CZ24177U1 - Vakcína pro orální podání hospodářským zvířatům - Google Patents
Vakcína pro orální podání hospodářským zvířatům Download PDFInfo
- Publication number
- CZ24177U1 CZ24177U1 CZ201226153U CZ201226153U CZ24177U1 CZ 24177 U1 CZ24177 U1 CZ 24177U1 CZ 201226153 U CZ201226153 U CZ 201226153U CZ 201226153 U CZ201226153 U CZ 201226153U CZ 24177 U1 CZ24177 U1 CZ 24177U1
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- vaccine
- strain
- oral administration
- chickens
- salmonella
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 23
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title description 11
- 241001138501 Salmonella enterica Species 0.000 claims description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 10
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 9
- 244000144972 livestock Species 0.000 claims description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 20
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 19
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 15
- 101000651211 Homo sapiens Transcription factor PU.1 Proteins 0.000 description 9
- 102100027654 Transcription factor PU.1 Human genes 0.000 description 9
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 8
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 7
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 7
- 101000823089 Equus caballus Alpha-1-antiproteinase 1 Proteins 0.000 description 6
- 101150038062 fliC gene Proteins 0.000 description 6
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 5
- 101100281124 Aquifex aeolicus (strain VF5) flaA gene Proteins 0.000 description 4
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 4
- 206010039438 Salmonella Infections Diseases 0.000 description 4
- 241001354013 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis Species 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 244000144992 flock Species 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 238000012770 revaccination Methods 0.000 description 4
- 206010039447 salmonellosis Diseases 0.000 description 4
- 108010040721 Flagellin Proteins 0.000 description 3
- 101000836070 Rattus norvegicus Serine protease inhibitor A3L Proteins 0.000 description 3
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 3
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 3
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 description 3
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 101710099705 Anti-lipopolysaccharide factor Proteins 0.000 description 2
- 206010048685 Oral infection Diseases 0.000 description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 2-nitrosoguanidine Chemical compound NC(N)=NN=O WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 101000933967 Pseudomonas phage KPP25 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Vakcína pro orální podání hospodářským zvířatům
Oblast techniky
Řešení se týká vakcíny pro orální podání hospodářským zvířatům, která obsahuje živý oslabený kmen Salmonella enterica CAPM 6474 na ochranu hospodářských zvířat před infekcí salmonelami ve formě atenuované vakcíny s možností serologické diferenciace vakcinovaných a přirozeně infikovaných hejn.
Dosavadní stav techniky
Vakcinace hospodářských zvířat proti infekcí salmonelami lze provádět dvěma typy vakcín inaktivovanými anebo živými oslabenými. Vzhledem k patogenezi onemocnění však oslabené živé vakcíny poskytují výrazně vyšší ochranu před infekcí než vakcíny inaktivované (Papežova aj. 2008, Vet. Med. Czech 53, 315; Robertsson aj. 1983, Infect. Immun. 41, 742; Silva aj., 1981, Avian Dis. 25, 38-52).
První oslabené živé salmonelové vakcíny byly získány dlouhodobým pasážováním v laboratoři nebo náhodnou mutagenezí indukovanou mutageny fyzikální (různé typy záření) nebo chemické povahy (např. působení nitrosoguanidinem). Tyto postupy umožnily selekci kmenů, u kterých byla následně prokázána snížená virulence, avšak se zachovanou imunogenitou. Přestože jsou tyto vakcíny funkční a jsou relativně extenzivně charakterizovány, skutečná příčina jejich oslabení není známa (Guzman aj., 2006, Vaccine 24, 3804-11; Smith 1956, J Hyg. (Lond); 54, 41932). Proto se od poloviny 80. let dvacátého století testují geneticky modifikované vakcíny, tedy s přesně definovaným způsobem oslabení. Při přípravě definovaných mutantních kmenů lze navíc cíleně připravit kmeny, kterým chybí specifické antigeny, které stimulují u infikovaných zvířat produkci protilátek. Absence takového genu a jim kódovaného proteinu pak vede k absenci protilátek v séru vakcinovaných zvířat a vytvoření negativní markerové vakcíny.
Podstata technického řešení
Uvedené nedostatky odstraňuje vakcína pro orální podání hospodářským zvířatům podle technického řešení, jehož podstata spočívá v tom, že vakcína obsahuje živý oslabený kmen zoopatogenního mikroorganismu Salmonella enterica CAPM 6474, přičemž tento kmen je modifikován třemi nezávislými vyjmutími genetického materiálu, a je uložený ve Sbírce zoopatogenních mikroorganismů v Brně, CZ.
Za účelem zvýšení bezpečnosti živé atenuované vakcíny pro orální užití u hospodářských zvířat původci dále modifikovali atenuovaný kmen, který je předmětem jejich přihlášky vynálezu PV 2011-887. Z kmene Salmonella Enteritidis SPI1 Ion vyjmuli gen kódující hlavní strukturní protein bičíku. Po vakc i nac i tímto kmenem byla zachována aíenuaee i imunogcniía původního kmene Salmonella Enteritidis SPI1 Ion, ale po vakcinaci kmenem SPI1 Ion fliC nedocházelo k tvorbě anti-FliC protilátek, a to ani po intravenózní aplikaci vakcinačního kmene, která vede k masivní produkci protilátek proti LPS.
Vzájemná kombinace mutací SPI-1, Ion a fliC tak vede k ideálnímu novému vakcinačnímu kmeni, který
i) je oslaben dvěma nezávislými mutacemi (zvýšená bezpečnost), ii) je velmi imunogenní (mutace v genu Ion vede k nadprodukci kapsulámích polysacharidů. SPI-1 mutanti neindukují buněčnou smrt u makrofágů), iii) je snadno odlišitelný (nadprodukce kapsulámích polysacharidů vede k tvorbě mukoidních kolonií na běžných agarech a snadnému vizuálnímu odlišení vakcinačního kmene od libovolného terénního kmene Salmonella enterica,
- 1 CZ 24177 Ul iv) umožňuje serologickou diferenciaci vakcinovaných a přirozeně infikovaných hejn Gallus gallus na základě absence anti-FliC protilátek v séru vakcinovaných kuřat.
Podstatou technického řešení je tedy užití kombinace dvou mutací. SPI-1 a Ion, za účelem oslabení Salmonella enterica pro využití jako živé oslabené vakcíny na ochranu chovů hospodář5 ských zvířat a současné vyjmutí genu fliC umožňující serologickou diferenciaci vakcinovaných kuřat od kuřat přirozeně infikovaných Salmonella Enteritidis komerčně dostupnými ELISA soupravami. Připravený konstrukt je vhodný jako orální živá markerová vakcína hospodářských zvířat proti salmonelovým infekcím. Vakcína podle technického řešení byla ověřena původci v praxi ve Výzkumném ústavu veterinárního lékařství v.v.i., Bmo, CZ.
Následující příklady provedení vakcínu podle technického řešení pouze dokládají, ale neomezují. Příklady provedení
Příklad 1
Vakcína pro orální podání hospodářským zvířatům podle technického řešení obsahuje živý oslabený kmen Salmonella enterica CAPM 6474, který byl připraven pomocí lambda red rekombi15 nace. Nejprve byly paralelně připraveny jednotlivé mutace, tedy delece SPI1, delece genu Ion a delece genu fliC. Po náhradě SPI1 za gen kódující rezistenci k chloramfenikolu byla tato modifikace přenesena do nového kmene Salmonella enterica transdukcí P22 fágem. Následně byl gen kódující rezistenci k chloramfenikolu odstraněn pomocí flipázy kódované plazmidem pCP20. Do kmene s úplnou delecí SPI1 byla pomocí transdukce následně vnesena mutace /o«::Cm. Gen kódující rezistenci k chloramfenikolu byl opět odstraněn pomocí flipázy kódované plazmidem pCP20 a do takto vytvořeného kmene (ASPIl ΔΙοη) byla transdukcí vnesena mutace /?/C::Cm. Kmen Salmonella enterica ASPIl A/o« fliC/.Cm byl využit pro testování imunogenity. Pri vakcinačních pokusech byla kmenem Salmonella enterica CAPM 6474 orálně vakcinována jednodenní kuřata linie ISA Brown. Kuřata byla orálně revakcinována o 3 týdny později a čelenžována divokým kmenem Salmonella enterica šero var Enteritidis o další 3 týdny později, tedy ve věku 42 dní. Čelenž byla prováděna jak orálně, tak intravenózně. Kuřata byla utrácena 4 a 14 dní po čelenži a výsledky jsou shrnuty v Tabulce 1. Vyplývá z ní, že vakcinace chránila kuřata před infekcí divokou Salmonella enterica šero var Enteritidis, protože počty salmonel ve tkáních vakcinovaných kuřat byly 10* až ÍOO* nižší než u nevakcinovaných kontrol. I v případech, kdy byla přítomnost salmonel prokázána pouze kvalitativně, byly ve skupinách vakcinovaných zvířat vždy nižší počty salmonela-pozitivních kuřat než ve skupině nevakcinovaných kuřat. Absence serologické odpovědi na vakcinací Salmonella enterica ASPIl Δίοη fliC.'. Cm tvorbou anti-FliC protilátek je doložena na Grafu 1.
Tabulka 1
Imunizace kuřat Salmonella Enteritidis SVW-Ion-fliC
| Vakcinace | den 42 | 4 DPI | 14 DPI | ||||
| čelenž | játra | slezina | Si. střevo | játra | slezina | sl. střevo | |
| SPI14on-fliC | p.o. | 1/6 | 0/6 | 0/6* | 0/6 | 1/6 | 2/6 |
| bez vakcinace | 2/6 | 2/6 | 6/6 | 4/6 | 4/6 | 6/6 | |
| SPI1-lon-fliC | i.v. | 2,92±1,374 | 4,89±0 72* | 6/6 | 5/6 | 3,29±1,07 | 2/6 |
| bez vakcinace | 4,71±0,39 | 6,68±0,42 | 6/6 | 5/5 | 4,16±0,38 | 5/5 |
& signifikantně odlišné od skupiny bez vakcinace (t-test, PO.05) * signifikantně odlišné od skupiny bez vakcinace (X2 test, P<0.05) p.o. - orální čelenž
i.v. - intravenózní čelenž.
-2 CZ 24177 Ul
V Tabulce 1 jsou shrnuty výsledky detekce saimonei v orgánech vakcinovaných a nevakcinovaných kuřat 4 (den 46) a 14 (den 56) dní po orální nebo intravenózní infekci (DPI). Údaje ukazují buď skutečné počty saimonei na gram tkáně (log CFU/g) anebo počet pozitivních z celkového počtu zvířat.
Tvorba protilátek proti LPS a biČíkovému antigenu F1ÍC po vakcinaci a infekci je znázorněna v Grafu 1.
Panel A, anti-LPS protilátky po orální vakcinaci (den 1 s revakcinací v den 21) a orální infekci v den 42 života kuřat.
Panel B, stejné jako na panelu A, ale pouze s tím rozdílem, že byly detekovány protilátky proti bičíkovému antigenu FliC.
Panel C, anti-LPS protilátky po orální a intravenózní vakcinaci (orální vakcinace v den 1, orální revakcinace v den 21, intravenózní revakcinace v den 42 života) a orální infekci v den 63 života kuřat.
Panel D, stejné jako na panelu C, ale pouze s tím rozdílem, že byly detekovány protilátky proti bičíkovému antigenu FliC. Protože při průkazu anti-FliC protilátek byla použita kompetitivní ELISA, nárůst anti-FliC protilátek je charakterizován poklesem v absorbanci.
Vysvětlivky ke Grafu 1 kosočtverce, SPI1 -Ion vakcinovaná kuřata čtverce, SPIl-Zon-^WC vakcinovaná kuřata kolečka, nevakcinovaná kuřata * - signifikantně odlišné od neinfikovaných kontrol utracených v den 42 (panely A a B) nebo den 46 (panely C a D) & - signifikantně odlišné od stejně starých nevakcinovaných, ale infikovaných kontrol, (vše t-test, P<0,05).
Celkové složení vakcíny podle technického řešení a její dávkování
Vakcína podle technického řešení obsahuje pouze živý atenuovaný kmen Salmonella enterica CAPM 6474. Imunizační dávka byla 107 CFU vakcinačního kmene v 0,1 ml inokula na jedno kuře a jednu imunizaci. Při Široké aplikaci se ale předpokládá imunizace orálně podáním v pitné vodě, přičemž dávka 107 CFU na kuře a dávku bude zachována. Kuřata jsou imunizována co nejdříve po vylíhnutí kuřat, ideálně v den 1 života s orální revakcinací 3 týdny po první vakcinaci.
Průmyslová využitelnost
Nová vakcína pro orální podání hospodářským zvířatům obsahuje kmen mikroorganismu Salmonella enterica CAPM 6474, ve kterém byla připravena konkrétní kombinace mutací vedoucí k jeho žádoucímu oslabení se zachováním imunogenity a možností serologické diferenciace po orální aplikaci. Serologická diferenciace umožňuje odlišení vakcinovaných hejn od hejn přirozeně infikovaných divokými kmeny Salmonella enterica. Je proto vhodná jako orální živá markerová vakcína na ochranu hospodářských zvířat před salmonelovými infekcemi.
Claims (1)
- NÁROKY NA OCHRANU1. Vakcína pro orální podání hospodářským zvířatům, vyznačující se tím, že obsahuje živý oslabený kmen zoopatogenního mikroorganismu Salmonella enterica CAPM 6474, přičemž tento kmen je oslabený třemi nezávislými modifikacemi založenými na vyjmutí genetického materiálu, a je uložený ve Sbírce zoopatogenních mikroorganismů v Bmě, CZ.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ201226153U CZ24177U1 (cs) | 2012-05-30 | 2012-05-30 | Vakcína pro orální podání hospodářským zvířatům |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ201226153U CZ24177U1 (cs) | 2012-05-30 | 2012-05-30 | Vakcína pro orální podání hospodářským zvířatům |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ24177U1 true CZ24177U1 (cs) | 2012-08-14 |
Family
ID=46671094
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ201226153U CZ24177U1 (cs) | 2012-05-30 | 2012-05-30 | Vakcína pro orální podání hospodářským zvířatům |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ24177U1 (cs) |
-
2012
- 2012-05-30 CZ CZ201226153U patent/CZ24177U1/cs not_active IP Right Cessation
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Woodward et al. | The efficacy of Salenvac, a Salmonella enterica subsp. Enterica serotype Enteritidis iron-restricted bacterin vaccine, in laying chickens | |
| EP2528620B1 (en) | Salmonella vaccine | |
| AU783508B2 (en) | Salmonella vaccine | |
| Tan et al. | Evaluation of an aroA mutant Salmonella typhimurium vaccine in chickens using modified semisolid Rappaport Vassiliadis medium to monitor faecal shedding | |
| Pan et al. | Progress in the application of Salmonella vaccines in poultry: A mini review | |
| US20110052635A1 (en) | Live attenuated salmonella vaccine | |
| US20210145954A1 (en) | Method of reducing egg contamination | |
| Barrow et al. | Vaccination against Salmonella infections in food animals: rationale, theoretical basis and practical application. | |
| JP6196677B2 (ja) | 交差防御性サルモネラワクチン | |
| El-Enbaawy et al. | Protective efficacy of Salmonella local strains representing groups B, C, D and E in a prepared polyvalent formalin inactivated oil adjuvant vaccine in layers | |
| CZ24177U1 (cs) | Vakcína pro orální podání hospodářským zvířatům | |
| RU2723031C2 (ru) | Вакцина для производства продукции животноводства | |
| CZ2012361A3 (cs) | Vakcína pro orální podání hospodárským zvíratum | |
| JP2009529895A (ja) | 弱毒化サルモネラ生ワクチン | |
| SOlIMAN et al. | Preparation of combined inactivated Vaccine against Salmonella enteritidis, Salmonella typhimurium and Clostridium perfringens type A and C toxins | |
| Menão et al. | Efficacy of bacterin-, outer membrane protein-and fimbriae extract-based vaccines for the control of Salmonella Enteritidis experimental infection in chickens | |
| Singh et al. | Salmonella vaccines for veterinary use: an overview. | |
| Sobhy et al. | Preparación y evaluación de una vacuna aviar bivalente contra Newcastle y Salmonella, inactivada con formaldehído | |
| CZ307299B6 (cs) | Živý oslabený kmen Salmonella enterica pro orální vakcinaci hospodářských zvířat | |
| Malik | Evaluation of Immunogenic Potential of Salmonella Gallinarum Phage Lysate as Vaccine Candidate | |
| KR20250121896A (ko) | 가금에서 가금 티푸스 및 살모넬라성 식중독 예방을 위한 새로운 형태의 3가 살모넬라 불활화 사균체 예방 백신의 최적화 | |
| KR101774863B1 (ko) | 살모넬라증 치료를 위한 변이 균주 ｈｉｄ２０９２와 ｈｉｄ２１１４ 및 이를 포함하는 살모넬라증 약제학적 조성물 | |
| KR20080110594A (ko) | 약독화 살모넬라 생백신 | |
| US20100260794A1 (en) | Live attenuated salmonella vaccine | |
| CHICKEN | Dr. Suraksha Subedi Deka |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG1K | Utility model registered |
Effective date: 20120814 |
|
| ND1K | First or second extension of term of utility model |
Effective date: 20160628 |
|
| ND1K | First or second extension of term of utility model |
Effective date: 20190410 |
|
| MK1K | Utility model expired |
Effective date: 20220530 |