CZ307488B6 - Sloučeniny na bázi cyklamu, jejich konjugáty, cílicí konjugáty, koordinační sloučeniny, farmaceutický přípravek je obsahující, způsob jejich přípravy a jejich použití - Google Patents

Sloučeniny na bázi cyklamu, jejich konjugáty, cílicí konjugáty, koordinační sloučeniny, farmaceutický přípravek je obsahující, způsob jejich přípravy a jejich použití Download PDF

Info

Publication number
CZ307488B6
CZ307488B6 CZ2015-825A CZ2015825A CZ307488B6 CZ 307488 B6 CZ307488 B6 CZ 307488B6 CZ 2015825 A CZ2015825 A CZ 2015825A CZ 307488 B6 CZ307488 B6 CZ 307488B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
cooh
cycle
ncs
groups selected
nco
Prior art date
Application number
CZ2015-825A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ2015825A3 (cs
Inventor
Tomáš David
Petr Hermann
Vojtěch Kubíček
Original Assignee
Univerzita Karlova V Praze
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univerzita Karlova V Praze filed Critical Univerzita Karlova V Praze
Priority to CZ2015-825A priority Critical patent/CZ307488B6/cs
Priority to EP16815699.0A priority patent/EP3377504B1/en
Priority to PCT/CZ2016/050043 priority patent/WO2017084645A1/en
Priority to GB1805528.5A priority patent/GB2560269A/en
Publication of CZ2015825A3 publication Critical patent/CZ2015825A3/cs
Publication of CZ307488B6 publication Critical patent/CZ307488B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6524—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having four or more nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/0002—General or multifunctional contrast agents, e.g. chelated agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A61K49/0041—Xanthene dyes, used in vivo, e.g. administered to a mice, e.g. rhodamines, rose Bengal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A61K49/0041—Xanthene dyes, used in vivo, e.g. administered to a mice, e.g. rhodamines, rose Bengal
    • A61K49/0043—Fluorescein, used in vivo
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
    • A61K49/0052—Small organic molecules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/0402—Organic compounds carboxylic acid carriers, fatty acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/041—Heterocyclic compounds
    • A61K51/044—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine, rifamycins
    • A61K51/0453—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine, rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/041—Heterocyclic compounds
    • A61K51/044—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine, rifamycins
    • A61K51/0459—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine, rifamycins having six-membered rings with two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, e.g. piperazine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/0474—Organic compounds complexes or complex-forming compounds, i.e. wherein a radioactive metal (e.g. 111In3+) is complexed or chelated by, e.g. a N2S2, N3S, NS3, N4 chelating group
    • A61K51/0482—Organic compounds complexes or complex-forming compounds, i.e. wherein a radioactive metal (e.g. 111In3+) is complexed or chelated by, e.g. a N2S2, N3S, NS3, N4 chelating group chelates from cyclic ligands, e.g. DOTA
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/0489—Phosphates or phosphonates, e.g. bone-seeking phosphonates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/0497—Organic compounds conjugates with a carrier being an organic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/06—Macromolecular compounds, carriers being organic macromolecular compounds, i.e. organic oligomeric, polymeric, dendrimeric molecules
    • A61K51/065—Macromolecular compounds, carriers being organic macromolecular compounds, i.e. organic oligomeric, polymeric, dendrimeric molecules conjugates with carriers being macromolecules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/088—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins conjugates with carriers being peptides, polyamino acids or proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1027—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against receptors, cell-surface antigens or cell-surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1093—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody conjugates with carriers being antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6558—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system
    • C07F9/65583—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system each of the hetero rings containing nitrogen as ring hetero atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/94—Bismuth compounds

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Předmětem předkládaného řešení jsou sloučeniny na bázi cyklamu obecného vzorce I, konjugáty těchto sloučenin a konjugační skupiny, jejich koordinační sloučeniny, cílicí konjufáty, způsob přípravy sloučenin na bázi cyklamu, meziprodukty pro přípravu sloučenin na bázi cyklamu, farmaceutický přípravek je obsahující a jejich použití.

Description

Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká sloučenin na bázi cyklámu, obsahujících tetraazamakrocyklus a bisfosforovou kyselinu, konjugátů těchto sloučenin a konjugační skupiny, jejich koordinačních sloučenin, cílícího konjugátů, způsobu přípravy sloučenin na bázi cyklámu, meziproduktů pro přípravu sloučenin na bázi cyklámu, farmaceutického přípravku je obsahujícího a jejich použití.
Dosavadní stav techniky
Polyazamakrocykly s koordinujícími postranními řetězci tvoří termodynamicky velmi stabilní komplexy s širokou škálou iontů kovů, jež jsou často také kineticky vysoce inertní. Tyto jejich vlastnosti jsou velice žádané pro aplikace v medicíně a molekulární biologii. Proto jsou tyto ligandy a jejich komplexy široce studovány a jejich vlastnosti přizpůsobovány konkrétnímu použití, např. jako MR1 kontrastní látky, nosiče radionuklidů kovů v diagnostických nebo terapeutických metodách, cílená léčiva či luminiscenční sondy.
Velmi mocné diagnostické metody moderní medicíny jsou pozitronová emisní tomografie (PET) nebo tomografická scintigrafie (single-photon emission tomography - SPÉCT), které jsou založeny na aplikaci radioizotopů, tj. protony-bohatých izotopů prvků, které podléhají β+rozpadu (pro PET) nebo vyzařujících gamma-záření (pro SPÉCT). Pro PET, kolize emitovaného pozitronu s elektronem z okolní tkáně vede ke vzniku páru kolineámích γ-fotonů (majících energii 512 keV), které umožňují přesné zjištění anihilačního místa a tím pádem i distribuce radioizotopu v těle. PET vyžaduje použití radioizotopů s vhodným poločasem rozpadu, nízkou energií emitovaných pozitronů a dobrou dostupností (např. nekovové radioizotopy I8F, nC, 15O nebo radioizotopy kovů jako 68Ga, 44 Sc, 89Zr). Velký zájem vzbudil radioizotop mědi 64Cu (61 % β) díky svému dlouhému poločasu rozpadu (tjq 12,8 h) a nízké energii pozitronů (£av 0,65 MeV), což vede k velkému rozlišení v PET. Další radioizotopy mědi, pozitron emitující 60Cu (tj/2 23,7 min, 100 % β+) a 61Cu (τ,/2 3,3 h, 100 % β+), jsou v PET využívány také, a β-emitující 67Cu (T]/2 61.8 h, 100 % β ) je využíván v radionuklidové terapii. Radioizotopy 64Cu a 67Cu tvoří zajímavý teranostický pár (jeden izotop je použit pro diagnózu a druhý izotop pro terapii).
Radioizotopy kovů většinou nemohou být aplikovány ve formě volného iontu kvůli nespecifickému ukládání v tkáních. Aby bylo dosaženo požadované biodistribuce, musí být ion kovu vázán v termodynamicky stabilním a kineticky inertním komplexu a tento komplex je často konjugován k cílicímu vektoru. Existují různé chelátory pro tvorbu termodynamicky stabilních a kineticky inertních komplexů kovů, přičemž makrocyklické ligandy jsou preferovány. Pro komplexaci radioizotopů mědi jsou využívány acyklické i makrocyklické ligandy, např. kyselina diethylentriaminpentaoctová (H5dtpa), 1,4,8,11-tetraazacyklotetradekan (cyklám), kyselina
I, 4,8,11-tetraazacyklotetradekan-l,4,8,11-tetraoctová (H4teta), kyselina 1,4,7,10tetraazacyklododekan-l,4,7,10-tetraoctová (H4dota), jejich monoamidy a jiné deriváty. Jejich vlastnosti však pro komplexaci iontů měďnatých nejsou optimální, zejména kvůli pomalé komplexaci, nízké kinetické inertnosti a nevhodnému redox potenciálu posunutému k měďným iontům, a proto byly zkoumány další ligandy, např. deriváty přemostěného cyklámu, které tvoří kineticky velmi inertní komplexy, jsou však zatížené velmi pomalou komplexaci.
Příprava různých makrocyklických ligandů na bázi cyklenu (1,4,7,10-tetraazacyklododekan) či cyklámu (1,4,8,11-tetraazacyklotetradekan), s pendantní skupinou obsahující fosfor, popř. arsen, je popsána např. v US 2008/0312430 AI nebo WO2015/038968. Dokument Fuzerová S., Kotek
J. , Císařová I., Hermann P., Binnemans K, Lukeš I., Dalton Trans., 2005, 2908 - 2915, popisuje
-1 CZ 307488 B6 syntézu, potenciometrické a NMR titrace a krystalografickou strukturu Ugandu na bázi cyklámu s pendantní fosfonovou kyselinou a jeho komplexů s mědí. Dokument Kotek J., Lubal P., Hermann P., Císařová I., Lukeš I., Godula T., Svobodová 1., Táborský P., Havel J., Chem. Eur. J., 2003, 9, No. 1, 233 - 248, popisuje analogickou sloučeninu, která však obsahuje dvě pendantní fosfonové kyseliny v trans poloze. Také tato publikace se zabývá syntézou, potenciometrií a krystalografickou studií ligandu a jeho komplexů s mědí. Z obou posledně jmenovaných dokumentů vyplývá, že jedna fosfonová skupina se koordinuje na Cun a vytváří termodynamicky stabilní a kineticky inertní komplex. Druhá fosfonová skupina přítomná ve sloučenině studované v Kotek J., Lubal P., Hermann P., Císařová I., Lukeš I., Godula T., Svobodová L, Táborský P., Havel J., Chem. Eur. J., 2003, 9, No. 1, 233 - 248 se na měďnatý ion nekoordinuje a termodynamická stabilita měďnatých komplexů obou zmíněných ligandů je srovnatelná. Citované látky však nejsou bifunkční, nemohou tedy být navázány na cílící vektor, díky kterému by se při biodistribuci dostaly selektivně do konkrétního místa v těle. Navíc, přestože citované látky tvoří stabilní komplexy s mědí, rychlost komplexace není dostatečná na to, aby se výsledný komplex vytvořil rychle a pokud možno za laboratorní teploty. Pro praktické použití v radiodiagnostice či radioterapii tedy tyto látky nejsou vhodné pro svou neselektivní biodistribuci a nízkou rychlost komplexace.
Pro cílenou biodistribuci a snížení aplikované dávky se využívá konjugace komplexu a cílícího vektoru. Cílícími vektory mohou být např. různé peptidy, protilátky a jejich fragmenty nebo deriváty, biotin, kyselina folová, cyklodextriny, dendrimery, polymery, polysacharidy.
Nevýhodou současného stavu techniky je absence látek o vysoké specifické aktivitě, což je veličina, udávající procentuální zastoupení komplexu radioizotopu v celkové dávce léčiva. Tato veličina úzce souvisí se schopností ligandů rychle a pokud možno za laboratorní teploty vytvořit termodynamicky stabilní a kineticky inertní koordinační sloučeninu s radionuklidem o vhodném poločasu rozpadu a které by zároveň obsahovaly cílící vektor, a byly by tudíž vhodné pro aplikace při diagnostických (např. PET, SPÉCT) a terapeutických metodách. Existující ligandy efektivně komplexují radionuklidy až při teplotách kolem 80 °C a vyšších, zatímco při laboratorní teplotě je jejich komplexace velice pomalá. S tím souvisí například ztráty komplexu radioizotopů s rychlým poločasem rozpadu, vysoké finanční náklady spojené s přípravou radioizotopových komplexů i zatížení pacienta, vystaveného aplikaci vysokých dávek léčiva pro dosažení kýženého efektu.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález se týká sloučenin na bázi cyklámu a/nebo přemostěného cyklámu pro terapii a diagnostiku, obsahujícího kyselinu bisfosforovou, které se vyznačují vysokou specifickou aktivitou. Tyto sloučeniny podle předkládaného vynálezu rychle a selektivně komplexují ionty kovů, zejména Cu2+, a vyznačují se tvorbou termodynamicky stabilních a kineticky inertních koordinačních sloučenin. Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou dále vytvářet konjugáty s konjugačními skupinami a dále cílící konjugáty s cílícími vektory, které zajišťují jejich cílenou distribuci v organismu.
Předmětem předkládaného vynálezu jsou sloučeniny na bázi cyklámu pro terapii a diagnostiku obecného vzorce I,
-2CZ 307488 B6
kde
R, Ra, R1, R2, R3 jsou nezávisle vybrány ze skupiny zahrnující
H, OH, (Cl až C6)alkyl, který může být lineární nebo rozvětvený, (C3 až C6)cykloalkyl, benzyl, fenyl, (C5-C6) heterocyklus, obsahující alespoň jeden heteroatom N, S, O, a/nebo R1 a/nebo R2 a/nebo R3 je bisfosforová kyselina obecného vzorce II
a/nebo dohromady R1 a R3 tvoří (C2 až C3)alkylen, který může být substituovaný jedním nebo více lineárními nebo rozvětvenými (Cl až C6)alkyly, přičemž (Cl až C6)alkyl, (C3 až C6)cykloalkyl, fenyl, benzyl a (C5-C6)heterocyklus, obsahující alespoň jeden heteroatom N, S, O, mohou být nezávisle substituovány jednou nebo více skupinami vybranými z COOH; NH2; NO2, NX2; C(O)NX2; NHX; C(O)NHX; OH; SH; -NCS; tetrazin obecného vzorce III;
Y (III) (C7 až C8)cykloalkenyl v trans konfiguraci, který může být popřípadě dále substituován jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; norbomenyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; -N3; (C2 až C6)alkynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; cyklooktynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; cykloazaoktynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více
-3 CZ 307488 B6 skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; maleinimid; fenyl; benzyl a -P(O)(OH)Z;
a kde R4 a R4a jsou nezávisle H, (Cl až C6)alkyl, který může být lineární nebo rozvětvený, (C3 až C6)cykloalkyl, benzyl;
a kde R5 a R5a jsou nezávisle H, (Cl až C6)alkyl, který může být lineární nebo rozvětvený, (C3 až C6)cykloalkyl, benzyl, přičemž (Cl až C6)alkyl, (C3 až C6)cykloalkyl a benzyl mohou být nezávisle substituovány jednou nebo více skupinami vybranými z COOH; NH2; NO2, NX2; C(O)NX2; NHX; C(O)NHX; OH; SH; -NCS; tetrazin obecného vzorce III; (C7 až C8)cykloalkenyl v trans konfiguraci, který může být popřípadě dále substituován jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; norbomenyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; -N3; (C2 až C6)alkynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2,-NCS, -NCO, N3 a SH; cyklooktynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; cykloazaoktynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, NCO, N3 a SH; maleinimid; fenyl; benzyl a-P(O)(OH)Z;
a kde R6 a R6aje H;
a kde R7, R8, R9 a R10 jsou nezávisle vybrané ze skupiny zahrnující H, (Cl až C6)alkyl, (C3 až C6)cykloalkyl, benzyl, NO2 a/nebo dohromady R7 a R8 obsahují (C2 až C3)alkylen nebo vinylen a/nebo dohromady R9 a R10 obsahují (C2 až C3)alkylen nebo vinylen, přičemž (Cl až C6)alkyl, (C3 až C6)cykloalkyl, benzyl, (C2 až C3)alkylen a vinylen mohou být nezávisle substituovány skupinou nebo skupinami vybranými z COOH; NH2; NO2; NX2; C(O)NX2; SH; tetrazin obecného vzorce III; (C7 až C8)cykloalkenyl v trans konfiguraci, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; norbornenyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; -N3; (C2 až C6)alkynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; cyklooktynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; cykloazaoktynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; maleinimid; fenyl; benzyl a-P(O)(OH)Z, kde Y je H, (Cl až C6)alkyl, -CH2COOH, (C5 až C6)heterocyklus, obsahující alespoň jeden heteroatom N, S, O, nebo heteroaryl, obsahující alespoň jeden heteroatom N, S, O, s výhodou je Y atom vodíku, methyl nebo pyridyl; Z je H; OH; (Cl až C6)alkyl, který může být lineární nebo rozvětvený; (Cl až C6)hydroxyalkyl; (Cl až C6)alkoxyl; fenyl nebo benzyl, přičemž fenyl nebo benzyl mohou být popřípadě substituovány jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, N3 a SH, s výhodou je substituent v para poloze; a X je nezávisle H; (Cl až C6)alkyl, který může být lineární nebo rozvětvený; (C3 až C6)cykloalkyl; fenyl a/nebo benzyl;
přičemž (Cl až C6)alkyl, (C3 až C6)cykloalkyl, fenyl a/nebo benzyl mohou být nezávisle substituovány jednou nebo více skupinami vybranými z COOH; NH2; NO2, NX2; C(O)NX2; NHX; C(O)NHX; SH; tetrazin obecného vzorce III; (C7 až C8)cykloalkenyl v trans konfiguraci, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; norbornenyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; -N3; (C2 až C6)alkynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; cyklooktynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; cykloazaoktynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; maleinimid; fenyl; benzyl a-P(O)(OH)Z;
přičemž alespoň jedna ze skupin R, Ra, R1, R2, R3, R4, R4a, R5, R5a, R6, R6a, R7, R8, R9 a R10 obsahuje alespoň jednu ze skupin -COOH; NH2; NO2, NX2, NHX; C(O)NHX; N3; SH; -NCS; tetrazin obecného vzorce III; (C7 až C8)cykloalkenyl v trans konfiguraci, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, NX2, -NCS, -NCO, NHX; C(O)NHX; N3 a SH; norbornenyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, NX2, -NCS, -NCO, NHX; C(O)NHX; N, a SH; -N3, (C2 až
-4CZ 307488 B6
C6)alkynyl; cyklooktynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, NX2, -NCS, -NCO, NHX; C(O)NHX; N3 a SH; cykloazaoktynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, NX2, -NCS, -NCO, NHX; C(O)NHX; N3 a SH; maleinimid; fenyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, NX2, -NCS, -NCO, NHX, C(O)NHX, N3 a SH; benzyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, NX2, -NCS, -NCO, NHX, C(O)NHX, N3 a SH; (Cl až C6) alkyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, NX2, -NCS, -NCO, NHX, C(O)NHX, N3 a SH; a -P(O)(OH)Z.
V jednom provedení vynálezu R a R dohromady tvoří (C2 až C3)alkylen, který může být substituovaný (Cl až C6)alkylem, který může být lineární nebo rozvětvený.
V jiném provedení vynálezu jsou R, Ra, R1, R2, R3, R4, R4a, R5, R5a, R6 a R6a nezávisle vybrány ze skupiny zahrnující H; (Cl až C6)alkyl, který může být lineární nebo rozvětvený; (C3 až C6)cykloalkyl; benzyl; fenyl; (C5-C6)heterocyklus, obsahující alespoň jeden heteroatom N, S, °;
a/nebo R1 a/nebo R2 a/nebo R3 je bisfosforová kyselina obecného vzorce II, s výhodou je alespoň jedna ze skupin R1, R2 a R3 bisfosforová kyselina obecného vzorce II, nejvýhodněji je R2 bisfosforová kyselina obecného vzorce II.
Ve výhodném provedení je R2 je vybrán ze skupiny zahrnující H; (Cl až C6)alkyl, který může být lineární nebo rozvětvený; (C3 až C6)cykloalkyl; benzyl; fenyl; (C5 až C6)heterocyklus, obsahující alespoň jeden heteroatom N, S, O; a bisfosforovou kyselinu obecného vzorce II.
-5 CZ 307488 B6
J3 o
'1
-O §
c δ
o
X kO
G
X>
ε
O
Ό «M
CO o
PÍ
P' .
PÍ
PÍ
O
PÍ
PÍ pí
PÍ
PÍ pí
ÍC
ÍC o
X>
CM
O a
a o
o o
CM a
υ u
-o a 'pí o 5 N TU > « § &
JI >> PÍ 44
.
>, >%
N N
G G
43 «3
X3 X3
a u
Ό >
cu ε
-ω
G
Ό
O >
ε '43
G >>
§ §o +-* m
N
O cn ·—i >>
S §
Pí a
ω
G
O, «3 §
t
Z o
CZ3 á, a
<D
X)
O •o n
«}
CM z**s
N
CQ
Sm-Z %
a z
CM a
o a
o o
o
CM
CM a
u t/5 o
o?
>ó >%
G •ε o
>o
O
ΓΊ
K-i oo cn ir>
ΓΊ
Γ-Ι
-6CZ 307488 B6
s B B B B B B B B B B B B E B
E B B B B B B B B B B B B B B
B B B B B B B B B B B B B B B
B B B B E B B S B B B S B B B
B B B B B B B B B B B B B B B
B B B B B B B E B B B B B B B
B B B B B B E m E O B B B B B B B
O 3 * ~ II B eá g o « £ O! g * 73 11 « « . Š * CM B O O X—z d< CM B U i CM B O O cu B1 O 1 N C o 33 B B B B B kyselina vzorce II , kde Ra = R, R48 až R6a = H ω ’Ο 33 < 7 bwd Λ cd « >N a « o « N TJ > OC g od 73 11 cn « . £ * kyselina vzorce II , kde Ra = R,R4aažR6a = H kyselina vzorce II , kde Ra = R, R4a až R6a = H kyselina vzorce II, kde Ra = OH, R4a až R6a = H kyselina vzorce II , kde
m B u >» a o 33 B CU 33 B 1 CM CM B O CM B* O < » CM CM B O CM CM B O 1 CM £ o 1 1 CM B* O 1 1 CM CM B O » CM CM B O i CM CM B O 1 < CM E* U 1
m B O 0* X) B CM E O c~\ o <57 CM B O cm B O z~\ o Oh CM B O
B O O U CM z“S CM B o \-Z 1 B O B O B O B O B B O B a 0) 33 .1 '5 1 B B O CM B o t B O B O O O CM CM B O 1 B N C3 U 33 *s i
m CM CM CM ^3 C4 r- CM 00 CM CM O cc m CM Γ*Ί IT> m O cn
-7CZ 307488 B6
X 53 53 53 53 53
X 53 53 53 53 53
£ 53 53 53 53 53
X 53 53 53 53 X
53 53 X 53 53 X
53 53 53 53 53 X
53 £ 53 53 53 X
χ II « ¢4 « ¢4 O II a j o3 kyselina vzorce II , kde Ra = OH, R4a až R6a = H kyselina vzorce II, kde Ra = OH, R4a až R6a = H O Hrt II a o3 8 u w O j ň c4 ·> s a s ° 73 || w 2 >> ^4 K £ O CM 53 U £ o o of £ o 1 CM £ o z**\ o pí CM 53 υ CM z“\ X o o p7 CM X u 1
CM CM 53 U 1 1 CM CM 53 O 1 t CN CM 53 υ I 1 CN CM 53 υ 1 CM z**s CM 53 U i 1 CM x—-\ CM X u 1
p-aminobenzyl N c <L> X) § t/5 £ o £ s 1 a. Ts a <υ X> o >1 4-» ’2 ά. T, a 4» X) 2 *3 ά. 72. £ ω x> o .s
00 C*“) O C<í O CM m
-8CZ 307488 B6
Předmětem předkládaného vynálezu je rovněž konjugát sloučeniny na bázi cyklámu podle předkládaného vynálezu a alespoň jedné konjugační skupiny, která je ke sloučenině na bázi cyklámu kovalentně vázána a která je vybraná ze skupiny obsahující OH, -COOH; NH2; NX2, NHX; C(O)NHX; tetrazin obecného vzorce III norbomenyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, NX2, -NCS, -NCO, NHX; C(O)NHX; N3 a SH; cykloazaoktynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, -NCS, -NCO, C(O)NHX, (Cl až C6)alkyl, (C6)aryl; maleinimid; a -P(O)(OH)Z; přičemž konjugát může mezi sloučeninou na bázi cyklámu a konjugační skupinou a/nebo mezi dvěma konjugačními skupinami dále obsahovat spacer, vybraný ze skupiny obsahující (Cl až C6)walkyl, popřípadě substituovaný C=O a/nebo -NH- skupinou; fenylen; řetězce aminokyselin o délce 1 až 5 aminokyselin; polyethylenglykoly o 1 až 10 monomemích jednotkách.
Předmětem předkládaného vynálezu jsou rovněž koordinační sloučeniny sloučenin na bázi cyklámu obecného vzorce I nebo konjugátů podle předkládaného vynálezu s kationty kovů vybraných ze skupiny sestávající z Cu2+, Bi3+, kationty lanthanoidů, Sc3+, Y3+, Pb2+, Zr4+, Ac3+, Mn2+ a Mn3+, s výhodou kationty lanthanoidů, Bi3+, Y3+ a Cu2+, výhodněji Lu3+, Bi3+, Y3+ a Cu2+. Kationty kovů mohou být s výhodou radioizotopy kovů, zejména radioizotopy mědi, lutecia, bismutu a yttria.
Předmětem předkládaného vynálezu je rovněž cílící konjugát, který obsahuje sloučeninu na bázi cyklámu obecného vzorce I a/nebo konjugát a/nebo koordinační sloučeninu podle předkládaného vynálezu a cílící vektor, vybraný ze skupiny zahrnující bis(fosfonáty), fluorescein, oligopeptidy o 1 až 15 aminokyselinách, protilátky, s výhodou rituximab, kyselinu listovou, biotin, cyklodextriny, PAMAM dendrimery, hydrofilní polyakryláty a polyakrylamidy.
Předmětem vynálezu je rovněž způsob přípravy sloučenin na bázi cyklámu obecného vzorce I podle předkládaného vynálezu, kdy se meziprodukt obecného vzorce IV,
(IV) kde R11, R12, R13 a R14 jsou v následujících kombinacích:
Meziprodu- kt R R17 R13 1Ú4
A H H H OH
B H H H 77-nitrobenzyl
C H H II -CH2N(benzyl)2
D H H H -(CH2)2COOH
E H -(CH2)4COOH H H
F OH -(CH2)3NH(4-dibenzylcyklooktynamidobutoxyl) OH OH
nebo sloučenina, vybraná ze skupiny obsahující methylen—bis(fosfinovou kyselinu), kyselinu fosforitou, kyselinu hydroxymethylfosfínovou, podrobí reakci s derivátem cyklámu a aldehydem ve vodném roztoku kyseliny o koncentraci v rozmezí od 10 do 40 % hmotn. s výhodou v rozmezí od 18 do 36 % hmotn., při teplotě v rozmezí od 40 do 80 °C po dobu alespoň 12 hodin;
-9CZ 307488 B6 přičemž derivátem cyklámu je 1,4,8,11-tetraazacyklotetradekan a jeho deriváty a 1,4,8,11tetraazabicyklo[6.6.2]hexadekan a jeho deriváty, s výhodou je derivát cyklámu vybraný ze skupiny zahrnující 1,4,8,11-tetraazacyklotetradekan, 1,4,8,1 l-tetraazabicyklo[6.6.2]hexadekan, l,4,8-trimethyl-l,4,8,l 1-tetraazacyklotetradekan, l,8-dimethyl-l,4,8,l 1tetraazacyklotetradekan, l,8-dibenzyl-l,4,8,l 1-tetraazacyklotetradekan, l,4-dibenzyl-l,4,8,l 1tetraazacyklotetradekan, 6,13-dimethyl-6,13-dinitro-l,4,8,l 1-tetraazacyklotetradekan; aldehyd je vybraný ze skupiny obsahující acetaldehyd, formaldehyd a para-formaldehyd, a kyselinou je s výhodou HCI a/nebo CF3COOH; a přičemž reakci může předcházet krok přípravy meziproduktu.
V jednom provedení způsobu přípravy sloučenin na bázi cyklámu obecného vzorce I podle předkládaného vynálezu se výsledný produkt dále podrobí redukci.
V jiném provedení způsobu přípravy sloučenin na bázi cyklámu obecného vzorce I podle předkládaného vynálezu se výsledný produkt dále podrobí oxidaci.
V jiném provedení způsobu přípravy sloučenin na bázi cyklámu obecného vzorce podle předkládaného vynálezu se výsledný produkt dále podrobí reakci s aldehydem; a popřípadě meziproduktem obecného vzorce nebo sloučeninou, vybranou ze skupiny obsahující methylenbis(fosfinovou kyselinu), kyselinu fosforitou, kyselinu hydroxymethylfosfinovou; ve vodném roztoku kyseliny, s výhodou HCI nebo CF3COOH.
V jiném provedení při způsobu přípravy sloučenin na bázi cyklámu obecného vzorce I podle předkládaného vynálezu po kroku redukce následuje krok, kdy se produkt redukce podrobí reakci s CSCI2 nebo COC12.
V jiném provedení při způsobu přípravy sloučenin na bázi cyklámu obecného vzorce I podle předkládaného vynálezu po kroku redukce následuje krok, kdy se výsledný produkt redukce podrobí reakci s NaN3.
Předmětem předkládaného vynálezu je rovněž meziprodukt obecného vzorce IV,
(IV) kde R11, R12, R13 a R14 jsou v následujících kombinacích:
Meziprodu- kt R11 r„ RIJ “Ř14
B H H H p-nitrobenzyl
C H H H -CH2N(benzyl)2
D H H H -(CII2)2COOH
E H -(CH2)4COOH H H
F OH -(CH2)3NH(4-dibenzylcyklooktynamidobutoxyl) OH OH
- 10CZ 307488 B6
Předmětem vynálezu je také farmaceutický přípravek, který obsahuje alespoň jednu sloučeninu na bázi cyklámu podle předkládaného vynálezu a/nebo alespoň jeden konjugát podle předkládaného vynálezu a/nebo alespoň jednu koordinační sloučeninu podle předkládaného vynálezu a/nebo alespoň jeden cílící konjugát podle předkládaného vynálezu, a farmaceuticky přijatelný nosič.
Předmětem vynálezu je rovněž sloučenina na bázi cyklámu podle předkládaného vynálezu a/nebo alespoň jeden konjugát podle předkládaného vynálezu a/nebo alespoň jedna koordinační sloučenina podle předkládaného vynálezu a/nebo alespoň jeden cílící konjugát podle předkládaného vynálezu a/nebo farmaceutický přípravek podle předkládaného vynálezu pro použití jako léčivo, s výhodou při léčbě nádorových onemocnění, zánětů a/nebo aterosklerózy. Zejména koordinační sloučeniny podle vynálezu s radioizotopy kovů, s výhodou radioizotopy mědi, lutecia, bismutu a yttria, jsou vhodné pro použití jako léčivo při radioterapii.
Předmětem vynálezu je sloučenina na bázi cyklámu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 a/nebo alespoň jeden konjugát podle předkládaného vynálezu a/nebo alespoň jedna koordinační sloučenina podle předkládaného vynálezu a/nebo alespoň jeden cílící konjugát podle předkládaného vynálezu a/nebo farmaceutický přípravek podle předkládaného vynálezu pro použití jako kontrastní látky v lékařské diagnostice, s výhodou při diagnostice nádorových onemocnění, zánětů a/nebo aterosklerózy. Pro luminiscenční metody v lékařské diagnostice jsou zejména vhodné koordinační sloučeniny podle vynálezu s kationty troj mocných lanthanoidů, pro magnetickou nukleární resonanci (NMR, MRI) jsou vhodné koordinační sloučeniny gadolinia.
Předmětem vynálezu je použití sloučenin na bázi cyklámu podle předkládaného vynálezu a/nebo konjugátů podle předkládaného vynálezu a/nebo koordinační sloučeniny podle předkládaného vynálezu a/nebo cílícího konjugátů podle předkládaného vynálezu a/nebo farmaceutického přípravku podle předkládaného vynálezu v radiochemii jako značek nebo prekurzorů značek při značení pomocí radioizotopů mědi, lutecia, bismutu a yttria, s výhodou pomocí radioizotopů mědi, výhodněji 64Cu.
Předmětem vynálezu je použití sloučenin na bázi cyklámu podle předkládaného vynálezu a/nebo konjugátů podle předkládaného vynálezu a/nebo koordinační sloučeniny podle předkládaného vynálezu a/nebo cílícího konjugátů podle předkládaného vynálezu ke komplexaci a/nebo čištění radioizotopů mědi.
Příklady uskutečnění vynálezu
Příklad 1: Příprava látky 1
NH HN
Do skleněné vialky (4 mL) byl navážen 1,4,8,11-tetraazacyklotetradekan (205 mg; 1,02 mmol; 5,0 ekviv.). Dále byly postupně přidány methylen-bis(fosfinová kyselina) (85,6 mg; 594 pmol; 2,9 ekviv.), acetaldehyd (9,0 mg; 205 pmol; 1,0 ekviv.) a vodná HC1 (6 M; 2 mL). Vzniklá suspenze byla míchána přes noc při 80 °C. Druhý den byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; Hforma; H2O —> 10% vodný pyridin). Pyridinová frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Odparek byl rozpuštěn v H2O (25 mL) a vzniklý roztok byl lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (35,0 mg; 40%; 1 krok; vztaženo na acetaldehyd).
NMR (D2O): ’Η δ 1,16 (C//3, dd, 3H, 3JHp = 15 Hz, 2./„ιι = 7 Hz); 1,73-2,00 (P—CH—P, CH2— CH2—CH2, m, 5H); 2,08 (P—C//2—P, dddd, 1H, VHh = 19 Hz, 2./IIP = 16 Hz, VHp = 12 Hz, 3JHh = 4 Hz); 2,52-3,24 (C/P—N, m, 16H); 3,37 (CH—CH3, dq, 1H, 2./llP = 14 Hz, 2JHh = 7 Hz); 7,12 (P7Í dd, 7Hp = 534 Hz, 2JHh = 4 Hz); 13C{’H} £6,3 (CH3, bm); 23,9 (CH2—CH2—CH2, s); 26,2 (CH2—CH2—CH2, s); 34,2 (P—CH2—P, dd, 1JCP = 78 Hz, 1JCP = 73 Hz); 44,8 (cyklus, s); 46,4 (cyklus, s); 46,5 (cyklus, s); 46,7 (cyklus, s); 49,4 (cyklus, s); 49,6 (cyklus, d, Hqp = 10 Hz); 50,0 (cyklus, s); 50,6 (cyklus, s); 52,0 (N—CH—P, d, 'jCp = 109 Hz); 31P δ 19,1 (PH, dtd, IP, ’Λη = 534 Hz, 2Jph = 16 Hz, 2JPP = 4 Hz); 35,5 (N—CH—P, m, IP).
MS: (-) 368,8 [M-H | . (+) 371,0 [M+H+]+; 392,9 [M+Na+]+; 408,9 [M+K+]+.
TLC (SiO2, /-PrOH-konc. NH4OH-H2O 7:3:3): R{ = 0,7.
EA (CI3H32N4O4P2-3,5H2O, Mr = 433,4): C 36,0 (35,6); H 9,1 (8,9); N 12,9 (13,2).
Příklad 2: Příprava látky 2
Do skleněné vialky (4 mL) byl navážen tetrahydrochlorid l,4,8_trimethyl-l,4,8,l 1tetraazacyklotetradekanu (65,2 mg; 168 pmol; 1,0 ekviv.). Dále byly postupně přidány methylenbis(fosfinová kyselina) (73,2 mg; 508 pmol; 3,0 ekviv.), acetaldehyd (8,1 mg; 184 pmol; 1,1 ekviv.) a vodná HCI (6 M; 2 mL). Vzniklá suspenze byla míchána dva dny při 60 °C. Druhý den byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O -> 10% vodný pyridin). Pyridinová frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Odparek byl následně znovu rozpuštěn v H2O (50 mL). Takto vzniklý roztok byl lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (48,7 mg; 63%; 1 krok; vztaženo na acetaldehyd).
NMR (D2O): ’Η δ 1,19 (C/A-C, dd, 3H, 3JHp = 16 Hz, 2./„H = 7 Hz); 1,68 (CH2—C//2—CH2, m, 4H); 1,81 (P—C/A—P, m, 1H); 1,98 (P—CH2—P, m, 1H); 2,25 (CH3—N, m, 3H); 2,27 (CH3— N, s, 6H); 2,48-3,16 (CH2—N, m, 16H); 3,41 (CH— CH3, dq, 1H, 2/Hp = 15 Hz, 2./,,h = 7 Hz); 7,13 (PH, dm, = 533 Hz); 13C{'H} č 7,1 (CH3—C, s); 21,4 (CH2—CH2—CH2, s); 22,7 (CH2—CH2—CH2, s); 35,2 (P—CH2—P, dd, './Cp = 77 Hz, 'jCp = 73 Hz); 43,6 (CH3—N, s); 43,7 (CH3—N, s); 43,9 (CH3—N, s); 46,2 (cyklus, s); 48,2 (cyklus, s); 50,0 (cyklus, s); 50,8 (cyklus, d, 3JCP = 8 Hz); 51,3 (cyklus, d, 3JCp = 9 Hz); 51,9 (cyklus, s); 53,5 (cyklus, s); 53,6 (cyklus, s); 56,5 (N—CH2—P, d, Vcp = 109 Hz); 31P δ 19,7 (PH, dtd, IP, 'jPH = 533 Hz, 2JPH = 16 Hz, 2JPp = 3 Hz); 32,1 (N—CH—P, m, IP).
MS: (-) 410,9 [M-H+]C (+) 413,1 [M+H+]+; 435,1 [M+Na+]+; 451,0 [M+K+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 4:1): Rf= 0,3.
EA (C16H38N4O4P2-2,5H2O, Mr = 457,4): C 42,0 (42,3); H 9,5 (9,1); N 12,3 (12,2).
Příklad 3: Příprava látky 3
- 12CZ 307488 B6
Do skleněné baňky (25 mL) byl navážen tetrahydrochlorid l,8-dimethyl-l,4,8,l 1tetraazacyklotetradekanu (1,56 g; 4,17 mmol; 2,5 ekviv.). Dále byly postupně přidány methylenbis(fosfinová kyselina) (480 mg; 3,33 mmol; 2,0 ekviv.), paraformaldehyd (50 mg; 1,67 mmol; 1,0 ekviv.) a vodná HC1 (6 M; 5 mL). Vzniklá suspenze byla míchána přes noc při 80 °C. Druhý den byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O -> 10% vodný pyridin). Pyridinová frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (SiO2; EtOH-konc. NH4OH 4:1; R{ = 0,4). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. K odparku byla přidána H2O (25 mL) a malé množství aktivního uhlí a vzniklá suspenze byla přefiltrována přes stříkačkový mikrofiltr (Millipore; 0,22 pm). Filtrát byl znovu čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O -> 10% vodný pyridin). Pyridinová frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s
H2O. Odparek byl rozpuštěn v H2O (25 mL) a vzniklý roztok byl lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (215 mg; 29 %; 1 krok; vztaženo na paraformaldehyd).
NMR (D2O): 'Η δ 1,70 (CH2—C//2—CH2, p, 2H, VHh = 7 Hz); 1,76 (CH2—CH2—CH2, p, 2H, 3Jhh = 7 Hz); 2,03 (P—CH2—P, ddd, 2H, 2./Hp = 18 Hz, 2JHp = 16 Hz, 3JHh = 2 Hz); 2,24 (CT/3, s, 3H); 2,30 (CH3, s, 3H); 2,50 (cyklus, t, 2Η, \/Hii = 7 Hz); 2,57 (cyklus, m, 4H); 2,66 (cyklus, t, 2Η, 3JHh = 7 Hz); 2,69-2,82 (cyklus, N—CIP—P, m, 10H); 7,14 (PH, dt, 7Hp = 531 Hz, 3.7hh = 2 Hz); 13C{’H} δ 23,0 (CH2—CH2—CH2, s); 23,6 (CH2—CH2—CH2, s); 35,9 (P—CH2—P, dd, Vcp = 77 Hz, ’jCp = 75 Hz); 43,5 (cyklus, s); 43,2 (CH3, s); 43,8 (CH3, s); 44,8 (cyklus, s); 51,1 (cyklus, d, 3JCP = 8 Hz); 52,2 (cyklus, s); 53,1 (cyklus, s); 53,4 (cyklus, s); 53,5 (cyklus, d, 3JCP = 6 Hz); 53,7 (cyklus, s); 56,1 (N—CH2—P, d, 'Jcp = 109 Hz); 31P δ 19,8 (PH, dtd, IP, = 531 Hz, 2Λη = 18 Hz, 2Λρ = 3 Hz); 32,5 (N—CH—P, m, 1P).
MS: (-) 382,6 [M-lf j . (+) 384,6 [M+H+]+; 406,8 [M+Na+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 4:1): R{ = 0,4.
EA (CI4H34N4O4P2-3,5H2O, MR = 447,5): C 37,6 (37,5); H 9,2 (9,0); N 12,5 (12,4).
Příklad 4: Příprava látky 4
Me.
Me'
Do skleněné vialky (4 mL) byl navážen tetrahydrochlorid l,4,8-trimethyl-l,4,8,l 1tetraazacyklotetradekanu (37,8 mg; 99,7 pmol; 1,0 ekviv.). Dále byly postupně přidány methylen-bis(fosfinová kyselina) (55,6 mg; 386 pmol; 3,9 ekviv.), paraformaldehyd (5,6 mg; 210 pmol; 2,1 ekviv.) a vodná HC1 (6 M; 2 mL). Vzniklá suspenze byla míchána dva dny při 60 °C. Druhý den byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O -> 10% vodný pyridin). Pyridinová frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Odparek byl následně znovu rozpuštěn v H2O (25 mL). Takto vzniklý roztok byl lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (35,4 mg; 82%; 1 krok; vztaženo na paraformaldehyd).
- 13 CZ 307488 B6
NMR (D2O): 'Η δ 1,71 (CH2—Cf/2-CH2, m, 4H); 2,04 (P—CH—P, ddd, 2H, 2JHP = 18 Hz, Vhp = 16 Hz, 3JHh = 2 Hz); 2,24 (CH3, m, 6H); 2,27 (CTÍ, s, 3H); 2,47-2,64 (cyklus, m, 12H); 2,75 (cyklus, m, 2H); 2,81 (N—CH2—P, d, 2H, 3íHh = 9 Hz); 2,84 (cyklus, m, 2H); 7,14 (PH, dt, Vhp = 531 Hz, Vhh = 2 Hz); l3C{'H} Č2O,2 (CH2—CH2—CH2, s); 20,6 (CH2—CH2—CH2, s);
35,4 (P—CH2—P, t, 'íCp = 77 Hz); 43,5 (CH3, s); 43,7 (CH3, s); 43,8 (CH3, s); 49,0 (cyklus, s);
49,2 (cyklus, s); 49,6 (cyklus, s); 50,0 (cyklus, d, 3íCp = 8 Hz); 52,1 (cyklus, d, 3ÍCP = 8 Hz); 52,2 (cyklus, s); 53,4 (cyklus, s); 53,5 (cyklus, s); 56,7 (N—CH?—P, d, 'íCp = 109 Hz); 31P δ 19,7 (PH, dtd, 1P, 'íph = 531 Hz, 2ÍPH = 18 Hz, 2ÍPP = 3 Hz); 32,1 (N—CH—P, m, 1P).
MS: (-) 396,8 [M-H+]“. (+) 399,0 [M+H+]+; 421,0 [M+Na+]+; 437,0 [M+K+]+TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 4:1): R{ = 0,2.
EA (CI4H34N4O4P2-2H2O, Aír = 434,5): C 41,5 (41,8); H 9,3 (9,1); N 12,9 (12,9).
Příklad 5: Příprava látky 5
Do skleněné vialky (20 mL) byl navážen tetrahydrochloríd 1,8—dibenzyl—1,4,8,11— tetraazacyklotetradekanu (506 mg; 959 μιτιοί; 2,0 ekviv.) a methylen-bis(fosfmová kyselina) (136 mg; 944 μιτιοί; 2,0 ekviv.). Dále byla postupně přidána CF3COOH (5 mL) a vodná HC1 (12 M, 5 mL). K vzniklé suspenzi byl přidán paraformaldehyd (20,9 mg; 474 pmol; 1,0 ekviv.) a směs byla poté zahřívána při 80 °C dva dny. Poté byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H?O. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (SiO2; EtOH-konc. NH4OH 5:1; Pf = 0,6). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. K odparku byla přidána H2O (25 mL) a malé množství aktivního uhlí a vzniklá suspenze byla přefiltrována přes stříkačkový mikrofiltr (Millipore; 0,22 pm). Filtrát byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; 50 mL; H+-forma; voda —> 10% vodný pyridin). Pyridinová frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Odparek byl následně znovu rozpuštěn v H2O (100 mL) a takto vzniklý roztok byl lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (146 mg; 54%; 1 krok; vztaženo na paraformaldehyd).
NMR (D2O): č 1,82 (CH2—CTT2—CH2, m, 4H); 2,05 (P—CTT2—P, dd, 2H, VHp = 18 Hz, 2Íhp = 15 Hz); 2,46-2,61 (cyklus, m, 6H); 2,74-3,12 (cyklus, N—CH—P, m, 10H); 3,68 (CTT2—Ph, s, 2H); 3,75 (CÍT2- Ph, s, 2H); 7,14 (PH, d, 'jHp = 529 Hz); 7,22-7,35 (Ph, m, 10H); 13C{!H} <724,1 (CH2-CH2—CH2, s); 27,2 (CH2—CH2_CH2, s); 37,1 (P—CH2—P, dd, 'íCP = 79 Hz, 'íCP = 71 Hz); 41,6 (cyklus, s); 42,2 (cyklus, s); 50,1 (cyklus, d, 3íCp = 7 Hz); 52,2 (cyklus, s); 53,3 (cyklus, s); 53,4 (cyklus, s); 53,8 (cyklus, d, 3JCp = 9 Hz); 54,2 (cyklus, s); 56,2 (CH2—Ph, s); 58,8 (N— CH2—P, d, 'JCP = 105 Hz); 59,1 (CH2—Ph, s); 124,1 (Ph, s); 126,4 (Ph, s); 128,1 (Ph, s); 128,3 (Ph, s); 128,9 (Ph, s); 130,8 (Ph, s); 138,1 (Ph, s); 139,1 (Ph, s); 31P Č26,4 (PH, dm, IP, X = 529 Hz); 34,3 (N—CH-P, m, IP).
MS: (-) 535,1 [M-H+]'· (+) 537,1 [M+H+]+; 559,2 [M+Na+]+; 581,4 [M-H++2Na+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 5:1): Pf = 0,6.
EA (C26H42N4O4P2-2H2O, Mp = 572,6): C 54,5 (54,7); H 8,1 (7,7); N 9,8 (10,0).
Příklad 6: Příprava látky 6
- 14CZ 307488 B6
Ve skleněné baňce (50 mL) byla rozpuštěna navážka látky 5-2H2O (103 mg; 180 pmol; 1,0 ekviv.) ve vodné HC1 (1%; 10 mL). Následně byl přidán roztok HgCl2 (83,1 mg; 306 pmol; 1,7 ekviv.) v H2O (10 mL) a vzniklá směs byla míchána přes noc při 60 °C. Druhý den byla vzniklá sraženina odfiltrována a promyta H2O. Do matečného louhu pak byl zaváděn plynný H2S. Vzniklá sraženina byla odfiltrována a promyta vodou a filtrát byl následně odpařen do sucha. Odparek byl dále dosušen pomocí vakuové pumpy a následně v evakuovaném exsikátoru nad P2O5. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (106 mg; 84%; 1 krok; vztaženo na látku 5-2H2O).
NMR (D2O): 'Η δ 1,76 (CH2—CH2—CH2, p, 2H, 3./HH - 4 Hz), 1,88 (CH2—CH2—CH2, m 2H); 2,03 (P—CH2 P, dd, 2H, 2./Hp = 18 Hz, 2./hi> = 14 Hz); 2,44 (cyklus, m, 2H); 2,51-2,63 (cyklus, m, 4H); 2,69-3,30 (cyklus, N—QH2—P, m, 10H); 3,72 (CH2—Ph, s, 2H); 3,74 (CH2—Ph, s, 2H); 7,16 (Ph, m, 2H); 7,25-7,34 (Ph, m, 8H); ^{'Η} £24,9 (CH2—CH2— CH2, s); 26,9 (CH2— CH2—CH2, s); 36,6 (P—CH2—P, dd, ’jCp = 114 Hz, 'jCp = 70 Hz); 40,8 (cyklus, s); 42,2 (cyklus, s); 50,3 (cyklus, d, 3./ci> ~ 7 Hz); 52,8 (cyklus, s); 53,5 (cyklus, s); 53,6 (cyklus, s); 53,8 (cyklus, d, 37cp = 9 Hz); 54,8 (cyklus, s); 55,3 (CH2—Ph, s); 58,8 (CH2—Ph, s); 60,1 (N—CH2—P, d, ’Jcp = 106 Hz); 125,2 (Ph, s); 125,9 (Ph, s); 128,1 (Ph, s); 128,3 (Ph, s); 130,0 (Ph, s); 130,2 (Ph, s); 138,5 (Ph, s); 140,3 (Ph, s); 31P{'H} £21,4 (HO—P—OH, d, IP, 2JPp = 9 Hz); 33,3 (N—CH— P, d, IP, 2Λρ = 9 Hz).
MS: (-)551,1 [M-H+] .
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 5:1): R{ = 0,2.
EA (C26H42N4O5P2-3.5HC1H2O, Mr = 698,2): C 44,7 (45,0); H 6,9 (6,7); N 8,0 (8,1).
Příklad 7: Příprava meziproduktu A
O O
HO OH
Ve skleněné baňce byla rozpuštěna navážka methylen-bis(fosfmové) kyseliny (2,50 g;
17,4 mmol; 1,0 ekviv.) v H2O (50 mL). Následně byl přidán roztok HgCl2 (5,90 g; 21,7 mmol;
1,2 ekviv.) v H2O (50 mL) a vzniklá směs byla míchána 3 dny při 60 °C. Následně byla vzniklá sraženina odfiltrována a promyta H2O. Do matečného louhu byl pak zaváděn plynný H2S. Vzniklá sraženina byla odfiltrována a promyta vodou a filtrát byl následně odpařen do sucha. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (SiO2; zPrOH-konc. NH4OH-H2O 7:3:3; Af = 0,2). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. K odparku byla přidána H2O (100 mL) a malé množství aktivního uhlí a vzniklá suspenze byla přefiltrována přes stříkačkový mikrofíltr (Millipore; 0,22 pm). Filtrát byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O). Vodná frakce byla odpařena do sucha a odparek byl dále dosušen pomocí vakuové pumpy a následně v evakuovaném exsikátoru nad P2O5. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (1,24 g; 42%; 1 krok; vztaženo na methylen—bis(fosfinovou kyselinu)).
- 15 CZ 307488 B6
NMR (D2O): ’Η δ 1,93 {CH,—P, tm, 2H, 2JHP = 18 Hz); 7,10 (P/7, dm, 1H, ’jHp = 526 Hz); ,3C{’H} <5 34,6 (CH2, dd, './CP = 114 Hz, 'jCp = 78 Hz); 3IP δ 12,3 (HO—P—OH, td, 2/PH = 18 Hz, 2JPp = 4 Hz); 24,9 (HO—P—H, dtd, ’jPH = 526 Hz, VP„ = 18 Hz, 2./PP = 4 Hz).
MS: (-) 158,6 [M-H+]L (+) 160,8 [M+H+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 1:1): R{ = 0,2.
EA (CH6O5P2 0,5H2O, Mr= 169,0): C 7,1 (7,1); H 4,2 (4,0).
Příklad 8: Příprava látky 7
Do skleněné vialky (20 mL) byl navážen tetrahydrochlorid 1,4—dibenzyl—1,4,8,11— tetraazacyklotetradekanu (554 mg; 1,05 mmol; 2,0 ekviv.) a látka A0,5H2O, (355 mg; 1,05 mmol; 2,0 ekviv.). Dále byla postupně přidána CF3COOH (5 mL) a vodná HCl (12 M, 5 mL). K. vzniklé suspenzi byl přidán paraformaldehyd (23,1 mg; 525 μιηοΐ; 1,0 ekviv.) a směs byla poté zahřívána při 80 °C dva dny. Poté byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (SiO2; EtOH-konc. NH4OH 5:1; R{ = 0,3). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. K odparku byla přidána H2O (25 mL) a malé množství aktivního uhlí a vzniklá suspenze byla přefiltrována přes stříkačkový mikrofiltr (Millipore; 0,22 pm). Filtrát byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; 50 mL; H+-forma; voda —> 10% vodný pyridin). Pyridinová frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Odparek byl následně znovu rozpuštěn v H2O (100 mL) a takto vzniklý roztok byl lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (198 mg; 62%; 1 krok; vztaženo na paraformaldehyd).
NMR (D2O): ’Η δ 1,74-1,92 (CH2—CH2—CH2, bm, 4H); 2,09 (P—CH2—P, t, 2H, 2.7„P = 16 Hz); 2,44-2,49 cyklus, bm, 3H); 2,54 {cyklus, m, 1H); 2,64-2,67 {cyklus, m, 3H); 2,82-3,16 {cyklus, N—CH—P, bm, 11H); 3,84 (C//2—Ph, s, 2H); 3,96 (CH2—Ph, s, 2H); 7,14-7,33 (Ph, bm, 6H); 7,37 (Ph, m, 2H); 7,44 (Ph, m, 2H); ,3C{'H} (525,5 (CH2—CH2—CH2, s); 25,9 (CH2— CH2—CH2, s); 36,6 (P—CH2—P, dd, './CP = 118 Hz, './CP = 83 Hz); 41,3 {cyklus, s); 41,4 {cyklus, s); 48,9 {cyklus, s); 49,7 {cyklus, d, 3JCp = 10 Hz); 52,4 {cyklus, s); 54,6 {cyklus, s); 55,5 {cyklus, d, 3JCP = 10 Hz); 55,8 {cyklus, s); 59,8 (CH2—Ph, s); 60,1 (N—CH2—P, d, './CP = 109 Hz); 61,3 (CH2—Ph, s); 126,0 {Ph, s); 127,4 {Ph, s); 130,2 {Ph, s); 130,7 {Ph, s); 131,4 {Ph, s); 132,2 {Ph, s); 134,2 {Ph, s); 137,6 {Ph, s); 31P{'H} δ 19,2 (HO—P—OH, d, IP, 2JPp = 7 Hz); 36,2 (NICH—P, d, 1P, 2JPP = 7 Hz).
Lztl-r, Q, lr, »7pp — / ΓΊΔ).
MS: (-) 535,4 [M-H+]L (+) 537,3 [M+H+]*; 559,5 [M+Na+]+; 581,2 [M-H++2Na+]+. TLC(SiO2, EtOH-konc. NH4OH 5:1): Rf = 0,3.
EA (C26H42N4O4P2-4H2O, Mr = 608,6): C 50,9 (51,3); H 8,0 (8,3); N 9,4 (9,2).
Příklad 9: Příprava meziproduktu B
HO OH
- 16CZ 307488 B6
Do skleněné baňky (100 mL) byl k suspenzi methylen-bis(fosfinové) kyseliny (1,04 g; 7,22 mol; l,0ekviv.) v suchém CH2C12; (25 mL) přidán V,V-diisopropylethylamin (9,90 mL; 57,8 mmol; 8,0 ekviv.) a baňka byla mírně propláchnuta proudem argonu. Následně byl přidán trimethylsilylchlorid (5,50 mL; 43,5 mmol; 6,0 ekviv.) a výsledná směs byla míchána 1 hodinu při laboratorní teplotě. Poté byl přidán roztok 4-nitrobenzylbromidu (1,87 g; 8,66 mmol; 1,2 ekviv.) v suchém CH2C12 (20 mL) a vzniklá směs byla míchána 3 dny při laboratorní teplotě. Reakce byla zastavena přídavkem EtOH (25 mL). Směs byla odpařena do sucha a několikrát odpařena s EtOH. K. odparku byla přidána H2O (100 mL) a vzniklá suspenze byla přefiltrována na fritě S3. Filtrát byl odpařen do sucha. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 1; OH -forma; H2O -» 50% AcOH -> 3% HC1). Frakce vymytá pomocí HC1 byla odpařena do sucha a dále čištěna pomocí iontoměniče (Amberlite CG50; H+-forma; H2O). Frakce s čistým produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. Odparek byl dále dosušen pomocí vakuové pumpy a následně v evakuovaném exsikátoru nad P2O5. Výsledný produkt byl získán jako žlutá látka (1,40 g; 69%; 1 krok; vztaženo na methylen-bis(fosfinovou kyselinu)).
NMR (D2O): 'H £2,28 (P—Ctf2—P, m, 2H); 3,29 (C//2—C, d, 2H, 2,/IIP = 17 Hz); 7,16 (PH, d, 1H, 'Λρ = 532 Hz); 7,53 (CH— C—CH2, d, 2H, 2JHh = 9 Hz); 8,21 (CH— C—N, d, 2H, 2./Hh = 9 Hz); 13C{’H} £35,3 (P—CH2—P, t, ‘jCp = 78 Hz); 40,4 (P—CH2—C, d, %>= 86 Hz); 124,3 (CH—C—N, s); 131,3 (CH—C—CH2, d, 3JCp = 4 Hz); 144,0 (CH—C—CH2, d, 2JCP = 8 Hz); 146,7 (CH—C—N, s); 31P £18,7 (PH, dt, IP, 7PH = 532 Hz; 2JPH = 18 Hz); 30,5 (CH2—P—CH2, p, 1P,2Jph = 17 Hz).
MS: (-) 277,5 [M-H+]L
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 5:1): Rf= 0,5.
EA (C8H„NO6P2, Mr = 279,1): C 34,4 (34,2); H 4,0 (3,9); N 5,0 (4,8).
Příklad 10: Příprava látky 8
Do skleněné baňky (100 mL) byl navážen 1,4,8,11-tetraazacyklotetradekan (3,38 g; 16,9 mmol; 3,6 ekviv.). Dále byly postupně přidány látka B (1,31 g; 4,69 mmol; 1,0 ekviv.), paraformaldehyd (169 mg; 5,63 mmol; 1,2 ekviv.) a vodná HC1 (6 M; 60 mL). Vzniklá suspenze byla míchána přes noc při 80 °C. Druhý den byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O -> 10% vodný pyridin). Pyridinová frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 1; OH“-forma; H2O -> 10% vodná AcOH). Acetátová frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Odparek byl dále dosušen pomocí vakuové pumpy a následně v evakuovaném exsikátoru nad P2O5. Výsledný produkt byl získán jako žlutá látka (1,67 g; 71%; 1 krok; vztaženo na látku B).
NMR (D2O): ’Η δ 1,70 (CH2—C7C CH2, p, 2H, VHh = 5 Hz); 1,76 (CH2—CH2—CH2, p, 2H, 3Jhh = 5 Hz); 2,01 (P—CH2—P, t, 2H, 2JHp = 16 Hz); 2,55-2,83 (cyklus, N—CH2—P, m, 18H); 3,32 (CH2—C—CH, d, 2H, 2JHP = 17 Hz); 7,56 (CH— C—CH2, d, 2H, 2,/IIH = 9 Hz); 8,21 (CH— C—N, d, 2H, Vhh = 9 Hz); ^εί'Η} £25,4 (CH2—CH2—CH2, s); 27,0 (CH2—CH2—CH2, s);
33,2 (P—CH2—P, t, 'Je, = 79 Hz); 40,8 (P—CH2—C, d, 'jCP = 86 Hz); 46,0 (cyklus, s); 46,2 (cyklus, s); 46,7 (cyklus, s); 46,8 (cyklus, s); 47,9 (cyklus, s); 48,9 (cyklus, s); 54,8 (cyklus, s);
54,5 (cyklus, s); 55,2 (P—CH2—N, d, 'jCP =110 Hz); 124,3 (CH—C—N, s); 131,3 (CH—C— CH2, d, 3JCP = 4 Hz); 144,6 (CH—C—CH2, s); 146,6 (CH—C—N, s); 3IP{'H} £31,6 (CH2—P— CH2, d, IP, 2JPP = 9 Hz); 32,9 (CH2—P—CH2, d, IP, VPP = 9 Hz).
MS: (-) 489,7 [M-H+]L (+) 491,9 [M+H+]+; 513,9 [M+Na+]+; 529,8 [M+K+]+·
- 17CZ 307488 B6
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 1:1): Rf = 0,7.
EA (C19H35N5O6P20,5H2O, Mr = 500,5): C 45,6 (45,2); H 7,3 (7,6); N 14,0 (13,8).
Příklad 11: Příprava látky 9
Ve skleněné baňce (100 mL) byla rozpuštěna navážka látky 80,5H2O (512 mg; 1,02 mmol; 1,0 ekviv.) v H2O (25 mL) a vzniklý roztok byl krátce promyt plynným argonem. Dále byly postupně přidány HCOONH4 (1,98 g; 31,4 mmol; 31 ekviv.) a katalyzátor (Pd@C; 10%; 54 mg). Vzniklá suspenze byla míchána 3 hodiny při 60 °C. Poté byl přidán další HCOONEU (658 mg;
IO, 4 mmol; 10 ekviv.) a katalyzátor (Pd@C; 10%; 52 mg) a směs byla míchána další dva dny. Následně byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Katalyzátor byl odfiltrován a filtrát byl odpařen do sucha. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 1; OH”-forma; H2O -> 10% vodná AcOH). Acetátová frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O —» 10% vodný pyridin). Pyridinová frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Odparek byl následně znovu rozpuštěn v H2O (150 mL) a lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako nažloutlá látka (443 mg; 84%; 1 krok; vztaženo na látku 8O,5H2O).
NMR (D2O): ’Η δ 1,72 (CH2—C//2—CH2, p, 2H, 7Hh = 5 Hz); 1,79 (CH2—CÍP—CH2, p, 2H, 3Jhh = 5 Hz); 1,96 (P—CfPP. t, 2H, VHp = 15 Hz); 2,62-2,88 (cyklus, N—CH2—P, m, 18H); 3,02 (CH2—C—CH, d, 2H, 2./Hp = 17 Hz); 6,82 (C77—C—CH2, d, 2H, 2JIIH = 8 Hz); 7,18 (CH— C—N, d, 2H, 2.7„ii = 8 Hz); 13C{' H} 25,0 (CH2—CH2—CH2, s); 26,7 (CH2—CH2—CH2, s); 32,7 (P—CH2—P, t, 'jCP = 78 Hz); 39,4 (P—CH2—C, d, ]JCP = 91 Hz); 45,7 (cyklus, s); 46,2 (cyklus, s); 46,7 (cyklus, s); 46,8 (cyklus, s); 48,7 (cyklus, s); 49,4 (cyklus, s); 54,8 (cyklus, s); 54,9 (cyklus, s); 55,0 (P—CH2—N, d, './CP = 109 Hz); 117,3 (CH—C—N, s); 126,4 (CH—C—CH2, d, 3JCP = 8 Hz); 131,4 (CH—C—CH2, s); 144,8 (CH—C—N, s); 31P{'H} <533,7 (CH2—P—CH2, d,
IP, 2Λρ = 9 Hz); 34,6 (CH2—P—CH2, d, 1P, 2JPp = 9 Hz).
MS: (-) 459,8 [M-H+] (+) 461,9 [M+H+]+; 483,9 [M+Na+]+; 499,9 [M+K+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 1:1): Rf = 0,6.
EA (C19H37N5O4P2-3H2O, Mr = 515,5): C 44,3 (44,4); H 8,4 (8,6); N 13,6 (13,6).
Příklad 12: Příprava látky 10
Ve skleněné vialce (20 mL) byla rozpuštěna navážka látky 9-3H2O (53,4 mg; 104 pmol; 1,0 ekviv.) v H2O. Poté byl roztok okyselen pomocí vodné HC1 (1,12 M; 185 pL; 207 pmol; 2,0 ekviv.). Následně byl jednorázově přidán čerstvě připravený roztok CSC12 (16 pL; 209 pmol; 2,0 ekviv.) v CC14 (5 mL). Reakční směs byla prudce míchána při laboratorní teplotě přes noc. Organická fáze byla oddělena a vodná fáze byla následně extrahována CC14 (2x20 mL) a Et2O
- 18CZ 307488 B6 (1x20 mL). Vodná fáze byla odpařena do sucha. Surový produkt byl čištěn pomocí preparativní HPLC (C8; gradientová eluce H2O-0,l% TFA-MeCN). Frakce s produktem byla lyofilizována. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (70,9 mg; 79%; 1 krok; vztaženo na látku 9-3H2O). NMR (D2O): *H <52,19 (CH2—CT/2—CH2, m, 4H); 2,40 (P—C/72—P, t, 2H, 2/„Ρ = 16 Hz); 3,133,60 {cyklus, N—CH2—P, P—C/72—C, m, 20H); 7,36 {CH, m, 4H); ^{'Η} δ 21,1 (CH2— CH2—CH2, s); 21,7 (CH2—CH2—CH2, s); 32,8 (P—CH2—P, t, './Cp = 81 Hz); 38,8 (P—CH2—C, d, }Jcp ~ 91 Hz); 40,5 {cyklus, s); 41,4 {cyklus, s); 42,8 {cyklus, s); 43,1 {cyklus, s); 43,9 {cyklus, s); 44,3 {cyklus, s); 52,9 {cyklus, s); 54,3 (P—CH2—N, d, ’jCp = 100 Hz); 54,4 {cyklus, s); 126,7 (CH—C—N, s); 130,1 (CH—C—N, s); 131,6 (CH—C—CH2, d, 3JCp = 5 Hz); 132,9 (CH—C— CH2, d, 27cp = 8 Hz); 134,8 (NCS, s); 31P{'H} <527,0 (CH2—P—CH2, bm, IP); 39,1 (CH2—P— CH2, d, IP, 2JPP = 7 Hz).
MS: (-) 501,8 [M-H+]’. (+) 504,0 [M+H+]+.
EA (C2oH35N504P2STFA-3,5H20, MR = 863,3): C 30,6 (30,8); H 5,0 (4,8); N 8,1 (8,0).
Příklad 13: Příprava látky 11
Ve skleněné vialce (4 mL) byla rozpuštěna navážka 9-3H2O (40,2 mg; 78,0 pmol; 1,3 ekviv.) ve vodné HC1 (243,8 mM; 962 pL; 235 pmol; 4,0 ekviv.) a vzniklá směs byla vychlazena v ledové lázni na 1 °C. Poté byl postupně přidáván (20 pL každé tři minuty) čerstvě připravený vodný roztok NaNO2 (290 mM; 200 pL; 58,0 pmol; 1,0 ekviv.). Poté byl jednorázově přidán čerstvě připravený vodný roztok NaN3 (580 mM; 200 pL; 116 pmol; 2,0 ekviv.). Reakční směs byla dále míchána při laboratorní teplotě 3 hodiny. Surový produkt byl čištěn pomocí preparativní HPLC (C8; gradientová eluce H2O-0,l% TFA-MeCN). Frakce s produktem byla lyofilizována. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (29,5 mg; 57%; 1 krok; vztaženo na látku 9-3H2O). NMR (D2O): ‘H <52,07 (CH2—CH2—CH2, p, 2H, 7,,,, = 6 Hz); 2,13 (CH2—C7/2—CH2, p, 2H, 3JHh = 7 Hz); 2,20 (P—CH—P, t, 2H, 2./,,,» = 16 Hz); 2,80-3,57 {cyklus, N—CH2—P, P—CH2— C, bm, 20H); 7,11 {CH—C—N, d, 2H, 3/HH = 8 Hz); 7,34 (C/ř—C—CH2, d, 2H, VHh = 8 Hz); 13C{'H} <522,4 (CH2—CH2—CH2, s); 22,7 (CH2—CH2—CH2, s); 32,3 (P—CH2—P, t, 'jCP = 80 Hz); 39,3 (P—CH2—C, d, './Cp = 91 Hz); 42,4 {cyklus, s); 43,5 {cyklus, s); 44,3 {cyklus, s); 45,1 {cyklus, s); 45,4 {cyklus, s); 46,0 {cyklus, s); 53,7 (P—CH2—N, d, 'Jcp = 105 Hz); 54,6 {cyklus, s); 55,6 {cyklus, s); 119,9 (CH—C—N, s); 130,9 (CH—C—CH2, d, 2JCP = 8 Hz); 131,8 (CH— C—CH2, d, 3.7Cp= 5 Hz); 139,0 (CH—C—N, s); 31P{'H} <529,6 (CH2—P—CH2, bm, IP); 37,1 (CH2—P -CH2) d, 1P, 2./,>P = 9 Hz).
MS: (-) 485,8 [M-H+]~. (+) 488,0 [M+H+]+; 509,9 [M+Na ]+; 531,9 [M+K+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 2:1): R{ = 0,7.
EA (C19H35N7O4P2 0,5TFA l,5H2O, Mr = 662,9): C 36,2 (36,4); H 5,9 (5,6); N 14,8 (15,0).
Příklad 14: Příprava meziproduktu C
- 19CZ 307488 B6
Do skleněné baňky (100 mL) byl k suspenzi methylen-bis(fosfinové) kyseliny (2,32 g; 16,1 mol; l,0ekviv.) a dibenzylaminu (4,03 mL; 21,0 mmol; 1,3 ekviv.) ve směsi 6 M vodná HC1-THF (1:1; 50 mL) přidán paraformaldehyd (726 mg; 24,2 mmol; 1,5 ekviv.) a baňka byla rychle uzavřena špuntem. Směs byla následně ponechána reagovat při 80 °C přes noc. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs odpařena do sucha. Odparek byl rozpuštěn v H2O a promyt CH2CI2. Vodná fáze byla odpařena do sucha a čištěna chromatograficky (Cl8; gradientová eluce H2O0,1% TFA-MeCN). Frakce s čistým produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. Odparek byl rozpuštěn v minimálním množství MeOH a následně byl přidáván Et2O do vytvoření zákalu. Druhý den byl vzniklý precipitát zachycen na fritě S3 a promyt Et2O. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (2,27 g; 37%; 1 krok; vztaženo na methylen-bis(fosfmovou kyselinu)). NMR (D2O): 'Η <5 2,02 (P—CH2—P, t, 2H, 2./,!P = 17 Hz); 3,25 (P—CH2—N, d, 2H, 2Jhp = 11 Hz); 4,46 (C//2- Ph. m, 4H); 7,15 (PH, d, 1H, 'JHp = 562 Hz); 7,52 (Ph, m, 10H); 13C{'H} δ
35,8 (P—CH2—P, t, 'jCp = 81 Hz); 51,7 (P—CH2—N, d, '7Cp = 92 Hz); 59,4 (CH2—Ph, s); 129,8 (C—CH2, s); 129,9 (Ph, s); 130,8 (Ph, s); 132.1 (Ph, s); 3,P <520,9 (P—CH2—N, m, IP); 22,1 (PH, dm, IP, = 562 Hz).
MS: (-) 351,6 [M-H+]7 (+) 353,7 [M+H+]+; 391,7 [M+K+]+.
TLC (SiO2, MeOH): R{ = 0,6.
EA (C16H2lNO4P2-MeOH, MK = 385,3): C 53,0 (53,1); H 6,5 (6,2); N 3,6 (3,9).
Do skleněné baňky (100 mL) byl navážen 1,4,8,11-tetraazacyklotetradekan (3,26 g; 16,3 mmol;
5,5 ekviv.). Dále byly postupně přidány surová látka C-MeOH (1,15 g; 2,99 mmol; 1,0 ekviv.), paraformaldehyd (160 mg; 5,33 mmol; 1,8 ekviv.) a vodná HC1 (6 M; 60 mL). Vzniklá suspenze byla míchána přes noc při 80 °C. Druhý den byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O -> 5% vodný amoniak). Amoniakální frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl znovu čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 1; OH -forma; H2O -> 10% vodná AcOH). Acetátová frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Odparek byl dále dosušen pomocí vakuové pumpy a následně v evakuovaném exsikátoru nad P2O5. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (1,46 g; 74%; 1 krok; vztaženo na látku C-MeOH).
NMR (D2O): ’H <5 1,67 (CH2—CH—CH2, p, 2H, 3JHh = 5 Hz); 1,71 (CH2—ClP-CH2, p, 2H, 3Jhh = 5 Hz); 2,07 (P—CH—P, t, 2H, 2JHp = 15 Hz); 2,55-2,73 (N—C//2—P, cyklus, m, 18H); 2,76 (N—CH—P, d, 2H, 2JHp = 9 Hz); 3,79 (CH2—Ph, s, 4H); 7,32-7,49 (Ph, m, 10H); ^Οΐ'Η} <525,1 (CH2—CH2—CH2, s); 27,0 (CH2—CH2—CH2, s); 33,5 (P—CH2—P, t, './Cp= 77 Hz); 45,7 (cyklus, s); 45,9 (cyklus, s); 46,3 (cyklus, s); 46,4 (cyklus, s); 53,7 (cyklus, s); 54,6 (cyklus, s);
-20CZ 307488 B6
54,9 (P—CH2—N, d, 'jCP = 107 Hz); 55,2 (P—CH2—N, d, 'jCP = 109 Hz); 58,9 (CH2—Ph, d, VCp = 6 Hz); 127,8 (Ph, s); 128,9 (Ph, s); 130,3 (Ph, s); 139,0 (Ph, s); 31P{’H} £33,1 (P—CH2— N, d, IP, 2JPP = 12 Hz) 33,6 (P—CH2—N, d, IP, 2JPP = 12 Hz).
MS: (-) 563,8 [M-H+] . (+) 566,0 [M+H+]+; 588,0 [M+Na+]+; 604,0 [M+K+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 2:1): R{ = 0,8.
EA (C27H45N5O4P2-AcOH-l,5H2O, MR = 657,2): C 53,4 (53,4); H 8,0 (7,7); N 10,7 (10,6).
Příklad 16: Příprava látky 13 n
NH HN
Ve skleněné baňce (250 mL) byla rozpuštěna navážka látky 12AcOHT,5H2O (1,55 g; 2,36 mmol) v H2O (125 mL) a vzniklý roztok byl krátce promyt plynným argonem. Dále byly postupně přidány HCOONH4 (4,45 g; 70,5 mmol; 30 ekviv.) a katalyzátor (10% Pd@C; 113 mg). Vzniklá suspenze byla míchána 3 hodiny při 60 °C. Poté byl přidán další HCOONH4 (1,48 g;
23,5 mmol; 10 ekviv.) a katalyzátor (10% Pd@C; 41 mg) a směs byla míchána další dva dny. Následně byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Katalyzátor byl odfiltrován a filtrát byl odpařen do sucha. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O -» 5% vodný amoniak). Amoniakální frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Odparek byl následně znovu rozpuštěn v H2O (150 mL) a lyofdizován. Výsledný produkt byl získán jako nažloutlá látka (720 mg; 74%; 1 krok; vztaženo na látku 13 AcOH1,5H2O).
NMR (D2O): 'Η δ 1,69 (CH2—CH2~CH2, ρ, 2H, VHh = 6 Hz); 1,81 (CH2—CH2—CH2, m, 2H); 2,11 (P—CH2—P, dd, 2H, 2./[IP = 17 Hz, 2JHp =15 Hz); 2,61-3,32 (N—CHr-P, cyklus, m, 20H); ^{'Η} £29,2 (CH2—CH2—CH2, s); 30,1 (CH2—CH2—CH2, s); 36,4 (P—CH2—P, t, 'jCP = 78 Hz); 39,9 (cyklus, s); 42,2 (cyklus, s); 43,3 (cyklus, s); 44,3 (cyklus, s); 45,8 (cyklus, s); 51,1 (cyklus, s); 51,8 (P—CH2—N, d, 'jCp = 105 Hz); 57,8 (P—CH2—N, d, 7Cp = 102 Hz); 31P{'H} 3 24,0 (P—CH2—NH2, d, 1P, 2JPP = 5 Hz); 31,3 (C—N—CH2—P, d, 1P, 2JPP = 5 Hz).
Z \ 7 07 η ΓΚ4 I Τ+Ί- Z I \ 'y O C *7 ΓΆ/Τ.Ϊ 1+1+ ,1Λ7 Λ TW ιλί +1 +
MS: (-) 383,9 [M-H+]~. (+) 385,7 [M+H+]+; 407,9 [M+Na+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 1:1): Rf = 0,6.
EA (C|3H33N5O4P2-2,5H2O, Mp = 412,4): C 40,5 (40,3); H 8,6 (8,9); N 18,2 (18,4).
Příklad 17: Příprava meziproduktu D
HO
OH
COOH
V sekurované (argon) tříhrdlé baňce (1000 mL) byla suspendována methylen-bis(fosfmová kyselina) (2,50 g; 17,4 mol; 1,0 ekviv.) v hexamethyldisilazanu (150 mL; 716 mmol; 41 ekviv.) a vzniklá směs byla zahřívána přes noc při 110 °C v mírném proudu argonu. Následně byla směs ochlazena na laboratorní teplotu a do reakční směsi byl přidán suchý CH2C12 (100 mL). Dále byl přidán roztok zbutyl akrylátu (5,00 mL; 34,2 mmol; 2,0 ekviv.) v suchém CH2C12 (100 mL) a směs byla míchána přes noc při laboratorní teplotě. Reakce byla zastavena přídavkem EtOH (150 mL). Vzniklá směs byla odpařena do sucha a následně několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn chromatograficky (Cl8; gradientova eluce H2O-0,l% TFA-MeCN). Frakce s
-21 CZ 307488 B6 čistým produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. Odparek byl dále čištěn na iontoměniči (Amberlite CG50; H+-forma; H2O). Vodná fáze byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s CH2C12. Odparek byl následně rozpuštěn ve směsi CH2C12-TFA (1:1; 200 mL) a vzniklá směs byla míchána přes noc při laboratorní teplotě za nepřístupu světla. Reakční směs byla následně odpařena do sucha a odparek byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+forma; H2O). Frakce obsahující produkt byly spojeny a odpařeny do sucha. Odparek byl dále dosušen pomocí vakuové pumpy a následně v evakuovaném exsikátoru nad P2O5. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (1,41 g; 38%; 2 kroky; vztaženo na methylen-bis(fosfinovou kyselinu)).
NMR (D2O): 'Η δ 1,97 (P—CIP—CH2, m, 2H); 2,21 (P—C//2—P, t, 2H, 2JHp = 17 Hz); 2,46 (P—CH2—C//2, m, 2H); 7,01 (P//, 1H, d, = 560 Hz); '^{'H} 26,2 (P—CH2—CH2, d, }JCP = 98 Hz); 27,1 (P—CH2—CH2, s); 33,0 (P—CH2—P, t, 7Cp = 79 Hz); 177,2 (CO, d, 3JCp = 16 Hz); 31P δ 19,2 (PH, d, IP, = 544 Hz); 44,5 (P—CH2—CH2, m, IP).
MS: (-) 196,6 [M-H3O+] ; 214,5 [M-H+] . (+) 216,7 [M+H+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 1:1): Pf = 0,6.
EA (C4Hl0O6P2, Mr = 216,1): C 22,2 (21,9); H 4,7 (5,0).
Příklad 18: Příprava látky 14
NH HN o o
COOH
Do skleněné vialky (20 mL) byl navážen 1,4,8,11-tetraazacyklotetradekan (1,19 g; 5,95 mmol;
3,8 ekviv.). Dále byly postupně přidány látka D (340 mg; 1,57 mmol; 1,0 ekviv.), paraformaldehyd (58 mg; 1,93 mmol; 1,2 ekviv.) a vodná HC1 (6 M; 10 mL). Vzniklá suspenze byla míchána přes noc při 60 °C. Druhý den byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl znovu čištěn pomocí iontoměniče (IRA 402; OH -forma; H2O -> 10% vodná AcOH). Acetátová frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+forma; H2O -> 10% vodný pyridin). Pyridinová frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Odparek byl následně znovu rozpuštěn v H2O (50 mL) a lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (459 mg; 61%; 1 krok; vztaženo na látku D).
NMR (D2O): ‘Η δ 1,71 (CH2—CH2CH2, p, 2H, VHH = 5 Hz); 1,76 (CH2—CH2—CH2, p, 2H, 3Jhh = 5 Hz); 1,91 (P—C//2 C, m, 2H); 2,05 (P—CIP—P, t, 2H, 2JHp = 16 Hz); 2,37 (C/ř2— CO, m, 2H); 2,65 (cyklus, t, 2H, 3JHh = 5 Hz); 2,69-2,79 (cyklus, N—C//2—P, m, 16H); l3C{1H} δ 25,6 (CH2—CH2—CH2, s); 27,2 (CH2—CH2—CH2, s); 29,7 (P—CH2—C, d, 'jCp = 96 Hz);
31.2 (CH2—CO, s); 33,5 (P—CH2—P, t, './Cp = 77 Hz); 46,2 (cyklus, s); 46,3 (cyklus, s); 46,8 (cyklus, s); 46,9 (cyklus, s); 47,6 (cyklus, s); 48,8 (cyklus, s); 54,4 (cyklus, s); 54,8 (cyklus, s);
55.2 (N—CH2—P, d, 'Jcp = 109 Hz); 183,2 (CO, d, 3JCp = 19 Hz); 31P{'H} δ33,4 (P—CH2—N, d, 1P, Vpp = 10 Hz); 36,6 (P—CH2—CH2, d, 1P, 2./PP = 10 Hz).
_ __ . . _ Λ . __ x - nu Λ I I+T / i \ /1^0 Λ ΓΧ 4 l 1 Ι+Ί + Λ C f\ O ΓΚ Λ I XT +1+ /1/2/20 ΓΚ/l_l_V+1 +
MS: (-) 402,8 [M-H3O+]“; 426,7 [M-H+] . (+) 428,9 [M+H+]+; 450,8 [M+Na+]+; 466,8 [M+K+]+. TLC (SiO2, /PrOH-konc.NH4OH-H2O 7:1:1): Rf = 0,5.
EA (C15H34N4O6P2-4H2O, Mr = 500,5): C 36,0 (36,0); H 8,5 (8,8); N 11,2 (11,2).
Příklad 19: Příprava meziproduktu E
-22CZ 307488 B6 o
o
II
H
-COOH
V kádince (1000 mL) byl rozpuštěn NaH2PO2H2O (28,6 g; 270 mmol; 6,0 ekviv.) ve směsi MeOH (500 mL) a nestabilizovaného dioxanu (75 mL). Dále byla postupně přidána 5-hexynová kyselina (5,00 mL; 45,3 mmol; 1,0 ekviv.) a roztok Et3B v hexanech (1,0 M; 45 mL; 45,0 mmol;
1,0 ekviv.) a výsledná směs byla intenzivně míchána za přístupu vzduchu 4 hodiny. Vzniklý precipitát byl odfiltrován na fritě S3 a několikrát promyt studeným MeOH a poté vysušen prosáváním vzduchu. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (SiO2; EtOH-konc. NH4OH 2:1; Rf = 0,4). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. K odparku byla přidána H2O (150 mL) a malé množství aktivního uhlí a vzniklá suspenze byla přefiltrována přes stříkačkový mikrofiltr (Millipore; 0,22 pm). Filtrát byl dále čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O). Vodná frakce byla odpařena do sucha, rozpuštěna v H2O a následně lyofilizována. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (4,31 g; 32%; 1 krok; vztaženo na Et3B).
NMR (D2O): ’Η δ 1,57 (Ctf2, m, 2H); 1,64 (CT/2, m, 2H); 1,74 (Ctf2, m, 2H); 1,87 (P—CH— P, m, 1H); 2,38 (C772—CO, t, 2H, 3JHH = 8 Hz); 7,04 (PH, dm, 2H, 7Hp = 526 Hz); '^{‘H} 621,7 (P—CH—CH2—CH2, t, 3JCp = 3 Hz); 25,6 (CH2—CH2—CO, s); 29,4 (P—CH—CH2, t, VCp = 7 Hz); 35,2 (CH2—CO, s); 44,8 (P—CH—P, t, 'jCp = 78 Hz); 180,9 (CO, s); 31P Č25,8 (dm, X = 526 Hz).
MS: (-) 242,5 [M-H+]4 264,5 [M-2H++Na+] ’; 286,5 [M-3H++2Na+]7 (+) 310,8 [M2H++3Na+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 2:1): 7řf= 0,4.
EA (C6HI4O6P2-3H2O, Λ/r = 298,2): C 24,2 (24,1); H 6,8 (6,5).
Příklad 20: Příprava látky 15
NH HN •COOH
Do skleněné vialky (20 mL) byl navážen 1,4,8,11-tetraazacyklotetradekan (1,50 g; 7,50 mmol;
3,8 ekviv.). Dále byly postupně přidány E-3H2O (1,51 g; 5,08 mmol; 2,6 ekviv.), paraformaldehyd (59,2 mg; 1,97 mmol; 1,0 ekviv.) a vodná HC1 (6 M; 10 mL). Vzniklá suspenze byla míchána přes noc při 70 °C. Druhý den byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O 10% vodný pyridin). Pyridinová frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (SiO2; /PrOH-konc.
NH4OH-H2O 7:3:3; Rf= 0,5). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. K. odparku byla přidána H2O (50 mL) a malé množství aktivního uhlí a vzniklá suspenze byla přefiltrována přes stříkačkový mikrofiltr (Millipore; 0,22 μιη). Filtrát byl znovu čištěn pomocí iontoměniče (IRA 402; OH -forma; H2O -> 10% vodná AcOH). Acetátová frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Odparek byl následně znovu rozpuštěn v H2O (50 mL) a lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (621 mg; 61%; 1 krok; vztaženo na paraformaldehyd).
-23 CZ 307488 B6
2,51-2,79 (cyklus, N—CH2—P, m, 18H); 7,05 (P/7, d, 'jHp = 525 Hz); 13C{'H} £23,8 (CH2— CH2—CH—P, t, VCp = 3 Hz); 25,6 (CH2—CH2—CH2, s); 26,9 (CH2—CH2— CH2, s); 27,2 (CH2—CH2—CH2, s); 30,8 (CH2—CH—P, dd, 2JCp = 8 Hz, 2./Cp = 4 Hz); 38,3 (CH2—CO, s); 45,0 (P—CH—P, dd, I/cp = 79 Hz, './cp = 73 Hz); 45,8 (cyklus, s); 46,1 (cyklus, s); 46,4 (cyklus, s); 46,7 (cyklus, s); 47,3 (cyklus, s); 48,2 (cyklus, s); 53,3 (N—CH2—P, d, 1 Jcv = 103 Hz); 54,1 (cyklus, d, 3JCp = 7 Hz); 54,7 (cyklus, d, 3JCp = 6 Hz); 184,6 (CO, s); 31P <525,7 (PH, dm, IP, I/hp = 525 Hz); 36,3 (P—CH2—N, m, IP).
MS: (-) 454,7 [M-H+] . (+) 457,0 [M+H+]+.
TLC (SiO2, zPrOH-konc. NH4OH-H2O 7:1:1): Rf= 0,5.
EA Ci4H32N4O5P2-AcOH, Mr = 516,5): C 44,2 (44,1); H 8,2 (8,5); N 10,9 (10,7).
Příklad 21: Příprava látky 16
Me NO2 .NH HN.
NH
HO
Do skleněné baňky (25 mL) byl navážen tetrahydrochlorid 6,13-dimethyl-6,13-dinitro— 1,4,8,11-tetraazacyklotetradekanu (411 mg; 885 μιτιοί; 4,7 ekviv.), methylen-bis(fosfinová kyselina) (61,3 mg; 426 μπιοί; 2,3 ekviv.) a paraformaldehyd (5,6 mg; 187 μιηοΐ; 1,0 ekviv.). Dále byla přidána vodná HCI (6 M; 10 mL) a vzniklá směs byla míchána dva dny při 60 °C. Poté byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; 200 mL; H+-forma; H2O -> 10% vodný pyridin). Pyridinová frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Odparek byl dále dosušen pomocí vakuové pumpy a následně v evakuovaném exsikátoru nad P2O5. Výsledný produkt byl získán jako nažloutlá látka (92,2 mg; 82%; 1 krok; vztaženo na methylenbis(fosfinovou kyselinu)).
NMR (D2O): ’Η δ 1,65 (CT/3, s, 3H); 1,74 (CH3, s, 3H); 2,12 (P—CH—P, dd, 2H, 27„p = 18 Hz, 27hp = 16 Hz); 2,69-2,94 (cyklus, N—C//2—P m, 8H); 3,03-3,41 (cyklus, m, 10H); 7,14 (PH, d, 1H, './,,p = 530 Hz); 13C{'H} J24,2 (CH3, s); 25,2 (CH3, s); 35,5 (P—CH2—P, dd, = 79 Hz, 'jCP = 76 Hz); 48,2 (cyklus, s); 48,8 (cyklus, s); 49,2 (cyklus, s); 50,1 (cyklus, s); 52,3 (cyklus, s);
52,4 (cyklus, s); 55,2 (cyklus, s); 57,6 (N—CH2—P, d, './Cp = 104 Hz); 58,2 (cyklus, d, 37cp = 10 Hz); 89,9 (C—NO2, s); 91,8 (C—NO2, s); 31P δ 16,2 (EH, dt, IP, '7ΡΗ = 530 Hz, V,»,, = 18 Hz);
36,9 (N—CH2—P, m, IP).
MS: (-) 473,3 [M-H+]C (+) 475,1 [M+H+]+; 513,4 [M+K+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 1:1): Rf = 0,8.
EA (C14H32N6O8P2-3HC1H2O, Mr = 601,8): C 27,9 (27,7); H 6,2 (6,5); N 14,0 (14,3).
Příklad 22: Příprava konjugátu 17
-24CZ 307488 B6
Ve skleněné vialce (4 mL) byla rozpuštěna navážka 131,5H2O (14,1 mg; 34,2 pmol; 1,0 ekviv.) a V-hydroxysukcinimidesteru kyseliny 3-(maleimido)propanové (10,0 mg; 37,6 pmol; 1,1 ekviv.) ve vodném roztoku pufru H3PO4-NaOH (1,0 M pH = 8,1; 1,00 mL; 1,0 mmol; 29 ekviv.). Vzniklá směs byla míchána při laboratorní teplotě přes noc. Surový produkt byl čištěn pomocí preparativní HPLC (C8; H2O-0,l% TFA-MeCN). Frakce s produktem byla lyofilizována. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (13,4 mg; 45%, 1 krok, vztaženo na 131,5H2O). NMR (D2O): ’H δ 1,99 (CH2—C//2—CH2, p, 2H, VHh = 7 Hz); 2,12 (CH2—C//2—CH2, m, 2H); 2,18 (P—CH2—P, t, 2H, 2JHp = 16 Hz); 2,48-3,11 (CH2—CO, N—CH2—P, cyklus, m, 20H); 4,21 (CH2—N—CO, t, Vhh = 9 Hz); 6,82 (CH, s, 2H); 13C{]H} δ 22,1 (CH2—CH2--CH2, s); 23,4 (CH2—CH2—CH2, s); 29,8 (CH2—CO, s); 34,1 (P—CH2—P, t, 7Cp = 79 Hz); 43,1 (CH2—N— CO, s); 41,9 (cyklus, s); 43,6 (cyklus, s); 43,9 (cyklus, s); 44,3 (cyklus, s); 46,8 (cyklus, s); 47,2 (cyklus, s); 53,4 (P—CH2—N, d, 'Jcp = 96 Hz); 53,6 (cyklus, s); 55,1 (cyklus, s); 55,2 (P—CH2— N, d, 'jCp = 108 Hz); 133,7 (CH, s); 169,8 (CO—N—CO, s); 174,5 (CH2—CO—N, d, 7Cp = 5 Hz). 3,P{'H} £32,8 (P—CH2—N, d, 1P, 2JPp = 11 Hz); 35,2 (P—CH2—N, d, 1P, 2JPP = 11 Hz). MS: (-) 535,0 [M-H+]C (+) 537,1 [M+H+]+; 559,1 [M+Na+]+; 575,1 [M+K+]+·
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 2:1): R{ = 0,5.
EA (C20H38N6O7P2 TFA-2H2O, Mr = 869,3): C 30,4 (30,7); H 5,0 (4,7); N 9,7 (9,5).
Příklad 23: Příprava konjugátu 18
Do skleněné vialky (4 mL) byl napipetován roztok 110,5TFAl,5H2O (20,4 mM v D2O; 420 pL; 8,57 pmol; 1,0 ekviv.) a následně byl přidán čerstvě připravený roztok 6dibenzocyklooktynamidohexanové kyseliny (3,0 mg; 9,0 pmol; 1,1 ekviv.) ve směsi suchý DMSO-suchý MeCN (1:1; 500 pL). Směs byla míchána 2 hodiny při laboratorní teplotě. Surový produkt byl čištěn pomocí preparativní HPLC (C8; gradientová eluce H2O-0,l% TFA-MeCN). Frakce s produkty byly lyofilizovány. Výsledný produkt byl získán ve formě dvou regioisomerů jako bílá látka (2 x «3 mg).
NMR (D2O): 'Η δ 1,18 (CH2, m, 2H); 1,32 (CH2, m, 2H); 2,04 (cyklus, p, 3/Hh = 6 Hz); 2,15 (cyklus, P—CH2~P, CH2, m, 6H); 2,36 (CH2, m, 1H); 2,56 (CH2, m, 1H); 2,67-3,63 (cyklus, N—CH2—P,P—CfP-C, m, 20H); 5,07 (CH2—N—CO, d, 1H, 2JHh = 18 Hz); 5,67 (CH2—N— CO, d, 1H, 2Jhh = 18 Hz); 6,89 (CH, d, 1H, 3JHh = 8 Hz); 7,21 (CH, t, 1H, 3JHh = 8 Hz); 7,29 (CH, d, 1H, 3JHh= 8 Hz); 7,39 (CH, m, 1H); 7,42 (CH, m, 1H); 7,45 (CH—C—CH2—P, d, 2H, •/Hu = 8 Hz); 7,50 (CH— C—N3, CH, m, 3H); 7,55 (CH, m, 2H); i3C{‘H} £23,0 (cyklus, s); 23,3 (cyklus, s); 24,3 (CH2, s); 24,6 (CH2, s); 32,4 (P—CH2—P, t, 'jCP = 80 Hz); 33,3 (CH2, s); 34,1 (CH2, s); 40,2 (P—CH2—P, d, ’£CP = 89 Hz); 42,9 (cyklus, s); 44,2 (cyklus, s); 44,9 (cyklus, s);
45,4 (cyklus, s); 46,0 (cyklus, s); 46,4 (cyklus, s); 53,6 (N—CH2—P, d, 'jCp - 106 Hz); 55,0 (cyklus, s); 55,9 (cyklus, d, 3JCP = 11 Hz); 55,9 (CH2—N—CO, s); 116,1-145,2 (4 x arom., 14 x arom.y 177,1 (CO—N, s); 178,9 (CO—O, s); 31P{'H} £30,9 (CH2—P—CH2, m, IP); 34,5 (CH2—P—CH2,d, IP, VPP = 10 Hz).
MS: (-) 818,8 [M-H+]“. (+) 821,1 [M+H+]+; 843,0 [M+Na+]+; 859,0 [M+K+]+·
Příklad 24: Příprava cílícího konjugátu 19
-25CZ 307488 B6
V NMR kyvetě byla rozpuštěna navážka 10TFA-3,5H2O (3,4 mg; 3,9 μιηοΐ; 1.0 ekviv.) v D2O (500 pL). K takto vzniklému roztoku byly postupně přidány tripeptid HGlyGlyTyrOH (1,9 mg;
6,2 μιηοΐ; 1,6 ekviv.) a vodný pufr H3BO3-LiOH (750 mM v D2O; pD = 9,3; 413 pL; 310 pmol; 80 ekviv.). Vzniklá směs byla míchána při laboratorní teplotě přes noc. Surový produkt byl čištěn pomocí preparativní HPLC (C8; gradientová eluce H2O-0,l% TFA-MeCN). Frakce s produktem byla lyofilizována. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka («1 mg).
NMR (D2O): ’H <72,01 (CH2—CH—CH2, m, 2H); 2,06 (CH2—CH—CH2, m, 2H); 2,12 (P— CH2—P, t, 2H, 2JHp = 15 Hz); 2,58-3,56 (cyklus, N—CH—P, P—CH2—C, CH2, m, 22H); 3,90 (CH2, m, 2H); 4,21 (CH2, m, 2H); 4,64 (CH—N, dd, 1H, VHh = 9 Hz, 3./„j, = 5 Hz); 6,85 (CH— C—OH, d, 2H, 3JHh = 8 Hz); 7,16 (CH—CH— CH2, d, 2H, 3JHh = 8 Hz); 7,32 (C7/- C NH, d, 2H, VHh = 8 Hz); 7,38 (CH— C—CH2, d, 2H, 7Hh = 8 Hz); 13C{1H} <723,0 (CH2—CH2—CH2, s);
23,8 (CH2—CH2—CH2, s); 32,4 (P—CH2—P, t, 'jCp = 80 Hz); 36,5 (CH2, s); 40,1 (P—CH2—C, d, 'Jcp = 89 Hz); 42,9 (CH2, s); 43,3 (cyklus, s); 44,8 (cyklus, s); 45,6 (cyklus, s); 46,0 (cyklus, s);
46,4 (cyklus, s); 47,0 (cyklus, s); 48,2 (CH2, s); 53,5 (P—CH2—N, d, 'jCp = 107 Hz); 54,9 (cyklus, s); 55,1 (CH—N, s); 55,8 (cyklus, d, 3Jcp = 11 Hz); 116,1 (CH—C—OH, s); 126,8 (CH—C—NH, s); 129,2 (C—CH2, s); 131,3 (CH—C—CH2, s); 131,5 (CH—C—CH2, s); 134,3 (C—CH2—P, d, 2JCP = 6 Hz); 135,8 (C—NH, s); 155,1 (C—OH, s); 171,9 (CO, s); 173,1 (CO, s); 175,7 (CO, s); 182,3 (CS, s); 31P{'H} <731,2 (N—CH2—P, m, IP); 34,2 (P—CH2—Cd, IP, 2Jpp = 8 Hz).
MS: (-) 796,8 [M-HTj (+) 799,0 [M+H+]+.
Příklad 25: Příprava cílícího konjugátu 20
Ve skleněné vialce (4 mL) byla rozpuštěna navážka tripeptidu HOValGlyGlyCbz (9,6 mg; 26 μιτιοί; 3,0 ekviv.) ve směsi H2O-MeCN (2:3; 1,0 mL). Dále byly postupně přidány trichlortriazin (1,6 mg; 8,7 μιηοΐ; 1,0 ekviv.) a pyridin (21,2 pL; 0,26 mmol; 30 ekviv.). Výsledná směs byla míchána 1 hodinu při laboratorní teplotě. Do směsi byl poté jednorázově přidán roztok 9-3H2O (17,4 mg; 33,8 pmol; 3,9 ekviv.) ve směsi H2O-MeCN (2:3; 1,0 mL) a vzniklá směs byla míchána při laboratorní teplotě přes noc. Surový produkt byl čištěn pomocí preparativní HPLC (C8; gradientová eluce H2O-0,l% TFA-MeCN). Frakce s produktem byla lyofilizována. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka («1 mg).
NMR (D2O): 'Η <71,02 (CH, m, 6H); 2,02 (CH2—CH2—CH2, p, 2H, 3./Hh = 6 Hz); 2,07 (CH2— CH2—CH2, p, 2H, 37hh = 6 Hz); 2,16 (P—C//2—P, t, 2H, 2JHP = 16 Hz); 2,20 (CH3—CH— CH3,
-26CZ 307488 B6 m, 1H); 2,34-3,52 (cyklus, N—CH2—P, P—CH2—C, bm, 20H); 3,91 (CH2, s, 2H); 4,02 (CH2, s, 2H); 4,23 (CH— CO, d, 1H, VHH = 8 Hz); 5,15 (Ph—CH2—O, s, 2H); 7,29-7,51 (CH—C—N, CH— C—CH2, Ph, bm, 9H); 13C{'H} δ 18,5 (CH3, s); 19,1 (CH3, s); 23,0 (CH2—CH2—CH2, s); 23,6 (CH2—CH2—CH2, s); 31,0 (CH3—CH—CH3, s); 32,5 (P—CH2—P, t, ]JCP = 80 Hz); 40,0 (P—CH2—C, d, 'Jcp = 90 Hz); 43,1 (CH2, s); 43,2 (cyklus, s); 44,5 (CH2, s); 44,6 (cyklus, s); 45,4 (cyklus, s); 45,6 (cyklus, s); 46,3 (cyklus, s); 46,6 (cyklus, s); 53,5 (P—CH2—N, d, 'jCp = 107 Hz); 54,8 (cyklus, s); 55,8 (cyklus, d, 3JCp = 10 Hz); 61,1 (CH—CO, s); 68,1 (Ph—CH2—O, s); 123,3 (Ph, s); 128,5 (CH—C—NH, s); 129,2 (Ph, s); 129,6 (Ph, s); 131,2 (CH—C—CH2, d, 3Jcp = 6 Hz); 132,5 (C—CH2—P, d, 27Cp = 8 Hz); 135,4 (C—NH, s); 137,0 (Ph, s); 159,4 (CO— O, s); 172,3 (CO, s); 173,0 (CO, s); 173,9 (CO, s); 31P{'H} <5 30,1 (N—CH2—P, m, IP); 34,4 (P—CH2—C,d, IP, 2JPP = 9 Hz).
MS: (-) 806,9 [M-H+] . (+) 809,1 [M+H+]+; 831,0 [M+Na+]+.
Příklad 26: Příprava cílícího konjugátu 21 n
.NH HN. h
C )s ? frV
Do skleněné vialky (4 mL) byl navážen 10TFA-3,5H2O (13,2 mg; 18,5 pmol; 1,7 ekviv.). Dále byly postupně přidány peptid NH2(CH2)5CONH(CH2)2CONIeAspHisD-PheArgTrpGlyNH2 (12,0 mg; 10,8 pmol; 1,0 ekviv.) a vodný pufr H3BO3-LiOH (750 mM v D2O; pD = 9,3; 3,5 mL; 2,63 mmol; 240 ekviv.). Vzniklá směs byla míchána při laboratorní teplotě přes noc. Surový produkt byl čištěn pomocí preparativní HPLC (C8; gradientová eluce H2O-0,l% TFA-MeCN). Frakce s produktem byla lyofilizována. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka («2 mg). NMR (D2O): ’H <5 0,83 (CH3, t, 3H, VHH = 7 Hz); 1,04 (CH2, bm, 2H); 1,21-1,72 (CH2, bm, 10H); 1,82-2,23 (P—CH2—P, CÍP, cyklus, bm, 8H); 2,35-3,54 (cyklus, CH2, P—CH2—N, P— CH2—C, bm, 38H); 3,80 (CH2, m, 2H); 4,12 (CH, m, 1H); 4,16 (CH, m, 1H); 4,51 (CH, m, 1H); 4,55 (CH, m, 1H); 4,59 (CH, m, 1H); 4,69 (CH, m, 1H); 7,06 (CIL—C—CH—N, s, 1H); 7,107,27 (arom., m, 7H); 7,28-7,39 (arom., m, 5H); 7,46 (CH, d, 1H, = 7 Hz); 7,63 (CH, d, 1H, •Ani = 8 Hz); 8,53 (N—CH—N, s, 1H); 3iP{'H} <532,5 (CH2—P—CH2, m, IP); 35,4 (CH2—P— CH2,m, IP).
MS: (-) 1614,5 [M-H+] . (+) 1616,4 [M+H+]+.
Příklad 27: Příprava látky 22
-27 CZ 307488 B6
Do skleněné vialky (4 mL) byl navážen 3-3,5H2O (35,6 mg; 79,6 μιηοΐ; 1,0 ekviv.). Dále byly postupně přidány methylen-bis(fosfinová kyselina) (27,6 mg; 192 pmol; 2,4 ekviv.), paraformaldehyd (5,8 mg; 193 pmol; 2,4 ekviv.) a vodná HC1 (6 Μ; 1 mL). Vzniklá suspenze byla míchána přes noc při 80 °C. Druhý den byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. Odparek byl dále několikrát odpařen s H2O a následně znovu rozpuštěn v H?O (50 mL). Takto vzniklý roztok byl lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (21,2 mg; 47%; 1 krok; vztaženo na 3-3,5H2O).
NMR (D2O): ’H δ 1,71 (CH2—CH2—CH2, p, 4H, a./llH = 7 Hz); 2,04 (P—CH2—P, dd, 2H, 2JHp = 18 Hz, 2Jhp = 16 Hz); 2,23 (CH3, s, 6H); 2,51 (cyklus, t, 4H, VHh = 7 Hz); 2,57 (cyklus, m, 4H); 2,75 (cyklus, m, 4H); 2,81 (N—QH2 -P, d, 2H, 2JHp = 9 Hz); 2,86 (cyklus, m, 4H); 7,13 (PH, d, 'Jhp = 531 Hz); 13C{'H} <720,2 (CH2—CH2—CH2, s); 35,7 (P—CH2—P, t, ’jCP = 77 Hz); 44,0 (CH3, s); 48,7 (cyklus, s); 49,9 (cyklus, d, 3Jcp = 7 Hz); 51,9 (cyklus, d,3Jev = 7 Hz); 53,8 (cyklus, s); 57,0 (N—CH2—P, d, 'jCP =110 Hz); 31P δ 19,8 (PH, dtd, 2P, = 531 Hz, V,.,, = 18 Hz, 2JPp = 3 Hz); 32,0 (N—CH—P, m, 2P).
MS: (-) 539,3 [M-H+] · (+) 541,4 [M+H+]+; 563,4 [M+Na+]+; 585,4 [M-H++2Na+]+; 607,4 [M2H++3Na+]+.
TLC (SiO2, z-PrOH-konc. NH4OH-H2O 7:3:3): Rf = 0,7.
EA (C,6H4oN408P4-l,5H20, MR = 567,4): C 33,9 (33,8); H 7,6 (7,2); N 9,9 (9,6).
Příklad 28: Příprava látky 23
HOOC.
HO
OH
Do skleněné vialky (20 mL) byl navážen tetrahydrochlorid 1,8—dimethyl—1,4,8,11— tetraazacyklotetradekanu (295 mg; 788 pmol; 1,0 ekviv.). Dále byly postupně přidány látka D (792 mg; 3,66 mmol; 4,6 ekviv.), paraformaldehyd (49,7 mg; 1,66 mmol; 2,1 ekviv.) a vodná HC1 (6 M; 15 mL). Vzniklá suspenze byla míchána 3 dny při 80 °C. Následně byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (SiO2; EtOH-konc. NH4OH 1:1; R{ - 0,5). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. K odparku byla přidána H2O (25 mL) a malé množství aktivního uhlí a vzniklá suspenze byla přefiltrována přes stříkačkový mikrofiltr (Millipore; 0,22 pm). Filtrát byl dále čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. Odparek byl následně znovu rozpuštěn v H2O (500 mL) a lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (392 mg; 62%; 1 krok; vztaženo na tetrahydrochlorid 1,8-dimethyl1,4,8,11-tetraazacyklotetradekanu).
NMR (D2O): 'Η <7 1,80 (CH2—CH2—CH2, p, 4H, 3./(ln = 6 Hz); 1,95 (P-CH^-C, m, 4H); 2,10 (P—CH2—P, dd, 4H, 2JHp = 17 Hz, 2JHp = 15 Hz); 2,25 (CH3, s, 6H); 2,35 (CÍP—CO, tm, 4H, VHH = 8 Hz); 2,49 (cyklus, t, 4H, VHh = 7 Hz); 2,51 (cyklus, m, 2H); 2,58 (cyklus, m, 4H); 2,632,79 (cyklus, N—Ctf2—P, m, 10H); <723,2 (CH2—CH2—CH2, s); 29,2 (P—CH2—C, d,
Vcp = 97 Hz); 30,8 (CH2—CO, s); 31,0 (P—CH2—P, dd, 'jCp = 79; './tP = 76 Hz); 43,8 (CH3, s);
(P—CH2—P, dd, 4H, 2JHp = 17 Hz, 2JHp = 15 Hz); 2,25 (CH3, s, 6H); 2,35 (C/Λ—CO, tm, VHH = 8 Hz); 2,49 (cyklus, t, 4H, VHh = 7 Hz); 2,51 (cyklus, m, 2H); 2,58 (cyklus, m, 4H); 2,i 2,79 (cyklus, N—CH2—P, m, 10H); <723,2 (CH2—CH2—CH2, s); 29,2 (P—CH2—C
-28CZ 307488 B6
50,2 (cyklus, d, 3./Cp = 6 Hz); 50,6 (cyklus, s); 52,6 (cyklus, s); 54,2 (cyklus, s); 55,5 (N—CH2—P, d, 'jCp = Π0 Hz); 184,1 (CO, d, 3JCp = 17 Hz); 31P{lH} £33,8 (CH2—P—CH2, d, IP, 2JPP = 9 Hz); 34,8 (CH2—P—CH2, d, 1P, 2./PI> = 9 Hz).
MS: (-) 665,2 [M-H3OJ\ 683,3 [M-H+]L (+) 685,2 [M+H+]+; 707,2 [M+Na+]+; 729,2 [MH++2Na+]+; 751,1 [M-2H++3Na+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 1:1): R{ = 0,5.
EA (C22H48N4Oi2P4-3H2O, MR = 738,6): C 35,8 (35,5); H 7,6 (8,0); N 7,6 (7,7).
Příklad 29: Příprava látky 24
Do skleněné vialky (4 mL) byla navážena látka 6-3,5HCl-H2O (81,3 mg; 116 pmol; 1,0 ekviv.). Dále byly postupně přidány kyselina fosforitá (90,2 mg; 1,10 mmol; 9,5 ekviv.), paraformaldehyd (8,2 mg; 273 pmol; 2,4 ekviv.) a vodná HC1 (12 Μ; 1 mL). Vzniklá suspenze byla míchána 5 dní při 40 °C. Následně byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. Odparek byl dále několikrát odpařen s H2O a následně znovu rozpuštěn v H2O (50 mL). Takto vzniklý roztok byl lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (40,4 mg; 51%; 1 krok; vztaženo na látku 6-3,5HCl-H2O).
NMR (D2O): *H £ 1,78-1,94 (CH2—CH2—CH2, bm, 4H); 2,12 (P—CH2—P, dd, 2H, 2Jhp = 19 Hz, 2JHp = 17 Hz); 2,51-2,60 (cyklus, m, 2H); 2,63-2,81 (cyklus, bm, 4H); 2,88-2,98 (cyklus, N—CH2—P, m, 4H); 3,03-3,44 (cyklus, N—CH2—P, m, 10H); 3,94 (C//2—Ph, bm, 2H); 4,02 (C//2 Ph, bm, 2H); 6,99-7,30 (Ph, m, 8H); l3C{'H} £22,6 (CH2—CH2—CH2, s); 27,6 (CH2— CH2—CH2, s); 34,8 (P—CH2—P, dd, './Ci> = 117 Hz, %ρ = 75 Hz); 41,5 (cyklus, s); 42,4 (cyklus, s); 50,4 (cyklus, s); 51,3 (cyklus, s); 52,3 (cyklus, s); 52,9 (N—CH2—P, d, ’7CP = 104 Hz); 53,3 (cyklus, s); 54,8 (cyklus, s); 56,2 (CH2—Ph, s); 56,9 (cyklus, d, 3JCp = 8 Hz); 58,9 (CH2—Ph, s); 59,0 (N—CH2—P, d, 'Jcp = HO Hz); 123,3 (Ph, s); 124,5 (Ph, s); 129,0 (Ph, s); 129,2 (Ph, s); 130,3 (Ph, s); 131,4 (Ph, s); 137,2 (Ph, s); 142,8 (Ph, s); 31P{’H} £19,2 (HO—P—OH, m, IP);
26,9 (HO—P—OH, d, IP, 2./PP = 9 Hz); 34,5 (N—CH—P, bm, IP).
MS: (-) 645,0 [M-H+]L (+) 647,1 [M+H+]+; 669,2 [M+Na+]+; 685,2 [M+K+]+.
TLC (SiO2, zPrOH-konc. NH4OH-H2O 7:3:3): Rf = 0,8.
EA (C27H45N4O8P3-2H2O, Mr = 682,6): C 47,5 (47,6); H 7,2 (7,2); N 8,2 (8,2).
Příklad 30: Příprava látky 25 0H Γ 1 H0\ I I p·^ ;n hn
NH
O
OH
HO
-29CZ 307488 B6
Ve skleněné baňce (50 mL) byla rozpuštěna navážka látky 24-2H2O (26,3 mg; 38,5 pmol; 1.0 ekviv.) v H2O (25 mL) a vzniklý roztok byl krátce promyt plynným argonem. Dále byly postupně přidány HCOONH4 (98,2 mg; 1,56 mmol; 41 ekviv.) a katalyzátor (10% Pd@C; 9,1 mg). Vzniklá suspenze byla míchána přes noc při 60 °C. Následně byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Katalyzátor byl odfiltrován a několikrát promyt H2O. Filtrát byl odpařen do sucha a odparek byl poté čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O). Vodná frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Odparek byl následně znovu rozpuštěn v H2O (50 mL) a lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (15,4 mg; 76%; 1 krok; vztaženo na látku 24-2H2O).
NMR (D2O): ’Η δ 1,85-1,98 (CH2—CH CH2, bm, 4H); 2,11 (P—CH—P, dd, 2H, 2./„P = 18 Hz, 2JHp = 15 Hz); 2,48-2,84 {cyklus, bm, 6H); 2,88 {cyklus, m, 2H); 3,01 (N—CH2—P, d, 2H, 2. /,,p = 12 Hz); 3,08-3,38 {cyklus, N—CH2—P, m, 10H); '^{'H} <523,1 (CH2—CH2—CH2, s);
27.4 (CH2—CH2—CH2, s); 34,2 (P—CH2—P, dd, 7Cp = 117 Hz, 7cp = 76 Hz); 43,8 {cyklus, s);
42.4 {cyklus, s); 50,4 {cyklus, s); 51,3 {cyklus, s); 52,6 {cyklus, s); 52,8 (N—CH2—P, d, 'Jcp = 107 Hz); 54,1 {cyklus, s); 55,2 {cyklus, s); 57,6 (N—CH2—P, d, 'jc? =111 Hz); 58,2 {cyklus, d, 3. /CP = 8 Hz); 31P{'H} 28,3 (HO—P—OH, d, IP, 2./PP = 10 Hz); 32,6 (N—CH—P, d, IP, 2JPp = 10 Hz).
MS: (-) 465,2 [M-H+]L (+) 467,3 [M+H+]+; 489,2 [M+Na+]+; 505,2 [M+K+]+; 511,2 [MH++2Na+]+.
TLC (SiO2, zPrOH-konc. NH4OH-H2O 7:3:3): R{ = 0,4.
EA(C13H33N4O8P3-3,5H2O, Mr = 529,4): C 29,5 (29,3); H 7,6 (7,9); N 10,6 (10,7).
Příklad 31: Příprava látky 26
Do skleněné vialky (4 mL) byla navážena látka 7-4H2O (91,3 mg; 150 μιηοΐ; 1,0 ekviv.). Dále byly postupně přidány kyselina fosforitá (123 mg; 1,5 mmol; 10 ekviv.), paraformaldehyd (10,8 mg; 360 pmol; 2,4 ekviv.) a vodná HCl (12 Μ; 1 mL). Vzniklá suspenze byla míchána 5 dní při 40 °C. Následně byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. Odparek byl dále několikrát odpařen s H2O a následně znovu rozpuštěn v H2O (50 mL). Takto vzniklý roztok byl lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (59,4 mg; 58%; 1 krok; vztaženo na látku 7-4H2O).
NMR (D2O): 1,72-1,84 (CH2—CH CH2, bm, 2H); 1,92 (CH2—CH2—CH2, m, 1H); 2,05-2,33 (CH2—CH2—CH2, P—CH2—P bm, 3H); 2,49-3,24 {cyklus, N—CH2—P, bm, 20H); 3,82 {CH2— Ph, m, 2H); 4,07 {CH2—Ph, m, 2H); 6,83-6,92 {Ph, bm, 3H); 6,98-7,22 {Ph, bm, 8H); 3,P{'H}
18,3 (HO—P—OH, s, IP); 22,9 (HO—P—OH, d, IP, 2JPp = 9 Hz); 32,4 (N—CH—P, bm, IP). MS: (-) 645,1 [M-H+]L (+) 647,4 [M+H+]+; 669,5 [M+Na+]+; 685,4 [M+K+]+.
TLC (SiO2, zPrOH-konc. NH4OH-H2O 7:3:3): R< = 0,8.
EA (027Η45Ν408Ρ3·2Η20, MR = 682,6): C 47,2 (47,6); H 7,3 (7,2); N 8,0 (8,2).
Příklad 32: Příprava látky 27
-30CZ 307488 B6
Ve skleněné baňce (50 mL) byla rozpuštěna navážka látky 26-2H2O (28 mg; 41 pmol; ekviv.) v H2O (25 mL) a vzniklý roztok byl krátce promyt plynným argonem. Dále byly postupně přidány HCOONH4 (107,8 mg; 1,71 mmol; 45 ekviv.) a katalyzátor (10% Pd@C; mg). Vzniklá suspenze byla míchána přes noc při 60 °C. Následně byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Katalyzátor byl odfiltrován a několikrát promyt H2O. Filtrát byl odpařen do sucha a odparek byl poté čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O). Vodná frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Odparek byl následně znovu rozpuštěn v H2O (50 mL) a lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (15,4 mg; 82%; 1 krok; vztaženo na látku 26-2H2O).
NMR (D2O): NMR (D2O): 'Η δ 1,88 (CH2—CH2—CH2, m, 1H); 1,97-2,08 (CH2—CH2—CH2, bm, 2H); 2,13-2,35 (P—CH2—P, CIL—Í7A-CH2, bm, 3H); 2,44-3,38 (cyklus, N—CH2—P, m, 20H); '^{'Η} <522,8 (CH2—CH2—CH2, s); 25,2 (CH2—CH2—CH2, s); 33,1 (P—CH2—P, dd, ’jCp =114 Hz, 'jCP = 80 Hz); 42,1 (cyklus, s); 45,5 (cyklus, s); 49,9 (cyklus, s); 51,1 (cyklus, s);
51,5 (cyklus, s); 53,9 (N—CH2—P, d, ’jcp = 109 Hz); 54,6 (cyklus, s); 54,8 (cyklus, s); 57,6 (cyklus, s); 59,2 (N—CH2—P, d, 'jCP = 108 Hz); 31P{'H} 21,3 (HO—P—OH, m, IP); 28,3 (HO—A—OH, d, IP, 2JPp = 10 Hz); 32,2 (N—CH—P, d, IP, 2JPp = 10 Hz).
MS: (-) 465,4 [M-HT+]L (+) 467,2 [M+H+]+; 489,5 [M+Na+]+; 505,5 [M+K+]+; 511,6 [MH++2Na+]+.
TLC (SiO2, zPrOH-konc. NH4OH-H2O 7:3:3): A = 0,4.
EA (C|3H33N4OgP3-5H2O, MR = 556,4): C 28,3 (28,1); H 8,6 (8,8); N 9,8 (10,1).
Příklad 33: Příprava látky 28 ,NH .N.
Do skleněné vialky (20 mL) byl navážen 1,4,8,1 l-tetraazabicyklo[6.6.2]hexadekan (1,17 g; 5,16 mmol; 2,4 ekviv.). Dále byly postupně přidány methylen-bis(fosfinová kyselina) (633 mg; 4,40 mmol; 2,0 ekviv.), paraformaldehyd (65,3 mg; 2,17 mmol; 1,0 ekviv.) a vodná HC1 (5 M;
mL). Vzniklá suspenze byla míchána přes noc při 80 °C. Druhý den byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (Amberlite IRA 402; OH -forma; H2O -> 10% vodná AcOH). Acetátová frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Odparek byl rozpuštěn ve vodné HC1 (5 M; 10 mL) a vzniklý roztok byl odpařen do sucha. Odparek byl dále dosušen pomocí vakuové pumpy a následně v evakuovaném exsikátoru nad P2O5. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (668 mg; 63%; 1 krok; vztaženo na paraformaldehyd).
NMR (D2O): ’Η δ 1,70 (CH2—CH2—CH2, dm, 1H, 'jHH = 17 Hz); 1,76 (CH2—CH2CH2, dm, 1H, 'JHh = 17 Hz); 2,12 (P—CH2—P, m, 2H); 2,30 (CH2—CH2—CH2, m, 1H); 2,30 (CH2— CH2—CH2, m, 1H); 2,56 (cyklus, m, 2H); 2,63 (cyklus, m, 2H); 2,92 (cyklus, m, 3H); 3,05 (cyklus, m, 2H); 3,14 (cyklus, m, 2H); 3,17 (N—CH2—P, 1H); 3,22 (cyklus, m, 1H); 3,30 (cyklus, m, 3H); 3,44 (cyklus, m, 2H); 3,62 (cyklus, m, 1H); 3,73 (N—CH2—P, m, 1H); 3,78 (cyklus, m,
-31 CZ 307488 B6
2H); 7,13 {PH, d, 1H, 'jHp = 533 Hz); 13C{'H} δ 18,9 (CH2—CH2—CH2, s); 20,1 (CH2—CH2— CH2, s); 36,0 (P—CH2—P, dd, './ci> = 84 Hz; './Cp = 77 Hz); 42,2 {cyklus, s); 47,7 {cyklus, s); 49,5 {cyklus, s); 49,9 {cyklus, s); 51,7 (CH2—N—CH2—P, d, 3Jcp = 6 Hz); 54,0 (N—CH2—P, d, 1</Cp = 91 Hz); 54,4 {cyklus, s); 56,2 {cyklus, s); 58,2 {cyklus, s); 58,4 {cyklus, s); 59,5 {cyklus, s); 31P δ
20,6 (PH, dtd, IP, 'jPH = 533 Hz, VPH = 17 Hz, 2JPP = 6 Hz); 25,7 (P—CH2—N, m, IP).
MS: (-) 381,2 [Μ-Η+]Ί 402,9 [M-2H++Na+]7 (+) 383,3 [M+H+]+; 405,3 [M+Na+]+; 421,2 [M+K+]+.
TLC (SiO2, /PrOH-konc. NH4OH-H2O 7:3:3): Pf = 0,7.
Příklad 34: Příprava látky 29
ΌΗ
Do skleněné baňky (50 mL) byl navážen 1,4,8,1 l-tetraazabicyklo[6.6.2]hexadekan (954 mg; 4,22 mmol; 2,0 ekviv.). Dále byly postupně přidány látka A0,5H2O (360 mg; 2,13 mmol; l,0ekviv.), paraformaldehyd (81,9 mg; 2,73 mmol; 1,3 ekviv.) a vodná HC1 (5 M; 20 mL). Vzniklá suspenze byla míchána přes noc při 80 °C. Druhý den byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 1; OH“-forma; H2O -> 10% vodná AcOH). Acetátová frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Odparek byl rozpuštěn v HC1 (6 M; 10 mL) a vzniklý roztok byl odpařen do sucha. Odparek byl dále dosušen pomocí vakuové pumpy a následně v evakuovaném exsikátoru nad P2O5. Výsledný produkt byl získán jako nažloutlá látka (571 mg; 58%; 1 krok; vztaženo na látku A0,5H2O).
NMR (D2O): ’Η δ 1,66 (CH2—CH2 CH2, dm, 1H, 7Hh = 17 Hz); 1,75 (CH2—CH2—CH2, dm, 1H, = 17 Hz); 1,92 (P—CH2 P, m, 2H); 2,20 (CH2—CÍP—CH2, m, 1H); 2,33 (CH2—
CH2—CH2, m, 1H); 2,60 {cyklus, m, 2H); 2,71 {cyklus, m, 2H); 2,91 {cyklus, m, 2H); 3,01 {cyklus, m, 6H); 3,03 (N—CH2—P, 1H); 3,15 {cyklus, m, 1H); 3,29 {cyklus, m, 4H); 3,79 {cyklus, m, 3H); 4,24 (N—CH2—P, m, 1H); '^{'Η} δ 19,5 (CH2—CH2—CH2, s); 20,6 (CH2—CH2— CH2, s); 33,7 (P—CH2—P, dd, 'jCp = 115 Hz; 'jCP = 88 Hz); 42,3 {cyklus, s,); 48,75 {cyklus, s,); 50,0 {cyklus, s); 50,1 {cyklus, s); 52,3 (CH2—N—CH2—P, d, 3JCp = 7 Hz); 53,2 {cyklus, s); 53,4 (N—CH2—P, d, 'jCp = 87 Hz); 55,0 {cyklus, s); 58,7 {cyklus, s); 59,1 {cyklus, s); 59,4 {cyklus, s); 31P{’H} δ 11,3 (HO—P—OH, m, IP); 27,6 {P—CH2—N, m, IP).
MS: (+) 399,1 [M+H+]+; 421,0 [M+Na+]+; 437,2 [M+K+]+·
TLC (SiO2, /PrOH-konc. NH4OH-H2O 7:3:3): Áf = 0,2.
EA(C14H32N4O5P2 l,5HC10,5H2O,A/R = 462,1): C 36,4 (36,2); H 7,5 (7,5); N 12,1 (12,0).
Příklad 35: Příprava látky 30
OH
-32 CZ 307488 B6
Do skleněné vialky (4 mL) byl navážen 1,4,8,1 l-tetraazabicyklo[6.6.2]hexadekan (298 mg; 1,32 mmol; 4,5 ekviv.). Dále byly postupně přidány methylen-bis(fosfinová kyselina) (93,5 mg; 649 pmol; 2,2 ekviv.), acetaldehyd (13,0 mg; 295 pmol; 1,0 ekviv.) a vodná HCI (6 M; 2 mL). Vzniklá suspenze byla míchána přes noc při 60 °C. Druhý den byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O -> 10% vodný pyridin). Pyridinová frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Odparek byl rozpuštěn v H2O (50 mL) a vzniklý roztok byl lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (62,3 mg; 51%; 1 krok; vztaženo na acetaldehyd).
NMR (D2O): 'H δ 1,19 (CH3, dd, 3H, 3JHp = 15 Hz, 2,/Hh = 6 Hz); 1,72 (CH2—CH2—CH2, dm, 1H, ',/HH = 16 Hz); 1,80 (CH2—CH2—CH2, dm, 1H, 'jHH = 17 Hz); 2,15 (P—CH2—P, t, 2H, 2JHp = 16 Hz); 2,27-2,39 (CH2—C/72—CH2, m, 2H); 2,48 (cyklus, m, 2H); 2,68 (cyklus, m, 2H); 2,95-3,04 (cyklus, m, 4H); 3,21-3,37 (cyklus, bm, 11H) 3,51 (CH—CH3, dq, 1H, 2JHp = 14 Hz, 2Jhh = 6 Hz); 3,62 (cyklus, m, 2H); 3,78 (cyklus, m, 1H); 7,15 (PH, d, 1H, 'Λρ = 533 Hz); 13C{'H} 8,9 (CH,, s); <522,1 (CH2—CH2—CH2, s); 23,5 (CH2—CH2—CH2, s); 36,7 (P—CH2— P, dd, L/cp = 81 Hz; %ρ = 75 Hz); 41,6 (cyklus, s); 46,2 (cyklus, s); 49,7 (cyklus, s); 50,9 (cyklus, d, 3./Cp = 6 Hz); 51,2 (cyklus, s); 53,5 (N—CH2—P, d, './cp = 92 Hz); 54,1 (cyklus, s); 55,5 (cyklus, s); 56,8 (cyklus, s); 57,2 (cyklus, s); 59,9 (cyklus, s); 31P <519,8 (PH, dtm, IP, '.Λή = 533 Hz, 2Jph = 16 Hz); 29,2 (P—CH2—N, m, 1P).
MS: (-) 394,9 [M-H+]7 (+) 396,9 [M+H+]+; 419,0 [M+Na+]+; 441,0 [M-H++2Na+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 2:1): £f= 0,7.
EA (CI5H34N4O4P2-H2O, = 414,2): C 43,5 (43,8); H 8,8 (8,5); N 13,5 (13,5).
Příklad 36: Příprava látky 31
Do skleněné vialky (20 mL) byl navážen 1,4,8,1 l-tetraazabicyklo[6.6.2]hexadekan (1,12 g; 4,97 pmol; 1,6 ekviv.). Dále byly postupně přidány látka B (856 mg; 3,07 mmol; 1,0 ekviv.), paraformaldehyd (92,4 mg; 3,08 mmol; 1,0 ekviv.) a vodná HCI (6 M; 15 mL). Vzniklá suspenze byla míchána přes noc při 80 °C. Druhý den byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O —> 10% vodný pyridin). Pyridinová frakce s produktem byla odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn chromatograficky (Cl8; gradientová eluce H2O-0,l% TFA-MeCN). Frakce s čistým produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. Odparek byl následně znovu rozpuštěn v H2O (250 mL) a lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako žlutá látka (1,04 g; 55%; 1 krok; vztaženo na látku B).
NMR (D2O): ’H <51,69 (CH2—CH2—CH2, m, 1H); 1,77 (CH2—CH2—CH2, m, 1H); 2,10 (P— CH2—P, m, 2H); 2,27 (CH2—CH2—CH2, m, 1H); 2,39 (CH2—CH2—CH2, m, 1H); 2,59 (cyklus, m, 2H); 2,64 (cyklus, m, 2H); 2,85-3,07 (cyklus, m, 5H); 3,07-3,35 (cyklus, P—CH2—C, N— CH2—P, m, 9H); 3,38 (cyklus, m, 1H); 3,38 (cyklus, m, 1H); 3,68 (cyklus, m, 1H); 3,74-3,88 (cyklus, N—CHr—P, m, 3H); 7,51 (C77—C—CH2, dd, 2H, VHh = 9 Hz, VHP= 2 Hz); 8,19 (CH— C—N, d, 2H, 2JHh = 9 Hz); ,3C{*H} δ 19,0 (CH2—CH2—CH2, s); 20,2 (CH2—CH2—CH2, s);
33,3 (P—CH2—P, dd, \jCP = 85 Hz, 7Cp = 82 Hz); 41,1 (P—CH2—C, dd, './Cp = 86 Hz, 3JCP = 3 Hz); 42,2 (cyklus, s); 47,9 (cyklus, s); 49,6 (cyklus, s); 49,9 (cyklus, s); 51,8 (cyklus, d, 3JCp = 7 Hz); 54,1 (cyklus, s); 55,2 (P—CH2—N, d, I/cp = 90 Hz); 58,4 (cyklus, s); 58,7 (cyklus, s); 59,5 (cyklus, s); 124,4 (CH—C—N, s); 131,3 (CH—C—CH2, d, 3./Cp = 5 Hz); 143,9 (CH—C—CH2,
-33 CZ 307488 B6 d, X = 8 Hz); 146,8 (CH—C—N, s); 31P{'H} J23,3 (CH2—P—CH2, d, IP, X = 11 Hz); 31,1 (CH2—P—CH2, d, IP, X = 11 Hz).
MS: (-) 516,2 [M-H+]C
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 4:1): Pf = 0,6.
EA (C21H37N5O6P2-5,5H2O, Mr = 616,5): C 40,9 (40,8); H 7,9 (7,6); N 11,4 (11,7).
Do skleněné baňky (25 mL) byl navážen 1,4,8,1 l-tetraazabicyklo[6.6.2]hexadekan (214 mg; 945 pmol; 1,0 ekviv.). Dále byly postupně přidány methylen-bis(fosfinová kyselina) (835 mg; 5,80 mmol; 5,5 ekviv.), paraformaldehyd (63,5 mg; 2,12 mmol; 2,0 ekviv.) a vodná HCI (6 M; 5 mL). Vzniklá suspenze byla míchána dva dny při 80 °C. Následně byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. Odparek byl následně znovu rozpuštěn v H2O (200 mL) a lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (392 mg; 68%; 1 krok; vztaženo na 1,4,8,1 l-tetraazabicyklo[6.6.2]hexadekan).
NMR (D2O): 'Η δ 1,67 (CH2—C/A—CH2, bm, 2H); 1,82 (CH2—CH2-CH2, bm, 2H); 1,99 (P— CH2—P, t, 4H, X> = 17 Hz); 2,78-3,19 (N—CH, bm, 20H); 3,26 (N—CH2, bm, 2H); 3,62 (N— CH2, bm, 2H); 7,14 (P/7, d, 2H, X = 530 Hz); 13C{'H} J24,4 (CH2—CH2—CH2, s); 37,1 (P— CH2—P, dd, 'Jcp = 76 Hz, './cp = 72 Hz); 52,4 (cyklus, s); 52,8 (cyklus, s); 53,8 (CH2—N— CH2—P, d, X = 4 Hz); 53,8 (N—CH2—P, d, X = 100 Hz); 56,5 (cyklus, s); 57,1 (cyklus, s); 31P{'H} />19,8 (PH, dt, 2P, X = 530 Hz, X = 18 Hz); 32,5 (P—CH2—N, t, 2P, X= 15 Hz). MS: (-) 536,7 [M-H+]C
TLC (SiO2, z'PrOH-konc.NH4OH-H2O 7:3:3): Pf= 0,4.
EA (C16H38N4O8P4-4H2O, Mr = 610,5): C 31,5 (31,3); H 7,6 (7,4); N 9,2 (9,2).
Do skleněné vialky (4 mL) byla navážena látka 32-4H2O (59,8 mg; 98 pmol; 1,0 ekviv.). Dále byl přidán paraformaldehyd (13,6 mg; 453 μιηοΐ; 4,6 ekviv.) a vodná HCI (6 M; 10 mL). Vzniklá suspenze byla míchána přes noc při 80 °C. Druhý den byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; Hforma; H2O). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. Odparek byl rozpuštěn v H2O (25 mL) a lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (51,3 mg; 80%; 1 krok, vztaženo na látku 32-4H2O).
NMR (D2O): *H δ 1,82 (CH2—CH2—CH2, m, 2H); 2,06 (CH2—CH2—CH2, m, 2H); 2,30 (P— CPA—P, t, 4H, X = 16 Hz); 2,67-3,63 (cyklus, N—CH2—P, bm, 24H); 3,67 (O—CT/2—P, d, 4H, 2JHp = 5 Hz); ^Οί'Η} Č22,l (CH2—CH2—CH2, s); 34,2 (P—CH2—P, dd, X= 84 Hz, X
-34CZ 307488 B6 = 73 Hz); 51,4 (cyklus, s); 52,8 (cyklus, s); 53,6 (CH2—N—CH2—P, d, 3JCp = 4 Hz); 54,9 (cyklus, s); 55,2 (N—CH2—P, d, }JCV = 98 Hz); 57,8 (cyklus, s); 61,3 (P—CH2—O, d, 3./Cp = 108 Hz) 31P{’H} £27,6 (P—CH2—N, bm, 2P); 40,6 (P—CH2—O, m, 2P).
MS: (-) 596,8 [M-H+] .
TLC (SiO2, zPrOH-konc. NH4OH-H2O 7:3:3): R{ = 0,5.
EA (C18H42N4O10P4-3H2O, Mr = 652,5): C 33,1 (33,4); H 7,4 (7,5); N 8,6 (8,3).
Do skleněné vialky (20 mL) byla navážena látka 32-4H2O (91,6 mg; 150 μηιοί; 1,0 ekviv.). Dále byl přidán roztok HgCl2 (173 mg; 638 pmol; 4,3 ekviv.) ve vodné HC1 (2 M; 5 mL) a vzniklá směs byla míchána dva dny při 60 °C. Druhý den byla vzniklá sraženina odcentrifugována. Do supematantu byl pak zaváděn plynný H2S. Vzniklá sraženina byla odcentrifugována a supematant byl následně odpařen do sucha. Odparek byl rozpuštěn ve vodné HC1 (3%; 300 pL) a k vzniklému roztoku byl přidán nadbytek zPrOH (25 mL). Druhý den byl matečný louh oddekantován. Olejovitý podíl byl opakovaně odpařen s H2O. Odparek byl následně rozpuštěn v H2O (100 mL) a lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (68,4 mg; 68%; 1 krok; vztaženo na látku 32-4H2O).
NMR (D2O): 'Η δ 1,68 (CH2—CH2—CH2, bm, 2H); 1,81 (CH2—Ctf2—CH2, bm, 2H); 1,92 (P— CH2—P, t, 4H, 2JHp = 18 Hz); 2,75-3,21 (N—CH2, bm, 20H); 3,27 (N—CH2, bm, 2H); 3,66 (N— CH2, bm, 2H); 13C{'H} £24,5 (CH2—CH2—CH2, s); 35,1 (P—CH2—P, dd, 'jCp = 117 Hz, 7Cp = 75 Hz); 52,5 (cyklus, s); 52,9 (cyklus, s); 53,3 (N—CH2—P, bm); 53,7 (CH2—N—CH2—P, bm);
56,7 (cyklus, s); 57,0 (cyklus, s); 3iP{'H} δ 12,4 (HO—P—OH, d, 2P, 2JPp = 7 Hz); 36,7 (P— CH2—N, d, 2P, 2JPp = 7 Hz).
TLC (SiO2, zPrOH-konc. NH4OH-H2O 7:3:3): Rf= 0,1.
MS: (-) 569,2 [M-H+]“· (+) 571,4 [M+H+]+; 593,4 [M+Na+]+; 609,4 [M+K+]+·
EA (C16H38N40,oP4-2,5HCl-H20, Mr = 679,6): C 28,3 (28,4); H 6,3 (6,2); N 8,2 (8,3).
Příklad 40: Příprava látky 35
Do skleněné vialky (20 mL) byl navážen 1,4,8,1 l-tetraazabicyklo[6.6.2]hexadekan (148 mg; 653 μιηοΐ; 1,0 ekviv.). Dále byly postupně přidány látka D (688 mg; 3,18 mmol; 4,9 ekviv.), paraformaldehyd (48,6 mg; 1,62 mmol; 2,5 ekviv.) a vodná HC1 (12 M; 10 mL). Vzniklá suspenze byla míchána dva dny při 80 °C. Následně byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (SiO2; EtOHkonc. NH4OH 1:1; R{ = 0,4). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. K. odparku byla přidána H2O (25 mL) a malé množství aktivního uhlí a vzniklá suspenze byla přefiltrována
-35CZ 307488 B6 přes stříkačkový mikrofiltr (Millipore; 0,22 pm). Filtrát byl dále čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. Odparek byl následně znovu rozpuštěn v H2O (125 mL) a lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (272 mg; 58%; 1 krok; vztaženo na 1,4,8,1 l-tetraazabicyklo[6.6.2]hexadekan).
NMR (D2O): 'Η δ 1,72 (CH2—CHr-CH2, m, 2H); 1,74 (CH2—CH2—CH2, m, 2H); 1,94 (P— CH2—P, P—CHyC, m, 8H); 2,48 (CH2—CO, t, 4H, VHh = 7 Hz); 2,92-3,31 (cyklus, N—CH2, bm, 22H); 3,52 (N—CH2, bm, 2H); ^{'Η} £24,4 (CH2—CH2—CH2, s); 26,8 (P—CH2—C, d, 'Jcp = 94 Hz); 31,0 (CH2—CO, s); 34,9 (P—CH2—P, dd, X = 76 Hz, = 74 Hz); 52,4 (cyklus, s); 52,8 (cyklus, s); 54,2 (N—CH2—P, d, ’jCp = 102 Hz); 54,4 (cyklus, d, 3JCT ~ 5 Hz); 57,1 (cyklus, s); 57,3 (cyklus, s); 182,8 (CO, d, 3JCP = 15 Hz); 3IP{'H} £30,4 (CH2—P—CH2, d, 2P, 2JPp = 10 Hz); 33,7 (CH2—P—CH2, d, 2P, 2JPP = 10 Hz).
MS: (-) 663,3 [M-H3O+]T 681,3 [M-H+]L (+) 683,2 [M+H+]+; 727,2 [M-H++2Na+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 1:1): Áf= 0,3.
EA (C22H46N4O12P4-2H2O, MR = 718,6): C 36,8 (36,9); H 7,0 (7,3); N 7,8 (7,5).
Do skleněné vialky (4 mL) byla navážena látka 29-l,5HCl-0,5H2O (51,3 mg; 111 pmol; 1,0 ekviv.). Dále byly postupně přidány methylen-bis(fosfinová kyselina) (59,2 mg; 411 pmol; 3,7 ekviv.), paraformaldehyd (4,9 mg; 163 pmol; 1,5 ekviv.) a vodná HC1 (12 Μ; 1 mL). Vzniklá suspenze byla míchána dva dny při 80 °C. Druhý den byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Odparek byl dále čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+forma; H2O). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. Odparek byl dále dosušen pomocí vakuové pumpy a následně v evakuovaném exsikátoru nad P2O5. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (35,0 mg; 55 %; 1 krok; vztaženo na 291,5HC1O,5H2O).
NMR (D2O): 'H £ 1,83-2,11 (CII2—CH2 CH2. bm, 4H); 2,24 (P—CH2—P, t, 2H, 2JHp = 15 Hz); 2,37 (CH2—CH2—CH2, dd, 2H, VHp = 18 Hz, VHp = 16 Hz); 2,64-3,44 (cyklus, N—CH2— P, bm, 24H); 13C{'H} £22,2 (CH2—CH2—CH2, s); 23,7 (CH2—CH2—CH2, s); 34,2 (P—CH2— P, dd, 'jCp = 122 Hz, 'jCP = 82 Hz); 36,3 (P—CH2—P, t, './Ci> = 82 Hz); 49,3—57,4 (12 x N— CH2; bm); 31P £ 19,0 (HO—P—OH, m, IP); 24,3 (PH, dm, IP, = 533 Hz); 26,7 (P—CH2— N, bm, IP); 27,8 (P—CH2—N, bm, IP).
MS: (-) 553,1 [M-H+] · (+) 555,2 [M+H+]+; 577,2 [M+Na+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 1:1): R{ = 0,3.
EA (C16H38N4O9P4-H2O, = 572,4): C 33,6 (33,4); H 7,0 (6,7); N 9,8 (9,9).
-36CZ 307488 B6
Do skleněné vialky (4 mL) byla navážena látka 291,5HC10,5H2O (403 mg; 872 μιηοΐ; 1,0 ekviv.). Dále byly postupně přidány látka B (294 mg; 1,05 mmol; 1,2 ekviv.), paraformaldehyd (39,3 mg; 1,33 mmol; 1,5 ekviv.) a vodná HC1 (12 M; 5 mL). Vzniklá suspenze byla míchána tři dny při 80 °C. Následně byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn chromatograficky (Cl8; gradientová eluce H2O-0,l% TFA-MeCN). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. Odparek byl následně znovu rozpuštěn v H2O (250 mL) a lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako žlutá látka (417 mg; 62%; 1 krok; vztaženo na 291,5HC10,5H2O).
NMR (D2O): 'H Č2,O2 (CH2—CH—CH2, bm, 2H); 2,32 (CH2—CH—CH2, bm, 2H); 2,40 (P— CH—P, t, 2H, 2.7Hp = 16 Hz); 2,48 (P—CH—P, dd, 2H, 2.7Hp = 20 Hz, 2.7HP = 17 Hz); 2,79-3,98 (cyklus, N—CH—P, P—C772—C, bm, 26H); 7,57 (CH, dd, 2H, 3JHh = 9 Hz, VHP= 2 Hz); 8,24 (CH, d, 2H, 37hh = 9 Hz); 13C{'H} Č2O,5 (CH2—CH2—CH2, s); 21,0 (CH2—CH2—CH2, s); 32,2 (P—CH2—P, dd, '.7CP = 124 Hz, '.7CP = 84 Hz); 33,2 (P—CH2—P, t, '.7CP = 82 Hz); 39,3 (P— CH2—C, d, 'Jcp = 89 Hz); 48,0-59,6 (12 x N—CH2 bm); 124,5 (CH—C—N, d, VCP = 3 Hz); 131,5 (CH—C—CH2, d, 3JCp = 6 Hz); 141,8 (CH—C—CH2, d, VCP = 9 Hz); 147,2 (CH—C—N, s); 31P{'H} δ 18,0 (HO—P—OH, m, IP); 24,0 (P—CH2—N, bm, IP); 25,6 (P—CH2—N, bm, IP); 39,0 (P—CH2—C, m, IP).
MS: (-) 687,8 [M-HU] ; 709,7 [M-2H++Na+]ý 725,7 [M-2H++K+]~. (+) 689,9 [M+H+]+; 711,9 [M+Na+]+; 727,8 [M+K+]+í 749,8 [M-H++Na++K+]+TLC (SiO2, zPrOH-konc. NH4OH-H2O 7:3:3): R{ = 0,3.
EA (C23H43N5O|,O4-4.5H2O, Mr = Π%,6): C 28,3 (28,4); H 6,3 (6,2); N 8,2 (8,3).
Příklad 43: Příprava látky 38
Ve skleněné baňce (250 mL) byla rozpuštěna navážka látky 37-4,5H2O (288 mg; 374 μιηοΙ) v H2O (100 mL) a vzniklý roztok byl krátce promyt plynným argonem. Dále byl přidán katalyzátor (10% Pd@C; 44 mg) a do vzniklé suspenze byl kontinuálně sycen plynným H2 při 60 °C přes noc. Katalyzátor byl poté odfiltrován a filtrát byl odpařen do sucha. Odparek byl poté znovu rozpuštěn v H2O (250 mL) a lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako nažloutlá látka (257 mg; 94%; 1 krok; vztaženo na 37-4,5H2O).
NMR (D2O): 'Η δ 1,80 (CH2—CH2~CH2, bm, 2H); 1,86 (CH2—C772—CH2, bm, 2H); 2,10 (P— CH—P, m, 2H); 2,21 (P—CH~P, m, 2H); 2,65-3,77 (cyklus, R-CHr-ΐ, P—CH2—C, bm, 26H); 6,97 (CH, d, 2H, 3JHH = 8 Hz); 7,25 (CH, d, 2H, ’./HH = 8 Hz); ,3C{'H} δ20,1 (CH2— CH2—CH2, s); 20,5 (CH2—CH2—CH2, s); 32,7 (P—CH2—P, m); 33,4 (P—CH2—P, m; 33,6 (P—CH2—C, d, Ucp = 91 Hz); 46,7-57,2 (12 x N—CH2, bm); 123,0 (CH—C—N, s); 118,2 (CH—C—N, m); 130,8 (CH—C—CH2, d, 3íCp = 5 Hz); 140,3 (CH—C—CH2, m); 31P{'H} δ 13,5 (HO—P—OH, bm, IP); 24,6 (P—CH2—N, bm, IP); 23,6 (P—CH2—N, bm, IP); 32,6 (P— CH2—C, bm, IP).
MS: (-) 658,0 [M-H ] ; 679,9 [M-2H++Na+]C (+) 659,9 [M+H+]+; 981,9 [M+Na+]+; 697,8 [M+K+]·
TLC (SiO2, zPrOH-konc. NH4OH-H2O 7:3:3): R( = 0,3.
EA (C23H45N5O9P4-4H2O, Mr = 731,6): C 37,8 (37,6); H 7,3 (7,2); N 9,6 (9,5).
Příklad 44: Příprava látky 39
-37CZ 307488 B6
Ve skleněné baňce (100 mL) byla navážka 38-4H2O (48,3 mg; 66,0 pmol, 1,0 ekviv.) rozpuštěna v H2O (20 mL). Následně byl jednorázově přidán čerstvě připravený roztok CSC12 (15 mM; 20 mL; 300 pmol; 4,5 ekviv.) v CCI4. Reakční směs byla míchána při laboratorní teplotě přes noc. Organická fáze byla oddělena a vodná fáze byla odpařena do sucha. Surový produkt byl čištěn pomocí preparativní HPLC (C8; gradientová eluce H2O-0,l% TFA-MeCN). Frakce s produktem byla lyofilizována. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (35,2 mg; 67%; 1 krok; vztaženo na 38-4H2O).
NMR (D2O): 'Η <52,02 (CH2—CH2—CH2, bm, 2H); 2,29 (P—C//2—P, t, 2H, 2JHp = 16 Hz); 2,32 (CH2—CH2—CH2, bm, 2H); 2,37 (P—CH2—P, t, 2H, 2JHp = 19 Hz); 2,86-3,92 {cyklus, N— CH—P, P—CH2—C, bm, 26H); 7,37 {CH, d, 2H, 3JHH = 8 Hz); 7,39 {CH, m, 2H); ,3C{'H} 20,8 (CH2—CH2_CH2, s); 21,3 (CH2—CH2—CH2, s); 31,7 (P—CH2—P, dd, 'jCf = 120 Hz, 'jCP = 83 Hz); 32,3 (P—CH2—P, t, ’jCp = 82 Hz); 38,4 (P—CH2—C, d, 'jCp = 91 Hz); 46,6-59,1 (12 x N—CH2, bm); 126,7 (CH—C—N, s); 130,1 (CH—C—N, s); 131,8 (CH—C—CH2, s); 132,2 (CH—C—CH2, d, 2./CP = 8 Hz); 134,8 (CS, s); 31P{'H} δ 16,3 (HO—P—OH, m, IP); 23,4 {P— CH2—N, bm, IP); 23,6 {P—CH2—N, bm, IP); 38,3 {P—CH2—C, m, IP).
MS: (-) 699,6 [M-ll]; 721,6 [M-2H++Na+]~; 737,6 [M-2H++K+]’. (+) 701,8 [M+H+]+; 723,8 [M+Na+]+; 739,8 [M+K+]+.
EA (C24H43N5O9P4S-3,5H2O, Mr = 796,1): C 36,2 (36,2); H 6,3 (6,3); N 8,8 (8,7).
Příklad 45: Příprava látky 40
Ve skleněné vialce (4 mL) byla rozpuštěna navážka látky 37-4H2O (161 mg; 220 pmol; 1,0 ekviv.) ve vodné HC1 (243,8 mM; 1,800 pL; 440 pmol; 2,0 ekviv.) a vzniklá směs byla vychlazena v ledové lázni na 1 °C. Poté byl postupně přidáván (100 pL každé tři minuty) čerstvě připravený roztok vodný NaNO2 (290 mM; 1,00 mL; 290,0 pmol; 1,3 ekviv.). Poté byl jednorázově přidán čerstvě připravený vodný roztok NaN3 (580 mM; 760 pL; 441 pmol; 2,0 ekviv.). Reakční směs byla dále míchána při laboratorní teplotě po dobu 3 hodin. Surový produkt byl rozdělen na dvě ěásti, které byly samostatně čištěny pomocí preparativní HPLC (C8; gradientová eluce H2O-0,l% TFA-MeCN). Frakce s produkty byly následně spojeny a vzniklý roztok byl lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (29,5 mg; 57%; 1 krok; vztaženo na látku 37-4H?O).
NMR (D2O): 'Η <52,07 (CH2—CH2—CH2, m, 2H); 2,18 (CH2—CH2—CH2, m); 2,28-2,41 (P— CH2—P, m, 4H); 2,70-3,82 {cyklus, N—CH2—P, P—CH2—C, bm, 26H); 7,17 {CH—C—N, d, 2H, Vhh = 7 Hz); 7,31 {CH— C—CH2, dd, 2H, 7Hh = 7 Hz, HJHP = 2 Hz); ,3C{'H} <520,5 (CH2— CH2—CH2, s); 22,5 (CH2—CH2—CH2, s); 32,2 (P—CH2—P, dd, 7Cp =121 Hz, 'jCp = 82 Hz); 32,3 (P—CH2—P, dd, 'jCp = 82 Hz); 36,6 (P—CH2—C, d, ’jCp = 93 Hz); 47,2-60,1 (12 x N— CH2,bm); 123,5 (CH—C—N, s); 131,7 (CH—C—CH2, d, 3JCP = 4 Hz); 132,2 (CH—C—CH2, d,
-38CZ 307488 B6
Vcp = 7 Hz); 141,0 (CH—C—N, s); 31P{'H} δ 17,5 (HO—P—OH, m, IP); 22,2 (E—CH2—N, bm, IP); 24,0 (E—CH2—N, bm, IP); 36,8 (E—CH2—C, m, IP).
MS: (-) 666,0 [M-H3O+] ; 684,1 [M-H+] . (+) 688,1 [M+H+]+; 708,1 [M+Na+]+; 724,0 [M+K+]+; 730,1 [M-H++2Na+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 1:1): R{ = 0,2.
EA (C23H43N7O9P4-3H2O, MR = 739,6): C 37,4 (37,2); H 6,7 (6,6); N 13,3 (13,3).
Do skleněné vialky (20 mL) byla navážena látka 31-5,5H2O (50,9 mg; 82,6 pmol; 1,0 ekviv.). Dále byly postupně přidány paraformaldehyd (10,1 mg; 343 pmol; 4,2 ekviv.) a hydroxymethylfosfmová kyselina (50,8 mg; 529 pmol; 6,4 ekviv.) a HCI (6 M; 2 mL). Vzniklá suspenze byla míchána přes noc při 80 °C. Druhý den byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+forma; H2O). Frakce s produkty byly spojeny, odpařeny do sucha a poté několikrát odpařeny s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí preparativní HPLC (C8; gradientová eluce H2O-0.1% TFA-MeCN). Frakce s produktem byla lyofdizována. Výsledný produkt byl získán jako nažloutlá látka (25,8 mg; 46%; 1 krok; vztaženo na látku 31-5,5H2O).
NMR (D2O): *H δ 1,84 (CH2—C//2CH2, m, 2H); 2,15-2,55 (CH2—CH—CH2, P—CÍP-P, m, 4H); 2,76 (cyklus, m, 4H); 2,98 (cyklus, m, 2H); 3,09 (cyklus, m, 2H); 3,18-3,84 (cyklus, N— CH2—P, P—CT/2—C, O—CH—P, m, 20H); 7,57 (CH— C—CH2, d, 2H, 2JHH = 8 Hz,); 8,25 (CH—C—N, d, 2H, 2Jhh = 8 Hz); δ20,7 (CH2—CH2—CH2, s); 33,5 (P—CH2—P, t, 'jCp = 81 Hz); 39,5 (P—CH2—C, dd, 'jCP = 88 Hz); 49,1 (cyklus, s); 49,2 (cyklus, s); 50,2 (cyklus, s); 51,7 (P—CH2—N, d, ’jCp = 84 Hz); 54,6 (cyklus, s); 54,9 (cyklus, s); 58,3 (cyklus, s); 58,9 (P—CH2—N, d, './CP = 83 Hz); 58,9 (P—CH2—O, d, [JCP = 116 Hz); 124,6 (CH—C—N, s);
131,6 (CH—C—CH2, d, 3JCp = 5 Hz); 142,3 (CH—C—CH2, d, 2JCP = 8 Hz); 147,2 (CH—C—N, s); 31P{'H} <523,6 (E—CH2—P, bm, IP); 29,7 (E—CH2—E, bm, IP); 37,3 (E—CH2—O, m, IP). MS: (-) 623,5 [M-H+] . (+) 625,4 [M+H+]+; 647,7 [M+Na“]+; 663,5 [M+K+]+·
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 2:1): Rf = 0,6.
EA (C23H42N5O9P3-3H2O, MR = 679,6): C 40,7 (40,6); H 7,1 (7,1); N 10,3 (10,5).
Příklad 47: Příprava látky 42
Do skleněné vialky (20 mL) byla navážena látka 31-5,5H2O (336 mg; 545 pmol; 1,0 ekviv.). Dále byly postupně přidány paraformaldehyd (44,2 mg; 1,47 mmol; 2,7 ekviv.) a kyselina fosforitá (380 mg; 4,63 mmol; 8,5 ekviv.) a vodná HCI (12 M; 10 mL). Vzniklá suspenze byla míchána čtyři dny při 40 °C. Následně byla směs odpařena do sucha a poté několikrát odpařena s H2O. Surový produkt byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+-forma; H2O). Frakce obsahující
-39CZ 307488 B6 produkt byly spojeny a odpařeny do sucha. Surový produkt byl čištěn pomocí flash chromatografie (Cl8; gradientova eluce H2O-0,1% TFA-MeCN). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. Odparek byl následně znovu rozpuštěn v H2O (250 mL) a lyofdizován. Výsledný produkt byl získán jako žlutá látka (194 mg; 54%; 1 krok; vztaženo na látka 31-5,5H2O).
NMR (D2O): ’Η δ 1,85 (CH2—C//2—CH2, m, 2H); 2,12 (CH2—CH2—CH2, m, 1H); 2,27 (P— CH2—P, m, 4H); 2,35 (CH2—CH2—CH2, m, 1H); 2,66-2,72 (cyklus, m, 3H); 2,89 (cyklus, m, 2H); 2,98-3,12 (cyklus, m, 3H); 3,14-3,60 (cyklus, N—CH2—Ρ, P—C/AC, m, 18H); 7,42 (CH— C—CH2, d, 2H, VHh = 8 Hz,); 8,20 (CH— C—N, d, 2H, 2./HH = 8 Hz); 31P{'H} δ 21,2 (HO—P—OH, s, IP); 23,6 (P—CH2—P, d, IP, 2JPP = 8 Hz); 29,7 (P—CH2—P, d, IP, 2JPp = 8 Hz).
MS: (-) 609,9 [M-H+]T (+) 612,1 [M+H+]+; 634,2 [M+Na+]+; 650,2 [M+K+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 2:1): R{ = 0,4.
EA (C22H40N5O9P3-2,5H2O, MR = 656,5): C 40,3 (40,5); H 6,9 (7,0); N 10,7 (10,4).
Příklad 48: Příprava látky 43
Ve skleněné baňce (100 mL) byla rozpuštěna navážka látky 42-2,5H2O (185 mg; 0,28 mmol; 1,0 ekviv.) v H2O (10 mL) a vzniklý roztok byl krátce promyt plynným. Dále byl přidán katalyzátor (10% Pd@C; 54 mg) a vzniklá suspenze byla kontinuálně sycena plynným H2 při 60 °C přes noc. Katalyzátor byl poté odfdtrován a fdtrát byl odpařen do sucha. Odparek byl poté znovu rozpuštěn v H2O (200 mL) a lyofilizován. Bylo získáno 158 mg (89%; 1 krok; vztaženo na 42-2,5H2O).
NMR(D20): 'Η £1,77 (CH2—C//2 CH2, m, 1H); 1,87 (CH2—CH2—CH2, m, 1H); 2,12 (CH2— CH2—CH2, m, 1H); 2,22-2,40 (CH2—CH2—CH2, P—CH2—P, bm, 5H); 2,62-2,79 (cyklus, m, 2H); 2,91-3,02 (cyklus, m, 4H); 3,07-3,48 (cyklus, N—CH2—Ρ, P—CH2—C, m, 20H); 6,89 (CH— C—N, d, 2H, 2Jhh = 8 Hz); 7,33 (CH— C—CH2, d, 2H, 2./„„ = 8 Hz,); ^Οί’Η} £ 18,9 (CH2—CH2—CH2, s); 22,3 (CH2—CH2—CH2, s); 34,1 (P—CH2—P, t, 'jCp= 83 Hz); 37,5 (P— CH2—C, d, 7CP = 90 Hz); 41,2-59,5 (12 x Ň—CH2,bm); 120,1 (CH—C—N, s); 127,1 (CH— C—N, m); 129,3 (CH—C—CH2, d, VCp = 5 Hz); 134,5 (CH—C—CH2, m); 3,P{'H} £ 19,3 (HO—Ρ—OH, m, 1P); 22,4 (P—CH2—P, d, 1P, 2JPP = 9 Hz); 31,5 (P—CH2—P, bm, IP).
MS: (-) 580,2 [M-HT+]C (+) 582,8 [M+H+]+; 603.2 [M+Na+]+; 619.8 [M+K+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 2:1): Rf = 0,3.
EA (C22H42N5O7P3-3H2O, Mr = 635,6): C 41,2 (41,6); H 6,8 (6,6); N 10,7 (11,0).
Příklad 49: Příprava cílícího konjugátu 44
-40CZ 307488 B6
Do skleněné vialky (4 mL) byla navážena látka 39-3,5H2O (5,3 mg; 6,7 pmol; 1,1 ekviv.). Dále byly postupně přidány peptid HNleAspHisD-PheArgTrpGlyNH2 (5,9 mg; 6.4 pmol; 1,0 ekviv.), vodný pufr H3BO3-LiOH (750 mM v D2O; pD = 10,1; 400 pL; 300 pmol; 50 ekviv.) a H2O (600 pL). Vzniklá směs byla míchána při laboratorní teplotě přes noc. Surový produkt byl čištěn pomocí preparativní HPLC (C8; gradientová eluce H2O-0,l% TFA-MeCN). Frakce s produkty byly lyofilizovány. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (5,7 mg; 55%; 1 krok; vztaženo na látku 39-3,5H2O).
NMR (D2O): 'H £0,86 (CT/3, t, 3H, 3JHh = 7 Hz); 1,01-1,53 (C//2, bm, 10H); 1,68-2,29 (C//2, P—CH2—P, cyklus, bm, 8 H); 2,47-3,73 (cyklus, CH2, P—CH—N, P—CH—C, bm, 36H); 3,80 (CH2, m, 2H); 4,11 (CH, m, 1H); 4,45 (CH, m, 1H); 4,51 (CH, m, 1H); 4,55 (CH, m, 1H); 4,59 (CH, m, 1H); 4,69 (CH, m, 1H); 6,90 (CH2—C—C/ř—N, s, 1H); 7,14 (CH, t, 1H, Vhh = 7 Hz); 7,14-7,27 (arom., m, 6H); 7,29-7,38 (arom., m, 5H); 7,46 (CH, d, 1H, \p,= 8 Hz); 7,66 (CH, d, 1H, Vhh = 8 Hz); 8,03 (N—CH—N, s, 1H); 3,P{'H} δ 13,2 (HO—P—OH, bm, IP); 25,3 (P— CH2—N, bm, IP); 27,4 (P—CH2—N, bm, IP); 32,3 (P—CH2—C, bm, IP).
MS: (-) 1628,2 [M-H ] , (+) 1630,4 [M+H+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 1:1): 7?f = 0,2.
Příklad 50: Příprava konjugátu 50
Ve skleněné vialce (4 mL) byla rozpuštěna navážka látky 38-4H2O (28,6 mg; 39,1 pmol; 1,0 ekviv.) a V-hydroxysukcinimidesteru kyseliny 5-norbomen-2-octové (21,1 mg 84,6 pmol; 2,2 ekviv.) ve směsi vodného roztoku pufru H3PO4-NaOH (1,0 M pH = 8,1; 1,00 mL; 1,0 mmol; 26 ekviv.) a MeCN (0,5 mL). Vzniklá směs byla míchána při laboratorní teplotě přes noc. Surový produkt byl čištěn pomocí preparativní HPLC (C8; H2O-0,l% TFA-MeCN). Frakce s produktem byla lyofilizována. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (26,1 mg; 71 %; 1 krok, vztaženo na látku 38-4H2O).
NMR (D2O): *H δ 1,41-1,56 (CH—CH2—CH, CH bm, 2H); 1,62-1,75 (CH2, CH—CH-CH, bm, 2H); 1,94-2,32 (P—C//2—P, cyklus, bm, 6H); 2,44 (P—CH2—P, t, 2H, 27Hp = 17 Hz); 2,844,16 (cyklus, CH, N—CH2—P, P—CH2—C, bm, 31H); 5,96 (CH, dd, VHH = 12 Hz, Vhh = 5 Hz); 6,32 (CH, dd, 7Hh = 12 Hz, 3Jhh = 6 Hz); 6,98 (CH, d, 2H, 3JHh = 8 Hz); 7,63 (CH, d, 2H, 7,„i =
-41 CZ 307488 B6
Hz); 3,P{'H} <721,1 (HO—P—OH, bm, IP); 23,5 (P—CH2—N, bm, IP); 24,9 (P—CH2—N, bm, IP); 29,3 (P—CH2—C, bm, IP).
MS: (-) 792,5 [M-H+]C
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 1:1): R{ = 0,3.
EA (C32H55N5O10P4-TFA-2H2O, Mr = 943,3): C 43,3 (43,4); H 6,4 (6,2); N 7,4 (7,7).
Příklad 51: Příprava meziproduktu F
Ve skleněné vialce (4 mL) byla rozpuštěna navážka trihydrátu alendronátu sodného (21,0 mg;
64.6 pmol; 1,4 ekviv.) ve vodném roztoku NaOH (250,6 mM; 773 pL; 194 pmol; 4,2 ekviv.) a vzniklá směs byla vychlazena v ledové lázni na 5 °C. Následně byl do směsi pomalu přikapán roztok A-hydroxysukcinimidesteru kyseliny 4-dibenzocyklooktynamidobutanové (18,4 mg;
45.7 pmol; 1,0 ekviv.) v suchém DMSO (1,25 mL) a vzniklá směs byla míchána přes noc za nepřístupu světla. Druhý den byla směs čištěna pomocí preparativní HPLC (C8; gradientní eluce H2O-0,l% TFA-MeCN). Frakce s produktem byla lyofilizována. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (16,3 mg; 66%; 1 krok; vztaženo na A-hydroxysukcinimidester kyseliny 4dibenzocyklooktynamidobutanové). NMR (D2O): *H <7 1,42 (CH2—CH2—CH2, m, 2H); 1,77 (CH2, m, 1H); 1,85 (CH2—C—P, tm, VHp= 13 Hz); 1,96 (CH2, t, 2H, Vhh = 7 Hz); 2,16 (CT/2, m, 1H); 2,88 (CV2—NI I, t, 3JHH = 9 Hz); 3,61 (C//2—N—CO, d, 1H, = 14 Hz); 5,04 (CH—N— CO, d, 1H, 2JHh = 14 Hz); 7,29 (CH, d, 1H, 37hh = 7 Hz); 7,35 (CH, t, 1H, 37Hh = 7 Hz); 7,39 (CH, t, 1H, 3Jhh = 7 Hz); 7,42-7,53 (CH, m, 3H); 7,58 (CH, d, 1H, V„n = 7 Hz); 7,63 (CH, t, 1H, 3Jhh=7Hz); 3iP{'H} <721,2 (m, IP).
MS: (-) 516,9 [M-H3O+]T 534,8 [M-H+]. (+) 536,2 [M+H+]+; 559,2 [M+Na+]+; 581,1 [MH++2Na+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 1:1): R{ = start.
Příklad 52: Příprava konjugátu 46
h2o3p
HjO3P
Ve skleněné vialce (4 mL) byla rozpuštěna navážka látky 40-3H2O (14,1 mg; 19,1 pmol; 1,0 ekviv.) ve vodném pufru AcOH-NH3 (500 mM; 700 pL; 350 pmol; 18 ekviv.). Ke vzniklému roztoku byl přidán čerstvě připravený roztok látky F (11,6 mg; 21,6 pmol; 1,1 ekviv.) ve směsi DMSO-MeCN-H2O (1:1:1; 800 pL). Směs byla míchána tři hodiny při laboratorní teplotě.
-42CZ 307488 B6
Surový produkt byl čištěn pomocí preparativní HPLC (C8; gradientová eluce H2O-0,l% TFAMeCN). Frakce s produktem byla lyofílizována. Výsledný produkt (směs dvou regioisomerů) byl získán jako bílá látka (14,1 mg; 56 %; 1 krok, vztaženo na 40-3H2O).
NMR (D2O): 'Η δ 1,22-1,41 (CH2, bm, 4H); 1,83-1,99 (C//2—C—P, CH2, bm, 6H); 2,05 (CH2, m, 2H); 2,14-2,45 (P—CH2—P, CH2, bm, 6H); 2,63-3,68 (cyklus, P—CH2—C, P—CH2—N, bm, 26H); 4,52-5,07 (CH2—N—CO, m, 1H); 5,63-5,79 (CH2—N—CO, m, 1H); 6,94 (CH, d, 1H, Vhh = 8 Hz); 7,02-7,22 (CH, m, 1H); 7,02-7,22 (CH, m, 1H); 7,30 (CH, bm, 2H); 7,34-7,61 (CH, bm, 7H); 31P{'H} δ 14,4 (HO—P—OH, bm, IP); 18,4 (PO3H2, bm, 2P); 24,4-28,9 (P— CH2—N, bm, 2P); 33,6-34,7 (P—CH2—C, bm, IP).
MS: (-) 1202,5 [M-H3O+]1220,5 [M-H+]C (+) 1222,7 [M+H+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 1:1): Rf= start.
EA (C46H69N9O18P6-5,5H2O, Mr = 1321,0): C 41,8 (41,8); H 6,1 (6,0); N 9,5 (9,5).
Příklad 53: Příprava cílícího konjugátu 47
Ve skleněné vialce (4 mL) byla rozpuštěna navážka konjugátů fluoresceinu a 6-methyl-tetrazinu (1,0 mg; 1,8 pmol; 1,0 ekviv.) v suchém DMSO (500 pL) a k vzniklému roztoku byl poté přidán čerstvě připravený roztok látky 45-TFA-2H2O (2,5 mg; 2,7 pmol; 1,0 ekviv.) ve vodném pufru AcOH-NH3 (100 mM; 500 pL; 50 pmol; 28 ekviv.). Směs byla míchána přes noc při laboratorní teplotě. Surový produkt byl čištěn pomocí preparativní HPLC (C8; gradientová eluce H2O—0,1% TFA-MeCN). Frakce s produktem byla lyofílizována. Výsledný produkt byl získán jako hnědá látka («2 mg).
NMR (D2O): 'Η δ 1,46 (CH—CH2—CH, m, 1H); 1,62 (CH2, bm, 1H); 1,88-1,96 (cyklus, CH— CH2—CH, bm, 2H); 1,98-2,16 (P—CH2—P, cyklus, bm, 3H); 2,25 (P—CH2—P, dd, 2H, 2JHp = 17 Hz, 27Hp = 15 Hz); 2,32 (CH3, s, 3H); 2,63^1,03 (cyklus, CH, N—CH2—P, P—CH2—C, bm, 33H); 6,66 (CH, m, 1H); 6,82-6,84 (CH, bm, 3H); 6,97 (CH, d, 2H, Vhh = 7 Hz); 7,12-7,23 (CH, bm, 3H); 7,29 (CH, d, 2H, VHH = 9 Hz); 7,34 (CH, d, 1H, VHH = 7 Hz); 8,03 (d, 2H, VHH = 8 Hz); 3IP{'H} δ 14,8 (HO—P—OH, d, IP, 2JPP = 8 Hz); 28,9 (P—CH2—N, m, IP); 32,1 (P— CH2—N, m, IP); 36,2 (P—CH2—C, d, IP, 2./PP = 10 Hz).
MS: (-) 1323,8 [M-H+] . (+) 1369,7 [M-H++2Na+]+.
TLC (SiO2, zPrOH-konc. NH4OH-H2O 7:3:3): R{ = 0,3.
Příklad 54: Příprava konjugátu 48
-43 CZ 307488 B6
Ve skleněné vialce (4 mL) byla rozpuštěna navážka látky 43-3H2O (28,9 mg; 45,5 pmol; 1,0 ekviv.) ve směsi vodného roztoku pufru H3PO4-NaOH (1,0 M, pH = 8,1; 1,00 mL) a MeCN (0,5 mL) a roztok byl vychlazen v ledové lázni na 5 °C. Následně byl do směsi pomalu přikapán roztok V-hydroxysukcinimidesteru kyseliny 4-dibenzocyklooktynamidobutanové (36,2 mg; 90,0 pmol; 2,0 ekviv.) v suchém DMSO (1,7 mL) a vzniklá směs byla míchána přes noc za nepřístupu světla. Druhý den byla směs čištěna pomocí preparativní HPLC (C8; gradientní eluce H2O-0,l% TFA-MeCN). Frakce s produktem byla lyofilizována. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (24,6 mg; 63%; 1 krok; vztaženo na látku 43-3H2O).
NMR (D2O): 31P{‘H} δ 12,2 (HO—P—OH, s, IP); 19,4 (P—CH2—P, d, IP, 2JPP = 10 Hz); 38,2 (P—CH2—P, d, 1P„ 2JPP = 10 Hz).
MS: (-) 867,6 [M-H+]'· (+) 870,2 [M+H+]+; 892,1 [M+Na+]+; 907,7 [M+K+]+·
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 2:1): R{ = 0,4.
EA (C41H55N6O9Py2,5H2O, MR = 913,9): C 53,6 (53,9); H 6,8 (6,6); N 8,9 (9,2).
Příklad 55: Příprava konjugátu 49
Látka 35-2H2O (108 mg; 150 pmol; 1,0 ekviv.) aV-hydroxysukcinimid (NHS; 69 mg; 600 pmol; 4,0 ekviv.) byly rozpuštěny ve vodném acetatovém pufru HOAc/NaOAc (pH 5,5; 0,5 M; 3 mL). Do tohoto roztoku byl přidán roztok EDC-HC1 (186 mg; 1,20 mmol; 8 ekviv.) ve stejném pufru (1 mL). Karboxylové funkce byly aktivovány po dobu 30 min. pH tohoto roztoku bylo opatrně zvýšeno na 9 přidáváním vodného NaOH (0,05 M). Poté byl k tomuto roztoku přidán roztok hydrochloridu methyltetrazinaminu (78,4 mg; 330 pmol; 2,2 ekviv.) v suchém DMSO (2,0 mL), pH bylo upraveno na 8 pomocí vodného NaOH (0,05 M) a směs byla ponechána míchat 3 hodiny při laboratorní teplotě. Poté byla reakční směs zakoncentrována na objem 2 mL a následně čištěna pomocí preparativní HPLC (C8; gradientová eluce H2O-0,l% TFA-MeCN). Frakce s produktem byla lyofilizována. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (121 mg; 75%; 1 krok; vztaženo na látku 35-2H2O).
NMR (D2O): 'Η δ 1,82 (CH2—CH-CH2, m, 2H); 1,88 (CH2—CH2—CH2, m, 2H); 1,99 (P— CH2—C, m, 4H); 2,13 (P—CH2—P, m, 4H); 2,34 (CH3, s, 6H); 2,40 (CT/2—CO, t, 4H, 3Jhh = 7 Hz); 2,72-3,22 (cyklus, bm, 20H); 3,34 (N—CH2—P, m, 4H); 4,31 (CH2—NH—CO, s, 4H); 7,11 (CH, d, 2H, VHh = 8 Hz); 8,11 (CH, d, 2H, Vhh = 8 Hz); ^Οΐ'Η} δ 19,4 (CH3, s); 22,1 (CH2—CH2—CH2, s); 28,0 (P—CH2—C, d, './CP = 93 Hz); 29,3 (CH2—CO, s); 35,5 (P—CH2— P, dd, 'JCP = 79 Hz, 'jCP = 75 Hz); 44,2 (CH2—NH—CO, s); 50,1 (cyklus, s); 54,2 (cyklus, s);
55,8 (cyklus, d, 3JCP = 5 Hz); 56,2 (N—CH2—P, d, 'Jcp = 102 Hz); 58,2 (cyklus, s); 59,0 (cyklus,
-44CZ 307488 B6 d, 3); 122,6 (arom., s); 127,3 (arom., s); 129,6 (arom., s); 138,2 (arom., s); 161,2 (arom., s); 164,2 (arom., s); 174,2 (CO, d, 3JCP = 17 Hz); 31P{'H} <5 27,2 (CH2—P—CH2, bm, 2P); 36,1 (CH2—P—CH2, d, 2P, 2JPp = 8 Hz).
MS: (-) 1048,1 [M-HJE (+) 1050,3 [M+H+]+; 1072,2 [M+Na+]+; 1087,6 [M+K+]+·
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 2:1): R{ = 0,4.
EA (C42H64Nl4Ol0P4 l,5H2O, MR = 1076,0): C 46,6 (46,9); H 6,2 (6,0); N 17,8 (18,2).
Příklad 56: Příprava měďnatého komplexu látky 14 N, ?cú2‘—-1---0COOH
Ve skleněné vialce (4 mL) byla rozpuštěna navážka látky 14-4H2O (61,3 mg; 122 pmol; 1,0 ekviv.) a Cu(OAc)2-H2O (34,2 mg; 171 pmol; 1,4 ekviv.) ve vodném pyridinu (2 %; 3 mL) a vzniklá směs byla ponechána míchat 10 minut. Poté byla směs odpařena do sucha a následně několikrát odpařena s H2O. Surový komplex byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; H+forma; H2O). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. Odparek byl znovu rozpuštěn v H2O (50 mL) a vzniklý roztok byl lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako tmavě modrá látka (51,4 mg; 83%; 1 krok; vztaženo na látku 14-4H2O).
MS: (-) 488,0 [M-H+] ; 524,0 [M+CEjL (+) 449,0 [M+H+]+; 512,0 [M+Na+]+.
TLC (SiO2, zPrOH-konc. NH4OH-H2O 7:3:3): Rf = 0,4.
EA (C15H32N4O6P2Cu-H2O, Mr = 508,0): C 35,5 (35,7); H 6,8 (6,6); N 11,0 (11,1).
Příklad 57: Příprava měďnatého komplexu látky 23
Ve skleněné vialce (4 mL) byla rozpuštěna navážka látky 23-3H2O (98,7 mg; 134 pmol; 1,0 ekviv.) a Cu(OAc)2-H2O (41,2 mg; 206 pmol; 1,5 ekviv.) ve vodném pyridinu (5%; 2 mL) a vzniklá směs byla ponechána míchat 10 minut. Poté byla směs odpařena do sucha a následně několikrát odpařena s H2O. Surový komplex byl čištěn pomocí iontoměniče (DOWEX 50; Hforma; H2O). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. Odparek byl znovu rozpuštěn v H2O (100 mL) a vzniklý roztok byl lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako tmavě modrá látka (83,4 mg; 77%; 1 krok; vztaženo na látku 23-3H2O).
MS: (-) 743,2 [M-H+]L
TLC (SiO2, zPrOH-konc. NH4OH-H2O 7:3:3): RP= 0,2.
EA (C22H45N4Ol2P4Cu-0,5HCl-2,5H2O, MR = 808,3): C 29,5 (29,6); H 4,8 (4,9); N 7,8 (7,8).
Příklad 58: Příprava měďnatého komplexu látky 37
-45 CZ 307488 B6
Ve skleněné vialce (4 mL) byla rozpuštěna navážka látky 37-4,5H2O (29,7 mg; 38,5 pmol; 1,0 ekviv.) ve vodném roztoku CuCl2 (63 mM; 793 pL; 50,0 pmol; 1,3 ekviv.). Následně bylo pH vzniklého roztoku pomalu upraveno na 6 pomocí vodného roztoku NaOH. Surový produkt byl ěištěn pomocí preparativní HPLC (C8; gradientní eluce H2O-0,l% TFA-MeCN). Frakce s produktem byla lyofilizována. Výsledný produkt byl získán jako světle modrá látka (25,8 mg; 70%; 1 krok; vztaženo na látku 37-4,5H2O).
MS: (-) 749,1 [M-H+]b 785,0 [M+CF]’. (+) 751,1 [M+H+ý; 774,1 [M+Na+]+; 790,2 [M+K+]+· TLC (SiO2, zPrOH-konc. NH4OH-H2O 7:3:3): R{ = 0,2.
EA (C23H4|N5OnP4Cu-0,5TFA-3H2O, Mr = 953,5): C 30,2 (30,1); H 5,0 (5,0); N 7,3 (7,4).
Ve skleněné vialce (4 mL) byla rozpuštěna navážka látky 35-2H2O (34,4 mg; 47,8 pmol; 1,0 ekviv.) ve vodném roztoku Bi(NO3)2 (50,5 mM; 947 pL; 47,8 pmol; 1,0 ekviv.). Následně bylo pH vzniklého roztoku bylo pomalu upraveno na 5 pomocí pevného urotropinu. Reakční směs byla poté zahřívána 2 hodiny při 90 °C. Poté bylo přidáno další množství pevného urotropinu na zvýšení pH na 5. Reakční směs byla zahřívána dalších 6 hodin při 90 °C. Po ochlazení byla reakční směs odpařena do sucha. Surový komplex byl čištěn pomocí iontoměniče (Amberlite CG50; H+-forma; H2O). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. Odparek byl znovu rozpuštěn v H2O (50 mL) a vzniklý roztok byl lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (34,3 mg; 75%; 1 krok; vztaženo na látku 35-2H2O).
MS: (-) 887,2 [M-H+]“. (+) 889,2 [M+H+]+.
TLC (SiO2, zPrOH-konc. NH4OH-H2O 7:3:3): R{ = 0,4.
EA (C22H43N4O,2P4Bi-2H2O, Mr = 955,5): C 28,6 (28,5); H 5,1 (4,9); N 6,1 (6,3).
Příklad 60: Příprava lutecitého komplexu látky 35
Ve skleněné vialce (4 mL) byla rozpuštěna navážka látky 35-2H2O (44,1 mg; 61,4 pmol; 1,0 ekviv.) ve vodném roztoku LuC13 (50,1 mM; 1.23 mL; 61,6 pmol; 1,0 ekviv.). Následně bylo pH vzniklého roztoku pomalu upraveno na 7 pomocí vodného roztoku NaOH. Reakční směs byla poté zahřívána přes noc při 80 °C. Druhý den byla reakční směs odpařena do sucha a surový komplex byl čištěn pomocí iontoměniče (Amberlite CG50; H-forma; H2O). Frakce s produktem
-46CZ 307488 B6 byly spojeny a odpařeny do sucha. Odparek byl znovu rozpuštěn v H2O (50 mL) a vzniklý roztok byl lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (37,1 mg; 64%; 1 krok; vztaženo na látku 35-2H2O).
MS: (-) 853,1 [M-H+]’. (+) 855,1 [M+H+]+; 893,1 [M+K+]+.
TLC (SiO2, EtOH-konc. NH4OH 1:1): R{ = 0,6.
EA (C22H43N4Oi2P4Lu-5H2O, Mr = 944,5): C 28,0 (28,0); H 5,7 (5,9); N 5,9 (5,9).
Příklad 61: Příprava gadolinitého komplexu látky 43
Ve skleněné vialce (4 mL) byla rozpuštěna navážka látky 43-3H2O (62,5 mg; 66,2 pmol; 1,0 ekviv.) ve vodném roztoku GdCL (49,8 mM; 1,33 mL; 66,2 pmol; 1,0 ekviv.). Následně bylo pH vzniklého roztoku pomalu upraveno na 6 pomocí vodného roztoku NaOH. Reakční směs byla poté zahřívána 2 hodiny při 80 °C, pH bylo znovu zvýšeno na 6 pomocí vodného roztoku NaOH a pak byla směs zahřívána přes noc při 80 °C. Další den byla reakční směs odpařena do sucha a surový komplex byl čištěn pomocí iontoměniče (Amberlite CG50; H+-forma; eluce H2O a poté 10%> AcOH ve směsi H2O:EtOH 1:1). Frakce s produktem byly spojeny a odpařeny do sucha. Odparek byl znovu rozpuštěn v H2O (50 mL), odpařen dosucha ve vakuu, znovu rozpuštěn ve vodě (50 mL) a vzniklý roztok byl lyofilizován. Výsledný produkt byl získán jako bílá látka (37,1 mg; 75%>; 1 krok; vztaženo na látku 43-3H2O).
MS: (-) 853,1 [Μ-ΡΓ] . (+) 855,1 [M+H+]+; 893,1 [M+K+]+.
Příklad 62: Srovnávací experiment: Značení látek pomocí64 Cu
Do plastové mikronádobky Eppendorf (1,5 mL) byl přidán vodný roztok značené látky (1,0 mM; 1,0 pL) k vodnému roztoku pufru MES-NaOH (1,0 M; pH 6,2; 10,0 pL). Vzniklý roztok byl inkubován při 25,0 °C a mírném třepání (750 kmitů/min) po dobu 10 minut. Poté byl ke směsi přidán čerstvě připravený roztok [64Cu]CuCl2 (9-10 MBq; 6,0 pL) ve vodné HCl (10 mM). Reakční směs byla posléze inkubována při 25,0 °C a mírném třepání (750 kmitů/min) po dobu 10 minut. Po 10 minutách byla reakční směs analyzována pomocí TLC (SiO2 60 W F254 S; vodný roztok EDTA-NaOH, pH 5; Povolná měď) = 0,8-0,9; 7?f(komplex) = start). Příklady radiochemických výtěžků (určeno pomocí RitaStar; Raytest) vybraných látek včetně příkladů v současné době používaných ligandů (kurzíva) jsou uvedeny níže (pro každý ligand alespoň ze třech různých eluátů [64Cu]CuC12):
Látka Radiochemický výtěžek
1 71±10% ’
8 76±14%o
14 83±8%
19 83±9%
32 83±3%
34 62±12%
41 66±8%
NOTA 18±11%
DOTA 9±1%
cb-TE2A 2±1%
-47CZ 307488 B6
Radiochemický výtěžek látek, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, byl několikanásobný ve srovnání s běžně dostupnými komerčními ligandy NOTA, DOTA a cbTE2A.
Příklad 63: Značení látky 34pomocí1/7Lu
Vodný roztok beznosičového radioizotopu [l77Lu]LuCl3 v 0,01 M HC1 (50 pL, aktivita cca 12MBq) byl přidán k vodnému roztoku NH4OAc (0,2 mL pufru; pH 5,5; 1 M) ve vialce o objemu 1 mL. Do tohoto roztoku byl přidán roztok sloučeniny 34 v ultračisté H2O (40 pL, c = 50 pM) a vzniklý roztok byl třepán při 90 °C po dobu 20 min. 1TLC analýza (1 M vodný NH4OAc a MeOH; 1:1 v/v) ukázala radiochemický čistý značený komplex (komplex má Rf ~0,9; volné 177Lu má Rf = start).
Příklad 64: Značení látky 37pomocí213Bi
K beznosičovému radioizotopu 2l3Bi3+ ve formě roztoku v 0,15 Μ KI (1,4 mL) s nominální aktivitou cca 150 MBq (tj. cca 107 MBq/mL) byl přidán vodný roztok NaOAc (pH 5,5; 1 M; 1,6 mL). Do roztoku sloučeniny 37 v ultračisté vodě (10 pL, c = 100 pM) byl přidán roztok obsahující [2l3Bi]Bi3+ (90 pL, cca 10 MBq) a roztok byl inkubován při 70 °C po dobu 10 min. Papírová LC (0,1 M vodný Na-citrát) ukázala kvantitativní vznik komplexu (Rf komplexu <0,5, 213Bi-citrát se pohybuje s čelem rozpouštědla).
Příklad 65: Příprava cílícího konjugátů látky 39 a protilátky Rituximab
Voda pro roztoky použité v reakci a při čištění v tomto příkladu je deionizovaná voda zbavená možných kovových nečistot prolitím aktivovanou chelatační pryskyřicí Chelex 100, dále bylo používáno sterilní nádobí a použité komerční chemikálie měly nejvyšší dostupnou čistotu ohledně obsahu iontů kovů.
Vodný roztok (4 mL) protilátky Rituximab (0,14 pmol) o koncentraci 5,0 mg/mL byl zkoncentrován ultrafiltrací v nádobce Vivaspin 6 s MWCO 30 kDa na 1 mL (výsledná koncentrace 20 mg/mL). Zkoncentrovaný roztok protilátky byl inkubován s roztokem látky 39-3,5H2O (1,1 mg; 1,4 pmol, molární poměr protilátka:ligand 1:10) v bezvodém DMSO (200 pl; rozpuštěno pomocí ultrazvuku, sterilizace byla provedena filtrací přes stříkačkový mikrofíltr; Millipore; 0,22 pm). Ihned po přípravě reakční směsi bylo pH roztoku upraveno opatrným přidáváním roztoku 0,1 M vodného NaOH tak, aby bylo 8,2 až 8,6. Reakční směs byla třepána (Vortex, 450 ot/min.) po dobu 2 hodiny při laboratorní teplotě. Po 1 hodině od začátku reakce bylo pH znovu upraveno na 8,2 až 8,6 (0,1 M vodný NaOH). Konjugace byla ukončena přídavkem vodného pufru TRIS-HC1 (1,0 M; pH 8,8; 50 pL). Roztok konjugátů byl dále přečištěn od zbytků nezreagovaného ligandů a jiných nízkomolekulámích nečistot trojnásobnou ultrafiltrací ve Vivaspinu 6. Ultrafiltrace byla provedena následujícím způsobem. Směs byla převedena do promyté sterilizované zkumavky Vivaspin 6 a objem roztoku byl poté doplněn 0,1 M pufrem PBS (pH 8,5) na 6 mL. Horní díl Vivaspinu byl následně 5 minut inkubován na Vortexu při 1000 kmitech/min. Roztok byl dále centrifugován 45 min při 4000 ot/min. až objem v horní části Vivaspinu byl menší než 0,3 mL. Roztok protilátky (vrchní část) byla doplněn 0,05 M vodným NH4OAc (pH 7,0) na objem 6 mL a byl opakován krok třepání a centrifugace (provedeno 2x). Po třetí centrifugaci byl roztok obsahující konjugát doplněn H2O na konečný objem 3 mL. Čistota konjugátů byla kontrolována spektrofotometricky při vlnové délce 280 nm a rovněž pomocí analýzy HPLC (UV detekce; 280 nm); test degradace nebo výraznějších ztrát
-48CZ 307488 B6 protilátky. Přečištěný konjugát musí být uchováván v lednici při 4 až 8 °C. Průměrný počet ligandů na molekulu protilátky byl pomocí MS-MALDI/TOF určen na 3.
Příklad 66: Značení cílícího konjugátů látky 39 a protilátky Rituximab pomocí 64Cu
Roztok konjugátů z příkladu 65 (0,5 mL) byl převeden do plastové mikronádobky Eppendorf o objemu 1,5 mL a popřípadě doplněn 0,5 M NH4OAc (pH 6,0) tak, aby výsledný objem roztoku (včetně radionuklidu) činil 1 mL. Vzniklý roztok byl inkubován při teplotě 25,0 °C a mírném třepání (450 kmitů/min) po dobu 15 min. Ke směsi byl poté přidán radioaktivní beznosičový [64Cu]CuC12 v 0,01 M vodné HCI (0,12 mL; 200 MBq [64Cu]CuCl2). Následně bylo zkontrolováno pH, jehož hodnota byla 6,0. Reakční směs byla posléze inkubována při teplotě 40 °C a mírném třepání (450 kmitů/min) po dobu 20 min. Po ukončení inkubace je přípravek sterilizován filtrací přes stříkačkový mikrofiltr (Millipore; 0,22 μιη). ITLC analýza (1 M vodný NH4OAC a MeOH; 1:1 v/v) po přidání vodného roztoku DTPA (komplexace volné 64-Cu) ke vzorku sterilního přípravku ukázala radiochemický čistý značený konjugát (Rf = start) a žádnou volnou 64-Cu (Cu-DTPA, R{ ~0,9).
Příklad 67: Syntéza cílícího konjugátů látky 39 a dendrimeru PAMAMdruhé generace
Komerční forma dendrimeru G2-PAMAM (16 volných aminoskupin; 20% roztok v MeOH; 0,15 mL; 10 pmol) byla rozpuštěna v H2O (5 mL) a v tomto roztoku byl rozpuštěna látka 39 (127 mg; 160 pmol), ekvivalentní množství na aminoskupiny dendrimeru). pH roztoku bylo opatrně upraveno na 9 pomocí vodného roztoku KOH a vzniklý roztok byl míchán při teplotě 40 °C po dobu 12 hodin. Poté byla opět přidána látka 39 (63 mg; 0,5 molámího ekvivalentu na počet aminoskupin dendrimeru), pH bylo pět upraveno 9 pomocí vodného roztoku KOH a roztok byl míchán při 40 °C po dobu 12 hodin. Poté byl roztok ochlazen, pH bylo sníženo na 7 pomocí zředěné vodné HCI a roztok byl přefiltrován přes stříkačkový mikrofiltr (Millipore; 0,22 pm) do ultrafiltrační cely. Ultrafiltrace (tlak 3 atm) byla provedena třikrát z objemu 50 mL na 10 mL s membránou 3kDa a poté probíhala kontinuální ultrafiltrace (4 atm), dokud nebylo získáno 800 mL eluátu. Zbývající roztok nad membránou byl lyofilizován za vzniku bílé pevné látky (167 mg, při obsahu účinné látky 72% je výtěžek cca 83 % na výchozí dendrimer). Počet ligandů na dendrimer ('H NMR spektrum) byl 15,5.
NMR (D2O): Η δ 1,88-3,72 (CT/2, bm, 39,44H); 7,11-7,33 (CH, bm, 4,00H); 31P{'H} δ 19,0 (HO—P—OH, bm, IP); 23,8 (P—CH2—P, bm, IP); 28,2 (P—CH2—P, bm); 35,8 (P—CH2—P, bm, IP).
EA (M, čistého konjugátů dendrimeru 14482): 31.4% C, 8.0% H, 9.6%N, 2.5% S; tj. obsah konjugátů dendrimeru 72%.
Příklad 68: Značení cílícího konjugátů látky 39 a dendrimeru PAMAM druhé generace pomocí 64-Cu
Konjugát z příkladu 67 (5 mg, cca 0,25 pmol, cca 3,9 pmol makrocyklu) byl rozpuštěn v ultračisté vodě (50 pL) v plastové mikronádobce Eppendorf (0,5 mL) a dále byl přidán vodný pufr 0,5 M HOAc/NaOAc (pH 5,8; 0,2 mL). Ke směsi byl přidán beznosičový [64Cu]CuC12 v 0,01 M vodné HCI (120 pL, 180-200 MBq [64Cu]CuCI2). Následně bylo zkontrolováno pH roztoku, jehož hodnota byla 5,8. Reakční směs byla posléze inkubována při 50,0 °C a mírném třepání (450 kmitů/min) po dobu 20 minut. Byl získán roztok obsahující značený dendrimer. Produkt byl analyzován tenkovrstvou chromatografíí (Instant Thin-Layer Chromatography, ITLC) na destičkách s impregnovanými skleněnými vlákny jako stacionární fází a s 10 mM EDTA v 0,1 M vodném NH4OAc (pH 5,5) jako mobilní fází s R( 0 až 0,1 a radioaktivita byla zjištěna pouze ve skvrně dendrimeru.
-49CZ 307488 B6
Příklad 69: Příprava cílícího konjugátů s kyselinou listovou na bázi konjugátů 48
Ve skleněné vialce (4 mL) byla rozpuštěna navážka konjugátů 48-2,5H2O (11 mg; 12 pmol; 1,0 ekviv.) ve vodném pufru NH4OAc (500 mM; pH 5,0; 0,5 mL). Ke vzniklému roztoku byl přidán čerstvě připravený roztok ó-(l-azido-3,6-dioxaoktan-8-amidu) kyseliny listové (8,6 mg; 14,4 pmol; 1,2 ekviv.) v H2O (0,3 mL). Směs byla míchána 4 hodiny při laboratorní teplotě. Surový produkt byl čištěn pomocí preparativní HPLC (C8; gradientová eluce H2O-0,l% TFAMeCN). Frakce s produktem byla lyofilizována. Výsledný produkt izolovaný jako směs regioisomerů byl získán jako bílá látka (11,4 mg).
MS: (+) 1467,6 [M+H+]+, 1489,2 [M+Na+]+.
Příklad 70: Příprava cílícího konjugátu s biotinem na bázi konjugátu 49
Ve skleněné vialce (4 mL) byla rozpuštěna navážka konjugátů 491,5H2O (11,8 mg; 11 pmol; 1,0 ekviv.) ve vodě (0,5 mL). Ke vzniklému roztoku byl přidán čerstvě připravený roztok komerčního derivátu biotinu TCO-PEG3-biotin (7,5 mg; 13,2 μιηοΐ; 1,2 ekviv.) v H2O (0,4 mL). Směs byla míchána 30 min při laboratorní teplotě. Surový produkt byl čištěn pomocí preparativní HPLC (C8; gradientová eluce H2O-0,l% TFA-MeCN). Frakce s produktem byla lyofilizována. Výsledný produkt izolovaný jako směs regioisomerů byl získán jako bílá látka (15,2 mg).
MS: (+) 1590,5 [M+H+]+, 1612,8 [M+Na+]+.

Claims (17)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Sloučeniny na bázi cyklámu a/nebo konjugáty sloučenin na bázi cyklámu a/nebo koordinační sloučeniny sloučenin na bázi cyklámu a/nebo cílící konjugát, přičemž sloučeniny na bázi cyklámu jsou obecného vzorce I (I) kde
    R, Ra, R1, R2, R3 jsou nezávisle vybrány ze skupiny zahrnující
    H, OH, (Cl až C6)alkyl, který může být lineární nebo rozvětvený, (C3 až C6)cykloalkyl, benzyl, fenyl, (C5-C6) heterocyklus, obsahující alespoň jeden heteroatom N, S, O, a/nebo R1 a/nebo R2 a/nebo R3 je bisfosforová kyselina obecného vzorce II a/nebo dohromady R1 a R3 tvoří (C2 až C3)alkylen, který může být substituovaný jedním nebo více lineárními nebo rozvětvenými (Cl až C6)alkyly, přičemž (Cl až C6)alkyl, (C3 až C6)cykloalkyl, fenyl, benzyl a (C5 až C6)heterocyklus, obsahující alespoň jeden heteroatom N, S, O, mohou být nezávisle substituovány jednou nebo více skupinami vybranými z COOH; NH2; NO2, NX2; C(O)NX2; NHX; C(O)NHX; OH; SH; -NCS; tetrazin obecného vzorce III
    N^N
    N
    Y (ΠΙ)
    -51 CZ 307488 B6 (C7 až C8)cykloalkenyl v trans konfiguraci, který může být popřípadě dále substituován jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; norbomenyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; -N3; (C2 až C6)alkynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2,-NCS, -NCO, N3 a SH; cyklooktynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; cykloazaoktynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; maleinimid; fenyl; benzyl a -P(O)(OH)Z;
    a kde R4 a R4ajsou nezávisle H, (Cl až C6)alkyl, který může být lineární nebo rozvětvený, (C3 až C6)cykloalkyl, benzyl;
    a kde R5 a R5a jsou nezávisle H, (Cl až C6)alkyl, který může být lineární nebo rozvětvený, (C3 až C6)cykloalkyl, benzyl, přičemž (Cl až C6)alkyl, (C3 až C6)cykloalkyl a benzyl mohou být nezávisle substituovány jednou nebo více skupinami vybranými z COOH; NH2; NO2, NX2; C(O)NX2; NHX; C(O)NHX; OH; SH; -NCS; tetrazin obecného vzorce III (C7 až C8)cykloalkenyl v trans konfiguraci, který může být popřípadě dále substituován jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; norbomenyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; -N3; (C2 až C6)alkynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2,-NCS, -NCO, N3 a SH; cyklooktynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; cykloazaoktynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, — NCO, N3 a SH; maleinimid; fenyl; benzyl a-P(O)(OH)Z;
    a kde R6 a R6a je H;
    a kde R7, R8, R9 a R10 jsou nezávisle vybrané ze skupiny zahrnující H, (Cl až C6)alkyl, (C3 až C6)cykloalkyl, benzyl, NO2 a/nebo dohromady R7 a R8 obsahují (C2 až C3)alkylen nebo vinylen a/nebo dohromady R9 a R10 obsahují (C2 až C3)alkylen nebo vinylen, přičemž (Cl až C6)alkyl, (C3 až C6)cykloalkyl, benzyl, (C2 až C3)alkylen a vinylen mohou být nezávisle substituovány skupinou nebo skupinami vybranými z COOH; NH2; NO2; NX2; C(O)NX2; SH; tetrazin obecného vzorce III (C7 až C8)cykloalkenyl v trans konfiguraci, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; norbomenyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; -N3; (C2 až C6)alkynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; cyklooktynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; cykloazaoktynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, NCS, -NCO, N3 a SH; maleinimid; fenyl; benzyl a-P(O)(OH)Z, kde Y je H, (Cl až C6)alkyl, -CH2COOH, (C5 až C6)heterocyklus, obsahující alespoň jeden heteroatom N, S, O, nebo heteroaryl, obsahující alespoň jeden heteroatom N, S, O, s výhodou je Y atom vodíku, methyl nebo pyridyl; Zje H; OH; (Cl až C6)alkyl, který může být lineární nebo rozvětvený; (Cl až C6)hydroxyalkyl; (Cl až C6)alkoxyl; fenyl nebo benzyl, přičemž fenyl nebo benzyl mohou být popřípadě substituovány jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, N3 a SH, s výhodou je substituent v para poloze; a X je nezávisle H; (Cl až C6)alkyl, který může být lineární nebo rozvětvený; (C3 až C6)cykloalkyl; fenyl a/nebo benzyl;
    přičemž (Cl až C6)alkyl, (C3 až C6)cykloalkyl, fenyl a/nebo benzyl mohou být nezávisle substituovány jednou nebo více skupinami vybranými z COOH; NH2; NO2, NX2; C(O)NX2; NHX; C(O)NHX; SH; tetrazin obecného vzorce III; (C7 až C8)cykloalkenyl v trans konfiguraci, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; norbomenyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; -N3; (C2 až C6)alkynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; cyklooktynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, -NCS, -NCO, N3 a SH; cykloazaoktynyl,
    -52CZ 307488 B6 popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, NCS, -NCO, N3 a SH; maleinimid; fenyl; benzyl a-P(O)(OH)Z;
    přičemž alespoň jedna ze skupin R, Ra, R1, R2, R3, R4, R4a, R5, R5a, R6, R6a, R7, R8, R9 a R10 obsahuje alespoň jednu ze skupin -COOH; NH2; NO2, NX2, NHX; C(O)NHX; N3; SH; -NCS; tetrazin obecného vzorce III (C7 až C8)cykloalkenyl v trans konfiguraci, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, NX2, -NCS, -NCO, NHX, C(O)NHX, N3 a SH; norbomenyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, NX2, -NCS, -NCO, NHX; C(O)NHX; N3 a SH; -N3, (C2 až C6)alkynyl; cyklooktynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, NX2, -NCS, -NCO, NHX, C(O)NHX, N3 a SH; cykloazaoktynyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, NX2, -NCS, -NCO, NHX, C(O)NHX, N3 a SH; maleinimid; fenyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, NX2, -NCS, -NCO, NHX, C(O)NHX, N3 a SH; benzyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, NX2, -NCS, -NCO, NHX, C(O)NHX, N3 a SH; (Cl až C6) alkyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, NX2, -NCS, -NCO, NHX, C(O)NHX, N3 a SH; a -P(O)(OH)Z;
    a přičemž konjugáty sloučeniny na bázi cyklámu jsou konjugáty sloučeniny na bázi cyklámu obecného vzorce I a alespoň jedné konjugační skupiny, která je ke sloučenině na bázi cyklámu kovalentně vázána a která je vybraná ze skupiny obsahující OH, -COOH; NH2, NX2, NHX; C(O)NHX; tetrazin obecného vzorce III; norbomenyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, NH2, NO2, NX2, -NCS, -NCO, NHX; C(O)NHX; N3 a SH; cykloazaoktynyl. popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z COOH, -NCS, -NCO, C(O)NHX, (Cl až C6)alkyl, (C6)aryl; maleinimid; a -P(O)(OH)Z; přičemž konjugát může mezi sloučeninou na bázi cyklámu a konjugační skupinou a/nebo mezi dvěma konjugačními skupinami dále obsahovat spacer, vybraný ze skupiny obsahující (Cl až C6)nalkyl, popřípadě substituovaný C=O a/nebo -NH- skupinou; fenylen; řetězce aminokyselin o délce 1 až 5 aminokyselin; polyethylenglykoly o 1 až 10 monomemích jednotkách;
    a přičemž koordinační sloučeniny jsou koordinační sloučeniny sloučenin na bázi cyklámu obecného vzorce I nebo konjugátů sloučeniny na bázi cyklámu obecného vzorce I s kationty kovů vybraných ze skupiny sestávající z Cu2+, Bi3+, kationty lanthanoidů, Sc3+, Y3+, Pb2+, Zr4+, Ac3+, Mn2+ a Mn3+, s výhodou kationty lanthanoidů, Y3+ a Cu2+, výhodněji Lu3+, Y3+ a Cu2+;
    a přičemž cílící konjugát obsahuje sloučeninu na bázi cyklámu obecného vzorce I a/nebo konjugát sloučeniny na bázi cyklámu obecného vzorce I a/nebo koordinační sloučeninu definovanou výše; a cílící vektor, vybraný ze skupiny zahrnující bis(fosfonáty), fluorescein, oligopeptidy o 1 až 15 aminokyselinách, protilátky, s výhodou rituximab, kyselinu listovou, biotin, cyklodextriny, PAMAM dendrimery, hydrofilní polyakryláty a polyakrylamidy.
  2. 2. Sloučeniny na bázi cyklámu podle nároku 1, kde R1 a R3 dohromady tvoří (C2 až C3)alkylen, který může být substituovaný (Cl až C6)alkylem, který může být lineární nebo rozvětvený.
  3. 3. Sloučeniny na bázi cyklámu podle nároku 1, kde R, Ra, R1, R2, R3, R4, R4a, R5, R5a, R6 a R6a jsou nezávisle vybrány ze skupiny zahrnující H; (Cl až C6)alkyl, který může být lineární nebo rozvětvený; (C3 až C6)cykloalkyl; benzyl; fenyl; (C5-C6)heterocyklus, obsahující alespoň jeden heteroatom N, S, O;
    a/nebo R1 a/nebo R2 a/nebo R3 je bisfosforová kyselina obecného vzorce II, s výhodou je alespoň jedna ze skupin R1, R2 a R3 bisfosforová kyselina obecného vzorce II, nejvýhodněji je R2 bisfosforová kyselina obecného vzorce II.
  4. 4. Sloučeniny na bázi cyklámu podle nároku 1, kde R2 je vybrán ze skupiny zahrnující H; (Cl až C6)alkyl, který může být lineární nebo rozvětvený; (C3 až C6)cykloalkyl; benzyl; fenyl; (C5
    -53 CZ 307488 B6 až C6)heterocyklus, obsahující alespoň jeden heteroatom N, S, O; a bisfosforovou kyselinu obecného vzorce II.
  5. 5. Sloučeniny na bázi cyklámu podle nároku 1, kde jsou vybrané ze skupiny zahrnující látky 5 obecného vzorce I, jejichž substituenty jsou zastoupeny v následujících kombinacích:
    Číslo sloučeniny R R1 R3 R2 R4 R’ Ré R7 R’ R’ Rlll l H H H H ch3 H H H H H H 2 H ch3 CHj ch3 ch3 H H H H H H 3 H CHs CHs H H H H H H II H 4 H ch3 CHs ch3 H H H H H H H 5 OH benzyl benzyl H H H H H H H H 7 OH II benzyl benzyl H H H H H H H 8 p-n»irobenzyl H H H H H H H H H H 9 p-aminobenzyl H H H H H H H H H H 10 p-SCN-bcnzyl H H H H II H H H H H ii p-azidobenzyl H H H H H H H H H H 12 -CH2N(Bz)2 H II H H H H H H H II 13 -CH2NH2 H H H II II H H H H H 14 -(CH2)2COOH H H H H H H H H H H 15 H H H H H -(CH^COOH H H H H H 16 H H H H H H H CHs NO2 no2 ch3 22 H CH3 CHs kyselina vzorce II , kde Ra = R, R4a až R6a = H H H H H H H H 23 -(CH2)2COOH CHs CH3 kyselina vzorce Π , kde Ra - R, R4a až R63 ~ H H H H H H H H 24 OH benzyl benzyl -CH2P(O)(OH)2 H H H H H H H 25 OH H H -CH2P(O)(OH)2 H H H H H H H 26 OH -CH2P(O)(OH)2 benzyl benzyl H H H H H H H 27 OH -CH2P(O)(OH)2 H H II H H H H H H 28 H -(C1I2)2- H H H H H H H H 29 OH -(CH2)2- H H H H H H H H 30 H -(ch,)2. H CHs H H H H H H 31 p-nitrobenzyl -(CH2)2- H H H H H H H H 32 H -(CH2)2- kyselina vzorce 11, kde Ra-R, R4aažRí* = H H H H H H H H 33 -CH2OH -(CH2)2- kyselina vzorce II, kde Ra = R, R4a až R6® = H H H H H H H H 34 OH -(CH2)2- kyselina vzorce II , kde R° = R, R4a až R63 = H H H H H H H H 3$ -(CHjfeCOOH -(CH2)2- kyselina vzorce II . kde Ra = R, R4a až Rí,a = H H H H H H H H 36 H -(CH2)2- kyselina vzorce II, kde Ra = OH, R4a až Rf* = H H H H H H H H 37 p-nitrobenzyl -(CH2)2- kyselina vzorce II , kde Ra = OH. R4· až R'» = H H H H H H H H 38 p-aminobenzyl -<CH2)2- kyselina vzorce II , kde Ra-OH. R4aažR6fl = H H II H H H H H
    -54CZ 307488 B6
    39 p-SCN-benzyl -(CH2)2- kyselina vzorce II, kde Ra-OH, R4’ažRfa~ll H H H 11 H H H 40 p-azidobenzyl -<CH2)2- kyselina vzorce II, kde R·-OH, RJtažR' =H H H H H H H H 41 p-nitrobenzyl -(CH2)2- -CH2P(O)(OH)(CH2OH) H H H H H H H 42 p-nitrobenzyl -(CH2)2- -CH2P(0)(OH)2 H H H H H H H 43 p-aminobenzy, <CH2)2- -CH2P(O)(OH)2 H H H H 11 H H
  6. 6. Způsob přípravy sloučenin na bázi cyklámu obecného vzorce I podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, vyznačený tím, že se meziprodukt obecného vzorce IV, kde R11, R12, R13 a R14 jsou v následujících kombinacích:
    Meziprodukt R R9 * * 12 R13 r!4 A H H H OH B H H H p-nitrobenzyl C H H H -CH2N(benzyl) 2 D H H H -(CH2)2COOH E H -(CH2)4COOH H H F OH -(CH 2)3NH (4-dibenzylcyklooktynam idobutoxyl) OH OH
    nebo sloučenina, vybraná ze skupiny obsahující methylen-bis(fosfmovou kyselinu), kyselinu fosforitou, kyselinu hydroxymethylfosfinovou, podrobí reakci s derivátem cyklámu a aldehydem ve vodném roztoku kyseliny o koncentraci v rozmezí od 10 do 40 % (hmotn.), s výhodou v rozmezí od 18 do 36 % (hmotn.), při teplotě v rozmezí od 40 do 80 °C po dobu alespoň 12 hodin; přičemž derivátem cyklámu je 1,4,8,11-tetraazacyklotetradekan a jeho deriváty a 1,4,8,11— tetraazabicyklo[6.6.2]hexadekan a jeho deriváty, s výhodou je derivát cyklámu vybraný ze skupiny zahrnující 1,4,8,11-tetraazacyklotetradekan, 1,4,8,1 l-tetraazabicyklo[6.6.2]hexadekan, l,4,8-trimethyl-l,4,8,l 1-tetraazacyklotetradekan, l,8-dimethyl-l,4,8,l 1tetraazacyklotetradekan, l,8-dibenzyl-l,4,8,l 1-tetraazacyklotetradekan, l,4-dibenzyl-l,4,8,l 1tetraazacyklotetradekan, 6,13-dimethyl-6,13-dinitro-l,4,8,l 1-tetraazacyklotetradekan; aldehyd je vybraný ze skupiny obsahující acetaldehyd, formaldehyd a para-formaldehyd, a kyselinou je s výhodou HC1 a/nebo CF3COOH; a přičemž reakci může předcházet krok přípravy meziproduktu.
  7. 7. Způsob přípravy sloučenin na bázi cyklámu podle nároku 6, vyznačený tím, že se výsledný produkt dále podrobí redukci.
  8. 8. Způsob přípravy sloučenin na bázi cyklámu podle nároku 6, vyznačený tím, že se výsledný produkt dále podrobí oxidaci.
  9. 9. Způsob přípravy sloučenin na bázi cyklámu podle nároku 6, vyznačený tím, že se výsledný produkt dále podrobí reakci s aldehydem, a popřípadě meziproduktem obecného vzorce IV nebo sloučeninou, vybranou ze skupiny obsahující methylen-bis(fosfmovou kyselinu), kyselinu fosforitou, kyselinu hydroxymethylfosfinovou, ve vodném roztoku kyseliny.
    -55 CZ 307488 B6
  10. 10. Způsob přípravy sloučenin na bázi cyklámu podle nároku 7, vyznačený tím, že po kroku redukce následuje krok, kdy se produkt redukce podrobí reakci s CSC12 nebo COC12.
  11. 11. Způsob přípravy sloučenin na bázi cyklámu podle nároku 10, vyznačený tím, že po kroku redukce následuje krok, kdy se výsledný produkt redukce podrobí reakci s NaN3.
  12. 12. Sloučenina obecného vzorce IV pro přípravu sloučenin na bázi cyklámu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5,
    O O (IV) kde R^R12, RnaR14 jsou v následujících kombinacích:
    Meziprodukt R” R12 R13 R14 B H H H p-nitrobenzyl C H H H -CH2N(benzyl)2 D H H H -(CH2)2COOH E H -(CH2)4COOH H H F OH -(CH2)3NH(4-dibenzylcyklooktynamidobutoxyl) OH OH
  13. 13. Farmaceutický přípravek, vyznačený tím, že obsahuje alespoň jednu sloučeninu na bázi cyklámu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, a farmaceuticky přijatelný nosič.
  14. 14. Sloučenina na bázi cyklámu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 a/nebo farmaceutický přípravek podle nároku 13 pro použití jako léčivo, s výhodou při léčbě nádorových onemocnění, zánětů a/nebo aterosklerózy.
  15. 15. Sloučenina na bázi cyklámu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 a/nebo farmaceutický přípravek podle nároku 13 pro použití jako kontrastní látky v lékařské diagnostice, s výhodou při diagnostice nádorových onemocnění, zánětů a/nebo aterosklerózy.
  16. 16. Použití sloučenin na bázi cyklámu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 a/nebo farmaceutického přípravku podle nároku 13 v radiochemii pro přípravu značek nebo prekurzorů značek při značení pomocí radioizotopů mědi, lutecia, bismutu a yttria.
  17. 17. Použití sloučenin na bázi cyklámu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 pro přípravu přípravku ke komplexaci a/nebo čištění radioizotopů mědi.
CZ2015-825A 2015-11-20 2015-11-20 Sloučeniny na bázi cyklamu, jejich konjugáty, cílicí konjugáty, koordinační sloučeniny, farmaceutický přípravek je obsahující, způsob jejich přípravy a jejich použití CZ307488B6 (cs)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2015-825A CZ307488B6 (cs) 2015-11-20 2015-11-20 Sloučeniny na bázi cyklamu, jejich konjugáty, cílicí konjugáty, koordinační sloučeniny, farmaceutický přípravek je obsahující, způsob jejich přípravy a jejich použití
EP16815699.0A EP3377504B1 (en) 2015-11-20 2016-11-18 Cyclam based compounds, their conjugates, co-ordination compounds, pharmaceutical compositions thereof, method of preparation and use thereof
PCT/CZ2016/050043 WO2017084645A1 (en) 2015-11-20 2016-11-18 Cyclam based compounds, their conjugates, co-ordination compounds, pharmaceutical composition containing thereof, method of preparation and use thereof
GB1805528.5A GB2560269A (en) 2015-11-20 2016-11-18 Cyclam based compounds, their conjugates, co-ordination compounds, pharmaceutical composition containing thereof, method of preparation and use thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2015-825A CZ307488B6 (cs) 2015-11-20 2015-11-20 Sloučeniny na bázi cyklamu, jejich konjugáty, cílicí konjugáty, koordinační sloučeniny, farmaceutický přípravek je obsahující, způsob jejich přípravy a jejich použití

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ2015825A3 CZ2015825A3 (cs) 2017-05-31
CZ307488B6 true CZ307488B6 (cs) 2018-10-10

Family

ID=57588817

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2015-825A CZ307488B6 (cs) 2015-11-20 2015-11-20 Sloučeniny na bázi cyklamu, jejich konjugáty, cílicí konjugáty, koordinační sloučeniny, farmaceutický přípravek je obsahující, způsob jejich přípravy a jejich použití

Country Status (4)

Country Link
EP (1) EP3377504B1 (cs)
CZ (1) CZ307488B6 (cs)
GB (1) GB2560269A (cs)
WO (1) WO2017084645A1 (cs)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022093800A2 (en) 2020-10-27 2022-05-05 Elucida Oncology, Inc. Carrier particle-drug conjugates, self-immolative linkers, and uses thereof

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002087498A2 (en) * 2001-04-26 2002-11-07 Board Of Regents, The University Of Texas System Diagnostic imaging compositions, their methods of synthesis and use
WO2005062828A2 (en) * 2003-12-23 2005-07-14 Bracco Imaging S.P.A. New compounds useful as metal chelators

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1812453A1 (en) 2004-10-20 2007-08-01 Therapharm GmbH Method of preparing or synthesizing polyazamacrocycle derivatives
WO2012150302A1 (en) * 2011-05-04 2012-11-08 Technische Universität München Tetraaza-cycloalkanes based ligands and their use in nuclear medicine and molecular imaging
WO2015038968A1 (en) 2013-09-13 2015-03-19 The General Hospital Corporation Activatable fibrin-binding probes

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002087498A2 (en) * 2001-04-26 2002-11-07 Board Of Regents, The University Of Texas System Diagnostic imaging compositions, their methods of synthesis and use
WO2005062828A2 (en) * 2003-12-23 2005-07-14 Bracco Imaging S.P.A. New compounds useful as metal chelators

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
C. King et al. Synthesis and structural characterisation of methylenebisphosphinic acid. Inorganic Chemistry 25, 1290-1292, 1986 *
DELGADO, Rita, et al. Metal complexes of cyclen and cyclam derivatives useful for medical applications: a discussion based on thermodynamic stability constants and structural data. Dalton Transactions, 2007, 26: 2734-2745. *
FÜZEROVÁ, Silvia, a kol., Cyclam (1, 4, 8, 11-tetraazacyclotetradecane) with one methylphosphonate pendant arm: a new ligand for selective copper (II) binding. Dalton transactions, 2005, 17: 2908-2915. *
Kotek, J., a kol., High Thermodynamic Stability and Extraordinary Kinetic Inertness of Copper(II) Complexes with 1,4,8,11-Tetraazacyclotetradecane-1,8-bis(methylphosphonic acid): Example of a Rare Isomerism between Kinetically Inert Penta- and Hexacoordinated Copper(II) Complexes. Chemistry–A European Journal., 2003, 233–248. *
ŠEVČÍK, Radek, et al. Formation and dissociation kinetics of copper (II) complexes with tetraphosphorus acid DOTA analogs. Polyhedron, 2014, 67: 449-455. *
VITHA, Tomáš, et al. Gd (III) complex of a monophosphinate-bis (phosphonate) DOTA analogue with a high relaxivity; lanthanide (III) complexes for imaging and radiotherapy of calcified tissues. Dalton Transactions, 2009, 17: 3204-3214. *

Also Published As

Publication number Publication date
EP3377504B1 (en) 2020-08-19
GB201805528D0 (en) 2018-05-16
GB2560269A (en) 2018-09-05
CZ2015825A3 (cs) 2017-05-31
WO2017084645A1 (en) 2017-05-26
EP3377504A1 (en) 2018-09-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Thiele et al. Implementing f-block metal ions in medicine: tuning the size selectivity of expanded macrocycles
JP6943765B2 (ja) 骨疾患の診断及び治療のためのコンジュゲート化ビスホスホネート
DE69227828T2 (de) Bicyclopolyazamacrocyclophosphon-Säure Komplexe, Verfahren, Konjugate und Radiopharmaka
KR102870722B1 (ko) 진단제 및 방사성핵종 치료제로서의 전립선-특이적 막 항원 (psma) 억제제
Simecek et al. Tailored gallium (III) chelator NOPO: synthesis, characterization, bioconjugation, and application in preclinical Ga-68-PET imaging
DK3098225T3 (en) NITROGEN CONTAINING MACROCYCLIC CONJUGATES AS RADIO PHARMACY
AU2016289474C1 (en) HBED-bisphosphonates, radiometal conjugates thereof and their use as theranostic agents
JP2022548635A (ja) Ｇｒｐｒアンタゴニストを放射標識するための方法及びそれらのキット
Srivastava et al. Synthesis and biological evaluation of newly designed phosphonate based bone-seeking agent
US20200046861A1 (en) Targeted radiolabeled compounds and their use for the treatment and diagnosis of cancer
JP2001114792A (ja) ビスホスホン酸誘導体およびその放射性核種標識体
CZ307488B6 (cs) Sloučeniny na bázi cyklamu, jejich konjugáty, cílicí konjugáty, koordinační sloučeniny, farmaceutický přípravek je obsahující, způsob jejich přípravy a jejich použití
JP4056088B2 (ja) 多座イミン類およびそれらの金属錯体類
Tsebrikova et al. Cyclen-containing phosphonic acids as components of osteotropic 68Ga radiopharmaceuticals
Ševčík et al. Formation and dissociation kinetics of copper (II) complexes with tetraphosphorus acid DOTA analogs
Campello et al. Radiochemical and biological behaviour of 153Sm and 166Ho complexes anchored by a novel bis (methylphosphonate) tetraazamacrocycle
Panwar et al. Synthesis, characterization, and in vivo skeletal localization of a new 99mTc-based multidentate phosphonate chelate: 5-Amino-1, 3-bis (ethylamine-(N, N dimethyl diphosphonic acid) acetamido) benzene
Chauhan et al. 68Ga-Labeled bismacrocyclic methylene phosphonate as potential bone seeking PET radiopharmaceutical
Försterová et al. Complexation and biodistribution study of 111In and 90Y complexes of bifunctional phosphinic acid analogs of H4dota
NZ263793A (en) Compounds suitable for forming tc and re chelates, radiopharmaceutical compositions thereof
Laznickova et al. Labeling of a bifunctional monophosphinic acid DOTA analogue with 111 In: Radiochemical aspects and preclinical results
CA2991498C (en) Hbed-bisphosphonates, radiometal conjugates thereof and their use as theranostic agents
James Rhenium and technetium radiopharmaceuticals: Design and development for applicatons in nuclear medicine
Ewart A new bifunctional chelating ligand based on glucosamine for the [M (CO) ₃]⁺(M= Tc, Re) core