CZ293905B6 - Deriváty dolastatinu@�Q v kombinaci s taxany - Google Patents

Deriváty dolastatinu@�Q v kombinaci s taxany Download PDF

Info

Publication number
CZ293905B6
CZ293905B6 CZ19993211A CZ321199A CZ293905B6 CZ 293905 B6 CZ293905 B6 CZ 293905B6 CZ 19993211 A CZ19993211 A CZ 19993211A CZ 321199 A CZ321199 A CZ 321199A CZ 293905 B6 CZ293905 B6 CZ 293905B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
compound
tert
pro
formula
carbonyl
Prior art date
Application number
CZ19993211A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ321199A3 (cs
Inventor
Barlozzariáteresa
Hauptáandreas
Original Assignee
Abbottágmbhá@Áco@Ákg
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Abbottágmbhá@Áco@Ákg filed Critical Abbottágmbhá@Áco@Ákg
Publication of CZ321199A3 publication Critical patent/CZ321199A3/cs
Publication of CZ293905B6 publication Critical patent/CZ293905B6/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Epoxy Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Farmaceutický prostředek obsahující účinné množství první sloučeniny vybrané ze skupiny obsahující paclitaxelŹ taxoterŹ modifikovaný taxan nebo taxoidní analogyY a účinné množství druhé sloučeniny obecného vzorce IŹ kterou je derivát dolastatinu@�QŹ a jejich soli s fyziologicky přijatelnými kyselinamiŕ

Description

Deriváty dolastatinu-15 v kombinaci s taxany
Oblast techniky
Vynález se týká farmaceutických prostředků užitečných v léčbě rakoviny savců.
Dosavadní stav techniky
Některé antineoplastické léky vyvolávají svůj efekt tak, že působí na mikrotubuly v buňce a proto jsou zvány „antimikrotubulámí“ léky. Mikrotubuly přispívají k cytoskeletu eukaryotických buněk a účastní se mnoha různých buněčných funkcí. Prostě řečeno jsou mikrotubuly hlavní organizátoři vnitřku buňky. Mikrotubuly jsou dynamické, polární struktury obsahující kladný konec, kde se přidávají tubulinové podjednotky a mikrotubuly rostou do délky, a záporný konec, kde se podjednotky ztrácejí a mikrotubuly se ruší pokud nejsou stabilizovány. Obecně mikrotubuly polymerizují v určitých odděleních uvnitř buňky nazývaných centry organizujícími mikrotubuly („MTOC“). Mikrotubuly se paprskovitě šíří z MTOC a neustále rostou a rozpouštějí se, protože jejich organizace je dynamická. (Viz Alberts a kol. THE CELL, 912, 3. vydání (1994)).
Antimikrotubulámí léky vyvolávají svůj antineoplastický efekt ovlivňováním mikrotubulů množstvím různých mechanismů. Například některé antineoplastické léky narušují organizaci mikrotubulu tak, že inhibují dynamiku mikrotubulů. Tyto léky ovlivňují kladný (polymerační) konec, záporný (depolymerační) konec nebo stabilizují mikrotubulus tak, že nedochází ke vzniku nebo narušení síťové struktury při vzniku mikrotubulů. Další antimikrotubulámí léky působí tak, že váží tubulinové podjednotky a tím inhibují vznik mikrotubulů tak, že ovlivní předskladebnou fázi organizace mikrotubulu a zastaví mechanismus polymerace. Další antimikrotubulámí léky zvyšují rychlost polymerace mikrotubulů a způsobují, že mikrotubulus na jednom konci rychle roste a ztrácí svou rovnováhu. Další antimikrotubulámí léky se váží na mikrotubuly na záporném konci, čímž způsobují, že se mikrotubulus buď rychle rozkládá nebo naopak stabilizují záporný konec, ale stále umožňují polymeraci. (Viz Arruda a kol., LU103793 (NSC D-669356): A Synthetic Peptide That Interacts with Microtubules and Inhibits mitosis, Cancer Research, 55, 3085 až 3092 (1995).
Lék taxol inhibuje funkci mikrotubulu jedinečnou cestou. Hyperstabilizuje mikrotubuly po délce mikrotubulu a na záporném konci a podporuje sestavování tubulinu na kladném konci (Viz Bissery, M., WO 94/10 995).
Dolastatin-15 je látka ze skupiny dolastatinových antineoplastických činidel, která inhibují polymeraci tubulinu a normální hematopoietickou progenitorovou proliferaci buňky. Dolastatin15 je depsipeptid sestávající ze sedmi jednotek, který je strukturně homologický s dolastatinem10. Dolastatín-10 má také antimiotickou a antiproliferativní aktivitu a inhibuje růst hematopoietických progenitorových buněk. Dolastatin-15 narušuje organizaci mikrotubulu depolymerací mikrotubulů v buňkách v mezifázi, což vede ke vzniku abnormálních vřeten a narušení distribuce chromozómu během mitózy. (Viz Arruda a kol., LU103793 (NSC D-669356): A Synthetic Peptide That Interacts with Microtubules and Ihhibits mitosis, Cancer Research, 55, 3085 až 3092 (1995).
Podstata vynálezu
Vynález se týká farmaceutických prostředků užitečných v léčbě rakoviny savců. Vynález je založen na objevu, že kombinace sloučeniny obecného vzorce I (derivát dolastatinu-15) a paclitaxelu (také známého jako taxol), taxoteru nebo upraveného taxanu nebo taxoidního analoga vykazují zvýšenou účinnost proti rakovině než je účinnost jednotlivých látek samostatně. Jinak
-1 CZ 293905 B6 řečeno kombinace podle předkládaného vynálezu je synergistická. Dva léky jsou pokládány za terapeuticky synergistické, pokud kombinace vede k znatelně účinnějšímu zabíjení rakovinných buněk než nej lepší složka při podávání samostatně v optimálních nebo maximálně tolerovaných dávkách. Dále uváděná data ukazují, že kombinace podle předkládaného vynálezu vykazují vyšší antineoplastickou aktivitu než kterýkoliv z léků z kombinace samostatně a/nebo, že kombinace překonává nevýhody dolastatinu-15 a udržuje si terapeuticky účinnou antineoplastickou aktivitu.
Takže vynález se týká farmaceutických prostředků užitečných v léčbě rakoviny savců. Farmaceutické prostředky z předloženého vynálezu obsahují dvě látky: první sloučeninou je paclitaxel, taxoter nebo modifikovaný taxan nebo taxoidní analog a druhá sloučenina je sloučenina obecného vzorce I:
R’R2N-CHX-CO-A-B-D-(E)s-(F)t-(G)u-K (I)
Vzorec I je diskutován dále v textu. Některé příklady sloučenin obecného vzorce Ijsou specifikovány na tomto místě. Např. sloučeniny obecného vzorce jsou ty, v kterých R1 a R2 jsou methyl nebo ethyl; X je izopropyl, se£-butyl nebo terc-butyl; sje 1; t a u jsou 0; A je valyl, izoleucyl nebo 2-terc-butylglycyl; D je thiazolidinyl-karbonyl, 3,4-dehydroprolyl nebo propyl; E je proryl, thiazolidinyl-4-karbonyl, homoprolyl, hydroxyprolyl nebo 3,4-dehydroproiyl; Kje substituovaná aminoskupina, která má obecný vzorec R5-N-R6, kde R5 je vodík nebo Ci-C4-alkoxy a R6 je monovalentní substituent jako (l)-nebo (2)- adamantyl; (CH2)v-fenyl kde v=l; α,α-dimethylbenzyl; C]-C]2-lineámí nebo rozvětvená hydroxyalkyl skupina, jako C(CH3)2-CH2-OH což je 3-hydroxy-l,l-dimethylpropyl; Ci-C4-cykloalkyl skupina jako bicyklo[3.3.0]okta-l-yl, 1-methylcykíopentyl nebo 1-methylcyklohexyl; nebo Ci-C4 lineární nebo rozvětvená alkylová skupina jako —C(CH3)3 což je Zerc-butyl;
-C-CH2-CH3 což je 1,1 -dimethylpropyl;
(CH3)2
-C(CH2-CH3) což je 1-methyl-1-ethylpropyl;
CH3 “CH-C(CH3)3 což je (S)- nebo (R)-1-methyl-2,2dimethyl-propyl
CH3
- CH-C(CH3)2COž je (S)- nebo (R)-1-ethyl-2-methyl-propyl c2h5
- CH-C(CH3)2což je 1-isopropyl-2-methy!-propyl; nebo
CH(CH3)2
-C(CH3)2-CH(CH3)2 což je l,l-dimethyl-2-methyl-propyl; -C(CH3)2, což je izopropyl;
-CH(CH3)-CH2CH3, sefc-Butyl[(S) nebo (R)]; nebo -CH(CH3)-CH(CH3)2, což je 1,2-dimethylpropyl.
Každá sloučenina je přítomná ve farmaceutickém prostředku v účinném množství. Farmaceutický prostředek může obsahovat jeden nebo více typů sloučeniny (např. jeden nebo více typů první sloučeniny, jako je paclitaxel nebo paclitaxel a taxoter a jednu nebo více sloučenin obecného vzorce I).
Tento vynález se také týká způsobu léčby rakoviny savců, při kterém jsou použity zde popsané farmaceutické sloučeniny. Podle způsobu z předloženého vynálezu jsou ve farmaceutickém
-2CZ 293905 B6 prostředku podávány dvě sloučeniny nebo jsou tyto dvě sloučeniny podávány individuálně/separátně v dostatečně krátkém časovém rozmezí, tak aby měly požadovaný účinek.
Bylo překvapivě objeveno, že kombinace paclitaxelu, taxoteru nebo modifikovaného taxanu nebo taxoidového analogu, zde popsaných, a sloučeniny obecného vzorce I, zde popsané, poskytují zlepšený nebo terapeutický synergický protirakovinový účinek in vivo. Pro účel tohoto vynálezu jsou dvě podávaná léčiva považována za synergická, jestliže kombinovaný režim produkuje více zabitých tumorových buněk, než jeho nejlepší složka, když je podávána samostatně v optimální nebo maximálně tolerované dávce. Rozdíly v množství zabitých tumorových buněk, které jsou nižší než je polovina desetiny, nejsou považovány za signifikantní.
Krátký popis obrázků
Obrázek zobrazuje sloučeniny i-xvii, které jsou příklady sloučenin obecného vzorce I.
Podrobný popis vynálezu
Vynález se týká farmaceutických prostředků užitečných v léčbě rakoviny savců. Farmaceutické prostředky z předloženého vynálezu obsahují dvě látky: první sloučeninou je paclitaxel, taxoter nebo modifikovaný taxan nebo taxoidní analog a druhá sloučenina je sloučenina obecného vzorce I, kteiý je níže popsán. Každá sloučenina je přítomná ve farmaceutickém prostředku v účinném množství. Farmaceutický prostředek může obsahovat jeden nebo více typů sloučeniny, nebo může být podáván podle předloženého způsobu. Zde použitý termín „účinné množství“ se týká takového dostatečného množství, které vyvolá žádoucí biologickou odezvu. V tomto vynálezu je žádoucí biologická odezva inhibice (částečná nebo totální) vzniku tumoru nebo zhoubných nemocí krve, zvrácení vývoje z tumoru nebo další zhoubného projevu, nebo prevenci nebo redukci jeho dalšího vývoje.
Paclitaxel, taxoter nebo modifikovaný taxan nebo taxoidní analog
Paclitaxel (Taxol®), který je jedním příkladem první sloučeniny farmaceutického prostředku, je diterpen izolovaný z kůiy tisu západního (pacifického), Taxus brevifolia, a je reprezentativním třídy terapeutického agens, která má systém taxanového kruhu. Pro cíle tohoto vynálezu je jakékoliv terapeutické
OH agens, které má taxanový kruh, definováno jako „taxan“. Vzorec paclitaxelu je:
Paclitaxel a jeho analogy mohou být vyrobeny částečnou syntézou z 10-deacetylbaccatinu III, prekurzoru, který je získán jehliček a větviček tisu, a dále mohou být získány totální syntézou. Viz Holton, et al., J. Am. Chem. Soc. 116:1597-1601 (1994) a Nicolaou, et al., Nátuře 367:630
-3CZ 293905 B6 (1994). U paclitaxelu byla prokázána antineoplazmická aktivita. V poslední době bylo prokázáno, že tato aktivity je důsledkem podpory polymerace mikrotubul. Viz Kumar, N., J. Biol. Chem. 256:10435-10441 (1981); Rowinsky, et al., J. Nati. Cancer Inst. 82:1247-1259 (1990); a Schiff, et al., Nátuře 277:656-667 (1997). Byla prokázaná účinnost paclitaxelu na některé lidské tumory 5 v klinických případech. Viz McGuire, et. al., Ann. Int. Med. 111:237-279 (1989); Holmes, et al.,
J. Nati. Cancer Inst. 83: 1797-1805 (1991); Kohn et al., J. Nati. Cancer Inst. 836: 18-24 (1994); a Kohn, et al., Američan Society for Clinical Oncology 12 (1993).
Paclitaxel je dostupný pod obchodním jménem Taxol® od Bristol-Myers Squibb Company, 10 NewYork,NY.
První sloučeninou ve farmaceutickém prostředku je obvykle paclitaxel (Taxol®), taxoter nebo modifikovaný taxan nebo taxoidní analog. Modifikovaný taxan nebo taxoidní analogy jsou takové sloučeniny, které mají taxanový kruh s modifikovanými postranními řetězci. Velký počet 15 těchto analog má zlepšené vlastnosti, jako např. vyšší rozpustnost ve vodě a stabilitu oproti přírodně vyskytujícímu se paclitaxelu. Např., RPR109881 je nový orální a iv aktivní taxoidní analog, který je vyvíjen Rhone. Poulenc Rhoreer a v současnosti je v I fázi klinických testů. Tyto analogy jsou známé odborníkům, kteří se pohybují na tomto poli vědy a jsou popsány např. v U S Patent 5 278 324; 5 272 171; 5 254 580; 5 250 683; 5 248 769; a 5 227 400 popisy těchto 20 vynálezů jsou zde zahrnuty v referencích. Taxoter může být připraven způsobem, který je popsán vWO 93/18 210, popis vynálezu je zde zahrnut v referencích. Ve konkrétních provedeních vynálezu je první sloučenina ve farmaceutickém prostředku paclitaxel nebo taxoter.
Sloučeniny obecného vzorce I
Počet krátkých peptidů se signifikantní aktivitou jako inhibitory růstu buněk byly izolovány z mořského zajíce z indického oceánu Dolabella auricularia (Bai, etl. al., Biochem. Pharmacology, 40: 1859-1864 (1990); Beckwith et al., J. Nati. Cancer Inst., 85:483-488 (1993) a reference zde uvedené). Tyto zahrnují dolastatiny 1-10 (US patent 4 816 444, vydaný Pettit 30 et al.) a dolastatin-15 (EP 3 985 558). Dolastatin-15 např. nepochybně inhibuje růst buněk rodu
National Cancer Institute P388 lymfatické leukemie, což silně předpovídá účinnost proti různým lidským karcinomům. Tato sloučenina bohužel je přítomna v mořském zajíci pouze ve stopových množstvích a je obtížněji izolovat, je drahé ji syntetizovat a má špatnou rozpustnost ve vodě.
Sloučeniny obecného vzorce I jsou deriváty dolastatinu-15, které netrpí výše zmíněnými nevýhodami, i když si zachovaly antineoplazmickou aktivitu nebo jí vykazují větší v porovnáním s přírodním produktem. Deriváty dolastatinu-15 obecného vzorce I, které jsou kombinovány s paclitaxelem, taxoterem nebo s modifikovaným taxanem nebo s taxoidním analogem v předloženém vynálezu, jsou syntetizovány tak, jak bylo popsáno v souhrnné aplikaci U.S.S.N.
08/472,453 z 7. června 1995, poznatky z této aplikace jsou zde inkorporované v jejich celistvosti.
Deriváty dolastatinu-15 obecného vzorce obvykle obsahují L-amino kyseliny, ale mohou také obsahovat jednu nebo více D-amino kyselin, jak je popsáno v souhrnné aplikaci U.S.S.N. 08/472,453 z 7. června 1995. Sloučeniny obecného vzorce mohou být přítomny jako soli s fyzio45 logicky přijatelnými kyselinami jako jsou, ale neomezují použití dalších, kyselina chlorovodíková, kyselina citrónová, kyselina vinná, kyselina mléčná, kyselina fosforečná, kyselina methansulfonová, kyselina octová, kyselina mravenčí, kyselina maleinová, kyselina fumarová, kyselina jablečná, kyselina jantarová, kyselina malonová, kyselina sírová, kyselina L-glutamová, kyselina L-asparagová, pyrohroznová, kyselina galaktarová, kyselina benzoová, kyselina 50 glukuronová, kyselina šťavelová, kyselina askorbová a acetylglycin.
Ve smyslu předloženého vynálezu termín „monovalentní radikál“ znamená elektricky neutrální molekulární fragment schopný vytvořit jednu kovalentní vazbu s druhým neutrálním molekulárním fragmentem. Monovalentní radikály zahrnují atom vodíku, alkylové skupiny (např. methylo55 vou, ethylovou, propylovou a terc-butylovou skupinu), cykloalkylové skupiny, hydroxy alkylové
-4CZ 293905 B6 skupiny, adamantylové skupiny, atomy halogenů (např. atomy fluoru, chloru a bromu), arylové skupiny (např. fenyl, benzyl a naftyl skupina) a alkoxy skupiny (např. methoxy a ethoxy skupina). Dva monovalentní radikály na dvou sousedních atomech, které jsou spojené sigma vazbou, mohou tvořit pi vazbu sousedních atomů. Dva monovalentní radikály mohou být také spojené spolu např. polymethylenovou jednotkou, a tak tvořit cyklickou strukturu. Např., jednotka -N(R)R', kde R a R' jsou monovalentní radikály, může společně s atomem dusíku tvořit heterocyklický kruh. Dva monovalentní zbytky s vazbou na jeden atom tvoří divalentní zbytek jako je alkylidenová skupina, např. propylidenová skupina nebo atom kyslíku.
Blíže v sloučeninách obecného vzorce I:
R1 je alkyl, jako Ci-C3; cykloalkyl, jako je cyklopropyl; alkylsulfonyl, jako je Ci-C3; fluoroalkyl, jako je fluoroethyl, difluoroethyl, fluoroizopropyl; aminosulfonyl, který může být substituován alkylem, jako je methyl;
R2 je vodík; alkyl jako je Ci-C5; fluoroalkyl jako je fluoroethyl, difluoroethyl, fluoroizopropyl; cykloalkyl, jako je cyklopropyl;
R'-N-R2 dohromady mohou být pyrrolidinové nebo piperidinové segmenty;
A je valyl, izoleucyl, leucyl, allo-izoleucyl, 2,2-dimethylglycyl, 2-cyklopropylglycyl, 2cyklopentylglycyl, 3-terc-butylalanyl, 2-terc-butylglycyl, 3-cykIohexylalanyl, 2-ethylglycyl, 2-cyklohexylglycyl, norleucylové nebo norvalylové segmenty;
B je N-alkyl-valyl, norvalyl, leucyl, izoleucyl, 2-terc-butylglycyl, -3-terc-5-butylalanyl, 2ethylglycyl, 2-cyklopropylglycyl, 2-cyklopentylglycyI, norleucylové nebo 2-cyklohexylglycylové segmenty, kde A-alkyl je s výhodou N-methyl nebo N-ethyl;
D je prolyl, homoprolyl, hydroxyprolyl, 3,4-dehydroprolyl, 4-fluoroprolyl, 3-methylprolyl, 4methylprolyl, 5-methylprolyl, azetidin-2-karbonyl, 3,3-dimethylprolyl, 4,4-difluoroprolyl, oxazolidin-4-karbonyl nebo thiazolidin-4-karbonyl-ové segmenty;
E je prolyl, homoprolyl, hydroxyprolyl, 3,4-dehydroprolyl, 4-fluoroprolyl, 3-methylprolyl, 4methylpropyl, 5-methylprolyl, azetidin-2-karbonyl, 3,3-dimethylprolyl, 4,4-difluoroprolyl, oxazolidin-4-karbonyl nebo thiazolidin-4-karbonyl-segmenty;
F a G jsou nezávisle na sobě vybrány ze skupiny, která obsahuje prolyl, homoprolyl, hydroxyprolyl, thiazolidinyl-4-karbonyl, 1-aminopentyl-l-karbonyl, valyl, 2-fórc-butylglycyl, izoleucyl, leucyl, 3-cyklohexylalanyl, fenylalanyl, N-methylfenylalanyl, tetrahydroisochinolyl-2-histidyl, 1-aminoindyl-l-karbonyl, 3-pyridylalanyl, 2-cyklohexylglycyl, norleucyl, norvalyl, neopentylglycyl, tryptophanyl, glycyl, 2,2-dimethylglycyl alanyl, βalanylové a 3-naflylalanylové segmenty;
X je vodík, alkyl (jako je C1-C5), cykloalkyl (jako je C3-C5), -CHr-cyklohexyl nebo arylalkyl (jako je benzyl nebo fenethyl);
s, t a u jsou nezávisle na sobě 0 nebo 1; a
K je hydroxy, alkoxy (jako je C1-C4), fenoxy, benzyloxy nebo substituovaná nebo nesubstituovaná amino skupina.
Dále, sloučeniny obecného vzorce I mohou být soli s fyziologicky přijatelnými kyselinami.
Jedna podskupina sloučenin z předloženého vynálezu zahrnuje sloučeniny obecného vzorce I kde R'-N-R2 je pyrrolidinylový nebo piperidinylový segment.
-5CZ 293905 B6
K je aminoskupina obecného vzorce R’-N-R2, kde:
R5 je vodík, nebo hydroxy, nebo C]_7 alkoxy, nebo benzyloxy, nebo fenyloxy nebo C]_i2 lineární nebo rozvětvený hydroxyalkyl, jako je 3-hydroxy-l,l-dimethylpropyl, nebo Ct_7 lineární nebo rozvětvený alkyl (který může být substituován jedním nebo více atomy fluoru), nebo C3_i0 cykloalkyl, jako je, bicyklo[3.3.0]octa-lyl, 1-methylcyklopentyl nebo 1methylcyklohexyl; nebo benzyl (který může být substituován až třemi substituenty, které jsou nezávisle na sobě CF3, nitro skupina, Cj_7 alkylsulfonyl, Ci^ alkoxy, fenoxy, benzoxy, halogen, Ci_4-alkyl, kyano skupina, hydroxy, N(CH3)2, COOMe, COOEt, COOiPr, nebo COONH2);
R6 je vodík, nebo Cj_7 lineární nebo rozvětvený alkyl (který může být substituován jedním nebo více atomy fluoru), nebo C i_72 lineární nebo rozvětvený hydroxyalkyl, jako je 3-hydroxy1,1-dimethylpropyl, or C3_i0 cykloalkyl, jako je, bicyklo[3.3.3]octa-lyl, 1-methylcyklopentyl nebo 1-methylcyklohexyl; nebo -(CH2)v-C3_7-cykloalkyl (v=0, 1, 2, nebo 3), nebo norefedryl, nebo norpseudoefediyl; nebo chinolyll, nebo pyrazolyl, nebo -CH2benzimidazolyl, nebo (1 )-adamantyl, nebo (2)-adamantyl--CHr-adamantyl, nebo alfamethyl-benzyl, nebo alfa-dimethylbenzyl, nebo (CH2)v-fenyl (v=0, 1, 2, nebo 3; který může být substituován až třemi substituenty, které jsou nezávisle na sobě CF3, nitro skupina, Ci_7 alkylsulfonyl, Cj^alkoxy, fenoxy, benzoxy, halogen, C]J(-alkyl, který může tvořit cyklický systém, kyano skupina, hydroxy, N(CH3)2, COOMe, COOEt, COOiPr, nebo COONH2) nebo -(CH2)m-naftyl (m=0 nebo 1); nebo ~(CH2)W benzhydryl (w=0, 1, nebo 2); nebo bifenyl nebo pikolyl nebo benzothiazolyl nebo benzoizothiazolyl nebo benzopyrazolyl nebo benzoxazolyl nebo -(CH2)m-fluorenyl (m=0 nebo 1); nebo pyrimidyl nebo -(CH2)m-mdanyl (m=0 nebo 1); nebo -(CH2CH2O)7-CH3 (y=0, 1, 2, 3, 4 nebo 5), nebo ~(CH2CH2O) γCH2CH3 (y=0, 1, 2, 3, 4, nebo 5), nebo NH-C6H5 (který může být substituován až dvěma substituenty, které jsou nezávisle na sobě CF3, nitro skupina, Ci_7 alkylsulfonyl, C1-4 alkoxy, fenoxy, benzoxy, halogen, Ci_4-alkyl, který může tvořit cyklický systém, kyano skupina, hydroxy, N(CH3)2, COOMe, COOEt, COOiPr, nebo COONH2), nebo -NCH3-C6H5 nebo NH-CH2-C6H5 nebo -NCH3-CH2-C6H5 nebo 5-členným heteroaryl, který může být substituován až dvěma substituenty, které jsou nezávisle na sobě CF3, nitro skupina, thiomethyl, thioethyl, C3_8-cykloalkyl, -CH2-COOEt, C3^-alkylenová skupina, která tvoří bicyklický systém s heterocyklem, fenyl; nebo -CHR7-5- členným heteroaryl (který může být substituován až dvěma substituenty, které jsou nezávisle na sobě CF3, nitro skupina, kyano skupina, halogen, COOMe, COOEt, COOiPr, CONH2, C]_í-alkyl, Ci^-alkoxy, fenyl, benzyl, naflyl, nebo C]_7 alkylsulfonyl, [R7 = vodík, lineární nebo rozvětvený C]_s alkyl, benzyl; nebo R7 a R5 společně tvoří a skupinu -(CH2)3- nebo -(CH2)4-). Kde u substituentů Me znamená methyl, Et je ethyl a Pr je propyl.
Tato podskupina zahrnuje sloučeniny obecného vzorce I kde s, t a u jsou nezávisle na sobě 0 nebo 1; R1, R2 a X jsou nižší alkyly, A je amino kyselina s nižším alkylem, B je N-alkylovaná nižším alkylem je amino kyselina s nižším alkylem; D, E, F, G a K jsou podle předchozí definice. Dle výše uvedeného tři sady takových sloučenin mohou být popsány následujícími obecnými vzorci II, III, IV
R^N-CXH-CO-A-B-Pro-Pro-F-G-K
R^N-CXH-CO-A-B-Pro-Pro-F-K
R’R2N-CXH-CC-A-B-Pro-Pro-K
II
III
IV,
-6CZ 293905 B6
-CHR7-5-členný heteroaryl může být reprezentován např. jedním z následujících segmentů:
COOF.t
COOBzl
CONHBzl
COOMe
CONH2
CON(CHj)2
-8CZ 293905 B6
-CHR7-5-členný heteroaryl může být reprezentován např. jedním z následujících segmentů:
CIIj
-9CZ 293905 B6
5-členný heteroaryl může být reprezentován následujícími segmenty:
-10CZ 293905 B6
-11 CZ 293905 B6
C(CH3)3
N--N
V další podskupině sloučenin z tohoto vynálezu R5-N-R6 společně mohou tvořit struktury, které jsou vybrány z následujících skupin:
- 12CZ 293905 B6
Další podskupina sloučenin z tohoto vynálezu zahrnuje např. sloučeniny obecného vzorce I, kde s, t a u jsou 1 a K je hydroxy, alkoxy, fenoxy nebo benzyloxy skupina.
Další podskupina sloučenin z tohoto vynálezu zahrnuje např. sloučeniny obecného vzorce I, kde s a t jsou 1, u je 0 a K je hydroxy, alkoxy, fenoxy nebo benzyloxy skupina.
Další podskupina sloučenin z tohoto vynálezu zahrnuje např. sloučeniny obecného vzorce I, kde s je 1, t a u jsou 0 a K je hydroxy, alkoxy, fenoxy nebo benzyloxy skupina.
V jednotlivých provedeních vynálezu je druhá sloučenina ve farmaceutickém prostředku sloučenina obecného vzorce I, v kterém R1 a R2 jsou methyl nebo ethyl; X je izopropyl, se/r-butyl nebo terc-butyl; s je 1; t a u jsou 0; A je valyl, izoleucyl nebo 2-tórc-butylglycyl; B je N-methylvalyl, 1-izoleucyl nebo 2-/erc-butylglycyl; D je prolyl, thiazolidinyl-4-karbonyl nebo 3,4 dehydroprolyl; E je prolyl, thiazolidinyl-4-karbonyl, homoprolyl, 3,4-dehydroprolyl nebo hydroxyprolyl; a K je substituovaná nebo nesubstituovaná amino skupina obecného vzorce R5-N-R6.
V dalších provedeních vynálezu je druhá sloučenina ve farmaceutickém prostředku sloučenina obecného vzorce I, v kterém R1 a R2 jsou methyl nebo ethyl; X je izopropyl, sefc-butyl nebo terc-butyl; s je 1; t a u jsou 0; A je valyl, izoleucyl nebo 2-terc-butyIglycyl; B je N-methylvalyl, I-izoleucyl nebo 2-terc-butylglycyl; D je prolyl, thiazolidinyl-4-karbonyl nebo 3,4 dehydroprolyl; E je prolyl, thiazolidinyl-4-karbonyl, homoprolyl, 3,4-dehydroprolyl nebo hydroxyprolyl; a K je substituovaná nebo nesubstituovaná amino skupina obecného vzorce R5-N-R6, kde R5 je vodík nebo Ci-C5 alkoxy a R6 je C1-C12 lineární nebo rozvětvená alkyl skupina nebo C]-C12 lineární nebo rozvětvená hydroxyalkyl skupina reprezentována např. následujícími monovalentními zbytky;
-(CH3)3 což je terc-butyl;
-C-CH2-CH3 což je 1, 1-dimethylpropyl;
(CH3)2
-C(CH2-CH3) což je 1-methyl-1-ethylpropyl;
CH3
-CH-C(CH3)3což je (S)- nebo (R)-1-methyl-2,2dimethyl-propyl
I ch3
- CH-C(CH3)2což je (S)- nebo (R)-1-ethyl-2-methyl-propyl
C2H5
- CH-C(CH3)2což je 1-isopropyl-2-methyl-propyl; nebo
CH(CH3)2
-C(CH3)2-CH(CH3)2 což je l,l-dimethyl-2-methyl-propyl;
-C(CH3)2, což je izopropyl;
-CH(CH3)-CH2CH3, sek Butyl[(S) nebo (R)]; nebo -CH(CH3)-CH(CH3)2, což je 1,2-dimethylpropyl.
V dalších provedeních vynálezu je druhá sloučenina ve farmaceutickém prostředku sloučenina obecného vzorce I, v kterém R1 a R2 jsou methyl nebo ethyl; X je izopropyl, sefc-butyl nebo terc-butyl; s je 1; t a u jsou 0; A je valyl, izoleucyl nebo 2-terc-butylglycyl; B je N-methylvalyl, I-izoleucyl nebo 2-terc-butylglycyl; D je prolyl, thiazolidinyl-4-karbonyl nebo 3,4-dehydroprolyl; E je prolyl, thiazolidin-4-karbonyl, homoprolyl, 3,4-dehydroprolyl nebo hydroxyprolyl; a Kje substituovaná nebo nesubstituovaná amino skupina obecného vzorce R5-N-R6, kde R3 je vodík nebo C]-C5 alkoxy a R6 je monovalentní radikál jako je C3-Ci0 cykloalkyl skupina (např.
-13CZ 293905 B6 cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, nebo 1-methylcyklopentyl, nebo 1-methylcyklohexyl nebo bicyklo[3.3.0]octa-l-yl); a (1)- nebo (2)-adamantyl skupina; (CH2)v-fenyl s v=l nebo α,α-dimethyibenzyl.
V dalších provedeních vynálezu je druhá sloučenina ve farmaceutickém prostředku sloučenina obecného vzorce I, v kterém R1 a R2 jsou methylová skupina; X je izopropyl; s je 1; t a u jsou 0; A je valyl; B je N-methylvalyl; D je prolyl; E je prolyl; a K je substituovaná amino skupina obecného vzorce R5-N-R6, kde R5 je benzyl a R6 je vodík. Tato sloučenina odpovídá sloučenině (xvii), která je zobrazená v obrázku. Výsledky použití sloučeniny (xvii) obecného vzorce I 10 v kombinaci s paclitaxelem jsou prezentovány v tabulkách 1-4.
Farmaceutické prostředky z předloženého vynálezu mohou výhodně obsahovat farmaceutický přijatelný nosič. Odborníkům z tohoto oboru jsou tyto farmaceuticky přijatelné nosiče dobře známy. Výběr nosiče je určen z části jednotlivými sloučeninami v kombinaci, tak jako i jednotli15 vým použitým způsobem podávání farmaceutického prostředku. Tudíž je velké množství variant vhodných prostředků z farmaceutických prostředků z předloženého vynálezu. Např. paclitaxel (Taxol®) je dostupný jako sterilní nepyrogenní roztok, který obsahuje polyoxyethylovaný ricínový olej (Cremophor®) a suchý alkohol, USP).
Další stránkou předloženého vynálezu je způsob částečné nebo úplné inhíbice tvorby, nebo jiný způsob léčby (např. zvrácení nebo inhibice dalšího vývoje) pevných nádorů (např. nádory plic, prsu, tlustého střeva, prostaty, močového měchýře, konečníku nebo sliznice děložní) nebo hematologických zhoubností (např. leukemie, lymfatické choroby) savců např. člověka podáním účinného množství první sloučeniny, která je paclitaxel, taxoter nebo modifikovaný taxan nebo 25 taxoidní analog, a podáním účinného množství druhé sloučeniny, která je sloučenina obecného vzorce I.
Dvě sloučeniny jsou podávány v kombinaci v souladu s vynálezem. Termín v kombinaci v tomto smyslu znamená to, že léky jsou podávané buď současně, nebo následně po sobě. Jestliže jsou 30 podávány následně po sobě, je jedna ze dvou sloučenin obvykle detekovatelná v séru subjektu při počátku podávání další sloučeniny. V jednom provedení je sloučenina obecného vzorce I podávána první a podání výše popsané sloučeniny, jako je paclitaxel, následuje za tímto podáním. V určitém provedení je paclitaxel podán hodinu po podání sloučeniny obecného vzorce I. Alternativně první sloučenina a druhá sloučenina mohou být podány současně, nebo může být 35 jako první podána první sloučenina a poté může být přidána druhá sloučenina, což je sloučenina obecného vzorce I.
První a druhá sloučenina mohou být podány jako takové, nebo s farmaceuticky přijatelným nosičem, nebo v diluentu příslušně k žádanému způsobu podání. Podání může být konvenčním 40 způsobem podáváním farmaceutických, s výhodou onkologických, prostředků, což je orální způsob a parenterální způsob, jako například subkutánní, intravenózní, intramuskulámí, intraperitoneální, nasální, nebo rektální. Tyto farmaceutické prostředky mohou také obsahovat další terapeuticky aktivní přísady.
Podávaná dávka savcům, jako je člověk, zahrnuje kombinaci účinné množství ke paclitaxelu, taxoteru nebo modifikovaného taxanu nebo taxoidního analogu, tak jak je zde popsáno. Pro jednotlivé podmínky a pro způsob léčby, je dávka určena empiricky a závisí na faktorech jako biologická aktivita, mechanismus účinku, nepříznivé rezistence, překrývání toxicity a profil toxicity jednotlivých použitých sloučenin; prostředky podání; věk, zdravotní stav a tělesná 50 hmotnost příjemce; povaha a rozsah symptomů; četnost léčby; na způsobu další léčby; a požadovaný účinek.
Obvyklá denní dávka sloučenin obecného vzorce I je od 5 do 250 miligramů na kilogram tělesné hmotnosti při orálním způsobu podání a 1 až 100 miligramů na kilogram tělesné hmotnosti při
-14CZ 293905 B6 parenterálním způsobu podávání. Běžná denní dávka paclitaxelu, taxoteru nebo modifikovaného taxanu nebo taxoidního analogu je obvykle 5 až 250 miligramů na kilogram tělesné hmotnosti.
První a druhá sloučenina z předloženého vynálezu může být podávána v běžné pevné nebo kapalné formě farmaceutického podávání- např. nepotažené nebo potažené tablety, kapsle, prášky, granule, čípky nebo roztoky. Tyto jsou vyráběny běžnými způsoby. Aktivní látky mohou být pro tento účel spojeny běžnými farmaceutickými pomocnými látkami jako jsou pojidla tablet, plnidla, konzervační látky, tabletové disintegranty, regulátory tečení, plastifíkátory, smáčedla, disperganty, emulgátory, rozpouštědla, prostředky umožňující postupné uvolňování, antioxidanty a/nebo propelentní plyny (cf. H. Sucker et, al.: Pharmazeutische Technologie, Thime-Verlag, Stuttgart, 1978). Podávači formy takto získané obvykle obsahují 1 až 90 hmot. % aktivní látky.
Sloučeniny obecného vzorce I jsou detailněji popsány výše. V určitém provedení způsob podle vynálezu používá sloučeninu obecného vzorce I, v kterém R1 a R2 jsou methyl nebo ethyl; X je izopropyl, se^-butyl nebo fórc-butyl; s je 1; t a u jsou 0; A je valyl, izoleucyl nebo 2-tercbutylglycyl; B je N-methylvalyl, I-izoleucyl nebo 2-rerc-butylglycyl; D je prolyl, thiazolidinyl4-karbonyl nebo 3,4 dehydroprolyl; E je prolyl, thiazolidinyl-4-karbonyl, homoprolyl, 3,4dehydroprolyl nebo hydroxyprolyl; a Kje substituovaná nebo nesubstituovaná amino skupina obecného vzorce R5-N-R6.
V určitém provedení způsob podle vynálezu používá sloučeninu obecného vzorce I, v kterém R1 a R2jsou methyl nebo ethyl; X je izopropyl, sdr-butyl nebo Zerc-butyl; sje 1; t a u jsou 0; A je valyl, izoleucyl nebo 2-fórc-butylglycyl; B je N-methylvalyl, I-izoleucyl nebo -2-terc-butylglycyl; D je prolyl, thiazolídinyl-4-karbonyl nebo 3,4 dehydroprolyl; E je prolyl, thiazolidinyl4-karbonyl, homoprolyl, 3,4-dehydroprolyl nebo hydroxyprolyl; a Kje substituovaná nebo nesubstituovaná amino skupina obecného vzorce R5-N-R6, kde R5 je vodík nebo C1-C4 alkoxy aR6 je C1-C12 lineární nebo rozvětvená alkyl skupina nebo C1-C12 lineární nebo rozvětvená hydroxyalkyl skupina reprezentována např. následujícími monovalentními radikály:
-(CH3)3 což je terc-butyl;
“C-CH2-CH3 což je 1,1 -dimethylpropyl;
(CH3)2
-C(CH2-CH3) což je 1-methyl-1-ethylpropyl;
CH3
-CH-C(CH3)3což je (S)- nebo (R)-1-methyl-2,2dimethyl-propyl
CH3
- CH-C(CH3)2COŽ je (S)- nebo (R)-1-ethyl-2-methyl-propyl
C2H5
- CH-C(CH3)2což je 1-isopropyl-2-methyl-prapyl; nebo
CH(CH3)2
-C(CH3)2-CH(CH3)2 což je l,l-dimethyl-2-methyl-propyl; -C(CH3)2, což je izopropyl;
-CH(CH3)-CH2CH3, sek Butyl[(S) nebo (R)]; nebo -CH(CH3)-CH(CH3)2, což je 1,2-dimethylpropyl.
V určitém provedení způsob podle vynálezu používá sloučeninu obecného vzorce I, v kterém R1 a R2 jsou methyl nebo ethyl; X je izopropyl, se^-butyl nebo /erc-butyl; sje 1; t a u jsou 0; A je valyl, izoleucyl nebo 2-terc-butylglycyl; B je N-methylvalyl, I-izoleucyl nebo 2-/erc-butylglycyl; D je prolyl, thiazolidinyl-4-karbonyl nebo 3,4 dehydroprolyl; E je prolyl, thiazolidinyl
- 15CZ 293905 B6
4-karbonyl, homoprolyl, 3,4-dehydroprolyl nebo hydroxyprolyl; a Kje substituovaná nebo nesubstituovaná amino skupina obecného vzorce R5-N-R6, kde R5 je vodík nebo C1-C4 alkoxy a R6 je monovalentní radikál jako je C3-C10 cykloalkyl skupina (např. cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, nebo 1-methylcyklopentyl, nebo 1-methylcyklohexyl nebo bicyklo[3.3.0]octa-lyl); a (1)- nebo (2)-adamantyl skupina; (CHZ)v-fenyl s v=l nebo α,α-dimethylbenzyl.
V určitém provedení způsob podle vynálezu používá sloučeninu obecného vzorce I, v kterém R1 a R2 jsou methylová skupina; X je izopropyl; s je 1; t a u jsou 0; A je valyl; B je N-methylvalyl; D je prolyl; Eje prolyl; a Kje substituovaná amino skupina obecného vzorce R5-N-R6, kde R5 je benzyl a R6 je vodík. Tato sloučenina odpovídá sloučenině (xvii), která je zobrazená v obrázku. Výsledky použití sloučeniny (xvii) obecného vzorce I v kombinaci s paclitaxelem jsou prezentovány v tabulkách 1-4.
Syntetické metody
Sloučeniny obecného vzorce mohou být připraveny známými způsoby syntézy peptidů tak jak je zde popsáno a v US patentu 5 762 127 z 9. června 1998, jehož poznatky jsou zde inkorporovány a citovány. Peptidy mohou být sestavovány sekvenčně z jednotlivých aminokyselin nebo spojováním vhodných malých peptidových fragmentů. V sekvenčním skládáním se peptidový řetězec zvětšuje postupně od C-konce o jednu aminokyselinu při jednom kroku. Při spojování fragmentů jsou spojovány fragmenty různé délky a tyto fragmenty mohou být získány sekvenčním skládáním z aminokyselin nebo spojováním fragmentů z ještě kratších peptidů.
Jak při sekvenčním skládání tak i při spojování fragmentů je nezbytné spojovat jednotky tvorbou amidové vazby, která může být vytvořena různými enzymatickými nebo chemickými způsoby. Způsoby zde popsané pro tvorbu peptidových amidových vazeb, jsou také vhodné pro tvorbu peptidových amidových vazeb.
Chemické způsoby tvorby amidové vazby jsou detailně popsány v standardních pramenech peptidové chemie, včetně Miiller, Methoden der organische Chemie Vol. XV/2, 1-364, Thieme Verlag, Stuttgart, (1974); Stewart and Young, Solid Phase Peptide Svnthesis, 31-34 a 71-82, Pierce Chemical Company, Rockford, IL (1984); Bodanszky et al. Peptide Svnthesis 85-128, John Wiley & Sons, New York, (1976); Practice of Peptide Svnthesis, M. Bodansky, A. Bodansky, Springer-Verlag, 1994 a další standardní práce v peptidové chemii. Výhodně způsoby zahrnují azidový způsob, způsob pomocí symetrických a smíšených anhydridů, použití in šitu generovaných nebo předpřipravených aktivních esterů, použití urethanem chráněných N-karboxy anhydridů aminokyselin a tvorbu amidové vazby kondenzačních činidel jako je dicyklohexylkarbodiimid (DCC), diizopropylkarbodiimid (DIC), ethoxykarbonyl-2-ethoxy-l,2dihydrochinolin (EEDQ), pivaloyl chlorid, l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid (PPA), N,N-bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)amido fosfory 1 chlorid (BOP-C1), brom-trispyrrolodinofosfonium hexafluorofosfát (PyBrop), difenylfosforyl azid (DPPA), Castrovo činidlo (BOP, PyBop), O-benzotriazolyl-N,N,N',N'-tetramethyluronium soli (HBTU), O-azabezotriazolyl-N,N,N',N'-tetramethyluronium soli (TÁTU), diethylfosforyl kyanid (DEPCN), 2,5—difenyl-2,3-dihydro-3-oxo-hydroxythifen dioxid (Steglichovo činidlo; HOTDO), a 1,1'karbonyldiimidazol (CDI). Kondenzační činidla mohou být použita jako taková nebo ve spojení s aditivy jako je N,N-dimethyl-4-aminopyridin (DMAP), N-hydroxy-benzotriazol (HOBt), Nhydroxy-benzotriazin (HOOBt), N-hydroxysukcinimid (HOSu) nebo 2-hydroxypyridin.
Ačkoliv použití chránících skupin není obecně nutné v enzymatické syntéze peptidů, reverzibilní ochrana reaktivních skupin, které nejsou zapojeny do tvorby amidové vazby, je nezbytná pro oba reaktanty. Tři běžné chránící skupiny jsou typicky použity v chemické syntéze peptidů: benzyloxykarbonyl (Z), terc-butyloxykarbonyl (Boc) a 9-fluomylmethoxykarbonyl (Fmoc).
V každém případě je chránící skupina na α-amino skupině jednotky rozšiřující řetězec. Detailní
-16CZ 293905 B6 článek o chránících skupinách pro aminokyselinu je v Miiller, Methoden der organische Chemie Vol. XV/1, pp 20-906. Thieme Verlag, Stuttgart, (1974).
Jednotky z nichž je sestavován peptidový řetězec mohou reagovat v roztoku, v suspenzi nebo způsobem podobným tomu, který popsal Marrifíeld vJ. Amer. Chem. Soc. 85 (1963 ) 2149. V jednom způsobu jsou peptidy skládány sekvenčně nebo spojováním fragmentů použitím Z, Boc nebo Fmoc chránících skupin, s jedním zreaktantů zakotvených na nerozpustném polymemím nosiči (také zde nazývané pryskyřice). Tento obvykle vyžaduje skládání peptidů sekvenčně na polymemím nosiči použitím Boc nebo Fmoc chránících skupin s tím, že narůstající řetězec je zakotven C-koncem na nerozpustných částicích pryskyřice. Tato metoda dovoluje odstranění reagentů a vedlejších produktů filtrací, což odstraňuje potřebu rekrystalizace meziproduktů.
Chráněné aminokyseliny mohou být zakotveny na jakýkoliv vhodný polymer, který musí být nerozpustný v použitých rozpouštědlech a musí mít stabilní fyzikální formu, která umožňuje filtraci. Polymer musí obsahovat funkční skupinu, za kterou je první aminokyselina na něj kovalentně zakotvena. Pro tento účel je vhodné široké pole polymerů např. celulóza, polyvinyl alkohol, polymethakrylát, sulfonovaný polystyren, chlormethylovaná kopolymer styren/divinylbenzen (merrifieldova pryskyřice), 4-methylbenzhydrylamin pryskyřice (MBHA-piyskyřice), fenylacetamidomethyl pryskyřice (Pam-pryskyřice), p-benzyloxy-benzyl-alkohol-pryskyřice, benzhydryl-amin-pryskyřice (BHA-pryskyřice), 4-(hydroxymethyl)-benzoyloxymethylpryskyřice, pryskyřice podle Breipohla et al. (Tetrahedron Letters 28 (1987) 565; dodávaná fy BACHEM), 4-(2,4-dimethoxyfenylaminomethyl)fenoxy-pryskyřice (dodávaná fy Novabiochem) nebo o-chlortrityl-pryskyřice (dodávaná fy Biohellas).
Vhodná rozpouštědla pro syntézu peptidů jsou ta rozpouštědla, která jsou inertní za podmínek reakce např. voda, Ν,Ν-dimethylformamid, dimethylsulfoxid (DMSO), acetonitril, dichlormethan (DCM), 1,4-dioxan, tetrahydrofuran (THF), N-methyl-2-pyrrolidon (NMP) a směsi těchto rozpouštědel.
Syntéza peptidů na polymemím nosiči je prováděna ve vhodném inertním organickém rozpouštědle, v kterém jsou deriváty aminokyselin a použité výchozí látky rozpustné. Zejména vhodná rozpouštědla jsou např. DMF, DCM, NMP, acetonitril, DMSO a směsi těchto rozpouštědel, důvodem jsou jejich vlastnosti vzhledem k bobtnání pryskyřice.
Po dokončení syntézy je peptid odstraněn z polymemího nosiče (toto se běžně nazývá odštěpení). Podmínky, za kterých dochází k odštěpení jsou dobře známy z peptidové chemie a syntézy peptidů, a závisí zčásti na druhu použité pryskyřice. Odštěpení jsou nejběžněji katalyzovány kysele nebo pomocí paládia, kysele katalyzované odštěpení může být vyvoláno např. kapalným bezvodým fluorovodíkem, bezvodou trifluormethansulfonovou kyselinou, ředěnou nebo koncentrovanou trifluoroctovou kyselinou a směsmi octová kyselina/dichlormethan/trifluorethanol. Paládiem katalyzované odštěpení může být vyvoláno v THF nebo směsích THF/DCM v přítomnosti slabé báze jako je morfolin. Za těchto podmínek dochází i jednoznačnému odstranění chránících skupin.
Před dalšími derivatizačními reakcemi může být také nezbytná částečná deprotekce peptidů. Např. dialkylované peptidy na N-konci mohou být připraveny kondenzací příslušné N,Ndialkylaminokyseliny k peptidů v roztoku, nebo k peptidů, který je zakotvený polymemím nosiči, nebo reduktivní alkylací peptidů zakotveného na pryskyřici vDMF/1% octové kyselině s NaCNBH3 a příslušného aldehydu nebo hydrogenací peptidů v roztoku v přítomnosti aldehydu nebo ketonu a Pd/C.
Zde popsané různé nepřírodní aminokyseliny tak jako i různé neaminokyselinové skupiny mohou být získány z komerčních zdrojů nebo mohou být připraveny způsoby, které jsou známy. Např. aminokyselinové stavební bloky s R1 a R2 skupinami mohou být připraveny podle E. Wuensch,
-17CZ 293905 B6
Huben Weyl, Methoden der organischen Chemie Vol. XV/1, p. 306 Thieme Verlag, Stuttgart (1974) a tam uvedené citace. Peptidy s gama- nebo delta- laktamovými spoji mohou být připraveny zapojením příslušných laktamem spojených dipeptidových jednotek (R. Freidinger, J. Org. Chem. (1982) 104-109) do peptidového řetězce. Peptidy s dipeptidovými stavebními jednotkami s thiazolem, thiazolinem nebo oxazolinem mohou být připraveny zapojením příslušné dipeptidové jednotky (P. Jouin et al., Tetrahedron Letters (1992), pp. 2087-2810; P. Wipf etal. Tetrahedron Letters (1992), pp. 907-910; W. R. Tully J. Med. Chem. (1991) p. 2065; Synthesis (1987), p. 235) do peptidového řetězce.
Příklady provedení vynálezu
Následující postupy mají v úmyslu ilustrovat užitečné způsoby přípravy sloučenin obecného vzorce I. Kde je to možné, jsou aminokyseliny zkráceny použitím známým způsobem pomocí tří písmenového kódu. Další zkratky znamenají: Me2Val = Ν,Ν-dimethylvalin, MeVal = N-methylvalin, TFA = trifluoroctová kyselina, Ac = octová kyselina, Bu = butyl, Et = ethyl, Me = methyl, Bzl = benzyl, Nal = 3-nafthylalanin, Cha = 3-cyklohexylalanin, Npg = neopentyl glycin, Abu - 2-amino butyryl, Dab = 2,4-diaminobutyryl, iPr = izopropyl.
Obecné syntetické postupy
I. Sloučeniny obecného vzorce I z vynálezu jsou syntetizovány buď klasickou syntézou v roztoku použitím standardních Z- a Boc- metodologie, jak bylo popsáno výše, a nebo standardními způsoby syntézy na pevné fázi na plně automatickém syntetizátoru model 413A, který dodává firma APPLIED BIOSYSTEMS. Aparatura používá odlišné syntetické cykly pro chránění pomocí Bos a Fmoc.
V případě syntézi na pevné fázi jsou Ν,Ν-dialkyl-penta nebo hexapeptidy uvolněny z pevného nosiče a dále kondenzovány s odpovídajícím C-koncem aminu v roztoku. Jako činidla pro kondenzaci aminokyselin a aminokyseliny, která je kondenzována kN-methylaminokyselině jsou použity BOP-C1 a Py Brop. Pro reduktivní alkylaci N konce je odchráněn N-konec v systému peptid-piyskyřice, a pak je reagován s trojnásobným molámím přebytkem aldehydu nebo ketonu vDMF/1% octová kyselina s přídavkem 3 ekvivalentů NaCNBH3. Po dokončení reakce (negativní Kaiser test) je pryskyřice několikrát omyta vodou, izopropanolem, DMF a dichlormethanem.
Pro syntézy v roztoku je nejvýhodnější použít buď Boc-chráněné amino kyseliny NCAs (N-tórc-butyloxykarbonyl-amino kyselina-N-karboxy-anhydridy), Z-chráněné amino kyseliny NCAs (N-benzyloxykarbonyl-amino kyselina-N-karboxy-anhydridy) nebo použít jako kondenzační činidla pivaloylchlorid pro kondenzaci aminokyseliny a aminokyseliny, která je kondenzována k N-methylaminokyselině. Reduktivní alkylace může být provedena např. reakcí N-konce peptidu po deprotekci nebo aminokyselin s aldehydy nebo ketony za použití NaCNBHj nebo vodíku, Pd/C.
a) Syntetický cyklus při chránění pomocí Boc.
30% trifluoroctová kyselina v DCM 1 x 3 min
50% trifluoroctová kyselina v DCM lxl min
DCM oplach
5% diizopropylethylamin v DCM 5 x 1 min
5% diizopropylethylamin v NMP 1 x 1 min
NPM oplach 5 x 1 min
-18CZ 293905 B6
7. přídavek aktivované chráněné kyseliny (DCC a 1 ekvivalent HOBt vNPM/DCM);
kondenzace peptidu (1. část)
8. přídavek DMSO do reakční směsi tak, aby obsahovala 20 obj. % DMSO kondenzace peptidu (2. část)
9. Přídavek 3,8 ekvivalentu diizopropylethylaminu do reakční směsi kondenzace peptidu (3. část)
10. DCMoplach
11. jestliže není konverze úplná, tak opakování kondenzace (od bodu 6)
12. 10% acetanhydrid,
5% diizopropylethylamin v DCM
13. 10% acetanhydrid v DCM
14. DCM oplach
15. zpět k bodu 1 x 30 min x 16 min x 7 min x 1 min
1x2 min x 4 min x 1 min
BOP-C1 a PyBrop byly použity jako činidla pro kondenzaci aminokyseliny a následně Nmethylaminokyselin. Tomu odpovídají zvýšené reakční časy. Při syntéze v roztoku je nejvýhodnější pro tento typ kondenzace použít Boc -chráněné amino kyseliny NCAs (N-terc-butyloxykarbonyl-amino kyselina-N-karboxy-anhydridy).
b) Syntetický cyklus při chránění pomocí Fmoc.
1. DMF oplach lxl min
2. 20% piperidin v DMF 1 x 4 min
3. 20% piperidin v DMF 1x16 min
4. DMF oplach 5 x 1 min
5. přídavek aktivované chráněné kyseliny (aktivace 1 ekvivalent TBTU a 5 ekvivalenty DIPEA v DMF); kondenzace peptidu (1. část) 1 x 61 min
6. DMF oplach 3x1 min
7. jestliže není konverze úplná, tak opakování kondenzace (od bodu 6)
8. 10% acetanhydrid v DMF 1 x 8 min
9. DMF oplach 3x1 min
10. zpět k bodu 2
BOP-C1 a PyBrop byly použity jako činidla pro kondenzaci aminokyseliny a následně Nmethylaminokyselin. Tomu odpovídají zvýšené reakční časy.
II. Reduktivní alkylace N-konce
V připraveném peptidu na pryskyřici podle Ia nebo Ia byl odchráněn N-konec (kroky 2-4 v Ib nebo 1-6 v Ia) a ten byl reagován s trojnásobným molámím přebytkem aldehydu nebo ketonu vDMF/1% octová kyselina s přídavkem 3 ekvivalentů NaCNBH3. Po dokončení reakce (negativní Kaiser test) byla pryskyřice několikrát omyta vodou, izopropanolem, DMF a dichlormethanem.
III. Zpracování peptidu na pryskyřice, které byly získány v Ia a II
Peptid na pryskyřici byl vysušen za sníženého tlaku a vložen do reakční nádoby z Teflon HF aparatury (dodávané firmou PENINSULA). Po přidání čisticí látky např. anisolu (1 ml/g pryskyřice) a v případě peptidu, které obsahují tryptofan, je přidán thiol k odstranění indolylformylové skupiny např. ethandithiol (0,5 ml/g pryskyřice), a pak je do reakční nádoby kondenzován fluorovodík (10 ml/g pryskyřice) za chlazení kapalným dusíkem. Směs byla temperována na 0 °C a míchána 45 minut. Pak byl odstraněn za sníženého tlaku
-19CZ 293905 B6 a odparek byl promyt ethylacetátem pro odstranění zbytků scavengeru. Peptid byl vytřepán do 30% octové kyseliny a odfiltrován, a pak byl filtrát lyofílizován.
IV. Zpracování peptidu na piyskyřice, které byly získány v Ib a II
Peptid na pryskyřici byl vysušen za sníženého tlaku a pak podroben jednomu z následujících postupů odštěpení, který závisí na obsahu aminokyselin (Wade, Tregear, Howard Florey Fmoc Workshop Manual, Melboume 1985).
Podmínky odštěpení:
TFA Scavenger Doba reakce
1. 95% 5% vody 1,5 hod
2. 95% 5% ethanthiol/anisol (1:3) 1,5 hod
Suspenze peptidu na pryskyřice ve vhodné směsi TFA byla míchána při teplotě místnosti po udanou dobu, a pak byla pryskyřice odfiltrována a promyta TFA a DCM. Filtrát a rozpouštědlo použité pro oplach byly zakoncentrovány a peptid byl precipitován diethyletherem. Po ochlazení ledovou lázní byl precipitát odfiltrován a rozpuštění v 30 % kyselině octové lyofílizován.
V. Jestliže byla použita o-chlortrityl- pryskyřice (dodávaná fy Biohellas) suspenze peptidu na piyskyřici v směsi octová kyselina/trifluorethanol/dichlormethan (1:1:3) byla míchána při teplotě místnosti 1 hodiny. Pryskyřice byla pomocí vakua odfiltrována a důkladně promyta štěpícím roztokem. Kombinované filtráty byly zakoncentrovány ve vakuu a zpracovány vodou. Precipitát byl získán filtrací nebo v centrifuze, promyt diethyletherem a vysušen za sníženého tlaku.
VI. Purifikace a charakterizace peptidů.
Purifikace byla uskutečněna gelovou chromatografíí (SEPHDEX G-10, G-15/10% HOAc, SEPHADEX LH20/MeOH), střednětlaká chromatografie (stacionární fáze: HD-SIL C-l 8, 20-45 mikronů, 10 nm; mobilní fáze: gradient s A% 0,1%/TFA/MeOH, B%0,l % TFA/voda) nebo preparativní HPLC (stacionární fáze: voda Delta-Pak C-l 8, 15 mikron, 18 nm; mobilní fáze: gradient s A% 0,l%TFA/MeOH, B%0,l % TFA/voda).
Čistota výsledných produktů byla určena analytickou HPLC (stacionární fáze 100 2,1 mm VYDAC C-l 8, 51, 30 nm; mobilní fáze gradient acetonitril-voda, pufrováno 0,4% TFA, 40 °C).
Produkt byl charakterizován analýzou aminokyselin a FAB hmotností spektroskopií.
Specifické syntetické postupy
Příklad 1A: N,N-dimethyl-Val-Val-N-methyl-Val-Pro-Pro-Val-Phe-NH2
1,98 g Fmoc-Rink-pryskyřice (substituce 0,46 mmol/g) což odpovídá počátečnímu množství 0,84 mmol) reagovalo postupem Ib s 1,26 mmol
Fmoc-Phe-OH
Fmoc-Val-OH
Fmoc-Pro-OH
Fmoc-Pro-OH
Fmoc-N-methyl-V al-OH
-20CZ 293905 B6
Fmoc-Val-ΌΗ Fmoc-Val-OH
Aminokyselina, která následovala za N-methyl aminokyselinou, byla kondenzována s PyBrop jako kondenzačním činidlem. Po vzájemných syntetických cyklech byla provedena deprotekce N-konce peptidu na pryskyřici (kroky 2—4 v Ib) a ten byl dále reagován s vodným roztokem formaldehydu, jak bylo popsáno v II, a pak byla pryskyřice vysušena za sníženého tlaku. Výsledná pryskyřice byla podrobena TFA odštěpení, tak jak bylo popsáno v IV. Surový produkt (590 mg) byl purifikován gelovou filtrací (SEPHADEX-LH-20). Výtěžek byl 295 mg.
Látka z příkladu 1 může být také připravena klasickým způsobem syntézy v roztoku. Syntéza N,N-dimethyl-Val-Val-N-methyl-Val-Pro-Pro-Val-Phe-NH2 a jeho příslušných meziproduktů je popsána v následujícím odstavci.
a) Z-MeVal-Pro-OMe
66,25 g (mmol) Z-MeVal-OH bylo rozpuštěno v 250 ml suchého dichlormethanu. Po přidání 36,41 ml (262,5) triethylaminu byla reakční směs ochlazena na -25 °C bylo kní přidáno 32,37 ml (26, 2,5 mmol) pivaloylchloridu. Po 2,5 hodinách míchání bylo do reakční směsi přidáno 41,89 (250 mmol) H-Pro-OMe-HCl ve 250 ml dichlormethanu, volná báze byla uvolněna přídavkem 36,41 ml (262,5) triethylaminu. Reakční směs byla míchána další 2 hodiny při -25 °C a přes noc při teplotě místnosti. Pak byla reakční směs naředěna dichlormethanem a důkladně promyta nasyceným vodným roztokem NaHCO3 (3X), vodou (IX), 5% citrónovou kyselinou (3X) a nasyceným roztokem NaCl. Organická fáze byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a pak odpařena. Odparek (91,24 g) byl míchán s petroletherem přes noc a odfiltrován. Bylo získáno 62,3 g produktu.
b) H-MeVal-Pro-OMe
48.9 g (130 mmol) Z-MeVal-Pro-OMe bylo rozpuštěno ve 490 ml methanolu. Po přidání
10.9 ml (130 mmol) koncentrované kyseliny chlorovodíkové a 2,43 10% Pd/C byla reakční směs hydrogenována. Filtrací a odpařením bylo získáno 36,43 g produktu.
c) Z-Val-MeVal-Pro-OMe
18,1 g (65 mmol) H-MeVal-Pro-OMe, 21,6 g (78 mmol) Z-Val-karboxyanhydrid a 22,8 ml (130 mmol) diizopropylethylaminu bylo mícháno 2 dny při 40 °C. Po odpaření DMF byl k odparku přidán dichlormethan a organická fáze byla důkladně promyta nasyceným vodným roztokem NaHCO3 (3X) vodou (IX) 5% citrónovou kyselinou (3X) a nasyceným roztokem NaCl. Organická fáze byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a pak odpařena. Produkt (29,3 g) byl získán jako viskózní olej.
d) H-Val-MeVal-Pro-OMe
29,3 g (61,6 mmol) Z-Val-MeVal-Pro-OMe bylo rozpuštěno ve 230 ml methanolu. Po přidání 1,15 10% Pd/C byla reakční směs hydrogenována. Filtrací a odpařením bylo získáno
21,96 g produktu.
e) Z-Val-MeVal-Pro-OMe
15,29 (61 mmol) Z-Val-OH a 21,96 g (61,6 mmol) H-Val-MeVal-Pro-OMe bylo rozpuštěno v 610 ml dichlormethanu a ochlazeno na 0 °C. Po přidání 8,16 ml (73,2 mmol) N-methylmorfolinu, 2,77 g (20,3 mmol) HOBt a 11,74 g (61 mmol) EDC1 byla reakční směs míchána přes noc při teplotě místnosti, pak byla reakční směs naředěna dichlormethanem a důkladně promyta nasyceným vodným roztokem NaHCO3 (3X), vodou (IX),
-21 CZ 293905 B6
5% citrónovou kyselinou (3X) a nasyceným roztokem NaCl. Organická fáze byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a pak odpařena do sucha. Bylo získáno 31,96 g produktu.
f) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH
31,96 g (57 mmol) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OMe bylo rozpuštěno v 250ml methanolu. K roztoku byl přidán 1N roztok LiOH reakční směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti. Po přidání 500 ml vody byla vodní fáze 3 krát vytřepána ethylacetátem. Organická fáze byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a pak odpařena do sucha. Bylo získáno 30,62 g bílého pevného produktu.
g) Z-V al-V al-MeV al-Pro-Pro-V al-Phe-NH2 g (43,3 mmol) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH a 15,59 g (43,3 mmol) H-Pro-Val-Phe-NH2 bylo suspendováno v 430 ml suchého dichlormethanu. Po ochlazení na 0 °C bylo přidáno 5,81 ml (52 mmol) N-methylmorfolinu, 1,94 g (15 mmol) HOBt a 8,33 g (43,3 mmol) EDC1 byla reakční směs míchána přes noc při teplotě místnosti. Pak byly odpařeny rozpouštědla a odparek byl v 640 ml dichlormethanu a ten důkladně promyt nasyceným vodným roztokem NaHCO3 (3X), vodou (IX), 5% citrónovou kyselinou (3X) a nasyceným roztokem NaCl. Organická fáze byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a pak odpařena do sucha. Bylo získáno 33,04 g produktu. Surový produkt byl čištěn chromatograficky na silikagelu mobilní fází 20 % MeOH/hexan. Bylo získáno 18,32 čistého produktu.
h) N,N-dimethyl-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-Val-Phe-NH2
18,32 g Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-Val-Phe-NH2 bylo rozpuštěno v 80 ml MeOH. Pod atmosférou dusíku bylo k roztoku přidáno 0,4 g 10% Pd/C reakční směs byla 4 hodiny hydrogenována. Po přidání 6,22 ml (81,24 mmol) 37% vodného roztoku formaldehydu hydrogenace pokračovala 5 hodin. Filtrací a odpařením bylo získáno 15,6 g surového produktu. Další purifikace byla provedena rozpuštěním peptidu ve vodě a úpravou pH roztoku na 2 a extrakcí vodné fáze 3 krát ethylacetátem. Pak bylo pH vodné fáze upraveno na 8-9 a dále byla extrahována 4 krát ethylacetátem. Organická fáze byla extrahována vodou a sušena nad síranem sodným, zfiltrována a pak odpařena. Bylo získáno 11,3 g produktu jako bílého prášku. Sloučenina byla charakterizována MS-FAB ([M+H]+ = 797).
Příklad 2A: N,N-dimethyl-Val-Val-MeVal-Pro{ l/[thiaoyl-(2)-yl]-2-fenyl}-ethylamid
4,11 g Fmoc-Pro-p-alkoxybenzyl-alkohol-piyskyřice (substituce 0,73 mmol/g), což odpovídá počátečnímu množství 3 mmol, reagovalo postupem Ib s 4,5 mmol
Fmoc-N-MeVal-OH
Fmoc-Val-OH Fmoc-Val-OH
Aminokyselina, která následovala za N-methyl aminokyselinou byla dvojnásobně kondenzována s PyBrop jako kondenzačním činidlem v prodlouženém reakčním čase. Po dokončení syntézy byla provedena deprotekce N-konce peptidu na pryskyřici (kroky 2-4 vlb) a ten byl dále reagován s vodným roztokem formaldehydu, jak bylo popsáno v II, a pak byl dále reagován s vodným roztokem formaldehydu, jak bylo popsáno v II, a pak byla pryskyřice vysušena za sníženého tlaku. Výsledná pryskyřice byla podrobena TFA odštěpení, tak jak bylo popsáno V IV. Surový produkt (750 mg) byl hned použít pro další kondenzaci. 100 mg této sloučeniny reagovalo s 45 mg (S)-2-[l-amino-2-fenylethyl]thiazol a 230 mg PyBrop s přídavkem 192 mikrolitrů v DMF po dobu 2 dnů při teplotě místnosti. Reakční směs byla čištěna gelovou
-22CZ 293905 B6 filtrací (SEPHADEX-LH-20, methanol) a frakce, kde byl produkt byly kombinovány. Bylo získáno 83 mg produktu.
Příklad 1B
Me2Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2
a) Z-MeVal-Pro-OMe
66,25 g (mmol) Z-MeVal-OH bylo rozpuštěno v 250 ml suchého dichlormethanu. Po přidání 36,41 ml (262,5) triethylaminu byla reakční směs ochlazena na -25 °C bylo kní přidáno 32,37 ml (26,2,5 mmol) pivaloyl chloridu. Po 2,5 hodinách míchání bylo do reakční směsi přidáno 41,89 (250 mmol) H-Pro-OMe-HCl ve 250 ml dichlormethanu, volná báze byla uvolněna přídavkem 36,41 ml (262,5) triethylaminu. Reakční směs byla míchána další 2 hodiny při -25 °C a přes noc při teplotě místnosti. Pak byla reakční směs naředěna dichlormethanem a důkladně promyta nasyceným vodným roztokem NaHCO3 (3X), vodou (IX), 5% citrónovou kyselinou (3X) a nasyceným roztokem NaCI. Organická fáze byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a pak odpařena. Odparek (91,24 g) byl míchán s petroletherem přes noc a odfiltrován. Bylo získáno 62,3 g produktu.
b) H-MeVal-Pro-OMe
48.9 g (130 mmol) Z-MeVal-Pro-OMe bylo rozpuštěno ve 490 ml methanolu. Po přidání
10.9 ml (130 mmol) koncentrované kyseliny chlorovodíkové a 2,43 10% Pd/C byla reakční směs hydrogenována. Filtrací a odpařením bylo získáno 36,43 g produktu.
c) Z-Val-MeVal-Pro-OMe
18,1 g (65 mmol) H-MeVal-Pro-OMe, 21,6 g (78 mmol) Z-Val-karboxyanhydrid a 22,8 ml (130 mmol) diizopropylethylaminu bylo mícháno 2 dny při 40 °C. Po odpaření DMF byl k odparku přidán dichlormethan a organická fáze byla důkladně promyta nasyceným vodným roztokem NaHCO3 (3X), vodou (IX), 5% citrónovou kyselinou (3X) a nasyceným roztokem NaCI. Organická fáze byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a pak odpařena. Produkt (29,3 g) byl získán jako viskózní olej.
d) H-Val-MeVal-Pro-OMe
29,3 g (61,6 mmol) Z-Val-MeVal-Pro-OMe bylo rozpuštěno ve 230 ml methanolu. Po přidání 1,15 10% Pd/C byla reakční směs hydrogenována. Filtrací a odpařením bylo získáno
21,96 g produktu.
e) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OMe
15,29 (61 mmol) Z-Val-OH a 21,96 g (61,6 mmol) H-Val-MeVal-Pro-OMe bylo rozpuštěno v 610 ml dichlormethanu a ochlazeno na 0 °C. Po přidání 8,16 ml (73,2 mmol) Nmethylmorfolinu, 2,77 g (20,3 mmol) HOBt a 11,74 g (61 mmol) EDC1 byla reakční směs míchána přes noc při teplotě místnosti, pak byla reakční směs naředěna dichlormethanem a důkladně promyta nasyceným vodným roztokem NaHCO3 (3X), vodou (IX), 5% citrónovou kyselinou (3X) a nasyceným roztokem NaCI. Organická fáze byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a pak odpařena do sucha. Bylo získáno 31,96 g produktu.
-23CZ 293905 B6
f) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH
31.96 g (57 mmol) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OMe bylo rozpuštěno v 250ml methanolu. K roztoku byl přidán 1N roztok LiOH reakční směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti. Po přidání 500 ml vody byla vodní fáze 3 krát vytřepána ethylacetátem. Organická fáze byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a pak odpařena do sucha. Bylo získáno 30,62 g bílého pevného produktu.
g) Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2 g (3,35 mmol) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH a 0,664 g (3,35 mmol) H-Pro-NHCH(CH3)2 bylo rozpuštěno v 34 ml suchého dichlormethanu. Po ochlazení na 0 °C bylo přidáno 1,35 ml (12,1 mmol) N-methylmorfolinu, 0,114 g (0,84 mmol) HOBt a 0,645 g (3,35 mmol) EDC1 byla reakční směs míchána přes noc při teplotě místnosti. Pak bylo k reakční směsi přidáno 80 ml dichlormethanu a organické fáze důkladně promyt nasyceným vodným roztokem NaHCO3 (3X), vodou (IX), 5% citrónovou kyselinou (3X) a nasyceným roztokem NaCl. Organická fáze byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a pak odpařena do sucha. Bylo získáno 1,96 g produktu, který byl použit pro další reakční krok bez dalšího čištění.
h) Me2Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2
1.96 g Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2 bylo rozpuštěno v 11 ml MeOH. Pod atmosférou dusíku bylo k roztoku přidáno 0,054 g 10% Pd/C reakční směs byla 4 hodiny hydrogenována. Po přidání 0,86 ml (11,24 mmol) 37 % vodného roztoku formaldehydu a 0,281 g 10% Pd/C hydrogenace pokračovala 5 hodin. Filtrací a odpařením bylo získáno 2,77 g surového produktu. Další purifikace byla provedena rozpuštěním peptidu ve vodě a úpravou pH roztoku na 2 a extrakcí vodné fáze 3 krát ethylacetátem. Pak bylo pH vodné fáze upraveno na 8-9 a dále byla extrahována 4 krát dichlormethanem. Organická fáze byla extrahována vodou a sušena nad síranem sodným, zfiltrována a pak odpařena. Bylo získáno 1,37 g čištěného produktu ve formě bílé pěny. Další čisticí operace byla střednětlaká kapalinová chromatografíe (10-50 % A v 10 minutách.; 50-90% A v 320 minutách). Frakce, které obsahovaly produkt, byly kombinovány, lyofilizovány, znovu rozpuštěny ve vodě a pH roztoku bylo upraveno na 9 1N LiOH. Po extrakci dichlormethanem byla organická fáze sušena nad síranem sodným, zfiltrována a pak odpařena do sucha. Lyofilizací bylo získáno 500 mg čistého produktu, který byl charakterizován MS-FAB ([M+H]+ = 593).
Příklad 2B
Me2Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)3
a) Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)3 g (3,35 mmol) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH a 0,664 g (3,35 mmol) H-Pro-NHCH(CH3)3 bylo rozpuštěno v 34 ml suchého dichlormethanu. Po ochlazení na 0°C bylo přidáno 1,35 ml (12,1 mmol) N-methylmorfolinu, 0,114 g (0,84 mmol) HOBt a 0,645 g (3,35 mmol) EDC1 byla reakční směs míchána přes noc při teplotě místnosti. Pak bylo k reakční směsi přidáno 80 ml dichlormethanu a organická fáze důkladně promyta nasyceným vodným roztokem NaHCO3 (3X), vodou (IX), 5% citrónovou kyselinou (3X) a nasyceným roztokem NaCl. Organická fáze byla sušena nad síranem sodným, zfiltrována a pak odpařena do sucha. Bylo získáno 1,8 g produktu, který byl použit pro další reakční krok bez dalšího čištění.
-24CZ 293905 B6
b) Me2Val-Val-MeVaI-Pro-Pro-NHCH(CH3)3
1,8 g Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)3 bylo rozpuštěno v 10 ml MeOH. Pod atmosférou dusíku bylo k roztoku přidáno 0,045 g 10% Pd/C reakční směs byla 4 hodiny hydrogenována. Po přidání 0,86 ml (11,24 mmol) 37% vodného roztoku formaldehydu a 0,252 g 10% Pd/C hydrogenace pokračovala 5 hodin. Filtrací a odpařením bylo získáno 1,82 g surového produktu. Čisticí operace byla střednětlaká kapalinová chromatografíe (10-50 % A v 10 minutách.; 50-90% A v 320 minutách). Frakce, které obsahovaly produkt, byly kombinovány, lyofílizovány, znovu rozpuštěny ve vodě a pH roztoku bylo upraveno na 9 1N LiOH. Po extrakci dichlormethanem byla organická fáze sušena nad síranem sodným, zfiltrována a pak odpařena do sucha. Lyofilizací bylo získáno 547 mg čistého produktu, který byl charakterizován MS-FAB ([M+H]+ = 607).
Testy biologické aktivity
Metodologie In vivo
Kombinace sloučeniny obecného vzorce I a paclitaxelu, taxoteru nebo modifikovaného taxanu nebo taxoidního analogu byly dále testovány různými předklinickými zkouškami na in vivo aktivitu, která indikuje klinickou použitelnost. Pro použití v tomto vynálezu jsou vhodné tyto modelové tumory P388 (ascites model), LX-1, CX-1 a PC-3 (modely s naroubovanými lidskými tumory plic, tlustého střeva a prostaty).
Obecně jakýkoliv režim dávkování, který zajišťuje přijatelnou hodnotu antitumorové aktivity obou účinných látek je vhodný. Jakýkoli způsob podávání léku může být použit v kombinované terapii podle tohoto vynálezu a může být určen použitím technik, které jsou známy z tohoto oboru. Dále léky mohou být podávány buď současně nebo sekvenčně v jakémkoliv pořadí.
Jako P388 tumorový model je použit rod myších leukemických buněk (viz Schabel et al. Pharmac. Ther. A, 1:411-435). P388 tumorové buňky použité v tomto vynálezu byly získány od donomích myších peritoneálním odběrem 7 dní po přenesení. lxlO6 P388 tumorových buněk bylo implantováno intraperitoneálně v objemu 0,5 ml do myši.
Typický režim podávání zahrnoval počátek léčby přibližně jeden den po přenesení tumorových buněk další pokračování 5 a 9 dne po přenesení tumorových buněk. Sloučeniny obecného vzorce byly podávány intravenózně (i.v.) a paclitaxel, taxoter nebo modifikovaný taxan nebo taxoidní analog byly podávány intraperitoneálně (i.p.).
Terapeutické výsledky kombinací podle vynálezu proti P388 buňkám jsou prezentovány v době vzrůstu doby života, což odpovídá relativní střední době přežití (MST) léčené (T) a kontrolní (C) skupiny (doba přežití neléčených myší byla zpravidla v rozmezí 11 až 13 dnů) a je prezentována jako % T/C hodnotách. Podle direktiv National Cancer Institute hodnoty % T/C v rozmezí 128 až 190 % indikují to, že lék má průměrnou až dobrou aktivitu. Dále Net log Cell Kill (logaritmus (počtu) zabitých buněk) je použit pro porovnání účinnosti různých kombinací a je vypočten takto:
[(T-C)-délka léčby] x 0,322
Net log Cell Kill =---------------------------doba zdvojnásobení kde, doba zdvojnásobení = čas nutný aby kontrolní tumor zdvojnásobil svojí velikost (0,4 dnu)
T a C = relativní střední době přežití (dny) léčení (T) a kontrolní (C) myši.
-25CZ 293905 B6
Délka léčby lékem
0,322 odvozená konstanta
Pozitivní číslo Net log Cell Kill znamená, že na konci léčby je méně tumorových buněk. Negativní číslo znamená, že tumor během léčby stále rostl.
Příklad 3: Kombinovaná léčba použití, sloučeniny (xvii) a paclitaxelu v modelu P388 tumoru.
lxlO6 P388 turových buněk bylo implantováno intraperitoneálně v objemu 0,5 ml do myši. Léčba byla zahájena přibližně jeden den po přenesení tumorových buněk další pokračování 5 a 9 dne po přenesení tumorových buněk. Sloučenina (xvii) byla podávána IV, zatím co paclitaxel byl podáván IP. Sloučenina (xvii) byla podávána buď ve 20, 40 nebo 60 mg/kg a paclitaxel buď v 10, 20 nebo 30 mg/kg. Podávání bylo sekvenční s tím, že jako první byla podávána sloučenina (xvii) a paclitaxel byl podáván hodinu po ní.
Výsledky:
Výsledky příkladu 3 jsou prezentovány v tabulce 1. Data z tabulky 1 ukazují, že léčba nekombinovaným lékem rezultuje ve výhodném % T/C 175 % pro sloučeninu (xvii), což odpovídá Net lof Cell Kill (NICK) 0,66 při intravenózním podávání v dávce 60 mg/kg, a ve výhodném % T/C 183% pro paclitaxel, což odpovídá NICK 1,33 při intraperitoneálním podávání v dávce 10 mg/kg. Pro léčbou kombinovaným lékem data v tabulce I ukazují, že kombinace 60 mg/kg (xvii) a 20 mg/kg paclitaxelu rezultuje v signifikantní vzrůst doby přežití (P hodnota nižší než 0,001, určena Mann-Whitney testem a ve výhodném % T/C 242 %, což odpovídá NICK 5,98 s tím, že 38 % zvířat přežilo víc než 60 dnů.
Modely s naroubovanými lidskými tumory
Lidské tumory plic (LX-1), tlustého střeva (CX-1) a prostaty (PC-3), které vyrostly na athymických bezsrstnatých myších byly přeneseny (naroubovány) na novou myš (příjemce) podle běžného postupu v tomto oboru. Transplantované části tumoru byly přibližně 50 miligramové. Den přenosu byl označen jako den 0. Kombinovaná terapie podle předloženého vynálezu měla určit antitumorovou aktivitu podáváním léku myši, která nesla naroubovaný tumor.
Při kombinované terapii byly oba léky podávány intravenózně. Hodinu po podání sloučeniny (xvii) byl podán injektován paclitaxel podle plánu Q2dx3;5,12 a 19. Jinými slovy se léčba skládala ze 23 cyklů počínaje 5, 12 a 19 dnem po implantaci tumoru. Jeden cyklus léčby se skládal z léčby každý další den v celkovém počtu 3 dnů. Optimální dávka pro jednotlivou dávku podání jak sloučeniny (xvii), tak i paclitaxelu pro LX-1 CX-1 typů testovaných modelů s naroubovanými lidskými tumory lze najít v tabulkách 2-3, nebyla určena optimální dávka pro PC-3 model.
Rozměry tumoru a hmotnost tumorů byly měřeny dvakrát týdně. Objem tumoru byl počítán použitím rozměrů, které byly změřeny Vemierova posuvného měřítka, podle vzorce:
(délka x šířka2)/2 = mg hmotnost tumoru
Střední hmotnosti tumoru (MTW) byly vypočteny pro každou léčenou skupinu a T/C hodnoty byly určeny v každé skupině se vztažením na neléčené kontrolní tumory.
-26CZ 293905 B6
Výsledky jsou dále prezentovány jako Net log Cell Kill a byly takto vypočteny:
[(T-C)-délka léčby] x 0,322
Net log Cell Kill-doba zdvojnásobení
T a C = střední počet dnů, kdy léčené i kontrolní tumory dosáhly specifikované velikosti, v tomto případě 2000 mm3 doba zdvojnásobení = čas nutný aby kontrolní tumor zdvojnásobil svojí velikost (0,4 dnu)
0,322 odvozená konstanta
Příklad 4: Kombinovaná léčba použití, sloučeniny (xvii) a paclitaxelu v LX-1 modelu s naroubovanými lidskými tumory
Byl použit výše popsaný režim dávkování Q2dx3;5, 12 a 19. Paclitaxel byl podáván IV hodinu po IV podání sloučeniny (xvii). Optimální dávka pro jednotlivou dávku podání jak sloučeniny (xvii) tak i paclitaxelu byla určena z tabulky 2.
Příklad 5: Kombinovaná léčba použití, sloučeniny (xvii) a paclitaxelu v CX-1 modelu s naroubovanými lidskými tumory
Byl použit výše popsaný režim dávkování Q2dx3;5,12 a 19. Paclitaxel byl podáván IV hodinu po IV podání sloučeniny (xvii). Optimální dávka pro jednotlivou dávku podání jak sloučeniny (xvii) tak i paclitaxelu byla určena z tabulky 3.
Příklad 6: Kombinovaná léčba použití, sloučeniny 103793 a paclitaxelu v LX-1 modelu s naroubovanými lidskými tumory
Byl použit výše popsaný režim dávkování Q2dx3;5,12 a 19. Paclitaxel byl podáván Iv hodinu po IV podání sloučeniny (xvii). Optimální dávka pro jednotlivou dávku podání jak sloučeniny (xvii) tak i paclitaxelu nebyla určena.
Výsledky:
Výsledky získané modely s naroubovanými lidskými tumory, které měly určit antitumorovou aktivitu kombinované terapie podle předloženého vynálezu, jsou prezentovány v tabulkách 2-4. Data představují výsledky s předběžných experimentů. Data z tabulky 2 ukazují, že optimální kombinace sloučeniny (xvii) a paclitaxelu je 15 mg/kg a respektive 10 mg/kg pro model LX-1. Kombinace rezultuje v regresi a v zpomalení růstu tumoru. Avšak ta samá kombinace pro model CX-1 nevykazuje v žádnou výhodu oproti léčbě nekombinovaným lékem, jak je ukázáno v tabulce 3.
Pro model PC-3 nebyl nalezen žádný prospěšný účinek kombinace v porovnání s léčbou nekombinovaným lékem. Nicméně nebyla určena optimální dávka pro jednotlivou dávku podání.
-27CZ 293905 B6
S ,g co 00 co Q.
□ +»
p >.
CL
3 n Ό
<0 O co
bez paci
t log
nebo <0 Z
co
£
a dávku sloi f W E S Paclitaxel IP
c >
co co •co
-X > Ί5 >
3 n
X3 w
CO u >
H O X,
Q4x3;1 paclitaxel injektován hodinu po sloučenině (xvii)
-28CZ 293905 B6
Tabulka 2
Odezva na dávku sloučeniny (xvii) s nebo bez paclitaxelu proti tumorovému modelu LX-1 in vivo. LX-1 #16 Regrese vyléčení
úplná
částečná Ol
Celkový počet zvířat to <0 CD to co co <0
Net Log Cell Kill -0,374 -0,042 -0,465 -0,581 0,382 0,589 co co o o
MTW d27 %T/C 10,5 3,94 12,24 19,06 1,28 1,92 4,57
% smrti otravou o o o o o b- t—
Léky Paclitaxel (IV) G> O ▼* o o o O V“ O T“ O ▼*
CQ H 3 S* O 5 ω o (0 Q o 25 to u> 25 m ID
Q2Dx3;5,12,19 paclitaxel injektován hodinu po sloučenině (xvii)
-29CZ 293905 B6
Tabulka 3
Odezva na dávku sloučeniny (xvii) s nebo bez paclitaxelu proti tumorovému modelu CX-1 in vivo. CX-1#9
Regrese vyléčení i—
úplná
částečná CM CM CM
Celkový počet zvířat CO co CD co CO CO co
Net Log Cell Kill -0,124 -0,313 | -0,763 -0,354 -0,39 -0,531
CM Ό P H S 2? 38,12 52,87 109,7 47,64 CD rm 73,85
% smrti otravou I L_______________________ 83
Léky Paclitaxel (IV) Dávka (mg/kg) o o o o o O v- O T“
Sloučenina (xvii) (IV) o 25 T— 7.5 25 co r-‘
Q2Dx3;5,12,19 paclitaxel injektován hodinu po sloučenině (xvii)
-30CZ 293905 B6
Tabulka 4
Odezva na dávku sloučeniny (xvii) s nebo bez paclitaxelu proti tumorovému modelu PC-3 in vívo. PC-3#8 Regrese vyléčení CM
úplná - v- CM
Částečná to to CM co T CO
Celkový počet zvířat CD CD CD CD CD CD CD
Net Log Cell Kill toxické I 1,98 -0,672 0,967 0,603 řÓ7 1,98
rCM o H h s s? CM 2,86 55,12 0,09 60'0 600 0,09
% smrti otravou r- o o 33 33 o
Léky Paclitaxel (IV) Dávka (mg/kg) 30 20 | o o 30 20 O v*
Sloučenina (xvii) (IV) o o o 30 30 30 30
’Q2Dx3;5,12,19 paclitaxel injektován hodinu po sloučenině (xvii)
-31 CZ 293905 B6
Následující sloučeniny byly připraveny mohou být připraveny v souladu s příklady:
3. Xaa Val Xab ProXac
4. Xaa Val Xab Pro Xad
5. Xaa Val Xab Pro Xae
6. Xaa Val Xab Pro Xaf
7. Xaa Val Xab Pro Xag
8. Xaa Val XabProXah
9. Xaa Val Xab Pro Xai
10. Xaa Val XabProXak
11. Xaa Val Xab Pro Xal
12. Xaa Val XabProXam
13. Xaa Val Xab Pro Xan
14. Xaa ValXabProXam
15. Xaa Val Xab Pro Xap
16. Xaa Val Xab Pro Xaq
17. Xaa Val XabProXar
18. Xaa Val XabProXas
19. Xaa Val Xab Pro Xat
20. Xaa Val Xab Pro Xau
21. Xaa Val XabProXav
22. Xaa Val Xab Pro Xaw
23. Xaa Val XabProXax
24. Xaa Val Xab Pro Xay
25. Xaa Val XabProXaz
26. Xaa Val XabProXba
27. Xaa Val Xab Pro Xbb
28. Xaa Val Xab Pro Xbc
29. Xaa Val XabProXbd
30. Xaa Val Xab Pro Xbe
31. Xaa Val XabProXbf
32. Xaa Val Xab Pro Xbg
33. Xaa Val Xab Pro Xbh
34. Xaa Val Xab Pro Xbi
35. Xaa Val Xab Pro Xbk
36. Xaa Val XabProXbl
37. Xaa Val Xab Pro Xbm
38. Xaa Val Xab Pro Xbn
39. Xaa Val XabProXbo
40. Xaa Val Xab Pro Xbp
41. Xaa Val XabProXbq
42. Xaa Val Xab Pro Xbr
43. Xaa Val Xab Pro Xbs
44. Xaa Val XabProXbt
45. Xaa Val XabProXbu
46. Xaa Val Xab Pro Xbv
47. Xaa Val XabProXbw
48. Xaa Val Xab Pro Xbx
49. Xaa Val Xab Pro Xby
50. Xaa Val Xab Pro Xbz
51. Xaa Val XabProXca
52. Xaa Val Xab Pro Xcb
53. Xaa Val Xab Pro Xcc
54. Xaa Val Xab Pro Xcd
-32CZ 293905 B6
55. Xaa Val Xab Pro Xce
56. Xaa Val Xab Pro Xcf
57. Xaa Val Xab Pro Xay
58. Xaa Val Xab Pro Xch
59. Xaa Val XabProXci
60. Xaa Val Xab Pro Xck
61. Xaa Val XabProXci
62. Xaa Val Xab Pro Xcm
63. Xaa Val Xab Pro Xcn
64. Xaa Val Xab Pro Xco
65. Xaa Val Xab Pro Xcp
66. Xaa Val Xab Pro Xcq
67. Xaa Val XabProXcr
68. Xaa Val Xab Pro Xcs
69. Xaa Val Xab Pro Xct
70. Xaa Val Xab Pro Xcu
71. Xcw Val Xab Pro Xcv
72. Xcx Val Xab Pro Xcv
73. Xaa Val Xab Pro Pro Xcy
74. Xaa Val Xab Pro Pro Xcz
75. Xaa Val Xda Pro Xcv
76. Xaa Xdb Xab Pro Xcv ΊΊ. Xdc Val Xab Pro Xcv
78. Xaa Ile Xab Pro Xcv
79. Xdd Val Xab Pro Xcv
80. Xde Val Xab Pro Xcv
81. Xaa Xdf Xab Pro Xcv
82. Xaa Val Xab Pro Xcv
83. Xaa Val Xab Pro Pro Xdg
84. Xaa Val Xab Pro Pro Xdh
85. Xaa Val Xab Pro Pro Xdi
86. Xaa Val Xab Pro Pro Xdk
87. Xaa Val Xdl Fro Xcv
88. Xde Val Xab Pro Xav
89. Xaa Val Xdl Pro Xay
90. Xaa Val Xab Pro Xdm
91. Xaa Val Xab Pro Xdn
92. Xaa Val XabProXdo
93. Xaa Val Xab Pro Xdp
94. Xaa Val Xab Pro Xdq
95. Xaa Val Xab Pro Pro Xdr
96. Xaa Val XabProXds
97. Xaa Val Xbc Píro Xcv
98. Xaa Ile Xab Pro Xay
99. Xcw Val Xab Pro Xay
100. Xaa Val XbcProXal
101. Xaa Val Xdl ProXal
102. Xaa Xdf Xab Pro Xal
103. Xaa Ile Xab Pro Xal
104. Xdd Val Xab Pro Xal
105. Xde Val Xab Pro Xal
106. Xcx Val Xab Pro Xcy
107. Xcw Val Xab Pro Xal
108. Xcx Val Xab Pro Xal
109. Xcw Val Xab Pro Xav
-33CZ 293905 B6
110. Xcx Val Xab Pro Xav
111. Xcw Val Xab Pro Xaw
112. Xcx Val Xab Pro Xaw
113. Xab Val Xab Pro Xay
114. Xab Val Xab Pro Xcv
115. Xab Val Xab ProXal
116. Xab Val XabProXam
117. Xab Val XabProXan
118. Xab Val Xab Pro Xao
119. Xab Val Xab Pro Xav
120. Xab Val Xab Pro Xaw
121. Xab Val Xab Pro Xat
122. Xab Val Xab Pro Xau
123. Xab Val Xab Pro Xbf
124. Xab Val Xab Pro Xbm
125. Xab Val Xab Pro Xbn
126. Xab Val Xab Pro Xbo
127. Xab Val Xab Pro Xch
128. Xaa Val Xab Pro Xdt
129. Xaa Val Xab Pro Xdu
130. Xaa Val Xab Pro Xdv
131. Xaa Val Xab Pro Xdw
132. Xaa Val Xab Pro Xdx
133. Xaa Val Xab Pro Xdy
134. Xaa Val XabProXdz
135. Xaa Val Xab Pro Xea
136. Xaa Val XabProXeb
137. Xaa Val Xab Pro Xec
138. Xaa Val Xab Pro Xed
139. Xaa Val Xab Pro Xef
140. Xaa Val Xab Pro Xeg
141. Xaa Val XabProXeh
142. Xaa Val Xab Pro Xei
143. Xaa Val Xab Pro Xek
144. Xaa Val XabProXel
145. Xaa Val XabProXem
146. Xaa Val XabProXen
147. Xaa Val Xab Pro Xeo
148. Xaa Val XabProXep
149. Xaa Val XabProXeq
150. Xaa Val Xab Prc Xer
151. Xaa Val Xab ProXcq
152. Xaa Val Xab Pro Pro Val Phe
153. Xaa Val Xab Pro Xet Val Phe NH2
154. Xaa Val Xer Pro Pro Val Phe NH2
155. Xaa Val Xbc Pro Pro Val Phe NH2
156. Xaa Ile Xab Pro Pro Val Phe NH2
157. Xaa Leu Xab Pro Pro Val Phe NH2
158. Xde Val Xab Pro Pro Val Phe NH2
159. Xdd Val Xab Pro Pro Val Phe NH2
160. Xes Val Xab Pro Pro Val Phe NH2
161. Xeu Val Xab Pro Pro Val Phe NH2
162. Xaa Val Xab Pro Pro Phe Phe NH,
163. Xaa Val Xab Pro Pro Val NH2
164. Xaa Val Xab Pro Xev
-34CZ 293905 B6
165. Xaa Val Xab Pro Pro NH2
166. Xaa Val Xab Pro Pro
167. Xaa Val Xab Pro Xew
168. Xaa Val Xab Xex
169. Xdd Val Xab Pro Pro NH2
170. Xaa Xdf Xab Pro Pro NH2
171. Xaa Val XabProXey
172. Xaa Val XabProXez
173. Xfa Val Xab Pro Pro Val Phe NH2
174. Xaa Val Xab Pro Pro Xfb
175. Xaa Val Xab Pro Xfc
176. Xaa Val XabProXfd
177. Xaa Val Xab Pro Xfe
178. Xaa Val Xab Pro Xff
179. Xaa Val Xab Pro Xfg
180. Xaa Val XabProXfh
181. Xaa Val Xab Pro Xfí
182. Xaa Val Xab Pro Xfj
183. Xaa Val Xdl Pro Pro NH2
184. Xaa Val Xfk Pro Pro NH2
185. Xaa Val Xfk Pro Xfh
186. Xaa Val Xfk Pro Xfh
187. XcxVal XabProXfh
188. Xaa Val Xab Pro Pro Xdf Phe NH2
189. Xaa Val Xab Pro Pro Leu Phe NH2
190. Xaa Val Xab Pro Pro Ile Phe NH2
Tabulka 5: Identifikace sekvencí sloučenin připravených podle příkladů a uvedených na obrázku
Číslo sloučeniny Číslo identifikace sekvence
2A, 3-59, 58-72, 75, 77,79-80, 82, 87- 94, 96-97, 99-101,104-151, 164, 171-172, 175-182, 185-187 a sloučeniny i-xvii z obrázku 1
57 2
73-74, 83-86, 95, 174 3
76,81,102 4
78,81,102 5
1A, 151, 154-155,158-161,173 6
153 7
156 8
157 9
162 10
163 11
1B, 2B, 165-166,169, 183 12
168 13
170 14
188 15
189 16
190 17
-35CZ 293905 B6
Dále je uvedený seznam příkladů MS-charakterizace připravených nových sloučenin
příklad MS-Fab
3. 565
4. 579
5. 593
6. 607
7. 621
8. 635
11. 607
12. 607
13. 621
14. 649
15. 635
16. 635
17. 635
18. 635
19. 621
20. 621
21. 635
22. 635
25. 633
26. 647
27. 661
31. 623
32. 671
33. 667
34. 681
35. 655
36. 655
37. 669
38. 621
39. 635
41. 649
42. 621
43. 633
44. 667
45. 607
46. 647
47. 668
48. 655
49. 669
50. 685
51. 629
52. 625
53. 721
55. 579
58. 623
61. 597
61. 621
62. 609
63. 625
64. 635
65. 591
-36CZ 293905 B6 příklad
66.
67.
68.
69.
70.
71.
74.
75.
76.
77.
78.
79.
80.
81.
82.
83.
84.
85.
86.
87.
90.
92.
93.
94.
95. 128. 131. 139.
151.
152.
153.
154.
155.
156.
157.
158.
159.
160. 161. 162.
163.
164.
165.
166.
167.
168.
169.
170.
171.
172.
173.
174.
MS-Fab
715
685
685
591
607
621
706
579
579
579
607
607
607
607
637
692
706
706
706
607
635
659
617
636
678
671
625
625
637
798
810
812
812
812
812
812
811
825
881
845
649
737
550
551
731
550
566
566
635
704
853
740
-37CZ 293905 B6 příklad
175.
176.
177.
178.
179.
180. 181. 182.
183.
184.
185.
186.
187.
188.
189.
190.
MS-Fab
619
845
649
691
717
641
579
595
566
566
669
656
669
811
812
812
Symboly použité v popisu sloučenin obecného vzorce I mají následující význam
Xaa: N,N-Dimethylvalin
Xab: N-Methylvalin
-38CZ 293905 B6
Xac:
Xad:
Xae:
Xag:
-39CZ 293905 B6
Xah:
Xai:
Xak.:
Xal:
Xam:
Xan:
-40CZ 293905 B6
Xao;
Xap:
Xaq:
Xar:
Xas;
-41 CZ 293905 B6
Xau:
Xav:
Xaw:
-42CZ 293905 B6
Xay:
Xba;
Xbb:
XbC:
N-Methyl-ísoleucin
Xbd:
-43CZ 293905 B6
Xbe.-
Xbg:
Xbh:
Xbi;
Xbk:
0 H3C
-44CZ 293905 B6
Xbm:
Xbn:
NH
Xbo:
Xbp:
-45CZ 293905 B6
Xbq:
Xbt:
Xbs:
Xbt:
Xbu:
Xbv:
-46CZ 293905 B6
Xbw
Xbx:
Xby:
Xbz.:
Xca:
-47CZ 293905 B6
Xcb:
Xcc:
Prolinadamantyl (1) amid
XCd:
o
Xce:
Xcg:
-48CZ 293905 B6
Xch:
Xck:
Xcl:
Xctn:
XCn:
-49CZ 293905 B6
Xco:
Xcp:
Xcqr:
Xcr:
Xcs:
-50CZ 293905 B6
Xct:
XCU:
Xcv:
Xcw:
Xcx:
Xcy:
N-Methyl-N-ethyl-valin
N,N-Diethylvalin
CHj
Xcz:
-51 CZ 293905 B6
Xda: N-Methyl-2-araínobutyroyl
Xdb: 2-aminobutyroyl
Xdc: N, N-Dimethyl-2-aminobutyroyl
Xdd: N,N-Dimethyl-2-terC.butylglycin
Xde: N,N-Dimethyl-isoleucin
Xdf: 2-terč.butylglycin
Xdg:
Xdh:
Xdk:
-52CZ 293905 B6
Xdl:
N-Methyl-2-terC.butylglycin'
Xdm:
NH
CH3
Xdn:
XdO:
Xdp:
Xdq:
Xdr:
XdS:
-53CZ 293905 B6
Xdt:
Xdu:
Xdv:
Xdw:
Xdx:
Xdy:
Xdz:
-54CZ 293905 B6
Xea:
Zeb:
Xec:
Xed:
Xee:
Xeť;
-55CZ 293905 B6
Xeg:
Xeh:
Xekí
Xel:
Xem:
Xen:
-56CZ 293905 B6
Xeo:
Xep:
Xeq:
-57CZ 293905 B6
Xer: N-Methylleucin
Xes·. N-Acetyl-N-methylvalin
Xet: pipekolinová kyselina
Xeu: N, N - Dibu tyl val in
Xev:
Xew:
Xex:
-58CZ 293905 B6
Xey:
Xez:
Xfa:
N,N-dipropylvalin
Xfb:
O
CH(CH3);
-59CZ 293905 B6
Xfc;
Xfd:
Xfe:
-60CZ 293905 B6
Xfg:
Xfhí
Xfi:
Xfj:
Xfk: N-Ethylvalin
Xfl: N-Methyl-3-/erc-butylalanin
Průmyslová využitelnost
Předložený vynález poskytuje způsob přípravy léku a způsob léčby rakoviny, který zahrnuje kombinovanou terapii s použitím první sloučeniny což jsou taxoidní analoga a druhé sloučeniny, která je reprezentovaná sloučeninou obecného vzorce I.
-61 CZ 293905 B6
Seznam sekvencí
Informace pro sekvenci č. 1:
(i) charakteristika sekvence (A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) počet vláken (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (xi) popis sekvence: sekvence č. 1:
Xaa Val Xaa Pro Xaa
5
Informace pro sekvenci č. 2:
(i) charakteristika sekvence (A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) počet vláken (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (xi) popis sekvence: sekvence č. 2:
Xaa Xaa Xaa Pro Xaa
5 (2) Informace pro sekvenci č. 3:
(i) charakteristika sekvence (A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) počet vláken (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (xi) popis sekvence: sekvence č. 3:
Xaa Val Xaa Pro Xaa Pro
5
-62CZ 293905 B6 (2) Informace pro sekvenci č. 4:
(i) charakteristika sekvence (A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) počet vláken (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (xi) popis sekvence: sekvence č. 4:
Xaa Xaa Xaa Pro Xaa
5 (2) Informace pro sekvenci č. 5:
(i) charakteristika sekvence (A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) počet vláken (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (xi) popis sekvence: sekvence č. 5:
Xaa Ile Xaa Pro Xaa
5 (2) Informace pro sekvenci č. 6:
(i) charakteristika sekvence (A) délka: 7 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) počet vláken (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (xi) popis sekvence: sekvence č. 6:
Xaa Val Xaa Pro Pro Val Phe
5
-63CZ 293905 B6 (2) Informace pro sekvenci č. 7:
(i) charakteristika sekvence (A) délka: 7 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) počet vláken (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (xi) popis sekvence: sekvence č. 7:
Xaa Val Xaa Pro Xaa Val Phe
5 (2) Informace pro sekvenci č. 8:
(i) charakteristika sekvence (A) délka: 7 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) počet vláken (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (xi) popis sekvence: sekvence č. 8:
Xaa Ile Xaa Pro Pro Val Phe
5 (2) Informace pro sekvenci č. 9:
(i) charakteristika sekvence (A) délka: 7 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) počet vláken (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (xi) popis sekvence: sekvence č. 9:
Xaa Leu Xaa Pro Pro Val Phe
5
-64CZ 293905 B6 (2) Informace pro sekvenci č. 10:
(i) charakteristika sekvence (A) délka: 7 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) počet vláken (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (xi) popis sekvence: sekvence č. 10:
Xaa Val Xaa Pro Pro Phe Phe
5 (2) Informace pro sekvenci č. 11:
(i) charakteristika sekvence (A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) počet vláken (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (xi) popis sekvence: sekvence č. 11:
Xaa Val Xaa Pro Pro Val
5 (2) Informace pro sekvenci č. 12:
(i) charakteristika sekvence (A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) počet vláken (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (xi) popis sekvence: sekvence č. 12:
Xaa Val Xaa Pro Pro
5
-65CZ 293905 B6 (2) Informace pro sekvenci č. 13:
(i) charakteristika sekvence (A) délka: 4 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) počet vláken (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (xi) popis sekvence: sekvence č. 13:
Xaa Val Xaa Xaa (2) Informace pro sekvenci č. 14:
(i) charakteristika sekvence (A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) počet vláken (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (xi) popis sekvence: sekvence č. 14:
Xaa Xaa Xaa Pro Pro
5 (2) Informace pro sekvenci č. 15:
(i) charakteristika sekvence (A) délka: 7 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) počet vláken (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (xi) popis sekvence: sekvence č. 15:
Xaa Val Xaa Pro Pro Xaa Phe
5
-66CZ 293905 B6 (2) Informace pro sekvenci č. 16:
(i) charakteristika sekvence (A) délka: 7 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) počet vláken (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (xi) popis sekvence: sekvence č. 16:
Xaa Val Xaa Pro Pro Leu Phe
5 (2) Informace pro sekvenci č. 17:
(i) charakteristika sekvence (A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) počet vláken (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (xi) popis sekvence: sekvence č. 17:
Xaa Val Xaa Pro Pro Ile Phe
5
Ekvivalenty
Odborníci z této oblasti techniky rozpoznají a mohou zjistit použití nejen rutinním experimentováním mnoho ekvivalentů dalším specifickým provedením, které ani nejsou popsány ve vynálezu.

Claims (16)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje účinné množství první sloučeniny, která se vybere z paclitaxelu, taxoteru, modifikovaného taxanu nebo taxoidních analogů; a účinné množství druhé sloučeniny obecného vzorce I,
    R’R2N-CHX-CO-A-B-D-(E)s-(F)t-(G)u-K (I) kde
    R1 je Cj až C4 alkyl, cyklopropyl, C] až C4 alkylsulfonyl, fluor Ci až C4 alkyl nebo aminosulfonyl, který může být substituovaný C, až C4 alkylem;
    -67CZ 293905 B6
    R2 je vodík, Ci až C4 alkyl, fluor Ci až C4 alkyl nebo cyklopropyl;
    R -N-R mohou společně tvořit pyrrolidinový nebo piperidinový zbytek;
    A je valylový, izoleucylový, leucylový, alloizoleucylový, 2,2-dimethylglycylový, 2-cyklopropylglycylový, 2-cyklopentylglycylový, 3-íerc-butylalanylový, 2-rerc-butylglycylový, 3-cyklohexylalanylový, 2-ethylglycylový, 2-cyklohexylglycylový, norleucylový nebo norvalylový zbytek;
    B je N-(Ci až C4 alkyl)-valylový, norvalylový, leucylový, izoleucylový, 2-terc-butylglycylový, 3-terc-butylalanylový, 2-ethylglycylový, 2-cyklopropylgIycylový, 2-cyklopentylglycylový, norleucylový nebo 2-cyklohexylglycylový zbytek;
    D je prolylový, homoprolylový, hydroxyprolylový, 3,4-dehydroprolylový, 4-fluoroprolylový, 3-methylprolylový, 4-methylprolylový, 5-methylprolylový, azetidin-2-karbonylový, 3,3dimethylprolylový, 4,4-difluoroprolylový, oxazolidin-4-karbonylový nebo thiazolidin-4karbonylový zbytek;
    E je prolylový, homoprolylový, hydroxyprolylový, 3,4-dehydroprolylový, 4-fluoroprolylový, 3-methylprolylový, 4-methylprolylový, 5-methylprolylový, azetidin-2-karbonylový, 3,3dimethylprolylový, 4,4-difluoroprolylový, oxazolidin-4-karbonylový nebo thiazolidin-4karbonylový zbytek;
    F a G se nezávisle vyberou ze skupiny, kterou tvoří prolylový, homoprolylový, hydroxyprolylový, thiazolidinyl-4-karbonylový, 1-aminopentyl-l-karbonylový, valylový, 2-tercbutylglycylový, izoleucylový, leucylový, 3-cyklohexylalanylový, fenylalanylový, Nmethylfenylalanylový, tetrahydroizochinolyl-2-histidylový, 1-aminoindyl-l-karbonylový, 3-pyridylalanylový, 2-cyklohexylglycylový, norleucylový, norvalylový, neopentylglycylový, tryptofanylový, glycylový, 2,2-dimethylglycylový, alanylový, β-alanylový a 3-naftylalanylový zbytek;
    X je vodík, Ci až C5 alkyl, C3 až C7 cykloalkyl, -CH2-cykIohexyl nebo aryl Cj až C4 alkyl, kde aryl je fenyl, benzyl nebo naftyl;
    s, t a u jsou nezávisle 0 nebo 1 a
    K je hydroxy, Ci až C4 alkoxy, fenoxy, benzyloxy nebo substituovaná nebo nesubstituovaná amino skupina vzorce R5-N-R6, kde
    R5 je vodík, hydroxy, C] až C7 alkoxy, benzyloxy, fenyloxy, Cj až C7 přímý nebo rozvětvený alkyl, který může být substituovaný jedním nebo více atomy fluoru nebo Ci až Cj2 přímý nebo rozvětvený hydroxyalkyl nebo C3 až Cm cykloalkyl; nebo benzyl, který může být substituovaný až třemi substituenty, jimiž mohou nezávisle být CF3, nitro, Ci až C7 alkylsulfonyl, C] až C4 alkoxy, fenoxy, benzoxy, halogen, Ci až C4 alkyl, kyano, hydroxy, N(CH3)2, COOMe, COOEt, COOiPr a COONH2;
    R6 je vodík, Ci až Cj2 přímý nebo rozvětvený alkyl, který může být substituovaný jedním nebo více atomy fluoru, nebo Cj až Cl2 přímý nebo rozvětvený hydroxyalkyl, C3 až Cio cykloalkyl, -(CH2)V-C3 až C7 cykloalkyl, kde index v je 0, 1, 2 nebo 3, nebo norefedryl, norpseudoefedryl nebo chinolyl nebo pyrazolyl nebo -(CH2)-benzimidazolyl, (l)-adamantyl nebo (2ý-adamantyl nebo -(CH2)-adamantyl nebo α-methylbenzyl nebo a-dimethylbenzyl nebo -(CH2)v-fenyl, kde index vje 0, 1, 2 nebo 3, který může být substituován až dvěma substituenty, jimiž mohou nezávisle být CF3, nitro, Cj až C7 alkylsulfonyl, Ci až C4 alkoxy, fenoxy, benzoxy, halogen, C! až C4 alkyl, který může tvořit cyklický systém, kyano,
    -68CZ 293905 B6 hydroxy, N(CH3)2, COOMe, COOEt, COOiPr nebo COONH2 nebo -(CH2)m-naftyl, kde index m je 0 nebo 1, nebo -(CH2)w-benzhydryl, kde index w je 0, 1 nebo 2 nebo bifenyl nebo pikolyl nebo benzothiazolyl nebo benzoizothiazolyl nebo benzopyrazolyl nebo benzoxazolyl nebo -(CH2)m-fluorenyl, kde index m je 0 nebo 1, nebo pyrimidyl nebo -(CH2)m-indanyl, kde index m je 0 nebo 1, nebo -(CH2CH2O)y-CH3, kde index y je 0, 1,2, 3,4 nebo 5, nebo
    -(CH2CH2O)y-CH2CH3, kde index y je 0, 1, 2, 3, 4 nebo 5, nebo NH-C6H5, který může být substituován až dvěma substituenty, jimiž mohou nezávisle být CF3, nitro, Cj až C7 alkylsulfonyl, Ci až C4 alkoxy, halogen, Ci až C4 alkyl, který může tvořit cyklický systém, kyano, hydroxy, COOMe, COOEt, COOiPr nebo COONH2, nebo -NCH3-C6Hs, nebo -NH-CHr-CčHí nebo -NCH3-CH2-C6H5, nebo pětičlenný heteroaryl, který může být substituován až dvěma substituenty, jimiž mohou nezávisle být CF3, nitro, thiomethyl, thioethyl, C3 až Cď cykloalkyl, -CH2-COOEt, C3 až C4 alkenylový skupina tvořící bicyklický systém s heterocyklem, nebo fenyl nebo -CHR7-pětičlenný heteroaryl, který může být substituován až dvěma substituenty, jimiž mohou nezávisle být CF3, nitro, kyano, halogen, COOMe, COOEt, COOiPr, COONH2, C] až C4 alkyl, Ci až C4 alkoxy, fenyl, benzyl, naftyl a Ci až C7 alkylsulfonyl, kde R7 je vodík, přímý nebo rozvětvený Ci až C5 alkyl, benzyl, nebo R7 a R5 společně tvoří skupinu -(CH2)3- nebo -(CH2)4-, kde Me je methyl, Et je ethyl aPrjepropyl a jejich soli s fyziologicky přijatelnými kyselinami.
  2. 2. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že dále obsahuje farmaceuticky přijatelný nosič.
  3. 3. Farmaceutický prostředek podle nároku 1,vyznačující se tím, že ve sloučenině obecného vzorce I jsou R1 a Rž methyl nebo ethyl; X je izopropyl, seA;-butyl nebo fórc-butyl; index s je 1; indexy t a u jsou 0; A je valyl, 2-ethylglycyl, izoleucyl nebo 2-rerc-butylglycyl; B je N-methylvalyl, 2-ethylglycyl, 1-izoleucyl nebo 2-Zerc-butylglycyl; D je prolyl, 4-fluoroprolyl, thiazolidinyM-karbonyl nebo 3,4-dehydroprolyl; E je prolyl, 4-fluoroprolyl, thiazolidinyl-4-karbonyl, homoprolyl, 3,4-dehydroprolyl nebo hydroxyprolyl a K je substituovaná amino skupina mající vzorec R5-N-R6, kde R5 je vodík nebo Ci až C4 alkoxy a R6 je Ci až C]2 přímá nebo rozvětvená alkylová skupina vybraná ze skupiny jednovazných zbytků sestávající z -C(CH3)3 terc-butylu,
    1 ,l-dimethylpropylu,
    1 -methyl-1 -ethy lpropy lu, (5)- nebo (7?)-l-methyl-2,2-dimethylpropylu,
    -69CZ 293905 B6 —c-di(cn3)2
    CzHg (S)- nebo (J?)-l-ethyl-2-methylpropylu, —C—CH(CH3)2
    CH(CH3)2
    1 -izopropy 1-2-methylbutylu.
  4. 4. Farmaceutický prostředek podle nároku 3, vyznačující se tím, že jednovazný zbytek je
    -C(CH3)3, fórc-butyl,
    -C(CH3)2-CH(CH3)2,1, l-dimethyl-2-methylpropyl,
    -CH(CH3)2, jako izopropyl,
    -CH(CH3)CH2CH3, jako se£-butyl, (5)- nebo (7ř)- a
    -CH(CH3)CH(CH3)2, jako 1,2-dimethylpropyl.
  5. 5. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že ve sloučenině obecného vzorce I jsou R1 a R2 methyl nebo ethyl; X je izopropyl, sek-butyl nebo terc-butyl; index s je 1; indexy t a u jsou 0; A je valyl, 2-ethylglycyl, izoleucyl nebo 2-terc-butylglycyl; B je N-methylvalyl, 2-ethylglycyl, 1-izoleucyl nebo 2-terc-butylglycyI; D je prolyl, 4-fluoroprolyl, thiazolidinyl-4-karbonyl nebo 3,4-dehydroprolyl; E je prolyl, 4-fluoroprolyl, thiazolidinyl-4-karbonyl, homoprolyl, 3,4-dehydroprolyl nebo hydroxyprolyl a Kje substituovaná amino skupina mající vzorec R5-N-R6, kde R5 je vodík nebo C, až C4 alkoxy a R6 se vybere ze skupiny jednovazných zbytků, sestávající z (CH2)v~fenylu, kde index v je 1 a α,α-dimethylbenzylu.
  6. 6. Farmaceutický prostředek podle nároku 1,vyznačující se tím, že ve sloučenině obecného vzorce I jsou R1 a R' methyl nebo ethyl; X je izopropyl, sdr-butyl nebo terc-butyl; index sje 1; indexy t a u jsou 0; A je valyl, 2-ethylglycyl, izoleucyl nebo 2-terc-butylglycyl; B je N-methylvalyl, 2-ethylglycyl, 1-izoleucyl nebo 2-/erc-butylglycyl; D je prolyl, 4-fluoroprolyl, thiazolidinyl-4-karbonyl nebo 3,4-dehydroprolyl; E je prolyl, 4—fluoroprolyl, thiazolidinyl-4-karbonyl, homoprolyl, 3,4-dehydroprolyl nebo hydroxyprolyl a Kje substituovaná amino skupina mající vzorec R5-N-R6, kde R5 je vodík nebo C] až C4 alkoxy a R6 je C] až Ci2 přímý nebo rozvětvený hydroxyalkyl.
  7. 7. Farmaceutický prostředek podle nároku 6, vyznačující se tím, že R6 je 3hydroxy-1,1-dimethylpropyl.
  8. 8. Farmaceutický prostředek podle nároku 1,vyznačující se tím, že ve sloučenině obecného vzorce I jsou R1 a R methyl nebo ethyl; X je izopropyl, seA-butyl nebo Zerc-butyl; index sje 1; indexy t a u jsou 0; A je valyl, 2-ethylglycyl, izoleucyl nebo 2-terc-butylglycyl; B je N-methylvalyl, 2-ethylglycyl, 1-izoleucyl nebo 2-íerc-butylglycyl; D je prolyl, 4-fluoroprolyl, thiazolidinyl-4-karbonyl nebo 3,4-dehydroprolyl; E je prolyl, 4-fluoroprolyl, thiazolidinyl-4-karbonyl, homoprolyl, 3,4-dehydroprolyl nebo hydroxyprolyl a Kje substituovaná amino skupina mající vzorec R5-N-R6, kde R5 je vodík nebo C, až C4 alkoxy a R6 je C3 až C10 cykloalkyl vybraný ze skupiny sestávající z (l)-adamantylu, (2)-adamantylu, cyklobutylu, cyklopentylu, cyklohexylu, 1-methylcyklopentylu, 1-methylcyklohexylu a [3.3.0]okta-l-ylu.
    -70CZ 293905 B6
  9. 9. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že ve sloučenině obecného vzorce I jsou R1 a R2 methyl; X je izopropyl; index s je 1; indexy t a u jsou 0; A je valyl; B je N-methylvalyl; D je prolyl; E je prolyl; R’je benzyl a R6 je vodík.
  10. 10. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že první sloučeninou je paclitaxel a druhou sloučeninou je sloučenina obecného vzorce I, kde R1 a R2 jsou methyl; X je izopropyl; index sje 1; indexy t a u jsou 0; A je valyl; B je N-methylvalyl; D je prolyl; E je prolyl; R5 je benzyl a R6 je vodík.
  11. 11. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že ve sloučenině obecného vzorce I jsou R1 a R2 methyl nebo ethyl; X je izopropyl, se£-butyl nebo Zerc-butyl; index sje 1; indexy t a u jsou 0; A je valyl, izoleucyl, 2-ethylglycyl nebo 2-Zerc-butyIgycyl; B je N-methylvalyl, 1-izoleucyl, 2-ethylglycyl nebo 2-rerc-butylglycyl; D je prolyl, 4-fluoropropyl, thiazolidinyl-4-karbonyl nebo 3,4-dehydroprolyl a E je prolyl, 3-methylprolyl, 4—fluoroprolyl, thiazolidinyl-4-karbonyl, homoprolyl, 3,4-dehydroprolyl nebo hydroxyprolyl.
  12. 12. Použití první sloučeniny vybrané z paclitaxelu, taxoteru a modifikovaného taxanu nebo taxoidních analogů a druhé sloučeniny, což je sloučenina obecného vzorce I definovaná v kterémkoliv z nároků 3 až 9, pro výrobu léku pro léčbu rakoviny savců, kde rakovina je vybrána ze skupiny obsahující rakovinu plic, prsu, tlustého střeva, prostaty, močového měchýře, konečníku, děložní sliznice a hematologických zhoubných onemocnění, např. leukémií, lymfomů.
  13. 13. Použití první sloučeniny vybrané z paclitaxelu, taxoteru a modifikovaného taxanu nebo taxoidních analogů pro výrobu léku pro kombinovanou terapii ve spojení s druhou sloučeninou, kde druhou sloučeninou je sloučenina obecného vzorce I, definovaná v kterémkoliv z nároků 3 až 9, v léčbě rakoviny savců, kde rakovina je vybrána ze skupiny obsahující rakovinu plic, prsu, tlustého střeva, prostaty, močového měchýře, konečníku, děložní sliznice, hematologických zhoubných onemocnění, např. leukémií, lymfomů.
  14. 14. Použití podle nároku 13 nebo 14, kde působení kombinované terapie zahrnuje podání nejprve první sloučeniny vybrané z paclitaxelu, taxoteru a modifikovaného taxanu nebo taxoidních analogů, následované podáním sloučeniny obecného vzorce I.
  15. 15. Použití podle nároku 13 nebo 14, kde léčení nebo kombinovaná terapie zahrnuje podání nejprve sloučeniny obecného vzorce I, následované podáním první sloučeniny vybrané z paclitaxelu, taxoteru a modifikovaného taxanu nebo taxoidních analogů.
  16. 16. Použití podle kteréhokoliv z nároků 12 až 14, kde léčení nebo kombinovaná terapie zahrnuje současné podání sloučeniny obecného vzorce I a první sloučeniny vybrané z paclitaxelu, taxoteru a modifikovaného taxanu nebo taxoidních analogů.
CZ19993211A 1997-03-13 1998-03-09 Deriváty dolastatinu@�Q v kombinaci s taxany CZ293905B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/819,101 US6103698A (en) 1997-03-13 1997-03-13 Dolastatin-15 derivatives in combination with taxanes

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ321199A3 CZ321199A3 (cs) 2000-02-16
CZ293905B6 true CZ293905B6 (cs) 2004-08-18

Family

ID=25227196

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19993211A CZ293905B6 (cs) 1997-03-13 1998-03-09 Deriváty dolastatinu@�Q v kombinaci s taxany

Country Status (29)

Country Link
US (2) US6103698A (cs)
EP (1) EP0981358B1 (cs)
JP (1) JP2001514659A (cs)
KR (1) KR100555604B1 (cs)
CN (1) CN1157223C (cs)
AT (1) ATE241376T1 (cs)
AU (1) AU728027B2 (cs)
BG (1) BG64338B1 (cs)
BR (1) BR9808249A (cs)
CA (1) CA2282720C (cs)
CO (1) CO4940498A1 (cs)
CZ (1) CZ293905B6 (cs)
DE (1) DE69815100T2 (cs)
DK (1) DK0981358T3 (cs)
ES (1) ES2200317T3 (cs)
HR (1) HRP980125A2 (cs)
HU (1) HU228860B1 (cs)
ID (1) ID23900A (cs)
IL (2) IL131597A0 (cs)
NO (1) NO323894B1 (cs)
NZ (1) NZ337416A (cs)
PL (1) PL197834B1 (cs)
PT (1) PT981358E (cs)
RU (1) RU2218174C2 (cs)
SK (1) SK285133B6 (cs)
TR (1) TR199902244T2 (cs)
TW (1) TWI277426B (cs)
WO (1) WO1998040092A1 (cs)
ZA (1) ZA982093B (cs)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20010009901A1 (en) * 1996-12-11 2001-07-26 Basf Aktiengesellschaft Germany Antineoplastic peptides
AU775373B2 (en) 1999-10-01 2004-07-29 Immunogen, Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
EP1333847A1 (en) * 2000-11-08 2003-08-13 Lorus Therapeutics Inc. Combination preparation of a biological response modidier and an anticancer agent and uses thereof
US20050192443A1 (en) * 2000-11-08 2005-09-01 Lorus Therapeutics Inc. Biological response modifier for the treatment of cancer
US7772177B2 (en) 2005-05-18 2010-08-10 Aegera Therapeutics, Inc. BIR domain binding compounds
AU2007250443B2 (en) 2006-05-16 2013-06-13 Pharmascience Inc. IAP BIR domain binding compounds
TW201129384A (en) 2010-02-10 2011-09-01 Immunogen Inc CD20 antibodies and uses thereof
WO2011098904A1 (en) 2010-02-12 2011-08-18 Aegera Therapeutics, Inc. Iap bir domain binding compounds
EP4144747A4 (en) * 2020-06-03 2024-05-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha EFFICIENT PEPTIDE CONDENSATION PROCESS FOR DIFFICULT SEQUENCES
MX2024002571A (es) 2021-09-03 2024-03-20 Toray Industries Composicion farmaceutica para tratamiento y/o prevencion de cancer.

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816444A (en) * 1987-07-10 1989-03-28 Arizona Board Of Regents, Arizona State University Cell growth inhibitory substance
US5676978A (en) 1989-02-14 1997-10-14 Amira, Inc. Methods of inhibiting undesirable cell growth using a combination of a cyclocreatine compound and a hyperplastic inhibitory agent
US4879278A (en) * 1989-05-16 1989-11-07 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptide dolastatin 15
US5278324A (en) * 1990-08-28 1994-01-11 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Water soluble derivatives of taxol
MX9102128A (es) 1990-11-23 1992-07-08 Rhone Poulenc Rorer Sa Derivados de taxano,procedimiento para su preparacion y composicion farmaceutica que los contiene
DE69232552T2 (de) 1991-08-09 2002-10-31 Teikoku Hormone Mfg. Co., Ltd. Tetrapeptide Derivat
US5227400A (en) * 1991-09-23 1993-07-13 Florida State University Furyl and thienyl substituted taxanes and pharmaceutical compositions containing them
US5250683A (en) * 1991-09-23 1993-10-05 Florida State University Certain substituted taxanes and pharmaceutical compositions containing them
US5272171A (en) * 1992-02-13 1993-12-21 Bristol-Myers Squibb Company Phosphonooxy and carbonate derivatives of taxol
FR2688518B1 (fr) * 1992-03-13 1994-05-06 Rhone Poulenc Rorer Sa Procede de preparation de derives du taxane.
US5831002A (en) * 1992-05-20 1998-11-03 Basf Aktiengesellschaft Antitumor peptides
US5248796A (en) * 1992-06-18 1993-09-28 Bristol-Myers Squibb Company Taxol derivatives
US5254580A (en) * 1993-01-19 1993-10-19 Bristol-Myers Squibb Company 7,8-cyclopropataxanes
FR2697752B1 (fr) * 1992-11-10 1995-04-14 Rhone Poulenc Rorer Sa Compositions antitumorales contenant des dérivés du taxane.
DE69329425T2 (de) * 1992-12-16 2001-01-18 Basf Ag Dolastatin analog
US5484612A (en) * 1993-09-22 1996-01-16 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method of treating a mammal having a solid tumor susceptible to treatment with cisplatin
CA2129282A1 (en) 1993-09-29 1995-03-30 George Weber Method for the treatment of neoplastic disease utilizing taxol and tiazofurin
US5447936A (en) * 1993-12-22 1995-09-05 Bionumerik Pharmaceuticals, Inc. Lactone stable formulation of 10-hydroxy 7-ethyl camptothecin and methods for uses thereof
US5565478A (en) * 1994-03-14 1996-10-15 The United States Of America As Represented By The Department Of Health & Human Services Combination therapy using signal transduction inhibitors with paclitaxel and other taxane analogs
US5494930A (en) * 1994-06-02 1996-02-27 Shimizu; Yuzuru Caribenolide I
US5525613A (en) * 1994-06-16 1996-06-11 Entropin, Inc. Covalently coupled benzoylecgonine ecgonine and ecgonidine
US5504191A (en) * 1994-08-01 1996-04-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide methyl esters
US5530097A (en) * 1994-08-01 1996-06-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory peptide amides
US5543423A (en) * 1994-11-16 1996-08-06 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Amino acid derivatives with improved multi-drug resistance activity
ATE306927T1 (de) 1994-12-15 2005-11-15 Baker Norton Pharma Verfahren und mittel zur verminderung der tumorentwicklung mittels einer kombination aus einer taxanverbindung und einer tellur und/oder selenverbindung

Also Published As

Publication number Publication date
CA2282720C (en) 2009-12-29
HUP0001381A2 (hu) 2000-10-28
RU2218174C2 (ru) 2003-12-10
NO323894B1 (no) 2007-07-16
AU728027B2 (en) 2001-01-04
KR20000076211A (ko) 2000-12-26
TWI277426B (en) 2007-04-01
IL131597A (en) 2006-06-11
SK125199A3 (en) 2000-08-14
KR100555604B1 (ko) 2006-03-03
JP2001514659A (ja) 2001-09-11
ATE241376T1 (de) 2003-06-15
DE69815100D1 (de) 2003-07-03
BG103728A (en) 2000-04-28
BR9808249A (pt) 2000-05-16
US6103698A (en) 2000-08-15
NO994408L (no) 1999-11-10
ES2200317T3 (es) 2004-03-01
SK285133B6 (sk) 2006-07-07
PT981358E (pt) 2003-09-30
EP0981358B1 (en) 2003-05-28
AU6694598A (en) 1998-09-29
HRP980125A2 (en) 1999-02-28
CO4940498A1 (es) 2000-07-24
ID23900A (id) 2000-05-25
ZA982093B (en) 1999-09-12
DE69815100T2 (de) 2004-02-05
DK0981358T3 (da) 2003-09-22
NO994408D0 (no) 1999-09-10
HK1026851A1 (en) 2000-12-29
PL335579A1 (en) 2000-05-08
CZ321199A3 (cs) 2000-02-16
IL131597A0 (en) 2001-01-28
HU228860B1 (en) 2013-06-28
TR199902244T2 (xx) 1999-12-21
US6632795B1 (en) 2003-10-14
HUP0001381A3 (en) 2001-12-28
NZ337416A (en) 2001-05-25
WO1998040092A1 (en) 1998-09-17
PL197834B1 (pl) 2008-04-30
CA2282720A1 (en) 1998-09-17
BG64338B1 (bg) 2004-10-29
CN1252728A (zh) 2000-05-10
CN1157223C (zh) 2004-07-14
EP0981358A1 (en) 2000-03-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ293682B6 (cs) Peptid, způsob jeho přípravy a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje
IL105651A (en) Dolastatin derivatives their preparation and pharmaceutical compositions containing them
CZ293905B6 (cs) Deriváty dolastatinu@�Q v kombinaci s taxany
EP1021200A1 (en) Methods and compositions for treating rheumatoid arthritis
EP0866800B1 (en) Antineoplastic peptides
US8440626B2 (en) Antineoplastic peptides
AU775090B2 (en) Antineoplastic peptides
MXPA99008066A (en) Dolastatin-15 derivatives in combination with taxanes
HK1080871A (en) Antineoplastic peptides
CZ20001211A3 (cs) Prostředky pro léčení revmatoidní artritidy

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20150309