CZ2017634A3 - Supramolekulární komplex oxycelulózové matrice s platinovým metalokomplexem s postupným uvolňováním platinového metalokomplexu a jeho použití - Google Patents

Abstract

Předmětem řešení je supramolekulární komplex oxycelulózové matrice s platinovým metalokomplexem s postupným uvolňováním platinového metalokomplexu, který obsahuje 5 až 30 % hmotn. platinového metalo-komplexu, který je s výhodou cisplatina, nekovalentně vázaného na oxycelulózovou matrici, která je tvořena oxidovanými formami celulózy s vysokými terapeutickými účinky při topických vnitrotělových aplikací do reziduální nádorové tkáně po chirurgickém odstranění.

Description

Oblast techniky

Vynález se týká nových supramolekulámích komplexů oxycelulózových matric s protinádorovými léčivy na bázi platinových metalo-komplexů a jejich pooperační vnitrotělové aplikace pro eliminaci reziduálních nádorových buněk/tkáně po chirurgickém zákroku. Předložená metodika eliminuje riziko jak metastáz tak opakovaného růstu nádoru v původním místě.

Stav techniky

Komplikace při chirurgickém odstranění solidních tumorů jsou jak metastáze (pozdní diagnosa), tak neúplné odstranění tumoru. Obě vedou k následným komplikacím a často končí úmrtím pacienta. Obvyklá následná terapie zahrnuje ozařování, fotodynamickou terapii, cytostatickou léčbu s použitím jiných léčiv.

Metastázy, tedy šíření nemocných buněk z nádoru do celého těla, mohou podle odhadů až za 90 procent všech úmrtí spojených s rakovinou. Cílem je tak najít cestu, jak jejich šíření po těle omezit nebo mu zabránit úplně. Nová ložiska nádorů na dalších místech těla (často to bývají například plíce, játra nebo kosti) mají obvykle dvě nepříjemné vlastnosti - bývají agresivnější (rychleji rostou) a jsou hůře léčitelné.

V závislosti na typu a stadiu karcinomu obecně léčíme chirurgicky, pomocí chemoterapie nebo radioterapie. U každého pacienta připadá v úvahu jedna nebo kombinace více uvedených léčebných metod. Chemoterapie se používá jako systémová léčba, která postihuje nádorové buňky v celém těle a je možno ji aplikovat po chirurgickém odstranění nádorové tkáně za účelem zabránění vzniku metastáz. Tato léčba se nazývá doplňková neboli adjuvantní. Chemoterapii používáme také ke zmírnění příznaků nemoci, pokud nelze nádor chirurgicky odstranit a ke kontrole jeho růstu. Chemoterapii podáváme v cyklech, mezi jednotlivými sériemi následuje různě dlouhé období na zotavení.

V současné době byla vyvinuta řada účinných protinádorových léčiv. Nicméně velmi vážný problém jejich klinické aplikace jsou velmi silné nepříznivé vedlejší účinky. Jednou z možností jak daný problém řešit je jejich formulace pomocí vhodných excipientů. Tato strategie by mohla potencionálně zlepšit terapeutické vlastnosti řady používaných protinádorových léčiv. Systémy pro cílený transport léčiv s řízeným uvolňováním a účinkem léčiva představují velmi slibné látky pro současnou farmakoterapii. Cílem jejich aplikace je dosáhnout použití správného množství léčiva, ve správném čase a na správném místě. Mají schopnost přivést léčivo v nezměněné podobě na místo jeho účinku při snížené distribuci do nežádoucích částí organizmu. Cílením léčiva na místo interakce se snižuje jeho podaná dávka a s tím nežádoucí vedlejší účinky. Vzniká tak možnost aplikace vysoce účinných léčiv, ale s velmi nízkou rozpustností jakou jsou taxolové deriváty (např. docetaxel) a tudíž omezenou aplikovatelností nebo s vysokými vedlejšími účinky jako jsou antracykliny (např. doxorubicin) nebo platinové metalokomplexy. Docetaxel (L01CD02) a doxorubucin (L01DB01) patří mezi velmi intenzivně studovaná léčiva pro tyto aplikace. Jejich vhodná formulace by mimo jiné umožnila jejich šetrnější podávání v případě docetaxelu a cisplatiny a podstatnou redukci kardiotoxicity doxorubicinu.

V současné době patří mezi nejvíce perspektivní excipienty pro formulaci protinádorových léčiv polysacharidové polymery např. oxycelulóza. Aktivní látka jev nich přítomna jako disperze v polymemí matrici, nebo lépe jako komplexované léčivo polymemí matricí. Jejich aplikace vede k snadnější kontrole hladiny léčiva krvi a tím i jeho efektivnějšímu dávkovaní oproti podání

- 1 CZ 2017 - 634 A3 volného léčiva. Na bázi polysacharidových polymerů, včetně oxyceulózy byla připravena a studována celá řada slibných excipientů včetně multifůkčních (někdy zvaných smart excipients). Potencionální výhoda vhodně aplikovaných polymemích excipientů např. polysacharidových by mohla být také snadnější kontrola vstupu léčiva do cílové nádorové buňky.

Oxidovaná celulóza (Oxycelulóza, Okcel) je známa jako vysoce slibná látka pro nejrůznější farmaceutické a medicínské aplikace. Oxycelulóza vykazuje vysokou biokompatibilitu a biodegradovatelnost za fyziologických podmínek vedoucí k netoxickým produktům. Oxycelulóza je dlouhodobě studována a používána v medicíně pro podporu krevní srážlivosti, jako prevence pro adhezi tkání po chirurgickém zákroku, pro zlepšení hojení chronickým ran, modulace imunitního systému a pro své protinádorové účinky.

(Jan Gajdziok, David Vetchý Oxidized Cellulose and its Pharmatetical and Medical Application Cellulose and Cellulose Derivarives Syntheses, Modification and Applications Nova Science Publishers, lne New York 2015; Schmidt, R., Bogan, D., Moore, J. (2001). Use of oxidized cellulose as free radical scavenger. European Patent EP1153618; Watt, P. W., Harvey, W., Lorimer, E., Wiseman, D. (1998). Use of oxidized cellulose and complexes thereof for chronic wound healing. World Patent W09800180. ; Jelínková, M., Briestenský, J., Santar, I., Říhová, B. (2002). In vitro and in vivo immunomodulatory effects of microdispersed oxidized cellulose. Int. Immunopharmacol. 2 (10), 1429-1441; Santar, I., Kiss, F., Briestenský, J. (1998). Cellulose derivatives. World Patent WO9833822; Dimitrijevich, S. D., Tatarko, M., Gracy, R. W. (1990). Biodegradation of oxidized regenerated, cellulose. Carbohydr. Res. 195 (2), 247-256; Dimitrijevich, S. D., Tatarko, M., Gracy, R. W., Wise, G. E., Oakford, L. X. (1990). In vivo degradation of oxidized, regenerated cellulose. Carbohydr. Res. 198 (2), 331-341; Bankéř, S. G., Kumar, V. (1995). Microfibrillated oxycellulose. United States Patent US5405953; Otterlei, M., Espvik, T, Skjak-Braek, G., Smidsrod, O. (1992) Diequatorially bound beta 1-4 polyuronates and use of same for cytokine stimulation. United States Patent US5169840; Doyle P. J., Saferstein L·, Lorimer E., WattP. W. (1998). Oxidized Oligosaccharides. World Patent W09800446; Bajerová, M., Krejčová, K, Rabišková, M., Gajdziok, J., Masteiková, R. (2009). Oxycellulose - significant characteristics in relation to its pharmaceutical and medical applications. Adv. Polym. Těch. 28(3), 199-208; Bankéř, G. S., Kumar, V. (1998) Oxidized cellulose. United States Patent US5780618), (Leidgens V, Seliger C, Jachnik B, Welz T, Leukel P, Vollmann-Zwerenz 1, Bogdahn U, Kreutz M, Grauer OM, Hau P Ibuprofen and Diclofenac Restrict Migration and Proliferation of Human Glioma Cells by Distinct Molecular Mechanisms. PLoS One. 2015 Oct 20;10(10):e0140613; Chai AC, Robinson AL, Chai KX, Chen EM. Ibuprofen regulates the expression andfunction of membrane-associated serine proteases prostasin and matriptase BMC Cancer. 2015 Dec 29;15:1025. doi: 10.1186/sl2885-015-2039-6; da Silveira EF1, Chassot JM, Teixeira FC, Azambuja JH, Debom G, Beira FT, Del Pino FA, kourenco A, Horn AP, Cruz L, Spanevello RM, Braganhol E. Ketoprofen-loaded polymeric nanocapsules selectively inhibit cancer cell growth in vitro and in preclinical model of glioblastoma multiforme Invest New Drugs. 2013 Dec;31(6):1424-35. doi: 10.1007/sl0637-013-0016-y. Epub 2013 Sep 27; Damnjanovic I, Najman S, Stojanovic S, Stojanovic D, Veljkovic A, Kocic H, Langerholc T, Damnjanovic Z, Pesic S. Crosstalk between possible cytostatic and antiinflammatory potential of ketoprofen in the treatment of culture of colon and cervix cancer cell lineš Bratisl Lek Listy. 2015;116(4):227-32), Kněžková, Barbora. Moderní protinádorová léčiva. 2008. PhD Thesis. Masarykova univerzita, Přírodovědecká fakulta.

Aplikace oxycelulózových derivátů pro cílený transport léčiv byli popsány v jejich kombinaci s magnetickými nanočásticemi (Sivakumar, Balasubramanian; Aswathy, Ravindran Girija; Nagaoka, Yutaka; Suzuki, Masashi; Fukuda, Takahiro; Yoshida, Yasuhiko; Maekawa, Toru; Sakthikumar, Dasappan Nair Multifunctional Carboxymethyl Cellulose-Based Magnetic Nanovector as a Theragnostic Systém for Folate Receptor Targeted Chemotherapy, Imaging, and Hyperthermia against Cancer Langmuir (2013), 29(10), 3453-3466), nebo jejich kombinaci s chitosanem a magnetickými nanočásticemi (Synthesis, characterization and in vitro assessment of the magnetic chitosan-carboxymethylcellulose biocomposite interactions with the prokaryotic

-2CZ 2017 - 634 A3 and eukaryotic cells Grumezescu, Alexandru Mihai; Andronescu, Ecaterina; Ficai, Anton; Bleotu, Coralia; Mihaiescu, Dan Eduard; Chifiriuc, Mariana Carmen International Journal of Pharmaceutics (Amsterdam, Netherlands) (2012), 436(1-2), 771-777), nebo kombinaci oxycelulózy s nanočásticemi, či její konjugáty s léčivy (Soo, B. Chia; Ting, Kang; Wu, Ben; Zhang, Kevin Transcutaneous multimodal delivery systems comprising dissolvable microneedles PCT Int. Appl. (2012), WO 2012103257 A2 20120802), nebo její kombinaci s chitosanem (Viieira, D. B.; Kim, V.; Petři, D. F. S.; Menck, C. F. M.; Carmona-Ribeiro, A. M.Edited By:Laudon, Matthew; Romanowicz, Bart Polymer-based delivery vehicle for cisplatin Nanotech Conference & Expo 2011: An Interdisciplinary Integrative Fórum on Nanotechnology, Biotechnology and Microtechnology, Boston, MA, United States, June 13-16, 2011 (2011), 3, 382-385), nebo aplikace oxycelulózového hydrogelu pro uvolňování léčiv pro léčbu močových cest (Konorty, Marina; Hakim, Gil Mucoadhesive thermoreversible topical hydrogels and method for treating intemal cavities U.S. Pat. Appl. Publ. (2014), US 20140105884 AI 20140417)

Patentový dokument WO 2007147052 popisuje farmaceutickou kompozici pro topické použití tvořenou filmem z celulózy’ nebo jejich derivátů, obsahující biologicky aktivní činidlo v přesyceném stavu, kterým je např. terbinafin, naftifin, amorolfin, butenafin, jejich deriváty, acyklovir, nepolymemí inhibitor krystalizace - hydroxykarboxylovou kyselinu, těkavé rozpouštědlo; Kompozice je určena pro antifugální léčbu, pro léčbu nebo prevenci varicella zoster infekce HSV-I infekce nebo HSV-2 infekce, nebo prevenci onychomykózy.

Vynález CN 1843332 A popisuje protinádorové injekce s prodlouženým uvolňováním obsahující angiogenezní inhibitory a cytotoxická činidla, které sestávají z mikrokuliček obsahujících protinádorové účinné látky 0,5 až 60%, pomocné látky s prodlouženým uvolňováním 40 až 99% jako je kyselina polymléčná; kopolymeru kyseliny polyglykolové a kyseliny glykolové; polifeprosan; ethylen-vinylacetátu; di-mastná kyselina a kopolymer kyseliny sebakové; póly (erukové dimer kyseliny - kyselina sebaková) kopolymer; póly (kyselina fúmarová - kopolymer kyseliny sebakové). Suspendační činidla 0.0-30%: sodné soli karboxymethylcelulózy, jodu glycerin, dimethikon, propylenglykol, karbomer, mannitol, sorbitol, povrchově aktivní látky, jeden z Tween 20, Tween 40 a Tween 80, nebo jejich kombinace,inhibitor je vybrán z gefitinib, erlotinib, lapatinib, karboxy-amino-triazolu, thalidomid, angiostatin, endostatin, endostatin, imatinib mesylát, kanamycin, erlotinib, sorafenib, imatinib. Cytotoxické činidlo se vybralo z platiny Nida, melfalan, cyklofosfamid, 4H peroxid vinorelbin, tamoxifen, metotrexát, doxorubicin, epirubicin, aktinomycin D, estramustin, semustin nebo ranimustin.

Přihláška vynálezu EP1491188 AI popisuje farmaceutický prostředek pro prevenci nebo léčbu kožních poruch s obsahem alespoň 0,1 % účinné látky, tvořené VPA a nebo jejich solí, která obsahuje také chemoterapeutické léčivo, kterým je 5-fluorouracil a dále obsahuje nosiče ve formě krémů, mastí, past a gelů. Přípravku má být použito pro léčbu kožních nádorů, preneoplastických kožních onemocnění, zánětů kůže a / nebo sliznice a photoaging.

Výběžky nádoru do okolní tkáně a jeho složitá topologie v praxi téměř znemožňují chirurgické odstranění celého nádoru. Následná chemoterapie nebo systémové podávání léčiv je často neúčinné, jelikož koncentrace léčiva v místě původního nádoru je příliš nízká.

Podstata vynálezu

Kvůli málo účinné postoperační léčbě reziduální nádorové tkáně byly vyvinuty nové postupy aplikace cytotoxického léčiva, na bázi platinových metalo-komplexů, nekovalentně vázaného na oxycelulózovou matrici, a to topicky přímo do rány po odstranění tumoru.

-3 CZ 2017 - 634 A3

Vynález se týká nové metody topické vnitrotělové aplikace stabilních supra-molekulámích komplexů oxycelulózových matric s platinovými metalo-komplexy - cytostatiky, jako je s výhodou Cisplatina, Karboplatina nebo Oxaliplatina.

Byla vytvořena kompozice pro pooperační vnitrotělové topické aplikace sestávající z modifikované oxycelulózy a platinových metalo-komplexů pro eliminaci nádorové tkáně/buněk po chirurgickém zákroku. Kompozice umožňuje řízené postupné uvolňování léčiva v nádoru nebo jeho reziduí a tím vede k eliminaci zbytkové nádorové tkáně a zabraňuje jejímu rapidnímu nárůstu po klasickém i laparoskopickém zákroku.

Kompozice je tvořena supra-molekulámími komplexy oxycelulózových matric s výhodou ve formě HD, HL a CaL s platinovými metalo-komplexy s výhodou s cisplatinou (cis-Pt).

Oxycelulózová matrice CaL je prášková forma vápenaté soli oxidované celulózy, je organismem dobře snášena a rychle se vstřebává, HD je pletená verze vstřebatelného hemostatického materiálu oxidované celulózy v textilní formě a HL je lintrová kyselá forma oxidované celulózy ve formě prášku který je nerozpustný ve vodě. V lidském těle se oxycelulózové matrice vstřebávají bez jakýchkoli zbytků, jsou biologicky odbouratelné, v průběhu rozkladu vznikají netoxické produkty a jsou plně biokompatibilní. Díky nízkému pH působí antibakteriálně. Pomáhají s regenerací tkáně, tedy i se zvýšením léčebných účinků.

Platinové komplexy jsou jedním z nejúčinnějších a nejběžněji používaných cytostatik v léčbě řady karcinomů, zejména karcinomů varlat, ovaria, hlavy, krku, močového měchýře a malobuněčného karcinomu plic. Jedná se o jednoduchou anorganickou sloučeninu [cisPt(NH₃)2Cl₂], tedy cis-diamino-dichlor platnatý komplex, řadící se mezi tzv. alkylační cytostatika. Chloridové ligandy mohou být nahrazovány za karboxyláty (karboplatina, oxaliplatina), character ligandu ovlivňuje lipofilitu a distribuci léčiva v organismu (iproplatina). Hlavní mechanismus protinádorového účinku cisplatiny spočívá v její interakci s DNA a v tvorbě kovalentních vazeb mezi cytostatikem a purinovými bázemi, nejčastěji s guaninem. Vzniklé kovalentní vazby mezi řetězci brání jejich separaci při replikaci a zároveň dochází k inhibici transkripce. Tím cisplatina indukuje apoptózu. Přesto, že je cisplatina jedním z nejčastěji používaných cytostatik, její použití je limitováno kvůli vysoké toxicitě.

Karboplatina je méně toxická, než cisplatina. Mechanismus účinkuje stejný jako u cisplatiny, aktivace molekuly je však pomalejší. Oproti cisplatině má mírnější nežádoucí účinky, avšak přispívá k poškození kostní dřeně a je vysoce hematotoxická.

Oxaliplatina má nízkou nefrotoxicitu, vyvolává ale časté nevolnosti, průjmy a zvracení, u léčených pacient způsobuje periferní neuropatii senzitivních nervů.

V případě platinových metalo-komplexů je proces přípravy supra-molekulámího komplexu založen na aktivaci absorpční schopnosti oxycelulózové matrice ponořením do vody a následném přidání roztoku rozpouštědla obsahujícího dané léčivo. Rozpouštědlo je vybráno ze skupiny obsahující methanol, etanol, isopropanol, 2-methoxyethanol, /V,/V-cli methyl lornianiid, dimethylsulfoxid, tetrahydrofuran, acetonitril, aceton nebo jejich směs a jako další voda. Dané míšení je kontrolované prováděno tak, aby léčivo obsažené v rozpouštědle zůstalo rozpuštěné i ve vzniklé směsi vody případně s daným organickým rozpouštědlem. Následně jsou vodné systémy s organickým rozpouštědlem obsahující oxycelulózovou matrici a dané léčivo třepány s výhodou po dobu 24 hodin. Poté je modifikovaná matrice, tedy s nekovalentně vázaným léčivem, izolovaná pomocí filtrace, následně promyta použitým rozpouštědlovým systém a nakonec vakuově sušena. Celý proces přípravy je kontrolované prováděn tak, aby teplota oxycelulózových matric nebo jejich roztoků nebyla vyšší než 20 °C.

Připravené kompozice sestávají z supramolekulámích struktur oxycelulózových matric a platinových metalo-komplexů, přičemž platinové metalo-komplexy jsou v matrici v množství 5

-4CZ 2017 - 634 A3 až 30 % hm. Ze strukturních analýz vyplynulo, že platinové metalo-komplexy jsou skutečně nedílnou součástí oxycelulózové matrice a nejedná se tedy o pouhou mechanickou směs, ale supramolekulámí strukturu. Také byly ověřeny vysoké stability vytvořených struktur, což dokazuje, že k uvolnění cytotoxických platinových metalo-komplexů nedochází předčasně do okolní zdravé tkáně. Dále byla ověřena zvýšená průchodnost přes simulované biologické membrány oproti průchodnosti samotných platinových metalo-komplexů, což je přisuzováno právě supra-molekulámí struktuře a zvyšuje se efektivita transportu léčiva přímo dovnitř nádorové tkáně.

Pro celulózové matrice jsou známy dva základní mechanismy uvolňování léčiv. Ve vodném prostředí se nejprve matrice zvlhčí vodou, čímž dojde k uvolnění počáteční koncentrace rozpuštěného léčiva z povrchu matrice. Díky této gelové vrstvě může voda z matrice uvolňovat léčivo, aniž by došlo k jejímu rozrušení (preferováno hydrofilními léčivy). V následné fázi dojde k hydrataci povrchu matrice, zvýšení pohyblivosti polymerových řetězců a vzniku nabobtnalého gelu. Další fázi dochází k rozvolnění polymerových řetězců a jejich uvolnění do okolí. Na novém povrchu matrice vznikne další gelová vrstva a celý proces se opakuje až do jejího zániku (preferováno pro hydrofobní léčiva). V případě omezeně rozpustných léčiv se na jejich uvolnění z matrice podílejí oba mechanismy. Na daný proces má velký vliv stabilita použité matrice. V případě stabilnějších matric bude preferováno vymývání léčiva. Naproti tomu v případě méně stabilních matric dojde k uvolnění většiny vázaného léčiva již během rozpadu samotné matrice. Dochází tedy k postupnému uvolňování léčiva z modifikované oxycelulózy a to pouze v místě po vyoperovaném nádoru, čímž se rapidně snižují nežádoucí účinky použitých cytostatik.

Bylo prokázáno, že při standardních testech za podmínek 25 °C ± 2 °C a relativní vlhkosti 60 % ± 5 % i při zrychlených testech (podmínky 40 °C ± 2 °C/75 % RV ± 5 % RV) jsou připravené komplexy modifikovaných celulózových matric stabilní po dobu nejméně 6 měsíců.

K výhodnosti vnitrotělové topické aplikace bylo dospěno až na základě řady experimentů, kdy byly prováděny preklinické testy na myších nu-nu modelech po odstranění nádorové tkáně karcinomu prsu a karcinomu pankreatu a následné aplikaci kompozice jak orálně, v každodenních dávkách, tak jednorázově topicky přímo do místa po vyoperovaném nádoru ve stejné dávce. Porovnání aplikace ve formě orální a vnitrotělové topické pooperační aplikace prokázal výhodnost topické aplikace, protože orální aplikace byla spojena s mortalitou o 9-33 % vyšší a především pozorovaný nárůst velikosti tumoru byl o 34 až 70 % vyšší.

Bylo zjištěno, že supermolekulámí komplex oxycelulóz s cisplatinou při vnitrotělové topické aplikaci má schopnost inhibovat nárůst karcinomu prsu a pankreatu až na 29 % oproti pouze chirurgické léčbě a na 56 % oproti chirurgické léčbě s následným podáním samotné cisplatiny. Také mortalita pokusných myší při vnitrotělové topické aplikaci komplexu byla o 18 až 37 % nižší oproti podání samotné cisplatiny.

Teprve na základě těchto výsledků bylo dospěno k závěrům použití pouze vnitrotělové topické aplikace platinových metalo-komplexů a pouze ve formě supramolekulámích oxycelulózových struktur, které byly prokázány jako nej šetrnější a nejúčinnější.

Přehled obrázků na výkresech

Obr. 1. Tabulka přehledu navážek cisplatiny vzhledem k navážkám oxycelulózy, procentuální obsah léčiva v oxycelulóze a loading léčiva do oxycelulózy, kdy jako rozpouštědlo byla použita směs EtOH/voda (1:1, V/V)

Obr. 2. Tabulka přehledu navážek cisplatiny vzhledem k navážkám oxycelulózy, procentuální obsah léčiva v oxycelulóze a loading léčiva do oxycelulózy, kdy jako rozpouštědlo byla použita voda

-5 CZ 2017 - 634 A3

Obr. 3.

Obr. 4.

Obr. 5.

Obr. 6.

Obr. 7.

Obr. 8.

Obr. 9.

Obr. 10.

Obr. 11.

Obr. 12.

Obr. 13.

Obr. 14.

Obr. 15.

Obr. 16.

Tabulka přehledu navážek cisplatiny vzhledem k navážkám oxycelulózy, procentuální obsah léčiva v oxycelulóze a loading léčiva do oxycelulózy, kdy jako rozpouštědlo byla použita směs aceton/voda (1:1, V/V)

Porovnání Ramanových spekter pro modifikovanou oxycelulosu HL cisplatinou („CisPt-voda“, obsah 5 hm. % cisplatiny), čistého léčiva („cisplatina“) a nemodifikované oxycelulózy („HL“)

Porovnání Ramanových spekter pro modifikovanou oxycelulosu HL cisplatinou („CisPt-voda/EtOH“, obsah 5 hm. % cisplatiny), čistého léčiva („cisplatina“) a nemodifikované oxycelulózy („HL“)

Porovnání Ramanových spekter pro modifikovanou oxycelulosu HL cisplatinou („CisPt-voda/Acet.“, obsah 5 hm. % cisplatiny), čistého léčiva („cisplatina“) a nemodifikované oxycelulózy („HL“)

Porovnání Ramanových spekter pro modifikovanou oxycelulosu HL cisplatinou („CisPt-voda/THF“, obsah 5 hm. % cisplatiny), čistého léčiva („cisplatina“) a nemodifikované oxycelulózy („HL“)

Porovnání Ramanových spekter pro modifikovanou oxycelulosu HD cisplatinou („CisPt-voda“, obsah 5 hm. % cisplatiny), čistého léčiva („cisplatina“) a nemodifikované oxycelulózy („HD“)

Porovnání Ramanových spekter pro modifikovanou oxycelulosu HD cisplatinou („CisPt-voda/EtOH“, obsah 5 hm. % cisplatiny), čistého léčiva („cisplatina“) a nemodifikované oxycelulózy („HD“)

Porovnání Ramanových spekter pro modifikovanou oxycelulosu HD cisplatinou („CisPt-voda/Acet.“, obsah 5 hm. % cisplatiny), čistého léčiva („cisplatina“) a nemodifikované oxycelulózy („HD“)

Porovnání Ramanových spekter pro modifikovanou oxycelulosu HD cisplatinou („CisPt-voda/THF“, obsah 5 hm. % cisplatiny), čistého léčiva („cisplatina“) a nemodifikované oxycelulózy („HD“)

Porovnání Ramanových spekter pro modifikovanou oxycelulosu CaL cisplatinou („CisPt-voda“, obsah 5 hm. % cisplatiny), čistého léčiva („cisplatina“) a nemodifikované oxycelulózy („CaL“)

Porovnání Ramanových spekter pro modifikovanou oxycelulosu CaL cisplatinou („CisPt-voda/EtOH“, obsah 5 hm. % cisplatiny), čistého léčiva („cisplatina“) a nemodifikované oxycelulózy („CaL“)

Porovnání Ramanových spekter pro modifikovanou oxycelulosu CaL cisplatinou („CisPt-voda/Acet.“, obsah 5 hm. % cisplatiny), čistého léčiva („cisplatina“) a nemodifikované oxycelulózy („CaL“)

Porovnání Ramanových spekter pro modifikovanou oxycelulosu CaL cisplatinou („CisPt-voda/THF“, obsah 5 hm. % cisplatiny), čistého léčiva („cisplatina“) a nemodifikované oxycelulózy („CaL“)

Vnitrotělová topická aplikace supramolekulámích komplexů oxycelulózových matric s cisplatinou po chirurgické léčbě nu-nu myší s PATU lidský karcinomem pankreatu

-6CZ 2017 - 634 A3

Obr. 17. Orální aplikace supramolekulámích komplexů oxycelulózových matric s cisplatinou po chirurgické léčbě nu-nu myší s PATU lidský karcinomem pankreatu

Obr. 18. Vnitrotělová topická aplikace supramolekulámích komplexů oxycelulózových matric s cisplatinou po chirurgické léčbě nu-nu myší s BT-474 lidský karcinomem prsu

Obr. 19. Orální aplikace supramolekulámích komplexů oxycelulózových matric s cisplatinou po chirurgické léčbě nu-nu myší s BT-474 lidský karcinomem prsu a její porovnání se samotnou cisplatinou a oxycelulózových matric

Obr. 20. In vitro studie mortality nádorových buněk tkáňových kultur působením samotné cisplatiny v porovnání s jejich oxycelulózovým komplexem

Obr. 21. Výsledky elementární analýzy modifikované celulózy (CaL, HL a HD) cisplatinou (5 hm. %) pro různé rozpouštědlové systémy

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Příprava a charakterizace supra-molekulámích komplexů oxycelulózových matric (HD, HL a CaL) s cisplatinou

Příklad 1A

Použití rozpouštědla ethanol/voda (1:1. V/V) mg cisplatiny bylo rozpuštěno ve směsi ethanol/voda (1:1, V/V; 5 ml) a přidáno k oxycelulóze (HL, HD nebo CaL) (100 mg). Po 24 hodinách třepání při teplotě 20 °C byla modifikovaná oxycelulóza odfiltrována, promyta směsí ethanol/voda (1:1, V/V; 3 ml), vodou (3 ml) a následně vysušena za vysokého vakua při teplotě 20 °C. Elementární analýzou bylo stanoveno, že na oxycelulózu bylo navázáno přibližně 5 % cisplatiny s přesnými hodnotami hmotnostních koncentrací dle obr. 1.

mg cisplatiny bylo rozpuštěno ve směsi ethanol/voda (1:1, V/V; 5 ml) a přidáno k oxycelulóze (HL, HD nebo CaL) (100 mg). Po 24 hodinách třepání při teplotě 20 °C byla modifikovaná oxycelulóza odfiltrována, promyta směsí ethanol/voda (1:1, V/V; 3 ml), vodou (3 ml) a následně vysušena za vysokého vakua při teplotě 20 °C. Elementární analýzou bylo stanoveno, že na oxycelulózu bylo navázáno přibližně 9,5 % cisplatiny s přesnými hodnotami hmotnostních koncentrací dle obr. 1.

mg cisplatiny bylo rozpuštěno ve směsi ethanol/voda (1:1, V/V; 5 ml) a přidáno k oxycelulóze (HL, HD nebo CaL) (100 mg). Po 36 hodinách třepání při teplotě 19 °C byla modifikovaná oxycelulóza odfiltrována, promyta směsí ethanol/voda (1:1, V/V; 3 ml), vodou (3 ml) a následně vysušena za vysokého vakua při teplotě 19 °C. Elementární analýzou bylo stanoveno, že na oxycelulózu bylo navázáno přibližně 28 % cisplatiny s přesnými hodnotami hmotnostních koncentrací dle obr. 1.

Pro takto připravené modifikované oxycelulózy byla změřena jejich Ramanova spektra a porovnána se spektrem čisté cisplatiny a nemodifikované oxycelulózy. Porovnáním pozice píků a jejich poměru intensit modifikovaných oxycelulóz, samotného cisplatiny a nemodifikovaných oxycelulóz, lze usoudit, že účinná látka cisplatiny není vázána čistě fyzikální absorpcí, ale tvoří inklusní komplex s danou matricí.

-7 CZ 2017 - 634 A3

Během rozpadu celulózových matric dochází k uvolňování jednotlivých vláken do roztoku. Daný jev se projeví změnou absorpčního spektra oproti spektru naměřenému v čase to. Pokud nejsou v daném čase pozorovaný významné změny oproti to , lze danou matrici považovat v tomto čase za stabilní. Stabilita testovaných matric je dostatečně velká pro uplatnění obou mechanismů uvolňování léčiv. Kompletní uvolnění léčiva v organismu lze očekávat do jednoho měsíce po aplikaci oxycelulózy do organismu.

Příklad 1B

Použití rozpouštědla voda mg cisplatiny bylo rozpuštěno ve vodě 5 ml a přidáno k oxycelulóze (HL, HD nebo CaL) (100 mg). Po 24 hodinách třepání při teplotě 20 °C byla modifikovaná oxycelulóza odfiltrována, promyta vodou vodou (6 ml) a následně vysušena za vysokého vakua při teplotě 20 °C. Elementární analýzou bylo stanoveno, že na oxycelulózu bylo navázáno přibližně 4 % cisplatiny s přesnými hodnotami hmotnostních koncentrací dle obr. 2.

mg cisplatiny bylo rozpuštěno ve vodě 5 ml a přidáno k oxycelulóze (HL, HD nebo CaL) (100 mg). Po 24 hodinách třepání při teplotě 20 °C byla modifikovaná oxycelulóza odfiltrována, promyta vodou (6 ml) a následně vysušena za vysokého vakua při teplotě 20 °C. Elementární analýzou bylo stanoveno, že na oxycelulózu bylo navázáno přibližně 8,5 % cisplatiny s přesnými hodnotami hmotnostních koncentrací dle obr. 2.

mg cisplatiny bylo rozpuštěno ve vodě 5 ml a přidáno k oxycelulóze (HL, HD nebo CaL) (100 mg). Po 36 hodinách třepání při teplotě 19 °C byla modifikovaná oxycelulóza odfiltrována, promyta vodou (6 ml) a následně vysušena za vysokého vakua při teplotě 19 °C. Elementární analýzou bylo stanoveno, že na oxycelulózu bylo navázáno přibližně 26 % cisplatiny s přesnými hodnotami hmotnostních koncentrací dle obr. 2.

Pro takto připravené modifikované oxycelulózy byla změřena jejich Ramanova spektra a porovnána se spektrem čisté cisplatiny a nemodifikované oxycelulózy. Porovnáním pozice píků a jejich poměru intensit modifikovaných oxycelulóz, samotné cisplatiny a nemodifikovaných oxycelulóz, lze usoudit, že účinná látka cisplatiny není vázána čistě lyzikální absorpcí, ale tvoří inklusní komplex s danou matricí.

Příklad 1C

Použití rozpouštědla acetomvoda (1:1. V/V) mg cisplatiny bylo rozpuštěno ve směsi aceton/voda (1:1, V/V; 5 ml) a přidáno k oxycelulóze (HL, HD nebo CaL) (100 mg). Po 24 hodinách třepání při teplotě 20 °C byla modifikovaná oxycelulóza odfiltrována, promyta směsí aceton/voda (1:1, V/V; 3 ml), vodou (3 ml) a následně vysušena za vysokého vakua při teplotě 20 °C. Elementární analýzou bylo stanoveno, že na oxycelulózu bylo navázáno přibližně 5 % cisplatiny s přesnými hodnotami hmotnostních koncentrací dle obr. 3.

mg cisplatiny bylo rozpuštěno ve směsi aceton/voda (1:1, V/V; 5 ml) a přidáno k oxycelulóze (HL, HD nebo CaL) (100 mg). Po 24 hodinách třepání při teplotě 20 °C byla modifikovaná oxycelulóza odfiltrována, promyta směsí aceton/voda (1:1, V/V; 3 ml), vodou (3 ml) a následně vysušena za vysokého vakua při teplotě 20 °C. Elementární analýzou bylo stanoveno, že na oxycelulózu bylo navázáno přibližně 10 % cisplatiny s přesnými hodnotami hmotnostních koncentrací dle obr. 3.

-8CZ 2017 - 634 A3 mg cisplatiny bylo rozpuštěno ve směsi aceton/voda (1:1, V/V; 5 ml) a přidáno k oxycelulóze (HL, HD nebo CaL) (100 mg). Po 36 hodinách třepání při teplotě 19 °C byla modifikovaná oxycelulóza odfiltrována, promyta směsí aceton/voda (1:1, V/V; 3 ml), vodou (3 ml) a následně vysušena za vysokého vakua při teplotě 19 °C. Elementární analýzou bylo stanoveno, že na oxycelulózu bylo navázáno přibližně 30 % cisplatiny s přesnými hodnotami hmotnostních koncentrací dle obr. 3.

Pro takto připravené modifikované oxycelulózy byla změřena jejich Ramanova spektra a porovnána se spektrem čisté cisplatiny a nemodifikované oxycelulózy. Porovnáním pozice píků a jejich poměru intensit modifikovaných oxycelulóz, samotné cisplatiny a nemodifikovaných oxycelulóz v různých rozpouštědlech, lze usoudit, že účinná látka cisplatiny není vázána čistě fyzikální absorpcí, ale tvoří inklusní komplex s danou matricí.

Příklad 2

Příprava Nu-nu myší s lidským karcinomem a následná chirurgická léčba.

Holé imunodeficientní myši postrádají T-lymfocyty v důsledku absence brzlíku, takže nemohou vytvořit imunologickou odezvu na cizí tkáně. Proto je možná xenotransplantace buněk lidského karcinomu.

Buněčné rakovinné linie (lidský nádor prsu - BT-474, slinivky - PATU) byly vytvořeny transfekcí buněk. Buňky karcinomu prsu a slinivky byly udržovány v T-mediu doplněném 5% fetálním bovinním sérem. Všechny buňky byly udržovány při 5 % CO2 (V/V) při 37 °C ve zvlhčené atmosféře. Všechny experimenty byly prováděny na buňkách v exponenciální růstové fázi.

Podkožní implantace buněk lidského karcinomu do boků imunodeficientních nahých nu-nu myší (Samice, bezthymové, věk 6 týdnů, váha 18-20 g). Nádorové buňky (lxlO⁷) byly resuspendovány v 0.1 ml PBS a 0.1 ml Matrigelu (BD Biosciences) a aplikovány podkožně do boku myší pomocí inzulínové stříkačky a jehly velikosti 27.

Jakmile dosáhla nádorová masa velikosti cca 200 mm³ (cca 10 dní po transplantaci, odpovídá 0,1-0,2 g nádorové tkáně), bylo zahájeno operativní chirurgické odstranění nádoru z 95-97 % a měření velikosti nádorů.

Příklad 3

Aplikace supramolekulámích komplexů oxycelulózových matric s cisplatinou po chirurgické léčbě nu-nu myší s PATU lidský karcinomem pankreatu

Příklad 3 A

Vnitrotělová topická aplikace

Imunodeficientní holé nu-nu myši, připravené a chirurgicky léčené dle příkladu 2, tedy s odstraněným nádorem pankreatu byly rozděleny do 10 experimentů po 6 myších. Skupina A tvořila 2 experimenty, byla jako kontrolní bez jakékoli další aplikace. Ostatním skupinám byly látky podány lokálně, ve formě prášku do místa vyoperovaného nádoru. Skupině B byla podána samotná cisplatina v množství 0,5 mg, tvořila také 2 experimenty, skupině C byla v experimentu 1 podána oxycelulóza HL a v experimentu 2 oxycelulóza CaL, vždy v množství 4,5 mg. Skupině

-9CZ 2017 - 634 A3

D6 byl ve dvou experimentech podán supermolekulámí komplex oxycelulózy CaL s cisplatinou a ve skupině D7 ve dvou experimentech podán supermolekulámí komplex oxycelulózy HL s cisplatinou, v množství 5 mg s 10 % hm. obsahem cisplatiny, což odpovídá množství samotné cisplatiny.

Následně byla velikost nádoru monitorována a měřena po 50 dnech po chirurgickém zákroku.

Byla sledována inhibice opětovného růstu nádoru v závislosti na podané látce. Byl vyhodnocen vliv lokální vnitrotělové topické aplikace supramolekulámích komplexů oxycelulózových matric s cytostatiky, samotnou oxycelulózou a samotnými cytostatiky na opětovný růst nádoru, resp. případnou eliminaci residuální nádorové tkáně. Výrazný terapeutický efekt byl pozorován pro topickou vnitrotělovou aplikaci oxycelulózových komplexů projevující se výrazně omezeným růstem nádoru. Tento přístup představuje významný přínos oproti kontrolním experimentům v konečném objemu nádoru. Změny ve velikosti tumoru byly použity pro stanovení protinádorové aktivity. Bylo zjištěno, že supermolekulámí komplex oxycelulóz s cisplatinou při vnitrotělové topické aplikaci má schopnost inhibovat nárůst karcinomu až na 46 % oproti pouze chirurgické léčbě a na 75 až 80 % oproti chirurgické léčbě s následným podáním samotné cisplatiny. Také mortalita pokusných myší při vnitrotělové topické aplikaci komplexu byla o 18-35 % nižší oproti podání samotné cisplatiny. Podrobné výsledky prezentuje tabulka na obr 16.

Příklad 3 B

Perorální aplikace

Imunodeficientní holé nu-nu myši, připravené a chirurgicky léčené dle příkladu 2, tedy s odstraněním nádoru pankreatu byly rozděleny do 5 experimentů po 3 myších. Skupina A byla jako kontrolní bez jakékoli další aplikace. Ostatním skupinám byly látky podávány orálně přímo do žaludku. Skupině B byla podávána samotná cisplatina v množství 0,5 mg, skupině C byla v experimentu 1 podána oxycelulóza HL a v experimentu 2 oxycelulóza CaL, vždy v množství 4,5 mg. Skupině D6 byl podáván supermolekulámí komplex oxycelulózy CaL s cisplatinou a ve skupině D7 podán supermolekulámí komplex oxycelulózy HL s cisplatinou, v množství 5 mg s 10 % hm. obsahem cisplatiny, což odpovídá množství samotné cisplatiny.

Velikost nádoru byla monitorována a měřena po 50 dnech po chirurgickém zákroku.

Byla sledována inhibice opětovného růstu nádoru především jako porovnání vůči vnitrotělové topické aplikaci.

Byl vyhodnocen vliv orální a vnitrotělové topické aplikace supramolekulámích komplexů oxycelulózových matric s cytostatiky, samotnou oxycelulózou a samotnými cytostatiky na opětovný růst nádoru, resp. případnou eliminaci residuální nádorové tkáně. Změny ve velikosti tumoru byly použity pro stanovení protinádorové aktivity. Bylo zjištěno, že supermolekulámí komplex oxycelulóz s cisplatinou při orální aplikaci má inhibici nárůstu karcinomu oproti pouze chirurgické léčbě 77 %. Mortalita komplexu při orálním podání byla poměrně značná a to 85-88 %. Podrobné výsledky prezentuje tabulka na obr. 17.

Porovnání aplikace ve formě orální a vnitrotělové topické pooperační aplikace prokázal výhodnost topické aplikace, protože orální aplikace byla spojena s mortalitou o 20-33 % vyšší a především pozorovaný nárůst velikosti tumoru byl cca 74 až 77% oproti kontrole.

Příklad 4

- 10CZ 2017 - 634 A3

Aplikace supramolekulámích komplexů oxycelulózových matric s cisplatinou po chirurgické léčbě nu-nu myší s BT-474 lidsky karcinomem prsu

Příklad 4 A

Vnitrotělová topická aplikace

Imunodeficientní holé nu-nu myši, připravené a chirurgicky léčené dle příkladu 8, tedy s odstraněním nádoru prsu byly rozděleny do 10 experimentů po 6 myších. Skupina A tvořila 2 experimenty, byla jako kontrolní bez jakékoli další aplikace. Ostatním skupinám byly látky podány lokálně, ve formě prášku do místa vyoperovaného nádoru. Skupině B byla podána samotná cisplatina v množství 0,5 mg, tvořila také 2 experimenty, skupině C byla v experimentu 1 podána oxycelulóza HL a v experimentu 2 oxycelulóza CaL, vždy v množství 4,5 mg. Skupině D6 byl ve dvou experimentech podán supermolekulámí komplex oxycelulózy CaL s cisplatinou a ve skupině D7 ve dvou experimentech podán supermolekulámí komplex oxycelulózy HL s cisplatinou, v množství 5 mg s 10 % hm. obsahem cisplatiny, což odpovídá množství samotné cisplatiny.

Následně byla velikost nádoru monitorována a měřena po 50 dnech po chirurgickém zákroku.

Byla sledována inhibice opětovného růstu nádoru s závislosti na podané látce. Byl vyhodnocen vliv lokální vnitratělové topické aplikace supramolekulámích komplexů oxycelulózových matric s cytostatiky, samotnou oxycelulózou a samotnými cytostatiky na opětovný růst nádoru, resp. případnou eliminaci residuální nádorové tkáně. Výrazný terapeutický efekt byl pozorován pro topickou vnitrotělovou aplikaci oxycelulózových komplexů projevující se výrazně omezeným růstem nádoru. Tento přístup představuje významný přínos oproti kontrolním experimentům v konečném objemu nádoru. Změny ve velikosti tumoru byly použity pro stanovení protinádorové aktivity. Bylo zjištěno, že supermolekulámí komplex oxycelulóz s cisplatinou při vnitrotělové topické aplikaci má schopnost inhibovat nárůst karcinomu až na 29 % oproti pouze chirurgické léčbě a na 56 % oproti chirurgické léčbě s následným podáním samotné cisplatiny. Mortalita pokusných myší při vnitrotělové topické aplikaci komplexu je v rozmezí 55 až 63 %. Podrobné výsledky prezentuje tabulka na obr. 18

Příklad 4 B

Perorální aplikace

Imunodeficientní holé nu-nu myši, připravené a chirurgicky léčené dle příkladu 8, tedy s odstraněním nádoru prsu byly rozděleny do 5 experimentů po 3 myších. Skupina A byla jako kontrolní bez jakékoli další aplikace. Ostatním skupinám byly látky podávány orálně přímo do žaludku. Skupině B byla podávána samotná cisplatina v množství 0,5 mg, skupině C byla v experimentu 1 podána oxycelulóza HL a v experimentu 2 oxycelulóza CaL, vždy v množství 4,5 mg. Skupině D6 byl podáván supermolekulámí komplex oxycelulózy CaL s cisplatinou a ve skupině D7 podán supermolekulámí komplex oxycelulózy HL s cisplatinou, v množství 5 mg s 10 % hm. obsahem cisplatiny, což odpovídá množství samotné cisplatiny.

Velikost nádoru byla monitorována a měřena po 50 dnech po chirurgickém zákroku.

Byla sledována inhibice opětovného růstu nádoru především jako porovnání vůči vnitrotělové topické aplikaci.

Byl vyhodnocen vliv orální a vnitrotělové topické aplikace supramolekulámích komplexů oxycelulózových matric s cytostatiky, samotnou oxycelulózou a samotnými cytostatiky na opětovný růst nádoru, resp. případnou eliminaci residuální nádorové tkáně. Výrazný terapeutický efekt byl pozorován pro topickou vnitrotělovou aplikaci oxycelulózových komplexů projevující

- 11 CZ 2017 - 634 A3 se výrazně omezeným růstem nádoru. Tento přístup představuje významný přínos oproti kontrolním experimentům v konečném objemu nádoru. Změny ve velikosti tumoru byly použity pro stanovení protinádorové aktivity. Bylo zjištěno, že supermolekulámí komplex oxycelulóz s cisplatinou při orální aplikaci má schopnost inhibovat nárůst karcinomu pouze na 34 až 45 % oproti pouze chirurgické léčbě a orální aplikace cisplatiny v supramolekulámím komplexu s oxycelulózou má schopnost inhibovat nárůst karcinomu na 46 až 60 %. Mortalita komplexu byla poměrně značná a to 72 až 75 %. Podrobné výsledky prezentuje tabulka na obr. 19

Porovnání aplikace ve formě orální a vnitrotělové topické pooperační aplikace prokázal výhodnost topické aplikace, protože orální aplikace byla spojena s mortalitou o 11 až 20 % vyšší a především pozorovaný nárůst velikosti tumoru byl cca 0-10% oproti topické aplikaci.

Příklad 5

Studium efektivity terapie komplexy oxycelulózové matrice s cytostatiky na tkáňových kulturách nádorových buněk in vitro

Linie nádorových buněk solidních tumorů byly získány od ETCC. Všechny buňky byly pěstovány exponenciálně v médiu RPMI 1640 s 10 % fetálního telecího séra v 35mm Petriho miskách. Pro experimenty byly buňky kultivovány v čistém růstovém médiu po dobu 16ti hodin pro dosažení exponenciální fáze růstu. Poté bylo naočkováno 5 x 10⁵ buněk do 1,8-2 cm jamek a inkubováno 16 hodin v růstovém médiu se supermolekulámím komplexem oxycelulózy CaL a cisplatinou. Po promytí byla buněčná smrt pozorována s DM IRB Leica mikroskopem s DFC 480 fotoaparátem pomocí imerzního X63 oleje a filtru Leica krychle N2.1.

Sledována byla mortalita buněk v tkáňových kulturách po ovlivnění samotnou cisplatinou v porovnání s CaL oxocelulózovým komplexem s 10 % hm. cisplatiny v čase 24 hodin po aplikaci. CaL oxycelulózový komplex s cisplatinou byl v koncentraci 0,1 pmol/ml růstového média. Buněčná mortalita byla stanovena sulforhodamine B (SRB) testem, alternativně vylučovacím barvením trypanovou modří, výsledky vyjádřeny jako % usmrcených buněk z celkového počtu jednotlivých buněčných linií (jak dokládá obrázek 20).

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (9)

1. Supramolekulární komplex oxycelulózové matrice s platinovým metalokomplexem s postupným uvolňováním platinového metalokomplexu vyznačující se tím, že obsahuje 5 až 30 % hm. platinového metalo-komplexu, nekovalentně vázaného na oxycelulózovou matrici.

2. Supramolekulární komplex oxycelulózové matrice s platinovým metalokomplexem s postupným uvolňováním platinového metalokomplexu podle nároku 1 vyznačující se tím, že oxycelulózová matrice je oxidovaná celulóza.

3. Supramolekulární komplex oxycelulózové matrice s platinovým metalokomplexem s postupným uvolňováním platinového metalokomplexu podle nároku 2 vyznačující se tím, že oxidovaná celulóza je v lintrové kyselé formě.

- 12CZ 2017 - 634 A3

4. Supramolekulámí komplex oxycelulózové matrice s platinovým metalokomplexem s postupným uvolňováním platinového metalokomplexu podle nároku 2 vyznačující se tím, že oxidovaná celulóza je ve formě vápenaté soli.

5. Supramolekulámí komplex oxycelulózové matrice s platinovým metalokomplexem s postupným uvolňováním platinového metalokomplexu podle nároku 2 vyznačující se tím, že oxidovaná celulóza je v textilní pletené formě.

6. Supramolekulámí komplex oxycelulózové matrice s platinovým metalokomplexem s postupným uvolňováním platinového metalokomplexu podle nároku 1 vyznačující se tím, že obsahuje 10 až 20 % hm. platinového metalo-komplexu.

7. Supramolekulámí komplex oxycelulózové matrice s platinovým metalokomplexem s postupným uvolňováním platinového metalokomplexu podle nároku 1 vyznačující se tím, že platinovým metalo-komplexem je cisplatina.

8. Použití supramolekulámího komplexu oxycelulózové matrice s platinovým metalokomplexem s postupným uvolňováním platinového metalokomplexu podle nároku 1 pro přípravu léčiva pro topickou cytostatickou léčbu nádorové tkáně.

9. Použití supramolekulámího komplexu oxycelulózové matrice s platinovým metalokomplexem s postupným uvolňováním platinového metalokomplexu podle nároku 8, kdy topickou cytostatickou léčbou nádorové tkáně je pooperační vnitrotělová topická aplikace na reziduální nádorové buňky/tkáň po chirurgickém zákroku.

8 výkresů