CZ323497A3

CZ323497A3 - Farmaceutický prostředek obsahující benzimidazol pro inhibici růstu karcinomu

Info

Publication number: CZ323497A3
Application number: CZ973234A
Authority: CZ
Inventors: James Berger Camden
Original assignee: The Procter & Gamble Company
Priority date: 1995-04-12
Filing date: 1996-04-11
Publication date: 1998-03-18
Also published as: IL117875A0; TR199701147T1; KR19980703828A; TR199801562T2; EP0821586A1; AU5389796A; CN1181010A; SK138497A3; CA2217952C; JPH11503459A; ATE242634T1; TW427887B; BR9604974A; JP2007284446A; HUP9801532A2; NO974695D0; PL322733A1; WO1996032107A1; EP0821586B1; DE69628645T2

Description

Farmaceutický přípravek s obsahem benzimidazolu inhibující rozvoj rakoviny

Oblast techniky

Vynález se týká farmaceutického přípravku, který inhibuje rozvoj rakoviny a růst nádorů, včetně leukemie u savců, * zejména u lidí a teplokrevných zvířat. Je rovněž účinný proti virům a použitelný při léčbě virových infekcí. Přípravek ^ř obsahuje derivát benzimidazolu.

Dosavadní stav techniky

Rakovina je velmi častou příčinou úmrtí u zvířat i lidí. Přesná příčina rakoviny není známa, ale jsou známy souvislosti mezi některými činnostmi jako je kouření nebo působení karcinogenů a výskytem určitých typů rakoviny a nádorů, a byly potvrzeny mnohými výzkumníky.

Existuje řada chemoterapeutik působících proti rakovinným a nádorovým buňkám, avšak ne všechny typy rakovinných a nádorových buněk jsou na ně citlivé. Naneštěstí mnoho chemoterapeutik rovněž ničí normální buňky. Přesný mechanismus účinku chemoterapeutik není vždy znám.

Nehledě k pokrokům v oblasti léčby rakoviny, jsou hlavními léčebnými postupy chirurgie, ozařování, chemoterapie a transplantace kostní dřeně. Chemoterapie se obvykle používá proti rakovinným metastázím, nebo ve velmi agresivních projevech rakoviny. Cytocidní nebo cytostatická léčiva jsou nejúčinnější proti typům rakoviny s vysokým růstovým faktorem, tj. kde dochází k rychlému buněčnému dělení. V současné době mohou onkologové volit z širokého spektra chemoterapeutik, zejména léčiva z oblasti hormonů, konkrétně estrogen, progesteron a testosteron, některá antibiotika produkovaná různými mikroby, alkylační činidla a antimetabolity. V ideálním případě by mělo cytotoxické léčivo působit ·· especificky proti rakovinným a nádorovým buňkám a neovlivňovat normální buňky. Bohužel žádné takové neexistuje a používají se látky působící proti rychle se dělícím rakovinným i normálním buňkám.

Je jasné že vývoj léčiv cílených nějaké jedinečné specifitě oblasti. buňkám a

Předmětem přípravek u savců, s na nádorové buňky díky bude výrazným úspěchem v této vědní látky cytotoxické vůči nádorovým mírné účinky na normální buňky, vynálezu je pravě farmaceutický nádorů a rozvoj rakoviny

Výhodné jsou i vykazující jen předkládaného uč inně inhibuj íc í ; mírnými nebo žádnými účinky na normální buňky. Konkrétně prot i rakovi nný a derivát a terapeutický postup léčby odpovídajících

Vývoj jedinečné oblasti.

buňkám a růst předmětem přípravek, který benzimidazolu, předkládaného obsahuje jak zde vynálezu je farmaceutický nosič bude definován,

Předmětem přípravek nebo žádné na typů rakoviny.

buňky díky nějaké výrazným úspěchem v této vědní cytotoxické vůči leukemickým účinky na normální buňky, farmaceutický leukemické léčiv cílených spec if i tě bude rovněž

Výhodné jsou i látky vykazující jen mírné předkládaného vynálezu je právě účinný při léčbě leukemie a vykazující účinky na normální krevní buňky.

Konkrétně jen mírné předmětem předkládaného vynálezu přípravek, který obsahuje farmaceutický a derivát benzimidazolu, jak zde bude definován, a terapeutický postup léčby leukemie.

Předkládané benzimidazolové přípravky používané spolu omezují rozvoj rakoviny i růst nádorů, Bylo zjištěno, že deriváty benzimidazolu působí proti rakovině, nádorům, virům i bakteriím. Použití předkládaných derivátů benzimidazolu v kombinaci s jinými chemoterapeutiky účinnými proti nádorům je novým terapeutickým postupem.

předkládaného vynálezu je přípravek, který obsahuje farmaceutický nosič benzimidazolu a chemoterapeutikum, jak zde bude definováno, a terapeutický postup léčby odpovídajících typů prot irakovi nný s chemoterapeutiky včetně leukemie.

zvláště účinně je nosič

Konkrétně proti rakov i nný a derivát předmětem • · ·· ··· · rakoviny. Tyto přípravky mohou obsahovat potenciátor.

Benzimidazolové přípravky jsou rovněž účinné proti virům a lze je použít při léčbě virových infekcí. Dalším předmětem předkládaného vynálezu je proto postup léčby virových infekcí působených viry HIV, chřipkovými viry a rhinoviry, zpočívající v podávání derivátů benzimidazolu spolu spotenciátorem.

Tento i další předměty předkládaného vynálezu budou patrné z dalšího podrobného popisu.

Podstata vynálezu

Farmaceutický přípravek na léčbu rakoviny a nádorů, včetně leukemie u savců a zejména u teplokrevných zvířat a lidí, obsahuje farmaceutický nosič a účinné množství protirakovinné látky vybrané ze skupiny zahrnující sloučeniny obecného vzorce I

kde X je vodík, halogen, Ci-C6 alkyl nebo C1-C6 alkoxy; n je kladné celé číslo menší než 4; Y je vodík, chlór, nitro, methyl nebo ethyl; R je vodík nebo C1-Ce alkyl a R2 je

4-thiazolyl, NHCOOR1, kde Ri je alifatický uhlovodík obsahující méně než 7 atomů uhlíku, výhodně C1 -Ce alkyl.

Tyto přípravky lze použít na inhibici rozvoje rakoviny a jiných nádorů u lidí nebo zvířat a lze je podávat v účinném množství perorálně, rektálně, topicky nebo parenterálně, intravenózně nebo injekčně přímo do nádoru. Tyto přípravky normální buňky významně neovlivňují, při porovnání s adriamyclnem, který na zdravé buňky působí zhoubně.

Předkládaný farmaceutický přípravek obsahující farmaceutický nosič, účinné množství chemoterapeutika a derivát benzimidazolu, je určen pro léčbu savců, zvláště teplokrevných zvířat a lidí.

Přípravek může obsahovat také potenciátor.

Přípravek výhodně obsahuje derivát benzimidazolu obecného vzorce II

kde R je Ci-Ce alkyl a R2 je vybráno ze skupiny obsahující

4-thiazoly1, NHCOOR1, kde R1 je methyl, ethyl nebo isopropy1 a netoxickou, farmaceuticky přijatelnou adiční sůl s organickými nebo anorganickými kyselinami. Nejvýhodnější sloučeniny jsou 2-(4-thiazolyljbenzimidazol, methyl(butylkarbamoyl)-2-benzimidazolkarbamát a 2-methoxykarbonylaminobenzimidazol a sloučeniny obecného vzorce I, kde Y je chlór.

Podrobný popis vynálezu

A. Definice:

Pojem “obsahující znamená, že v předkládaném přípravku mohou být současně upotřebeny různé uvedené složky. Pojem obsahující'“ zahrnuje pojmy sestávající v podstatě z a sestávající z.

Pojem farmaceuticky přijatelná složka je složka vhodná pro použití u lidí a/nebo zvířat bez nežádoucích vedlejších účinků (jako je toxicita, dráždivost a alergická reakce), s přiměřeným poměrem přínosu k riziku.

Pojem bezpečné a účinné množství znamená množství složky dostatečné k vyvolání očekávané terapeutické reakce, bez nežádoucích negativních vedlejších účinků (jako je toxicita, dráždivost a alergická reakce), s přiměřeným poměrem přínosu k riziku, při použití podle předkládaného postupu.

·· ····

Konkrétní výše bezpečného a účinného množství je samozřejmě závislá na takových faktorech jako konkrétní léčený stav, celkový stav pacienta, druh léčeného savce, povaha souběžné terapie (pokud existuje), konkrétní složení použitého přípravku a struktura sloučenin nebo jejich derivátů.

Pojem farmaceutické adiční soli jsou soli protirakovinné sloučeniny s organickými nebo anorganickými kyselinami. Výhodné kyselé adiční soli jsou chloridy, bromidy, sírany, dusičnany, fosforečnany, sulfonáty, formiáty, tartaráty, maleináty, maláty, citráty, benzoáty, salicyláty, askorbáty a pod. ··...

Pojem farmaceutický nosič je farmaceuticky přijatelné rozpouštědlo, suspenzní činidlo nebo přenašeč, včetně lipozómů, tedy látky, které dopravují protirakovinné léčivo do těl pacientů. Nosič může být kapalný nebo pevný a lze jej volit podle zamýšleného způsobu podávání.

Pojem rakovina zahrnuje všechny typy rakovinných onemocnění, novotvarů nebo zhoubných nádorů vyskytujících se u savců, včetně nádorů a leukemie. Mezi rakovinná onemocnění patří zhoubná onemocnění napadající normální zdravé buňky.

Leukemie je onemocnění savců, napadající normální zdravé krevní buňky a kostní dřeň produkující kostní buňky.

Pojem “protirakovinné sloučeniny zahrnuje deriváty benzimidazolu a jejich soli. Explicitně jsou deriváty benzimidazolu popsány dále. Výhodné látky jsou výrobky prodávaně pod obchodním názvem thiabendazole” ,benomyl”” a carbendazim” firem BASF a Hoechst, DuPont a MSD-AgVet.

Pojem viry zahrnuje viry infikující zvířata nebo savce, včetně lidí. Mezi tyto viry patří virus HIV, chřipky, polio virus,, herpes, rhinovirus, a pod..

Pojem chemoterapeutikum zahrnuje DNA-interaktivní látky, Antimetabolity, Tubulin-interaktivní látky. Hormonální i ' ' látky a jiné, např. Asparaginazu nebo hydroxymočovinu.

Pojem potenciátor' zahrnuje látky jako triprolidin a jeho cis-izomer a procodazol, které se používají v kombinaci

I s chemoterapeutiky a deriváty benzimidazolu.

• 9

Ir

B. Protirakovinné sloučeniny

Pro ti rakovi nné sloučeniny s antifungálními účinky. Jde o systémové preventivně před houbovými

Deriváty benzimidazolu jsou

I vzorce jsou deriváty benzimidazolu fungic i dy používané infekcemi a na jejich potlačení, sloučeniny strukturního obecného

kde X je vodík, halogen, Cí-Ca alkyl nebo Cí-Cs alkoxy; n je kladné celé číslo menší než 4; Y je vodík, chlór, nitro, methyl nebo ethyl; R je vodík nebo Cí-Ca alkyl a R2 je 4-thiazolyl, NHCOOR1, kde Ri je alifatický uhlovodík obsahující méně než 7 atomů uhlíku, výhodně C1-Ca alkyl.

Přípravek výhodně obsahuje derivát benzimidazolu obecného vzorce II

kde R je Cí-Ca alkyl a R2 je vybráno ze skupiny obsahující

4-thiazolyl, NHCOOR1, kde R1 je methyl, ethyl nebo isopropyl a netoxickou, farmaceuticky přijatelnou adiční sůl s organickými nebo anorganickými kyselinami.

Nejvýhodnější sloučeniny jsou 2-(4-thiazolyl)benzimidazol, methy1(buty1karbamoyl)-2-benzimi dazolkarbamát a 2-methoxykarbonylaminobenzimidazol a sloučeniny obecného vzorce I, kde Y je chlór a X je vodík.

Tyto sloučeniny lze připravit postupem podle U.S.

Ί ·· ··· ·

738 995, vyd. Adams et al., 12.6.1973. Thiazolylové deriváty lze připravit postupem podle Brouwn et al., J.Am.Chem.Soc., 83, 1764 (1961); Grenda et al., J.Org.Chem., 30, 289 (1965).

Je známo, že fungicidy, zejména systémové fungicidy mají schopnost zmenšovat nádory nebo podstatně omezovat jejich růst. Systémové fungicidy mohou v rostlinném nebo živočišném těle migrovat. Ač je tato vlastnost přínosná, není nezbytným atributem účinných látek v oboru léčby virových infekcí, rakoviny nebo nádorů.

C. Chemoterapeutika

Chemoterapeutika lze obecně rodělit na několik skupin, sice DNA-interaktivní látky, Antimetabolity, Tubulin-iriteraktivní látky. Hormonální látky a jiné, např. Asparagináza nebo hydroxymočovina. Každou z těchto skupin lze dále dělit z hlediska typu účinku nebo typu sloučeniny. Jako chemoterapeutika, používaná v sloučeninami nebo předkládanými volit látky ze všech o chemoterapeutikách a těchto kombinaci s protirakovinnými deriváty benzimidazolu, lze skupin. Podrobnější pojednání způsobech podávání lze nalézt v práci

Dorr, et al., Cancer

Chemotherapy Handbook,

2. vyd., str.

15-34, Appelton & v odkazech.

Lange (Connecticut,

1994), uvedeno

Mezi DNA-interaktivní látky patří alkylační činidla, např. Cisplatina, Cyklofosfamid, Altretamin; látky narušující řetězec DNA jako Bleomycin; interkalární inhibitory topoisomerázy II, např, Dactinomycin a Doxorubicin); ,non-interkalární inhibitory topoisomerázy II, např. Etoposid a Teniposid; a Plicamycin, který se váže v oblasti malé rýhy DNA.

Alkylační činidla tvoří kovalentní chemické adukty s buněčnou DNA, RNA a molekulami proteinů a s menšími aminokyselinami, glutathionem a podobými látkami. Obecně alkylační činidla reagují s nukleofilním atomem některé konstituční buněčné sloučeniny, nacházejícím se např. ve funkčních skupinách amino, karboxyl, fosfát a sulfhydryl ·· ···· v molekulách nukleových kyselin, proteinů, aminokyselin nebo glutathionu. Mechanismus účinku a úloha alkylačních činidel v terapaii rakoviny nejsou úplně vysvětleny. Typickými alkylačními činidly jsou:

Dusíkaté hořčice, jako Chlorambucil, Cyklofosfamid, Isofamid, Mechlorethamin, Melfalan, Uráčil;

aziridiny jako Thiotepa;

estery kyseliny methansulfonové jako Busulfan; nitrosomočoviny, jako Carmustin, Lomustin, Streptozocin; platinové komplexy jako Cisplatina, Carboplatina; bioredukční alkylační činidla jako Mitomycin, Procarbazin, Dacarbazin a Altretamin;

látky narušující řetězec DNA jako Bleomycin;

inhibitory DNA topolsomerázy II:

interkalátory jako Amsacrin, Dactinomycin, Daunorubicin, Doxorubicin, Idarubicin a Mitoxantron;

non-interkalátory Etoposid a Teniposid;

Plicamycin vážící se v oblasti malé rýhy DNA.

Antimetabolity zasahují do syntézy nukleových kyselin dvěma hlavními mechanismy. Některé látky inhibují syntézu deoxyribonukleosid trifosfátů, bezprostředních prekursorů syntézy DNA a tím inhibují replikaci DNA. Jiné sloučeniny natolik připomínají puriny či pyrimidiny, že je mohou v anabolických cestách nukleotidů nahrazovat. Tato analoga jsou pak inkorporována do DNA nebo RNA místo přirozených baží. Vhodnými antimetabolity jsou:

antagonisté folátů jako je Methotrexat a trimetrexat;

antagonisté pyrimidinů jako Fluorouraci1,

Fluorodeoxyuridin, CB3717, Azacytidin, Cytarabin a Floxuridin;

antagonisté purinů jako Merkaptopurin, 6-Thioguanin, Fludarabin, Pentostatin;

analoga s	modi f i kovaným	cukrem	jako Cyctrabin,
Fludarabin;
inhibitory	ribonukleotidové	reduktázy jako
hydroxymočovina.
Tubulin-interaktivní látky	působí	skrze vazbu na

specifická místa tubulinu, proteinu, který polymeruje za ··«· tvorby buněčných mikrotubulí. Mikrotubule jsou významné buněčné strukturní jednotky. Pokud se interaktivní látka naváže na protein, buňka nemůže mikrotubule vytvářet. Mezi Tubulin-interaktivní látky patří alkaloidy Vincristin a Vinblastin a Paclitaxel.

Látky hormonální povahy jsou často rovněž užitečné při léčbě rakoviny a nádorů. Používají se proti nádorům citlivým na hormony a obvykle pocházejí z přírodních zdrojů. Tyto látky zahrnují estrogeny, konjugované estrogeny a Ethinyl Estradiol a Diethylstilbestrol, Chlorotrianisen a Idenestrol;

progestiny jako Hydroxyprogesteron kaproát,

Medroxyprogesteron a Megestrol;

androgeny jako testosteron, testosteron propionát;

fluoxymesteron, methyltestosteron.

Adrenální kortikosteroidy pocházejí z přirozeného adrenálního kortisolu nebo hydrokorti zónu. Jsou používány pro své protizánětlivé účinky i pro schopnost některých z nich inhibovat mitotické dělení a zastavit syntézu DNA. Mezi tyto sloučeniny patří Prednison, Dexamethason, Methylprednison a Prednisolon.

Leutenizační hormon uvolňující hormonální činidla nebo anatgonisté hormonu uvolňujícího gonadotropin jsou primárně používány při léčbě rakoviny prostaty. Mezi tyto látky patří leuprolid acetát a goserelin acetát. Brání biosyntéze steroidů ve varlatech.

Mezi antihormonální antigeny patří:

antiestrogeny jako Tamosifen, antiandrogeny jako Flutamid; a antiadrenální látky jako Mitotan a Aminoglutethimid.

Hydroxymočovina pravděpodobně primárně inhibuje enzym ribonukleotidovou reduktázu.

Asparagináza je enzym který převádí asparagin na nefunkční kyselinu asparagovou a tak blokuje proteosyntézu v nádoru.

D. Potenciátory • « ·« • ·

Potenciátory jsou látky zlepšující nebo zvy suj i c í účinnost farmaceutického přípravku a/nebo imunosupresoru.

Potenciátor triprolidin a j eho cis-izomer se používají v kombinaci s chemoterapeutiky a benzimidazolem. Triprolidin je popsán v U.S. 5 114 951 (1992). Jiným potenciátorem je procodazol, lH-benzimidazol-2-propanová kyselina [β-(2-benžimidazol)propionová kyselina; 2-(2-karboxyethyl)benzimidazol; propazol]. Procodazol je nespecifická imunoprotektivní látka působící proti virové a bakteriální infekci a lze ji použít v předkládaných přípravcích.

V kombinaci s deriváty benzimidazolu nebo v kombinaci s deriváty benzimidazolu a chemoterapeutiky je účinná při léčbě rakoviny, nádorů, leukemie a virových infekcí.

V komibnaci s předkládanými nárokovanými přípravky lze rovněž použít kyselinu propionovou, její soli a estery.

Potenciátory rovněž zvyšují účinnost derivátů benzimidazolu při léčbě virových i jiných infekcí. Lze je použít v kombinaci s těmtito protirakovinnými léčivy v bezpečném a účinném množství. Vzniklé přípravky lze pacientům podávat perorálně, rektálně, topicky nebo parenterálně.

Spolu s předkládanými přípravky lze také podávat antioxidační vitaminy jako je kyselina askorbová, beta-karotén, vitamín A a E.

D. Dávkování

Předkládaný postup umožňuje libovolné vhodně dávkování. Typ sloučenin a nosičů a jejich množství je značně proměnlivé a závisí na druhu léčeného teplokrevného zvířete nebo člověka, typu rakovinného a nádorového onemocnění, a poměr použitého chemoterapeutika léčiva se řídí typem chemoterapeutika a léčeného onemocnění. Obvykle se vhodné dávky pohybují v rozmezí 2 až 400 mg/kg tělesné hmotnosti. Výhodné rozmezí pro deriváty benzimidazolu je 15 až 150 mg/kg tělesné hmotnosti. Pro chemoterapeutika je vhodnější nižší dávka, tj.

telesne hmotnosti, Dávkové rozmezí a proti rakovinného ·· ····

94»

• ·

0,5 až 400 mg/kg tělesné hmotnosti. Obecně platí, že dávka pro člověka je nižší, než dávka pro malé teplokrevné savce, např. myši. Dávková jednotka může obsahovat jednu sloučeninu nebo její směs s dalšími sloučeninami nebo jinými látkami inhibujíčími rozvoj rakoviny. Dávkové jednotky také zahrnují ředidla, nastavovadla, nosiče a podobně. Dávková jednotka může být v pevné nebo gelové formě jako pilulka, tableta, kapsle, lipozóm a pod., a v kapalné formě určené pro perorální, rektální, topické, intravenózní injekční nebo parenterální podávání nebo injekční podání přímo do nádoru nebo jeho okolí, nebo kostní dřeně a jejího okolí.

F. Dávkové formy a jejich podávání

Protirakovinné sloučeniny a chemoterapeutika se obvykle míchají š farmaceuticky přijatelným nosičem. Nosič může být pevný nebo kapalný nebo lipozóm, a jeho typ je volen zpravidla podle zamýšlené cesty podání. Účinná látka může být podávána v tabletách, kapslích, lipozómech nebo jako práškové aglomeráty, nebo v kapalné formě. Příkladem vhodných pevných nosičů jsou laktóza, sacharóza, želatina a agar. Kapsle nebo tablety lze snadno připravovat, lze je připravit ve formě dobře polykatelné, nebo určené ke žvýkání; mezi další pevné formy patří granule a práškové aglomeráty. Tablety obsahují vhodná pojivá, lubrikanty, ředidla, disintegrátory, barviva, aromatické přísady, činidla zvyšující tekutost a rozpustnost. Příkladem vhodných kapalných dávkových forem jsou roztoky nebo suspenze ve vodě, ve farmaceuticky přijatelných tucích a olejích, alkoholech i jiných organických rozpouštědlech včetně esterů, emulze, syrupy nebo elixíry, suspenze, roztoky a/nebo suspenze rekonstituované z neefervescentních granulí a efervescentní přípravky rekonstituované z efervescentních granulí. Kapalné dávkové formy mohou obsahovat například vhodná rozpouštědla, konzervační přísady, emulsifikátory, suspenzní činidla, ředidla, sladidla, zahušťovadla a činidla zvyšující rozpustnost. Perorální dávkové formy případně ještě obsahují aromatické přísady a

barviva

Parenterální ·· ···· • · · • · · ··· * • · ·· · ·· · · • · • · · • · •·· ··· · • · • ·· • · a intravenózní formy léčiv obsahují také minerální látky a další přísady, které zajišťují kompatibilitu léčiva se zvoleným typem injekce, nebo způsobem dodání dávkové formy.

Konkrétní příklady farmaceuticky přijatelných nosičů a excipientů, které lze použít při tvorbě perorálních dávkových forem předkládaného vynálezu, lze nalézt v U.S. 3 903 297, Robert, vyd. 2.9.1975. Postupy příprav a složení dávkových forem odpovídajících požadavkům předkládaného vynálezu jsou popsány v následujících odkazech: 7 Modern Pharmaceutics, kap. 9 a 10 (Bankéř & Rhodes, vyd., 1979); Lieberman et al., Pharmaceutical Dosage Forms; Tablets (1981); a Ansel, Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 2. vyd. (1976).

G. Způsoby léčby

Vhodný způsob léčby je každý způsob efektivní při léčbě určitého typu rakovinného a nádorového onemocnění. Léčba může být založena na perorálním, rektálním, topickém, parenterálním nebo intravenózním podávání léčiva, nebo na injekční aplikaci přímo do nádoru a pod. Způsob aplikace účinného množství též závisí na typu léčeného nádoru. Obecně platí, že výhodnějším způsobem podávání léčiv pro teplokreVné živočichy je parenterální léčba intravenózní, subkutánní nebo intramuskulární injekcí benzimodalových sloučenin doprovázených odpovídajícím nosičem, dalšími protirakovinnými sloučeninami nebo sloučeninami či ředidly na usnadnění aplikace.

Způsob léčby virových infekcí může být rovněž záložen na perorálním, rektálním, topickém, parenterálním nebo intravenózním podávání léčiva. Účinná doba léčby a dávka závisí na konkrétním léčeném virovém onemocnění a požadovaných krevních hladinách.

Uvedené systémové fungicidy mohou být použity samostatně nebo v kombinaci s dalšími fungicidy a chemoterapeutiky.

Dalšími vhodnými fungicidy jsou deriváty 1H-1,2,4-triazolu jako fluconazol a propiconazol a N-chlorfenylthiokarbamáty. V kombinaci s deriváty benzimidazolu lze rovněž • 9 9·· · použít herbicidy jako jsou deriváty N-fosfonoglycinu, např. glyfosát.

Následující příklady slouží jako ilustrace vynálezu, v žádném případě nejsou jeho vymezením.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Nádorové buňky tlustého střeva, prsu a plic

Následujícími testy na buněčných kulturách byla studována toxicita benzimidazolových sloučenin na nádorové buňky tlustého střeva, prsu a plic u člověka. Životaschopnost buněk byla testována vizuálně na redukci MTT (3-[4,5-dimethyl~ thiazol-2-yl]-2,5-difeny1tetrazolium bromid). Test MTT je známý postup stanovení životachopnosti buněk.

Nádorové buňky tlustého střeva (HT29 z Americké sbírky kultur ATCC) a prsu (MX1 z buněčné linie z ATCC) byly napěstovány v Eagleově minimálním základním mediu s 10 % fetálního hovězího séra. Nádorové buňky z plic (A549 z buněčné linie z ATCC) byly napěstovány v Hamově mediu F12 s 10 % fetálního hovězího séra.

Nádorové buňky byly pasážovány a naneseny do kultivačních lahví v požadované buněčné hustotě. Kultivační medium bylo dekantováno a buněčné vrstvy dvakrát opláchnuty fyziologickým roztokem pufrovaným fosfátem (PBS). Buňky byly před nanesením • do lahví trypsinizovány a triturovány. Pokud není uvedeno jinak, byly kultury inkubovány při 3.7 + 1 °C v atmosféře zvlhčeného vzduchu s obsahem 5+1 % oxidu uhličitého. Kultury byly inkubovány do 50-80% konfluence.

> Při subkonfluentní inkubaci byly buňky napěstovány nedostatečně. Medium bylo z lahví odstraněno a vrstvy buněk dvakrát opláchnuty PBS. Poté byl do každé láhve přidán trypsinový roztok do pokrytí vrstev. Po 30-60 s byl trypsinový roztok odstraněn a láhve inkubovány při laboratorní teplotě ·· ···· • ·· · ·· • · · · · · • · · • · 9 9 999999

2-6 min. Po uvolnění 90 % buněk bylo přidáno růstové medium. Buňky byly triturovány a přeneseny do sterilních centrifugačních zkumavek. Byla stanovena koncentrace buněk v suspenzi a upravena hustota na hodnotu 5000 buněk/ml. Buňky byly subkultivovány do označených jamek na 96-ti jamkových plotnách (200 μιΐ buněčné suspenze na jamku). Do volných jamek byl dodán PBS kvůli udržení vlhkosti. Před provedením testu se studovanou sloučeninou byly plotny inkubovány přes noc.

Každá dávka testované sloučeniny byla testována na čtveřici jamek s 100 jil každého zředění. Do jamek označených jako rozpouštědlové kontroly bylo přidáno dalších 100 ul methanolové kontroly; do negativních kontrol bylo přidáno dalších 100 gul reakčního media. Do volných jamek byl dodán PBS. Plotny byly inkubovány průměrně 5 dní.

Po zkončené inkubaci byla každá skupina vyšetřená mikroskopicky a stanovena toxicita. Do reakčního media bylo přidáno MTT 0,5 mg/ml a roztok přefiltrován přes filtr 0,45 ^um k odstranění nerozpuštěných krystalků. Z jamek bylo dekantováno medium. Bezprostředně byl do všech testovaných jamek přidán přef iltrovaný roztok MTT (2000 μιΐ), jamky dvou prázdných kontrol byly ponechány volné. Do těchto dvou jamek bylo dáno 200 μιΐ reakčního media. Plotny byly opět inkubovány 3 h. Po inkubaci bylo dekantováno medium obsahující MTT. Do každé jamky byl dán nadbytek media a plotny byly třepány při laboratorní teplotě 2 h.

Byla stanovena absorbance při 550 nm (ODsso) u každé jamky na čtecím zařízení VMax, Molecular Devices (Menlo Park, CA).

Byly stanoveny střední hodnoty 0D550 pro rozpouštědlovou kontrolu, všechna ředění testovaných sloučenin, prázdných kontrol a pozitivních kontrol. Střední OD55 o prázdných kontrol byla odvozena jako střední hodnota z rozpouštědlových kontrol a testovaných sloučenin.

1.5 • ·· • · · opr. střed. OD550 ředění test, sloučenin % kontroly * 100 • ·· · • · opr. střed. OD550 rozpouštědlové kontroly

Křivky dávkové odpovědi byly konstruovány jako semilogaritmické grafy, kde % kontroly byla na souřadnici lineární a koncentrace testovaných sloučenin na souřadnici logaritmické. Z křivek pro každou testovanou sloučeninu byla interpolována hodnota EC50.

Pro testované sloučeniny podávané v methanolu byly připraveny zvláštní odpovědí korigující methanolová data.

Jako pozitivní kontrola byl použit Adriamycin. Ve všech případech byl toxičtější než všechny testované sloučeniny o 1 až 2 logaritmy. Adriamycin je jedním z velmi účinných léčiv používaných v současné době, který má však výrazné vedlejší účinky. Maximální koncentrace v plazmě ostatních, poměrně účinných chemoterapeutik, múze být až 10 až 50krát vyšší než koncentrace Adriamycinu.

Hodnota EC50 je koncentrace, při níž je usmrcena právě polovina buněk.

Tabulka 1

Testovaná sloučenina	~ ^: 1 ··.—:------ Výsledky EC50 (ppm)
HT29	MX1
Benomyl	0,728	0,68 2	3,26	2,4
Carbendazim	0,3 20	0,50 6	0,75 2	0,822
Adriamycin	0,015	0,0020	0,0035	0,0093

Pro normální zdravé buňky byly získány následující výsledky. Je zřejmé, že benomyl a carbendazim jsou vůči normálním zdravým buňkám výrazně méně toxické než adriamycin.

• · ·· · · · ·

Tabulka 2

Testovaná sloučenina	ECso bronchiální b.	keratinní b.	fibroblasty
Benomy1	0,728	0,682	3,26	2,4	3,24	2,81
Carbendazim	0,320	0,506	0,752	0,822	1,52	1,42
Adriamyc in	0,015	0,0020	0,0035	0,0093	0,065	0,10 .

(A-549), buňkách příbuzné prsních tlustého studii na plicních nádorových buňkách nádorových buňkách (MCF-7) a nádorových střeva (HT-29), thiabendazol, systémový fungicid, tyto buňky účinné usmrcoval. Souhrn výsledků je uveden v tabulce 3.

Tabulka 3

Koncentrace (ppm)	Optická hustota
	A-549	MCF-7	HT-29
0-kontrola	0,600	0,245	0,398
173	0,007	0,007	0,005
35	0,411	0,025	0,011
17,3	0,851	0,258	0,204
3,46	1,12	0,466	0,713
0,87	1,32	0,507	0,852

Pokusy prokazují, že uvedené sloučeniny účinně usmrcují nádorové buňky.

Příklad 2

Náhodně vybrané myši byly rozděleny do léčebných skupin. Pět skupin bylo infikováno leukémií. Nemocná zvířata dostávala pět dní dávku léčiv, pak byla dvoudenní přestávka, dalších pět dní léčiva, tři dny přestávka, pět dní léčiva a dva dny ·· ····

přestávka. Uvedený nepravidelný program dávkování s přestávkami není ideální léčebný režim, ale přesto výsledky prokazují pozitivní účinek Carbendazimu™. Jedna skupina myší byla léčena Cytoxanem™ (2-[bis(2-chlorethyl)-amino-l-oxo-2-aza-5-oxosforidin), kontrola byla léčena canolovým olejem a tři skupiny dostávaly různé hladiny Carbendazimu™ (methyl-(butylkarbamoyl)-2-benzimidazol-karbamát). Byla provedena i neléčená kontrola. Carbendazim™ byl dávkován na třech hladinách 4000, 2500 a 1000 mg/kg. Cytoxan™ byl dávkován na

Po osmi dnech v neléčené skupině uhynula do desátého dne uhynulo 8 myší a do 11 dne uhynuly Myši ve skupině léčené Cytoxanem™ přežily déle než Ve skupině léčené vysokou hladinou Carbandazimu™ den, 2 myši 15., 16. a 17. den a 1 myš vždy den. Střední délka přežití pro tuto skupinu je skupině léčené střední hladinou Carbandazimu™ 14. den, 4 myši 15., 1 myš 16.

den. Střední délka přežití pro

Ve skupině léčené nízkou hladinou myši 12., 13., 14. a 15. den, a

Střední délka přežití pro tuto skupinu je 14,1 dne.

hladině 125 mg/kg. 1 my š, všechny.

dní uhynula 20., 21.

myš 14. a 22

17,3 dne. Ve uhynuly 2 myši den a 1 myš 21.

16,5 uhynuly 2 á 17. den.

den, 2 myši 19. tuto skupinu je

Carbandazimu™ myš vždy 16.

Průmyslová využitelnost

Vynález přináší farmaceutický přípravek inhibující rozvoj rakoviny a růst nádorů, včetně leukemie u savců, zejména u lidí a teplokrevných zvířat. Přípravek je použitelný při léčbě virových infekcí. Jako účinnou složku obsahuje derivát benzimidazolu.

Claims

PATENTOVÉ N Á R 0 K Y

1. Farmaceutický přípravek na léčbu rakoviny, nádorového nebo virového onemocnění, v y z n a č u j í c í s e t i m , že obsahuje účinně množství sloučeniny obecného vzorce I kde X je vodík, halogen, Ci-Ce alkyl nebo Ci-Ce alkoxy ; n je kladné celé číslo menší než 4; Y je vodík, chlór, nitro, methyl nebo ethyl; R je vodík nebo Ci-Ce alkyl a R
2 je 4-thiazolyl, NHCOORi, kde Ri je alifatický C1-Ce uhlovodík, nebo farmaceuticky přijatelné adiční soli definovaných sloučenin s anorganickými nebo organickými kyselinami.

Farmaceutický přípravek podle nároku 1, v y z n a č u j í c í se tím, že dále obsahuje bezpečné a účinné množství chemoterapeutika.
3. Farmaceutický přípravek podle nároku

1 , v y z n ač ují c í bezpečné a účinné množství s e t í m , že dále obsahuje potenciátoru.

4. Farmaceutický přípravek, v y z n a č u j í č í s e tím, že R je vodík nebo C1-Ce alkyl a R2 je voleno ze skupiny obsahující 4-thiazolyl, NHCOOR1, kde Ri je

methyl, ethyl nebo isopropyl a farmaceuticky přijatelné adiční soli definovaných sloučenin s organickými nebo anorganickými kyselinami.

·· ···· • ·

5. Farmaceutický přípravek podle nároků 1, 2, 3 nebo
4,vyznačující se tím, že derivát benzimidazolu je volen ze skupiny 2-(4-thiazolyl)benzimidazol, methyl(butylkarbamoyl)-2-benzimidazolkarbamát a 2-methoxykarbonylaminobenzimidazol.
6. Farmaceutický přípravek podle nároku 5, v y z n a č u j í c í se t í m , že chemoterapeutikum je voleno ze skupiny obsahující DNA-interaktivnf látky, Antimetabolity,

Tubulin-interaktivní látky, Hormonální látky,

Asparaginázu nebo hydroxymočovinu, Asparaginázu, hydroxymočovinu, Cisplatinu, Cyklofosfamid, Altretamin, Bleomycin, Dactinomycin, Doxorubicin, Etoposid,

Teniposid, Plicamycin, Methotrexat, Fluorouraci1, Fluorodeoxyuridin, CB3717, Azacytidin, Cytarabin,

Floxuridin, Merkaptopurin, 6-Thioguanin, Fludarabin, Pentostatin, Cyctrabin a Fludarabin.

Farmaceutický vyznačuj í přijatelné adiční skupiny zahrnující fosforečnany, sulfonáty, přípravek c í podle se tím, jsou soli s kyselinami chloridy, bromidy, sírany, formiáty, tartaráty, . maláty, citráty, benzoáty, salicyláty, askorbáty a jejich směsi, kde Y je chlor.
8. Způsob léčby rakoviny u teplokrevných živočichů, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání 2 až 400 mg/kg tělesné hmotnosti farmaceutického přípravku podle nároků 1, 2, 3, 4, 5, 6 nebo 7.
9. Způsob podle nároku 8, v y z n a č u j í c í s e tím, že benzimidazol je podáván perorálně nebo enterálně, intravenózně, parenterálně nebo injekcí do nádoru.

·· ····
10. Dávková jednotka přípravku na léčbu rakoviny a virových infekcí u zvířat nebo lidí, vyznačuj ící se tím, že obsahuje derivát benzimidazolu obecného vzorce I

12.

13 .

kde X je vodík, halogen, n je kladné celé číslo menší nitro, methyl nebo ethyl; R je 4-thiazolyl, NHCOORi uhlovodík, nebo def inovaných a R2

Ci -Ce soli

Ci-Ce alkyl nebo Ci-C6 alkoxy; než 4; Y je vodík , kde farmaceuticky sloučenin je vodík, chlór, nebo Ci-Ce alkyl je alifatický přijatelné adiční anorganickými nebo

Ri organickými kyselinami.

Dávková jednotka vyznačuj íc chemoterapeutikum.

j ednotka vyznačuj í c potenciátor.

Dávková

Dávková přípravku s e t přípravku s e t podle m , že podle m , že nároku 10, dále obsahuje nároku 10, dále obsahuje jednotka vyznačuj í c benzimidazolu je přípravku podle tím , nároku 12, že derivát volen ze obsahující methy1(butylkarbamoy1)-22-methoxykarbonylaminobenzimid2-(4-thiazoly1)benzimidazol,

-benzimidazolkarbamát a azol a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Dávková jednotka přípravku podle nároků 10, 11 nebo 12, vyznačující se tím, že nosič je volen ze skupiny zahrnující laktózu, sacharozu, želatinu a agar, vodné roztoky, emulze, suspenzní roztoky a suspenze rekonstituované z neefervescentních i efervescentních přípravků.
15. Dávková jednotka přípravku podle nároku 13, v y z n a č u j í c i s e t í m , že obsahuje složku ? volenou ze skupiny látek zahrnující suspenzní činidla, ředidla, sladidla, aromatické přísady, barviva, '* konzervační přísady, emulsif ikátory, barevné přísady a jejich směsi.
16. Způsob léčby virových infekcí , v y z n a č u j í c í se t í m , že zahrnuje podání bezpečného a účinného množství sloučeniny obecného vzorce I kde X je vodík, halogen, Ci -Ca alkyl nebo Ci-Ce alkoxy; n je kladné celé číslo menší než 4; Y je vodík, chlór, nitro, methyl nebo ethyl ; R je vodík nebo Ci -Ca alkyl a R2 je 4-thiazolyl, NHCOORi , kde Ri je alifatický C1—Ce uhlovodík, nebo farmaceuticky přijatelné adiční soli definovaných sloučenin s anorganickými nebo organickými kyselinami.

16. Způsob léčby zhoubných nádorů , vy znač u jí c í se t í m , že zahrnuje podání bezpečného a účinného množství fungicidu.

·· · · · ·
17. Způsob inhibice růstu nádorů , vyznačuj i c í se t í in , že zahrnuje podání bezpečného a účinného množství fungicidu.