CZ303575B6 - Separace a detekce smesných vzorku sekvencní injekcní chromatografií - Google Patents
Separace a detekce smesných vzorku sekvencní injekcní chromatografií Download PDFInfo
- Publication number
- CZ303575B6 CZ303575B6 CZ20090801A CZ2009801A CZ303575B6 CZ 303575 B6 CZ303575 B6 CZ 303575B6 CZ 20090801 A CZ20090801 A CZ 20090801A CZ 2009801 A CZ2009801 A CZ 2009801A CZ 303575 B6 CZ303575 B6 CZ 303575B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- column
- mobile phase
- separation
- chromatographic
- columns
- Prior art date
Links
Landscapes
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
Separace a detekce smesných sériových vzorku sekvencní injekcní chromatografií s vysoce rozdílnými retencními vlastnostmi složek vuci nastaveným chromatografickým podmínkám podle vynálezu spocívá v tom, že se týž smesný vzorek oddelene separuje nejméne na dvou kolonách s ruzne nastavenými chromatografickými podmínkami, pricemž se ze smesného vzorku na každé kolone prednostne separují složky s podobnými retencními vlastnostmi vuci nastaveným, pro ne optimálním chromatografickým podmínkám, a eluáty jednotlivých složek ze všech chromatografických kolon postupne prochází jednou detekcní celou spektrofotometrického detektoru. Chromatografické podmínky se upravují zmenou délky kolony a/nebo zmenou stacionární fáze kolony a/nebo zmenou složení mobilní fáze a/nebo rychlostí prutoku mobilní fáze.
Description
Separace a detekce směsných vzorků sekvenční injekční chromatografií
Oblast techniky
S
Předkládaný vynález se týká oblasti analytické chemie, konkrétně chromatografie separace. Používá automatizovanou metodu sekvenční injekční analýzy. Týká se příkladů, kdy se běžně používá pro časově a nákladově efektivní separaci obsahových látek ve směsném vzorku gradientová eluce. Týká se sériové analýzy vzorků u nichž se předpokládá, že obsahuje složky, analyty, s vysoce rozdílným retenčními vlastnostmi vůči nastaveným chromatografíckým podmínkám systému mobilní a stacionární fáze.
Dosavadní stav techniky
Kapalinová chromatografie na reverzní stacionární fázi běžně využívá izokratické složení mobilní fáze během separace jednotlivých látek vzorku tzv. izokratícká eluce. V případě nedostatečné selektivity separačních podmínek pro jednotlivé látky lze tyto jednoduše upravit změnou složení mobilní fáze během separace (nejČastěji plynulou změnou poměru rozpouštědel v mobilní fázi) tzv. gradientová eluce. Sekvenční injekční chromatografie (SIC) je jednou z možností jak provádět kapalinovou chromatografii. SIC využívá nejčastěji monolitickou chromatografickou kolonu (různé délky a průměru) s reverzní stacionární fází Cl8 pro její nízký odpor vůči protékající mobilní fázi. Nedostupnost jiných druhů stacionárních fází monolitických kolon a omezená možnost využití částicových kolon (díky jejich vyššímu odporu vůči protékající mobilní fázi) ome25 zuje selektivitu separací a tím i využitelnost metody SIC [Chocholouš P., Solích P., Šatínský D.: Analytica Chimica Acta (600) 2007, 129-135., Chocholouš P., Šatínský D., Sladkovský R., Pospíšilová M., Solích P.: Talanta (77) 2008, 566-570],
Pro detekci směsných vzorků s předpokládanými, vysoce rozdílným retenčními vlastnostmi ana30 lytů vůči nastaveným chromatografíckým podmínkám je nutné použít chromatografii s měnícími se chromatografickými podmínkami (gradientová eluce). Při gradientově eluci jsou pro jednotlivé analyty vytvářeny co nejvhodnější chromatografické podmínky plynulou zménou složení mobilní fáze.
Při gradientově eluci se pracuje s mobilní fází, jejíž složení se mění s časem, takže v průběhu separace dochází k plynulé změně poměru rozpouštědel tvořící mobilní fázi a tím k zvyšování eluční síly mobilní fáze a tím i urychlení eluce (vymývání) látek z chromatografické kolony [Láhdesmaki I., Carroll A. D., Wood J., Klein G. D., Scampavia L. D.: FIAIab Instruments, Brochures/Sichrom (2008)]. Změna eluční síly mobilní fáze umožňuje zajistit selektivitu chro40 matografického systému a zároveň urychlit proces separace. Vzhledem ke zvyšujícímu se zastoupení organického rozpouštědla v mobilní fázi se zvyšuje jeho spotřeba. Po skončení separace gradientovou eluci je třeba upravit podmínky na koloně zpět na počáteční stav, tedy je třeba kolonu dostatečně dlouhou dobu promývat mobilní fází o složení stejném jako na počátku analýzy, tímto dochází k prodlužování času analýzy a stejně tak k další spotřebě mobilní fáze.
Při sériovém měření vzorků za podmínek gradientově eluce tvoří významný časový úsek doba, kdy jsou po ukončení měření ustalovány chromatografické podmínky v systému na původní (kolona je promývána mobilní fází o původním složení) před analýzou dalšího vzorku. Tento časový úsek prodlužuje čas celé analýzy a také se spotřebovává mobilní fázi.
Spotřeba rozpouštědel mobilní fáze se zvyšuje se zvyšujícím se poměrem jejích zastoupení během gradienové eluce a zároveň během ustalování původních podmínek před analýzou dalšího vzorku.
Převod metody separace gradientovou eluci (zejména gradientového profilu) z jednoho přístroje na druhý může být problematický, protože jejích směšovací systémy (čerpadla) pro vytváření
- 1 CZ 303575 B6 gradientového profilu ruční síly mobilní fáze mohou být odlišná. Gradientová eluce může být použita jak v případě vysokoúčinné kapalinové chromatografie tak v metodě sekvenční injekční chromatografie (SIC) pro změnu selektivity separace během analýzy [Jandera P., ChuráČekJ.: Gradient Elution in Column Liquid Chromatography. Elsevier, Amsterdam 1985].
Alternativním přístupem pro časové zefektivnění analýzy série podobných vzorků je systém s dvěma a více paralelně zapojenými chromatografickými kolonami, kdy jsou jednotlivé vzorky postupně dávkovány na jednotlivé kolony se stejnou optimální mobilní a stacionární fází pro dané složky ve vzorcích. Výstupy z jednotlivých kolon jsou přepínány do detektoru v závislosti na právě vymývané složce v jednotlivých vzorcích. Sestava vyžaduje dvě (nebo více) jednoduchých čerpadel a ventil pro přepínání výstupu z kolon do detektoru. Bohužel díky trvalému toku mobilních fází je jejich spotřeba vyšší [Linqvist A., Hilke S., Skoglund E.: Journal of Chromatography A (1058) 2004), 121-126, Van Pelt C, K., Corso T. N., Schultz G. A., Lowes S., Henion J.: Anal. Chem. (73)2001, 582-588].
Podstata vynálezu
Uvedené nevýhody odstraňuje separace a detekce složek v sérii podobných směsných vzorků s vysoce rozdílnými retenčními vlastnostmi složek vůči nastaveným chromatografickým podmínkám sekvenční injekční chromatografií, které podle vynálezu spočívá v to, že se týž směsný vzorek odděleně separuje nejméně na dvou kolonách s různě nastavenými chromatografickými podmínkami, přičemž se ze směsného vzorku na každé koloně přednostně separují složky s podobnými retenčními vlastnostmi vůči nastaveným, pro ně optimálním chromatografickým podmínkám, a eluáty jednotlivých složek ze všech chromatografických kolon postupně prochází jednou detekční celou spektrofotometr ického detektoru.
Chromatografické podmínky se upravují změnou délky kolony a/nebo změnou stacionární fáze kolony a/nebo změnou složení mobilní fáze a/nebo rychlostí průtoku mobilní fáze.
Zařízení k provádění separace a detekce podle vynálezu spočívá v tom, že sestává z pístové pumpy i, propojené se selekčním ventilem 5, který je dále propojen s prvním zásobníkem 2 první mobilní fáze a se druhým zásobníkem 3 druhé mobilní fáze a se třetím zásobníkem 4 vzorku a s první chromatografickou kolonou 6 a s druhou chromatografickou kolonou 7, výtoky obou kolon jsou připojeny přes směšovací T bod 12 k průtokové cele 8 UV- VIS detektoru 10, průtoková cela je připojena k lahvi 11 s odpadem.
Nový analytický přístup využívá nově dvou paralelně umístěných chromatografických kolon pro separaci a stanovení látek a rozšiřuje možnosti chromatografické analýzy složitějších vzorků (zvyšuje selektivitu měření). Dvoukolonová chromatografie je založena na ízokratické eluci (neměnných podmínkách analýzy). Každá chromatografická kolona má optimální chromatografické podmínky pro různou skupinu složek obsažených ve vzorku. Látky s menší schopností retence ke stacionární fázi jsou separovány na první koloně a jsou promývány optimální první mobilní fází a látky s větší schopnosti retence k téže stacionární fázi jsou separovány na druhé koloně, v níž jsou optimální chromatografické podmínky pro tyto složky, které jsou odlišné od první kolony, (s odlišnou délkou, stacionární fází a odpovídající optimální druhou mobilní fází).
Každá kolona je promývána stále stejnou mobilní fází, odpadá nutnost promývání stacionární fáze mobilní fází s původním složením před analýzou dalšího vzorku. Eliminován je problém unášení základní linie při změně složení mobilní fáze za podmínek gradientově eluce, při zachování vysoké reprodukovatelnosti a snadné přenositelnosti metody na jiný přístroj. Pro každou skupinu látek se používá specifická (optimální) kolona a mobilní fáze, optimální průtoková rychlost mobilní fáze, optimální objem vzorku.
Přestože silněji zadržované látky nejsou vymyty z první kolony před dalším nadávkováním vzorku na tuto kolonu, nemají vliv na následnou analýzu. Jsou velmi pomalu vymývány z první kolony ve velmi vysokém retenčním čase a zaznamenány jen jako malé zvýšení základní linie píky jsou velmi ro zrny té. Experimentálně bylo ověřeno, že zadržování těchto látek na koloně iiCsnízuje účinnost první kolony vazbou na aktivní bíc+o laií ío
11JLU J *J 1 111 1U použita pro separaci látek silněji zadržovaných na první koloně, zatímco slaběji zadržované látky nejsou zadržovány na druhé koloně vůbec a vymývají se s šumem mrtvého objemu kolony. Takto lze s výhodou použít druhou kratší kolonu, vyšší průtok druhé mobilní fáze nebo druhou mobilní fázi s vyšší eluční silou. Variabilita systému je vysoká díky široké nabídce chromatografických kolon, směsí mobilní fáze, průtokových rychlostí mobilní fáze a nástřikových objemů vzorku.
Významná je úspora mobilní fáze v porovnání s metodou s gradientovou změnou eluční síly mobilní fáze, vynechán je krok promývání kolony před opakovaným nástřikem jako při metodě s gradientovou změnou eluční síly mobilní fáze, tomu odpovídá i časová úspora.
Výsledný čas analýz)7 a spotřeba mobilní fáze v případě dvoukolonového systému je nižší nejméně o 30 % v porovnání se shodnou analýzou v módu gradientově eluce. Pro dvoukolonový systém není třeba dvojice pump se směšovačem vytvářejícím gradient mobilní fáze. Systém je vybaven pístovou pumpou a selekčním ventilem.
Sekvenční injekční chromatografie podle vynálezu umožňuje sériové stanovení vzorků o známém složení s předpokládaným rozsahem množství jednotlivých složek. Je časově úspornější a snižuje spotřebu rozpouštědel mobilní fáze v porovnání se sekvenční injekční chromatografii s gradientovou elucí.
Chromatografické podmínky co nejvhodnější pro jednotlivé skupiny složek jsou vytvářeny výběrem co nej vhodnější kolony se stacionární fází a co nej vhodnějším složením mobilní fáze, které se během měření nemění.
Při sériovém měření vzorků díky neměnným chromatografie kým podmínkám je čas pro obnovu zařízení pro analýzu nového vzorku nulový.
Složení mobilní fáze způsobem podle vynálezu je ovlivněno i výběrem druhé kolony, což v případě kratší kolony umožňuje použít mobilní fázi s menším množství organického rozpouštědla v porovnání s gradientovou elucí.
Dávkování vzorku na více kolon (oddělená separace složek s rozdílnými retenčními vlastnostmi) umožňuje i variabilitu dávkovaného množství vzhledem k předpokládané odezvě detektoru pro předpokládanou koncentraci složek - vyšší nadávkované množství umožní zvýšit odezvu detektoru, tedy snížit nejnižší limit stanovení (limit kvantifikace), tato možnost u gradientově eluce není.
Sekvenční injekční chromatografie podle vynálezu umožňuje analýzu (kvalitativní i kvantitativní) u vzorku se známým složením a s obsahem těchto analytů v kalibrovaném rozsahu, který je předem experimentálně ověřen.
Podmínky měření v sekvenční injekční chromatografii podle vynálezu jsou optimalizovány vzhledem k složení analyzovaného vzorku. Vybrány jsou vhodné kolony pro dané skupiny složek, vybráno je vhodné složení mobilních fází pro jednotlivé kolony, vybráno je vhodné množství vzorku dávkované na jednotlivé kolony, vybráno je vhodné množství mobilní fáze pro jednotlivé kolony a průtoková rychlost mobilních fází pro jednotlivé kolony. Spektrofotometrický detektor je nastaven vzhledem k absorpčním vlastnostem jednotlivých složek. Všechny výše uvedené podmínky jsou nastaveny v programu počítače ovládajícího celý systém a jsou během měření neměnné.
- 3 CZ 303575 B6
Přehled obrázků na výkresech
Na obr. 1 je znázorněno schéma zařízení
Příklady provedení vynálezu
Výstupní kontrola při výrobě léčivých přípravků (zejména tablety) s obsahem paracetamolu, kofeinu a propyfenazonu byla prováděna na zařízení znázorněném na obr. 1.
Zařízení sestává z pístové pumpy 1, propojené se selekčním ventilem 5, který je dále propojen s prvním zásobníkem 2 první mobilní fáze a se druhým zásobníkem 3 druhé mobilní fáze a se třetím zásobníkem 4 vzorku a s první chromatografickou kolonou 6 a s druhou chromatografickou kolonou 7. Výtoky obou kolon jsou připojeny přes směšovací T bod J_2 k průtokové cele 8 UV-VIS detektoru 10, průtoková cela připojena k lahvi 11 s odpadem. Průtoková cela 8 je ozařována UV lampou 9, Pístová pumpa I a osmicestný selekční ventil 5 a UV-VIS detektor 10 jsou ovládány osobním počítačem 13.
Stanovení obsahových látek v tabletách s paracetamolem, kofeinem, propyfenazonem se provádělo za použití kyseliny salicylové jako vnitřního standardu. V první koloně 6 byla použita mobilní fáze o složení acetonitril : voda = 10 : 90. Jako první kolona 6 byla použita komerčně vyráběná chromatografická monolitická kolona s chemicky modifikovaným silikagelem řetězci 08 (25 + 5 mm x 4,6 mm) - první kolona s chemicky modifikovaným silikagelem řetězci 08 (25 + 5 mm x 4,6 mm) - první kolona byla použita pro separaci a následné spektrofotometrické stanovení při 210 nm paracetamolu, kofeinu a kyseliny salicylové. Jako druhá kolona 7 byla použita komerčně vyráběná chromatografická monolitická kolona s chemicky modifikovaným silikagelem řetězci 08 (10 mm x 4,6 mm). Mobilní fáze v druhé koloně 7 měla složení acetonitrikvoda = 30 : 70. Druhá kolona 2 byla použita pro separaci a následné spektrofotometrické stanovení propyfenazonu. Kalibrační rozsah měření je pro paracetamol 1,2 až 150,0pg ml“1 při korelaci 0,999; pro koefin 1,6 až 200,0 pg ml1 při korelaci 0,999 a pro propyfenazon 2,4 až 300,0 pg ml“1 při korelaci 0,999.
Sekvence měření TC - SIC;
Na základě počítačového programu bylo přesné množství první mobilní fáze nasáto pohybem pístu peristaltické pumpy 1 z prvního zásobníku 2 přes výstup selekčního ventilu 5 do zásobníku peristaltické pumpy i, poté vzorek byl nasát pumpou J_ přes selekční ventil 5 z třetího zásobníku 4 do hadičky spojující vstup selekčního ventilu 5 a výstup pumpy 1, otočením směru průtoku pomocí první mobilní fáze byl vzorek vymýván z hadičky přes selekční ventil 5 dále na první chromatografickou kolonu 6 a pak byl vymýván celým objemem první mobilní fáze ze zásobníku pumpy i do průtokové cely 8 detektoru a dále z průtokové cely 8 detektoru do lahve ΐ 1 pro odpad. UV-VIS detektor zaznamenává absorbancí během celé doby promývání první kolony první mobilní fází. Po separaci všech složek s podobnými vlastnostmi vůči nastaveným chromatografickým podmínkám v první chromatografické koloně 6 nově analýza pokračovala separací na druhé chromatografické koloně 7, kde se separovaly další složky vzorku s podobnými vlastnostmi vůči nastaveným chromatografie kým podmínkám na druhé chromatografické koloně 7. Přesné množství druhé mobilní fáze bylo nasáto pohybem pístu peristaltické pumpy f z druhého zásobníku druhé mobilní fáze 3 přes výstup selekčního ventilu 5 do zásobníku peristaltické pumpy 1. Vzorek je nasát pumpou 1 přes selekční ventil 5 z třetího zásobníku vzorku 4 do hadičky spojující vstup selekčního ventilu 5 a výstup pumpy Otočením směru průtoku pomocí druhé mobilní fáze je vzorek vymýván z hadičky přes selekční ventil 5 dále na druhou chromatografickou kolonu 2 a pak vymýván celým objemem druhé mobilní fáze ze zásobníku pumpy | do průtokové cely 8 detektoru a dáte z průtokové cely 8 detektoru do lahve JJ pro odpad. UV-VIS detektor zaznamenává absorbancí během celé doby promývání kolony druhou mobilní fází.
-4CZ 303575 B6
Po vyhodnocení časového záznamu z detektoru se opět do obou chromatografíekých kolon nastříkne nový vzorek.
ý
Průmyslová využitelnost
Separace a detekce směsných vzorků podle vynálezu je využitelná ve farmaceutickém, nebo potravinářském průmyslu při výstupní kontrole výrobků.
Claims (3)
1. Separace a detekce směsných vzorků sekvenční injekční chromatografií s vysoce rozdílnými retenčními vlastnostmi složek vůči nastaveným chromatografickým podmínkám, vyznačující se tím, že se týž směsný vzorek odděleně separuje nejméně na dvou kolonách s různě
20 nastavenými chromatografickými podmínkami, přičemž se ze směsného vzorku na každé koloně přednostně separují složky s podobnými retenčními vlastnostmi vůči nastaveným, pro ně optimálním chromatografickým podmínkám, a eluáty jednotlivých složek ze všech chromatografických kolon postupně prochází jednou detekční celou spektrofotometrického detektoru.
25
2. Separace a detekce podle nároku 1, vyznačující se tím, že chromatografické podmínky se upravují změnou délky kolony a/nebo změnou stacionární fáze kolony a/nebo změnou složení mobilní fáze a/nebo lychiostí průtoku mobilní fáze.
3. Zařízení k provádění separace a detekce podle nároků I a 2, vyznačující se tím,
30 že sestává z pístové pumpy (1), propojené se selekčním ventilem (5), který je dále propojen s prvním zásobníkem (2) první mobilní fáze a se druhým zásobníkem (3) druhé mobilní fáze a se třetím zásobníkem (4) vzorku a s první chromatografickou kolonou (6) a s druhou chromatografickou kolonou (7), výtoky obou kolon jsou připojeny přes směšovací T bod (12) k průtokové cele (8) UV- VIS detektoru (10), průtoková cela je připojena k lahvi (11) s odpadem.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20090801A CZ303575B6 (cs) | 2009-12-01 | 2009-12-01 | Separace a detekce smesných vzorku sekvencní injekcní chromatografií |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20090801A CZ303575B6 (cs) | 2009-12-01 | 2009-12-01 | Separace a detekce smesných vzorku sekvencní injekcní chromatografií |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2009801A3 CZ2009801A3 (cs) | 2011-06-08 |
| CZ303575B6 true CZ303575B6 (cs) | 2012-12-19 |
Family
ID=44114440
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20090801A CZ303575B6 (cs) | 2009-12-01 | 2009-12-01 | Separace a detekce smesných vzorku sekvencní injekcní chromatografií |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ303575B6 (cs) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4271697A (en) * | 1979-10-17 | 1981-06-09 | Phillips Petroleum Company | Chromatographic analysis |
| US20050218055A1 (en) * | 2004-03-30 | 2005-10-06 | Shimadzu Corporation | Liquid chromatograph |
-
2009
- 2009-12-01 CZ CZ20090801A patent/CZ303575B6/cs not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4271697A (en) * | 1979-10-17 | 1981-06-09 | Phillips Petroleum Company | Chromatographic analysis |
| US20050218055A1 (en) * | 2004-03-30 | 2005-10-06 | Shimadzu Corporation | Liquid chromatograph |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Choholous P. et al: An overview of sequential injection chromatography; ANALYTICA CHIMICA ACTA 600 (2007) 129-135 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2009801A3 (cs) | 2011-06-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Brestrich et al. | Selective protein quantification for preparative chromatography using variable pathlength UV/Vis spectroscopy and partial least squares regression | |
| Ahmed | High-performance liquid chromatography (HPLC): principles, applications, versatality, efficiency, innovation and comparative analysis in modern analytical chemistry and in pharmaceutical sciences | |
| JP5635204B2 (ja) | クロマトグラフィー精製法 | |
| Chocholouš et al. | An overview of sequential injection chromatography | |
| AU661349B2 (en) | Protein chromatography system | |
| German et al. | Rapid simultaneous determination of glucagon and insulin by capillary electrophoresis immunoassays | |
| Kaliszan et al. | pH gradient high-performance liquid chromatography: theory and applications | |
| Huclová et al. | Coupling of monolithic columns with sequential injection technique: A new separation approach in flow methods | |
| Chocholouš et al. | Fast simultaneous spectrophotometric determination of naphazoline nitrate and methylparaben by sequential injection chromatography | |
| Molina-Díaz et al. | Solid-phase spectroscopy from the point of view of green analytical chemistry | |
| Serra-Mora et al. | Trends in online intube solid phase microextraction | |
| Chen et al. | Selectivity optimization in green chromatography by gradient stationary phase optimized selectivity liquid chromatography | |
| Cerdà et al. | Potential of multisyringe flow-based multicommutated systems | |
| US20140095082A1 (en) | Expanded linear range by use of two flow cell detectors with long and short path | |
| Huclová et al. | Sequential injection extraction based on restricted access material for determination of furosemide in serum | |
| US11307181B1 (en) | HPLC system with mixed-mode columns for measuring charged analytes in complex mixtures | |
| EP2581741A1 (en) | Method transfer by freezing an initially non-controlled parameter | |
| CN109324135B (zh) | 用于同时检测复合乳化剂中3种乳化剂的方法 | |
| CN112903846B (zh) | 一种测定利伐沙班及其杂质的分析方法 | |
| Theodoridis et al. | Automated sample treatment by flow techniques prior to liquid-phase separations | |
| AU654503B2 (en) | Quantitative analysis and monitoring of protein structure by subtractive chromatography | |
| Wu et al. | Quantification of 7-aminoflunitrazepam in human urine by polymeric monolith-based capillary liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry | |
| Scott et al. | Advances in the application of high resolution liquid chromatography to the separation of complex biological mixtures | |
| Bernart | Ultra-high performance liquid chromatography (UHPLC) method for the determination of limonene in sweet orange (Citrus sinensis) oil: implications for limonene stability | |
| CZ303575B6 (cs) | Separace a detekce smesných vzorku sekvencní injekcní chromatografií |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20181201 |