CZ280679B6 - Způsob izotopového značení peptidů - Google Patents
Způsob izotopového značení peptidů Download PDFInfo
- Publication number
- CZ280679B6 CZ280679B6 CS905076A CS507690A CZ280679B6 CZ 280679 B6 CZ280679 B6 CZ 280679B6 CS 905076 A CS905076 A CS 905076A CS 507690 A CS507690 A CS 507690A CZ 280679 B6 CZ280679 B6 CZ 280679B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- peptide
- hydrogen
- isotopes
- peptides
- solution
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 title 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 20
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims abstract description 20
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims abstract description 13
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims abstract description 11
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 10
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 14
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract 1
- -1 amine acids Chemical class 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 8
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N phenylalanine group Chemical group N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 7
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N butan-2-ol Chemical compound CCC(C)O BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KWHAJHJQOWBJEG-KBPBESRZSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[2-[(2-aminoacetyl)amino]acetyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 KWHAJHJQOWBJEG-KBPBESRZSA-N 0.000 description 2
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YFGBQHOOROIVKG-FKBYEOEOSA-N Met-enkephalin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=CC=C1 YFGBQHOOROIVKG-FKBYEOEOSA-N 0.000 description 1
- 108010042237 Methionine Enkephalin Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N formic acid;hydrate Chemical compound O.OC=O HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N pyridine Substances C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/665—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
- C07K14/70—Enkephalins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/107—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides
- C07K1/1072—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups
- C07K1/1077—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups by covalent attachment of residues other than amino acids or peptide residues, e.g. sugars, polyols, fatty acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/12—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by hydrolysis, i.e. solvolysis in general
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/534—Production of labelled immunochemicals with radioactive label
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
Způsob izotopového značení peptidů pro získání peptidů obsahujících izotopy vodíku spočívá v tom, že peptid s volnou N-koncovou aminoskupinou se zahřívá v neutrálním nebo mírně alkalickém prostředí o pH 7 až 11 za teploty 30 až 130 .sup.o.n.C a za přítomnosti vody s pozměněným zastoupením izotopů vodíku, přičemž izotopy vodíku jsou zavedeny na -uhlík první, první a druhé, případně první, druhé a třetí amminokyseliny v peptidovém řetězci. Výhodou je peptid, který obsahuje v poloze 1, nebo v polohách 1 a 2 glycin.ŕ
Description
Způsob izotopového značení peptidů
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu izotopového značení peptidů pro získávání peptidů, obsahujících izotopy vodíku.
Dosavadní stav techniky
Izotopově značené organické sloučeniny jsou velmi významným nástrojem, používaným při výzkumu jejich chemickým přeměn. V případě biologicky aktivních peptidů je izotopové značení prakticky jedinou možností, používanou při studiu mechanismu jejich účinku a sledování jejich osudu v živém organismu. Doposud známé způsoby vnesení izotopové značky do peptidů zahrnují a) nespecifickou výměnu vodíkových atomů - tzv. Wilzbachovo značení, b) adici vodíku na nenasycené vazby, c) katalytickou výměnu halogenových atomů na aromatickém jádře. Pouze těmito způsoby lze relativně snadno získat značenou látku, která se neliší chemicky od látky neznačené. Jiné způsoby značení bud’ mění charakter studované látky - vnášení radioaktivních atomů původně v molekule neobsažených (např. izotopů jodu), nebo připojováním bloků, obsahujících radioaktivní značku - nebo jsou synteticky velmi náročné - syntéza vychází z prekurzorů (obvykle aminokyselin) již obsahujících radioaktivní izotopy (3H, i:lC, 13C).
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je způsob izotopového značení peptidů pro získání peptidů, obsahujících izotopy vodíku, který spočívá v tom, že peptid s volnou N-koncovou aminoskupinou se zahřívá v neutrálním nebo mírně alkalickém prostředí o pH 7 až 11 za teploty 30 až 130 C za přítomnosti vody s pozměněným zastoupením izotopů vodíku, přičemž izotopy vodíku jsou zavedeny na a-uhlík první, první a druhé, případně první, druhé a třetí aminokyseliny v peptidovém řetězci. Výhodou je peptid, který obsahuje v poloze 1, nebo v polohách 1 a 2 glycin. Takto získaný peptid lze použít jako jeden z fragmentů při syntéze peptidů. Metoda značení peptidů podle vynálezu vychází z poznatku, že peptidy ve vodném prostředí za neutrálních či různě alkalických podmínek (pH 7-11) a zvýšené teploty (30-130 °C) podléhají racemizaci amminoterminálních aminokyselin, přičemž volbou podmínek je možno racemizovat jednu, dvě nebo tři aminokyseliny. Tudíž je možno libovolný peptid s volnou α-aminoskupinou podrobit zahřívání v neutrálním až mírně alkalickém roztoku ve vodě s pozměněným zastoupením izotopů vodíku a získat tak směs distereoizomerních peptidů, ve kterých je vodík na α-uhlíku první aminokyseliny (v případě tvrdších podmínek zahřívání také na druhé a třetí aminokyselině) vyměněn za izotop nebo směs izotopů vodíku, který byl obsažen v použité vodě.
Diastereoizomerní peptidy, získané v případě, že koncovou aminokyselinou není glycin, lze rozdělit pomocí vysokotlaké kapalinové chromatografie (HPLC) a získat tak velmi snadno peptid o stejné konfiguraci všech asymetrických center, jako měla výchozí látka. Zvláště výhodný je tento postup pro peptid, obsahující
-1CZ 280679 B6 v poloze 1 glycin (případně obsahující glycin v polohách 1, 2 či 1, 2, 3), neboť v tomto případě nevzniká směs diastereoizomerů (a tudíž není třeba přistupovat k HPLC čištění) a výtěžek značení je vyšší, neboť lze vyměnit dva protony v první aminokyselině. Využití aminokoncového glycinu lze doporučit i pro značení látek, které obsahují glycin uvnitř své aminokyselinové sekvence. V těchto případech je třeba provést syntézy jednak fragmentu peptidu, obsahujícího aminoterminální glycin (I), a jednak aminoterminálního fragmentu (II). Fragment I se pak podrobí výše popsanému vnesení vodíkových izotopů, připojí se k němu pomocí známých metod syntézy peptidů fragment II a po odstranění chránících skupin se získá specificky značený žádaný peptid. Výhodou způsobu značení dle vynálezu je velmi jednoduchý způsob provedení, nízká cena potřebných chemikálií.
Dále uvedené příklady způsob dle vynálezu ilustrují, ale neomezuj í.
Příklady provedení vynálezu
Vysvětlení zkratek, použitých v příkladech:
TLC = tenkovrstvá chromatografie,
HPLC = vysokotlaká kapalinová chromatografie.
Příklad 1
Η-(a-2H)-Phe-Met-Arg-Phe-OH
Hydrochlorid tetrapeptidu H-Phe-Met-Arg-Phe-OH (30 mg) byl rozpuštěn v D2O (10 ml), pH roztoku bylo upraveno na hodnotu 7,3 pomocí 1 mol/1 roztoku hydroxidu draselného a roztok byl v uzavřené ampulí zahříván na 120 °C po dobu 47 h. Po této době byl roztok vnesen na kolonu Silasorbu Cg (25x2,4 cm) a gradientovou elucí (30-50 % acetonitrilu v 0,l%ní kyselině trifluoroctové během 50 min) získané frakce byly zahřívány ve vakuu a lyofilizovány. Bylo získáno 8 mg látky, jejíž retenční čas na koloně Separon SIC18 (25x0,4 cm) je shodný s retenčním časem výchozí láťky. Pomocí analýzy 1H NMR spektroskopie bylo zjištěno, že tato látka obsahuje pouze 35 % vodíku 1H na α-uhlíku aminoterminálního fenylalaninu. Získaný peptid byl čistý dle TLC (tenkovrstvá chromatograf ie) [RF 0,24 (2-butanol - 98% kyselina mravenčí - voda, 75: :13,5:11,5 (soustava A)], 0,01 [2-butanol - 25% vodný čpavek
- voda, 85:7,5:7,5 (soustava B)], 0,09 [1-butanol - kyselina octová - voda, 4:1:1 (soustava C)J, 0,58 [1-butanol - pyridin
- kyselina octová - voda, 15:10:3:6 (soustava D)], elektroforetické analýzy (EHis5,7 = 0,44, EHls2ř4 = °>82) a HPLC (viz výše) a shodoval se ve všech těchto testech s výchozí látkou. Aminokyselinová analýza: Phe 1,96 (2), Met 0,88 (1), Arg 1,04 (1). FAB MS: 601,3 + 600,3 (M+H+).
Příklad 2
Η-(a-2H2)Gly-Gly-Phe-Met-OH
Volný tetrapeptid H-Gly-Gly-Phe-Met-OH (5 mg) byl rozpuštěn v D2O (5 ml), pH roztoku bylo upraveno na hodnotu 9,25 pomocí 1 mol/1 roztoku hydroxidu draselného a roztok byl v uzavřené ampuli zahříván na 120 ’C po dobu 23 h. Po této době byl roztok vnesen na kolonu Silasorbu C8 (25 x 2,4 cm) a gradientovou elucí získané frakce byly zahřívány ve vakuu a lyofilizovány. Bylo získáno 5 mg látky, jejíž retenční čas na koloně Separon SIC18 (25 x 0,4 cm) je shodný s retenčním časem výchozí látky. Pomocí analýzy ^H NMR spektroskopie bylo zjištěno, že tato látka obsahuje pouze 20 % vodíku na α-uhlíku aminoterminálního glycinu. Získaný peptid byl čistý dle TLC [Rp 0,28 (A), 0,03 (B), 0,32 (C), 0,55 (D)], elektroforetické analýzy (EHis5,7 = 0/01/ WG1^2 4 =
0,96) a HPLC (viz výše) a shodoval se ve všech těchto testech s výchozí látkou. Aminokyselinová analýza: Phe 0,96 (1), Gly 2,03 (2), Met 0,89 (1). FAB MS: 413,2 (M+H+).
Příklad 3
Η-(a-2H2)Gly-(a-2H2)Gly-(a-2H)Phe-Met-OH
Volný tetrapeptid H-Gly-Gly-Phe-Met-OH (20 mg) byl rozpuštěn v D2O (5 ml), pH roztoku bylo upraveno na hodnotu 11,9 a roztok byl v uzavřené ampuli zahřívá na 120 °C po dobu 24 h. Po této době byl roztok vnesen na kolonu Silasorb C8 (25 x 2,4 cm) a gradientovou elucí (0-40 % methanolu v 0,1% trifluoroctové kyselině během 5 min a 40-50 % methanolu v 0,1% trifluoroctové kyselině během 50 min) získané frakce byly zahřívány ve vakuu a lyofilizovány. Bylo získáno 9 mg látky, jejíž retenční čas na koloně Separonu SIC18 (25 x 0,4 cm) je shodný s retenčním časem výchozí látky. Pomocí analýzy ^H NMR spektroskopie bylo zjištěno, že tato látka obsahuje pouze stopy vodíku 1H na α-uhlíku aminoterminálního glycinu a na α-uhlíku glycinu v poloze 2 a 10 % vodíku ·*·Η na α-uhlíku fenylalaninu v poloze 3. Získaný peptid byl čistý dle TLC [Rp 0,28 (A), 0,03 (B), 0,32 (C), 0,55 (D)], elektroforetické analýzy (EH-*-s5 7 = 0,01, EG3_^2 4 = 0,96) a HPLC (viz výše) a shodoval se ve všech těchto testech s výchozí látkou. Aminokyselinová analýza: Phe 1,03 (1), Gly 2,07 (2), Met 0,88 (1), FAB MS: 416,2 (M+H+).
Příklad 4
H-Tyr-(a-2H2)Gly-(a-2H2)Gly-(a-2H)Phe-Met-OH
Peptid připravený v příkladu 3 (5 mg) byl rozpuštěn ve vodě,
-3CZ 280679 B6 pH roztoku bylo upraveno na 9,5 a k získanému roztoku byl přidán roztok Boc-Tyr-ONSu (10 mg). Směs byla míchána při teplotě místnosti až do vymizení výchozího peptidu (TLC) analýza). Poté byl roztok odpařen, zbytek byl rozpuštěn ve směsi kyseliny trifluoroctové a anisolu (95:5) a po 20 min byl roztok odpařen, zbytek rozpuštěn v 3 mol/1 kyselině octové a nanesen na kolonu Vydac C18 (25 χ 1 cm). Gradientovou elucí (20-50% acetonitrilu v 0,05 % trifluoroctové kyseliny během 40 min) získané frakce byly zahřívány ve vakuu a lyofilizovány. Bylo získáno 4,7 mg látky, jejíž retenční čas na koloně Separonu SIC18 (25 x 0,4 cm) je shodný s retenčním časem výchozí látky. Pomocí analýzy NMR spektroskopie bylo zjištěno, že tato látka má stejný obsah vodíku na α-uhlících glycinu v poloze 2 a 3 a fenylalaninu v poloze 4, jako měl výchozí tetrapeptid. Získaný peptid byl čistý dle TLC [Rp 0,32 (A), 0,10 (B), 0,41 (C), 0,57 (D)J, elektroforetické analýzy (eHís^ i _ QzQiř EG1^2 4 = 0/67) a HPLC (viz výše) a shodoval se ve všech těchto testech se standardem methionin enkefalinu. Aminokyselinová analýza: Phe 1,03 (1), Gly 2,10 (2), Met 0,87 (1), Tyr 0,93 (1). FAB MS: 579,2 (M+N+).
Průmyslová využitelnost
Způsob podle vynález lze využít v základním výzkumu při studiu metabolismu a distribuce biologicky aktivních peptidů v živém organismu.
Claims (2)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Způsob izotopového značení peptidů pro získání peptidů, obsahujících izotopy vodíku, vyznačující se tím, že peptid s volnou N-koncovou aminoskupinou se zahřívá v neutrálním nebo mírně alkalickém prostředí o pH 7 až 11 za teploty 30 až 130 ’C a za přítomnosti vody s pozměněným zastoupením izotopů vodíku, přičemž izotopy vodíku jsou zavedeny na α-uhlík první, první a druhé, případně první, druhé a třetí aminokyseliny v peptidovém řetězci.
- 2. Způsob dle nároku 1, vyznačený tím, že značený peptid je peptid, obsahující v poloze 1, nebo v poloze 1 a 2 glycin.
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS905076A CZ280679B6 (cs) | 1990-10-18 | 1990-10-18 | Způsob izotopového značení peptidů |
| PCT/US1991/007658 WO1992007265A1 (en) | 1990-10-18 | 1991-10-18 | Selective peptide labeling with hydrogen isotopes |
| AU89536/91A AU8953691A (en) | 1990-10-18 | 1991-10-18 | Selective peptide labeling with hydrogen isotopes |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS905076A CZ280679B6 (cs) | 1990-10-18 | 1990-10-18 | Způsob izotopového značení peptidů |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ507690A3 CZ507690A3 (en) | 1994-02-16 |
| CZ280679B6 true CZ280679B6 (cs) | 1996-04-17 |
Family
ID=5394932
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS905076A CZ280679B6 (cs) | 1990-10-18 | 1990-10-18 | Způsob izotopového značení peptidů |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| AU (1) | AU8953691A (cs) |
| CZ (1) | CZ280679B6 (cs) |
| WO (1) | WO1992007265A1 (cs) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2135602C1 (ru) * | 1998-02-23 | 1999-08-27 | Московский государственный институт стали и сплавов (технологический университет) | Способ сжигания природного газа в кислороде в дуговой сталеплавильной печи и устройство для его осуществления |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4162142A (en) * | 1978-06-29 | 1979-07-24 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Tritium labeling of organic compounds deposited on porous structures |
| US4242186A (en) * | 1979-03-27 | 1980-12-30 | Georgia Tech Research Institute | Low pressure tritiation of molecules |
| SU968036A1 (ru) * | 1980-03-10 | 1982-10-23 | Научно-исследовательский институт медицинской радиологии АМН СССР | Способ получени меченого белка |
-
1990
- 1990-10-18 CZ CS905076A patent/CZ280679B6/cs unknown
-
1991
- 1991-10-18 AU AU89536/91A patent/AU8953691A/en not_active Abandoned
- 1991-10-18 WO PCT/US1991/007658 patent/WO1992007265A1/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1992007265A1 (en) | 1992-04-30 |
| CZ507690A3 (en) | 1994-02-16 |
| AU8953691A (en) | 1992-05-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2091873C (en) | Parathyroid hormone derivatives | |
| Bodanszky et al. | Synthesis of the vasoactive intestinal peptide (VIP) | |
| Han et al. | Studies on the Primary Structure of Bovine High-MolecularWeight Kininogen: Amino Acid Sequence of a Fragment (“Histidine-Rich Peptide”) Released by Plasma Kallikrein | |
| DK1019095T3 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af faciale metaltricarbonylforbindelser og deres anvendelse til mærkning af biologisk aktive substrater | |
| US5026909A (en) | Method for preparing biologically active organic compound labelled with hydrogen isotope | |
| US4206199A (en) | Novel glucagon fragment and its derivatives | |
| JPH0570433B2 (cs) | ||
| Yi et al. | Peroxynitrite-mediated nitration of peptides: characterization of the products by electrospray and combined gas chromatography–mass spectrometry | |
| Wendt et al. | The Covalent Structure of Collagen: The Amino‐Acid Sequence of the 112‐Residues Amino‐Terminal Part of Peptide α1‐CB6 from Calf‐Skin Collagen | |
| Glazer et al. | The iodination of chymotrypsinogen | |
| O'Connell et al. | Isolation and isotopic analysis of individual amino acids from archaeological bone collagen: A new method using RP‐HPLC | |
| Yamasaki et al. | Amino acid sequence of a biologically active fragment of bovine growth hormone | |
| Tenu et al. | Photoaffinity labelling of macrophages and B-lymphocytes using 125I-labelled aryl-azide derivatives of muramyldipeptide | |
| CZ507690A3 (en) | Method of peptide radiolabelling | |
| SHIMOMURA et al. | Primary structure of cat osteocalcin | |
| Klauschenz et al. | Tritium labeling of gonadotropin releasing hormone in its proline and histidine residues | |
| Langley et al. | Sequence of Bovine Liver Glutamate Dehydrogenase: IV. CYANOGEN BROMIDE PEPTIDES | |
| Aimoto et al. | Development of protein chemical synthesis using peptide thioester synthetic blocks | |
| Terada et al. | Iodination of luteinizing hormone-releasing hormone | |
| JPH04282399A (ja) | 放射性ヨウ素標識インシュリン様成長因子ｉ | |
| Brundish et al. | Tritiated peptides. Part 141. Catalytic exchange labelling of various synthetic peptides | |
| Weinberger et al. | Small Peptide Libraries: Combinatorial Split‐Mix Synthesis followed by Combinatorial Amino Acid Analysis of Selected Variants | |
| Yajima et al. | Studies on Peptides. XV. Synthesis of Prolyltyrosylarginylmethionine, the Tetrapeptide situated within the Amino Acid Sequences of Monkey and Human β-Melanocyte-stimulating Hormones. | |
| Anpeiji et al. | An improved resolution of. BETA.-hydroxy-DL-aspartic acid on optically active resin containing L-lysine or L-ornithine. | |
| US20060111552A1 (en) | Metal binding precursors for the synthesis of peptide-metal conjugates |