CZ309204B6 - Kolagenní kompozit pro řízené uvolňování aktivních látek a způsob jeho přípravy - Google Patents
Kolagenní kompozit pro řízené uvolňování aktivních látek a způsob jeho přípravy Download PDFInfo
- Publication number
- CZ309204B6 CZ309204B6 CZ202155A CZ202155A CZ309204B6 CZ 309204 B6 CZ309204 B6 CZ 309204B6 CZ 202155 A CZ202155 A CZ 202155A CZ 202155 A CZ202155 A CZ 202155A CZ 309204 B6 CZ309204 B6 CZ 309204B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- collagen
- foam
- hours
- weight
- composite
- Prior art date
Links
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title claims abstract description 258
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title claims abstract description 258
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title claims abstract description 258
- 239000002131 composite material Substances 0.000 title claims abstract description 78
- 239000013543 active substance Substances 0.000 title claims abstract description 48
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 title claims description 7
- 239000006260 foam Substances 0.000 claims abstract description 207
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 22
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 76
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 62
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 59
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 52
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 43
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 41
- 239000002121 nanofiber Substances 0.000 claims description 32
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims description 29
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 26
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 25
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 21
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 20
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 10
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 claims description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 8
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 claims description 7
- 238000010041 electrostatic spinning Methods 0.000 claims description 6
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 claims description 5
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 claims description 5
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 claims description 4
- 229940127218 antiplatelet drug Drugs 0.000 claims description 3
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 66
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 52
- BXGTVNLGPMZLAZ-UHFFFAOYSA-N n'-ethylmethanediimine;hydrochloride Chemical compound Cl.CCN=C=N BXGTVNLGPMZLAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 41
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 22
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 22
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 description 22
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 21
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 19
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 19
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 19
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 16
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 16
- 239000000463 material Substances 0.000 description 16
- NXFQHRVNIOXGAQ-YCRREMRBSA-N nitrofurantoin Chemical compound O1C([N+](=O)[O-])=CC=C1\C=N\N1C(=O)NC(=O)C1 NXFQHRVNIOXGAQ-YCRREMRBSA-N 0.000 description 13
- 229960000564 nitrofurantoin Drugs 0.000 description 13
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 11
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 11
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 11
- JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N rifampicin Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C([O-])=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CC[NH+](C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N 0.000 description 11
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 11
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 11
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 11
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 10
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 10
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 9
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 8
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 7
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 7
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 6
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 6
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 5
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 5
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229940126575 aminoglycoside Drugs 0.000 description 4
- 238000002316 cosmetic surgery Methods 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 230000006855 networking Effects 0.000 description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 4
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N Chlorhexidine Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1NC(N)=NC(N)=NCCCCCCN=C(N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000252233 Cyprinus carpio Species 0.000 description 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 3
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 229960003260 chlorhexidine Drugs 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 3
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 3
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 2
- -1 aminoglycosides Chemical compound 0.000 description 2
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012984 antibiotic solution Substances 0.000 description 2
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 description 2
- MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N ciprofloxacin Chemical compound C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000005686 electrostatic field Effects 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 201000001245 periodontitis Diseases 0.000 description 2
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 206010017076 Fracture Diseases 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010067268 Post procedural infection Diseases 0.000 description 1
- 206010041925 Staphylococcal infections Diseases 0.000 description 1
- 208000002847 Surgical Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000031650 Surgical Wound Infection Diseases 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 238000012084 abdominal surgery Methods 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 238000005452 bending Methods 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 238000007675 cardiac surgery Methods 0.000 description 1
- 229940036735 ceftaroline Drugs 0.000 description 1
- ZCCUWMICIWSJIX-NQJJCJBVSA-N ceftaroline fosamil Chemical compound S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C([O-])=O)=O)NC(=O)\C(=N/OCC)C=2N=C(NP(O)(O)=O)SN=2)CC=1SC(SC=1)=NC=1C1=CC=[N+](C)C=C1 ZCCUWMICIWSJIX-NQJJCJBVSA-N 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000004568 cement Substances 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 229960003405 ciprofloxacin Drugs 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000000515 collagen sponge Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 210000004013 groin Anatomy 0.000 description 1
- 210000004394 hip joint Anatomy 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960003907 linezolid Drugs 0.000 description 1
- TYZROVQLWOKYKF-ZDUSSCGKSA-N linezolid Chemical compound O=C1O[C@@H](CNC(=O)C)CN1C(C=C1F)=CC=C1N1CCOCC1 TYZROVQLWOKYKF-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 238000012792 lyophilization process Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229960000282 metronidazole Drugs 0.000 description 1
- VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N metronidazole Chemical compound CC1=NC=C([N+]([O-])=O)N1CCO VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 238000009121 systemic therapy Methods 0.000 description 1
- 231100000057 systemic toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/39—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/22—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing macromolecular materials
- A61L15/32—Proteins, polypeptides; Degradation products or derivatives thereof, e.g. albumin, collagen, fibrin, gelatin
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
Vynález se týká kolagenního kompozitu, který obsahuje alespoň jednu vrstvu vysoce porézní kolagenní pěny s alespoň jednu vrstvu kolagenních nanovláken, který je schopen řízeného lokálního uvolňování aktivních látek. Dále je předmětem vynálezu i způsob přípravy kolagenního kompozitu.
Description
Kolagenní kompozit pro řízené uvolňování aktivních látek a způsob jeho přípravy
Oblast techniky
Předmětem vynálezu je kolagenní kompozit, v němž se střídá alespoň jedna vrstva vysoce porézní, degradovatelné kolagenní pěny s hemostatickými účinky s alespoň jednou vrstvou kolagenních vláken, a který je schopen řízeného lokálního uvolňování aktivních látek, například antibiotik, pro použití formou krytí ran v chirurgii, ortopedii, traumatologii a plastické chirurgii. Předmětem vynálezu je i způsob přípravy kolagenního kompozitu.
Dosavadní stav techniky
Krvácení na větších plochách při chirurgických zákrocích je poměrně častým a velmi závažným problémem a v krajních případech může znamenat i ohrožení života pacienta. Dalším závažným problémem je proniknutí infekce do organismu. Při postoperační administraci antibiotik nastává problém systémového zatížení organismu, často nedostatečného průniku do operační rány a v určitých případech může dojít i k systémové toxicitě.
Jedním z řešení je použití lokálně antiseptického neadhezivního materiálu. Mimo podstatnou lokálně antiseptickou fúnkci může mít tento materiál současně také lokálně hemostatické a anestetické vlastnosti.
Kolageny izolované z tkání velkých savců jako kráva, prase nebo kůň jsou hojně využívány v biomateriálovém inženýrství. Jejich nevýhodou jsou potenciální alergické reakce, kterými trpí 3 až 4 % populace. Řešení se nabízí v použití rybího kolagenu, který vykazuje excelentní biokompatibilitu. Izolace kolagenu z kůže ryb navíc nepředstavuje takové riziko přenosu různých chorob, jako v případě extrakce z vepřové nebo hovězí kůže (BSE, PrPSc). Rybí kolagen vykazuje nižší reprodukovatelnost, co se týče jeho strukturních vlastností, v porovnání s kolageny izolovanými z velkých savců. Tento nedostatek je možné odstranit jeho chemickým síťováním pomocí sloučenin na bázi karboimidů, které jsou v chemii kolagenu běžně používány. Podmínky síťování ovlivňují výslednou míru zesítění kolagenního materiálu, což má ve výsledku velký vliv na jeho nasákavost a degradační vlastnosti ve fýziologickém prostředí. Síťovaný kolagen dobře odolává ionizujícímu záření, což umožňuje jeho sterilizaci běžně užívanými dávkami 25 kGy. Pomocí lyofilizačního procesuje možné dále vytvořit trojrozměrný materiál s danou porozitou.
Kolagenní materiál je možné připravit rovněž ve formě nanovlákenných vrstev pomocí elektrostatického zvlákňování. Jejich obrovskou výhodou je velký aktivní povrch, který dokáže efektivně navázat velká množství chemických agens a zároveň je pozitivním faktorem pro adhezi, proliferaci a růst buněk.
Takto připravené materiály se obecně velmi osvědčily jako nosiče léčiv s řízenou elucí. Léčivo je možné do kolagenu inkorporovat přímo do roztoku před danými procesy zpracování nebo dodatečnou impregnací hotového materiálu pomocí rozpouštědla, které jednak nedegraduje strukturu kolagenu a zároveň je schopno rozpustit požadované léčivo. Dodatečná impregnace se osvědčila jako nejefektivnější způsob, jelikož nedochází k předčasnému uvolňování léčiva během zpracování kolagenního materiálu.
Možnost zpracovávat kolagen do různých výsledných forem (vrstvy, pěny apod.), jeho snadná a ekonomická dostupnost (odpadní materiál v potravinářství) spolu s jeho biokompatibilními a zároveň hemokoagulačními vlastnostmi jej činí jako optimálního kandidáta pro využití v hemostatických pěnách pro krytí operačních a pooperačních ran.
- 1 CZ 309204 B6
Nejčastěji používaným antibiotikem v kolagenních lékových formách je gentamicin. V klinické praxi našly tyto přípravky využití především ve stomatologii, břišní chirurgii a traumatologii. V poslední době se objevují také klinické studie z oblasti kardiochirurgie, které potvrzují efektivitu tohoto přístupu v prevenci pooperačních infekcí. Existují rovněž studie zabývající se využitím kolagenní matrice s tetracyklinem a metronidazolem v dentální chirurgii. Za účelem terapie periodontitidy jsou používány kolagenní matrice uvolňující chlorhexidin v dutině ústní. V naprosté většině studií a klinicky používaných výrobků je základní matricí kolagen savčí (bovinní, nebo koňský). Vzácně je kromě savčího kolagenu za tímto účelem využíván i kolagen z mořských ryb - pouze pro aplikaci chlorhexidinu ve stomatologii. Dále jsou dostupná in vitro data a data ze zvířecích experimentů pro ciprofloxacin. Z uvedeného vyplývá, že rybí kolagen, a to kolagen z mořských, nikoli sladkovodních ryb, je klinicky využíván jako matrice pro uvolňování léčiv zcela okrajově pouze pro terapii periodontitidy chlorhexidinem. Není používán pro léčbu antibiotiky. Další zajímavou možností, která není v současné době dostupná, by bylo použití vankomycinu v kolagenové pěně. V klinické praxi je vankomycin používán převážně v lokální léčbě fraktur - byly použity vankomycinem impregnované korálky a kostní alografty v kombinaci s cementem obsahujícím aminoglykosidy při náhradě kyčelního kloubu. Vankomycinem impregnované kolagenní pěny studovány nebyly. Vzhledem k tomu, že vankomycin, stejně jako aminoglykosidy nedostatečně penetruje do tkání je systémová aplikace k terapii infekcí pooperačních ran problematická. Lokální aplikace s postupným uvolňováním by v případě tohoto antibiotika byla obzvláště vhodná, neboť na rozdíl od aminoglykosidů je jeho účinnost závislá nejenom na výši dosažených koncentrací, ale také na době, kdy koncentrace přesahuje MIC. Hodnota nejlépe korelující s klinickou odezvou při systémové terapii infekcí Staphylococcus aureus je AUC/MIC. Pokud by kolagenní lékové formy zajistily dlouhodobě adekvátní lokální koncentrace vankomycinu v ráně, bylo by možné tímto způsobem upustit od systémového použití dalších záložních antibiotik (ceftarolinu, linezolidu) a jejich šetření pro závažnější infekce.
Lokální aplikace je vhodná především pro antibiotika s nízkou distribucí do tkání, čemuž odpovídají aminoglykosidy, vankoymcin a nitrofurantoin. Nově umisťujeme tyto látky do kolagenní matrice z kolagenu sladkovodních ryb, což je lehce dostupný materiál s nižší imunogenitou, než kolagen získávaný ze savců. Dosahujeme různé míry retardace podle povahy antibiotika, např. rychlé uvolnění a dosažení vysokých koncentrací u gentamicinu, nebo naopak pozvolné uvolňování vankomycinu - tyto charakteristiky odpovídají rozdílnému mechanizmu účinku antibiotik a rozdílným cílovým farmakokinetickým parametrům (koncentračně x časově závislá antibiotika).
Mezi další nevýhody stávajících materiálů na bázi kolagenu je obtížná manipulace, protože tyto materiály ve styku s tělním prostředím ztrácejí soudržnost a při manipulaci mají tendenci se trhat a rozpadat.
Podstata vynálezu
Nevýhody hemostatických krycích materiálů na bázi kolagenu do značené míry překonává kolagenní kompozit, který obsahuje porézní kolagenní pěnu. Tento kolagenní kompozit obsahuje kolagen typu I, který je uspořádán do alespoň dvou vrstev, přičemž jednou vrstvou je vrstva vysoce porézní pěny a druhou vrstvou je nanovlákenná vrstva, přičemž vrstva vysoce porézní pěny má otevřenou porozitu v rozmezí 70 až 90 %, s výhodou 80 % až 90 %, a střední hodnotu velikosti pórů 50 až 200 pm, kde alespoň 50 % objemu pórů je tvořeno póry o velikosti nad 80 pm, a přičemž průměr vláken je v rozmezí 100 až 350 nm. Nanovlákenná vrstva má s výhodou tloušťku v rozmezí 0,2 až 0,5 mm. Ve výhodném provedení je kolagenní kompozit uspořádán do více než dvou vrstev, s výhodou do alespoň pěti vrstev, kde se pravidelně střídají vrstva vysoce porézní pěny s nanovlákennou vrstvou. Objemové množství všech nanovlákenných vrstev je v rozmezí 20 až 60 %. Kolagenní kompozit může dále obsahovat alespoň jednu aktivní látku, přičemž poměr kolagenu k celkovému množství aktivních látek v kolagenním kompozitu je 40 až 70 % hmota, kolagenu na 30 až 60 % hmota, aktivních látek. Aktivní látka je s výhodou vybrána ze skupiny
-2CZ 309204 B6 zahrnující antibiotikum, anestetikum, antiagregans, antivirotikum, nebo jejich směs, s výhodou je to antibiotikum nebo směs antibiotik, například vybrané ze skupiny zahrnující vankomycin, gentamicin, rifampicin, nitrofurantoin.
Vysoce porézní pěnou je degradovatelná kolagenní pěna pro řízené uvolňování aktivních látek, která obsahuje kolagen typu I a má otevřenou porozitu v rozmezí 70 až 90 % a střední hodnotu velikosti pórů 50 až 200 pm, kde alespoň 50 % objemu pórů je tvořeno póry o velikosti nad 80 pm. S výhodou pochází kolagen z kůže sladkovodních ryb, kde jsou imunitní reakce výrazně menší než u kolagenu savčího původu, zejména z tkání velkých savců. Pěna může být dále impregnovaná alespoň jednou aktivní látkou, která se uspořádá do pórů pěny, přičemž poměr kolagenu k celkovému množství aktivních látek v kolagenní pěně je 40 až 70 % hmota, kolagenu na 30 až 60 % hmota, aktivních látek. Aktivní látka je s výhodou vybrána ze skupiny zahrnující antibiotikum, anestetikum, antiagregans, antivirotikum, nebo jejich směs, s výhodou antibiotikum, například vankomycin, gentamicin, rifampicin, nitrofurantoin, nebo jejich směs. Pěna má s výhodou tloušťku v rozmezí 0,5 až 5 cm, například 1 cm.
Dalším podstatným přínosem kompozitu je také skutečnost, že umožňuje deponovat do nanostrukturovaného a mikrostrukturovaného povrchu s velkým specifickým povrchem a dostatečnou otevřenou porozitou biologicky aktivní látky podle očekávaného rozsahu poranění nebo poškození před operací, ale také podle uvážení operatéra i během operace, a to impregnací kolagenní pěny např. do roztoku antibiotik. Zároveň resorbovatelný materiál umožňuje jeho postupné bezpečné vstřebávání do okolní tkáně, a tím i postupné účinné uvolňování v něm deponovaných biologicky aktivních látek. Zároveň se ale kompozit podle technického řešení oproti stavu techniky díky tomu, že se netrhá a nerozpadá, vyznačuje snazší manipulací a možností repozice.
Kolagenem typu I je ve všech provedeních vynálezu s výhodou kolagen izolovaný z kůže sladkovodních ryb, například z kůže kapra obecného.
Vysoce porézní pěna se vyznačuje řízeným rozpadem, řízenou porozitou a schopností řízeného uvolňování aktivních látek, zejména antibiotik. Tato kolagenová pěna má vysokou míru otevřené porozity 70 až 90 % obj., velikost pórů v rozmezí 50 až 200 pm a je navržená tak, aby vykazovala udržitelné lokální uvolňování aktivních látek, jejichž celkové množství je 30 až 60 % hmota. Řízeného uvolňování aktivních látek, například antibiotik, a řízeného rozpadu kolagenové pěny je dosaženo vytvářením optimálního množství příčných vazeb v molekule kolagenu při její přípravě, a to buď fyzikálně, např. ozařováním, nebo chemicky, s výhodou aplikací N-(3dimethylaminopropyl)-A-ethylkarbodiimid hydrochloridu (EDC) a A-hydroxysukcinimidu (NHS). Rozpad nezesíťované vysoce porézní pěny bez nebo s aktivními látkami, například s antibiotiky, lze předpokládat v řádu 2 až 7 dnů. Pěna síťovaná po dobu 2 hodin se rozpadne do 2 týdnů. Pěna síťovaná po dobu 3 hodin se rozpadne do 4 týdnů. Pěna síťovaná po dobu 4 hodin se rozpadne do 6 týdnů. Tyto údaje se týkají pěny, která vychází ze způsobu přípravy při použití 1 % hmota, disperze kolagenu. Při použití jiné výchozí koncentrace se mohou doby rozpadu lišit, ale odborník je zjistí rutinním experimentováním.
Doba řízeného rozpadu, kterou lze vybrat na základě požadované doby aplikace pěny, následně ovlivňuje dobu řízeného uvolňování aktivních látek, například antibiotik (viz příklady 2 až 4). U pěny (při použití 1% hmota, disperze kolagenu při přípravě) zesíťované po dobu 2 hodin dochází k uvolňování antibiotik do deseti dnů. U pěny zesíťované po dobu 3 hodin dochází k uvolnění antibiotik do patnácti dnů. U pěny zesíťované po dobu 4 hodin dochází k uvolnění antibiotik do dvaceti dnů.
Při preventivním použití pěny s antibiotiky se s výhodou použije pěna s dobou rozpadu maximálně do dvou týdnů a s uvolňováním antibiotik maximálně do deseti dnů s výhodou čtyř dnů. V případech rizika vzniku zánětu, v potenciálně infekčním terénu (např. operace v třísle, v blízkosti genitálu, nebo laparoskopické odstranění žlučníku či slepého střeva) se s výhodou použije pěna s
-3 CZ 309204 B6 dobou rozpadu maximálně čtyři týdny a s uvolňováním antibiotik maximálně do patnácti dnů, s výhodou deseti dnů. V případech infekce způsobené přítomností protetického materiálu, kde je vysoké riziko infekce, se s výhodou použije pěna s dobou rozpadu maximálně do osmi týdnů s výhodou šesti týdnů a s dobou uvolňování antibiotik po dobu maximálně padesáti dnů s výhodou dvaceti dnů dle citlivosti na vykultivované infekční agens.
Požadované porozity je dosaženo jednak koncentrací disperze kolagenu, z níž se pěna připravuje, a jednak teplotou zamražení výsledné pěny před lyofilizací a následnou impregnací aktivní látkou. Čím koncentrovanější je disperze kolagenu, tím menší póry vznikají, a čím nižší je teplota zamražení, tím menší póry vznikají.
Základním přínosem tohoto vynálezu je skutečnost, že použitý kolagen izolovaný z kůže sladkovodních ryb má hemostatické účinky a jeho aplikace není spojená s rizikem alergické reakce nebo jiné nežádoucí imunitní odezvy organizmu. Dalším podstatným přínosem tohoto vynálezu je skutečnost, že umožňuje deponovat do mikrostrukturovaného povrchu s velkým specifickým povrchem a dostatečnou otevřenou porozitou biologicky aktivní látky podle očekávaného rozsahu poranění nebo poškození před operací, ale také podle uvážení operatéra i během operace, a to impregnací kolagenní pěny, např. v roztoku antibiotik. Zároveň resorbovatelný materiál umožňuje jeho postupné bezpečné vstřebávání do okolní tkáně, a tím i postupné účinné uvolňování v něm deponovaných biologicky aktivních látek.
Při přípravě samotné vysoce porézní kolagenové pěny se postupuje tak, že se odvážené množství kolagenu smísí s deionizovanou vodou v koncentraci 0,1 až 3 % hmotn., s výhodou 0,5 až 1 % hmotn. kolagenu, kde se kolagen nechá nabobtnat při teplotě 5 až 15 °C po dobu 1 až 3 hodin. Výsledná disperze je po homogenizaci zamražena při -60 až -90 °C po dobu 3 až 8 hodin a lyofilizována do dosažení konstantní hmotnosti. Stabilita kolagenové pěny je po lyofilizací s výhodou zvýšena chemickým síťováním pomocí EDC a NHS, načež se pěna opět zamrazí na -15 až -30 °C po dobu 5 až 7 hodin a lyofilizuje. Pro zajištění řízeného uvolňování aktivní látky do těla je posledním krokem přípravy impregnace pěny roztokem na bázi alkoholu obsahujícím odvážené množství aktivních látek, například antibiotik, která jsou s výhodou vybrána ze skupiny zahrnující vankomycin, gentamicin, rifampicin, nitrofurantoin, nebo jejich kombinace tak, aby jejich výsledné množství v roztoku bylo 30 až 60 % hmotn. Impregnovaná pěna se poté může použít v této formě, nebo může být zamražena a lyofilizována. Alternativně může být impregnace vybranými aktivními látkami uskutečněna teprve před aplikací pěny, pro což se použije vodný roztok aktivních látek nebo se aktivní látky smísí s fýziologickým roztokem a pěna se aplikuje ihned, nebo až po odpaření kapalné fáze, tedy po dosažení konstantní hmotnosti pěny. Tímto postupem je získána pěna s výsledným množstvím kolagenu 40 až 70 % hmotn. a 30 až 60 % hmotn. aktivních látek.
Při přípravě nanostrukturované vysoce porézní kompozitní kolagenní pěny se postupuje tak, že se nejprve připraví nanovlákenná vrstva, a to například způsobem popsaným v české přihlášce vynálezu PV 2016-656. Vrstva se s výhodou připraví elektrostatickým zvlákňováním, konkrétně tak, že se kolagen typu I a polyethylenoxid o viskozitně střední molekulové hmotnosti v rozmezí 400 000 až 900 000 v poměru polyethylenoxidu ku kolagenu v rozmezí 0,05 až 0,11 smíchá s fosfátovým pufrem pro získání koncentrace 5 až 11 hmotn. % kolagenu ve směsi, vzniklá směs se vystaví teplotě v rozmezí 32 až 42 °C po dobu alespoň 60 hodin, načež se homogenizuje míšením za současného přidávání ethanolu v konečném objemovém poměru fosfátového pufru ku ethanolu 1:1 až 1:2, následně se směs elektrostaticky zvlákňuje za vzniku nanovlákenné vrstvy, která se následně promyje fýziologickým roztokem nebo fosfátovým pufrem a poté vodou a usuší se. Stabilita této vrstvy je před promytím s výhodou zvýšena fýzikálním či chemickým síťováním, např. máčením v 95 % hmotn. roztoku alkoholu ve vodě s přídavkem EDC a NHS, kde množství EDC na 1 g zvlákněného kolagenu je alespoň 0,625 g amnožství NHS na 1 g zvlákněného kolagenu je alespoň 0,156 g, a kde množství 95%hm. roztoku alkoholu ve vodě je alespoň 140 ml na 1 g zvlákněného kolagenu. Následně se vrstva promyje, čímž se z ní vymyje pomocný polymer
-4CZ 309204 B6 polyethylenoxid, zamrazí se na teplotu -60 až -90 °C po dobu 3 až 8 hodin a lyofilizuje. Tloušťka zvlákněné vrstvy je s výhodou v rozmezí 0,2 až 0,5 mm.
V dalším krokuje zvlákněná vrstva ponechána v 0,1 až 3 % hmotn. disperzi kolagenu po dobu 1 až 3 hodin při teplotě 15 až 25 °C a po jejím prosycení následuje zamražení na teplotu -60 až 90 °C po dobu 3 až 8 hodin a lyofilizace do dosažení konstantní hmotnosti, za vzniku kompozitní kolagenní pěny. Stabilita kolagenové kompozitní pěny je po lyofilizaci s výhodou zvýšena chemickým síťováním, například chemicky pomocí EDC a NHS. Konečné objemové množství kolagenové nanovlákenné vrstvy v kompozitu je 20 až 60 %.
V případě více než dvou vrstev se nejprve připraví nanovlákenná vrstva a zesíťuje se. Potom se dvě nebo více těchto zesíťovaných nanovlákenných vrstev položí přes sebe a vloží se do disperze kolagenu, kde se máčí až do prosycení vrstev disperzí. Následuje zamražení a lyofilizace do dosažení konstantní hmotnosti. Stabilita takto získané kolagenové kompozitní pěny je po lyofilizaci s výhodou zvýšena chemickým síťováním pomocí EDC a NHS. Konečné objemové množství kolagenové nanovlákenné vrstvy v kompozitu je 20 až 60 %.
Ve výhodném provedení je posledním krokem přípravy impregnace kompozitu roztokem na bázi alkoholu obsahujícím odvážené množství aktivních látek, například antibiotik, s výhodou vybraných ze skupiny zahrnující vankomycin, gentamicin, rifampicin, nitrofurantoin, nebo jejich kombinace tak, aby jejich výsledné množství bylo 30 až 60 % hmotn. Impregnovaný kompozit může být poté zamražen a lyofilizován. Alternativně může být impregnace vybranými aktivními látkami uskutečněna teprve před aplikací kompozitu, pro což se použije vodný roztok aktivních látek nebo se aktivní látky smísí s fyziologickým roztokem a kompozit se aplikuje ihned, nebo až po odpaření kapalné fáze, tedy po dosažení konstantní hmotnosti kompozitu.
Podobně jako u vysoce porézní pěny, čím kratší je doba síťování, tím rychlejší je rozpad kompozitu a tím kratší je i doba uvolňování antibiotik.
Kompozitní kolagenová pěna je vhodná především pro použití v chirurgii, ortopedii, v oblasti krytí ran, léčby bércových vředů apod. Zejména je vhodné její použití v případech známého zánětu nebo vysokého rizika infekce, kdy se pěna impregnovaná aktivními látkami použije pro léčbu zánětu/infekce a cílené dodání aktivních látek, například antibiotik. Kompozitní pěna poskytuje díky nanovláknům velký aktivní povrch, kde dochází k větší vazbě aktivních látek, většímu kontaktu s tělním prostředím, a tím i k rychlým, vysokým a dlouhodobým dávkám uvolňovaných aktivních látek.
Vysoce porézní pěna a kompozit podle vynálezu mají následující výhody:
- programovatelný (řízený) rozpad pěny
- programovatelné (řízené) uvolňování aktivních látek
- elastická paměť, ohybová tuhost
- snazší manipulace s pěnou, možnost repozice (netrhá se, nerozpadá se)
- snížené riziko alergické reakce nebo jiné nežádoucí imunitní odezvy organizmu.
Kolagenová pěna podle vynálezu se s výhodou použije zejména preventivně, s cílem rychlého uvolňování aktivních látek.
Objasnění výkresů
Obr. 1 znázorňuje kolagenovou pěnu připravenou z 1% hmotn. disperze kolagenu bez antibiotik (vlevo: lOOnásobné zvětšení, uprostřed: 500násobné zvětšení) a po impregnaci gentamicinem (zcela vpravo, 2000násobné zvětšení).
-5CZ 309204 B6
Obr. 2 znázorňuje sendvičovou kolagenovou pěnu s málo porézním jádrem, připraveným z 5 % hmota, disperze kolagenu, a s vysoce porézními okrajovými částmi, připravenými z 1 % hmota, disperze kolagenu, příprava dle příkladu 11. Zcela vpravo je snímek rozhraní přechodu mezi jádrem a okrajem.
Obr. 3 znázorňuje graf závislosti smluvního napětí na deformaci pro samotnou porézní pěnu, samotné tuhé jádro a pro sendvičovou pěnu (příprava dle příkladu 11). Z grafu je patrná několikanásobně zvýšená odolnost vůči deformaci u sendvičové pěny oproti samotné pěně.
Obr. 4 znázorňuje nanostrukturovanou vysoce porézní kompozitní pěnu připravenou prosycením pěti nanovlákenných vrstev 1 % hmota, disperzí kolagenu. Snímek uprostřed ilustruje přechod mezi vlákny a porézní strukturou pěny. Snímek zcela vpravo ukazuje detail prosycení nanovlákenné vrstvy disperzí.
Příklady uskutečnění vynálezu
Definice
Kolagenová pěna v kontextu tohoto vynálezu je synonymem pro pojem „kolagenová houba“, tedy porézní materiál na bázi kolagenu.
Pod pojmem „otevřená porozita“, resp. „otevřené póry“ se rozumí prostor, který komunikuje s povrchem výrobku, tedy se zevním prostředím. Může jít o jednotlivé póry propojené s povrchem, ale i o vzájemně propojené póry, z nichž alespoň jeden navíc komunikuje i s povrchem výrobku.
Pod pojmem „uzavřená porozita“, resp. „uzavřené póry“ se rozumí tzv. osamocené póry, neboli póry, které nejsou propojeny s vnějším povrchem výrobku.
Výraz vysoce porézní v kontextu tohoto vynálezu jsou ty pěny, které mají otevřenou porozita v rozmezí 70 % až 90 %, s výhodou 80 % až 90 %, a velikost pórů v rozmezí 50 až 200 pm, přičemž alespoň 50 % objemu pórů je tvořeno póry o velikosti nad 80 pm, s výhodou nad 100 pm.
Výraz málo porézní v kontextu tohoto vynálezu jsou ty pěny, které mají otevřenou porozita v rozmezí 70 % až 90 % a velikost pórů v rozmezí 20 až 80 pm, přičemž alespoň 50 % objemu pórů je tvořeno póry o velikosti pod 50 pm.
Příklad 1 - vysoce porézní pěna
Při přípravě vysoce porézní kolagenové pěny se obecně postupuje tak, že se odvážené množství kolagenu, s výhodou izolovaného z kůže sladkovodních ryb, například z kapra obecného, smísí s deionizovanou vodou v koncentraci 0,1 až 3 % hmota., s výhodou 0,5 až 1 % hmota, kolagenu. Po nabobtnání kolagenu při teplotě 5-15 °C po dobu 1-3 hodin je směs dvojnásobně homogenizována po dobu 1 až 20 minut při 5 až 15 000 ot/min s 20 minutovou prodlevou při teplotě 15 až 25 °C. Výsledná disperze je poté dávkována do forem, zamražena při teplotě -60 až -90 °C po dobu 3 až 8 hodin a lyofilizována do dosažení konstantní hmotnosti. Stabilita kolagenové pěny je po lyofilizaci zvýšena máčením v roztoku 95 % hmota, ethanolu a vody s EDC a NHS při teplotě 25 až 40 °C, s výhodou při 37 °C, po dobu 2 až 4 hodin. Na 1 g kolagenu připadá 0,5-1,5 g EDC a 0,125 až 0,750 g NHS smísené se 140 až 160 ml 95 % hmota, roztoku ethanolu s vodou. Po zesíťování kolagenu je pěna promývána 0,5 až 1,5 M hydrogen fosforečnanem disodným po dobu alespoň 30 minut a dále promyta alespoň 20 minut v destilované vodě, zamražena na -15 až -30 °C po dobu 5 až 7 hodin a lyofilizována. Posledním krokem přípravy je impregnace pěny 95 % hmota, roztokem ethanolu s vodou obsahujícím odvážené množství antibiotika vybraných ze skupiny zahrnující vankomycin, gentamicin, rifampicin, nitrofurantoin, nebo jejich kombinace tak, aby jejich výsledné množství bylo 60 % hmota. Impregnovaná pěna může být poté zamražena na -60
-6CZ 309204 B6 až -90 °C, lyofilizována a nařezána na potřebné rozměry. Pěna může být také impregnována vybranými antibiotiky teprve před její aplikací, pro což se použije vodný roztok antibiotik nebo se antibiotika smísí s fyziologickým roztokem. Následně se pěna aplikuje buď nasáknutá impregnačním roztokem, nebo suchá, tedy až po odpaření kapalné fáze z pěny. Tímto postupem je získána pěna s výsledným množstvím kolagenu 40 % hmota, a 60 % hmota, antibiotik.
Příklad 2 - vysoce porézní pěna
Odvážené množství kolagenu se smísí s deionizovanou vodou v koncentraci 1 % hmota, kolagenu. Po nabobtnání kolagenu při teplotě 10 °C po dobu 2 hodin je směs dvojnásobně homogenizována po dobu 10 minut při 10 000 ot/min s 20 minutovou prodlevou při teplotě 20 °C. Výsledná disperze je poté dávkována do forem, zamražena při teplotě -70 °C po dobu 6 hodin a lyofilizována do dosažení konstantní hmotnosti. Stabilita kolagenové pěny je po lyofilizaci zvýšena máčením v roztoku 95 % hmota, ethanolu a vody s EDC a NHS při teplotě 30 °C po dobu 2 hodin. Na 1 g kolagenu se použil 1 g EDC a 0,250 g NHS smísené se 150 ml 95 % hmota, roztoku ethanolu s vodou. Po zesíťování kolagenu je pěna promývána 1 M hydrogen fosforečnanem disodným po dobu alespoň 30 minut a dále promyta alespoň 20 minut v destilované vodě, zamražena na -20 °C po dobu 6 hodin a lyofilizována. Posledním krokem přípravy je impregnace pěny 95 % hmota, roztokem ethanolu s vodou obsahujícím odvážené množství gentamicinu tak, aby jeho výsledné množství v roztoku bylo 45 % hmota. Impregnovaná pěna se pak zamrazí na -70 °C, lyofílizuje a nařeže na potřebné rozměry. Tímto postupem je získána pěna s výsledným množstvím kolagenu 55 % hmota, a 45 % hmota, antibiotika.
Příklad 3 - vysoce porézní pěna
Postupuje se stejně jako v příkladu 2, ale doba síťování je 3 hodiny.
Příklad 4 - vysoce porézní pěna
Postupuje se stejně jako v příkladu 2, ale doba síťování je 4 hodiny.
Příklad 5 - vysoce porézní pěna
Postupuje se jako v příkladu 2 s výjimkou posledního kroku přípravy, tj. impregnace pěny roztokem obsahujícím aktivní látku. Pěna se zamrazí na -70 °C, lyofílizuje a nařeže na potřebné rozměry. Tímto postupem je získána pěna sestávající z čistého kolagenu.
Příklad 6 - vysoce porézní pěna
Odvážené množství kolagenu se smísí s deionizovanou vodou v koncentraci 1,5 % hmota, kolagenu. Po nabobtnání kolagenu při teplotě 15 °C po dobu 1 hodiny je směs dvojnásobně homogenizována po dobu 15 minut při 8000 ot/min s 20 minutovou prodlevou při teplotě 15 °C. Výsledná disperze je poté dávkována do forem, zamražena při teplotě -80 °C po dobu 4 hodin a lyofilizována do dosažení konstantní hmotnosti. Stabilita kolagenové pěny je po lyofilizaci zvýšena máčením v roztoku 95 % hmota, ethanolu a vody s EDC a NHS při teplotě 25 °C po dobu 3 hodin. Na 1 g kolagenu se použilo 0,7 g EDC a 0,2 g NHS smísené se 140 ml 95 % hmota, roztoku ethanolu s vodou. Po zesíťování kolagenu je pěna promývána 0,8 M hydrogen fosforečnanem disodným po dobu alespoň 30 minut a dále promyta alespoň 20 minut v destilované vodě, zamražena na -30 °C po dobu 5 hodin a lyofilizována. Posledním krokem přípravy je impregnace pěny 95 % hmota, roztokem ethanolu s vodou obsahujícím odvážené množství vankomycinu tak, aby jeho výsledné množství v roztoku bylo 45 % hmota. Impregnovaná pěna se pak zamrazí na 80 °C, lyofílizuje a nařeže na potřebné rozměry. Tímto postupem je získána pěna s výsledným množstvím kolagenu 55 % hmota, a 45 % hmota, antibiotika.
-7 CZ 309204 B6
Příklad 7 - vysoce porézní pěna
Odvážené množství kolagenu se smísí s deionizovanou vodou v koncentraci 3 % hmoto, kolagenu. Po nabobtnání kolagenu při teplotě 12 °C po dobu 2,5 hodin je směs dvojnásobně homogenizována po dobu 20 minut při 15 000 ot/min s 20 minutovou prodlevou při teplotě 25 °C. Výsledná disperze je poté dávkována do forem, zamražena při teplotě -90 °C po dobu 3 hodin a lyofilizována do dosažení konstantní hmotnosti. Stabilita kolagenové pěny je po lyofilizaci zvýšena máčením v roztoku 95 % hmota, ethanolu a vody s EDC a NHS při teplotě 40 °C po dobu 2 hodin. Na 1 g kolagenu se použilo 1,4 g EDC a 0,7 g NHS smísené se 160 ml 95 % hmota, roztoku ethanolu s vodou. Po zesíťování kolagenu je pěna promývána 1,5 M hydrogen fosforečnanem disodným po dobu alespoň 30 minut a dále promyta alespoň 20 minut v destilované vodě, zamražena na -30 °C po dobu 5 hodin a lyofilizována. Posledním krokem přípravy je impregnace pěny 95 % hmota, roztokem ethanolu s vodou obsahujícím odvážené množství směsi vankomycinu a gentamicinu v poměru 1:1 tak, aby jejich výsledné množství bylo 30 % hmota. Impregnovaná pěna je poté zamražena na -90 °C, lyofilizována a nařezána na potřebné rozměry. Tímto postupem je získána pěna s výsledným množstvím kolagenu 70 % hmota, a 30 % hmota, antibiotik.
Příklad 8 - vysoce porézní pěna
Odvážené množství kolagenu se smísí s deionizovanou vodou v koncentraci 0,5 % hmota, kolagenu. Po nabobtnání kolagenu při teplotě 15 °C po dobu 3 hodin je směs dvojnásobně homogenizována po dobu 20 minut při 5000 ot/min s 20 minutovou prodlevou při teplotě 25 °C. Výsledná disperze je poté dávkována do forem, zamražena při teplotě -60 °C po dobu 8 hodin a lyofilizována do dosažení konstantní hmotnosti. Stabilita kolagenové pěny je po lyofilizaci zvýšena máčením v roztoku 95 % hmota, ethanolu a vody s EDC a NHS při teplotě 25 °C po dobu 4 hodin. Na 1 g kolagenu se použilo 1,2 g EDC a 0,7 g NHS smísené se 160 ml 95 % hmota, roztoku ethanolu s vodou. Po zesíťování kolagenu je pěna promývána 0,5 M hydrogen fosforečnanem disodným po dobu alespoň 30 minut a dále promyta alespoň 20 minut v destilované vodě, zamražena na -15 °C po dobu 7 hodin a lyofilizována. Posledním krokem přípravy je impregnace pěny 95 % hmota, roztokem ethanolu s vodou obsahujícím odvážené množství směsi vankomycinu, gentamicinu a nitrofurantoinu v poměru 1:1:1 tak, aby jejich výsledné množství bylo 3 0 % hmota. Impregnovaná pěna j e poté zamražena na -60 °C, lyofilizována a nařezána na potřebné rozměry. Tímto postupem je získána pěna s výsledným množstvím kolagenu 70 % hmota, a 30 % hmota, antibiotik.
Příklad 9 - vysoce porézní pěna
Maximální doby rozpadu kolagenové pěny a maximální doby uvolňování aktivních látek (zde antibiotik)
Tab. 1 Dosažená maximální doba rozpadu kolagenové pěny při použití EDC v koncentraci 0,5 až 1,5 g (na 1 g kolagenu) podle použité teploty a doby expozice v síťovacím systému 95 % hmota, roztoku ethanolu s vodou EDC a NHS. NHS je k EDC v hmotnostním poměru 1:4. Základní parametry postupu jsou dle příkladu 2.
| dosažená maximální doba degradace | doba síťotání při teplotě 15-25°C | doba síťování při teplotě 30-40°C | maximální doba uvolňování antibiotik |
| 2 týdny | 6 hodin | 2 hodiny | 10 dnů |
| 4 týdny | 9 hodin | 3 hodiny | 15 dnů |
| 6 týdnů | 12 hodin | 4 hodiny | 20 dnů |
-8CZ 309204 B6
Příklad 10 - sendvičová kolagenová pěna
Při přípravě sendvičové kolagenové pěny se obecně postupuje tak, že se odvážené množství kolagenu, s výhodou izolovaného z kůže sladkovodních ryb, například z kapra obecného, smísí s deionizovanou vodou, po nabobtnání kolagenu při teplotě 5 až 15 °C po dobu 1 až 3 hodin je směs dvojnásobně homogenizována po dobu 1 až 20 minut při 5 až 15 000 ot/min s 20 minutovou prodlevou při teplotě 15 až 25 °C. Koncentrace kolagenové disperze pro přípravu jádra je 4 až 8 % hmota. Koncentrace pro přípravu okrajových částí je 0,1 až 3 % hmota., s výhodou 0,1 až 1 % hmota. V prvním krokuje výsledná 4 až 8 % hmota, disperze dávkována do forem, zamražena při teplotě -60 až -90 °C po dobu 3 až 8 hodin a lyofilizována do dosažení konstantní hmotnosti. Ve druhém kroku je tuhé jádro impregnováno 0,1 až 3% hmota, disperzí kolagenu ve formě a takto ponecháno 1-3 hodiny při teplotě 15 až 25 °C, zamraženo při teplotě -60 až -90 °C po dobu 3 až 8 hodin a lyofilizováno do dosažení konstantní hmotnosti, za získání sendvičové kolagenové pěny s málo porézním jádrem a vysoce porézními okrajovými vrstvami. Stabilita kolagenové sendvičové pěny je po lyofilizaci zvýšena máčením v roztoku 95 % hmota, ethanolu a vody s EDC a NHS při teplotě 25 až 40 °C, s výhodou 30 až 40 °C, nejvýhodněji při 37 °C po dobu 2 až 4 hodin. Na 1 g kolagenu pňpadá 0,5-1,5 g EDC a 0,125 až 0,750 g NHS smísené se 140 až 160 ml 95 % hmota, roztoku ethanolu s vodou. Po zesíťování kolagenu je pěna promývána 0,5 až 1,5 M hydrogen fosforečnanem disodným po dobu alespoň 30 minut a dále promyta alespoň 20 minut v destilované vodě, zamražena na -15 až -30 °C po dobu 5 až 7 hodin a lyofilizována. Konečné objemové množství málo porézního jádra v sendvičové pěně je 40 až 60 %. Posledním krokem přípravy podle výhodného provedení je impregnace sendvičové pěny 95 % hmota, roztokem ethanolu s vodou obsahujícím odvážené množství aktivních látek, například antibiotik vybraných ze skupiny zahrnující vankomycin, gentamicin, rifampicin, nitrofurantoin, nebo jejich kombinace tak, aby jejich výsledné množství bylo 30 až 60 % hmota. Impregnovaná pěna může být poté zamražena a lyofilizována. Sendvičová pěna může být také impregnována vybranými antibiotiky teprve před její aplikací, pro což se použije vodný roztok antibiotik nebo se antibiotika smísí s fýziologickým roztokem a pěna se aplikuje po jejich odpaření, tedy po dosažení konstantní hmotnosti pěny. Tímto postupem je získána pěna s výsledným množstvím kolagenu 40 až 60 % hmota, a 40 až 60 % hmota, antibiotik.
Příklad 11 - sendvičová kolagenová pěna
Při přípravě sendvičové kolagenové pěny se postupuje tak, že se odvážené množství kolagenu smísí s deionizovanou vodou v koncentraci 5 % hmota, kolagenu, po nabobtnání kolagenu při teplotě 10 °C po dobu 2 hodin je směs dvojnásobně homogenizována po dobu 10 minut při 10 000 ot/min s 20 minutovou prodlevou při teplotě 20 °C. Výsledná 5% hmota, disperze je dávkována do forem, zamražena při teplotě -80 °C po dobu 6 hodin a lyofilizována do dosažení konstantní hmotnosti, za vzniku tuhého, málo porézního jádra. Ve druhém kroku je tuhé jádro impregnováno 1% hmota, disperzí kolagenu ve formě, přičemž objemový poměr obou disperzí (disperze pro přípravu jádra a disperze pro přípravu okrajových částí) je 1:1, a takto je ponecháno 2 hodiny při teplotě 20 °C, zamraženo při teplotě -80 °C po dobu 6 hodin a lyofilizováno do dosažení konstantní hmotnosti za získání sendvičové pěny sestávající z málo porézního jádra a vysoce porézních okrajových vrstev. Stabilita kolagenové sendvičové pěny je po lyofilizaci zvýšena máčením v roztoku 95 % hmota, ethanolu a vody s EDC a NHS při teplotě 37 °C po dobu 2 hodin. Na 1 g kolagenu se použil 1 g EDC a 0,250 g NHS smísené se 150 ml 95 % hmota, roztoku ethanolu s vodou. Po zesíťování kolagenu je pěna promývána 1 M hydrogen fosforečnanem disodným po dobu alespoň 30 minut a dále promyta alespoň 20 minut v destilované vodě, zamražena na -20 °C po dobu 6 hodin a lyofilizována. Konečné objemové množství málo porézního jádra v sendvičové pěně je 50 %. Posledním krokem přípravy je impregnace sendvičové pěny 95 % hmota, roztokem ethanolu s vodou obsahujícím odvážené množství antibiotik vybraných ze skupiny zahrnující vankomycin, gentamicin, rifampicin, nitrofurantoin, nebo jejich kombinace tak, aby jejich výsledné množství bylo 45 % hmota. Impregnovaná pěna může být poté zamražena a lyofilizována. Tímto postupem je získána pěna s výsledným množstvím kolagenu 55 % hmota, a 45 % hmota, antibiotik.
-9CZ 309204 B6
Příklad 12 - sendvičová kolagenová pěna
Postupuje se stejně jako v příkladu 11, ale doba síťování je 3 hodiny.
Příklad 13 - sendvičová kolagenová pěna
Postupuje se stejně jako v příkladu 11, ale doba síťování je 4 hodiny.
Příklad 14 - sendvičová kolagenová pěna
Postupuje se jako v příkladu lis výjimkou posledního kroku přípravy, tj. pěna se neimpregnuje roztokem obsahujícím aktivní látku. Pěna se zamrazí na -70 °C, lyofílizuje a nařeže na potřebné rozměry. Tímto postupem je získána sendvičová pěna sestávající z čistého kolagenu.
Příklad 15 - sendvičová kolagenová pěna
Odvážené množství kolagenu se smísí s deionizovanou vodou v koncentraci 4 % hmotn., po nabobtnání kolagenu při teplotě 15 °C po dobu 1 hodiny je směs dvojnásobně homogenizována po dobu 15 minut při 8000 ot/min s 20 minutovou prodlevou při teplotě 15 °C. V prvním krokuje výsledná 4% hmotn. disperze dávkována do forem, zamražena při teplotě -75 °C po dobu 4 hodin a lyofilizována do dosažení konstantní hmotnosti, za získání tuhého jádra. Ve druhém krokuje tuhé jádro impregnováno 0,6% hmotn. disperzí kolagenu ve formě, přičemž poměr disperze pro přípravu jádra k disperzi pro přípravu okrajových vrstev je 2:3, a takto ponecháno 1 hodinu při teplotě 25 °C, zamraženo při teplotě -75 °C po dobu 4 hodin a lyofilizováno do dosažení konstantní hmotnosti za získání sendvičové pěny sestávající z málo porézního jádra a vysoce porézních okrajových vrstev. Stabilita kolagenové sendvičové pěny je po lyofilizaci zvýšena máčením v roztoku 95 % hmotn. ethanolu a vody s EDC a NHS při teplotě 37 °C po dobu 3 hodin. Na 1 g kolagenu se použilo 0,7 g EDC a 0,2 g NHS smísené se 140 ml 95 % hmotn. roztoku ethanolu s vodou. Po zesíťování kolagenu je pěna promývána 0,8 M hydrogen fosforečnanem disodným po dobu alespoň 30 minut a dále promyta alespoň 20 minut v destilované vodě, zamražena na -30 °C po dobu 5 hodin a lyofilizována. Konečné objemové množství málo porézního jádra v sendvičové pěně je 40 %. Posledním krokem přípravy je impregnace sendvičové pěny 95 % hmotn. roztokem ethanolu s vodou obsahujícím odvážené množství antibiotik vybraných ze skupiny zahrnující vankomycin, gentamicin, rifampicin, nitrofurantoin, nebo jejich kombinace tak, aby jejich výsledné množství bylo 30 % hmotn. Impregnovaná pěna může být poté zamražena a lyofilizována. Tímto postupem je získána pěna s výsledným množstvím kolagenu 70 % hmotn. a 30 % hmotn. antibiotik.
Příklad 16 - sendvičová kolagenová pěna
Odvážené množství kolagenu se smísí s deionizovanou vodou v koncentraci 7 % hmotn., po nabobtnání kolagenu při teplotě 12 °C po dobu 2,5 hodin je směs dvojnásobně homogenizována po dobu 20 minut při 15 000 ot/min s 20 minutovou prodlevou při teplotě 25 °C. V prvním kroku je výsledná 7% hmotn. disperze dávkována do forem, zamražena při teplotě -85 °C po dobu 3 hodin a lyofilizována do dosažení konstantní hmotnosti, za získání tuhého jádra. Ve druhém krokuje tuhé jádro impregnováno 1% hmotn. disperzí kolagenu ve formě (poměr disperze pro přípravu jádra k disperzi pro přípravu okrajových vrstev je 3:2) a takto ponecháno 2,5 hodiny při teplotě 25 °C, zamraženo při teplotě -85 °C po dobu 3 hodin a lyofilizováno do dosažení konstantní hmotnosti za získání sendvičové pěny sestávající z málo porézního jádra a vysoce porézních okrajových vrstev. Stabilita kolagenové sendvičové pěny je po lyofilizaci zvýšena máčením v roztoku 95 % hmotn. ethanolu a vody s EDC a NHS při teplotě 37 °C po dobu 3 hodin. Na 1 g kolagenu se použilo 1,4 g EDC a 0,7 g NHS smísené se 160 ml 95 % hmotn. roztoku ethanolu s vodou. Po zesíťování kolagenu je pěna promývána 1,5 M hydrogen fosforečnanem disodným po dobu alespoň 30 minut a dále promyta alespoň 20 minut v destilované vodě, zamražena na -30 °C po dobu 5 hodin a
-10 CZ 309204 B6 lyofilizována. Konečné objemové množství málo porézního jádra v sendvičové pěně je 60 %. Posledním krokem přípravy je impregnace sendvičové pěny 95% hmotn. roztokem ethanolu s vodou obsahujícím odvážené množství antibiotik vybraných ze skupiny zahrnující vankomycin, gentamicin, rifampicin, nitrofurantoin, nebo jejich kombinace tak, aby jejich výsledné množství bylo 30 % hmotn. Impregnovaná pěna může být poté zamražena a lyofilizována. Tímto postupem je získána pěna s výsledným množstvím kolagenu 70 % hmotn. a 30 % hmotn. antibiotik.
Příklad 17 - sendvičová kolagenová pěna
Odvážené množství kolagenu se smísí s deionizovanou vodou v koncentraci 8 % hmotn., po nabobtnání kolagenu při teplotě 20 °C po dobu 3 hodin je směs dvojnásobně homogenizována po dobu 20 minut při 6000 ot/min s 20 minutovou prodlevou při teplotě 25 °C. V prvním kroku je výsledná 8% hmotn. disperze dávkována do forem, zamražena při teplotě -80 °C po dobu 3 hodin a lyofilizována do dosažení konstantní hmotnosti, za získání tuhého jádra. Ve druhém krokuje tuhé jádro impregnováno 1,5% hmotn. disperzí kolagenu ve formě (poměr disperze pro přípravu jádra k disperzi pro přípravu okrajových vrstev je 7:3) a takto ponecháno 2 hodiny při teplotě 25 °C, zamraženo při teplotě -80 °C po dobu 3 hodin a lyofilizováno do dosažení konstantní hmotnosti za získání sendvičové pěny sestávající z málo porézního jádra a vysoce porézních okrajových vrstev. Stabilita kolagenové sendvičové pěny je po lyofilizaci zvýšena máčením v roztoku 95 % hmotn. ethanolu a vody s EDC a NHS při teplotě 37 °C po dobu 2 hodin. Na 1 g kolagenu se použilo 1,4 g EDC a 0,35 g NHS smísené se 160 ml 95 % hmotn. roztoku ethanolu s vodou. Po zesíťování kolagenu je pěna promývána 1,5 M hydrogen fosforečnanem disodným po dobu alespoň 30 minut a dále promyta alespoň 20 minut v destilované vodě, zamražena na -30 °C po dobu 5 hodin a lyofilizována. Konečné objemové množství málo porézního jádra v sendvičové pěně je 70 %. Posledním krokem přípravy je impregnace sendvičové pěny 95 % hmotn. roztokem ethanolu s vodou obsahujícím odvážené množství antibiotik vybraných ze skupiny zahrnující vankomycin, gentamicin, rifampicin, nitrofurantoin, nebo jejich kombinace tak, aby jejich výsledné množství bylo 30 % hmotn. Impregnovaná pěna může být poté zamražena a lyofilizována. Tímto postupem je získána pěna s výsledným množstvím kolagenu 70 % hmotn. a 30 % hmotn. antibiotik.
Příklad 18 - sendvičová kolagenová pěna
V tabulce 2 jsou dosažené maximální doby rozpadu sendvičové kolagenové pěny a maximální doby uvolňování antibiotik, doba a teplota síťování, přičemž příprava sendvičové pěny se provedla dle příkladu 11 s proměnnými konečnými objemovými množstvími málo porézního jádra v sendvičové pěně 40 %, 50 %, 60 %, tj. s proměnnými poměry výchozích disperzí (2:3, 1:1, 3:2).
Tab. 2
| objemový podíl jádra | doba síťování při teplotě 15 až | doba síťování při teplotě 30 až llllllilillillllllli | dosažená maximální doba degradace | maximální doba uvolňování antibiotik |
| 40% | 6 hodin | 2 hodiny | 4 týdny | 21 dnů |
| 9 hodin | 3 hodiny | 6 týdnů | 25 dnů | |
| 12 hodin | 4 hodiny | 8 týdnů | 30 dnů | |
| 50% | 6 hodin | 2 hodinv | 5 tvdnv | 31 dnu |
| 9 hodin | 3 hodinv | 7 tvdnv | 35 dnu | |
| 12 hodin | 4 hodinv | 9 tvdnu | 40 dnu | |
| 60% | 6 hodin | 2 hodiny | 6 týdny | 41 dnů |
| 9 hodin | 3 hodiny | 8 týdny | 45 dnů | |
| 12 hodin | 4 hodiny | 10 týdnů | 50 dnů |
-11 CZ 309204 B6
Příklad 19 - kompozitní kolagenní pěna
Při přípravě nanostrukturované vysoce porézní kompozitní kolagenní pěny se obecně postupuje tak, že je nejprve připravena nanovlákenná kolagenová vrstva, a to elektrostatickým zvlákňo váním 5 až 11 % hmota., s výhodou 6 až 10 % hmota, roztoku kolagenu s obsahem polyethylen oxidu (PEO; Mr 400 000 až 900 000) v poměru PEO ku kolagenu v rozmezí 0,05 až 0,11, fosfátového pufru a ethanolu (1:1 až 1:2 objemově). Zvlákňování probíhá v elektrostatickém poli 200 až 300kV.m-1 s dávkováním 100 až 200 μΐ/min a teplotě ne vyšší než 37 °C. Stabilita vrstvy je zvýšena máčením v roztoku 95 % hmota, ethanolu a vody s EDC aNHS při teplotě 25 až 40 °C, s výhodou 37 °C po dobu 2 až 4 hodin. Na 1 g kolagenu připadá 0,5 až 1,5 g EDC a 0,125 až 0,750 g NHS smísené se 140 až 160 ml 95 % hmota, roztoku ethanolu s vodou. Po zesíťování kolagenu je vrstva promývána 0,5 až 1,5 M hydrogen fosforečnanem disodným po dobu alespoň 30 minut a dále promyta alespoň 20 minut v destilované vodě. Při tomto procesu dojde k vyplavení pomocného polymeru. Dále je vrstva zamražena na -15 až -30 °C po dobu 5 až 7 hodin a lyofilizována. V dalším kroku je zvlákněná vrstva, resp. několik přes sebe položených vrstev, ponecháno v 0,1 až 3 % hmota, disperzi kolagenu po dobu 1 až 3 hodin při teplotě 15 až 25 °C. Za těchto podmínek dojde k prosycení zvlákněné vrstvy/zvlákněných vrstev kolagenovou disperzí, po čemž následuje zamražení na teplotu -60 až -90 °C po dobu 3 až 8 hodin a lyofílizace do dosažení konstantní hmotnosti, za získání kolagenové kompozitní pěny. Stabilita kolagenové kompozitní pěny je po lyofilizaci zvýšena máčením v roztoku 95 % hmota, ethanolu a vody s EDC a NHS při teplotě 25 až 40 °C po dobu 2 až 4 hodin. Na 1 g kolagenu připadá 0,5 až 1,5 g EDC a 0,125 až 0,750 g NHS smísené se 140 až 160 ml 95 % hmota, roztoku ethanolu s vodou. Po zesíťování kolagenu je pěna promývána 0,5 až 1,5 M hydrogen fosforečnanem disodným po dobu alespoň 30 minut a dále promyta alespoň 20 minut v destilované vodě, zamražena na -15 až -30 °C po dobu 5 až 7 hodin a lyofilizována. Konečné objemové množství kolagenové nanovlákenné vrstvy v kompozitu je 20 až 60 %. Posledním, volitelným krokem přípravy je impregnace kompozitní pěny 95 % hmota, roztokem ethanolu s vodou obsahujícím odvážené množství aktivních látek, například antibiotik, s výhodou vybraných ze skupiny zahrnující vankomycin, gentamicin, rifampicin, nitrofurantoin, nebo jejich kombinace tak, aby jejich výsledné množství bylo 30 až 60 % hmota. Impregnovaná pěna může být poté zamražena a lyofilizována. Impregnace vybranými antibiotiky může být uskutečněna teprve před její aplikací, pro což se použije vodný roztok antibiotik nebo se antibiotika smísí s fýziologickým roztokem a pěna se aplikuje po jejich odpaření, tedy po dosažení konstantní hmotnosti pěny. Tímto postupem je získána pěna s výsledným množstvím kolagenu 40 až 70 % hmota, a 30 až 60 % hmota, antibiotik.
Příklad 20 - kompozitní kolagenní pěna
Při přípravě nanostrukturované vysoce porézní kompozitní kolagenní pěny se postupuje tak, že se nejprve připraví nanovlákenná kolagenová vrstva elektrostatickým zvlákňováním 8% hmota, roztoku kolagenu s fosfátovým pufrem a ethanolem (1:1 objemově), do kterého je přidán polyethylenoxid v hmotnostním poměru 0,08 ku kolagenu (Mr 700 000). Zvlákňování probíhá v elektrostatickém poli 270 kV.m1, dávkování 150 pl.min1 a při teplotě 25 °C. Stabilita vrstvy je zvýšena máčením v roztoku 95 % hmota, ethanolu a vody s EDC a NHS při teplotě 37 °C po dobu 2 hodin. Na 1 g kolagenu připadá 1 g EDC a 0,250 g NHS smísené se 150 ml 95 % hmota, roztoku ethanolu s vodou. Po zesíťování kolagenu je vrstva promývána IM hydrogen fosforečnanem disodným po dobu alespoň 30 minut a dále promyta alespoň 20 minut v destilované vodě. Při tomto procesu dojde k vyplavení pomocného polymeru. Dále je vrstva zamražena na -25 °C po dobu 6 hodin a lyofilizována. V dalším kroku je zvlákněná vrstva ponechána v 1 % hmota, disperzi kolagenu po dobu 2 hodin při teplotě 25 °C. Za těchto podmínek dojde k prosycení zvlákněné vrstvy kolagenovou disperzí, po čemž následuje zamražení na teplotu -80 °C po dobu 5 hodin a lyofílizace do dosažení konstantní hmotnosti. Stabilita kolagenové kompozitní pěny je po lyofilizaci opět zvýšena máčením v roztoku 95 % hmota, ethanolu a vody s EDC a NHS při teplotě 37 °C po dobu 2 hodin. Na 1 g kolagenu připadá 1 g EDC a 0,250 g NHS smísené se 150 ml 95 % hmota, roztoku ethanolu s vodou. Po zesíťování kolagenu je pěna promývána IM hydrogen
-12 CZ 309204 B6 fosforečnanem disodným po dobu alespoň 30 minut a dále promyta alespoň 20 minut v destilované vodě, zamražena na -25 °C po dobu 6 hodin a lyofilizována. Objemový poměr vlákenné vrstvy a disperze je 2:3, a proto i objemový poměr vlákenné vrstvy a pěny ve výsledném kompozitu je 2:3, tj. konečné objemové množství kolagenové nanovlákenné vrstvy v kompozitu je 40 %. Posledním krokem přípravy je impregnace kompozitní pěny 95 % hmotn. roztokem ethanolu s vodou obsahujícím odvážené množství vankomycinu tak, aby jeho výsledné množství bylo 45 % hmotn. Impregnovaný kompozit se poté zamrazí na -25 °C po dobu 6 hodin a lyofilizuje. Tímto postupem je získána kompozitní pěna s výsledným množstvím kolagenu 55 % hmotn. a 45 % hmotn. antibiotik.
Příklad 21 - kompozitní kolagenní pěna
Při přípravě nanostrukturované vysoce porézní kompozitní kolagenní pěny se postupuje tak, že se nejprve připraví nanovlákenná kolagenová vrstva jako v příkladu 20. Stabilizace, zamražení a lyofilizace se provede také jako v příkladu 2. Výsledná vrstva se nařeže na menší díly, například 5 x 10 cm, které se položí na sebe (5 nanovlákenných vrstev leží na sobě) a vloží se do 1% hmotn. disperze kolagenu na dobu 2 hodin při teplotě 25 °C. Za těchto podmínek dojde k prosycení zvlákněných vrstev kolagenovou disperzí, po čemž následuje zamražení na teplotu -70 °C po dobu 6 hodin a lyofilizace do dosažení konstantní hmotnosti. Stabilita kolagenové kompozitní pěny je po lyofilizaci opět zvýšena máčením v roztoku 95 % hmotn. ethanolu a vody s EDC a NHS při teplotě 37 °C po dobu 2 hodin. Na 1 g kolagenu připadá 1 g EDC a 0,250 g NHS smísené se 150 ml 95% hmotn. roztoku ethanolu s vodou. Po zesíťování kolagenu je pěna promývána IM hydrogen fosforečnanem disodným po dobu alespoň 30 minut a dále promyta alespoň 20 minut v destilované vodě, zamražena na -25 °C po dobu 6 hodin a lyofilizována. Objemový poměr všech vlákenných vrstev k disperzi je 2:3, a proto i objemový poměr vlákenných vrstev a pěny ve výsledném kompozitu je 2:3, tj. konečné objemové množství kolagenových nanovlákenných vrstev v kompozitu je 40 %. Posledním krokem přípravy je impregnace kompozitní pěny 95% hmotn. roztokem ethanolu s vodou obsahujícím odvážené množství směsi vankomycinu a gentamicinu tak, aby jejich výsledné množství bylo 30 % hmotn. Impregnovaný kompozit se poté zamrazí na -25 °C po dobu 6 hodin a lyofilizuje. Tímto postupem je získána kompozitní pěna s výsledným množstvím kolagenu 70 % hmotn. a 30 % hmotn. antibiotik.
Příklad 22 - kompozitní kolagenní pěna
Postupuje se stejně jako v příkladu 20, ale doba každého síťování (stabilizace) je 3 hodiny.
Příklad 23 - kompozitní kolagenní pěna
Postupuje se stejně jako v příkladu 20, ale doba každého síťování (stabilizace) je 4 hodiny.
Příklad 24 - kompozitní kolagenní pěna
Při přípravě nanostrukturované vysoce porézní kompozitní kolagenní pěny se postupuje tak, že se nejprve připraví nanovlákenná kolagenová vrstva jako v příkladu 20. Stabilizace, zamražení a lyofilizace se provede také jako v příkladu 20. Následně se šest takto připravených vrstev položí na sebe a vloží se do 0,8 % hmotn. disperze kolagenu na dobu 3 hodin při teplotě 20 °C. Za těchto podmínek dojde k prosycení nanovlákenných vrstev kolagenovou disperzí, po čemž následuje zamražení na teplotu -80 °C po dobu 4 hodin a lyofilizace do dosažení konstantní hmotnosti. Stabilita kolagenové kompozitní pěny je po lyofilizaci opět zvýšena máčením v roztoku 95% hmotn. ethanolu a vody s EDC a NHS při teplotě 30 °C po dobu 3 hodin. Na 1 g kolagenu připadá 1,40 g EDC a 0,350 g NHS smísené se 150 ml 95 % hmotn. roztoku ethanolu s vodou. Po zesíťování kolagenu je pěna promývána 1,2M hydrogen fosforečnanem disodným po dobu alespoň 30 minut a dále promyta alespoň 20 minut v destilované vodě, zamražena na -30 °C po dobu 6 hodin a lyofilizována. Objemový poměr všech vlákenných vrstev k disperzi je 1:4, a proto i objemový poměr vlákenných vrstev a pěny ve výsledném kompozitu je 1:4, tj. konečné objemové množství
-13 CZ 309204 B6 kolagenových nanovlákenných vrstev v kompozitu je 20 %. Posledním krokem přípravy je impregnace kompozitní pěny 95% hmoto, roztokem ethanolu s vodou obsahujícím odvážené množství gentamicinu tak, aby jeho výsledné množství bylo 50 % hmota. Impregnovaný kompozit se poté zamrazí na -25 °C po dobu 6 hodin a lyofilizuje. Tímto postupem je získána kompozitní pěna s výsledným množstvím kolagenu 50 % hmota, a 50 % hmota, antibiotik.
Průmyslová využitelnost
Degradovatelné kolagenní pěny s hemostatickými účinky, s řízenou dobou degradace a s řízeným lokálním uvolňováním antibiotik podle tohoto užitného vzoru lze využít v humánní a veterinární medicíně, zejména v chirurgii, ortopedii, traumatologii a plastické chirurgii. Použití samotné pěny je vhodné v případech, kdy se jedná o potenciálně infekční terén, například hrozí riziko vzniku infekce při operaci nebo ošetření otevřené rány nebo vředu. V některých případech lze použít jen samotné kolagenové krytí díky jeho hemokoagulačním účinkům. Přídavek aktivních látek, například antibiotik pak slouží jako rychlá, krátkodobá prevence. Rychlejší je i doba rozpadu. Sendvičové kolagenní pěny s málo porézním jádrem a vysoce porézními okrajovými vrstvami s hemostatickými účinky, s řízenou dobou degradace a s řízeným lokálním uvolňováním antibiotik podle tohoto užitného vzoru lze využít v humánní a veterinární medicíně, zejména v chirurgii, ortopedii, krytí ran, léčbě bércových vředů, traumatologii a plastické chirurgii. Vhodná je zejména u méně rozsáhlých zánětů nebo v potenciálně infekčním terénu, tedy tam, kde je zapotřebí nejprve rychlé uvolnění optimální dávky aktivní látky, a následně dlouhodobější účinek aktivní látky, díky kterému se zamezí opětovnému vzniku zánětu. Nanostruktarované vysoce porézní kompozitní kolagenní pěny s hemostatickými účinky, s řízenou dobou degradace a s řízeným lokálním uvolňováním antibiotik podle tohoto užitného vzoru lze využít v humánní a veterinární medicíně, zejména v chirurgii, ortopedii, traumatologii a plastické chirurgii. Kompozitní kolagenová pěna impregnovaná antibiotiky je vhodná zejména pro použití při vysokém riziku infekce, přičemž se vyznačuje rychlým a dlouhodobým uvolňováním antibiotik.
Claims (9)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Kolagenní kompozit pro řízené uvolňování aktivních látek, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jednu vrstvu vysoce porézní pěny, která obsahuje kolagen typu I a má otevřenou porozitu v rozmezí 70 až 90 % a střední hodnotu velikosti pórů 50 až 200 pm, přičemž alespoň 50 % obj. pórů má velikost póru nad 80 pm, a alespoň jednu nanovlákennou kolagenní vrstvu, kde průměr vláken nanovlákenné vrstvy je v rozmezí 100 až 350 nm.
- 2. Kolagenní kompozit podle nároku 1, vyznačuj ící se tím, že vysoce porézní vrstva má otevřenou porozitu v rozmezí 80 až 90 % a/nebo že kompozit je uspořádán do více než dvou vrstev, přičemž všechny nanovlákenné vrstvy dohromady tvoří 20 až 60 % obj. vzhledem k celkovému objemu kompozitu.
- 3. Kolagenní kompozit podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že kompozit je uspořádán do alespoň pěti vrstev, kde se pravidelně střídají vrstva vysoce porézní pěny s nanovlákennou vrstvou, přičemž všechny nanovlákenné vrstvy dohromady tvoří 20 až 60 % obj. vzhledem k celkovému objemu kompozitu.
- 4. Kolagenní kompozit podle kteréhokoli z předchozích nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že dále obsahuje alespoň jednu aktivní látku a že hmotnostní poměr kolagenu k celkovému množství aktivních látek v kolagenní pěně je v rozmezí 2:3 až 7:3.
- 5. Způsob přípravy kolagenního kompozitu definovaného v nároku 1, vyznačující se tím, že se nejprve elektrostatickým zvlákňováním připraví nanovlákenná kolagenová vrstva, která se stabilizuje chemickým síťováním, načež se promyje, zamrazí na teplotu -60 až -90 °C po dobu 3 až 8 hodin a lyofilizuje, poté se nanovlákenná kolagenová vrstva ponechá v 0,1 až 3 % hmotn. disperzi kolagenu po dobu 1 až 3 hodin při teplotě 15 až 25 °C, následně se zamrazí na teplotu -60 až -90 °C po dobu 3 až 8 hodin a lyofilizuje za vzniku kolagenové kompozitní pěny, která se poté stabilizuje fýzikálním nebo chemickým síťováním, načež se promyje, zamrazí a lyofilizuje.
- 6. Způsob přípravy podle nároku 5, kolagenního kompozitu definovaného v nároku 2, vyznačující se tím, že se nejprve elektrostatickým zvlákňováním připraví nanovlákenná kolagenová vrstva, která se stabilizuje chemickým síťováním, načež se promyje, zamrazí na teplotu -60 až -90 °C po dobu 3 až 8 hodin a lyofilizuje, poté se dvě nebo více takto připravených nanovlákenných vrstev položených na sobě ponechá v 0,1 až 3 % hmotn. disperzi kolagenu po dobu 1 až 3 hodin při teplotě 15 až 25 °C, následně se zamrazí na teplotu -60 až -90 °C po dobu 3 až 8 hodin a lyofilizuje za vzniku kolagenové kompozitní pěny, která se poté stabilizuje fýzikálním nebo chemickým síťováním, načež se promyje, zamrazí a lyofilizuje.
- 7. Způsob přípravy kolagenního kompozitu podle nároku 5 nebo 6, vyznačující se tím, že síťování je chemické a provede se máčením pěny v roztoku 95 % hmotn. ethanolu a vody s N-(3dimethylaminopropyl)-/V-ethylkarbodiimid hydrochloridem a A-hydroxysukcinimidem při teplotě 25 až 40 °C po dobu 2 až 4 hodin.
- 8. Způsob přípravy kolagenního kompozitu podle nároku 7, vyznačující se tím, že při síťování je na 1 g kolagenu množství A-(3-dimethylaminopropyl)-A-ethylkarbodiimid hydrochloridu 0,5 až 1,5 g a množství A-hydroxysukcinimidu je 0,125 až 0,750 g.
- 9. Způsob přípravy podle nároku 5 kolagenního kompozitu definovaného v nároku 4, vyznačující se tím, že se kompozit po poslední lyofilizací impregnuje 95% hmotn. roztokem ethanolu s vodou-15 CZ 309204 B6 obsahujícím jednu nebo více aktivních látek, s výhodou vybranou ze skupiny zahrnující antibiotikum, anestetikum, antiagregans, antivirotikum, nebo jejich směs, s výhodou antibiotikum.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ202155A CZ309204B6 (cs) | 2019-12-17 | 2019-12-17 | Kolagenní kompozit pro řízené uvolňování aktivních látek a způsob jeho přípravy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ202155A CZ309204B6 (cs) | 2019-12-17 | 2019-12-17 | Kolagenní kompozit pro řízené uvolňování aktivních látek a způsob jeho přípravy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ202155A3 CZ202155A3 (cs) | 2021-06-30 |
| CZ309204B6 true CZ309204B6 (cs) | 2022-05-18 |
Family
ID=76550787
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ202155A CZ309204B6 (cs) | 2019-12-17 | 2019-12-17 | Kolagenní kompozit pro řízené uvolňování aktivních látek a způsob jeho přípravy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ309204B6 (cs) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1990000060A1 (en) * | 1988-06-30 | 1990-01-11 | Collagen Corporation | Collagen wound healing matrices and process for their production |
| WO2013173906A1 (en) * | 2012-05-25 | 2013-11-28 | Queens' University At Kingston | Collagenous foam materials |
| EP2803371A1 (en) * | 2012-01-12 | 2014-11-19 | Nippi Incorporated | Collagen structure, and method for producing collagen structure |
| CZ20131079A3 (cs) * | 2013-12-30 | 2015-07-08 | Student Science, s. r. o. | 3 D kolagenové porézní kompozitní nosiče buněk pro akcelerovanou regeneraci kostí |
-
2019
- 2019-12-17 CZ CZ202155A patent/CZ309204B6/cs unknown
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1990000060A1 (en) * | 1988-06-30 | 1990-01-11 | Collagen Corporation | Collagen wound healing matrices and process for their production |
| EP2803371A1 (en) * | 2012-01-12 | 2014-11-19 | Nippi Incorporated | Collagen structure, and method for producing collagen structure |
| WO2013173906A1 (en) * | 2012-05-25 | 2013-11-28 | Queens' University At Kingston | Collagenous foam materials |
| CZ20131079A3 (cs) * | 2013-12-30 | 2015-07-08 | Student Science, s. r. o. | 3 D kolagenové porézní kompozitní nosiče buněk pro akcelerovanou regeneraci kostí |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Collagen Based Multilayer Scaffolds for Meniscus Tissue Engineering: In Vivo Test Results Biomaterials and Medical Applications 2 (1) DOI:10.4172/2577-0268.1000112 https://www.scitechnol.com/peer-review/collagen-based-multilayer-scaffolds-for-meniscus-tissue-engineering-in-vivo-test-results-e5gs.php?article_id=7159 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ202155A3 (cs) | 2021-06-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Priya et al. | Bilayer cryogel wound dressing and skin regeneration grafts for the treatment of acute skin wounds | |
| Thu et al. | Alginate based bilayer hydrocolloid films as potential slow-release modern wound dressing | |
| CN1320931C (zh) | 含药物、壳聚糖的聚乙烯醇水凝胶敷料及其制备方法 | |
| JP2008504912A (ja) | 非接着性ヒドロゲル | |
| KR101717585B1 (ko) | 약물 방출 조절이 가능한 스캐폴드 | |
| Egozi et al. | Biodegradable soy wound dressings with controlled release of antibiotics: Results from a guinea pig burn model | |
| KR100947765B1 (ko) | 조직수복재료로서의 콜라겐 기반 매트릭스 및 이의 제조방법 | |
| Shahriari-Khalaji et al. | Physicochemically Cross-linked injectable hydrogel: an adhesive skin substitute for burned wound therapy | |
| KR100748348B1 (ko) | 방사선 조사기술을 이용한 상처 치료용 수화겔의 제조방법 | |
| Yue et al. | A bacteria-resistant and self-healing spray dressing based on lyotropic liquid crystals to treat infected post-operative wounds | |
| EP4059527B1 (en) | Composite collagen sponge for controlled release of active substances, and method of preparation thereof | |
| JPH08506497A (ja) | 他の薬物学的活性物質と組み合わせたヒアルロン酸のエステル誘導体からなるスポンジ状材料を含んでなる薬学的組成物 | |
| KR101068967B1 (ko) | 조직수복재료로서의 콜라겐 기반 매트릭스의 제조방법 | |
| KR101576244B1 (ko) | 알로인을 함유하는 하이드로겔 기반의 창상피복제용 조성물과 이의 제조방법 | |
| Jacobsen | Update on wound dressings: indications and best use | |
| CN112546282A (zh) | 一种阳离子聚合物医用抗菌敷料及制备方法 | |
| CZ309204B6 (cs) | Kolagenní kompozit pro řízené uvolňování aktivních látek a způsob jeho přípravy | |
| Bhoopathy et al. | A comprehensive review on natural therapeutics for Wound Treatment | |
| CZ33802U1 (cs) | Nanostrukturovaná vysoce porézní kompozitní kolagenní pěna pro řízené uvolňování aktivních látek | |
| CZ34045U1 (cs) | Degradovatelná vysoce porézní kolagenní pěna pro řízené uvolňování aktivních látek | |
| CZ33755U1 (cs) | Sendvičová kolagenní pěna s málo porézním jádrem a vysoce porézními okrajovými vrstvami pro řízené uvolňování aktivních látek | |
| US11389558B2 (en) | Transparent wound dressings containing thymol nanoparticles | |
| Olami et al. | Novel soy protein blend scaffolds loaded with antibiotics: Drug release profile—bacterial inhibition effects | |
| JP2023534315A (ja) | 混合ポリビニルアルコール薬物送達システム | |
| KR20110055535A (ko) | 지혈제로서 콜레스테릴 설페이트를 포함하는 조성물 |