CZ308178B6 - Postpartální epigenetický profil kardiovaskulárních mikroRNA u matek po komplikované graviditě - nové biomarkery kardiovaskulárního rizika - Google Patents

Postpartální epigenetický profil kardiovaskulárních mikroRNA u matek po komplikované graviditě - nové biomarkery kardiovaskulárního rizika Download PDF

Info

Publication number
CZ308178B6
CZ308178B6 CZ2018-597A CZ2018597A CZ308178B6 CZ 308178 B6 CZ308178 B6 CZ 308178B6 CZ 2018597 A CZ2018597 A CZ 2018597A CZ 308178 B6 CZ308178 B6 CZ 308178B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
mir
women
postpartal
screening
history
Prior art date
Application number
CZ2018-597A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ2018597A3 (cs
Inventor
Ilona Hromadníková
Original Assignee
Univerzita Karlova
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univerzita Karlova filed Critical Univerzita Karlova
Priority to CZ2018-597A priority Critical patent/CZ308178B6/cs
Priority to PCT/CZ2019/050051 priority patent/WO2020088704A1/en
Publication of CZ2018597A3 publication Critical patent/CZ2018597A3/cs
Publication of CZ308178B6 publication Critical patent/CZ308178B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering nucleic acids [NA]
    • C12N2310/141—MicroRNAs, miRNAs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/10—Applications; Uses in screening processes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/118—Prognosis of disease development
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Způsob in vitro detekce potenciálního kardiovaskulárního rizika u matek po komplikovaném průběhu těhotenství na základě přítomnosti aberantního expresního profilu vybraných mikroRNA v plné periférní žilní krvi.

Description

Oblast techniky
Předkládaný vynález se obecně týká určení kardiovaskulárního rizika u matek po komplikovaném průběhu těhotenství. Zejména se vynález týká molekulárních markérů pro stratifikaci pacientů v riziku pozdějšího rozvoje kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění. Přítomnost aberantního expresního profilu kardiovaskulárních mikroRNA v plné periferní žilní krvi matek po komplikované graviditě (gestační hypertenze, preeklampsie a/nebo fetální růstová restrikce) selektuje rizikovou populaci, která může profitovat z preventivních opatření s cílem omezit nebo zabránit pozdějšímu rozvoji kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění.
Dosavadní stav techniky
Gestační hypertenze (GH), preeklampsie (PE) a fetální růstová restrikce (FGR) jsou hlavní komplikace, které postihují 2 až 10 % těhotných žen a významně přispívají k mateřské a perinatální morbiditě a mortalitě (WHO, 1988; Bamfo et al., 2011). Gestační hypertenze se rozvíjí obvykle po 20. gestačním týdnu a je charakterizována zvýšeným krevním tlakem > 140/90 mmHg zjištěným ve 2 nezávislých měřeních v rozmezí 4 hodin. Preeklampsie se rovněž vyskytuje u těhotných žen po 20. gestačním týdnu a je charakterizována přítomností chronické a/nebo gestační hypertenze v kombinaci s proteinurií (ACOG, 2002). Fetální růstová restrikce je diagnostikována, pokud plod zaostává v růstu s ohledem na příslušné gestační stáří (odhadovaná hmotnost plodu je pod 10. percentilem pro příslušné gestační období) a současně jsou přítomny patologické průtoky v umbilikální artérii, uterinní artérii a/nebo známky centralizace oběhu plodu (ACOG, 2013).
Časná preeklampsie (onset před 34. gestačním týdnem) a časná FGR (onset před 32. gestačním týdnem) jsou obyčejně důsledkem placentám! insuficience s následnou maladaptací mateřského kardiovaskulárního systému (Brosens et al., 2011; Thilaganathan, 2017; Nardozza et al., 2017; Figueras et al., 2014; Baschat, 2011). Na druhé straně, pozdní preeklampsie (onset po 34. gestačním týdnu) a pozdní FGR (onset po 32. gestačním týdnu) se mohou vyskytovat jako důsledek sekundární placentámí insuficience způsobené dysfunkcí kardiovaskulárního systému matky (Thilaganathan, 2016 a 2017; Nardozza et al., 2017; Figueras et al., 2014; Baschat, 2011). Jelikož těhotenské komplikace jsou pravděpodobně prvním časným projevem endoteliální dysfunkce, vaskulámích a metabolických onemocnění (Kaaja et al., 2005), doporučuje the American Heart Association dlouhodobé sledování žen, u nichž se v průběhu těhotenství vyskytla preeklampsie, fetální růstová restrikce, gestační diabetes mellitus a/nebo předčasný porod (A Guideline From the American Heart Association, 2011).
Narůstá počet studií, které dokumentují souvislost mezi výskytem hypertenze v těhotenství a pozdějším výskytem kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění, diabetů mellitu a onemocnění ledvin (Libby et al., 2007; Mánnistó et al., 2013; Tooher et al., 2017; Benschop et al., 2018; Heida et al., 2015; Lykke et al., 2009).
Zeny, u nichž byla v průběhu těhotenství diagnostikována preeklampsie a/nebo eklampsie mají zvýšené riziko pozdějšího výskytu hypertenze, aterosklerózy, ischemické choroby srdeční, infarktu myokardu, cévní mozkové příhody, hluboké žilní trombózy a metabolického syndromu (Bellamy et al., 2007; Haukkamaa et al., 2009; Lykke et al., 2009; Berks et al., 2013; Craici et al., 2008). Zvýšené riziko výskytu hypertenze, obezity, metabolického syndromu, typu 2 diabetů mellitu, ischemické choroby srdeční, infarktu myokardu, cévní mozkové příhody bylo také popsáno u žen s předchozím výskytem gestační hypertenze (Mánnistó et al., 2013; Bellamy et al., 2007; Facca et al., 2017). Rovněž ženy, jejichž těhotenství bylo komplikováno výskytem fetální
- 1 CZ 308178 B6 růstové restrikce a nízkou porodní váhou dítěte, mají zvýšené riziko pozdějšího výskytu ischemické choroby srdeční (Boma et al., 2012; Bonamy et al., 2011; Bukowski et al., 2012).
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je popis postpartálního expresního profilu mikroRNA, které hrají roli v patogenezi kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích chorob (miR-l-3p, miR-16-5p, miR-17-5p, miR-20a-5p, miR-20b-5p, miR-21-5p, miR-23a-3p, miR-24-3p, miR-26a-5p, miR-29a-3p, miR92a-3p, miR-100-5p, miR-103a-3p, miR-125b-5p, miR-126-3p, miR-130b-3p, miR-133a-3p, miR-143-3p, miR-145-5p, miR-146a-5p, miR-155-5p, miR-181a-5p, miR-195-5p, miR-199a-5p, miR-210-3p, miR-221-3p, miR-342-3p, miR-499a-5p a miR-574-3p), u žen s předchozím výskytem těhotenských komplikací (gestační hypertenze, preeklampsie a/nebo fetální růstová restrikce).
MikroRNA patří do rodiny malých nekódujících RNA molekul s délkou 18 až 25 nukleotidů, které regulují genovou expresi na posttranskripční úrovni degradací a/nebo blokací cílové mRNA. Rada tkání ovlivněných patologickým procesem má charakteristický expresní profil mikroRNA, který odlišuje tkáň fyziologickou od tkáně postižené příslušnou patologií, čehož se úspěšně využívá v diagnostice. Nedávné studie dokumentovaly aberantní expresní profil mikroRNA v placentámí tkáni, pupečníkové krvi a mateřské cirkulaci u gestační hypertenze, preeklampsie a fetální růstové restrikce.
Předmětem vynálezu je popis expresního profilu mikroRNA v plné periferní žilní krvi žen po prodělané těhotenské komplikaci (gestační hypertenze, preeklampsie a/nebo fetální růstová restrikce). Soustředili jsme se zejména na ty mikroRNA, které hrají roli v patogenezi dyslipidémie, hypertenze, vaskulámího zánětu, inzulínové rezistence a diabetů, aterosklerózy, angiogeneze, koronárních arteriálních onemocnění, infarktu myokardu, srdečního selhání, cévní mozkové příhody, intrakraniálního aneuryzma, pulmonámí arteriální hypertenze a peripartální kardiomyopatie.
Jedná se o první studii tohoto typu. Doposud nebyla provedena žádná studie dokumentující expresní profil mikroRNA asociovaných s kardiovaskulárními a cerebrovaskulámími onemocněními v plné periferní žilní krvi u žen s předchozím výskytem gestační hypertenze, preeklampsie a/nebo fetální růstové restrikce. Předmětem patentového spisu je popsat, které mikroRNA a případně jejich kombinace by mohly být využitelné v rámci skríninku pro stratifikaci matek po komplikované graviditě ve zvýšeném kardiovaskulárním riziku. Nově identifikovaná riziková skupina matek na základě skríninku mikroRNA asociovaných s kardiovaskulárními a cerebrovaskulámími onemocněními může profitovat z dispenzarizace u praktických a/nebo specializovaných lékařů a implementace cílených preventivních režimových opatření zaměřených na omezení nebo zabránění pozdějšímu rozvoji kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění.
Těhotenské komplikace (gestační hypertenze, preeklampsie a/nebo fetální růstová restrikce) indukují epigenetické změny, které jsou obvykle asociovány s výskytem kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění. Tyto epigenetické změny je možné detekovat v plné periferní žilní krvi u matek v dlouhodobém horizontu (3 až 11 let po porodu). Postpartální skrínink jednotlivých mikroRNA asociovaných s výskytem kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění (a/nebo jejich optimální kombinace) identifikuje matky se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem. Skupina matek s aberantním expresním profilem kardiovaskulárních mikroRNA v plné periferní žilní krvi představuje nově identifikovanou rizikovou skupinou pacientů, která může profitovat z preventivních opatření s cílem omezit nebo zabránit pozdějšímu rozvoji kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění.
Gestační hypertenze vede k indukci upregulace několika mikroRNA, které jsou asociovány
-2CZ 308178 B6 s výskytem kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění (miR-20a-5p, miR-143-3p, miR-146a-5p, miR-181a-5p, miR-199a-5p, miR-221-3p, a miR-499a-5p). Aberantní expresní profil těchto mikroRNA je přítomen v plné periferní žilní krvi u 8,0 % až 18,0 % žen s předchozím výskytem gestační hypertenze (miR-20a-5p: 8,0%, miR-143-3p: 8,0%, miR-146a5p: 12,0%, miR-181a-5p: 18,0%, miR-199a-5p: 12,0%, miR-221-3p: 14,0% a miR-499a-5p: 8,0%).
Upregulace miR-17-5p (20,0% vs. 19,48%), miR-20b-5p (14,0% vs. 18,18%), miR-29a-3p (20,0% vs. 18.18%) a miR-126-3p (12,0% vs. 11,69%) se vyskytuje u určité skupiny žen s předchozím výskytem gestační hypertenze nebo závažné preeklampsie. Gestační hypertenze a časná preeklampsie, která vyžaduje ukončení těhotenství před 34. gestačním týdnem, jsou asociovány u části žen se zvýšenou postpartální genovou expresí miR-l-3p (16,0% vs. 11,11%) a miR-17-5p (20,0% vs. 16,67%). Gestační hypertenze a pozdní preeklampsie, vyskytující se po 34. gestačním týdnu, vykazují u části žen upregulaci miR-17-5p (20,0% vs. 21,54%), miR-20b5p (14,0% vs. 18,46%) a miR-29a-3p (20,0% vs. 13,85%). Závažná preeklampsie také indukuje u části žen upregulaci miR-130b-3p (10,39%) a upregulaci miR-133a-3p (14,29%). Navíc miR133a-3p je také upregulována u 16,67 % žen s časnou formou preeklampsie, která vyžaduje ukončení těhotenství před 34. gestačním týdnem.
Postpartální hladiny některých kardiovaskulárních mikroRNA detekované v plné periferní žilní krvi matek rovněž korelují se závažností preeklampsie a/nebo FGR hodnocené na základě Dopplerovského ultrazvukového vyšetření v průběhu výskytu těhotenské komplikace. Patologické průtoky v umbilikální artérii (miR-145-5p), v arteria cerebri media (miR-125b-5p), v arteria uterina (miR-125b-5p, miR-133a-3p a miR-145-5p) a v ductus venosus (miR-145-5p) v průběhu výskytu těhotenské komplikace (preeklampsie a/nebo fetální růstové restrikce) indukují upregulaci příslušné mikroRNA. Centralizace oběhu plodu pak vyvolává zvýšenou expresi miR100-5p.
V případě gestační hypertenze (kombinace 1: miR-l-3p, miR-17-5p, miR-20b-5p, miR-29a-3p a miR-126-3p; kombinace 2: miR-20a-5p, miR-143-3p, miR-146a-5p, miR-181a-5p, miR-199a-5p, miR-221-3p a miR-499a-5p), preeklampsie bez ohledu na závažnost onemocnění a gestační stáří ukončení gravidity (miR-17-5p, miR-29a-3p a miR-133a-3p), závažné preeklampsie (miR-17-5p, miR-20b-5p, miR-29a-3p, miR-126-3p a miR-133a-3p), a časné preeklampsie (miR-l-3p, miR17-5p a miR-133a-3p) vykazoval postpartální kombinovaný skrínink mikroRNA biomarkerů lepší výsledky než skrínink jednotlivých individuálních mikroRNA biomarkerů. Na druhou stranu, u pacientek s předchozím výskytem pozdní preeklampsie (miR-29a-3p), a také u pacientek s předchozím výskytem preeklampsie a/nebo FGR s patologickými průtoky v arteria uterina (miR-125b-5p) v průběhu těhotenské komplikace bylo kardiovaskulární riziko identifikováno přesněji pomocí výše uvedených individuálních mikroRNA biomarkerů.
Izolace RNA obohacené o krátké RNA a kontrola kvality RNA
Periferní žilní krev je nabírána do EDTA zkumavek. Homogenizované buněčné lyzáty jsou připravovány z 200 pl plné periferní žilní krve bezprostředně po jejím náběru pomocí QIAamp RNA Blood Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany, no: 52304) podle doporučení výrobce a skladovány při -80 °C do dalšího zpracování. Celková RNA je izolována z homogenizovaných buněčných lyzátů pomocí mirVana microRNA Isolation kit (Ambion, Austin, USA, no: AM1560). Následuje proces obohacení RNA o krátké RNA molekuly (siRNAs, microRNAs) podle doporučení výrobce. Pro minimalizaci DNA kontaminace se k vyizolované RNA přidává 5 pL of DNase I (Thermo Fisher Scientific, California, USA, no: EN0521), doba působení 30 min při 37 °C. Kvalita vyizolované RNA je měřena na spektrofotometru (NanoDrop ND-1000 spectrophotometer, NanoDrop Technologies, USA). Poměr hodnot absorbancí A(260/280) je optimálně v rozmezí 1,8 až 2,0 (získaná RNA je zbavena DNA). Poměr hodnot absorbancí A(260/230) má být více než 1,6 (získaná RNA je zbavena póly sacharidů).
-3 CZ 308178 B6
Reverzní transkripce
Každá mikroRNA je reverzně přepsaná do komplementární DNA (cDNA) pomocí TaqMan MicroRNA Assay, která obsahuje specifický primer pro danou mikroRNA (microRNA-specific stem-loop RT primer) a reverzní transkripční kit (TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit, Applied Biosystems, Branchburg, USA, no: 4366597) v celkovém reakčním objemu 10 pL podle doporučení výrobce. Reverzní transkripce je provedena na cicleru (7500 Real-Time PCR system, Applied Biosystems, Branchburg, USA) za následujících podmínek: 30 minut při 16 °C, 30 minut při 42 °C, 5 minut při 85 °C a 4 °C bez omezení.
Relativní kvantifikace mikroRNA pomocí PCR v reálném čase pL cDNA jsou přidány do reakční směsi obsahující specifické primery a TaqMan MGB sondu (TaqMan MicroRNA Assay, Applied Biosystems, Branchburg, USA) a ingredience master mixu (TaqMan Universal PCR Master Mix, Applied Biosystems, Branchburg, USA, no: 4318157) v celkovém reakčním objemu 15 pL. Detekce a kvantifikace příslušné mikroRNA probíhá na cicleru (7500 Real-Time PCR system, Applied Biosystems, Branchburg, USA) za standardních podmínek dle doporučení výrobce. Detekce se provádí vždy v duplikátech. Současně jsou analyzovány negativní kontroly: NTC (voda pro PCR aplikace místo cDNA templátu), NAC (nepřepsané RNA vzorky), a genomická DNA (DNA izolovaná z ekvivalentních vzorků), které negenerují žádný amplifikační signál v průběhu PCR reakce. Vzorek je považován za pozitivní, pokud je generován amplifikační signál s hodnotou Ct (prahová hodnota) před 40. cyklem (Ct < 40).
Exprese příslušné mikroRNA byla stanovena pomocí komparativní Ct metody vzhledem k normalizačnímu faktoru (geometrický průměr dvou námi vybraných endogenních kontrol). RNU58A a RNU38B, nekódující malé RNA, vykazují stabilní expresi napříč spektrem různých vyšetřovaných skupin, a proto byly vybrány jako optimální endogenní kontroly pro normalizaci genové exprese. Tyto nekódující malé RNA zároveň sloužily jako pozitivní kontroly úspěšné extrakce RNA z biologického materiálu a byly použity jako interní kontroly izolace RNA, cDNA syntézy a provedení PCR v reálném čase.
RNA obohacená o malé RNA izolovaná z fetální části jedné náhodně vybrané placenty z normálního těhotenství byla použita jako referenční vzorek pro relativní kvantifikaci napříč analýzami.
Statistická analýza
Vzhledem k nenormálnímu rozložení dat dle Shapiro-Wilk testu byly k hodnocení experimentálních dat použity neparametrické testy. Genová exprese mikroRNA byla srovnána mezi jednotlivými skupinami (více jak 2 porovnávané skupiny) pomocí Kruskal-Wallisova testu s následnou post-hoc analýzou. Hladina statistické významnosti byla stanovena na hodnotě p < 0,05.
Rovněž byly zkonstruovány pro příslušné mikroRNA asociované s kardiovaskulárními a cerebrovaskulámími onemocněními v rámci postpartálního skríninku u žen s předchozím výskytem těhotenských komplikací receivers operating characteristic (ROC) křivky. Byla zhodnocena plocha pod křivkou, senzitivita a specificita jednotlivých mikroRNA, a optimální cut-off hodnota. Dále byla určena senzitivita daného mikroRNA biomarkeru při 90,0% specificitě (informace, jaké procentuální zastoupení žen má zvýšenou/sníženou expresi konkrétní mikroRNA při 10,0% falešné pozitivitě) (MedCalc Software bvba, Ostend, Belgium).
Dále byla provedena kombinovaná statistická analýza (logistická regrese a ROC analýza) s cílem vybrat optimální kombinaci mikroRNA biomarkerů pro danou situaci. Tato aplikace poskytuje následující parametry: plocha pod křivkou, senzitivita, specificita, optimální cut-off hodnota,
-4CZ 308178 B6 senzitivita dané kombinace mikroRNA biomarkerů při 90,0% specificitě.
Tato analýza identifikuje ženy, které mají po předchozím těhotenství v důsledku výskytu těhotenských komplikací zvýšené riziko pozdějšího výskytu kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění. Na základě výsledků individuálních ROC analýz a kombinovaných ROC analýz byla provedena diferenciace matek po komplikované graviditě na ty bez rizika pozdějšího rozvoje kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění a na ty s rizikem pozdějšího rozvoje kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění.
Korelace mezi proměnnými (postpartální relativní kvantifikace mikroRNA v plné periferní žilní krvi matek vs. Dopplerovské ultrazvukové parametry v průběhu těhotenství: index pulsatility v umbilikální artérii, index pulsatility v arteria cerebri media, index pulsatility v uterinní artérii, index pulsatility v ductus venosus a cerebroplacentámí index) byla určena pomocí Spearmanova korelačního koeficientu (p). Pokud se korelační koeficient pohyboval v rozmezí <0; 0,5>, jednalo se o slabou pozitivní korelaci. Pokud se korelační koeficient pohyboval v rozmezí <-0,5; 0>, jednalo se o slabou negativní korelaci. Hladina statistické významnosti byla stanovena na hodnotě p < 0,05.
Výsledky experimentálních dat jsou prezentovány ve formě krabicových grafů (Statistica software, version 9.0; StatSoft, Inc., USA). Každý krabicový graf má znázorněn medián logaritmické hodnoty normalizované genové exprese příslušné mikroRNA. Horní a dolní hranice krabice označuje 75. a 25. percentil. Horní a dolní linie označují maximální a minimální hodnoty do velikosti l,5násobku rozpětí boxplotu. Kroužky označují odlehlé hodnoty a hvězdičky extrémní hodnoty.
MikroRNA asociované s kardiovaskulárními a cerebrovaskulámími chorobami jsou dysregulovány postpartálně v plné periferní žilní krvi matek s předchozím výskytem těhotenských komplikací
Genová exprese mikroRNA asociovaných s kardiovaskulárními a cerebrovaskulámími chorobami byla studována postpartálně v plné periferní žilní krvi u matek 3 až 11 let po porodu. Genová exprese mikroRNA byla porovnána mezi ženami s předchozím výskytem těhotenských komplikací (gestační hypertenze, preeklampsie a/nebo fetální růstová restrikce) a ženami s normálním průběhem těhotenství. Postpartální genová exprese mikroRNA byla analyzována rovněž s ohledem na závažnost těhotenské komplikace dle klinické symptomatologie (mírná vs. závažná preeklampsie, absence vs. přítomnost anhydramnionu/oligohydramnionu u plodu, absence vs. přítomnost abnormálních Dopplerovských průtoků u těhotenství s preeklampsií a/nebo FGR) a dle doby porodu (před 34. gestačním týdnem vs. po 34. gestačním týdnu u preeklampie, před 32. gestačním týdnem vs. po 32. gestačním týdnu u FGR). Asociace mezi postpartální genovou expresí příslušné mikroRNA v plné periferní žilní krvi matek a Dopplerovskými parametry v průběhu výskytu těhotenské komplikace (index pulsatility v umbilikální artérii, index pulsatility v arteria cerebri media, index pulsatility v uterinní artérii, index pulsatility v ductus venosus a cerebroplacentámí index) byla analyzována u pacientek s předchozím výskytem preeklampsie a/nebo FGR v průběhu těhotenství.
Postpartální upregulace miR-20a-5p, miR-143-3p, miR-146a-5p, miR-181a-5p, miR-199a-5p, miR-221-3p amiR-499a-5p je přítomna pouze u žen s předchozím výskytem gestační hypertenze
Při použití Kruskal-Wallisova testu se genová exprese miR-20a-5p (p=0,043), miR-143-3p (p=0,123), miR-146a-5p (p=0,008), miR-181a-5p (p=0,063), miR-199a-5p (p=0,099), miR-2213p (p=0,038) a miR-499a-5p (p=0,002) lišila významně nebo vykazovala pouze trend k dosažení statistické významnosti mezi kontrolní skupinou žen s normálním průběhem těhotenství a skupinou žen, které měly v průběhu gravidity diagnostikovanou gestační hypertenzi.
ROC analýza pak odhalila statisticky významný rozdíl mezi oběma skupina pro všechny výše
-5 CZ 308178 B6 uvedené mikroRNA [miR-20a-5p (AUC 0,631, p=0,006), miR-143-3p (AUC 0,616, p=0,017), miR-146a-5p (AUC 0,664, p<0,001), miR-181a-5p (AUC 0,625, p=0,012), miR-199a-5p (AUC 0,618, p=0,018), miR-221-3p (AUC 0,643, p=0,003) a miR-499a-5p (AUC 0,675, p<0,001)]. Všechny tyto mikroRNA vykazovaly v plné periferní žilní krvi u pacientek s předchozím výskytem gestační hypertenze zvýšenou genovou expresi.
Dále je uvedeno, jaké procentuální zastoupení žen má zvýšenou expresi konkrétní mikroRNA při 10,0% falešné pozitivitě. Zvýšená exprese jednotlivých mikroRNA je pozorována u 8,0 % až 18,0 % žen s předchozím výskytem gestační hypertenze v závislosti na příslušné mikroRNA [miR-20a-5p (8,0%), miR-143-3p (8,0%), miR-146a-5p (12,0%), miR-181a-p (18,0%), miR199a-5p (12,0%), miR-221-3p (14,0%) a miR-499a-5p (8,0%) ].
Tato analýza identifikuje ženy, které mají po předchozím těhotenství v důsledku výskytu těhotenských komplikací zvýšené riziko pozdějšího výskytu kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění.
Postpartální upregulace miR-l-3p, miR-17-5p, miR-20b-5p, miR-29a-3p a miR-126-3p je přítomna u žen s předchozím výskytem gestační hypertenze a/nebo preeklampsie
Při použití Kruskal-Wallisova testu při porovnání s kontrolní skupinou vykazovala skupina žen s předchozím výskytem gestační hypertenze a/nebo preeklampsie bez ohledu na závažnost onemocnění a gestační stáří ukončení těhotenství zvýšenou expresi a/nebo trend k dosažení statisticky významné zvýšené exprese miR-17-5p (p=0,016, p=0,047) a miR-29a-3p (p=0,001, p=0,079) v plné periferní žilní krvi. Následná ROC analýza potvrdila zvýšenou expresi miR-175p (AUC 0,658, p<0,001, 20,0% senzitivita při 10,0% FP vs. AUC 0,608, p=0,008, 19,8% senzitivita při 10,0% FP) a miR-29a-3p (AUC 0,678, p<0,001, 20,0% senzitivita při 10,0% FP vs. AUC 0,609, p=0,008, 15,84% senzitivita při 10,0% FP) u obou skupin žen.
Po detailní analýze s ohledem na klinickou symptomatologii byla také pomocí Kruskal-Wallisova testu detekována zvýšená exprese a/nebo trend k dosažení statisticky významné zvýšené exprese miR-17-5p (p=0,016, p=0,010), miR-20b-5p (p=0,008, p=0,129), miR-29a-3p (p=0,001, p=0,021) a miR-126-3p (p=0,074, p=0,109) u pacientek s předchozím výskytem gestační hypertenze a/nebo závažné preeklampsie. ROC analýza pak ukázala, že část žen s předchozím výskytem gestační hypertenze a/nebo závažné preeklampsie v průběhu těhotenství má při 10,0% falešné pozitivitě upregulovaný postpartální profil výše uvedených mikroRNA asociovaných s kardiovaskulárními a cerebrovaskulámími onemocněními [miR-17-5p (AUC 0,658, p<0,001, 20,0% senzitivita vs. AUC 0,633, p=0,002, 19,48% senzitivita), miR-20b-5p (AUC 0,660, p<0,001, 14,0% senzitivita vs. AUC 0,591, p=0,039, 18,18% senzitivita), miR-29a-3p (AUC 0,678, p<0,001, 20,0% senzitivita vs. AUC 0,622, p=0,005, 18,18% senzitivita) a miR-126-3p (AUC 0,631, p=0,007, 12,0% senzitivita vs. AUC 0,594, p=0,035, 11,69% senzitivita)].
Současně statistická analýza pomocí Kruskal-Wallisova testu detekovala zvýšené hladiny a/nebo trend k dosažení statisticky významných zvýšených hladin miR-l-3p (p=0,065, p=0,095) a miR17-5p (p=0,016, p=0,178) u žen s diagnostikovanou gestační hypertenzí a/nebo časnou preeklampsií, u nichž bylo nutné ukončit předchozí těhotenství před 34. gestačním týdnem. Následná ROC analýza pak odhalila při 10,0% falešné pozitivitě upregulovaný expresní profil miR-l-3p (AUC 0,634, p=0,005, 16,0% senzitivita vs. AUC 0,626, p=0,018, 11,11% senzitivita) a miR-17-5p (AUC 0,658, p<0,001, 20,0% senzitivita vs. AUC 0,611, p=0,043, 16,67% senzitivita) u obou skupin žen (výskyt gestační hypertenze a/nebo časné preeklampsie v průběhu předchozí gravidity).
Zároveň, statistická analýza pomocí Kruskal-Wallisova testu detekovala zvýšené hladiny a/nebo trend k dosažení statisticky významné zvýšené genové exprese miR-17-5p (p=0,016, p=0,068), miR-20b-5p (p=0,008, p=0,l 12) a miR-29a-3p (p=0,001, p=0,029) u žen s předchozím výskytem
-6CZ 308178 B6 gestační hypertenze a/nebo pozdní formy preeklampsie diagnostikované po 34. gestačním týdnu. ROC analýza pak ukázala, že postpartální skrínink miR-17-5p (AUC 0,658, p<0,001 vs. AUC 0,606, p=0,023) identifikoval rizikovou skupinu žen s předchozím výskytem gestační hypertenze a/nebo pozdní preeklampsie se sensitivitou 20,0% a 21,54% při 10,0% falešné pozitivitě. MiR20b-5p (AUC 0,660, p<0,001 vs. AUC 0,594, p=0,045) pak vykazovala zvýšené hodnoty v plné periferní žilní krvi u 14,0 % žen s předchozím výskytem gestační hypertenze a u 18,46 % žen s předchozím výskytem pozdní preeklampsie. MiR-29a-3p (AUC 0,678, p<0,001 vs. AUC 0,618, p=0,010) byla upregulovaná u 20,0 % žen s anamnézou gestační hypertenze a u 13,85 % žen s anamnézou pozdní formy preeklampsie.
Postpartální upregulace miR-133a-3p a miR-130b-3p jsou přítomny pouze u žen s předchozím výskytem preeklampsie
Při použití Kruskal-Wallisova testu při porovnání s kontrolní skupinou vykazovala skupina žen s předchozím výskytem preeklampsie bez ohledu na závažnost onemocnění a gestační stáří ukončení těhotenství trend k dosažení statisticky významné zvýšené exprese miR-133a-3p (p=0,087) v plné periferní žilní krvi. ROC analýza odhalila zvýšenou expresi miR-133a-3p (AUC 0,598, p=0,018) u 13,86 % žen s anamnézou preeklampsie při 10,0% falešné pozitivitě.
Při použití Kruskal-Wallisova testu byla zvýšená exprese miR-133a-3p (p=0,008) pozorována ve skupině žen s časnou preeklampsií, u kterých bylo nutné ukončit těhotenství před 34. gestačním týdnem. Zvýšená exprese miR-133a-3p (p=0,034) byla rovněž detekována u žen, u kterých byla v průběhu předchozího těhotenství diagnostikována závažná preeklampsie. MiR-133a-3p vykazovala vyšší přesnost v případě žen s předchozí expozicí závažné preeklampsií (AUC 0,613, p=0,009, 14,29% senzitivita při 10,0% FP) a/nebo časné preeklampsií (AUC 0,670, p<0,001, 16,67% senzitivita při 10,0% FP) při porovnání se skupinou žen s anamnézou preeklampsie bez ohledu na závažnost onemocnění a gestační stáří ukončení těhotenství.
Současně byl při použití Kruskal-Wallisova testu detekován trend k dosažení statisticky významné zvýšené exprese miR-130b-3p (p=0,054) u žen, u kterých byla v průběhu předchozího těhotenství diagnostikována závažná preeklampsie. ROC analýza detekovala zvýšenou expresi miR-130b-3p (AUC 0,606, p=0,016) ve skupině žen s anamnézou závažné preeklampsie se sensitivitou 10,39% při 90,0% specificitě.
Asociace mezi postpartálním skríninkem mikroRNA asociovaných s kardiovaskulárními a cerebrovaskulámími onemocněními a závažností preeklampsie a/nebo fetální růstové restrikce s ohledem na Dopplerovské UZ parametry v průběhu výskytu těhotenské komplikace
Index pulsatility v umbilikální artérii naměřený v době manifestace těhotenské komplikace koreluje s postpartální expresí miR-145-5p (p=0,227, p=0,026, slabá pozitivní korelace) v plné periferní žilní krvi matek s předchozím výskytem preeklampsie a/nebo FGR. Tento nález naznačuje, že některé matky s abnormálními průtoky v umbilikální artérii mají postpartálně zvýšenou hladinu miR-145-5p v plné periferní žilní krvi.
Zeny s anamnézou preeklampsie a/nebo FGR s patologickými hodnotami průtoků v arteria cerebri media mají postpartálně zvýšenou genovou expresi miR-125b-5p (AUC 0,643, p=0,029, 14,29% senzitivita při 10,0% FP), která by nebyla detekována, pokud by byla statistická analýza provedena pouze pomocí Kruskal-Wallisova testu (p=0,308).
Dále byla pozorována korelace mezi cerebroplacentámím poměrem a postpartální genovou expresí miR-100-5p (p=-0,253, p=0,046, slabá negativní korelace) v plné periferní žilní krvi matek s předchozím výskytem preeklampsie a/nebo FGR. Při 10,0% falešné pozitivitě byla zvýšená exprese miR-100-5p (AUC 0,613, p=0,029) rovněž nalezena u 10,81 % žen s předchozím výskytem preeklampsie a/nebo FGR v průběhu těhotenství. Tato skutečnost by
-7CZ 308178 B6 nebyla detekována, pokud by byla statistická analýza provedena pouze pomocí KruskalWallisova testu (p=0,139). Tento nález znamená, že centralizace oběhu plodu, která se rozvinula v průběhu těhotenství u některých matek jako kompenzační mechanizmus vzniklé hypoxie v důsledku výskytu závažné preeklampsie a/nebo FGR, vedla k postpartální zvýšené expresi miR100-5p v plné periferní žilní krvi matek.
Současně, ačkoliv iniciální statistická analýza pomocí Kruskal-Wallisova testu naznačila pouze trend k upregulaci miR-125b-5p (p=0,059), miR-133a-3p (p=0,137) a miR-145-5p (p=0,128) u žen s předchozím výskytem preeklampsie a/nebo FGR s patologickými průtoky v uterinní artérii v průběhu gravidity, následná ROC analýza odhalila u těchto žen upregulaci miR-125b-5p (AUC 0,663, p=0,004, 19,05% senzitivita při 10,0% FP), miR-133a-3p (AUC 0,642, p=0,018, 14,29% senzitivita při 10,0% FP) a miR-145-5p (AUC 0,644, p=0,016, 9,52% senzitivita při 10,0% FP).
Navíc ženy s předchozím výskytem preeklampsie a/nebo FGR s přítomností unilaterálního nebo bilaterálního diastolického notche v uterinní artérii v průběhu gravidity měly rovněž postpartálně upregulované hladiny miR-125b-5p (AUC 0,657, p=0,012, 20,0% senzitivita při 10,0% FP) a miR-133a-3p (AUC 0,630, p=0,040, 15,0% senzitivita při 10,0% FP), což nebylo detekováno při provedení iniciální statistické analýzy pomocí Kruskal-Wallisova testu (miR-125b-5p: p=0,072, miR-133a-3p: p=0,203).
Patologické průtoky v ductus venosus vykazovaly slabou pozitivní korelaci s genovou expresí miR-145-5p (p=0,474, p= 0,034) v plné periferní žilní krvi žen s předchozím výskytem preeklampsie a/nebo FGR. Tento nález naznačuje, že ženy s nálezem dilatace ductus venosus u plodu v průběhu předchozího těhotenství, což zpravidla svědčí o špatné prognóze u závažné formy fetální růstové restrikce, vykazovaly zvýšené postpartální hladiny miR-145-5p v plné periferní žilní krvi.
Postpartální kombinovaný skrínink mikroRNA asociovaných s kardiovaskulárními a cerebrovaskulámími onemocněními je přesnější u žen s předchozím výskytem gestační hypertenze než skrínink individuálních upregulovaných mikroRNA biomarkerů, neboť identifikuje více žen ve zvýšeném riziku pozdějšího výskytu kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění než individuální mikroRNA biomarkery
Postpartální skrínink založený na kombinaci 7 ze 7 unikátních mikroRNA s aberantním expresním profilem pouze u žen s anamnézou gestační hypertenze (miR-20a-5p, miR-143-3p, miR-146a-5p, miR-181a-5p, miR-199a-5p, miR-221-3p a miR-499a-5p) ukázal vyšší přesnost (AUC 0,680, p<0,001, 68,75% senzitivita, 62,92% specificita, cut off hodnota >0,320869) než jednotlivé unikátní mikroRNA biomarkery up-regulované pouze u žen s předchozím výskytem gestační hypertenze. Postpartální skrínink založený na kombinaci miR-20a-5p, miR-143-3p, miR-146a-5p, miR-181a-5p, miR-199a-5p, miR-221-3p a miR-499a-5p identifikoval při 10,0% falešné pozitivitě 29,17 % žen s anamnézou gestační hypertenze se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem.
Postpartální kombinovaný skrínink všech 5 mikroRNA biomarkerů upregulovaných u žen s anamnézou gestační hypertenze a/nebo preeklampsie (miR-l-3p, miR-17-5p, miR-20b-5p, miR29a-3p a miR-126-3p) byl rovněž přesnější v identifikaci žen s předchozím výskytem gestační hypertenze ve zvýšeném kardiovaskulárním riziku (AUC 0,711, p<0,001, 58,33% senzitivita, 82,02% specificita, cut off hodnota >0,365924) než jednotlivé mikroRNA biomarkery upregulované u žen s předchozím výskytem gestační hypertenze a/nebo preeklampsie. Postpartální skrínink založený na kombinaci miR-l-3p, miR-17-5p, miR-20b-5p, miR-29a-3p a miR-126-3p identifikoval při 10,0% falešné pozitivitě 33,33 % žen s anamnézou gestační hypertenze se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem.
Postpartální kombinovaný skrínink mikroRNA asociovaných s kardiovaskulárními a cerebrovaskulámími onemocněními je přesnější u žen s předchozím výskytem preeklampsie bez
- 8 CZ 308178 B6 ohledu na závažnost onemocnění a gestační stáří ukončení těhotenství než skrínink individuálních upregulovaných mikroRNA biomarkerů, neboť identifikuje více žen ve zvýšeném riziku pozdějšího výskytu kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění než individuální mikroRNA biomarkery
Postpartální skrínink založený na kombinaci miR-17-5p, miR-29a-3p a miR-133a-3p (AUC 0,622, p=0,003, 73,27% senzitivita, 51,69% specificita, cut off hodnota >0,487687) byl mnohem přesnější v identifikaci žen s předchozím výskytem preeklampsie bez ohledu na závažnost onemocnění a gestační stáří ukončení těhotenství ve zvýšeném kardiovaskulárním riziku než skrínink individuálních mikroRNA biomarkerů (miR-17-5p, miR-29a-3p a miR-133a-3p). Postpartální skrínink založený na kombinaci miR-17-5p, miR-29a-3p a miR-133a-3p identifikoval při 10,0% falešné pozitivitě 18,81 % žen s anamnézou preeklampsie bez ohledu na závažnost onemocnění a gestační stáří ukončení těhotenství se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem.
Postpartální kombinovaný skrínink mikroRNA asociovaných s kardiovaskulárními a cerebrovaskulámími onemocněními je přesnější u žen s předchozím výskytem závažné preeklampsie než skrínink individuálních mikroRNA biomarkerů, neboť identifikuje více žen ve zvýšeném riziku pozdějšího výskytu kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění než individuální mikroRNA biomarkery
V případě závažné preeklampsie byl postpartální skrínink založený na kombinaci 5 ze 6 mikroRNA biomarkerů (miR-17-5p, miR-20b-5p, miR-29a-3p, miR-126-3p, a miR-133a-3p) mnohem přesnější (AUC 0,644, p<0,001, 83,12% senzitivita, 47,19% specificita, cut off hodnota >0,400368) v identifikaci žen se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem než skrínink individuálních mikroRNA biomarkerů (miR-17-5p, miR-20b-5p, miR-29a-3p, miR-126-3p, miR130b-3p a miR-133a-3p). Postpartální skrínink založený na kombinaci miR-17-5p, miR-20b-5p, miR-29a-3p, miR-126-3p, a miR-133a-3p identifikoval při 10,0% falešné pozitivitě 23,38 % žen s anamnézou závažné preeklampsie se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem.
Postpartální kombinovaný skrínink mikroRNA asociovaných s kardiovaskulárními a cerebrovaskulámími onemocněními je přesnější u žen s předchozím výskytem časné preeklampsie než skrínink individuálních upregulovaných mikroRNA biomarkerů, neboť identifikuje více žen ve zvýšeném riziku pozdějšího výskytu kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění než individuální mikroRNA biomarkery
U žen s výskytem časné preeklampsie v průběhu předchozího těhotenství, které muselo být ukončeno před 34. gestačním týdnem, byl prokázán aditivní efekt postpartálního kombinovaného skríninku založeného na kombinaci miR-l-3p, miR-17-5p a miR-133a-3p (AUC 0,674, p<0,001, 75,0% senzitivita, 58,43% specificita, cut off hodnota >0,256824). Postpartální kombinovaný skrínink založený na kombinaci miR-l-3p, miR-17-5p, a miR-133a-3p identifikoval při 10,0% falešné pozitivitě 16,67 % žen s anamnézou časné preeklampsie se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem. Postpartální kombinovaný skrínink vykazoval větší přesnost v identifikaci žen s anamnézou časné formy preeklampsie ve zvýšeném kardiovaskulárním riziku než individuální mikroRNA biomarkery (miR-l-3p, miR-17-5p a miR-133a-3p).
Postpartální skrínink jediného mikroRNA biomarkerů (miR-29a-3p) je přesnější u žen s předchozím výskytem pozdní preeklampsie než postpartální kombinovaný skrínink mikroRNA asociovaných s kardiovaskulárními a cerebrovaskulámími onemocněními, neboť identifikuje více žen ve zvýšeném riziku pozdějšího výskytu kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění než kombinace mikroRNA biomarkerů
U žen s anamnézou pozdní formy preeklampsie, která byla diagnostikována po 34. gestačním týdnu, měl postpartální kombinovaný skrínink založený na různých kombinacích mikroRNA biomarkerů (miR-17-5p, miR-20b-5p a miR-29a-3p) menší přesnost v identifikaci žen se
-9CZ 308178 B6 zvýšeným kardiovaskulárním rizikem (AUC 0,607, p=0,023, 56,92% senzitivita, 67,42% specificita, cut off hodnota >0,415645) než postpartální skrínink s využitím jediného mikroRNA biomarkeru (miR-29a-3p, AUC 0,618, p=0,010, 13,85% senzitivita při 10,0% FP). Postpartální kombinovaný skrínink založený na kombinaci miR-17-5p, miR-20b-5p, a miR-29a-5p, který vykazoval v různých kombinacích mikroRNA biomarkerů nejvyšší přesnost, identifikoval při 10,0% falešné pozitivitě 23,08 % žen se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem ve skupině pacientek s anamnézou pozdní formy preeklampsie v předchozím těhotenství.
Postpartální skrínink jediného mikroRNA biomarkeru (miR-125b-5p) je přesnější u žen s výskytem preeklampsie a/nebo FGR s patologickými průtoky v uterinní artérii v předchozím těhotenství než postpartální kombinovaný skrínink mikroRNA asociovaných s kardiovaskulárními a cerebrovaskulámími onemocněními, neboť identifikuje více žen ve zvýšeném riziku pozdějšího výskytu kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění než kombinace mikroRNA biomarkerů
Postpartální kombinovaný skrínink založený na různých kombinacích 3 mikroRNA biomarkerů (miR-125b-5p, miR-133a-3p a miR-145-5p) upregulovaných ve skupině žen s předchozím výskytem preeklampsie a/nebo FGR s patologickým průtokem v uterinní artérii byl méně přesný (AUC 0,644, p=0,016, 95,24% senzitivita, 32,58% specificita, cut off hodnota >0,154988) než postpartální skrínink jediného mikroRNA biomarkeru (miR-125b-5p, AUC 0,663, p=0,004, 19,05% senzitivita při 10,0% FP). Postpartální kombinovaný skrínink založený na kombinaci miR-133a-3p a miR-145-5p, který vykazoval v různých kombinacích mikroRNA biomarkerů nejvyšší přesnost, identifikoval při 10,0% falešné pozitivitě 14,29 % žen se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem ve skupině pacientek s anamnézou preeklampsie a/nebo FGR se zvýšeným indexem pulsatility v uterinní artérii v předchozím těhotenství.
Navíc, u žen s výskytem preeklampsie a/nebo FGR, u kterých byla v předchozím těhotenství zjištěna přítomnost unilaterálního a/nebo bilaterálního diastolického notche v uterinní artérii vykazoval postpartální skrínink jediného mikroRNA biomarkeru (miR-125b-5p) nejvyšší přesnost v identifikaci žen se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem (AUC 0,657, p=0,012, 20,0% senzitivita při 10,0% FP). Postpartální kombinovaný skrínink založený na kombinaci miR-125b5p a miR-133a-3p identifikoval v této skupině při 10,0% falešné pozitivitě 15,0 % žen se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem a vykázal nižší přesnost (AUC 0,625, p=0,053, 80,0% senzitivita, 51,69% specificita, cut off hodnota >0,164734).
Role mikroRNA v patogenezi kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění
Zatím nejsou k dispozici žádné studie zaměřené na sledování postpartálního expresního profilu mikroRNA asociovaných s kardiovaskulárními a cerebrovaskulámími onemocněními v plné periferní žilní krvi žen s předchozím výskytem těhotenských komplikací (gestační hypertenze, preeklampsie a/nebo fetální růstová restrikce). Avšak z dostupných dat je zřejmé, že námi studované mikroRNA hrají významnou roli v patogenezi kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění. Domníváme se, že výskyt gestační hypertenze, preeklampsie a/nebo fetální růstové restrikce v předchozím těhotenství, který je asociován s aberantním postpartálním expresním profilem některých mikroRNA hrajících roli v patogenezi kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění, predisponuje část žen k pozdějšímu rozvoji kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění. Právě tato riziková skupina žen by měla být v rámci postpartálního skríninku včas rozpoznána, neboť' může významně profitovat z preventivních opatření s cílem omezit nebo zabránit pozdějšímu rozvoji kardiovaskulárních a cerebrovaskulámích onemocnění.
MiR-l-3p je generována z prekurzorů miR-1-l a miR-1-2, jejichž geny jsou lokalizované na chromozómech 20ql3.3 a 18q 11.2. MiR-1 je vysoce exprimovaná v srdečním svalu, především v myokardu, a v kosterních svalech. Hladiny cirkulující miR-1 jsou významně zvýšeny u akutního infarktu myokardu a korelují s hladinami cirkulujícího troponinu T, markérem srdečního
- 10 CZ 308178 B6 poškození. MiR-1 je potenciálním cílem terapeutické intervence u kardiovaskulárních onemocnění, srdeční ischemie a u komplikací vyskytujících se po infarktu myokardu. Inhibice miR-1 pomocí oligonukleotidů je kardioprotektivní, jelikož vede k omezení apoptózy, zvýšení rezistence k oxidativnímu stresu a k zmírnění spontánních arytmií. Domníváme se, že část žen s aberantním postpartálním expresním profilem miR-1 -3p v plné periferní žilní krvi, jejichž předchozí těhotenství bylo komplikováno gestační hypertenzí (16,0 %) nebo časnou preeklampsií (11,11 %), má zvýšené kardiovaskulární riziko a měla by být dlouhodobě monitorována.
MiR-17-5p, člen miR-17-92 klastru, má gen lokalizovaný na chromozómu 13q31, je vysoce exprimovaná v endoteliálních buňkách a málo exprimovaná v buňkách hladkého svalstva cévní stěny. MikroRNA pocházející z miR-17p-92 klastru hrají kritickou roli při vývoji srdce, jelikož srdce miR-17p-92 deficientních mutantních experimentálních myších embryí měly defekt komorového septa. Několik studií rovněž potvrdilo roli miR-17-5p v regulaci ischemickoreperfůzního poškození srdce (I/R-I). Upregulace miR-17-5p podporuje apoptózu indukovanou oxidativním stresem v in vivo I/R-I myším modelu přes regulaci exprese Stat3. Inhibice exprese miR-17-5p pomocí specifických inhibitorů vedla k inhibici buněčné smrti a nastolila přežívání buněk jak v in vivo I/R-I myším modelu tak v in vitro buněčném modelu oxidativního stresu a zlepšila funkce srdce po prodělaném akutním infarktu myokardu tím, že vedla k potlačení apoptózy endoteliálních buněk. Exprese miR-17-5p je také aktivována během ischemickoreperfůzního poškození ledvin u myší. U lidí, cirkulující miR-17-5p reprezentuje jeden z hlavních potenciálních upregulovaných biomarkerů difuzní fibrózy myokardu u pacientů s hypertrofickou kardiomyopatií, u pacientů s akutní ischemickou cévní mozkovou příhodou a je rovněž biomarkerem závažnosti koronární aterosklerózy u pacientů s onemocněním koronárních tepen. Naše výsledky prokázaly, že miR-17-5p je upregulována u části žen s anamnézou gestační hypertenze (20,0 %), preeklampsie bez ohledu na závažnost onemocnění a gestační stáří ukončení gravidity (19,8 %), závažné preeklampsie (19,48 %), časné preeklampsie (16,67 %) a pozdní preeklampsie v předchozím těhotenství (21,54 %). S ohledem na fakt, že upregulace miR17-5p je asociována s vyšším kardiovaskulárním rizikem, se domníváme, že ženy s aberantním postpartálním expresním profilem miR-17-5p by měly být stratifikovány a dispenzarizovány co nejdříve s důrazem na prevenci možného rozvoje kardiovaskulárních onemocnění.
MiR-20a-5p patří také do miR-17 rodiny a je přepisována z miR-17-92 klastru. MiR-20a hraje roli v zánětlivé reakci u pulmonámí hypertenze. Intraperitoneální aplikace antagomiR-20a významně snížila expresi miR-20a-5p a obnovila funkce BMPR2 v pulmonámích artériích v experimentálním myším modelu pulmonámí hypertenze vyvolané hypoxií. Předchozí studie rovněž prokázaly zvýšené plazmatické hladiny miR-17-5p a miR-20a-5p u pacientek s GDM mezi 16 až 19 gestačním týdnem. Naše data podporují roh miR-20a-5p v patogenezi patologických stavů zvyšujících kardiovaskulární riziko. Identifikovali jsme upregulaci miR-20a5p u části žen s anamnézou gestační hypertenze v předchozím těhotenství (8,0 %). Domníváme, že časná identifikace rizikové skupiny žen s aberantním postpartálním expresním profilem miR20a-5p povede ke zlepšení jejich kardiovaskulárního zdraví.
MiR-20b-5p také patří do miR-17 rodiny, avšak je přepisována z miR-106a-363 klastru. Nedávné studie potvrdily, že zvýšené plazmatické hladiny miR-20b mohou reprezentovat jeden z možných biomarkerů monitorování účinnosti terapie a progrese onemocnění u hypertenzí indukovaného srdečního selhání v experimentální zvířecím modelu. U lidí byly pak zvýšené hladiny miR-20b5p detekovány v séru matek s SGA plody v průběhu druhého trimestru těhotenství. V naší studii, miR-20b-5p reprezentovala mikroRNA biomarker, který je upregulován u části žen s anamnézou gestační hypertenze (14,0 %), závažné preeklampsie (18,18 %) a pozdní preeklampsie v předchozím těhotenství (18,46 %). Domníváme se, že tato skupina žen je ohrožena pozdějším výskytem kardiovaskulárních onemocnění a profitovala by z preventivních programů zaměřených na snížení kardiovaskulárního rizika.
MiR-29a-3p, člen miR-29 rodiny, má gen lokalizovaný na chromozómu 7q32.3. Aplikace antagomiR-29a signifikantně zvýšila expresi Mcl-2 proteinu a tím signifikantně snížila velikost
- 11 CZ 308178 B6 rozsahu infarktu myokardu a apoptózu v experimentálním modelu ischemicko- reperfuzního poškození srdce. Upregulace miR-29a-3p byla také pozorována u kardiální kachexie, časté komplikace srdečního selhání, rovněž v experimentálním modelu. U pacientů s atriální fibrilací pak byla nalezena v biopsii srdce zvýšená exprese mi-29a-3p, která byla asociována se sníženou expresí CACNA1C proteinu. Cirkulující miR-29a-3p představuje rovněž jeden z potenciálních upregulovaných biomarkerů u difuzni myokardiální fibrózy u pacientů s hypertrofickou kardiomyopatií. Předchozí studie prokázaly zvýšené plazmatické hladiny miR-29a-3p u pacientek s GDM mezi 16 až 19 gestačním týdnem. Zvýšené sérové hladiny miR-29a-3p byly také pozorovány u pacientů s čerstvou diagnózou DM typu II. V naší studii jsme identifikovali upregulaci miR-29a-3p u části žen, u nichž byla v předchozím těhotenství diagnostikována gestační hypertenze (20,0 %), preeklampsie bez ohledu na závažnost onemocnění a gestační stáří ukončení gravidity (15,84 %), závažná preeklampsie (18,18 %) a pozdní preeklampsie (13,85 %). Považujeme postpartální upregulaci miR-29a-3p v cirkulaci žen za vysoce rizikový faktor indikující zvýšené kardiovaskulární riziko.
MiR-100-5p je součástí MIR100HG klastru lokalizovaném na chromozómu 11. MiR-100 je upregulovaná v selhávajícím srdci, dále u pacientů s idiopatickou dilatační kardiomyopatií a ischemickou kardiomyopatií. Zvýšená exprese miR-100 vede k potlačení exprese genů asociovaných s hypertenzí. Upregulace miR-100-5p snižuje hladiny transkriptu N0X4 (NADPH oxidáza 4), oxidoreduktázy, která katalyzuje konverzi kyslíku na reaktivní kyslíkové formy v dermálních mikrovaskulámích endoteliálních buňkách, a redukuje produkci H2O2. Naše studie demonstrovala upregulaci miR-100-5p u části žen s anamnézou preeklampsie a/nebo FGR s patologickými průtoky v arteria cerebri media v průběhu předchozího těhotenství (10,81 %), což je indikátorem špatné perinatální prognózy. Z těchto důvodů se domníváme, že kompenzační efekt miR-100-5p se objevuje v této skupině žen s cílem normalizovat funkce kardiovaskulárního systému. Nicméně pokládáme skupinu žen s aberantním postpartálním expresním profilem miR100-5p za rizikovou. Tato skupina žen by měla být dle našeho názoru dispenzarizována a dlouhodobě sledována.
Existují 2 paralogy, miR-125b-l na chromozómu llq24.1 a miR-125b-2 na chromozómu 21q21.1, oba produkují miR-125b-5p. Několik upregulovaných cirkulujících mikroRNA včetně miR-125b-5p je asociováno s akutní ischemickou cévní mozkovou příhodou a akutním infarktem myokardu. Upregulace miR-125b-5p chrání endoteliální buňky před apoptózou způsobenou oxidativním stresem díky negativní regulaci SMAD4 (SMAD family member 4). Navíc miR125b-5p působí jako protektor před apoptózou kardiomyocytů vyvolanou ischemií. Kardiomyocyty s upregulovanou miR-125b-5p déle přežívají a chrání srdce před akutním infartkem myokardu represí proapoptotických genů bakl a klfl3. Naše studie prokázala upregulaci miR-125b-5p u části žen s anamnézou preeklampsie a/nebo FGR s patologickými průtoky v arteria cerebri media a v uterinní artérii (zvýšená rezistence a přítomnost unilaterálního a/nebo bilaterálního notche). Zvýšený index pulsatility v uterinní artérii zpravidla odráží defekt mateřských spirálních artérii v placentě u těhotenství komplikovaných hypertenzí a fetální růstovou restrikcí. Domníváme se, že protektivní efekt miR-125-5p může být dlouhodobým důsledkem závažné těhotenské komplikace s cílem ochránit endoteliální buňky a kardiomyocyty před apoptózou. Považujeme tedy postpartální upregulaci miR-125-5p v cirkulaci žen za rizikový faktor, který svědčí pro zvýšené kardiovaskulární riziko.
MÍR-126, produkující miR-126-3p, je kódována genem lokalizovaným v intronu 7 EGFL7 (epidermálni růstový faktor-like protein 7) genu na chromozómu 9q34.3. MiR-126 reguluje endoteliální expresi vaskulámi buněčné adhezivni molekuly 1 (VCAM-1) a kontroluje vaskulámi zánět. Upregulace miR-126 snižuje VCAM-1 expresi a naopak transfekce endoteliálních buněk miR-126 antagomiry zvyšuje TNFa-stimulovanou expresi VCAM-1. MiR-126-3p je signifikantně downregulovaná v séru pacientů s akutním infarktem myokardu a v plasmě pacientů s DM typu II. Nedávné studie prokázaly, že intercelulámi přenos miR-126-3p prostřednictvím endoteliálních mikropartikuli snižuje proliferaci buněk vaskulámich hladkých svalů a zabraňuje tvorbě neointimy inhibici LRP6 (LDL Receptor Related Protein 6). Z naší
- 12 CZ 308178 B6 studie vyplývá, že kompenzační role miR-126-3p se také uplatňuje u části pacientek dříve exponovaných gestační hypertenzi (12,0 %) nebo závažné preeklampsii (11,69%), pravděpodobně s cílem indukovat supresi cytokíny aktivovaných endoteliálních buněk a proliferaci buněk vaskulámích hladkých svalů.
MiR-130b gen je člen miR-130 rodiny lokalizované na chromozómu 22q 11.21. Cirkulující hladiny miR-130b-3p reflektují míru obezity, a proto mohou být využity v monitorinku hypertriglyceridémie a metabolického syndromu. Zvýšené hladiny cirkulující miR-130b-3p byly rovněž pozorovány u pacientů s DM typu 2 a u pacientů s intrakraniálním aneuryzma. MiR-13 0b je také hojně exprimována ve velkých i malých tepnách u pacientů po ischemické cévní mozkové příhodě. Jelikož naše studie prokázala upregulaci miR-130b-3p u části pacientek s anamnézou závažné preeklampsie v předchozím těhotenství (10,39 %), domníváme se, že postpartální skrínink miR-130b-3p může přispět ke stratifikaci žen ve zvýšeném kardiovaskulárním riziku. Nicméně role miR-130b-3p zůstává u těchto pacientek zatím nejasná.
MiR-133a-3p patří do miR-133 rodiny a je přepisována z genu, jenž se vyskytuje ve vícero kopiích, a to na chromozómu 18 (miR-133a-l) a na chromozómu 20 (miR-133a-2). MiR-133 je exprimována v kardiomyocytech a v kosterních svalech a má anti-apoptotický účinek, tím že potlačuje expresi kaspázy 9. MiR-133 hraje také důležitou úlohu ve vývoji srdce ovlivněním exprese genů HCN2 a HCN4. MiR-133 je downregulována u hypertrofie srdce, srdečního selhání, a downregulace miR-133 také přispívá k arytmogenezi u hypertrofie srdce a srdečního selhání. Indukce overexprese miR-133 redukuje hypertrofíi srdce a vede ke korekci abnormalit v převodním srdečním systému. Dále je cirkulující miR-133a-3p jedním z potenciálních biomarkerů difúzní myokardiální fibrózy u pacientů s hypertrofickou kardiomyopatií a kalcifikací koronárních tepen. Naše studie prokázala upregulaci miR-133a-3p u části žen, jejichž předchozí těhotenství bylo komplikováno preeklampsii bez ohledu na závažnost onemocnění a gestační stáří ukončení gravidity (13,86 %), závažnou preeklampsii (14,29 %) a časnou preeklampsii (16,67 %). Dále část žen s anamnézou preeklampsie a/nebo FGR s patologickými Dopplerovskými UZ parametry v době klinické manifestace těhotenských komplikací (zvýšená rezistence v uterinní artérii a přítomnost unilaterálního nebo bilaterálního notche v uterinní artérii) měla také postpartálně upregulovaný expresní profil miR-133a-3p (14,29 % a 15,0 %). Domníváme se, že kompenzační efekt miR-133a-3p se může objevit v této rizikové skupině žen s cílem normalizovat funkce kardiovaskulárního systému.
MiR-143-3p a miR-145-5p, mají geny lokalizované na chromozómu 5q33 ve vzdálenosti přibližně 1,3 kb od sebe. Obě mikroRNA jsou downregulované u většiny nádorů a působí jako tumor supresory. Cílovými geny pro miR-143 jsou ERKS a KRAS, a pro miR-145 pak geny cmyc a IRS-1. Navíc klastr miR-143/145 hraje zásadní roli v diferenciaci buněk vaskulámího hladkého svalstva (VSMC) prostřednictvím regulace exprese sítě transkripčních faktorů včetně Klf4, myokardinu a Elk-1. Zatímco exprese miR-143/145 klastru je snížena za podmínek asociovaných s akutním a chronickým vaskulámím stresem jako je např. aneuryzma aorty a u koronárních arteriálních onemocnění, upregulace miR-143-3p a miR-145-5p byla pozorována u VSMC pulmonámích artérii a VSMC-derivovaných exozómů a v plicní tkáni u pacientů s idiopatickou a hereditámí pulmonámí hypertenzí. Navíc zvýšená exprese miR-143/miR-145 byla nalezena v buňkách hladkého svalstva v safenéní žíle u pacientů s DM typu 2 a v aterosklerotických plátech u pacientů s hypertenzí. Cirkulující miR-143-3p byla rovněž validována jako jeden z upregulovaných biomarkerů asociovaných s akutní ischemickou mozkovou příhodou. Zatímco jsme v naší studii pozorovali upregulaci miR-143-3p u části žen s anamnézou gestační hypertenze v předchozím těhotenství (8,0 %), upregulace nebo tendence k upregulaci miR-145-5p byla nalezena u části žen s anamnézou preeklampsie a/nebo FGR s patologickými Dopplerovskými UZ průtoky (zvýšená rezistence v umbilikální artérii, uterinní artérii a ductus venosus). Domníváme se, že časná identifikace této rizikové skupiny žen může zlepšit jejich budoucí kardiovaskulární zdraví.
MiR-146 rodina obsahuje 2 členy s téměř identickou sekvencí, miR-146a-5p a miR-146b-5p.
- 13 CZ 308178 B6
MIR146A gen je lokalizován uvnitř genu kódujícího dlouhou nekódující RNA, MIR3142HG, na chromozómu 5q33.3. MiR-146a-5p se podílí aktivně na celé řadě procesů u nádorových onemocnění jako je imunosuprese, metastazování a angiogeneze. MiR-146a-5p je protizánětlivá mikroRNA, negativně reguluje zánět tím, že cílí na geny IRAKI a TRAF6, což má za následek inhibici aktivace NF-κΒ. Dále je miR- 146a jednou z mikroRNA vysoce senzitivní na hypoxii. Zdá se, že upregulace miR-146a chrání myokard před poškozením. Transfekce lentiviru exprimujícího miR-146a do buněk srdce myši signifikantně snížila rozsah indukovaného infarktu myokardu. Zvýšené plasmatické hladiny miR-146a korelují se závažností koronární aterosklerózy u pacientů se subklinickým hypotyroidismem a jsou dobrým prediktorem rozvoje koronárního srdečního onemocnění u jedinců se zvýšenými hladinami TSH. Nicméně signifikantní downregulace miR-146a byla pozorována u pacientů s akutní ischemickou mozkovou příhodou. Downregulace miR-146a má zde zřejmě self-protektivní charakter s cílem snížit následky akutní ischemické mozkové příhody, neboť upregulace FbxllO chrání neurony před buněčnou smrtí vyvolanou ischemií. V naší studii jsme pozorovali upregulaci miR-146a-5p u části žen, jejichž předchozí těhotenství bylo komplikováno gestační hypertenzí (12,0 %). Domníváme se tedy, že protektivní role miR-146a-5p se uplatňuje v určité rizikové skupině žen s cílem redukovat zánět a jeho negativní důsledky.
MiR-181a a miR-181b mají geny lokalizované na chromozómech lq32.1 a 9q33.3. MiR-181a tvoří několik zralých mikroRNA: miR-181a-5p, miR-181a-3p a miR-181a2-3p. MiR-181 rodina hraje centrální roli u akutních i chronických zánětlivých onemocnění jako je ateroskleróza, DM typu 2 a obezita. Nicméně, existuje celá řada protichůdných dat ohledně miR-181a exprese u různých patologických stavů. Snížená exprese miR-181a pozorovaná vmonocytech obézních pacientů byla asociovaná s metabolickým syndromem a koronárními arteriálními onemocněními. Avšak jiná studie dokumentovala, že upregulace miR-181a-5p v adipocytech zvyšuje inzulínemstimulovanou AKT aktivaci a snižuje TNFa-indukovanou inzulínovou rezistenci. Navíc zvýšená exprese miR-181a v játrech narušila homeostázu glukózy a lipidů umlčením sirtuin 1 u pacientů s onemocněním jater. Protichůdná data existují i v případě sérových hladin miR-181a u diabetických pacientů. Zatímco sérové hladiny miR-181a-5p byly snížené u obézních a diabetických pacientů, cirkulující hladiny miR-181a byly zvýšeny u dětí a adolescentů s DM typu 1. Nicméně cirkulující hladiny miR-181a-5p byly zvýšené u pacientů s ischemickou mozkovou příhodou, transientní ischemickou atakou a akutním infarktem myokardu. Naše studie odhalila upregulaci miR-181a-5p u části žen s anamnézou gestační hypertenze v předchozím těhotenství (18,0 %). S ohledem na inkonzistentní data jednotlivých studií je role miR-181a-5p zatím nejasná. Nicméně se domníváme, že zvýšené hladiny miR-181a-5p v cirkulaci žen s předchozí expozicí gestační hypertenzi mohou predisponovat k pozdějšími rozvoji kardiovaskulárních onemocnění.
MiR-199a-5p je kódována 2 geny lokalizovanými na chromozómech lq24.3 a 19pl3.2. MiR199a je esenciální pro udržení velikosti kardiomyocytů a hraje roli v regulaci hypertrofie srdce. Upregulace miR-199a v kardiomyocytech zvětšuje jejich velikost, a naopak umlčení endogenní exprese miR-199a zmenšuje jejich velikost. MiR-199a je upregulována 10-násobně v hypertrofhím srdci u krys po konstrikci abdominální aorty i po 12 týdnech. Upregulace miR-199a byla také pozorována u modelu pozdního poinfarktového srdečního selhání u krys. Navíc miR199a je velice senzitivní na hypoxii. MiR-199a přímo cílí a inhibuje translaci HIF-Ια mRNA během normoxie a downregulace miR-199a je nutná pro upregulaci HIF-Ια během hypoxie. V naší studii byla zjištěna upregulace miR-199a-5p u části žen s anamnézou gestační hypertenze v předchozím těhotenství (12,0 %). Domníváme se, že upregulace miR-199a-5p má spíše protektivní roli než škodlivý účinek s cílem navodit normoxii.
MiR-221/222 klastr obsahující geny pro miR-221 a miR-222 lokalizované na chromozómu Xpl 1 se podílí na regulaci buněk vaskulámí hladké svaloviny a endotelu a fimkce myokardu. Exprese miR-221/222 je pozitivně regulována angiotensinem II a přispívá k několika závažným patologickým stavům srdce včetně myotonické dystrofie typu 2 a hypertrofické kardiomyopatie. Ačkoliv vaskulámí exprese miR-221/222 je upregulována v iniciální fázi aterosklerózy, v
- 14 CZ 308178 B6 pozdějších stádiích chronický zánět vede k downregulaci miR-221/222 v endoteliálních buňkách. Cirkulující miR-221 a/nebo miR-221-3p je jedním z nových diagnostických biomarkerů hypertenze, obezity, metabolického syndromu, koronárních arteriálních onemocnění, aterosklerózy karotid a akutního infarktu myokardu. Naše studie demonstrovala přítomnost upregulace miR-221-3p u části žen s anamnézou gestační hypertenze v předchozí graviditě (14,0 %). S ohledem na data předchozích studií se domníváme, že tato skupina žen je ohrožena pozdějším rozvojem kardiovaskulárních onemocnění a vyžaduje časnou implementaci preventivních programů s cílem snížit kardiovaskulární riziko.
MiR-499a-5p, kódovaná genem miR-499a lokalizovaným na chromozómu 20qll.22, je za fýziologických podmínek silně exprimovaná v srdci. MiR-499 se podílí na inhibici apoptózy kardiomyocytů supresí kalcineurin-zprostředkované defosforylace Drpl proteinu. Bylo rovněž popsáno, že p53 transkripčně downreguluje expresi miR-499. MiR-499 je také asociována signifikantně s infarktem myokardu, a společně s miR-133a a miR-208a představují potenciální časné diagnostické biomarkery infarktu myokardu. Navíc se miR-499 významně podílí na zánětlivých signálních drahách u astma bronchiale. Naše studie prokázala upregulaci miR-499a5p u části žen s anamnézou gestační hypertenze v předchozím těhotenství (8,0 %). S ohledem na klinickou relevanci miR-499 se domníváme, že skupina žen s upregulovaným expresním profilem miR-499a-5p je vysoce rizikovou skupinou pacientek, která by profitovala z časné implementace preventivních programů a dlouhodobého monitorinku.
Objasnění výkresů
Obr. 1: Výsledky analýzy pro kombinaci mikroRNA markérů podle příkladu 1
Obr. 2: Výsledky analýzy pro miR-20a-5p podle příkladu 1
Obr. 3: Výsledky analýzy pro miR-143-3p podle příkladu 1
Obr. 4: Výsledky analýzy pro miR-146a-5p podle příkladu 1
Obr. 5: Výsledky analýzy pro miR-181a-5p podle příkladu 1
Obr. 6: Výsledky analýzy pro miR-199a-5p podle příkladu 1
Obr. 7: Výsledky analýzy pro miR-221-3p podle příkladu 1
Obr. 8: Výsledky analýzy pro miR-499a-5p podle příkladu 1
Obr. 9: Výsledky analýzy pro kombinaci mikroRNA markérů podle příkladu 2
Obr. 10: Výsledky analýzy pro miR-l-3p podle příkladu 2
Obr. 11: Výsledky analýzy pro miR-17-5p podle příkladu 2
Obr. 12: Výsledky analýzy pro miR-20b-5p podle příkladu 2
Obr. 13: Výsledky analýzy pro miR-29a-3p podle příkladu 2
Obr. 14: Výsledky analýzy pro miR-126-3p podle příkladu 2
Obr. 15: Výsledky analýzy pro kombinaci mikroRNA markérů podle příkladu 3
Obr. 16: Výsledky analýzy pro miR-17-5p podle příkladu 3
- 15 CZ 308178 B6
Obr. 17: Výsledky analýzy pro miR-29a-3p podle příkladu 3
Obr. 18: Výsledky analýzy pro miR-133a-3p podle příkladu 3
Obr. 19: Výsledky analýzy pro kombinaci mikroRNA markérů podle příkladu 4
Obr. 20: Výsledky analýzy pro miR-17-5p podle příkladu 4
Obr. 21: Výsledky analýzy pro miR-20b-5p podle příkladu 4
Obr. 22: Výsledky analýzy pro miR-29a-3p podle příkladu 4
Obr. 23: Výsledky analýzy pro miR-126-3p podle příkladu 4
Obr. 24: Výsledky analýzy pro miR-130b-3p podle příkladu 4
Obr. 25: Výsledky analýzy pro miR-133a-3p podle příkladu 4
Obr. 26: Výsledky analýzy pro kombinaci mikroRNA markérů podle příkladu 5
Obr. 27: Výsledky analýzy pro miR-l-3p podle příkladu 5
Obr. 28: Výsledky analýzy pro miR-17-5p podle příkladu 5
Obr. 29: Výsledky analýzy pro miR-133a-3p podle příkladu 5
Obr. 30: Výsledky analýzy pro miR-29a-3p podle příkladu 6
Obr. 31: Výsledky analýzy pro kombinaci mikroRNA markérů podle příkladu 6
Obr. 32: Výsledky analýzy pro miR-17-5p podle příkladu 6
Obr. 33: Výsledky analýzy pro miR-20b-5p podle příkladu 6
Obr. 34: Výsledky analýzy pro miR-125b-5p podle příkladu 7 (patologický PI v uterinní artérii)
Obr. 35: Výsledky analýzy pro kombinaci mikroRNA markérů podle příkladu 7
Obr. 36: Výsledky analýzy pro miR-133a-3p podle příkladu 7 (patologický PI v uterinní artérii)
Obr. 37: Výsledky analýzy pro miR-145-5p podle příkladu 7
Obr. 38: Výsledky analýzy pro miR-125b-5p podle příkladu 7 (přítomnost unilaterálního a/nebo bilaterálního diastolického notche)
Obr. 39: Výsledky analýzy pro kombinaci mikroRNA markérů podle příkladu 7
Obr. 40: Výsledky analýzy pro miR-133a-3p podle příkladu 7 (přítomnost unilaterálního a/nebo bilaterálního diastolického notche)
Obr. 41: Výsledky analýzy pro miR-125b-5p podle příkladu 8
Obr. 42: Výsledky analýzy pro miR-100-5p podle příkladu 9
- 16 CZ 308178 B6
Příklady uskutečnění vynálezu
Příklad 1
Postpartální kombinovaný skrínink miR-20a-5p, miR-143-3p, miR-146a-5p, miR-181a-5p, miR199a-5p, miR-221-3p amiR-499a-5p identifikuje skupinu žen s anamnézou gestační hypertenze, které mají zvýšené kardiovaskulární riziko
Postpartální skrínink založený na kombinaci 7 ze 7 unikátních mikroRNA s aberantním expresním profilem pouze u žen s anamnézou gestační hypertenze (miR-20a-5p, miR-143-3p, miR-146a-5p, miR-181a-5p, miR-199a-5p, miR-221-3p a miR-499a-5p) ukázal vyšší přesnost (AUC 0,680, p<0,001, 68,75% senzitivita, 62,92% specificita, cut off hodnota >0,320869) než jednotlivé unikátní mikroRNA biomarkery upregulované pouze u žen s předchozím výskytem gestační hypertenze. Postpartální skrínink založený na kombinaci miR-20a-5p, miR-143-3p, miR-146a-5p, miR-181a-5p, miR-199a-5p, miR-221-3p a miR-499a-5p identifikoval při 10,0% falešné pozitivitě 29,17 % žen s anamnézou gestační hypertenze se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem.
Tabulka 1: Výsledky analýzy kombinace mikroRNA markérů podle příkladu 1 miR-20a-5p + miR-143-3p + miR-146a-5p + miR-181a-5p + miR-199a-5p + miR-221-3p + miR-499a-5p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,680 Kritérium >0,320869004
Směrodatná odchylka 0,0479 Senzitivita 68,75
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,594 do 0,757 95% Cl 53,7-81,3
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0002 Specificita 62,92
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 52,0 - 72,9
Specificita 90,00 +LR 1,85
Senzitivita 29,17 95% Cl 1,3-2,6
95% Interval spolehlivosti (Cl) 8,33 do 47,92 -LR 0,50
Kritérium >0,46495467 95% Cl 0,3 - 0,8
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 2: Výsledky analýzy miR-20a-5p podle příkladu 1
miR-20a-5p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,631 Kritérium >1,179384708
Směrodatná odchylka 0,0482 Senzitivita 58,00
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,536 do 0,726 95% Cl 43,2-71,8
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0066 Specificita 68,54
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 57,8- 78,0
- 17 CZ 308178 B6
Specificita 90,00 +LR 1,84
Senzitivita 8,00 95% Cl 1,3-2,7
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,00 do 20,00 -LR 0,61
Kritérium >2,561238402 95% Cl 0,4 - 0,9
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 3: Výsledky analýzy miR-143-3p podle příkladu 1
miR-143-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,616 Kritérium >0,010303369
Směrodatná odchylka 0,0486 Senzitivita 72,00
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,530 do 0,698 95% Cl 57,5 - 83,8
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0166 Specificita 53,93
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 43,0 - 64,6
Specificita 90,00 +LR 1,56
Senzitivita 8,00 95% Cl 1,2-2,1
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,00 do 20,00 -LR 0,52
Kritérium >0,056054907 95% Cl 0,3 - 0,8
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 4: Výsledky analýzy miR-146a-5p podle příkladu 1
miR-146a-5p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,664 Kritérium >0,735309647
Směrodatná odchylka 0,0456 Senzitivita 74,00
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,574 do 0,753 95% Cl 59,7- 85.4
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0003 Specificita 56,18
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 45,3 - 66,7
Specificita 90,00 +LR 1,69
Senzitivita 12,00 95% Cl 1,3-2,2
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,00 do 28,00 -LR 0,46
Kritérium >1,978839214 95% Cl 0,3 - 0,8
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 5: Výsledky analýzy miR-181a-5p podle příkladu 1
miR-181a-5p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,625 Kritérium >0,179703784
Směrodatná odchylka 0,0501 Senzitivita 60,00
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,527 do 0,723 95% Cl 45,2-73,6
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0128 Specificita 65,17
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 54,3 - 75,0
Specificita 90,00 +LR 1,72
Senzitivita 18,00 95% Cl 1,2-2,5
- 18 CZ 308178 B6
95% Interval spolehlivosti (Cl) 2,00,do 34,00 -LR 0,61
Kritérium >0,339021625 95% Cl 0,4 - 0,9
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 6: Výsledky analýzy miR-199a-5p podle příkladu 1
miR-199a-5p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,618 Kritérium >0,036037609
Směrodatná odchylka 0,0499 Senzitivita 54,00
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,532 do 0,699 95% Cl 39,3 - 68,2
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0178 Specificita 69,66
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 59,0-79,0
Specificita 90,00 +LR 1,78
Senzitivita 12,00 95% Cl 1,2-2,7
95% Interval spolehlivosti (Cl) 2,00 do 30,00 -LR 0,66
Kritérium >0,131315001 95% Cl 0,5 - 0,9
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 7: Výsledky analýzy miR-221-3p podle příkladu 1
miR-221-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,643 Kritérium >0,380438702
Směrodatná odchylka 0,0484 Senzitivita 62,00
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,548 do 0,738 95% Cl 47,2 - 75,3
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0031 Specificita 64,04
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 53,2- 73,9
Specificita 90,00 +LR 1,72
Senzitivita 14,00 95% Cl 1,2-2,5
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,00 do 34,00 -LR 0,59
Kritérium >0,806023549 95% Cl 0,4 - 0,9
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 8: Výsledky analýzy miR-499a-5p podle příkladu 1
miR-499a-5p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,675 Kritérium >0,04898703
Směrodatná odchylka 0,0455 Senzitivita 88,00
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,585 do 0,764 95% Cl 75,7- 95,5
Úroveň významnosti P 0,0001 Specificita 44,94
(Plocha=0,5)
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 34,4- 55,9
Specificita 90,00 +LR 1,60
Senzitivita 8,00 95% Cl 1,3-2,0
95% Interval spolehlivosti (Cl) 2,00 do 28,00 -LR 0,27
Kritérium >0,459413327 95% Cl 0,1-0,6
- 19 CZ 308178 B6
CI = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Příklad 2
Postpartální kombinovaný skrínink miR-l-3p, miR-17-5p, miR-20b-5p, miR-29a-3p a miR-1263p identifikuje skupinu žen s anamnézou gestační hypertenze, které mají zvýšené kardiovaskulární riziko
Postpartální kombinovaný skrínink všech 5 mikroRNA biomarkerů upregulovaných u žen s anamnézou gestační hypertenze a/nebo preeklampsie (miR-l-3p, miR-17-5p, miR-20b-5p, miR29a-3p a miR-126-3p) byl přesnější v identifikaci žen s předchozím výskytem gestační hypertenze ve zvýšeném kardiovaskulárním riziku (AUC 0,711, p<0,001, 58,33% senzitivita, 82,02% specificita, cut off hodnota >0,365924) než jednotlivé mikroRNA biomarkery upregulované u žen s předchozím výskytem gestační hypertenze a/nebo preeklampsie. Postpartální skrínink založený na kombinaci miR-l-3p, miR-17-5p, miR-20b-5p, miR-29a-3p a miR-126-3p identifikoval při 10,0% falešné pozitivitě 33,33 % žen s anamnézou gestační hypertenze se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem.
Tabulka 9: Výsledky analýzy kombinace mikroRNA markérů podle příkladu 2
miR-l-3p + miR-17-5 p + miR-20b-5p + miř .-29a-3p + mi R-126-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,711 Kritérium >0,365924101
Směrodatná odchylka 0,0479 Senzitivita 58,33
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,627 do 0,785 95% Cl 43,2 - 72,4
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) <0,0001 Specificita 82,02
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 72,5 - 89,4
Specificita 90,00 +LR 3,24
Senzitivita 33,33 95% Cl 2,0-5,4
95% Interval spolehlivosti (Cl) 16,67 do 62,50 -LR 0,51
Kritérium >0,457174369 95% Cl 0,4 - 0,7
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 10: Výsledky analýzy miR-l-3p podle příkladu 2
miR-l-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,634 Kritérium >0,033643566
Směrodatná odchylka 0,0474 Senzitivita 86,00
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,542 do 0,727 95% Cl 73,3 - 94,2
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0046 Specificita 47,19
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 36,5 - 58,1
Specificita 90,00 +LR 1,63
Senzitivita 16,00 95% Cl 1,3-2,0
95% Interval spolehlivosti (Cl) 8,00 do 28,00 -LR 0,30
Kritérium >0,243781644 95% Cl 0,1-0,6
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
-20 CZ 308178 B6
Tabulka 11: Výsledky analýzy miR-17-5p podle příkladu 2
miR-17-5p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,658 Kritérium >1,035235049
Směrodatná odchylka 0,0477 Senzitivita 72,00
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,564 do 0,751 95% Cl 57,5 - 83,8
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0009 Specifícita 60,67
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 49,7 - 70,9
Specifícita 90,00 +LR 1,83
Senzitivita 20,00 95% Cl 1,3-2,5
95% Interval spolehlivosti (Cl) 6,00 do 43,39 -LR 0,46
Kritérium >1,978599453 95% Cl 0,3 - 0,7
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 12: Výsledky analýzy miR-20b-5p podle příkladu 2
miR-20b-5p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,660 Kritérium >0,834919939
Směrodatná odchylka 0,0465 Senzitivita 78,00
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,569 do 0,751 95% Cl 64,0- 88,5
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0006 Specifícita 52,81
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 41,9-63,5
Specifícita 90,00 +LR 1,65
Senzitivita 14,00 95% Cl 1,3-2,2
95% Interval spolehlivosti (Cl) 4,00 do 28,00 -LR 0,42
Kritérium >1,994145976 95% Cl 0,2 - 0,7
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 13: Výsledky analýzy miR-29a-3p podle příkladu 2
miR-29a-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,678 Kritérium >0,198819326
Směrodatná odchylka 0,0476 Senzitivita 64,00
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,585 do 0,772 95% Cl 49,2-77,1
Úroveň významnosti P 0,0002 Specifícita 67,42
(Plocha=0,5)
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 56,7-77,0
Specifícita 90,00 +LR 1,96
Senzitivita 20,00 95% Cl 1,4-2,8
95% Interval spolehlivosti (Cl) 4,00 do 38,00 -LR 0,53
Kritérium >0,455281368 95% Cl 0,4 - 0,8
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
-21 CZ 308178 B6
Tabulka 14: Výsledky analýzy miR-126-3p podle příkladu 2
miR-126-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,631 Kritérium >0,158267099
Směrodatná odchylka 0,0486 Senzitivita 74,00
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,536 do 0,727 95% Cl 59,7- 85,4
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0070 Specificita 53,93
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 43,0 - 64,6
Specificita 90,00 +LR 1,61
Senzitivita 12,00 95% Cl 1,2-2,1
95% Interval spolehlivosti (Cl) 2,00 do 36,00 -LR 0,48
Kritérium >0,433567853 95% Cl 0,3 - 0,8
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Příklad 3
Postpartální kombinovaný skrínink miR-17-5p, miR-29a-3p a miR-133a-3p identifikuje skupinu žen s anamnézou preeklampsie bez ohledu na závažnost onemocnění a gestační stáří ukončení těhotenství, které mají zvýšené kardiovaskulární riziko
Postpartální skrínink založený na kombinaci miR-17-5p, miR-29a-3p a miR-133a-3p (AUC 0,622, p=0,003, 73,27% senzitivita, 51,69% specificita, cut off hodnota >0,487687) byl mnohem přesnější v identifikaci žen s předchozím výskytem preeklampsie bez ohledu na závažnost onemocnění a gestační stáří ukončení těhotenství ve zvýšeném kardiovaskulárním riziku než skrínink individuálních mikroRNA biomarkerů upregulovaných u žen s předchozím výskytem preeklampsie bez ohledu na závažnost onemocnění a gestační stáří ukončení těhotenství (miR-175p, miR-29a-3p a miR-133a-3p). Postpartální skrínink založený na kombinaci miR-17-5p, miR29a-3p a miR-133a-3p identifikoval při 10,0% falešné pozitivitě 18,81 % žen s anamnézou preeklampsie bez ohledu na závažnost onemocnění a gestační stáří ukončení těhotenství se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem.
Tabulka 15: Výsledky analýzy kombinace mikroRNA markérů podle příkladu 3
miR-17-5p + miR-29a-3p + miR-133a-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,622 Kritérium >0,487687218
Směrodatná odchylka 0,0409 Senzitivita 73,27
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,549 do 0,691 95% Cl 63,5-81,6
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0029 Specificita 51,69
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 40,8 - 62,4
Specificita 90,00 +LR 1,52
Senzitivita 18,81 95% Cl 1,2-1,9
95% Interval spolehlivosti (Cl) 8,92 do 31,68 -LR 0,52
Kritérium >0,61338786 95% Cl 0,4 - 0,8
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
-22 CZ 308178 B6
Tabulka 16: Výsledky analýzy miR-17-5p podle příkladu 3
miR-17-5p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,608 Kritérium >1,204723794
Směrodatná odchylka 0,0411 Senzitivita 51,49
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,534 do 0,678 95% Cl 41,3-61,6
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0087 Specifícita 70,79
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 60,2 - 79,9
Specifícita 90,00 +LR 1,76
Senzitivita 19,80 95% Cl 1,2-2,6
95% Interval spolehlivosti (Cl) 5,94 do 38,61 -LR 0,69
Kritérium >1,992039988 95% Cl 0,5 - 0,9
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 17: Výsledky analýzy miR-29a-3p podle příkladu 3
miR-29a-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,609 Kritérium >0,198819326
Směrodatná odchylka 0,0415 Senzitivita 55,45
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,536 do 0,679 95% Cl 45,2-65,3
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0086 Specifícita 67,42
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 56,7-77,0
Specifícita 90,00 +LR 1,70
Senzitivita 15,84 95% Cl 1,2-2,4
95% Interval spolehlivosti (Cl) 1,98 do 27,72 -LR 0,66
Kritérium >0,450783191 95% Cl 0,5 - 0,9
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 18: Výsledky analýzy miR-133a-3p podle příkladu 3
miR-133a-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,598 Kritérium >0,05225494
Směrodatná odchylka 0,0416 Senzitivita 74,26
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,516 do 0,679 95% Cl 64,6 - 82,4
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0189 Specifícita 46,59
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 35,9- 57,5
Specifícita 90,00 +LR 1,39
Senzitivita 13,86 95% Cl 1,1-1,7
95% Interval spolehlivosti (Cl) 4,95 do 25,74 -LR 0,55
Kritérium >0,340061101 95% Cl 0,4 - 0,8
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
-23 CZ 308178 B6
Příklad 4
Postpartální kombinovaný skrínink miR-17-5p, miR-20b-5p, miR-29a-3p, miR-126-3p a miR133a-3p identifikuje skupinu žen s anamnézou závažné preeklampsie, které mají zvýšené kardiovaskulární riziko
V případě závažné preeklampsie byl postpartální skrínink založený na kombinaci 5 ze 6 mikroRNA biomarkerů (miR-17-5p, miR-20b-5p, miR-29a-3p, miR-126-3p, a miR-133a-3p) mnohem přesnější (AUC 0,644, p<0,001, 83,12% senzitivita, 47,19% specificita, cut off hodnota >0,400368) v identifikaci žen se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem než skrínink individuálních mikroRNA (miR-17-5p, miR-20b-5p, miR-29a-3p, miR-126-3p, miR-130b-3p a miR-133a-3p). Postpartální skrínink založený na kombinaci miR-17-5p, miR-20b-5p, miR-29a3p, miR-126-3p, a miR-133a-3p identifikoval při 10,0% falešné pozitivitě 23,38 % žen s anamnézou závažné preeklampsie se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem.
Tabulka 19: Výsledky analýzy kombinace mikroRNA markérů podle příkladu 4 miR-17-5p + miR-20b-5p + miR-29a-3p + miR-126-3p + miR-133a-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,644 Kritérium >0,400368067
Směrodatná odchylka 0,0427 Senzitivita 83,12
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,566 do 0,716 95% Cl 72,9 - 90,7
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0008 Specificita 47,19
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 36,5 - 58,1
Specificita 90,00 +UR 1,57
Senzitivita 23,38 95% Cl 1,3-2,0
95% Interval spolehlivosti (Cl) 7,79 do 36,36 -UR 0,36
Kritérium >0,582968525 95% Cl 0,2 - 0,6
Cl = Interval spolehlivosti UR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 20: Výsledky analýzy miR-17-5p podle příkladu 4
miR-17-5p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,633 Kritérium >1,204723794
Směrodatná odchylka 0,0434 Senzitivita 55,84
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,548 do 0,718 95% Cl 44,1-67,2
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0021 Specificita 70,79
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 60,2 - 79,9
Specificita 90,00 +UR 1,91
Senzitivita 19,48 95% Cl 1,3-2,8
95% Interval spolehlivosti (Cl) 6,49 do 37,66 -UR 0,62
Kritérium >1,992039988 95% Cl 0,5 - 0,8
Cl = Interval spolehlivosti
UR = Poměr pravděpodobnosti
-24 CZ 308178 B6
Tabulka 21: Výsledky analýzy miR-20b-5p podle příkladu 4
miR-20b-5p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,591 Kritérium >1,121453636
Směrodatná odchylka 0,0444 Senzitivita 51,95
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,513 do 0,667 95% Cl 40,3 - 63,5
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0394 Specificita 66,29
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 55,5 - 76,0
Specificita 90,00 +LR 1,54
Senzitivita 18,18 95% Cl úl-2,2
95% Interval spolehlivosti (Cl) 9,09 do 30,43 -LR 0,72
Kritérium >1,929497269 95% Cl 0,6- 1,0
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 22: Výsledky analýzy miR-29a-3p podle příkladu 4
miR-29a-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,622 Kritérium >0,17308401
Směrodatná odchylka 0,0436 Senzitivita 64,94
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,536 do 0,707 95% Cl 53,2- 75,5
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0052 Specificita 58,43
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 47,5 - 68,8
Specificita 90,00 +LR 1,56
Senzitivita 18,18 95% Cl 1,2-2,1
95% Interval spolehlivosti (Cl) 1,30 do 32,47 -LR 0,60
Kritérium >0,450783191 95% Cl 0,4 - 0,9
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 23: Výsledky analýzy miR-126-3p podle příkladu 4
miR-126-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,594 Kritérium >0,198861002
Směrodatná odchylka 0,0446 Senzitivita 50,65
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,515 do 0,669 95% Cl 39,0 - 62,2
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0353 Specificita 68,54
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 57,8- 78,0
Specificita 90,00 +LR 1,61
Senzitivita 11,69 95% Cl 1,1-2,3
95% Interval spolehlivosti (Cl) 2,60 do 37,66 -LR 0,72
Kritérium >0,433567853 95% Cl 0,6 - 0,9
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
-25 CZ 308178 B6
Tabulka 24: Výsledky analýzy miR-130b-3p podle příkladu 4
miR-130b-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,606 Kritérium >0,444432357
Směrodatná odchylka 0,0440 Senzitivita 50,65
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,520 do 0,692 95% Cl 39,0 - 62,2
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0161 Specificita 68,54
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 57,8- 78,0
Specificita 90,00 +UR 1,61
Senzitivita 10,39 95% Cl úl-2,3
95% Interval spolehlivosti (Cl) 2,60 do 22,08 -UR 0,72
Kritérium >1,213765997 95% Cl 0,6 - 0,9
Cl = Interval spolehlivosti UR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 25: Výsledky analýzy miR-133a-3p podle příkladu 4
miR-133a-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,613 Kritérium >0,05225494
Směrodatná odchylka 0,0437 Senzitivita 76,62
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,527 do 0,699 95% Cl 65,6- 85,5
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0097 Specificita 46,07
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 35,4- 57,0
Specificita 90,00 +UR 1,42
Senzitivita 14,29 95% Cl úl-1,8
95% Interval spolehlivosti (Cl) 5,19 do 25,97 -UR 0,51
Kritérium >0,339879061 95% Cl 0,3 - 0,8
Cl = Interval spolehlivosti UR = Poměr pravděpodobnosti
Příklad 5
Postpartální kombinovaný skrínink miR-l-3p, miR-17-5p, a miR-133a-3p identifikuje skupinu žen s anamnézou časné preeklampsie, které mají zvýšené kardiovaskulární riziko
V případě časné preeklampsie byl postpartální skrínink založený na kombinaci 3 ze 3 mikroRNA biomarkerů (miR-l-3p, miR-17-5p, a miR-133a-3p) mnohem přesnější (AUC 0,674, p<0,001, 75,0% senzitivita, 58,43% specificita, cut off hodnota >0,256824) v identifikaci žen se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem než skrínink individuálních mikroRNA (miR-l-3p, miR-17-5p, a miR-133a-3p). Postpartální skrínink založený na kombinaci miR-l-3p, miR-17-5p, a miR-133a3p identifikoval při 10,0% falešné pozitivitě 16,67 % žen s anamnézou časné preeklampsie se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem.
-26 CZ 308178 B6
Tabulka 26: Výsledky analýzy kombinace mikroRNA markérů podle příkladu 5
miR-l-3p + miR-17-5p + miR-133a-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,674 Kritérium >0,256824331
Směrodatná odchylka 0,0514 Senzitivita 75,00
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,584 do 0,755 95% Cl 57,8- 87,9
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0007 Specifícita 58,43
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 47,5 - 68,8
Specifícita 90,00 +LR 1,80
Senzitivita 16,67 95% Cl 1,3-2,5
95% Interval spolehlivosti (Cl) 5,56 do 33,33 -LR 0,43
Kritérium >0,367096147 95% Cl 0,2 - 0,8
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 27: Výsledky analýzy miR-1 -3p podle příkladu 5
miR-l-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,626 Kritérium >0,062859432
Směrodatná odchylka 0,0532 Senzitivita 61,11
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,535 do 0,711 95% Cl 43,5 - 76,9
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0175 Specifícita 65,17
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 54,3 - 75,0
Specifícita 90,00 +LR 1,75
Senzitivita 11,11 95% Cl 1,2-2,6
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,00 do 36,89 -LR 0,60
Kritérium >0,243781644 95% Cl 0,4 - 0,9
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 28: Výsledky analýzy miR-17-5p podle příkladu 5
miR-17-5p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,611 Kritérium >1,204723794
Směrodatná odchylka 0,0550 Senzitivita 50,00
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,520 do 0,697 95% Cl 32,9-67,1
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0429 Specifícita 70,79
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 60,2 - 79,9
Specifícita 90,00 +LR 1,71
Senzitivita 16,67 95% Cl 1,1-2,7
95% Interval spolehlivosti (Cl) 2,78 do 41,67 -LR 0,71
Kritérium >1,992039988 95% Cl 0,5 - 1,0
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
-27 CZ 308178 B6
Tabulka 29: Výsledky analýzy miR-133a-3p podle příkladu 5
miR-133a-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,670 Kritérium >0,066941093
Směrodatná odchylka 0,0499 Senzitivita 80,56
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,572 do 0,768 95% Cl 64,0-91,8
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0006 Specificita 51,69
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 40,8 - 62,4
Specificita 90,00 +UR 1,67
Senzitivita 16,67 95% Cl 1,3-2,2
95% Interval spolehlivosti (Cl) 2,78 do 38,89 -UR 0,38
Kritérium >0,332141809 95% Cl 0,2 - 0,8
Cl = Interval spolehlivosti UR = Poměr pravděpodobnosti
Příklad 6
Postpartální skrínink miR-29a-3p identifikuje skupinu žen s anamnézou pozdní preeklampsie se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem
U žen s anamnézou pozdní formy preeklampsie, která byla diagnostikována po 34, gestačním týdnu, měl postpartální kombinovaný skrínink založený na různých kombinacích mikroRNA biomarkerů (miR-17-5p, miR-20b-5p a miR-29a-3p) menší přesnost v identifikaci žen se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem (AUC 0,607, p=0,023, 56,92% senzitivita, 67,42% specificita, cut off hodnota >0,415645) než postpartální skrínink s využitím jediného mikroRNA biomarkerů (miR-29a-3p, AUC 0,618, p=0,010, 13,85% senzitivita při 10,0% FP). Postpartální kombinovaný skrínink založený na kombinaci miR-17-5p, miR-20b-5p, a miR-29a-5p, který vykazoval v různých kombinacích mikroRNA biomarkerů nejvyšší přesnost, identifikoval identifikoval při 10,0% falešné pozitivitě 23,08 % žen s anamnézou pozdní preeklampsie se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem.
Tabulka 30: Výsledky analýzy miR-29a-3p podle příkladu 6
miR-29a-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,618 Kritérium >0,198819326
Směrodatná odchylka 0,0461 Senzitivita 63,08
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,528 do 0,708 95% Cl 50,2 - 74,7
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0106 Specificita 67,42
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 56,7-77,0
Specificita 90,00 +UR 1,94
Senzitivita 13,85 95% Cl 1,4-2,8
95% Interval spolehlivosti (Cl) 1,54 do 29,23 -UR 0,55
Kritérium >0,450783191 95% Cl 0,4 - 0,8
Cl = Interval spolehlivosti UR = Poměr pravděpodobnosti
-28 CZ 308178 B6
Tabulka 31: Výsledky analýzy kombinace mikroRNA markérů podle příkladu 6
miR-17-5p + miR-20b-3p + miR-29a-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,607 Kritérium >0,415645121
Směrodatná odchylka 0,0473 Senzitivita 56,92
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,526 do 0,685 95% Cl 44,0 - 69,2
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0231 Specificita 67,42
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 56,7-77,0
Specificita 90,00 +LR 1,75
Senzitivita 23,08 95% Cl 1,2-2,5
95% Interval spolehlivosti (Cl) 10,77 do 40,39 -LR 0,64
Kritérium >0,485854122 95% Cl 0,5 - 0,9
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 32: Výsledky analýzy miR-17-5p podle příkladu 6
miR-17-5p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,606 Kritérium >1,204723794
Směrodatná odchylka 0,0468 Senzitivita 52,31
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,514 do 0,697 95% Cl 39,5 - 64,9
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0239 Specificita 70,79
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 60,2 - 79,9
Specificita 90,00 +LR 1,79
Senzitivita 21,54 95% Cl 1,2-2,7
95% Interval spolehlivosti (Cl) 9,23 do 40,00 -LR 0,67
Kritérium >1,978599453 95% Cl 0,5 - 0,9
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 33: Výsledky analýzy miR-20b-5p podle příkladu 6
miR-20b-5p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,594 Kritérium >1,101269704
Směrodatná odchylka 0,0471 Senzitivita 56,92
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,512 do 0,673 95% Cl 44,0 - 69,2
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0449 Specificita 65,17
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 54,3 - 75,0
Specificita 90,00 +LR 1,63
Senzitivita 18,46 95% Cl 1,1-2,3
95% Interval spolehlivosti (Cl) 7,69 do 30,77 -LR 0,66
Kritérium >1,929497269 95% Cl 0,5 - 0,9
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
-29 CZ 308178 B6
Příklad 7
Postpartální skrínink miR-125b-5p identifikuje skupinu žen s anamnézou preeklampsie a/nebo FGR s patologickými průtoky v uterinní artérii v předchozím těhotenství, které mají zvýšené kardiovaskulární riziko
Postpartální kombinovaný skrínink založený na různých kombinacích 3 mikroRNA biomarkerů (miR-125b-5p, miR-133a-3p a miR-145-5p) upregulovaných ve skupině žen s předchozím výskytem preeklampsie a/nebo FGR s patologickým průtokem v uterinní artérii byl méně přesnější (AUC 0,644, p=0,016, 95,24% senzitivita, 32,58% specificita, cut off hodnota > 0,154988) než postpartální skrínink jediného mikroRNA biomarkerů (miR-125b-5p, AUC 0,663, p=0,004, 19,05% senzitivita při 10,0% FP). Postpartální kombinovaný skrínink založený na kombinaci miR-133a-3p a miR-145-5p, který vykazoval v různých kombinacích mikroRNA biomarkerů nejvyšší přesnost, identifikoval při 10,0% falešné pozitivitě 14,29 % žen se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem ve skupině pacientek s anamnézou preeklampsie a/nebo FGR se zvýšeným indexem pulsatility v uterinní artérii v předchozím těhotenství.
Navíc u žen s výskytem preeklampsie a/nebo FGR, u kterých byla v předchozím těhotenství zjištěna přítomnost unilaterálního a/nebo bilaterálního diastolického notche v uterinní artérii, vykazoval postpartální skrínink jediného mikroRNA biomarkerů (miR-125b-5p) nejvyšší přesnost v identifikaci žen se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem (AUC 0,657, p=0,012, 20,0% senzitivita při 10,0% FP). Postpartální kombinovaný skrínink založený na kombinaci miR-125b5p a miR-133a-3p identifikoval v této skupině žen při 10,0% falešné pozitivitě 15,0 % žen se zvýšeným kardiovaskulárním rizikem, a vykázal nižší přesnost (AUC 0,625, p=0,053, 80,0% senzitivita, 51,69% specificita, cut off hodnota >0,164734).
Tabulka 34: Výsledky analýzy miR-125b-5p podle příkladu 7 (patologické průtoky v uterinní artérii)
miR-125b-5p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,663 Kritérium >0,001948849
Směrodatná odchylka 0,0562 Senzitivita 90,48
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,587 do 0,750 95% Cl 69,6-98,8
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0038 Specificita 48,31
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 37,6- 59,2
Specificita 90,00 +LR 1,75
Senzitivita 19,05 95% Cl 1,4-2,2
95% Interval spolehlivosti (Cl) 4,76 do 42,86 -LR 0,20
Kritérium >0,006963705 95% Cl 0,05 - 0,7
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 35: Výsledky analýzy kombinace mikroRNA markérů podle příkladu 7 miR-133a-3p + miR-145-5p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,644 Kritérium >0,154987741
Směrodatná odchylka 0,0599 Senzitivita 95,24
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,547 do 0,733 95% Cl 76,2 - 99,9
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0165 Specificita 32,58
-30 CZ 308178 B6
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 23,0-43,3
Specifícita 90,00 +LR 1,41
Senzitivita 14,29 95% Cl 1,2-1,7
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,00 do 38,10 -LR 0,15
Kritérium >0,241913577 95% Cl 0,02- 1,0
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 36: Výsledky analýzy miR-133a-3p podle příkladu 7 (patologické průtoky v uterinní artérii)
miR-133a-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,642 Kritérium >0,033249351
Směrodatná odchylka 0,0598 Senzitivita 95,24
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,544 do 0,731 95% Cl 76,2 - 99,9
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0180 Specifícita 34,83
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 25,0-45,7
Specifícita 90,00 +LR 1,46
Senzitivita 14,29 95% Cl 1,2-1,7
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,00 do 38,10 -LR 0,14
Kritérium >0,339879061 95% Cl 0,02 - 0,9
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 37: Výsledky analýzy miR-145-5p podle příkladu 7
miR-145-5p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,644 Kritérium >0,042696901
Směrodatná odchylka 0,0598 Senzitivita 100,00
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,547 do 0,733 95% Cl 83,9- 100,00
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0159 Specifícita 28,09
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 19,1-38,6
Specifícita 90,00 +LR 1,39
Senzitivita 9,52 95% Cl 1,2-1,6
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,00 do 28,57 -LR 0,00
Kritérium >0,191900734 95% Cl
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 38: Výsledky analýzy miR-125b-5p podle příkladu 7 (přítomnost unilaterálního a/nebo ίο bilaterálního diastolického notche)
miR-125b-5p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,657 Kritérium >0,001948849
Směrodatná odchylka 0,0628 Senzitivita 90,00
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,560 do 0,746 95% Cl 68,3 - 98,8
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0122 Specifícita 48,31
-31 CZ 308178 B6
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 37,6- 59,2
Specificita 90,00 +LR 1,74
Senzitivita 20,00 95% Cl 1,4-2,2
95% Interval spolehlivosti (Cl) 5,00 do 50,00 -LR 0,21
Kritérium >0,006963705 95% Cl 0,05 - 0,8
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 39: Výsledky analýzy kombinace mikroRNA markérů podle příkladu 7
mi i-125b-5p + miR-133a-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,625 Kritérium >0,16473431
Směrodatná odchylka 0,0644 Senzitivita 80,00
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,527 do 0,716 95% Cl 56,3 - 94,3
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0528 Specificita 51,69
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 40,8 - 62,4
Specificita 90,00 +LR 1,66
Senzitivita 15,00 95% Cl 1,2-2,3
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,00 do 40,00 -LR 0,39
Kritérium >0,237543599 95% Cl 0,2- 1,0
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Tabulka 40: Výsledky analýzy miR-133a-3p podle příkladu 7 (přítomnost unilaterálního a/nebo bilaterálního diastolického notche)
miR-133a-3p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,630 Kritérium >0,073099777
Směrodatná odchylka 0,0636 Senzitivita 80,00
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,533 do 0,721 95% Cl 56,3 - 94,3
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0404 Specificita 53,93
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 43,0 - 64,6
Specificita 90,00 +LR 1,74
Senzitivita 15,00 95% Cl 1,3-2,4
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,00 do 35,00 -LR 0,37
Kritérium >0,339879061 95% Cl 0,2 - 0,9
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Příklad 8
Postpartální skrínink miR-125b-5p identifikuje skupinu žen s anamnézou preeklampsie a/nebo FGR s patologickými průtoky v arteria cerebri media v předchozím těhotenství, které mají zvýšené kardiovaskulární riziko
Zeny s anamnézou preeklampsie a/nebo FGR s patologickými hodnotami průtoků v arteria cerebri media mají postpartálně zvýšenou genovou expresi miR-125b-5p (AUC 0,643, p=0,029, 14,29% senzitivita při 10,0% FP), která by nebyla detekována, pokud by byla statistická analýza provedena pouze pomocí Kruskal-Wallisova testu (p=0,308).
-32 CZ 308178 B6
Tabulka 41: Výsledky analýzy miR-125b-5p podle příkladu 8
miR-125b-5p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,643 Kritérium >0,001801973
Směrodatná odchylka 0,0652 Senzitivita 92,86
95% Interval spolehlivosti (CI) 0,542 do 0,735 95% Cl 66,1 -99,8
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0285 Specificita 44,94
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 34,4- 55,9
Specificita 90,00 +LR 1,69
Senzitivita 14,29 95% Cl 1,3-2,1
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,00 do 42,86 -LR 0,16
Kritérium >0,006963705 95% Cl 0,02- 1,1
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Příklad 9
Postpartální skrínink miR-100-5p identifikuje skupinu žen s anamnézou preeklampsie a/nebo FGR s patologickými hodnotami cerebroplacentámího poměru v předchozím těhotenství, které mají zvýšené kardiovaskulární riziko
Při 10,0% falešné pozitivitě byla zvýšená exprese miR-100-5p (AUC 0,613, p=0,029) rovněž nalezena u 10,81 % žen s patologickými hodnotami cerebroplacentámího poměru s předchozím výskytem preeklampsie a/nebo FGR v průběhu těhotenství. Tato skutečnost by nebyla detekována, pokud by byla statistická analýza provedena pouze pomocí Kruskal-Wallisova testu (p=0,139).
Tabulka 42: Výsledky analýzy miR-100-5p podle příkladu 9
miR-100-5p
Plocha pod ROC křivkou (AUC) 0,613 Kritérium >0,000656385
Směrodatná odchylka 0,0516 Senzitivita 86,49
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,522 do 0,698 95% Cl 71,2-95,5
Úroveň významnosti P (Plocha=0,5) 0,0289 Specificita 38,20
Stanovená senzitivita při určené specificitě 95% Cl 28,1 -49,1
Specificita 90,00 +LR 1,40
Senzitivita 10,81 95% Cl úl-1,7
95% Interval spolehlivosti (Cl) 0,00 do 45,72 -LR 0,35
Kritérium >0,003245268 95% Cl 0,2 - 0,8
Cl = Interval spolehlivosti LR = Poměr pravděpodobnosti
Reference
1. WHO. (1988) Geographic variation in the incidence of hypertension in pregnancy. World Health Organization International Collaborative Study of Hypertensive Disorders of Pregnancy. Am J Obstet Gynecol. 158(1): 80-83.
2. Bamfo JE, Odibo AO. (2011) Diagnosis and management of fetal growth restriction. J Pregnancy. 640715.
-33 CZ 308178 B6
3. ACOG practice bulletin. (2002) Diagnosis and management of preeclampsia and eclampsia. Obstet Gynecol. 99(1): 159-167.
4. ACOG Practice bulletin no. 134: fetal growth restriction. (2013) American College of Obstetricians and Gynecologists. Obstet Gynecol. 121(5): 1122-33.
5. Brosens I, Pijnenborg R, Vercruysse L, Romero R. (2011) The Great Obstetrical Syndromes are associated with disorders of deep placentation. Am J Obstet Gynecol. 204(3): 193-201.
6. Thilaganathan B. (2017) Placental syndromes: getting to the heart of the matter. Ultrasound Obstet Gynecol. 49(1): 7-9.
7. Nardozza LM, Caetano AC, Zamarian AC, Mazzola JB, Silva CP, Marcal VM, Lobo TF, Peixoto AB, Araujo Júnior E. (2017) Fetal growth restriction: current knowledge. Arch Gynecol Obstet. 295(5): 1061-1077.
8. Figueras F, Gratacos E. (2014) Stage-based approach to the management of fetal growth restriction. Prenat Diagn. 34: 655-659
9. Baschat AA. (2011) Neurodevelopment following fetal growth restriction and its relationship with antepartum parameters of placental dysfunction. Ultrasound Obstet Gynecol. 37: 501-514
10. Kaaja RJ, Greer IA. (2005) Manifestations of chronic disease during pregnancy. JAMA. 294:2751-7.
11. Effectiveness-Based Guidelines for the Prevention of Cardiovascular Disease in Women— 2011 Update. (2011) A Guideline From the American Heart Association. Journal of the American College of Cardiology. 57(12).
12. Libby G, Murphy DJ, McEwan NF, Greene SA, Forsyth JS, Chien PW, Morris AD; DARTS/MEMO Collaboration. (2007) Pre-eclampsia and the later development of type 2 diabetes in mothers and their children: an intergenerational study from the Walker cohort. Diabetologia. 50(3): 523-30.
13. Mánnistó T, Mendola P, Vaarásmáki M, Járvelin MR, Hartikainen AL, Pouta A, Suvanto E. (2013) Elevated blood pressure in pregnancy and subsequent chronic disease risk. Circulation. 127: 681-90.
14. Tooher J, Thornton C, Makris A, Ogle R, Korda A, Hennessy A. (2017) All Hypertensive Disorders of Pregnancy Increase the Risk of Future Cardiovascular Disease. Hypertension. 70(4): 798-803.
15. Benschop L, Bergen NE, Schalekamp-Timmermans S, Jaddoe VWV, Mulder MT, Steegers EAP, Roeters van Lennep JE. (2018) Maternal lipid profile 6 years after a gestational hypertensive disorder. J Clin Lipidol. 12(2): 428-36.e4.
16. Heida KY, Franx A, van Rijn BB, Eijkemans MJ, Boer JM, Verschuren MW, Oudijk MA, Bots ML, van der Schouw YT. (2015) Earlier Age of Onset of Chronic Hypertension and Type 2 Diabetes Mellitus After a Hypertensive Disorder of Pregnancy or Gestational Diabetes Mellitus. Hypertension. 66(6): 1116-22.
17. Lykke JA, Langhoff-Roos J, Sibai BM, Funai EF, Triche EW, Paidas MJ. (2009) Hypertensive pregnancy disorders and subsequent cardiovascular morbidity and type 2 diabetes mellitus in the mother. Hypertension. 53(6): 944-51.
18. Bellamy L, Casas JP, Hingorani AD, WilliamsDJ. (2007) Pre-eclampsia and risk of cardiovascular disease and cancer in later life: systematic review and meta-analysis. BMJ 335:974.
19. Haukkamaa L, Moilanen L, Kattainen A, Luoto R, Kahonen M, Leinonen M, Jula A, Kesaniemi YA, Kaaja R. (2009) Pre-eclampsia is a risk factor of carotid artery atherosclerosis, Cerebrovasc. Dis. 27: 599-607.
20. Berks D, Hoedjes M, Raat H, Duvekot JJ, Steegers EA, Habbema JD. (2013) Risk of cardiovascular disease after pre-eclampsia and the effect of lifestyle interventions: a literature-based study. BJOG 120(8): 924-31.
21. Craici IM, Wagner SJ, Hayman SR, Garovic VD. (2008) Pre-eclamptic pregnancies: an opportunity to identify women at risk for future cardiovascular disease. Womens Health (Lond). 4(2): 133-5.
22. Facca TA, Mastroianni-Kirsztajn G, Sabino ARP, Passes MT, Dos Santos LF, Famá EAB,
-34 CZ 308178 B6
Nishida SK, Sass N. (2017) Pregnancy as an early stress test for cardiovascular and kidney disease diagnosis. Pregnancy Hypertens. S2210-7789(17): 30306-9.
23. Boma S, Neamatipoor E, Radman N. (2012) Risk of coronary artery disease in women with history of pregnancies complicated by preeclampsia and LBW. J Matem Fetal Neonatal Med. 2: 1114-16.
24. Bonamy AK, Parikh NI, Cnattingius S, Ludvigsson JF, Ingelsson E. (2011) Birth characteristics and subsequent risks of maternal cardiovascular disease: effects of gestational age and fetal growth. Circulation. 124(25): 2839-46.
25. Bukowski R, Davis KE, Wilson PW. (2012) Delivery of a small for gestational age infant and greater maternal risk of ischemic heart disease. PLoS One. 7(3): e33047.
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (15)

1. Způsob detekce zvýšeného kardiovaskulárního rizika u matek po komplikovaném průběhu těhotenství, vyznačující se tím, že se provede postpartální skrínink spočívající ve zjištění expresního profilu jedné nebo více mikroRNA vybraných ze skupiny sestávající z:
miR-l-3p, miR-16-5p, miR-17-5p, miR-20a-5p, miR-20b-5p, miR-21-5p, miR-23a-3p, miR-243p, miR-26a-5p, miR-29a-3p, miR-92a-3p, miR-100-5p, miR-103a-3p, miR-125b-5p, miR-1263p, miR-130b-3p, miR-133a-3p, miR-143-3p, miR-145-5p, miR-146a-5p, miR-155-5p, miR181a-5p, miR-195-5p, miR-199a-5p, miR-210-3p, miR-221-3p, miR-342-3p, miR-499a-5p a miR-574-3p, v plné periferní žilní krvi žen s anamnézou gestační hypertenze, preeklampsie nebo fetální růstové restrikce, přičemž uvedený postpartální skrínink se provede 3 až 11 let po porodu.
2. Způsob podle nároku 1 pro detekci zvýšeného kardiovaskulárního rizika u žen s anamnézou gestační hypertenze, vyznačující se tím, že se provede postpartální skrínink jednotlivých mikroRNA biomarkerů miR-20a-5p, miR-143-3p, miR-146a-5p, miR-181a-5p, miR-199a-5p, miR-221-3p a/nebo miR-499a-5p.
3. Způsob podle nároku 1 pro detekci zvýšeného kardiovaskulárního rizika u žen s anamnézou gestační hypertenze, vyznačující se tím, že se provede postpartální kombinovaný skrínink mikroRNA biomarkerů miR-20a-5p, miR-143-3p, miR-146a-5p, miR-181a-5p, miR-199a-5p, miR-221-3p amiR-499a-5p.
4. Způsob podle nároku 1 pro detekci zvýšeného kardiovaskulárního rizika u žen s anamnézou gestační hypertenze, vyznačující se tím, že se provede postpartální skrínink jednotlivých mikroRNA biomarkerů miR-l-3p, miR-17-5p, miR-20b-5p, miR-29a-3p a/nebo miR-126-3p.
5. Způsob podle nároku 1 pro detekci zvýšeného kardiovaskulárního rizika u žen s anamnézou gestační hypertenze, vyznačující se tím, že se provede postpartální kombinovaný skrínink mikroRNA biomarkerů miR-l-3p, miR-17-5p, miR-20b-5p, miR-29a-3p a miR-126-3p.
6. Způsob podle nároku 1 pro detekci zvýšeného kardiovaskulárního rizika u žen s anamnézou preeklampsie bez ohledu na závažnost onemocnění a gestační stáří ukončení těhotenství, vyznačující se tím, že se provede postpartální skrínink jednotlivých mikroRNA biomarkerů miR-17-5p, miR-29a-3p a/nebo miR-133a-3p.
7. Způsob podle nároku 1 pro detekci zvýšeného kardiovaskulárního rizika u žen s anamnézou preeklampsie bez ohledu na závažnost onemocnění a gestační stáří ukončení těhotenství,
-35 CZ 308178 B6 vyznačující se tím, že se provede postpartální kombinovaný skrínink mikroRNA biomarkerů miR-17-5p, miR-29a-3p a miR-133a-3p.
8. Způsob podle nároku 1 pro detekci zvýšeného kardiovaskulárního rizika u žen s anamnézou závažné preeklampsie, vyznačující se tím, že se provede postpartální skrínink jednotlivých mikroRNA biomarkerů miR-17-5p, miR-20b-5p, miR-29a-3p, miR-126-3p, miR-130b-3p a/nebo miR-133a-3p.
9. Způsob podle nároku 1 pro detekci zvýšeného kardiovaskulárního rizika u žen s anamnézou závažné preeklampsie, vyznačující se tím, že se provede postpartální kombinovaný skrínink mikroRNA biomarkerů miR-17-5p, miR-20b-5p, miR-29a-3p, miR-126-3p, a miR-133a-3p.
10. Způsob podle nároku 1 pro detekci zvýšeného kardiovaskulárního rizika u žen s anamnézou časné preeklampsie, vyznačující se tím, že se provede postpartální skrínink jednotlivých mikroRNA biomarkerů miR-l-3p, miR-17-5p a/nebo miR-133a-3p.
11. Způsob podle nároku 1 pro detekci zvýšeného kardiovaskulárního rizika u žen s anamnézou časné preeklampsie, vyznačující se tím, že se provede postpartální kombinovaný skrínink mikroRNA biomarkerů miR-l-3p, miR-17-5p, a miR-133a-3p.
12. Způsob podle nároku 1 pro detekci zvýšeného kardiovaskulárního rizika u žen s anamnézou pozdní preeklampsie, vyznačující se tím, že se provede postpartální skrínink mikroRNA biomarkerů miR-17-5p, miR-20b-5p a/nebo miR-29a-3p, s výhodou se provede postpartální skrínink mikroRNA biomarkerů miR-29a-3p.
13. Způsob podle nároku 1 pro detekci zvýšeného kardiovaskulárního rizika u žen s anamnézou preeklampsie a/nebo FGR s patologickým průtokem v uterinní artérii v předchozí graviditě, vyznačující se tím, že se provede postpartální skrínink mikroRNA biomarkerů miR-125b-5p, miR-133a-3p a/nebo miR-145-5p, s výhodou se provede postpartální skrínink mikroRNA biomarkerů miR-125b-5p.
14. Způsob podle nároku 1 pro detekci zvýšeného kardiovaskulárního rizika u žen s anamnézou preeklampsie a/nebo FGR s patologickým průtokem v arteria cerebri media v předchozí graviditě, vyznačující se tím, že se provede postpartální skrínink mikroRNA biomarkerů miR-125b-5p.
15. Způsob podle nároku 1 pro detekci zvýšeného kardiovaskulárního rizika u žen s anamnézou preeklampsie a/nebo FGR s patologickými hodnotami cerebroplacentámího poměru v předchozí graviditě, vyznačující se tím, že se provede postpartální skrínink mikroRNA biomarkerů miR100-5p.
CZ2018-597A 2018-10-31 2018-10-31 Postpartální epigenetický profil kardiovaskulárních mikroRNA u matek po komplikované graviditě - nové biomarkery kardiovaskulárního rizika CZ308178B6 (cs)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2018-597A CZ308178B6 (cs) 2018-10-31 2018-10-31 Postpartální epigenetický profil kardiovaskulárních mikroRNA u matek po komplikované graviditě - nové biomarkery kardiovaskulárního rizika
PCT/CZ2019/050051 WO2020088704A1 (en) 2018-10-31 2019-10-30 Postpartum epigenetic profile of cardiovascular micrornas in women exposed to pregnancy-related complications

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2018-597A CZ308178B6 (cs) 2018-10-31 2018-10-31 Postpartální epigenetický profil kardiovaskulárních mikroRNA u matek po komplikované graviditě - nové biomarkery kardiovaskulárního rizika

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ2018597A3 CZ2018597A3 (cs) 2020-02-05
CZ308178B6 true CZ308178B6 (cs) 2020-02-05

Family

ID=69191784

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2018-597A CZ308178B6 (cs) 2018-10-31 2018-10-31 Postpartální epigenetický profil kardiovaskulárních mikroRNA u matek po komplikované graviditě - nové biomarkery kardiovaskulárního rizika

Country Status (2)

Country Link
CZ (1) CZ308178B6 (cs)
WO (1) WO2020088704A1 (cs)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023109988A1 (en) 2021-12-13 2023-06-22 GeneSpector Innovations s.r.o. Method of prediction of pregnancy complications based on the expression profile of cardiovascular mirnas

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112391462A (zh) * 2020-12-04 2021-02-23 天津医科大学第二医院 一种子痫前期外周血浆中特异性miRNAs及其应用
CN113943792A (zh) * 2021-11-02 2022-01-18 石河子大学 检测miRNA表达量的试剂在制备诊断或预后哈萨克族高血压的试剂或试剂盒中的应用
CN115181797B (zh) * 2022-04-19 2023-08-18 唐颢 MicroRNA在扩张型心肌病治疗中的应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015066611A2 (en) * 2013-11-01 2015-05-07 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Microrna profiles in heart failure: methods and systems for detection and use

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK144771C (da) 1979-07-10 1982-10-25 V B K Rasmussen Haengselbeslag til vippevinduer,navnlig skraat indbyggede tagvinduer
US4318157A (en) 1980-06-06 1982-03-02 Control Data Corporation Apparatus for mounting circuit cards
GB201504772D0 (en) * 2015-03-20 2015-05-06 Univ Aston Preeclampsia

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015066611A2 (en) * 2013-11-01 2015-05-07 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Microrna profiles in heart failure: methods and systems for detection and use

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CORSTEN M. F. et al.: „Circulating microRNA-208b and microRNA-499 reflect myocardial damage in cardiovascular disease," Circulation: Cardiovascular Genetics, vol. 3, no. 6, 2010, str. 499 – 506, ISSN 1942-325X *
HROMADNÍKOVÁ I. et al.: „Cardiovascular and cerebrovascular disease associated microRNAs are dysregulated in placental tissues affected with gestational hypertension, preeclampsia and intrauterine growth restriction," Plos One, vol. 10, no. 9, 2015, str. e0138383, ISSN 1932-6203 *
HROMADNÍKOVÁ I. et al.: „Gestational hypertension, preeclampsia and intrauterine growth restriction induce dysregulation of cardiovascular and cerebrovascular disease associated microRNAs in maternal whole peripheral blood," Trombosis Research, vol. 137, 2016, str. 126 - 140, ISSN 0049-3848 *
HROMADNÍKOVÁ I. et al.: „Profiling of cardiovascular and cerebrovascular disease associated microRNA expression in umbilical cord blood in gestational hypertension, preeclampsia and fetal growth restriction," International Journal of Cardiology, vol. 249, 2017, str. 402 - 409, ISSN 0167-5273 *
MURPHY M. S. et al.: „Differential expression of plasma microRNA in preeclamptic patients at delivery and 1 year postpartum," American Journal of Obstetrics & Gynecology, vol. 213, no. 3, 2015, str. 367.e1 – 367.e9, ISSN 0002-9378 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023109988A1 (en) 2021-12-13 2023-06-22 GeneSpector Innovations s.r.o. Method of prediction of pregnancy complications based on the expression profile of cardiovascular mirnas

Also Published As

Publication number Publication date
WO2020088704A1 (en) 2020-05-07
CZ2018597A3 (cs) 2020-02-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Zhu et al. Identification of maternal serum microRNAs as novel non-invasive biomarkers for prenatal detection of fetal congenital heart defects
Munaut et al. Dysregulated circulating miRNAs in preeclampsia
Peng et al. Clinical impact of circulating miR-133, miR-1291 and miR-663b in plasma of patients with acute myocardial infarction
Hromadnikova et al. Absolute and relative quantification of placenta-specific microRNAs in maternal circulation with placental insufficiency–related complications
Sayed et al. The diagnostic value of circulating microRNAs for middle-aged (40–60-year-old) coronary artery disease patients
Lykoudi et al. Dysregulated placental microRNAs in early and late onset preeclampsia
Qin et al. Long non-coding RNA H19 is associated with polycystic ovary syndrome in Chinese women: a preliminary study
CZ2018597A3 (cs) Postpartální epigenetický profil kardiovaskulárních mikroRNA u matek po komplikované graviditě - nové biomarkery kardiovaskulárního rizika
Kim et al. Genome‐wide analysis of DNA methylation in human amnion
US20130316351A1 (en) Methods and kits for diagnosing conditions related to hypoxia
CN102575294A (zh) 用于急性肾损伤的诊断和/或预后的方法
Kiani et al. MicroRNA expression in infertile men: its alterations and effects
Kaneto et al. MicroRNA profiling identifies miR-7-5p and miR-26b-5p as differentially expressed in hypertensive patients with left ventricular hypertrophy
Huang et al. RNA degradation differentially affects quantitative mRNA measurements of endogenous reference genes in human placenta
Ding et al. A polymorphism rs3746444 within the pre‐miR‐499 alters the maturation of miR‐499‐5p and its antiapoptotic function
CN106148537A (zh) 一种与2型糖尿病相关的血清或血浆miRNA标志物及其应用
Liu et al. miR-28-5p involved in LXR-ABCA1 pathway is increased in the plasma of unstable angina patients
Vashukova et al. MicroRNAs associated with preeclampsia
EP3119905B1 (en) Mitochondrial non-coding rnas for predicting disease progression in heart failure and myocardial infarction patients
Abu-Halima et al. Characterization of micro-RNA Profile in the Blood of Patients with Marfan's Syndrome
Ayoub et al. Association of MicroRNA-155rs767649 polymorphism with susceptibility to preeclampsia
WO2019143828A2 (en) Biomarkers of cardiovascular status and uses therof
WO2020088703A1 (en) A method of predicting a risk of cardiovascular disease for a child born from a complicated pregnancy
Rahul et al. Circulating microRNAs as potential novel biomarkers in cardiovascular diseases: Emerging role, biogenesis, current knowledge, therapeutics and the road ahead
WO2018041726A1 (en) Biomarkers for determining the presence of an unstable atherosclerotic plaque