CZ285199A3

CZ285199A3 - Způsob přípravy eprosartanu

Info

Publication number: CZ285199A3
Application number: CZ19992851A
Authority: CZ
Inventors: Richard T. Matsuoka; Peng Liu
Original assignee: Smithkline Beecham Corporation
Priority date: 1997-02-14
Filing date: 1998-02-13
Publication date: 2000-02-16
Also published as: US20020028951A1; AU730162B2; IL143785A0; BRPI9808642B8; HK1026206A1; EA001761B1; NO317761B1; SA98190146B1; NO993912L; IL143783A; ES2224358T3; HU228098B1; WO1998035962A1; IL131310A; HUP0001813A3; CA2281471A1; NO993912D0; JP2001511808A; EP0973769A1; IL143784A0

Description

Předkládaný vynález roztažnosti za použíti o toká regulace cervikálni dilaíacc a onorú oxidu dusnatého a/nebo substrát nebo inhibitorů oxidu dusnatého

Dos avadriWs.Uá: .1eohniky

Porod (vypuzení plodu z dělohy) vyžaduje jax kont.,-u. myometri a, hladké svaloviny dělohy, tak rozvlnění pojivové tkané červixu, takže se roztáhne a dilatujp dostatečně pro umožněni vypuzení plodu. Toto rozvolnéní je známé jako dozrán í.

Nvní preferovanou metodou pro dozrání cervixu je použití prostaglandmu E: . Tento jp používán jako vaginální Ρ-Ί nebo tablety nebo jako gel umístěný do cervixu. Jednou obavou při použití prostag1 and i nu Fz je to. že zde existuje možnost hvperstimuláce dělohy, vedoucí k excesivně silným kontrakcím m v ome t r i a před dozrama cervixu a proto před tím. nez je komín ctní nebo bezpečny porod možný.

Ideální přípravek bude rozvolňovat a vyhlazovat cervix bez toho, že by způsobil kontrakce myometria. Toto umožní, aby následná kontrakce (/ndukovatdně. pokud je to nutné, malou dávkou prostaglandinu) dopravily dítě s minimálním odporem. Existují dobré důkazy z pokusů na zvířatech, ze ant iprogest i ny , jako je RG486. mohou splňovat tyto požadavky, ale problem u léčiva je v tom, že je asociováno s ant ig 1 ukokor t i ko idní aktivitou, která může poškozovat plod.

Jedním z. nejvýznamnějších nedávných objevů v duhoU; a medicíně je objev, že oxid dusnatý je produkován cndote1 iú1ními buňkami a že se účastní v regulaci cévního tonu, agregace destiček. neurotnnsmise a imunitní aktivace (Furchgott a Zawadzki. MHO: Moncada. Palmer a Higgs, 1991; Ignarro.

199P. Oxid dusnatý jo významným med i diářem relaxace hladkenu svalu ( Montadu. Palmer and Higgs. 1991) a byl drive znám jako EDRP endotelií odvozený relaxační faktor) (l-’urchgott a Zawadxki. 1980: Moncada. Palmer a Higgs. 1991).

Cxid dusnatý je syntetizován oxidativci Team;naví guan id i nového dusíku L-argíninu různými i so formami flavin-obsahujicího enzymu, oxid dusnatý synthasy (Montada. Palmer a Higgs. 1991) .

Oxid dusnatý může také být generován aplikací různých donoru oxidu dusnatého. jako je nitroprusid sodný, nitroglycerin, glyceryl trinitrát. SIN—1, isosorbit mononitrát. isosorbit dinitrát. atd.

Γ syntesy oxidu dusnatého bylo ukázáno, že je kompetitivně inhihována analogy L-argininu; NG-nitro-Largi nin methylesterem (L-NAME), NG-monoethyl-L-argi ninem (nMMA).

N- i m i noci by 1 -L-arni thinem (I- NIO) . L-monome tliy 1 -L-arg i n i num (L-NNMA) . L-NG-methylarg ininem ÍLMMA) , Nw-nitro-I-argi ninem (I.—NA) a ami neguan id inem.

Léčba nobřezích morčat L-hAMP vede ke zvýšení kontraktabi1 i ty dělohy. Tak inhibice oxid dusnatý synthasou st i mu 1 o v a n é k o n t r ak t a b i 1 11 y d e 1 o h y u k a z u je. že u o n i c λ. e uvo i nen i oxidu dusnatého udržuje dělohu v klidném stavu. Obdobné, leeba březích morčat P-aAMF indukuje porod před termínem. Na drv.he -;'-·>οθ !.· ř ’ vrouž!·:ΰ dčbd;' in vítr·) L-argininem inhibuje kontrakce. Tyto studie ukazují, že produkce o:udu dusnatého dělohou inhibuje děložní kontrakt i 11 tu a hlokada této s v rit esy vede ke zvýšení svalové kont rakt i 1 i ty jak u orezich tak li nebřezích zvířat. Tak jsou substráty nebo doncry oxidu dusnatého použitelné terapeuticky pro zabráněn: déloíní kont rakti 1 itě a inhibitory oxidu dusnatého jsou ucinne pr; stimulaci dě ložních kontrakcí.

Na základe předběžných studií za použití opic rhesus

Jennings et al.. (The Journal of Maternal-Fetal Medicine 2: 170 - 175 (1993)) naznačili, že oxid dusnoty muže byt významný při udržení dčlohv v klidném stavu během těhotenství a ze enogenni oxid dusnatý muže být užitečný v kontrole porodu přej termínem.

Aktivita oxid dusnatý synthasy (NOS) byla demonstrována v mnoha strukturách dělohy gravidních krys Natuzz im et al. (Biochem. and Biophys. Res. Commun. . 194. c. 1 , 1 ~ S Π'·'¹'?); a ti usoudili, že NOS je přítomna v mnoha strukcuracn ':o i o ι n těhotných krys, Kedukce aktivity NOS při porodu rm smi čuj ? . ze NO může způsobovat zachovaní klidového stavu deložm kont rakti 1 i ty během gestace.

Morfo 1ogické studie již také ukázaly vyskyt NOS (NADPH-diaphorasa. histochemická metoda detekující všechny i so formy NOS) a NO metabolizujících enzymů jako je superoxid dismutasa v cervixu (Papka et al.. Neuroscience Letters 147 (1992): Shiotani et al., Acta Histochem, Cytochem. 26: 57 - 64

Bylo také objeveno, že s.c. ošetření L-ΝΛΜΕ u březích morčat v den 48 - 49 p.c. (den porodu 67 + 3 dny) překvapivě vedlo k redukci cervikální roz tažnos t i a redukci cervikanu dilatuce. ť břvíOi krys h;y 1 a zvýšená ys.duk.e oxidu d ns na t ή líc (parametr. ni tri ty a nitráty uvolňované in vitro) v cípku d ě ΐ o ž n i m na lezena v době porodu ve srovnán; s 1c. dnem březosti. Oproti tomu zde byla redukce v dčložní (ravometriální) produkci NO v průběhu březosti. Antiprogestin onapriston zvyšoval produkci oxidu dusnatého v děložním cípku u březích krys ještě více. ale měl inhibiční účinek na produkci NO v (děloze) myometriu. Ošetření stejnou dávkou onapristonu indukovalo cervikálni dozrávám u krys.

Tyto objevy ukazuji, že

- ošetření inhibitory oxidu dusnatého jako je L-NAME inhibuje cervikální dozráváni, ale stimuluje děložní kontrakce u bř-zích morčat:

- produkce NO, který má relaxační účinek na myometrium, se snižuje v těhotné děloze (myometriu) v průběhu březosti, ale zvyšuje se v čípku děložním během normálního a ant iprogestiny indukovaného porodu u krys:

- různé účinky inhibitorů oxidu dusnatého jako jo L-NAME na děložní kontrakt i 1 i tu a děl ožni čípek jsou způsoben;· různou funkcí NO-s y s t eaiu nebo přítomností různých isoforem enzymu v myometriu a čípku: a

- NO-system hraje významnou roli v kontrole déložmho cípku, kdy produkce NO je zvýšena během procesu dozrávání cípku dělo ž o i ho.

Z tohoto proto vyplývá, že (a) lokální aplikace donorú a/neho substrátů oxidu dusnaténo : bc-t nouzi ta ořu indukci c m / i j u i ho dozrávaní nebo fh) lokální aplikace inhibitorů oxidu dusnatého múže být použita pro zabránění nebo inhibici dozr ani cípku de 1 ožn : ho . např. pro léčbu červ i kál ní insuficience (předčasné rcrviKálni dozrávání) nebo předčasných porodů.

Tak je předkládaný vynález zaměřen na použití dononů a/nebo substrátů oxidu dusnatého nebo na použití inhibitoru oxidu dusnatého pro výrobu léčiv pro regulaci červ.kalni dilatace a/nobo roz tažnosti.

Předkládaný vynález obsahuje použití (a) alespoň jednoho donoru a/nebo substrátu pro výrobu léčiva, které má být podáno lokálně (např. intracervikalne něco intravaginálně) pro indukci cervikálního dozrání nebo (b) alespoň jednoho inhibitoru oxidu dusnat eho pro vyrorju léčiva, která má bát podáno lokálně (např. intracervikálně nebo i nt ravag iná 1 né) pro inhibici cervikálního dozraní pro let· roj cervikální insuficience nebo předčasného porodu.

Vhodné pro účely tohoto vynálezu jako (a) donory a/nebo substráty oxidu dusnatého nebo (b) inhibitory oxidu dusnatého jsou všechny sloučeniny, které jsou odborníkům známé a mají požadované vlastnosti; sloučeniny uvedené pod Dosavadním stavem techniky jsou preferovány.

Donory a/nebo substráty oxidu dusnatého (a) mohou být dále použity v kombinaci s (i) alespoň jedním antiprogesti πem. prostag1 and inem a/nebo cytokinem.

Příklady ant i provestinu jsou {i- 1'

7β/ lamino;

_s t [--4-^1-3-011 t y1f enyl)- l Ή’ 759). 4',5'-d

Ό , RV 48 a--¹

7 « - ( 1 - p r o p i n ? 1) o s 1.1 a 4 «- í 4- (d i me t !iy i aim no) i'e

- 1 l [1 - [ 4 - (d i m e t h y 1 a m i π o

H) -1'uran] -3-on.

) f e ny Π - 7 (i -nio 1 hy 1 ^s P

4,9- d 1 e η- Γ7 β . 2 ' (3 Ή) - furan ] - 3-υη .

Η ji-U-acetyifenyn-iR^-ůHiorπ-cho 1a-4,9.2 0 (Ε)-1 1β-μ-[ [ (aectyloxy) iminolmethy H f eny 1 I l/β (methoxymetl^ (E)-l Ιβ-[4-[[[(ethoxykarbony1) oxy] imino! methyl | tenyl .· p metboxy-na-imethoxymetliyDestra 4.9 dien ... a mnoho jiných sloučenin, majících kmnpetot antagonistickou aktivitu, ;.ΐηιθ J'^ju 1....,1 ovní progesteron 71¹ á m é o d 0 o m i x 11 m rno prostaílsndiny .»h»u být použity například sulprost-n (FGE2I nebo gemeprost.

Gc- i významně j š ími nebo i nterleuki η-13 representanty cytokinů jsou inter i cukin 8 Tyto výčty nejsou vyčerpávající.

Inliibitory oxidu dusnatého (b) v kombinaci s (ii) alespoň jeunim inhibitorem eyklooxygenasy (napr.

mohou dále byt použiti oroges1111 cm a/neuo

CQv_| nebo COX-2 inhibitory).

Jako progestin je preferován při proyvstvron. ale je také možné pouč nrozesticů známých odb rozené se vyskytující ít ivd'?u noho více z mnoha o mi kam pro použití jako orální antikoncepce. například levonorgestrel, cypr acetát. gestoden, drosp i renor:. desogestrel, 3—kctc-ci d i c n o g est aid.

Inhibitorem cyk 1 ooxygenasy muže byt například aspii in 1 a COX—2 inhibitor)- Další příklady COX-2 inhibitorů jsou uvedeny například v: Robert Aslanian. Nicholas I. (íu rutn··!.·,. James J. Kaminski; Cyclooxygenase 2: A Novel Target for Therapeuti o Intervention. Exp. Opin. Invest. Drugs, 19b4. 3 (I2> 1323 - 1325. například sloučeniny Sc-58l2o (GD Searle).

DuP-637, flusolide (6- ( 2 , 4-d i fluorophenoxy)-5-methy 1 s u 1 fony 1 amino- 1 - i nd anon) . Sc-57666 (GD Searle). L-745 337 (Merck Frosst). NS-398 (Μο n s a nto) .

V prvním aspektu (a) poskytuje vynalez použití tec bio sloučenin podle vynálezu ve spojení s porodem nebo potratem. A této situaci těhotenství je cervix předošetřen. Hormony během těhotenství a Iteruj i cervix, který potom účine ji od povíoá na jiná stimulans.

Dále vynález poskytuje sloučeniny podle (a) vynalezu ve spojitosti s chirurgickými postupy a diagnostickými postupy. Proto, sloučeniny podle, (a) vynálezu mohou, volitelné v kombinaci se sloučeninami uvedenými pod (i), být použity pro výrobu léku pro následující indikace:

(A) indukci porodu v termínu (době řádného porodu, nohou byt kombi novény se sekvenční léčbou oxytocinem nebo podobnými a g e n s ) , (B) indukci porodu při patologickém těhotenství (např. pri ma l formaci plodu): (preferovaně potraty crniiem t r i me :> .; o ; .

(C) indukci porodu v;·- spojitost; s intra a' ^Λri au; smrti ρΠΑ (D) indukci potratu (preferované /útratu v prvním t r i m e s t r u ) , (E) indukci porodu před termínem, (F) zvládáni prolongovaného porodu v důsledku cervikální dy s tok i o .

(G) indukci červ i kálni ho dozrávání u netěhotných žen nebo u těhotných zen pro usnadnění chirurgických nebo diagnostických p o s t u p ů . a (H) indukci cervikálního dozrávání u žen, které jsou léčeny oplodněním in vitro.

Ve druhém aspektu (b) poskytuje vynález použití těchto sloučenin podle vynálezu v indikacích, které vyžadují zahraněn příliš časnému dozrávání červixu nebo tam. kde by měl byt červ udržován rigidní. Proto sloučeniny podle (b) vynálezu mohou, volitelné v kombinaci se sloučeninami uvedenými pod (i i) . byt použity pro výrobu léků pro následující indikace:

(I) léčbu cervikální insuťici once (cervikální inkompetence) a (K) léčbu hrozícího předčasného porodu.

Obecně mohou být sloučeniny použity pro lidské a nor.“ lidské samice. Lidé jsou preferovanou skupinou pro tuto léčbu.

Donory a/nebo substráty oxidu dusna!vho (a) a inhibitory o.c dusnatého (b) mohou byt podány jakýmoliv způsobem, který, přim nebo nepřímo, dosáhne červixu. Tak jo vhodné aplikovat je intravaginálně nebo přímo do cervixn, např. typicky jako gel nebo krém. Mohou také byt inikovány do cervikální tkáně nebo tupou jehlou do cervikálního kanálu. Také mohou být aplikovány extraamni oti oky. t.j. mezi stěnu déložní a a um i otický vak, za p o užití kat e t ru.

Preferovanou formulací je gel nebo krém. ale mohou být aplikovány ve formě změkéovate Ir.ých kapslí, 1 i po šumů. nebo ve formulacích se zpomaleným uvolňováním, nebo jako vodné roztok, například jako salinický roztok nebo proteiny obsahující roztok. Formulace mohou byt připraveny metodami, které jsuu odboru í kům známe.

Pokud S'¹ kombinuje použití sloučenin výše uvedených pod (a) a (i), pak je předpokládáno, že ant i provestin múze být formulován pro systémové nebo pro lokální podaní .

Prostag1 and iny, stejně jako cytokiny. budou preferovaně formulovány pro lokální použiti.

Pokud se kombinuje použití a ( i i) . pak je předpokládáno.

sloučenin výše uvedený cli pod (b) že sloučeniny podle (i i) mohou být formulovány pro systémové nebo pro 1oká1n í podán í.

Formulací sloučenin podle (i) a (i i) muže být dosaženo způsoby. které jsou odborníkům známé.

Sloučeniny podle (a) podle vynálezu vykazuji farmako1 oyickou aktivitu v indukci cervikálního dozrávání a mohou proto být užitečné jako farmaceutická agens.

Sloučeniny podle (b) podlí' vynálezu vykazují farmako1ogi oknu aktivitu v prevenci cervikálního dozrávání a mohou proto byt užitečné jako farmaceutická agens.

Měření cervikálního dozráváni je uvedeno v příkadu 1.

Nitroprusid sodný a jiné honory oxidu dus πatého vykazují účinek na cervikální dozrávání v konceti t rac i ch okol·- b.''ž v

Sloučeniny podle rivm dozráním o porodu oxy tuuckou iedně nebo ve v;ce hodin nebo jednoho , , ^Λ - 40 n¹¹¹ · vvnáiezu monou oy l pouan. _er_Vixu. Dozrání múze byt následováno sloučeninou. Sloučeniny mohou být podány dávkách pedanyen ^v seri. x ·ΛΛ·.αρ.·.> dne. Sloučeniny podle vynálezu mohou být podány jakýmkoliv vhodným zusobem. zejména ve formě gelu, mast nebo lokální in j ekce koncentraci okolo 0,03 až 100 mM) .

Nitrcorusid sodný a jiné donory oxidu dusnateno vyhazuji účinek na červ i kál ni dozrávání v koncentrac i cn okolo C-bo c - 100 mM (i .8 ng - 6 mg/aplikaci) pokud jsou podaný lokálně nebfezím samicím morčat. Pro ty indikace, které jsou uveder vvše pod (G) až (H) se bude vhodná dávka samozřejmé i;s i1 v zé·· i s i o s t i na. například, použité sloučenino podle vy na ; ‘ hostiteli. zásobu odání a charakteru a závažnosti lecenéh, ,i. Nicméně, obecné, uspokojivé výsledky jsou u zvířat získán v v k · nc e n tracích od asi 0.0 o - 1 v o mM my/aniikaci) , preferované v koncentraci okolo podle vynálezu mohou být podány 2-1 - 48 hedm dozráním červixu . Sloučeniny mohou být podány více dávkách podaných v sérii s odstupem nexe jednoho dne. Sloučeniny podle vynálezu mohou jakýmkoliv vhodným zusobem. zejména ve formě lokální injekce (·' koncentraci okolo O.bc λ.·.

(1.3 μ í - 6 mM. S i čučen i před konečným v jedné nebo ve iika hodin nebo být podány gelu, masti nebo l00 mM).

Příklady dávkových rozsahů u lidí pro typické NO sub iO-donory jsou:

L-a rg i π i ii nitroprusid sodný n i t r o g I y c e r i n i sosu rbi d mu noni trát i s o s o rb id d i nií rát

500 mg - 10 g/den rozsah 500 - 2000 yg/kg/doii 0,5 - 10 mg/den

- 100 mg/den

10-10 0 m g./de n

Jiné NO-donory nebo NO-substráty jsou použity v i oek v i v a 1 on t n í cli množství cd .

vpické NO-inhibitory jsou:

Příklady dávkových rozsahu pr

I-NAME	1 - 50	m g /kg/do n
L-NIO	1 - 5 0	m g / k g / d e n
E-NA	1 - 50	me/kg/den
I.-MMA	i - 50	mg/kg/den
L-NG	1 - 50	mg/kg/den
L-NMA	1 - 50	mg/kg/den

am inoguanidin 0,1 100 mg/^g/aen

Jiný ΝΌ-inhibi tory jsou použity v b i oekv i v a 1 e n t n i en mim ž štvi ch .

Dávkovv rozsah pro Rl.‘ 486: 25 - 600 mg/den P¹ i

Jiné antiprogestiny jsou použity v biologicky ekvivalentních množs tv í cli.

Dávkovv rozsah pro su1 pros ton: 100 - 1000 pg/den i .m. nebo i.v. Jiné prostaglandiny jako je PGE2 jsou použity · ..· iňoekvivalentnich množstvích. Prostaglandiny mohou byt také □ on?, i ty lokálně i nt r ac e rv i ká i ně v gelu. i m ravas i na ne - - > pbo । a k') t a b I o 1v

Kvk.vy msab pru ««-2 ÍOnbit-ry: M - 130 ms/kg/den.

Dávkový rozsah pro Π.-Ζ: 130 os - 503 ug/den: dávkový rozsah pro IL-Ιβ: ICO ny - 500 pg/den.

B i oekv i va lentn i množství jiných sloučenin, r:e_ j >pu t .· , k ·..., js.m uvedeny výše, mohou být určena metodami, ktere jsou pausou v příkladech jako taková množství, ktere vedou k - * « a\na t « .,, účinku na cervix jako specificky popsaná množství za jinak ana 1ogických podmínek.

Popis obrázků na přiložených výkresech

Vvsledky vynálezu jsou doplněny obrázky, ktere usazuji ná s 1 e d u jící.

Obrázek 1 ukazuje účinek nitroprusidu sodného na cervikaOu dozrávání u březích morčat. Zvířata byla ošetřena jak je popsáno v příkladu 1. Horní panel ukazuje počáteční diiatuc. (v mm) během měřeni roz tažnos t i ; dolní panel Uhdí.aj,. u-int.. roztažnosti (sklon regresní křivky). Data jsou presentována jal sloupcové grafy. Vertikální linie ukazuje rozsah nd n e j n i ž š i ho naivyššího množství. Výška rámečku, horizontální linie a h\ezd popisují hodnotu čtvrtiny proměnné, median a průměrnou hodné. m v příslušném pořadí.

Obrázek 2 ukazuje účinky L-NAME na děložni čípek u těhotných morčat. Horní panel ukazuje počáteční dilataci (v nim) během měření mz tažnos t i ; dolní panel ukazuje účinek r<>z t a: uíc s l i (sni r-e-a rosní křivky \/mm)) . Data jsou ρ re s a n t os o no j -a..' a ¹

grafy jak je popsáno pro obrázek 1

Obrázky 3 až 5 ukažují roztažnosí čípku krys po ošetřeni I.-NAME (50 mg/krysu) nebo bez ošetření.

Obrázek 6 ukazuje zvýšení v trvání porodu a interval mládat (doba mezi narozením mládat) bahrm ošetření L-NAML·.

Obrázky 7 až 9 ukazují produkci NO během normální cervikální dilatace ( ), po progesteronu ( ), antiprogestinu ( ) a LPS ( ).

Pr í k íady pruvedení vynálezu

Příklad !

Vliv uxidu dusnatého na cervikální zralost u březích morčat (a) O be cná část

Měření zralosti

Celé čípky jsou získána od morčat v den 44 post co i turn. Studie roztažnosti jsou provedeny modifikací metody popsané v publikaci

DOWNING, S.J. and SHERWOOD, O,D, (1985) Endocrinology 118: 1215

- 1229. Iz^C-ivany čípek je udržv'án mezi dvěma háky insertovánými skrz každý kanál čípku. Jeden hák je fixován, druhým je pohybováno nahoru a síla a posun jsou měřeny se vzorkovacím stupněm 1 II? . Nej prve· je každé' čípek roztažen, dokud není dosažena síla 50 mN. Asociovaný posun je zaznamenán a jo nazván počáteční dilataci. Tak je původní vnitřní průměr cervixu dvojnásobek počáteční dilatace.

Potom je cervix r ts z L a ž n posunem háku o 0.1 mm, potom je hák

relaxován po 2 minuty. Toto jc opakováno.

vs. čas nestane nelineární (viz publikace Conrad. J- Γ Beland, K. (1979) Am. J. Obstet. Gynecol 133: M - 13) (bi Analýza:

Pra určeni roztažnosti cervixu je studována křivka poměru s;1: vs, napětí. Tato křivka je získána tehdy, když se vezme maximaln; síta p ·-a každé stadium eztense a asociovaný poměr napru, kun., je definován jako posun děleny počáteční dilataci. Sklen regre ani linie v lineární části této křivky se bere |>rn kvant i 1 i kar: účinku Léčby na cervikální roztažnost. Smzen: sklonu r e o r e s e n t u j e z v ý š e n i c e r v i k á 1 n í r o z t a z n o s t i (d o z r á \ a . 11 <. i 11 c ' _? · (c) Speciální část:

Břez; morčata, která byla 42 dni post coitum (o = 6 zmrat na skupinu) byla ošetřena i at racorvikal ně dvakrát denné 200 pl gelu (3% hvdroxvcelulosa) obsahujícího 0.03 mM nitroprusidu snílmdiu ·. (ivn éj a v den 43 (v 9.00 a v 17,00). Měřen: c erv i k á 1 n roztažnosti (parametry: sklon regresní linie, počáteční dilata. . bv I a provedena v den 44 p.c.

Gel je podán následujícím způsobem: Po zavedeni zřenula do vaginv je 200 μΐ celulosového gelu s nebo bez SMP injikovano as; 100 mm dlouhou tupou jehlou do červ i kál ní ho kanalu. Cast gelu se Přesunuje kanálem a dostává se přibližně do os internum čípku děložního. Gel má následující formulaci: gel obsahuje sloučeniny pudle vvnálezu v PBS (fosfátem pufrovaný sáli nicky roztos. viz I Huda,ni and i^;. C. Hay , (1900) Practical Immunology. Oxfcrd, druiv ·ρ.;_Λ:-) ýý (hmotnes t/oh j cm) hyd ro xy c - 1 u i c s o u .

Kontrolní skupina dostala gel obsahuji o i hydroxyce1u1 osu v PES.

3% (biu o t no s t / o b i em)

Mechanické vlastnosti čípku jsou měřeny metodou popsanou výše, která umožňuje kvantifikaci cervikální roztažnosti a dilatace děl ožni ho cípku za i zome t r i ckýii podmínek.

(d) Výsledky

Výsledky příkladu 1 jsou ukázány na obrázku I . Horní panel ukazuje sklon regresní 1 inie, což je parametrem roztažnosti cervixu. Dolní panel ukazuje počáteční di 1 ataci cervixu v mm.

Výsledky demonstruji, že donor NO nitroprusid sodný (SN?) po lokálním podání v gelu dramaticky zvyšuje cervikální dozrávání u t ě h o t n ý o h m o r č a t .

Příklad 2

Účinky ni troprusidu sodného (SNP) na morfologii cervixu u březí cti morčat

SNP (0,! M) byl podán intracervikálně v 0,2 ml PBS pufru obsahujícím 3% hydroxycelulosu dvakrát \ cíny (d) 42 - 43 post coitum (p.c.) a účinky byly hodnoceny v den 44 p.c. morfologickým hodnocením. Kontrolní zvířata byla ošetřena vehiknlem. Všechny červ ixy použité pro morťologické hodnoceni byly získány po in situ fixaci vaskulární perfuzí. Perfuzní procedura byla provedena v den 50 p.c. mezi 9 a 10 hodinami za auestesie 1,5 ml pentobarbita 1u i.m. (60 mg/ml). Kanyla byla implantována do břišní aorty před odstupem renálních artori i ; zvířata byla perfundaváaa kakady I át os ým put'r-u. pH t pu - 20 sekund a potom následovala fixam 2,5% glutaraldehydes v kakody 1 atov^m pufru. pH 7,4 po 6 - 10 minut při tlaku 80 - 100 ca HzO. Cemmy bylv excidovány a odděleny od okolních tkání, potom tixovar.y při 4 »C ve stejném fixativu. Po prosytí pufrem byl materiál post-fixován pv 2 hodiny v chladném kakody1átes puirováném IX OsOó, dehydratován ve stupňovaném ethanolu a ponořen do Araldyte eposy resinu. Transversal ní polotenkň mzy. tanks 1 - z pm, byly odebrány z každého z těchto vzorku a byly barveny i% toluidinovou modři v bor i tanu sodném pro vyšetření světelnou mikroskopií. Toto umožnilo studovat cely cervix, coz poskytuje oohl-’d na d i $ t r i hue i r ύ z n < ·; h buněčných populaoi v cozomu. Potom byly malé vzorky (1 — 2 mm ^}) odděleny od ΐransversální ho bloku červixu a bvlv p ř i ora v e n v ultratenké řezy sk l čněnými i nebo diamantovými noži na Reichert 0mU3 mikrotomu a byly umístěny na j edno š t ěrb i no vé Formvar-potažené móděné mřížky. Potom byly barveny uranylacetátem a citrátem olovnatým a vyšetřovány na Zeiss EM-10 elektronovém mikroskopu při 60 - 80 kW.

Studie na elektronovém mikroskopu ukázaly zřetelné cvrv ika Ini dozrávání spojené s rozpuštěním kolagenových vláken, stmmalním edemem, arteriálni dilataci a infiltrací makrofágy, lymtocyty a granulocyty, Také je přítomno mnoho ži mých buněk. Mortolcgicke účinky SNP byly podobné těm. které jsou pozorovány u normálního cervikálního dozrávání v termínu, nebo ρο léčbě antiprogestinem onapristonem nebo cytokinem IL-8.

Příklad 3 ilč inky 1-NAME na čípek děl ožni u březích morčat

Březí morčata byla ošetřena L-NAME (12.5 mg/den/zviře s.c.) v den 48 a 49 p.c. Cervikální roztažnosí a dilatace byla měřena v d · ’d o o i.^:. Λ· dav oo ;t t k · i hd'bv. Měřeni b^v 10 promd-no jak je popsáno v příkladu 1. Výsledky příkladu 3 jsou ukázány na obrázku 2. Jak počáteční dilatace. tak cervikální roztaž no st (zvýšení sklenul byly sníženy ve srovnání s kontrolní skupinou.

Příklad 4 účinky L-NAME na porod u březích morčat

Osmotické mínipumpy obsahující L-NAME (skupina 1: 7 mg: skupina 2: 12.5 a skupina 3: 25 mg/zviře/den) by iy implantovány suhkiitmié v dvn 50 p.c. (temni· = den 67 + 2 pm.). kojpim’ni skupina byla ošetřena voli i ku lem.

Všechna zvířata (5/5) ze skupiny 3 a 3/5 ze skupiny 2 porodil předčasně (před dnem 65 p.c.) v proběhu 8 dní léčby.

Tato studie ukazuje, že L-NAME indukuje porod před terminem u morčat aktivací děložních kontrakcí. Nicméně, prolongované porody trvající někoik hodin byly pozorovány u zvířat ošetřených L-NAME. Toto pozorovaní nepřímo ukazuje na deficientní cervikáIní dozrávání, které bylo demonstrováno v odděleném pokusu provedeném v den 50 p.c. za použití měření roztučnosti cervixu (obr. 2).

Příklad 5

Účinky L-NAME na porod u krys

Obrázek 6, který je založen na podobném pokusu, jako je popsán v příkladu 4 ukazuje, že během ošetření březích krys L-NAME (50 mg/den) se trvání porodu a interval mezi mládaty. což je interval mezi narozením jednotlivých mláďat, významně zvyšuje. Toto jasné ukazuje, že inhibitory exidu dusnatého zabraňují červ i kalnímu dozráváni u krys.

Pródiikce oxidu dusnatého u krys v průběhu normální cerviknlni dilatace. po ošetření progesteronem_f antiprogestinem a J.PS (a) Metoda

Aktivita generováni oxidu dusnatého in vitro jako celková akumulace nitritů v cervikální a děložní tkáni byla hodnocena za použití metody, kterou popsal Yallampalli C. Garfield BE.

Bvam-Smith Μ (1993); Nitric oxide inhibits uterine contractility dur ing pregnancy, but nut during del ivery, Endocrinology i 3.: : 1899 - 1902 . Stručně, malé kousky cervikální nebo uteriní tkán'· získané od rodících krys (den 22 - 23 těhotenství), od ošetřených onapristoněm (10 mg v den 18 p.c., s.c.) a od vehikulem ošetřených krys v den 18 - 2! p.c (kontrola) byly inkubovány v minimálním esenciálním mediu (MEM) s L-argimnem s ne¹)'; bez L-NAME po 2 4 hodin při 3 7 °C. Medium bylo testováno na cel kovu ni tri ty za použití Griess reapers.

(b) Výsledky

Produkce nitritů v děložní (my unie t r i á 1 n i) tkám: produkce se vv7n3nmě snižuje ve vzorcích dělohy získaných od rodících zvířat ve srovnáni s 18. dnem březosti (Yallampalli et al.. lne. cit.).

Produkce nitritů v cervikaluí tkáni signifikantní zvýšení v produkci Níž v rodících zvířat ve srovnaní s březími p.c.

Účinek iucmusleo no Nď p r mi 9: / ;

(o oř. i): je zde eervixu získaném od krysami ve dnu 18. - 22.

1 j l zde s i g n i í i k a π ΐ η i z v v š c π í v ρ r o cl 11 k c i \ i 1 v c o rvi x u v o s r' ) s kontrolní skupinou v 19. den p.c. na hladiny puzoruvane v spoutá lne rodících zvířat.

Příklad 7

Γιο : nd uk e cervikálního dozrávaní donor v oxidu dusnatéhc

Těhotným ženám (asi 30 b? t, 50 - SO km ve -0. tvdnu ges t a c o . k l p i e h y 1 y k 1 a s i i i k o v a n y k i nd n k c i po rodu v z h 1 e d e ni k preeklampsi i . by! podán nitroprusid sodný v koncentraci 0.0! - 01 mM v gelu intracervika1 ně dvakrát denně pro dosaženi cervikálního dozrávání. Indukce porodu byla provedena následující den za p o uži ti i,v, i n fu se o x yt ocínu.

P r í k 1a d S

Léčba cervikální insuficience lokální aplikací L-NAME

Těhotným ženám (asi 30 let, 50 - SCI kg) ve 26. tvdnu těhotenství výkazujicícm cervikální insuficienci (cervikální dilataee, rozvolnění červixu) bylo podáno L-NAME v gelu mt race rvi kalně nebo intravagi na I ně v koncentraci 0.1 - 50 mg/ ve dvou až třecii dávkách denně do zmírnění příznaků eervikální i ns u f i c i o n c e .

Claims

1. Použití donorů a/nebo substrátu oxidu cos inhibitoru oxidu dusnatéhc pro výrobu léčiva pr červ i kalu i dilatace a/nebo ro ztažnosti .

2. Použití bud:

(a) alespoň jednoho donoru a/nebo ouostrátu ^f|Xido dusnato pro vťrobu léčiva, které jo podáno lokálně intnearvikai ne ne oo intravaginálně pro indukci červ iká1ního dozrávání nebo (b) alespoň jednoho inhibitoru oxidu dusnatehc pro výronu léčiva, které je podáno lokálně i ntracorvika1 ně neoo intravaginálně pro inhibic i cerviká l n í ho dozrávám pro Ivcim cervikální insuficience nebo předčasného porodu.

podle nároku 1

3. Použití podle nároku 2 (a) v kombinaci s alespoň jedním autiprogestinem. prostaglandinem a/nebo cytokinem.

4. Použiti podle nároku 2 (b) v kombinaci s alespoň jedním antiprogestinem a/nebo inhibitorem cyklooxygenasy (COX-1 a COX i nhi b i t o ry) .

Použiti podle nároku 2 nebo 3 pro

6, Použití podle nároku 2 něho 3 pro indukci porodu v termínu.

indukci porodu v souvislosti s patologickým těhotenstvím.

7. Použití podle nároku 2 nebo 3 pm indukci porodu v s ·. i o v i s 1 o s t i s nitroděložní smrtí plodu.

o. Použití podle nároku 2 nebo 3 pro indukci potratu.

9. Použití podle nároku 2 nebo 3 pro indukci porodu před t : rm i ncm .

10. Použití podle nároku 2 nebo 3 pro zvládnutí prodlouženého po rodu.

11 . Použil: podle nároku 2 nebo 3 pm indukci cervikalr.die dozrávání netěhotných žen nebo těhotných žen pro uplatnění při chirurgiekých a diagnostických postupech.

12. Použiti podle nároku 2 nebo 3 pro indukci červ iká1ního dozrávání u žen léčených oplodněním in vitro.

!3. Použití podle nároku 2 nebo 4 pro léčbu červikálni insu i i cienc e.

14. Použití podle nároku 2 nebo 4 pro léčbu hrozícího porodu před termínem.

15. Použiti alespoň jednoho z L-argininu, nitroprusidu sodného, nitroglycerinu. glyceryl trinitrátu, SIM—l, isosorbid mononitratu. isosorbid dinitrátu podle nároku 2 jako substrátu a/neho donoru oxidu dusnatého podle nároku 2.

16. Použití alespoň jednoho z NG-nitro-L-arginin methylesteru (L-NAME), NG-monoethy 1-L-argini nu (L-MMA) ,

N- i m i noe t hy 1 -I.-a rn i t h i nu (L—ΜT<') . L-monome t hy 1 -L-a rg i n i nu (I.-NkMA) . P-NG-me t hy la r g i n i nu (L-NMA(, Nw-n i t m-I.-a rg i n i nu (I.-ΜΛ) a ani i no juan i d i nu podle nároku 2 jako inhibitoru oxidu dusnatého.

17. Po užit i alespoň jednoho · onapnstonu (Hp i4 v d mne i iu· amino) feny1]-17a-hydroxy-l7β- (3-hydroxypropy1)- 13a-estra-4.9-dien-3-on). ΚΓ 4H6 (113Γ 4-(d i methyl am i no) feny 1 ] - !. 7 α- (1 - p r o p i ny 1) es tra-4 . 9-d i on-3-on) · (Z) — 1 1 P — [ (d i me t hy 1 am i no) fenyl I -! 7 β-hydroxy- 1 7α- (o-a; d i o.%y - H propenyl)-str-4-en-3-onu (ΕΡ-Λ 0404283).

1 Ιβ - (4 - a c e t y l f e ny1)-l7β~ hd r ox y- 17 a-(l-p r op i ny1)o s t r a-4.-d i en3-onu (EP-A 0’90759),

4 ¹ .5 ’ -dihydro-11β-[4-(d imethylamino)feny l ]-6βmethyIspi n[estra-t, 9-d ien-i 7β . 2 ' (3 ' H)-furan]-3-unu.

4 ¹ .5 ’ -d i hydru-1 1 β — [ 4 - (d imethy 1 am i no) fenyl ] - β — _in e t uy l s p i r::' o s i 4,9-d i en-í 7i<, 2 ’ (3 Ή)-f uran]-3-onu, !।p_(4-_acety 1fony 1)- I9.24-di nor-17,23-^ poxy-17a-cbola-4.9.20t r i e n-3-onu, (E) — 1 । r ,i _ [ r (ac? t y 1 oxy) imi no 1 me t hy 1 ] f eny 1 ] - l 7β-mr’ t hony - 1 7 α(me thoxymethy])es t ra-4.9-d i en-3-onu, f v) _ ’ । β- [ 4- [ r [ (_e t ho xykar bony 1) o xy ] i ni i no ] me tli y 1 | feny 1 - l 7 β — nu·' t ho xy -1 7α - (me t imxyme t hy 1) es t ra-4,9-d i e u-3- onU jako antipmsti nu podle nároku 3.

13. Použití PGE?. nebo Gemeprostu jako pros tag lund i nu podle ! t¹. Použití interleukinu-8 nebo interleukinu Ιβ jako tok;nu podle nároku 3,

20. Použití progesteronu jako progestinu podle nároku 4.

21. Použití aspirinu jako inhibitoru cyklooxygenasy podle ná r o ku 4,

22. Použití Πosol Idu jako COX-2 inh