CZ289871B6 - Fosfonooxymethylether derivátů taxanu, jeho pouľití, farmaceutický prostředek, který ho obsahuje a meziprodukt pro jeho přípravu - Google Patents

Abstract

Fosfonooxymethylether deriv t taxanu obecn ho vzorce I, kde znamen R.sup.1.n. skupinu OH, -OCH.sub.2.n.(OCH.sub.2.n.).sub.m.n.OP(O)(OH).sub.2.n., -OC(O)R.sup.x.n. nebo -OC(O)OR.sup.x.n., R.sup.3.n. atom H, skupinu OH, acetoxy, -OCH.sub.2.n.(OCH.sub.2.n.).sub.m.n.OP(O)(OH).sub.2.n. nebo -OC(O)OR.sup.x.n., R.sup.4.n. a R.sup.5.n. na sob nez visle C.sub.1-6.n.alkyl, C.sub.2-6.n.alkenyl, C.sub.2-6.n.alkinyl nebo -Z-R.sup.6'.n., R.sup.6.n., R.sup.7.n. atom H a druh² skupinu OH, C.sub.1-6.n.alkanoyloxy nebo -OCH.sub.2.n.(OCH.sub.2.n.).sub.m.n.OP(O)(OH).sub.2.n. nebo R.sup.6.n., R.sup.7.n. spolu dohromady oxoskupinu, za podm nky, e 1 a 3 ze symbol R.sup.1.n., R.sup.2.n., R.sup.3.n., R.sup.6.n. a R.sup.7.n. znamen skupinu -OCH.sub.2.n.(OCH.sub.2.n.).sub.m.n.OP(O)(OH).sub.2.n., R.sup.6'.n. pop° pad aminoskupinou nebo amidoskupinou substituovanou aromatickou C.sub.6-10.n.uhlovod kovou skupinu, C.sub.3-6.n.cykloalkyl nebo 5- nebo 6- lenn² heterocyklus, R.sup.x.n. C.sub.1-6.n. pop° pad substituovan² alkyl nebo skupinu obecn ho vzorce (a) kde znamen D vazbu nebo C.sub.1-6.n.alkandiyl a R.sup.a.n., R.sup.b.n. a R.sup.c.n. atom H, amino, C.sub.1-6.n.alkylamino, di(C.sub.1-6.n.alkyl)amino, halogen, C.sub.1-6.n.alkyl nebo C.sub.1-6.n.alkoxy, p 0 nebo 1 a m 0, 1 nebo 2 nebo jeho farmaceuticky p°ijateln s l je vhodn² pro v²robu protin dorov²ch prost°edk .\

Description

Fosfonooxymethylether derivátů taxanu, jeho použití, farmaceutický prostředek, který ho obsahuje a meziprodukt pro jeho přípravu

Oblast techniky

Vynález se týká fosfonooxymethylether derivátů taxanu, který je vhodný pro výrobu farmaceutických protinádorově účinných prostředků a meziproduktů pro jejich přípravu.

Dosavadní stav techniky

Taxol (označovaný také paclitaxel) je přírodní látka, extrahovaná z kůry tisu krátkolistého (Taxus brevifolia). Vyznačuje se vynikající protinádorovou účinností in vivo při testech na savcích a poslední výzkumy zjistily jedinečný účinek zahrnující abnormální polymerování tubulinu a přerušené mitosy. V současné době se provádějí klinické testy účinku při rakovině vaječníků, plic a dalších druhů rakoviny ve Spojených státech amerických a ve Francii a výsledky potvrzují mimořádně slibné chemoterapeutické účinky (Rowinsky a Donehowe, „The Clinical Pharmacology and Use of Antimicrotubule Agents in Cancer Chemotherapeutics“, Pharmac. Ther. 52, str. 35 až 84, 1991).

Nověji byla popsána semisyntetická obdoba paclitaxelu označovaná jako Taxotere, která má rovněž výtečnou protinádorovou účinnost při textování na zvířatech. Taxotere je nyní ve stadiu klinických zkoušek jak v Evropě, tak i v USA. Struktury paclitaxelu a Taxotere jsou uvedeny zde níže; uvedeno je také běžné číslování poloh v molekuly paclitaxelu:

Taxol: R = C₆H₅, R' = acetyl

Taxotere: R = terc.-butoxy, R' = vodík

Jedním z nedostatků paclitaxelu je jeho velmi malá rozpustnost ve vodě, což znamená upravovat tuto látku ve formě nevodných farmaceutických nosičů. Jedním z obvykle používaných nosičů je Cremophor EL, který může mít nežádoucí postranní účinky pro lidi. V důsledku toho připravila řada výzkumných teamů deriváty paclitaxelu, rozpustné ve vodě, viz dále citované literární údaje:

(a) Haugwitz a spol., Americký pat. spis 4 942 184, (b) Kingston a spol., Americký patentový spis 5 059 699 (c) Stella a spol., Amer. pat. spis 4 960 790,

-1 CZ 289871 B6 (d) Evropská pat. přihláška 0 558 959 Al, zveřejněna 08.09.1993 (e) Vyas a spol., Bioorganic § Medicinal Chemistry Letters, 3, 1357-1360 (1993).

(f) Nicolau a sol., Nátuře, 364, 464-466 (1993).

Sloučeninami podle tohoto vynálezu jsou fosfonooxymethylethery taxanových derivátů a jejich farmaceuticky způsobilé soli. V případě těchto solí umožňuje jejich rozpustnost ve vodě přípravu farmaceutických přípravků.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je fosfonooxymethylether derivátů taxanu obecného vzorce I

(I) kde znamená

R¹ hydroxylovou skupinu, skupinu -OCH₂(OCH₂)_mOP(O)(OH)₂, -OC(O)R^X nebo -OC(O)OR^X,

R² atom vodíku a R² atom vodíku, hydroxylovou skupinu, skupinu -OCH₂(OCH₂)_mOP(O)(OH)₂ nebo -OC(O)OR^X nebo

R² atom fluoru a R² atom vodíku,

R³ atom vodíku, hydroxylovou skupinu, acetoxyskupinu, skupinu -OCH₂(OCH₂)_mOP(O)(OH)₂ nebo -OC(O)OR^X,

R⁴ a R⁵ na sobě nezávisle alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkinylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku nebo skupinu -Z-R°,

R⁶, R⁷ atom vodíku a druhý hydroxylovou skupinu, alkanoyloxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo skupinu -OCH₂(OCH₂)_mOP(O)(OH)₂ nebo R⁶, R⁷ spolu dohromady oxoskupinu, za podmínky, že jeden až tři ze symbolů R¹, R² R³ R⁶ a R⁷ znamená skupinu -OCH₂(OCH₂)_mOP(OXOH)₂,

Ph fenylovou skupinu

Ac acetylovou skupinu

Z přímou vazbu, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku,

R⁶ popřípadě aminoskupinou nebo amidoskupinou substituovanou aromatickou uhlovodíkovou skupinu se 6 až 10 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 6 atomy uhlíku nebo pětičlennou nebo šestičlennou heterocyklickou skupinu s jedním až čtyřmi atomy ze souboru zahrnujícího atom kyslíku, síry a dusíku

R^x alylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku popřípadě substituovanou jedním až šesti stejnými nebo odlišnými atomy halogenu, cykloalkylovou skupinu se 3 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku nebo skupinu obecného vzorce

kde znamená

D vazbu nebo alkandiylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku a

R^a, R^b a R^c na sobě nezávisle atom vodíku, aminoskupinu, alkylaminoskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, dialkylaminoskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, atom halogenu, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku,

P 0 nebo 1 a m 0, 1 nebo 2 nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.

Pokud není jinak uvedeno mají jednotlivé skupiny obvyklé významy.

Alkylovou skupinou se míní skupina s 1 až 6 atomy uhlíku s přímým nebo s rozvětveným řetězcem: příkladně se uvádějí skupina methylová, ethylová, n-propylová, isopropylová, n-butylová, isobutylová, sek-butylová, terc-butylová, n-pentylová, sek-pentylová, isopentylová a n-hexylová skupina.

Alkenylovou skupinou se míní skupina se 2 až 6 atomy uhlíku s přímým nebo s rozvětveným řetězcem s alespoň jednou dvojnou vazbou mezi sousedními atomy uhlíku: příkladně se uvádějí skupina ethenylová, n-propenylová, isopropenylová, butenylová, isobutenylová, pentenylová a hexenylová skupina.

Alkinylovou skupinou se míní skupina se 2 až 6 atomy uhlíku s přímým nebo s rozvětveným řetězcem s alespoň jednou trojnou vazbou mezi sousedními atomy uhlíku: příkladně se uvádějí skupina ethinylová, n-propinylová, butinylová a hexinylová skupina.

Arylovou skupinou se míní skupina se 6 až 10 atomy uhlíku: příkladně se uvádějí skupina fenylová a naftylová.

Atomem halogenu se vždy míní atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu.

Taxanový zbytek se označuje obvykle také zkratkou txn nebo dokonce T.

Heterocyklickou skupinou se vždy míní pětičlenná nebo šestičlenná aromatická skupina s jedním až čtyřmi heteroatomy ze souboru zahrnujícího atom kyslíku, síry a dusíku: příkladně se uvádějí

-3CZ 289871 B6 skupina thienylová, furylová, pyrrolylová, imidazolylová, pyrazolylová, thiazolylová, isothiazolylová, oxazolylová, isoxazolylová, triazolylová, thiadiazolylová, oxadiazolyíová, tetrazolylová, thiatriazolylová, oxatriazolylová, pyridylová, pyrimidylová, pyrazinylová, pyridazinylová, triazinylová a tetrazinylová skupina.

Výraz „skupina, chránící hydroxylovou funkci“ zahrnuje bez jakéhokoli omezování skupiny, vytvářející ethery, jako je skupina methylová, terc.-butylová, benzylová, p-methoxybenzylová, methoxyethoxymethylová, ethoxyethylová, tetrahydropyranylová, tetrahydrothiopyranylová a také odpovídající trialkylsilylethery, jako je trimethylsilylether a terc.-butyldimethylsilylether; dále sem patří estery, v tom případě skupina benzoylová, acetylová, fenylacetylová, formylová, mono-, di- a trihalogenacetylová, jako je skupina chloracetylová, dichloracetylová, trichloracetylová, trifluoracetylová, dále karbonáty, jako je methyl-, ethyl-, 2,2,2-trichlorethyl-, allyl—, benzyl- a p-nitrofenylkarbonát.

Další příklady skupin, chránících hydroxylovou a fosfonovou funkci, lze nalézt v běžných referenčních dílech, jako je třeba Greene aWuts „Protective Groups in Organic Synthesis“, 2. vyd., 1991, J. Wiley a synové, a McOmie „Protective Groups in Organic Chemistry“, 1975, Plenům Press. Způsoby, jak lze zavést do molekuly chránící skupinu a jak ji lze odstranit, je možno rovněž hladce nalézt v učebnicích.

„Farmaceuticky vhodná sůl“ je sůl kovu nebo aminu a kyselé fosfonové skupiny, kde kation nijak podstatně neovlivňuje toxicitu nebo biologickou aktivitu vlastní účinné látky. Mezi vhodné kovové soli patří soli lithia, sodíku, draslíku, vápníku, barya, hořčíku, zinku a hliníku. Za výhodné soli kovů lze označit soli sodíku a draslíku. Vhodnými solemi aminů jsou například soli amoniové, trimethylaminu (TRIS), triethylaminu, prokainu, benzathinu, dibenzylaminu, chlorprokainu, cholinu, diethanolaminu, triethanolaminu, ethylendiaminu, glukaminu, N-methylglukaminu, lysinu, argininu, ethanolaminu, jen aby bylo jmenováno několik z nich. Za výhodné soli aminů lze označit soli lysinu, argininu a N-methylglukaminu.

V tomto textu a v připojených nárocích se má za to, že výraz -OCH₂(OCH₂)_mOP(O)(OH)₂ zahrnuje jak volné kyseliny, tak i farmaceuticky vhodné soli, pokud není výslovně uvedeno v textu, zeje v tom či onom místě míněna volná kyselina.

Podle jednoho předmětu tohoto vynálezu jsou popisovány taxanové deriváty obecného vzorce A

T-[OCH₂(OCH₂)_mOP(O)(OH)₂]_n (A) kde T znamená taxanovou část, jež má na uhlíkovém atomu C,3 substituovanou 3-aminu-2hydroxypropanoyloxylovou skupinu, n znamená 1, 2 nebo 3, m znamená 0 nebo číslo od 1 až do 6 včetně, nebo farmaceuticky vhodné soli těchto látek.

Podle jednoho z provedení taxanová část obsahuje nejméně jednu z dále uvedených funkčních skupin: Cj-hydroxylovou skupinu, C2-benzoyloxylovou skupinu, C₄-acetyloxylovou skupinu, C₅-C₂₀-oxetanovou skupinu, Cg-oxyskupinu a Cn-Ci₂-dvojnou vazbu.

-4CZ 289871 B6

Podle jednoho z výhodných provedení se taxanová část odvozuje od zbytku vzorce

kde R² znamená vodík a R^2e znamená vodík, hydroxylovou skupinu nebo skupinu OC(O)R^X či -OC(O)OR^X, nebo R^2e znamená vodík a R^2e znamená fluor, dále R^3c znamená vodík, hydroxylovou skupinu, skupinu -OC(O)R^X, alkyloxylovou skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku nebo skupinu -OC(O)OR^X, nebo jeden z obecných symbolů R^6c nebo R^7c znamená vodík a druhý značí hydroxylovou skupinu nebo skupinu -OC(O)R^X, nebo R^6c a R^7c spolu tvoří oxo-skupinu a R^x má významy, jak jsou definovány dále.

Podle jiného provedení je postranní řetězec na C_l3 odvozen od zbytku obecného vzorce ^r4(0)p^cT °^_o

R⁵

kde R^Ie znamená vodík nebo skupinu -C(O)R^X nebo -C-(O)OR^X, R⁴ a R⁵ znamenají vzájemně nezávisle alkylovou skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku, alkenylovou či alkinylovou skupinu se dvěma až šesti atomy uhlíku, R⁶ znamená arylovou skupinu, případně substituovanou, cykloalkylovou skupinu se třemi až šesti atomy uhlíku nebo heteroarylovou skupinu, a R^x znamená alkylovou skupinu s jedním až čtyřmi atomy uhlíku, případně substituovanou jednou až šestkrát týmž či různými atomy halogenu, cykloalkylovou skupinu se třemi až šesti atomy uhlíku, alkenylovou skupinou se dvěma až šesti atomy uhlíku nebo zbytkem obecného vzorce

-5CZ 289871 B6 kde D znamená vazbu nebo alkylovou skupinu sjedním až šesti atomy uhlíku a R^a, R^b a R^c znamenají vzájemně nezávisle vodík, aminoskupinu nebo alkylaminoskupinu sjedním až šesti atomy uhlíku.

Dále znamenají R^a, R^b a R^c dialkylaminoskupinu sjedním až šesti atomy uhlíku v každém z alkylových zbytků, halogen, alkylovou či alkoxylovou skupinu sjedním až šesti atomy uhlíku, a p znamená 0 nebo 1.

Podle jednoho z výhodných provedení znamená R⁴ alkylovou skupinu sjedním až šesti atomy uhlíku a p znamená 1, nebo R⁴ znamená skupinu -Z-R⁶ a p znamená 0. Ještě výhodněji znamená R⁴(O)_p terc.-butoxylovou skupinu, fenylovou, isopropyloxylovou, n-propyloxylovou nebo n-butoxylovou skupinu.

Podle jiného výhodného provedení znamená R⁵ alkenylovou skupinu se dvěma až šesti atomy uhlíku nebo skupinu -Z-R⁶ a R⁶ má významy, jak zde byly výše uvedeny. A výhodněji znamená R³ skupinu fenylovou, 2-furylovou, 2-thienylovou, isobutenylovou, 2-propenylovou nebo cykloalkyiovou se třemi až šesti atomy uhlíku.

Podle dalšího výhodného provedení může být sloučenina vzorce A přesněji vyjádřena obecným vzorcem I

(I) kde R¹ znamená vodík, skupinu -OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2, -OC(O)R^{V * * * * X} nebo -OC(O)OR^X, R² znamená vodík a R² znamená vodík, hydroxylovou skupinu nebo skupinu vzorce -OCH2(OCH₂)_mOP(O)(OH)₂ nebo -OC(O)OR^X, nebo R² znamená fluor a R² znamená vodík, dále R³ znamená vodík, hydroxylovou skupinu acetoxylovou skupinu, skupinu -OCH2(OCH2)raOP(O)(OH)2, nebo -OC(O)OR^X, dále jeden ze symbolů R⁶ nebo R⁷ znamená vodík a další hydroxylovou skupinu, alkanoyloxylovou skupinu sjedním až šesti atomy uhlíku nebo skupinu -OCH2(OCH₂)_mOP(O)(OH)₂, nebo dále R⁶ a R⁷ tvoří spolu dohromady oxo-skupinu, to za omezení, že nejméně jeden ze symbolů R¹, R², R³, R⁶ nebo R⁷ znamená skupinu obecného vzorce -OCH₂(OCH₂)_mOP(O)(OH)₂, dále symboly R⁴, R⁵, R^x, m a p mají významy, jak zde byly dříve uvedeny a patří sem i odpovídající farmaceuticky vhodné soli.

V sloučeninách obecného vzorce I lze jako příklady R^x uvést skupiny methylovou, ethylovou, n-propylovou, isopropylovou, n-butylovou, isobutylovou, chlormethylovou, 2,2,2-trichlorethylovou, cyklopropylovou, cyklobutylovou, cyklopentylovou, cyklohexylovou, ethenylovou,

2-propenylovou, fenylovou, benzylovou, bromfenylovou, 4—aminofenylovou, 4—methylaminofenylovou, 4-methylfenylovou, 4-methoxyfenylovou a podobné. Příklady pro R⁴ a R⁵ zahrnují skupiny 2-propenylovou, isobutenylovou, 3-furanylovou (3-furylovou), 3-thienylovou, fenylovou, naftylovou, 4-hydroxyfenylovou, 4-methoxyfenylovou, 4-fluorfenylovou, 4-trifluormethylfenylovou, methylovou, ethylovou, n-propylovou, isopropylovou, n-butylovou, isobuty-6CZ 289871 B6 lovou, terč-butylovou, ethenylovou, 2-propenylovou, 2-propionylovou, benzylovou, fenethylovou, fenylethenylovou, 3,4-dimethoxyfenylovou, 2-furanylovou (2-furylovou), 2-thienylovou,

2- (3-furanyl)-ethenyIovou, 2-methylpropylovou, cyklopropylovou, cyklobutylovou, cyklopentylovou, cyklohexylovou, cyklohexylmethylovou, cyklohexylethylovou a podobné.

Podle jednoho z výhodných provedení zahrnuje tento vynález sloučeninu obecného vzorce I, kde R⁵ znamená alkenylovou skupinu se dvěma až šesti atomy uhlíku nebo skupinu -Z-R⁶, kde Z a R⁶ mají významy, jak zde byly již uvedeny. Výhodněji znamená R⁵ skupinu fenylovou,

3- fuiylovou, 3-thienylovou, 2-propenylovou, isobutenylovou, 2-furylovou, 2-thienylovou, nebo cykloalkylovou se třemi až šesti atomy uhlíku.

Podle dalšího možného provedení znamená R⁴ ve sloučeninách obecného vzorce I alkylovou skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku a v takovém případě p znamená 1, nebo R⁴ znamená skupinu -Z-R⁶ s tím, že Z a R⁶ mají významy, jak zde již byly uvedeny a v takovém případě p znamená O. Výhodněji R⁴(O)_P znamená skupinu terc.-butoxylovou, fenylovou, isopropyloxylovou, n-propyloxylovou, n-butoxylovou.

Podle dalšího výhodného provedení popisuje tento vynález sloučeniny obecného vzorce I, kde R¹ znamená -OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2 a podle výhodnějšího provedení R² znamená hydroxylovou skupinu, skupinu vzorce -OCH2(OCH2)_mOP(O)(OH)2 nebo -OC(O)R^X stím, že R^x znamená alkylovou skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku. Podle jiného výhodného provedení znamená R³ skupinu hydroxylovou nebo acetoxylovou.

Podle dalšího výhodného provedení zahrnuje tento vynález sloučeniny obecného vzorce I, kde R² znamená skupinu -OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2, R¹ znamená hydroxylovou skupinu nebo -OC(O)OR^X a R³ znamená vodík či skupinu hydroxylovou, případně acetoxylovou, -OCH2(OCH₂)_mOP(O)(OH)₂, nebo -OC(O)R^X a R^x má významy, jak zde byly již dříve uvedeny. Podle ještě výhodnějšího provedení R¹ znamená hydroxylovou skupinu nebo -OC(O)OR^X a R^x s výhodou alkylovou skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku, R³ pak znamená skupinu hydroxylovou či acetoxylovou.

Podle dalšího výhodného provedení zahrnuje tento vynález sloučeniny obecného vzorce I, kde R³ znamená -OCH₂(OCH₂)_mOP(O)(OH)₂, R¹ znamená hydroxylovou skupinu nebo skupinu -OC(O)OR^X a R² znamená vodík, R² vodík, hydroxylovou skupinu nebo -OC(O)OR^X, nebo R² znamená fluor a R² znamená vodík s tím, že R^x má dříve již uvedené významy.

Podle ještě výhodnějšího provedení znamená R¹ hydroxylovou skupinu nebo -OC(O)OR^X a R^x znamená s výhodou alkylovou skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku. Podle dalšího výhodného provedení znamená R² hydroxylovou skupinu.

Podle ještě jiného výhodného provedení znamená m O nebo 1, pokud je fosfonooxymethoxylová skupina na C₇ taxanové části.

Jako výhodné a farmaceuticky způsobilé soli sloučeniny obecného vzorce I lze uvést soli alkalických kovů, počítaje v to lithium, sodík a draslík, dále soli aminů, zahrnující triethylamin, triethanolamin, ethanolamin, arginin, lysin a N-methylglukamin. Za výhodnější lze pokládat soli argininu, lysinu a N-methylglukaminu.

Za nejvýhodnější představitele taxanových derivátů obecného vzorce A je třeba pokládat tyto dále uvedené sloučeniny:

(1) 7-O-fosfonooxymethylpaclitaxel, (2) 2'-O-(ethyloxykarbonyl)-7-O-fosfonooxymethylpaclitaxel,

-7CZ 289871 B6 (3) 2'-O-fosfonooxymethylpaclitaxel, (4) 2',7-bis-0-(fosfonooxymethyl)-paclitaxel, (5) 3 '-N-debenzoy 1-3 '-desfeny 1-3 '-N-(terc-butyloxykarbonyl)-3 '-(2-fury l)-2'-O-ethy loxykarbonyl-7-O-fosfonooxymethylpaclitaxel, (6) 3'-N-debenzoyl-3'-desfenyl-3'-N-(terc.-butyloxykarbonyl)-3'-(2-thienyl)-2'-O-ethyloxykarbonyl-7-O-fosfonooxymethylpaclitaxel, (7) 10-desacetyl-3'-desbenzoyl-3'-N-(terc.-butyloxykarbonyl)-l 0-O-(fosfonooxymethyl)paclitaxel, (8) 2'-0-fosfonooxymethoxymethylpaclitaxel, jakož i jejich odpovídající farmaceuticky vhodné soli.

Sloučeniny obecného vzorce A lze připravit z taxanových derivátů T-(OH)_n jako výchozích látek, kde T a n byly již dříve definovány. Identita látky T-(OH)_n není nijak podstatně omezována, pokud nejméně jedna reaktivní hydroxylová skupina bud’ na taxanové části, nebo v postranním řetězci na Cj₃, což umožňuje tvorbu fosfonooxymethyl-etherové vazby. Je tomu třeba rozumět tak, že reaktivní hydroxylová skupina může být přímo vázána na propanoyloxylový základ na Ci₃ (například jako je 2'-hydroxylová skupina paclitaxelu) nebo na vlastní základní strukturu taxanu (například jako je 7-hydroxylová skupina paclitaxelu), nebo může být přítomna nebo substituentu postranního řetězce na Ci₃ nebo na substituentu taxanového základu. Reakční schéma a jeho sled - viz Schéma I - se může využít pro přípravu sloučenin obecného vzorce A:

Schéma I

T-(0H)_n (Aa)

T- [oCH/OOBp^SCHj J _n (B)

V

TífoCHgíOCH^OPÍOXOR^gJ _β (C) (A)

Ve schématu I znamená T' taxanový derivát, ve kterém byly nereaktivní hydroxylové skupiny blokovány, R^y je skupina, kryjící fosfonovou funkci, n a m mají významy, jak zde již byly uvedeny. Takže vhodně chráněná část T's jednou reaktivní hydroxylovou skupinou či s více takových skupin se převede nejprve na odpovídající methylthiomethylether obecného vzorce B. Použije-li se na příklad paclitaxel, pak skupinou T' může být paclitaxel jako takový (s tím, že proběhne bismethylthiomethylování v polohách 2',7-), dále 7-O-triethylsilylaclitaxel nebo 2'-O-ethoxykarbonylpaclitaxel. Sloučenina obecného vzorce B, kde m znamená O, se může připravit reakcí látky vzorce T'-(OH)_n se směsí dimethylsulfoxidu a anhydridu kyseliny octové,

-8CZ 289871 B6 nebo reakcí s dimethylsulfoxidem a organickým peroxidem. O těchto reakcích se podrobněji jedná v následující sekci.

Ether MTM s jednou intervenující methyloxy-skupinou (tj. sloučenina obecného vzorce B, kde m znamená 1), se může připravovat několika možnými postupy. Při jednom z nich se působí na sloučeninu obecného vzorce B, kde m znamená O, N-jodimidem kyseliny jantarové (NIS) a methylthiomethanolem s úmyslem prodloužit řetězec o jednu methylenoxylovou jednotku:

, NIS

T -(0CH₂SCH₃)_n + n CH^SCHg-OH ------> T -(OCHgOCI^SCHp

Odpovídající derivát methylthiomethanolu a jeho příprava je popsána v Syn. Comm., 16 (13), 1607-1610(1986).

Podle jiného, obměněného postupu se připraví T-alkoxid Ad reakcí sloučeniny obecného vzorce Aa s bází jako je n-butyllithium, lithiumdiisopropylamid nebo lithiumhexamethyldisilazid s následující reakcí s chlormethylmethylthiomethyletherem za vzniku sloučeniny obecného vzorce (B), kde m = 1.

T'-(°)_n + n CH^SCHg-OCHgCl ----T*-(OCH₂OCH₂SCH₃)_n (Ad) (Ae)

Sloučenina Ae se připraví reakcí methylthiomethoxidu (získaného z methylthiomethanolu reakcí s bází, jako je n-butyllithium, lithiumdiisopropylamid nebo lithiumhexamethyldisilazid) s chlorjodmethanem.

Sloučeninu Ae je možno rovněž připravit reakcí Ι,Γ-dichlordimethyletheru (CICH2OCH2CI) se stechiometrickým či menším množstvím (například asi 0,8 ekv) jodidu sodného s následnou reakcí s natriumthiomethoxidem. O Ι,Γ-dichlordimethyletheru je zmínka vlnd.J.Chem. 28B, 454-456 (1989).

Podle dalšího postupu se na sloučeninu obecného vzorce Aa působí bis(MTM)etherem, CH3SCH2OCH2SCH3 a NIS, takže se získá sloučenina obecného vzorce B, kde m znamená 1:

T'-(OH)_n + n CH3SCH2OCH2SCH3 -> T'-ÍOCH2OCH2SCH₃)n)

Bis(MTM)ether se připraví reakcí, Ι,Γ-dichlordimethyletheru sjodidem sodným s následující reakcí s natriumthiomethoxidem.

Postup, jak je výše popsán za použití methylthiomethanolu a NIS se může použít s jakýmkoli reagens, obsahujícím MTM-skupinu k prodloužení řetězce o jednu methylenoxy-skupinu v té či oné chvíli. Tak například v případě sloučeniny obecného vzorce B, kde m znamená 1, lze reakcí s methylthiomethanolem a NIS získat sloučeninu obecného vzorce B, kde m znamená 2. Postup je možno dále opakovat tak, že se tímto způsobem získají sloučeniny obecného vzorce B, kde m znamená 3,4, 5 nebo 6.

Ve druhém stupni, jak je to uvedeno ve schématu I, se methylthiomethylether převádí na odpovídající chráněný fosfonooxymethylether. Provádí se to reakcí MTM-etheru sNIS a chráněným fosfátem HOP(O)(OR')₂. Ve třetím stupni se odstraní kiycí skupina na fosfonové funkci a jakákoli skupina, případně jakékoli skupiny, chránící hydroxylovou funkci či hydroxylové funkce a získá se tak sloučenina obecného vzorce A. Tak například vhodnou krycí

-9CZ 289871 B6 skupinou fosfonové funkce může být benzylová skupina, jež se může odstranit katalytickou hydrogenolýzou. Krycí skupiny na hydroxylových funkcích, jako jsou trialkylsilylové skupiny, se mohou odstranit působením fluoridových iontů, skupinu trichlorethoxykarbonylovou lze odstranit zinkem. Jakákoli eliminace krycích skupin je popsána v učebnicích, jako je Green aWuts „Protective Groups in Organic Synthesis,“ John Wiley and Sons, 1991; dále McOmie „Protective in Organic Chemistry“, Plenům Press, 1973. Oba dva stupně jsou podrobněji probírány v dalších částech tohoto vynálezu.

Obměny reakčních sledů ve schématu I jsou zachyceny ve schématu II.

Schéma II

(C)

Podle schématu II se na sloučeninu vzorce Aa působí sloučeninou vzorce Ca a NIS za vzniku sloučeniny a z té odstraněním krycích skupin vznikne sloučenina A. Sloučeniny vzorce Ca, kde m znamená O, se mohou připravovat nejprve reakcí methylthiomethanolu s bází, jako je natrium, lithium, nebo kalium-hexamethyldisilazid tak, že vzniká methylthiomethoxid; na ten se pak působí chráněným chlorofosfátem, jako je dibenzylchlorofosfát, tak, že vzniká očekávaná sloučenina. Sloučeniny vzorce Ca, kde m znamená 1, se mohou připravovat reakcí CH3SCH2OCH2CI s dvojnásobně chráněnou solí kyseliny fosforečné, např. sodnou, draselnou nebo tetra-(n-butyl)amoniovou solí dibenzylfosfátu. Nebo je možno nejprve převést CH3SCH2OCH2CI na odpovídající jodovanou látku za použití jodidu sodného před provedením vlastní reakce se solí kyseliny fosforečné. Jinak je dále možno připravit sloučeninu vzorce Ca, kde m znamená 1, reakcí C1CH₂OCH₂C1 sjodidem sodným s následující reakcí snatriumthiomethoxidem za vzniku CH3SCH2OCH2SCH3; na tuto sloučeninu se potom působí NIS a dvojnásobně chráněným fosfátem, jako je dibenzylfosfát, za vzniku očekávaného produktu. Kterákoli z dříve zde již zmíněných reagujících činidel se skupinou MTM se může prodloužit o jednu methylenoxy-skupinu vždy v té které době reakcí uvedené reagující látky smethylthiomethanolem a NIS.

Při jiném způsobu přípravy sloučeniny vzorce A se působí na T-alkoxid Ad jodofosfátem, jak je to naznačeno ve schématu ΙΠ.

Schéma ΙΠ + lC^(0C^)_m0ř(0)(0R’)₂ (Ad) (C)

-10CZ 289871 B6

Jodovaný fosfát ve schématu III se získá reakcí Cl(CH₂(OCH₂)_mCl s dvojnásobně chráněnou solí kyseliny fosforečné za vzniku ClCH₂(OCH₂)_mOP(O)(OR^y)₂ a z této látky se potom působením jodidu sodného získá očekávaný produkt.

A ještě další postup, vhodný pro přípravu podskupiny sloučenin vzorce A, kde nejméně jedna z fosfonooxymethoxylových skupin je vázána na taxanovou část, je zachycen ve schématu IV.

Schéma IV

PO . X

I + U-OH^txn-focI^COCHg)^^! (Ba)

X (D)

Ve schématu IV mají man významy, jak byly dříve uvedeny, X má jiný význam, než vodík, P je skupina, chránící hydroxylovou funkci, txn je taxanová část molekuly. Sloučeniny vzorce D jsou taxany s 13a-hydroxylovou skupinou a jednou či více methylthiomethyl-etherových skupin, vázaných přímo nebo nepřímo na taxanový základ; patří sem rovněž Cu-kovové alkoxidy vzorce B. Jedním z příkladů sloučenin vzorce D je 7-0-methylthiomethylbaccatin ΙΠ:

Spojení taxanu D s azetidinonem se provádí obdobně jak je uvedeno dále ve schématu VI. Takže postup, který se tam popisuje pro přípravu sloučeniny Id je použitelný rovněž pro přípravu sloučeniny vzorce Ba, tj. sloučeniny vzorce B, kde nejméně jedna ze skupin MTM je vázána přímo nebo nepřímo na taxanovou část, to za předpokladu, že se podle postupu dle schématu VI použije sloučenina vzorce D místo sloučeniny vzorce Π. S výhodou se převede taxan D nejprve na Cu-alkoxid kovu, jako je alkoxid sodíku, draslíku nebo lithia s tím že lithiumalkoxid je nejvýhodnější. Azetidinon se používá jako výchozí sloučenina pro postranní řetězec na C]₃. Po kondenzační reakci s taxanem se odstraní krycí skupina P na hydroxylové funkci, a - je-li to žádoucí - může se převést volná hydroxylová skupina v postranním řetězci na MTM-ether nebo se může převést na derivát esterového typu či na karbonát, jak se to zde popisuje.

Azitidinony lze připravovat dále popsanými způsoby, a to jsou rovněž postupy obecně známé na tomto úseku. Sloučeniny obecného vzorce D se mohou připravovat obecně platnými postupy, jak

-11 CZ 289871 B6 jsou výše popsány pro přípravu sloučenin vzorce B za použití vhodně chráněného taxanu. Avšak pohodlněji je lze získat ze sloučeniny vzorce Ba odštěpením Cn-postranního řetězce za použití některého borohydridu, jako je natriumborohydrid nebo tatrabutylamoniumborohydrid. Tak se na 7-0-MTM-derivát paclitaxalu působí tetrabutylamoniumborohydridem za vzniku 7-O-MTMbaccatinu III.

Obecný postup ze schématu I pro přípravu sloučeniny vzorce A je podrobněji popsán na příkladech ve schématu V, které dokládá přípravu sloučeniny vzorce Γ, tj. sloučeniny vzorce I, kde m znamená O. Postup, použitý při tomto synthetickém sledu je obecně aplikovatelný na další taxanové deriváty, i pokud nejsou specificky zahrnuty do rozsahu vzorce I. Dále je možno postup ze schématu V modifikovat ve shodě s obecně známými postupy, jak to obeznámený zná, takže se tak dospěje v taxanovým derivátům vzorce A, kde m znamená 1 nebo 2.

Je samozřejmé, že ve schématu V jakož i kdekoli jinde v tomto textu, může výraz „skupina, chránící hydroxylovou funkci“ zahrnovat uhličitany (~OC(O)OR^X); takže použije-li se zbytek kyseliny uhličité k chránění hydroxylové skupiny, má se za to, že se odstraní v dalším stupni za obnovení volné hydroxylové skupiny, jinak by totiž zbytek kyseliny uhličité zůstal jako nezbytná část v konečném produktu.

Schéma V

(la) (la) SMe₂/ (C₆H₅C0)₂0 nebo (1b) AcgO/DMSO

(Ib) (2) NlS/H0P(0)(0R^y)₂

-12CZ 289871 B6

Cle) (3) odstranění fosfonové krycí skupiay, a - je-li to třeba - hydroxylové krycí skupiny

R⁴(0)_CQIH o ^p 1 Í *⁵ v⁰

R·¹·

ď)

Ve schématu V znamená R^la hydroxylovou skupinu, chráněnou hydroxylovou skupinu, -OC(O)R' nebo -OC(0)OR^X, R² znamená vodík a R^2a znamená vodík, hydroxylovou skupinu, chráněnou hydroxylovou skupinu nebo -OC(O)OR^X, nebo R² znamená fluor a R^2a znamená vodík; R^3a znamená vodík, hydroxylovou skupinu, chráněnou hydroxylovou skupinu, acetoxylovou skupinu nebo -OC(O)OR^X; jeden ze symbolů R^6a nebo R^7a znamená vodík a druhý hydroxylovou skupinu, chráněnou hydroxylovou skupinu nebo alkanoyloxylovou skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku; nebo R“^a a R^7a tvoří spolu dohromady oxoskupinu, to znamená, že nejméně jeden ze symbolů R^la, R^2a nebo R^3a, R^6a nebo R^7a znamená hydroxylovou skupinu. R^lb znamená hydroxylovou skupinu, chráněnou hydroxylovou skupinu, -OCH2SCH3, -OC(O)R^X nebo -OC(O)OR^X; R² znamená vodík a R^2b znamená vodík, hydroxylovou skupinu, chráněnou hydroxylovou skupinu, -OCH2SCH3, nebo -OC(O)OR^X; nebo R² znamená fluor a R^2b znamená vodík; R^3b znamená vodík, hydroxylovou skupinu, chráněnou hydroxylovou skupinu, acetoxylovou skupinu, -OCH2SCH3 nebo -OC(O)OR^X; jeden ze symbolů R^6b a R^7b znamená vodík druhý hydroxylovou či chráněnou hydroxylovou skupinu, alkanoyloxylovou skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku nebo -OCH2SCH3; nebo R^6b a R^7b tvoří spolu dohromady oxo-skupinu, to za omezení, že nejméně jeden ze symbolů R^lb, R^2b, R^3b, R^6b nebo R^7b znamená -OCH2SCH3, R^lc znamená hydroxylovou či chráněnou hydroxylovou skupinu -OCH2OP(O)(OR^y)2, -OC(O)R^X nebo -OC(O)OR^X; R² znamená vodík a R^2c znamená vodík; R^3c znamená vodík, hydroxylovou, chráněnou hydroxylovou nebo acetoxylovou skupinu, -OCH₂OP(O)(OR^y)2 nebo -OC(O)OR^X; jeden ze symbolů R^6c nebo R^7c znamená vodík a druhý

-13CZ 289871 B6 hydroxylovou či chráněnou hydroxylovou skupinu, alkanoyloxylovou skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku nebo -OCH2OP(O)(OR^y)2, to znamená, že nejméně jeden ze symbolů R^lc, R^2c, R^3c, R^6c, nebo R^7c znamená -OCH2OP(O)(OR^y)2.

R¹ znamená hydroxylovou skupinu, -OCH2OP(O)(OH)2, -OC(O)R^X nebo -OC(O)OR^X; R²' znamená vodík a R² znamená vodík, hydroxylovou skupinu -OCH2OP(O)(OH)₂ nebo -OC(0)OR^X; nebo R² znamená fluor a R² znamená vodík; R³ znamená vodík, hydroxylovou či acetoxylovou skupinu, -OCH2OP(O)(OH)2 nebo -OC(O)OR^X; jeden ze symbolů R⁶ a R⁷ znamená vodík a druhý znamená hydroxylovou skupinu, alkanoyloxylovou skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku nebo -OCH2P(O)(OH)₂, to za omezení, že nejméně jeden ze symbolů R¹, R², R³, R⁶ anebo R⁷ znamená -OCH₂OP(O)(OH)₂, R⁴, R⁵ a R^x mají významy, jak zde již byly dříve uvedeny a R^y znamená fosfonovou krycí skupinu.

V pravém stupni se volná hydroxylová skupina sloučeniny vzorce Ia převede na odpovídající methylthiomethyletherovou skupinu (-OCtfySCPb). Dá se to provést kterýmkoli z obou možných postupů, tedy la dimethylsulfidový postup a lb dimethylsulfoxidový postup. Dimethylsulfidový postup převádění alkoholů na methylthiomethylethery popisuje Medina a spol. v Tet. Letters 1988, 3773-3776, část tohoto postupu je zde uvedena. Dimethylsulfoxidový postup je velmi dobře známou reakcí, obvykle označovanou jako Pummererova.

Je třeba připomenout, že se reaktivita hydroxylové skupiny často liší v závislosti na jejím umístění na taxanovém derivátu jako výchozí látce obecného vzorce Ia. Ačkoliv obecně 2'-hydroxylová skupina je reaktivnější při acetylování než 7-hydroxylová skupina, a ta je zase reaktivnější než 10-hydroxylová skupina, bylo nalezeno a s překvapením, že se 7-hydroxylová skupina převádí na odpovídající methylthiomethylether snáze než 2'-hydroxylová skupina. Terciární hydroxylová skupina na C-l je obvykle reaktivní nejméně. Lišící se reaktivitu hydroxylových skupin je možno využít při kontrole místa, jakož i stupně methylthiomethylování.

Takže při použití sloučeniny obecného vzorce Ia, kde R^la a R^2a znamená v obou případech po hydroxylové skupině, převládne jako produkt methylthiomethylování, odpovídající 7-O-methylthiomethylether. Má-li se získat sloučenina vzorce lb, kde R^Ib znamená methylthiomethoxylovou skupinu, aniž by došlo k reakci 7-hydroxylové skupiny, je-li v molekule přítomná, za vzniku odpovídajícího methylthiomethyletheru, je třeba 7-hydroxylovou skupinu blokovat běžnou chránící skupinou, jako je například skupina triethylsilylová. Podobně je možno připravit 10-methylthiomethylether, aniž by došlo k reakci 7- a/nebo 2'-hydroxylové skupiny, jsou-li přítomné, jestliže se tyté dvě skupiny blokují týmž nebo i různými činidly, chránícími hydroxylovou funkci. I když 7-hydroxylová skupina představuje preferenční místo methylthiomethylsilylování, je přesto výhodné chránit 2'-hydroxylovou skupinu, je-li 7-monomethylthiomethylether žádoucím produktem.

Avšak reakční podmínky lze upravit tak, že se podporuje tvorba bis- nebo tris-methylthiomethyletherů taxanových derivátů. Tak například při použití paclitaxelu se dá docílit vyšší poměr 2',7-bis-(methylthiomethyl)etheru paclitaxelu ve směsi produktů použitím většího nadbytku methylthiomethylačního činidla.

Pokud se vrátíme ke schématu V, pak v postupu 1 a se na sloučeninu vzorce Ia působí dimethylsulfodem a organickým peroxidem, jako je benzoylperoxid. Reakce se provádí v prostředí inertního organického rozpouštědla, jako je acetonitril, methylenchlorid a podobné látky za teploty, jež je vhodná pro vznik produktu, obvykle jde o rozsah od asi -40 °C až asi do teploty místnosti. Dimethylsulfid a benzoylperoxid se používají v nadbytku, vztažmo k taxanovému derivátu jako výchozí látce Ia a dimethylsulfid se používá v nadbytku se zřetelem na benzoylperoxid.

-14CZ 289871 B6

Relativní a vzájemná množství výchozích látek, použitých při takové reakci, budou záviset na stupni methylthiomethylování, jehož má být dosaženo. Takže má-li se převést jedna volná hydroxylová skupina taxanového derivátu jako výchozí látka vzorce la na methylthiomethylether, použijí se dimethylsulfid a benzoylperoxid až do desetinásobného nadbytku vůči taxanovému derivátu la, a s výhodou se dimethylsulfid použije asi v dvojnásobném až trojnásobném množství vztažmo k benzoylperoxidu. V případě, kdy výchozí látka (la) obsahuje jak 2'-, tak i 7-hydroxylovou skupinu, se množství 2',7-bis-(methylthiomethyl)-etheru, získané touto reakcí, zvýší v závislosti na množství dimethylsulfidu a benzoylperoxidu. Je-li žádoucím produktem 2',7-bis— (methylthiomethyl)ether, použije se dimethylsulfid s výhodou asi v patnáctinásobném až dvacetinásobném nadbytku, přepočteno na taxanový derivát jako výchozí látku. Benzoylperoxid se použije v množství asi pětinásobku až desetinásobku v přepočtu na taxanový derivát jako výchozí látku.

Jinak se může sloučenina vzorce lb připravovat reakcí sloučeniny obecného vzorce la s dimethylsulfoxidem a anhydridem kyseliny octové (tedy dle postupu lb). Tento postup je vhodný pro převedení látky bez 2'-hydroxylové skupiny na odpovídající derivát, tedy methylthiomethylether. Při postupu lb se sloučenina vzorce la rozpustí v dimethylsulfoxidu a do roztoku se přidá anhydrid kyseliny octové. Obvykle se tato reakce provádí za teploty místnosti a po době 18 až 24 hodin vznikne monomethylthiomethylether.

Ve druhém stupni reakčního sledu se methylthiomethylether převede na odpovídající blokovaný fosfonooxymethylether. Taková přeměna methylthiomethyletheru na blokovaný fosfonooxymethyl-derivát se dá provést obecnými postupy, jak o tom píše Veeneman a spol., Tetrahedron 47, 1547-1562 (1991). Závažné části takového postupu zde budou ještě uvedeny. Takže na sloučeninu vzorce lb s nejméně jednou methylthiomethyletherickou skupinou se působí N-jodimidem kyseliny jantarové a částečně chráněným derivátem kyseliny fosforečné, jako je dibenzylester této kyseliny. Reakce se provádí v prostředí inertního organického rozpouštědla, jako je tetrahydrofuran nebo některý z halogenovaných uhlovodíků, třeba 1,2-dichlorethan nebo methylenchlorid, případně za přítomnosti dehydratačního činidla, třeba některého molekulárního síta. K urychlení reakce se může také přidávat katalyzátor, například stříbrná sůl kyseliny trifluormethansulfonové. Reakce se provádí v teplotním rozmezí od asi 0 °C asi do teploty místnosti, s výhodou právě za teploty místnosti. N-Jodimid kyseliny jantarové a derivát kyseliny fosforečné se používají vaši stejném polárním ekvivalentu jako methylthiomethylether lb, ale s výhodou se používají v mírném nadbytku, například od asi 1,3 do asi 1,5 ekvivalentů, přepočteno na sloučeninu vzorce lb.

Třetí stupeň reakčního sledu je odstranění fosfonové krycí skupiny jakož i skupiny, chránící hydroxylovou funkci, pokud jsou v molekule přítomné. Toto odblokování se provede běžnými postupy, jak jsou v tomto případě známé, jako je bázicky či kysele katalyzovaná hydrolýza, dále hydrogenolýza, redukce a podobně. Tak například katalytickou hydrogenolýzou lze použít k odstranění benzylové fosfonové skupiny, jakož i benzyloxykarbonylové skupiny, chránící hydroxylovou funkci. Tyto postupy odstraňování krycích skupin lze nalézt ve standardních učebnicích, jako je ta od Greene a Wuzt, případně McOmie, viz zde dříve.

Soli sloučenin obecného vzorce I a bází lze připravit běžnými postupy a to tak, že se sloučenina obecného vzorce I uvádí do styku s kovovou bází nebo s aminem. Mezi vhodné kovové báze patří hydroxidy, uhličitany a hydrogenuhličitany sodíku, draslíku, lithia, vápníku, barya, hořčíku, zinku a hliníku; a mezi vhodnými aminy lze uvést triethylamin, amoniak, lysin, arginin, N-methylglykamin, ethanolamin, prokain, benzathin, dibenzylamin, trimethamin (TRIS), chlorprokain, cholin, diethanolamin, triethanolamin a četné další podobné látky.

Takové soli s bázemi lze dále čistit třeba chromatografováním s následující lyofílizací nebo krystalizací.

-15CZ 289871 B6

Taxanové deriváty jako výchozí sloučeniny

Postupy, jak jsou zde popisovány výše, se dají použít na jakékoli taxanové deriváty vzorce T—(OH)_n za vzniku sloučeniny vzorce A. Četné příklady sloučenin T-(OH)_n jsou uváděny v literatuře a některé z nich jsou uvedeny i zde dále.

(a) paclitaxel, (b) Taxotere, (c) 10-desacetylpaclitaxel, (d) taxanové deriváty, jak jsou uvedeny v PCT přihlášce 93/06079, zveřejněné 01.04.1993, vzorce

kde Ri znamená -OR, -SR₇ nebo -NRR₉; R₂ znamená vodík, alkylovou, alkenylovou, alkinylovou, arylovou nebo heteroarylovou skupinu; R₃ a R znamenají vzájemně nezávisle vodík, alkylovou, alkenylovou, alkinylovou, arylovou, heteroarylovou nebo acylovou skupinu, to za omezení, že R₃ a Ř mohou znamenat současně v obou případech acylovou skupinu; R5 znamená -COR₁₀, -COOR10, -COSR_]0, -CONRR10, -SO₂Rn nebo -PORi₂Ri₃; Rf, znamená vodík, alkylovou, alkenylovou, alkinylovou, arylovou, heteroarylovou, hydroxylovou krycí skupinu nebo funkční skupinu, jež zvyšuje rozpustnost taxanového derivátu ve vodě; R₇ znamená alkylovou, alkenylovou, alkinylovou, arylovou, heteroarylovou nebo sulfhydrylovou krycí skupinu; R₈ znamená vodík, alkylovou, alkenylovou, alkinylovou, arylovou, heteroarylovou skupinu; R₉ znamená skupinu, chránící aminofunkci; R10 znamená alkylovou, alkenylovou, alkinylovou, arylovou nebo heteroarylovou skupinu, dále skupinu vzorce -OR10 nebo -NRR14; Ri₂ a Ri₃ znamená vzájemně nezávisle alkylovou, alkenylovou, alkinylovou, arylovou, heteroarylovou skupinu, dále -ORi₀ nebo -NRR]₄; R14 znamená vodík, alkylovou, alkenylovou, alkinylovou, arylovou, heteroarylovou skupinu; R15 a R16 znamenají vzájemně nezávisle vodík, hydroxylovou, nižší alkanoyloxylovou, alkenyloxylovou, alkinoyloxylovou, aryloyloxylovou skupinu nebo Ri₅ a Ri₆ tvoří spolu dohromady oxoskupinu; R_i7 a R_lg znamenají vzájemně nezávisle vodík, hydroxylovou skupinu, nižší alkanoyloxylovou, alkenoyloxylovou, alkinoyloxylovou, aryloyloxylovou skupinu nebo Rn a Ru tvoří spolu dohromady oxo-skupinu; Ri₉ a R₂o znamenají vzájemně nezávisle vodík, hydroxylovou nebo nižší alkanoyloxylovou, aikenoyloxylovou, alkinoyloxylovou skupinu nebo aryloyloxylovou skupinu; R_2J a R₂₂ znamenají vzájemně nezávisle vodík nebo nižší alkanoyloxylovou, alkenoyloxylovou, alkinoyloxylovou skupinu nebo aryloyloxylovou skupinu nebo Ř₂i a R₂₂ tvoří spolu dohromady oxo-skupinu; R₂₈ znamená vodík nebo hydroxylovou či nižší alkanoyloxylovou, alkenoyloxylovou, alkinoyloxylovou skupinu nebo aryloyloxylovou skupinu; nebo R₂₃ a R₂₄ tvoří spolu dohromady

-16CZ 289871 B6 oxoskupinu nebo methylenový můstek; nebo R₂3 a R₂₄ dohromady spolu a s uhlíkovým atomem, na který jsou vázány, tvoří oxiranový kruh, nebo R₂₃ a R₂₂ tvoří spolu dohromady a s uhlíkovým atomem na kterém jsou vázány, oxetanový kruh; R₂₅ znamená vodík, hydroxylovou nebo nižší alkanoyloxylovou alkenoyloxylovou, alkinoyloxylovou nebo aroyloxylovou skupinu; nebo R₂₆ znamená vodík, hydroxylovou, nižší alkanoyloxylovou, alkenoyloxylovou, alkinoyloxylovou nebo aryloyloxylovou skupinu, nebo R₂6 a R₂₅ tvoří spolu dohromady oxo-skupinu; a R₂₇ znamená vodík, hydroxylovou nebo nižší alkoxylovou, alkanoyloxylovou, alkenoyloxylovou, alkinoyloxylovou či aryloyloxylovou skupinu;

(e) taxanové deriváty, popsané v Americkém patentovém spise 5,227.400, tedy 3'-desfenyl-3'(2-furyl)- nebo 3'-(2-thienyl)-deriváty paclitaxelu, Taxotere;

(f) taxanové deriváty popsané v Evropském patentovém spise 534 709, zveřejněném 31.03.1993 (paclitaxelové deriváty, kde fenylové skupiny postranního řetězce jsou vzájemně nezávisle nahrazovány skupinami nafiylovými, styrylovými nebo substituovanými fenylovými), viz rovněž PCT 92/09 589, publ. 11.06.1992;

(g) taxanové deriváty, viz EP 534 707, publ. 31.03. 1993 (paclitaxelové deriváty, kde 3'-Nbenzoylová skupina je nahrazena ethoxykarbonylovou nebo methoxykarbonylovou skupinou;

(h) PCT přihláška 93/06 093, zvěř. 01.04.1993 (10-desacetoxyderiváty paclitaxelu a Taxotere;

(i) EP 524 093, publ.. 20.01. 1993 (10-, 7-, nebo 7,10-bis-O-(N-substituované karbamoyltaxanové deriváty);

(j) 9-a-hydroxy-analog paclitaxelu, viz Klein „Synthesis of 9-dihydrotaxol: A New Bioactive Taxane“, Tetrahedron Letters 1993, 34(13), 2047-2050;

(k) 14-[3-hydroxy-analog paclitaxelu a Taxotere, připravené z 14-(3-hydroxy-10-desacetylbaccatinu III, předneseno na ,205* ACS National Meeting in Colorado, 1993 (Med. Chem. Division, Abstract č. 28) a (l) další taxany, jako je C-7-Fluortaxan a různé C-10-substituované taxany, viz naše souvislá Americká patentová přihláška U.S.S.N. 08/062 687 a 20.05.1993, na kterou se zde pro úplnost odkazuje.

Volná hydroxylová skupina, případně volné hydroxylové skupiny taxanových derivátů lze převést obvyklými postupy na odpovídající estery či karbonáty; například ve sloučeninách obecného vzorce Ia je jedna ze skupin R^la, R^2a a nebo R^3a -OC(O)R^X nebo -OC(O)OR^X a R^x, jak to zde bylo dříve již uvedeno. Takže je možno provést reakci staxanovým derivátem T-OH a sloučeninou obecného vzorce L-C(O)OR^X (kde L znamená odštěpující se skupinu), jako je někteiý chloromravenčan za přítomnosti báze, jako je některý terc.amin, to za vzniku odpovídajícího karbonátu; tak například reaguje paclitaxel s ethyletherem kyseliny chloromravenčí za přítomnosti diisopropylethylaminu za vzniku 2'-O-ethyloxykarbonylpaclitaxelu. T-OH může také reagovat s karboxylovou kyselinou vzorce R^XCOOH nebo odpovídajícím acylujícím derivátem (například anhydridem, aktivním esterem nebo acylhalogenidem) za vzniku odpovídajícího esteru.

Dále pak se mohou taxanové deriváty T-(OH)_n připravovat acylováním taxanových látek s C-13-hydroxylovou skupinou působením vhodně substituované 3-amino-2-hydroxypropanové kyseliny, nebo odpovídajícím acylujícím derivátem této kyseliny či látkou, ze které odpovídající aminokyselina vzniká. Takovými vhodnými látkami pro vznik substituované

3-amino-2-hydroxypropanové kyseliny jsou například azetidinony vzorce III. Příkladem takové acylační reakce je spojení derivátu baccatinu III schráněnou hydroxylovou skupinou, nebo

- 17CZ 289871 B6

10-desacetylbaccatinu III schráněnou hydroxylovou skupinou sderivátem fenylisoserinu za vzniku paclitaxelových derivátů, jak to popisuje například Denis a spol. v Amerických patentových spisech 4 924 011 a 4 924 012. Dále pak je podobná reakce chráněného baccatinu III a azetidinonu za vzniku paclita připravovat acylováním taxanových látek s C-13-hydroxylovou skupinou působením vhodně substituované 3-amino-2-hydroxypropanové kyseliny, nebo odpovídajícím acylujícím derivátem této kyseliny či látkou, ze které odpovídající aminokyselina vzniká. Takovými vhodnými látkami pro vznik substituované 3-amino-2-hydroxypropanové kyseliny jsou například azetidinony vzorce III. Příkladem takové acylační reakce je spojení derivátu baccatinu ΠΙ schráněnou hydroxylovou skupinou, nebo 10-desacetylbaccatinu III s chráněnou hydroxylovou skupinou s derivátem fenylisoserinu za vzniku paclitaxelových derivátů, jak to popisuje například Denis a spol. v Amerických patentových spisech 4 924 011 a 4 924 012. Dále pak je podobná reakce chráněného baccatinu ΙΠ a azetidinonu za vzniku paclitaxelu o odpovídajících derivátů popsána vEP-přihlášce 400 971, zveřejněné 05.12.1990 (nyní Americké patentové spisy 5 175 315 a 5 229 526.

Postup, jak je popsán vEP 400 971 (Holton-ův způsob) záleží v reakci l-benzoyl-3-(lethoxy)ethoxy-4-fenyl-2-azetidinonu s 7-O-triethylsilylbaccatinem ΠΙ za přítomnosti Ν,Ν-dimethylaminopyridinu a pyridinu při 25 °C po dobu 12ti hodin; po odstranění různých krycích skupin z hydroxylových funkcí se takto připraví paclitaxel. Zlepšení Holton-ova postupu popisuje Ojima a spol., viz „New and Efficient Approaches to the Semisynthesis of Taxol and its C-13 Side Chain Analogs by Means of β-Lactam Synthon Method“, Tetrahedron 1992, 48(34) 6985-7012. Ojimův způsob záleží v tom, že se nejprve připraví sodná sůl triethylsilylbaccatinu III za použití hydridu sodíku, a na tuto sůl se potom působí chirálním l-benzoyl-3-(lethyloxy)ethoxy)-4-fenyl-2-azetidinonem za vzniku paclitaxelu po odstranění krycích skupin z hydroxylových funkcí. V Americkém patentovém spise 5 229 526 popisuje Holton reakci kovového alkoxidu baccatinu ΠΙ nebo odpovídajícího derivátu s 2-azetidinonem za vzniku taxanů s postranním řetězcem na uhlíkovém atomu v poloze -13-, Má se za to, že tento postup je vysoce diastereoselektivní; mohou se tedy použít racemické směsi 2-azetidinonu jako předchůdce postranního řetězce. Nověji popisuje Ojima a spol., viz „A Highly Efficient Routě to Taxotere by the β-Lactam Synthon Method“, Tetrahedron Letters 34 (26) 4149-4152 (1993) reakci kovových alkoxidů 7,10-bis-O-(trichlorethoxykarbonyl)-10-desacetylbaccatinu III s chirálním l-(terc.-butoxykarbonyl)-4-fenyl-3-(chrán.-hydroxy)H-2-azetidinonem za vzniku Taxotere (pochopitelně po odstranění krycích skupin). Podstatné části všech citovaných prací jsou zde dále ještě uvedeny.

Způsob baccatin/azetidinon, zobecněný na přípravu sloučenin obecného vzorce Ia je doložen ve schématu VI. A opět další taxanové deriváty, i když nezapadají specificky do rozsahu obecného vzorce Ia lze rovněž připravovat tímto postupem za použití vhodných výchozích látek.

-18CZ 289871 B6

Schéma VI

R⁴(0)„C0NH

J(Ia)

Ve schématu VI znamená R² vodík a R^2d znamená vodík, chráněnou hydroxylovou skupinu nebo

-OC(O)OR^X; nebo R² znamená fluor a R^2d znamená vodík; R^3d znamená vodík, acetoxylovou skupinu, chráněnou hydroxylovou skupinu nebo -OC(O)OR^X; jen ze symbolů R^6d nebo R^7d znamená vodík a druhý znamená hydroxylovou skupinu, případně chráněnou nebo alkanoyloxylovu skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku; nebo R^6d a R^7d tvoří spolu dohromady oxo-skupinu; P znamená skupinu, chránící hydroxylovou funkci; M znamená vodík nebo kov ze skupiny LA, jako je lithium, sodík či draslík, a p, R⁴, R^{5 * * * * 10} a R^x mají významy, jak zde již byly uvedeny. Reakci je možno provést, jak to bylo popsáno v EP 400 871, kde se působí na derivát baccatinu obecného vzorce II, kde M znamená vodík, azetidinonem obecného vzorce III za přítomnosti organické báze, jako je Ν,Ν-dimethylaminopyridin. S výhodou se však derivát

-19CZ 289871 B6 baccatinu vzorce III převede nejprve na 13-alkoxid působením silné báze, jako je některý zhydridů, alkylamidů nebo bis-(trialkylsilyl)amidů kovů skupiny IA, jak se to popisuje v Americkém patentovém spise 5 229 526, jakož i ve výše uvedených sděleních Ojimy.

S výhodou se jako 13-alkoxid použije lithiumalkoxid. Tuto látku lze připravit reakcí sloučeniny 5 obecného vzorce II, kde M znamená vodík, se silnou bází kovu, jako je lithiumdiisopropylamin, alkyllithium s jedním až šesti atomy uhlíku, lithium-bis-(trimethylsilyl)amid, fenyllithium, hydrid lithia a podobné báze.

Vlastní reakce mezi taxanem obecného vzorce II a azetidinonem vzorce III se provádí v prostředí ío inertního organického rozpouštědla, jako je tetrahydrofuran, to za nízké teploty od asi 0 až asi do

-78 °C. Azetidinony obecného vzorce III lze použít jako racemickou směs při reakci s kovovými alkoxidy taxanových látek vzorce II, kde M znamená kov skupiny ΙΑ. V takovém případě se azetidinové reagens použije s výhodou v množství nejméně 2 ekvivalenty ve vztahu k taxanu jako reagující složce, lépe v množství asi 3 až asi 6 ekvivalentů. Mohou se rovněž použít chirální 15 azetidinony a v takovém případě může postačovat použití jednoho ekvivalentu azetidinonu na taxanovou složku. S výhodo se však azetidinon použije v mírném nadbytku, například až asi do 1,5 ekvivalentů.

Krycí skupina na hydroxylové funkci může být tatáž, jako obvykle, nebo se volí tak, aby bylo 20 možno selektivní odstranění jedné či více krycích skupin, aniž by tím byly podstatněji odstraněny ostatní. Tak například ve sloučenině vzorce Id mohou R^2d i PO znamenat v obou případech triethylsilyloxylovou skupinu a R^3d může znamenat benzyloxykarbonylovou skupinu. Katalytickou hydrogenolýzou za přítomnosti palladia na uhlí se odstraní benzyloxykarbonylová krycí skupina, aniž došlo k odštěpení triethylsilylové skupiny. Takže hydroxylové krycí skupiny 25 ve sloučeninách obecného vzorce Id se mohou selektivně odstranit za vzniku sloučeniny obecného vzorce la.

Sloučeniny obecného vzorce Π jsou buď z literatury známé, jako je například baccatin ΙΠ, 10-desacetylnaccatin III a jejich deriváty s chráněnými hydroxylovými skupinami, nebo je lze 30 připravit běžnými postupy, například převedením hydroxylové skupiny na odpovídající karbonát.

Další sloučenina obecného vzorce II se mohou připravovat podle postupů, popsaných zde dále v sekci Příprava výchozích složek.

Sloučeniny obecného vzorce ΠΙ se mohou připravovat ze sloučenin obecného vzorce lila 35 obecných postupy dle EP 400 971 a sdělení Ojimy a spol., Tetrahedron 48, 6985-7012 (1992):

*0.	R5
		v	báze	v
				I
			---------?
		NH	R4(O)pCO-L		/(O) R4
0*				0^	.... . ... y , v &
	(lila)			(III) 0

Takže se na sloučeninu obecného vzorce lila působí nejprve bází, jako je n-butyllithium nebo triethylamin a pak následuje reakce se sloučeninou vzorce R⁴(O)_PCO-L, kde L znamená 40 odštěpující se skupinu, takže vzniká sloučenina vzorce III.

Sloučeniny obecného vzorce lila lze připravovat podle obecných postupů, popsaných vEP 400 971 za použití meziproduktu, tedy 3-acetoxy-4-substituovaného derivátu 2-azetidinonu vzorce Illb, nebo za použití postupu z Amerického patentového spisu 5 229 526, kdy se používá 45 jako meziprodukt 3-triethylsilyloxy-4-substituovaný derivát 2-azetidinonu. Podle zlepšeného

-20CZ 289871 B6 postupu se získá sloučenina obecného vzorce Illb kondenzací acetoxyacetylchloridu s bis-iminem s tím, že se následující hydrogenolýzou nebo štěpením v kyselém prostředí odstraní N-imonová skupina; tento postup je zachycen v následujícím schématu, kde R⁵ je arylová skupina, případně substituovaná, nebo heteroarylová skupina, jako je furylová či thienylová. Tento postup je popisován v související americké přihlášce 08/052 434 z 23.04.1993, na kterou se zde odkazuje.

0^0(0)001^0(0)01 + —

R⁵CH~(NeCHR⁵)2 báze

CH.C(0)0 _r5

ch₃c(o)o

Reakční produkty vzorce Illb, získané po takových cykloadičních reakcích, jsou obvykle racemické směsi dvou cis-azetidinonů. Racemickou směs lze rozštěpit běžnými postupy, jako je konverze na diasteroisomeiy, diferenční absorpce na koloně s náplní chirálního adsorbentu nebo enzymově. Tak například lze působit na racemickou směs sloučenin obecného vzorce Illb enzymem, kteiý katalyzuje hydrolýzu esteru, například tedy některou esterovou nebo lipasou, čímž se selektivně odštěpí 3-acylová skupina z jednoho enantiomerů, aniž by byl dotčen jakkoli druhý. Ktomu viz například Brieva a spol., J. Org. Chem. 58, 1068-1075 (1993) a rovněž související americká přihláška 092 170 z 14.07.1993 a Evropská patentová přihláška 552 041, zveřejněná 29.07.1993.

Jinak je možno nejprve zpracovat racemickou směs bázicky katalyzovanou hydrolýzou, čímž se odstraní 3-acylové skupiny a vznikne směs - racemická - odpovídajícího 3-hydroxy-p-laktamu; na tu se pak působí enzymem, schopným katalyzovat acylování hydroxylové skupiny tak, že se selektivně acyluje hydroxylová skupina jednoho enantiomerů, aniž by byl dotčen jakkoli druhý. Nebo je možno acylovat racemickou směs 3-hydroxy-[3-laktamu chirální karboxylovou kyselinou a získaná diastereoisomemí směs se pak dělí za použití postupů, které jsou jinak obecně známé, načež po odstranění pomocného chirálního činidla se získá očekávaný a potřebný enantiomer.

-21 CZ 289871 B6

Podle sdělení Ojimy a spol., J. Org. Chem. 56, 1681-1683 (1991); Tetrahedron Letters 33, 57375740 (1992) a Tetrahedron 48. 6985-7012 (1992) lze syntetizovat chirální azetidinony vzorce (lila) a/nebo odpovídající N-(p-methoxyfenyl)-obdoby, kdeže P je triisopropylsilylová skupina jako skupina chránící hydroxylovou funkci, a R⁵ znamená skupinu 4-methoxyfenylovou, 3,4-dimethoxyfenylovu, fenylovou, 4-fluorfenylovou, 4-trifluormethylfenylovou, 2-furylovou, 2-fenylethenylovou, 2-(2-furyl)ethenyIovou, 2-methylpropylovou, cyklohexylmethylovou, isopropylovou, fenethylovou, 2-cyklohexylethylovou nebo n-propylovou. Patrné části těchto údajů jsou zde připojeny. Další azetidinony spadají do rozsahu definice obecného vzorce III, ale nikoli specificky jmenované, se mohou připravovat jakýmkoli z pracovníků, obeznámených na tomto úseku s tím, že se postupy podle obecně známých způsobů.

Biologická zhodnocení

Sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou novými antitumorovými činidly; příkladné sloučeniny obecného vzorce A byly vyhodnoceny in vitro cytotoxickými testy a in vivo na tumorech zvířat.

Cytotoxické údaje „in vitro“.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu se vyznačují in vitro cytotoxicitou proti rakovinným buňkám lidského tlustého střeva HCT-116 a HCT-116/VM46. Buňky HCT.l 16/VM46 byly předem zvoleny se zřetelem na resistenci proti teniposidu a vyjadřují fenotyp, resistentní na četné léky, počítaje v to resistenci na paclitaxel. Cytotoxicita byla vyhodnocena na karcinomních buňkách lidského tlustého střeva HCT-116 za použití XXT (2,3-bis-(2-methoxy-4-nitro-5-sulfenyl)-5[(fenylamino)karbonyl]-2H-tetrazoliumhydroxid; test je zmíněn v práci D.A. Scufiero a spol.: „Evaluation of soluble tetrazolium/formazan assay for cell Growth and Drug sensitivity in culture using human and other tumor cell lineš“, viz Cancer Res., 48, 4827-4833 (1988). Buňky byly naneseny v množství 4000 buněk na jeden žlábek na mikrotitrační destičku s 96ti žlábky, po 24 hodinách následovalo přidání léku a sériové zředění. Buňky byly inkubovány při 37 °C po 72 hodin a po této době se přidá tetrazoliové barvivo XTT. Dehydrogenační enzym v živých buňkách redukuje XTT do formy, jež absorbuje světlo při 450 nm, a to lze vyhodnotit kvantitativně spektrofotometricky. Čím větší je absorbance, tím větší je počet živých buněk. Výsledky se vyjadřují jako IC₅₀, což znamená koncentraci léku, jež je nutná k inhibování proliferace buněk (tj. absorbance při 450 mM) na 50% při porovnání s neošetřenými kontrolními buňkami. Hodnoty IC₅₀ pro sloučeniny, vyhodnocené při tomto testu, jsou uvedeny v tabulce I.

Tabulka I

Údaje o cytotoxicitě „in vitro“ proti rakovinovým buňkám lidského tlustého střeva

Sloučenina	IC5o(pM)
HCT-116	HCT.l 16/VM46
Taxotere	0,004	0,213 (53)
paclitaxel	0,004	0,44 (124)
příklad 1	0,020	1,30(66)
příklad 3	0,266	6,67 (25)
příklad 4	0,044	5,36(122)

'Hodnota v závorkách je násobkem resistence proti HCT.l 16 buňkám.

Sloučenina 7-0-methylthiomethylpaclitacel (příklad la) byla rovněž testována cytotoxickým testem a zjistilo se, že má IC50 0,05 μΜ proti HCT-116 a 0,025 μΜ proti HCT.l 16/VM46.

-22CZ 289871 B6

Antitumorová účinnost in vivo

Hybridním myším Balb/c x DBA₂ Fi (CDF]) se implantuje subkutánně 0,1 ml 2%ní břečky (hmotnost dle objemu) M109 karcinomu plic, jak to popisuje W. Rose v „Evaluation of Manison 5 109 Lung Carcinoma as a Model for Screening Antitumor Drugs“, Cancer Treatment Reports, 65,

č. 3-4, str. 299-312 (1981). Testované látky a referenční léky, tedy paclitaxel, se podávají intravenosně skupinám myší.

Každá ze skupin dostane látku v lišící se dávkovači hladině, a tři až čtyři různí se dávkovači 10 hladiny byly vyhodnoceny na tu či onu sloučeninu. Myšky byly sledovány denně na přežití až do jejich uhynutí nebo asi do 75 dní po implantaci tumoru, ať již ktomu či onomu došlo dříve. Jedna skupina myší na pokus zůstala bez ošetření a byla použita jako kontrolní. Tumory byly rovněž měřeny jednou či dvakrát týdně a jejich velikost v mm byla použita ke zjištění váhy tumoru ve shodě s publikovanými postupy (ibidem).

Střední doby přežití myší léčených (T) byly porovnány se středními dobami souběžně chovaných kontrolních myší (C). Poměr obou dvou hodnot pro každou skupinu léčených myší byl vynásoben 100 a vyjádřen v % (tedy % T/C) v tabulce II za použití příkladných sloučenin. Dále jsou v tabulce II rozdíly mezi střední dobou léčených skupin a střední dobou kontrolních skupin 20 se zřetelem na vzrůst tumoru na 1 g za vyjádření hodnotou T-C ve dnech. Čím vyšší je hodnota

T-C, tím větší je prodlení primárního tumorového vzrůstu. Sloučeniny s % hodnotou T/C 125% či výše a/nebo T-C 4,0 či více dnů jsou pokládány za účinné při použití M109 SC jako modelu.

25 Tabulka II
Sloučenina		Nejvyšší účinek	Optim, dávka
	% T/C	T-C (dní)	(mg/kg, inj.)
Příklad 1	131	14,0	45a
paclitaxel	134	14	48/24a'c
Příklad 3	160	18,8	24*
paclitaxel	151	15	18b

^a Sloučenina byla podávána intravenosně jednou denně, a to 4., 5., 6., 7. a 8. dne po implantaci tumoru.

^b Sloučenina byla podávána intravenosně jednou denně, a to 5., 6., 7., 8 a 9 dne po implantaci tumoru.

^c Vyšší dávka je spojena s nejvyšším možným zvýšením životnosti, nižší dávka způsobuje 35 největší zpožďování růstu tumoru.

Sloučenina z příkladu 3 (ve formě soli s triethanolaminem) byla dále vyhodnocena na myších i lidských tumorových modelech (Ml09, A2780/cDDP - lidský karcinom vaječníků resistentní na cisplatin a HCT-116, lidský karcinom tlustého střeva) ve srovnání s paclitaxelem jako 40 pasitivní kontrola. Model A2780/cDDP popsali Rose a Basler, In Vivo 4,391-396 (1990); Model

HCT-116 popsali Rose a Basler, In Vivo 3, 249-254 (1989). M109 byl zaveden subkutánně dvakrát týdně myším Balb/C a implantován subkutánně myším CDF1 se zřetelem na antitumorové vyhodnocení. A2780/cDDP a HCT-116 rostly vathymických myších po dobu obou pasáží (vždy dva až tři týdny) a therapeutických pokusech. Sloučenina z příkladu 3 byla 45 podávána intravenosně ve vodě, nebo orálně ve vodě a několika málo kapkami Tween-u 80, zatím co paclitaxel byl buď suspendován ve vodě + Tween 80, nebo rozpuštěn ve směsi kremoforu a ethanolu (50 na 50%) a zředěn solankou.

-23CZ 289871 B6

Režim léčby pro subkutánní testy Ml09 tumoru bylo podávání jednou denně po 5 následujících dní, počítaje od čtvrtého dne po implantování tumoru. Pro xenograftové testy lidského tumoru byly testované látky podávány denně po 5 dní, počínaje chvílí, kdy se vytvořil tumor o váze mezi 50 až 100 mg.

Při jednom z pokusů Ml09 za použití sloučeniny z příkladu 3 a intravenosního podávání bylo dosaženo maximální hodnoty %T/C 155 (T-C: 19 dní) při injikování 36 mg/kg (pro srovnání paclitaxel max. %T/C 132 (T-C 13 dní) při dávce 36 nebo 18 mg/kg, injekčně). Při témže pokusu a orálním podávání látky z příkladu 3 bylo dosaženo maxima %T/C 158 (T-C 22,8 dní) v dávce 160 mg/kg, zatím co v případu paclitaxelu v téže dávce (nejvyšší testovaná) za suspendování ve vodě (+ Tween 80) se neprojevila vůbec účinnost. Při jiném pokusu sM109 se dosáhlo intravenosním podáváním sloučeniny z příkladu 3 maxima %T/C 170 (T-C 17 dní) při dávce 48 mg/kg injekčně. Pro srovnání u paclitaxelu max. %T/C 167, T-C 14 dní, dávka 48 nebo 36 mg/kg, injekčně.

Při témže pokusu způsobila orálně podávaná látka z příkladu 3 nejvýše %T/C 172 (T-C, 17 dní) v dávce 200 mg/kg, zatím co v případě paclitaxelu, rozpuštěného v kremoforu/ethanolu/solance nebyla pozorována vůbec účinnost při injikování dávky 60/mg/kg. Při takovém pokusu nemohl být podáván paclitaxel po rozpuštění v kremoforu/ethanolu/solance v dávce nad 60mg/kg, injekčně, to se zřetelem na rozpustnost a nutná omezení se zřetelem na toxicitu.

Při pokusu s A2780/cDDP u intravenosně podávaných látek z příkladu 3 se projevila nejvyšší hodnota T-C za 29,8 dní v dávce 36 mg/kg, injekčně (pro srovnání paclitaxel nejvýše T-C za 26,3 dní v dávce 36/mg/kg, injekčně). Orálně podávaná látka z příkladu 3 vyvolá nejvýše hodnotu T-C za 20 dní v dávce 160 mg/kg. Při pokusu HCT-116, intravenosní léčba s použitím 24 nebo 36 mg/kg, injekčně, paclitaxelu 6 vyléčení ze sedmi, nebo 6 vyléčení z osmi ošetřovaných myší v tom kterém případě, a 160 nebo 240 mg/kg orálně podávané látky z příkladu 3 způsobilo ozdravění 6 nebo 7 z 8 léčených myší. Vyléčením se míní nepřítomnost tumoru za 80 dní po implantaci tumoru.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou fosfonooxymethyletheiy derivátů taxanu. V případě farmaceuticky způsobilé soli se projeví zvýšená rozpustnost ve vodě ve srovnání s vlastním paclitaxelem, což umožňuje vhodnější přípravu farmaceutických přípravků. Aniž bychom se jakkoli vázali na teorii má se za to, že fosfonooxymethylethery podle tohoto vynálezu jsou vhodnými formami paclitaxelu nebo odpovídajících derivátů, to proto, že fosfonooxymethylová část se odštěpí ve styku s fosfatasou in vivo a generuje se potom matečná sloučenina. Jak je to uvedeno již výše, jsou sloučeniny podle tohoto vynálezu účinnými činidly při inhibování růstu tumorů. Takže další rys tohoto vynálezu se týká způsobu inhibování tumorů savců, který záleží v podávání tumorem napadenému antitumorově účinné množství sloučeniny obecného vzorce A.

Sloučeniny vzorce A podle tohoto vynálezu se mohou použít podobným způsobem, jako tomu je v případě paclitaxelu; takže onkolog, obeznámený s léčbou rakoviny, bude schopný určit, a to bez zbytečného experimentování, vhodný protokol pro podávání sloučenin podle vynálezu. Dávkování, způsob a rozpis podávání sloučenin podle tohoto vynálezu nejsou zde jakkoli omezeny a budou se obměňovat stou či onou použitou sloučeninou. Takže sloučenina podle tohoto vynálezu se může podávat jakýmkoli vhodným způsobem, s výhodou parenterálně. Dávkování se může pohybovat například v rozsahu od asi 1 do asi 100 mg/kg tělesné hmotnosti, nebo od asi 20 do asi 500 mg/m². Sloučeniny obecného vzorce A se mohou rovněž podávat orálně, a orální dávkování může kolísat v rozmezí od asi 5 do asi 500 mg/kg tělesné hmotnosti. Skutečné dávkování bude kolísat v závislosti na tom či onom přípravku, způsobu podávání, jakož i místu, hostitele a typu tumoru, který se má léčit. Četné faktory, které modifikují působení léku, je třeba vzít v úvahu při určování dávky, počítaje v tom věku, hmotnost, pohlaví, dietu a fyzické podmínky pacienta.

-24CZ 289871 B6

Předmětem tohoto vynálezu jsou rovněž farmaceutické přípravky, obsahující antitumorově účinné množství sloučeniny obecného vzorce A v kombinaci s jedním či více farmaceuticky vhodných nosičů, excipientií, ředidel nebo adjuvantií. Příklady úpravy paclitaxelu nebo jeho derivátů lze nalézt například v Amerických patentových spisech 4 960 790 a 4 814 470. Takže například sloučeniny podle tohoto vynálezu se mohou upravovat do formy tabletek, pilulek, práškovaných směsí, kapslí, injekčních roztoků, roztoků vůbec, čípků, emulsí, dispersí, potravinových směsí a do dalších podobných forem. Mohou se rovněž upravovat do formy sterilních pevných přípravků, například i lyofilizovat a - je-li to třeba - mohou se kombinovat s dalšími farmaceuticky přijatelnými excipientií. Takové pevné přípravky lze rekonstituovat přidáním sterilní vody, fyziologického roztoku chloridu sodného nebo směsí vody a organického rozpouštědla, jako je propylenglykol, ethanol a podobné látky nebo jakékoli jiné sterilní a injikovatelné prostředí, použitelné bezprostředně před parenterálním podáváním.

Jako typické příklady farmaceuticky přijatelných nosičů lze uvést například mannitol, močovinu, dextrany, laktosu, škrob bramborový a kukuřičný, hořečnatou sůl kyseliny stearové, talek, rostlinné oleje, polyalkylenglykoly, ethylcelulosu, poly(vinyl)pyrrolidon, uhličitan vápenatý, ethylester kyseliny olejové, isopropylester kyseliny myriatové, benzylester kyseliny benzoové, uhličitan sodný, želatinu, uhličitan draselný, kyselinu křemičitou. Farmaceutické přípravky mohou rovněž obsahovat netoxické pomocné látky, jako jsou emulsifikátory, konzervační činidla, smáčedla a podobné látky, například tedy monolauiylester sorbitanu, triethanolamin. oleját, polyoxyethylen-monostearát, glyceryl-tripalmitát, sodná sůl dioktylesteru kyseliny sulfojantarové apod.

V dalších postupech příkladů jsou všechny teploty uváděny ve stupních C. Hodnoty nukleárně magnetické resonance (NMR) se vztahují k chemickým posunům (δ) za vyjádření v částech na milion (ppm) proti tetramethylsilanu (TMS) jako referenčnímu standartu. Relativní prostor pro různé posuny v hodnotách protonové NMR odpovídá počtu vodíkových atomů toho či onoho funkčního typu molekuly. Povaha posunů jako násobek je uváděna jako široký singlet (bs), široký dublet (bd), široký triplet (bt), široký kvartet (bq), singlet (s), multiplet (m), dublet (d), kvartet (q), triplet (t), doublet dubletů (dd), dublet tripletů (dt) a dublet kvartetů (dq). Jako rozpouštědla, použitelná pro NMR-spektra lze uvést aceton D₆ (deuterovaný aceton), DMSO-dé (perdeuterodimethylsulfoxid), D₂O (deuterovaná voda), CDC1₃ (deuterovaný chloroform) a další běžná deuterovaná rozpouštědla. Spektrální hodnoty infračervených spekter obsahující pouze údaje v cm’¹, pokud mají funkční identifikační smysl.

Celit je chráněné označení infisoriové hlinky, produkt Johns-Manville Products Corporation.

Zde používané zkratky jsou běžné zkratky, jak se používají v chemii, zvláště v tomto oboru. Některé z nich:

MS	hmotnostní spektrometrie
HRMS	vysoce rozlišovací hmotnostní
ac	acetyl
c6h5	fenyl
FAB	rychlé atomové bombardování
ΝΟΒΑ	m-nitrobenzylalkohol,
Min	minuta
NIS	N-jodimid kyseliny jantarové
BOC	terc.-butoxykarbonyl
CBZ	benzyloxykarbonyl
Bh	benzyl
Bz	benzoyl
TES	triethylsilyl
DMSO	dimethylsulfoxid
THF	tetrahydrofuran

-25CZ 289871 B6

HMDS hexamethyldisilazen

Příprava výchozích složek

Příprava některých a specifických výchozích složek, použitelných při přípravě sloučenin vzorce Aje připojena formou příkladů dále.

Příprava 1

10-Desacetoxypaclitaxel

(a) 2',7-O-Bis-(2,2,2-trichlorethoxykarbonyl)-lO-desacetylpaclitaxel

K roztoku 140 mg (0,173 mmol) 10-desacetylpaclitaxelu v 3,5 ml dichlormethanu se přidá za teploty 0 °C 0,028 ml (0,346 mmol) pyridinu a 0,0724 ml (0,260 mmol) trichlorethylesteru kyseliny chloromravenčí, reakční směs se ponechá za uvedené teploty stát hodinu, chladicí lázeň se odstraní a za teploty místnosti se reakční směs míchá po dobu noci. Rozpouštědlo se oddestiluje a zbytek se chromatografuje na silikagelu za eluování 30 až 50 % ethylesteru kyseliny octové v hexanu. Jako pěna ve výtěžku 92,3 mg (46%) se získá takto sloučenina, uvedená v nadpise, dalším eluováním se izoluje 38 mg (25%) nezreagované výchozí látky a 16% 2', 10-0-bis-(2,2,2-trichlorethoxykarbonyl)-10-desacetylpaclitaxelu.

(b) 2',7-O-Bis-(2,2,2-trichlorethoxykarbonyl}-l 0-desacetoxy-l 1,12-dihydropaclitaxel10,12(18)-dien

92,3 mg (0,79 mmol) produktu ze stupně (a) se rozpustí v 2 ml dichlormethanu, a do roztoku se přidává za teploty místnosti 0,0384 ml (0,238 mmol) l,l,2-trifluor-2-chlortriethylaminu; získaný roztok se míchá pod dobu noci, rozpouštědlo se potom oddestiluje, a zbytek se čistí kolonovou chromatografií (25% ethylesteru kyseliny octové v hexanu), čímž se získá ve výtěžku 42,8 mg (47,3%) sloučenina, jejíž složení je uvedeno v nadpise, a to ve formě bílého prášku.

(c) 10-Desacetoxy-l 1,12-dihydropaclitacel-l 0,12( 18)-dien mg (0,034 mmol) produktu ze stupně (b) se rozpustí v 0,5 ml methanolu a 0,5 ml kyseliny octové a vnáší se do roztoku 66,4 mg (1,020 mmol) kyselinou omytého zinkového prášku. Suspense se míchá hodinu za teploty 40 °C, filtruje se a filtrát se zahustí. Chromatografováním zbytku za použití 60% ethylesteru kyseliny octové v hexanu se získá sloučenina, jak je uvedena v nadpise, to ve formě pěny a ve výtěžku 22 mg (81%).

-26CZ 289871 B6 (d) Roztok 22 mg (0,028 mmol) produktu ze stupně (c) v 0,7 ml ethylesteru kyseliny octové se hydrogenuje za normálního tlaku za přítomnosti palladia na uhlí, 10%ního, 14,7 mg, tj. 0,014 mmol Pd). Po 5,5 hodinách za teploty místnosti a filtraci (s propláchnutím katalyzátoru ethylesterem kyseliny octové), oddestilování rozpouštědla se zbytek chromatografuje s použitím 60% ethylesteru kyseliny octové v hexanu. Získá se tak 15,0 mg (68%) produktu, jak je uveden v nadpise, a to ve formě bílé pěny.

Příprava 2

7-Desoxy-7-a-fluorpaclitaxel

(a) 2'-Benzyloxykarbonyl-7-desoxy-7-a-fluorpaclitaxel

V 0,5 ml suchého dichlormethanu se rozpustí 18,7 μΐ (0,141 mmol) diethylaminothiotrifluoridu (DAST), roztok se ochladí a 0 °C, přidá se roztok 71 mg (0,072 mmol) 2'-O-(benzyloxykarbonyl)paclitaxelu v 1 ml dichlormethanu a takto připravený roztok se uchovává 30 minut za teploty 0 °C a potom 4 hodiny za teploty místnosti. Reakce se přeruší přidáním 0,15 vody do reakční směsi a zahuštěním se izoluje zbytek, který se chromatografuje na koloně silikagelu (s eluováním 40% ethylesteru kyseliny octové v hexanu. Získá se tak 61 mg (85,7%) směsi 1:1 sloučeniny jak je uvedena v nadpise a 2'-O-benzyloxykarbonyl-8-desmethyl-7,8-cyklopropapaclitaxelu.

(b) 7-Desoxy-7-a-fluorpaclitaxel g produktu (tedy směsi) ze stupně (a) se rozpustí v 3 ml ethylesteru kyseliny octové a reakční směs se míchá za mírně vyššího tlaku než je tlak normální pod vodíkem za přítomnosti palladia na uhlí (10% Pd, 29 mg, 0,027 mmol). Po 12ti hodinách a filtraci se rozpouštědlo oddestiluje a zbytek se čistí chromatografováním na silikagelu s eluováním 40% ethylesteru kyseliny octové v hexanu. Získá se tak 67,7 mg sloučeniny, jak je uvedena v nadpise spolu s 8-desmethyl-7,8cyklopropapaclitaxelem.

Dále uvedený postup vysokotlakové kapalinové chromatografie byl použit k oddělení 7-desoxy7a-fluorpaclitaxelu od 8-desmethyl-7,8-cyklopropapyclitaxelu:

-27CZ 289871 B6

Zařízení:

Čerpadlo:	PE, série 4
Kolona:	„Shandon Hypercard“ (grafitované uhlí), 7 μ, 100 x 4,6 mm, Φ 59864750 (viz Keystone Scientific Bellefonte, PA).
Injektor:	PEISS-100
Detektor:	HP-1040 M

Podmínky:

Mobilní fáze: směs methylenchloridu a hexanu 85:15. Dělení je možné i použitím směsi methylenchlorid: hexan: isopropylalkohol 80 : 19 :1

Průtoková rychlost: 2,5 ml/min

Detektor 254 nm

Ředění vzorek se rozpustí v methylenchloridu

Příprava 3

7-Deso 7-a-fluorbaccatin III

V dokonale vysušené baňce se v prostředí inertního plynu smíchají 4 g (4 mmol) 2'-O-benzyloxykarbonyl)-paclitaxelu a 80 ml suchého toluenu, vzniklá suspenze se míchá za pokojové místnosti za postupného přidávání 16 ml suchého tetrahydrofuranu po kapkách až do chvíle kdy vznikne čirý bezbarvý roztok, který se ochladí v lázni z pevného oxidu uhličitého a acetonu na -76 °C, načež se přidá 1,2 ml (2,5 ekv.) diethylaminothiotrifluoridu (DAST). Reakční směs se dále míchá 16 hodin, teplota se nechá postupně vystoupit až na teplotu místnosti, suspense se filtruje, filtrát se zředí přidáním 30 ml ethylacetátu, roztok se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou; organická frakce se vysuší bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se zahuštěním filtrátu získá jako zbytek surový produkt ve formě bílé pěny. Tento surový produkt se částečně vyčistí chromatografováním na koloně silikagelu; eluováním methylenchloridem s 10% aetonitrilu se takto získá 1,45 g směsi 2'-O-(benzyloxykarbonyl)-7-deoxy-7a-fluorpaclitaxelu a 2'-O-(benzyloxykarbonyl)-8-desmethyl-7,8-cyklopropapaclitaxelu (podle měření 'Η-NMR je to směs v poměru 82 : 18 uvedených složek).

Z výše uvedené směsi se 1,45 g rozpustí v 60 ml ethylacetátu, přidá se 300 mg palladia na uhlí, a hydrogenuje se 4 hodiny za tlaku 34.460 Pa vodíku. Potom se reakční směs filtruje malou vrstvou silikagelu, zahustí se a tak se získá očekávaná směs 1,24 g (99%) 7-deoxy-7a-fluorpaclitaxelu a 8-desmethyl-7,8-cyklopropapaclitaxelu ve formě bílé pěny, dle *N-NMR v poměru 90 : 10 té které látky. Tato směs se rozpustí v 30 ml suchého methylenchloridu, přidá

-28CZ 289871 B6 se 745 mg (2,9 mmol) tetrabutylamoniumborohydridu a vše se míchá 6 hodin. Reakce se přeruší přidáním 1 ml kyseliny octové a po zředění reakční směsi přidáním 30 ml methylenchloridu se získaný roztok promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Organická frakce se vysuší bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se filtrát zahustí. Surová směs substituovaného taxanového základu se částečně vyčistí chromatografováním na koloně silikagelu za eluování methylenchloridem s obsahem 10% acetonitrilu; získá se tak směs 90 : 10 (podle H-NMR) 7-deoxy-7-a-fluorbaccatinu ΠΙ a 8-desmethyl-7,8-cyklopropabaccatinu III ve výtěžku 510 mg, 60% jako bílá pěna. Krystalizací tohoto produktu z horkého isopropylalkoholu se získá 410 mg 7-deoxy-7a-fluorbaccatinu III ve formě drobných bílých jehliček, b.t. 234 až 236 °C (za rozkl).

Příprava 4

10-Desacetoxy-7-deoxy-7a-fluorpaclitaxel

(a) 2'-0-Benzyloxykarbonyl-l 0-dexacetoxypaclitaxel

K roztoku 27 mg (0,034 mmol) 10-desacetoxypaclitaxelu v 1 ml dichlormethanu se přidá 0,0146 ml (0,102 mmol) benzylesteru kyseliny chloromravenčí a potom 0,0177 ml (0,102 mmol) diisopropylethylaminu. Reakční směs se míchá 45 minut za chlazení na 0 °C, dále 12 hodin za teploty místnosti. Oddestilováním rozpouštědla a chromatografováním na silikagelu (za eluování 40% ethylacetátu v hexanu) se získá 25,5 mg (81%) látky, jejíž složení je uvedeno v nadpise, to ve formě bílé pěny.

(b) 10-Desacetoxy-7-deoxy-7a-fluorpaclitaxel

V 0,8 ml dichlormethanu se rozpustí 25,5 mg (0,028 mol) produktu ze stupně (a) a za chlazení na 0 °C se přidá 0,0071 ml (0,055 mmol) DAST. Reakční směs se ponechá 45 minut při 0 °C, potom dále 5 hodin za teploty místnosti, načež se zahuštěním a chromatografováním získá 2'-O-benzyloxykarbonyl-7-deoxy-7a-fluorpaclitaxel jako surová pěna. Tato látka se rozpustí v 1 ml ethylacetátu, a za tlaku mírně nad normálním vodíku se hydrogenuje reakční směs za přítomnosti 8,9 mg 10% palladia na uhlí 12 hodin za teploty místnosti. Katalyzátor se potom odfiltruje a chromatografováním produktu na silikagelu se získá 10 mg (40%, počítáno na oba stupně) sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, to ve formě pěny.

-29CZ 289871 B6

Příprava 5

10-Deacetyl-7-deoxy-7a-fluorpaclitaxel

Roztok 120 mg (0,103 mmol) 2'-10-0-bis-(2,2,2-trichlorethoxykarbonyl)-10-deacetylpaclitaxelu v 2 ml dichlormethanu se ochladí na 0 °C a přidá se 0,0266 ml (0,207 mmol) DAST. Roztok se potom míchá za teploty 0 °C po 30 minut a dále 4 hodiny za teploty místnosti. Reakce se potom přeruší přidáním 0,05 ml vody, reakční směs se zahustí a zbytek se chromatografuje na silikagelu za eluování 30%ním podílem ethylacetátu v hexanu. Získá se tím 81 mg (68%) 2',10-O-bis-(2,2,2-trichlorethoxykarbonyl)-7-deoxy-7a-fluorpaclitaxelu ve formě bílé pěny. 63 mg (0,054 mmol) této látky se rozpustí v 0,5 ml methanolu, přidají se 0,5 ml kyseliny octové a během 90 minut se za teploty 45 °C vnáší 105 mg (1,62 mmol) práškovaného zinku. Potom se reakční směs filtruje, filtrát se zahustí, a chromatografováním zbytku na silikagelu za eluování směsí 40% hexanu a 60% ethylacetátu se získá 38 mg (86%) sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě bílé pevné látky.

Příprava 6

7-Deoxybaccatin III

-30CZ 289871 B6 (a) 7-O-[(Methylthio)-thiokarbonyl]-baccatin III

V 20 ml suchého tetrahydrofuranu se rozpustí 750 mg (1,278 mmol) baccatinu ΠΙ a najednou se přidá 8,7 mg (0,128 mmol) imidazolu. Za teploty místnosti se potom přidává 77 mg, 1,597 mmol) hydridu sodíku (50% v minerálním oleji, a jakmile ustane vývoj plynu - asi za 10 minut - přidá se najednou 4,6 ml sirouhlíku. Po 3 hodinách uchovávání za teploty místnosti se přidá ke žlutému roztoku 0,238 ml (3,835 mmol) methyljodidu, reakční směs se míchá přes noc a rozpuštěním v ethylacetátu (s vytřepáním vodou) se získá po zahuštění sloučenina, jak je uvedena v nadpise, jako surový olej.

Obměněný způsob

Ve směsi 5 ml tetrahydrofuranu a 1 ml sirouhlíku se rozpustí 394 mg (0,672 mmol) baccatinu III, přidá se 40,3 mg hydridu sodíku (60%, 1,009 mmol) a katalytické množství imidazolu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti po dobu 1,5 hodin, přidá se 122,8 μΐ (2,016 mmol) methyljodidu a za 40 minut se rozpouštědlo oddestiluje ve vakuu. Zbytek se chromatografuje na silikagelu za eluování gradientu 20% - 50% - 60% ethylacetátu v hexanu. Získá se tím 260 mg (57,2% sloučeniny, jak je uvedena v nadpise spolu s 98,5 mg, (25%) 7-epibaccatinu.

(b) 7-0-[(Methylthio)thiokarbonyl]-13-0-triethylsilylbaccatin III

Produkt ze stupně (a) se ještě ve formě surové oleje rozpustí v 5 ml suchého dimethylformamidu, přidá se 870 mg imidazolu (12,78 mmol) a 2,10 ml (12,78 mmol) triethylsilylchloridu a reakční směs se ponechá 15 hodin za teploty místnosti. Po přidání vody následuje extrakce do ethylacetátu, organický podíl se důkladně protřepává s vodou, a po vysušení se prudkou chromatografií na silikagelu (eluování hexanem s obsahem 20% ethylacetátu) získá sloučenina, jejíž složení je uvedeno v nadpise, jako sklovitá pevná látka ve výtěžku 209 mg (20% v obou dvou stupních).

Obměněný způsob:

V 2,86 ml suchého dimethylformamidu se rozpustí 193,4 mg (0,286 mmol) produktu ze stupně (a), do roztoku se přidá 77,9 mg (1,14 mmol imidazolu, dále 192 μΐ (1,14 mmol) triethylsilylchloridu a reakční směs se míchá po dobu noci za teploty místnosti. Po 12-ti hodinách se reakční směs zředí přidáním 180 ml ethylacetátu, organická vrstva se promyje třikrát vodou (vždy 10 ml), potom třikrát solankou (vždy á 10 ml), vysuší se a zahustí ve vakuu. Chromatografováním zbytku na silikagelu za eluování hexanem s obsahem 20% ethylacetátu se získá sloučenina, jak je uvedena v nadpise, ve výtěžku 163 mg (72,0%).

(c) 7-Deoxy-13-0-triethylsilylbaccatin III

Roztok 182 mg (0,120 mmol) produktu ze stupně (b) v 5 ml suchého benzenu se vyhřeje na 80 °C za přítomnosti 0,310 ml (1,150 mmol) tributylstannihydridu a 10 mg 2,2'-azabisisobutyronitrilu (AIBN). Po třech hodinách se roztok nechá vychladnout a rozpouštědlo se oddestiluje ve vakuu. Zbytek se chromatografuje na silikagelu za použití hexanu s obsahem 20% ethylacetátu k eluování, a získá se tím v olejové formě sloučeniny, jak je uvedena v nadpise.

(d) 7-Deoxybaccatin ΠΙ

Produkt ze stupně (c) se rozpustí v 5 ml tetrahydrofuranu, přidá se 0,50 ml (0,50 mmol) 1 M roztoku tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu, a reakční směs se nechá reagovat 2 hodiny za teploty místnosti. Roztok se dále zředí ethylacetátem a po promytí tohoto roztoku vodou a solankou se následující chromatografií na silikagelu za eluování směsí ethylacetátu a hexanu (1:1) izoluje sloučenina, jejíž složení je uvedeno v nadpise, jako pevná, bílá sklovitá látka ve výtěžku 63 mg (58% v obou stupních.).

-31 CZ 289871 B6

Příprava Ί

10-Desacetoxybaccatin ΙΠ

(a) 1O-Desacetyl-1 0-O-(pentafluorfenoxy)-thiokarbonyl-7-O-triethylsilylbaccatin III

V 5 ml suchého tetrahydrofuranu se rozpustí 319 mg (0,485 mmol) 7—O—triethylsilyl—10— desacetylbaccatinu III, k tomu viz Greene a spol., J. Amer. Chem. Soc. 110, 5917 (1988), roztok se ochladí na -40 °C a vnese se 0,384 ml (0,606 ml) 1,58 M roztoku n-butyllithia v hexanu. Po 40 minutách uchovávání za zmíněné teploty se vnese injekční stříkačkou 0,086 ml (0,536 mmol) pentafluorfenylesteru kyseliny chlorthionomravenčí, reakční směs se míchá 90 minut za chlazení na -20 °C, rozruší se přidáním nasyceného vodného roztoku chloridu amonného a extrahuje do ethylesteru kyseliny octové. Získaný organický roztok se vysuší a zahustí, zbytek se potom čistí chromatografováním na sloupci silikagelu za eluování 40% ethylacetátu v hexanu. Získá se tím sloučenina, uvedená v nadpise, ve formě pěny a ve výtěžku 32 mg (74%).

(b) 10-Desacetoxy-7-O-triethylsilylbaccatin ΠΙ

V 3 ml suchého toluenu se rozpustí 119 mg (0,135 mmol) produktu ze stupně (a), přidá se AIBN (2 mg), z roztoku se suchým dusíkem vypudí vzduch a následuje přidání 0,055 ml (0,202 mmol) tributylstannihydridu. Potom se roztok zahřívá hodinu na 90 °C, rozpouštědlo se vydestiluje a chromatografováním zbytku na silikagelu za eluování 40%ním roztokem ethylacetátu v hexanu se získá sloučenina, uvedená v nadpise, ve výtěžku 87 mg (99%) jako bezbarvá pěnovitá hmota.

(c) 10-Desacetoxybaccatin III

V 3,5 ml acetonitrilu se rozpustí 120 mg (0,187 mmol) produktu ze stupně (b), roztok se podchladí na -10 °C, a po přidání 0,060 ml koncentrované (36%) kyseliny chlorovodíkové se roztok míchá 30 minut. Dále se roztok zředí přidáním 75 ml ethylacetátu, promyje se nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, dále solankou, vysuší se a zahustí. Zbytek se čistí prudkou chromatografií na silikagelu za eluování 70% ethylacetátu v hexanu a získá se tak 75 mg (76%) 10-desacetylbaccatinu III ve formě pěny.

-32CZ 289871 B6

Příprava 8

10-Desacetoxy-7-deoxybaccatin III

(a) 7-O-[(Methylthio)thiokarbonyl]-10-deacetoxybaccatin III

Ve směsi 2 ml suchého tetrahydrofuranu a 0,5 ml sirouhlíku se rozpustí 75 mg (0,142 mmol) 10-desacetoxybaccatinu III, přidá se 8,5 mg (0,213 mmol) 60%ní suspense hydridu sodíku v minerálním oleji a reakční směs se míchá 2 hodiny za teploty místnosti. Dále se přidá 0,026 mol (0,426 mmol) methyljodidu a nechá se reakce probíhat po dobu jedné noci, rozpouštědlo se potom oddestiluje a zbytek se čistí chromatografováním na silikagelu za eluování směsí hexanu a ethylacetátu s obsahem 50 až 70 % posléze uvedeného esteru. Ve formě pěny se získá takto 46,4 mg (53%) sloučeniny, jak je uveden v nadpise.

(b) 10-Desacetoxy-7-deoxybaccatin III mg (0,058 mmol) produktu ze stupně (a) se zahřívá v prostředí 1 ml benzenu kvaru za přítomnosti 2 mg AIBN a 0,079 ml (0,290 mmol) tributylstannhydridu 3 hodiny pod argonem. Zahuštěním reakční směsi s následující prudkou chromatografíi zbytku na silikagelu (40% ethylacetátu v hexanu) s následující vysokotlakovou kapalinovou chromatografíi se oddělí od dalších složek 16,8 mg (56%) látky, jak je uvedena v nadpise, to ve formě pěny.

Obměněný způsob:

Do roztoku 416,3 mg (0,527 mmol) 7-O-[(methylthio)karbonothioyl]-13-O-triethylslylbaccatinu III (produktu z přípravy I, stupeň b) v 10,5 ml suchého toluenu se přidá katalytické množství AIBN, z takto připraveného roztoku se suchým dusíkem 5 minut vypuzuje vzduch, dále pak se přidá 708,7 μΐ (2,63 mmol) tributylstannihydridu a reakční směs se zahřívá 2 hodiny na 100 °C a potom se přidá další podíl 425 μΐ (1,581 mmol) tributylstannihydridu. Reakční směs se zahřívá 5,5 hodin na 100 °C, ochladí se na teplotu místnosti a další sloupcovou chromatografíi na silikagelu za eluování hexanem s obsahem 20 % ethylacetátu se získá 320 mg (97%) 7-deoxy10-desacetoxy-l3-O-(triethylsilyl)baccatinu III:

Do roztoku 160 mg (0,255 mmol) produktu z výše uvedeného stupně v 2 ml suchého tetrahydrofuranu se přidává za teploty místnosti 766 μΐ (0,766 mmol) tetrabutylamoniumfluoridu, reakční směs se míchá hodinu za teploty místnosti, rozpouštědlo se vydestiluje a zbytek se chromatografuje na silikagelu za eluování gradientem 50 až 70 % ethylacetátu v hexanu. Získá se tím očekávaná sloučenina, jejíž složení je uvedeno v nadpise, ve výtěžku 115 mg (87,9%).

-33CZ 289871 B6

Příprava 9 (3R, 4S)-l-terc.-ButoxykarbonyI-4-fenyl-3-triethylsilyloxy-2-azetidinon

O-terc.-Bu

Do míchaného roztoku 2,200 g (7,92 mmol) (35,4S)-4-fenyl-3-triethylsilyloxy-2-azetidinonu v 25 ml suchého tetrahydrofuranu se vnese za chlazení na 0 °C a pod argonem 1,65 ml (9,510 mmol, 1,2 ekv) Ν,Ν-diisopropylethylaminu, roztok se míchá 5 minut, přidá se 2,080 g (9,510 mmol, 1,2 ekv) di-terc.-butylesteru kyseliny uhličité, dále 193,6 mg (1,581 mmol, 0,20 ekv.) 4-dimethylaminopyridinu a reakční směs se míchá 60 minut za chlazení na 0 °C. Po zředění přidáním 25 ml ethylacetátu se vzniklý organický roztok promyje solankou, 10%ním roztokem hydrogenuhličitanu sodného, 10%ním roztokem chlorovodíku, a po vysušení bezvodým síranem hořečnatým a filtraci se filtrát zahustí za vzniku surového olejovitého produktu. Ten se čistí prudkou chromatografií na silikagelu za eluování 15% ethylacetátu v hexanu, a jako pevná bílá látka se získají 2,4 g (83%) sloučeniny, jejíž složení je uvedeno v nadpise.

Příprava 10 (±)-cis-3-acetoxy-4-fenylazetidin-2-on

(a) Do litrové, tříhrdlé kulaté baňky s teploměrem, magnetickou míchačkou a kapací nálevkou se vnese 30,00 g (100,5 mmol) hydrobenzamidu a 150 ml ethylacetátu, potom se za míchání a pod argonem ochladí reakční směs na 5 °C, přidá se 16,0 ml (121 mmol) triethylaminu a dále se během 1,5 hodiny přikapává roztok 12,4 ml (116 mmol) acetoxyacetylchloridu v 300 ml ethylacetátu. Za uvedené teploty se reakční směs ponechá 16 hodin, teplota se nechá vystoupit během 1,5 hodiny na 20 °C, reakční směs se přelije do děličky, oddělená organická vrstva se promývá postupně nasyceným vodným roztokem chloridu amonného (150 a 100 ml), nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (120 mi) a solankou (120 ml). Pro charakterisační účely je možno izolovat sloučeninu, jak je uvedena v nadpise, v tom stupni tak, že se organický roztok vysuší bezvodým síranem hořečnatým, a po filtraci se filtrát zahustí ve vakuu. Získá se tím prakticky v kvantitativním výtěžku ve formě červené sklovité hmoty (±)-cis-3-acetoxy-l[(fenyl)(benzylidenimino)-methyl]-4-fenylazetidin-2-on.

-34CZ 289871 B6 (b) Roztok sloučeniny, jak byla získána v části (a) v 500 ml ethylacetátu se opatrně přepraví pod argonem do dvoulitrové Parr-ovy nádoby, obsahující 6,00 g 10%ního palladia na uhlí. Hydrogenuje se 20 hodin vodíkem za tlaku 0,4 MPa, katalyzátor se potom odstraní filtrací vrstvičkou celitu. Podíl na filtru se rozmíchá do 200 ml ethylacetátu a po míchání 10 minut a filtraci se podíl na filtru znovu rozmíchá do 100 ml ethylacetátu, a po filtraci se filtráty spojí. Tato organická vrstva se promyje použitím 300 ml 10%ního chlorovodíku a obě vrstvy se filtrují skleněnou nučí ze slinutého skla, aby se tak odstranila bílá sraženina hydrochloridu dibenzylaminu. Ta se promyje použitím 100 ml ethylacetátu, organické podíly se spojí a promyjí dalším podílem 200 ml 10%ního chlorovodíku. Spojené kyselé výtřepky (v 10%ním chlorovodíku) se opět extrahují do ethylacetátu (200 ml) a všechny spojené organické roztoky se promyjí nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (300 ml) a solankou (250 ml). Organický roztok se dále vysuší bezvodým síranem hořečnatým, a po filtraci se zahuštěním ve vakuu na konečný objem 75 ml ochladí tento koncentrát na 4 °C, produkt, který se tím vysráží, se odfiltruje. Podíl na filtru se promyje hexanem (200 ml), a tak se získá ve formě bílých jehliček 16,12 g sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, celkový výtěžek 78,1% je propočten na hydrobenzamid.

Příprava 11 (±)-cis-3-Triethylsilyloxy-4-(2-furyl)-N-terc.-butoxykarbonylazetidin-2-on

TES O

(a) Opakuje se postup, popsaný v přípravě 10, část (a) stou výhradou, že se použije místo hydrobenzamidu hydrofuramid, tedy 2-furyl-CH-(N=CH-2-fuiyl)2 a reakce se provede v měřítku 18,6 mol (proti původním 100 mmol). Takže z 5,00 g (18,6 mmol) hydrofuramidu, 3,11 ml (22,3 mmol) triethylaminu a 2,30 ml (21,4 mmol) acetoxyacetylchloridu se získá 6,192 g (90,4%) (±)-cis-3-acetoxy-1 -[(2-fury l)-(2-fuiy lmethylan imino)methy l]^4-(2-fury l)azetidin2-onu ve formě bledě červeného sirupu.

(b) Opakuje se postup, popsaný v přípravě 10, část (b) stou změnou, že se produkt izoluje preparativní chromatografií na tenké vrstvě a reakce se provádí v měřítku 2,7 mmol, přepočteno na původní množství hydrofuramidu. Takže surový produkt, jak byl získán ve stupni (a), se opět rozpustí v 50 ml ethylacetátu a přidá se 150 mg 10%ního palladia na uhlí. Čistěním surové pevné látky preparativní chromatografií na tenké vrstvě (síla silikagelu 2mm, eluování směsí ethylacetátu a hexanu 1:1) se získá 386 mg (65,8%, přepočteno na celkový výtěžek z hydrofuramidu) ve formě žluté pevné látky (±)-cis-3-(acetoxy)-4-(2-furyl)azetidin-2-on. Krystalizací ze směsi ethylacetátu a hexanu se získá látka o b.t. 118 až 119 °C.

(c) Sloučenina, jak byla získána v části (b) zde výše (3,78 g, 19,4 mmol) se míchá v prostředí 60 ml methanolu 90 minut po přidání 20 mg (0,14 mmol) uhličitanu draselného, roztok se potom neutralizuje Dowex-em 50W-83 a filtruje. Filtrát se zahustí, zbytek se rozpustí v 80 ml bezvodého tetrahydrofuranu a míchá se za chlazení na 0°C s 1,44 g (21,2 mmol) imidazolu a 3,4 ml (20,2 mmol) TESC1 30 minut. Potom se roztok zředí přidáním ethylacetátu, získaný roztok se promyje solankou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se zahustí. Zbytek se chromatografuje na silikagelu (s eluováním směsí hexanu a ethylacetátu 3:1) a získá se

-35CZ 289871 B6 tak 4,47 g (86%) (±)-cis-3-triethylsilyloxy-4-(2-fury)-azetidin-2-onu ve formě bezbarvého oleje.

(d) Produkt ze stupně (c) (2,05 g, Ί,Ί mmol) se v prostředí 30 ml dichlormethanu míchá za chlazení na 0 °C s 1,5 ml (8,6 mmol) diisopropylaminu s 2,0 g (9,2 mmol) di-terc.-butylesteru kyseliny uhličité spolu s katalytickým množstvím dimethylaminopyridinu (DMAP). Roztok se zředí dichlormethanem a promyje se potom solankou, po vysušení bezvodým síranem hořečnatým se filtrát zahustí. Zbytek se chromatografuje na silikagelu (za eluování směsi hexanu ethylacetátu (8:1), takže se získá 2,0 g (70%) sloučeniny, jak je uvedena v názvu jako voskovitá pevná látka.

Racemická směs, jak se získá v části (b) se může použít jako substrát pro enzymovou hydrolýzu za použití lipasy, jako je PS-30 z Pseudomonas sp. (Amano Intemational CO.), takže se tím získá (3R,4R)-3-hydroxy-4-(2-fuiyl)-azetidin-2 on. Způsob enzymového štěpení za použití lipasy PD-30 a dalších enzymů je popsán v naší související přihlášce 092,170 z 14.07.1993, na kterou se zde odkazuje.

Postup z částí (c) a (d) byl opakován za použití (3R,4R)-3-hydroxy-4-(2-furyl)-azetidin-2-onu, takže byl připraven (3R,4R)-N-(terc.-butoxykarbonyl)-3-triethylsilyloxy-4-(2-furyl)-azetidin-

2-on.

Příprava 12 (+)-cis-3-Triethylsilyloxy-4-(2-triethyl)-N-terc.-butoxykarbonylazetidin-2-on

(a) Opakuje se postup z přípravy 10, stupeň (a) stou výhradou, že se použije místo hydrobenzamidu hydrotrienamid (tj. 2-thienyl-CH-(N=CH-2-thienyl). Takže za použití 30 g (94,7 mmol) hydrothienamidu, 15,84 ml (114 mmol) triethylaminu a 11,6 mol (108 mmol) acetoxyacetylchloridu se získá jako viskosní olej (±)-cis-3-acetyloxy-l-[(2-thienyl)-(2trienylmethylenimino)-methyl]-4-(2-thienyl)-azetidin-2-on.

(b) 70%ní vodný roztok kyseliny octové (0,35 ml ledové kyseliny octové a 0,15 ml vody) se přidá náraz do míchaného roztoku, získaného v části (a) 0,431 g (1,03 mmol) v dichlormethanu (2,93 ml) za teploty 25 °C. Reakční směs se uvede do varu pod zpětným chladičem, míchá se 2,5 hodin, načež se zředí přidáním 50 ml dichlormethanu s tím, že se organická vrstva promyje použitím dvou 75 ml podílů nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a potom se použití 50 ml nasyceného roztoku solanky. Po zahuštění organického extraktu ve vakuu se získá hnědý olej, ten se rozpustí v nejmenším možném množství dichlormethanu, načež se roztok nanese na kolonu silikagelu 4 na 0,5. Eluováním za použití gradientu 10 až 60% ethylacetátu v hexanu se získají méně polární vedlejší produkty a potom 0,154 g (75%) (±)-cis-3-acetoxy-4(2-thienyl)-azetidino-2-onu, to ve formě bílé pevné látky.

(c) Roztok produktu, jak se získá v části (b), tedy 2,5 g, (11,8 mmol) se rozpustí v 10 ml methanolu, přidá se 10 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného ve vodě, a vzniklá

-36CZ 289871 B6 sraženina se míchá 3 hodiny za teploty místnosti. Potom se reakční směs zředí přidáním 20 ml ethylacetátu, roztok se promyje použitím 15 ml vody, vodný podíl se několikráte extrahuje ethylacetátem a spojené organické podíly se vysuší bezvodým síranem hořečnatým. Zahuštěním se získá 1,7 g žluté pevné látky. Surový materiál se rozpustí v 20 ml suchého tetrahydrofuranu, roztok se ochladí na 5 °C v lázni ledu a vody, přidá se 752 mg (1,1 ekv) imidazolu, dále se reakční směs míchá 5 minut, přikapává se 1,85 ml (1,1 ekv) triethylchlorsilanu, dále se vzniklá suspense míchá 3 hodiny za uvedené teploty, načež se pevný podíl odfiltruje. Organická frakce se promyje vodou (dvakrát po 20 ml), a po vysušení bezvodým síranem hořečnatým se filtrát zahustí. Surový produkt se čistí chromatografováním na koloně silikagelu (eluování směsí hexanu a ethylacetátu, 7:3) a získá se tak 1,5 g (45%) (+-—)—cis—3—triethylsilyloxy—4—(2—triethyl)— azetidin-2-onu ve formě bezbarvé pevné látky, b.t. 70 až 71 °C.

Obměněný způsob

2,0 g (9,37 mmol) produktu z části (b) se v prostředí 40 ml methanolu míchá s 60 mg (0,43 mmol) uhličitanu draselného 30 minut, roztok se neutralizuje Dowem 50W-X8 a filtruje. Filtrát se zahustí, zbytek se rozpustí v 50 ml bezvodého THF a míchá se při 0 °C s 0,85 g (11,1 mmol) imidazolu a 1,9 ml (12,5 mmol) TESC1) po minut. Potom se roztok zředí ethylacetátem, promyje se solankou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a zahustí. Zbytek se chromatografuje na silikagelu (hexan/ethylacetát 3:1) s získá se tak 2,13 g (86%) sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, jako bezbarvý olej.

(d) V 10 ml dichlormethanu se rozpustí 425,7 mg (1,48 mmol) produktu z části (c) a roztok se ochladí v lázni z ledu a vody na 5 °C. Do reakční směsi se přidá katalytické množství DMAP a 0,25 ml (1,0 ekv. diisopropylethylaminu (TEČI), dále pak 388,4 mg (1 ekv.) di-tercbutylesteru kyseliny uhličité. Za uvedené teploty se reakční směs míchá 2 hodiny, rozhasí se přidáním 5 ml vodného nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, organický podíl se promyje použitím 5 ml vody, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a filtruje malou vrstvou silikagelu. Zajištěním filtrátu se izoluje očekávaný produkt v množství 525,3 mg (93%) jako bezbarvý olej.

Způsob, popsaný výše v přípravě 9, ll(d) a 12(d) se může přizpůsobit pro přípravu dalších N-substituovaných azedinonů, použitelných pro přípravu sloučenin podle tohoto vynálezu. Příklady takových azetidinonů jsou uvedeny v následující tabulce: P znamená skupinu, chránící hydroxylovou funkci, jako je skupina triethylsilylóvá, triisopropylsilylová a ethoxyethylová

PO

NH

R⁴(O)C(O)L

-37CZ 289871 B6

L	ŘW	R’
Cl	c6h5	4-CH3O-C6H4- 3,4-di-CCH3O-C6H3c6h5- 4-F-C6H4- 4—CF3—CéFU— 2-furanyl- 2-thienyl- C6H5CH=CH- 2-furanyl-CH=CH(CH3)2CHCH2CéHjC^CHj- C6Hn-CH2CHr- CH3CH2CH2- 4-Cl-C6H4- 2- F-C6H4- 3- F-C6H4- 4- CH3-C6H4-
Cl	4-CH3O-C6H4-
3,4-di-CH3O-C6H3- 4-CF3-C6H4- 2-furanyl- C6H5-CH=CH(CH3)2CH-CH2- CeHn^CHr- C6H5CH2CH2-
(CH3)3CO-	(CH3)3CO-	4-CH3O~C6H4- 4-F-C6H44-CF3-C6H4C6H5-CH=CH- (CH3)2CH- C6H5-CH2—CHrCeHn-CHzCHzCH3CH2CH2-
Cl	ch3-	4-CH3O-C6H4- C6H5- 4-F-C6H4- 2-furanyl2-furanyI-CH=CHCsHs-CHjCHrCfiHn-C^CHzCH3CH2CH2-

-38CZ 289871 B6

Příprava 13

1O-Deoxytaxotere tereBuOCO NH o

°6^hA ⁵ Ih

V 1,5 ml suchého tetrahydrofuranu se rozpustí v baňce pod argonem 100 mg (0,156 mmol) 10-desacetoxy-7-O-triethylsilylbaccatinu III, a po ochlazení na -40 °C se přikapává 0,119 ml (0,170 mmol) 1,45 M roztoku n-butyllithia v hexanu, a potom během dvou minut 94,2 mg (0,25 mmol) (3R,4S)-l-terc.butoxykarbonyl-4-fenyl-3-triethylsilyloxy-2-azetidinonu v 0,5 ml tetrahydrofuranu. Teplota reakční směsi se nechá vystoupit bezprostředně na 0 °C, reakční směs se míchá 45 minut, načež se reakce přeruší přidáním 3 ml nasyceného roztoku chloridu amonného. Reakční směs se extrahuje do ethylacetátu, extrakt se vysuší a zahustí. Chromatografováním na silikagelu (eluování 30% ethylacetátu v hexanu) se získá 125 mg (76%) 10-deoxy-2',7-bis-O-(triethylsilyl)taxotere ve formě pěny. 100 mg (0,098 mmol) této látky se bezprostředně rozpustí v 2 ml acetonitrilu za vychlazení na -5 °C, přidá se 0,037 ml 12M, 36% chlorovodíkové kyseliny, a reakční směs se míchá 2 hodiny za chlazení na -5 °C, rozhasí se přidáním vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, a po následující extrakci do ethylacetátu se získaný extrakt vysuší; oddestilováním rozpouštědla a následující chromatografií na silikagelu (eluování 75% ethylacetátu v hexanu) se získá sloučenina, jak je uvedena v názvu ve formě pěny a ve výtěžku 80,5 mg (80%).

Obecný postup, jak je popsán v přípravě 13, se může upravovat na přípravu dalších sloučenin vzorce (Ia), přičemž se vychází z vhodných složek typu baccatin ΙΠ a azetidinonových složek; příklady dalších složek vzorce (Ia) jsou uvedeny v následující tabulce. Je snadno pochopitelná, že i když jsou dále uvedené sloučeniny uváděny s volnými hydroxylovými skupinami, pak se zřetelem na odpovědnou volbu různých skupin, kryjících hydroxylové funkce, se může kterákoli z krycích skupin na 2'-, 7- nebo 10- poloze selektivně odstranit, aniž by to jakkoli ovlivnilo případné další krycí skupiny.

-39CZ 289871 B6

H OH AcO C₆H₅ 4-CH₃O-C₆H4-

3.4- di-CH₃O-C₆H₃-

4-F-C₆H4-

4-CF₃—C₆H₄2-furanyl2-thienylC₆Hs-CH=CH2-furanyl-CH=CH(CH₃)₂-CHCH₂C₆H_n-CH₂(CH₃)₂CHC₆H₅CH₂CH₂CsHn-CHzCHzCH₃CH₂CH₂4-Cl-C₆H₄-

2- F-C₆H4-

3- F-C₆H4- ___4—CH₃—CýH₄—_____ H OH OH (CH₃)₃CO 4-CH₃-O-C₆H4c₆h₅-

4- F-C₆H44-CF₃^C₆H42-furanyl2-thienylC₆H₅-CH=CHC₆H_n-CH₂— (CH₃)₂CH- ______________________________________________C₆H₅CH₂CH₂OH H C₆H₅ 4-CH₃O-C₆H₄-

3.4- dÍ-CH₃O-C₆H₃4-F-C₆H₄ 4-CF₃-C₆H₄2-furanyl2-thienylC₆H5-CH=CH2-furanyl-CH=CH(CH₃)₂-CH-CH2

-40CZ 289871 B6

CeHn-CHz(CH₃)₂-CH- c₆h₅-ch₂-ch₂CfiHi ]—CH₂—CH₂— ch₃ch₂ch₂-

	H	H	(CH3)3CO	4-CH3O-C6H43,4-di-CH3O-C6H3ΟΛ- 4-F-C6H44-CF3-C6H4- 2-furanyl- 2-thienylC6H5-CH=CH2-furanyl-CH=CH(CH3)2CH-CH2C6Hu-CH2(CH3)2CHC6H5-CH2CH2C6Hh-CH2-CH2ch3ch2ch2-
H	OH	AcO	2-naftyl 4-OH-C6H44-CH3O-C6H44-F-C6H4(CH3)2COch3(CH3)2-CHch2=chch24-Cl-C6H4-	C6H5
F	H	AcO	(CH3)2CO-	c6h5
F	H	OH	c6h5	c6h5
H	H	AcO	c6h5	4-CH3O-C6H4- 3,4-di-CH3O-O-C6H3c6h5- 4-F-C6H4- 4-CF3C6H4- 2-furanyl- 2-thienyl C6H5-CH=CH2-furanyl-CH=CH(CH3)2=CH-CH2Ο6Η5-ΟΗ2ΟΗ2C6Hh-CH2-CH2CH3CH2CH2-

Příprava 14

Bis-methyl-thiomethyl)-ether

CH₃SCH₂OCH₂SCH₃

Do roztoku 3,0 g (26,3 mmol) Ι,Γ-dichlordimethyletheru se přidá 8,23 g (55,23 mmol) jodidu io sodného v prostředí 100 ml acetonu za chlazení na 0 °C, a reakční směs se míchá za této teploty minut. Potom se přidá 1,84 g (5,23 mmol) natriumthiomethoxidu ve čtyřech dávkách,

-41 CZ 289871 B6 a získaný roztok se míchá po dobu další hodiny. Heterogenní roztok se potom filtruje vrstvičkou celitu, a filtrát se zahustí ve vakuu. Zbylý olej se roztřepává mezi ethylacetát a nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného, oddělené a spojené vodné podíly se extrahují ethylacetátem, a spojené organické extrakty se protřepají směsí (objemově 1:1) nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 5%ního vodného roztoku simatanu sodného. Dále se organický roztok promyje solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a po filtraci zahustí ve vakuu. Zbylý olej se čistí prudkou chromatografií (za použití směsi hexanu a ethylacetátu, (30:1) a získá se tak 1,9 g žlutého oleje, který se potom destiluje z kuličkové baňky (120 až 130 °C, 2600 Pa) a získá se tak 1,5 g (45%) sloučeniny složení, jak je uvedeno v nadpise, to ve formě bezbarvého oleje.

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 4,73 (4H, s), 2,15 (6H, s).

Příprava 15

Dibenzylmethylthiomethylester kyseliny fosforečné

CH₃SCH₂OP(O)(OC₆H₅)₂

Do reakční směsi 30 mg (2,34 mmol) bis-(methylthiomethyl)-etheru a 300 mg molekulárního síta se v prostředí 100 ml tetrahydrofuranu přidá za teploty místnosti 2,74 g (9,85 mmol) dibenzylesteru kyseliny fosforečné, dále pak 608 mg (2,71 mmol) N-jodimidu kyseliny jantarové, reakční smě se míchá 4 hodiny, potom se zředí ethylacetátem a vše se filtruje vrstvičkou celitu. Filtrát se protřepává směsí (objemově 1:1) nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 5%ního vodného roztoku simanu sodného, bezbarvý organický roztok se dále promyje solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a zahuštěním filtrátu ve vakuu se izoluje 600 mg (69% sloučeniny, jak je uvedeno v nadpise.

’H NMR: (300 MHz, CDC1₃): δ 7,35 (10 H, s), 5,29 (2H, d, J=12,2 Hz), 5,08 (4H, dd, J=8,0, 1,0 Hz), 4,68 )2H, s), 2,10 (3H, s).

Příklady provedení vynálezu

Další příklady jsou připojeny se zřetelem na bližší doložení synthes příkladných sloučenin podle tohoto vynálezu a nejsou jakkoli míněny, že by omezovaly jeho rozsah jakýmkoli způsobem. Odborník v tomto oboru je schopný uzpůsobit postupy bez jakéhokoli zbytečného experimentování na další sloučeniny v rozsahu tohoto vynálezu, i když zde nejsou specificky jmenovány.

-42CZ 289871 B6

Příklad 1

7-0-Fosfonooxymethylpaclitaxel a jeho monosodná sůl (a) Příprava 7-Omethylthiomethylpaclitaxelu

Do prudce míchané směsi 0,85 g (1 mmol) paclitaxelu a 0,72 ml (8 mmol) dimethylsulfidu se ío přidá 0,98 g (4 mmol) benzoylperoxidu v prostředí 10 ml acetonitrilu za teploty 0 °C. Reakční směs se za uvedené teploty míchá 2,5 hodin, a průběh reakce se sleduje na silikagelu tenkovstvou chromatografií v prostředí toluen : aceton (objemově, 1 : 1); R_{f tax} = 0,38, Rfprod. ⁼ 0,64) a jakmile se projeví tvorba výše polárních produktů, přeruší se průběh reakce oddestilováním rozpouštědla při 30 °C za použití přístroje „Rotavapor“. Chromatografií na tenké vrstvě se zjistilo, že reakční 15 směs obsahuje určité množství nezreagovaného paclitaxelu a 2',7-O-bis-(methylthiomethyl)paclitaxelu a sloučenina, jejíž sloužení je uvedeno v nadpise, byla oddělena z reakční směsi bleskovou sloupcovou chromatografií na silikagelu 60 (4 až 63 pm) EM Science (100 ml), průměr kolony 5 cm, soustava rozpouštědel ethylacetát: hexan (objemově 1 : 1), Rf _prod = 0,34. Vlastní reakční produkt ve váze 552 mg (výtěžek 60%) byl získán z frakcí 12 až 18 (každý 20 frakční podíl představoval asi 20 ml).

MS (FAB/matrix ΝΟΒΑ, Nal, KI): (M+H)⁺, m/z 914; (M+Na)⁺, m/z 934; (M+K)⁺, m/z 952.

Analýza:

vypočteno: 64,39 % C, 6,07 % Η, 1,53 % N nalezeno: 64,28 % C, 5,85 % H, 1,46 % N

Ultrafialové spektrum (MeOH): = 226 nm, E( 1 %/l cm) = 150, A = 0,2653

Infračervené spektrum (KBr): 3432, 3066, 2940, 1726, 1668, 1602, 1582, 1514, 1484, 1452, 1372, 1242, 1178, 1142,1108,1068, 1026, 990, 916, 884, 852, 802, 774, 710, 608, 570, 538, 482 cm .

’Η-NMR (CDCb): δ 1,15 (3H, s), 1,19 (3H, s), 1,73 (3H, s), 1,79 (H, s), 1,90 (3H, d), 2,09 (3H, s), 2,16 (3H, s), 2,29 (2H, d), 2,35 (3H, s), 2,77 (H, m), 3,70 (H, d), 3,83 (H, d), 4,17 (H, d), 4,26 (H, m, překryv s H, d), 4,63 (2H, t), 4,77 (H, dd), 4,91 (H, d), 5,65 (H, d), 5,77 (H, dd), 6,16 (H, dd), 6,48 (H, s), 7,07 (H, d), 7,29-7,50 (10H, m), 7,57 (H, m), 7,73 (2H, d), 8,08 (2H, d).

-43CZ 289871 B6 (b) Příprava Z-O-dibenzylfosfonooxymethylpaclitaxelu

OOOCgHj

Roztok 45 mg (0,2 mmol) N-jodsukcinimidu a 55 mg (0,2 mmol) dibenzylfosfátu v 4 ml suchého tetrahydrofuranu se přidává do směsi 119 mg (0,13 mmol) 7-O-methylthiomethylpaclitaxelu a asi 120 mg práškovaného molekulárního síta 4 Á suchém 1,2-dichlorethanu (5 ml). Reakční směs se míchá za teploty místnosti 16 hodin, a sled reakce je monitorován chromatografií na tenké vrstvě v toluenu a acetonu, objemově (2:1), Rf_prOd. ⁼ 0,48). Molekulární síta se odstraní filtrací vrstvou Celíte 545 a filtrát se extrahuje do 100 ml methylenchloridu. Organická vrstva se promyje l%nim roztokem (asi 100 ml) simatanu sodného, a 100 ml 0,5 M roztoku hydrogenuhličitanu sodného, dále za použití 100 ml solanky. Extrakt se filtruje za použití „Watman Phase Separator“, rozpouštědla se oddestilují. Dalším čistěním na koloně silikagelu 60 bleskovou chromatografií za použití soustavy objemově methylenchloridu a ethylacetát (2:1) se získá 41,5 mg 7-O-dibenzylfosfonooxymethylpaclitaxelu.

(c) Příprava 7-O-fosfonoxymethylpaclitaxelu a jeho monosodné soli.

V 5 ml ethylacetátu se rozpustí 41,5 mg 7-O-dibenzylfosfonooxymethylpaclitaxelu, přidá se 20 mg 10%ního palladia na uhlí a za teploty místnosti se hydrogenuje vodíkem za tlaku 275 kPa. Postupující reakce se sleduje chromatografováním na tenké vrstvě za použití směsi chloroform : methanol ; voda (objemově 120 : 45 : 8). Čištěním preparativní chromatografií na tenké vrstvě (20 na 20 na 0,05 cm) silikagelu se získá 26 mg (75%) 7-O-fosfonooxymethylpaclitaxelu.

Protože bylo pozorováno, že se 7-O-dibenzylfosfonooxymethylpaclitaxel rozkládá během čistění na silikagelu, byl postup hydrogenace upraven, takže surový extrakt s obsahem 7-O-dibenyl

-44CZ 289871 B6 fosfonooxymethylpaclitaxelu byl hydrogenován bez jakéhokoli čistění a hydrogenování surového extraktu 7-O-dibenzylfosfonooxymethylpaclitaxelu bylo prováděno za tlaku 400 kPa 24 hodin.

V 5 ml roztoku acetonu ve vodě (1 : 1) bylo rozpuštěno 70 mg 7-O-fosfonooxymethylpaclitaxelu, získaný roztok byl zředěn vodou na objem 50 ml a po přidání 18 mg (1,2 ekv.) suchého hydrogenuhličitanu sodného byl aceton oddestilován za teploty místnosti ve vakuu za použití Rotavaporu, načež byl zbylý vodný roztok lyofilizován. Monosodná sůl surového 7-0fosfonooxymethylpaclitaxelu byla čištěna Cl8 reversní fází kolonovou chromatografií v soustavě voda : acetonitril (objemově 70 : 30). Složení eluátu bylo sledováno analyticky vysokotlakovou kapalinovou chromatografií (15 cm, Jonesova C18 kolona, 1 ml/min, 1 = 230/270 nm) v acetonitrilu a 0,05 M amoniumacetátového pufru (objemově 45 : 55), pH = 7, Rt = 2,09 min. Frakce s obsahem očekávaného produktu byly spojeny, acetonitril byl oddestilován a lyofilizováním zbylého vodného roztoku bylo získáno 112 mg monosodné soli fosfonooxymethylpaclitaxelu.

MS (FAB): (M+H)⁺), m/Z 986; (M+Na)⁺, M/z 1008,

Ultrafial. spektrum (MeOH) = 230 nm E (1%/lcm) = 248

Infračerv. spektrum (KBr): 3430, 3066, 2948, 1724, 1652, 1602, 1580, 1518, 1486, 1452, 1372, 1316,1246,1178,1154,1108,1070,1000, 982,946 856, 802, 776, 710,628, 538 cm-¹.

'H NMR (aceton-dJDzO) δ: 8,05 (2H, d), 7,92 (2H, d), 7,65 (1H, dd), 7,58-7,35 (9H, m, překryv), 7,22 (1H, dd), 6,38 (1H, s), 6,08 (1H, t), 5,65 (1H, d), 5,60 (1H, d), 5,10 (1H, br.s.), 4,99 (1H, d), 4,97 (1H, br.s.), 4,80 (1H, d), 4,28 (1H, dd), 4,11 (2H, s), 3,79 (1H, d), 2,94 (1H, m), 2,15 (3H, m), 2,35 (3H, s), 2,35-2,10 (1H, m), 2,13 (3H, s), 1,95 (3H, s), 1,84 (1H, m), 1,67 (3H, s), 1,13 (6H, s, překryv).

Příklad 2

Jiný způsob přípravy 7-O-fosfonooxymethylpaclitaxelu (a) Příprava 2'-0-(benzyloxykarbonyl)-paclitaxelu

Do míchaného roztoku 150 mg (0,176 mmol) paclitaxelu a 93 μΐ (0,534 mmol) N,N-diisopropylethylaminu v 4 ml bezvodého methylenchloridu se přidává za teploty místnosti 75 μΐ (0,525 mmol, 1 ekv.) benzylesteru kyseliny chloromravenčí, reakční směs se potom míchá 3 hodiny za teploty místnosti, zahustí se na objem 2 ml a čistí na sloupci silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu (1:1) k eluování. Jako bílý prášek se získá ve výtěžku 150 mg (86%) sloučenina, jejíž sloužení je uvedeno v nadpise.

-45CZ 289871 B6

T.t. 140 až 150 °C (za rozkl.) (b) Příprava 2'-0-benzyloxykarbonyl)-7-0-methylthiomethylpaclitaxelu

CrH.CONH ^{6 5} J o

CgH/jAo 0^0^00(0)0

Roztok 4,935 (5,00 mmol) 2'-O-(benzyloxykarbonyl)-paclitaxelu v 80 ml suchého acetonitrilu se ochladí v lázni z pevného oxidu uhličitého a chloridu uhličitého (teplota lázně -30 °C), a postupně se přidává 3,6 ml (40 mmol) dimethylsulfidu a 4,9 g (20,247 mmol) benzoylperoxidu. Po 10 minutách uchovávání za chlazení na -30 °C se chladicí lázeň odstraní a reakční směs se energicky míchá 2 hodiny za teploty místnosti. Dále se reakční směs zředí přidáním ethylacetátu na objem 200 ml, roztok se promyje vodou a solankou, organický podíl se vysuší bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se zahuštěním filtrátu získá zbytek, a uchováváním 18 hodin ve vakuu se odstraní jakýkoli zbytek dimethylsulfoxidu, který je případně v reakční směsi jako vedlejší produkt. Zbytek se pak čistí chromatografováním na koloně silikagelu za použití nejprve směsi ethylacetátu a hexanu (1:2) k eluování méně polárních nečistot, načet se eluováním směsi ethylacetátu a hexanu (1:1) získá ve formě pěny očekávaný produkt. Ten se trituruje se suchým etherem, a potom se odfiltrováním získá sloučenina, jak je uvedena v nadpise ve výtěžku 5,0 g (95%) jako péřovitá pevná látka, t.t. 120 až 122 °C.

MS (FAB: (MH)⁺, M/z 1048; (M+Na)⁺, m/z 1070; (M+K⁺) m/z 108

Infrač. spektr. (KBr): 3440, 3066, 1750,1722,1664, 1602,1583,1538 cm’¹.

NMR (CDCI3): δ 1,117 (3H, s), 1,236 (3H, s), 1,745 (3H, s), 2,023 (3H, s), 2,121 (3H, s), 2,162 (3H, S), 2,436 (3H, s), 3,887 (H, d), 4,134 (H, d), 4,197 (H, d), 4,295 (H, m), 4,964 (H, d), 5,161 (2H, d), 5,450 (H, d), 5,703 (H, d), 5,981 (H, dd), 6,257 (H, t), 6,541 (H, s), 6,920 (H, d) (NH), 7,322-8,22 (15H, m).

Sloučenina, jak je uvedena v nadpisu, byla rovněž připravena tímto obměněným postupem:

Do roztoku 2,0 g (2,0263 mmol) 2'-0-(benzyloxykarbonyl)-paclitaxelu v 10 ml suchého dimethylsulfoxidu se přikapává 10 ml anhydridu kyseliny octové a reakční směs se míchá pod dusíkem 18 hodin, dále se zředí přidáním 100 ml ethylacetátu a roztok se pečlivě promyje za použití šesti dávek po 30 ml vychlazeného 6%ního roztoku hydrogenuhličitanu sodného, dále pak šesti podílů po 30 ml studené vody a solankou. Organická vrstva se po oddělení vysuší bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se oddestilováním rozpouštědla získá zbytek, který se čistí chromatografováním na koloně silikagelu za eluování nejprve methylenchloridem s 50% acetonitrilu a potom methylenchloridem s 10% acetonitrilu. Získá se tím 1,86 g (87,7%) očekávané sloučeniny, jak je uvedena v nadpise. Tato sloučenina je totožná s produktem, který byl získán výše popisovaným postupem za použití dimethylsulfidu a benzoylperoxidu.

-46CZ 289871 B6 (c) Příprava 2'-O-(benzyloxykarbonyl)-7-O-dibenzylfosfonoxymethylpaclitaxelu

CrHc.COUH O

0^01^00.(0)0

Do roztoku 5,0 g (5,5396 mmol) 2'-0-(benzyloxykarbonyl)-7-0-methylthiomethylpaclitaxelu v 120 ml suchého 1,2-dichlormethanu se přidá 5,0 g práškového 0,4 nm molekulárního síta, a do této směsi se přikapává za teploty místnosti směs 1,61 g (7,1632 mmol) N-jodimidu kyseliny jantarové a 1,97 g (7,1632 mmol) dibenzylesteru kyseliny fosforečné v 90 ml suchého tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá energicky za teploty místnosti 30 minut, potom se filtruje celitem a filtrát se zahustí do sucha za vzniku červeného zbytku. Ten se rozpustí v 100 ml ethylacetátu, získaný roztok se promyje za použití dvou podílů po 50 ml vychlazeného, 6%ního roztoku hydrogensiřičitanu sodného, vychlazeného 6%ního vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (2 x 50 ml) a za použití 50 ml roztoku solanky. Organická vrstva se po oddělení vysuší bezvodým síranem hořečnatým, a zahuštěním filtrátu se získá pevný podíl, který se trituruje se suchým etherem, načež se filtrací získá sloučenina, jak je uvedena v nadpise jako pevná látka barvy slonové kosti ve výtěžku 5,9 g (97%) t.t. 124 až 127 °C.

MS (FAB): (MH)⁺, m/z 1278; (M+Na)⁺, m/z 1301, (M+K)⁺, m/z 1316

Infřačer. spektrum (KBr): 3430,3066, 3032,1750,1726,1664,1582,1532 cm¹

NMR (CDC1₃) δ: 1,160 (3H, s), 1,703 (3H, s), 1,985 (3H, s), 2,164 (3H, s), 2,420 (3H, s), 3,854 (H, d), 4,151 (H, d), 5,216 (H, m), 4,298 (H, d), 4,873 (H, d), 5,042 (6H, m), 5,140 (2H, d), 5,417 (H, d), 5,670 (H, d), 5,971 (H, dd), 6,241 (H, t), 6,317 (H, s), 6,912 (H, d, NH), 7,280-8,115 (25 H, m).

(d) Příprava 7-O-fosfonooxymethylpaclitaxelu

Do roztoku 6,0 g (4,7095 mmol) 2'-0-benzyloxykarbonyl)-7-0-dibenzylfosfonooxymethylpaclitaxelu v 120 ml ethylacetátu se přidá 6,0 g 10%ního palladia na uhlí a směs se hydrogenuje za tlaku vodíku 400 kPa 24 hodin. Po filtraci reakční směsi vrstvou celitu se rozpouštědlo z filtrátu oddestiluje a získá se tak 4,07 g surového zbytku. Ten se čistí chromatografií na tenké koloně silikagelu za postupného eluování chloroformem, potom se přidání 10%, 20% a 40% methanolu, a jako bílá pevná látka se takto získá 3,2 g (71%) sloučeniny jak je uvedena v nadpise, t.t. 155ažl58°C.

Při chromatografování na tenké vrstvě má tato látka shodnou hodnotu Rf a při vysokotlakové kapalinové chromatografii shodný retenční čas ve srovnání s autentickým vzorkem.

MS (FAB): (MH)⁺, m/z 964; (M+Na)⁺, m/z 986; (M+K)⁺, m/z 1002; (M+K⁺ + Na⁺ - H)⁺, m/z 1024; (Μ + 2K - H)⁺ m/z 1040.

-47CZ 289871 B6

Ultrafial. sp. (ΜΕΘΗ): = 230 nm, E(l%/lcm) = 252,5

Ič(KBr): 3432, 3066, 2992, 1648, 1722, 1602, 1580, 1522, 1488, 1452, 1372, 1316, 1246, 1178, 1154, 1110,1070, 1000, 980,946, 854, 802, 776, 710, 628, 538 cm’¹.

Ή NMR (aceton-dfi/DjO), δ: 1,08 (3H, s), 1,10 (3H, s), 1,63 (3H, s), 1,88 (3H s), 1,96 (H, m), 2,13 (3H, s), 2,32 (3H, s), 2,89 (H, m), 3,76 (H, d), 4,19 (H, m), 4,89 (H, dd), 5,09 (H, dd), 5,55-5,60 (2H, překiyv s d), 6,04 (H, t), 6,32 (H, s), 7,20 (H, t), 7,34-7,67 (1 OH, překryv s s), 7,87 (2H, dd), 8,02 (2H, dd).

Příklad 3

2'-0-Ethoxykarbonyl)-7-0-fosfonooxymethylpaclitaxel (a) Příprava 2'-0-(ethoxykarbonylpaclitaxelu)

CzHt-CONH ^{6 5} i O

CH^CHg00-(0)0

Do roztoku 4,35 g (5 ml mmol) paclitaxelu v 51 ml suchého methylenchloridu se přidá 2,67 ml (15,3 mmol) diisopropylethylaminu a dále 1,46 ml (15,3 mmol) ethylesteru kyseliny chloromravenčí. Reakční směs se míchá za teploty 0 °C 2 hodiny, dále další hodinu za teploty místnosti, zředí se přidáním 400 ml ethylacetátu, organická vrstva se po oddělení promyje dvakrát za použití vždy 30 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, týmž objemem solanky, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a zahuštěním filtrátu se izoluje ve výtěžku 93% sloučenina, jak je uvedena v nadpise, která se v tomto surovém stavu použije bez jakéhokoli čistění v dalším stupni.

MS (FAB/NOBA, Nal, KI): (M+H)⁺, m/z 926; (M + Na); m/z 948; (M + K)⁺, m/z 964.

NHMS (FAB/NOBA, Csl/Gly vnější ref.): (M + H)⁺, m/z pro C50H56NO16 vypočteno: 926,3599, nalezeno 926, 3588, odchylka Δ = 1,2 ppm *H NMR (CDCI3): 1,13 (3H, s), 1,23 (3H, s), 1,30 (3H, t), 1,67 (3H, s), 1,92 (3H, s), 2,21 (2H, s), 2,37 (H, d), 2,45 (3H, s), 2,54 (H, m), 3,80 (H, d), 4,15-4,32 (4H překryv s s), 4,43 (H, dd), 4,96 (H, d), 5,42 (H, d), 5,68 (H, d), 5,98 (H, dd), 6,28 (2H, m's, překryv), 7,00 (H, d), 7,34-7,59 (1 IH, m's, překryv), 7,74 (2H, d), 8,12 (2H, d).

-48CZ 289871 B6

Obměněný způsob:

Roztok 5,40 g (6,324 mmol) paclitaxelu v 63 ml suchého dichlormethanu se ochladí na 0 °C a přidá se po částech 3,30 ml (3 ekv.) Ν,Ν-diisopropylethylaminu a potom po kapkách během 5ti minut 1,81 ml (3 ekv.) ethylesteru kyseliny chloromravenčí. Průběh reakce se sleduje chromatografií na tenké vrstvě (50% ethylacetátu v hexanu) a po dvou hodinách chlazení na 0 °C a 16ti hodinách uchovávání za teploty místnosti se zjistí, že reakce je skončena, žlutooranžový roztok se zředí přidáním 300 ml ethylacetátu, promyje se třemi podíly po 75 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, týmž objemem solanky, organický roztok se vysuší bezvodým síranem hořečnatým a zahuštění se získá surová sloučenina, jak je uvedena v nadpise, která se čistí přesrážením tímto postupem: látka se rozpustí asi v 100 ml dichlormethanu, roztok se ochladí a přidává se hexan (asi 60 ml) až do zákalu. Potom se po chlazení ledem několik hodin odfiltruje pevná látka, jež se mezitím vyloučí, výtěžek 5,17 g (88%).

Další obměněný postup:

V baňce objemu 31, vysušené nad plamenem, se rozpustí 99,0 g (115,9 mmol) paclitaxelu v 1350 ml suchého methylenchloridu pod argonem. Roztok se ochladí na -10 °C, pomalu se přidává 52,4 g (405,7 mmol) diisopropylethylaminu (asi 3 minuty) dále pak během asi 15 minut 31,45 g (289,8 mmol) ethylesteru kyseliny chloromravenčí. Takto připravená směs se míchá 16 hodin (tedy více než přes noc) za chlazení na -4 °C, kdy podle vyhodnocování chromatografií na tenké vrstvě je reakce skončena. Přidá se další podíl 2,62 g (20,28 mmol) Ν,Ν-diisopropylethylaminu, dále pak 2,20 g (20,28 mmol) ethylesteru kyseliny chloromravenčí a reakční směs se míchá dále 3 hodiny za -4 °C. Chromatografií na tenké vrstvě nelze dokázat přítomnost výchozí látky. Studená reakční směs se zředí přidáním 1,5 litru ethylacetátu, přelije do dětičky, kde se promývá dvakrát za použití vždy 500 ml 5%ního roztoku hydrogensíranu draselného, jednou za použití 500 ml vody, znovu s použitím 500 ml 5%ního hydrogensíranu draselného, 500 ml vody, dvakrát za použití vždy 500 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát použitím vždy 500 ml solanky, načež se po vysušení bezvodým síranem hořečnatým a filtraci oddestilováním rozpouštědel ve vakuu získá 147 g surového produktu; ten se rozpustí v 800 ml horkého methylenchloridu (v lázni teploty 42 °C) a za udržování uvedené teploty se přikapává 530 ml hexanu. Krystalizace se projeví asi po tříhodinovém stání za teploty místnosti a dalším uchováním přes noc za 0 °C. Odfiltrují se těžké bílé krystaly a ty se promyjí dvakrát vždy za použití 200 ml směsi hexanu a methylenchloridu (objemově 1:1). Krystaly se suší na filtračním papíru, hodinu, dále pak přes noc ve vakuové sušárně za vysokého vakua a získá se tak 95,7 g (89%) sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, index homogenity podle zjištění vysokotlakovou kapalinovou chromatografií: 98,5 %.

(b) Příprava 2'-0-(ethoxykarbonyl)-7-0-methylthiomethylpaclitaxelu

ococ₆h₅

-49CZ 289871 B6

Do roztoku 4,38 g (4,7 mmol) 2'-0-(ethoxykarbonyl)paclitaxelu v 12,5 ml suchého dimethylsulfoxidu se přidá 12,5 ml anhydridů kyseliny octové, reakční směs se míchá 24 hodin za teploty místnosti, potom se zředí přidáním 500 ml ethylacetátu, promyje se třikrát za použití 40 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát stejným objemem vždy vody, organický roztok se potom vysuší bezvodým síranem hořečnatým, po filtraci se rozpouštědla vydestilují za sníženého tlaku až do sucha a zbytek se čistí chromatografií na silikagelu za eluování hexanem s obsahem 40% ethylacetátu. Získá se tím sloučenina, jak je uvedena v nadpise, výtěžek 4,39 g (94%).

MS (FAB/NOBA, Nal, ΚΙ): M + H)⁺, m/z 986; (M + Na)⁺, m/z 1008; (M + K)⁺, m/z 1024

HRMS (FAB/NOBA, CSI/Gly, exter.ref.): (M + H)⁺, m/z, vypočteno: 986,3633m nalezeno: 986,3646, odchylka = 1,3 ppm *H NMR (CDC1₃) δ: 1,18 (3H, s), 1,20 (3H, s), 1,30 (3H, s), 1,75 (3H, s), 1,84 (H, m), 2,09 (3H, s), 2,11 (3H, s), 2,16 (3H, s), 2,24 (H, d), 2,37 (H, d), 2,45 (3H, s), 2,80 (H, m), 3,68 (H, d), 4,08-4,33 (5H, m, překryv), 4,65 (2H, s), 4,96 (H, d), 5,43 (H, d), 5,69 (H, d), 5,98 (H, dd), 6,26 (h, t), 6,55 (H, s), 7,00 (H, d), 7,32-7,61 (11H, m, překryv), 7,73 (2H, dd), 8,11 (2H, dd).

Obměněný způsob:

V 6 ml bezvodého dimethylsulfoxidu se rozpustí 2,260 g (2,4406 mmol) 2'-O-(ethoxykarbonyl)paclitaxelu, a za teploty místnosti se v jedné dávce přidá 6 ml anhydridů kyseliny octové. Průběh reakce se sleduje vysokotlakovou kapalinovou chromatografií (analytická kolona Cl8, 60% acetonitrilu + 40% 10 mM amonimfosfátového pufru, pH 6). Po 30ti hodinách se roztok zředí přidáním 250 ml ethylacetátu, organický roztok se promyje třikrát nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, potom vodou a solankou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se surový produkt chromatografuje na silikagelu (40% ethylacetátu v hexanu) a získá se tím sloučenina, jak je uvedena v nadpise, jako bílá pěna ve výtěžku 2,030 g (91%), podle vyhodnocení vysokotlakovou kapalinovou chromatografií je stupeň čistoty 90%. Část se čistí na druhé koloně (5% acetonitrilu v dichlormethanu) a získá se tak látka, jež se vyznačuje podle vyhodnocení vysokotlakovou kapalinovou chromatografií čistotou asi 97%.

Obměněný způsob přípravy 2'-0-(ethoxykarbonyl)-7-0-methylthiomethylpaclitaxelu

Za chlazení na -40 °C se rozpustí v 68 ml bezvodého acetonitrilu 4,170 g (4,503 mmol) 2'-O(ethoxykarbonyl)paclitaxelu, přidá se 3,2 ml (44,10 mmol) dimethylsulfidu a 4,400 g (18,24 mmol) benzoylperoxidu, reakční směs se umístí do ledové lázně, kde se míchá hodinu. Průběh reakce se sleduje chromatografováním na tenké vrstvě (40%-ethylacetát v hexanu). Po 3 hodinách nelze zjistit v reakční směsi výchozí látku, takže byla reakční směs zpracována přidáním 250 ml ethylacetátu a 100 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Organická oddělená vrstva byla dále promývána roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, solankou, načež po vysušení bezvodým síranem hořečnatým a filtraci byl po zahuštění získaný zbytek čištěn bleskovou chromatografií na silikagelu za použití 4% acetonitrilu v dichlormethanu. Získá se tím sloučenina, jak je uvedena v nadpise, jako bílá pěna ve výtěžku (2,571 g, 58%). Čistota této látky dle vyhodnocení vysokotlakovou kapalinovou chromatografií (nad 97%). NMR spektrum bylo totožné s oním, jak je uvedeno zde již výše.

Obměněný způsob přípravy 2'-O-(ethoxykarbonyl)-7-O-methylthiomethylpaclitaxelu:

V litrové baňce, vysušené nad plamenem, se rozpustí 49,3 g (53,2 mmol) 2'-O-(ethoxykarbonyl)-paclitaxelu v 500 ml suchého acetonitrilu za teploty místnosti a za pomoci injekční stříkačky se rychle přidá 39,1 ml (0,532) methylsulfidu. V lázni z ledu a soli se reakční směs

-50CZ 289871 B6 vychladí na -16 °C a v jedné dávce se do reakční směsi vnese 51,6 g (0,213 mol) benzoylperoxidu. Aby reakce proběhla kvantitativně, je třeba použít plných 4 ekvivalentů uvedené látky. V míchání se pokračuje 30 minut, během této doby teplota reakční směsi vystoupí na -10 °C; reakční prostředí zůstává stále heterogenní, protože benzoylperoxid se nemůže rozpustit dokonale. Chladicí lázeň se zamění za lázeň z ledu a vody, teplota se nechá vystoupit na 0 °C a zbylý benzoylperoxid se rozpustí během nejvýše 5 minut po zmíněném zvýšení teploty. Podle vyhodnocení chromatografíi na tenké vrstvě se má za to, že reakce je skončena mícháním při 0 °C po dobu dalších 2,5 hodin. Objem roztoku se sníží na 200 ml oddestilováním rozpouštědla na rotační odparce, tento podíl se přenese do děličky, kde se promývá pěti podíly po 500 ml heptanu. Acetonitrilová vrstva se zředí přidáním 1,5 litru ethylacetátu a promývá se dvěma podíly po 500 ml směsí 3 : 1 nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného + 5%ní roztok uhličitanu draselného (objemově), dále za použití dvou dávek po 500 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 500 ml polonasyceného roztoku solanky a 500 ml solanky. Po vysušení bezvodým síranem hořečnatým a filtraci se rozpouštědla vydestilují ve vakuu a získá se tak 67,0 g surového produktu. Ten se rozpustí v 200 ml acetonu, roztok se vyhřeje na 40 °C ve vodní lázni, a přikapává se za míchání hexan až do zakalení (asi 400 ml). Krystalující směs se nechá stranou po 3 hodiny uchovávání za teploty místnosti, potom se umístí na 16 hodin, nejlépe přes noc do chladničky teploty 0 °C, kde se vytvoří silný pevný podíl. Ten se odfiltruje, promyje se za použití dvou dávek po 50 ml směsi hexanu a acetonu (objemově 3:1), získané krystaly se suší na filtračním papíru hodinu, potom přes noc za hlubokého vakua a získá se tím 47,5 g (91%) sloučeniny, jak je uvedena v nadpise. Podle vyhodnocení vysokotlakovou kapalinovou chromatografíi odpovídá index halogenity 94,8%.

(c) Příprava 2'-Q-(Ethoxykarbonyl)-7-O-dibenzylfosfonooxymethylpaclitaxelu

CgHjCONH ₀ «

CH^CHgOCCOd

Roztok 1,953 g (8,65 mmol) N-jodimidu kyseliny jantarové a 2,41 g (8,65 mmol) dibenzylfosfátu v tetrahydrofuranu se přidává za teploty místnosti do směsi 5,677 g, (5,76 mmol) 2'-0-ethoxykarbonyl)-7-0-methylthiomethylpaclitaxelu a 5,7 nm molekulárního síta v 100 ml methylenchloridu. Reakční směs se míchá 40 minut za teploty místnosti, a po této době je podle vyhodnocení chromatografíi na tenké vrstvě reakce skončena. Reakční směs se filtruje celitem a filtrát se zahustí ve vakuu, takže se získá hnědavě zbarvený zbytek, který se zředí přidáním 800 ml ethylacetátu. Organická fáze se promyje dvakrát za použití 80ml l%ního siřičitanů sodného a dále dvakrát za použití 50 ml 5%né solanky. Potom se organická fáze zahustí ve vakuu a vysuší. Chromatografováním vzniklého zbytku za použití 50 až 60% ethylacetátu v hexanu se získá sloučenina, jak je uvedena v nadpise, ve výtěžku 6,23 g (89%).

MS (FAB/NOBa, Nal, ΚΙ): (M + Na)⁺, m/z 1238; (M + K)⁺ m/z 1254

HRMS (FAB/NOBA) (CsI/GIy, ext.ref.): (M + Na)⁺. m/z 1216, 4291,

-51 CZ 289871 B6 pro C₆₅H₇iNO₂₀P vypočteno 1216,4307, nalezeno 1216,4291 odchylka Δ = 1,3 ppm.

*H-NMR (CDC1₃): δ 1,18 (3H, s), 1,21 (3H, s), 1,30 (3H, t), 1,67 (6H, s), 1,80 (H, s), 1,93 (H, m), 1,99 (3H, d), 2,18 (3H, s), 2,23 (H, m), 2,38 (H, m), 2,45 (3H, s), 2,80 (H, m), 3,86 (H, d), 4,14-4,32 (5H, m, překryv s s), 4,88 (H, d), 5,00-5,07 (4H, m, překryv s s), 5,42 (H, d), 5,68 (H, d), 5,96 (H, dd), 6,26 (H, t), 6,33 (H, s), 6,95 (H, d), 7,30-7,61 (11H, překryv s s), 7,75 (2H, dd), 8,12 (2H, dd).

Obměněný postup:

Do roztoku 350 mg (0,355 mmol) 2'-O-(ethoxykarbonyl)-7-O-methylthiomethylpaclitaxelu v 8 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá roztok 120 mg (0,532 mmol) N-jodimidu kyseliny jantarové a 148 mg (0,532 mmol) dibenzylesteru kyseliny fosforečné v 5 ml tetrahydrofuranu. Průběh reakce se sleduje vysokotlakovou chromatografií na koloně Cl8, 70% acetonitrilu, 30%10nM fosforečnanu amonného (pH 6), po dvou hodinách se zjistí v reakční směsi přítomnost pod 5% výchozích látek a reakční směs se zpracuje. Roztok se zředí přidáním 75 ml ethylacetátu, získaný roztok se promyje dvakrát za použití 50 ml l%ního vodného roztoku hydrogensiřičitanu sodného, dále za použití 50 ml solanky, načež se roztok rychle vysuší bezvodým síranem hořečnatým, a po filtraci se rozpouštědlo odpaří. Bleskovou chromatografií na silikagelu (za použití 45% ethylacetátu v hexanu) se získá bílá pěna sloučeniny, uvedené v názvu, ve výtěžku 281 mg (65%). Podle výsledků analýzy vysokotlakové kapalinové chromatografie je stupeň čistoty asi 95%.

Obměněný postup

Rozdrcené molekulární síta 0,4 nm se umístí v litrové baňce, vysušené nad plamenem, jež se spojí s odtahem do hlubokého vakua. Síto se potom vyhřeje teplometem za ručního potřásání, což trvá 10 minut, načež se po ochlazení ve vakuu pod arogenem zavádí do baňky 37,5 g (38,03 mmol) 2'-0-(ethoxykarbonyl)-7-0-methylthiomethylpaclitaxelu, potom 14,8 g (53,25%) dibenzylesteru kyseliny fosforečné a 400 ml tetrahydrofuranu. Heterogenní směs se míchá energicky po 15 minut za teploty místnosti magnetickým míchadlem. V jiné baňce, vysušené nad plamenem, se rozpustí v 50 ml tetrahydrofuranu 10,7 g (47,54 mmol) N-jodimidu kyseliny jantarové pod argonem. V průběhu přípravy NIS roztoku, přenosu kapaliny a v průběhu reakčního postupu se nádoby chrání hliníkovou fólií před přístupem světla. Zmíněný roztok N-jodsukcinimidu se přidává zaváděcí trubičkou do reakční směsi pomalu během 10ti minut. Baňka s obsahem NIS se propláchne za použití 5 ml THF, roztok se přepustí do reakční směsi, jež se pak míchá 2 hodiny za teploty místnosti. Podle analýzy na tenké vrstvě není v reakční směsi výchozí látka. Temně červený roztok se filtruje vrstvu celitu přímo do intensivně míchané směsi, obsahující 500 ml ethylacetátu, 300 ml 10%ního vodného roztoku simatanu sodného a 200 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Během několika sekund zmizí červené zbarvení za vzniku bezbarvého roztoku. Vrstva celitu se promyje 100 ml ethylacetátu a obě kapalné vrstvy se přelijí do děličky, organická vrstva se zředí přidáním litru ethylacetátu, vrstvy se oddělí a organický roztok se promyje směsí nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 5%ního roztoku uhličitanu draselného (3:1, objemově, dvakrát po 500 ml), dále použitím dvou dávek po 500 ml hydrogenuhličitanu sodného, 500 ml polonasyceného roztoku solanky a 500 ml konc. roztoku solanky. Extrakt se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, filtruje se, dále se přidá 5,0 g neutrálního noritu (aktivní uhlí), vše se míchá 15 minut za teploty místnosti, znovu se filtruje vrstvou celitu, a oddestilováním rozpouštědla za sníženého tlaku se získá 52 g surového produktu. Ten se rozpustí ve směsi toluenu a methylenchloridu (280 ml na 25 ml) a přikapává se 20 ml hexanu. Reakční směs se potom odstaví na 3 hodiny za teploty místnosti, a dále se ponechá krystalovat za teploty 0 °C přes noc. Na stěnách baňky se vyloučí bledě žlutá sraženina. Po oddekantování matečné kapaliny se zbytek trituruje

-52CZ 289871 B6 s 50 ml toluenu, a po filtraci se podíl na filtru promyje toluenem a suší se na filtračním papíru 30 minut., potom se suší v exsikátoru s drieritem a dále pak za hlubokého vakua 4 hodiny a získá se tak 24,4 g (53%) sloučeniny, jak je její složení uvedeno v nadpise (index homogenity podle vysokotlakové kapalinové chromatografie = 95,9%). Matečný louh se zahustí do sucha, trituruje se s 100 ml toluenu, pevný podíl se odfiltruje, promyje toluenem a suší na filtračním papíru po 30 minut. Sušením v exsikátoru, jak se to popisuje výše, se získá 12,5 g (27%) stejného produktu (index homogenity dle stanovení vysokotlakovou kapalinovou chromatografií = 97,1%) (d) Příprava 2'-0-(ethoxykarbonyl)-7-0-fosfonooxymethyl)paclitaxel a odpovídající soli: monosodné, monodraselné, triethylaminu, argininu, lysinu, ethanolaminu, N-methylglukaminu a triethanolaminu

Do roztoku 1,23 g (1,01 mmol) 2'-2-(ethoxykarbonyl)-7-0-dibenzylfosfonooxymethylpaclitaxelu v 40 ml suchého ethylacetátu se přidá 428 mg (0,404 mmol) 10%ního palladia na uhlí a reakční směs se hydrogenuje za tlaku 400 kPa vodíku za nepřetržitého potřásání po 24 hodin. Pevný podíl se zachytí na vrstvě celitu, celit se promyje několikráte ethylacetátem a zahuštěním filtrátu se získá sloučenina, jak je uvedena v nadpise, to ve formě volné kyseliny, výtěžek 1,01 g, čistota podle vysokotlakové kapalinové chromatografie 80%. Nečistoty se odstraní v dalším stupni preparativní sloupcovou chromatografií na sloupci Cl8.

MS (FAB/NOBA), Nal, ΚΙ): (M + Na)⁺, m/z 1058; (M + K)⁺, m/z 1074; (M + 2 Na - H)⁺, m/z 1080; (M + Na + K - H)⁺, m/u 1096; (K + 2K - H)⁺, m/Z 1112.

HR-MS (FAB/NOBA), Csl/Gly, exter. Ref.): (M + Na)⁺, m/z 1058.3163 nalezeno, pro

CjiHjgNOzoPNa vypočteno. 1058.3188 odchylka Δ = 2,3 ppm.

’H NMR (aceton. ds/D20 5: 1,13 (3H, s), 1,21 (3H, s), 1,66 (3H, s), 1,87 (H, m), 1,93 (3H, s), 2,14 (3H, s), 2,18 (H, m), 2,44 (3H, s), 2,95 (H, m), 3,81 (H, d), 4,12 (2H, s), 4,15-4,27 (3H, m, spřekiyvem s), 4,92-4,99 (2H, br.M., spřekryvem s), 5,15 (H, br.s), 5,48 (H, d), 5,61 (H, d), 5,84 (H, dd), 6,07 (H, t), 6,36 (H, s), 7,25 (H, t), 7,28-7,69 (10H, m spřekiyvem s), 7,89 (2H, dd), 8,08 (2H, dd), 8,86 (H, d).

-53CZ 289871 B6

Obměněný postup:

Roztok 490 mg (0,402 mmol) 2'-0-ethoxykarbonyl)-7-0-(dibenzylfosfonooxymethylpaclitaxelu) v 20 ml ethylacetátu se hydrogenuje v Parrově nádobce za třepání a pod tlakem 400 kPa vodíku za přítomnosti 150 mg 10% palladia na uhlí (hmotnostně). Reakce se sleduje chromatografováním na tenké vrstvě a vysokotlakovou kapalinovou chromatografií. Když již nelze postihnout v reakční směsi ani výchozí látku ani meziprodukt (asi monobenzylfosfát), tj. asi za 26 hodin, filtruje se suspense vrstvou celitu a filtrát se zahustí do sucha. Analýzou vysokotlakovou kapalinovou chromatografií se zjistí čistota 88 až 92 %.

Obměněný postup:

5,4 g (4,75 mmol) triethylaminové soli 2'-0-ethoxykarbonyl)-7-0-fosfonooxymethylpaclitaxelu - popis viz dále se roztřepává energicky mezi 100 ml ethylacetátu a 45 ml 5%ního hydrogensiřičitanu sodného 30 minut za míchání při 0 °C. Vodný podíl se oddělí, extrahuje se do 20 ml ethylacetátu, spojené extraktry v tomto rozpouštědle se promyjí za použití 25 ml zpolanasycené solanky, dále dvou podílů po 25 ml solanky a po vysušení bezvodým síranem sodným a filtraci se získá roztok (4,75 mmol) kyseliny v asi 150 ml ethylacetátu. Tento roztok se zahustí až do sucha na rotační odparce, a získá se tak 3,75 g sloučenina, jak je uvedena v nadpise, a to ve formě volné kyseliny v 95%ním výtěžku. Index homogenity dle vysokotlakové kapalinové chromatografie: 96,1%.

Monosodná sůl se připraví takto:

Vzorek 1,6 g (1,55 mmol) 2'-0-(ethoxykarbonyl)-7-0-fosfonooxymethylpaclitaxelu v 30 ml acetonitrilu se připraví použitím ultrazvuku. Tento roztok se zředí přidáním 30 ml vody, dále se přidá 2,11 ml (2,32 mmol) 1,1 M roztoku hydrogenuhličitanu sodného a střídavým potřásáním a působením ultrazvuku se docílí během 5 až 20 minut rozpuštění. Poněkud mléčně zakalený roztok se nanese na kolonu Cl8, promyje se dvěma kolonovými objemy vody, načež se eluuje monosodná sůl 25%ním acetonitrilem ve vodě. Vhodné odpovídající frakce se spojí, acetonitril se oddestiluje, vodná fáze se lyofilizuje a získá se tak 850 mg (asi 50%) monosodné soli sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, čistota podle vysokotlakové kapalinové chromatografie 97%.

MS (FAB/NOBA), Nai, ΚΙ): (M + Na)⁺, m/z 1180

MR-MS (FAB/NOBA), CsVGly, exter. ref.):, (M + Na)⁺. m/z pro C₅₁H₃₇N0₂oPNa₂ vypočteno: 1080,3007 nalezeno 1080,2968 odchylka Δ = 3,6 ppm

Elementární analýza:

vypočteno: 56,72 % C, 5,23 % H, 1,30 % N, 2,12 % Na nalezeno: 52,65 % C, 5,06 % H, 1,30 % n, 2,12 % Na

I-spektrum (KBr): 3430, 3066, 1746, 1722, 1660, 1602, 1582, 1526, 1488, 1452, 1374, 1246, 1178, 1150, 1108, 1070, 1052, 1026,1002, 966, 912, 834, 792, 776, 710, 628, 538 cm’¹.

’Η-NMR (DMSO-d₆, D₂O, aceton-d₆): δ 1,10 (6H, s), 1,23 (3H, t), 1,64 (3H, s), 1,70 (H, m), 1,90 (3H, s), 1,99 (H, m), 2,14 (3H, s), 2,37 (3H, s), 2,98 (H, m), 3,74 (H, d), 4,07 (2H, s), 4,13 - 4,26 (3H, m, překiyv), 4,80 (H, br.dd), 4,97 (H, d), 5,09 (H, br.z), 5,44 (H, d), 5,55 (H, d), 5,99 (H, t), 6,34 (H, s), 7,22 (H, t), 7,43-7,69 (10H, m, překiyv, 7,92 (2H, dd), 8,06 (2H, dd).

-54CZ 289871 B6

Sodnou sůl je možno připravit také takto:

K roztoku 70 mg (0,860 mmol) surového (89%) 2'-0-(ethoxykarbonyl)-7-0-fosfonooxy5 methylpaclitaxelu v 2 ml ethylacetátu se přidá za teploty místnosti a za míchání 1,0 ml (0,0875 mmol) 87,5 mM roztoku sodné soli ethylhexanoátu v ethylacetátu, vše se míchá hodinu za teploty místnosti, přidá se 1,2 ml hexanu až do zakalení, a po uchovávání 2 hodiny při -20 °C se odfiltruje jemný amorfní prášek s určitými nesnázemi, jde to totiž velmi pomalu. Získá se tak při použití velmi jemného filtračního papíru 45 mg (70%) sodné soli. Podle vysokotlakové ío kapalinové chromatografie má čistotu 95,2% a obsahuje dle NMR malé množství ethylhexanové kyseliny.

Sůl triethanolaminu se připraví takto:

V 10 ml ethylacetátu se rozpustí 0,69 g (0,593 mmol) 2'-0-(ethoxykarbonyl)-7-0-fosfonooxymethylpaclitaxelu, surového produktu z hydrogenace (podle vysokotlakové kapalinové chromatografie 89%) - uvedené množství je již korigováno s ohledem na nečistoty - roztok se pomalu míchá za přikapávání 5,1 ml (0,95 ekv.) 0,11 M roztoku triethanolaminu v ethylacetátu. Mléčně zakalený roztok, jak se získá tímto postupem, se digeruje 2 hodiny při 0 °C a potom se 20 filtruje jemným filtračním papírem s propláchnutím studeným ethylacetátem. Výtěžek: 499 mg (80%) amorfního, jemného, nikoli elektrostatického prášku, který se suší po dobu noci ve vakuu. Podle vysokotlakové kapalinové chromatografie má látka čistotu 96,6% (kolona C-18, 45% 5nM Q12 + 10 mM amoniumfosfátu, pH 6, 55% acetonitrilu). NMR-spektrum (D₂O/aceton/DMSO: stopy ethylacetátu, ale žádné jiné zjistitelné nečistoty. Analýzou zjištěn di až trihydrát.

Triethanolaminová sůl nižší čistoty, získaná podle jiného postupu v jiném pokuse, byla dále čištěna takto: Asi 2 g triethanolaminové soli bylo rozpuštěno v asi 30% acetonitrilu/vody, roztok byl eluován pod slabým tlakem dusíku kolonou C-18 (Bakerbond) za použití gradientu 20% až 40% acetonitrilu ve vodě, frakce, obsahující očekávanou triethylaminovou sůl byly spojeny, 30 acetonitril byl oddestilován na rotační odparce za sníženého tlaku. Vodné roztoky byly zmrazený a lyofilizovány přes noc; získá se tak 1,4 g triethanolaminové soli s čistotou 97,5%.

Triethanolaminová sůl se dá připravit také takto:

3,0 g (2,64 mol) triethylaminové soli 2'-0-(ethoxykarbonyl)-7-0-fosfonooxymethylpaclitaxelu se rozděluje mezi 60 ml ethylacetátu a 30 ml 5%ního vodného roztoku hydrogensiřičitanu sodného za energického míchání 15 minut při 0 °C. Vodný podíl se oddělí, extrahuje se do 10 ml ethylacetátu, spojené roztoky v tomto rozpouštědle se promyjí za použití 15 ml solanky, a vysuší se nad bezvodým síranem sodným, filtrací se pak získá roztok kyseliny (asi 2,64 mmolu) v asi

70 ml ethylacetátu. K tomuto roztoku se přikapává za teploty místnosti a za chlazení i za energického míchání 0,35 ml (2,64 mmolu) triethanolaminu během 5ti minut, získaná suspense se míchá další hodinu, potom se filtruje, promyje se dvěma dávkami po 15 ml ethylacetátu, a sušením ve vakuu se získá 2,8 g triethylaminové soli ve výtěžku 89%. Podle vysokotlakové kapalinové chromatografie činí index homogenit 98,7%. T.t. nad 157 °C za rozkladu.

Elem. analýza:

pro C₅₆H73N₂O2₃P.2,0 H₂O.0,3 EtOAc vypočteno: 55,60 % C, 6,48 % H, 2,27 % N, KF (H₂O) 2,92 nalezeno: 55,94 % C, 6,59 % H, 2,43 % N, KF (H₂O), 3,50

-55CZ 289871 B6

Triethylaminová sůl byla připravena takto:

Do roztoku 10 g (8,23 mmol) 2'-0-(ethoxykarbonyI)-7-0-dibezyifosfonooymethylpaclitaxelu v 350 ml ethylacetátu se vnese za teploty místnosti 2g (20%ní zatížení) 10%ního palladia na uhlí, získaná suspense se zbaví vzduchu evakováním, připustí se argon, a tento postup se opakuje dvakrát. Argon se potom vypudí vodíkem se stejným postupem odplynění. Získaná suspenze se potom míchá 16 hodin za energického potřásání a pod tlakem vodíku 133 až 200 kPa, vodík se potom vypustí a nahradí argonem za evakuování, což se opakuje třikrát. Získaná suspense se filtruje vrstvou celitu, k homogennímu filtrátu se přidá 1,14 ml (8,23 mmol) ethylaminu za energického míchání během 5 minut a vzniklá jemná bílá suspense se míchá dalších 30 minut. Filtruje se nučí ze slinutého skla, velikost pórů E, podíl na filtru se suší za vysokého vakua 16 hodin a získá se tak 8,22 g triethylaminové soli, jak je uvedena v nadpise, výtěžek 88%. Podle vysokotlakové kapalinové chromatografie odpovídá homogenitní index 97,4%. B.t. nad 178 °C (za rozkladu).

Analýza:

pro C57H₇₃N202oP.4m5 H₂O vypočteno: 56,19 % C, 6,79 % H, 2,30 % N, KF (H₂O) 6,65 nalezeno. 56,33 % C, 6,87 % H, 2,32 % N, KF (H₂O) 7,96

Jiný způsob přípravy triethylaminové soli:

V baňce objemu 250 ml se rozpustí 5,67 g (4,66 mmol) 2'-0-ethoxykarbonyl)-7-0-dibenzylfosfonooxymethylpaclitaxelu v 150 ml ethylacetátu, baňka se uzavře trojcestnou závěrou s jedním napojením na vakuum a druhým na přívod argonu. Potom se vakuem odčerpá vzduch a dále se napustí argon, což se opakuje dvakrát. Vnese se 0,85 g 10%ního palladia na uhlí, přívod argonu se nahradí přívodem vodíku, baňka se opět částečně evakuuje a potom naplní vodíkem, což se opakuje čtyřikrát. Získaná reakční směs se míchá přes noc pod tlakem vodíku ze zásobníku, a za 17 hodin po zahájení hydrogenace se zjistí chromatografií na tenké vrstvě, že v reakční směsi není výchozí látka. Přísun vodíku se nahradí přísunem argonu, vodík se vypudí argonem, což se opakuje dvakrát. Potom se obsah baňky vakuově odfiltruje přes vrstvu celitu, celitový uzávěr se propláchne dvakrát za použití 10 ml ethylacetátu, filtráty se spojí a přidá se k nim 0,650 ml (4,66 mmol) triethylaminu. Vzniklá suspenze se míchá za teploty místnosti 2 hodiny, na rotační odparce se objem reakční směsi sníží asi na 150 ml, pevný podíl se odfiltruje, promyje dvakrát za užití vždy 10 ml ethylacetátu a sušením ve vakuu se získá ve výtěžku 4,76 g (90%) triethylaminová sůl, jak je její sloužení uvedeno v nadpise. Je to bílý prášek, podle vysokotlakové kapalinové chromatografie odpovídá index homogenity 96,6%.

Jiný způsob přípravy triethylaminové soli:

V baňce objemu 250 ml se rozpustí 5,17 g (4,25 mmol) 2'-0-(ethoxykarbonyl)-7-0-dibenzylfosfonooxymethylpaclitaxelu v 150 ml ethylacetátu, na baňku se nasadí trojhrdlý nástavec, napojený jak na vakuum, tak na přívod argonu. Za použití prvého z nástavců se baňka částečně evakuuje, pomocí druhého se napustí argon, a tento postup se opakuje dvakrát. Potom se vnese 0,86 g 10%ního palladia na uhlí, přívod argonu se nahradí přívodem vodíku, baňka se opět částečně evakuuje a pak naplní vodíkem, což se provede ještě pětkrát. Reakční směs, takto upravená se míchá za teploty místnosti v prostředí vodíku přes noc. Po 16 hodinách po zahájení přívodu se zajistí chromatografií na tenké vrstvě, že výchozí látka vymizela, vodíkový přívod se opět nahradí přívodem argonu, baňka se částečně evakuuje, naplní argonem, což se opakuje ještě dvakrát. Potom se obsah filtruje použitím vakua přes vrstvu celitu, ten se pak propláchne čtyřikrát vždy za použití 10 ml ethylacetátu, do filtrátu se za míchání připustí 0,590 ml (4,25 mmol) triethylaminu a získaná suspenze se míchá za teploty místnosti hodinu, dále se na rotační odparce zmenší objem reakční směsi asi na 140 ml, pevný podíl se odsaje, promyje použitím 10 ml

-56CZ 289871 B6 ethylacetátu, načež se sušením ve vakuu izoluje 4,46 g (92%) triethylaminové soli, jak je uvedena v nadpise, ve formě bílého prášku. Index homogenity dle vysokotlakové kapalinové chromatografie: 96,7%.

Sůl lysinu lze připravit takto:

Do suspense 3 g 10%ního palladia na uhlí v 600 ml ethanolu se přidává po částech 15,0 g (12,34 mmol) 2'-0-(ethoxykarbonyl)-7-0-dibenzylfosfonooxymethylpaclitaxelu za chlazení na 0 °C. Získaná suspense se odplyní evakuováním vzduchu a napuštěním argonu, což se opakuje dvakrát. Argon se dále vypudí vodíkem použitím stejného postupu za energického míchání. Směs se potom míchá za teploty 0 °C 2 hodiny, chladicí lázeň se odstraní a v míchání za teploty místnosti se pokračuje 4,5 hodin. Vodík se potom nahradí vakuováním a náhradou argonem, což se opakuje třikrát, a následuje filtrace vrstvičkou celitu opět pod argone. K získanému filtrátu se pomalu přidává roztok 1,63 g (0,94 ekv.) lysinu v 20 ml směsi 1 : 1 vody a ethanolu, což trvá za usilovného míchání 5 minut. Získaná bílá suspense se zředí přidáním 110 ml destilované vody a vše se míchá 30 minut. Vyhřátím na asi 55 °C vznikne čirý homogenní roztok, který se uchovává v lázni teploty 50 °C, načež se pomalu vychladí na teplotu místnosti a po 16 hodinách se udržuje 3 hodiny na teplotě 4 °C. Po filtraci a sušení za neustálého odsávání 16 hodin se získá takto 11,8 g (asi 80%) zmíněné soli lysinu o homogenitním indexu 99,0% dle zjištění vysokotlakovou kapalinovou chromatografií. T.t. nad 170 °C (za rozkl.).

Analýza:

prO C57H72N3O₂21P.8,0 H₂O vypočteno: 51,62 % C, 6,69 % H, 3,17 % N, KF (H₂O)10,87 nalezeno: 51,76 % C, 6,57 % H, 3,48 % N, KF (H₂O)11,2

Sůl ethanolaminu se připraví takto:

Za teploty 0 °C se za energického míchání při teplotě 0 °C roztřepává 3,0 g (2,64 mmol) triethylaminové soli 2'-0-(ethoxykarbonyl)-7-0-fosfonooxymethylpaclitaxelu mezi 60 ml ethylacetátu a 30 ml 5%ního roztoku hydrogensíranu sodného. Vodný podíl se po oddělení extrahuje do 15 ml ethylacetátu, roztoky v tomto rozpouštědle se spojí, a po promytí použitím 15 ml solanky, sušení bezvodým síranem sodným a filtraci se získá roztok asi 2,64 mmol volné kyseliny v asi 70 ml ethylacetátu. K tomuto roztoku se přikapává za teploty místnosti a energického míchání roztok 0,15 ml (2,64 mmol) ethanolaminu v 5 ml ethylacetátu, což trvá asi 5 minut. Vzniklá suspense se míchá hodinu, pak se filtruje, podíl na filtru se promyje použitím 15 ml ethylacetátu, to se ještě jednou opakuje, a sušením ve vakuu se takto získají 2,6 g (89%) ethanolaminové soli, jak je uvedena v nadpise. Podle vysokotlakové kapalinové chromatografie odpovídá homogenitní index 97,8%. T.t. nad 130 °C (za rozkl.).

Analýza:

pro C53H65N₂O₂]P—2,5 H₂O vypočteno: 55,73 % C, 6,18 % H, 2,45 % N, KF(H₂O) 3,94 nalezeno: 55,76 % C, 6,39 % H, 2,45 % N, KF(H₂O) 6,00

Argininová sůl se připraví takto:

Do suspense 6 g 10%ního palladia na uhlí v prostředí 900 ml ethanolu se za teploty 0 °C přidává po částech 30,Og (24,69 mmol) 2'-0-(ethoxykarbonyl)-7-0-dibenzylfosfonooxymethylpaclitaxelu, získaná suspense se odplyní evakuováním vzduchu, který se nahradí argonem, což se provede ještě dvakrát. Argon se potom nahradí vodíkem s tím, že se postup rovněž opakuje ještě

-57CZ 289871 B6 za energického míchání dvakrát, a reakční směs se míchá za chlazení na 0 °C 2 hodiny. Po odstranění chladicí lázně se reakční roztok míchá za teploty místnosti dalších 24 hodin, vodík se potom nahradí argonem podle výše uvedeného schématu, což se třikrát opakuje, následuje filtrace vrstvou celitu opět pod argonem, filtrát se rozdělí na dvě stejné části a do každé z nich se přidá 190 ml ethanolu. Do jedné části objemu asi 630 ml se pomalu přidává roztok 2,0 g (0,94 ekv.) argininu v 20 ml směsi vody a ethanolu (2:1), to během 5 mnut za energického míchání. Do takto získané bílé suspense se přidá 100 ml destilované vody, reakční směs se míchá 30 minut, vyhřeje se asi na 60 °C, filtruje za horka a filtrát se udržuje v lázni teploty 50 °C, potom se ochladí na teplotu místnosti, ponechá tak 2 hodiny, a další 2 hodiny se uchovává za teploty 4 °C. Pevný podíl se odfiltruje, promyje se za použití lOOml ethanolu s obsahem 3 % vody a sušením za neustálého odsávání po 16 hodin se získá takto 12,95 g (asi 86%) argininové soli, jak je uvedena v nadpise, homogenitní index 96,7%.

12,95 g tohoto produktu se rozpustí za teploty 55 °C v 700 ml ethanolu s obsahem 15% vody, roztok se ochladí na 30 °C, udržuje se takto 3,5 hodin, potom za teploty místnosti 16 hodin a 3 hodiny při 4 °C. Vyloučené krystaly se odsají, promyjí použitím dvou podílů po 50 ml chlazeného ethanolu s obsahem 2% vody, načež se látka suší 4 hodiny sáním a 16 hodin za hlubokého vakua, čímž se získá 10,2 g (asi 80%) argininové soli, jak je uvedena v nadpise, homogenitní index 98,5%, T.t. 176 °C (za rozkl.).

Analýza:

pro C₅7H72N₅O₂₂P.6,4 H₂O vypočteno: 51,65 % C, 6,45 % H, 5,28 % N, KF (H₂O) 8,7 nalezeno: 51,86 % C, 6,65 % H, 5,53 % N, KF (H₂O) 8,72

Sůl N-methylglukaminu se připravuje takto:

Po částech se vnáší 30,0 g (24,69 mmol) 2'-0-(ethoxykarbonyl)-7-0-dibenzylfosfonooxymethylpaclitaxelu do suspense 6 g 10%ního palladia na uhlí v 900 ml ethanolu za chlazení na 0°C. Získaná suspense se odplyní evakuováním vzduchu, který se nahradí argonem, což se opakuje dvakrát, a argon se nahradí stejným způsobem za energického míchání vodíkem. Reakční směs se dále míchá za teploty 0 °C 2 hodiny, chladicí lázeň se odstraní a v míchání se pokračuje 24 hodin za teploty místnosti. Podle výše popsaného způsobu se opět vypudí evakuováním vodík argonem což se opakuje třikrát, následuje filtrace vrstvou celitu opět pod argonem, filtrát se rozdělí na 2 stejné části a do každé z nichž se přidá 190 ml ethanolu. Do jednoho z těchto podílů (objem asi 630 ml) se přidává pomalu roztok 2,24 g (0,94 ekv.) N-methylglukaminu v 20 ml směsi vody a ethanolu (1 : 1), což trvá za energického míchání 5 minut. Do vzniklé bílé suspense se přidá 100 ml destilované vody, suspense se míchá 30 minut, potom se vyhřeje asi na 49 °C a vzniklý čirý roztok se udržuje v lázni teploty 50 °C, ochladí se na teplotu místnosti, udržuje na ní 2 hodiny a potom 1,5 hodin na teplotě 4°C. Další filtrací, promytím za použití 100 ml ethanolu s obsahem 3% vody a sušením za teploty místnosti po 16 hodin se získá 9,65 g (64%) soli N-methylglukaminu, jak je uvedena v nadpise, homogenitní index 96,4%.

Tato látka (9,65 g) se rozpustí za teploty 52 °C v 450 ml ethanolu s obsahem 15% vody, roztok se ochladí na 28 °C, udržuje takto 3,5 hodin, dále 16 hodin za teploty místnosti a 3 hodiny za teploty 4 °C. Vzniklé krystaly se odfiltrují, promyjí se dvakrát použitím 50 ml vychlazeného ethanolu s obsahem 2% vody, suší se 4 hodiny odsáváním, potom 16 hodin za hlubokého vakua a získá se tak 7,5 g (80%) N-glukaminové soli, jak je uvedena v nadpise (homogenitní index podle výsledků vysokotlakové kapalinové chromatografíe 98,6%), t.t. nad 154 °C (za rokl.).

-58CZ 289871 B6

Analýza:

pro C5₈H75N2O259.5,O H₂O vypočteno: 52,72 % C, 6,48 % H, 2,12 % N, KF (H₂O) 6,82 nalezeno: 53,09 % C, 6,50 % H, 2,08 % N, KF (H₂O) 7,12

Příklad 4

2'-0-(Fosfonooxymethyl)paclitaxel (a) Příprava 2'-0-(methylthiomethyl)-7-0-(triethylsilyl)paclitaxelu

AcO 0

/ bAo

0(O)CC₅H₅

Do vychlazeného roztoku (0 až -5 °C) 2,46 g (2,5439 mmol) 7-O-(triethylsilyl)paclitaxelu v 100 ml suchého ácetonitrilu se přidá 1,348 g, tedy 1,59 ml (21,6976 mmol) dimethylsulfidu a potom 2,628 g (10,8488 mmol) benzoylperoxidu, heterogenní směs se míchá hodinu za chlazení na 0 °C, dále se udržuje 18 hodin za teploty 5 °C. Vznikne tím žlutý roztok, který se zahustí do sucha a čistěním na koloně silikagelu (za eluování směsí ethylacetátu a hexanu v poměrech 1 : 4, 1 : 3 a 1 : 2) se získá 1,0 g (38%) sloučeniny, jak je uvedena v nadpise. Ta se použije v dalším stupni.

MS: (M + H)⁺, 1028; (M+Na)⁺, 1050; (M+K)⁺, 1086.

(b) Příprava 2'-O-methylthiomethyl)-paclitaxelu

AcO.

O

II

O(O)CC₆H₅

-59CZ 289871 B6

Do ochlazeného roztoku (-15 °C) 1,0 g (0,9737 mmol) produktu ze stupně (a) v 30 ml suchého acetonitrilu se přikapává 0,5 N roztok chlorovodíku v množství 2 ml, a vzniklý roztok se míchá hodinu za chlazení na -15 °C a 18 hodin za teploty 5 °C. Dále se zředí přidáním 20 ml ethylacetátu, roztok se promyje vychlazeným 6%ním roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, po vysušení bezvodým síranem hořečnatým a filtraci se zahustí do sucha. Získaný podíl se čistí na destičkách se silikagelem za eluování methylenchloridem s 15% acetonitrilu a získá se tím 280 mg (31,4%) sloučeniny, jak je uvedena v nadpise.

Infrač.spektrum (KBr): 3446, 3064, 2940,1726, 1666, 1582,1516,1486

NMR-spektrum (CDC1₃): δ 1,118 (s, 5H), 1,229 (s, RH), 1,662 (s, 3H), 1,688 (s, 3H), 1,871 (s, 3H), 2,209 (s, 3H), 2,450 (s, 3H), 3,800 (d, H), 4,119 (d, H), 4,305 (d, H), 4,413 (m, H), 4,563 (d, H), 4,703 (d, H), 4,940 (d, H), 4,958 (dd, H), 5,667 (d, H), 5,822 (dd, H), 6,263 (m, 2H), 7,019 (d, NH), 7,293-8,127 (m, 15H).

MS: (M+H)⁺, 914; (M+Na)⁺, 936; M+K)⁺, 952.

HRMS: MH⁺: 914,3394 (vypočteno 914, 3422).

(c) Příprava 2'-O-(dibenzylfosfonooxymethyl)-paclitaxelu

C<H.C0NH

(C^CI^O^COOCHgO

Do míchaného roztoku 0,89 g (0,9748 mmol) produktu ze stupně (b) v 12 ml suchého 1,2-dichlorethanu se přidá 1,0 g práškovaného 0,4 nm molekulárního síta, načež se přidává po kapkách roztok směsi 0,33 g (1,4622 mmol) N-jodimidu kyseliny jantarové a 0,41 g (1,4622 mmol) dibenzylesteru kyseliny fosforečné v 8 ml suchého tetrahydrofuranu. Směs se míchá hodinu za teploty místnosti, potom se filtruje celitem, filtrát se zahustí do sucha a červený zbytek se rozpustí v 50 ml ethylacetátu. Tento roztok se promyje vodným 6ti%ním roztokem hydrogensiřičitanu sodného, vychlazeným a roztokem hydrogenuhličitanu sodného téže koncentrace, rovněž vychlazeným a solankou. Po vysušení bezvodým síranem hořečnatým se zahuštěním filtrátu do sucha získá pěna, ta se čistí na destičkách se silikagelem, eluování methylenchloridem s 20% acetonitrilu, a ve výtěžku 0,77 g (69%) se získá čistý produkt.

IČ (KBr): 3854, 3744, 3362,3066,1960,1722,1602,1580.

NMR (CDCI3) δ 1,075 (s, 3H), 1,167 (s, 3H), 1,651 (s, 3H), 1,799 (s, 3H), 2,209 (s, 3H), 2,296 (s, 3H), 2,464 (m, H), 3,686 (d, H), 4,121 (d, H), 4,240 (d, H), 4,293 (m, H), 4,808-^1,957 (m, 6H), 5,006 (m, H), 5,565-6,649 (m 2H), 6,034 (t, H), 6,194 (3, H), 7,100-8,132 (m, 3H).

-60CZ 289871 B6

MS (M+H)⁺, 1144; (M+Na)⁺, 1166, (M+K)⁺, 1182.

(d) Příprava 2'-0-(fosfonooxymethyl)-paclitaxelu

Směs 0,90 g (0,7873 mmol) produktu ze stupně (c) a 1,0 g 10%ního palladia na uhlí se v prostředí 20 ml ethylacetátu hydrogenuje za tlaku 400 kPa vodíku 24 hodin. Reakční směs se filtruje přes celit a filtrát se zahustí do sucha. Zbytek se čistí na destičkách se silikagelem (methylenchlorid + 40% methanolu), a získá se tím produkt, jak je uveden v názvu ve výtěžku 0,254 g (33,4%). T.t. 202 až 205 °C (za rozkl.)

IČ (KBr): 3438, 3066, 2942,1722, 1652,1602 cm’¹

NMR (aceton-d6/D₂O): δ 1,081 (s, 6H), 1,571 (s, 3H), 1,847 (s, 3H), 2,115 (s, 3H), 2,357 (s, 3H), 3,707 (s, H), 4,08 (m, 2H), 4,275 (m, H), 4,941-5,085 (m, 4H), 5,231 (t, H), 5,430 (d, H), 5,544 (d, H), 5,970 (t, H), 6,376 (s, H), 6,961-8,017 (m, 16 H).

MS: (M+Na)⁺, 986; (M+K)⁺, 1002; (M + 2Na - H)⁺, 1008; (M+Na+K-H)⁺, 1024; (M+2K-H)⁺, 1040.

HRMS: MNa⁺, 986, 2955 (vypočteno 986,2976).

Příklad 5

Sodná sůl 2',7-O-bis-(fosfonooxymethyl)-paclitaxelu

-61 CZ 289871 B6

Pevný benzoylperoxid (1,995 g, 8 mmol) se vnese do míchaného roztoku 0,853 g, 1 mmol) paclitaxelu a 1,465 g (20 mmol) dimethylsulfidu v 20 ml acetonitrilu za teploty 0 °C. Reakční směs se míchá energicky po 3 hodiny za chlazení na 0 °C. Postup reakce se sleduje chromatografií na tenké vrstvě v hexanu a ethylacetátu (1 : 1), Rf (paclitaxelu) ⁼ 0,24, Rf (produktu) ⁼ 0,60. Jakmile výchozí materiál vymizí (cca za 3 hodiny), reakce se přeruší odpařením rozpouštědel do sucha za teploty 25 °C s použitím místní vodní vývěvy. Suchý zbytek se oddělí za použití kolony se silikagelem (EM Science, 40 až 63 pm), 100 ml suchého silikagelu, kolona v průměru 1 cm, rozpouštědlový systém: hexan: ethylacetát (3:2), objem každé z frakcí asi 25 ml. Sloučenina, jak je vedena v názvu (0,515 g, výtěžek 53%) se izoluje z frakcí 15 až 19.

MS (FAB/matrix ΝΟΒΑ, Nal, KI): (M+H)⁺, m/z 974; (M+Na)⁺, m/z 996; (M+K)⁺, m/z 1012

UF-spektrum (MeOH): = 204 nm, E(l%/1 cm) = 243,45, X_max - 228 nm, E(l%/1 cm) = 313,99.

IČ (KBr): 2440, 3064, 2926, 1724, 1668, 1602, 1582, 1514, 1484, 1452, 1372,1314,1266,1242, 1178,1142,1068,1026, 990, 916, 886, 848, 800, 774, 710, 646, 606, 570, 540, 480 cm'¹.

'H-NMR (CDCls), 6: 1,17 (3H, s), 1,20 (3H, s), 1,68 (3H, s), 1,74 (3H, s), 1,84 (H, dd), 2,04 (3H, d), 2,09 (3H, s), 2,15 (3H, s, překryv s (H, m), 2,37 (H, dd), 2,51 (3H, s), 2,79 (H, ddd), 3,78 (H, d), 4,18 (H, d), 4,28 (H, m), 4,31 (H, d), 4,53—4,74 (4H, dva překryvy AB m), 4,93 (H, d), 4,95 (H, d), 5,68 (H, d), 5,82 (H, dd), 6,24 (H, dd), 6,54 (H, s), 7,05 (H, d), 7,28-7,59 (10H, překryv m), 7,57 (H, m), 7,76 (2H, d), 8,09 (2H, d).

Příprava 2'-7-0-bis-(Dibenzylfosfonooxymethyl)-paclitaxelu (c₆h₅ch₂o)

Roztok 135 mg (0,5 mmol) N-jodimidu kyseliny jantarové a 167 mg (0,5 mmol) dibenzylesteru kyseliny fosforečné v 8 ml suchého tetrahydrofuranu se vnese do směsi 198 mg (0,2 mmol) 2', 7-O-bis-(methylthiomethyl)-paclitaxelu a asi 200 mg molekulárního síta 0,5 nm v 12 ml methylenchloridu za teploty místnosti a reakční směs se míchá 1,5 hodin. Molekulární síto se dále odfiltruje celitem, ten se promyje methylenchloridem (10 ml) a zahuštěním spojených organických roztoků do sucha za teploty místnosti a vodní vývěvou se získá zbytek, který se rozpustí v 100 ml ethylacetátu, roztok se v děličce vymyje po protřepání použitím 50 ml l%ního thiosíranu sodného, 50 ml 0,5 M roztoku hydrogenuhličitanu sodného a dvakrát vodou, vždy 50 ml. Organický roztok se dále po vysušení bezvodým síranem hořečnatým a filtraci zahustí do sucha, zbytek se znovu rozpustí v 1 ml ethylacetátu a produkt se vysráží přidáním 50 ml směsi ethyletheru a hexanu (1 : 1). Po filtraci se promyje dvakrát použitím vždy 50 ml téže směsi. Surový produkt byl získán ve výtěžku 218 mg (74%). Čistí se tak, že se nanese jeho roztok v3 ml methylenchloridu na silikagelovou kolonku průměru 1,8 cm a délky 2,5 cm stím, že se

-62CZ 289871 B6 produkt eluuje do 50 ml směsi methylenchloridu a ethylacetátu (3:1). Sloučenina, jak je uvedena v nadpise, se získá ve výtěžku 172,7 g (59,3%).

MS (FAB, matrice NOBA/Nal, ΚΙ): (M + Na)⁺, m/u 1456; (M + K)⁺, m/z 1472

Ultrafial. spektrum (MeCN): = 194 nm E(l%/lcm) = 1078,36.

X_max = 228 nm E(l%/lcm) = 31,95

IČ-spektrum (KBr): 3430, 3066, 3032, 2958, 1744, 1726, 1664, 1602, 1582, 1532, 1488, 1456, 1372,1270,1244,1158,1108, 1068, 1016,1000, 952, 886, 800, 776, 738, 698, 604,498 cm^-1.

’N-NMR (CDCIj), 5: 1,12 (3H, s), 1,14 (SH, s), 1,56 (H, m), 1,67 (3H, s), 1,84 (3H, d), 1,90 (H, m), 2,17 (3H, s), 2,29 (3H, s), 2,73 (H, m), 3,73 (H, s), 4,08 (H, d), 4,15 (H, m), 4,20 (H, d), 4,77 (H, m), 4,79 (H, d), 4,91-5,04 (10 H, překryv m), 5,25 (H, dd), 5,38 (H, dd), 5,54-5,64 (2H, překryv m), 5,99 (H, br, dd), 6,25 (h, s), 7,11-7,14 (2H, m), 7,24-7,64 (28H, překryv m), 7,94 (2H, dd), 8,04 (2H, dd), 8,30 (H, d).

(c) Příprava 2',7-O-bis-(fosfonooxymethylpaclitaxelu ve formě sodné soli:

Vzorec 112 mg (0,078 mmol) 2',7-O-bis-(dienzylfosfonooxymethyl)-paclitaxelu se rozpustí v 7 ml ethylacetátu a po přidání 50 mg 10%ního palladia na uhlí a reakční směs hydrogenuje 2 hodiny za tlaku 400 kPa. Katalyzátor se odfiltruje vrstvou celitu, ten se propláchne použitím 10 ml ethylacetátu, spojený roztok v tomto rozpouštědle se po přidání 20 mg (3 ekv.) pevného hydrogenuhličitanu sodného a filtraci zahustí do sucha. Suchý zbytek se opět rozpustí ve směsi 5 ml vody a acetonu (objemově 4 : 1) a čistí se sloupcovou chromatografií na koloně C—18 v reversní fázi (55 až 105 μ, 50 ml suchého C-18, průměr 1,8 cm, voda a aceton, objemově 4 : 1). Eluující podíl se sleduje na analytické vysokotlakové kapalinové Jones-ově C-18 koloně (15 cm, 1 ml/min, λ = 230 cm), acetonitril + fosfátový pufr pH 6 (objemově 50 : 50) s přidáním Q 12 iontového párového kokteilu (Regis), retenční doba = 4,7 min. Frakce, obsahující sloučeninu, uvedenou v nadpise, se spojí, aceton se oddestiluje ve vakuu vodní vývěvy při 20 °C, a zbylý roztok se lyofilizuje. Získá se 44,2 mg sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, výtěžek 58,8%.

MS (FAB/matrice NOBA/Nal, ΚΙ): (M + H)⁺, m/z 1118; (M + Na)⁺, m/z 1140.

UF (MeCN): = 192 nm, E( 1 %/l cm) = 129,73; = 230 nm E (1%/lcm) = 26,43

-63CZ 289871 B6

IČ(KBr): 3430,3066,2956,1724, 1658,1604,1582,1520, 1486,1452, 1374,1316, 1256,1152, 1110, 1070,1026, 966, 914, 802, 772, 710, 538 cm’¹.

’Η-NMR (aceton.dfi/DzO): δ 0,97 (3H, s), 1,02 (3H, s), 1,47 (H, m), 1,54 (3H, s), 1,70 (H, m), 5 1,75 (3H, s), 1,85 (H, m), 2,11 (3H, s), 2,30 (3H, s), 2,88 (H, m), 3,64 (H, d), 4,03 (H, m), 4,06 (H, d), 4,16 (H, d), 4,74 (H, m), 4,86 (H, m), 5,11 (H, br.t). 5,22 (H, d), 5,42 (H, d), 5,90 (H, br.t), 6,21 (H, s), 7,06 (H, br.t), 7,32-7,69 (10H, překryv), 7,80 (2H, d), 7,93 (2H, d).

Příklad 6

7-O-methylthiomethylbaccatin ΠΙ

Do roztoku 27 g (27,4 mmol) 2'-O-ethyloxykarbonyl-7-O-methylthiomethylpaclitaxelu [sloučenina z příkladu 3(b)J v 100 ml tetrahydrofuranu a 500 ml methanolu se přidá 2,7 g čerstvě rozetřeného (19 mmol) uhličitanu draselného, roztok se míchá 30 minut, neutralizuje se pryskyřicí IR-120 (Hť), a po filtraci se zahustí. Surový produkt se potom rozpustí v 200 ml dichlormethanu a po přidání 10 g tetramethylamoniumborohydridu se reakční směs míchá 20 24 hodin. Po zředění dichlormethanem se roztok promyje vodou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, organická frakce se vysuší bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se filtrát zahustí. Zbytek se chromatografuje na silikagelu (hexan + ethylacetát, 1:1) a získá se tak 9,4 g (53%) sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, t.t. 269 °C.

FABMS (ΝΟΒΑ) M+H vypočteno pro C33H43SO11: 647, nalezeno 647.

IČ (KBr): 3474,1746,1724, 1712,1270, 1240,1070 cm’¹.

’Η-NMR (CDCI3, 300 MHz): δ 8,08 (d, J = 7,1 Hz, 2H), 7,58 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,45 (t, J = 7,8 30 Hz), 2H), 6,55 (s, 1H), 4,94 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 4,83 (br q, J = 5,1 Hz), 4,66 (ABq, J = 14,7,

12,3 Hz, 2H), 4,30 (m, 2H), 4,13 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,91 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 2,79 (m, 1H), 2,27 (s, 3H), 2,25 (m, 2H), 2,19 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,10 (s, 4H), 1,81 (m, 1H), 1,72 (s, 3H), 1,61 (m, 2H), 1,16 (s, 3H), 1,03 (s, 3H).

-64CZ 289871 B6

Příklad 7

T riethanolaminová sůl 3 '-N-debenzoyl-3 '-desfenyl-3 '-N-(terc -butoxykarbony l)-3 '-(2-furyl)2'-0-ethoxykarbonyl-7-0-fosfonooxymethylpyclitaxelu.

(a) Příprava 3 '-N-debenzoyl-3 '-desfenyl-3 '-N-(terc -butoxykarbonyl)-3 '-(2-furyl)-7-C)methy lth iopacl itaxel

Do roztoku 0,40 ml (1,90 mmol) HMDS v 15 ml tetrahydrofuranu se přidá roztok 0,75 ml, 2,5 M v hexanu, 1,88 mmol) a vše se míchá 5 minut za vychlazení na -55 °C. K tomuto roztoku se přidá 1,03 g (1,59 mmol) 7-MTM baccatinu ΠΙ (sloučeniny z příkladu 6) v 10 ml tetrahydrofuranu a vše se míchá 10 minut před přidáním 10 ml roztoku 883 mg, 2,40 mmol) (3R,4R)-l-(terc.butoxykarbonyl)-4-(2-furyl)-3-(triethylsilyloxy)-2-azetidinonu. Chladicí lázeň se odejme a nahradí se lázní teploty 0 °C, a reakční směs se míchá po 30 minut. Roztok se zředí ethylacetátem, a získaný roztok se promyje nasyceným roztokem chloridu amonného, a po vysušení bezvodým síranem hořečnatým se po filtraci roztok zahustí. Zbytek se chromatografuje na silikagelu (2,5 : 1 hexanu k ethylacetátu) a získá se tak 1,5 g (93%) kondenzovaného produktu 3'-Ndebenzoyl-3'-desfenyl-3'-N-(terc.-butoxykarbonyl)-3'-(2-furyl)-7-0-methylthiomethyl-2'O-triethylsilylpaclitaxelu.

FABMS (ΝΟΒΑ), N + Na, vypočteno pro C30H71NSS1O16,1036, nalezeno 1036

IČ (film): 3446 (s), 1720,1368, 1242,1166,1144,1124,1066 cm'¹.

'H-NMR (CDCI3, 300 MHz), δ 8,07 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,56 (m, 1H), 7,46 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 7,36 (m, 1H), 6,56 (s, 1H), 6,33 (m, 1H), 6,20 (m, 2H), 5,67 (d, J=6,5 Hz, 1H), 5,29 (br.s., 2H), 4,94 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,65 (s, 2H), 4,65 (s, 2H), 4,28 (m, 2H), 4,1 (d, J =8,8 Hz, 1H), 3,89 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 2,80 (m, 1H), 2,46 (s, 3H), 2,37 (m, 1H), 2,22 (m, 1H), 2,16 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 1,84 (m, 1H), 1,74 (s, 3H), 1,65 (m, 1H), 1,33 (s, 9H), 1,20 (s, 3H), 1,19 (s, 3H), 0,81 (t, J = 7,8 Hz, 9 H), 0,47 (m, 6H).

¹³C NMR (CDCI3, 75,5 Hz) δ 202.0, 171,2, 170,3, 169,3, 167,1, 155,3, 152,0, 141,9, 141,0,

133,6, 132,9, 130,2, 129,2, 128,7, 110,7, 107,3, 84,0, 81,1, 80,2, 78,7, 76,1, 75,7, 74,7, 74,1,

72,4, 71,1, 57,4, 52,8, 47,1, 43,3, 35,2, 33,0, 28,1, 26,3, 22,9, 21,2, 21,0, 15,0, 14,5, 10,9, 6,5,

4,3.

Do roztoku 330 mg (0,32 mmol) 2'-triethylsilyletheru, jak byl získán zde výše, v 7 ml tetrahydrofuranu se přidá 0,35 ml (0,35 mmol) tetrabutylamoniumfluoridu jako 1M roztoku v tetrahydrofuranu a reakční směs se míchá 10 minut. Po zředění ethylacetátem se roztok

-65CZ 289871 B6 promyje solankou, vysuší se nad bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci zahustí; zbytek se chromatografuje na silikagelu (hexan/ethylacetát, 2 : 1) a získá se tak 301 mg (95%) sloučeniny, jak je uvedena v nadpise.

FABMS/NOBA), Μ + H, pro C45H58NO16S, vypočteno: 900, nalezeno: 900

IČ (film) 3442,1720,1242,1066,1026 cm’¹ ’H NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 8,07 (d, J=7,3 Hz, 2H), 7,57 (t, J=7,3 Hz, 1H), 7,45 (t, J=7,8 Hz, 2H), 7,38 (s, 1H), 6,53 (s, 1H), 6,34 (d, J=3,2 Hz, 1H), 6,29 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,17 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 5,65 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 5,29 (m, 2H), 4,92 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,64 (d, J = 4,6 Hz, 2H), 4,29 (m, 2H), 4,14 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 3,86 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 3,37 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 2,77 (m, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,32 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,77 (m, 3H), 1,73 (s, 3H), 1,33 (s, 9H), 1,17 (s, 3H), 1,12 (s, 3H).

^,3C NMR (CDClj, 75,5 Hz) δ 202,0, 172,6, 170,3, 169,2, 167,0, 155,2, 151,3, 142,4, 140,4,

133,7, 133,2, 130,2, 129,1, 128,7, 110,7, 107,4, 83,9, 81,2, 80,5, 78,6, 76,5, 76,1, 75,4, 74,6,

(b) Příprava 3 '-N-debenzoyl-4'-desfenyl-3 '-N-(terc -butoxykarbonyl)-3'-fuiy 1)-2-0ethoxykarbonyl-7-O-methylthiomethylpaclitaxelu.

Do roztoku 864 mg (0,96 mmol) produktu ze stupně (a) v 50 ml dichlormethanu se přidá za chlazení na 0 °C 2,0 ml diisopropylethylaminu a 0,50 ml (5,25 mmol) ethylesteru kyseliny chloromravenčí, a reakční směs se míchá 4 hodiny. Po zředění dichlormethanem se promytí nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vysušení bezvodým síranem hořečnatým se filtrát zahustí a zbytek se chromatografuje na silikagelu (hexan/ethylacetát, 1:1). Tak se získá 884 mg (95%) 2'-ethylkarbonátu sloučeniny, jak je uvedena v nadpise.

FABMS (ΝΟΒΑ), Μ + H, pro C₄8H₆₂NOi₈S, vypočteno: 972,3688, nalezeno: 972,3654

IČ (film): 1752,1720,1370,1244,1196,1176, 1064 cm’¹.

*H NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 8,09 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,57 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,46 (t, J=7,8 Hz, 2H), 7,38 (s, 1H), 6,55 (s, 1H), 6,35 (m, 1H), 6,27 (m, 1H), 6,22 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 5,67 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 5,51 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 5,34 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,25 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 4,95 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 4,65 (s, 2H), 4,30 (m, 2H), 4,22 (m, 2H), 3,88 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 2,81 (m, 1H), 2,41 (s, 3H), 2,36 - 2,21 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,09 )s, 3H), 1,83 (m, 1H), 1,74 (s, 3H), 1,67 (s, 1H), 1,59 (s, 1H), 1,34 (s, 9H), 1,29 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,20 (s,3H), 1,18 (s, 3H).

^,3C NMR (CDCI3, 75,5 Hz) δ 202,1, 169,9, 169,1, 167,6, 167,0, 154,0, 150,1, 142,6, 141,0,

133,6, 132,9, 130,2, 129,2, 128,7, 110,7, 107,5, 83,9, 81,1, 80,7, 78,7, 76,0, 75,7, 75,1, 74,7,

-66CZ 289871 B6

(c) Příprava 3 '-N-debenzoy 1-3 '-desfenyl-3 '-N-(terc -butoxykarbonyl)-3 '-(2-furyl)-2'-Oethoxykarbonyl-7-O-dibenzylfosfonooxymethylpaclitaxelu:

Do roztoku 230 mg (0,236 mmol) produktu ze stupně (b) v 10 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá 300 mg molekulárního síta 4A, 270 mg (0,98 mmol) dibenzylesteru kyseliny fosforečné a 62 mg (0,28 mmol) překryst. NIS. K takto připravenému roztoku se přidá 45 mg (0,17 mmol) stříbrné soli kyseliny trifluormethansulfonové, a roztok se míchá po 3 hodiny. Získaný roztok se filtruje vrstvou celitu, zředí se ethylacetátem a po promytí 10%ním roztokem NaS₂O_g, nasyceným hydrogenuhličitanem a solankou se roztok vysuší bezvodým síranem hořečnatým a zahustí. Zbytek se chromatografuje na silikagelu (15% acetonitrilu v chloroformu) a získá se tak 219 mg dibenzylfosfátu sloučeniny, jak je uvedena v nadpise (tj. 77%),

FABMS (ΝΟΒΑ) M+Na, pro C₆iH₇₂NPO₂₂Na 1224, vyp. 1224, nal. 1224

IČ (film) 3422 (br), 1750,1722,1370,1244,1160, 1036,1016,1000,976,944 cm'¹ *H NMR (CDC1₃, 300 MHz), δ 8,08 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 7,58 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,46 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 7,39 (s, 1H), 7,31 (m, 10), 6,35 (m, 2H), 6,28 (s, 1H), 6,21 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 5,64 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 5,50 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 5,39 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 5,32 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,25 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 5,01 (dd, J = 8,1, 6,3 Hz, 5H), 4,86 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,29-4,09 (m, 4H), 3,85 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 2,77 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,30 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,94 (m, 1H), 1,70 (s, 3H), 1,67 (s, 1H), 1,54 (s, 1H), 1,34 (s, 9H), 1,28 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,20 (s, 3H),l,17(s, 3H).

¹³C NMR (CDClj, 75,5 Hz) δ 201,8, 169,9, 169,2, 167,7, 167,0, 155,1, 154,0, 150,0, 142,74, 141,0, 133,7, 132,9, 130,2,129,1, 128,7, 128,5, 128,4,128,0, 110,7, 107,6, 93,8, 84,1, 81,6, 80,8, 80,7, 78,8, 76,3, 75,1, 74,6, 71,8, 69,3, 69,2, 65,1, 57,0, 49,7, 46,7, 43,2, 35,0, 28,1, 26,4, 22,6, 21,2,20,8,14,6,14,1,10,5 (d) Příprava triethylaminové soli 3'-N-debenzoyl-3'-desfenyl-3'-N-(terc.-butoxykarbonyl)3'-(2-furyl)-2'-0-ethoxykarbonyl-7-0-fosfonooxymethylpaclitaxelu

-67CZ 289871 B6

K roztoku 311 mg (0,259 mmol) produktu ze stupně (c) v 25 ml ethylacetátu se přidá 60 mg 10%ního palladia na uhlí a roztok se míchá pod vodíkovou atmosférou za normálního tlaku 30 minut; katalyzátor se odfiltruje vrstvou celitu, filtrát se zahustí ve vakuu, zbytek se rozpustí v 3 ml ethylacetátu a k roztoku se přidají 2,3 ml (0,23 mmol) triethanolaminu ve formě 0,1 M roztoku v ethylacetátu. Získaný roztok se zahustí a zbytek se chromatografuje na C_)g-koloně (acetonitril/voda, 40 %: 60 %) a lyofilizováním se potom získá 205 mg (67%) triethanolaminové soli fosfátu.

FABMS (ΝΟΒΑ) M + Na, pro C₄₇H6oNP022Na: vypočteno 1044, nalezeno 1044.

IČ (film): 3422 (br), 1752, 1722,1372, 1246,1158,1108,1096, 1070,1002 cm’¹.

’H NMR (d₆ aceton/D₂O, 300 MHz) δ 8,09 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,62 (m, 2H), 7,52 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 6,48 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 6,42 (m, 2H), 6,16 (t, J = 8,7 Hz, 1H), 5,65 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 5,46 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,30 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,17 (br s, 1H), 5,01 (br d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,19 (br s, 1H), 4,18 (m, 5H), 3,95 (m, 6H), 3,87 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 3,68 (s, 7H), 3,50 (br, t, J = 4,8 Hz, 6H), 2,95 (m, 1H), 2,44 (s, 3H), 2,41 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 1,9 (s, 3H), 1,94 (m, 1H), 1,68 (s, 3H), 1,34 (s, 9H), 1,24 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,17 (s, 6H).

Příklad 8

Triethanolaminová sůl 3'-N-debenzoyl-3'-desfenyl-3'-(terc.-butoxykarbonyl)-3'-(2-thienyl)2'-0-ethoxykarbonyl)-7-0-fosfonooxymethylpaclitacelu (a) Příprava 3 '-N-debenzoyl-3 '-desfeny 1-3 '-(terč -butoxykarbonyl)-3-(2-thienyl)-7_Omethylthiomethylpaclitaxelu

OCHgSCH^

AcO

Do roztoku 0,5 ml (2,4 mmol) HMDS v 18 ml tetrahydrofuranu se přidává za chlazení na -55 °C 0,85 ml (2,1 mmol) 2,5 M roztoku n-butyllithia v hexanu. Za 10 minut se dále přidá 1,15 g (1,78 mmol) 7-MTM-baccatinu III v 18.0 ml tetrahydrofuranu, což se provádí přikapáváním za chladu a míchání po 10 minut. Dále se přidává 2,80 g (7,3 mmol) (+)-cis-l-(terc.-butoxykarbonyl)-4-(2-thienyl)-3-(triethylsilyloxy)-2-azetidinonu v 18 ml tetrahydrofuranu, a teplota chladicí lázně se nechá pomalu vystoupit na 0 °C během 30 minut. Roztok se zředí ethylacetátem, a po promytí nasyceným roztokem chloridu amonného a vysušení síranem hořečnatým se filtrát zahustí. Zbytek se chromatografuje na silikagelu (hexan a ethylacetát, 5:1), izoluje se 1,87 g regenerovaného laktamu (hexan/ethylacetát (3 : 1) a 1,44 g (78%) kondenzačního

-68CZ 289871 B6 produktu 3'-N-debenzoyl-3'-desfenyl-3'-(terc-butoxykarbonyl)-3'-(2-thienyl)-7-O-methylthiomethyl-2'-0-triethylsilylpaclitaxelu.

FABMS (ΝΟΒΑ): M + Na, pro C₅iH₇iNOi₅S2SiNa, vypočteno 1052, nalezeno 1052.

IČ (film 3442 (br), 1720,1490,1368,1270,1242,1162,1110, 1064,1024,984, 754 cm'¹.

’H NMR (CDC1₃, 300 MHz) δ 8,09 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,57 (t, J = 7,6 Hz, IH), 7,47 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 7,22 (m, IH), 6,95 (m, 2H), 6,55 (s, IH), 6,21 (t, J = 9,3 Hz, IH), 5,68 (d, J = 6,9 Hz, IH), 5,49 (br d, IH), 5,39 (br d, J = 9,6 Hz, IH), 4,94 (d, J = 7,8 Hz, IH), 4,65 (s, 2H), 4,57 (s, IH), 4,28 (m, 2H), 4,17 )d, J = 8,4 Hz, IH), 3,88 (d, J = 6,9 Hz, IH), 2,80 (m, IH), 2,46 (s, 3H), 2,37 (m, IH), 2,20 (m, IH), 2,17 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 1,84 (m, IH), 1,74 (s,3H), 1,68 (s, IH), 1,62 (s, IH), 1,31 (s, 9H), 1,20 (s, 6H), 0,84 (t, J = 7,8 Hz, 9H), 0,50 (m, 6H).

^,3C NMR (CDClj, 75,5 Hz) δ 201,9, 171,1, 170,7, 170,1, 169,3, 167,0, 155,1, 142,8, 140,9,

133,6, 132,9, 130,2, 129,2, 128,7, 126,9, 124,6, 83,9, 81,2, 80,1, 78,8, 77,4, 76,0, 75,7, 75,2, 74,8, 74,1, 71,3, 57,4, 53,8, 47,0, 43,3, 35,3, 33,3, 28,1, 26,3, 23,0, 21,3, 20,9, 14,9, 14,4, 10,9, 6,6,4,5.

K roztoku 1,41 g (1,37 mmol) výše popsaného 2'-triethylsilyletheru v 14 ml tetrahydrofuranu se přidá 1,4 ml, 1,0 M roztoku tetrahbutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu. Roztok se míchá 30 minut, zředí se ethylacetátem, roztok se promyje solankou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se filtrát zahustí. Zbytek se chromatografuje na silikagelu (hexan/ethylacetát, 1:1) a získá se tak 1,16 g (92%) sloučeniny, jejíž složení je uvedeno v nadpise.

FAMBS (ΝΟΒΑ) M + na, pro Cís^NOisSiNa. vypočteno 938, nalezeno 938

IČ (film) 3340 (br), 1720, 1368,1242,1168, 1106,1066, 710 cm'¹ *H NMR (CDC1₃, 300 MHz), δ 8,08 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,59 (m, IH), 7,47 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 7,24 (m, IH), 7,07 (m, IH), 6,99 (m, IH), 6,53 (s, IH), 6,18 (t, J = 8,1 Hz, IH), 5,66 (d, J = 6,9 Hz, IH), 5,49 (d, J = 9,6 Hz, IH), 5,32 (d, J = 9,6 Hz, IH), 4,92 (d, J = 7,8 Hz, IH), 4,63 (m, 3H), 4,28 (m, 2H), 4,15 (d, J = 8,4 Hz, IH), 3,86 (d, J = 6,9 Hz, IH), 2,80 (m, IH), 3,47 (d, J = 5,4 Hz, IH), 2,78 (m, IH), 2,36 (s, 3H), 2,34 (2H), 2,17 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,83 (m, IH), 1,74 (s, 3H), 1,72 (s, IH), 1,61 (s, IH), 1,33 (s, 9H), 1,21 (s, 3H), 1,18 (s, 3H).

¹³C NMR (CDClj, 75,5 Hz) δ 201,9, 172,3, 170,3, 169,2, 167,0, 154,0, 141,5, 140,2, 133,7,

133,3, 130,2, 129,1, 128,7, 127,0, 125,4, 125,4, 83,9, 81,3, 80,4, 78,6, 76,1, 75,4, 74,5, 74,0,

73,4, 72,5, 57,5, 52,8,47,2,43,2,35,3, 32,9,28,2,26,4,22,6,20,9,15,1,14,7, 10,8.

-69CZ 289871 B6 (b) Příprava 3'-N-debenzoyl-3'-desfenyl-3'-N-(terc.-butoxykarbonyl)-3'-(2-thienyl)-2'-Oethoxykarbonyl)-7-C)-methylthiomethylpaclitaxel

Do roztoku 621 g (0,677 mmol) produktu ze stupně (a) v 35 ml dichlormethanu se za teploty 0 °C vnese 1,20 ml (6,89 mmol) diisopropylethylaminu a 0,35 ml (3,7 mmol) ethylesteru kyseliny chloromravenčí, reakční směs se míchá hodinu, chladicí lázeň se potom odstraní, roztok se dále míchá 2 hodiny, zředí se dichlormethanem a promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Po vysušení bezvodým síranem hořečnatým se filtrát zahustí. Zbytek se chromatografuje na silikagelu (hexan/ethylacetát, 1 : 1) a získá se tak 528 mg (79%) sloučeniny, jak je uvedena v nadpise.

FABMS (ΝΟΒΑ) Ní + Na, pro C4₈H6iNOi₇S₂Na, nalezeno 1010, vypočteno 1010,

IČ (film): 3510, 3440,1752, 1720, 1370,1244,1198,1170, 1026, 988, 756 cm·'.

'H NMR (CDC1₃, 300 MHz), 5 8,09 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,58 (m, 1H), 7,4 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 7,26 (m, 1H), 6,99 (2H), 6,55 (s, 1H), 6,23 (t, J = 9,0 Hz, 1H), 5,68 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 5,33 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 5,25 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 4,94 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,65 (s, 2H), 4,33-4,08 (m, 5H), 3,88 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 2,80 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,40-2,20 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 1,83 (m, 1H), 1,74 (s, 3H), 1,69 (s, 1H), 1,60 (s, 1H), 1,33 (s, 9H), 1,31 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,19 (s, 3H).

¹³C NMR (CDC1₃, 75,5 Hz) 5 202,0, 169,7, 169,1, 167,5, 167,1, 154,0, 140,9, 133,6, 132,9, 130,2, 129,2, 128,7, 127,2, 125,4, 125,3, 83,9, 81,2, 80,6, 78,8, 76,9, 76,0, 75,7, 74,7, 74,2, 72,8, 72,0, 65,2, 57,4, 50,9, 47,1, 43,3, 35,1, 33,0, 28,1, 26,4,22,7, 21,2, 20,9, 15,1,14,5,14,1,10,9.

(c) Příprava 3 '-N-debenzoyl-3 '-desfenyl-3 '-N-(terc.-butoxykarbony 1)—3 '-(2-thienyl)-2'-Oethoxykarbonyl-7-O-dibenzylfosfonooxymethylpaclitaxelu

-70CZ 289871 B6

Do roztoku 516 g (0,522 mmol) produktu ze stupně (b) v 15 ml bezvodého tetrahydrofuranu se vnese 530 mg molekulárního síta 4 nM, 576 (2,09 mmol) dibenzylesteru kyseliny fosforečné a 136 mg (0,604 mmol) překryst. NIS. Do takto připraveného roztoku se dále přidá 50 mg (0,194 mmol) stříbrné soli kyseliny trifluormethansulfonové, vše se míchá hodinu, potom se reakční směs filtruje celitem a filtrát se zředí ethylacetátem. Po promytí 10%ním Na₂S₂O_g, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, jakož i po vysušení bezvodým síranem hořečnatým se filtrát zahustí. Zbytek se chromatografuje na silikagelu (15 % acetonitrilu v chloroformu) a získá se tak 535 mg (84%) sloučeniny, jak je uvedena v nadpise.

FABMS (ΝΟΒΑ) M + Na, pro C6iH₇₂NO₂iPSNa, vypočteno 1240, nalezeno 1240.

IČ (film) 3424 (br), 1750, 1722,1370, 1244,1016,100, 944 cm'¹ *H NMR (CDC1₃, 300 MHz) δ 8,08 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 7,58 (m, 1H), 7,47 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 7,28 (m, 11H), 6,99 (m, 2H), 6,33 (s, 1H), 6,22 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 5,66 (m, 2H), 5,39 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 5,34 (d, J = 12 Hz, 1H), 5,22 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,01 (dd, J = 8,1, 6,0 Hz, 5H), 4,86 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,29-4,08 (m, 5H), 3,85 (d, J = 6,6 Hz, 1H) 2,76 (m, 1H), 2,39 (s,3H), 2,25-2,18 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 1,97 (s, 4H), 1,69 (s, 4H), 1,33 (s, 9H), 1,30 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,17 (s, 3H).

¹³C NMR (CHCI3), 75,5 Hz) δ 197,4, 165,4, 164,9, 163,3, 162,7, 150,6, 149,7, 136,7, 136,0,

129,4, 128,9, 125,9, 124,7,124,3,124,2, 124,1,133,6,122,9,121,1,121,0, 89,4, 79,8, 77,3, 76,5,

76.3, 74,4, 72,0, 70,7, 70,3, 67,7, 64,9, 60,9, 52,7, 46,8, 42,3, 38,9, 30,7, 23,8, 22,0, 18,3, 17,0,

16.4.10.3, 9,8, 6,2.

(d) Příprava triethylaminové soli 3'-debenzoyl-3'-desfenyl-3'-N-(terc.-butoxykarbonyl)-3'(2-thienyl-2'-0-ethoxykarbonyl-7-0-fosfonooxymethylpaclitaxelu

Do roztoku 512 mg (0,42 mmol) produktu ze stupně (c) v 30 ml ethylacetátu se vnese 53 mg 10%ního palladia na uhlí, a roztok se míchá ve vodíkové atmosféře 3 hodiny. Katalyzátor se odstraní filtrací přes celit, filtrát se zahustí ve vakuu. Zbytek se rozpustí v 2 ml ethylacetátu, přidá se triethanolamin, totiž 4,0 ml (0,40 mmol) 0,1 M roztoku v ethylacetátu, takže připravený roztok se zahustí a zbytek se chromatografuje na Cig-koloně (40% acetonitrilu ve vodě); následnou lyofilizací se získá 280 mg (56%) triethanolaminové soli fosfátu. Podle výsledků vysokotlakové chromatografické analýzy odpovídá čistota získané soli 96%.

FABMA (ΝΟΒΑ) M + Na, pro C₄₇H6oN0₂i vypočteno 1060, nalezeno 1050.

-71 CZ 289871 B6

IČ (film) 3422 (br), 1750, 1720, 1372, 1246, 1162, 1096, 1068, 1000 cm-'.

‘H NMR (d₆ aceton/D₂O, 300 MHz) δ 8,06 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,63 (t J = 7,2 Hz, 1H), 7,52 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 7,38 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 7,16 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 7,01 (dd, J = 5,1 3,6 Hz, 1H), 6,37 (s, 1H), 6,11 (t, J = 8,7 Hz, 1H), 5,61 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 5,60 (s, 1H), 5,26 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 5,14 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 5,00 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,86 (dd, J = 12,0, 6,3 Hz, 1H), 4,17 (m, 5H), 4,00 (s, 7H), 3,92 (t, J = 4,8 Hz, 6H), 3,84 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 3,48 (t, J = 5,4Hz, 6H), 2,94 (m, 1H), 2,42 (s, 3H), 2,36 (m, 1H), 2,27 (m, 1H), 2,15 (s, 3H), 1,95 (s, 4H), 1,66 (s, 3H), 1,30 (s, 9H), 1,23 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,14 (s, 6H).

Příklad 9

10-Desacetyl-3'-desbenzoyl-3'-N-(terc.-butoxykarbonyl)-10-0-(fosfonooxymethylpaclitaxel (a) Příprava 10-desacetyl-10-0-benzyloxykarbonyl-7-0-triethylsilylbaccatinu III

Vysušená baňka se pod argonem naplní 2,093 g (3,177 mmol) 7-O-triethylsilyl-lO-desacetylbaccatinu ΙΠ, přidá se 30 ml suchého tetrahydrofuranu a vše se vychladí na -70 °C; přikapává se 2,38 ml (3,81 mmol) 1,6 M n-butyllithia, reakční směs se míchá 15 minut a dále se přikapává 0,91 ml (6,35 mmol) benzylesteru kyseliny chloromravenčí. Takto připravená směs se míchá 3 hodiny za postupného zvyšování teploty až na 20 °C, potom se reakční směs rozloží přidáním 25 ml nasyceného roztoku chloridu amonného, vše se promyje solankou, organický podíl se vysuší bezvodým síranem hořečnatým. Ze zbytku po zahuštění se získá bleskovou chromatografií na silikagelu (30 až 45% ethylacetátu v hexanu) 2,24 g (89%) sloučeniny, jak je uvedena v nadpise. Tvoří bílou pěnu.

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 8,10 (d, J = 8,0, 2H); 7,63-7,58 (m, 1H), 7,47 (t, J = 8,0, 2H), 7,41-7,26 (m, 5H), 6,29 (s, 1H), 5,61 (d, J = 7,0, 1H), 5,20 (q, J = 12,2, 2H), 4,96 (d, J = 9,0, 1H), 4,87-4,84 (m, 1H), 4,48 (dd, J = 6,7, J = 10,4, 1H), 4,30 (d, J = 8,5, 1H), 4,14 (d, J = 8,5, 1H), 3,84 (d, J = 7,0, 1H), 2,58-2,48 (m, 1H), 2,29 (m, 4H), 2,20 (s, 3H), 2,03 (d, J = 5,0, 1H), 1,92-1,83 (m, 1H), 1,68 (s, 3H), 1,17 (s, 3H), 1,04 (s, 3H), 0,91 (t, J = 7,5, 9H), 0,57 (q, J = 7,4, 6H).

-72CZ 289871 B6 (b) Příprava 10-desacety 1-10-O-benzyloxykarbony 1-3 '-N-debenzoy 1-3 '-N-(terc -butoxykarbonyl)-2',7-bis-O-triethylsilylpaclitaxelu.

TES o

Do vysušené baňky, obsahující 3,50 g (4,42 mmol) produktu ze stupně (a) se přidá malé množství toluenu a roztok se potom zahustí ve vakuu. V prostředí argonu se přidá 100 ml suchého tetrahydrofuranu,baňka se vychladí na -70 °C a přikapává se 6,19 ml (6,19 mmol) 1,0 M lithiumhexamethyldisilazanu, reakční směs se míchá 20 minut, načež se přikapává roztok 2,58 g (7,07 mmol) (3R,4S)-l-(terc.-butoxykarbonyl)-4-fenyl-3-triethylsilyloxy-2-azetidinonu v 10 ml suchého tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá 3,5 hodin, teplota přitom vystoupí postupně na 20 °C, potom se reakční směs rozloží přidáním 70 ml nasyceného roztoku chloridu amonného, roztok se promyje solankou a vysuší se bezvodým síranem hořečnatým. Bleskovou chromatografií na silikagelu (5-15% ethylacetátu v hexanu) se izoluje 5,12 g (99%) sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, to ve formě bílé pěny.

’H NMR (300 MHz,CDCl₃) δ 8,11 (d, J = 8,0,2H); 7,60-7,58 (m, IH); 7,48 (t, J = 8,0,2H); 7,24 -7,26 (m, 10H); 6,32-6,26 (m, 2H); 5,68 (d, J = 7,0, IH); 5,47 (bd, J = 9,7, IH); 5,31-5,10 (m, 3H); 4,96 (d, J=8,5, IH); 4,56 (s, IH), 4,46 (dd, J = 6,9, J = 10,6, IH); 4,31 (d, J = 8,3, IH); 4,17 (d, J = 8,3, IH); 3,81 (d, J = 7,0, IH); 2,53 (s, 3H); 2,48-2,33 (m, IH); 2,22-2,17 (m, IH); 2,09 (s, 3H); 1,95-1,86 (m, IH); 1,70 (s, 3H); 1,65 (s, IH); 1,52 (s, IH); 1,30 (s, 9H); 1,26-1,19 (m, 6H); 0,94-0,87 (m, 9H); 0,80-0,75 (m, 9H); 0,61-0,53 (m, 6H); 0,48-0,30 (m, 6H).

(c) Příprava 10-desacety 1-3 '-N-debenzoy 1-3 '-N-(terc -butoxykarbonyl)-7-O-triethylsilylpaclitaxelu

V 100 ml ethylacetátu se rozpustí 5,12 g (4,40 mmol) produktu ze stupně (b), roztok se přepraví do Parrovy nádobky, překryje se argonem, přidá se 2,4 g 10%ního palladia na uhlí a v Parrově hydrogenačním zařízení se provede hydrogenace po dobu 8 hodin za tlaku 350 kPa. Reakční směs se filtruje vrstvou celitu, filtrát se zahustí, a bleskovou chromatografií na silikagelu (15-20% ethylacetátu v hexanu) se získá 3,24 g (79%) produktu, uvedeného v nadpise, jako bílá

-73CZ 289871 B6 pěna. Hydrolýza 2'-triethylsilylové skupiny v produktu ze stupně (b) byla výsledkem stop kyselých zbytků v Parrově zařízení.

*H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 8,10 (d, J = 8,0, 2H); 7,63 - 7,58 (m, 1H); 7,49 (d, J = 8,0, 2H); 7,39 - 7,26 (m, 5H); 6,27 - 6,17 (m, 1H); 5,64 (d, J = 7,2); 5,42 (d, J = 9,4, 1H); 5,28 - 5,25 (m, 1H); 5,12 (s, 1H); 4,92 (d, J = 8,6, 1H); 4,62 (bs, 1H); 4,38-4,28 (m, 3H); 4,17 (d, J = 8,5, 1H); 3,85 (d, J = 6,7, 1H); 3,36 (d, J = 5,3, 1H); 2,49-2,40 (m, 1H); 2,36 (s, 3H);

2,25 (bd, J = 8,7, 2H); 1,99-1,91 (m, 1H); 1,85 (s, 3H); 1,74 (s, 3H); 1,69 (s, 1H), 1,67 (s, 1H); 1,35 (s, 9H); 1,22 (s, 3H); 1,11 (s, 3H); 0,93 (t, J = 7,5 9H); 0,61-0,49 (m, 6H).

(d) Příprava 10-desacetyl-2'-O-benzyloxykarbonyl-3'-N-debenzoyl-3'-(terc.-butoxykarbonyl)-7-O-triethylsilylpaclitaxelu

V baňce s obsahem 3,24 g (3,51 mmol) produktu ze stupně (c) se přidá 30 ml suchého dichlormethanu, pod argonem se baňka s obsahem vychladí na 0 °C, do reakční směsi se přidá 22 ml (7,02 mmol) Ν,Ν-diisopropylethylaminu, dále se přikapává 1,00 ml (7,02 mmol) benzylesteru kyseliny mravenčí, po 15ti minutách se chladicí lázeň odstraní a míchá se pak za teploty místnosti 7 hodin. Reakční směs se rozloží přidáním 30 ml nasyceného roztoku chloridu amonného, organický podíl se oddělí, promyje se solankou a vysuší pak bezvodým síranem hořečnatým. Bleskovou chromatografií na silikagelu (7-20% ethylacetátu v hexanu) se získá 3,24 g (88%) sloučeniny, jak je uveden v názvu, to ve formě bílé pevné látky.

’H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 8,10 (d, J = 8,0, 2H); 7,62-7,57 (m, 1H); 7,48 (t, J = 8,0, 2H); 7,40-7,26 (m, 10H); 6,33-6,27 (m, 1H); 5,66 (d, J = 7,0, 1H); 5,49-5,42 (m, 2H); 5,32 (s, 1H); 5,22-5,13 (m, 3H); 4,93 (d, J=9,4, 1H); 4,38 (dd, J = 6,5, J = 10,7, 1H); 4,34-4,28 (m, 2H); 4,18 (d, J = 8,3,1H); 3,90 (d, J = 6,7, 1H); 2,52-2,30 (m, 4H); 2,24-2,20 (m, 1H); 1,97-1,87 (m, 3H); 1,74 (s, 3H); 1,59 (s, 3H); 1,32 (s, 9H); 1,26 (s, 3H); 1,11 (s, 3H); 0,96-0,88 (m, 9H); 0,61-0,48 (m, 6H).

-74CZ 289871 B6 (e) Příprava 10.desacetyl-2'-O-benzyloxykarbonyl-3'-N-debenzoyl-3'-N—(terc.-butoxykarbonyl)-10-O-(dibenzylfosfonooxymethyl)-7-O-triethylsilylpaclitaxelu

Produkt ze stupně (d) se rozpustí v 13,5 ml (54%) dimethylsulfoxidu, přidá se 8,75 ml (34%) anhydridů kyseliny octové a 2,75 ml (11%) ledové kyseliny octové, vše se umístí pod clonou argonu, reakční směs se míchá 56 hodin, potom se zředí ethylacetátem na objem 60 ml. Roztok se promyje nasyceným roztokem hydrogenkarbonátu sodíku až do neutrální reakce na pH papírek, dále se promývá solankou, organický roztok se dále vysuší bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se filtrát zahustí. Bleskovou chromatografií (15-20% ethylacetátu v hexanu se získá 3,12 g surové pěny, což je očekávaný thiomethylacetal (tj. 10-desacetyl-2'-Obenzylocykarbonyl-3 -N-debenzoyl-3 '-N-(terc.-butoxykarbonyl)-l 0-O-(methylthiomethyl)7-O-triethylsilylpaclitaxel, podle NMR 70%.

Z výše uvedené surové směsi se 3,12 rozpustí v 61 ml 1,2-dichlorethanu, a pod argonem se přidá 3,12 g práškového molekulárního síta A, a takto připravená heterogenní směs se energicky promíchává. K ní se pak přidá roztok 0,830 g (3,69 mmol) překrystalovaného N-jodimidu kyseliny jantarové a 1,027 g (3,69 mmol) dibenzylesteru kyseliny fosforečné v 46 ml suchého tetrahydrofuranu pomocí lapačky. Takto připravená směs se míchá 5 hodin, filtruje se vrstvou celitu, a filtrát se zředí na 250 ml ethylacetátem. Organický roztok je promyje dvakrát po 125 ml vychlazeného 2%ního roztoku hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát po 125 ml vychlazeného roztoku hydrogensiřičitanu sodného, potom solankou, organický roztok se vysuší bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se filtrát zahustí. Bleskovou chromatografií na silikagelu (25 až 35 % ethylacetátu v hexanu) se získá takto 1,52 g (40%) sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, to ve formě pevné bílé látky.

*H NMR (CDC1₃, 300 MHz) δ 8,08 (d, J = 7,0, 2H); 7,59-7,55 (m, 1H); 7,46 (t, J = 7,2, 2H); 7,38-7,25 (m, 20H); 6,30 (t, J = 8,5, 1H); 5,65 (d, J = 6,8, 1H); 5,49-5,39 (m, 4H); 5,32 (s, 1H), 5,18^1,19 (m, 4H); 4,93 (d, J = 9,2, 1H); 4,44 (dd, J = 6,6, J = 10,2 1H); 4,31 (d, J = 8,4, 1H); 4,16 (d, J = 8,5, 1H); 3,80 (d, J = 6,9, 1H); 2,69-2,39, (m, 4H), 2,33-2,23 (m, 3H); 2,03 (s, 3H); 1,90 (t, J = 12,6, 1H); 1,68-1,63 (m, 6H); 1,28 (s, 9H); 1,16-1,10 (m, 6H); 0,93 (t, J = 7,4, 9H); 0,55 (q, J = 7,8, 6H).

¹³C NMR (CDCI3, 75,5 MHz, δ 204,1, 169,7, 167,9, 167,1, 151,1, 140,7, 135,7, 133,6, 130,2,

129,2, 128,9, 128,8, 128,7, 128,6, 128,5, 128,4, 128,3, 128,2, 128,0, 127,8, 126,4, 90,4, 84,2, 81,1, 80,4, 79,3, 78,8, 74,9, 72,8, 72,0, 70,5, 69,2, 69,1, 69,0, 58,1, 46,8, 43,2, 37,1, 35,0, 28,1,

26,5,22,8,21,0,14,1, 10,0, 6,9, 5,5.

-75CZ 289871 B6

M.S. (FAB) m/z+: 1345 (f) Příprava 10-desacetyl-2'-O-benzyloxykarbonyl-3'-N-debenzoyl-3'-N-(terc.-butoxykarbonyl)-! 0-O-dienzylfosfonooxymethyl)-paclitaxelu

OB Z

Roztok 50,8 mg (0,038 mmol) produktu ze stupně (e) v 2,5 ml suchého tetrahydrofuranu se ochladí pod argonem na -40 °C, do roztoku se přikapává roztok 0,057 ml (0,057 mmol) tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu (1M), a reakční směs se míchá 1,5 hodin za postupného zvyšování teploty na -20 °C. Směs se rozloží přidáním 15 ml nasyceného roztoku chloridu amonného a zředí se přidáním 30 ml ethylacetátu. Organická fáze se promyje dvakrát za použití 15 ml roztoku hydrogenuhličitanu sodného, potom solankou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se filtrát zahustí. Preparativní chromatografií na tenké vrstvě silikagelu za použití 50% ethylacetátu v hexanu se získá 365 mg (77%) sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, jako bílý prášek.

’N NMR (CDC1₃, 300 MHz) δ 8,10 (d, J = 8,5, 2H), 7,60-7,55 (m, 1H), 7,49-7,44 (m, 2H), 7,36-7,18 (m, 20 H), 6,27-6,22 (m, 1H); 5,78 (s, 1H); 5,67 (d, H = 7,0, 1H); 5,44-5,34 (m, 3H); 5,27 (d, J = 2,2, 1H); 5,24-5,05 (m, 4H); 5,01-4,91 (m, 4H); 4,39-4,28 (m, 2H); 4,17 (d, J = 8,2, 1H); 3,87 (d, J = 7,0, 1H); 2,58-2,51 (m, 1H); 2,41 (s, 3H); 2,40-2,18 (m, 2H); 2,00-1,87 (m, 5H); 1,73-1,69 (m, 4H); 1,30 (s, 9H); 1,22-1,15 (m, 6H).

M.S. (FAB) m/z+: 1231 (g) Příprava 10-desacetyl-3'-N-desbenzoyl-3 -N-(terc -butoxykarbonyl)-l 0-O-(fosfonooxymethyl)paclitaxelu ve formě triethanolaminové soli

HO O

-76CZ 289871 B6

Parraova nádobka objemu 500 ml se naplní 264,9 mg 0,215 mmol) 10-desacetyl-2'-O-benzyloxykarbonyl-3'-N-debenzoyl-3'-N-(terc.-butoxykarbonyl)-10-O-(dibenzylfosfonooxymethyl)paclitaxelu a 20 ml ethylacetátu. Po vypuzení vzduchu argonem se přidá 318 mg 10%ního palladia na uhlí a hydrogenuje se v atmosféře vodíku za tlaku 350 kPa. Průběh reakce se sleduje 5 vysokotlakovou kapalinovou chromatografií za použití směsi 70 : 30 acetonitrilu a Q8 pufru o pH

6,0, 1,00 ml/min, Zorbachova Cig-kolona 25,0 cm λ = 230 nm až nelze dokázat přítomnost výchozí látky, což trvá asi 12,5 hodin. Potom se reakční směs filtruje vrstvičkou celitu, ten se promyje ethylacetátem a malým množstvím dichlormethanu. Získaný filtrát se zahustí a zbytek se rozpustí v 5 ml dichlormethanu. Přidáním hexanu se začne vylučovat bílá staženina, a jako bílá io pevná látka se izoluje 140,3 mg volné kyseliny (podle vysokotlakové kapalinové chromatografie čistota 80%). Tato látka se přímo použije v dalším stupni.

Do baňky s obsahem 140 mg (0,153 mmol) výše uvedené volné kyseliny se přidá 10 ml dichlormethanu, k získanému roztoku se potom přidá 1,16 ml (0,116 mmol) 0,1 M roztoku 15 triethanolaminu v ethylacetátu; získaný roztok je mírně zakalený. Přidají se asi 2 ml hexanu a směs se ponechá přes noc v mrazničce za -20 °C. Vzniklá sraženina se odfiltruje na nuči ze slinutého skla 4,0 až 5,5 pm, pevný podíl se vyjme a suší ve vakuu 4 hodiny. Výtěžkem je 69,9 mg (42%) triethanolaminové sloučeniny, jako je uvedena v názvu, jako šedivý prášek, čistota produktu podle vysokotlakové kapalinové chromatografie 95 až 96% (Tr = 2,05 min, 20 70 : 30 acetonitril a QB pufr o pH 6,0,1,00 ml/min, Zorbax Ci₈ kolona 25 cm, λ = 230 nm).

'H-NMR (d₆-aceton/D₂O, 300 MHz): δ 8,30 (d, J = 7,4, 2H), 7,65 (t, J = 7,3, 1H), 7,54 (t, J = 7,6, 2H), 7,42, 7,33 (m, 5H); 7,21 (t, J = 7,0, 1H); 6,09 (t, J = 9,0, 1H); 5,81 (s, 1H); 5,59 (d, J = 7,0,1H); 5,12 (bs, 2H); 4,93 (d, J = 8,4, 2H) 4,56 (d, J = 4,9,1H); 4,31-4,26 (m, 1H); 4,11 25 (s, 2H); 3,41-3,37 (m, 6H); 2,42-2,32 (m, 5H); 2,15 (bs, 1H); 1,97 (s, 3H); 1,77-1,64 (m, 2H);

1,58 (s, 3H); 1,13 (s, 9H), 1,15-1,07 (m, 6H).

HRMS: MNa⁺, pro C44H₅₆NO_lgPNa, vypočteno 940,3142 nalezeno: 940,3133

Příklad 10 (a) Příprava 2'-O-(methylthiomethoxymethyl)-7-O-triethylsilylpaclitaxelu

AcO O	OSi (CH2CH3)3
CONH O \ \
CH3SCH2OCH2O HO j AcÓ
C(O)Ó

Do roztoku 70,0 mg (72,2 mmol) 7-O-triethylsilylpaclitaxalu, 90 ml (72,2 mmol) bis-(methylthiomethyl)etheru, 70 mg molekulárního síta a 160 mg (72,2 mmol) N-jodimidu kyseliny jantarové v 2,0 tetrahydrofuranu se přidá za teploty místnosti 5,0 mg (19,5) stříbrné soli kyseliny 45 trifluoroctové a takto připravená reakční směs se míchá 2 hodiny. Zředí se přidáním ethylacetátu a filtruje se vrstvou celitu. Filtrát se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu

-77CZ 289871 B6 sodného, dále pak směsí 1 : 1 (objemově) nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 5%ního vodného roztoku simatanu sodného, posléze solankou, načež se organický roztok vysuší bezvodým síranem sodným, a po filtraci se filtrát zahustí ve vakuu. Zbylý olej se čistí bleskovou chromatografií (hexan : ethylacetát, 3 : 1) a získá se tak 22,0 mg (29%) sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, jako bílá pevná látka.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 8,12-7,20 (15 H, m), 7,04 (1H, d, J = 8,9 Hz), 6,41 (1H, s), 6,25 (1H, m), 5,81 (1H, dd, J = 8,9, 2,4 Hz), 5,68 (1H, d, J = 7,0 Hz), 4,93 (1H, d, 8,0 Hz), 4,79 (2H, m), 4,71 (1H, d, 2,4 Hz), 4,45 (1H, dd, J =10,5, 6,6 Hz), 4,30 (1H, d, J = 8,3 Hz), 4,28 (1H, d, J = 11,7 Hz), 4,17 (1H, d, J = 8,3 Hz), 4,04 (1H, d, J = 11,7 Hz), 3,80 (1H, d, J = 6,9), 2,48-1,13 (25 H, m, zahrnuje singlety 2,51, 2,13, 2,15, 2,01, 1,69, 1,19, 1,16), 0,98-0,85 (9H, m), 0,65-0,50 (6H, m).

(b) Příprava 2'-O-dibenzylfosfonooxymethoxymethyl)-7-triethylsilylpaclitaxelu

CzrH_cCONH

(obh)₂(o)poch₂och₂ó

Do roztoku 15 mg (0,0141 mmol) produktu, jak byl získán ve stupni (a) a 15 mgl molekulárního síta v 0,5 ml tetrahydrofuranu se přidá za teploty místnosti nejprve 20,0 mg (0,089 mml) dibenzylesteru kyseliny fosforečné a atom 4,2 mg (0,0187 mmol) N-jodimidu kyseliny jantarové, tato reakční směs se míchá hodinu. Podle chromatografíe na tenké vrstvě obsahuje v tu chvíli reakční směs jen výchozí látku; během dvou hodin se přidá ve třech dávkách 5,0 mg (0,019 mmol) stříbrné soli kyseliny trifluoroctové, reakční směs se míchá další hodinu, zředí se ethylacetátem a filtruje se vrstvou celitu. Filtrát se protřepává s 1 : 1 (objemově) směsí nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 5%vodného roztoku simatanu sodného. Dále se organická vrstva promyje solankou, vysuší se síranem sodným a filtrát se zahustí ve vakuu. Zbylý olej se čistí bleskovou chromatografií (1:1, hexan a ethylacetát) a získá se tak 5,0 mg (33%) sloučeniny, jak je uvedena v nadpise.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 8,08-7,16 (25H, m), 7,18 (1H, d, J=8,8 Hz), 6,41 (1H, s), 6,21 (1H, m), 5,82 (1H, dd, J=9,0, 3,1 Hz), 5,66 (1H, d, 7,0 Hz), 5,01-4,65 (10H, m), 4,56 (1H, dd, J=14,7, 5,6 Hz), 4,43 (1H, dd, J=10,4, 6,7 Hz), 4,29 (1H, d, J = 8,3 Hz), 4,16 (1H, d, J = 8,3 Hz), 3,78 (1H, d, J = 7,0 Hz), 2,60-1,13 (22H, m, počítaje v to singlety při 2,49,2,15,1,93,1,66,1,15, 1,13, 3H, každý), 0,95-0,84 (9H, m), 0,63-0,45 (6H, m).

-78CZ 289871 B6 (c) Příprava 2'-O-fosfonooxymethoxymethylpaclitaxelu

Podle postupu, jak byl popsán v příkladu 9 (f) se působí na produkt ze stupně (b) tetrabutylamoniumfluoridem, čímž se odstraní krycí 7-O-triethylsilylová skupina. Takto získaná sloučenina se katalyticky hydrogenuje podle postupů, popsaných v předchozích příkladech za vzniku sloučeniny, jak je uvedeno v nadpise.

Příklad 11

2'-O-Fosfonooxymethoxymethylpaclitaxel (jiný způsob) (a) Příprava 2'-O-triethylsilylpaclitaxelu

Do roztoku 20,0 g (0,0234 mol) paclitaxelu a 3,59 g (0,052 mol) imidazolu se v 150 ml dimethylformamidu přidává za chlazení na 0 °C a během 20ti minut v dávkách po 2,0 ml celkem 6,0 ml (0,053 mol) triethylsilylchloridu, reakční směs se míchá za chlazení na 0 °C hodinu, směs se dále zředí ethylacetátem, protřepá s nasyceným vodným roztokem chloridu amonného, organická vrstva se oddělí, promyje solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a po filtraci se filtrát zahustí ve vakuu do konzistence žlutého oleje. Čistěním tohoto surového produktu bleskovou chromatografíi (hexan : ethylacetát, 1 : 3, potom 1 : 1) se získá 21,07 g (98%) sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, ve formě bezbarvé pevné látky.

*H-NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 8,15 (2H, m), 7,70 (2H, m), 7,65-7,30 (11H, m), 7,35 (1H, d, J = 8,9 Hz), 6,30 (1H, s), 6,25 (1H, m), 6,70-6,10 (2H, m),4,94 (1H, d, J = 7,9 Hz), 4,67 (1H, d,

-79CZ 289871 B6

2,0 Hz), 4,40 (1H, m), 4,29 (1H, d, J = 8,4 Hz), 4,18 (1H, d, J = 8,4 Hz), 3,81 (1H, d, J = 7,1 Hz), 2,65-1,10 (22H, počítaje v to singlety při 2,55, 2,20, 1,88, 1,69, 1,22, 1,13, (b) Příprava 2'-0-triethylsilyl-7-0-benzyloxykarbonylpaclitaxel

Během 10ti minut se přikapává 12,9 ml (8,08 mmol) 1,6 M roztoku butylltihia v hexanu do roztoku 22,3 g (24,1 mmol) 2'-O-triethylsilylpaclitaxelu v 250 ml tetrahydrofuranu při chlazení na -50 °C. Vzniklý roztok se míchá 20 minut, teplota se přitom udržuje v rozmezí -50 až -35 °C. Reakční směs se znovu vychladí na -50 °C a během 5ti minut se přikapává 5,08 ml (29,8 mmol) benzylesteru kyseliny chloromravenčí. Reakční směs se ponechá 30 minut za chlazení na -40 °C, potom se nechá teplota vystoupit asi během 30 minut na 0 °C, směs se zředí přidáním ethylacetát, potom se přidá nasycený vodný roztok chloridu amonného a po vytřepání se oddělená organická vrstva se promyje solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a filtrát se zahustí ve vakuu. Podle analýzy ¹ H-NMR obsahuje surová reakční směs očekávaný 2'-O-triethylsilyl-7-Obenzyloxykarbonylpaclitaxel, jakož i 2'-0-triethylsilyl-7-epihydroxypaclitaxel v poměru 3:1. Tento produkt jako směs se použije v dalším reakčním stupni bez jakéhokoli čistění a isomery se potom oddělí. Analyticky čistý vzorek hlavního produktu, tedy 2'-O-triethylsilyl-7-O-benzyloxykarbonylpaclitaxelu byl přečištěn bleskovou chromatografií:

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃: δ 8,12 (2H, m), 7,72 (1H, m), 7,65-7,27 (1H, d, J = 8,8 Hz), 6,41 (1H, m), 6,20 (1H, m), 5,72-5,65 (2H, m) 5,52 (1H, m), 5,24 (1H, d, J = 12,3 Hz), 5,16 (1H, d, J = 12,3 Hz), 4,95 (1H, d, J = 8,7 Hz) 4,69 (1H, s), 4,35 (1H, d, J = 8,3 Hz), 4,25 (1H, d, J = 8,3 Hz), 3,94 (1H, d, J = 6,8 Hz), 2,70—1,12 (22H, počítaje v to singlety při 2,54, 2,14, 2,01, 1,80, 1,20, 1,15 (vždy 3H), 0,81-0,73 (9H, m), 0,55-0,31 (6H, m) (c) Příprava 7-O-benzyloxykarbonylpaclitaxelu

Do roztoku 24,0 g (22,6 mmol) produktu se stupně (b) v 250 ml acetonitrilu se po ochlazení na 0 °C přidá 1,0 ml (6,0 mmol) 6N chlorovodíkové kyseliny a za 10 minut podle vyhodnocení chromatografií na tenké vrstvě je reakce skončena. Reakční směs se zředí přidáním nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a ethylacetátu, organická vrstva se oddělí a promývá postupně solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a po filtraci se filtrát zahustí ve vakuu. Zbylý olej se čistí bleskovou chromatografií (hexan : ethylacetát, 1 : 3, potom 1 : 1)

-80CZ 289871 B6 a získá se tak 11,4 g (48% v obou stupních celkem) sloučeniny, jak je uvedena v nadpise a 4,8 g (20%) 7-epihydroxypaclitacelu.

‘H-NMR (300 MHz, CDCls) δ 8,09 (2H, m), 7,71 (2H, m), 7,65-7,27 (16H, m), 7,10 (1H, d, 8,9 Hz), 6,39 (1H, s), 6,1 (1H, m), 5,81 (1H, d, J = 8,9, 2,4 Hz), 5,65 (1 H, d, J = 6,9 Hz), 5,49 (1H, dd, J = 10,6, 7,2 Hz), 5,20 (1H, d, J = 11,9 Hz), 5,12 (1H, d, J = 11,9), 4,91 (1H, d, J = 8,4 Hz), 4,78 (1H, m), 4,30 (1H, d, J = 8,4 Hz), 4,15 (1H, d, J = 8,4 Hz), 3,91 (1H, d, J = 6,8 Hz), 3,69 (1H, d, J - 4,9 Hz), 2,65-1,10 (22H, počítaje v to singlety 2,39, 2,18, 1,81, 1,75, 1,21, 1,15, vždy 3H) (d) Příprava 2'-0-(methylthiomethoxymethyl)-7-0-benzyloxykarbonylpaclitaxelu

Do roztoku 5,53 g (5,71 mmol) 7-O-benzyloxykarbonylpaclitaxelu se přidá 300 mg (1,17 mmol) stříbrné soli kyseliny trifluoroctové, obsahujícího 7,8 g (57,1 mmol) l,l'-dithiodimethyletheru, 6,35 g (28,3 mmol) N-jodimidu kyseliny jantarové a 5,0 g za horka sušeného a práškovaného molámího síta, to vše v prostředí 110 ml tetrahydrofuranu a za teploty místnosti. Za 20 minut podle vyhodnocení chromatografií na tenké vrstvě (hexan/ethylacetát, 1:1) lze zjistit, že proběhla asi 40%ní přeměna výchozí látky na lychleji se pohybující produkt. Potom se znovu přidá 150 mg (0,585 mmol) stříbrné soli kyseliny trifluoroctové, reakce se dále sleduje chromatografií na tenké vrstvě se zjištěním, že za 30 minut je reakce asi z 65 % skončena. Směs se zředí ethylacetátem (100 ml), filtruje se vrstvičkou celitu, filtrát se v děličce protřepá s 200 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 50 ml 5%ního vodného roztoku simatanu sodného. Organická vrstva se dále oddělí promyje se solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a po filtraci se filtrát zahustí ve vakuu. Zbylý olej se čistí bleskovou chromatografií (hexan/ethylacetát, gradientově ředění 4: 1 až 3 : 2); získá se tak sloučenina, jak je uvedena v nadpise ve výtěžku 3,0 g (54%) ve formě světle žluté kapalné látky.

’Η-NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 8,10 (2H, m), 7,74 (2H, m), 7,66-7,25 (18H, m), 7,05 (1H, d, J = 8,9 Hz), 6,40 (1H, s), 6,26 (1H, m), 5,77 (1H, dd, J = 8,8,2,5 Hz), 5,71 (1H, d, J = 6,9 Hz), 5,51 (1H, dd, J = 10,6, 7,1 Hz), 5,21 (1H, d, J = 11,9 Hz), 5,14 (1 H, d, J = 11,9 Hz), 4,92 (1H, m), 4,79 (2H, m), 4,68 (1H, d, J = 2,5 Hz), 4,31 (1H, d, J = 11,8 Hz), 4,30 (1H, d, J = 8,5 Hz), 4,16 (1H, d, J = 8,5 Hz), 4,10 (1H, d, J = 11,8 Hz), 3,93 (1H, d, J = 6,9 Hz), 2,65 - 1,10 (25H počítaje to singlety při 2,50,2,15,2,05,1,74,1,72,1,20,1,15, vždy 3H).

-81 CZ 289871 B6 (e) Příprava 2'-0-(dibenzylfosfonooxymethoxymethyl)-7-0-benzyloxykarbonylpaclitaxeIu

Do roztoku 1,06 g (1,07 mmol) 2'-0-(methylthiomethoxymethyl)-7-0-benzyloxykarbonylpaclitaxelu a 1,0 g za horka vysušeného molekulárního síta v 20 ml tetrahydrofuranu se vnese za teploty místnosti 1,49 g (5,30 mmol) dibenzylesteru kyseliny fosforečné a potom ihned 2,65 g (1,18 mmol) N-jodimidu kyseliny jantarové. Za 2,5 hodiny podle vyhodnocení chromatografií na tenké vrstvě (hexan/ethylacetát) se zjistí, že reakce proběhla asi z 60 %. Přidá se ještě 175 mg (0,78 mmol) N-jodimidu kyseliny jantarové a reakční směs se dále míchá 30 minut; chromatografií na tenké vrstvě se v tu dobu zjistí, že reakce je skončena. Směs se zředí použitím 50 ml ethylacetátu, filtruje se vrstvičkou celitu, filtrát se vlije do děličky obsahující 100 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 20 ml 5%ního vodného roztoku simatanu sodného. Organická vrstva se oddělí, promyje solankou, vysuší se bezvodým síranem sodným a filtrát se zahustí ve vakuu. Zbylý olej se čistí bleskovou chromatografií (hexan/ethylacetát, gradientové ředění 3 : 1 až 1 : 1); získá se tak 750 mg (62%) sloučeniny, jak je uvedena v názvu, to ve formě bílé pevné látky.

‘H-NMR (360 MHz, CDC1₃), δ 8,10 (2H, m), 7,79 (2H, m), 7,65-7,24 (26 H, m), 7,10 (1H, m), 6,43 (1H, s), 6,20 (1H, m), 5,79 (1H, dd, J = 8,8, 3,6 Hz), 5,65 (1H, d, J = 7,0 Hz), 5,52 (1H, m), 5,20 (1H, d, J = 11,8 Hz), 5,11 (1H, d, J = 11,8 Hz), 5,04 - 4,85 (6H, m), 4,75-4,60 (4H, m), 4,30 (1H, d, 8,4 Hz), 4,15 (1H, d, J = 8,4 Hz), 3,92 (1H, d, J = 7,0 Hz), 2,65-1,10 (22H, počítaje v to singlety při 2,48, 2,19,1,95,1,80, 1,20, 1,10, vždy 3 H).

(f) Příprava 2'-0-fosfonooxymethoxymethylpaclitaxelu ve formě triethanolaminové soli

Do roztoku 500 mg (0,382) 2'-O-(dibenzylfosfonooxymethoxymethyl)-7-O-benzyloxykarbonylpaclitaxelu v 40 ml ethylacetátu se v Parr-ově nádobce přidá 10%ní palladium na uhlí a provede se hydrogenace za tlaku 320 kPa. Po 6,5 hodinách se vše filtruje nučí ze slinutého skla, k filtrátu se přidá 0,1 roztok triethanolaminu v ethylacetátu (4,0 ml) a takto připravený roztok se zahustí ve vakuu. Zbylá surová pevná látka se suspenduje asi v 5,0 ml ethylacetátu, ten se odlije, a uvedený postup se opakuje třikrát a získá se tak 300 mg soli triethanolaminu, jak je uvedena v nadpise o čistotě 87% (dle stanovení vysokotlakovou kapalinovou chromatografií). Dalším čištěním této soli chromatografováním na Cjg-koloně (voda/acetonitril, 3 : 1) se získá 120 mg (34%) sloučeniny, jak je uvedena v nadpise, podle stanovení vysokotlakovou kapalinovou chromatografií o čistotě 95%.

‘H-NMR (300 MHz, CD3COCD3, D₂O) δ 9,05 (1H, d, J = 8,7 Hz), 8,15-7,12 (21H, m), 6,40 (1H, m), 6,05 (1H, m), 5,69-5,55 (2H, m), 5,01-4,85 (6H, m), 4,35 (1H, m), 4,14 (2H, m), 3,96-3,85 (6H, m), 3,25 (1H, d, J = 7,1 Hz), 3,30-3,15 (6H, m), 2,50-1,04 (22H, počítaje v to singlety při 2,49, 2,05,1,81,1,60, vždy 3H).

-82CZ 289871 B6

Další příklady

Obecné postupy, jak byly popsány v předcházejících příkladech a popisech jsou ještě doplněny dalšími příklady přípravy sloučenin v rozsahu vzorce (A) tohoto vynálezu;

R‘	T	---------Ř---------	----F----	Ř------	-----Ř*-----
OH	H	-OCH2OP(O)(OH)2	AcO	C6H5	4-F-C«H5 -í-CHj-CéH, 2- furyl 2- thienyl (CH3)2CHisobutenyl (2-methyl-lpropenyl) * c-C3H6- 3- furyl 3- thienyl 2-propenyl
OH CH3CH2OC(O)O-	H	-OCH2OP(O)(OH)2	OH	(CH3)3CO-	CJf,
-OCH2OP(0)(OH)2	H	H CH3CH2OC(O)O-	AcO	c6h5	C6H,
OH CH3OC(O)OCH3CH2OC(O)OCH3(CH2)2OC(O)OCH3(CH2)30C(0)OCC13CH2OC(O)OCH3C(O)OCH3CH2(O)OCH3(CH2)2C(O)OCH3(CH2)3C(O)OCeH5C(0)0C6H3OC(0)0CH2=CHCH2OC(O)OC<íH5CH20C(0)O-	H	-OCH20P(O)(OH)2	AcO	CA	c6h5
OH	H	OH	-OCH2OP(0)(OH)2	C6H5	c6h5
OH	H	H	-OCH2OP(O)(OH)2	CíH,	c6h5
-OCH2OP(O)(OH)2	H	H	H	(CH3)3CO-	4-CH3O-
-OCHzOPÍOXOHh	H	OH	AcO	CíH,	4-CF3-C6H5 2- furyl (CH3)2CH- 2- thienyl ísobutenyl cyclopropyl 3- thienyl 3- furyl 2-propenyl isopropyl
CHjCH20C(0)0-	H	-OCH2OP(O)(OH)2	AcO	CsHj	4-F-C6H5 2-thienyl isopropyl 2-propenyl ísobutenyl cyclopropyl 2-furanyl

-83CZ 289871 B6

					3—furyl 3-thienyl
-OCH2OP(O)(OH)2	H	OH H CH3CH2OC(O)O-	OH	(CH3)3CO-	CíHs
OH	H	-OCH2OP(O)(OH)2	AcO	(CH3)3CO-	isobutenyl 2-propenyl cyklopropyl 3-fiiryl 3-thienyl isopropyl cyclobutyl isopropyl
CH3OC(O)O-	H	-OCH2OP(O)(OH)2	AcO	(CH3)3CO-	isobutenyl 2-propenyl cyclopropyl 3-fiiryl 3-thienyl isopropyl cyclobutyl isopropyl
CH3CH2OC(0)0-	H	-OCH2OP(O)(OH)2	AcO	(CH3)3CO-	isobutenyl 2- propenyl cyclopropyl 3—fiiry! 3- thienyl isopropyl cyclobutyl isopropyl
CHjfCHíhOCÍOO-	H	-OCH2OP(0)(OH)2	AcO	(CH3)3CO-	isobutenyl 2-propenyl cyclopropyl 3-fiiryl 3-thienyl isopropyl cyclobutyl isopropyl
CH3(CH2)3OC(O)O-	H	-OCH2OP(O)(OH)2	AcO	(CH3)3CO-	isobutenyl 2- propenyl cyclopropyl 3-fiiryl 3- thienyl isopropyl cyclobutyl isopropyl
CC13CH2OC(O)O-	H	-OCH2OP(O)(OH)2	AcO	(CH3)3CO-	isobutenyl 2-propenyl cyclopropyl 3-furyl 3-thienyl isopropyl cyclobutyl isopropyl
CHjC(O)O-	H	-OCH2OP(O)(OH)2	AcO	(CH3)3CO-	isobutenyl 2-propenyl cyclopropyl 3—furyl 3-thienyl isopropyl cyclobutyl isopropyl
CH3CHj(0)O-	H	-OCH2OP(OXOH)2	AcO	(CH3)3CO-	isobutenyl 2-propenyl cyclopropyl 3-fitryl 3-thienyl isopropyl cyclobutyl isopropyl
CH3(CH2)2C(O)O-	H	-OCH2OP(O)(OH)2	AcO	(CH3)3CO-	isobutenyl 2-propenyl cyclopropyl 3-furyl 3-thienyl isopropyl

-84CZ 289871 B6

					cyclobutyl isopropyl
CH3(CH2)1C(O)O-	H	-OCH20P(0)(0H)2	AcO	(CH^CO-	isobutyl 2-propenyl cyclopropyl 3-fiiryl 3-thienyl isopropyl cyclobutyl isopropyl
C6HsC(0)O-	H	-OCH20P(0)(0H)2	AcO	(CH3)3CO-	isobutenyl 2-propenyl cyclopropyl 3-fiiryl 3-thienyl isopropyl cyclobutyl isopropyl
CgHíOqojo-	H	-OCH2OP(O)(OH)2	AcO	(CH3)3CO-	isobutenyl 2-propenyl cyclopropyl 3—fiiryl 3-thienyl isopropyl cyclobutyl isopropyl
C6H5OC(O)O-	H	-OCH2OP(O)(OH)2	AcO	(CH^CO-	isobutenyl 2-propenyl cyclopropyl 3-fiiryl 3-thienyl isopropyl cyclobutyl isopropyl
CH2=CHCH2OC(O)O-	H	-OCH2OP(O)(OH)2	AcO	(CH3)3CO-	isobutenyl 2-propenyl cyclopropyl 3-fiiryl 3-thienyl isopropyl cyclobutyl isopropyl
CsHjCHjOCÍOJO-	H	-ΟΟΗ2ΟΡ(0)(ΟΗ)2	AcO	(CH3)3CO-	isobutenyl 2-propenyl cyclopropyl 3-furyl 3-thienyl isopropyl cyclobutyl isopropyl
-OCO2CH2CH3	H	-OCH2OP(0)(OH)2	AcO	CHjCHjCHjCHjO-	2- furanyl 3—furyl isobutenyl 2-propenyl cyclopropyl cyclobutyl 3- thienyl 2-thienyl isopropyl
OH	H	-OCH2OP(O)(OH)2	AcO	CHjCHjCHjCHjO-	2- furyl 3- furyl isobutenyl 2-propenyl cyclopropyl cyclobutyl 3-thienyl 2-thienyl isopropyl
-OCO2CH2CH3	H	-OCH2OP(O)(OH)2	AcO	isopropyloxy	2- furyl 3- furyl 2-thienyl isobutenyl 2-propenyl cyclopropyl cyclobutyl

-85CZ 289871 B6

					3-thienyl isopropyl
OH	H	-OCH2OP(O)(OH)2	AcO	isopropyloxy	2- furyl 3— furyl 2- thienyl isobutenyl 2-propenyl cyclopropyl cyclobutyl 3- thienyl isopropyl
OH CH3OC(O)O- CH3CH2OC(0)O- CH3(CH2)2OC(O)O- CH3(CH2)3OC(O)O- CC13CH2OC(O)OCH3C(O)OCH3CH2(O)O- CH3(CH2)2C(O)O- CH3(CH2)3C(O)OC6H5C(O)OΟίΗ5ΟΟ(Ο)ΟCH3=CHCH20C(0)O- C6HsCH2OC(O)O-	H	-OCH2OCH2OP(0)(OH)2	AcO	(CH3)3CO-	2-furyl
CJIsOCOjCHjCH,	H	-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	AcO	(CH3)3CO-	3-furyl isobutenyl 2-propenyl 2- thienyl 3- thienyl cyclopropyl isopropyl
OH	H	-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	AcO	(CHj)jCO-	2- furyl isobutenyl 2- thienyl 2-propenyl isopropyl cyclopropyl 3- thienyl 3- furyl
-OCO2CH2CH3	H	-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	AcO	CHjCH2CH2CH2O-	2-furyl
-OCO^HjCHj	H	-OCH2OCH2OP(0)(OH)2	AcO	isopropyloxy	2-furyl
-oco2ch2ch3	H	-OCH2OP(O)(OH)2	-OCO2CHj	(CH3)3CO-	2- furyl 3- furyl 3-thienyl isoropyl cyclopropyl isobutenyl 2-thienyl 2-propenyl
OH	H	-Ο0Η2ΟΡ(Ο)(ΟΗ)2	-OCO2CH3	(CH^CO-	2- furyl 3- furyl 3-thienyl isopropyl cyclopropyl isobutenyl 2-thienyl 2-propenyl
-OCO2CH2CH3	H	-OCH2OP(O)(OH)2	OMe	(CH3)3CO-	2- furyl 3— furyl 3-thienyl isopropyl cyclopropyl isobutenyl 2-thienyl 2-propenyl
OH	H	-OCH2OP(0)(OH)2	OMe	(CH3)3CO-	2- furyl 3- furyl 3-thienyl isopropyl cyclopropyl isobutenyl 2-thienyl 2-propenyl

-86CZ 289871 B6

-OCO2CH2CH3	H	-OCH2OP(0)(OH)2	-OC(O)C6H5	(CH3)3CO-	2— furyl 3— furyl 3-thienyl isopropyl cyclopropyl isobutenyl 2-thienyl 2-propenyl
OH	H	-OCH2OP(O)(OH)2	-OC(O)C6H3	(CH3)3CO-	2— furyl 3— furyl 3-thienyl isopropyl cyclopropyl isobutenyl 2-thienyl 2-propenyl
-OCO2CH2CH3	H	-OCH2OP(0)(OH)2	-oco2ch3	CsHí CH3CH2CH2CH2Oisopropoxy	2-furyl
OH	H	-OCH2OP(O)(OH)2	-oco2ch3	C6Hj CH3CH2CH2CH2Oisopropoxy	2—furyl
-OCO2CH2CH3	H	-OCH2OP(O)(OH)2	OMe	C6H, ch3ch2ch2ch2oisopropoxy	2-furyl
OH	H	-OCH2OP(O)(OH)2	OMe	c6h3 ch3ch2ch2ch2oisopropoxy	2-furyl
-OCO2CH2CH3	H	-OCH2OP(O)(OH)2	-OC(0)C6H5	C6Hj CH3CH2CH2CH2Oisopropoxy	2-furyl
OH	H	-OCH2OP(O)(OH)2	-OC(O)C6Hs	CeHj CH3CH2CH2CH2Oisopropoxy	2-furyl
-OCO2CH2CH3	H	-OCH2OCH2OP(0)(OH)2	-oco2ch3	C6H5 ch3ch2ch2ch2oisopropoxy	2-furyl
OH	H	-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	-oco2ch3	CíH3 ch3ch2ch2ch2oisopropoxy	2-furyl
-oco2ch2ch3	H	-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	OMe	c6h3 ch3ch2ch2ch2oisopropoxy	2-furyl
OH	H	-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	OMe	C6H3 ch3ch2ch2ch2oisopropoxy	2-furyl
-oco2ch2ch3	H	-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	-OC(O)	c6h3 ch3ch2ch2ch2oisopropoxy	2-furyl
OH	H	-OCH2OCH2OP(0)(OH)2	-C(O)C6H5	(CH3)3COisopropoxy CH3CH2CH2CH2O-	2-furyl
-OCO2CH2CH3	H	-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	-oco2ch3	(CH3)3CO-	isobutenyl
-oco2ch2ch3	H	-OCH2OCH2OP(0)(OH)2	OMe	(CH3)3CO-	isobutenyl
-oco2ch2ch3	H	-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	-OC(O)C6H3	(CH3)3CO-	isobutenyl
OH	H	-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	-oco2ch3	C6H,	2—furyl
OH	H	-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	OMe	CeHs	2-furyl
OH	H	-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	-OC(O)C6H5	C6H3	2-furyl
-OCO2CH2CH3	H	-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	-OCO2CH3	(CH3)3CO-	2-propenyl
-oco2ch2ch3	H	-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	OMe	(CH3)3CO-	2-propenyl
-oco2ch2ch3	H	-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	-OC(O)C6H3	(CH3)3CO-	2-propenyl
-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	H	OH	AcO	(CH3)3CO	2-furanyl 2- thienyl 3—furyl 3- thienyl isobutenyl 2-propenyl cyclopropyl
-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	H	OH	AcO	ch3ch2ch2ch2oisopropoxy (CH3)3CO-	2-furyl

-87CZ 289871 B6

-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	H	OH	-OCO2CH,	(CH3)3COCeHjisopropoxy	2-furyl
-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	H	OH	OMe	(CH3)sCO CsHj isopropoxy	2-furyl
-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	H	OH	-OC(O)Ph	(CH3)3COc6h5isopropoxy	2-furyl
-oco2ch2ch3	H	-OCH2OCH2OP(0)(OH)2	AcO	C6H5	C6H,
OH	F	H	-OCH2OP(O)(OH)2	(CH3)3COc6h5	CM
-OCO2CH2CH3	F	H	-OCH2OP(O)(OH)2	(CH3)3COc6h,	CeHj
-OCH2OP(O)(OH)2	F	H	AcO	c6h5	2- furyl isobutenyl 3- furyl 2- thienyl 2-propenyl cyclopropyl 3- thienyl isopropyl
-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	F	H	AcO	c6h3	2- furyl isobutenyl 3- furyl 2- thienyl 2-propenyl cyclopropyl 3- thienyl isopropyl
-OCH2OP(O)(OH)2	F	H	AcO	(CH3)3CO-	2- furyl 3-thienyl isobutenyl 3- furyl cyclopropyl 2-thienyl 2-propenyl
-OCH2OCH2OP(0)(OH)2	F	H	AcO	(CH3)3CO-	2—furyl 3-thienyl isobutenyl 3-furanyl cyclopropy 2-thienyl 2-propenyl
-OCH2OP(O)(OH)2	F	H	-oco2ch,	-(CH3)3CO-	2-furyl
-OCH2OP(O)(OH)2	F	H	OMe	(CH3)3CO-	2-furyl
-OCH2OP(O)(OH)2	F	H	-OC(O)C6H5	(CH3)3CO-	2-furyl
-OCH2OP(O)(OH)2	F	H	-oco2ch3	(CH^CO-	2-íuryl
-OCH2OP(O)(OH)2	F	H	OMe	(CH3)3CO-	2-furyl
-OCH2OP(OXOH)2	F	H	-OC(O)C6H,	(CH3)3CO-	2-furyl
-OCH2OP(0)(OH)2	H	OH	OH	(CHj)3CO-	C6H,
OH	H	-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	OH	(CH3)3CO-	CeHj
-OCO2CH2CH2	H	-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	OH	(CH3)3CO-	c6h.
OH	H	OH	-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	(CH3)3CO-	c6h,
-OCOjCHjCH,	H	OH	-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	(CH3)3CO-	UH,
OH	F	H	-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	(CH3)3CO-	CeHj 2- furyl 3- fiiryl 2- thienyl 3- thienyl isobutenyl cyclopropyl 2-propenyl
-0C02CH2CHj	F	H	-OCH2OCH2OP(O)(OH)2	(CH3)3CO-	2- furyl 3- furyl 2- thienyl 3- thienyl isobutenyl cyclopropyl 2-propenyl

* „c“ znamená cykio

-88CZ 289871 B6

Průmyslová využitelnost

Fosfonooxymethylether derivátů taxanu vhodný pro výrobu protinádorových farmaceutických 5 prostředků.

Claims (22)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Fosfonooxymethylether derivátů taxanu obecného vzorce I kde znamená

   R¹ hydroxylovou skupinu, skupinu -OCH₂(OCH₂)_mOP(O)(OH)₂, -OC(O)R^X nebo -OC(O)OR^X,

   20 R atom vodíku a R atom vodíku, hydroxylovou skupinu, skupinu -OCH₂(OCH₂)_mOP(O)(OH)₂ nebo -OC(O)OR^X nebo

   R² atom fluoru a R² atom vodíku,

   25 R³ atom vodíku, hydroxylovou skupinu, acetoxyskupinu, skupinu -OCH₂(OCH₂)_mOP(O)(OH)₂ nebo-OC(O)OR^X,

   R⁴ a R⁵ na sobě nezávisle alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku, alkinylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku nebo skupinu -Z-R⁶ ,

   R⁶, R⁷ atom vodíku a druhý hydroxylovou skupinu, alkanoyloxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo skupinu -OCH₂(OCH₂)_mOP(O)(OH)₂ nebo R⁶, R⁷ spolu dohromady oxoskupinu, za podmínky, že jeden až tři ze symbolů R¹, R², R³ R⁶ a R⁷ znamená skupinu 35 -OCH₂(OCH₂)_mOP(O)(OH)₂,

   Ph fenylovou skupinu,

   Ac acetylovou skupinu

   Z přímou vazbu, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku,

   R⁶ popřípadě aminoskupinou nebo amidoskupinou substituovanou aromatickou uhlovodíkovou 45 skupinu se 6 až 10 atomy uhlíku, cykloalkyiovou skupinu se 3 až 6 atomy uhlíku nebo pětičlennou nebo šestičlennou heterocyklickou skupinu sjedním až čtyřmi atomy ze souboru zahrnujícího atom kyslíku, síry a dusíku,

   -89CZ 289871 B6

   R^x alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku popřípadě substituovanou jedním až šesti stejnými nebo odlišnými atomy halogenu, cykloalkylovou skupinu se 3 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 6 atomy uhlíku nebo skupinu obecného vzorce

   R^a kde znamená

   D vazbu nebo alkandiylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku a

   R^a, R^b a R^c na sobě nezávisle atom vodíku, aminoskupinu, alkylaminoskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, dialkylaminoskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, atom halogenu, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku,

   P 0 nebo 1 a m 0,1 nebo 2 nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.
2. 2. Fosfonooxymethylether derivátů taxanu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde znamená R², atom vodíku a R² skupinu -OCH₂OP(O)(OH)₂ a ostatní symboly mají v nároku 1 uvedený význam.
3. 3. Fosfonooxymethylether derivátů taxanu podle nároku 2 obecného vzorce I, kde znamená R¹ hydroxylovou skupinu nebo skupinu -OC(0)OR^X a R^x má v nároku 1 uvedený význam, přičemž znamená zvláště alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku a ostatní symboly mají v nároku 2 uvedený význam
4. 4. Fosfonooxymethylether derivátů taxanu podle nároku 3 obecného vzorce I, kde znamená R³ atom vodíku, hydroxylovou skupinu nebo acetoxyskupinu a ostatní symboly mají v nároku 3 uvedený význam.
5. 5. Fosfonooxymethylether derivátů taxanu podle nároku 3 nebo 4 obecného vzorce I, kde znamená R⁴(O)_P fenylovou skupinu nebo terc.-butoxyskupinu a ostatní symboly mají v nároku 3 nebo 4 uvedený význam.
6. 6. Fosfonooxymethylether derivátů taxanu podle nároku 3 až 5 obecného vzorce I, kde znamená R⁵ skupinu fenylovou, 2-furylovou nebo 2-thienylovou a ostatní symboly mají v nároku 3 až 5 uvedený význam.
7. 7. Fosfonooxymethylether derivátů taxanu podle nároku 1 ze souboru zahrnujícího

   2'-0-(ethoxykarbonyl)-7-0-(fosfonooxymethyl)paclitaxel a jeho farmaceuticky přijatelnou sůl, zvláště sůl sodnou, triethanolaminovou, triethylaminovou, arginovou, lysinovou, ethanolaminovou a N-methylglukaminovou,

   -90CZ 289871 B6

   7-O-ffosfonooxymethyl)paclitaxel a jeho farmaceuticky přijatelnou sůl, zvláště sůl sodnou,

   3 '-N-debenzoy 1-3 '-desfenyl-3 '-N-(terc .butoxykarbonyl)-3 '-(2-fury l)-2'-O-(ethy loxykarbonyl)-7-0-(fosfonooxymethyl)paclitaxel a jeho farmaceuticky přijatelnou sůl, zvláště sůl triethanolaminovou a

   3 '-N-debenzoy 1-3 '-desfenyl-3 '-N-(terc .butoxykarbonyl)-3 '-(2-thienyl)-2'-O-(ethy ioxykarbonyl)-7-0-(fosfonooxymethyl)paclitaxel a jeho farmaceuticky přijatelnou sůl, zvláště sůl triethanolaminovou.
8. 8. Fosfonooxymethylether derivátů taxanu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde znamená R¹ skupinu -OCH₂OP(O)(OH)₂ a ostatní symboly mají v nároku 1 uvedený význam.
9. 9. Fosfonooxymethylether derivátů taxanu podle nároku 8 obecného vzorce I, kde znamená

   R atom vodíku,

   R² atom vodíku, hydroxylovou skupinu nebo skupinu -OC(O)OR^X a ostatní symboly mají v nároku 8 uvedený význam.
10. 10. Fosfonooxymethylether derivátů taxanu podle nároku 9 obecného vzorce I, kde znamená R³ atom vodíku, hydroxylovou skupinu nebo acetoxyskupinu a ostatní symboly mají v nároku 9 uvedený význam.
11. 11. Fosfonooxymethylether derivátů taxanu podle nároku 9 nebo 10 obecného vzorce I, kde znamená R⁴(O)_P fenylovou skupinu nebo terc.-butoxyskupinu a ostatní symboly mají v nároku 9 nebo 10 uvedený význam.
12. 12. Fosfonooxymethylether derivátů taxanu podle nároku 9 až 11 obecného vzorce I, kde znamená R⁵ skupinu fenylovou a ostatní symboly mají v nároku 9 až 11 uvedený význam.
13. 13. Fosfonooxymethylether derivátů taxanu podle nároku ze souboru zahrnujícího

    2'-0-(fosfonooxymethyl)paclitaxel a jeho farmaceuticky přijatelnou sůl,

    2',7-0-bis(fosfonooxymethyl)paclitaxel a jeho farmaceuticky přijatelnou sůl, zvláště sůl sodnou,

    10-desacetyl-3 '-N-desbenzoy 1-3 '-N-(terc.butoxykarbonyl)-10-O-(fosfonooxymethyl)paclitaxel a jeho farmaceuticky přijatelnou sůl, zvláště sůl triethanolaminovou.
14. 14. Fosfonooxymethylether derivátů taxanu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde znamená jak R¹ tak R² skupinu -OCH2OP(O)(OH)2 a ostatní symboly mají v nároku 1 uvedený význam, nebo znamená R¹ skupinu OCH2OCH₂OP(O)(OH)₂ a ostatní symboly mají v nároku 1 uvedený význam, nebo znamená R³ skupinu OC^OPíOjíOH^ a ostatní symboly mají v nároku 1 uvedený význam nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.

    -91 CZ 289871 B6 ( III)
15. 15. Sloučenina vzorce III kde znamená Ph fenylovou skupinu Ac acetylovou skupinu a jeho kovový alkoxid jako meziprodukt pro přípravu fosfonooxymethyletheru derivátů taxanu obecného vzorce I podle nároku 1.
16. 16. Sloučenina obecného vzorce lb kde znamená

    R^Ib hydroxylovou skupinu, chráněnou hydroxylovou skupinu, skupinu -OCH2SCH3, -OC(O)R^X nebo -OC(O)OR^X

    R², atom vodíku a

    R^2b atom vodíku, hydroxylovou skupinu, chráněnou hydroxylovou skupinu, skupinu -OCH₂SCH₃ nebo-OC(O)OR^X nebo

    R² atom fluoru a

    R^2b atom vodíku,

    R^3b atom vodíku, hydroxylovou skupinu, chráněnou hydroxylovou skupinu, acetoxyskupinu, skupinu -OCH₂SCH3 nebo -OC(O)OR^X,

    R^6b, R^7b jeden ze symbolů atom vodíku a druhý hydroxylovou skupinu, chráněnou hydroxylovou skupinu, alkanoyloxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo skupinu -OCH₂SCH3 nebo R^6b, R^7b spolu dohromady oxoskupinu

    -92CZ 289871 B6 za podmínky, že alespoň jeden ze symbolů R^lb, R^2b, R^3b, R^6b a R^7b znamená skupinu -OCH₂SCH₃ a ostatní symboly mají v nároku 1 uvedený význam, jako meziprodukt pro přípravu fosfonooxymethyletheru derivátů taxanu obecného vzorce I podle nároku 1.
17. 17. Sloučenina podle nároku 16 ze souboru zahrnujícího

    7-O-methylthiomethylpaclitaxel,

    T -0-(benzyloxykarbonyl)-7-0-methylthiomethylpaclitaxel,

    2' -0-(ethoxykarbonyl)-7-0-methylthiomethylpaclitaxel,

    2' -O-(methylthiomethyl)-7-O-(triethylsilyl)paclitaxel,

    2' -0-methylthiomethyl)paclitaxel,

    2', 7-0-bis(methylthiomethyl)paclitaxel,

    3' -N-debenzoyl-3 '-desfenyl-3 ’-N-(terc.butyloxykarbonyl)-3 '-(2-furyl)-7-0-(methylthiomethyl)paclitaxel,

    3' -N-debenzoyl-3 '-desfenyl-3 '-N- (terč .butyloxykarebonyl)-3 '-(2-furyl}-2'-O-ethoxykarbonyl-7-0-(methylthiomethyl)paclitaxel,

    3' -N-debenzoyl-3 '-desfenyl-3 '-N-(terc .butoxykarbonyl)-3 '-(2-thienyl)-7-0-(methylthiomethyl)paclitaxel,

    3' -N-debenzoyl-3'-desfenyl-3'-N-(terc.butyloxykarbonyl)-3'-(2-thienyl)-2'-0-ethyloxykarbonyl-7-0-(methylthiomethyl)-paclitaxel jako meziprodukt pro přípravu fosfonooxymethyletheru derivátů taxanu obecného vzorce I podle nároku 1.
18. 18. Sloučenina obecného vzorce kde R², R^2b, R^3b, R⁴, R⁵, R^6b a R^7b a p mají v nároku 16 uvedený význam, jako meziprodukt pro přípravu fosfonooxymethyletheru derivátů taxanu obecného vzorce I podle nároku 1..

    -93CZ 289871 B6
19. 19. Sloučeniny obecného vzorce Ic kde znamená

    R^lc hydroxylovou skupinu, chráněnou hydroxylovou skupinu, skupinu -OCH2OP(O)(OR^y)2 nebo-OC(O)OR^X

    R² atom vodíku a

    R^2c atom vodíku, hydroxylovou skupinu, chráněnou hydroxylovou skupinu, skupinu -OCH2OP(O)(OR^y)2 nebo -OC(O)OR^X nebo

    R² atom fluoru a

    R^2c atom vodíku,

    R^3c atom vodíku, hydroxylovou skupinu, chráněnou hydroxylovou skupinu, acetoxyskupinu, skupinu OCH2OP(O)(OR^y)2 nebo -OC(O)OR^X, jeden ze symbolů róc, r7c j_e(j_{en ze} symbolů atom vodíku a druhý hydroxylovou skupinu, chráněnou hydroxylovou skupinu, alkanoyloxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo skupinu -OCH₂OP(O)(OR^y)2 nebo R^6c, R^7c spolu dohromady oxoskupinu za podmínky, že alespoň jeden ze symbolů R^lc, R²', R^3c, R^6c a R^7c znamená skupinu -OCH2OP(O)(OR^y)2 a ostatní symboly mají v nároku 1 uvedený význam jako meziprodukt pro přípravu fosfonooxymethyletheru derivátů taxanu obecného vzorce I podle nároku 1.
20. 20. Sloučenina podle nároku 19 obecného vzorce

    -94CZ 289871 B6 kde R², R^2c, R^3c, R⁴, R⁵, R^6c, R^7c, R^y a p mají v nároku 19 uvedený význam jako meziprodukt pro přípravu fosfonooxymethyletheru derivátů taxanu obecného vzorce I podle nároku 1.
21. 21. Farmaceutický prostředek, v y z n a č u j í c í se tím, že obsahuje protinádorově účinné 5 množství sloučeniny podle nároku 1 až 14 a farmaceuticky vhodný nosič.
22. 22. Použití sloučeniny podle nároku 1 až 14 pro výrobu farmaceutického prostředku, zvláště pro orální podání, pro inhibici růstu nádoru.