CZ2024226A3 - Deriváty 1-(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl)-3-fenoxypropan-2-olu, způsob jejich přípravy a jejich použití - Google Patents
Deriváty 1-(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl)-3-fenoxypropan-2-olu, způsob jejich přípravy a jejich použitíInfo
- Publication number
- CZ2024226A3 CZ2024226A3 CZ2024-226A CZ2024226A CZ2024226A3 CZ 2024226 A3 CZ2024226 A3 CZ 2024226A3 CZ 2024226 A CZ2024226 A CZ 2024226A CZ 2024226 A3 CZ2024226 A3 CZ 2024226A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- hydroxyethyl
- pharmaceutically acceptable
- piperazin
- compounds
- cells
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
- C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
- C07D295/08—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms
- C07D295/084—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms with the ring nitrogen atoms and the oxygen or sulfur atoms attached to the same carbon chain, which is not interrupted by carbocyclic rings
- C07D295/092—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms with the ring nitrogen atoms and the oxygen or sulfur atoms attached to the same carbon chain, which is not interrupted by carbocyclic rings with aromatic radicals attached to the chain
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Předkládané řešení se týká radioprotektivních látek, kterými jsou 1-(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl)-3-fenoxypropan-2-oly obecného vzorce I, kde R1 je halogen a R2 je nitro skupina nebo atom vodíku, a jejich farmaceuticky přijatelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo jeho adiční soli s farmaceuticky přijatelnými kyselinami. Popsán je rovněž způsob přípravy těchto látek.
Description
Deriváty l-(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-l-yl)-3-fenoxypropan-2-olu, způsob jejich přípravy a jejich použití
Oblast techniky
Vynález se týká radioprotektivních sloučenin na bázi 1-(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-l-yl)-3fenoxypropan-2-olu a způsobu jejich přípravy.
Dosavadní stav techniky
Hrozba jaderného konfliktu představuje riziko vystavení civilního obyvatelstva ionizujícímu záření, proti kterému je složité se chránit. Zároveň miliony pacientů podstupují radioterapii při léčbě rakoviny, která s sebou nese nežádoucí důsledky. Z tohoto důvodu je vývoj radioprotektiv důležitý.
Na orgánové úrovni expozice ionizujícímu záření vyvolává poškození zásadních buněčných populací, např. buněk hematopoetického systému nebo enterocytů, což vede k buněčné smrti nebo senescenci v orgánech.
Na molekulární úrovni ionizující záření způsobuje poškození DNA, aktivaci zánětlivých markérů a specifických signálních drah, mimo jiné aktivuje vnitřní a vnější pro-apoptickou signální dráhu, které se vyznačující svými specifickými cytokiny a faktory. Upregulovaný modulátor apoptózy p53 (PUMA) se jeví jako zásadní molekula při buněčné smrti vyvolané ionizujícím zářením.
Aktuálně jediné používané radioprotektivum je amifostin, který kromě poskytnutí ochrany proti ionizujícímu záření vykazuje také nežádoucí účinky jako hypotense, nevolnost a zvracení. Vysoká toxicita amifostinu omezuje jeho užitnost a úzké terapeutické okno omezuje jeho aplikovatelnost. Vzhledem k jeho unikátnímu postavení v oblasti radioprotekce je amifostin ve své neaktivní i aktivní formě používán pro porovnání s potenciálními radiofarmaky.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález poskytuje nové radioprotektivní látky na bázi 1-(4-(2hydroxyethyl)piperazin-l-yl)-3-fenoxypropan-2-olu prostřednictvím inhibice apoptózy.
Předkládaný vynález se týká l-(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-l-yl)-3-fenoxypropan-2-olů obecného vzorce I,
(I), vybraných ze skupiny látek uvedených v následující tabulce:
CZ 2024-226 A3
| Látka | R1 | R2 | Název látky obecného vzorce I |
| 1 | 2-fluor | 4-nitro | 1 -(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1 -yl)-3-(2-fluor-4nitrofenoxy)propan-2-ol |
| 3 | 4-chlor | 3-nitro | 1 -(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1 -yl)-3-(4-chlor-3nitrofenoxy)propan-2-ol |
| 4 | 3-chlor | vodík | 1 -(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1 -yl)-3-(3 chlorfenoxy)propan-2-ol |
a jejich farmaceuticky přijatelných solí s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo jejich adičních solí s farmaceuticky přijatelnými kyselinami.
Předmětem vynálezu jsou dále uvedené látky pro použití jako léčivo.
Látky podle vynálezu v testech vykazovaly účinky ochrany buněk před účinky ionizujícího záření, zvyšovaly viabilitu buněk po ozáření i bránily vzniku dicentrických chromozomů. Přitom vykazovaly při farmaceuticky relevantních koncentracích nízkou cytotoxicitu na panelu buněčných linií. Látky obecného vzorce I jsou tedy účinná radioprotektiva, přičemž jsou u nich odstraněny nežádoucí vedlejší účinky spojené s cytotoxicitou.
Předmětem vynálezu jsou tedy i látky obecného vzorce I pro ochranu organismů, orgánů či buněk proti ozáření. Organismy mohou zahrnovat rostlinné i živočišné organismy, včetně člověka.
Popsán je zde dále způsob přípravy látek obecného vzorce I, v němž se nejprve prekurzor vzorce A
(A) podrobí reakci s epibromohydrinem za vzniku meziproduktu vzorce B
který se dále reaguje s 1-(2-hydroxyethyl)piperazinem v bazickém prostředí, s výhodou v acetonitrilu jako rozpouštědle, za vzniku látky obecného vzorce I.
Předmětem předkládaného vynálezu je dále farmaceutická kompozice obsahující alespoň jednu výše uvedenou látku obecného vzorce I a alespoň jednu farmaceuticky přijatelnou pomocnou látku. Farmaceuticky přijatelné pomocné látky zahrnují plniva, pojivá, rozpouštědla, rozvolňovadla, kluzné látky, lubrikanty, konzervanty, sorbenty, sladidla, barviva, chuť ovlivňující látky a další. Vhodné látky pro formulaci konkrétních farmaceutických kompozic jsou známy odborníkovi v oboru.
-2CZ 2024 - 226 A3
Objasnění výkresů
Obr. 1 ukazuje cytotoxický účinek látek podle vynálezu (látky 1, 3, 4) a srovnávacích látek (látka 2 a látky z příkladu 2). Sloupce ukazují průměr % proliferace z testu na 10 buněčných liniích pro látky podle vynálezu a na 9 buněčných liniích pro srovnávací látky.
Obr. 2: Kvantifikace viability buněk MOLT-4 pomocí průtokové cytometrie. Viabilita buněk byla stanovena barvením Annexinem V/PI. Buňky MOLT-4 byly vystaveny ionizujícímu záření (2 Gy) 2 hodiny po ošetření testovanými látkami o koncentraci 100 μM. Po 24hodinové inkubaci byly podrobeny analýze průtokovou cytometrií ke stanovení populace viabilních (Annexin V /PI negativní) buněk. Sloupcový graf ukazuje procenta viabilních buněk. Hvězdička nad jednotlivými sloupci představuje statisticky významný rozdíl oproti dávce záření 2 Gy na hladině α = 0,05. Buňky ošetřené 0,1% DMSO byly použity jako negativní kontrola.
Obr. 3: Kvantifikace viability buněk MOLT-4 pomocí průtokové cytometrie. Viabilita buněk byla stanovena barvením Annexinem V/PI. Buňky MOLT-4 byly vystaveny ionizujícímu záření (2 Gy) 2 hodiny po ošetření testovanými látkami o koncentraci 200 μM. Po 24hodinové inkubaci byly podrobeny analýze průtokovou cytometrií ke stanovení populace viabilních (Annexin V /PI negativní) buněk. Sloupcový graf ukazuje procenta viabilních buněk. Hvězdička nad jednotlivými sloupci představuje statisticky významný rozdíl oproti 2 Gy na hladině α = 0,05. Buňky ošetřené 0,1% DMSO byly použity jako negativní kontrola.
Obr. 4: Počet dicentrických chromozomů na buňku po expozici ionizujícímu záření (3 Gy) 1 hodinu po ošetření testovanými látkami o optimální netoxické koncentraci. Po 48hodinové inkubaci byla provedena analýza dicentrických chromozomů. Chybové úsečky znázorňují směrodatnou odchylku. Hvězdičky nad jednotlivými sloupci znázorňují statisticky významný rozdíl oproti 3 Gy na hladině α = 0,05.
Obr. 5: Počet dicentrických chromozomů na buňku po expozici ionizujícímu záření (3 Gy) 1 hodinu po ošetření testovanými látkami o bezpečné koncentraci. Po 48hodinové inkubaci byla provedena analýza dicentrických chromozomů. Chybové úsečky znázorňují směrodatnou odchylku. Hvězdičky nad jednotlivými sloupci znázorňují statisticky významný rozdíl oproti 3 Gy na hladině α = 0,05.
Příklady uskutečnění vynálezu
Vynález je popsán v následujících příkladech, které nijak neomezují jeho rozsah.
Obecné chemické metody
Některé prekurzory B2-6 (schéma 1) byly připraveny způsobem dle literatury (patent: ES 19730411826; Marona H, Kubacka M, Filipek B, Siwek A, Dybaia M, Szneler E, Pociecha T, Gunia A. Synthesis, α-adrenoceptors affinity and α1-adrenoceptor antagonistic properties of some 1,4-substituted piperazine derivatives, Pharmazie, 2011, 66, 733-739; Marek J, Tichy A, Havelek R, Seifrtova M, Filipova A, Andrejsova L, Kucera T, Prchal L, Muckova L, Rezacova M, Sinkorova Z, Pejchal J. A Novel Class of Small Molecule Inhibitors with Radioprotective Properties. Eur. J. Med. Chem. 2020, 187, 111606.) nebo analogickým způsobem z odpovídajících reagencií.
Všechny základní substituované fenoly (A2-6) a ostatní reagencie byly získány komerčně od firmy Sigma-Aldrich (Praha, ČR). Rozpouštědla byla získána komerčně od firmy Penta chemicals (Praha, CŘ). TLC chromatografie byla prováděna na aluminiových deskách pokrytých
- 3 CZ 2024-226 A3 silikagelem 60 F254 (Merck, Praha, ČR). Sloupcová chromatografie probíhala za atmosférického tlaku na silikagelu 100 (velikost 0.063 až 0.2000 mm. 70 až 230 mesh ASTM, Fluka, Praha, ČR).
Pro stanovení hmotnostní spektroskopie byl využit analytický systém Dionex Ultimate 3000 LCMS spojený se spektrometrem Orbitrap Q Exactive Plus (Thermo Fisher Scientific, Brémy, Německo). Systém LC-MS se skládá z binárního čerpadla HHG-3400RS, který je spojený s vakuovým odplynovačem. Dále z vyhřívaného sloupcového kompartmentu TCC-3000, autosampleru WTS-3000 a ultrafialového detektoru VWD-3000. Kvadrupolový hmotnostní spektrometr byl vybaven elektron-sprejovým ionizačním zdrojem a data byla zaznamenána v pozitivním modu s následujícími parametry: sprejové napětí bylo 3.5 kV, kapilární teplota 220 °C, teplota plynu 220 °C.
Ή-NMR a 13C-NMR spektra byla měřena na přístroji Varian S500 spektrometr (500 a 126 MHz) v methanolii-A nebo hexadeuteriodimethylsulfoxidu (DMSO-cý; 2,50 (D), 39,7 (C) ppm) s použitím tetramethylsilanu (TMS) jako interního standardu (= 0 ppm pro obě jádra). Multiplicity spinu jsou označeny jako s (singlet), d (dublet), t (triplet), dd (dublet dubletu) nebo m (multiplet). Chemické posuny jsou udávané v ppm (parts per milion, δ) vzhledem k TMS. Přiřazení posunů vychází ze standardních NMR experimentů.
Příklad 1: Příprava látek obecného vzorce I
Am
1-1
B1-4
Schéma 1. Syntéza derivátů l-(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-l-yl)-3-fenoxypropan-2-olů (1-4).
Podmínky reakce: (i) Epibromhydrin, 135 °C, 2h, 1 kapka piperidinu; (ii) l-(2hydroxyethyljpiperazin, Acetonitril, reflux, 4h
Ve vzorcích Am, B1-4 a 1-4 jsou substituenty RI a R2 následující:
| Číslo látky | R1 | R2 |
| 1 | 2-fluor | 4-nitro |
| 2 | 4-fluor | vodík |
| 3 | 4-chlor | 3-nitro |
| 4 | 3-chlor | vodík |
Substituované fenoly Am byly (8 mmol) byly zahřátý na 135 °C. K zahřátým látkám Am byla přidána 1 kapka piperidinu a následně epibromhydrin (40 mmol). Směs byla zahřívána po dobou 4 hodin. Reakční směs byla po zchladnutí přečištěna sloupcovou chromatografií (Hep:EtOAc, 3:1). Výtěžek látek vzorců Bm: 32-74 %.
Jednotlivé látky Bm (8 mmol) byly rozpuštěny v acetonitrilu. K roztoku byl přidán K2CO3 (24 mmol) a 1-(2-hydroxyethyl)piperazin (12 mmol). Směs byla zahřívána na reflux 4 hodiny. Směs byla filtrována a následně odpařena. Látky 1 až 4 byly následně čištěny sloupcovou chromatografií (EtOAc:MeOH:NH3, 6:2:0,2). Výtěžek: 70-92 %.
-(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1 -yl)-3-(2-fluor-4-nitrofenoxy)propan-2-ol (1).
-4CZ 2024 - 226 A3
Oranžový olej, výtěžek: 70 %. 1H NMR (500 MHz, Methanol-d4) δ 8,49 (s, 1H), 8,17 (dd, J = 8,3, 3,0 Hz, 1H), 7,14 (dd, J = 9,1, 4,9 Hz, 1H), 4,17 - 4,10 (m, 1H), 4,06 - 3,98 (m, 2H), 3,70 (t, J = 5,8 Hz, 2h), 2,94 - 2,54 (m, 12H); 13C NMR (126 MHz, MeOD) δ 157,50, 155,69, 152,14, 124,45, 121,25, 116,91, 83,15, 81,16, 72,13, 66,76, 60,35, 58,98, 57,75, 56,93, 52,60; HRMS: m/z 344,1591 [M+H]+ (vypočteno m/z 344,1616 pro [C15H23FN3O5+]).
1-(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl)-3-(4-fluorfenoxy)propan-2-ol (2) - srovnávací látka
Hnědý olej, výtěžek: 80 %. 1H NMR (500 MHz, Methanol-d4) δ 7,04 - 6,96 (m, 2H), 6,96 - 6,89 (m, 2H), 4,13 (ddt, J = 7,8, 5,7, 4,4 Hz, 1H), 3,98 (dd, J = 9,7, 4,3 Hz, 1H), 3,92 (dd, J = 9,7, 5,7 Hz, 1H), 3,75 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 2,88 (s, 4H), 2,80 (q, J = 5,7, 4,9 Hz, 6H), 2,75 - 2,61 (m, 2H); 13C NMR (126 MHz, MeOD) δ 158,32, 156,44, 115,46, 115,39, 115,38, 115,19, 71,00, 66,66, 60,05, 59,13, 57,22, 52,22, 51,91; HRMS: m/z 299,1771 [M+H]+ (vypočteno m/z 299,1776 pro [C15H24FN2O3+]).
-(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1 -yl)-3-(4-chlor-3-nitrofenoxy)propan-2-ol (3).
Oranžový olej, výtěžek: 76 %. 1H NMR (500 MHz, Methanol-d4) δ 7,55 - 7,49 (m, 2H), 7,23 (dd, J = 9,0, 3,0 Hz, 1H), 4,17 - 4,07 (m, 2H), 4,05 - 3,97 (m, 1H), 3,70 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 2,74 - 2,50 (m, 12H); 13C NMR (126 MHz, MeOD) δ 158,20, 148,62, 131,97, 119,85, 116,89, 110,89, 71,61, 66,63, 60,20, 59,62, 57,97, 56,93, 52,76, 52,64; HRMS: m/z 360,1317 [M+H]+ (vypočteno m/z 360,1321 pro [C15H23ClN3O5+]).
1-(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl)-3-(3-chlorfenoxy)propan-2-ol (4).
Žlutý olej, výtěžek: 92 %. 1H NMR (500 MHz, Methanol-d4) δ 7,38 (d, J = 8,9 Hz, 1H),7,30 (s,1H), 7,08 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 6,91 (dd, J = 8,9, 2,9 Hz, 1H), 4,17 - 4,10 (m, 1H), 4,02 (dd, J = 9,8, 4,0 Hz, 1H), 3,94 (dd, J = 9,8, 5,8 Hz, 1H), 3,75 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 3,60 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 3,08 - 2,60 (m, 12H); 13C NMR (126 MHz, MeOD) δ 158,30, 132,30, 130,45, 123,48, 117,00, 113,27, 71,03, 66,55, 59,90, 58,98, 56,14, 52,25, 51,85; HRMS: m/z 315,1476 [M+H]+ (vypočteno m/z 315,1470 pro [C15H24ClN2O3+]).
Příklad 2: Cytotoxický účinek látek 1 až 4 u 10 lidských buněčných linií
Kultivace buněk a stanovení cytotoxicity
Vybrané lidské buněčné linie zastupující různé histotypy: leukémie (Jurkat, MOLT-4), plicní adenokarcinom (A549), kolorektální adenokarcinom (HT-29), karcinom slinivky břišní (PANC1), karcinom vaječníku (A2780), děložní adenokarcinom (HeLa), prsní adenokarcinom (MCF-7), osteosarkom (SAOS-2) a nenádorová buněčná linie (fetální plicní fibroblasty MRC-5) byly zakoupeny od American Type Culture Collection (ATCC; VA, USA) nebo od Sigma-Aldrich (MO, USA), nasazeny do 96-jamkové destičky (TPP, Trasadingen, Švýcarsko) v hustotě 1-50 x 103 buněk/jamku a vystaveny 100 μM testovaných látek po dobu 48 h. Buněčné linie byly rovněž vystaveny oběma formám amifostinu (WR2726 a WR1065) jako porovnávacím látkám o koncentraci 100 μM po dobu 48 h. Změny v proliferaci byly porovnány s negativní kontrolou (0,1 % DMSO) pomocí WST-1 testu (Roche, Basel, Švýcarsko), který byl proveden dle pokynu výrobce a absorbance byla změřena při 440 nm pomocí Tecan Spark multimode microplate reader (Tecan, Mannedorf, Švýcarsko). Cytotoxická aktivita látek byla vyjádřena jako procento proliferace. Každá hodnota je průměr tří nezávislých měření a zobrazena jako procento proliferace, kdy 100 % buněčné proliferace odpovídá negativní kontrole po působení rozpouštědla 0,1 % DMSO.
- 5 CZ 2024 - 226 A3
Výsledky
Testování cytotoxicity na screeningovém panelu 10 lidských buněčných linií bylo provedeno se 4 novými látkami 1 až 4 v koncentraci 100 μΜ. Dva typy amifostinu (WR2726 a WR1065) sloužily pro porovnání ve stejné koncentraci a čase. Nově připravenými sloučeninami 1 až 4 bylo ovlivněno 9 lidských nádorových buněčných linií a 1 nenádorová buněčná linie v časovém intervalu 48 h a poté byla stanovena proliferace buněk pomocí testu WST-1 a byla porovnána s proliferací kontrolních buněk ovlivněných pouze rozpouštědlem 0,1% DMSO (100%). Výsledky ukázaly, že nové látky 1 až 4 v koncentraci 100 μM neměly výrazný cytotoxický účinek na žádnou z 10 buněčných liniích; procento proliferace buněk se pohybovalo od 84 do 127 % v porovnání s kontrolou (tabulka 1). Celkový cytotoxický účinek každé testované látky je formou průměru z proliferací jednotlivých linií znázorněn na obrázku 1.
Tabulka 1: Přehled 10 testovaných buněčných linií vystavených 100 μM testovaných látek po dobu 48 hodin. Čísla v tabulce ukazují procento proliferace buněk po ovlivnění testovanou látkou.
| WR2721 | WR1065 | 1 | 2 | 3 | 4 | |
| Jurkat | 10 | 1 | 92 | 100 | 85 | 89 |
| MOLT-4 | 71 | 3 | 84 | 102 | 84 | 89 |
| A549 | 5 | 3 | 106 | 112 | 109 | 99 |
| HT-29 | 27 | 20 | 94 | 99 | 95 | 85 |
| PANC-1 | 8 | 3 | 90 | 97 | 100 | 94 |
| A2780 | 158 | 7 | 95 | 101 | 94 | 96 |
| HeLa | n/a | n/a | 99 | 106 | 127 | 101 |
| MCF-7 | 7 | 2 | 91 | 102 | 104 | 86 |
| SAOS-2 | 9 | 7 | 92 | 102 | 89 | 120 |
| MRC-5 | 8 | 3 | 103 | 103 | 98 | 97 |
Příklad 3: Ex vivo hodnocení cytotoxického účinku
Stanovení cytotoxicity na periferních krevních buňkách
Ex vivo toxicita byla stanovena na periferních krevních mononukleárních buňkách od zdravých dárců pro obě formy amifostinu a pro látky 1 až 4. Stanovení proběhlo pomocí MTS kolorimetrického testu. Inhibiční aktivita látek byla spočítána jako průměr alespoň tří nezávislých měření s cílem určit optimální netoxickou koncentraci pro budoucí radioprotektivní testy. Buňky byly nasazeny do 96-jamkové destičky s hustotou buněk 5 x 104 a vystaveny koncentracím 10, 20, 50, 100, 200, 500 a 1000 μΜ testovaných látek po dobu 48 h. Viabilita buněk byla stanovena při 490 nm pomocí Synergy H1 přístroje od BioTeku. Výsledky jsou zobrazeny jako procento průměru viability vzhledem k negativní kontrole (100 %).
Výsledky
Na základě screeningu cytotoxicity na buněčných liniích byly sloučeniny 1 až 4 spolu s amifostinem a jeho aktivní formou WR1065 vybrány pro hodnocení toxicity na PBMC pomocí kolorimetrického testu MTS. Pro každou látku byla stanovena koncentrace, při které viabilita PBMC statisticky významně neklesla pod 100 % (kontrolní skupina) na hladině významnosti 0,05 a byla zároveň vyšší než 90 %. Pro sloučeninu 2 byla tato koncentrace 1 μΜ; pro sloučeniny 1 a 4 byla koncentrace 500 μM; pro 3 to bylo 200 μM; pro WR2721 to bylo 10 μM; a pro
- 6 CZ 2024 - 226 A3
WR1065 byla pod nejnižší testovanou koncentrací 10 μΜ. Výsledky jsou shrnuty v tabulce 2 níže.
Tabulka 2: Toxicita na lymfocytech po 48 h expozice testovaným látkám, negativní kontrola je vyjádřena jako 100 %. Jedná se o průměr tří měření.
| Viabilita průměr (%) | ||||||
| [μΜ] | WR2721 | WR1065 | 1 | 2 | 3 | 4 |
| 0 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 10 | 93 | 57 | 98 | 104 | 121 | 94 |
| 20 | 75 | 47 | 95 | 103 | 99 | 96 |
| 50 | 37 | 19 | 90 | 112 | 111 | 99 |
| 100 | 33 | 16 | 92 | 107 | 102 | 99 |
| 200 | 35 | 21 | 92 | 110 | 107 | 96 |
| 500 | 37 | 27 | 92 | 110 | 79 | 94 |
| 1000 | n/a | n/a | 81 | 105 | 44 | 51 |
| 2000 | n/a | n/a | n/a | 53 | n/a | n/a |
| 5000 | n/a | n/a | n/a | 39 | n/a | n/a |
Příklad 4: Ochranný účinek u buněk po ozáření
Nová radioprotektiva zlepšují viabilitu u buněčné linie MOLT-4 in vitro
Čerstvé zásobní roztoky inhibitorů v koncentracích 50 mM byly rozpuštěny v dimethylsulfoxidu (DMSO; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). Zásobní roztoky byly před použitím ve studii připraveny vždy čerstvé. Pro stanovení radioprotektivních vlastností byly buňky MOLT-4 ošetřeny inhibitory o koncentraci 100 nebo 200 μM (podle předchozích měření). Při použití této koncentrace inhibitoru bylo předejito toxickým účinkům DMSO (<0,1%) na buňky. Šedesát minut po přidání inhibitoru byly buňky MOLT-4 ozářeny při pokojové teplotě za použití zdroje záření 60Co (Chisotron Chirana, Praha, Česká republika). Neozářené kontrolní buňky a buňky ozářené dávkou 2 Gy byly ošetřeny pouze DMSO (0,1%; kontrola) a zpracovávány paralelně s testovanými buňkami. Viabilita byla stanovena pomocí průtokové cytometrie za použití soupravy Alexa Fluor® 488 Annexin V/Dead Cell Apoptosis (Life Technologies, Grand Island, NY, USA) podle instrukcí výrobce. Měření bylo provedeno okamžitě pomocí průtokového cytometru CyAn (Beckman Coulter, Miami, FL, USA). Data byla analyzována pomocí softwaru Kaluza Analysis 1.3 (Beckman Coulter, Miami, FL, USA).
Výsledky
Radioprotektivní účinky všech sloučenin byly hodnoceny na lymfoblastické leukemické buněčné linii MOLT-4 pomocí průtokové cytometrie. Cílem bylo zjistit, zda nově připravené látky jsou schopny augmentovat přežití MOLT-4 buněk sloužící jako model hematopoetického poškození po ozáření. Viabilita buněk byla stanovena Annexin V/propidium jodid barvením. Průtoková cytometrická analýza ukázala, že obě dávky zajistily vyšší viabilitu buněk, než bylo dosaženo u 2 Gy. Jak je znázorněno na obr. 2, dvojité barvení annexinem V/PI jasně ukazuje pokles viabilních buněk 24 hod po ozáření dávkou 2 Gy (28%) ve srovnání s negativní kontrolou (92%). Naopak, ošetření buněk MOLT-4 sloučeninami 1-4 (100 μM nebo 200 μM) 2 hod před ozářením vykazovalo ochranné účinky před IZ oproti pouze ozářené buněčné linii MOLT-4. Buněčná linie MOLT-4 byla vystavena působení radioprotektivních látek po dobu 24 hod a bylo zjištěno významné zvýšení množství viabilních buněk. Obrázek 2 ukazuje zvýšení viability buněk po koncentrací 100 μM testovaných látek, obrázek 3 pak pro koncentraci 200 μM.
- 7 CZ 2024 - 226 A3
Příklad 5: Stanovení radioprotektivního účinku cytogenetickou metodou
Ochrana ozářených buněk hodnocená pomocí stanovení dicentrických chromosomů (DCA)
Radioprotektivní účinek sloučenin byl hodnocen pomocí cytogenetické metody DCA. DCA je známá svou vysokou citlivostí na radiační expozici a svou specifitou, a je proto považována za zlatý standard biologické dozimetrie. Stanovení bylo provedeno na krvi zdravých dárců, která byla ozářena 3 Gy, 1 hodinu po vystavení testovaným látkám o různých koncentracích (100 až 1000 μΜ) (30 minut v případě amifostinu). Buňky byly zafixovány na studených mikroskopických destičkách, vysušeny přes noc a obarveny pomocí 5% Giemsa roztoku (P-Lab, Praha, Česká republika) po dobu 6 min.
Výsledky
Tento test zahrnoval čtyři látky 1 až 4 a také amifostin (WR2721) a jeho aktivní formu (WR1065) jako zavedené porovnávací látky. Pro DCA byla použita plná krev od zdravých lidských dárců a po expozici testovaným sloučeninám byla ozářena gama zářením dávkou 3 Gy. Každý experiment zahrnoval ozářenou a neozářenou kontrolu. Pokusy byly prováděny při dvou různých koncentracích látek. Pro sloučeniny 1 až 4 bylo použito 100 μM a optimální netoxická koncentrace, která se pohybovala mezi 200 až 1000 μM. Protože WR2721 a WR1065 vykazovaly významně vyšší toxicitu, byly pro ně vybrány koncentrace 10 μΜ a 100 μΜ. Výsledky byly interpretovány jako počet dicentrických chromozomů na buňku. Všechny látky 1 až 4 vykazovaly významný radioprotektivní účinek v obou koncentracích, přičemž vyšší účinek byl pozorován u vyšších koncentrací (obrázek 4 a obrázek 5).
Claims (4)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. l-(4-(2-Hydroxyethyl)piperazin-l-yl)-3-fenoxypropan-2-ol obecného vzorce I,(I), vybraný ze skupiny l-(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-l-yl)-3-(2-fluor-4-nitrofenoxy)propan-2-ol, 1(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1 -yl)-3-(4-chlor-3-nitro fenoxy)propan-2-ol, 1 -(4-(2hydroxyethyl)piperazin-l-yl)-3-(3-chlorfenoxy)propan-2-ol a jejich farmaceuticky přijatelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo jejich adiční soli s farmaceuticky přijatelnými kyselinami.
- 2. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo její adiční sůl s farmaceuticky přijatelnou kyselinou, pro použití jako léčivo.
- 3. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo její adiční sůl s farmaceuticky přijatelnou kyselinou, pro použití pro ochranu organismů, orgánů či buněk proti ozáření.
- 4. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jednu sloučeninu obecného vzorce I podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo její adiční sůl s farmaceuticky přijatelnou kyselinou, a alespoň jednu farmaceuticky přijatelnou pomocnou látku.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2024-226A CZ2024226A3 (cs) | 2024-05-30 | 2024-05-30 | Deriváty 1-(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl)-3-fenoxypropan-2-olu, způsob jejich přípravy a jejich použití |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2024-226A CZ2024226A3 (cs) | 2024-05-30 | 2024-05-30 | Deriváty 1-(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl)-3-fenoxypropan-2-olu, způsob jejich přípravy a jejich použití |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ310541B6 CZ310541B6 (cs) | 2025-11-05 |
| CZ2024226A3 true CZ2024226A3 (cs) | 2025-11-05 |
Family
ID=97599039
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2024-226A CZ2024226A3 (cs) | 2024-05-30 | 2024-05-30 | Deriváty 1-(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl)-3-fenoxypropan-2-olu, způsob jejich přípravy a jejich použití |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ2024226A3 (cs) |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES411826A1 (es) * | 1973-02-20 | 1976-01-01 | Liade Sa Lab | Procedimiento de obtencion de 1-ariloxi - 2 - propanolami- nas farmacologicamente activos. |
| FR2267104A1 (en) * | 1974-04-12 | 1975-11-07 | Ferlux Labo Sa | Hypotensive and antiarrhythmic piperazines - 1-(3-phenoxy-2-hydroxy propyl)-4-substd. piperazines |
| CN113498339A (zh) * | 2019-02-05 | 2021-10-12 | 余健 | 预防或治疗由治疗诱导的胃肠损伤的方法 |
| CZ309081B6 (cs) * | 2019-11-21 | 2022-01-19 | Fakultní nemocnice Hradec Králové | 1-Aryloxy-3-(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl)propan-2-oly, způsob jejich přípravy a jejich použití |
-
2024
- 2024-05-30 CZ CZ2024-226A patent/CZ2024226A3/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ310541B6 (cs) | 2025-11-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP3530656B1 (en) | 2-substituted aromatic ring-pyrimidine derivative, and preparation and application thereof | |
| JP6064079B2 (ja) | Ｃｄｃ７阻害剤 | |
| Mukherjee et al. | A pentanoic acid derivative targeting matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) induces apoptosis in a chronic myeloid leukemia cell line | |
| EP0523100B1 (en) | O6 -benzylated guanine, guanosine and 2'-deoxyguanosine compounds possessing o6 -alkylguanine-dna alkyltransferase depleting activity | |
| CN109843896B (zh) | 羟基肉桂酸衍生物、方法及其用途 | |
| CA2124315C (en) | Nitroaniline derivatives and their use as antitumor agents | |
| WO2023166078A1 (en) | Combination treatments comprising a ctps1 inhibitor and a chek1 inhibitor | |
| Noureen et al. | Synthesis, combined theoretical and spectral characterization of some new 1, 3, 5 triazine compounds, and their in vitro biological analysis | |
| CZ2024226A3 (cs) | Deriváty 1-(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl)-3-fenoxypropan-2-olu, způsob jejich přípravy a jejich použití | |
| Pathan et al. | Design and synthesis of novel 1, 2, 4-triazolo [4, 3-b] pyridazine derivatives with anti-cancer activity | |
| Voller et al. | The natural cytokinin 2OH3MeOBAR induces cell death by a mechanism that is different from that of the “classical” cytokinin ribosides | |
| Fernandez-Gomez et al. | 2-Amino diphenylsulfides as new inhibitors of trypanothione reductase | |
| Ma et al. | Identification and biological evaluation of novel benzothiazole derivatives bearing a pyridine-semicarbazone moiety as apoptosis inducers via activation of procaspase-3 to caspase-3 | |
| Casati et al. | Effects of cytokinins, cytokinin ribosides and their analogs on the viability of normal and neoplastic human cells | |
| US5869338A (en) | Method for protection against genotoxic mutagenesis | |
| Marek et al. | A novel class of small molecule inhibitors with radioprotective properties | |
| US11786520B2 (en) | Method for producing benzazoloquinolium (BQs) salts and using the biological activity of the composition | |
| Ulus et al. | Microwave assisted synthesis of novel acridine–acetazolamide conjugates and investigation of their inhibition effects on human carbonic anhydrase isoforms hCA I, II, IV and VII | |
| Chiba et al. | Selective antitumor activity of MKT‐077, a delocalized lipophilic cation, on normal cells and cancer cells in vitro | |
| CZ2019713A3 (cs) | 1-Aryloxy-3-(4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl)propan-2-oly, způsob jejich přípravy a jejich použití | |
| Heddle et al. | Rapid screening of radioprotective drugs in vivo | |
| US20100120856A1 (en) | Derivatives of the Aminated Hydroxyquinoline Class For Treating Cancers | |
| Panigrahy et al. | Therapeutic use of cyclophosphamide and its cytotoxic action: A challenge for researchers | |
| WO2012149093A1 (en) | 2-guanidino-4-oxo-imidazoline derivatives as antimalarial agents, synthesis and methods of use thereof | |
| RU2404987C2 (ru) | Антинеоплазические соединения и фармацевтические композиции на их основе |