CZ304385B6 - Způsob predikce viditelných fenotypových znaků a biogeografického původu, zejména pro forenzní účely - Google Patents
Způsob predikce viditelných fenotypových znaků a biogeografického původu, zejména pro forenzní účely Download PDFInfo
- Publication number
- CZ304385B6 CZ304385B6 CZ2012-793A CZ2012793A CZ304385B6 CZ 304385 B6 CZ304385 B6 CZ 304385B6 CZ 2012793 A CZ2012793 A CZ 2012793A CZ 304385 B6 CZ304385 B6 CZ 304385B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- markers
- genotype
- subset
- origin
- group
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 33
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 25
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 230000037308 hair color Effects 0.000 claims abstract description 9
- 102210011593 rs7495174 Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 102220001747 rs16891982 Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 102200025847 rs1426654 Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 claims description 10
- 239000003550 marker Substances 0.000 abstract description 6
- 102210017944 rs12896399 Human genes 0.000 abstract description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 45
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 24
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 208000012641 Pigmentation disease Diseases 0.000 description 8
- 102100034745 E3 ubiquitin-protein ligase HERC2 Human genes 0.000 description 5
- 101000872516 Homo sapiens E3 ubiquitin-protein ligase HERC2 Proteins 0.000 description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 5
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 5
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 description 4
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 4
- 230000003061 melanogenesis Effects 0.000 description 4
- 210000002780 melanosome Anatomy 0.000 description 4
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 101150004219 MCR1 gene Proteins 0.000 description 3
- 102100037258 Membrane-associated transporter protein Human genes 0.000 description 3
- 101100206347 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) pmh1 gene Proteins 0.000 description 3
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 3
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 3
- 108010051081 dopachrome isomerase Proteins 0.000 description 3
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000031872 Body Remains Diseases 0.000 description 2
- IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N Cyclic adenosine monophosphate Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 101001131829 Homo sapiens P protein Proteins 0.000 description 2
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100034574 P protein Human genes 0.000 description 2
- 108091006702 SLC24A4 Proteins 0.000 description 2
- 108091007563 SLC45A2 Proteins 0.000 description 2
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 102100032003 Sodium/potassium/calcium exchanger 4 Human genes 0.000 description 2
- 102100032079 Sodium/potassium/calcium exchanger 5 Human genes 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 210000005178 buccal mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 2
- BCOSEZGCLGPUSL-UHFFFAOYSA-N 2,3,3-trichloroprop-2-enoyl chloride Chemical compound ClC(Cl)=C(Cl)C(Cl)=O BCOSEZGCLGPUSL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDRNOBUWMVLVFH-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-n-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)prop-2-enamide Chemical compound CC(=C)C(=O)NC1CC(C)(C)NC(C)(C)C1 KDRNOBUWMVLVFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000692783 Chylismia claviformis Species 0.000 description 1
- 101150076925 Herc2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101001011441 Homo sapiens Interferon regulatory factor 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000796203 Homo sapiens L-dopachrome tautomerase Proteins 0.000 description 1
- 101000740112 Homo sapiens Membrane-associated transporter protein Proteins 0.000 description 1
- 102100030126 Interferon regulatory factor 4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000301 Membrane transport proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003939 Membrane transport proteins Human genes 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091093105 Nuclear DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000320126 Pseudomugilidae Species 0.000 description 1
- 108091006701 SLC24A5 Proteins 0.000 description 1
- 102000008314 Type 1 Melanocortin Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010021428 Type 1 Melanocortin Receptor Proteins 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000013412 genome amplification Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000002974 pharmacogenomic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000029219 regulation of pH Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 101150117832 slc24a5 gene Proteins 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 239000011098 white lined chipboard Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Předkládané řešení poskytuje způsob predikce viditelných fenotypových znaků a biogeografického původu osoby, zejména pro forenzní účely, stanovením genotypu následujících markerů vykazujících jednonukleotidový polymorfismus (SNP): rs16891982, rs2031526, rs12896399, rs7495174, rs12913832, rs916977, rs1426654, rs1667394, rs28049897. Srovnáním s genotypovými kombinacemi podmnožin této skupiny markerů určujícími příslušnost ke skupině osob vykazujících daný fenotypový znak, určenými na vzorku populace srovnáním genotypu a fenotypu, se provede určení následujících fenotypových charakteristik: barva očí modrá vs. nemodrá na podmnožině markerů rs16891982, rs2031526, rs12913832, rs916977; barva očí hnědá vs. nehnědá na podmnožině markerů rs7495174, rs12913832; biogeografický původ běloch vs. asiat na podmnožině markerů rs16891982, rs1426654; barva vlasů světlé vs. tmavé na podmnožině markerů rs12896399, rs12913832, rs8049897, rs1667394. Součástí řešení je také sada pro provádění uvedeného způsobu, která obsahuje sondy komplementární k oběma alelám uvedených markerů.
Description
Způsob predikce viditelných fenotypových znaků a biogeografického původu, zejména pro forenzní účely
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká způsobu predikce lidských fenotypových znaků a biogeografického původu individua na základě genetické analýzy sady SNP markérů.
Dosavadní stav techniky
V současné době je forenzní genetika jedno z nejdůležitějších odvětví ve forenzních vědách. Molekulárně genetická analýza polymorfizmů DNA má téměř všechny vlastnosti „ideálního identifikačního systému“: důkazní materiál se nemění v čase, technika dovoluje určit jedinečné vlastnosti osoby, pomoci této techniky lze spojit osoby s místem činu a je poměrně levná a rychlá. Přesto, že současná analýza polymorfizmů DNA produkuje obvykle velice relevantní důkazy, má nízkou diskriminační sílu pro vyšetřovatele. To znamená, že pokud je k dispozici DNA profil podezřelého, který byl zatčen z důvodu nesouvisejících s DNA, anebo po prohledání databáze, analýza shody DNA profilu z místa činu a DNA podezřelého může být velmi silným důkazem. Ovšem pokud nemáme podezřelou osobu, analýza DNA z místa činu pomocí současných metod není schopná určit viditelné fenotypové znaky, které by mohly zmenšit množinu možných pachatelů.
Tato skutečnost byla podnětem ke vzniku studií, které se zabývají výzkumem oblastí lidského genomu, jejichž variabilita koreluje s viditelnými fenotypovými znaky. K rozšíření poznatků v této oblasti přispěly hlavně celogenomové studie, zahrnující různé populace. Takovým příkladem je Rotterdamská studie, obsahující celkem 7983 osob (Kayser M et al. Three genome-wide association situdies and a linkage analysis identify HERC2 as a human iris color gene, American Journal of Human Genetics 2008; 82(2):411-23; Liu F et al. Digital quantification of human eye color highlights genetic association of three new loci. PloS Genetics PLoS Genet. 2010 May 6; 6(5):e 1000934). Dalším příkladem je celogenomová studie islandské populace, která byla validována na nizozemské populaci (Sulem et al. Genetic determinants of hair, eye and skin pigmentation in Europeans. Nátuře Genetics 2007; 39: 1443 - 1452; Sulem et al. Two newly identified genetic determinants of pigmentation in Europeans, Nátuře Genetics 2008; 40: 835 - 837). Tyto studie identifikovaly několik majoritních genů, které se zúčastňují melanogeneze, procesu majícího zásadní význam při vzniku pigmentace jedince.
Melanogeneze probíhá v melanocytech, kde se vytvářejí melanosomy, jež jsou následně transportovány do keratinocytů, které chrání pokožku proti UV záření. Dle průběhu maturace se melanosomy rozdělují do dvou typů: feomelanosomy, u kterých se proces zrání zastaví na prvním stupni, a eumelanosomy, které prochází úplným procesem zrání. Feomelanosomy produkují světlý feomelanin, zatímco eumelanosomy produkují tmavší eumelanin. Proces melanogeneze začíná produkcí hormonů aktivujících MCR1 (melanocortin-receptor 1), které jsou stimulovány UV. MCR1 následně zvyšuje úroveň cAMP (cyklického adenosinmonofosfátu), což aktivuje transkripění faktory, které stimulují expresi proteinů zúčastňujících se zrání melanosomů (Scherer D et Kumar R, Genetics of pigmentation in skin cancer-a review, Mutation Research 2010; 705(2):141-53). První enzym, který přeměňuje tyrozin na melanin je TYR (tyrozináza), která je přítomná v obou typech melanosomů. Ostatní enzymy, TYRP1 (tyrosine-related protein) a DCT (dopachrome tautomerase), jsou potřebné ke tvorbě výhradně eumelaninu. Další skupinou proteinů, které se zúčastňují melanogeneze, jsou membránové transportéiy, které zajišťují transport iontů a malých molekul, jako např. tyrozin, a regulaci pH. Polymorfismy v těchto proteinech mohou být využity k predikci fenotypových znaků a s nimi spojeného biogeografického původu.
-1 CZ 304385 B6
Jedním z průkopníků v aplikaci těchto poznatků do forenzní genetiky byla vědecká skupina T. Frudakise, která se zabývala výzkumem a následnou aplikaci markérů určujících biogeografický původ (Frudakis T., Pharmacogenomics, 2008, DNAPrint Genomics, lne.: Better druigs for segmented markets, Feb;9(2):247-51). Byly provedeny studie, jejichž snahou bylo určené fenotypových znaků a biogeografického původu kosterních pozůstatků (Bouakaze et al. Pigment phenotype and biogeographical ancestry from ancient skeletal remains: inferences from multiplexed autosomal SNP analysis, International Journal of Legal Medicine 2009; 123: 315-325). Dalším a zatím nejúspěšnějším projektem určování fenotypových znaků, konkrétně barvy očí, je Irisplex (Walsh et al. IrisPlex: A sensitive DNA tool for accurate prediction of blue and brown eye colour in the absence of ancestry Information, Forensic Science International Genetics 2010; 5: 170— 180). Tato metoda je založena na analýze 6 SNP markérů z 6 různých genů (HERC2, OCA2, SLC24A4, SLC45A2, TYR, IRF4).
Dosud však nebyla vytvořena testovací sada umožňující určit všechny důležité fenotypové znaky s vysokou přesností.
Podstata vynálezu
Předmětem předkládaného vynálezu je způsob predikce viditelných fenotypových znaků a biogeografického původu osoby, zejména pro forenzní účely, stanovením genotypu markérů vykazujících jednonukleotidový polymorfismus (SNP markéry), jehož podstata spočívá v tom, že se stanoví genotyp následujících markérů vykazujících jednonukleotidový polymorfismus: rsl6891982, rs2031526, rsl2896399, rs7495174, rsl2913832, rs916977, rsl426654, rsl667394, rs28049897, a srovnáním s genotypovými kombinacemi podmnožin této skupiny markérů určujícími příslušnost ke skupině osob vykazujících daný fenotypový znak určenými na vzorku populace srovnáním genotypu a fenotypu se provede určení fenotypových charakteristik:
barva očí modrá vs. nemodrá na podmnožině markérů rsl 6891982, rs2031526, rsl2913832, rs916977;
barva očí hnědá vs. nehnědá na podmnožině markérů rs7495174, rs 12913832;
biogeografický původ běloch vs. asiat na podmnožině markérů rsl6891982, rsl426654;
barva vlasů světlé vs. tmavé na podmnožině markérů rsl2896399, rsl2913832, rs8049897, rsl667394.
Vyšetřením souhrnného multilokusového genotypu lze predikovat příslušné fenotypové znaky s přesností uvedenou níže v Tabulce 1.
Tabulka 1: Vlastnosti zvolených kombinací SNP markérů
| Sada | Popis - určovaní charakteristiky | SNP v sadě | Přesnost predikce |
| S1 | Barva očí: Modré vs Nemodré | rsl6891982, rs2031526, rsl2913832, rs916977 | >80% |
| S2 | Barva očí: Hnědé vs Nehnědé | rs7495174, rsl2913832 | >80% |
| S3 | Biogeografický původ: Běloch vs Asiat | rsl6891982,rsl426654 | >90% |
| S4 | Barva vlasů: světlé vs Tmavé | rsl2896399, rsl2913832, rs8049897, rsl 667394 | >70% |
-2CZ 304385 B6
S výhodou se genotypy určí metodou RealTime PCR.
Genotypové kombinace určující příslušnost ke skupině osob vykazujících daný fenotypový znak se s výhodou získají na vzorku populace tak, že se u jednotlivých osob z daného vzorku populace získají údaje o fenotypových znacích (barva očí, vlasů, biogeografický původ), následně se osobám odeberou vzorky DNA (např. bukálním stěrem), a tyto vzorky se rozdělí do skupin dle fenotypových znaků. U jednotlivých vzorků se pak provede izolace DNA a genotypování, tj. určení genotypu pro jednotlivé SNP markéry, a vytvoří se tabulky pravděpodobností nebo podílů šancí pro danou populaci porovnáním frekvencí jednotlivých fenotypů pro každý multilokusový genotyp.
Srovnání s genotypovými kombinacemi určujícími příslušnost ke skupině osob vykazujících daný fenotypový znak, a tedy určení genotypu neznámé osoby ze vzorku její DNA (například zanechané na místě kriminálního činu), se s výhodou provede tak, že se izoluje DNA ze vzorku, určí se genotyp uvedené sady SNP markérů a v tabulkách pravděpodobností nebo podílů šancí se najdou odpovídající multilokusové genotypy, a zjistí se pravděpodobnost nebo podíl šancí vyjadřující, kolikrát je pravděpodobnější, že daná neznámá osoba se zjištěným multilokusovým genotypem patří ke skupině vykazující daný fenotypový znak než ke skupině nevykazující daný fenotypový znak.
Předmětem předkládaného vynálezu je také sada pro provádění způsobu predikce viditelných fenotypových znaků a biogeografického původu, obsahující sondy komplementární k oběma alelám markérů vykazujících jednonukleotidový polymorfismus, kterými jsou rsl6891982, rs2031526, rsl2896399, rs7495174, rsl2913832, rs916977, rsl426654, rsl667394 a rs28049897. S výhodou jsou sondy značeny fluorescenčně.
V sadě podle předkládaného vynálezu jsou pro účely kontroly správného odečtení genotypu metodou Reál Time PCR s výhodou dále obsaženy i již amplifikované DNA všech třech možných genotypů u každého ze SNP markérů zahrnutých v panelu.
Předkládaný vynález poskytuje sadu SNP markérů, která dovoluje určit rychle a s velkou spolehlivostí fenotypové znaky neznámé osoby. Vysoké přesnosti predikce je dosaženo tím, že je založena na kombinacích SNP markérů. Ačkoliv jsou použité SNP markéry známy z literatury, jejich použití pro predikci v kombinacích v rámci uvedené sady nebylo dosud navrženo.
Uvedené kombinace byly vytvořeny na základě vlastní populační studie provedené na 131 vzorcích. Získaná data byla následně analyzována pomocí metody MDR (multifaktoriální redukce dimenzí). Tato metoda spočívá ve výběru kombinací SNP markérů s největší mírou predikce a nejriižší chybou predikce. K redukci dimenzí dochází díky tomu, že markéry se posuzují společně jako multilokusový genotyp. Po provedení této analýzy byly vybrány nejlepší modely (sady SNP markérů) pro každý sledovaný fenotypový znak (viz Tabulka 1).
Na základě výše popsané studie bylo vybráno 9 nejinformativnějších SNP uvedených v Tabulce 2. Všechny zkoumané SNP markéry jsou lokalizovány na autozomech. Přesnost predikce fenotypových znaků uvedená v Tabulce 1 byla určena pomocí metody multidimenzionální redukce.
-3 CZ 304385 B6
Tabulka 2: Přehled SNP markérů vybraných jako součást sady na základě vlastní populační stu die a dosavadních literárních údajů charakterizujících tyto SNP
| rs číslo | Gen | Chromo- zom | Publikace | Fragment DNA včetně polymorfního místa |
| rsl6891982 | SLC45A2 (MATP) | 5p | Ilan J et al., PLoS genetics, 2008, A genome-wide association study identifies novel alleles associated with hair color and skin pigmentation, May 16;4(5) | AGTTGATGCA[C/G]AAGCCC CAA |
| rs2031526 | DCT (TYRP2) | 13q | Myles S et al., Human Genetics, 2007, Identifying genes underlying skin pigmentation difřerences among human populations, 120(5):613-21 | GGGTAGGAA[ A/G] C AAAAGC AAA |
| rsl2896399 | SLC24A4 | 14q | Liu F et al., PloS genetics, 2010, Digital quantification of human eye color highlights genetic association of three new loci, May 6;6(5) | TATTTTGGG[G/T]TCTCTTTG TCAC |
| rs7495174 | 0CA2 | 15q | Kayser et al., American joumal of human genetics, 2008, Three genome-wide association studies and a linkage analysis identity HERC2 as a human iris color gene, 82(2):411-23 | TGTGCACACT[A/G]ACCTTTA GGG |
| rsl2913832 | HERC2 | 15q | Sturm RA et al., American joumal of human genetics, 2008, A single SNP in an evolutionary conserved region within intron 86 of the HERC2 gene determines human blue-brown eye color, 82(2):424-31 | TTGAGCATTAA[A/G]TGTCA AGTT |
| rs916977 | HERC2 | 15q | Han J et al., PLoS genetics, 2008, A genome-wide association study identifies novel alleles associated with hair color and skin pigmentation, May 16;4(5) | TTTGAGTAGA[C/T]AGAAGG CTGG |
| rs 1426654 | SLC24A5( NCKX5) | 15q | Nan H et al., International joumal of cancer, 2009, Genetic variants in pigmentation genes, pigmentary phenotypes, and risk of skin cancer in Caucasians, Aug 15;125(4) | TGTTGCAGGC[A/G]CAACTT TCAT |
| rsl667394 | OCA2 | 15q | Kayser et al., American joumal of human genetics, 2008, Three genome-wide association studies and a linkage analysis identity HERC2 as a human iris color gene, 82(2):411-23 | TTTGTTTGGT[A/G]TATGCAC GTT |
| rs28049897 | MCR1 | 16q | Nan H et al., The joural of investigative dermatology 2009, Genome-wide association study of tanning phenotype in a population of European ancestry,Sep;129(9):2250-7 | CTGAGGTAGAA|A/G]GGCAC GAG |
-4CZ 304385 B6
Vynález může být aplikován na lidskou DNA izolovanou kteroukoliv z běžných komerčně dostupných izolačních metod, na vzorky DNA získané manuální izolací na DNA získanou v robotizovaném procesu izolace v tzv. „high-throughput“ laboratořích.
Upřednostňovaný postup je založen na metodě RealTime PCR, lze však použít i další molekulárně genetické metody schopné detekovat vybrané SNP varianty lidského genomu. Takové metody jsou odborníkovi v daném oboru dobře známy.
Charakter vyšetřovaných polymorfísmů principiálně umožňuje aplikovat na vzorky rovněž některou z metod celogenomové amplifikace před vlastním vyšetřením multilokusového genotypu vybraných SNP markérů, pokud to nízká koncentrace zkoumané DNA ve výchozím vzorku vyžaduje.
Ve výhodném provedení vynálezu je izolovaná DNA podrobena vyšetření metodou RealTime PCR pomocí fluorescenčně označených sond. Každá ze sond je komplementární kjiné alele a je značenájinou fluorescenční značkou. Genotyp každého SNP markéru je detekován jednotlivě pomocí páru příslušných sond tak, aby byl v 9 separátních Reál Time PCR reakcích determinován správný genotyp vyšetřovaného vzorku DNA ve všech 9 SNP markérech.
Ke stanovení pravděpodobného fenotypu původce vyšetřované DNA lze využít podílu šancí. Význakem vynálezu je skutečnost, že genotyp lze určit například pomocí metody Real-Time PCR a že genotypy ve vybraných markérech se posuzují společně a interpretují se pomocí podílu šancí.
Získané výsledky dovolují predikovat fenotypové charakteristiky a biogeografický původ pomocí pravděpodobností nebo s použitím podílu šancí (O - odds). O(X=1) v tomto případě lze zapsat následně: O(X=l)=P(X=l|Gx)/P(X=0|Gx), kde Gx - genotyp osoby X, symbol „|“ značí „za předpokladu“, X=1 - osoba patří ke skupině 1, X=0 - osoba patří ke skupině 0. Podíl šancí vyjadřuje kolikrát je pravděpodobnější, že osoba X se zjištěným genotypem patří ke skupině 1, než ke skupině 0.
Podíly šancí pro přesnou interpretaci konkrétního výsledku v rámci zkoumané populace se zjistí, jakje uvedeno výše, populační studií.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Populační studie- vyšetření SNP markérů pomocí metody RealTime PCR
Zkoumaný populační vzorek obsahoval celkem 131 nepříbuzných osob, ze kterých bylo 31 Asiatů (Kazachů) a 100 bělochů. Vzorky DNA z bukální sliznice byly odebrány po vyplnění sebehodnotícího dotazníku a podepsání informovaného souhlasu. Dotazník obsahoval otázky ohledně barvy očí, vlasů a původu jak dotazovaného, tak i jeho blízkých příbuzných (rodiče a prarodiče). Byly provedeny čtyři analýzy, zkoumané vzorky byly pro účely každé analýzy rozděleny do dvou skupin (viz Tab. 3).
-5CZ 304385 B6
Tabulka 3: Rozdělení zkoumaných vzorků do skupin
| Modré vs nemodré oči | Hnědé vs nehnědé oči | Běloši vs Asiati | Světlé vs Tmavé vlasy |
| Modré 47, označení 1 | Hnědé 66, označení 1 | Běloši 100, označení 1 | Světlé 46, označení 1 |
| Nemodré 84, označení 0 | Nehnědé 65, označení 0 | Asiati 31, označení 0 | Tmavé 85, označení 0 |
DNA z bukálních stěrů byla izolována pomocí DNA QIAmp Blood Mini Kit (QIAGEN, Německo) na přístroji QIAcube. Výsledný objem eluátu byl 150 μΐ. Průměrná koncentrace DNA v eluátu byla 10 ng/μΐ. Koncentrace byla změřena pomocí přístroje NanoDrop (Thermo Fisher Scientific, USA).
Genotypizační analýza byla provedená pomocí modulu Allelic Discrimination na přístroji 7900 HT Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems, USA) při použití fluorescenčně označených sond. Každá ze sond byla komplementární kjiné alele a byla značená jinou barvou. Každý SNP markér byl detekován jednotlivě pomocí páru příslušných sond a vyhodnocení probíhalo na základě stanovení intenzity fluorescenčního signálu konkrétní barvy. Vstupní množství DNA do reakce bylo minimálně 10 ng.
Tabulky 4 až 7 ukazují predikční schopnosti souhrnných multilokusových genotypů pro jednotlivé fenotypové znaky získané jako výsledek této populační studie:
Tabulka 4: Podíly šancí
| Barva oči: modré (1) vs nemodré (0) | |||
| Genotyp (v pořadí markérů rsl6891982, rs2031526, rsl2913832, rs916977) | P(X=l|Gx) | P(X=0|Gx) | O(X=1) |
| GG,AG,AA,CT | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| GG,AG,AA,CC | 0,7500 | 0,2500 | 3,0000 |
| GG,AG,AA,TT | 1,0000 | 0,0533 | 18,7449 |
| GG,AG,AG,CT | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| GG,AG,AG,CC | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| GG,AG,AG,TT | 1,0000 | 0,0533 | 18,7449 |
| GG,AG,GG,CC | 1,0000 | 0,0533 | 18,7449 |
| GG,GG,AA,CT | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| GG,GG,AA,CC | 0,2500 | 0,7500 | 0,3333 |
| GG,GG,AA,TT | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| GG,GG,AG,CT | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| GG,GG,AG,CC | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
-6CZ 304385 B6
| GG,GG,AG,TT | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| GG,GG,GG,CC | 0,8462 | 0,1538 | 5,5000 |
| GG,GG,GG,TT | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| GG,AA,AA,CC | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| GG,AA,AG,CT | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| GG,AA,GG,CC | 1,0000 | 0,0533 | 18,7449 |
| CG,AG,AA,CT | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| CG,AG,AA,TT | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| CG,AG,AG,CT | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| CG,AG,AG,CC | 1,0000 | 0,0533 | 18,7449 |
| CG,AG,AG,TT | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| CG,AG,GG,CC | 0,5000 | 0,5000 | 1,0000 |
| CG,AG,GG,TT | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| CG,GG,AA,CT | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| CG,GG,AA,CC | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| CG,GG,AA,TT | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| CG,GG,AG,CT | 0,5000 | 0,5000 | 1,0000 |
| CG,GG,GG,CC | 0,6000 | 0,4000 | 1,5000 |
| CG,AA,AA,CC | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| CG,AA,AG,CT | 0,5000 | 0,5000 | 1,0000 |
| CC,AG,AA,CT | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| CC,AG,AA,CC | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| CC,AG,AA,TT | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| CC,AG,AG,CT | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| CC,AG,GG,TT | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| CC,AA,AA,CC | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| CC,AA,AG,CT | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
| cc,aa,ag,tt | 0,0933 | 1,0000 | 0,0933 |
-7 CZ 304385 B6
Tabulka 5: Podíly šancí
| Barva oči: hnědé (1) vs nehnědé (0) | |||
| Genotyp (v pořadí markérů rs7495174, rs 12913832) | P(X=l|Gx) | P(X=0|Gx) | O(X=1) |
| AG,AA | 0,6667 | 0,3333 | 2,0000 |
| ag,ag | 0,8125 | 0,1875 | 4,3333 |
| GG,AA | 0,1111 | 0,8889 | 0,1250 |
| ΑΑ,ΑΑ | 1,0000 | 0,0684 | 14,6205 |
| ΑΑ,Αθ | 0,7879 | 0,2121 | 3,7143 |
| AA,GG | 0,0833 | 0,9167 | 0,0909 |
Tabulka 6: Podíly šancí
| Biogeografický původ: Běloch (1) vs Asiat (0) | |||
| Genotyp (v pořadí markérů rsl6891982 , rsl426654) | P(X=l|Gx) | P(X=0|Gx) | O(X=1) |
| GG,AA | 1,0000 | 0,1380 | 7,2439 |
| GG,AG | 0,5000 | 0,5000 | 1,0000 |
| GG,GG | 0,0450 | 1,0000 | 0,0450 |
| CG,AA | 0,8421 | 0,1579 | 5,3333 |
| CG,AG | 0,0450 | 1,0000 | 0,0450 |
| CG,GG | 0,0450 | 1,0000 | 0,0450 |
| CC,AA | 0,0450 | 1,0000 | 0,0450 |
| CC,AG | 0,0450 | 1,0000 | 0,0450 |
| CC,GG | 0,0450 | 1,0000 | 0,0450 |
-8CZ 304385 B6
Tabulka 7: Podíly šancí
| Barva vlasů: světlé (1) vs tmavé (0) | |||
| Genotyp (v pořadí markérů rsl2896399, rsl2913832, rs8049897, rsl667394 | P(X=l|Gx) | P(X=0,Gx) | O(X=1) |
| GT,AA,GG,AG | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
| GT,AA,GG,AA | 0,7143 | 0,2857 | 2,5000 |
| GT,AA,GG,GG | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
| GT,AA,AG,AG | 1,0000 | 0,0527 | 18,9620 |
| GT,AA,AG,AA | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
| GT,AA,AG,GG | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
| gt,aa,aa,aa | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
| GT,AA,AA,GG | 1,0000 | 0,0527 | 18,9620 |
| gt,ag,gg,ag | 0,1429 | 0,8571 | 0,1667 |
| gt,ag,gg,gg | 0,0909 | 0,9091 | 0,1000 |
| gt,ag,ag,ag | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
| gt,ag,ag,gg | 0,5000 | 0,5000 | 1,0000 |
| gt,ag,aa,ag | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
| gt,ag,aa,aa | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
| GT,AG,AA,GG | 1,0000 | 0,0527 | 18,9620 |
| GT,GG,GG,AA | 0,6000 | 0,4000 | 1,5000 |
| GT,GG,GG,GG | 0,8889 | 0,1111 | 8,0000 |
| GT,GG,AG,AA | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
| gt,gg,ag,gg | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
| gg,aa,gg,ag | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
| GG,AA,GG,AA | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
| GG,AA,GG,GG | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
| gg,aa,ag,aa | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
| GG,AA,AG,GG | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
| gg,ag,gg,ag | 0,1111 | 0,8889 | 0,1250 |
| gg,ag,gg,aa | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
| gg,ag,gg,gg | 0,2000 | 0,8000 | 0,2500 |
| GG,AG,AG,AG | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
| gg,ag,ag,gg | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
| GG,AG,AA,AA | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
| GG,GG,GG,AA | 0,4615 | 0,5385 | 0,8571 |
| GG,GG,GG,GG | 0,6667 | 0,3333 | 2,0000 |
| GG,GG,AG,AA | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
-9CZ 304385 B6
| GG,GG,AG,GG | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
| GG,GG,AA,AA | 1,0000 | 0,0527 | 18,9620 |
| TT,AA,GG,GG | 1,0000 | 0,0527 | 18,9620 |
| TT,AG,GG,AG | 0,0953 | 1,0000 | 0,0953 |
| TT,AG,GG,AA | 0,5000 | 0,5000 | 1,0000 |
| TT,AG,GG,GG | 1,0000 | 0,0527 | 18,9620 |
| TT,GG,GG,AA | 1,0000 | 0,0527 | 18,9620 |
| TT,GG,GG,GG | 0,5000 | 0,5000 | 1,0000 |
| TT,GG,AG,AA | 1,0000 | 0,0527 | 18,9620 |
| TT,GG,AG,GG | 1,0000 | 0,0527 | 18,9620 |
| TT,GG,AA,GG | 1,0000 | 0,0527 | 18,9620 |
Příklad 2
Stanovení fenotypu a biogeografického původu na příkladu 5 vzorků DNA
U pěti dobrovolníků byly odebrány vzorky bukální sliznice, ze kterých byla izolována jaderná DNA pomocí Blood Mini Kit (QIAGEN, Germany). Výsledný objem eluátu byl 150 μΐ. Následně byla provedena amplifikace s použitím primerů a sond (TaqMan, Applied Biosystems, USA) pro vybraných 9 SNP markérů. Tato analýza byla provedena na přístroji 7900 HT Fast RealTime PCR System (Applied Biosystems, USA), modul Allelic Discrimination. Po zjištění genotypů analyzovaných osob, byl vypočítán věrohodnostní poměr pro všechny čtyři kombinace SNP markérů.
Podíl šancí určuje, zdaje pravděpodobnější, že pokud zkoumaná osoba má daný genotyp, patří do skupiny 1 nebo patří do skupiny 0. Například u biogeografického původu do skupiny 0 (jmenovatel) patří osoby asijského původu, do skupiny 1 (čitatel) patří osoby bělošského původu (viz Tabulka 5). V čitateli je potom frekvence osob se stejným genotypem jako zkoumaná osoba, která patří do skupiny 1, ve jmenovateli je osob se stejným genotypem jako zkoumaná osoba, které patří do skupiny 0. O(X=l)=P(X=l|Gx)/P(X=0|Gx), kde Gx - genotyp osoby X, symbol „|“ značí „za předpokladu“, X=1 - osoba patří ke skupině 1, X=0 - osoba patří ke skupině 0.
Výsledky výpočtu podílu šancí jsou představeny v Tabulce 8. Pokud O(X=1) se rovná jedné anebo číslu blízkému k jedné, pak lze výsledek považovat za nerozhodný, protože pravděpodobnost čitatele se rovná pravděpodobnosti jmenovatele, neboli zjištěný genotyp má stejnou frekvenci jak ve skupině 1, tak i ve skupině 0. Pokud O(X=1)>1, potom osoba s takovým genotypem pravděpodobněji patří do skupiny 1. Pokud O(X=1)<1, potom osoba s takovým genotypem pravděpodobněji patří do skupiny 0. Pro výpočet podílu šancí byla použita ve všech případech data prezentovaná v Tabulkách 4 až 7.
-10CZ 304385 B6
Tabulka 8: Příklady predikce fenotypových znaků pomocí vybraných kombinací SNP markérů
| Číslo osoby | Barva oči: modré (1) vs nemodré (0) | ||||
| P(X=l|Gx) | P(X=0Gx) | O(X=1)* | Predikovaná skupina | Skutečná skupina | |
| 1 | 0,0934 | 1,0000 | 0,0934 | 0 | 0 |
| 2 | 0,0934 | 1,0000 | 0,0934 | 0 | 0 |
| 3 | 0,8462 | 0,1538 | 5,5020 | 1 | 1 |
| 4 | 0,0934 | 1,0000 | 0,0934 | 0 | 0 |
| 5 | 0,8462 | 0,1538 | 5,5020 | 1 | 1 |
| Číslo osoby | Barva oči: hnědé (1) vs nehnědé (0) | ||||
| P(X=l|Gx) | P(X=0|Gx) | O(X=1)* | Predikovaná skupina | Skutečná skupina | |
| 1 | 0,8125 | 0,1875 | 4,3333 | 1 | 1 |
| 2 | 0,7879 | 0,2121 | 3,7143 | 1 | 1 |
| 3 | 0,0833 | 0,9167 | 0,0909 | 0 | 0 |
| 4 | 0,7879 | 0,2121 | 3,7143 | 1 | 1 |
| 5 | 0,0833 | 0,9167 | 0,0909 | 0 | 0 |
| Číslo osoby | Biogeografický původ: běloch (1) vs Asiat (0) | ||||
| P(X=l|Gx) | P(X=0|Gx) | O(X=1)* | Predikovaná skupina | Skutečná skupina | |
| 1 | 1,0000 | 0,1378 | 7,2569 | 1 | 1 |
| 2 | 1,0000 | 0,1378 | 7,2569 | 1 | 1 |
| 3 | 1,0000 | 0,1378 | 7,2569 | 1 | 1 |
| 4 | 0,0450 | 1,0000 | 0,0450 | 0 | 0 |
| 5 | 1,0000 | 0,1378 | 7,2569 | 1 | 1 |
| Číslo osoby | Barva vlasů: světlé (. | ) vs tmavé (0) | |||
| P(X=l|Gx) | P(X=0|Gx) | O(X=1)* | Predikovaná skupina | Skutečná skupina | |
| 1 | 0,1111 | 0,8889 | 0,1250 | 0 | 0 |
| 2 | 0,0909 | 0,9091 | 0,1000 | 0 | 0 |
| 3 | 0,6667 | 0,3333 | 2,0003 | 1 | 0 |
| 4 | 0,1429 | 0,8571 | 0,1667 | 0 | 0 |
| 5 | 0,5000 | 0,5000 | 1,0000 | - | 1 |
| * O(X=l)=P(X=l|Gx)/P(X=0 C | IX) |
- 11 CZ 304385 B6
Claims (6)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Způsob predikce viditelných fenotypových znaků a biogeografického původu osoby, zejména pro forenzní účely, stanovením genotypu markérů vykazujících jednonukleotidový polymorfismus, vyznačený tím, že se stanoví genotyp následujících markérů vykazujících jednonukleotidový polymorfismus: rsl6891982, rs2031526, rsl2896399, rs7495174, rsl2913832, rs916977, rsl426654, rsl667394, rs28049897, a srovnáním s genotypovými kombinacemi podmnožin této skupiny markérů určujícími příslušnost ke skupině osob vykazujících daný fenotypový znak, určenými na vzorku populace srovnáním genotypu a fenotypu, se provede určení fenotypových charakteristik:barva očí modrá vs. nemodrá na podmnožině markérů rs 16891982, rs2031526, rs 12913832, rs916977;barva očí hnědá vs. nehnědá na podmnožině markérů rs7495174, rsl2913832;biogeografický původ běloch vs. asiat na podmnožině markérů rsl6891982, rsl426654;barva vlasů světlé vs. tmavé na podmnožině markérů rsl2896399, rsl2913832, rs8049897, rsl667394.
- 2. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že se genotypy určí metodou RealTime PCR.
- 3. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že se určení fenotypových charakteristik provádí metodou podílu šancí.
- 4. Sada pro provádění způsobu podle nároku 1 nebo 2, vyznačená tím, že obsahuje sondy komplementární k oběma alelám markérů vykazujících jednonukleotidový polymorfismus, kterými jsou rsl6891982, rs2031526, rsl2896399, rs7495174, rsl2913832, rs916977, rsl 426654, rsl667394 a rs28049897.
- 5. Sada podle nároku 4, vyznačená tím, že sondy jsou značeny fluorescenčně.
- 6. Sada podle nároku 4 nebo 5, vyznačená tím, že dále obsahuje amplifikované DNA všech třech možných genotypů u každého ze SNP markérů zahrnutých v panelu.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2012-793A CZ304385B6 (cs) | 2012-11-15 | 2012-11-15 | Způsob predikce viditelných fenotypových znaků a biogeografického původu, zejména pro forenzní účely |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2012-793A CZ304385B6 (cs) | 2012-11-15 | 2012-11-15 | Způsob predikce viditelných fenotypových znaků a biogeografického původu, zejména pro forenzní účely |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2012793A3 CZ2012793A3 (cs) | 2014-04-09 |
| CZ304385B6 true CZ304385B6 (cs) | 2014-04-09 |
Family
ID=50436541
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2012-793A CZ304385B6 (cs) | 2012-11-15 | 2012-11-15 | Způsob predikce viditelných fenotypových znaků a biogeografického původu, zejména pro forenzní účely |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ304385B6 (cs) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002097047A2 (en) * | 2001-05-25 | 2002-12-05 | Dnaprint Genomics, Inc. | Compositions and methods for the inference of pigmentation traits |
| WO2011107973A2 (en) * | 2010-03-05 | 2011-09-09 | Erasmus University Medical Center Rotterdam | Method for prediction of human iris color |
-
2012
- 2012-11-15 CZ CZ2012-793A patent/CZ304385B6/cs not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002097047A2 (en) * | 2001-05-25 | 2002-12-05 | Dnaprint Genomics, Inc. | Compositions and methods for the inference of pigmentation traits |
| WO2011107973A2 (en) * | 2010-03-05 | 2011-09-09 | Erasmus University Medical Center Rotterdam | Method for prediction of human iris color |
Non-Patent Citations (10)
| Title |
|---|
| Eriksson N et al. Web-based, participant-driven studies yield novel genetic associations for common traits. PLoS Genetics, 2010, 6(6), e1000993. * |
| Han J et al. A genome-wide association study identifies novel alleles associated with hair color and skin pigmentation. PLoS Genetics, 2008, 4(5), e1000074. * |
| Kastelic V, Drobnic K. Single multiplex system of twelve SNPs: Validation and implementation for association of SNPs with human eye and hair color. Forensic Science International: Genetics Supplement Series, 2011, 3, e216-e217. * |
| Mengel-From J et al. Human eye colour and HERC2, OCA2 and MATP. Forensic Science International: Genetics, 2010, 4, 323-328. * |
| Myles S et al. Identifying genes underlying skin pigmentation differences among human populations. Human Genetics, 2007, 120, 613-621. * |
| Ruiz Y et al. Further development of forensic eye color predictive tests. Forensic Science International: Genetics, 2013, 7, 28-40, publikováno online v cervnu 2012. * |
| Soejima M, Koda Y. Population differences of two coding SNPs in pigmentation-related genes SLC24A5 and SLC45A2. International Journal of Legal Medicine, 2007, 121, 36-39. * |
| Spichenok O et al. Prediction of eye and skin color in diverse populations using seven SNPs. Forensic Science International: Genetics, 2011, 5, 472-478. * |
| Sturm RA et al. A single SNP in an evolutionary conserved region within intron 86 of the HERC2 gene determines human blue-brown eye color. The American Journal of Human Genetics, 2008, 82, 424-431. * |
| Walsh S et al. IrisPlex: A sensitive DNA tool for accurate prediction of blue and brown eye colour in the absence of ancestry information. Forensic Science International: Genetics, 2011, 5, 170-180. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2012793A3 (cs) | 2014-04-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Freire-Aradas et al. | Development of a methylation marker set for forensic age estimation using analysis of public methylation data and the Agena Bioscience EpiTYPER system | |
| KR101768415B1 (ko) | 미백 피부 타입 유전자 다형성 마커 및 이의 용도 | |
| Pneuman et al. | Verification of eye and skin color predictors in various populations | |
| Haidar et al. | Forensic DNA phenotyping using next-generation sequencing | |
| CZ304385B6 (cs) | Způsob predikce viditelných fenotypových znaků a biogeografického původu, zejména pro forenzní účely | |
| RU2746055C1 (ru) | Способ диагностики мутации c.-23+1G>A (rs80338940) гена GJB2 | |
| CN109321658A (zh) | 一种检测宫颈癌易感性的试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20181115 |