CZ297983B6 - Entericky potazená farmaceutická kompozice pro perorální podávání pro lécení roztrousené sklerózy - Google Patents
Entericky potazená farmaceutická kompozice pro perorální podávání pro lécení roztrousené sklerózy Download PDFInfo
- Publication number
- CZ297983B6 CZ297983B6 CZ0243799A CZ243799A CZ297983B6 CZ 297983 B6 CZ297983 B6 CZ 297983B6 CZ 0243799 A CZ0243799 A CZ 0243799A CZ 243799 A CZ243799 A CZ 243799A CZ 297983 B6 CZ297983 B6 CZ 297983B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- copolymer
- cells
- eae
- pharmaceutical composition
- fed
- Prior art date
Links
- 239000002775 capsule Substances 0.000 title claims abstract description 18
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 title claims abstract description 13
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 230000037406 food intake Effects 0.000 title abstract description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 9
- 108010072051 Glatiramer Acetate Proteins 0.000 claims abstract description 8
- FHEAIOHRHQGZPC-KIWGSFCNSA-N acetic acid;(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid;(2s)-2-aminopentanedioic acid;(2s)-2-aminopropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound CC(O)=O.C[C@H](N)C(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 FHEAIOHRHQGZPC-KIWGSFCNSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 229960003776 glatiramer acetate Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- 239000002702 enteric coating Substances 0.000 claims description 6
- 238000009505 enteric coating Methods 0.000 claims description 6
- 229920003136 Eudragit® L polymer Polymers 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 229920003137 Eudragit® S polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 43
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 36
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 32
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 29
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 21
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 17
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 16
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 16
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 12
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 11
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 11
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 11
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 9
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 9
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 9
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 8
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 8
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 8
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 7
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 7
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 7
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 7
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 6
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 5
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 5
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 5
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 5
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 4
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 4
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- 206010060860 Neurological symptom Diseases 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000011694 lewis rat Methods 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000020192 tolerance induction in gut-associated lymphoid tissue Effects 0.000 description 3
- 125000004044 trifluoroacetyl group Chemical group FC(C(=O)*)(F)F 0.000 description 3
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 2
- 0 CCC(*)C(C(C)(C)O)N Chemical compound CCC(*)C(C(C)(C)O)N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 229920003138 Eudragit® L 30 D-55 Polymers 0.000 description 2
- 229920003134 Eudragit® polymer Polymers 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002233 Myelin-Oligodendrocyte Glycoprotein Human genes 0.000 description 2
- 108010000123 Myelin-Oligodendrocyte Glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 159000000021 acetate salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 229940052491 bordetella pertussis Drugs 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 2
- GDCRSXZBSIRSFR-UHFFFAOYSA-N ethyl prop-2-enoate;2-methylprop-2-enoic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O.CCOC(=O)C=C GDCRSXZBSIRSFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 2
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 238000002627 tracheal intubation Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030090 Acute Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010001541 Akinesia Diseases 0.000 description 1
- 206010002942 Apathy Diseases 0.000 description 1
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 description 1
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 101001018362 Bos taurus Myelin basic protein Proteins 0.000 description 1
- 101710119334 Ceramide transfer protein Proteins 0.000 description 1
- 206010010071 Coma Diseases 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 206010012373 Depressed level of consciousness Diseases 0.000 description 1
- 206010013642 Drooling Diseases 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108010005714 Interferon beta-1b Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 206010022998 Irritability Diseases 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 241001049988 Mycobacterium tuberculosis H37Ra Species 0.000 description 1
- 102000047918 Myelin Basic Human genes 0.000 description 1
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241001282135 Poromitra oscitans Species 0.000 description 1
- 102000016202 Proteolipids Human genes 0.000 description 1
- 108010010974 Proteolipids Proteins 0.000 description 1
- 206010039740 Screaming Diseases 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 208000008630 Sialorrhea Diseases 0.000 description 1
- 101001018322 Sus scrofa Myelin basic protein Proteins 0.000 description 1
- 101150057615 Syn gene Proteins 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 1
- 102100034166 Vasculin Human genes 0.000 description 1
- 208000013521 Visual disease Diseases 0.000 description 1
- 206010048232 Yawning Diseases 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000003916 acid precipitation Methods 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000000599 auto-anti-genic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003855 balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000011970 concomitant therapy Methods 0.000 description 1
- 229940038717 copaxone Drugs 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003568 cytokine secretion assay Methods 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 208000010726 hind limb paralysis Diseases 0.000 description 1
- 229910000042 hydrogen bromide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 229960003161 interferon beta-1b Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 208000027905 limb weakness Diseases 0.000 description 1
- 231100000861 limb weakness Toxicity 0.000 description 1
- 238000005567 liquid scintillation counting Methods 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 230000001459 mortal effect Effects 0.000 description 1
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 238000010984 neurological examination Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 238000001558 permutation test Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 238000009522 phase III clinical trial Methods 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 210000001747 pupil Anatomy 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000021670 response to stimulus Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N subtilin Chemical compound CC1SCC(NC2=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O)CSC(C)C2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C2NC(=O)CNC(=O)C3CCCN3C(=O)C(NC(=O)C3NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CC=4C5=CC=CC=C5NC=4)CSC3)C(C)SC2)C(C)C)C(C)SC1)CC1=CC=CC=C1 WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000002512 suppressor factor Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000029257 vision disease Diseases 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/02—Peptides of undefined number of amino acids; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Treatments Of Macromolecular Shaped Articles (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
Abstract
Pouzití glatiramer acetátu v pevné forme a v mnozství 0,1 az 1000 mg pro výrobu entericky potazené kompozice pro perorální podávání pro lécení roztrousené sklerózy. Vzniklá farmaceutická kompozice.
Description
Entericky potažená farmaceutická kompozice pro perorální podávání pro léčení roztroušené sklerózy
Oblast techniky
Vynález se týká entericky potažené farmaceutické kompozice pro perorální podávání pro léčení roztroušené sklerózy.
Dosavadní stav techniky
Kopolymer-1, který je také znám jako glatirameracetát a je prodáván pod ochrannou známkou Copaxone(R), zahrnuje acetátové soli polypeptidů obsahujících L-glutamovou kyselinu, L-alanin, L-tyrosin a L-lysin. Průměrný molámí zlomek je 0,141 pro L-glutamovou kyselinu, 0,427 pro L-alanin, 0,095 pro L-tyrosin a 0,338 pro L-lysin a průměrná molekulová hmotnost kopolymeru-1 je 4700 až 11 000 Dalton. Tato látka je ne-autoantigen, o němž bylo prokázáno, že potlačuje experimentální alergickou encefalomyelitis (EAE) indukovanou různými encefalitogeny, jako je například homogenát z myší míchy (MSCH, mouše spinal cord homogenate), který obsahuje všechny myelinové antigeny, jako myelinový základní protein (myelin basic protein, MBP) (Sela M. et al., Bull. Inst. Pasteur (1990), 88 303 až 314), proteolipidový protein (PLP) (Teitelbaum D. et al., J. Neuroimmunol. (1996), 64, 209 až 217) a myelinový oligodendrocytový glykoprotein (MOG) (Ben-Nun A. et al., J. Neurol. (1996) 243 (doplněk 1) S14—322) u různých druhů. EAE je přijímána jako model pro roztroušenou sklerózu.
Bylo prokázáno, že kopolymer-1 je účinný při injekčním, subkutánním, intraperitoneálním, intravenózním nebo intramuskulámím, podávání (D. Teitelbaum et al., Eur. J. Immunol. (1971) 1: 242 až 248; D. Teitelbaum et al., Eur. J. Immunol. (1973) 3: 273 až 279).
Ve fázi III klinických zkoušek bylo zjištěno, že denní subkutánní injekční podávání kopolymeru1 zpomaluje progresivní postup invalidity a redukuje relapsní poměr u exacerbující-remitující roztroušené sklerózy (K.P. Johnson, Neurology (1995), 1: 65 až 70). Léčení pomocí kopolymeru-1 je v současné době omezeno na denní subkutánní podávání.
V současné době všechny konkrétně schválené léčebné postupy u roztroušené sklerózy zahrnují autoinjekce účinné látky. V místech vpichu jsou často pozorovány problémy, jako je podráždění, přecitlivělost, zánět, bolest a dokonce nekróza (v případě léčení alespoň jedním interferonem β 1-B). Dalším faktorem je nízká komplinace u pacientů. Je tedy žádoucí vyvinout nový způsob podávání.
V patentu EP 359 783 je popsán způsob léčení autoimunitních chorob orálním podáváním autoantigenů. V tomto patentuje popsáno orální podávání MBP za účelem léčení roztroušené sklerózy. Orální podávání autoantigenu bylo označeno jako „orální tolerance“.
PCT mezinárodní patentové přihlášky č. WO 91/12 816, WO 91/08 7690 a WO 92/06 704 popisují léčení dalších autoimunitních chorob za použití způsobu „orální tolerance“ s různými autoantigeny. V každém z těchto dokumentů však není popsáno léčení roztroušené sklerózy pomocí orálního podávání ne-autoantigenního kopolymeru-1. Všechny tyto dokumenty jsou zde citovány náhradou za přenesení celého jejího obsahu do tohoto textu.
Úkolem vynálezu je tedy poskytnout způsob léčení roztroušené sklerózy pomocí orálního podávání kopolymeru-1 požitím.
- 1 CZ 297983 B6
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je použití glatiramer acetátu v pevná formě a v množství 0,1 až 1000 mg pro výhodu entericky potažené kompozice pro perorální podávání pro léčení roztroušené sklerózy.
Dále je předmětem vynálezu farmaceutická kompozice, která obsahuje glatiramer acetát v pevné formě v množství 0,1 až 1000 mg v entericky potažené kompozici.
Jak již bylo uvedeno výše, glatiramer acetát či kopolymer-1 obsahuje acetátové soli polypeptidů obsahujících L-glutamovou kyselinu, L-alanin, L-tyrosin a L-lysin. Průměrný molámí zlomek je 0,141 pro L-glutamovou kyselinu, 0,427 pro L-alanin, 0,095 pro L-tyrosin a 0,338 pro Llysin a průměrná molekulová hmotnost kopolymeru-1 je 4700 až 11 000 Dalton.
Tento vynálezu je založen na zjištění, že orální podání kopolymeru-1 je účinné při potlačování EAE, a má tedy terapeutickou hodnotu při léčbě roztroušené sklerózy.
Má se za to, že kopolymer-1 přichází do kontaktu s takovými lymfoidními tkáněmi v mukosální výstelce, které jsou považovány za primární zdroj senzitizace imunitního systému. Mukosální výstelka se může nacházet (nikoliv však výhradně) v dutinách, průdušnici, bronchiálních pasáží (v tomto případě jsou známy jako BALT nebo lymfoidní tkáně spojené s průduškami) a gastrointestinální výstelce (známé jako GALT nebo lymfoidní tkáně spojené se střevem). V konkrétním případě vynálezu podávání kopolymeru-1 tedy zahrnuje postupy, při nichž se kopolymer-1 do těla zavádí požitím nebo pomocí žaludeční sondy.
Podle jednoho příkladného provedení vynálezu se kopolymer podává orálně v množství od 0,1 do 1000 mg za den a tuto denní dávku lze podávat ve formě dávky jediné nebo několika dílčích dávek. Odborníku v tomto oboru je zřejmé, že terapeuticky účinná dávka je obecně funkcí pacientova věku, pohlaví a fyzikálního stavu a dále též funkcí jiné souběžné léčby. Stanoveno optimální terapeuticky účinné dávky léčby. Stanovení optimální terapeuticky účinné dávky spadá do rozsahu působnosti odborníka v tomto oboru.
Jelikož je kopolymer-1 podáván orálně, může být smísen s jinými potravinovými formami a konzumován v podobě pevných nebo polotuhých suspenzí nebo emulzí. Může být smísen s farmaceuticky vhodnými nosiči, jako je voda, suspenzními činidly, emulgačními činidly, modifikátory vůně a chuti apod. Podle vynálezu je kompozice opatřena enterickým povlakem. Použití enterických povlaků je v tomto oboru dobře známé. Tak například K. Lehman, Acrylic Coatings in Controlled Resease Tablet Manufacturer, Manufacturing Chemist and Aerosol News, str. 39 (červen 1973) a K. Lehman, Programmed Drug Release From Oral Program Forms, Pharma, Int., sv. ISS 3, 1971, str. 34 až 41 popisují enterické povlaky, jako Eudragit Sa Eudragit L. V Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2. vydání jsou také vysvětleny aplikace Eudragitu S a Eudragitu L. Jako jeden z produktů řady Eudragit je možno uvést Eudragit L30D55.
Kopolymer-1 v některé z výše uvedených forem je v širším kontextu rovněž možno podávat nazálně, inhalací výsledku trachey a bronchiálních pasáží je navíc možno použít inhalace ústy.
Kopolymer-1 lze připravovat postupy známými odborníkům v tomto oboru, například způsobem opsaným v patentu US 3 849 550. Při tomto způsobu se N-karboxyanhydridy tyrosinu, alaninu, gama-benzylglutamátu a epsilon-N-trifluoracetyllysinu polymerují při teplotě místnosti v bezvodém dioxanu za použití diethylaminu jako iniciátoru. Odblokování gama-karboxyskupiny kyseliny glutamové se provádí za použití bromovodíku v ledové kyselině octové, načež se ze zbytků lysinu 1M piperidinem odstraní trifluoracetylové skupiny.
-2CZ 297983 B6
Jak je popsáno v přihlášce PCT publikované pod číslem WO 95/31 990, je kopolymer-1 s požadovanou průměrnou molekulovou hmotností 7±2 kDa možno přednostně připravovat způsobem, při němž se chráněný kopolymer-1 nechá reagovat s kyselinou bromovodíkovou za vzniku trifluoracetylkopolymeru-1, na trifluoracetylkopolymer-1 se působí vodným roztokem piperidinu a výsledný kopolymer-1 se přečistí tak, aby se získal kopolymer-1 s požadovanou molekulovou hmotností.
Přehled obrázků na výkresech
Na obr. 1 a 2 je znázorněn účinek kopolymeru-1 na imunitní odpověď na myelinový základní protein morčete (GPBP) u potkanů (obr. 1) a myší (obr. 2) stanovený pomocí proliferace slezinných buněk.
Na obr. 3 a 4 je znázorněn účinek kopolymeru-1 na uvolňování cytokinu.
Na obr. 5 je znázorněno potlačení EAE u myší orálním podáváním kopolymeru-1. Myši (SJL/JxBALB/C) F| se krmí PBS (plné čtverečky), 0,lmg dávkou kopolymeru-1 (prázdné čtverečky), 0,25mg dávkou kopolymeru-1 (plné trojúhelníčky) nebo 0,5mg dávkou kopolymeru-1 (prázdné trojúhelníčky). Každá dávka se podává sedmkrát, ve dny -7, -5, -3, 0, 2, 4 a 6. EAE se indukuje v den 0 injekcí MSCH.
Na obr. 6 je znázorněna proliferace a sekrece cytokinu linií T-buněk odvozenou z buněk sleziny potkanů krmených kopolymerem-1. Buňky se kultivují s médiem, kopolymerem-1 (50 pg/ml ) nebo konkavalinem A (Con A) (5 pg/ml). Jako odpověď na tyto antigeny se měří proliferace a sekrece cytokinu.
Na obr. 7 je znázorněna inhibice EAE linií T-buněk odvozenou z buněk sleziny potkanů krmených kopolymerem-1. Buňky (20 x 106/potkan) se podají intraperitoneální injekcí 3 dny po stimulaci kopolymerem-1 následované indukcí EAE.
Na obr. 8 je znázorněna inhibice EAE linií T-buněk odvozenou z buněk sleziny myší krmených kopolymerem-1. Buňky (15 x 106/myš) se podají intravenózní injekcí 3 dny po stimulaci kopolymer-1 následované indukcí EAE.
Na obr. 9 je znázorněn graf, v němž jsou vyneseny výsledky klinického hodnocení proti době podávání kopolymeru-1 po indukci EAE ve dnech u tří makaků Rhesus.
Na obr. 10 je znázorněn graf, kde jsou vyneseny výsledky klinického hodnocení proti době podávání kopolymeru—1 po indukci EAE ve dnech u šesti makaků Rhesus při komparační zkoušce dávkovačích forem s enterickým povlakem a bez enterického povlaku. Počátek osy y byl posunut, aby bylo možno znázornit výsledky.
Vynález je blíže objasněn v následujících příkladech. Tyto příklady mají výhradně ilustrativní charakter a rozsah vynálezu v žádném ohledu neomezují. Všechny díly, procentní údaje apod. jsou hmotnostní, pokud není uvedené jinak.
-3CZ 297983 B6
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Antigeny
Kopolymer-1 připravený způsobem popsaným v mezinárodní patentové přihlášce PCT/WO 95/31 990 byl získán od firmy Teva Pharmaceutical Industries Ltd., Izrael. GPBP se připraví z míchy morčete extrakcí kyselinou a vysrážením síranem amonným, způsobem popsaným v Hirshfeld H. et al., Febs Lett. (1970) 7, 317 až 320.
Zvířata
Samice myši (PL/JxSJL/J) F1 o stáří 8 až 10 týdnů byly získány od firmy Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME, USA). Samice potkana Lewis o stáří 8 až 12 týdnů byly získány od firmy Harlan-Olac (Bicester, Velká Británie).
Indukce a stanovení EAE
Myším se injekčně podá 200 μg GPBP emulgovaného ve stejném objemu úplného Freundova adjuvans (CFA) obsahujícího 4 mg/ml Mycobacterium tuberculosis (H37RA) (Difco Lab, Detroit, Mích., USA). Potkanům se do všech čtyř tlapek injekčně podá emulze o celkovém objemu 0,1 ml. Bezprostředně poté a po 24 hodinách se potkanům intravenózní injekcí podá toxin Bordetellapertussis (250 ng/myš) (Sigma).
Potkani se imunizují 25 μg GPBP emulgovaného v poměru 1 : 1 v CFA obsahujícím 4 mg/ml H37Ra. Potkanům se do dvou zadních tlapek injekčně podá emulze v celkovém objemu 0,1 ml.
Zvířata se denně po dobu 10 dní po indukci zkoušejí na přítomnost příznaků choroby. EAE se hodnotí následujícím způsobem: 0 - bez choroby, 1 - ochabnutí ocasu, 2 - paralýza zadních končetin, 3 - paralýza všech čtyř končetin, 4 - předsmrtný stav, 5 - smrt.
Indukce orální tolerance
Myši se ve dnech -7, -5, -3, 0, 2, 4 a 6 krmí 250 pg GPBP nebo kopolymerem-1 rozpuštěným ve fosfátem pufrovaném solném roztoku (PBS) pomocí intubace žaludku za použití sondy z nerezové oceli o velikosti 18 (Thomas). EAE se indukuje v den 0.
Potkani se krmí 1 mg GPBP nebo kopolymerem-1 rozpuštěným v PBS pomocí intubace žaludku za použití sterilní sondy (Uno Plast, Dánsko). Potkani se před indukcí choroby krmí 5 x (celková dávka 5 mg) v intervalech 2 až 3 dnů. EAE se indukuje 2 dny po posledním krmení. Kontrolní myši a potkani se simulované krmí PBS.
Zkouška proliferace
Proliferační odpověď u buněk sleziny se zkouší 10 až 11 dnů po výše popsané indukce EAE. Buňky od 3 zvířat v každé skupině se spojí a ve trojím provedení kultivují (5 x 105 myších buněk a 2 x 105 potkaních buněk) v mikrotitrových plotnách s různými koncentracemi antigenu (GPBP) v konečném objemu 0,2 ml. Mikrotitrové plotny obsahují živné médium RPMI 1640 (dostupné od firmy Sigma Biochemicals, St. Louis, Missouri, USA) doplněné 1 % autologního séra. Po 72hodinové inkubaci se buňky 18 hodin pulzují 1 pCi [3H]-thymidinu, poté sklidí na filtračních papírech a spočítá se radioaktivita.
-4CZ 297983 B6
Zkouška sekrece cytokinu až 11 dnů po indukci EAE se odeberou sleziny a buňky od 3 myší z každé skupiny se vždy spojí. Buňky (5 x 106/ml) se ve dvojím provedení kultivují ve 24jamkových plotnách v RPMI 1640 doplněném 10 % FCS (fetálního telecího séra) za přítomnosti nebo za nepřítomnosti antigenu (GPBP 100 Fg/ml). Supematanty se sklidí po 24 až 40hodinové kultivaci. Za použití párovaných monoklonálních protilátek specifických pro odpovídající cytokiny (Pharmigen, La Jolla, CA, USA) se podle pokynů výrobce provede kvantitativní stanovení ELISA pro IL-2, IFNgamma, IU-4, IL-6 a IL-10.
Výsledky
Účinnost orálně podávaného kopolymeru-1 při prevenci klinických projevů EAE u Lewisových potkanů se porovná s účinností GPBP, přičemž zkouška se provádí za podmínek nedávno popsaných pro indukci potlačení pomocí orálního podávání GPBP (P.J. Higgins a H.L. Weiner, J. Immunol (1988), 140, 440 až 445). Výsledky, které jsou souhrnně uvedeny v tabulce 1, demonstrují, že kopolymer-1 je účinnější než GPBP a ve srovnání s výsledky u potkanů krmených PBS, kteří slouží jako kontrola, významně snižuje jak incidenci (54 % inhibice), tak i závažnost (57% inhibice) EAE.
Tabulka 1
Potlačení EAE u potkanů orálním podáváním kopolymeru-1
Podaný antigen Incidence Střední maximál- Střední doba ní hodnocení vypuknutí ± SD příznaků (dny)
| PBS (kontrola) | 27/28 (96 %) | 1,8 ± | 0,5 | 11,9 |
| GPBP | 10/17 (59 %) | 0,9 ± | 0,5 | 11,4 |
| (p = 0,0026) | ||||
| Kopolymer-1 | 13/28 (46 %) | 0,78± | 0,45 | 12,6 |
(p = 0,00005)
SD = smérodaná odchylka
Každá hodnota představuje kumulativní výsledek ze 3 až 5 nezávislých experimentů. Hodnota p představuje statistickou významnost rozdílu od kontrolní skupiny (Fischerův exaktní test). Střední maximální hodnocení bylo vypočteno pro celou skupinu.
Účinek orálně podávaného antigenu na imunitní odpověď na GPBP
Účinek orálního podávání kopolymeru-1 GPBP na imunitní odpověď na chorobu indukovanou antigenem GPBP se zkouší na myších a potkanech. Výsledky, které jsou souhrnně znázorněny na obr. 1, ukazují, že každé orální podání sloučenin (kopolymeru-1 nebo GPBP) snížilo buněčnou proliferaci v suspenzi slezinných buněk potkana stimulovaných GPBP (obr. 2 znázorňuje podobné výsledky u myší). Je patrné, že orální podávání kopolymeru-1 u obou druhů zvířat vede k téměř úplné inhibici proliferativní odpovědi na GPBP. U obou těchto druhů je při inhibici odpovědi na GPBP kopolymer-1 účinnější než GPBP.
-5CZ 297983 B6
Hladiny cytokinu se měří v supematantech kultur buněk sleziny myšího původu (obr. 3 a 4). Kontrolní myši krmené PBS v odpovědi na GPBP vylučovaly IL-2, IFN-gama a IL-6 (není znázorněno). U myší krmených kopolymerem-1 nebo GPBP byla množství Thl prozánětlivých cytokinů IL-2 a IFN-gamma produkovaná při odpovědi na stimulaci GPBP nižší než u kontrolních skupin, přičemž kopolymer-1 je účinnější supresantem. IL-4 a IL—10 nebyly detekovány u žádné skupiny.
Výsledky ukazují, že kopolymer-1, je-li podáván orálně, je při potlačování EAE účinný. Klinický ochranný účinek orálního podávání kopolymeru-1 je spojen s regulací směrem dolů imunitní odpovědi T buněk na GPBP, jako je proliferace a uvolňování prozánětlivých cytokinů (IL-2 a IFN-gama).
Příklad 2
Na myších a potkanech byly provedeny další zkoušky potlačování EAE pomocí orálního podávání kopolymeru-1. Při těchto studiích se stanoví optimální dávka pro léčení u každého druhu. Za účelem pochopení mechanismu, který je základem orálního potlačení EAE pomocí kopolymeru-1 se ze slezin zvířat krmených kopolymerem-1 izoluje linie T-buněk specifická vůči kopolymeru-1. Zkouší se in vitro reaktivita linií a jejich in vivo účinek na indukci choroby, která je předmětem zkoušky.
Materiály a postupy
Izolace kopolymer-l-specifických linií T-buněk
Potkani Lewis se krmí 5 x 1 mg kopolymeru-1 a myši (SJL/JxBALB/c)Fi 7 x 250 pg kopolymeru-1, v intervalech 2 až 3 dnů. Čtyři až dvanáct dní po posledním krmení se zvířata usmrtí a vyjmou se jim sleziny.
Buňky sleziny od tří zvířat se spojí a inkubují (50 x 106/miska) s kopolymerem-1 (500 pg) v médiu obsahujícím 1 % autologního séra po dobu 4 dnů. Každých 14 až 21 dnů se buňky (4x6 x 106/miska) znovu stimulují třídenním vystavením kopolymeru-1 (500 pg) na syngenních ozářených (3000 rad) thymocytech potkana (100 x 106/miska) nebo myších solenocytech (50 x 105/miska). Po stimulaci následuje množení v 10% supematantu normálních myších slezinných buněk aktivovaných konkavalinem Noc A, jako růstovým faktorem T-buněk (TCGF).
Zkouška proliferace
Linie T-buněk (1 x 104 buněk) se kultivují s ozářenými (3000 R) thymocyty (potkan 1 x 106) nebo splenocyty (myš - 5 x 105) a s uvedenými antigeny (10 pg kopolymeru-1, 1 pg Noc A) a mikrotitrových deskách v konečném objemu 0,2 ml. Na konci 48hodinové inkubace se kultury pulzují s 3H-thymidinem a po 6 až 12 hodinách sklidí.
Cytokinová zkouška
T-buňky potkaní linie (0,5 x 106/ml) se inkubují s ozářenými thymocyty (10 x 106) za přítomnosti nebo za nepřítomnosti uvedeného antigenu (50 pg kopolymeru-1, 5 pg Noc A). Buňky se kultivují 24 hodin v RPMI 1640 doplněném 10 % fetálního telecího séra - za účelem stanovení IL-2, TNFa, IL-4 a IL-10 a v médiu bez séra - DCM-1 (Biological Industries, Kibbutz Beit Haemek, Izrael) po dobu 72 hodin - za účelem stanovení TGFp.
Hladiny cytokinu v supematantech se měří pomocí kvantitativního stanovení ELISA za použití párů monoklonálních protilátek specifických pro odpovídající cytokiny.
-6CZ 297983 B6
Indukce EAE
Myším (SJL/xBALB/c)Fi se injekčně do všech čtyřech tlapek podají 2 mg homogenátu myší míchy (MSCH) emulgované vDetroit, Mích., USA). Bezprostředně poté a po 48 hodinách se potkanům intravenózní injekcí podá Toxin Bordetellapertussis (250 ng/myš) (Sigma).
Výsledky
1. Zkouška závislosti odpovědi na dávce na potkanech a myších
Potkani se krmí 5 x 0,5, 1 nebo 2 mg kopolymeru-1 podle výše uvedeného protokolu (viz materiály a postupy) a poté provokují za účelem indukce EAE. Výsledky, které jsou souhrnně uvedeny v tabulce 2, ukazují, že nejúčinnější dávkou je 1 mg kopolymeru-1. Dávky 0,5 mg nebo 2 mg kopolymeru-1 jsou při potlačování EAE účinné méně.
Myši (SJL/JxBABl/c) Fi se krmí 7 x 0,1, 0,25 nebo 0,5 mg kopolymeru-1 ve dnech -7, -5, -3, 0,
2, 4 a 6 pomocí žaludeční sondy. EAE se indukuje v den 0 injekčním podáním MSCH. Výsledky, které jsou souhrnně znázorněny na obr. 5, ukazují, že orální podání kopolymeru-1 může potlačit tuto chorobu u myší. Nejůčinnější dávkou kopolymeru-1 je 0,1 mg. Dávka kopolymeru-1 0,25 mg je účinná méně a dávka 0,5 mg je zcela neúčinná. Výsledky získané na potkanech i myších ukazují, že křivka závislosti odpovědi na dávce u kopolymer-1 podávaného orálně má optimum a překročení účinné orální dávky vede k neúčinnému potlačení EAE.
2. Zkoušky s Ts-liniemi specifickými vůči kopolymeru-1 získanými do zvířat krmených kopolymerem-1
Linie supresorových T-buněk specifická vzhledem ke kopolymeru-1 se izoluje ze slezin potkanů a myší, u nichž byla díky krmení kopolymerem-1 potlačena odpověď na EAE. Odpověď, vyjádřená pomocí proliferace a sekrece cytokinu, takové buněčné linie izolované z potkanů je demonstrována na obr. 6. Buňky této linie v odpovědi na kopolymer-1 proliferují a uvolňují IL2, určité množství IL-10 a TGFp, ale neuvolňují TNFa nebo IL—4. Tento cytokinový profil je kompatibilní s buňkami typu Th3, o nichž se ukázalo, že jsou indukovány orálním podáním MBP (Chem et al., Science 265, 1237, 1994).
Zkouší se schopnost linií specifických vzhledem ke kopolymeru-1 zabraňovat EAE in vivo. Buněčné linie se podají injekčně 3 dny po in vivo stimulaci kopolymerem-1 (20 x 106 buněk/potkan, i.p. a 15 x 106 buněk/myš, i.v.). Ihned po přenosu buněk se zvířata provokují na indukci EAE. Výsledky, které jsou znázorněny na obr. 7 a 8, ukazují, že u recipientních zvířat byla choroba podstatně inhibována. Jak potkanní, tak myší linie T—buněk specifických vzhledem ke kopolymeru-1 přenášejí potlačení odpovědi na EAE indukovanou orálním podáním kopolymeru1. Tyto buňky účinné snižují patologickou imunitní odpověď in vivo.
Tabulka 2
Zkouška závislosti odpovědi na dávce u potkanů při orálním podávání kopolymeru-1
| Podaný antigen | Incidence Střední maxi- Střední doba mální hodnoce- vypuknutí | Potlačení (%) | ||
| ní + sd | příznaků | |||
| PBS | ||||
| (kontrola) | 10/11 | 1,32+0,64 | 13,1 | |
| Kopolymer-1 | ||||
| (0,5 mg) | 9/11 | 0,95±0,57 | 13,5 | 28 |
| Kopolymer-1 | ||||
| (1 mg) | 7/11 | 0,64±0,50 | 15,1 | 51 |
| Kopolymer-1 | ||||
| (2 mg) | 8/11 | 0,91±0,70 | 13,1 | 31 |
vypočteno jako střední hodnota
Každá z hodnot incidence představuje kumulativní výsledky ze 2 individuálních zkoušek. Střední maximum klinického hodnocení se vypočítá za celou skupinu.
Příklad 3
Zkouší se účinek orálně podávaného kopolymeru-1 na indukci EAE u makaků Rhesus.
Materiály
Kopolymer-1 pochází od firmy Teva Pharmaceutical Industries Ltd. a je ve formě tvrdých želatinových tobolek s enterickým povlakem, které obsahují dvě úrovně dávek: 1 mg kopolymeru-1 a 20 mg kopolymeru-1. Každá z nich byla připravena za použití mannitolu a opatřena povlakem z Eudragitu L30D55. Placebem, či kontrolními tobolkami, jsou tobolky obsahující 5 mg cukru.
Hovězí MPB pochází od firmy Life Technologies, Grands Island, New York, US. Tento materiál představuje vysoce purifikovaný přípravek, který při SDS-PAGe a Silverově barvení vykazuje jediný pás při 18,5 kD.
Režim krmení
Tři makakové rhesus se ošetří následujícím způsobem: jedna opice, která slouží jako kontrola, se krmí placebem (tobolky obsahující pouze 5 mg glukózy). Druhá opice se krmí tobolkami obsahujícími kopolymer-1 v dávce 1 mg/krmení a třetí opice se krmí tobolkami obsahujícími kopolymer-1 v dávce 20 mg/krmení. Zvířata se krmí každý další den, celkem desetkrát, z toho pětkrát před indukcí choroby (imunizace v den 0) a pětkrát po imunizaci.
-8CZ 297983 B6
Indukce choroby
Choroba se indukuje v den 0 intradermální injekcí 8 mg hovězího MBP a 3 mg M. tuberculosis H37Ra a FCA do zadních tlapek, přičemž celkový objem injekce na tlapku je 0,1 až 0,15 ml. U zvířat se sleduje klinická manifestace EAE, různé sérové a CSF imunologické markéry a míšní a kraniální MRL
Klinické hodnocení
Symptomy se hodnotí následujícím způsobem: 0 - normální neurologické vyšetření, 1 - ztráta hmotnosti, anorexie, zívání, pomalá odpověď na stimul, dráždivost nebo letargie, 2 - mírné neurologické příznaky, netečnost, slintání, nemotornost při používání končetin, třas, změněný křik a pohledové poruchy, 3 - středně těžké neurologické příznaky, slepota (pupily nereagují na světlo), akinese, ochabnutí končetin nebo paralýza, 4 - těžké neurologické příznaky, semikóma, kóma, kvadruplegie, 5 - smrt.
Proliferace lymfocytů indukovaná antigenem
Vzorky heparinizované krve se zředí v pomru 1 : 1 Hanksovým vyváženým solným roztokem (BSS) obsahujícím 5% teplotě inaktivované fetální telecí sérum (FCS) a rozdělí v gradientu Hypaque-Ficol. Centrifugací (2000 min'1, 20 minut při teplotě místnosti) a izoluje zředěná plazma a lymfocyty se odstředí na rozhraní. Izolované lymfocyty se promyjí třikrát v Hanksově BSS5% FCS a resuspendují vRPMI 1640, úplném médiu obsahujícím médium RPMI 1640, 10% FCS a 1% následující činidla: neesenciální aminokyseliny, pyrohroznan sodný, L-glutamin, 2merkaptoethanol a penicilin/streptomycin. Izolované lymfocyty se spočítají a resuspendují v konečné koncentraci 2 x 106/ml. Kultury obsahující 100 μΐ buněčné suspenze a 100 μΐ MBP (20 pg/jamka), 100 μΐ kopolymeru-1 (10 pg/jamka) nebo 100 μΐ Noc A (1 pg/jamka) se navzorkují na desky s 96 jamkami s kulatým dnem. Kultury se udržují 6 dní při 37 °C v atmosféře 5% oxidu uhličitého. Pátý den kultivace se každá jamka pulzuje 1 pCi 3H-thymidinu po dobu 16 až 18 hodin. Šestý den se kultury sklidí za použití automatického zařízení pro sklizeň buněk a spočítají pomocí kapalinové scintilace. Stimulační index se stanoví pomocí následujícího vzorce experimentální počet počet impulzů za minutu impulzů za minutu (cpm) - (cpm) pozadí
Stimulační index =------------------------------------------------------------počet impulzů za minutu (cpm) pozadí
Klinické hodnocení
Po dobu 24 dní žádné ze zvířat nevykazovalo klinické příznaky. U zvířete 18374, léčeného placebem, 25. den došlo k rozvinutí choroby. Vzhledem k závažné manifestaci EAE (hodnocení stupněm 4+ z pětistupňové stupnice) zvíře bylo 28. den usmrceno. Zvíře 18498, ošetřené vysokou dávkou (20 mg) kopolymeru-1, během šedesátidenního období pozorování nevykázalo žádné významné klinické symptomy. U zvířete 18497 ošetřeného nízkou dávkou kopolymeru-1 se 25. den začaly projevovat minimální symptomy. Na rozdíl od zvířete 18374, ošetřované placebem, zvíře 18497 vykazovalo pomalejší prohlubování klinických symptomů, které v době mezi 28. až 33. dnem ustálily na stupni hodnocení 2 až 3+. Poté byly zvířeti 18497 obden po dobu 10 dnů, celkem tedy pětkrát, podány 20mg tobolky. Jak je vidět na obr. 9, v průběhu 3 dnů klinické příznaky u zvířete poklesly na stupeň 0 a na tomto stupni zůstaly až do doby, kdy byla obě zvířata ošetřována kopolymerem-1, 18497 a 18498, usmrcena za účelem provedení histologických zkoušek (60. den).
-9CZ 297983 B6
Průtoková cytometrie
Pro analýzu lymfocytů a periferní krvi (PBL) a mozkomíšního moku (CSF) shromážděných od každé opice se použije průtokového cytometru Epics C. Červené krvinky se lyžují a zbývající bílé krvinky (WBC) se promyjí a barví vhodnými činidly za použití standardních postupů. V tabulkách 3 a 4 jsou uvedeny údaje v barvení PBL a CSF WBC získané od tří zvířat z tohoto příkladu.
Počet obarvených buněk (CD4+) byl u zvířat krmených kopolymerem-1, 18497 a 18498, mírně vyšší než u kontrolního zvířete 18374. Ukázalo se, že počet buněk CD4+, které byl zároveň CD45RA-, byl jak u kontrolního zvířete 18374, tak u zvířete 18497, ošetřovaného nízkou dávkou kopolymeru-1 zvýšený v době, kdy se u těchto zvířat objevily klinické symptomy (dny +27 až +34). Oproti tomu u zvířete 18498 ošetřovaného vysokou dávkou kopolymeru-1 zůstal tento počet v podstatě konstantní. Počet obarvených buněk CD8+CD45RA+ se u kontrolního zvířete 18374 a zvířete ošetřovaného nízkou dávkou kopolymeru-1 18497 stále snižoval, avšak u zvířete krmeného vysokou dávkou kopolymeru-1 18498 se mírně zvyšoval (což ukazuje produkci nových buněk CD4+).
Počet buněk nalezených v CSF kontrolního zvířete 18374 se ode dne 20+ do dne 28+, kdy zvíře pošlo, stále zvyšoval. Analýza ukázala, že většina buněk CD4+ byla CD45RA-. Buněk shromážděných z CSF zvířete 18497 bylo příliš málo na to, aby je bylo možno spočítat nebo barvit. Buněk shromážděných od zvířete 18498 bylo příliš málo na to, aby je bylo možno spočítat nebo barvit, s výjimkou dne +27. Shromážděné buňky CD4+ byly v tomto případě převážně CD45RA-.
Tabulka 3
Analýza lymfocytů v periferní krvi (PBL) získaných od makaků rhesus imunizovaných MBP
| Opice | Den zkoušky | CD4+ | CD8+ | Poměr | CD4+ CD45RA+ | CD8+ CD45RA+ |
| 18374 | (-1) | 24 | 47 | 0,51 | 15 | 45 |
| (kontrolní) | (+6) | 24 | 42 | 0,57 | 15 | 40 |
| (+13) | 23 | 40 | 0,58 | 12 | 38 | |
| +20 | 22 | 45 | 0,49 | 10 | 45 | |
| +27 | 24 | 27 | 0,89 | 10 | 23 | |
| +28 | 24 | 24 | 1,0 | 10 | 21 |
-10CZ 297983 B6
Tabulka 3 - pokračování
| Opice | Den zkoušky | CD4+ | CD8+ | Poměr | CD4+ CD45RA+ | CD8+ CD45RA+ |
| 18497 | -1 | 35 | 36 | 0,97 | 21 | 33 |
| (1 mg kopo- | +6 | 39 | 31 | 1,26 | 24 | 29 |
| lymeru-1/ | +13 | 37 | 34 | 1,09 | 16 | 29 |
| dávka) | +20 | 41 | 32 | 1,28 | 18 | 25 |
| +27 | 35 | 27 | 1,3 | 12 | 18 | |
| +34 | ND | ND | ND | ND | ND | |
| 18498 | -1 | 37 | 40 | 0,93 | 23 | 32 |
| (20 mg kopo- | +6 | 37 | 42 | 0,88 | 23 | 32 |
| lymeru-1/ | +13 | 41 | 46 | 0,89 | 24 | 37 |
| dávka) | +20 | 27 | 57 | 0,47 | 12 | 41 |
| +27 | 37 | 52 | 0,71 | 22 | 41 | |
| +34 | ND | ND | ND | ND | ND |
ND - nestanoveno
Tabulka 4
Analýza mozkomíšního moku makaků rhesus imunizovaných MBP
| Opice | Den zkoušky | Buňky (μΐ) | CD4+ | CD8+ | Poměr CD4+/ CD8+ | CD4+ CD45RA+ | CD8+ CD45RA+ |
| 18374 | 0 | ND | |||||
| +14 | 28 | ** | |||||
| +20 | 100 | 61 | 18 | 2,18 | 2 | 4 | |
| +28 | 294 | 35 | 35 | 0,94 | 4 | 8 |
- 11 CZ 297983 B6
Tabulka 4 - pokračování
| Opice | Den | Buňky CD4+ | CD8+ Poměr | CD4+ | CD8+ |
| zkoušky | (μΐ) | CD4+/ | CD45RA+ | CD45RA+ | |
| CD8+ |
| 18497 | 0 | ** | ||
| +14 | ** | |||
| +20 | ** | |||
| +27 | ** | |||
| +34 | ** | |||
| 18498 | 0 | ** | ||
| +14 | ** | |||
| +20 | ** | |||
| +27 | 29,7 | 47 | ND | |
| +34 | ** | |||
| +41 | ** |
ND ** = příliš málo buněk
ND = nestanoveno
Analýza induktoru faktoru antigen-specifických supresorových T-buněk (Tscfi)
Údaje z analýzy na MBP-specifícký Tsfí v plazmě tří opic z tohoto příkladu jsou uvedeny dále v tabulkách 5 a 6. Do dne +13 po indukci EAE pomocí MBP žádné ze zvířat neprodukovalo MBP-specifický Tsfí. Kontrolní zvíře 18374 neprodukovalo žádný Tsfí do dne +20 a od tohoto dne byla produkovaná hladina těsně nad pozadím. Zvířata krmená kopolymerem-1 18497 a 18498 ode dne +13 shodně produkovala významné hladiny Tsfí až do dne +41, krátce před ukončením zkoušky.
V tabulce 6 jsou uvedeny údaje ze vzorků plazmy, které neobsahovaly Tsfí a nereagovaly s protilátkou anti-TGF-beta. Plazma, která vykazuje MBP vazbu s protilátkou 3C9 (anti-Tsfí), rovněž reaguje s protilátkou anti-TGF-beta. Rekombinantní lidský TGF-beta reaguje s protilátkou antiTGF-beta, ale nikoliv s protilátkou 3C9.
- 12CZ 297983 B6
Tabulka 5
Analýza induktoru faktoru MBP-specifíckých supresorových T-buněk (Tcsfi)a
| Zvíře | “13 | -1 | +6 +13 | +20 | +27 | +34 | +41 |
| číslo | |||||||
| 18374 | žádný | žádný | ND ND | 0,17 | 0,21 | smrt | |
| 18497 | žádný | žádný | žádný 0,60 | 0,61 | 0,56 | 0,66 | 0,76 |
| 18498 | žádný | žádný | žádný 0,32 | 0,32 | 0,42 | 0,40 | 0,40 |
| a Údaje | představují optickou hustotu OE | i při | 405 nm | ||||
| vzorků plazmy | při zředění 1 : | 20 |
ND = nestanoveno
| Tabulka 6 Spojitost mezi MBP-specifíckým Tsfi a TGF-beta v plazmě makaků rhesus | ||
| Zvíře Den anti-Tsfia číslo zkoušky (protilátka 3C9) | anti-TGF-betab | |
| 18374 -1 | žádná | žádná |
| +27 | 0,21 | žádná |
| 18497 +6 | žádná | žádná |
| +13 | 0,60 | 0,71 |
| +27 | 0,56 | 0,65 |
| +41 | 0,76 | 0,85 |
| 18498 +6 | žádná | žádná |
| +13 | 0,32 | 0,35 |
| +27 | 0,42 | 0,47 |
| +41 | 0,40 | 0,45 |
| rekombinantní | ||
| lidský TGF-betac | - | 0,72 |
| a Představuje optickou hustotu OD při 405 nm látky, která se vázala k MBP (2,5 pg proteinu) a reaguje s anti-humánní Tsfi (3C9) protilátkou. b Představuje optickou hustotu OD při 405 nm látky, která se vázala k MBP a reaguje s antihumánní TGF-beta protilátkou. |
-13 CZ 297983 B6
Představuje optickou hustotu OD při 405 nm látky, která se vázala k MBP a reaguje s antihumánní TGF-beta protilátkou.
Představuje jamku potaženou 100 ng rekombinantního lidského TGF-beta
Příklad 4
Šest opic se ošetří a provede se analýza za použití v podstatě stejného postupu, jaký je popsán výše v příkladu 3.
Kontrolní zvíře krmené placebem 18746 se krmí tobolkami obsahujícími glukózu. Zvíře 18586 se krmí 1 mg kopolymerů-1 v tobolkách s prasklým enterickým povlakem. Zvíře 18639 se krmí 20 mg kopolymeru-1 v tobolkách s prasklým enterickým povlakem. Zvíře 18724 se krmí 1 mg kopolymeru-1 v tobolkách s neporušeným enterickým povlakem. Zvíře 18810 se krmí 10 mg kopolymeru-1 v tobolkách s neporušeným enterickým povlakem. Zvíře 18962 se krmí 20 mg kopolymeru-1 v tobolkách s neporušeným enterickým povlakem.
Režim krmení, indukce choroby a sledování dalšího průběhu jsou stejné jako v příkladu 3.
Výsledky
Jak je zřejmé, z obr. 10, u kontrolní opice 18746 se rozvinula akutní choroba počínaje dnem +21 a opice uhynula v den +23 na projevy této choroby. Zvířata 18586 a 18639, jimž byly podány tobolky s prasklým enterickým povlakem, které se v žaludku otevřely (při obou dávkách) před chorobou nebyla chráněna a uhynula v průběhu 2 až 3 dnů na projevy choroby. Všechny opice krmené kopolymerem-1 v tobolkách s enterickým povlakem byly plně chráněny před chorobou a až do 60. dne, kdy byly usmrceny za účelem provedení histologických zkoušek, se u nich nerozvinuly žádné příznaky EAE.
Claims (5)
1. Použití glatiramer acetátu v pevné formě a v množství 0,1 až 1000 mg pro výrobu entericky potažené kompozice pro perorální podávání pro léčení roztroušené sklerózy.
2. Použití podle nároku 1, kde entericky potaženou kompozicí je entericky potažená tobolka.
3. Použití podle nároku 1 nebo 2, kde množství je 1 mg, 10 mg nebo 20 mg.
4. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje glatiramer acetát v pevné formě v množství 0,1 až 1000 mg v entericky potažené kompozici.
5. Farmaceutická kompozice podle nároku 4, vyznačující se tím, že entericky potaženou kompozicí je entericky potažená tobolka.
6. Farmaceutická kompozice podle nároku 4 nebo 5, vyznačující se tím, že enterický potah obsahuje Eudragit S.
-14CZ 297983 B6
7. Farmaceutická kompozice podle nároku 4 nebo 5, vyznačující se tím, že enterický potah obsahuje Eudragit L.
5 8. Farmaceutická kompozice podle nároku 7, vyznačující se tím, že Eudragit L je
L30D55.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IL11998997A IL119989A0 (en) | 1997-01-10 | 1997-01-10 | Pharmaceutical compositions for oral treatment of multiple sclerosis |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ243799A3 CZ243799A3 (cs) | 2000-06-14 |
| CZ297983B6 true CZ297983B6 (cs) | 2007-05-16 |
Family
ID=11069682
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ0243799A CZ297983B6 (cs) | 1997-01-10 | 1998-01-12 | Entericky potazená farmaceutická kompozice pro perorální podávání pro lécení roztrousené sklerózy |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0975351B1 (cs) |
| JP (1) | JP4216342B2 (cs) |
| KR (1) | KR20000070058A (cs) |
| CN (1) | CN100528222C (cs) |
| AT (1) | ATE356608T1 (cs) |
| AU (1) | AU737287B2 (cs) |
| BR (1) | BRPI9807076B8 (cs) |
| CA (1) | CA2277365C (cs) |
| CZ (1) | CZ297983B6 (cs) |
| DE (1) | DE69837324T2 (cs) |
| EA (1) | EA003128B1 (cs) |
| HU (1) | HU226612B1 (cs) |
| IL (2) | IL119989A0 (cs) |
| NZ (1) | NZ336690A (cs) |
| PL (1) | PL193300B1 (cs) |
| SK (1) | SK284029B6 (cs) |
| WO (1) | WO1998030227A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA98214B (cs) |
Families Citing this family (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2527760T3 (es) | 1998-07-23 | 2015-01-29 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Tratamiento de enfermedad de Crohn con copolímero 1 y polipéptidos |
| IL141021A0 (en) | 1998-07-23 | 2002-02-10 | Yeda Res & Dev | Treatment of autoimmune conditions with copolymer 1 and related copolymers |
| WO2000005249A2 (en) * | 1998-07-23 | 2000-02-03 | The President And Fellows Of Harvard College | Synthetic peptides and methods of use for autoimmune disease therapies |
| US6800287B2 (en) | 1998-09-25 | 2004-10-05 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Copolymer 1 related polypeptides for use as molecular weight markers and for therapeutic use |
| US6872739B1 (en) * | 1999-06-04 | 2005-03-29 | Vereniging Voor Christelijk Wetenshappelikjk Onderwijs | Use of riluzole for the treatment of multiple sclerosis |
| JP2003522121A (ja) * | 1999-06-04 | 2003-07-22 | フェレニヒング フォール クリステレイク ウェテンスハッペリキク オンデルウェイス | 多発性硬化症の処置のためのリルゾールの使用 |
| IL150895A0 (en) * | 2000-02-18 | 2003-02-12 | Teva Pharma | Oral, nasal and pulmonary formulations of copolymer-1 |
| US7022663B2 (en) | 2000-02-18 | 2006-04-04 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Oral, nasal and pulmonary dosage formulations of copolymer 1 |
| US20020077278A1 (en) | 2000-06-05 | 2002-06-20 | Yong V. Wee | Use of glatiramer acetate (copolymer 1) in the treatment of central nervous system disorders |
| HUP0302333A3 (en) * | 2000-06-05 | 2005-07-28 | Teva Pharma | The use of glatiramer acetate (copolymer 1) for the preparation of pharmaceutical compositions available in the treatment of central nervous system disorders |
| WO2002076503A1 (en) | 2000-06-20 | 2002-10-03 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Treatment of central nervous system diseases by antibodies against glatiramer acetate |
| US7429374B2 (en) | 2001-12-04 | 2008-09-30 | Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. | Process for the measurement of the potency of glatiramer acetate |
| DK1485127T3 (da) | 2002-02-25 | 2011-10-03 | Elan Pharm Inc | Anvendelse af midler til behandling af inflammation |
| CA2514117A1 (en) * | 2003-01-24 | 2004-08-12 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Composition for and treatment of demyelinating diseases and paralysis by administration of remyelinating agents |
| HRP20160455T1 (hr) | 2004-09-09 | 2016-07-15 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Smjese polipeptida, sastavi koji ih sadrže i postupci za njihovu pripremu, te njihove primjene |
| NZ598661A (en) | 2009-08-20 | 2013-02-22 | Yeda Res & Dev | Low frequency glatiramer acetate therapy |
| USRE49251E1 (en) | 2010-01-04 | 2022-10-18 | Mapi Pharma Ltd. | Depot systems comprising glatiramer or pharmacologically acceptable salt thereof |
| US8759302B2 (en) | 2010-03-16 | 2014-06-24 | Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. | Methods of treating a subject afflicted with an autoimmune disease using predictive biomarkers of clinical response to glatiramer acetate therapy in multiple sclerosis |
| CA2814500A1 (en) | 2010-10-11 | 2012-04-19 | Teva Pharmaceutical Industries Ltd | Cytokine biomarkers as predictive biomarkers of clinical response for glatiramer acetate |
| HK1200274A1 (en) | 2011-10-10 | 2015-08-07 | Teva Pharmaceutical Industries Ltd. | Single nucleotide polymorphisms useful to predict clinical response for glatiramer acetate |
| HK1213830A1 (zh) | 2012-10-10 | 2016-07-15 | Teva Pharmaceutical Industries Ltd. | 用於预测醋酸格拉替雷临床反应的生物标志物 |
| UY35790A (es) | 2013-10-21 | 2015-05-29 | Teva Pharma | Marcadores genéticos que predicen la respuesta al acetato de glatiramer |
| CN105884866B (zh) * | 2015-01-26 | 2021-04-20 | 漳州未名博欣生物医药有限公司 | 格拉替雷的化学合成方法 |
| US9155775B1 (en) | 2015-01-28 | 2015-10-13 | Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. | Process for manufacturing glatiramer acetate product |
| CN112649538B (zh) * | 2015-04-28 | 2024-03-29 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 多肽混合物高效液相色谱分析方法 |
| US12097292B2 (en) | 2016-08-28 | 2024-09-24 | Mapi Pharma Ltd. | Process for preparing microparticles containing glatiramer acetate |
| CN109982712A (zh) | 2016-08-31 | 2019-07-05 | Mapi医药公司 | 包含醋酸格拉替雷的储库系统 |
| CN110382052A (zh) | 2017-03-26 | 2019-10-25 | Mapi医药公司 | 用于治疗进展型形式的多发性硬化症的格拉替雷储库系统 |
| WO2019002228A1 (en) | 2017-06-26 | 2019-01-03 | Institut Pasteur | TREATMENTS TO REMOVE HIV RESERVOIRS AND REDUCE VIRAL LOAD |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995031990A1 (en) * | 1994-05-24 | 1995-11-30 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Copolymer-1 improvements in compositions of copolymers |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5719296A (en) * | 1995-10-30 | 1998-02-17 | Merck & Co., Inc. | Pseudopeptide lactam inhibitors of peptide binding to MHC class II proteins |
-
1997
- 1997-01-10 IL IL11998997A patent/IL119989A0/xx unknown
-
1998
- 1998-01-12 SK SK931-99A patent/SK284029B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-01-12 EP EP98901745A patent/EP0975351B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-01-12 EA EA199900621A patent/EA003128B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-01-12 PL PL334566A patent/PL193300B1/pl unknown
- 1998-01-12 WO PCT/US1998/000375 patent/WO1998030227A1/en not_active Ceased
- 1998-01-12 CZ CZ0243799A patent/CZ297983B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-01-12 ZA ZA9800214A patent/ZA98214B/xx unknown
- 1998-01-12 BR BRPI9807076A patent/BRPI9807076B8/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-01-12 JP JP53110898A patent/JP4216342B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1998-01-12 AT AT98901745T patent/ATE356608T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-01-12 CA CA2277365A patent/CA2277365C/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-01-12 KR KR1019997006278A patent/KR20000070058A/ko not_active Ceased
- 1998-01-12 DE DE69837324T patent/DE69837324T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-01-12 AU AU58195/98A patent/AU737287B2/en not_active Expired
- 1998-01-12 HU HU0001917A patent/HU226612B1/hu unknown
- 1998-01-12 NZ NZ336690A patent/NZ336690A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-01-12 CN CNB988031221A patent/CN100528222C/zh not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-07-06 IL IL130820A patent/IL130820A/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995031990A1 (en) * | 1994-05-24 | 1995-11-30 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Copolymer-1 improvements in compositions of copolymers |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NZ336690A (en) | 2001-05-25 |
| SK93199A3 (en) | 2000-11-07 |
| WO1998030227A1 (en) | 1998-07-16 |
| AU5819598A (en) | 1998-08-03 |
| PL193300B1 (pl) | 2007-01-31 |
| EP0975351A1 (en) | 2000-02-02 |
| EP0975351B1 (en) | 2007-03-14 |
| EA199900621A1 (ru) | 2000-02-28 |
| HUP0001917A3 (en) | 2001-12-28 |
| BR9807076A (pt) | 2000-05-02 |
| HU226612B1 (en) | 2009-04-28 |
| DE69837324D1 (de) | 2007-04-26 |
| KR20000070058A (ko) | 2000-11-25 |
| ATE356608T1 (de) | 2007-04-15 |
| HUP0001917A2 (hu) | 2000-10-28 |
| JP2001511121A (ja) | 2001-08-07 |
| SK284029B6 (sk) | 2004-08-03 |
| PL334566A1 (en) | 2000-03-13 |
| BR9807076B1 (pt) | 2013-10-29 |
| EP0975351A4 (en) | 2002-05-15 |
| CZ243799A3 (cs) | 2000-06-14 |
| AU737287B2 (en) | 2001-08-16 |
| IL119989A0 (en) | 1997-04-15 |
| BRPI9807076B8 (pt) | 2021-05-25 |
| ZA98214B (en) | 1999-08-11 |
| CN1249690A (zh) | 2000-04-05 |
| IL130820A (en) | 2007-03-08 |
| HK1025737A1 (en) | 2000-11-24 |
| JP4216342B2 (ja) | 2009-01-28 |
| EA003128B1 (ru) | 2003-02-27 |
| CN100528222C (zh) | 2009-08-19 |
| CA2277365C (en) | 2011-04-12 |
| CA2277365A1 (en) | 1998-07-16 |
| DE69837324T2 (de) | 2007-11-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ297983B6 (cs) | Entericky potazená farmaceutická kompozice pro perorální podávání pro lécení roztrousené sklerózy | |
| US6214791B1 (en) | Treatment of multiple sclerosis through ingestion or inhalation of copolymer-1 | |
| JP3712260B2 (ja) | 自己免疫疾患のバイスタンダー抑制 | |
| WO1998030227A9 (en) | Treatment of multiple sclerosis through ingestion or inhalation of copolymer-1 | |
| EP0359783B2 (en) | Treatment of autoimmune diseases by oral administration of autoantigens | |
| US6645504B1 (en) | Bystander suppression of type I diabetes by oral administration of glucagon | |
| HUT69942A (en) | Treatment of autoimmun diseases by oral administration of autoantigenes | |
| WO1996039176A1 (en) | USE OF ORAL TOLERANCE TO SUPPRESS BOTH Th1 AND Th2 IMMUNE RESPONSES AND TO SUPPRESS ANTIBODY PRODUCTION | |
| JP2002515853A (ja) | 低投与量の▲ｉｉ▼型コラーゲンによる慢性関節リウマチの治療 | |
| KR20000070460A (ko) | 메토트렉세이트와 공동으로 내성화를 사용한 자기면역질병의 치료 | |
| WO1998032451A9 (en) | Treatment of autoimmune disease using tolerization in combination with methotrexate | |
| AU2003250892A1 (en) | Use of alanyl-aminopeptidase inhibitors and pharmaceutical compositions containing said inhibitors | |
| JP2001500488A (ja) | 宿主ｖｓ移植片反応の重篤度をＨＳＰ６０自己免疫性をダウンレギュレーションすることにより低下させる方法 | |
| KR100435040B1 (ko) | 티세포매개성질환들의치료를위한제제들및방법들 | |
| HUT76101A (en) | Treatment of autoimmune disease using oral tolerization and/or th2-enhancing cytokines | |
| US20030190323A1 (en) | Preparations and methods for the treatment of T cell mediated diseases | |
| Sela | Immunomodulatory vaccines against autoimmune diseases | |
| MXPA99006457A (en) | Treatment of multiple sclerosisthrough ingestion or inhalation of copolymer-1 | |
| JPH08500823A (ja) | レトロウィルス関連神経疾患のバイスタンダー抑制 | |
| US20020086030A1 (en) | Preparations and methods for the treatment of t cell mediated diseases | |
| US20040115217A1 (en) | Bystander suppression of autoimmune diseases |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20180112 |