CZ287889B6 - Heparin tvořený složkami s nízkou molekulovou hmotností, způsob jeho přípravy a farmaceutická kompozice tento heparin obsahující - Google Patents
Heparin tvořený složkami s nízkou molekulovou hmotností, způsob jeho přípravy a farmaceutická kompozice tento heparin obsahující Download PDFInfo
- Publication number
- CZ287889B6 CZ287889B6 CZ19941132A CZ113294A CZ287889B6 CZ 287889 B6 CZ287889 B6 CZ 287889B6 CZ 19941132 A CZ19941132 A CZ 19941132A CZ 113294 A CZ113294 A CZ 113294A CZ 287889 B6 CZ287889 B6 CZ 287889B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- heparin
- molecular weight
- solution
- nitrite
- sodium salt
- Prior art date
Links
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 title claims abstract description 80
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 60
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 title claims abstract description 48
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 25
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 18
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 44
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 21
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims abstract description 13
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 229940127215 low-molecular weight heparin Drugs 0.000 claims description 20
- 239000003055 low molecular weight heparin Substances 0.000 claims description 18
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 17
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 claims description 17
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 13
- OHJKXVLJWUPWQG-PNRHKHKDSA-N Heparinsodiumsalt Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NS(O)(=O)=O)[C@@H](O)O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@H]1O[C@H]1[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](C(O)=O)O1 OHJKXVLJWUPWQG-PNRHKHKDSA-N 0.000 claims description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 10
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims description 9
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 claims description 9
- 125000000018 nitroso group Chemical group N(=O)* 0.000 claims description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 9
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 claims description 8
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 claims description 7
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 7
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 claims description 7
- -1 nitrite ions Chemical class 0.000 claims description 5
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N Nitrous acid Chemical compound ON=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 claims description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 2
- 150000003385 sodium Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims 2
- 230000001858 anti-Xa Effects 0.000 claims 1
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 claims 1
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 claims 1
- 150000002832 nitroso derivatives Chemical class 0.000 abstract description 24
- 239000013543 active substance Substances 0.000 abstract 1
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 29
- 239000000047 product Substances 0.000 description 18
- 239000002565 heparin fraction Substances 0.000 description 17
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Natural products CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 11
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- YLKFDHTUAUWZPQ-UHFFFAOYSA-N N-Nitrosodi-n-propylamine Chemical compound CCCN(N=O)CCC YLKFDHTUAUWZPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 8
- 229960000899 nadroparin Drugs 0.000 description 7
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 4
- QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N isopentane Chemical compound CCC(C)C QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LNOPIUAQISRISI-UHFFFAOYSA-N n'-hydroxy-2-propan-2-ylsulfonylethanimidamide Chemical compound CC(C)S(=O)(=O)CC(N)=NO LNOPIUAQISRISI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- YTKLYANZDLHMLG-KVTDHHQDSA-N [(2r,3s,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]methyl hydrogen sulfate Chemical group OC[C@H]1O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O YTKLYANZDLHMLG-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- QHFQAJHNDKBRBO-UHFFFAOYSA-L calcium chloride hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Cl-].[Cl-].[Ca+2] QHFQAJHNDKBRBO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000012691 depolymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N dimethyl butane Natural products CCCC(C)C AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 229950003543 nadroparin calcium Drugs 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 2
- 229940000204 reviparin sodium Drugs 0.000 description 2
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004435 EPR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 101150030550 cpg-9 gene Proteins 0.000 description 1
- 229940018872 dalteparin sodium Drugs 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N diphosphonate Chemical compound O=P(=O)OP(=O)=O YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N phosphorus pentoxide Inorganic materials O1P(O2)(=O)OP3(=O)OP1(=O)OP2(=O)O3 DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000011045 prefiltration Methods 0.000 description 1
- 239000005297 pyrex Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
- C08B37/0078—Degradation products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Řešení se týká heparinu, tvořeného složkami s nízkou molekulovou hmotností a získaného dusitanovou depolymerací heparinu přírodního původu, ve kterém 90 % z celkového počtu jeho složek má molekulovou hmotnost 1000 až 10 000 a který má celkový obsah nitrososloučenin nižší nebo rovný 500 ppb, a jeho farmaceuticky přijatelných solí. Způsob přípravy tohoto heparinu spočívá v tom, že se vodný roztok heparinu, získaného dusitanovou depolymerací heparinu přírodního původu, mající koncentraci 5 až 15 % hmotn./obj., vystaví účinku ultrafialového záření s vlnovou délkou 180 až 350 nm při teplotě 5 až 50 .degree.C a pH roztoku 3 až 8. Je popsána i farmaceutická kompozice, obsahující uvedený heparin jako účinnou látku.ŕ
Description
Oblast techniky
Vynález se týká heparinu, tvořeného složkami s nízkou molekulovou hmotností, způsobu jeho přípravy a farmaceutické kompozice, která tento heparin obsahuje jako účinnou látku.
Dosavadní stav techniky
Je známo získávat frakce heparinu dusitanovou depolymerací jak je popsáno například v patentových přihláškách EP-A-0014184 a EB-A-0027089. Určité heparinové frakce, získané 15 dusitanovou depolymerací, jsou účinnými složkami léčiv, která vstoupila do obecného používání pod označením „hepariny s nízkou molekulovou hmotností“. Pro veškeré podrobnosti o heparinech s nízkou molekulovou hmotností, používaných jako léčiva, jejich koncentracích a stupni sulfatace, vyjádřeném poměrem sulfáty/karboxyly, je možno se obrátit na publikaci „Héparines de faible masse moléculaire“, Pharmeuropa, říjen 1991, 3, č. 3, str. 161-165, a dále na 20 monografii, navrhovanou pro Evropskou farmakopeu, „Heparina massae molecularis minoris“, únor 1993 (PA/PH/Exp. 3T (92) 93). Takto připravené hepariny, s nízkou molekulovou hmotností, používané jako účinné složky léčiv, jsou popsány v patentových přihláškách nebo patentech, zveřejněných pod čísly FR-A-2478646, EP-A-0037319, EP-A-0076279, EP-A-0181259. Jsou známy pod mezinárodními obecnými označeními nadroparin vápenatý, 25 dalteparin sodný, reviparin sodný a tvoří účinné složky obchodně dodávaných nebo potenciálních specialit. Zejména reviparin sodný tvoří účinnou složku speciality CLIVARINr, prodávané v Německu. Další hepariny s nízkou molekulovou hmotností, získané dusitanovou depolymerací, jsou rovněž přítomny ve specialitách, které jsou k dispozici lékařské obci v Německu (MONOEMBOLEXRNM), v Rakousku (SANDOPARINR a TROPARINr) a ve Švýcarsku 30 (SANDOPARINER).
Postup dusitanové depolymerace vyvolává tvorbu netěkavých nitrososloučenin (dále označovaných sloučeniny N-NO nebo pouze N-NO) adicí skupiny NO na nitrosovatelné složky, přítomné v heparinu nebo v jeho frakcích nebo fragmentech. I když množství nitrososloučenin, přítomných 35 ve frakcích heparinu, je velmi nízké a nepředstavuje překážku jejich použití jako léčiv, poněvadž se jedná o netěkavé sloučeniny, vyžaduje výroba těchto produktů v průmyslovém měřítku manipulaci s velkými množstvími práškových substancí. Jejich úplné nebo prakticky úplné odstranění by tedy mohlo být účelné pro zdokonalení charakteristik heparinů s nízkou molekulovou hmotností, které se používají jako účinné látky ve farmaceutických specialitách.
V případě heparinů s nízkou molekulovou hmotností, jejichž střední molekulová hmotnost je malá, například v případě produktu, který je dále označován CY 222 (střední molekulová hmotnost 1700 až 3300 Da), může být množství nitrososloučenin vyšší než množství produktů s vyšší molekulovou hmotností. Tento produkt odpovídá definici produktů, nárokovaných v 45 patentových přihláškách a patentech, zveřejněných pod čísly FR-A-2 478 646 a EP-A-0 037 219, a může být připraven postupy v nich popsanými.
Z výše uvedených důvodů je tedy velmi žádoucí mít k dispozici frakce heparinu, připravené dusitanovou depolymerací a prakticky prosté nitrososloučenin.
Způsob odstranění dusičnanů z pitné vody se současnou sterilizací vody ozařováním ultrafialovými paprsky o vlnové délce nižší než 200 nm, přednostně 185 nm, a při alkalickém pH je popsán v článku P. Princze a d., Water Supply, 1988, 6, 199-205. Tento dokument, týkající se zpracování vody, však neumožňoval předpovědět, zda bude ozařování ultrafialovými paprsky
-1 CZ 287889 B6 použitelné na biologicky aktivní produkt bez nepříznivého ovlivnění jeho biologických a/nebo fyziochemických vlastností.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je heparin, tvořený složkami s nízkou molekulovou hmotností a získaný dusitanovou depolymerací heparinu přírodního původu, ve kterém 90 % z celkového počtu jeho složek má molekulovou hmotnost 1000 až 10 000 a který má celkový obsah nitrososloučenin nižší nebo rovný 500 ppb, a jeho farmaceuticky přijatelné soli.
Výhodně je heparinem podle vynálezu heparin, který je depolymerovaným heparinem, získaným dusitanovou depolymerací heparinu přírodního původu, pocházejícího z vepřového střevního slizu, z hovězích plic nebo jiného heparinu, získaného ze zvířecích tkání nebo orgánů, a majícím střední molekulovou hmotnost nižší než 8000, přičemž alespoň 60 % z celkového počtu jeho složek má molekulovou hmotnost nižší než 8000, aktivitu proti faktoru Xa rovnou nebo vyšší než 60 IU/mg a poměr aktivity proti faktoru Xa a aktivity proti faktoru Ha rovný nebo vyšší než 1,5, a který je ve formě farmaceuticky přijatelné soli.
Výhodně je heparin podle vynálezu ve formě sodné nebo vápenaté soli.
Výhodně je heparin podle vynálezu ve formě sodné soli heparinu, získaného depolymerací heparinu přírodního původu z vepřového střevního slizu kyselinou dusitou a mající střední molekulovou hmotnost v rozmezí 1 700 až 3 300, přičemž 90 % z celkového počtu jeho složek má molekulovou hmotnost v rozmezí 1000 až 8000, 2-O-sulfo-alfa-L-idopyranosuronovou strukturu na neredukujícím konci a 6-0-sulfo-2,5-anhydro-D-mannitolovou strukturu na redukujícím konci více než 50 % z celkového počtu jeho složek, stupeň sulfatace 2,1, aktivitu proti faktoru Xa 60 až 80 IU/mg, aktivitu proti faktoru Ha nejvýše rovnou 25 IU/mg a celkový obsah nitrososloučenin nižší nebo rovný 100 ppb.
Výhodně má tato sodná sůl heparinu celkový obsah nitrososloučenin nižší nebo rovný 50 ppb.
Předmětem vynálezu je dále způsob přípravy heparinu podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že se vodný roztok heparinu, získaného dusitanovou depolymerací heparinu přírodního původu, mající koncentraci 5 až 15 % hmotn./obj., vystaví účinku ultrafialového záření s vlnovou délkou 180 až 350 nm při teplotě 5 až 50 °C a pH roztoku 3 až 8.
Při způsobu podle vynálezu se výhodně použije ultrafialové záření s vlnovou délkou 254 nm při teplotě 15 až 35 °C a při pH roztoku 5 až 8.
Předmětem vynálezu je také způsob přípravy výše uvedené sodné soli heparinu, jehož podstata spočívá v tom, že se na vodný roztok nefrakciované sodné soli heparinu působí kyselinou chlorovodíkovou a alkalickým dusitanem v množství 3,5 až 4 hmotn. %, vztaženo na použité množství sodné soli heparinu, za udržování pHv kyselé oblasti a sledování přítomnosti dusitanových iontů až do negativní reakce, načež se reakční směs zalkalizuje tetrahydroboritanem sodným a v neutrálním prostředí se izoluje depolymerovaná sodná sůl heparinu, tvořená složkami s nízkou molekulovou hmotností, srážením ethanolem a získaný vodný roztok sodné soli heparinu s hodnotou pH 7 se vystaví účinku ultrafialového záření a vlnové délce 254 nm, při teplotě 5 až 50 °C a pH roztoku 7, načež se získaný roztok zavede na sloupec aniontoměničové pryskyřice, která se potom propláchne vodou a sodná sůl heparinu se z eluátu vysráží při pH 7 srážením chloridem sodným a ethanolem.
Výhodně se při tomto způsobu účinku ultrafialového záření o vlnové délce 254 nm vystaví po dobu 9 až 15 min a za použití UV lampy výkonu 16 W roztok sodné soli heparinu s koncentrací 8 až 12 % hmotn./obj.
-2CZ 287889 B6
Předmětem vynálezu je konečně farmaceutická kompozice, jejíž podstata spočívá v tom, že jako účinnou látku obsahuje heparin nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl podle vynálezu.
Výhodně tato farmaceutická kompozice obsahuje jako účinnou látku 10 až 5000 mg sodné soli heparinu podle vynálezu v jednotkové dávce.
Aktivita proti faktoru Xa a poměr aktivit proti faktoru Xa a faktoru Ila se stanovuje oproti mezinárodnímu etalonu heparinů s nízkou molekulovou hmotností OMS 1-85/600. Střední molekulová hmotnost se stanovuje podle výše uvedené monografie, navrhované pro Evropskou farmakopeu.
Jako výchozí produkt pro způsob podle vynálezu je možné použít veškeré frakce heparinu, získané dusitanovou depolymerací. Takový výchozí produkt má celkový obsah nitrososloučenin obecně mezi 1000 a 20 000 ppb.
Stanovení celkových nitrososloučenin se provádí metodou podle B. Pignatelliho a d., popsanou vAnalyst, září 1989, 114, str. 1103-1108, a Analyst, červenec 1987, 112, str. 945-949, přizpůsobenou pro heparin a jeho frakce, přednostně pro hepariny s nízkou molekulovou hmotností.
Způsob podle vynálezu může být prováděn u heparinu s nízkou molekulovou hmotností farmaceutické kvality, rozpuštěného ve vodě, nebo během průmyslové výroby po stupni dusitanové depolymerace a před izolací čistého produktu farmaceutické kvality. Přednostně se používá heparin s nízkou molekulovou hmotností farmaceutické kvality.
Jako surovinu pro způsob podle vynálezu je tedy možno použít jakýkoli heparin s nízkou molekulovou hmotností, získaný dusitanovou depolymerací. K dosažení maximální účinnosti procesu je výhodné používat roztoky depolymerovaného heparinu, zbavený mikročástic v suspenzi. Přítomnost těchto mikročástic může být důsledkem špatného rozpuštění depolymerovaného heparinu nebo různých nečistot, nebo dále zbytků reakčních činidel, použitých během depolymerace nebo během čištění. Různé roztoky depolymerovaného heparinu se proto přednostně podrobují předběžné filtraci.
Způsob podle vynálezu je velmi účinný a flexibilní, protože umožňuje odstranění nitrososloučenin jednoduchým, rychlým a bezpečným způsobem, kromě toho nezanáší žádnou modifikaci do struktuiy heparinové frakce, jejíž biologické vlastnosti a fyziochemické charakteristiky zůstávají přísně identické.
Způsob podle vynálezu může být prováděn tak, že se vodný roztok o koncentraci 5 až 15 % hmotn./obj. frakce heparinu, získané dusitanovou depolymerací, přednostně heparinu s nízkou molekulovou hmotností, vystaví systému ultrafialového ozařování při vlnové délce 180 až 350 nm, přednostně 254 nm, při teplotě 5 až 50 °C, přednostně 15 až 35 °C, výhodně při teplotě místnosti.
Hodnota pH roztoku je mírně kyselá nebo mírně zásaditá, zejména mezi 3 a 8, přednostně mezi 5 a 8.
Doba ozařování závisí na použitém ozařovacím systému, na ozařovacím výkonu a na množství celkových odstraňovaných nitrososloučenin, přítomných v heparinové frakci. Činí asi 2 až 30 min, i když po 9 až 15 min je čištění obvykle prakticky úplné.
Jako systém ultrafialového ozařování je možno předpokládat buď statický systém, nebo dynamický systém, umožňující cirkulaci roztoků heparinových frakcí kolem zdroje ultrafialového ozařování. Přednost se dává dynamickým systémům. V tom případě může být zdroj
-3CZ 287889 B6 ultrafialového ozařování spojen s válcovou trubkou (přístroj „uzavřeného“ typu) nebo s kanálem (přístroj „otevřeného“ typu). Jako přístroj uzavřeného typu je možno použít sterilizátor UV JR1-50 (KATADYN) nebo jakýkoli jiný ekvivalentní přístroj.
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1 představuje v řezu přístroj „uzavřeného“ typu. Tento přístroj se skládá z UV lampy 1, kolem níž je upraven křemenný plášť 2. Roztoky, obsahující hepariny s nízkou molekulovou hmotností, cirkulují kolem UV lampy, chráněné křemenným pláštěm (plášť 3 cirkulující kapaliny). Přivádějí se vstupem 4, umístěným na úrovni jednoho z konců UV lampy, přičemž výstup 5 je umístěn na druhém konci UV lampy.
Jestliže se používá dynamický systém, měl by být příslušným způsobem nastaven průtok roztoků heparinové frakce, s nímž cirkulují kolem zdroje UV záření, aby bylo dosaženo délky ozařování nutné k odstranění nitrososloučenin. Parametry, které to mohou ovlivnit, jsou průměr proudového vlákna cirkulující kapaliny, rozměry a/nebo výkon zdroje UV záření, koncentrace vodného roztoku v heparinové frakci a množství odstraňovaných nitrososloučenin, obsažené v této frakci.
Heparinová frakce, nebo přednostně takto získaný heparin s nízkou molekulovou hmotností, zbavený celkových nitrososloučenin, může být izolován běžnými metodami.
Jestliže se jako výchozí produkt použije heparin s nízkou molekulovou hmotností již farmaceutické kvality, stačí produkt rozpustit ve vodě, upravit pH roztoku na 3 až 8, přednostně 5 až 8, a podrobit tento roztok procesu podle vynálezu.
Jako výchozí produkt je rovněž možno použít nefrakcionovaný heparin sodný, přednostně pocházející z vepřového střevního slizu. V tom případě tvoří postup podle vynálezu jeden stupeň přípravy finálního produktu, zbaveného celkových nitrososloučenin, po dusitanové depolymeraci. Celkový postup, vycházející z heparinu, představuje další předmět vynálezu.
Podle dalšího aspektu se tedy vynález týká způsobu přípravy heparinu s nízkou molekulovou hmotností s celkovým obsahem nitrososloučenin nižším nebo rovným 500 ppb, výhodně nižším nebo rovným 150 ppb, přednostně nižším nebo rovným 100 ppb, zejména nižším nebo rovným 50 ppb, dusitanovou depolymeraci, který spočívá v tom, že
a) na roztok nefrakcionovaného heparinu sodného ve vodě o koncentraci 5 až 15 % hmotn./obj. se působí roztokem alkalického dusitanu, přednostně dusitanu sodného, v poměru 15 až 69 g dusitanu na kg použitého heparinu v přítomnosti kyseliny chlorovodíkové při pH 1 až 5, přednostně 1,5 až 4, po dobu 20 až 50 min a takto získaný produkt se podrobí redukci, přednostně alkalickém prostředí, pomocí 5 až 20 g tetrahydroboritanu sodného na kg výchozího heparinu, přebytek tetrahydroboritanu sodného se eliminuje kyselinou chlorovodíkovou, reakční prostředí se popřípadě neutralizuje a vysráží ethanolem, načež se po případné jedné nebo několika alkoholických frakcionacích takto získaného heparinu s nízkou molekulovou hmotností,
b) takto získaný roztok podrobí ultrafialovému ozařování,
c) popřípadě se provede chromatografické čištění a depolymerovaný heparin sodný, čištěný a zbavený celkových nitrososloučenin, se izoluje srážením chloridem sodným a ethanolem, a popřípadě
d) sodná sůl se převede na jinou farmaceuticky přijatelnou sůl, přednostně vápenatou sůl.
-4CZ 287889 B6
Podle přednostního aspektu se vynález týká způsobu přípravy čištěného CY 222, definovaného jako sodná sůl depolymerovaného heparinu, získaného depolymerací heparinu přírodního původu z vepřového střevního slizu pomocí kyseliny dusité, majícího
- převládající molekulovou hmotnost v rozmezí 1700 až 3300 Da,
- přičemž 90 % složek má molekulovou hmotnost v rozmezí 1000 až 8000 Da,
- 2-O-sulfo-a-L-idopyranosuronovou strukturu na neredukujícím konci a 6-O-sulfo-2,5anhydro-D-mannitolovou strukturu na redukujícím konci většiny svých složek.
- stupeň sulfatace kolem 2,1,
- aktivitu proti faktoru Xa 60 až 80 IU/mg,
- aktivitu proti faktoru Ha ne vyšší než 25 IU/mg,
- celkový obsah nitrososloučenin nižší nebo rovný 100 ppb, přednostně nižší nebo rovný 50 ppb, spočívajícího v tom, že
a) na vodný roztok nefrakcionovaného heparinu sodného přírodního původu se působí kyselinou chlorovodíkovou a alkalickým dusitanem v množství 3,5 až 4 % hmotnostní, vztaženo na použitý heparin, za udržování kyselého pH a sledování přítomnosti dusitanových iontů do negativní reakce, načež se reakční směs alkalizuje, redukuje tetrahydroboritanem sodným a v neutrálním prostředí se izoluje depolymerovaný produkt srážením ethanolem, načež se
b) takto získaný vodný roztok produktu o pH asi 7 nechá procházet pod systémem ultrafialového ozařování o vlnové délce 254 nm, takto získaný roztok se pak uvede na sloupec měniče iontů a po propláchnutí sloupce vodou a při pH asi 7 se získá konečný produkt srážením chloridem sodným a ethanolem.
Ve stupni (a) se jako alkalický dusitan používá ve výše uvedených poměrech dusitan sodný.
Přednostně je systém ultrafialového ozařování ve stupni (b) vybaven lampou 16 W a délka UV ozařování při 254 nm je asi 9 až 15 min. Přednost se dává dynamickému systému ozařování UV a zejména přístroji „uzavřeného“ typu. Výhodně je koncentrace roztoků, podrobovaných UV ozařování, 8 až 12 % hmotn./obj.
Podle dalšího aspektu se vynález týká farmaceutických prostředků, obsahujících jako účinnou látku čištěnou frakci heparinu, zbavenou celkových nitrososloučenin, přednostně výše uvedený heparin s nízkou molekulovou hmotností, zbavený celkových nitrososloučenin.
Pro prostředky podle vynálezu může být frakce heparinu ve formě lyofilizátu nebo v roztoku pro subkutánní injekce, ve sterilním biologicky přijatelném rozpouštědle, jako je voda, nebo ve fyziologickém roztoku, v ampulích, v lahvičkách, v předem plněných injekčních stříkačkách nebo ve stříkačkách pro obsluhu pacientem typu „plnicího pera“. Každá dávková jednotka farmaceutického prostředku může obsahovat 50 až 50 000 IU anti-faktoru Xa.
Heparinové frakce podle vynálezu mohou být rovněž podávány ve formě intravenózních injekcí, samotné nebo ve směsi s jinými účinnými látkami. Mohou být dále podávány intranasálním nebo intrapulmonámím rozprašováním.
Výhodný farmaceutický prostředek podle vynálezu obsahuje jako účinnou látku výše uvedený CY 222, prostý celkových nitrososloučenin, v dávkových jednotkách, obsahujících 10 až 5000 mg CY 222 ve formě sodné soli.
Jak bylo výše uvedeno, stanovení celkových nitrososloučenin se provádí metodou podle B. Pignatelliho a d., popsanou vAnalyst, září 1979, 114, str. 1103-1108, a v Analyst, červenec 1987, 112, str. 945-949, upravenou pro heparin a hepariny s nízkou molekulovou hmotností.
-5CZ 287889 B6
Analytické metody
Analyzované produkty jsou přednostně v práškové formě, a proto se v případě stanovení celkových nitrososloučenin, přítomných v roztoku provádí nejprve lyofilizace tohoto roztoku a pak se analyzuje lyofílizovaný vzorek.
1. Reakční činidla
Na 100 mg heparinové frakce se použijí tato činidla:
- ethylacetát, podrobený zpracování kyselinou sulfamovou v množství 20 % hmotn./obj. (roztok 200 g kyseliny sulfamové v 1000 ml ethylacetátu se míchá 3 dny a před použitím přefiltruje přes papír),
- kyselina bromovodíková o koncentraci 15 % v kyselině octové (žluté lahvičky s polyethylenovou zátkou, obsahující 5 ml 30% kyseliny bromovodíkové, uzavřené pod argonem a uchovávané v temnu. V okamžiku použití se přidá 5 ml čisté kyseliny octové, obsah se zamíchá a uchovává v temnu v malé nádobě. Používá se 1 lahvička na sérii dávek),
- 95% formamid, podrobený zpracování kyselinou sulfamovou, 5 % hmotn./obj. (roztok 1 g kyseliny sulfamové ve 20 ml formamidu obsahujícího 5 % čištěné vody).
2. Příprava standardních roztoků a vzorků k analýze
Standardní roztok N-nitroso-di-n-propylaminu (NDPA)
78,62 g čistého ethanolu se přes septum nastříkne do lahvičky ISOPAC Sigma, obsahující 1 g N-nitroso-di-n-propylaminu. Koncentrace je 10 000 ppm NDPA (3379 ppm N-NO). Pak se směs zředí lOOkrát čistým ethanolem a rozdělí na alikvoty po 0,5 ml do zatavených lahviček. Koncentrace je 100 ppm NDPA. Roztok se uchovává v temnu při +4 °C.
* Nízký standardní roztok: v okamžiku použití se provede stonásobné naředění v ethanolu a pak naředění 1/17 ve zpracovaném formamidu. Koncentrace bude 0,0588 ppm NDPA nebo 19,9 ppb N-NO.
* Střední standardní roztok: v okamžiku použití se provede naředění 1/61 v ethanolu a pak 1/11 ve zpracovaném formamidu. Koncentrace bude 0,149 ppm NDPA nebo 50,4 ppb N-NO.
* Vysoký standardní roztok: v okamžiku použití se provede naředění 1/10 v ethanolu a pak 1/10 ve zpracovaném formamidu. Koncentrace bude 1 ppm NDPA nebo 338 ppb N-NO.
Vzorek k analýze
Vzorky heparinové frakce se suší 12 h ve vakuu při 60 °C nad oxidem fosforečným. 100 mg heparinové frakce se rozpustí v 1 ml zpracovaného formamidu a 30 min se míchá na třepačce.
3. Použité přístroje
Použité zařízení je zobrazeno na obr. 2.
Montáž
Zařízení se skládá z baňky 1 z pyrexu o objemu 500 ml, opatřené dvojitým chladičem 2. chlazeným na -15 °C. Ten je spojen s třemi probublávačkami 3, uspořádanými v sérii, z nichž každá obsahuje 30 ml 30% hydroxidu sodného. K probublávačkám jsou připojena dvě jímadla za studená, uspořádaná v sérii, přičemž jedno jímadlo 4 je připraveno z roztaveného ethanolu při -120 °C a druhé jímadlo 5 z roztaveného izopentanu při -160 °C. K jímadlům je připojen detektor
-6CZ 287889 B6 chemiluminiscence (TEA) model 610 (Thermedics Detection lne.) nebo jeho ekvivalent. Detektor je spojen s integračním a registračním zařízením 7.
Baňkaje na jedné straně opatřena provrtanou zátkou 8, umožňující zavést trubičku, jíž se přivádí proud argonu, a na druhé straně šroubovým zábrusem se zátkou, umožňující upevnění septa 9 typu CPG, skrze něž se nastřikuje vzorek. Plyn je nasáván k TEA působením proudu argonu a vakua, vytvořeného vakuovým čerpadlem TEA.
4. Pracovní postup
4.1. Seřízení detektoru
TEA je seřízen podle návodu výrobce k dosažení maximální citlivosti a reprodukovatelnosti. Jendu hodinu před dávkováním se otevře kyslík na tlak 2.105 Pa a průtok na průtokoměru TEA 610 (Thermedics Detection lne.) se nastaví na 0,02.
4.2. Příprava louhových jímadel
Každé jímadlo se naplní 30 ml 30% hydroxidu sodného.
4.3. Přípravajímadel za studená
Jímadlo o -120 °C: Do Dewarovy nádoby, obsahující 250 ml ethanolu, se pomalu za míchání dřevěnou špachtlí lije kapalný dusík do vytvoření pasty.
Jímadlo o -160 °C: Do Dewarovy nádoby, obsahující 250 ml izopentanu, se pomalu za míchání dřevěnou špachtlí lije kapalný dusík do vytvoření pasty.
Obě skleněná jímadla jsou umístěna v příslušných Dewarových nádobách a zapojena v obvodu v sérii.
4.4. Dehydratace soustavy baňka-chladič ml ethylacetátu se udržuje 1 h pod argonem na refluxu bez připojení k TEA.
4.5. Reakce a dávkování
Do nové čisté a suché baňky, vybavené šeptem, se uvede 30 ml zpracovaného ethylacetátu, napojí se pod chladič (kryostat je nutno uvést do chodu při -15 °C 2h předem), instaluje se vytápění baňky a topení se uvede do chodu (poloha 4). Připoj í se trubička s argonem, průtok se upraví na 0,1 1/min a prověří se těsnost celého obvodu. Pouze připojení k TEA zůstává otevřeno k vyloučení přetlaku. Když ethylacetát refluxuje, převede se velmi pomalu pod vakuum a současně se uzavře přístup k TEA. Vakuum vznikne v celém obvodu a při vyrovnání systému dosahuje 266,6 až 533,2 Pa. Nula na TEA se nastaví na 10% plné stupnice integračního a registračního zařízení.
Přes septum se nastříkne postupně 0,5 ml čištěné vody, 2 ml zředěné kyseliny bromovodíkové a pak znovu 2 ml zředěné kyseliny bromovodíkové: mezi každým nástřikem se ověří návrat na základní linii na integrační a registrační zařízení. Jakmile jsou reakční složky nastříknuty do baňky, čeká se na návrat na základní linii a nastříkne se 50 μΐ standardu nebo vzorku. Mezi každým nástřikem se čeká na návrat na základní linii. Během dávkování se 5 vzorků umístí mezi 2 standardy a postupuje se tak, aby celková manipulace netrvala déle než 60 min.
-7CZ 287889 B6
4.6. Hodnocení množství celkových nitrososloučenin
Množství N-NO v ppb se vypočte podle vzorce povrch vzorku x Cs x 0,05 x 44 x 100 ppb N-NO =--------------------------povrch standardu x 0,05 x 0,1 x 130,2 kde
Cs je koncentrace standardu v ppm NDPA (0,0588 nebo 0,149 nebo 1 ppm)
0,05 (čitatel) zkušební odběr standardu (ml), molekulová hmotnost N-NO
1000 převod ppm na ppb
0,05 (jmenovatel) zkušební odběr vzorku (ml)
0,1 zkušební odběr vzorku v gramech
130,2 molekulová hmotnost NDPA.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Příprava čištěného nadroparinu vápenatého s celkovým obsahem nitrosoderivátů nižším než 100 ppb
Stupeň A: Depolymerace a ethanolická frakcionace
V reaktoru se rozpustí 20 kg heparinu sodného, pocházejícího z vepřového střevního slizu, v čištěné vodě tak, aby konečná koncentrace byla blízká 10,3% (hmotn./obj.). Hodnota pH roztoku se pomocí koncentrované kyseliny chlorovodíkové nataví na 2,5.
Do reaktoru se za udržování pH na hodnotě 2,5 koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou uvede 572 g dusitanu sodného.
Depolymerační reakce se sleduje pomocí zkušebního škrobového papírku s jodidem draselným. Reakce je ukončena, je-li zkouška negativní. Hodnota pH reakčního roztoku se koncentrovaným hydroxidem sodným upraví na 10 a pak se přidá 200 g tetrahydroboritanu sodného. Směs se 15 h míchá a pak se pH koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou upraví na 4 až 3,5, aby se eliminoval přebytečný tetrahydroboritan. Pak se pH přídavkem koncentrovaného hydroxidu sodného upraví na 7. Pak se provede srážení přídavkem 2 objemů ethanolu na objem vodného roztoku. Směs se nechá dekantovat a vodné alkoholický supematant se odstraní. Sraženina se rozpustí ve 400 I čištěné vody. K tomuto roztoku se přidá chlorid sodný do dosažení měrné vodivosti blízké 20 000 gS/cm. Pak se pH upraví koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou na hodnotu blízkou 4 a k roztoku se za míchání přidá 1 objem absolutního ethanolu. Směs se nechá asi 60 h dekantovat a odstraní se vodně alkoholický supematant. Získá se tak nadroparin ve formě sodné soli.
Sraženina se pak rozpustí v čištěné vodě za účelem získání roztoku o koncentraci asi 18% hmotn./obj., vztaženo na vsazené výchozí množství heparinu sodného, a pH se koncentrovaným hydroxidem sodným upraví na 7. Roztok se pak přefiltruje přes systém, vybavený filtračními patronami o porozitě 0,2 gm. Z přefiltrovaného roztoku, obsahujícího nadroparin. sodný, se odebere vzorek, který nebude zpracován postupem, popsaným ve stupni B (ošetření UV zářením). Tento vzorek se označí jako „kontrolní“.
Stupeň B: Ošetření UV zářením
Pro ošetření UV zářením se použije trubice Katadyn typu JR1-50 o užitečném objemu 750 ml. Použitá vlnová délka je 254 nm. Pomocí peristaltického čerpadla se předem nastaví průtok s použitím čištěné vody způsobem (4800 ml/h), umožňujícím dosáhnout při průchodu bez recyklace celkovou dobu ozáření UV kolem 9 min. Pak se přivede zpracovaný roztok 10 nadroparinu sodného a obvod se promývá čištěnou vodou do úplného shromáždění zpracovávaného produktu v jímce, upravené na výstupu z trubice Katadyn JR1-50.
Stupeň C: Chromatografické čištění a přeměna na vápenatou sůl
Roztok nadroparinu, získaný v předchozím stupni, se čistí na aniontové koloně (0,5 1/kg použitého heparinu sodného). Měrná vodivost shromážděné odtékající kapaliny se chloridem sodným upraví na 10 000 až 20 000 pS/cm a pak se přidá 1,5 objemu ethanolu. Směs se nechá asi 41 h dekantovat a pak se odstraní supematant.
Sraženina se rozpustí v čištěné vodě (koncentrace 18% hmotn./obj., vztaženo na použité množství heparinu sodného) a přidá se hexahydrát chloridu vápenatého (9,63 g/g vsazeného heparinu sodného). Pak se provede ethanolické srážení přídavkem 1,5 objemu ethanolu. Opakuje se stupeň vysolení hexahydrátem chloridu vápenatého a stupeň čištění ethanolickým srážením. Získaná sraženina se suší při teplotě nepřesahující 60 °C.
Získá se tak šarže 1.
„Kontrolní“ šarže, získaná ve stupni A, se rovněž zpracuje postupem, uvedeným ve stupni C a izoluje se „kontrolní“ šarže nadroparinu vápenatého.
Na vzorku šarže 1 a „kontrolního“ nadroparinu vápenatého se provedou fyzikálně chemické analýzy a testy stanovení jejich biologické aktivity.
Výsledky jsou uvedeny v tabulkách I a II.
Tabulka I. Fyzikálně chemické testy charakter testu________________ celkové nitrososloučeniny volné sírany pH 5% roztoku volné NH2
HPLC-GPC (UV 205 nm) hmotnostní střední molekulová hmotnost (Mw) číselná střední molekulová hmotnost (Mn) molekulová hmotnost na vrcholu rozptyl %PM> 10 000 %PM> 8000 % PM < 2000 %PM< 1800 šarže 1 (s UV ozařováním) ppb
0,05 %
6,0 < 30 ppm „kontrola“ (bez UV ozařování) 3150 ppb
0,06 %
6,0 < 30 ppm
5017
4043
4181
1,24
2,4
7,2
3,0
2,4
4933
4052
4192
1,21
2,1
6.9
2.9
2,3
-9CZ 287889 B6
Tabulka II. Biologické testy šarže 1 „kontrola“ charakter testu______________________(s UV ozařováním)____________(bez UV ozařování) aktivita proti faktoru Xa 124 IU/mg 123 IU/mg aktivita proti faktoru Ha 29,3 IU/mg 30,4 IU/mg
Výsledky, uvedené v tabulkách I a II, ukazují, že ošetření UV zářením nevyvolává žádnou změnu nadroparinu. Fyzikálně chemické a biologické charakteristiky šarže 1, jako je chromatografický profil produktu, obsah různých nečistot, aktivita proti faktoru Xa a aktivita proti faktoru Ila, jsou totiž s jedinou výjimkou stejné jako v případě „kontrolního“ vzorku, neošetřeného UV zářením. Obsah celkových nitrososloučenin neošetřeného „kontrolního“ vzorku je asi 60krát vyšší než 10 celkové nitrososloučeniny šarže 1, která byla podrobena ošetření UV zářením.
Výsledky analýzy elektronovou paramagnetickou rezonancí dále potvrdily, že ošetření UV zářením nevyvolává vznik volných radikálů.
Příklad 2
Příprava sodné soli CY 222 s celkovým obsahem nitrososloučenin nižším než 50 ppb
Stupeň A: Depolymerace
V reaktoru se rozpustí 250 g heparinu sodného, pocházejícího z vepřového střevního slizu, v čištěné vodě tak, aby konečná koncentrace byla blízká 10,3% (hmotn./obj.). Hodnota pH roztoku se pomocí koncentrované kyseliny chlorovodíkové nastaví na 2,5. Do reaktoru se za 25 udržování pH na hodnotě 2,5 uvede 9,49 g dusitanu sodného. Depolymerační reakce se sleduje pomocí zkušebního škrobového papírku sjodidem draselným. Reakce je ukončena, je-li zkouška negativní. Hodnota pH reakčního roztoku se koncentrovaným hydroxidem sodným upraví na 10 až 10,5 a pak se přidá 2,5 g tetrahydroboritanu sodného. Směs se 15 h míchá a pak se pH koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou upraví na 3,5 až 4, aby se eliminoval přebytečný 30 tetrahydroboritan. Pak se pH přídavkem koncentrovaného hydroxidu sodného upraví na 7. Pak se provede srážení přídavkem 2 objemů ethanolu na objem roztoku. Sraženina se nechá dekantovat a supematant se odstraní. Získá se tak CY 222 ve formě sodné soli. Takto získaný produkt obsahuje mezi 3000 a 10 000 ppb celkových nitrososloučenin (výsledek 3 preparací).
Stupeň B: Ošetření UV zářením
Sraženina z předchozího stupně se rozpustí v čištěné vodě na roztok o konečné koncentraci asi 10% hmotn./objem., vztaženo na vsazené množství heparinu sodného, a pH se kyselinou chlorovodíkovou nebo hydroxidem sodným upraví na 7. Po nastavení průtoku čerpadla se takto 40 získaný roztok nechá procházet pod systémem ultrafialového ozařování o vlnové délce 254 nm (systém Katadyn JR1-50 vybavený 16W lampou). Doba vystavení UV ozařování je 9 až 15 min.
Stupeň C: Chromatografické čištění a konečné srážení
Roztok, získaný po ošetření UV zářením, se čistí na chromatografické koloně, obsahující alespoň 2 1 aniontové pryskyřice na kg vsazeného heparinu sodného. Měrná vodivost shromážděné odtékající kapaliny se chloridem sodným upraví na 30 až 35 mS/cm a její pH se upraví kyselinou chlorovodíkovou na 7. Pak se přidají 2 objemy ethanolu na objem vodného roztoku. Sraženina se nechá dekantovat a odstraní se supematant. Sraženina se rozpustí v čištěné vodě na roztok o 50 konečné koncentraci 20 % hmotn./obj., vztaženo na vsazené výchozí množství heparinu sodného, měrná vodivost roztoku se upraví chloridem sodným na 30 až 35 mS/cm a jeho
-10CZ 287889 B6 pH koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou nebo koncentrovaným hydroxidem sodným na 7 až 7,5. Pak se roztok vysráží 2 objemy absolutního ethanolu a nechá se dekantovat. Odebraná sraženina se promyje ethanolem a suší se při teplotě nepřesahující 60 °C. Získá se tak čistý CY 222, definovaný jako sodná sůl depolymerovaného heparinu, získaného depolymerací heparinu z vepřového střevního slizu kyselinou dusitou, mající
- převládající molekulovou hmotnost v rozmezí 1700 až 3300, přičemž 90% složek má molekulovou hmotnost v rozmezí 1000 až 8000.
- 2-O-sulfo-a-L-idopyranosuronovou strukturu na neredukujícím konci a 6-O-sulfo-2,5anhydro-D-mannitolovou strukturu na redukujícím konci většiny svých složek,
- stupeň sulfatace kolem 2,1,
- aktivitu proti faktoru Xa 60 až 80 IU/mg,
- aktivitu proti faktoru Ha ne vyšší než 25 IU/mg, zejména 10 až 15 IU/mg,
- celkový obsah nitrososloučenin nižší než 50 ppb.
Claims (11)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Heparin, tvořený složkami s nízkou molekulovou hmotností a získaný dusitanovou depolymerací heparinu přírodního původu, ve kterém 90 % z celkového počtu jeho složek má molekulovou hmotnost 1000 až 10 000 a který má celkový obsah nitrososloučenin nižší nebo rovný 500 ppb a jeho farmaceuticky přijatelné soli.
- 2. Heparin podle nároku 1, který je depolymerovaným heparinem, získaným dusitanovou depolymerací heparinu přírodního původu, pocházejícího z vepřového střevního slizu, z hovězích plic nebo jiného heparinu, získaného ze zvířecích tkání nebo orgánů, a majícím střední molekulovou hmotnost nižší než 8000, přičemž alespoň 60 % z celkového počtu jeho složek má molekulovou hmotnost nižší než 8000, aktivitu proti faktoru Xa rovnou nebo vyšší než 60 IU/mg a poměr aktivita proti faktoru Xa/aktivita proti faktoru Ha rovný nebo vyšší než 1,5, a který je ve formě farmaceuticky přijatelné soli.
- 3. Heparin podle nároku 2 ve formě sodné nebo vápenaté soli.
- 4. Sodná sůl heparinu podle nároku 1 získaného depolymerací heparinu přírodního původu z vepřového střevního slizu kyselinou dusitou a mající střední molekulovou hmotnost v rozmezí 1700 až 3300, přičemž 90 % z celkového počtu jeho složek má molekulovou hmotnost v rozmezí 1000 až 8000, 2-O-sulfo-alfa-L-idopyranosuronovou strukturu na neredukujícím konci a 6-Osulfo-2,5-anhydro-D-mannitolovou strukturu na redukujícím konci více než 50 % z celkového počtu jeho složek, stupeň sulfatace 2,1, aktivitu proti faktoru Xa 60 až 80 IU/mg, aktivitu proti faktoru Ha nejvýše rovnou 25 IU/mg a celkový obsah nitrososloučenin nižší nebo rovný 100 ppb.
- 5. Sodná sůl heparinu podle nároku 4, mající celkový obsah nitrososloučenin nižší nebo rovný 50 ppb.
- 6. Způsob přípravy heparinu podle nároků la2, vyznačený tím, že se vodný roztok heparinu, získaného dusitanovou depolymerací heparinu přírodního původu, mající koncentraci 5 až 15 % hmotn./obj., vystaví účinku ultrafialového záření s vlnovou délkou 180 až 350 nm při teplotě 5 až 50 °C a pH roztoku 3 až 8.
- 7. Způsob podle nároku 6, vyznačený tím, že se použije ultrafialové záření s vlnovou délkou 254 nm při teplotě 15 až 35 °C a při pH roztoku 5 až 8.-11CZ 287889 B6
- 8. Způsob přípravy sodné soli heparinu podle nároku 5, vyznačený tím, že se na vodný roztok nefrakcionované sodné soli heparinu působí kyselinou chlorovodíkovou a alkalickým dusitanem v množství 3,5 až 4 hmotn. %, vztaženo na použité množství sodné soli heparinu, za udržování pH v kyselé oblasti a sledování přítomnosti dusitanových iontů až do negativní reakce, načež se reakční směs zalkalizuje tetrahydroboritanem sodným a v neutrálním prostředí se izoluje depolymerovaná sodná sůl heparinu, tvořená složkami s nízkou molekulovou hmotností, srážením ethanolem a získaný vodný roztok sodné soli heparinu s hodnotou pH 7 se vystaví účinku ultrafialového záření o vlnové délce 254 nm, při teplotě 5 až 50 °C a pH roztoku 7, načež se získaný roztok zavede na sloupec aniontoměničové pryskyřice, který se potom propláchne vodou a sodná sůl heparinu se z eluátu vysráží při pH 7 srážením chloridem sodným a ethanolem.
- 9. Způsob podle nároku 8, vyznačený tím, že se účinku ultrafialového záření o vlnové délce 254 nm vystaví po dobu 9 až 15 min a za použití UV lampy výkonu 16 W roztok sodné soli heparinu s koncentrací 8 až 12 % hmotn./obj.
- 10. Farmaceutická kompozice, vyznačená tím, že obsahuje jako účinnou látku heparin nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl podle některého z nároků 1 až 5.
- 11. Farmaceutická kompozice podle nároku 10, vyznačená tím, že obsahuje jako účinnou látku 10 až 5000 mg sodné soli heparinu podle nároku 5 v jednotkové dávce.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9305534A FR2704861B1 (fr) | 1993-05-07 | 1993-05-07 | Fractions d'héparine purifiées, procédé d'obtention et compositions pharmaceutiques les contenant. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ113294A3 CZ113294A3 (en) | 1994-12-15 |
| CZ287889B6 true CZ287889B6 (cs) | 2001-03-14 |
Family
ID=9446915
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19941132A CZ287889B6 (cs) | 1993-05-07 | 1994-05-06 | Heparin tvořený složkami s nízkou molekulovou hmotností, způsob jeho přípravy a farmaceutická kompozice tento heparin obsahující |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5599801A (cs) |
| EP (1) | EP0623629B1 (cs) |
| JP (1) | JP3529835B2 (cs) |
| KR (1) | KR100328095B1 (cs) |
| CN (1) | CN1066155C (cs) |
| AT (1) | ATE141618T1 (cs) |
| AU (1) | AU672291B2 (cs) |
| BR (1) | BR9401920A (cs) |
| CA (1) | CA2122930C (cs) |
| CZ (1) | CZ287889B6 (cs) |
| DE (1) | DE69400385T2 (cs) |
| DK (1) | DK0623629T3 (cs) |
| ES (1) | ES2093494T3 (cs) |
| FI (1) | FI107388B (cs) |
| FR (1) | FR2704861B1 (cs) |
| GR (1) | GR3021648T3 (cs) |
| HK (1) | HK1007432A1 (cs) |
| HU (1) | HU221595B (cs) |
| IL (1) | IL109587A (cs) |
| MY (1) | MY110862A (cs) |
| NO (1) | NO306952B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ260460A (cs) |
| PL (1) | PL178294B1 (cs) |
| RU (1) | RU2133253C1 (cs) |
| TW (1) | TW438812B (cs) |
| ZA (1) | ZA943152B (cs) |
Families Citing this family (40)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5763427A (en) * | 1995-03-31 | 1998-06-09 | Hamilton Civic Hospitals Research Development Inc. | Compositions and methods for inhibiting thrombogenesis |
| US5744457A (en) * | 1995-03-31 | 1998-04-28 | Hamilton Civic Hospitals Research Development Inc. | Compositions and methods for inhibiting thrombogenesis |
| US6001820A (en) * | 1995-03-31 | 1999-12-14 | Hamilton Civic Hospitals Research Development Inc. | Compositions and methods for inhibiting thrombogenesis |
| US5980865A (en) * | 1995-08-18 | 1999-11-09 | Baker Norton Pharmaceuticals, Inc. | Method for treating late phase allergic reactions and inflammatory diseases |
| CA2235223A1 (en) | 1995-10-30 | 1997-05-09 | Massachusetts Institute Of Technology | Rationally designed polysaccharide lyases derived from heparinase i |
| US5767269A (en) * | 1996-10-01 | 1998-06-16 | Hamilton Civic Hospitals Research Development Inc. | Processes for the preparation of low-affinity, low molecular weight heparins useful as antithrombotics |
| IT1290814B1 (it) * | 1997-03-24 | 1998-12-11 | Istituto Scient Di Chimica E B | Glicosaminoglicani aventi elevata attivita' antitrombotica |
| EP1109919A2 (en) * | 1998-08-27 | 2001-06-27 | Massachusetts Institute Of Technology | Rationally designed heparinases derived from heparinase i and ii |
| US7056504B1 (en) | 1998-08-27 | 2006-06-06 | Massachusetts Institute Of Technology | Rationally designed heparinases derived from heparinase I and II |
| JP4824170B2 (ja) * | 1999-04-23 | 2011-11-30 | マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー | ポリマーを表記するためのシステムおよび方法 |
| WO2001066772A2 (en) * | 2000-03-08 | 2001-09-13 | Massachusetts Institute Of Technology | Heparinase iii and uses thereof |
| US8227449B2 (en) * | 2000-03-30 | 2012-07-24 | Glycores 2000 S.R.L. | Glycosaminoglycans derived from K5 polysaccharide having high anticoagulant and antithrombotic activities and process for their preparation |
| IT1318432B1 (it) * | 2000-03-30 | 2003-08-25 | Inalco Spa | Glicosaminoglicani derivati dal polisaccaride k5 aventi elevataattivita' anticoagulante ed antitrombotica e processo per la loro |
| DE60138115D1 (de) | 2000-09-12 | 2009-05-07 | Massachusetts Inst Technology | Verfahren und produkte, die mit niedermolekularem heparin assoziiert sind |
| US7709461B2 (en) * | 2000-10-18 | 2010-05-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Methods and products related to pulmonary delivery of polysaccharides |
| US20050027117A1 (en) * | 2000-12-18 | 2005-02-03 | Pasqua Oreste | Anticoagulant and antithrombotic LMW-glycosaminoglycans derived from K5 polysaccharide and process for their preparation |
| JP2002293804A (ja) * | 2001-03-28 | 2002-10-09 | Itoham Foods Inc | 低分子量ヘパリンの製造法 |
| EP1518120A4 (en) * | 2002-03-11 | 2008-08-13 | Momenta Pharmaceuticals Inc | ANALYSIS OF SULFATE POLYSACCHARIDES |
| RU2248801C2 (ru) * | 2003-04-21 | 2005-03-27 | ГУ Гематологический научный центр РАМН | Способ получения низкомолекулярных гепаринов |
| EP1582531A1 (en) | 2004-03-24 | 2005-10-05 | Aventis Pharma S.A. | Process for oxidizing unfractionated heparins and detecting presence or absence of glycoserine in heparin and heparin products |
| ITMO20040199A1 (it) * | 2004-07-29 | 2004-10-29 | Biofer Spa | Procedimento per la purificazione da gruppi e n no rsidui di eparine a basso peso molecolare ottentite tramite nitrosazione. |
| RU2295538C2 (ru) * | 2005-03-01 | 2007-03-20 | Гематологический научный центр РАМН | Способ получения гепаринов с низкой молекулярной массой |
| JP2006291028A (ja) * | 2005-04-11 | 2006-10-26 | Q P Corp | 低分子ヘパリンまたはその塩、ならびにその製造方法 |
| EP1792621B1 (en) | 2005-11-30 | 2012-04-04 | Istituto di Ricerche Chimiche e Biochimiche "G. Ronzoni" | Orally administrable heparin derivatives |
| US9139876B1 (en) | 2007-05-03 | 2015-09-22 | Momenta Pharmacueticals, Inc. | Method of analyzing a preparation of a low molecular weight heparin |
| ES2817779T3 (es) * | 2010-01-19 | 2021-04-08 | Momenta Pharmaceuticals Inc | Evaluación de preparaciones de heparina |
| CA2974062C (en) * | 2010-09-14 | 2018-07-17 | Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. | High purity heparin and production method therefor |
| US9068957B2 (en) | 2011-02-21 | 2015-06-30 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Evaluating heparin preparations |
| CN102633905B (zh) * | 2011-04-11 | 2014-10-08 | 南通天龙畜产品有限公司 | 一种肝素钠中不被亚硝酸降解且在肝素钠保留时间附近出峰的物质的去除方法 |
| CN104045744B (zh) * | 2014-06-26 | 2016-01-06 | 常州千红生化制药股份有限公司 | 达肝素钠的制备方法 |
| CN104098716B (zh) * | 2014-07-16 | 2015-04-22 | 南京健友生化制药股份有限公司 | 一种达肝素钠精品的生产方法 |
| US10688249B2 (en) * | 2015-06-11 | 2020-06-23 | Virchow Biotech Pvt. Ltd. | Multiple dose pharmaceutical compositions containing heparin and/or heparin-like compounds and devices and methods for delivering the same |
| CN105294885A (zh) * | 2015-11-23 | 2016-02-03 | 山东大学 | 一种新来源亚硝酸降解低分子肝素的制备方法 |
| EP3740513B1 (en) * | 2018-02-14 | 2022-06-22 | Biological E Limited | Improved process for the preparation of dalteparin sodium |
| RU186728U1 (ru) * | 2018-10-19 | 2019-01-30 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "МИРЭА - Российский технологический университет" | Лабораторное устройство для отмывки порошковых продуктов химических реакций от посторонних примесей |
| WO2022015794A1 (en) | 2020-07-14 | 2022-01-20 | Optimvia, Llc | Methods for synthesizing non-anticoagulant heparan sulfate |
| CA3144968A1 (en) | 2019-07-09 | 2021-01-14 | Optimvia Llc | Methods for synthesizing anticoagulant polysaccharides |
| CN110845641A (zh) * | 2019-11-07 | 2020-02-28 | 中国药科大学 | 一种肝素寡糖及其在制备抗血管生成药物中的应用 |
| CN110787489A (zh) * | 2019-11-20 | 2020-02-14 | 江苏千牧生物科技股份有限公司 | 一种肝素钠加工使用的分离装置及加工的工艺 |
| CN115304688A (zh) * | 2022-08-25 | 2022-11-08 | 湖北亿诺瑞生物制药有限公司 | 一种达肝素钠的制备方法 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4119774A (en) * | 1976-03-05 | 1978-10-10 | Ab Kabi | Heparin purification method |
| FR2478646A2 (fr) * | 1980-03-20 | 1981-09-25 | Choay Sa | Composition mucopolysaccharidique ayant une activite regulatrice de la coagulation, medicament la contenant et procede pour l'obtenir |
| CA1136620A (en) * | 1979-01-08 | 1982-11-30 | Ulf P.F. Lindahl | Heparin fragments having selective anticoagulation activity |
| IL61201A (en) * | 1979-10-05 | 1984-09-30 | Choay Sa | Oligosaccharides having no more than 8 saccharide moieties,their obtention from heparin and pharmaceutical compositions containing them |
| US4351938A (en) * | 1980-05-19 | 1982-09-28 | Riker Laboratories, Inc. | Anticoagulant substance |
| US4438261A (en) * | 1980-05-19 | 1984-03-20 | Riker Laboratories, Inc. | Anticoagulant substance |
| CA1171375A (en) * | 1980-09-15 | 1984-07-24 | Ulf P.F. Lindahl | Oligosaccharides having selective anticoagulation activity |
| FR2503714B1 (fr) * | 1981-04-10 | 1986-11-21 | Choay Sa | Procede d'obtention de mucopolysaccharides biologiquement actifs, de purete elevee, par depolymerisation de l'heparine |
| FR2538404B1 (cs) * | 1982-12-28 | 1985-08-23 | Anic Spa | |
| FR2568774B2 (fr) * | 1984-05-30 | 1989-05-19 | Choay Sa | Medicaments favorisant les proprietes d'ecoulement du sang et leur utilisation en therapeutique |
| US5094815A (en) * | 1988-05-18 | 1992-03-10 | Cornell Research Foundation, Inc. | Photolytic interface for HPLC-chemiluminescence detection of non volatile N-nitroso compounds |
| US5032679A (en) * | 1988-12-15 | 1991-07-16 | Glycomed, Inc. | Heparin fragments as inhibitors of smooth muscle cell proliferation |
| IT1243300B (it) * | 1990-12-20 | 1994-05-26 | Fidia Spa | Derivati dell'eparina |
| US5385937A (en) * | 1991-04-10 | 1995-01-31 | Brigham & Women's Hospital | Nitrosation of homocysteine as a method for treating homocysteinemia |
-
1993
- 1993-05-07 FR FR9305534A patent/FR2704861B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-05-05 AU AU61912/94A patent/AU672291B2/en not_active Expired
- 1994-05-05 CA CA002122930A patent/CA2122930C/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-05 NZ NZ260460A patent/NZ260460A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 DE DE69400385T patent/DE69400385T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 PL PL94303336A patent/PL178294B1/pl unknown
- 1994-05-06 ES ES94400994T patent/ES2093494T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 NO NO941686A patent/NO306952B1/no not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 ZA ZA943152A patent/ZA943152B/xx unknown
- 1994-05-06 HU HU9401446A patent/HU221595B/hu unknown
- 1994-05-06 AT AT94400994T patent/ATE141618T1/de active
- 1994-05-06 US US08/239,320 patent/US5599801A/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 FI FI942095A patent/FI107388B/fi not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 IL IL109587A patent/IL109587A/xx not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 BR BR9401920A patent/BR9401920A/pt not_active Application Discontinuation
- 1994-05-06 MY MYPI94001141A patent/MY110862A/en unknown
- 1994-05-06 EP EP94400994A patent/EP0623629B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 DK DK94400994.3T patent/DK0623629T3/da active
- 1994-05-06 CZ CZ19941132A patent/CZ287889B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 RU RU94015595A patent/RU2133253C1/ru active
- 1994-05-07 TW TW083104157A patent/TW438812B/zh not_active IP Right Cessation
- 1994-05-07 KR KR1019940010033A patent/KR100328095B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-07 CN CN94105382A patent/CN1066155C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-09 JP JP09533794A patent/JP3529835B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-11-14 GR GR960403019T patent/GR3021648T3/el unknown
-
1998
- 1998-06-25 HK HK98106616A patent/HK1007432A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU672291B2 (en) | Purified herapin fractions, method for obtaining them and pharmaceutical compositions containing them | |
| HK1007432B (en) | Purified heparin fractions, process for obtaining them and pharmaceutical compositions containing the same | |
| Choay et al. | Structure-activity relationship in heparin: a synthetic pentasaccharide with high affinity for antithrombin III and eliciting high anti-factor Xa activity | |
| TR201802024T1 (tr) | Ovi̇n enoksapari̇n sodyum, bunun hazirlanmasina yöneli̇k yöntem ve bunlarin uygulanmasi | |
| PL135948B1 (en) | Method of obtaining mucopolysaccharides | |
| RS57214B1 (sr) | Upotreba derivata hemijski modifikovanog heparina za bolest srpastih ćelija | |
| CN102961389A (zh) | 一种含有氨基葡萄糖的组合物及其制备方法和检测方法 | |
| CN103463565B (zh) | 一种莪术油注射液及其制备方法 | |
| CN104548278B (zh) | 一种依诺肝素钠封管注射液及其制备方法 | |
| ITCO960031A1 (it) | Fucani a basso peso molecolare aventi attivita' anticoagulante antitrombinica e antitrombotica | |
| CN114767627B (zh) | 一种乳酸环丙沙星氯化钠注射液的制备方法 | |
| EP3010940B1 (en) | New processes for the production of chemically-modified heparins | |
| AU2021101429A4 (en) | Method for extracting flavonoids as active substances from honey | |
| CN103315951B (zh) | 低分子肝素钙注射剂 | |
| ES2317280T3 (es) | Proceso para preparar heparina de bajo peso molecular. | |
| US20100196510A1 (en) | Composition and treatment | |
| CN105030658A (zh) | 一种美容作用的药物 | |
| CN117064850B (zh) | 一种甲氨蝶呤注射液及其制备方法 | |
| CN115869255A (zh) | 一种呋塞米注射液的组成及制备方法 | |
| WO2026076502A1 (en) | Methods for producing bovine-derived heparin and derivatives thereof, pharmaceutical compositions, and applications | |
| CN102309455A (zh) | 一种地塞米松磷酸钠粉针剂及其生产方法 | |
| EA049054B1 (ru) | Способ получения надропарина кальция | |
| HK1220475B (en) | New processes for the production of chemically-modified heparins |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20140506 |