu Ser Vai 815 Ala Vai Glu Gin Leu 820 Glu 825 Lys Gly Ser Pro Gly
826 Gly Pro Pro Pro 830 Ser Trp Vai Arg Asp 835 Pro 840 Arg Leu Pro Pro Cys
10 841 Thr Leu Arg Gin 845 Ala Leu Thr Phe Phe 850 Leu 855 Asp He Thr Ser Pro
856 Pro Ser Pro Arg 860 Leu Leu Arg Leu Leu 865 Ser 870 Thr Leu Ala Glu Glu
15 871 Pro Ser Glu Gin 875 Gin Glu Leu Glu Thr 880 Leu 885 Ser Gin Asp Pro Arg
886 Arg Tyr Glu Glu 890 Trp Lys Trp Phe Arg 895 Cys 900 Pro Thr Leu Leu Glu
901 Vai Leu Glu Gin 905 Phe Pro Ser Vai Ala 910 Leu 915 Pro Ala Pro Leu Leu
20 916 Leu Thr Gin Leu 920 Pro Leu Leu Gin Pro 925 Arg 930 Tyr Tyr Ser Vai Ser
931 Ser Ala Pro Asn 935 Ala His Pro Gly Glu 940 Vai 945 His Leu Thr Vai Ala
25 946 Vai Leu Ala Tyr 950 Arg Thr Gin Asp Gly 955 Leu 960 Gly Pro Leu His Tyr
961 Gly Vai Cys Ser 965 Thr Trp Leu Ser Gin 970 Leu 975 Lys Thr Gly Asp Pro
976 Vai Pro Cys Phe 980 He Arg Gly Ala Pro 985 Ser 990 Phe Arg Leu Pro Pro
30 991 Asp Pro Tyr Vai 995 Pro Cys He Leu Vai 1000 Gly 1005 Pro Gly Thr Gly He
1006 Ala Pro Phe Arg 1010 Gly Phe Trp Gin Glu 1015 1020 . Arg Leu His Asp He Glu
1021 Ser 1036 Arg 1025 1030 Pro Met Thr Leu Val 1045 Phe Val 1035 Gly Cys 1050 Gin Asp
Lys Cys Gly Leu Gin 1040 Pro Ala
Asp His
Ser Gin Leu Leu Tyr Arg Asp Glu
5 1051 Ala Gin Glu 1055 Arg Gly Val Phe Gly 1060 Arg Val Leu Thr Ala 1065 Phe Ser
1066 Arg Glu Pro 1070 Asp Ser Pro Lys Thr 1075 Tyr Val Gin Asp lie 1080 Leu Arg
10 1081 Thr Glu Leu 1085 Ala Ala Glu Val His 1090 Arg Val Leu Cys Leu 1095 Glu Arg
1096 Gly His Met 1100 Phe Val Cys Gly Asp 1105 Val Thr Met Ala Thr 1110 Ser Val
1111 Leu Gin Thr 1115 Val Gin Arg lie Leu 1120 Ala Thr Glu Gly Asp 1125 Met Glu
15 1126 Leu Asp Glu 1130 Ala Gly Asp Val lie 1135 Gly Val Leu Arg Asp 1140 Gin Gin
1141 Arg Tyr His 1145 Glu Asp lie Phe Gly 1150 Leu Thr Leu Arg Thr 1155 Gin Glu
20 1156 Val Thr Ser 1160 Arg lie Arg Thr Gin 1165 Ser Phe Ser Leu Gin 1170 Glu Arg
1171 His Leu Arg 1175 Gly Ala Val Pro Trp 1180 Ala Phe Asp Pro Pro 1185 Gly Pro
1186 Asp Thr Pro 1190 Gly Pro 1195 1200
1201 1205
Polyklonální protilátky proti NO-syntáze mohou být získány s použitím celé molekuly lidské NO-syntázy s následující sekvencí:
SEQ ID NO: 2
Met Gly Asn Leu Lys Ser Val Ala Gin Glu Pro Gly Pro Pro Cys
Gly : Leu । Sly Leu Gly 3 Leu Gly : Leu ' Gly J Leu Cys < Sly : Lys < Gin ( Gly
16 20 25 30
Pro Ala 1 Thr Pro Ala : Pro Glu Pro Ser . A.rg Ala : Pro Ala Ser : Leu
31 35 40 45
5 Leu Pro Pro Ala Pro Glu His Ser Pro Pro ; Ser Ser Pro Leu ' Thr
46 50 55 60
Gin Pro Pro Glu Gly Pro Lys Phe Pro Arg Vai Lys Asn Trp Glu
61 65 70 75
Vai GLys er He Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Ala Gin Ala Gin Gin
10 76 80 85 90
Asp Gly Pro Cys Thr Pro Arg Arg Cys Leu Gly Ser Leu Vai Phe
91 95 100 105
Pro Arg Lys Leu Gin Gly Arg Pro Ser Pro Gly Pro Pro Ala Pro
106 110 115 120
15 Glu Gin Leu Leu Ser Gin Ala Arg Asp Phe He Asn Gin Tyr Tyr
121 125 130 135
Ser Ser He Lys Arg Ser GLys er Gin Ala His Glu Gin Arg Leu
136 140 145 150
Gin Glu Vai Glu Ala Glu Vai Ala Ala Thr Gly Thr Tyr Gin Leu
20 151 155 160 165
Arg Glu Ser Glu Leu Vai Phe Gly Ala Lys Gin Ala Trp Arg Asn
166 170 175 180
Ala Pro Arg Cys Vai Gly Arg He Gin Trp Gly Lys Leu Gin Vai
181 185 190 195
25 Phe Asp Ala Arg Asp Cys Arg Ser Ala Gin Glu Met Phe Thr Tyr
196 200 205 210
lie Cys Asn His lie Lys Tyr Ala Thr Asn Arg Gly • Asn . Leu Arg
211 215 220 225
Ser Ala He Thr Vai Phe Pro Gin Arg Cys Pro Gly r Arg I Gly Asp
30 226 230 235 240
Phe Arg He Trp Asn Ser Gin . Leu . Vai Arg Tyr • Ala Gli r Tyr ' Arg
241 245 250 255
Gin Gin Asp • GLy Ser Vai . Arg [ Gly r Asp > Pro Ala Asn Vai L G1l i He
256 260 265 270
Thr 271 Glu Leu Cys lie 275 Gin His Gly Trp Thr 280 Pro Gly . Asn Gly Arg 285
5 Phe 286 Asp Val Leu Pro 290 Leu Leu Leu Gin Ala 295 Pro Asp Glu Pro Pro 300
Glu 301 Leu Phe Leu Leu 305 Pro Pro Glu Leu Val 310 Leu Glu Val Pro Leu 315
Glu 316 His Pro Thr Leu 320 Glu Trp Phe Ala Ala 325 Leu Gly Leu Arg Trp 330
10 Tyr 331 Ala Leu Pro Ala 335 Val Ser Asn Met Leu 340 Leu Glu lie Gly Gly 345
Leu 346 Glu Phe Pro Ala 350 Ala Pro Phe Ser Gly 355 Trp Tyr Met Ser Thr 360
15 Glu 361 lie Gly Thr Arg 365 Asn Leu Cys Asp Pro 370 His Arg Tyr Asn lie 375
Leu 376 Glu Asp Val Ala 380 Val Cys Met Asp Leu 385 Asp Thr Arg Thr Thr 390
Ser 391 Ser Leu Trp Lys 395 Asp Lys Ala Ala Val 400 Glu lie Asn Val Ala 405
20 Val 406 Leu His Ser Tyr 410 Gin Leu Ala Lys Val 415 Thr lie Val Asp His 420
His 421 Ala Ala Thr Ala 425 Ser Phe Met Lys His 430 Leu Glu Asn Glu Gin 435
25 Lys 436 Ala Arg Gly Gly 440 Cys Pro Ala Asp Trp 445 Ala Trp lie Val Pro 450
Pro 451 lie Ser Gly Ser 455 Leu Thr Pro Val Phe 460 His Gin Glu Met Val 465
Asn 466 Tyr Phe Leu Ser 470 Pro Ala Phe Arg Tyr 475 Gin Pro Asp Pro Trp 480
30 Lys 481 Gly Ser Ala Ala 485 Lys Gly Thr Gly lie 490 Thr Arg Lys Lys Thr 495
Phe 496 Lys Glu Val Ala 500 Asn Ala Val Lys lie 505 Ser Ala Ser Leu Met 510
Gly 511 Ser 526 Thr Val Met Gly Ala 515 Arg 530 Lys Ala Arg Val Lys Ala 510 Thr Gin lie Gin Leu Leu Tyr Gly Gly 525 Arg 540
Gin Ser
Glu Thr Tyr Ala 535
5 Leu Phe Arg Lys Ala Phe Asp Pro Arg Val Leu Cys Met Asp Glu
541 545 550 555
Tyr Asp Val Val Ser Leu Glu His Glu Thr Leu Val Leu Val Val
556 560 565 570
Thr Ser Thr Phe Gly Asn Gly Asp Pro Pro Glu Asn Gly Glu Ser
10 571 575 580 585
Phe Ala Ala Ala Leu Met Glu Met Ser Gly Pro Tyr Asn Ser Ser
586 590 595 600
Pro Arg Pro Glu Gin His Lys Ser Tyr Lys lie Arg Phe Asn Ser
601 605 610 615
15 lie Ser Cys Ser Asp Pro Leu Val Ser Ser Trp Arg Arg Lys Arg
616 620 625 630
Lys Glu Ser Ser Asn Thr Asp Ser Ala Gly Ala Leu Gly Thr Leu
631 635 640 645
Arg Phe Cys Val Phe Gly Leu GLys er Arg Ala Tyr Pro His Phe
20 646 650 655 660
Cys Ala Phe Ala Arg Ala Val Asp Thr Arg Leu Glu Glu Leu Gly
661 665 670 675
Gly Glu Arg Leu Leu Gin Leu Gly Gin Gly Asp Glu Leu Cys Gly
676 680 685 690
25 Gin Glu Glu Ala Phe Arg Gly Trp Ala Gin Ala Ala Phe Gin Ala
691 695 700 705
Ala Cys Glu Thr Phe Cys Val Gly Glu Asp Ala Lys Ala Ala Ala
706 710 715 720
Arg Asp lie Phe Ser Pro Lys Arg Ser Trp Lys Arg Gin Arg Tyr
30 721 725 730 735
Arg Leu Ser Ala Gin Ala Glu Gly Leu Gin Leu Leu Pro Gly Leu
736 740 745 750
Tle His Val His Arg Arg Lys Met Phe Gin Ala Thr lie Arg Ser
751 755 Lys Gin 760 Thr Tyr lie Gin 765 Leu 780 Pro
Val 766 Val Glu Arg Asn Leu Leu Asp Gin 770 Thr Ser Gly Ser Gly Ser Glu Thr Arg Ala 775
Gly Leu Gin
5 781 785 790 795
Gly Asp His lie Gly Val Cys Pro Pro Asn Arg Pro Gly Leu Val
796 800 805 810
Glu Ala Leu Leu Ser Arg Val Glu Asp Pro Pro Ala Pro Thr Glu
811 815 820 825
10 Pro Val Ala Val Glu Gin Leu Glu Lys Gly Ser Pro Gly Gly Pro
826 830 835 840
Pro Pro Gly Trp Val Arg Asp Pro Arg Leu Pro Pro Cys Thr Leu
841 845 850 855
Arg Gin Ala Leu Thr Phe Phe Leu Asp lie Thr Ser Pro Pro Ser
15 856 860 865 870
Pro Gin Leu Leu Arg Leu Leu Ser Thr Leu Ala Glu Glu Pro Arg
871 875 880 885
Glu Gin Gin Glu Leu Glu Ala Leu Ser Gin Asp Pro Arg Arg Tyr
886 890 895 900
20 Glu Glu Trp Lys Trp Phe Arg Cys Pro Thr Leu Leu Glu Val Leu
901 905 910 915
Glu Gin Phe Pro Ser Val Ala Leu Pro Ala Pro Leu Leu Leu Thr
916 920 925 930
Gin Leu Pro Leu Leu Gin Pro Arg Tyr Tyr Ser Val Ser Ser Ala
25 931 935 940 945
Pro Ser Thr His Pro Gly Glu lie His Leu Thr Val Ala Val Leu
946 950 955 960
Ala Tyr Arg Thr Gin Asp Gly Leu Gly Pro Leu His Tyr Gly Val
961 965 970 975
30 Cys Ser Thr Trp Leu Ser Gin Leu Lys Pro Gly Asp Pro Val Pro
976 980 985 990
Cys Phe Tle Arg Gly Ala Pro Ser Phe Arg Leu Pro Pro Asp • Pro
991 995 1000 1005
Ser Leu Pro Cys lie Leu Val Gly Pro Gly Thr Gly lie Ala Pro
1006 Phe Arg Gly 1010 Phe Trp Gin Glu 1015 Arg Leu His Asp lie 1020 Glu Ser Lys
1021 Gly Leu Gin 1025 Pro Thr Pro Met 1030 Thr Leu Val Phe Gly 1035 Cys Arg Cys
1036 Ser Gin Leu 1040 Asp His Leu Tyr 1045 Arg Asp Glu Val Gin 1050 Asn Ala Gin
1051 Gin Arg Gly 1055 Val Phe Gly Arg 1060 Val Leu Thr Ala Phe 1065 Ser Arg Glu
1066 Pro Asp Asn 1070 Pro Lys Thr Tyr 1075 Val Gin Asp lie Leu 1080 Arg Thr Glu
1081 Leu Ala Ala 1085 Glu Val His Arg 1090 Val Leu Cys Leu Glu 1095 Arg Gly His
1096 Met Phe Val 1100 Cys Gly Asp Val 1105 Thr Met Ala Thr Asn 1110 Val Leu Gin
1111 Thr Val Gin 1115 Arg lie Leu Ala 1120 Thr Glu Gly Asp Met 1125 Glu Leu Asp
1126 Glu Ala Gly 1130 Asp Val lie Gly 1135 Val Leu Arg Asp Gin 1140 Gin Arg Tyr
1141 His Glu Asp 1145 lie Phe Gly Leu 1150 Thr Leu Arg Thr Gin 1155 Glu Val Thr
1156 Ser Arg lie 1160 Arg Thr Gin Ser 1165 Phe Ser Leu Gin Glu 1170 Arg Gin Leu
1171 Arg Gly Ala 1175 Val Pro Trp Ala 1180 Phe Asp Pro Pro Gly 1185 Ser Asp Thr
1186 Asn Ser Pro 1190 1195 1200
1201 1203
K získání polyklonálních protilátek proti NO-syntáze lze též použít fragment NOsyntázy, vybraný například z následujících sekvencí:
SEQ ID NO: 3
Pro Trp Ala Phe
11921195
SEQ ID NO: 4
Gly Ala Vai Pro
11891192
SEQ ID NO: 5
Arg 1185
His Leu Arg Gly Ala Vai Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro 1186 1190 11951200
Asp Thr Pro Gly Pro
12011205
SEQ ID NO: 6
Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro 1194 11951200
Asp Thr Pro Gly Pro
12011205
SEQ ID NO: 7
His Leu Arg Gly Ala Vai Pro Trp Ala Phe Asp
1186 1190 1195 1196
SEQ ID NO: 8
His Leu Arg Gly Ala Vai Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro
1186 1190 11951200
Asp Thr Pro Gly Pro
1201
1205
Příkladný postup pro přípravu výchozích polyklonálních protilátek proti NOsyntáze může být popsán následovně. 7 až 9 dnů před odběrem krevního vzorku jsou králíkům aplikovány 1-3 nitrožilní injekce požadovaného antigenu ke zvýšení hladiny polyklonálních protilátek v krevním řečišti králíků. Po imunizaci jsou odebrány vzorky krve k testování hladiny protilátek. Obvykle je nejvyšší úrovně imunitní reakce rozpustného antigenu dosaženo za 40 až 60 dnů po prvním podání antigenu. Po dokončení prvního očkovacího cyklu mají králíci 30-denní rehabilitační období, po němž se znovu provede imunizace dalšími 1-3 intravenózními injekcemi.
K získání antiséra obsahujícího požadované protilátky je krev imunizovaných králíků odebrána a umístěna do 50 ml centrifugační zkumavky. Sraženina vytvořená na stěnách se odstraní dřevěnou špachtlí a do sraženiny uprostřed zkumavky se vloží tyčinka. Krev se pak umístí přes noc v mrazicím boxu při teplotě asi -40 °C. Následujícího dne se sraženina na špachtli odstraní a zbývající kapalina se odstředí po dobu 10 minut při 13 000 otáčkách za minutu. Supernatant je cílové antisérum. Získané antisérum je typicky žluté. K antiséru se přidá 20 % NaN3 (hmotnostní koncentrace) do konečné koncentrace 0,02 % a uchová se před použitím ve zmrazeném stavu při teplotě -20 °C nebo bez NaN3 při teplotě -70 °C. Pro oddělení cílových protilátek ke gama interferonu z antiséra je vhodný následující postup absorpce na pevné fázi:
ml králičího antiséra se zředí stejným objemem 0,15 M NaCI, pak se přidá 6,26 g Na2SO4, promíchá a inkubuje 12-16 hodin při teplotě 4 °C. Sediment se odstraní odstředěním, zředí 10 ml fosfátového pufru a dialyzuje přes noc při pokojové teplotě proti témuž pufru. Po odstranění usazeniny se roztok nanese na sloupec DEAE-celulózy ekvilibrovaný fosfátovým pufrem. Frakce protilátky se stanoví měřením optické hustoty eluátu při 280 nm.
Izolované surové protilátky se vyčistí pomocí afinitní chromatografie navázáním získaných protilátek proti NO-syntáze umístěných v nerozpustné matrici chromatografického media s následnou elucí koncentrovaným vodným roztokem solí.
Výsledný roztok pufru se použije jako výchozí roztok procesu homeopatického ředění pro přípravu aktivované potencované formy protilátek. Počáteční koncentrace výchozího roztoku antigenem čištěné polyklonální králičí protilátky proti NO-syntáze je přednostně 0,5 - 5,0 mg/ml, s výhodou 2,0 až 3,0 mg/ml.
Polyklonální protilátky proti endogenní biologické molekule mohou být získány podobnou metodou jako je popsána pro protilátky proti endotelové NO-syntáze pomocí adjuvans.
Výsledný roztok pufru se používá jako výchozí roztok pro homeopatické ředění použité pro přípravu aktivované potencované formy protilátek.
Aktivovaná potencované forma každé složky v kombinaci může být připravena z výchozího roztoku homeopatickou potenciací, přednostně metodou poměrného snižování koncentrace sériovým ředěním 1 dílu každého předcházejícího roztoku (počínaje výchozím roztokem) s 9 díly (pro desetinná ředění), nebo s 99 díly (pro setinná ředění), nebo s 999 díly (pro tisícinná ředění) neutrálního rozpouštědla, počínaje výchozím roztokem protilátky v rozpouštědle, nejlépe ve vodě nebo směsi voda-etanol, v rozmezí koncentrace od asi 0,5 do asi 5,0 mg/ml, spojeným s vnějším působením. Vnějším působením se přednostně rozumí vertikální protřepání (dynamizace) každého ředění. Přednostně se pro každé další zředění na požadovanou úroveň nebo ředicí faktor použijí oddělené nádoby. Tato metoda je v homeopatické technice dobře známa. Viz např. publikaci V. Schwabe „Homeopathic medicines, Μ., 1967, str. 14-29, na kterou ktomuto účelu odkazujeme.
Například k přípravě 12-setinného ředění (označeného C12), se rozředí jeden díl výchozího základního roztoku protilátek proti NO-syntáze o koncentrací 3,0 mg/ml 99 díly neutrálního vodného nebo vodně-alkoholového rozpouštědla (přednostně 15% ethanol) a pak mnohokrát (10 a více) opakovaně svisle protřepe, aby se vytvořilo l.setinné ředění (označované jako C1). 2. setinné ředění (C2) se připravuje z prvního setinného ředění C1. K přípravě 12. setinného ředění se tento postup opakuje 11 krát. To znamená, že dvanácté setinné ředění C12 představuje roztok, získaný 12. sériovým ředěním jednoho dílu výchozího základního roztoku protilátek o koncentrací 3,0 mg/ml 99 díly neutrálního rozpouštědla v různých nádobách, což je ekvivalentní setinnému homeopatickému ředění C12. Podobné postupy s příslušným ředicím faktorem se provedou pro získání požadovaných ředění. Pro kontrolu účinnosti mohou být mezilehlá ředění testována v požadovaném biologickém modelu. Preferovanou aktivovanou potencovanou formou pro protilátky tvořící kombinaci podle vynálezu jsou směsi ředění C12, C30 a C200 pro každou aktivovanou potencovanou formu. Při použití směsi různých homeopatických ředění (především setinného) biologicky aktivní kapalné složky jako účinné látky je každá složka přípravku (např. C12, C30, C200) připravena odděleně v souladu s výše popsaným postupem, dokud se nezíská předposlední ředění (např. do C11, C29, resp. C199), a pak se jeden díl každé složky přidá do nádoby podle složení směsi a smíchá s potřebným množstvím rozpouštědla (např. s 97 díly pro setinné ředění).
Je možné použít účinnou látku jako směs různých homeopatických ředění, např. desetinného a/nebo setinného (D20, C30, C100 nebo C12, C30, C50 nebo C12, C30, C200, atd.), jejíž účinnost je stanovena experimentálně testováním ředění na vhodném biologickém modelu, například v modelech popsaných zde v příkladech.
V průběhu potenciace a snižování koncentrace může být vertikální protřepání nahrazeno vnějším působením ultrazvuku, elektromagnetického pole nebo jiným podobným vnějším vlivem, uznávaným v homeopatické technice.
Jednotka pevné lékové formy farmaceutického přípravku podle vynálezu může být připravena napuštěním pevného, farmaceuticky přijatelného nosiče směsí aktivovaných potencovaných forem vodných nebo vodně-alkoholových roztoků aktivních složek, které jsou smíchány zpravidla v poměru 1:1a použity v kapalné lékové formě. Alternativně může být nosič napuštěn každým požadovaným ředěním postupně.
Farmaceutický přípravek v pevné jednotkové lékové formě se přednostně skládá z granulí farmaceuticky vhodného nosiče, který byl předem nasycen vodným nebo vodně-alkoholovým ředěním aktivované potencované formy protilátek. Pevná léková forma může být v jakékoliv modifikaci známé ve farmaceutické praxi, včetně tablety, kapsle, pastilky a jiných. Jako neaktivní lékovou přísadu lze využít glukózu, sacharózu, maltózu, škrob, izomaltózu, izomalt a jiné mono-, oligo- a polysacharidy používané při výrobě léčiv, jakož i technologické směsi výše uvedených neaktivních složek léčivých přípravků s jinými farmaceuticky přijatelnými pomocnými látkami, například izomaltem, krospovidonem, cyklamátem sodným, sacharinátem sodným, bezvodou kyselinou citrónovou, atd., včetně mazadel, rozvolňovadel, pojiv a barviv. Preferovanými nosiči jsou laktóza a izomalt. Dávková léková forma může dále obsahovat standardní farmaceutické pomocné látky, například mikrokrystalickou celulózu, stearát hořečnatý a kyselinu citrónovou.
Příklad přípravy pevné jednotky lékové formy je uveden dále. K přípravě pevné perorální formy jsou 100 - 300 pm granule laktózy napuštěny vodným nebo vodněalkoholovým roztokem aktivované potencované formy protilátek proti histaminu, aktivované potencované formy protilátek proti endotelové NO-syntáze a aktivované potencované formy protilátek proti endogenní biologické molekule v poměru 1 kg roztoku protilátek na 5 nebo 10 kg laktózy (1:5-1:10). Kdocílení impregnace se granule laktózy vystaví nasycení ponořením ve fluidní varné lázni (např. zařízení „Huttlin Pilotlab“ společnosti Huttlin GmbH) s následným sušením ohřátým vzduchem při teplotě nižší než 40 °C. Určené množství sušených granulí (10-34 hmotnostních dílů) nasycených aktivovanou potencovanou formou protilátek je umístěno v mixéru a smícháno s 25 až 45 hmotnostními díly „nenasycené“ čisté laktózy (používá se pro snížení nákladů, zjednodušení a zrychlení technologického procesu bez snížení účinnosti čištění), společně s 0,1 až 1 hmotnostním dílem stearátu hořečnatého a 3 až10 hmotnostními díly mikrokrystalické celulózy. Získaná tabletová hmota je po rovnoměrném rozmíchání tabletována přímým suchým lisováním (například v tabletovacím lisu Korsch-XL 400) se vytvarují okrouhlé pilulky o hmotnosti 150 až 500 mg, přednostně 300 mg. Tabletováním se získají 300 mg pilulky, nasycené vodné alkoholovým roztokem (3,0-6,0 mg na 1 pilulku) kombinace aktivované potencované formy protilátek. Každá složka kombinace, použité k impregnaci nosiče, je ve formě směsi setinných homeopatických ředění, přednostně C12, C30 a C200.
Přestože vynález není omezen na konkrétní teorii, předpokládá se, že zde popisovaná aktivovaná potencované forma protilátek neobsahuje molekulární formu protilátky v natolik dostatečném množství, aby bylo možné biologickou aktivitu připsat takové molekulární formě. Biologická aktivita kombinovaného léčiva (kombinovaného farmaceutického přípravku) podle vynálezu je dostatečně prokázána v připojených příkladech.
Přednostně, za účelem léčby, je kombinace podle vynálezu podávána jednou denně až čtyřikrát denně, přednostně dvakrát denně, přičemž každá dávka zahrnuje jednu nebo dvě kombinační jednotkové lékové formy.
Vynález je dále objasněn s odkazem na připojené neomezující příklady.
PŘÍKLADY
Příklad 1.
S využitím radioligandové metody byla hodnocena studie vlivu komplexního přípravku obsahujícího ultranízké dávky (ULD) aktivované potencované formy afinitně čištěných králičích protilátek proti specifickému mozkovému proteinu S-100 (anti-S100) a proti endotelové NO-syntáze (anti-eNOS), získané superředěním počátečního základního roztoku (koncentrace: 2,5 mg/ml) (10012, 10030, 1002°°krát), což odpovídá směsi setinných homeopatických ředění C12, C30, resp. C200 (v poměru 1:1) (ULD anti-S100 + anti-eNOS), stejně jako jeho složek - aktivované potencované formy afinitně čištěné polyklonální králičí protilátky proti ultranízkým dávkám (ULD) specifického mozkového proteinu S-100 (anti-S100) čištěné na antigen, získaných super-ředěním počátečního základního roztoku (10012, 10030, 1002°°krát, což je ekvivalentní směsi setinných homeopatických ředění C12, C30, resp. C200), a aktivované potencované formy polyklonální králičí protilátky proti ultranízkým dávkám endotelové NO-syntázy (ULD anti-eNOS), získané superředěním původního základního roztoku (10012, 10030, 1002°°krát), což odpovídá směsi setinných homeopatických ředění C12, C30, resp. C200 in vitro na vazbu standardního ligandu [3H] pentazocinu na lidský rekombinantní o1 receptor. Jako kontrola byla v testu použita potencovaná destilovaná voda (směs homeopatických ředění C12 + C30 + C200).
Sigma-1 (σ1) receptor je intracelulární a je lokalizován v buňkách centrálního nervového systému, buněk většiny periferních tkání a je složkou imunitních buněk. Receptory vykazují jedinečnou schopnost být přemísťovány vlivem mnoha psychotropních léčiv. Dynamika sigma-1 receptorů je přímo spojena s různými vlivy, vykonávanými přípravky, které působí na sigma-1 receptory. Tyto projevy zahrnují regulaci kanálů aktivity, ekocytózy, přenosu signálu, remodelaci plazmatické membrány (tvorba hřebenů) a transport/metabolismus lipidů. To vše může přispět k plasticitě neuronů v mozku. Existují důkazy o tom, že sigma-1 receptory mají modulační účinek na všechny hlavní neuromediátorové systémy: noradrenergní, serotoninergní, dopaminergní, cholinergní systém a na NMDA-nastavitelné účinky glutamátu. Sigma-1 receptor má důležitou roli v patofyziologii neurodegenerativních onemocnění (např. Alzheimerovy choroby, parkinsonismu), psychiatrických a afektivních poruch a mrtvice, a účastní se také v procesech učení a paměti. V tomto ohledu schopnost léků ovlivňovat účinnost interakce ligandů se sigma-1 receptorem ukazuje na přítomnost neuroprotektivních, protiischemických, protiúzkostných, antidepresivních a protiastenických složek ve spektru jejich farmakologického účinku, která umožňuje považovat tyto léky za účinné přípravky zejména pro léčbu cerebrovaskulárních chorob.
Během testu bylo (pro měření celkové vazby) převedeno do inkubačního media buď 20 pl komplexního přípravku ULD anti-S 100 + anti-eNOS nebo 10 pl ULD protilátek proti S-100 nebo 10 μΙ ULD protilátek proti NO-syntáze. To znamená, že množství ULD anti-S 100+anti-eNOS, přenesené do jamky při testování komplexního přípravku, bylo totožné s ULD anti-S100 a ULD anti-eNOS testovaných jako monopreparáty, což umožňuje porovnat účinnost přípravku pro jeho jednotlivé složky. Do inkubačního media bylo přeneseno 20 μΙ a 10 μΙ potencované vody.
Dále bylo přeneseno 160 μΙ (asi 200 μg bílkoviny) homogenátu buněčných membrán buněčné linie Jurkat (linie lidských leukemických T-lymfocytů), a nakonec 20 μΙ tritiem značeného radioligandu [3H]pentazocinu (15 nm).
Pro měření nespecifické vazby bylo místo přípravku nebo potencované vody do media přeneseno 20 μΙ neznačeného ligandu - haloperidolu (10 μΜ).
Radioaktivita byla měřena za použití scintilometru (Topcount, Packard) a scintilační směsi (Microscint 0, Packard) po inkubaci 120 minut při 22 °C v 50 mM pufru Tris-HCI (pH = 7,4) a filtraci pomocí filtrů ze skelného vlákna (GF/B, Packard). Specifická vazba (při testu nebo kontrole) byla vypočtena jako rozdíl mezi celkovou (při testu nebo kontrole) a nespecifickou vazbou.
Výsledky jsou znázorněny v procentech inhibice specifické vazby u kontroly (jako kontrola byla použita destilovaná voda) (tabulka 1).
Tabulka 1
skupina testu množství v pokusné jamce % specifické vazby radioligandu proti kontrole % inhibice vazby radioligandu proti kontrole
1. test 2. test průměr
ULD anti-S100+anti-eNOS 20 μΙ 48,4 35,5 42,0 58,0
ULD anti-S100 10 μΙ 67,3 63,1 65,2 34,8
ULD anti-eNOS 10 μΙ 147,5 161,1 154,3 -54,3
ná voda 20 μΙ 98,1 75,8 86,9 13,1
ná voda 10 μΙ 140,1 106,2 123,2 -23,2
Účinek preparátů a potencované vody na vazbu standardního ligandu [3H]pentazocinu na lidský rekombinantní σ 1 receptor
Poznámka: % specifické vazby proti kontrole = (specifická vazba při testu/specifická vazba u kontroly) * 100 %;
% inhibice specifické vazby u kontroly = 100 % - (specifická vazba při testu / specifická vazba u kontroly) * 100 % ).
Výsledky odrážející inhibici vyšší než 50 % představují významné účinky testovaných látek; inhibice od 25 % do 50 % potvrzuje mírné až střední účinky; inhibice méně než 25 % se považuje za nevýznamný účinek testované látky a je na úrovni pozadí.
Výsledky tohoto modelového testu tak ukázaly, že komplexní přípravek ULD antiS100+anti-eNOS je účinnější než jeho jednotlivé složky (ULD anti-S100 a ULD antieNOS) při inhibici vazby standardního radioligandu [3H]pentazocinu na lidský rekombinantní o1-receptor; ULD anti-S100, přenesené do zkušební jamky, a to 10 μΐ, inhibuje vazbu standardního radioligandu [3H]pentazocinu na lidský rekombinantní o1-receptor, ale intenzita účinku je nižší než u komplexního přípravku ULD antiS100+anti-eNOS; ULD anti-eNOS, přenesené do zkušební jamky, a to 10 μΙ, nemá žádný vliv na vazbu standardního radioligandu [3H]pentazocinu na lidský rekombinantní o1-receptor; potencované voda, přenesená do zkušební jamky, a to 10 μΙ nebo 20 μΙ, nemá žádný vliv na vazbu standardního radioligandu [3H]pentazocinu na lidský rekombinantní σ1 -receptor.
Příklad 2.
Alzheimerova choroba (ACH) je neurodegenerativní onemocnění, které je charakterizováno snížením kognitivních funkcí, zhoršováním paměti, zmatením vědomí a emocionálními změnami. Přestože za hlavní příčinu této patologie je v současné době považováno hromadění beta-amyloidu, které vede k tvorbě betaamyloidových plaků a neurofibrilárních uzlin v mozkové tkáni, ACH je také doprovázena nedostatečností cholinergního systému. To je základem nejběžnějšího způsobu modelování ACH u zvířat pomocí antagonisty cholinergního systému skopolaminu. Injekce skopolaminu pokusným zvířatům (obvykle krysám nebo myším) přerušují schopnost učit se a vedou ke zhoršování paměti.
K posouzení kognitivních funkcí u krys a myší byly použity různé metody, včetně vodního bludiště Morris. Podstatou tohoto testu je, že zvířata jsou z různých míst vypouštěna do nádoby se zakalenou vodou a nucena hledat skrytou pevnou plošinu. Výhodou tohoto způsobu je, že umožňuje výzkumníkovi sledovat průběh tréninku zvířat (tvorba představy o prostorovém uspořádání plošiny bez ohledu na to, kde bylo zvíře umístěno ve vodě), aby bylo možno zhodnotit sílu paměti (ktomu se test provádí po odstranění plošiny).
Byla studována účinnost kombinovaného farmaceutického přípravku podle vynálezu obsahujícího aktivované potencované formy afinitně čištěných králičích protilátek proti specifickému mozkovému proteinu S-100 (anti-S100) a proti endotelové NO-syntáze (anti-eNOS), v ultranízkých dávkách (ULD), získaných superředěním počátečního základního roztoku (koncentrace 2,5 mg/ml) 10012, 10030, 1002°°krát, což odpovídá směsi setinných homeopatických ředění C12, C30, C200 (ULD anti-S100+anti-eNOS) na skopolaminovou amnézii u krys.
Ve studii účinnosti léku ULD anti-S100+anti-eNOS u krys se skopolaminovou amnézií (model Alzheimerovy choroby) bylo použito 48 krysích samců linie Rj: Wistar (Han) (hmotnost 180-280 g). Během 4 dnů byly krysám subdermální injekcí podány buď fyziologický roztok (n = 12, intaktní) nebo skopolamin v dávce 0,5 mg/kg (n = 36) (skopolaminem vyvolaná amnézie). Krysy se skopolaminem vyvolanou amnézií byly rozděleny do tří skupin, a 9 dnů (4 dny před injekcí skopolaminu, 4 dny proti pozadí skopolaminu a 1 den po poslední skopolaminové injekci) jim byla podávána přes zažívací trakt buď destilovaná voda (7,5 ml/kg, n = 12, kontrolní skupina 1), nebo ULD anti-S100 (7,5 ml/kg, n = 12, skupina 2) nebo ULD antiS100+anti-eNOS (7,5 ml/kg, n = 12, skupina 3).
Trénink ve vodním bludišti Morris byl prováděn během 4 dnů skopolaminových injekci 60 minut po podání testovaných léků a 30 minut po podání skopolaminu (4 postupné testy v intervalu 60 sekund). Morrisovo bludiště je kruhová nádrž (průměr 150 cm, výška 45 cm), naplněná do 30 cm vodou (26-28 °C). 18 cm od okraje nádoby je skryta plošina (průměr 15 cm) ponořená 1,5 cm pod hladinou vody. Zakalení vody docílené přidáním nejedovatého barviva (např. sušeného mléka) činí plošinu neviditelnou. Pro každou zkoušku bylo zvíře umístěno v bludišti do jednoho z výchozích bodů, které jsou ve stejné vzdálenosti od skryté plošiny, a zvířeti bylo umožněno hledat plošinu. Pokud zvíře nemohlo najít plošinu do 120 sekund, bylo zvíře umístěno na plošině po dobu 60 sekund a test byl restartován. Během čtyř testů v náhodném pořadí zvířata začínala chodit v bludišti dvakrát z každého výchozího bodu. Testy byly zaznamenány na videokazetě a pak analyzovány na vzdálenost překonanou při vyhledávání plošiny v každém pokusu a latentní období hledání plošiny. 5. den byla provedena zkouška: plošina byla odstraněna z bludiště a krysy volně plavaly po dobu 60 sekund. Čas strávený v místě, kde bývala plošina, byl zaznamenán.
Podávání skopolaminu výrazně zhoršovalo schopnost zvířat se učit. V kontrolní skupině se čas věnovaný zvířaty vyhledávání plošiny a vzdálenost, kterou zvířata uplavala při vyhledávání plošiny, výrazně zvýšil (tabulka 2, 3). Test ukazuje, že se paměť zvířat v kontrolní skupině zhoršila: zvířata v této skupině věnovala méně času místu, kde byla plošina umístěna při použití, než zdravá zvířata (tabulka 4). Podávání ULD anti-S100 nevedlo ke zlepšení sledovaných parametrů (tabulky 2, 3, 4). Podávání ULD anti-S100+anti-eNOS vedlo k určitému zlepšení učení, které mělo za následek zkrácení latentní doby hledání plošiny (tabulka 2) a pokryté vzdálenosti (tabulka 3) během 4 dnů tréninku, a ke zlepšení paměti, jak se to odráží ve zvýšení času stráveného v místě, kde byla dříve umístěna plošina (tabulka 4).
Tabulka 2.
Latentní doba vyhledávání plošiny, sec
skupina trénink
1. den 2. den 3. den 4. den
intaktní n=12 54,7 ± 6,2 30,8 ± 2,8 26,9 ± 5,1 20,5 ± 3,6
kontrola n=12 100,1 ±6,8 *** 92,4 ± 9,3 *** 81,4 ±10,7 *** 77,7 ± 9,4 ***
ULD anti-S100 n=12 106,8 ±7,0 99,3 ±7,8 95,6 ± 9,0 80,4 ±11,1
ULD anti-S100+anti-eNOS n=12 94,4 ±7,2 90,7 ±8,2 78,3 ± 8,6 60,1 ±10,2
*** - rozdíl od skupiny intaktních je významný, p < 0,05
Tabulka 3.
Vzdálenost překonaná při vyhledávání plošiny, cm
skupina trénink
1. den 2. den 3. den 4. den
intaktní n=12 1055,7 ± 94,6 659,5 ± 94,6 564,8±119,3 406,1 ± 61,2
kontrola n=12 2587,1 ±217,2*** 2559,6 ±250,5*** 2397,9±312,6 2366,1 ±283,8***
ULD anti-S100 n=12 2797,2 ±208,9 2865,2±255,1 2857,0 ±300,8 2457,4 ±344,4
ULDanti-S100+anti-eNOSn=12 2434,3 ±222,8 2529,9 ±282,7 2344,2 ±283,0 1905,1 ±343,7
*** - rozdíl od skupiny intaktních je významný, p < 0,05
Tabulka 4.
Doba strávená na místě, kde byla předtím umístěna plošina, sec.
skupina test
0 - 30 sec. 30 - 60 sec. 0 - 60 sec.
intaktní n=12 40,8 ±4,1 36,8 ± 3,6 38,5 ± 2,6
kontrola n=12 18,4 ±2,8 *** 18,8 ± 1,9 *** 18,8 ±1,7 ***
ULD anti-S100 n=12 13,3 ±2,1 21,5 ±2,6 17,6 ±1,3
ULD anti-S100+anti-eNOS n=12 19,1 ±4,8 23,8 ±2,2 21,2 ±2,5
*** - rozdíl od skupiny intaktních je významný, p < 0,05
V modelu Alzheimerovy choroby tak bylo podávání komplexu ULD antiS100 + anti-eNOS účinnější ve srovnání s podáváním ULD anti-S100 a vehikula.
Příklad 3.
V předklinickém výzkumu byly studovány ultranízké dávky (ULD) aktivované potencované formy polyklonální afinitně čištěné králičích protilátek proti specifickému mozkovému proteinu S-100 (anti-S100) purifikovaných antigenem a proti endotelové NO-syntáze (anti-eNOS), získaných superředěním počátečního základního roztoku (koncentrace: 2,5 mg/ml), (10012, 10030, 100200krát), což odpovídá směsi setinných homeopatických ředění C12, C30, C200 (poměr: 1:1) (ULD anti-S100 + antieNOS), při léčbě ischemické cévní mozkové příhody způsobené prefrontální cerebrokortikální fototrombózou u krys.
Akutní cerebrovaskulární onemocnění (mozková příhoda) patří na třetí místo mezi příčinami úmrtí v rozvinutých zemích a jedním z hlavních příčin zdravotního postižení u lidí (Gusev E.I., 2003; Janardhan V., Qureshi A. I., 2004).
Model fotoindukované trombózy splňuje téměř všechny požadavky na experimentální model ložiskové mozkové ischemie. Metoda vyvinutá Watsonem (Watson B. et al., 1985) je založena na účinku světla s vlnovou délkou 560 nm na fotocitlivý pigment bengálskou červeň zavedený do krevního oběhu. Vznikající aktivní formy kyslíku způsobí zvýšení přilnavosti endotelu krvinek a krevních destiček a vznikají sraženiny, ucpávající průřez cév. Metoda ischemické indukce mozkové léze pomocí fotoindukované trombózy je technicky jednoduchá a velmi podobná klinických formám ischemické mozkové mrtvice. Velkou výhodou tohoto modelu je to, že je neinvazivní, tj. nevyžaduje kraniotomii, a proto přesněji reprodukuje klinický obraz mozkové trombózy.
Třicet sedm krysích samců linie Wistar (hmotnost: 150-180 g; stáří: 2-3 měsíce) bylo zahrnuto do studie vlivu ULD anti-S100+anti-eNOS na krysy s ischemickou mozkovou příhodou způsobenou prefrontální cerebrokortikální fototrombózou. Oboustranné ložiskové fokální ischemické poškození prefrontální mozkové kůry u krys bylo dosaženo pomocí fotochemické trombózy metodou podle Watsona (Watson B.D. et al., 1985) modifikovanou I.V. Viktorovem (Romanova G.A. et al, 1998). Do jugulární žíly krys (n = 37) byla při znecitlivění (anestezie: chloralhydrát
300 mg/kg, intraperitoneálně) injektována bengálská červeň (3% roztok). Z halogenové žárovky (24 V, 250 W) byla za použití svazku optických vláken (3 cm v průměru) osvětlen povrch lebky nad čelní kůrou levé a pravé mozkové hemisféry a indukována fototrombóza. Krysy (n = 6) simulované skupiny byly vystaveny stejnému postupu, s výjimkou podání bengálské červeni a vystavení světlu halogenové žárovky. Intaktní skupina zahrnovala 6 krys.
Pět dnů před a 9 dnů po indukci mrtvice byly podávány krysám s fototrombózou následující přípravky: destilovaná voda (kontrola-fototrombóza, 5 ml/kg denně, n= 12), ULDanti-S100 (5 ml/kg denně, n = 7) nebo ULD anti-S100+anti-eNOS (5 ml/kg denně, n = 6). 8. den po operaci (nebo fiktivní operaci) byl proveden test na reflex podmíněného pasivního vyhýbání se (CPAR) k posouzení schopnosti učení a paměti u krys. Krysy byly umístěny v jednotce skládající se z osvětleného místa a připojené temné komory, kde byla zvířata vystavena elektrickým šokům do nohou 0,45 mA, čímž se obvykle preferovaná temná komora stala nebezpečnou. Vývoj reflex podmíněného pasivního vyhýbání se byl testován další den. V něm byly krysy umístěny v osvětlené komoře. Byla zaznamenávána doba prvního vstupu do temné komory (doba latence). Pokud se krysa vyhýbala temné komoře po dlouhou dobu, byl proveden závěr, že si pamatovala nebezpečí (elektrický šok). Čím delší doba latence vstupu do temné komory, tím lepší paměť.
Objem mrtvičné léze byl morfologicky hodnocen v poměru krys experimentálních skupin na 9. den.
U kontrolních krys fototrombóza způsobila vznik rozsáhlé oblasti mrtvice a vedla tak ke zhoršení paměti: V testu CPAR se zhoršily o 9,6 % ve srovnání s intaktními krysami a o 22,9 % ve srovnání se simulovanou skupinou (tabulka 5). Podávání ULD anti-S100 snížilo objem ložiskové změny o 42,2 % a zlepšilo paměť o 14,0 % ve srovnání s kontrolní skupinou fototrombózy. Podávání ULD anti-S100+anti-eNOS bylo účinnější: snížilo objem ložiskové změny o 44,0 % a reprodukce podmíněného reflexu o 33,4 % ve srovnání s kontrolní skupinou fototrombózy.
Podávání komplexního přípravku ULD anti-S100+anti-eNOS bylo tedy účinnější než jednosložkového přípravku ULD anti-S100.
Tabulka 5
objem ložiskové změny (mm3); počet zvířat doba latence CPAR(sec); počet zvířat
intaktní - 135,8 ±28,8; n= 6
simulovaná - 159,3 ±18,7; n = 6
kontrola-fototrombóza 3,41 ±0,5; n = 9 122,8 ±20,9; n =12
fototrombóza + ULD anti-S100 1,97 ±0,6; n = 4 140,0 ±26,5; n= 7
fototrombóza + ULD anti-S1 OO+anti-eNOS 1,91 ±0,5; n = 4 163,8 ±16,2; n= 6
Příklad 4.
Studium kombinace „aktivovaných“ potencovaných forem protilátek proti C-terminálnímu fragmentu AT1 receptoru angiotensinu II ve směsi homeopatických ředění C12, C30, C200, a aktivované potencované formy protilátek proti endotelové NO-syntáze ve směsi homeopatických ředění C12, C30, C200 u krys linie SHR v modelu hypertenze.
U krys linie SHR v modelu hypertenze byla studována kombinace roztoků „aktivované“ potencované formy protilátek proti C-terminálnímu fragmentu receptoru angiotensinu II ve směsi homeopatických ředění C12, C30, C200 a aktivované potencované formy protilátek proti endotelové NO-syntáze ve směsi homeopatických ředění C12, C30, C200. Šetření bylo provedeno na 40 krysích samcích linie SHR (hmotnost 350 ±50g, stáří 4,5-5 měsíců) s hypertenzí, kteří byly rozděleni do 4 skupin po 10 zvířatech.
Po dobu 28 dnů byla zvířata ošetřována takto. Skupina 1 - 2,5 ml/kg aktivované potencované formy protilátek proti C-terminálnímu fragmentu AT1 receptoru lidského angiotensinu II (směs vodných ředění C12, C30, C200) v kombinaci s 2,5 ml/kg destilované vody, skupina 2 - 2,5 ml/kg aktivované potencované formy protilátek proti endotelové NO-syntáze (směs vodných ředění C12, C30, C200) v kombinaci s 2,5 ml/kg destilované vody, skupina 3 - 5 ml/kg kombinovaného farmaceutického přípravku (směs vodných ředění C12, C30, C200 pro každou složku) a skupina 4-5 ml/kg destilované vody.
U krys v bdělém stavu byl jednou týdně a 9 hodin po posledním podání léků měřen nepřímou metodou (pomocí manžety) systolický krevní tlak (SBP) v ocasní tepně.
Všechny testované preparáty prokázaly hypotenzní účinek (p < 0,05): 28. den se systolický krevní tlak (SBP) snížil ve srovnání s počáteční úrovní ve skupině 1 o 20,6 %; ve skupině 2 o 14,4 %, ve skupině 3 o 27,6 %. V kontrolní skupině 4 byly změny SBP o 1,6% ve srovnání s výchozími hodnotami. Výsledky ukazují jasný synergický hypotenzní účinek kombinovaného farmaceutického prostředku.
Příklad 5.
Studium kombinace aktivované potencované formy protilátek proti C-terminálnímu fragmentu AT1 receptoru angiotensinu II ve směsi homeopatických ředění C12, C30, C200 a aktivované potencované formy protilátek proti endotelové NO-syntáze ve směsi homeopatických ředění C12, C30, C200 u krys linie NISAG v modelu hypertenze.
U krys linie NISAG v modelu hypertenze byla studována kombinace aktivované potencované formy protilátek proti C-terminálnímu fragmentu AT1 receptoru angiotensinu II ve směsi homeopatických ředění C12, C30, C200, a aktivované potencované formy protilátek proti endotelové NO-syntáze ve směsi homeopatických ředění C12, C30, C200. Šetření bylo provedeno na 50 krysích samcích linie NISAG (hmotnost 300 g, stáří 4 měsíce) s dědičně danou na stres citlivou arteriální hypertenzí, kteří byly rozděleni do 5 skupin po 10 zvířatech.
Zvířata užívala perorálně jednou denně a po dobu 28 dnů následující léky: Skupina 1 - 2,5 ml/kg aktivované potencované formy protilátek proti C-terminálnímu fragmentu AT1 receptoru pro lidský angiotensin II (směs vodných roztoků C12, C30, C200) v kombinaci s 2,5 ml/kg destilované vody; skupina 2 - 2,5 ml/kg aktivované potencované formy protilátek proti endotelové NO-syntáze (směs vodných roztoků C12, C30, C200) v kombinaci s 2,5 ml/kg destilované vody; skupina 3- 5 ml/kg kombinovaného farmaceutického přípravku (směs vodných roztoků C12, C30, C200 pro každou složku); skupina 4-5 ml/kg (10 ml/kg dávka) léku k porovnání (Losartan) a skupina 5-5 ml/kg destilované vody.
Dvakrát týdně, 2 až 6 hodin po podání protilátek VSD a Losartanu, byl měřen nepřímou metodou (pomocí manžety) systolický krevní tlak (SBP) v ocasní tepně. Tabulka 6 ukazuje dynamiku změn systolického krevního tlaku, měřeného nepřímou metodou u krys linie NISAG.
Tabulka 6
indikátor SBP počáteční mmHg SBP po 28 dnech léčby mm Hg Δ vzhledem k počáteční úrovni mm Hg % počáteční úrovně
VSD protilátky proti C-terminálnímu fragmentu AT1 receptoru lidského angiotensinu II 176 150 -26 -14,7%
VSD protilátky proti endotelové NO-syntáze 175 164,5 -10,5 - 6 %
kombinovaný lék na bázi VSD protilátek proti C-terminálnímu fragmentu AT1 receptoru angiotensinu II a proti endotelové NO-syntáze 179,5 140 -39,5 -22 %
Losartan 173,5 140,5 -33 -19 %
kontrola (destilovaná voda) 181 178 - 3 - 1,6%
Příklad 6.
Experimentální studie vyšetřovala účinky protilátek proti C-terminálnímu 10 fragmentu β-podjednotky receptoru pro insulin afinitně čištěných na antigenu, v ultranízkých dávkách, získaných superředěním počátečního základního roztoku 10012, 100 °, 1002°°krát (ULD anti-IR), protilátek proti endotelové NO-syntáze afinitně čištěné na antigenu v ultranízkých dávkách, získaných hyperředěním počátečního základního roztoku 10012, 10030, 100200 (ULD anti-ULD anti-eNOS), jakož i 15 kombinace ultranízkých dávek protilátek proti C-terminálnímu fragmentu β-podjednotky receptoru pro insulin a ultranízké dávky protilátek proti endotelové NO-syntáze (ULD anti-IR+ULD anti-eNOS).
Ve studii bylo použito 150 krysích samců linie Wistar (hmotnost na počátku studie 250-300 g, stáří 3,5 až 4 měsíce). 10 krys bylo intaktních. Zbytku byl intravenózně injektován streptozotocin v dávce 50 mg/kg (experimentální model diabetů mellitus). 72 hodin po injekci streptozotocinu byly vybrány krysy s hladinou glukózy v plazmě nejméně 12 mmol/l a rozděleny do 7 skupin (20 krys v každé), kterým byla následujících 21 dnů podávána destilovaná voda (5 ml/kg/den, jednou denně ve stravě), insulin® (8 jednotek/kg/den, subkutánně), Rosiglitazone® (8mg/kg/den, dvakrát denně ve stravě), ULD anti-IR (2,5 ml/kg/den v objemu 5 ml/kg/den, jednou denně ve stravě), ULD anti-IR+ULD anti-eNOS (5 ml/kg/den, jednou denně ve stravě), a také Rosiglitazone® a insulin® společně nebo ULD anti-IR+ULD anti-eNOS a insulinu® podle režimů odpovídajících každému přípravku (jak je popsáno výše). Intaktní krysy obdržely destilovanou vodu ve stejném objemu. Ve dnech 7, 14 a 21 injekcí přípravků u krys byla měřena nalačno hladina glukózy v krevní plazmě enzymatickou metodou (glukózooxidázovou metodou) s použitím soupravy „glucose FKD“ (Rusko).
Orální test tolerance glukózy (OGTT) byl proveden 14. den studie (14. den podávání přípravku) podle standardní metody (Du Vigneaud a Karr, 1925). Krysy byly vyhladověny o vodě po dobu 18 hodin. 60 min před testem jim byly naposledy podány zkoušené látky. Intaktní krysy obdržely stejný objem destilované vody. Glukóza byla podávána per os jako 50% (hmotnostní) vodný roztok (1 g na kg hmotnosti krys). Glykémie byla měřena z krve z ocasní žíly pomocí soupravy „Glucose FKD“ kit (OOO „Pharmaceutical and clinical diagnostics“ Rusko, www.fkd.ru) v časech 0, 30, 60, 90 a 120 minut. Byla vypočtena průměrná plocha pod křivkou časovou koncentrace glukózy v krvi.
Injekce streptozotocinu vedla k podstatnému zvýšení glukózy v krevní plazmě krys ve srovnání s intaktními zvířaty (18 mmol/l proti 3,5 mmol/l, p < 0,05) . Ve skupině ULD anti-IR byla v 7., 14. a 21.den injekce přípravku, hladina glukózy nižší než v kontrolní skupině v průměru o 22 až 28 %, ale rozdíly nedosáhly statisticky významnou úroveň. Kombinace ULD anti-IR a anti-eNOS byla efektivnější, snížení hladiny glukózy ve 14. a 21. dni experimentu bylo 47 % a 42 % (p < 0,05 ve srovnání s kontrolou). Referenční přípravek Rosiglitazone rovněž snížil hladinu glukózy ve 14. a 21. dni experimentu; účinek tak dosáhl statistické významnosti pouze ve 14. den pokusu (o 36 %, p < 0,05 ve srovnání s kontrolou).
Insulin, podávaný injekčně v % účinné dávky (určeno v předběžné studii) nejúčinněji snižoval hladinu glukózy ve všech pozorovacích obdobích (až na úroveň intaktní kontroly) (obrázek 1). Je třeba vzít v úvahu, že ve studii byl použit krátkodobě působící insulin a glukóza v krevní plazmě byla měřena 1 hodinu po injekční aplikaci, což také ovlivnilo účinek poloviční dávky inzulínu na hladinu glukózy v krvi. V této souvislosti nebylo možné plně určit, jaký je vliv na kombinované použití insulinu a rosiglitazonu nebo inzulínem a komplexu ULD anti-IR+anti-eNOS.
Porucha tolerance glukózy (snížení využití glukózy v těle) je jedním z nejdůležitějších ukazatelů v diagnostice a léčbě cukrovky. U intaktních zvířat v orálním testu glukózové tolerance (14.den injekcí přípravků) komplexní přípravek ULD anti-IR+ULD anti-eNOS a inzulínu nejúčinněji zvýšit toleranci glukózy při samostatném podání. Rosiglitazone také snížil plochu pod časovou křivkou koncentrace (zvýšená tolerance glukózy), nicméně jeho účinnost nebyla statisticky významná v porovnání s kontrolní skupinou (obrázek 2).
Příklad 7.
Experimentální studie vyšetřovala účinky protilátek proti C-terminálnímu fragmentu β-podjednotky receptoru pro insulin afinitně čištěných na antigenu, v ultranízkých dávkách, získaných superředěním počátečního základního roztoku 10012, 10030, 1002°°krát (ULD anti-IR), protilátek proti endotelové NO-syntáze afinitně čištěné na antigenu v ultranízkých dávkách, získaných hyperředěním počátečního základního roztoku 10012, 10030, 100200 (ULD anti-ULD anti-eNOS), stejně jako kombinace ultra-nízkých dávek protilátek proti C-terminálnímu fragmentu β-podjednotky receptoru pro insulin a ultranízké dávky protilátek proti endotelové NO-syntáze (ULD anti-IR + ULD anti-eNOS).
Ve studii bylo použito 36 krysích samců linie Goto-Kakizaki (hmotnost na počátku studie 250-280 g, stáří 10-12 týdnů). Krysy z této linie se vyznačují spontánním vývojem cukrovky nezávislé na insulinu. Zvířata byla rozdělena do 3 skupin (12 krys v každé) a dostávala buď destilovanou vodu (5 ml/kg, jednou denně ve stravě), nebo ULD anti-IR (2,5 ml/kg jednou denně ve stravě), nebo ULD anti-IR+ULD anti-eNOS (5 ml/kg, jednou denně intragastricky) po dobu 28 dnů. Hladina glukózy v krevní plazmě byla měřena pomocí analyzátoru glukózy (Beckman, Fullerton, California,
...... ·..· :
USA) před začátkem injekce přípravků a ve dnech 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28 injekční aplikace přípravků. 28. den byl proveden test glukózové tolerance (glukóza perorálně i g/kg)·
Injekce ULD anti-IR vedla k významnému (p < 0,05) snížení hladiny glukózy v krevní plazmě krys, ale použití kombinace ULD anti-IR+ULD anti-eNOS bylo účinnější (p < 0,001 oproti kontrolní skupině) (obrázek 3).
Tyto výsledky byly potvrzeny údaji z testu tolerance glukózy, provedeného 28. den po injekci přípravků (obrázek 4). Injekce ULD anti-IR vedla ke zvýšení glukózové tolerance (statisticky nevýznamný pokles o 44 % AUC oproti kontrolní skupině). Současně bylo snížení tohoto parametru (AUC — plochy pod časovou křivkou koncentrace glukózy), způsobené injekcí kombinace ULD anti-IR+ULD anti-eNOS, o 62 %, a bylo statisticky významné vzhledem ke kontrole (p < 0,05).
Příklad 8.
Byl použit následující přípravek: 300 mg tablety napuštěné vodně alkoholovým roztokem (3 mg na 1 tabletu) aktivované potencované formy polyklonálních afinitně čištěných protilátek proti specifickému mozkovému králičímu S-100 proteinu (anti-S100) čištěné antigenem v ultranízkých dávkách, získaných hyperředěním počátečního základního roztoku (s koncentrací 2,5 mg/ml) v ultranízkých dávkách, 100 ,100 , 1002°°krát, což odpovídá směsi setinných homeopatických ředění C12, C30, C200; 300 mg tablety napuštěné farmaceutickým směsným přípravkem, obsahujícím vodně-alkoholové roztoky (6 mg/tabletu) aktivovaných potencovaných forem polyklonálních afinitně čištěných protilátek proti specifickému mozkovému králičímu proteinu S-100 (anti-S100) a proti endotelové NO-syntáze (anti-eNOS) v ultranízkých dávkách (ULD) získaných superředěním výchozího roztoku (o koncentrací 2,5 mg/ml) 10012, 10030, 1002°°krát, což odpovídá směsi setinných homeopatických ředění C12, C30, C200 (ULD anti-S100+anti-eNOS), 300 mg tablety napuštěné farmaceutickým přípravkem, obsahujícím vodně-alkoholový roztok (3 mg na 1 tabletu) aktivované potencované formy polyklonálních afinitně čištěných králičích protilátek proti eNOS v ultranízké dávce (ULD anti-eNOS) získané superředěním výchozího roztoku (o koncentrací 2,5 mg/ml) 10012, 10030, 1OO2ookrát, což odpovídá směsi setinných homeopatických ředění C12, C30, C200 a jako placebo 300 mg tablety obsahující pomocné látky: laktózu (monohydrát laktózy) 267 mg, mikrokrystalickou celulózu - 30 mg, stearát hořečnatý - 3 mg.
Byla hodnocena účinnost zkoumaných léku při léčbě závratí (vertigo) a dalších příznaků nevolnosti při pohybu na modelu kinetózy nebo onemocnění při pohybu/ nevolnosti při pohybu, která se vyskytuje u různých vestibulárně vegetativních poruch. Závrat je typickým znakem léze vestibulárního analyzátoru různého původu, včetně dysfunkcí vestibulárního nervu a kochleárního systému, oběhových poruch ve vertebrobazilárním systému, patologie centrálního nervového systému (CNS), atd. Závrat jako projev kinetózy doprovázené jinými vestibulárně vegetativními poruchami, které zahrnují tři typy reakcí: vestibulárně-motorické (nystagmus a deviační reakce), vestibulárně-smyslové (kromě závratí, nystagmus (nebo reakce po otáčení) je defenzivní pohyb) a vegetativní (nausea, zvracení, pocení, bušení srdce, pocit tepla, kolísání tepu a krevního tlaku).
V paralelních skupinách složených z 15 somaticky zdravých jedinců - muži a ženy ve věku 15 až 60 let (průměrný věk 33,3 ± 0,75 let) s nízkým (n = 5; 33 %) nebo středním (n = 10; 67 %) stupněm odolnosti ke kinetóze byla provedena dvojitě slepá placebem kontrolovaná srovnávací studie za účelem testování účinků různých přípravků proti pohybové závrati. Skupina 1 dostávala ULD anti-S 100+anti-eNOS, skupina 2 dostávala ULD anti-S100 a skupina 3 dostávala anti-eNOS.
K simulaci stavu nevolnosti a vyhodnocení účinnosti studovaných léků byl použit nejvhodnější a uznávaných model kinetózy - test zrychlení s plynulým kumulativním účinkem podle Coriolise (CCEAC). Počáteční tolerance testu CCEAC u všech účastníků studie nebyla delší než 5 minut. Vestibulárně vegetativní poruchy vyvolané touto kinetickou zátěží (CCEAC) byly registrovány s využitím komplexu diagnostických metod, zahrnujících osobní vyšetření, kvantitativní vyhodnocení poruch vestibulárně vegetativní citlivosti (stupnice Halle), analýza variability srdečního rytmu (HRV), a sebevnímání funkční kondice (WBAM - pocitu pohody, aktivity a nálady). Jako kritéria účinnosti prováděné terapie byly hodnoceny dynamika tolerance a rozsah fáze zotavení po kinetické zátěži, jakož i změna evidence indexů sensoricko-motorických reakcí (nystagmus), indexů VSR (s využitím systému Scan Wellness Biocom, vyvinutým AWS, LLC v souladu s mezinárodním standardem Evropského sdružení kardiologů a Severoamerického elektro
........
fyziologického sdružení) a daty WBAM. Bezpečnostními kritérii byly charakter, známky a podmínky vzniku možných nežádoucích účinků v období léčby spojené s užíváním léku, vliv studovaných léků na indexy, které charakterizují funkci centrálního nervového systému (CNS) (reakce na pohybující se objekt (RMO)), doba jednoduchého motorické reakce (TSMR), dynamika fyzikálních a funkčních faktorů (tepová frekvence (HR), systolický a diastolický krevní tlak (SBP, DBP), Stangeho test, tolerance vůči cvičení (index Harvard step testu). Byla hodnocena bezpečnost po podání jedné dávky a po 7denním podávání kombinace ULD anti-S-100 a ULD anti-eNOS.
Všichni účastníci studie během 1 měsíce před zapojením se do studie nebrali žádné léky. Po prověření byli účastníci náhodně rozděleni do 4 skupin (skupina 1 ULD anti-S100+anti-eNOS, skupina 2 - ULD anti-S100, skupina 3 - ULD anti-eNOS a skupina 4 - placebo).
První den studie (1. návštěva) byly zaznamenány počáteční funkční a psychofyziologický stav účastníků, pak obdrželi 5 tablet případných ULD protilátek a následoval test CCEAC. Byla zaznamenána doba trvání testu a pomocí komplexního diagnostického vyšetření byly zjištěny vegetativně vestibulární poruchy a nežádoucí účinky ve vztahu k nevolnosti. V následujících 2. až 6. dni dostávali účastníci třikrát denně 1 tabletu předepsaného léku. Na 7. den (2. návštěva) dostali stejnou dávku jako první den (1. návštěva). Před a po CCEAC testu byla provedena komplexní diagnostická studie. Ta byla organizována takovým způsobem, že pracovník, který ji prováděl, mohl pracovat pouze s jednou osobou. Studie probíhala souběžně a byla provedena v první polovině dne s účastí zpravidla 4 osob v ten den, jedna osoba pro každý lék nebo placebo. Další tři týdny následovalo období vymývání, na jehož konci byl účastníkům z každé skupiny předepsán nový lék nebo placebo. Cyklus studie byl opakován (1. návštěva, období příjmu léku, 2. návštěva). Tak se během studie každý účastník zúčastnil ve čtyřech cyklech studie. To znamená, že každý se účastnil v každé skupině s třítýdenním vymývacím obdobím mezi každým cyklem. To umožnilo výzkumníkovi vyrovnat vliv jednotlivých zvláštností zkoumané osoby na účinek léčby. Analýza účinnosti léků byla provedena na základě údajů všech testovaných osob, které dokončily celý průběh užívání studovaného léku podle protokolu studie (n = 15).
Průkazné faktory příznaků kinetózy (závratě, nausea, nečinnost, zsinalost, pocení, atd.) po kinetické zátěži (CCEAC) po jednodenním příjmu studovaných léků, dokládají, že všichni účastníci studie dosáhli zhruba stejný stav kinetózy, pokud jde o přítomnost posuzovaných příznaků a vegetativní dysfunkce v měřítku stupnice Halle se z pohledu lékaře-výzkumníka v žádné ze skupin významně nelišily (tabulka 7, 1. návštěva). Nicméně, kinetické vlivy, které způsobují podobné příznaky kinetózy, se ve čtyřech skupinách lišily a byl závislé na léku, který užívali účastníci studie (tabulka 8, 1.návštěva). Jednodenní příjem přípravku ULD anti-SWO+anti-eNOS měl jasný účinek proti kinetóze, který se projevil nejen ve významně delším času tolerance v testu CCEAC (104,10 ± 13,14 sec proti 68,50 ± 6,57 sec ve skupině ULD anti-S100; 75,00 ±6,79 sec ve skupině ULD anti-eNOS a 61,30 ± 3,15 sec v placebové skupině), ale také v nejkratším času nystagmu (9,90 ±1,20; 13,50 ±1,51; 16,10 ± 1,68 a 13,30 ±1,12 sec) a v nejrychlejším zotavení (96,90 ± 13,54; 194,20 ± 18,45; 202,50 ± 21,72 a 241,70 ± 38,41 sec).
Zhruba podobné indexy byly registrovány při 2. návštěvě po dalším užívání léků. Pro dosažení podobných příznaků cestovní nevolnosti (tabulka 7, 2. návštěva) byla nejdelší doba kinetické zátěže použita u osob, které dostávaly přípravek ULD antiS100 + anti-eNOS (tabulka 8, 2. návštěva) po 7 dnů. Nejvýraznější účinek přípravku ULD anti-S100+anti-eNOS proti cestovní nevolnosti byl vyjádřen výrazně kratším časem nystagmu (9,50 ± 1,38 sec, p < 0,01) a délkou fáze zotavení (117,90 ± 15,65 sec, p < 0,01). Jednosložkový přípravek ULD anti-eNOS neprokázal proti cestovní nevolnosti efekt, protože výsledky testů CCEAC a následné období zotavení neukázaly žádný výrazný rozdíl proti skupině s placebem (tabulka 8, 1.a2. návštěva). Srovnávací analýza indexů testu CCEAC ve skupinách ULD anti S100+anti eNOS a ULD anti S100 po jednodenním užívání léků ukázaly, že přidání ULD anti-eNOS zvýšilo odolnost ke kinetické zátěži o 52 %, snížilo čas nystagmu o 27 % a přispělo ke snížení období zotavení po ukončení kinetické zátěže na 50 %, včetně doby trvání závratí - na 49 %. Nicméně, největší přínos složky ULD anti-eNOS dodal účinnost kombinovanému přípravku (směs ULD anti S100+antieNOS) který byl v průběhu příjmu léku vyjádřen 30 % nárůstem výsledku dosaženého ve skupině ULD anti-S100 ve faktorech tolerance kinetické zátěže a trvání nystagmu (v každém z parametrů). Navíc se při 2. návštěvě projevil růst účinku na index tolerance testu CCEAC a trvání nystagmu ve vztahu k údajům při
1. návštěvě, když se porovná kombinace ULD anti-S100+anti-eNOS s jednosložkovým přípravkem ULD anti-S100 vyjádřený větší měrou potvrzené změny těchto indexů na 30 % a 4 % (oproti 21 % a 0 % ve skupině ULD anti-S100). Při posuzování účinnosti léků proti kinetóze byla věnována zvláštní pozornost možnému dopadu léků na stabilitu autonomního nervového systému (ANS), zejména na posun rovnováhy mezi jeho sympatickou a parasympatickou částí. Pro tento účel byly při každé návštěvě analyzovány parametry VSR v klidovém stavu a při provádění funkčních zkoušek (dýchání a ortostatické testy).
Tabulka 7
Indexy stupnice Halle v závislosti na aplikovaném přípravku po provedení testu CCEAC
přípravek stupnice Halle (bodů)
1.návštěva (jednodenní užívání) (n=15; M±SE) 2.návštěva (další užívání) (n=15; M±SE)
ULD anti-S100 + anti-eNOS 12,00±0,63 12,30±0,59
ULD anti-S100 13,30±0,65 12,30±0,46
ULD anti-eNOS 13,10±0,78 12,00+0,55
placebo 13,40±0,77 13,30±0,45
Tabulka 8
Vývoj indexu v testu CCEAC v závislosti na použitém přípravku
přípravek 1. návštěva (jednodenní užívání)
odolnost v testu CCEAC, sec (n=15; M±SD) trvání nystagmu, sec (n=15; M±SD) doba zotavení, sec (n=15; M±SD)
ULD anti-S100 + anti-eNOS 104,10 ±13,14** 9,90 ±1,20* 96,90 ±13,54 ***
ULD anti-S100 68,50 ± 6,57 χ 13,50 ±1,51 194,20 ±18,45 χχχ
ULD anti-eNOS 75,00 ± 6,79 16,10 ±1,68 202,50 ±21,72 χχχ
placebo 61,30 ± 3,15 13,30 ± 1,12 241,70 ±38,41
hodnota P v testu Kruskal-Wallis1 0,0182 0,0658 0,0001
____________________________________________ 2.návštěva (další užívání)
ULD anti-S100 + anti-eNOS 134,70 ±20,24 ** 9,50 ±1,38 ** 117,90 ±15,65 **
ULD anti-S100 82,70 ±10,33 13,50 ±1,69 167,50 ± 14,72 χ
ULD anti-eNOS 74,30 ± 9,49 χ 17,30 ±2,40 xxx 209,20 ±21,62 χχ
placebo 63,70 ± 3,91 15,00 ±1,47 199,60 ±31,19
hodnota P v testu Kruskal-Wallis1 0,0341 0,0244 0,0061
Poznámky:
1 Pro stanovení významnosti rozdílu nezi skupinamií byl použit Kruskal-Wallisův test. Pokud test ukázal při vzájemném porovnání mezi skupinami významný rozdíl s p < 0,05, byl použit test Mann-Whitney.
* významný rozdíl při porovnání s placebem, p < 0,05 * * významný rozdíl při porovnání s placebem, p < 0,01 * ** významný rozdíl při porovnání s placebem, p < 0,001 x významný rozdíl při porovnání s ULD anti-S100 + anti-eNOS, p <0,05 x x významný rozdíl při porovnání s ULD anti-S100 + anti-eNOS, p <0,01 xxx významný rozdíl při porovnání s ULD anti-S100 + anti-eNOS, p <0,001
Analýza VSR v podmínkách odpočinku (v poloze vsedě) před a po testu CCEAC (tabulka 9) zjistila, že u osob užívajících studované léky se projevila tendence ke zvýšení hodnoty SDNN nanačující zvýšení variability srdeční frekvence vlivem vlivu parasympatiku na srdeční rytmus. V reakci na kinetickou zátěž se ve všech léčených skupinách zvýšila hodnota RMS-SD, která charakterizuje aktivitu parasympatické složky autonomní regulace. Ve skupinách léčených přípravky ULD anti-S100+anti-eNOS a ULD anti-S100 došlo ke zvýšení tepové frekvence, což rovněž naznačuje posun v autonomní rovnováze směrem k linii parasympatiku. Tak po provedení testu CCEAC došlo ve všech skupinách ke zvýšení vlivu parasympatiku na srdeční frekvenci.
Tabulka 9
Parametry VSR účastníků studie v klidu před a po kinetické zátěži
parametr 1.návštěva (jednodenní užívání) 2.návštěva (další užívání)
po přijetí léku po testu CCEAC po přijetí léku po testu CCEAC
skupina ULD anti-S100 + anti-eNOS (M ± SD)
SDNN, msec 57,7 ± 5,51 68,2 ± 7,42 59,4 ± 5,03 65,6 ± 4,66
RMSSD, msec 43,1 ± 6,77 51,4 ± 9,22 47,0 ± 6,21 47,6 ± 5,33
TP, msec2 979,0 ±186,06 1678,3 ± 397,11 # 1067,2 ±167,24 1381,0 ±166,30
LF, msec2 437,5 ± 709,6 709,6 ± 178,72 391,9 ± 75,61 588,5 ± 87,48
HF, msec ·2 171,5 ± 51,08 228,4 ± 76,79 206,5 ± 58,32 218,5 ± 43,96
LF/HF, c,u, 4,2 ± 0,82 4,9 ± 0,83 3,3 ± 0,83 4,2 ± 0,91
skupina ULD anti-S100 (M ± SD)
SDNN, msec 60,9 ± 4,62 70,9 ± 5,90 59,1 ± 4,80 68,8 ± 4,87
RMSSD, msec 44,3 ± 5,39 50,6 ± 6,56 42,4 ± 4,63 47,8 ± 5,57
TP, msec2 832,2 ± 124,93* 1342,8 ±217,09 841,4 ±149,93 1288,0 ± 163,52#
LF, msec·2 315,2 ± 52,38 * 550,9 ± 72,44# 313,6 ± 66,71 540,7 ± 87,57#
HF, msec2 151,4± 41,19 247,0 ± 69,53# 138,3 ± 38,42 187,1 ± 39,80
LF/HF, c.u. 3,0 ± 0,54 4,0 ± 0,72 2,8 ± 0,53 4,0 ± 0,52
skupina ULD anti-eNOS (M ± SD)
SDNN, msec 67,4 ± 7,73 78,6 ± 6,14 65,8 ± 8,68 69,0 ± 5,23
RMSSD, msec 53,0 ± 8,86 58,4 ± 7,68 59,6 ± 12,45 52,2 ± 5,30
TP, msec2 1307,8 ±324,24 1841,1 ± 359,79# 1232,3 ±292,51 1275,4 ±172,47
LF, msec·2 576,5 ±167,07 849,9 ±194,2 # 527,2 ±167,07 562,1 ± 89,38
HF, msec·2 313,3 ±139,90 285,3 ± 65,92 218,9 ± 74,78 216,3 ± 63,72
LF/HF, c.u. 3,6 ± 0,87 3,9 ± 0,82 3,7 ± 1,14 3,8 ± 0,58
skupina placebo (M ± SD)
SDNN, msec 64,6 ± 6,10 75,7 ± 6,42 61,1 ± 6,72 70,8 ± 6,79
RMSSD, msec 50,9 ± 7,74 53,1 ± 6,62 44,6 ± 6,63 44,3 ± 5,31
TP, msec2 1062,2 ±150,02 1917,8 ±318,96# 898,8 ±169,62 1418,5 ± 227,59#
LF, msec2 440,6 ± 77,30 832,4 ±181,15 334,8 ± 75,94 611,4 ± 113,64#
HF, msec2 253,9 ± 59,95 266,7 ± 61,94 166,0 ± 48,14 174,1 ± 44,96
LF/HF, c,u, 3,4 ± 0,72 5,0 ± 1,33 3,4 ± 0,93 4,8 ± 0,83
Poznámka: * významný rozdíl v porovnání s placebem, p < 0,05;
# významný rozdíl v porovnání s parametry základní linie p s 0,05.
Analýza VSR v přechodových stavech ukázala, že jednodenní užívání kompozitní 5 ULD anti-S100+anti-eNOS zvýšilo reakční čas (13,9 ± 1,14; p < 0,05) a stabilizační čas (24,2 ± 1,28; p < 0,05) v srovnání s ULD anti-S100 a s placebem. Stejné faktory překročily hodnotu v placebové skupině a po kinetické zátěži, které prokázalo pozitivní vliv kombinovaného léku na reaktivitu ANS (zvýšení tolerance ke změnám v poloze těla). Nejmenší rozdíl mezi maximální a minimální tepovou frekvence 10 vdechovém testu potvrdil lepší rovnováhu dvou částí ANS po jednodenním užívání přípravku ULD anti-S100+anti-eNOS (25,1 ±2,66 tepů/min, p < 0,05). Na konci týdenní terapie byl rovněž zaznamenán stabilizující vliv na rovnováhu ANS po testu CCEAC (s ortostatickým a dechovým testem) ve skupině užívající přípravek ULD anti-S100+anti-eNOS (tabulky 10 a 11).
Tabulka 10
Parametry VSR účastníků studie v ortostatickém testu před a po kinetické zátěži
parametr 1.návštěva (jednodenní užívání) 2,návštěva (další užívání)
po přijetí léku po testu CCEAC po přijetí léku po testu CCEAC
skupina ULD anti-S100 + anti-eNOS (M ± SD)
reakce na cvičení, c.u. 1,30 ±0,06 1,40 ±0,04 1,30 ±0,06 1,30 ±0,04
doba reakce, sec 13,9 ±1,14*x 12,7 ±1,24* 11,8 ±0,57 11,7 ±1,09
doba stabilizace, sec 24,2 ± 1,28 *x 21,9 ±1,44* 20,6 ±0,74 22,4 ±1,44*x
skupina ULD anti-S100 (M ± SD)
reakce na cvičení, c.u. 1,40 ±0,04 1,30 ±0,04 1,30 ±0,04 1,30 ±0,05
doba reakce, sec 7,60 ±1,05 10,6 ±1,55 9,7 ±1,21 10,0 ±1,73
doba stabilizace, sec 15,1 ±1,16* 18,3 ±1,43 18,0 ±1,18 18,0 ±1,80
skupina ULD anti-eNOS (M ± SD)
reakce na cvičení, c.u. 1,30 ±0,04 1,30 ±0,04 1,50 ±0,12 1,30 ±0,04
doba reakce, sec 8,20 ± 0,94 9,10± 1,12 9,2 ±0,77 8,3 ±0,70
doba stabilizace, sec 16,5 ±1,02 17,1 ±1,33 19,0 ±2,04 16,7 ±0,98
skupina placebo (M ± SD)
reakce na cvičení, c.u. 1,30 ±0,04 1,30 ±0,04 1,40 ±0,06 1,30 ±0,06
doba reakce, sec 9,5 ±1,28 8,1 ±0,90 10,4 ±1,58 8,8 ±1,09
doba stabilizace, sec 18,3 ±0,94 16,8 ± 1,09 18,0 ±1,37 16,5 ±1,11
Poznámka: * významný rozdíl v porovnání s placebem, p < 0,05);
χ významný rozdíl v porovnání ss skupino ULD anti-S100, p < 0,05.
Tabulka 11
Parametry VSR účastníků studie v dechovém testu před a po kinetické zátěži
parametr 1.návštěva (jednodenní užívání) ž.návštěva (další užívání)
po přijetí léku po testu CCEAC po přijeti léku po testu CCEAC
skupina ULD anti-S100 + anti-eNOS (M ± SD)
korelace max tep / min tep, c.u. 1,5 ± 0,05* 1,5 ± 0,06 1,5 ± 0,05 1,5 ± 0,05
rozdíl max tep - min tep, úderů/min 25,1 ± 2,66* 26,5 ± 2,77 26,5 ± 2,37 24,9 ± 2,24*
skupina ULD anti-S100 (M ± SD)
korelace max tep / min tep, c.u. 1,5 ±0,06 1,6 ±0,05 1,5 ±0,04 1,6 ±0,06
rozdíl max tep - min tep, úderů/min 27,7 + 2,68 27,2 ± 2,40 25,7 ± 2,24 26,9 ± 2,67
skupina ULD anti-eNOS (M ± SD)
korelace max tep / min tep, c.u. 1,5 ±0,05 1,5 ±0,04 1,5 ±0,06 1,6 ±0,05
rozdíl max tep - min tep, úderů/min 26,7 ± 2,44 26,2 ± 2,04 27,7 ± 2,47 27,3 ±2,12
skupina placebo (M ± SD)
korelace max tep / min tep, c.u. 1,6 ±0,07 1,6 ±0,06 1,5 ±0,05 1,6 ±0,05
rozdíl max tep - min tep, úderů/min 31,2 ±3,06 28,2 ± 2,50 27,7 ± 2,37 29,2 ± 2,44
Poznámka: * - významný rozdíl v porovnání se skupinou placebo, p < 0,05
Výsledky hodnocení sebeuvědomění funkčního stavu (pohoda, aktivita, nálada), které probíhalo na účastníků studie po simulaci kinetózy (CCEAC testy) na začátku a na konci léčby ukázaly, že účastníci všech skupin měli pro každý z parametrů „průměrné“ body (tabulka 12). Tolerance CCEAC na pozadí příjmu léků byla tedy 5 uspokojivá. Nejvyšší růstu ve srovnání s údaji o placebo skupiny na konce 7 denního užívání (více než 10%) bylo pozorován ve skupině s přípravkem ULD anti-S1 OO+anti-eNOS.
Tabulka 12
Vývoj ukazatelů sebeuvědomění funkčního stavu (pohoda - aktivita - nálada) účastníků studie
parametr 1.návštěva (jednodenní užíváni) 2.návštěva (další užívání)
skupina ULD anti-S100 + anti-eNOS (M ± SE)
pohoda 4,3 ± 0,26 4,6 ± 0,27
aktivita 4,2 ±0,20 4,2 ±0,22
nálada 5,0 ±0,16 5,2 ±0,13
skupina ULD anti-S100 (M ± SE)
pohoda 3,7 ±0,21 4,3 ±0,22
aktivita 3,6 ±0,17 4,0 ±0,19
nálada 4,5 ±0,16 4,9 ±0,19
skupina ULD anti-eNOS (M ± SE)
pohoda 3,9 ±0,25 4,1 ±0,26
aktivita 3,8 ±0,25 3,9 ± 0,23
nálada 4,4 ±0,19 4,6 ±0,19
skupina placebo (M ± SE)
pohoda 4,0 ±0,24 4,0 ± 0,24
aktivita 3,8 ±0,20 3,7 ±0,26
nálada 4,3 ±0,20 4,7 ±0,24
Bezpečnostní analýza zahrnovala data všech oeob, které se zúčastnily studie. Během sledovaného období byla zaznamenána dobrá snášenlivost studovaných 15 přípravků. Neobjevily se žádné nežádoucí účinky spojené s užíváním léků. Všichni účastníci studovaných skupin dokončili ošetření za podmínek stanovených studijním protokolem, řádná osoba nevypadla předčasně.
Podle výsledků fyzického vyšetření, včetně ukazatelů srdeční frekvence, systolického i diastolického krevní tlaku a v souladu s Harvard steptestem nebylo zaznamenáno během studie nic mimořádného (tabulka 13). Všechny zjištěné změny byly v normální rozmezí. V tomto případě subjektivně všichni účastníci hlásili 5 uspokojivou pohodu.
Tabulka 13
Dynamika fyzikálních parametrů a tolerance fyzické zátěže účastníků studie před a po kinetické zátěži
parametr 1. návštěva (jednodenní užívání) 2. návštěva (další užívání)
po přijetí léku po testu CCEAC po přijetí léku po testu CCEAC
skupina ULD anti-S100 + anti-eNOS (M ± SE)
tep (úderů/min) 74,6 ± 3,36 68,4 ± 3,67 74,1 ±3,10 67,7 ± 2,62
SKT (mm Hg) 123,4 ±2,83 125,9 ±4,08 121,8 ±2,65 128,3 ±4,25
DKT (mm Hg) 74,0 ± 3,09 79,3 ± 2,62 76,2 ± 2,43 80,3 ± 3,30
step-test index - 53,6 ± 2,60 - 52,3 ± 2,09
skupina ULD anti-S100 (M ± SE)
tep (úderů/min) 73,5 ± 2,57 69,7 ± 2,78 72,1 ± 2,84 67,7 ± 2,39
SKT (mm Hg) 127,5 ±2,55 133,5 ±4,77 127,1 ±2,55 129,9 ±5,06
DKT (mm Hg) 75,5 ± 2,65 82,6 ±3,31 74,9 ± 2,41 82,3 ±3,19
step-test index - 50,6 ±1,71 - 53,0 ±1,63
skupina ULD anti-eNOS (M ± SE)
tep (úderů/min) 76,5 ± 2,59 67,3 ±1,98 77,3 ±2,02 70,1 ± 3,23
SKT (mm Hg) 127,3 ±3,14 131,5 ± 5,16 123,5 ±3,06 129,3 ±4,13
DKT (mm Hg) 75,2±2,24 80,3 ± 2,66 73,9 ± 2,83 81,0 ±3,22
step-test index - 51,8± 2,12 - 51,2 ±2,21
skupina placebo (M±SE)
tep (úderů/min) 74,5 ± 2,78 68,9 ± 3,46 73,9 ± 3,23 72,3 ± 3,58
SKT (mm Hg) 125,3 ±3,30 133,3 ±4,73 124,3 ±2,83 126,9 ±3,95
DKT (mm Hg) 76,2 ±2,15 81,7 ±2,83 75,4±1,86 79,7 ± 3,03
step-test index - 50,0 ± 2,03 - 50,1 ±1,99
Vedle hemodynamických parametrů byly pro hodnocení bezpečnosti studovaných léků a jejich možný negativní dopad na centrální nervové funkce zkoumány u účastníků tyto fyziologické parametry: (RMO (reakce na pohybující se objekt), SMRT (reakční doba jednoduché motorické reakce), RA (rozsah pozornosti), soustředění (AS), a faktor stability pozornosti (ASF)). Kromě toho byl proveden Stangeho test k posouzení tolerance k hypoxii.
Podle získaných výsledků (tabulka 9) žádný den ani průběh užívání léku neměl významný vliv na stanovené parametry. Indexy smyslové motorické koordinace (SMRT, RMO) před a po testu CCEAC se při obou návštěvách nelišily od výsledků placebové skupiny. Studijní údaje o tak složitých funkcích, jako je objem a stabilita pozornosti ukázaly, že studované léky před i po testu CCEAC nezměnily míru koncentrace a posun pozornosti nebyl odlišný od skupiny placeba.
Analýza standardních zátěžových testů se zadržením dechu ukázala sklon ke zvýšení tolerance hypoxie u účastníků (tabulka 14). Při zadržení dechu doba trvání Stangeho testu rostla po přijetí u všech studovaných léků. Nicméně pouze užívání složeného přípravku ULD anti-S100+anti-eNOS se projevillo výrazně delší dobou zadržení dechu po kinetické zátěži (68,1 ± 18,8 při zahájení a 91,7 ± 27,4 sekund po testu CCEAC; p < 0,05). Pokud byl použit Genchův test (Stangeho test) (zadržení dechu při výdechu, P > 0,05) byla rovněž zaznamenána zvýšená tolerance hypoxie.
Tabulka 14
Vývoj parametrů psychofyziologického stavu účastníků studie před a po kinetické zátěži
parametr 1.návštěva (jednodenní užívání) 2.návštěva (další užíváni)
po přijetí léku po testu CCEAC po přijetí léku po testu CCEAC
skupina ULD anti-vS100+anti-eNOS (M ± SE)
SMRT 257,5 ± 8,67 268,9 ±10,18 269,6 ± 9,75 279,9 ± 12,24
RMO, c,u, 50,1 ± 3,92 49,5 ± 4,50 47,3 ± 4,86 47,0 ± 3,54
RMO, % koncové hodnoty 3,0 ±0,95 4,5 ± 1,15 5,3 ± 1,58 4,0± 1,11
AS, sec 5,2 ± 0,34 5,2 ± 0,35 5,2 ± 0,41 5,1 ± 0,40
rozsah pozornosti, sec 41,7 ±2,36 39,9 ± 2,38 38,1 ± 2,17 37,5 ± 2,04
ASF 17,4 ±1,66 17,2 ± 1,51 18,0 ± 1,71 18,8 ± 1,72
Stangeho test 68,1 ±4,85 91,7 ± 7,07* 71,8 ± 6,02 85,5 ± 9,36
Genchův test 47,1 ±4,03 50,1 ± 3,94 46,7 ± 3,28 48,1 ± 4,52
skupina ULD anti-S100 (M ± SE)
SMRT 258,9 ±9,95 282,4 ±13,56 268,4 ±11,37 279,1 ± 9,20
RMO, c,u, 58,1 ±6,40 57,5 ± 6,34 55,1 ± 5,06 53,8 ± 5,02
RMO, % koncové hodnoty 3,7 ±1,50 2,0 ± 0,82 2,3 ± 0,83 5,0 ± 1,69
AS, sec, 6,0 ± 0,40 6,4 ± 0,52 6,2 ± 0,42 6,0 ± 0,41
rozsah pozornosti, sec 42,6 ±2,68 42,1 ± 2,27 42,7 ± 2,30 41,9 ± 2,52
ASF 14,5 ±1,16 14,9 ± 1,26 15,3± 1,13 15,4 ± 1,18
Stangeho test 59,0 ± 4,09 72,6 ± 6,19 64,5 ± 4,93 75,9 ± 5,67
Genchův test 47,1 ±4,48 49,4 ± 4,69 48,3 ± 4,30 48,8 ± 4,14
skupina ULD anti-eNOS (M ± SE)
SMRT 257,7 ± 8,49 279,4 ± 14,23 266,7 ±13,19 275,5 ±11,44
RMO, c,u, 48,3 ± 3,67 51,9 ± 4,39 52,5 ± 4,79 49,6 ± 4,22
RMO, % koncové hodnoty 2,3 ±0,83 2,0 ± 0,82 3,3 ± 1,26 5,7 ± 1,68
AS, sec, 5,9 ± 0,25 6,0 ± 0,34 5,5 ± 0,24 5,9 ± 0,33
rozsah pozornosti, sec 41,9 ±2,10 43,8 ± 2,39 41,3 ± 2,00 42,5 ± 2,22
ASF 13,7 ±1,34 14,8 ± 1,31 15,6 ± 1,24 14,1 ± 1,40
Stangeho test 62,5 ±5,49 69,5 ± 5,09 56,7 ± 3,34 73,1 ± 7,98
Genchův test 43,1 ±3,51 45,7 ± 3,15 43,4 ± 3,77 45,8 ± 4,03
skupina placebo (M ± SE)
SMRT 267,6 ± 7,64 290,1 ±11,33 281,1 ± 9,78 263,3 ± 6,85
RMO, c,u, 60,7 ±8,31 54,1 ± 5,57 51,1 ± 3,69 52,6 ± 5,38
RMO, % koncové hodnoty 3,7 ±1,03 3,7 ± 1,24 3,3 ± 0,93 4,3 ± 1,61
AS, sec, 6,1 ±0,71 5,7 ± 0,36 5,5 ± 0,32 5,9 ± 0,71
rozsah pozornosti, sec 41,9 ±2,09 42,4 ± 2,81 41,3 ± 2,18 39,6 ± 2,26
ASF 14,5 ±1,64 14,5 ± 1,79 15,3 ± 1,55 15,9 ± 1,58
Stangeho test 63,7 ±4,71 67,9 ± 6,90 64,8 ± 5,94 83,0 ±12,24
Genchův test 44,7 ± 2,52 47,1 ± 3,30 43,7 ± 2,71 47,8 ± 3,78
Studie pomocí experimentální nevolnosti tak prokázala účinnost kombinovaného přípravku ULD anti-SIOO+anti-eNOS a jednosložkového přípravku ULD-S100. Studované léky zvyšují stabilitu osob ke kinetickým vlivům po simulaci klinických a fyziologických účinků kinetózy, které přispívají ke zmírnění klinického procesu kinetózy a rychlejšímu zotavení osob po ukončení léčby. Navíc bylo prokázáno, že účinek kombinovaného přípravku (směs ULD anti-S100+anti-eNOS) převyšuje účinnost jednotlivých složek. Účinnost kombinovaného přípravku ULD anti-S100+anti-eNOS na kontrolu nad vestibulárně-autonomními a senzorickými reakcemi těla při experimentální kinetózy se zvyšuje při dalším užívání. Je třeba poznamenat, že ULD anti-eNOS ve formě monopreparátu nemá ochranný účinek proti nevolnosti, ale v kombinaci s ULD anti-S100 výrazně zvyšuje jeho účinek proti kinetóze, což se projevuje jako při jednodenním tak i v krátkodobém užívání léku. Nejlepší schopnost nastavit přechodové procesy, které ovlivňují reaktivitu parasympatické a sympatické částí ANS, jakož i adaptivní schopnost ANS ve stavu nevolnosti (zvýšení tolerance k náhlé změně v poloze těla) byla pozorována u přípravku ULD anti-S100+anti-eNOS, který je důležitou složkou léku proti kinetóze. Jak kombinovaný přípravek ULD anti-S100+anti-eNOS, tak jednosložkový přípravek ULD anti-S100 při jejich použití jako preparáty proti kinetóze včetně umožnění cestovních funkcí jsou bezpečné a nemají nepříznivý dopad na fyzické a psychofyziologické parametry.
Kombinovaný přípravek ULD anti-S100+anti-eNOS a ULD anti-S100 lze doporučit k profylaxi a zmírnění dopadů pohybu na cestovní choroby (včetně námořních, vzdušných a auto nevolností) u osob s nízkým a středním stupněm stability. Kombinovaný přípravek je vysoce bezpečný a nemá žádné nežádoucí účinky na profesní činnosti.
Příklad 9.
Pro studium vlastností kombinovaného farmaceutického přípravku podle vynálezu k léčbě psychoorganického syndromu byly použity tablety o hmotnosti 300 mg.
si .:.. ..· ·..· :
Tablety byly napuštěny farmaceutickou směsí, obsahující vodně-alkoholové roztoky (6 mg na 1 tabletu) aktivovaných potencovaných forem polyklonálních afinitně čištěných protilátek proti specifickému mozkovému králičímu proteinu S-100 (anti-S100) a proti endotelové NO-syntáze (anti-eNOS) v ultranízkých dávkách 5 (ULD) získaných superředěním výchozího roztoku (o koncentrací 2,5 mg/ml) 10012, 10030, 1OO2ookrát, což odpovídá směsi setinných homeopatických ředění C12, C30, C200 („ULD ant-S100+anti-eNOS“).
Kontrolní skupina pacientů dostávala 300 mg tablety napuštěné farmaceutickým přípravkem, obsahujícím vodně-alkoholové roztoky (6 mg na 1 tabletu) aktivovaných 10 potencovaných forem polyklonálních afinitně čištěných protilátek proti specifickému mozkovému králičímu proteinu S-100 (anti-S100) v ultranízkých dávkách (ULD) získaných superředěním výchozího roztoku (o koncentrací 2,5 mg/ml) 10012, 10030, 100 200 krát.
Studie zahrnovala pacienty s diagnózou psychoorganický syndrom 15 posttraumatického původu. Psychoorganický syndrom je charakterizován následující trojicí příznaků: zeslabení paměti, pokles inteligence, nedostatek emoční kontroly (Walther-Buel's triad).
Studie byla otevřená randomizovaná srovnávací paralelní skupinová klinická studie účinnosti a bezpečnosti terapie u pacientů s psychoorganickým syndromem 20 posttraumatického původu (první skupina pacientů užívala přípravek ULD anti-S100, druhá skupina pacientů přípravek ULD anti-S 10O+anti-eNOS).
Do studie bylo zahrnuto 6 pacientů ve věku od 35 do 90 let (průměrný věk 70,83 ± 21,95) s diagnózou psychoorganický syndrom.
Byla zkontrolována vhodnost pacientů podle měřítek pro začlenění nebo vyloučení. 25 Kritéria pro zařazení:
1. Pacienti s diagnózou posttraumatické encefalopatie s psychoorganickým syndromem nebo s encefalopatií komplexní etiologie (cévní, poúrazové) s psychoorganickým syndromem potvrzeným anamnézou, neurologickým vyšetřením a lékařskými záznamy.
2. Pacient bez změny kombinované terapie v rámci alespoň jednoho měsíce před první návštěvou.
3. Není potřeba změnit současnou léčbu pro celou dobu pozorování.
4. Není třeba předepisovat léky ovlivňující imunitu pro příštích 6 měsíců.
5. Pacienti s dostatečnou úrovní vzdělání, aby odpovídajícím způsobem komunikovali s výzkumníky a studijními koordinátory.
6. Pacienti, považované výzkumníky za spolehlivé a připravené plnit všechny naplánované klinické návštěvy, testy a postupy stanovené v protokolu.
7. Pacienti s platnou domácí adresou.
Kritéria pro vyloučení:
1. Jakákoliv operace mozku v historii léčby.
2. Akutní infarkt myokardu.
3. Hemoragická mrtvice.
4. Diagnóza psychózy, bipolární porucha nebo schizoafektivní porucha v lékařské historii.
5. Velká depresivní porucha podle kritérií modulu deprese mezinárodního neuropsychiatrického mini-interview (MINI).
6. Faktory/podmínky lékařského nebo jiného charakteru, které podle názoru výzkumníka mohou ovlivnit výsledek testu studovaných pacientů.
7. Odpovědi „2A“, „2B“, „2C“ nebo „3“ v části „I“ Beckova dotazníku deprese (aktivní sebevražedné myšlenky s určitým úmyslem jednat, bez konkrétního plánu, nebo aktivní sklony s konkrétním plánem a záměrem).
8. Autoimunitní onemocnění v historii léčby.
9. Akutní poškození jater nebo těžká cirhóza (třída C podle Child-Pugh).
10. Nekorigovaná porucha funkce štítné žlázy.
11. Dekompenzovaná arteriální hypertenze v anamnéze.
12. Vážná nebo dekompenzovaná kardiovaskulární onemocnění, onemocnění jater, onemocnění ledvin, metabolické, respirační nebo hematologické onemocnění, příznaky periferního cévního onemocnění nebo jiný zdravotní či psychiatrický stavy, který podle názoru výzkumníka, může ovlivnit pacientovu .:.. ..· ·..· :
účast ve studii, nebo by mohl vést k dlouhodobé hospitalizace nebo rehospitalizaci v průběhu studie.
13. Nemoci a podmínky, které podle názoru výzkumníka mohou bránit pacientovi v účasti ve studii.
14. Příjem léku obsahujícího ULD anti-eNOS nebo léku obsahujícího ULD antiS100 před zařazením do studie.
15. Příjem antidepresiv z jakékoliv skupiny, včetně rostlin a homeopatických přípravků.
16. Příjem anxiolytika z jakékoliv skupiny, včetně rostlin a homeopatických přípravků.
17. Příjem imunomodulátorů včetně rostlin a homeopatických přípravků.
18. Léčba systémovými steroidy do 1 měsíce před návštěvou 0.
19. Účast ve studii léku obsahujícího ULD anti-eNOS nebo léku obsahujícího ULD anti-S100, pokud pacienti obdrželi alespoň jednu dávku přípravku
20. Účast v jiných klinických studiích během 1 měsíce předtím, než má dojít k zařazení do této studie.
21. Těhotenství, kojení, nemožnost používat adekvátní antikoncepci během sledovaného období a do 1 měsíce po posledním příjmu studovaného léku.
22. Přítomnost alergie/intolerance jakékoli součásti léků, včetně laktózové intolerance.
23. Pacienti užívající narkotika a neuroleptika, závislí na alkoholu, psychiatricky nemocní.
24. Pacienti ze zaměstnanců centra, kteří jsou v přímém vztahu k prováděné studii a/nebo jsou rodinnými příslušníky těch zaměstnanců výzkumného centra, kteří přímo souvisejí s probíhající studií. „Rodinnými příslušníky“ jsou manžel (manželka), rodiče, děti, bratři (sestry).
25. Účast ve studii nebo předpokládaný příjem náhrady nebo účast na soudním procesu ve věci názoru výzkumného pracovníka.
Po nalezení shody v kriteriích začlenění a vyloučení pacienta byli pacienti náhodně rozděleni do dvou skupin: skupiny pacientů užívajících ULD anti-S100 ··«*· · · · · » • W * « » » * φ • · · · · · «····« « • · · · · e
...........
(3 pacienti, ženy - 100 %, muži - 0 %, průměrný věk 59,33 ± 16,25 let) a skupiny pacientů užívajících ULD anti-S100+anti-eNOS (3 pacienti, ženy-66,66% muži 33,33 %, průměrný věk 70,33 ± 30,66 let).
Během této studie bylo provedeno pět návštěv. Fáze léčby trvala od 1. až do 4. návštěvy v průměru 84 ± 5 dnů. 4. návštěva (den 84 ± 5) byla prvým koncovým bodem ve studii, následovaným dalším pozorováním. Následná fáze pokračovala od čtvrté do páté návštěvy (v průměru den 168 ± 5).
V bezpečnostní analýze byla zahrnuta data všech pacientů účastnících se studie (n = 6) . V průběhu studie byla zaznamenána dobrá snášenlivost léku. Žádné nežádoucí příhody nebyly registrovány. Všichni pacienti studovaných skupin dokončili léčbu dle protokolu; bez předčasných výpadků.
Byl hodnocen účinek přípravku ULD anti-S100+anti-eNOS na hlavní klinické známky a příznaky psychoorganického syndromu (neuropsychiatrický seznam NPI v části Intenzita), intenzitu související úzkosti osoby ošetřující pacienta (neuropsychiatrický seznam NPI v části Úzkost) , jakož i na pacientovy kognitivní funkce (Mini Mental State Examination, MMSE). V hlavních příznacích psychoorganického syndromu bylo nalezeno zlepšení, jako je statisticky významné snížení v části Intenzita neuropsychiatrického seznamu NPI (z 91,0 ±15,13 na 69,0 ± 6,24, p < 0,05), snížení skóre v části Úzkost neuropsychiatrického seznamu NPI (ze 44,33 ± 17,78 na 36,33 ± 3,21, p < 0,05) při 4. návštěvě (tabulka 15).
Ve skupině pacientů léčených samotným ULD anti-S100 nebylo zaznamenáno žádné klinické zlepšení.
Rozdíl mezi skupinami pacientů v celkovém skóre části Intenzita neuropsychiatrického seznamu NPI byl na konci léčby byl statisticky významný při p < 0,05.
Tabulka 15
NPI (intenzita) NPI (úzkost) ADS-ADL MMSE
ULD anti-S1 OO+anti-eNOS před léčbou 91,0 ±15,13 44,33 ±17,78 42,66 ± 4,93 22,33 ± 3,21
ULD anti-S1 OO+anti-eNOS po léčbě 69,0 ± 6,244 *# 36,33 ± 3,21* 52,0 ± 5,57 22,66 ± 2,08
ULD anti-S100 před léčbou 114,0 ±25,53 45,66 ±14,47 33,0 ±13,89 22,33 ±4,16
ULD anti-S100 po léčbě 99,66 ±18,0 49,0 ±17,05 31,66 ±10,69 23,0 ±4,36
- p od základní linie < 0,05; # - p od kontroly < 0,05
V provedené klinické studii tak byl zaznamenán pozitivní vliv kombinovaného 5 farmaceutického přípravku ULD anti-S100+anti-eNOS na hlavní klinické známky a příznaky psychoorganického syndromu a náchylnosti k ovlivnění kognitivních funkcí psychoorganickým syndromem. Kromě toho byla potvrzena dobrá snášenlivost léku. Nebyly zaznamenány žádné nežádoucí účinky v souvislosti s léky.
Příklad 10.
Pro studium vlastností kombinovaného farmaceutického přípravku podle vynálezu při léčbě Alzheimerovy nemoci byly použity tablety o hmotnosti 300 mg. Tablety byly napuštěny farmaceutickým směsným přípravkem, obsahujícím vodně-alkoholové roztoky (6 mg na 1 tabletu) aktivovaných potencovaných forem polyklonálních afinitně čištěných protilátek proti specifickému mozkovému králičímu proteinu S-100 15 (anti-S100) a proti endotelové NO-syntáze (anti-eNOS) v ultranízkých dávkách (ULD) získaných superředěním výchozího roztoku (o koncentrací 2,5 mg/ml) 10012, 10030, 100200krát, což odpovídá směsi setinných homeopatických ředění C12, C30, C200 (poměr 1 : 1) („ULD anti-S100+anti-eNOS“).
Kontrolní skupina pacientů dostávala 300 mg tablety napuštěné farmaceutickým 20 přípravkem, obsahujícím vodně-alkoholový roztok (3 mg na 1 tabletu) aktivovaných potencovaných forem polyklonální afinitně čištěných protilátek proti specifickému mozkovému králičímu S-100 proteinu (anti-S100) v ultranízké dávce (ULD) získané superředěním výchozího roztoku (o koncentrací 2,5 mg/ml) 10012, 10030, 1002°°krát, což odpovídá směsi setinných homeopatických ředění C12, C30, C200.
Studie zahrnovala pacienty s diagnózou Alzheimerovy choroby. Alzheimerova choroba je charakterizována demencí (získaná demence, stabilní zhoršení .:.. ..· ·..· :
kognitivních činností s určitou ztrátou dříve získaných znalostí a praktických dovedností, obtíže nebo nemožnost získat nové poznatky).
Studie byla otevřený randomizovaný srovnávací klinické pokus účinnosti a bezpečnosti léčby ve dvou paralelních skupinách (přípravky ULD anti-S100 a ULD anti-S100+anti-eNOS) v léčbě pacientů s mírnou až středně závažnou Alzheimerovou nemocí.
Do studie bylo zahrnuto 6 pacientů ve věku 55 - 64 let (průměrný věk 59,0 ± 3,58) s diagnózou mírného až středního stadia Alzheimerovy choroby.
Byla zkontrolována vhodnost pacientů podle měřítek pro začlenění nebo vyloučení. Kritéria pro zařazení jsou následující:
1. Pacienti s mírnou až středně závažnou Alzheimerovou nemocí, potvrzenou anamnézou, neurologickým vyšetřením a lékařskými záznamy.
2. Pacient bez změny kombinované terapie v rámci alespoň jednoho měsíce před první návštěvou.
3. Není potřeba změnit současnou léčbu pro celou dobu pozorování.
4. Není třeba předepisovat léky ovlivňující imunitu pro příštích 6 měsíců.
5. Pacienti s dostatečnou úrovní vzdělání, aby odpovídajícím způsobem komunikovali s výzkumníky a studijními koordinátory.
6. Pacienti, považované výzkumníky za spolehlivé a připravené plnit všechny naplánované klinické návštěvy, testy a postupy stanovené v protokolu.
7. Pacienti s platnou domácí adresou.
Kritéria pro vyloučení jsou následující:
1. Jakákoliv operace mozku v historii léčby.
2. Akutní infarkt myokardu.
3. Hemoragická mrtvice.
4. Diagnóza psychózy, bipolární porucha nebo schizoafektivní porucha v lékařské historii.
5. Velká depresivní porucha podle kritérií modulu deprese mezinárodního neuropsychiatrickéhp mini-interview (MINI).
* β * » * • · · *·*·· · • · · 4
6. Faktory/podmínky lékařského nebo jiného charakteru, které podle názoru výzkumíka mohou ovlivnit výsledek testu studovaných pacientů.
7. Odpovědi „2A“, „2B“, „2C“ nebo „3“ v části „I“ Beckova dotazníku deprese (aktivní sebevražedné myšlenky s určitým úmyslem jednat, bez konkrétního plánu, nebo aktivní sklony s konkrétním plánem a záměrem).
8. Autoimunitní onemocnění v historii léčby.
9. Akutní poškození jater nebo těžká cirhóza (třída C podle Child-Pugh).
10. Nekorigovaná porucha funkce štítné žlázy.
11. Dekompenzovaná arteriální hypertenze v anamnéze.
12. Vážná nebo dekompenzovaná kardiovaskulární onemocnění, onemocnění jater, onemocnění ledvin, metabolické, respirační nebo hematologické onemocnění, příznaky periferního cévního onemocnění nebo jiný zdravotní či psychiatrický stavy, který podle názoru výzkumníka, může ovlivnit pacientovu účast ve studii, nebo by mohl vést k dlouhodobé hospitalizace nebo rehospitalizaci v průběhu studie.
13. Nemoci a podmínky, které podle názoru výzkumníka mohou bránit pacientovi v účasti ve studii.
14. Příjem léku obsahujícího ULD anti-eNOS nebo léku obsahujícího ULD antiS100 před zařazením do studie.
15. Příjem antidepresiv z jakékoliv skupiny, včetně rostlin a homeopatických přípravků.
16. Příjem anxiolytika z jakékoliv skupiny, včetně rostlin a homeopatických přípravků.
17. Příjem imunomodulátorů včetně rostlin a homeopatických přípravků.
18. Léčba systémovými steroidy do 1 měsíce před návštěvou 0.
19. Účast ve studii léku obsahujícího ULD anti-eNOS nebo léku obsahujícího ULD anti-S100, pokud pacienti obdrželi alespoň jednu dávku přípravku
20. Účast v jiných klinických studiích během 1 měsíce předtím, než má dojít k zařazenído této studie.
21. Těhotenství, kojení, nemožnost používat adekvátní antikoncepci během sledovaného období a do 1 měsíce po posledním příjmu studovaného léku.
22. Přítomnost alergie/intolerance jakékoli součásti léků, včetně laktózové intolerance.
23. Pacienti užívající narkotika a neuroleptika, závislí na alkoholu, psychiatricky nemocní.
24. Pacienti ze zaměstnanců centra, kteří jsou v přímém vztahu k prováděné studii a/nebo jsou rodinnými příslušníky těch zaměstnanců výzkumného centra, kteří přímo souvisejí s probíhající studií. „Rodinnými příslušníky“ jsou manžel (manželka), rodiče, děti, bratři (sestry).
25. Účast ve studii nebo předpokládaný příjem náhrady nebo o účasti na soudním procesu ve věci názoru výzkumného pracovníka.
Po nalezení shody v kriteriích začlenění a vyloučení pacienta byli pacienti náhodně rozděleni do dvou skupin: skupiny pacientů užívajících ULD anti-S100 (3 pacienti, ženy - 100 %, muži - 0 %, průměrný věk 59,0 ± 3,6 roků) a skupiny pacientů užívajících ULD anti-S100+anti-eNOS (3 pacienti, ženy-66,66% muži 33,33 %, průměrný věk 59,0 ± 4,36 roků).
Během této studie bylo provedeno pět návštěv. Fáze léčby trvala od 1. až do 4. návštěvy v průměru 84 ± 5 dnů. 4. návštěva (den 84 ± 5) byla prvým koncovým bodem ve studii, následovaným dalším pozorováním. Následná fáze pokračovala od čtvrté do páté návštěvy (v průměru den 168 ± 5).
V bezpečnostní analýze byla zahrnuta data všech pacientů účastnících se studie (n = 6). V průběhu studie byla zaznamenána dobrá snášenlivost léku. Žádné nežádoucí příhody nebyly registrovány. Všichni pacienti studovaných skupin dokončili léčbu dle protokolu; bez předčasných výpadků.
Byly hodnoceny účinek přípravku ULD anti-S100+anti-eNOS na hlavní známky a příznaky Alzheimerovy choroby (neuropsychiatrický seznam NPI v části Intenzita), intenzita související úzkost osoby ošetřující pacienta (neuropsychiatrický seznam NPI v části Úzkost), jakož i pacientovy kognitivní funkce (Mini Mental State Examination, MMSE). Bylo nalezeno zlepšení hlavních příznaků Alzheimerovy choroby, jako je statisticky významné snížení v části Intenzita neuropsychiatrického seznamu NPI (z 24,33 ± 4,73 na 12,0 ± 3,46, p < 0,05) při 4. návštěvě (tabulka 16).
Byla rovněž zjištěna tendence ke snížení úzkosti osoby ošetřující pacienta, stejně jako snížení aktivity pacientova každodenního života na konci léčby (avšak bez statisticky významného rozdílu, pravděpodobně vzhledem k malému počtu pacientů ve studii).
Kromě toho byla nalezena tendence ke zlepšení kognitivních funkcí, projevující se zvýšením skóre MMSE z 23,66 ± 3,21 na 26,66 ± 1,53 bodů, nicméně rozdíl rovněž nedosáhl statisticky významné hodnoty na konci léčby, což může též souviset s malou velikostí vzorku.
Stejné koncové body ve skupině pacientů užívajících ULD anti-S100, nevykazovaly tendenci ke zlepšení, s výjimkou statisticky nevýznamného zlepšení MMSE skóre z 22,66 ± 0,58 na 23,33 ± 0,58 bodů.
Přitom rozdíl mezi skupinami pacientů v celkovém MMSE skóre na konci léčby byl statisticky významný při p < 0,05.
Tabulka 16.
NPI (intenzita) NPI (úzkost) ADCS-ADL MMSE
ULD anti-S1 OO+anti-eNOS před léčbou 24,33 ± 4,73 9,66 ±1,53 71,0 ±6,56 23,66 ± 3,21
ULD anti-S1 OO+anti-eNOS po léčbě 12,0 ±3,46 * 5,0 ±3,61 74,33 ± 2,51 26,66 ±1,53#
ULD anti-S100 před léčbou 35,66 ± 5,50 22,33 ± 5,50 61,66 ±5,13 22,66 ± 0,58
ULD anti-S100 po léčbě 38,33 ± 8,5 23,0 ±5,0 61,33 ±5,86 23,33 ± 0,58
* - p od základní linie < 0,05; # - p od kontroly < 0,05
V provedené klinické studii tak byl zaznamenán pozitivní vliv kombinovaného farmaceutického přípravku ULD anti-S100+anti-eNOS na hlavní klinické známky a příznaky Alzheimerovy choroby a náchylnosti k ovlivnění kognitivních funkcí Alzheimerovou chorobou. Kromě toho byla potvrzena dobrá snášenlivost léku. Nebyly zaznamenány žádné nežádoucí účinky v souvislosti s léky.
• · Μ · ··« · · • ··»·» *··**· » 60 .:.. : .:.
Příklad 11.
Skupina 1 - aktivní léková skupina dostávala 300 mg tablety napuštěné vodněalkoholovými roztoky (6 mg v 1 tabletě) aktivované potencované formy polyklonální králičí protilátky proti specifickému mozkovému proteinu S-100 (anti-S-100) a proti endotelové NO-syntáze (anti-eNOS) v ultranízké dávce (ULD anti-S-100 +ULD anti-eNOS), čištěné antigenem, získaným superředěním počátečního roztoku (koncentrace 2,5 mg/ml) 10012, 10030, 1002°°krát, což odpovídá směsi setinných homeopatických ředění C12, C30, C200;
Skupina 2 - dostávala 300 mg tablety napuštěné vodně-alkoholovým roztokem (3 mg v 1 tabletě) aktivované potencované formy polyklonální králičí protilátky proti specifickému mozkovému proteinu S-100 čištěné antigenem v ultranízké dávce (ULD anti-S100), získané superředěním počátečního roztoku 10012, 10030, 1005°krát, což odpovídá směsi setinných homeopatických ředění C12, C30, C50;
Skupina 3 - kontrolní skupina (placebo) dostávala 300 mg tablety s obsahem pomocných látek (monohydrát laktózy - 267 mg, mikrokrystalická celulóza - 30 mg, stearát hořečnatý, - 3 mg).
Ve srovnávací dvojitě slepé, placebem kontrolované studii u 146 dětí od 6 do 12 roků (průměrný věk 9,3 ± 0,24 roků), které byly náhodně rozděleny do tří skupin v závislosti na předepsané terapii byla sledována účinnost aktivního léku ULD anti-S100+anti-eNOS v léčbě pacientů se syndromem deficitu pozornosti a hyperaktivní poruchou (ADHD). Během 12 týdnů pacienti skupiny č. 1 (n = 46) obdrželi přípravek ULD anti-S100+anti-eNOS, 2 tablety dvakrát denně; členové srovnávací 2. skupiny (n = 50) obdrželi ULD anti-S100, 2 tablety dvakrát denně, členové kontrolní 3. skupiny (n = 50) obdrželi 2 tablety dvakrát denně. Všichni pacienti sledovaní v této studii měli klinicky zaznamenanou přítomnost ADHD, která byla potvrzena vysokým počtem bodů v měřítcích posuzování příznaků ADHD (ADHDRS-IV-Home version): 33,8 ± 0,92 ve skupině 1, 32,5 ± 1,14 ve skupině 2 a 33,6 ± 0,91 ve skupině 3. Většina dětí se vyznačovala mírným stupněm závažnosti ADHD podle dotazníku CGI-ADHD-závažnosti. Celkové skóre na této stupnici bylo 4,0 ±0,02 bodů ve skupině 1, 4,0 ±0,03 bodů ve skupině 2, a 4,0 ±0,00 bodů ve skupině 3. Tak měli zpočátku pacienti tří skupin srovnatelné ukazatele závažnosti ADHD. Podle výsledků neurologických, laboratorně klinických a instrumentálních vyšetření v době zařazeni do studie nebyly zjištěny žádné abnormality u žádného pacienta. V průběhu 12 týdnů léčby byli pacienti prohlédnuti šestkrát lékařem. Během prohlídek lékař-výzkumník zaznamenával dynamiku intenzity klinických projevů ADHD (celkové skóre na stupnici ADHDRS-IV-Home version) a závažnosti onemocnění (v dotazníku CGI-ADHD-Severity), dohlížel na medikaci a průběh léčby a hodnotil její bezpečnost.
Analýza účinnosti 12 týdenní léčby ve třech skupinách ukázala pokles o více než 25 % počátečního celkové skóre na stupnici ADHDRS-IV-Home version u 75 % (n = 36) dětí léčených přípravkem ULD anti-S100+anti-eNOS, u 66% (n = 33) pacientů léčených ULD anti-S100 a u 56% (n = 28) dětí, kterým bylo podáváno placebo. Rozdíly v účinnosti mezi skupinami ukazuje podrobnější posouzení s přihlédnutím k třístupňovému třídění zlepšení stavu (snížení celkového skóre na stupnici ADHDRS-IV pro < 25 %, 25-49,9 % nebo > 50 % proti základní linii) jsou uvedeny v tabulce 17. Významné zlepšení se snížením celkového skóre na 50% nebo více proti základní linii bylo zaznamenáno u 52% dětí ve skupině 2, které užívaly ULD anti-S100+anti-eNOS, a 34 % dětí ve skupině 2, které dostávaly ULD anti-S100 (proti 8 % pacientů ve skupině 3 s placebem).
Ve všech třech pozorovaných skupinách došlo již po 2 týdnech léčby k významnému snížení (p < 0,001) klinických důsledků ADHD ve srovnání s počátečním stavem. Pozitivní dynamika byla výraznější u pacientů skupin 1 a 2, mezi nimiž byly zjištěny významné rozdíly celkového skóre ADHDRS-IVHome version, a to nejen ve vztahu ke screeningové návštěvě, ale i v porovnání s indexy skupiny 3 s placebem. V následujících týdnech léčby začala účinnost léčby přípravkem ULD anti-S100+anti-eNOS a jednosložkovým přípravkem ULD anti-S100 růst, nejvýrazněji v aktivní lékové skupině (p < 0,05). Výsledný pokles celkového skóre na stupnici ADHDRS-IV-Home version u dětí ve skupině 1 s ULD anti-S100+anti-eNOS je nižší o 16,5 bodu, u pacientů ve skupině 2 s ULD anti-S100 o 12,4 bodů (oproti 6,3 bodů ve skupině 3 s placebem). V důsledku 12-týdenní léčby intenzita klinických důsledků ADHD u dětí léčených přípravkem ULD ant-S100+anti-eNOS poklesla téměř na polovinu (-48,8%) a u pacientů léčených ULD anti-S100 na více než jednu třetinu (-38,2 %) ve srovnání s počátečním stavem.
Příjem přípravku ULD anti-S100+anti-eNOS nebo ULD anti-S100 ovlivnil soubor příznaků ADHD, což bylo potvrzeno dynamikou posouzení dvěma úseky stupnice s ADHDRS-IV-Home version. Navíc účinnost léčby přípravkem ULD anti-S100+anti-eNOS byla výrazně vyšší než účinnost léčby jednosložkovým ULD anti-S100 pokud jde o vliv na intenzitu dopadů a deficit pozornosti a hyperaktivitu/impulzivitu.
Pozitivní terapeutický účinek aktivního léku ULD anti-S100+anti-eNOS a srovnávacího léku ULD-S100 byl uveden v hodnocení výsledků léčby pacienta na stupnici hodnocení závažnosti ADHD (CGI-ADHR-Severity) (tabulka 17). Téměř u čtvrtiny pacientů ve skupině ULD anti-S100+anti-eNOS byla závažnost onemocnění snížena ze střední na mírnou a dokonce minimální, jak bylo potvrzeno snížením střední hodnoty na stupnici CGI-ADHR-Severity o 15% po Směsicích léčby (ze 4,0 ±0,02 na 3,4 ±0,06, p< 0,001). Účinek léčby jednosložkovým přípravkem ULD anti-S100 po 3 měsících je o něco nižší a představuje -10% v měřítku testu CGI-ADHR-Severity (proti 5 % ve skupině s placebem). Bezpečnostní analýza zahrnovala údaje o všech pacientech účastnících se studie. Po celou dobu sledování byla tolerance jak aktivovaného léku ULD anti-S100+anti-eNOS, tak srovnávacího přípravku ULD-S100 dobře srovnatelná s placebem. Nežádoucí účinky byly hlášeny u jednoho pacienta ze skupiny s ULD anti-S100 (bolesti hlavy vymizely během čtvrtého týdne studie) a jednoho pacienta ze skupiny s placebem (náměsíčnost během druhého měsíce pozorování). Tyto nežádoucí účinky nebyly spojeny s léčbou. Kromě toho byly v průběhu léčby pozorovány jednotlivé případy akutních onemocnění dýchacích cest, které rovněž nebyly spojeny s léčbou. Všichni pacienti studovaných skupin dokončili léčbu podle plánu stanoveného protokolem studie bez předčasných výpadků. Absence patologických změn podle fyzického vyšetření pacientů a v průběžně opakované analýzy laboratorních parametrů neprokázaly patologické změny a potvrdily bezpečnost studované léčby.
Podle výsledků fyzického vyšetření (tep, SKT, DKT, tělesná teplota) nebyly u pacientů v průběhu léčby registrovány žádné patologické změny. Rozdíly v analyzovaných hodnotách v souladu s návštěvami ani ve srovnávaných skupinách nedosáhly statistické významnosti a nepřekračují meze fyziologicky přípustných odchylek. Vysoká míra dodržování (adherence) léčby je navíc dokladem účinnosti i bezpečnosti sledovaných přípravků. Na konci třetího měsíce léčby bylo dodržování 99,8 ± 1,15% a 98,8 ± 2,25 % ve skupině 1 s ULD anti-S100+anti-eNOS a ve skupině 2 s ULD anti-S100 (ve srovnání s 74,6 ± 2,54 % ve skupině 3 s placebem).
Tak studie prokázala účinnost a bezpečnost přípravků ULD anti-S100+anti-eNOS 5 a jednosložkového přípravku ULD-S100 v léčbě dětí s ADHD. Nejvýraznější léčebný efekt v průběhu 12 týdnů byl pozorován v komplexním léku (ULD anti-S100+anti-eNOS), což se projevilo v pozitivní dynamice klinických příznaků u většiny (75 %) dětí. Přípravek ULD anti-S100+anti-eNOS má korigující vliv na oba soubory příznaků ADHD a jako výsledek bylo zaznamenáno signifikantní snížení 10 poruch pozornosti a hyperaktivity u pacientů s ADHD.
Tabulka 17. Dynamika celkového skóre podle stupnice ADHDRS-IV-Home Version na konci 12. týdne léčby
skupina pacientů podíl of pacientů se snížením celkového skóre na stupnici ADHDRS-IV-Home Version
< 25,0 % proti základní linii 25,0 - 49,9 % proti základní linii > 50,0 % and více proti základní linii
ULD anti-S1 OO+anti-eNOS, n=48 12(25%) 11 (23%) 25 (52%)»
ULD anti-S100, n=50 17(34%) 16(32%) 17(34%)»
placebo, n=50 22 (44 %) 24 (48%) 4 ( 8%)
rozdíl je významný ve sovnání se skupinou placebo: ## p < 0,01
Tabulka 18. Dynamika důkazů klinických projevů ADHD podle stupnice ADHDRS-IV-Home Version
stadium léčby ULD anti-S100 + anti-eNOS, n=48 ULD anti-S100, n=50 placebo, n=50
hodnota ± statistická odchylka A od základní linie hodnota ± statistická odchylka A od základní linie hodnota ± statistická odchylka Aod základní linie
celkové skóre
screening 33,8 ± 0,96 32,5 ±1,14 33,6 ±0,91
2 týdny 24,1 ±0,97 *** # -28,7% 25,1 ±1,03 *** # -22,8 % 28,8 ±1,26 -14,3%
4 týdny 22,6 ±0,98 ***## -33,1% 22,7 ±1,23 *** ## -30,2 % 29,9 ±1,06 -11,0%
6 týdnů 19,4 ±0,95 *** ## -42,6% 20,8 ±1,06 *** ## -36,0 % 29,0 ±1,25 *** -13,7%
8 týdnů 18,9 ±0,94 *** ### -44,1% 20,9 ±1,30 *** ### -35,7 % 27,6 ±1,35 -17,9%
12 týdnů 17,3 ±0,96 ***###& -48,8% 20,1 ±1,21 *** -38,2 % 27,3 ±1,48 *** -18,8%
poruchy pozornosti
screening 18,4 ±0,55 17,4 ±0,57 18,4 ±0,43
2 týdny 12,8 ±0,57 *** # -30,4% 13,7 ±0,68 *** # -21,3% 16,1 ±0,66 ★★★ -12,5%
4 týdny 11,6 ±0,56 *** ### -37,0% 12,9 ±0,79 ### -25,9 % 16,4 ±0,57 *** -10,9%
6 týdnů 10,7 ±0,54 *** ### -41,8% 11,9 ±0,64 *** ### -31,6% 16,0 ±0,70 ★★★ -13,0%
8 týdnů 10,3 ±0,53 *** ### -44,0% 11,5 ±0,70 *** ### -33,9 % 15,1 ±0,76 -17,9%
12 týdnů 9,7 ±0,55 *** ##& -47,3% 11,4 ±0,68 *** ## -34,5 % 14,9 ±0,78 ★★★ -19,0%
hyperaktivita / impulzivnost
screening 15,4± 0,61 15,1 ±0,77 15,2 ±0,62
2 týdny 11,3 ±0,63 ★★★ -26,6% 11,4 ±0,61 *★* -24,5 % 12,7 ±0,74 -16,4%
4 týdny 11,0 ±0,62 ** * -28,6% 9,8 ±0,64 *** ### -35,1 % 13,5 ±0,67 ** -11,2%
6 týdnů 8,7 ± 0,59 *** ## -43,5% 8,9 ±0,64 *** ftttff -41,1 % 12,9 ±0,73 ** -15,1 %
8 týdnů 8,6 ±0,60 *** ## -44,2% 9,5 ±0,76 *** ## -37,1 % 12,5 ±0,81 •kick -17,8%
12 týdnů 7,6 ±0,57 *** ## & -50,6% 8,7 ± 0,70 *** ### -42,4 % 12,5 ±0,82 •kkk -17,8%
Pozn. rozdíl je významný v porovnání se základní linií: * p<0,05, ** p<0,01, *** p<0,001 rozdíl je významný v porovnání se skupinou placebo: # p<0,05, ** p<0,01, m p<0,001 rozdíl je významný v porovnání se skupinou ULD anti-S100: & p<0,05
Tabulka 19. Dynamika hladiny ADHD na stupnici
CGI-ADHD-Severity
parametr
ADHD Severity
průměr ± směrodatná odchylka Δ od základní linie
ULD anti-S100 + anti-eNOS, n = 48
screening 4,0 ± 0,02
4 týdny 3,6 ± 0,02 ** -10 %
12 týdnů 3,4 ± 0,06 *** -15 %
ULD anti-S100, n = 50
screening 4,0 ± 0,03
4 týdny 3,8 ± 0,06 ** - 5 %
12 týdnů 3,6 ± 0,08 *** -10 %
placebo, n = 50
screening 4,0 ±0,01
4 týdny 3,9 ±0,05 - 2,5%
12 týdnů 3,8 ± 0,06 *** - 2,5%
Rozdíl je významný v porovnání se základní linií“: ** p < 0,01, *** p < 0,001
Příklad 12.
Dvojitě slepá, placebem kontrolovaná klinická studie kombinace aktivované potencované formy protilátek proti C-terminálnímu fragmentu AT1 receptoru pro angiotensin II ve směsi homeopatických ředění C12, C30, C200, s aktivovanou potencovanou formou protilátek proti endotelové NO-syntáze ve směsi homeopatických ředění C12, C30, C200, u lidských pacientů s chronickým srdečním selháním k vyhodnocení klíčových parametrů patologie CHSS.
pacientů (CHSS II až IV funkční třídy (FC), s ejekční frakcí levé komory (LVEF) menší než 40 %) bylo pro 6 měsíční studii rozděleno do 4 skupin se stejným zacházením a kontrolou. Základní léčba nebyla přerušena (β-blokátor bisoprolol, ACE inhibitor enalapril, aspirin (pokud nebyl kontraindikován), podávání diuretik, nitrátů, povolen byl rovněž digoxin). Skupina 1 dostávala aktivovanou potencovanou formu protilátek proti C-terminálnímu fragmentu AT1 receptoru pro angiotensin II (směs homeopatických ředění C12, C30, C200) (3 tablety denně, n = 20). Skupina 2 dostávala aktivovanou potencovanou formu protilátek proti endotelové NO-syntáze (směs homeopatických ředění C12, C30, C200) (3 tablety denně, n = 20). Skupina 3 dostávala kombinovaný farmaceutický přípravek obsahující jak aktivovanou potencovanou formu protilátek proti C-terminálnímu fragmentu AT1 receptoru pro angiotensin II (směs homeopatických ředění C12, C30, C200), tak i aktivovanou potencovanou formu protilátek proti endotelové NO-syntáze (směs homeopatických ředění C12, C30, C200 (3 tablety denně, n = 20). Skupina 4 dostávala placebo (3 tablety denně, n = 20). Skupiny byly srovnatelné v počátečních studijních parametrech: věku a pohlaví, závažnosti (třídě CHSS a LVEF) a době trvání nemoci.
Před a po ošetření byli pacienti vyšetřeni na vliv podávaných léků na cévní remodelaci a endotelovou dysfunkci, který je důležitý pro proces a progresi CHSS. Vliv léků na procesy cévní remodelace byl hodnocen podle rychlostí pulzní vlny („Colson“ systém) v karotido-femorálním (CF) (elastický typ) a karotido-radiálním (CR) (svalový typ)) segmentu tepen.
Tabulka 20 ukazuje dynamiku hodnot rychlosti pulzní vlny v krčním-stehenním (CF) (elastický typ) a krčním-vřetenním (CR) (svalový typ) úseku tepen.
Tabulka 20
skupiny / parametry ULD Abs proti Cterminálnímu fragmentu AT1 receptoru pro angiotensin II ULD Abs proti endotelové NO-syntáze kombinace ULD Abs proti Cterminálnímu fragmentu AT1 receptoru pro angiotensin II a ULD Abs proti endotelové NO-syntáze placebo
Λ & Δ% Λ & Δ% Λ & Δ% Λ & Δ%
CF,m/c 9,7±0,5 8 ±0,6 -14,8* 10,1 ±0,5 9,8±0,4 -2,97 10,8±0,3 8,6±0,6 -20,3* 8,2±0,4 8,2±0,5 0,1
CR, m/c 8,6±0,2 8,9±0,3 2,9 8,8±0,1 8,3±0,3 5,7 8,9±0,5 7,6±0,7 15,6*#$ 9,1 ±0,3 9,7±0,3 6,4*
(A) označuje počáteční hodnotu (&) označuje 6 měsíců po zahájení podávání (*) označuje, že rozdíl od počáteční hodnoty, je ověřitelný s hodnotou p < 0,05 (#) označuje rozdíl od skupiny, která dostávala ULD Abs proti C-terminálnímu fragmentu receptoru AT1 pro angiotensin II s ověřitelným rozdílem s hodnotou p < 0,05 ($) označuje rozdíl od skupiny, která dostávala ULD Abs proti endotelové NO-syntáze s významným rozdílem s hodnotou p < 0,05 (ULD) označuje ultra-nízké dávky (Abs) označuje protilátky
Po 6 měsících léčby se pouze u skupiny 3 projevil prokazatelný vliv farmaceutického přípravku podle vynálezu na tuhost svalového typu tepen. Skupina 1, který dostávala ULD protilátek proti C-terminálnímu fragmentu AT1 receptoru pro angiotensin II a skupina 3, která dostávala kombinovaný farmaceutický přípravek podle vynálezu, vykazovaly prokázané zvýšení tuhosti u elastického typu tepen
Příklad 13.
Dvojitě slepá, placebem kontrolovaná klinická studie kombinace aktivované potencované formy protilátek proti C-terminálnímu fragmentu AT1 receptoru pro angiotensin II ve směsi homeopatických ředění C12, C30, C200, a aktivované potencované formy protilátek proti endotelové NO-syntáze ve směsi homeopatických ředění C12, C30, C200, k vyhodnocení klíčových měřítek kvality života u lidských pacientů s chronickým srdečním selháním.
pacientů (CHSS II až IV funkční třídy (FC) , s ejekční frakcí levé komory (LVEF) menší než 40 %) bylo pro 6 měsíční studii rozděleno do 4 skupin se stejným zacházením a kontrolou. Základní léčba nebyla přerušena (β-blokátor bisoprolol, ACE inhibitor enalapril, aspirin (pokud nebyl kontraindikován), podávání diuretik, nitrátů, povolen byl rovněž digoxin). Skupina 1 dostávala aktivovanou potencovanou formu protilátek proti C-terminálnímu fragmentu AT1 receptoru pro angiotensin II (směs homeopatických ředění C12, C30, C200) (v3 tablety denně, n=20). Skupina 2 dostávala aktivovanou potencovanou formu protilátek proti endotelové NO-syntáze (směs homeopatických ředění C12, C30, C200) (3 tablety denně, n = 20). Skupina 3 dostávala kombinovaný farmaceutický přípravek obsahující jak aktivovanou potencovanou formu protilátek proti C-terminálnímu fragmentu AT1 receptoru pro angiotensin II (směs homeopatických ředění C12, C30, C200) tak i aktivovanou potencovanou formu protilátek proti endotelové NO-syntáze (směs homeopatických ředění C12, C30, C200) (3 tablety denně, n = 20). Skupina 4 dostávala placebo (3 tablety denně, n = 20). Skupiny byly srovnatelné v počátečních studijních parametrech: věku a pohlaví, závažnosti (třídě CHSS a LVEF) a době trvání nemoci. Před a po ošetření byli pacienti vyšetřeni na kvalitu života (dotazníky Minnesota a Kansas), morfologické parametry srdce, a toleranci k fyzické zátěži.
Tabulka 21 ukazuje výsledky studie v podobě dynamiky základních parametrů účinnosti léčby.
Po 6 měsících léčby pacienti ve skupině 1, léčení ULD protilátek proti Cterminálnímu fragmentu AT1 receptoru pro angiotensin II, vykázali významné zlepšení kvality života, zlepšení systolické funkce levé komory a zvýšenou toleranci k fyzické zátěži. Skupina 2 vykázala prokazatelné snížení úrovně úzkosti a deprese a (zlepšení) kvality života, které byly vyhodnoceny pomocí dotazníku Kansas. Studie potvrdily, že nejvyšší terapeutický efekt byl dosažen kombinovaným farmaceutickým přípravkem podle vynálezu v kombinaci se standardní terapii CHSS, podávaným pacientům ze skupiny 3, kteří vykázali prokazatelně pozitivní dynamiku ve všech studovaných parametrech.
Kombinace aktivované (potencované) formy protilátek proti C-terminálnímu fragmentu AT1 receptoru pro angiotensin II a proti endotelové syntáze oxidu dusnatého (NO-syntáza) ve farmaceutickém přípravku podle vynálezu (kombinovaný lék) poskytuje neočekávaný synergický léčebný účinek zahrnující zvýšený vliv na cévní remodelaci a dysfunkci endotelu, která je kritická jak pro postup a vývoj CHSS, tak též pro zlepšení kvality pacientova života, morfologických parametrů srdce a tolerance k fyzické zátěži, což je potvrzeno klinickými testy.
Výsledky jsou uvedeny v tabulce 21.
Tabulka 21
skupiny /parametry ULD1 Abs2 proti Cterminálnímu fragmentu receptoru AT1 pro angiotensin II ULD Abs proti endotelové NO-syntáze kombinace ULD Abs proti Cterminálnímu fragmentu AT1 receptoru pro angiotensin li a ULD Abs proti endotelové NO-syntáze placebo
Λ & Δ% Λ & Δ% Λ & Δ% Λ & Δ%
Minnesota3 47,5 ± 2,8 39,1** ± 3,8 -17,6 48,1 ± 3,7 40,8 ± 3,8 -15,2 43,9 ± 2,8 32,0*** ± 4,9 $ -27,1 48,3 ±3,7 42,4** + 2,9 -12,2
Kansas4 82,1 ± 2,3 70,1 *** + 5,5 -14,6 81,5 ± 2,5 72,0 ± 8,2 -11,7 87,7 ± 2,3 65,7*** ± 7,3 $ -25,1 83,8 ±3,5 60,3 ± 6,8 - 7,2
HADS5 15,3 ± 1,0 12,5 ** ± 0,9 -18,5 16,2 ± 1,7 11,34 ± 2,1 -30,3 16,2 ± 1,3 8,4 *** ± 0,9#$$ 48,1 17,3 ±1,1 5,9 + 1,1 -8,1
FC CHSS6 12,7 ± 0,1 2 2 *** + 0,1 -17,3 2,9 ± 0,1 2,7 ± 0,2 -7,3 3,0 ± 0,2 1,9 *** ± 0,1 #$ 36,6 2,7 ±0,1 2,5 ± 0,1 -6,2
FF LV7 27,1 ± 0,9 33,6 ** ± 1,5 24,0 28,2 ± 1,5 25,3 ± 1,7 10,3 25,3 ± 1,1 34,6 *** ± 1,9 #$ 36,7 26,4 ±1,1 28,0 ± 1,4 6,3
test 6 minutové procházky 378,7 ±12,4 419,6*** ±13,7 10,8 383,1 ±15,3 416,8 ±17,2 8,8 378,7 ±12,4 450,1 ** ±17,7 #$ 18,9 15,3 ±1,0 409,1 ±11,5 4,8
**,***- hodnoty p < 0,05, p < 0,01, p < 0,001 # rozdíl od skupiny užívající ULD Abs proti C-terminálnímu fragmentu AT1 receptoru 10 pro angiotensinu II s ověřitelnou úrovní p < 0,05 $, $$ rozdíl od skupiny užívající ULD Abs proti endotelové NO-syntázy je signifikantní na úrovních p 0,05 a 0,01 (1) ULD znamená ultra-nízké dávky (2) Abs znamená protilátky, (3) „Minnesota“ označuje dotazník Minnesota (4) „Kansas“ označuje dotazník Kansas (5) HADS označuje celkové skóre HADS (6) FC CHSS označuje pacienty s chronickým srdečním selháním, funkční třída (7) FF LV označuje zlomek fungování levé srdeční komory
Příklad 14.
Při studii vlastností navrhovaného farmaceutického přípravku k léčbě pacientů s benigní hyperplazií prostaty, byly použity 300 mg tablety, nasycené farmaceutickým složením, obsahujícím vodně-alkoholové roztoky (6 mg/tabletu) aktivované potencované králičí polyklonální afinitně čištěné protilátky proti specifickému prostatickému antigenu (anti-PSA) a endotelové NO-syntáze (anti-eNOS) v ultranízkých dávkách (ULD), získané ultraředěním původního základního roztoku 10012, 10030, 1OO2ookrát, což odpovídá směsi setinných homeopatických ředění C12, C30, C200 (ULD anti-PSA + anti-eNOS) a 300 mg tablety nasycené farmaceutickým složením, obsahujícím vodně-alkoholové roztoky (6 mg na 1 tabletu) aktivované potencované králičí polyklonální afinitně čištěné protilátky proti specifickému prostatickému antigenu v ultranízké dávce (ULD), získané ultraředěním původního základního roztoku 10012, 10030, 100200 krát, což odpovídá směsi setinných homeopatických ředění C12, C30, C200 (ULD anti-PSA).
Benigní hyperplazie prostaty (BHP) je jedním z nejčastěji se vyskytujících onemocnění u mužů (Bruskewitz R. C., 2003, Rosen R., 2003): na jedné straně epidemiologické studie prováděné v Rusku, věnované postupnému zvyšování výskytu BHP z 11,3% ve věkové skupině 40-49 let na 81,4% ve věku 80 let (Gorilovskij, L.M., 1999) , na druhé straně demografické studie prováděné WHO potvrzují významný nárůst u populace nad 60 let, převyšující nárůst u jiných věkových skupin.
Mezi hlavními příznaky benigní hyperplazie prostaty jsou příznaky v dolních močových cestách, které mohou způsobit značné nepohodlí a snížit kvalitu života (Bruskewitz R. C., 2003; Lepor H., 2004; O'Leary Μ. P., 2005). V závažných případech může být onemocnění doprovázeno komplikacemi, jako jsou například akutní retence moči, infekce močových cest, červené zbarvení moči, selhání ledvin (Stepanov, V. N., 1999; Jacobsen S.J., 1997; Lepor Η., 2004). BHP je také spojována s rozvojem erektilní dysfunkce u pacientů (Bruskewitz R.C., 2003, Daly M. P., 2005).
Otevřené srovnávací studii paralelních skupin na účinnost a bezpečnost léčivých přípravků obsahujících ULD anti-PSA+ULD anti-eNOS a ULD anti-PSA při zmírňování poruch močení způsobených benigní hyperplazie prostaty (BHP) se účastnilo 40 pacientů, vybraných v souladu s kriterii pro zahrnutí/vyloučení. Pacienti byli náhodně rozděleni do 2 skupin, jedna skupina dostávala 1 pilulku s ULD anti-PSA+anti-eNOS 3 krát denně po dobu 12 týdnů (n = 21), druhá 1 pilulku s ULD anti-PSA 3 krát denně po dobu 12 týdnů (n = 19). Tyto skupiny byly srovnatelné ve věku, závažnosti symptomů BHP, parametrů močení a objemu prostaty.
Studie zahrnovala pacienty nad 45 let s anamnézou BHP s odpovídajícími symptomy dolních močových cest po dobu nejméně 6 měsíců, IPSS > 13, objem prostaty podle transrektální ultrasonografie £ 30 cm3, s maximálním průtokem moči rychlostí ž 4 a 15 ml/sec a minimálním reziduální objemem moči 125 ml, s hladinou antigenu PSA á 4 ng/ml. Nezbytnou podmínkou pro začlenění byla absence příjmu těchto léků v lékařských záznamech: Finasterid, Dutasterid, nebo jiného pokusného léku po 6 měsíců před zařazením do studie, σΐ-adrenergních blokátorů a bylinných léků 4 týdny před zařazením do studie, jakýchkoliv inhibitorů fosfodiesterázy typu 5 a dalších léků na erektilní dysfunkci 4 týdny před zařazením do studie.
Studie nezahrnovala pacienty podrobené invazivním metodám léčby BHP, včetně transuretrální resekce prostaty, termoterapie, transuretrální ablace jehlou, angioplastiky výztuže a jiné, s maligním onkologickým onemocněním, akutním zpožděným močením, močovými kameny, zúžením močovodu, nemocí Marion, urogenitální systém infekce ve fázi aktivního zánětu a další.
Klinická účinnost farmaceutických přípravků byla stanovena jako zlepšení klinických příznaků dolních močových cest, vyhodnocených pomocí dotazníku IPSS (International Prostate Symptom Score), parametrů močení (maximální a průměrná rychlost proudění moči, vymočeného objemu, objemu reziduální moči) a objemu prostaty na základě údajů transuretrálního ultrazvuku (TU), a také erektilní funkce byla hodnocena na základě údajů získaných z dotazníku IIEF (mezinárodní index erektilní funkce). Výsledky studie jsou uvedeny v tabulkách 22 a 23.
Tabulka 22.
ULD anti-PSA ULD anti-PSA + ULD anti-eNOS
n/N (%)i počáteční průměr 12 týdnů průměr Δ bodů n/N (%)1 počáteční průměr 12 týdnů průměr Δ bodů
skóre IPSS 19/19 (100,0) 17,8 11,9 -5,9 20/21 (95,2) 16,0 10,5 -5,6
QoL / skóre (kvalita života) 19/19 (100,0) 3,4 2,4 -1,0 20/21 (95,2) 3,4 2,3 -1,1
skóre IIEF 2/19 (10,5) 17,8 18,6 0,8 4/21 (19,0) 17,5 18,9 1,4
Qmax (nejvyšší hodnota močení), ml/s 16/19 (84,2) 10,8 13,1 2,2 15/21 (71,4) 11,7 13,7 2,0
Qave, ml/S (průměrná) 15/19 (78,9) 5,8 7,1 1,3 18/21 (85,7) 5,8 7,1 1,3
V, (vymočený objem), ml 10/19 (52,6) 218,6 206,8 -11,8 15/21 (71,4) 203,7 252,0 48,3
RV (zbytkový objem moči),ml 15/19 (78,9) 23,6 19,4 -4,3 14/21 (66,6) 19,1 14,1 -5,0
PV (objem prostaty), cm3 18/19 (94,7) 55,9 48,9 -7,0 15/21 (71,4) 57,0 52,4 -4,6
- čitatel je počet pacientů (n) - ukazuje zlepšení, jmenovatel je celkový počet pacientů v pokusu (N)
Tabulka 23.
Dynamika podstupnic obstrukčních a dráždících příznaků a otázka 7 dotazníku IPSS
ULD anti-PSA ULD anti-PSA+anti-eNOS
M±SD návštěva 1 M ± SD návštěva 2 M ± SD návštěva 1 M±SD návštěva 2
obstrukční 10,0±3,02# 6,5 ±2,81 *** 8,2 ±2,96 6,0 ± 3,39**
dráždící 7,5±2,21 & 5,3 ±1,90 *** 7,8±2,16& 4,5 ± 2,34***
7. otázka 2,1 ±0,78 1,9±0,75 2,3±0,90 1,4± 0,98***
obstrukční v %2 -33,4 ±26,85 - 5,2 ±34,50
dráždicí v %2 -28,2 ±1730 -40,3 ±30,35
7. otázka v % 2 - 2,0±49,61 ## -37,7 ±39,23
M±SD - střední hodnota ± standardní odchylka * - p < 0,05 vs baseline;
** - p < 0,01 vs baseline;
*** - p < 0,001 vs baseline ## - p < 0,01 vs ULD anti-PSA 2 - ukazuje snížení vzhledem k základní linii v % průměrné hodnoty skupiny
Uvedené údaje potvrzují, že jak ULD anti-PSA, tak i ULD anti-PSA + ULD antieNOS použité k efektivní léčbě příznaků dolních močových cest, zvýšily průměrný i maximální průtok moči a zlepšily kvalitu života pacientů (tabulka 22). Průběh léčby nebyl dlouhý (12 týdnů), a proto byl nebyl v žádné studované skupině pozorován pokles objemu prostaty. ULD anti-PSA neměla vliv na vymočený objem, který vzrostl pouze u 52,6 % pacientů, v průměru skupina vykazovala určitý statisticky nevýznamný pokles objemu moči 11,8 ml (5,4%) ve srovnání s výchozími hodnotami. Současně u pacientů, léčených ULD anti-PSA+ULD anti-eNOS, došlo k růstu objemu moči o 71,4%, a průměrné zvýšení objemu bylo 48,3 ml (23,7%) v porovnání se základní linií.
Analýza dynamiky obstrukčních a iritační příznaků dle podstupnic IPSS, stejně jako důkazy nokturie (otázka č. 7 IPSS) ukázaly, že oba farmaceutické přípravky přispěly ke snížení obstrukčních a iritačních příznaků, a také snížení příznaků noturie. Současně byla ULD anti-PSA+anti-eNOS účinnější v porovnání s ULD antiPSA, pokud jde o snížení dráždivých symptomů dolních cest močových (28,2 % vs 40,3 %, p < 0,05) a naléhavého nočního močení (2,0 % vs 37,7 %).
Je třeba poznamenat, že ULD anti-PSA+ULD anti-eNOS je také účinnější v porovnání s ULD anti-PSA při zlepšování erekční funkce u pacientů. Ve skupině ULD anti-PSA+ULD anti-eNOS se celkové skóre IIEF (mezinárodní index erektilní funkce) u pacientů zvýšilo o 19%, (ve skupině ULD anti-PSA 10,5 %), průměrný 5 nárůst skóre IIEF ve skupině ULD anti-PSA+ULD anti-eNOS skupina byl 8 %, ve skupině ULD anti-PSA 4,5 %.
Farmaceutické přípravky ukázaly vynikající bezpečnostní profil, nebyly zjištěny žádné nežádoucí účinky, spojené s podáváním léků v průběhu studie.
Tak ULD anti-PSA+ULD anti-eNOS ukázalo lepší účinnost ve srovnání s ULD 10 anti-PSA při léčbě problémů s močením, způsobených benigní hyperplasií prostaty. Navíc byl odhalen větší kladný vliv ULD anti-PSA+ULD anti-eNOS na erektilní funkci pacientů ve srovnání s ULD anti-PSA.
• ···· ······ · · 75 ·:·· ··’
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (15)

PATENTOVÉ NÁROKY
1. Způsob zvýšení účinku aktivované potencované formy protilátky proti endogenní biologické molekule, vyznačující se tím, že zahrnuje kombinování uvedené endogenní biologické molekuly s aktivovanou potencovanou formou protilátek proti endotelové NO-syntáze.
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že dále zahrnuje podávání uvedené kombinace pacientovi, který potřebuje léčbu uvedenou aktivovanou potencovanou formou protilátky.
3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že uvedenou aktivovanou potencovanou formou protilátky proti endogenní biologické molekule je protilátka proti proteinu S-100.
4. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že uvedenou aktivovanou potencovanou formou protilátky proti endogenní biologické molekule je protilátka proti specifickému prostatickému antigenu.
5. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že uvedenou aktivovanou potencovanou formou protilátky proti endogenní biologické molekule je protilátka proti receptoru insulinu.
6. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že uvedenou aktivovanou potencovanou formou protilátky proti endogenní biologické molekule je protilátka proti receptoru angiotensinu II.
7. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje a) aktivovanou potencovanou formu protilátky proti endogenní biologické molekule a b) aktivovanou potencovanou formu protilátky proti NO-syntáze.
8. Farmaceutický přípravek podle nároku 7, vyznačující se tím, že dále zahrnuje farmaceuticky přijatelný pevný nosič.
9. Farmaceutický přípravek podle nároku 8, vyznačující se tím, že uvedená aktivovaná potencované forma protilátky proti endotelové NO-syntáze je ve formě směsi homeopatických ředění C12, C30 a C200, napuštěné do uvedeného pevného nosiče.
10. Farmaceutický přípravek podle nároku 7, vyznačující se tím, že uvedenou aktivovanou potencovanou formou protilátky proti endogenní biologické molekule je monoklonální, polyklonální nebo přírodní protilátky.
11. Farmaceutický přípravek podle nároku 10, vyznačující se tím, že uvedenou 5 protilátkou proti endogenní biologické molekule je polyklonální protilátka.
12. Farmaceutický přípravek podle nároku 7, vyznačující se tím, že uvedená aktivovaná potencovaná forma protilátky proti endogenní biologické molekule je připravena postupným setinným ředěním, spojeným s protřepáním každého zředění.
10
13. Farmaceutický přípravek podle nároku 7, vyznačující se tím, že uvedenou protilátkou proti endotelové NO-syntáze je monoklonální, polyklonální nebo přírodní protilátka.
14 . Farmaceutický přípravek podle nároku 8, vyznačující se tím, že uvedenou protilátkou proti endotelové NO-syntáze je polyklonální protilátka.
15 15. Farmaceutický přípravek podle nároku 9, vyznačující se tím, že aktivovaná potencovaná forma protilátky proti endotelové NO-syntáze je připravena postupným setinným ředěním, spojeným s protřepáním každého zředění.
CZ20130105A 2010-07-15 2011-07-15 Zpusob zvýsení úcinku aktivované potencované formy protilátky CZ2013105A3 (cs)

Applications Claiming Priority (18)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2010129290/15A RU2525155C2 (ru) 2010-07-15 2010-07-15 Способ лечения хронической сердечной недостаточности и фармацевтическая композиция для комплексной терапии хронической сердечной недостаточности
RU2010129295/15A RU2531049C2 (ru) 2010-07-15 2010-07-15 Лекарственное средство для лечения заболеваний предстательной железы и способ лечения заболеваний предстательной железы
RU2010129291/15A RU2525156C2 (ru) 2010-07-15 2010-07-15 Способ лечения и профилактики артериальной гипертензии и фармацевтическая композиция для лечения артериальной гипертензии
RU2010129298/15A RU2526153C2 (ru) 2010-07-15 2010-07-15 Способ повышения фармакологической активности действующего вещества лекарственного средства и фармацевтическая композиция
RU2010129292/15A RU2523557C2 (ru) 2010-07-15 2010-07-15 Способ лечения вегетососудистой дистонии и фармацевтическая композиция для лечения вегетососудистой дистонии
RU2010129294/15A RU2542414C2 (ru) 2010-07-15 2010-07-15 Лекарственное средство для лечения эректильных дисфункций и способ лечения эректильных дисфункций
RU2010130356/15A RU2542453C2 (ru) 2010-07-21 2010-07-21 Лекарственное средство и способ лечения вегето-сосудистой дистонии, синдрома головокружения различного генеза и кинетозов
RU2010130353/15A RU2542445C2 (ru) 2010-07-21 2010-07-21 Лекарственное средство для лечения болезни альцгеймера и способ лечения болезни альцгеймера
RU2010130348/15A RU2531048C2 (ru) 2010-07-21 2010-07-21 Лекарственное средство для уменьшения резистентности к инсулину и лечения сахарного диабета и способ повышения эффективности лечения сахарного диабета инсулином и/или гипогликемическими препаратами
RU2010130355/15A RU2530638C2 (ru) 2010-07-21 2010-07-21 Лекарственное средство и способ лечения органических заболеваний нервной системы, психоорганического синдрома и энцефалопатий различного генеза
RU2010130358/15A RU2519695C2 (ru) 2010-07-21 2010-07-21 Лекарственное средство для лечения синдрома дефицита внимания и способ лечения синдрома дефицита внимания
RU2011110106/15A RU2523451C2 (ru) 2011-03-17 2011-03-17 Способ лечения хронической сердечной недостаточности и фармацевтическая композиция для лечения хронической сердечной недостаточности
RU2011127059/15A RU2536234C2 (ru) 2011-07-01 2011-07-01 Нейротропное лекарственное средство и способ лечения органических заболеваний нервной системы, психоорганического синдрома и энцефалопатий различного генеза
RU2011127058/15A RU2536232C2 (ru) 2011-07-01 2011-07-01 Лекарственное средство для лечения болезни альцгеймера и способ лечения болезни альцгеймера
RU2011127051/15A RU2509572C2 (ru) 2011-07-01 2011-07-01 Лекарственное средство для уменьшения резистентности к инсулину и для лечения сахарного диабета, способ уменьшения резистентности к инсулину, способ лечения сахарного диабета и способ лечения сахарного диабета инсулином и/или гипогликемическими препаратами
RU2011127053/15A RU2565400C2 (ru) 2011-07-01 2011-07-01 Лекарственное средство для лечения заболеваний мочеполовой системы и способ лечения заболеваний мочеполовой системы
RU2011127055/15A RU2536230C2 (ru) 2011-07-01 2011-07-01 Лекарственное средство для лечения неврологическо-поведенческих рассторойств развития и способ лечения неврологическо-поведенческих расстройств развития
RU2011127052/15A RU2503462C2 (ru) 2011-07-01 2011-07-01 Способ лечения головокружения различного генеза, кинетозов и вегето-сосудистой дистонии (варианты) и лекарственное средство

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ2013105A3 true CZ2013105A3 (cs) 2013-05-22

Family

ID=44863151

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20130105A CZ2013105A3 (cs) 2010-07-15 2011-07-15 Zpusob zvýsení úcinku aktivované potencované formy protilátky

Country Status (25)

Country Link
US (3) US9308275B2 (cs)
EP (1) EP2593140A2 (cs)
JP (2) JP2013538186A (cs)
KR (1) KR20140014059A (cs)
AR (1) AR082247A1 (cs)
AU (1) AU2011278038B2 (cs)
BR (1) BR112013000840A2 (cs)
CA (1) CA2804966A1 (cs)
CZ (1) CZ2013105A3 (cs)
DE (1) DE112011102358T5 (cs)
DK (1) DK201370079A (cs)
EA (1) EA030566B1 (cs)
EE (1) EE201300006A (cs)
ES (1) ES2440393R1 (cs)
FR (1) FR2962656A1 (cs)
GB (1) GB2495884B (cs)
IT (1) ITTO20110639A1 (cs)
LT (1) LT5988B (cs)
MX (1) MX2013000543A (cs)
NO (1) NO20130222A1 (cs)
NZ (1) NZ606767A (cs)
PE (1) PE20130398A1 (cs)
PH (1) PH12013500107A1 (cs)
SG (2) SG10201505561TA (cs)
WO (1) WO2012007845A2 (cs)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20140014059A (ko) * 2010-07-15 2014-02-05 올레그 일리치 엡쉬테인 활성화되고 강화된 형태의 항체의 효과를 증가시키는 방법
SG187036A1 (en) * 2010-07-15 2013-02-28 Oleg Iliich Epshtein Combination pharmaceutical composition and methods of treating genitourinary system disorders
PH12013500141A1 (en) * 2010-07-21 2013-03-11 Oleg Lliich Epshtein Combination pharmaceutical compositions and method of treatment of vertigo, kinetosis and vegetative-vascular dystonia
MY160979A (en) * 2010-07-21 2017-03-31 Oleg Llich Epshtein A combination pharmaceutical composition and methods of treating diabetes and metabolic disorders
EP2450375A1 (en) 2010-11-09 2012-05-09 Sandoz Gmbh Cell culture medium and process for protein expression, said medium and process comprising a PAM inhibitor
RU2013111962A (ru) * 2013-03-18 2014-09-27 Олег Ильич Эпштейн Способ определения выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем
RU2013111961A (ru) * 2013-03-18 2014-09-27 Олег Ильич Эпштейн Способ определения выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем

Family Cites Families (82)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB750155A (en) 1953-03-17 1956-06-13 Nat Res Dev Substituted alanines
US3134718A (en) 1963-12-12 1964-05-26 Schering Corp Pregna-1,4-dienes and compositions containing same
US3901967A (en) 1973-09-10 1975-08-26 Union Corp Sustained release of atropine
SE393532B (sv) 1974-05-02 1977-05-16 Draco Ab Sett att framstella en farmaceutisk zinkberedning for astadkommande av en smaklig, fordragbar, peroral zinklosning innehallande ett zinkkomplex
US4311897A (en) 1979-08-28 1982-01-19 Union Carbide Corporation Plasma arc torch and nozzle assembly
US4963367A (en) 1984-04-27 1990-10-16 Medaphore, Inc. Drug delivery compositions and methods
US4839341A (en) 1984-05-29 1989-06-13 Eli Lilly And Company Stabilized insulin formulations
SU1331508A1 (ru) 1985-08-14 1987-08-23 Киевский Кабельный Завод "Укркабель" Устройство дл пневматического массажа урогенитальной сферы человека
FI101344B1 (fi) 1988-03-31 1998-06-15 Tanabe Seiyaku Co Menetelmä valmistaa valmiste, josta kontrolloidusti vapautuu farmaseuttisesti aktiivista ainetta
US4987127A (en) 1989-01-31 1991-01-22 Dal Sirany Method of treating a virus outbreak
SU1730144A1 (ru) 1989-02-24 1992-04-30 Научный Центр По Разработке И Внедрению Современных Методов Молекулярной Диагностики Способ подавлени репродукции вирусов
US5733572A (en) 1989-12-22 1998-03-31 Imarx Pharmaceutical Corp. Gas and gaseous precursor filled microspheres as topical and subcutaneous delivery vehicles
US5698195A (en) 1991-03-18 1997-12-16 New York University Medical Center Methods of treating rheumatoid arthritis using chimeric anti-TNF antibodies
RU2007989C1 (ru) 1991-11-12 1994-02-28 Акционерное общество "Трейдис" Способ габович подбора гомеопатических препаратов и их разовой дозы
ATE155043T1 (de) 1992-10-08 1997-07-15 Kennedy Inst Of Rheumatology Behandlung von autoimmun- und entzundungskrankheiten
DK140992D0 (da) 1992-11-24 1992-11-24 Ole Buchardt Fremgangsmaade til frembringelse af antistoffer mod haptener og andre b-celle-antigener, antistoffer opnaaet ved fremgangsmaaden og anvendelse af disse antistoffer til fremstilling af vacciner, isaer til veterinaermedicinsk brug
US5879677A (en) 1992-12-09 1999-03-09 The Scripps Research Institute Method for inhibition of cerebral tissue factor mediated reperfusion damage
WO1994022846A1 (en) 1993-03-30 1994-10-13 Pfizer Inc. Compounds enhancing antitumor activity of other cytotoxic agents
RU2033784C1 (ru) 1993-05-28 1995-04-30 Индивидуальное частное предприятие "Диалог" Устройство для репродуцирования гомеопатических и изопатических препаратов
US5895783A (en) 1993-07-16 1999-04-20 Schering Aktiengesellschaft Treatment of preeclampsia and preterm labor with combination of progestational agent and a nitric oxide synthase substrate and/or donor
IT1261849B (it) 1993-09-02 1996-06-03 Avantgarde Spa Dispositivo medico per la somministrazione di principi attivi o farmaci a bassissimo dosaggio, in particolare di farmaci omeopatici.
EP0652014A1 (en) 1993-11-10 1995-05-10 National Institute Of Immunology Treatment of prostatic hypertrophy
NZ278607A (en) 1994-02-07 1999-05-28 Knoll Ag Use of tnf antagonists for treating disorders involving elevated serum levels of il-6 wherein the serum levels are 500pg/ml or above
ES2293638T3 (es) 1994-03-25 2008-03-16 Isotechnika, Inc. Mejora de la eficacia de farmacos por deuteracion.
US5629286A (en) 1994-03-31 1997-05-13 Brewitt; Barbara Homeopathic dilutions of growth factors
IL110035A0 (en) 1994-06-16 1994-10-07 Tapuach Natural Technologies 1 Homeopathic formulations
RU2137483C1 (ru) 1995-08-02 1999-09-20 Божедомов Владимир Александрович Способ лечения урогенитальной хламидийной, уреаплазменной и микоплазменной инфекции
US6379669B1 (en) 1995-08-04 2002-04-30 Akhouri A. Sinha Targeting of organs by immunoconjugates
ES2132855T3 (es) 1995-09-07 1999-08-16 Oreal Extracto de iridaceas y composiciones que lo contienen.
EA000885B1 (ru) 1996-02-12 2000-06-26 Олег Ильич ЭПШТЕЙН Лекарственное средство и способ медикаментозного воздействия на организм
IL118096A0 (en) 1996-05-01 1996-09-12 Yeda Res & Dev Antibodies against interferon alpha/beta receptor
US6150500A (en) 1996-07-12 2000-11-21 Salerno; John C. Activators of endothelial nitric oxide synthase
SE9604341D0 (sv) 1996-11-26 1996-11-26 Ferring Bv Hepta-peptide oxytocin analogue
RU2104032C1 (ru) 1997-03-11 1998-02-10 Общество с ограниченной ответственностью "Снежный барс" Способ усиления лечебного эффекта лекарственных средств
US5849528A (en) 1997-08-21 1998-12-15 Incyte Pharmaceuticals, Inc.. Polynucleotides encoding a human S100 protein
DE19746868A1 (de) 1997-10-23 1999-04-29 Knoll Ag Verwendung von TNF-Antagonisten als Arzneimittel zur Behandlung von septischen Erkrankungen
WO1999026657A1 (en) 1997-11-25 1999-06-03 Musc Foundation For Research Development Inhibitors of nitric oxide synthase
RU2122858C1 (ru) 1997-12-29 1998-12-10 Яковлева Людмила Борисовна Гомеопатическое лекарственное средство седативного действия "вернисон"
DK1062952T3 (da) 1998-03-11 2003-11-24 Grelan Pharmaceutical Co Brusende enteropræparater
RU2187334C2 (ru) 1998-05-22 2002-08-20 Эпштейн Олег Ильич Способ коррекции нарушенного иммунного гомеостаза и лекарственное средство
US6933272B1 (en) 1998-09-22 2005-08-23 Erik Helmerhorst Use of non-peptidyl compounds for the treatment of insulin related ailments
RU2144370C1 (ru) 1999-01-06 2000-01-20 Титиева Наталья Михайловна Гомеопатическое лекарственное средство для лечения гипертрофии предстательной железы
RU2156621C1 (ru) 1999-03-04 2000-09-27 Эпштейн Олег Ильич Нейротропное лекарственное средство
RU2181297C2 (ru) 2000-06-20 2002-04-20 Эпштейн Олег Ильич Способ лечения патологического синдрома и лекарственное средство
RU2177795C1 (ru) 2001-02-15 2002-01-10 Эпштей Олег Ильич Гомеопатическое лекарственное средство для лечения и профилактики аденовирусных инфекций у детей
RU2192882C1 (ru) 2001-04-18 2002-11-20 Эпштейн Олег Ильич Лекарственное средство и способ лечения патологического синдрома, обусловленного нарушением кроветворения
RU2201255C1 (ru) 2001-12-26 2003-03-27 Эпштейн Олег Ильич Лекарственное средство и способ регуляции сосудистого тонуса
RU2199345C1 (ru) 2001-12-26 2003-02-27 Эпштейн Олег Ильич Лекарственное средство и способ регуляции углеводного и жирового обмена
UA76638C2 (en) 2002-08-02 2006-08-15 Oleh Illich Epshtein Homeopathic medication based on anti-interferon antibodies and method for treating a pathological syndrome associated with interferon
UA76640C2 (uk) 2002-08-02 2006-08-15 Олєг Ільіч Епштєйн Спосіб корекції патологічних імунних реакцій та гомеопатичний лікарський засіб
UA76639C2 (uk) 2002-08-02 2006-08-15 Олєг Ільіч Епштєйн Гомеопатичний лікарський засіб та спосіб лікування еректильних дисфункцій
UA76641C2 (uk) * 2002-08-02 2006-08-15 Олєг Ільіч Епштєйн Гомеопатичний лікарський засіб та спосіб лікування захворювань передміхурової залози
GB2414670B (en) 2003-03-14 2008-03-19 Nutrition Res Inc Homeopathic formulations useful for treating pain and/or inflammation
RU2253478C1 (ru) 2003-10-01 2005-06-10 Эпштейн Олег Ильич Средство для потенцирования лечебных эффектов - усиления действия лекарственного вещества
CA2554045A1 (en) 2004-01-20 2005-07-28 Astellas Pharma Inc. Method for treating erectile dysfunction
JP2008511593A (ja) 2004-09-03 2008-04-17 セーホーエル．ハンセン アクティーゼルスカブ 受容体リガンドを含む発酵乳又は植物性タンパク質及びその使用
RU2309732C1 (ru) 2006-03-13 2007-11-10 Олег Ильич Эпштейн Спрессованная твердая оральная форма лекарственного препарата и способ получения твердой оральной формы лекарственного препарата
AU2006341342B2 (en) 2006-04-04 2010-05-20 Dong-A Pharmaceutical.Co., Ltd. Agent for the prevention and treatment of prostatic hyperplasia comprising pyrazolopyrimidinone compound
EP2395021A1 (en) 2006-06-06 2011-12-14 Oleg Iliich Epshtein Medicinal agent for treating fatness, diabetes, and diseases associated with impaired glucose tolerance
RU2438707C2 (ru) 2006-06-06 2012-01-10 Олег Ильич Эпштейн Лекарственное средство для перорального лечения сахарного диабета и других заболеваний, сопровождающихся нарушением толерантности к глюкозе, и способ получения твердой лекарственной формы для пероральной терапии сахарного диабета и других заболеваний, сопровождающихся нарушением толерантности к глюкозе
KR100927958B1 (ko) 2006-07-13 2009-11-24 주식회사 머젠스 금속의 흡수를 촉진시키는 금속-산성아미노산 킬레이트를함유하는 조성물
GB0812019D0 (en) 2008-07-02 2008-08-06 Asterion Ltd Insulin
US20130189707A1 (en) 2010-01-26 2013-07-25 Svetlana Alexandrovna Sergeeva Method of determination of autoantibody level by means of enzyme immunoassay
BR112013000842A2 (pt) 2010-07-15 2016-06-07 Oleg Lliich Epshtein composições farmacêuticas, método de tratamento de condição de etiologia funcional do trato gastrointestinal e uso de forma potenciada ativada de anticorpo para a proteína s-100, de forma potenciada ativada de anticorpo para histamina e de forma potenciada ativada de anticorpo para a tnf-alfa.
SG187036A1 (en) 2010-07-15 2013-02-28 Oleg Iliich Epshtein Combination pharmaceutical composition and methods of treating genitourinary system disorders
BR112013000841A2 (pt) 2010-07-15 2016-06-07 Oleg Lliich Epshtein composições farmacêuticas, métodos de tratamento da obesidade e distúrbios metabólicos relacionados, de redução da massa corpórea de mamífero, do crescimento da massa corpórea de mamífero, do consumo de comida em mamífero, de trtamento de paciente de adicção de substância psicoativa, de adicção de substância psicoativa e uso de forma ativada-potencializada de anticorpo para receptor de canabinoide humano.
KR20140014059A (ko) * 2010-07-15 2014-02-05 올레그 일리치 엡쉬테인 활성화되고 강화된 형태의 항체의 효과를 증가시키는 방법
CN103154028A (zh) 2010-07-15 2013-06-12 奥列格·伊里奇·爱泼斯坦 复合药物组合物以及对神经退行性疾病相关的疾病或病症进行治疗的方法
US8703124B2 (en) 2010-07-15 2014-04-22 Oleg I. Epshtein Combination pharmaceutical composition and methods of treating diseases or conditions associated with the cardiovascular system
PH12013500141A1 (en) * 2010-07-21 2013-03-11 Oleg Lliich Epshtein Combination pharmaceutical compositions and method of treatment of vertigo, kinetosis and vegetative-vascular dystonia
MY160979A (en) * 2010-07-21 2017-03-31 Oleg Llich Epshtein A combination pharmaceutical composition and methods of treating diabetes and metabolic disorders
US20130058982A1 (en) * 2010-07-21 2013-03-07 Oleg Iliich Epshtein Method of treating Alzheimer's disease
MY158522A (en) 2010-07-21 2016-10-14 Epshtein Oleg Lliich Combination pharmaceutical composition and methods of treating diseases or conditions associated with respiratory diseases or condition
CA2805963A1 (en) * 2010-07-21 2012-01-26 Oleg Iliich Epshtein A method of treating attention deficit hyperactivity disorder
WO2012014078A2 (en) * 2010-07-21 2012-02-02 Olge Iliich Epshtein Method of treatment of organic diseases of nervous system, psychoorganic syndrome and encephalopathy
RU2535033C2 (ru) 2010-08-06 2014-12-10 Олег Ильич Эпштейн Лекарственное средство и способ профилактики инфицирования вич, профилактики и лечения заболеваний, вызываемых вич или ассоциированных с вич, в том числе спида
FR2963563A1 (fr) 2010-08-06 2012-02-10 Oleg Iliich Epshtein Composition pharmaceutique d'association et son utilisation dans des procedes pour traiter et prevenir les maladies infectieuses
US20120263725A1 (en) 2010-08-06 2012-10-18 Epshtein Oleg Iiiich Pharmaceutical composition and methods of treating and preventing the diseases caused by HIV or associated with HIV
RU2535034C2 (ru) 2010-08-06 2014-12-10 Олег Ильич Эпштейн Лекарственное средство и способ профилактики инфицирования вич, профилактики и лечения заболеваний, вызываемых вич или ассоциированных с вич, в том числе спида
RU2517084C2 (ru) 2010-08-06 2014-05-27 Олег Ильич Эпштейн Способ и средство для ингибирования продукции или усиления элиминации белка р24
US20130171161A1 (en) 2010-12-23 2013-07-04 Oleg Iliich Epshtein Method and composition for the treatment of diseases caused by or associated with hiv
JP5418549B2 (ja) * 2011-07-06 2014-02-19 アイシン精機株式会社 車両のドアアウタハンドル装置

Also Published As

Publication number Publication date
WO2012007845A3 (en) 2012-03-29
SG10201505561TA (en) 2015-08-28
CA2804966A1 (en) 2012-01-19
DE112011102358T5 (de) 2013-04-25
PH12013500107A1 (en) 2013-03-11
GB201302649D0 (en) 2013-04-03
ES2440393A2 (es) 2014-01-28
PE20130398A1 (es) 2013-04-10
EA201300126A1 (ru) 2013-12-30
ES2440393R1 (es) 2014-10-10
JP2013538186A (ja) 2013-10-10
US20160251448A1 (en) 2016-09-01
AU2011278038A1 (en) 2013-03-07
US20160244531A1 (en) 2016-08-25
WO2012007845A2 (en) 2012-01-19
EA030566B1 (ru) 2018-08-31
NO20130222A1 (no) 2013-03-22
ITTO20110639A1 (it) 2012-01-16
BR112013000840A2 (pt) 2016-06-07
JP2016216483A (ja) 2016-12-22
GB2495884A (en) 2013-04-24
SG187038A1 (en) 2013-02-28
US20140079696A1 (en) 2014-03-20
AU2011278038B2 (en) 2017-02-02
DK201370079A (en) 2013-02-14
KR20140014059A (ko) 2014-02-05
FR2962656A1 (fr) 2012-01-20
EE201300006A (et) 2013-08-15
AR082247A1 (es) 2012-11-21
MX2013000543A (es) 2013-10-28
NZ606767A (en) 2015-08-28
GB2495884B (en) 2017-05-31
US9308275B2 (en) 2016-04-12
LT5988B (lt) 2014-01-27
EP2593140A2 (en) 2013-05-22
LT2013016A (lt) 2013-11-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2011281248B2 (en) Combination pharmaceutical compositions and method of treatment of vertigo, kinetosis and vegetative-vascular dystonia
US20160251448A1 (en) Method of increasing the effect of an activated-potentiated form of an antibody
FR2962651A1 (fr) Composition pharmaceutique d&#39;association et son utilisation dans des procedes pour traiter les maladies ou affections fonctionnelles du tractus gastro-intestinal
US20130058982A1 (en) Method of treating Alzheimer&#39;s disease
MX2013000804A (es) Una composicion de combinacion farmaceutica y metodos para tratar la diabetes y los trastornos metabolicos.
CN103119061A (zh) 治疗注意力不足过动症的方法
MX2013000544A (es) Una composicion de combinacion farmaceutica y metodos de tratamiento de enfermedades o condiciones asociadas con el sistema cardiovascular.
RU2503462C2 (ru) Способ лечения головокружения различного генеза, кинетозов и вегето-сосудистой дистонии (варианты) и лекарственное средство
CN103108657A (zh) 提高活性强化形式的抗体的效果的方法
RU2542453C2 (ru) Лекарственное средство и способ лечения вегето-сосудистой дистонии, синдрома головокружения различного генеза и кинетозов
SE1350184A1 (sv) Förfarande för att öka effekten av en aktiverad, potentierad form av en antikropp
UA112753C2 (uk) Метод підвищення впливу активованої потенційованої форми антитіла