CZ324092A3 - Novel alkaloids of hapalindole type, process of their preparation and a pharmaceutical preparation in which the are comprised - Google Patents

Novel alkaloids of hapalindole type, process of their preparation and a pharmaceutical preparation in which the are comprised Download PDF

Info

Publication number
CZ324092A3
CZ324092A3 CS923240A CS324092A CZ324092A3 CZ 324092 A3 CZ324092 A3 CZ 324092A3 CS 923240 A CS923240 A CS 923240A CS 324092 A CS324092 A CS 324092A CZ 324092 A3 CZ324092 A3 CZ 324092A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
factor
atcc
hapalindole
factors
group
Prior art date
Application number
CS923240A
Other languages
English (en)
Inventor
Rosanne Bonjouklian
Richard Elliott Moore
Gregory Matthew Leon Patterson
Tim Allen Smitka
Original Assignee
Lilly Co Eli
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lilly Co Eli filed Critical Lilly Co Eli
Publication of CZ324092A3 publication Critical patent/CZ324092A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/56—Ring systems containing three or more rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/34—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • A01N43/36—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom five-membered rings
    • A01N43/38—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom five-membered rings condensed with carbocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/90—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having two or more relevant hetero rings, condensed among themselves or with a common carbocyclic ring system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/56—Ring systems containing three or more rings
    • C07D209/80—[b, c]- or [b, d]-condensed
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/06—Peri-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/12—Unicellular algae; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/10—Nitrogen as only ring hetero atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/946—Microorganisms using algae

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Description

Oblast techniky
Vynález se týká nových alkaloidů hapalindolového typu, které mohou být Izolovány z modrozelených řas Fischerella ambigua ATCC 55210. Tyto nové alkaloidy jsou antifungálnimi a protinádorovými činidly. Vynález se taká týká četných způsobů. Prvním takovým způsobem je způsob přípravy A89271 B, přičemž se kultivuje modrozelená řasa ze souboru zahrnujícího F.ambigua ATCC 55210, Hapalosiphon hlbernious ATCC 55225 a Nestiellopsis prolifica Janet (UH izolát EN-3-1) nebo jejich rautant, který produkuje A89271 B. Dalším způsobem je způsob produkce A89271 F, přičemž se kultivuje modrozelená řasa ze souboru zahrnujícího F.ambigua ATCC 55210 a Hapalosiphon hlbernious ATCC 55225 nebo jejich mutant, který produkuje A89271 F. Jeátě dalším způsobem je způsob přípravy faktoru A89271 ze souboru zahrnujícího faktory A89271 A, C, D, E a 1, přičemž se kultivuje F.ambigua ATCC 55210, nebo její mutant, který produkuje zvolený A89271 faktor. Opět dalším způsobem je způsob přípravy hapalindolu voleného ze souboru zahrnujícího hapal indoly G a H, přičemž se kultivuje F. ambigua ATCC 55210 nebo jajl mutant, který produkuje hapalindol G a H. Vynález se rovněž týká biologicky vyčištěné kultury Hapalosiphon hlbernious ATCC 55225 nebo jejího mutantu, produkujícího A89271. Kromě toho se vynálezu týká použiti faktorů A89271 pro inhibici fungálního růstu a pro ošetřováni vnímavých neoplasmů savců. Tento vynález se taká týká farmaceutických prostředků obsahujících jako účlnou látku alespoň jeden faktor A89271.
Dosavadní stav techniky
Vynález se tedy týká nových antifungálnich a protinádorových prostředků. Obzvláště se vynález týká alkaloidů hapalindolového typu označovaných jakožto faktory A89271 A, B, C, D, E, F, a I.
Jiné typy alkaloidů hapalindolového typu popsal Bonjouklian a kol. v americkém patentovém spise číslo 4 870185 (zveřejněno 26. 9.1989) a Moor a kol. v americkém patentovém spise čislo 4 755610 (zveřejněno 5.7.1988).
Hapalindoly jsou účinnými fungicidy, což se nejprve zjistilo v případě Hapalosiphon fontinalis (R.E. Moore a kol., J. Am.
1984, 106, str. 6456 až 6457; R.E. Moore a kol., J. 1987, 52, str. 1036; a R.E. Schwartz a kol., J. Ind.
5, str. 113 až 124). Nejběžnějělm hapalindolem je hapalindol Ά, což je chlor a insonitril obsahující tetracyklický indolový alkaloid, který je pravděpodobně produktem biosyntézy z prokursoru odvozeného od tryptofano a geraniol pyrofosfátu.
Podobné sloučeniny, hipalindolinony byly izolovány z Pischerella sp. R.E. Schwartz a kol., J. Org. Chem. 1987, 52, str. 3706 až 3708). Jak Flscherella tak Hapalosiphon patři do rodu Stigonemataceae (Stigonematales).
Chem. Soc Org. Chem Mlcrobiol. 1990,
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je nová řada hapalidolových alkaloidů faktory A98271. Faktory A89271 se také označují jakožto amhiguines .
Podobně jako hapalindoly faktory A89271 jsou produkovány modrozelenou řasou rodu Stigonemataceae, viz. Flscherella ambigua (Nageli) Gomont (UTZX 1903) ATCC 55210, Hapalosiphon hibernicus W. & G.S. West (UH izolát BZ-3-1) ATCC 55225 a Westiellopsis prolifica Janet (UH izlát EN-3-1). F. ambigua ATCC 55210 (UTEX 1903 je veřejně dostupná a předmětem obchodu jakožto produkt společnosti Culture Colleotion of Algae Department of Botany, The University of Texas v Austinu, Austin, Texas 78713-7640. Faktory A89271 podle vynálezu se mohou nejlépe připravovat kultivaci modrozelené řasy Flscherella ambigua ATCC 55210.
Faktory A89271 mají následující strukturu a systém číslováni :
(1) A89271 A
(2) A89271 Β
(1) A89271 D
(£) A89271 F
(2) A89271 I
Faktory A89271 podle vynálezu se mohou produkovat kultivaci kmene produkujícího A89271 modrozelené řasy Fischerella ambigua. AS9271 B se také může produkovat kultivaci kmene produkujícího A89271 B Hapalosiphon hibernicus ATCC 55225 a Westiellopsis prolifica; a A89271 F se také může produkovat použitím Hapalosiphon hihernícus.
Kmen Fischerella ambigua. produkující A89271 je uložen v souhlase s budapeátskou smlouvou a je součásti sbírky kmenových kultur The American Type Culture Collection (ATCC),12301 Parklawn Drive. Rockville, MD 20852, kde je veřejně dostupný pod číslem No. ATCC 55210.
Kmen Westisllopsis prolifica produkující A89271-B je dostupný ve sbírce kultur The University v Hawaii.
Nový Hapalosiphon hibernicus W a 3.3. West kmen: ATCC 55225
Nový kmen Hapalosiphon hibernicus podle vynálezu produkuje faktory 189271 3 a F. Tento kmen je uložen podle budapeátské dohody a je součásti sbírky kmenových kultur ATCC pod číslem ATCC 55225.
Charakteristiky Hapalosiphon hibernicus ATCC 55225
Jde o filament s pravým rozvětvením. Buňky hlavního filamenfn jsou áiroké 8 až 10 mikrometrů.Buňky jsou kvadrátové a subválcové. Části hlavního vlákna jsou pleuriseriátové. Heterocysty v hlavním filamentu mají ěířku 5 až 6 mikrometrů a délku 10 až 3L2 mikrometrů (válečkovítý tvar). Filamenty jsou bohatě větveny.
Buňky větvi jsou široké 4 až 6 mikrometrů a jsou tedy tenči než hlavního filamentu.Buňky blízké typu větveni jsou podstatně delší než áirěi (přibližně tři až čtyři krát delší než širší). Obal je tenký a sklovitě průhledný (bezbarvý).
Podobně jako v případě jiných organismů je charakteristikou kmenů Fischere!1a ambigua ATCG 55210, Hapaloslphon hibernicus ATCC 55225 a Westiellopsis prolifica jejich proměnlivost. Proto přirozené a navozené mutanty kmenů se mohou získat známými způsoby, jako je zpracováni chemickým matugenem N-methyl-N‘ -nitro-líni trosoguanidin. Vynález se týká mutantů kultur Fisoherella ambigua ATCC 55210, Hapaloslphon hibernicus ATCC 55225 a Westiellopsis prolifica, které sl podržujl svoji charakteristiku produkovat faktor A89271 ze souboru A až F a I.
Alkaloidy A89271 podle vynálezu se mohou připravovat kultivaci kmenů Fisoherella ambigua , Hapaloslphon hibernicus a Westiellopsis prolifica za submerznlch aerobních podmínek ve vhodném kultivačním prostřed! až do vytvořeni podstatné antifungálnl aktivity. Jiné kultivační techniky, jako je povrchový růst na ztu, ženém prostředí, se mohou rovněž používat pro produkci těchto
4- sloučenin. Používaným prostředím pro růst kultur Fisoherella ambigua ATCC 55210, Hapaloslphon hibernicus ATCC 55225 nebo Westiellopsls prolifica může být jakékoliv známé prostředí.Ekonomie produkce, optimální výtěžek a snadnost izolace produktů jsou faktory, na které se bere-zřetel při volbě zdroje uhlíku a dusíku. Jakožto živných anorganických soli, které se mohou vnášet do kultivačního prostředí, se může používat běžných rozpustných soli, které jsou schopné dodávat železité, draselné, sodné, hořčnaté, i vápenaté, amonlové, chloridové, uhličitanové, fosforečnanové, síranové, dusičnanové a podobné lonty.
Do růstového prostředí se také musí zavádět podstatné stopové prvky, nutné pro 'ít a vývoj organismů. Takové stopové prvky se běžně vyskytuji jakožto nečistoty jiných složek prostředí v dostatečném množství pro požadavky růstu kultivovaného organis- S mu. Může být nutné přidává malá množství (například 0,2 ml/1) protipěniolho činidla, jako je například propylenglykol (molekulová hmotnost přibližně 2000) do fermentačlho prostředí v provoz8 nim množství, pokud se pěněni stává problémem.
Pro produkci podstatného množství faktorů A89271 se může používat submerznl aerobní kultivace v tancích. Malá množství se mohou produkovat v třepačce. Pro prodlevu ve výrobě, spojenou běžně s naočkováním velkých tanků organismem, je výhodná používat vegetativního inokul a. Vegetativní inokul um se připravuje v malém objemu kultivačního prostředí použitím spor nebo příbuzných forem naho fragmentů vegetativního trlchomu organismu k získáni čerstvé aktivní růstové kultury organismu. Vegetativní Inokulum se pak přenese do většího tanku. Použité prostředí pro vegetativní inokulum může být totožné, jako prostředí, používané pro fermentace ve velkém měřítku, může se však použit také jiného prostředí.
Kultury Pisoherella amblgua ATCC 55210, Hapalosiphon hibernicus ATCC 55225 a Westiellopsls prolifica mohou růst při teplotě přibližně 20 až přibližně 30 ’C. Sloučeniny A89271 se produkuji při teplotě přibližně 24 ’C a při případném osvíceni intezitou 150 až 200 mikrceinsteinů m2s_i. Pro produkci sloučenin se může požívat intenzity někdy vyšší, někdy nižší.
- Jak je běžné pro způsoby aerobní submerznl kultivace tohoto typu, oxid uhličitý ve strilnlm vzduchu se probublává kultivačním
;.X prostředím. Pro účinnou produkci sloučenin A89271 má být procento oxidu uhličitého přibližně 1 % (při teplotě 24 *C a za tlaku 0,1 MPa).
Prdukce A 89271 se může v průběhu kultivace zkušebních vzorků myceliálnibo extraktu sledovat zkouškami vysoce výkonnou kapalinovou chromatografi1 nebo chromatograf!1 v tenké vrstvě. Vzorky mycellálnlho extraktu se také mohou zkoušet se zřetelem na organismy, o nichž je známé, že jsou citlivé na antlfungálnl prostředky. Takovým, užitečným organismem jhe Candida albicans.
Při produkci za submerznlch aerobních kultivačních podmínek ze z kultivačního prostřed! mohou faktory A89271 získat o sobě známými způsoby pracovníkům v oboru. Při způsobu izolace se zpravidla používá nejdříve filtrace kultivačního prostřed! k odděleni buněk řas a pak vymražovaciho sušeni oddělených buněk. Vymražovaclm sušením získané řasy se mohou extrahovat vhodným rozpouštědlem, jako je isopropanol, dichlormethan, ethylacetát nebo jejich stndsi. Alkaloidy se mohou oddělovat tak, že se extrakt podrobuje separačnim způsobům známým v oboru, jako je například gelová filtrace a/nebo silikagelová chromatografie. Alkaloidy se pak mohou čistit vysoce výkonnou kapalinovou chromatografií (HPLC).
Faktory A89271 podle vynálezu inhibuji růst různých hub, zvláště patogenních Živočišných a rostliných hub.
V tabulce I až VII jsou uvedeny minimální inhibiční koncentrace (HIC), při kterých faktory zpravidla inhibují růst různých hub. V těchto tabulkách znamená pomlčka nebo výraz K.T., že materiál nebyl testován.
Tabulka Ij-n vitro antifungální účinnost. AS9271; A v HFMI a 10% telecím zářoďečném sér®
Sloučenina MIC Candida albicans (mcg/mL) Trichophyton mentagrophytes
A89271 A 2,5 >20
Amphotaricin 5 0,156 -
Tolnaftate - 0,039
Tabulka IX In vitro antifungální účinnost; Δ8927Π A v Sabouraudově a dextrozovém prostředí
Sloučenina Candida albicans MIC (mcg/mL) TEichcBhy.fcgn mentacrophvt.es. Asoeraillus fmiaafcug
A39271 A 2,5 10 80
Amphotaricin B 0 j625 - 1.25 j
Tolnaftát - 0.039 -
-11TáBuIfca III ín vitro antifugální účinnost Α8927Ί B,C _ P a F ▼ BPIK a 10¾ zář od eč near, telecím séru;
MIC (mcg/mL)
Sloučenina Candida albicans Tgjffihgphytan mentaoroohytas
A89271 B '1.25 2,5
A89271 C 1,25 0,825
A89271 D 1,25 0,625
A89271 F 1,25 1,25
Amphotericin B 0,156 -
Z Tolnaftat - <0,02
-12Tabulka ΣΤχη vitro anťifurigální 'účiňno3^^39271
B, C, Ha F τ Sabourauďově a v dextrozovém prostředí
MIC (mcg/mL)
Sloučenina Candida albicans Trichcphytcn msntacrophytss Aspexcillus, fnmiaabns
A89271 B 1,25 >80 20
A89271 C 2,5 >80 >80
A89271 D 1,25 >80 >80
A89271 F 1,25 . >80 >80
Amphotericin 3 0,312 - 1,25
Tolnaftát- <0,02 -
lllliUlkllJI-IlJ^rrt-lílJl,..........γ'Ί'ΊΐΙιΐ'Ι Ί|·. I'|ll,|.|r' Ι'^!ρΙΊ||,|,·ι·„ '^-ΗΐΛ^Ι|(|ήφ»ηΐΧΙ(
Tabulka V vitr0 sntifugální účinnost A89271 E a I v HPMI a 10% zárodečném· telecím: séra
MIC (mcg/mL) £anďida Trishpphytaa Aspergillus
Sloučenina albicans man t acrr onhvfc β s fumieratus
A89271 E 2,5 2,5 >80
A89271 I 1,25 2,5 >80
Amphotericin B 0;S25 N.T. 1,25
Tolnaftátc’ N.T. 0,02 N.T.
*?%
Tabulka VÍ/ in I vitro antifúgální účinnost v Sebouraudově a v dext.ro z c A89271 E a }vénr prostři
MIC (mcg/mL)
Candida Trishaptotaa Aspergillus
Sloučenina alfeisans, mantagrophy.te.a fumicatus
A89271 E 5 2,5 >80
A89271 I 2,5 2,5 >80
Amphotericin B 0,312 N.T.
Tolnaftat· N.T. 0,02 N.T.
ibulka VII Ur vitro antifúgální účinnost A87271 H a I v antibiotikovém prostředí 3 /Difco/
MIC (mcg/mL)
Candida Trighgphytgn Aspergillus
Sloučenina albicana mentagrophyt&a fumicatus
A89271 E 5.0 5.0 >80
A89271 I 1.25 5.0 ✓ >80
Amphotericin B 0.02 s N.T. 0.039 y
Tolnaftat N.T. 0,02 N.T.
Vyrobený a izolovaný alespoň jeden faktor A89271 nebo jeho farmaceuticky vhodná sůl je užitečný k inhibici růstu hub, zvláště v případě živočichů a především lidi. Vynález se proto týká způsobu Inhihice růstu hub v případě lidi, kteři potřebuji takové ošetřeni, přičemž se ošetřovaným jedincům podává účinné množství alespoň jedné sloučeniny ze souboru A89271, zahrnujícího faktor A, faktor B, faktor C, faktor D, faktor E, faktor P a faktor I.
Vynález se však také týká způsobu inhibice růstu hub v případě rostlin nebo rostlinných části, přičemž se rostlina nebo rostlinná část ošetřuje účinným množstvím alespoň jedné sloučeniny ze souboru A89271, zahrnujícího faktor A, faktor B, faktor C, faktor D, faktor B, faktor F a faktor I. Výrazem rostlina a/nebo rostliná část se zde vždy mini celá rostlina nebo jeji části, například listy, květy, stonky, kořeny, plody, zelené části, hlizy ale také sklizené a skladované plodiny, například plody, zrna, hlízy, zelené části, vláknina a semena. Při ochraně rostlin se nanáší alespoň jeden z faktorů A89271 na rostlinu nebo na její část, přičemž se alespoň jeden takový faktor uvádí do styku s fytopatogenem rostliny. Pracovníkům v oboru je jasné, že takové ošetřenl nemusí nutně zahubit organismus. V závislosti na použitém množství, na druhu a na sile pathogenu se voli jednotlivá sloučenina, která pak ničí nebo narušuje větší nebo menši podlí pathogenu. Je dobře známo, že sníženi nepříznivého působní pathogenu,! když plně onemocněni nelikviduje, má pro ošetřovanou rostlinu značný význam.
Je nejúčinnějšl aplikovat sloučeninu podle vynálezu na rostlinu nebo její část před výskytem zdrojů infekce. Je tedy možno používat sloučeninu podle vynálezu pro předcházeni onemocněni nanášením alespoň jednoho faktoru v období klimaticky příznivém pro růst pathogenů. Rostlina a její části se tak mohou chránit před poškozením, které nutně souvlstl s patogenní infekci.
Pro aktivní růst rostlin se dosahuje nej lepších výsledků při opakovaném nanášeni faktoru v průběhu růstu rostliny v intervalech jednoho až několika týdnů v závislosti na počasí a na závažnosti onemooněnl.
Způsoby formulace faktorů A 89271 a přípravy disperzi a emulzi a způsoby nanášeni disperzi nebo emulzi faktoru A89271 na rostlinu nebo na části rostliny jsou zcela v oboru ochrany rostlin obvyklé.
Podle zvlášť výhodného provedeni vynálezu jsou A89271 faktory podle vynálezu užitečné pro ošetřováni citlivých neoplasmů zvláště leukemie a pevných nádorů, například nádorů pankreas a prsu. Jakkoliv jsou faktory A89271 obecně užitečné pro ošetřováni vnímavých neoplasmů, jsou faktory A, F a I zvláště vhodné pro ošetřování pevných nádrorů savců, zvláště lidí.
Vynález se proto také týká způsobu ošetřování vnímavých neoplasmů savců, přičemž se podává účinná množství alespoň jedné sloučeniny ze souboru A89271, zahrnujícího faktor A, faktor B, faktor E, faktor F a faktor I nebo jeho farmaceuticky vhodnou sůl.
V tabulce Vlil je uvedena účinnost vybraných faktorů A89271 na určité buněčné řady pevných nádorů. Kolonová fermentační zkouška diskové difúze na měkkém agaru je popsána v kapitole 3 publikace Cytotoxlc Anticancer Drugs: Model3 and Concepts for 3>rug Disoovery and Development (Frederick A. Valeriote a kol., “ vyd. 1990). Uvedený popsaný způsob se modifikuje přidáním 1 ml ‘ethanolu do každého suchého faktoru ve fiole a žádaná koncentrace ‘ roztoku se nanáší na papírový kotouček (disk). Kotouček se vysuší a pak se vloží na destičky měkkého agaru, jak je ve shora uvedené publikaci popsáno.
Kromě uvedeného výhodného provedení se vynález také týká farmaceutického prostředku, který obsahuje účinné množství alespoň jedné sloučeniny ze souboru A89271, zahrnujícího faktor A, faktor B, faktor C, faktor D, faktor E, faktor F a faktor I spolu s farmaceuticky vhodným nosičem, excipientem nebo ředidlem, kterého se používá pro podáváni živočichům.
Výrazem “účinné množství, zde používaným, se vždy mini dávka alespoň jedné účinné látky dostatečná pro terapeutické ošetřeni podle specifická lékařské indikace.
Výrazem účinná látka zde používaným, se vždy míní alespoň jedna sloučenina ze souboru A89271, zahrnujícího faktor A až F a Z
Pro terapeutická ošetřeni specifické indikace se podává alespoň jeden A89271 faktor jako takový, nebo zpracovaný na jed—
- 1'6a
Tabulka ΟΙΣ Vytváření kolonie při diskové difuzni
Zkouěka1'2 zkoušce na měkkém agarw
A89271 Pakt-.pr (mcg/disk) T.1210 P03 Pevný nádor ua 1HL
C38 Mami 7 CX-1
Faktor A (43 ug) 0-4002 650 650 670 600-650
750 300-470 0-300
(11 ug) 250-320 610 250-420 0-300
(9 ug) 200-250 500 480 200-330
Faktor B (80 ug) 210 200-250 430 220 220 200-300 0-250 80-250
(20 ug) 100-200 260-400 180 0-100
Faktor E (80 ug) 280 250-300 440-500- 300 350 220-240 100-180
200-220 460 480-500
(20 ug) 100-200 300-360 100-180 80
Faktor F (80 ug) 200-250 350-460 500 500 550-580 200-300 200-400 0-120
(20ug) 300-350 590 200-350 0-80
(16 ug) 0-220 440 460 200-330
(8 ug) 250-280 250 0-400
Faktor I (BO ug) 260 200-220 490 500 250 0-200 100-200
(20 ug) 100-250 680 100-130 0-180
(16 ug) 110 420 390 120
1L121O buňky myší leukemie
PO 3 buňky pevného nádoru myšího pankreas
C3Q buňky pevného nádoru myšího tračníku
Mam 17 buňky pevného nádoru myších bradasvek
í CX-1 buňky pevného nádoru lidského trař^/ku
L H8 buňky pevného nádoru lidského tračníku
L LML fibroblast nízké malignance
^měřeni v zónových jednotkách: 200 zónových jednotek = 6MM ί
- 17 notkovou dávku farmaceutického prostředku pro parenterální,trans— dermální, rektální, nasálni nebo intravenozni podání nebo s výhodou pro orální podání. Taková farmaceutická prostředky se připravuji v oboru o sobá známým způsobem a obsahuji alespoň jednu účinnou látku ze souboru zahrnujícího A89271 faktory spolu s farmaceuticky vhodným nosičem. V takových farmaceutických prostředcích se účinná sloučenina označuje jakožto účinná látka. Při výrobě farmaceutického prostředku se účinná látka zpravidla misí s nosičem nebo se ředí nosičem nebo se zapouzdřuje do nosiče, který může mit formu kapsle, sáčku nebo jiného obalu. Pokud nosič slouží jako ředidlo, může být pevný, polopevný nebo kapalný a působ! jako pojidlo, exclpient nebo prostředí pro účinnou látku. Farmaceutický prostředek má pak formu tablet, pipůlek, prášků, kosočtveřečků, sáčků, elixírů, emulzi, roztoků, sirupů, suspenzi, měkkých a tvrdých želatinových kapsli, sterilních, vštřikovatelných roztoků a sterilních balených prášků.
Jakožto příklady vhodných nosičů, excipientů a ředidel se uvádějí laktoza, dextroza, sačharóza, sorbitol, manito1, škroby, klovatina akacia, fosforečnan vápenastý, algináty, salicylát vápenatý, mikrokrystalická celulóza, polyvinylpyrrolidon, celulóza, tragakant, želatina, sirup, methylcelulóza, methylhydroxybenzoát, propy1hydroxybenzoát, mastek, stearát hořečnatý, voda a minerální olej. Farmaceutická prostředky mohou přídavně obsahovat mazadla, smáčedla, emulgátory, a suspenzačnl prostředky, konservačnl prostředky, sladidla a chuťová přísady. Farmaceutické prostředky mohou být formulovány tak, aby okamžitě, po prodlouženou dobu nebo odložené uvolňovaly alespoň jednu účinnou látku po podáni nemocnému za použiti o sobě známých způsobů. Pro orální podáni se faktor obsahující popřípadě alespoň jeden další faktor, misi s nosičem a s ředidly a lisuje se na tablety nebo se zapouzdřuje do želatinových kapsli. Nebo se směsi mohou rozupouštět v kapalinách, jako je například 10¾ vodný glukozový roztok, isotonická solanka, sterilní voda nebo jako je podobná kapalina a mohou se podávat intravenozně vstřikováním.
Farmaceutická prostředky se s výhodou fomulují v jednotková dávkovači formě, přičemž každá dávka obsahuje přibližně l mg až přibližně 500 mg a nejčastěji přibližně 5 mg až přibližně 300 mg alespoň jedné účinné látky. Výrazem jednotková dávkovači forma se zde vždy mini fyzikálně oddělené jednotky, vhodné jakožto dávka pro lidi i pro zvířata, přičemž každá jednotka obsahuje předem stanovené množství účinné látky, vypočtené podle žádoucího účinku spolu s potřebným farmaceuticky vhodným mosičem. Takové farmaceutické prostředky mohou obsahovat alespoň jeden faktor A89271 jakožto účinnou látku. Výrazem farmaceuticky vhodný se zde vždy mini nosič, ředidlo nebo excipient, které jsou slučitelné s ostatními složkami a nepůsobí nepříznivě na ošetřovaného jedince.
Následující přlpklady farmaceutických prostředků vynález toliko objasňuji, nijak jej však neoraezuj-l .Používaný výraz účinná látka má shora vysvětlený význam.
Farmaceutický prostředek 1
Tvrdé želatinové kapsle se připravuji za použiti následujících složek*.
množství (mg/kapsle) alespoň jedna účinná látka 250 škrob, sušený 200 stearát hořečnatý 10 celkem 460
Farmaceutický prostředek 2
Tablety se připravuji za použiti následujících složek:
množství (mg/tableta) alespoň jedna účinná látka 250 celulóza, mikrokrystalická 400 oxid křemičitý, sublimovaný 10 kyselina stearová 5 celkem 665
Složky se smlsl a slisují se na formu tablet o hmotnosti vždy 665 mg.
Farmaceutický prostředek .3
Suspenze, obsahující vždy 50 mg účinné látky na 5 ml, se připravují za použití následujících složek:
alespoň jedna účinná látka natři umkarboxymethylce1ulóza sirup roztok kyseliny benzoové chuťová přísada barvivo čištěná voda do celkem
50,00 mg 50,00 mg 1,25 ml 0,10 ml
q.v.
q.v.
5,0 ml
Účinná látka se vede sítem No. 45 mesh U.S.(průměr ok 45 mikrometrů) a smlsl se s natriumkarboxymethylcelulózou a sirupem za vzniku hladké pasty. Roztok kyseliny benzoové, chuťová přísada a barvivo se zředí dílem vody a přidají se za mícháni. Pak se přidá dostatečné množství vody k dosaženi žádaného objemu.
Farmaceutický prostředek 4
Intravenózně podávaný prostředek se připraví za použiti následujících složek:
alespoň jedna účinná látka 100,00 mg isotonická solanka 1000,00 ml
Sloučeniny A89271 jsou účinné proti houbovým infekcím a citlivým neoplasmům v širokém oboru dávkováni. Například denní dávka je zpravidla přibližně O ,1 mg/kg až přibližně 50 mg/kg tělesné hmotnosti. Při ošetřováni dospělých jedinců je výhodnou dávka přibližně 5 mg/kg až přibližně 25 mg/kg podávaná najednou nebo po několika částech. Skutečně podávané množství účinné látky určuje vždy lékař se zřetelem na příslušné okolnosti, jako je závažnost onemocněni, volba příslušné sloučeniny nebo sloučenin, věk, hmotnost a odezva příslušného jedince a cesta podáni. Proto určitá dávka účinné látky není předmětem vynálezu. Množství dalších složek je je známé a v tomto oboru obvyklé.
I
- 20 Vynález blíže objasňuji avšak nijak neomezuji následujici příklady praktického provedeni.
Obecné způsoby. iH a 1 3C nukleární magnetické rezonanční (NMR) chemické posuny se vztahuji na rozpouátědlové píky: 5» 7,26 (zbytkový CHC13) a 5C 77,0 pro CDC13 a 5H 3,30 (zbytková CHD2OD) a 6c 49,0 pro methanol-d^. Homonukleární 3H pojivost se stanovuje experimentem COSY a heteronukleární *H-i3C pojivost se stanovuje HMQC (A. Bax a kol., J. Magn. Reson. 1986, 67, str. 565) a HMBC (A. Bax a kol., J. Am. CHem. Soc. 1986, 108, str. 2093). Homonukleární iH nukleární Overhauserovy efekty (NOE) se stanovuji podle rozdílu zkoušk NOE za použiti 3 s ozařovacich period. V tabulce IX jsou přibližné hodnoty Rf 189271 faktorů získané chromatograf!i v tenké vrstvě (TLC) na silikagelu.
Tabulka IX tlc Rf hodnoty A89271 faktorů
Rozpouátěďlf
A89271 faktor Rf hodnota System4·
A 0,47 A
B 0,83 A
C 0,75 A
D 0,21 A
E 0,77 A
F 0,67 A
I 0,29 B
XA = toluen /EtOAc (3:1)
B = hexan /dioxan (3:2)
Příklady provedeni vynálezu
Přiklad 1
Kultura Fischerella ambigua (Nageli) Gomont
Fischerella ambigua kmen ATCC 55210 se kultivuje v kapalném prostředí (modifikované A3 Μγ) ve skleněné baňce o obsahu 20 litrů, obsahující anorganické prostředí následujícího složeni:
Složka .· Mhožsitví
NaN03 200 mg/L
NH4C1 10 mg/L
K2HP04.3H20 65 mg/L
MgS04.7H2O 50 mg/L
CaCl2.2H20 13 mg/L
3-.(N-mor f olino) -propanesulf onová kyselina 627 mg/L
Roztok minoritních prvků® 1 mL/L
Roztok, stopových, prvků** 3/25 (0,12) mL/L
Před autoklávováním se hodnota pH prostředí nastavuje na 7 hydroxidem sodným.
aRoztok minoritních prvků
Složka Množství
PeCl3·6H2O 0,54 g/L
Na2EDTA 3.0 g/L
H3BO3 Oj62 g/L
MnCl2.4H2O 1.4 g/L
ZnCl2 0.10 g/L
CoCl2.6H2O 5 mg/L
CuC12 2H2O 34 mcg/L
“ 22 Roztok stopových prvků
Množství
Složíš» (ag/io Xi 0,1 H H2so4)
M0O3 (85%) 176,4
NH4VO3 229,6
Cr2K2(SO4)4-24H2O 960,2
NÍSO4.6H2O 447,8
Co(NO3)2.6H2O 493 >8
Na2WO4.2H2O 179,4
A12(SO4)3 317,1
As2O3 66,1
CdCl2 81,5
SX-SO4 104,9
Hgci2 67,7
PbCl2 67.1
líci 305,5
Rb2SO4 . 78,1
NaBr 64,4
KI 6Sj4
NaF 110.5
Na2SaO4 119,4
Be(N03)2-3H2O 1037.0
Kultury se kontinuálně osvicují případnou intenzitou 150 až 200 mikroeinstein m-^s-i za použití studených bílých fluorescentnich trubic. Obecně se kultury intenzivně provzdušftuji vzduchem o obsahu a % oxidu uhličitého a inkubují se při teplotě 24 ± 1 *C Po 25 až 30 dnech se axenická řasa oddělí filtraci a vysuší se vymrazováním. Výtěžek lyofilizované řasy je zpravidla přibližně 0,4 g/1.
Přiklad 2
Kultivace Hapalosiphon hibernicus ATCC 55225 nebo Westiellopsis prolifica UH izolát EN-3-1
Kmeny Hapalosiphon hibernicus ATCC 55225 nebo Westiellopsis prolifica UH izolát EN-3-1 se kultivují stejně, jako je popsáno v přikladu 1. Výtěžek lyofilizované řasy je zpravidla přibližněO,2 až 0,3 g/1 pro Hapalosiphon hibernicus a přibližně 0,1 g/1 pro Westiellopsis prolifica.
Přiklad 3
Izolace A89271 A-F a hapalindolů β a H z Fischerella ambigua kmen ATCC 55210
Lyofilizovaná Fischerella ambigua kmen ATCC 55210 (83 g), připravená způsobem podle přikladu 1, se extrahuje systémem diehlormethan/2-propanol. Extrakt (4,07 g) se chromatografuje na sloupci 1,1 m x 5 cm Sephadexu LH-20 za použiti methanolu jakožto elučního činidla. Frakce, účinné proti Candida albicans při diskové zkoušce, se spoji na dva podíly a odpaří se. Zbytek z podílu 1 (242 mg) se rozpustí v 50 ml methanolu a filtruje se přes 10 g C18 oxidu křemičitého. Filtrát (202 g) se pak chromatografuje na sloupci 30 cm x 2,5 cm C18 oxidu křemičitého (Chromegabond HC18, ES Industries) za použiti lineárního gradientu 80 až 100 % methanolu ve vodě. Fungicidni frakce tohoto sloupce se spoji a odpři se,čimž se získá A89271 B (11,3 mg) a druhý zbytek (38 mg).
Dalším čištěním druhého zbytku preparativní chromatografií v tenké vrstvě na silikagelu za použiti systému 3 : 1 toluen/ethylacetát se ziská A89271 A (21 mg) a směs A89271 C a A89271 E. Směs se rozdělí na čistý C (4 mg) a E (7 mg) preparativní chromatografií v tenké vrstvě na oxidu křemičitém za použiti systému 3 : 1 hexan/dioxan.
Zbytek z podílu 2 (338 mg) se chromatografuje na Cn silikagelu podobným způsobem jako materiál podílu 1, čímž se ziská A89271 D (8,5 mg) a A89271 F (25 mg) spolu s hapalindoly G (10,5 mg a H (12,5 mg). [<x] D + 217,73 ·)
Příklad 4
Izolace A89271 I
Lyofilizované Fischerella ambigua kmen ATCC 55210 (83 g), připravená způsobem podle přikladu 1, se extrahuje způsobem podle příkladu 3, čímž se získá 1,73 g extraktu. Tento materiál se rozpustí ve ÍOO ml methanolu a zfiltruje se 15 g adsorbentu C18. Filtrát (995 mg) se ohromatografuje na Sephadexu LH-20 způsobem podle příkladu 3, čímž se zisků podíl (150 mg) obsahující indoly.
Tento materiál se ohromatografuje na Cl8 preparativnim sloupci, jak shora popsáno, za použiti gradientu 80 % až 88 % methanolu ve vodě, přičemž se shromažďuji 5 ml frakce (průtoková rychlost 5 ml/min). Frakce 42 až 50 obsahuje faktory A89271 A a E, frakce 52 až 58 obsahuje hapalindol G a frakce 59 až 62 obsahuje A89271 I.
Frakce, obsahujíc! A89271 I se spoji a zkoncentruji, čímž se získá zbytek (7,6 mg), který se čisti preparativní chromatografií v tenké vrstvě na silikagelu (systóm hexan/dioxan 3:2), čímž se získá 4,5 mg A89271 T.
Přiklad 5
Izolace A89271 faktorů B a F z Hapalosiphon hlbernious
Lyofilizovaný Hapalosiphon hibernicus ATCC 55225 (25 g), připravený způsobem podle přikladu 2, se extrahuje v míchačce třikrát vždy jedno11travýra podílem 70% ethanolu. Zfiltrované extrakty se spoji a odpaří se. Polopevný zbytek (4,72 g) se chromatografuje na C18 reversním fázovém silikagelu (50 g) za použiti strmně stupňovitého gradientu voda k methanolu k dichlormethanu. Frakce, obsahující indolové alkaloidy podle iH NMR a podle chromatografie v tenké vrstvě (systém 3 : 1 toluen/ethylacetát) se spoji (1,4 g) a dále se rozdělí bleskovou sloupcovou ohromatografii na silikagelu (40 g) za použiti směsi hexanu a ethylacetátu. Frakce eluovaná systémem 4 : 1 hexan/ethylácetát (138 mg), obsahuje v podstatě čistý A89271 B. Frakce 7 (290 mg) se dále chromá tografuje na C8 reverzním fázovém silikagelu za použiti rozpouětědlového gradientu podobného, jako uvedeno shora. Frakce 32 až obsahuje pouze A89271 F podle iH NMR a podle chromatografie v tenké vrstvě. Frakce 5 (180 mg) se překrystaluje ze systému hexan/dichlořmethan, čímž se získá A89271 F (100 mg) bílých jehlic
Přiklad 6
Izolace A89271 B z Westiellopsis prolifica
Lyofilizovaný Westiellopsis prolifioa EN-3-1 (17,3 g) se extrahuje 70% ethanolem (jeden litr) míšením (3 krát). Zfiltrovaný exrtrakt se odpaří, čímž se získá polopevný zbytek (3,5 g). Surový extrakt se frakcionuje bleskovou sloupcovou chromatografií na C-18 reverzním fázovém materiálu (50 g) za pouzžiti strraně stupňovaného gradientu voda k methanolu k dichlormethanu. Frakce 6 až 10 obsahuje A89271 faktory podle *H NMR spektroskopie a podle chromatografie v tenké vrstvě. Tyto frakce se opět spojí (1,25 g) a dále se rozdělí bleskovou sloupcovou chromatografií na silikagelu (150 mg) za použití směsi hexan/ethylacetát. Frakce 3 z tohoto sloupce (32 mg) obsahuje především Ά89271 B podle iH a 13C NMR spektroskopie. Tyto frakce se překrystaluji ze systému hexan/dichlormethan, čímž se ziská čistý A89271 B ve formě bílých jehlic (13 mg).
Přiklad 7 atosič pro strukturální formule A89271 A - F a I
1) AB 9 271 A.
a) Charakteristiky [a]D -30° (MeOH, c 0.1);
CD (MeOH) λ nm [Θ]: 228 (-30,200), 248 (1,000), 272 (-11,000), 303 (18,100);
UV (MeOH) nm (ε) : 227 (13,900), 301 (2,170);
IR (KBr) ν^: 3500, 3007, 2977, 2933, 2123,
1391, 1371, 1188, 1043, 1003, 937 cm-1;
XH NMR (500 MHz, CDCl3) δ (multiplicita-, J Hz; asignace”.; NOE ): 7,12 (dd, J = 7,,3 a 0,7 Hz; H-5; 6,17); 7,31 (m, J = 7,8 a· 7,3 Hz; H-6; 5, 7), 7,32 (m, J = 7,8 a- 0,7 Hz; H-7; 6), 4.,09 (dd, J 12,3 a 3.9 Hz; H-13; 14eq, 15,20), 2,17 (ddd, J = -12,8, 3,9 a.. 2,7 Hz; H-14eq; 13, Max, 15,17), 2,47 (q, IJI = 12,8 Hz; H-14ax; 14eq,18,19), 1,64 (br ddd, J = 12,8, 2,7 a'/, 1,2 Hz; H-15; 13, Meq, 17), 1,35 (s; H3-17; 5,Meq,15), 1,39 (s; H3-I8; 3-OH, 10-OH, MaX), 1,68 (s; H3-19; 10-OH, Max, 21Z, 25), 5,96 (dd, J = 17,3 a 11,1 Hz; H-20; 13,2lZ,21E), 5,37 (d, J =
17.3 Hz; H-212; 19,2O,21E,26), 5,53 (d, J = 11,1 Hz; H-21E; 20,21Ž), 3,11 (d, J = 4,3 Hz; H-25; 26,27), 3,55 (d, J =
4.3 Hz; H-26; 19,21Z,25), 1,73 (s; H3-27; 25), 1,72 (s; H3-28; žádná), 2,91 (s; OHinaC-3; 10^-OH, 18), 4,26 (d, J »
1.2 Hz; OH nac-10; 3-OH, 18,19);
13C NMR (125 MHz, CDCI3) d (multiplicita, pozice ; 1H-HMBC): 187,4 (s, C2; 3-OH, 25,27,28), 83,0 (s, C3; 3-OH, 10-OH), 147,1 (s, C4; 5, 6, 7,15,17,18), 120,0 (d, 05; 6, 7), 130.7 (d, C6; 5), 118,8 (d, C7; 5), 152,0 (3, C8;5, 6,7), 135,8 (s, 09; 3-OH,5,7), 77,7 (s, CIO; 3-OH, 10OH,14eq, Max, 26), 68,1 (s, Cil; 10-OH, 19,20,25,26), 51,2 (s, C12; 13, Meq, Max, 19,20,21Z, 21E, 26), 63,8 (d, C13;
Meq, Max, 15,19,20), 29,0 (t, C14; 13,15), 53,3 (d, C15;
13, Meq, Max, 17,18,10-OH), 38,8 (s, C16; 5,15,17,18), 26,3 (q, C17; 15,18), 25,6 (q, C18; 17), 13,9 íq, C19; 13,20),
140,5 (d, C20; 13,19,2lZ), 120,3 (t, C21; Žádná), 164,5 (s, C23; Žádná), 39,1 (s, C24; 25,26,27,28), 64,6 (d, C25; 26,27,28), 60,3 (d, C26;žádná), 30,6 (q, C27; 25,28), 26,6 (q, C28; 25, 27) .
FABMS m/z 453/455 (3:1 MH+ iontový shluk)
HR FABMS m/z 453,1953 (C2SH30N2O3CI, Δ -0.8 mmu) .
b) Analýza charakteristik
NMR analýza ukazuje přítomnost 26 uhlíkových a 29 vodíkových atomů. Pozoruje se 26 signálů v NMR spektru pro 5 methylových, 2 methylenové, 8 methinových a 11 kvarterních atomů uhlíku. V HMQC
- 27 experimentu 15 protónovaných uhlíkových signálů je ve vztahu se 17 a 19 protonovými signály v iH NMR spektru. Dva zbylé protonové signály (2,91 a 4,26 ppm) se přikládají dvěma vyměnitelným protonům. Jelikož FAB MS ukazuje 3 : 1 protonovaný molekulární iontový svazek při miz 453/455, má mít A89271 A jeden atom chloru, dva atomy dusíku a tři atomy kyslíku na účet multiplicity iontového svazku a zbytek hmotových jednotek. Vysoká rozliáovaci měřeni potvrzuji molekulární vzorec C26H2«,N2O3C1, což vyžaduje 13 jednotek nenasycenosti .
Pouze 10 signálů je v oblasti ÍOO až 200 ppm spektra 13C NMR. Šest plků se přičítá atomům uhlíku trisubstituovaného benzoidního jádra, dva navlo atomům uhlíku vinylové skupiny a další isonitrilovému uhlíku. Zbylý signál (6 187,4) je konsistentní s iminovým uhlíkem a dokládá, že A89271 A je indolenin. A89271 A nemůže být indolem, jelikož jeho UV spektrum je atypické pro indol a jeho NMR spektrum nemá signály pro sp2-typ C3 a indol NH. Jelikož pouze 7 z 13 jednotek nenasycenosti se přičítá v vazbám, je A89271 A hexacyklický.
Dva atomy kyslíku jsou v hydroxylových skupinách (6« 2,91 a 4,26), vázané na kvarterní atomy uhlíku (6c 83,0 a 77,7). Zdá se, 'íe třeti atom kyslíku je v epoxidovém kruhu (5» 3,11 a 3,55; 6c
64,6 a 60,3).
Porovnání NMR hodnot (včetně HMBC a NOESY ukazuje, že A89271 A má stejnou strukturu jako A89271 C od C4 až C21, avšak s tím rozdílem. Že má hydroxylovou skupinu na C3, C26 z 5 substituentů uhlíku na C2 anelovaném na Cil a epoxidický atom kyslíku, vázaný na C25 a C26. Hydroxyl na CIO je axiální, jelikož NOE se zdají mezi OH protonem a axiálními methylovými skupinami na Cl2 a Cl6. Hydroxylová skupina je také na C3 a syn k OH na CIO, jelikož (1) NOE je viditelný mezi dvěma OH protony a mezi OH protonem na C3 a axiální methylovou skupinou na C16 a (2) HMBC vztahy se nalezly mezi OH protonovým signálem a C2, C3, C9 a CIO signály. Jako v případě A89271 B, C a E, infra, gem-dimethylová skupina je vázána na C2, jelikož HMBC vztahy se pozoruji mezi dvěma protony dvou methylových skupin (1,72 a 1,73 ppm) a C2. Zbylé atomy, to je atopmy 1,2-disubstituovaného epoxidového jádra, jsou vázány na gem-dimethylovou skupinu a Cíl, jelikož se zjistily HMBC vztahy mezi mezi H26 a CIO, Cil, C12, C24 a C25 a mezi H15 a C24, C27 a C28. Skutečnost, že protony na epoxidovém kruhu jsou orientovány jak ukázáno v 1 jsou založeny na NOE mezi (1) H25 a protony na C26 a C 27 a (2) H26 a protony na C 19, C21 (pouze E) a C25.
c) Krystalografická analýza A89271 A rentgenovými paprsky
A89271 A krystaluje ze systému methanol/voda v jednoklonné soustavě skupina Ρ2χ s jednotkou o rozměrech a - 0,792(2)nm, h » 1,2418(3) nm, c » 1,3686(6) nm, β » 94,55(3) nm a vypočtená hustota je 1,27 g cm-3. Celek 1803 reflexi s 2q menši než 116,0, měřeno Siemens R3M-V difraktometrem s rentgenovými paprsky za použiti zářeni mědi. Struktura řešena za použiti přímých způsobů a rafinována posledními čtverci s faktory anlsotropické teploty pro všechny atomy s výjimkou vodíku. Všechny atom vodíku jsou začleněny na vypočítané polohy. Finální R-faktor je 0,06 pro 1668 pozorovaných reflexi. Tak je potvrzena struktura a relativní stereo chemie A krystalografií s rentgenovými paprsky.
2) A99371-A*
a) Charakteristiky Mp >300°;
[a]D-37e(MeOH, c 0,1) .
CD (MeOH) λ nm [Θ]: 225 (20,800), 236 (-11,000), sh 255 (-6,800), 280-292 (-1,300), 300-310 (-4,700);
UV (MeOH) Xjnax nm (S): 225 (32,400) 282 (7,600);
IR (KBr) iWx: 3620, 3487, 2975, 2142, 1602,
1467, 1445, 1231, 1046, 924 cm“1.
1h NMR (500 MHz, CDC13) 5 (multiplicita, J v
Hz; asignsce · ; NOE ): 8,03 (br s; 1-NH; 7,27,28), 7,00 ídd, J = 7,4 a 0,7 Hz; H-5; 5,1), 7,12 (m, J » 7.9 a
7.4 Hz; H-6; 5,7), 7,13 (m, J = 7.9 a 0,7 Hz; H-7;
1-NH, 5), 3,22 (dd, J = 11,2 a 2,3 Hz; H—10; ll,14ax, 18,
19), 4,67 (d, J =2,3 Hz; H-ll; 10, 19, 25, 26Z, 27, 28),
4,41 (dd, J = 12,5 a 4,4 Hz; H-13; 14eq, 15), 2,44 (ddd,
J = -13,0, 4,4 a. 2,8 Hz; H-14eq; 13, 14ax, 15, 17), 1,94 {q, |J| = 13,O Hz; H-14ax; 10, 14eq, 18, 19), 2,22 (ddd, J = 12,5, 11,2 a 2,8 Hz; H-15; 13, 14eq, 17), 1,53 (s; H3 -17; 5, 14eq, 15, 18), 1,05 (s; H3-18; 10, 14ax, 17), 1,34 ís; H3-19; 10, 11, 14ax, 20, 212), 6,07 (dd, J ~ 17.6 a
11,1 Hz; H-20; 13, 19, 21Z, 21E), 5,27 (d, J = 17, 6 Hz;
H-21Z; 19, 20), 5,34 (d, J = 11,1 Hz; H-21E; 20), 6,21 (dd, .
J a 17,6 a 10,6 Hz; H-25; 11, 262, 26E, 27, 28), 5,24 ídd, J = 17,6 a. 0,9 Hz; H-26Z; 11, 25, 27, 28), 5,21 (dd,
J = 10,6 a .0,9 Hz; H-26E; 25), 1,.58 (s; H3-27; 1-NH ,11,
25, 262), 1,.52 (s; H3-28; 1-NH, 11, 25, 262) .
13C NMR (125 MHz, CDCÍ3) δ (multiplicita,' pozice: ; ^H-HMBC): 137,0 (s, C2; 1-NH, 10, 25, 27, 28),
105,4 (s, C3; 1-NH, 10,11), 139,7 (s, C4; 5, 6, 7, 17,
18), 112,6 (d, C5; 6, 7), 122,2 (d, C6; žádná), 107,8 (d,
C7; 5), 132,2 (s, C8; 1-NH, 5, 6, 7), 127,0 (s, C9; 1-NH,
5, 6, 7), 34,5 (d, CIO; 11,14eq, 14ax, 15), 66,2 (d, Cil; 15,
19, 20), 44,8 (s, C12; 10, 11, 13, 14eq, 14ax, 19, 20, 21Z,
21E), 62,8 (d, C13; 11, 14eq, 14ax, 19, 20), 33,0 (t, C14;
10, 13, 15), 44,6 (d, C15; 10, 11, 14eq, 14ax, 17, 18), “36.5 (s, C16; 5,14eq, 14ax, 15, 17, 18), 23,9 (q, C17; 18),
24,8 (q, C18; 15,17), 16.2 (q, C19; 11, 13, 20), 142,4 (d,
C20; 13, 19, 21Z, 21E), 115,9 (t, C21;2áďná), 158,6 (s,
C23; 11), 38,7 (s, C24; 25, 26Z, 26E, 27, 28), 146,2 (d,
C25; 26Z) 27, 28), 113,1 (t, C26; none), 27,6 (q, C27; 25,
28), 29,3 (q, C28; 25, 27).
PDMS m/z 406/408 (3:1 M+ iontový 'shluk)
PABMS m/z 407/409 (3:1 MH+ iontový shluk);380/382
ÍMH+-HCN) ;
HR FABMS m/z 407,2207 (C2gH32N2Cl, Δ +4,7 mmu),
380,2112 (C25H31NCI, Δ +3,3 mmu).
b) Analýza charakteristik
Desorpčni hmotové spektrum B vykazuje 3:1 molekulární iontový shluk při m/z 406/408 a vysoce rozlišující hmotové měřeni potvrzuje elementární složeni C26H31N2CI. Z vyšetřeni hodnot a 13C NMR vyplývá, že B je hapalindol G, substituovaný na C2
I, l-dimethyl-2-propenylovau. skupinou. Signál pro proton na C2 indolového ppodilu chybí avšak přídavné signály potvrzuji přítomnost druhé vinylové skupiny a druhé gem-dimethylové skupiny. HMBC a NOESY zkoušky potvrzuji navrženou strukturu. Například kopulace se pozoruje mezi C2 a protony na NI, CIO, C25, C27 a C28 při experimentu HMBC a NOE jsou evidentní mezi Hll a protony na C26 (Z pouze), C27 a C28.
3) M9371., &a) Charakteristiky .
amorfní pevná látka [a]D -44° (MeOH, c 0,1)
CD (MeOH) λ nm [Θ]: 224 (-7,000), 229 (-25,500),
242 (-8,700), 255 (-8,900), 291 (-5,000), 295 (-5,300);
DV (MeOH) λη,Μν nm (ε) : 223 (40,700), 281 (9,400), 291 (7,700);
ΙΉ (KBr) η,Μχ; 3486, 2976, 2144, 1442, 1227,
999, 936 cm-1.
χΗ NMR (500 MHz, CDCI3) δ (multiplicita·, J v Hz; asignace ·? NOE ): 8,18 (br s; 1-NH; 7, 27, 28), 7,07 (dd, J = 7,3 a 0.8 Hz; H-5; 6, 17, 18), 7,17 (m, J = 8^,1 a 7,3 Hz; H-6; 5, 7), 7,15 (m, J = 8,1 a,· 0,8 Hz; H-7;
1-NH, 6), 4,68 (S; H-ll; 10-OH, 19, 20, 21Z, 25, 26Z, 2SE,
27, 28),4,41 (dd, J = 12,2 a 4,1 Hz; H-13; 14eq, 15, 20,
21Z), 2,30 (ddd, J = -13,1, 4,1 a · 2,3 Hz; H-14eq; 13,
14ax, 15, 17), 2;53 (q, IJI = 12,7 Hz; H-14ax; 11, 14eq,
18, 19), 2,41 (ddd, J = 12,7 a 2,3 Hz; H-15; 13, 14eq,
17), 1,54 (s; H3 -17; 5, 14eq, 15, 18), 1,23 (s; H3 -18; 5,
10-OH, 14ax, 17), 1,53 <s; H3 -19; 10-OH, 11, 14ax, 20,
21Z), 6,04 (dd, J = 17,6 a 10,9 Hz; H-20; 11, 13, 19,
21Z, 21E), 5,26 (d, J = 17,6 Hz; H-21Z; 11, xj, 19, 20,
21E), 5,31 (d, J = 10,9· Hz; H-21E; 2O,21Z), 6,33 (dd, J =
17,6 a; 10,4 Hz; H-25; 10-OH, 11, 26Z, 28E, 27, 28), 5,36 (d, J = 17,6 Hz; H-26Z; 10-OH, 11, 25, 26E, 27, 28), 5,28 (d, J = 10,4 Hz; H-26E; 11, 25, 26Z), 1,64 (s; H3-27; 1-NH,
II, 25,26Z,28), 1,62 (S; H3-28; 1-NH, 11, 25, 26Z, 27), 1,67 (s; 10-OH; 11, 14ax, 19, 25, 26E) 13C NMR (125 MHz, CDCI3) δ (multipliciCa, pczice ; 1H-HMBC) : 13 8.8 (s, C2; 1-NH, 25, 27, 28), 111.4 (s, C3; 2-WH, ÍO.-OH, 11), 139,8 (s, C4; 6, 17, 18), 114,4 (d, C5; 6, 7), 122.9 (d, C6; žádná), 107,6 (d, C7; 5), 131,8 (s, C8; 1-NH, 6), 125,4 (s, C9 ; 1-NH, 5, 7), 73,8 (s, CIO ;
11, 14eq, 14ax, 15, IO-OH), 68,5 (d, Cil; 15, 19, 20, 10OS), 45,3 (s, C12; 11, 13, 14eq, 14ax, 19, 20, 212, 21E), 63,9 (d, C13; 11, 14eq, 14ax, 15, 19, 20), 29,1 (t, C14;
13, 15), 48,0 (d, C15; 11, 13, 14eq, 14ax, 17, 18), 36,7 (s, C16; 5, 14eq, 14ax, 15, 17, 18), 27,1 (q, C17; . 15,18),
26,5 (q, C18; 15, 17), 18,5 (q, C19; 11, 13, 20), .144,2 (d,
C20; 13,19,212), 115.5 (t, C21;žáďná), 159;0 (s, C23; 11), 39.0 (s, C24; 25, 262 , 26E, 27, 28), 146,8 (d, C25; 262,
27, 28), 112.7 (t, C26; žádná), 27,6 (q, C27; 25, 28), 28.9 (q, C28; 25, 27);
FDMS m/z 421/423 (3:1 [M-H] + iontový shluk)
FABMS m/z 423/425 (3:1 MH* iontový Shluk)
HR FABMS m/z 423,2197 (C26H32N2OCI Δ +0-6 mmu).
b* Analýza charaktorí^tik
Hmotová spektrometrie potvrzuje molekulární vzorec pr A37.271 C 1akc C;-H · : W. CCi . -H Ntífc Λ89271 C nemá. signál pro H1O který ma 3, ma však sior.ai pri 1.67 pro hydroxylový oroton iívdroxy 1 o vz skupina v jeví na CIO jelikož OH protonový signa', vykazuje dv-uvazné a třívazné HMBC vztahy k C3. CIO, Cil, C15 3 y* ,·λ z r i
-ve nkup:
Cl' mě 1- dvo jelikož signál tr: axiáln. proton na Clá a protony axiálních methylových skupil na C12 a C16 jsou posunuty výrazně dolů a NO£ se pozoruji mezi Ol protonem a protony na Cil, C14 (pouze axiálně), C19, C25 a C2( (toliko E) Proto má AS9271 c strukturu podobnou jako hapalindol
V 3 tou výjimkou, áe A89271 C má 1,1- dimsthyl-2-propenylovoi skupinu v poloze C2.
) A89271 D.
a) Charakteristiky amorfní pevná látka [a]D -13° (MeOH, c 0,1);
CD (MeOH) λ nm [q]: 221 (31,300), 231 (-18,000),
268 (1,500), 300 (-2,500);
UV (MeOH) Xmax nm (ε) : 224 (36,000), 28Ó (7,200),
290 (5,500);
IR (KBr) nmax: 3020, 2131, 1701, 1445, 1250, 1033 cm“1.
XH NMR (500 MHz, CDCI3} δ (multiplicifa, J v;.
Hz; asignace; NOE ): 8,08 (br s; 1-NH; 7, 27, 28), 7,08 (dd, J = 7,2 a . 0,7 Hz; H-5; 6, 17, 18), 7.15 (dd, J = 7,7 a 0,7 Hz; H-6; 5, 7), 7,21 (dd, J = 7,7 a· 7,2 Hz; H-7;
1-NH, £,53 (dd, J = 12,7 a 3,6 Hz; H-13; 14eq, 15, 20),
2.32 (ddd, J = -12,7, 3,6 a . 2,7 Hz; Hl4eq; 13, 14ax, 15,
17), 2.61 fq, I JI = 12,7 Hz; H-14ax; 14eq, 18, 19), 2,46 (br dd, J = 12.7 a 2.7 Hz; H-15; 13, 14eq,17), 1,53 (s; H317; 5, 14eq, 15,18) 1,37 (s; H3-I8; 5, 10-OH, 14ax, 17),
1,84 (3; H3-19; 10-OH, 14ax, 212, 26, 26-OH), 6,08 (dd, J =
17,2 a 11,1 Hz; H-20; 13, 21Z, 21E, 26), 5,43 (d, J =
17,2 Hz; H-21Z; 19, 20, 21H, 26), 5,54 (d, J = 11,1 Hz; H21E; 20,212), 4,65 (dd, J = 5,0 a. 1.8 Hz; H-26; 19, 212,
25, 26-OH), 4,22 (br s; H-25; 26,27), 1.60 (s; H3-27; 1-NH,
25), 1.43 (s; H3-28; 1-NH, 10-OH, 26-OH), 3.61 (S; OH na C- |
10; 18, 19, 26-OH, 28), 2,55 (br s; OH m C25; 10-OH, 26OH), 4,01 (d, J = 5,0 Hz; OH n\C-26; 10-OH, 19, 26, 28) .
13C NMR (125 MHz, CDCI3) δ (multiplicit-, pozice ‘•H-HMBC) : 136.9 (s, C2; 1-NH, 27, 23), 110.4 (s,
C3; 1-NH), 139,3 (s, C4; 6,17,18), 114,7 (d, C5; 7), 123,1 (d, C6; žádná)/ 107,3 (d, C7; 5), 133.0 (s, C8; 1-NH, 6), '
124.7 (s, C9; 1-NH, 5, 7), 77.8 (s, CIO; 10-OH, 14eq, 14ax,
15, 26), 70.3 (s, Cil; 10-OH, 19, 20, 26, 26-OH), 50,7 (s,
C12; 13, 1.4eq, 14ax, 19, 20, 212, 21E, 26), 65.4 (d, C13;
14eq, 14ax, 15, 19, 20), 29,0 (t, C14; 13, 15), 49,4 (d,
C15; 10-OH, 13, 14eq, 14ax, 17, 18), 37.6 (s, C16; 5, 15,
17, 18), 28,8 (q, C17; 13), 26,6 (q, CIS; 15, 17), 13.2 (q, Cl9; 13,20), 141,3 (d, C20; 13, 19, 21Z), 120 2 (t C21; žádná), 163,0 (s, C23; žádná), 40.4 (s, C24; 26, 2 ,
73,9 (d, C25; 26, 27, 28), 80,7 (d, C26; 26-OH), 28,1 (q,
C27; 28), 27,0 (q, C28; 25, 27).
FDMS m/z 454/455/456/457 ( překrytí 3. M
MH+ iontový shluk? _ .
HR MS m/z 454.2009 (C2SH31N2O3CI, D +1,4 mmu) .
b) Analýza charakteristik
FAB MS vykazuje 3 : 1 MH* iontový shluk při m/z 454/456 a HR MS dokládá molekulární vzorec C3 4H > 1 N-0 -,C1 . Spektrum UV a NH signál při 8,08 ppm ve *H NMR spektru souhlasí s indolem. NMR hodnoty ukazuji, že A39271 D má podobnou strukturu jako A89271 F, přičemž je rozdílem, že epoxidový kruh je nahrazen trans dioiovou jednotkou. !H NMR spektrum dává signály při 4,22 (H25) a ~ 4,65 (H26) -pm, která jsou kopulovány navzájem a k hydroxylovým protonovým signálům při 2,55 a 4,01 ppm. Experiment HMBC dokládá, že transdiolová jednotka je spojena s Cil a C24, jelikož příčné píky jsou mezi sionálem H 26 a signály CIO. Cil, C12. C24 a C25.
MOESY experiment dokládá, že skupina OH na C26 je syn k methylová skupině na O :.2 a OH skupině na CIO, jelikož NOE se jeví mezi í'1j 26-OH protonem a protony 1O-OH. axiální methylová skupina na C12 a pro-R w-vňyi .vá skunina r,a C24 a (2) H26 a Z oroton na C21.
5) A89271 E.
a) Charatexisfiiky amorfní pevná látka [a] o -9.5° (MeOH, c 0,1) .
CD (MeOH) λ nm [Θ]: 223 (12,600), 230 (-21,200), 241 (-4,100), 251 (-6,700), sh 270 (-3,400), sh 282 (-2,400), 291 (- 2,100), 295-305 (-3,600);
3.2 Hz; H-13; 13ax,
2.3 Hz; H-14eq; 13ax,
UV (MeOH)-Xmax nm (ε) : 223 (36,000) 281 (8,400), 291 (6,800);
IR (KBr) n^: 3486, 2970, 2146, 1700, 1603,
1441, 999, 935 cm1.
NMR (500 MHz, CDC13) δ (multiplicica, J v Hz; asignace ; NOE ): 8,15 (br s; 1-NH; 7, 27, 28), 7,06 (dd, J = 7,4 a. 0,6 Hz; H-5; 6,17,18), 7,15 (dd, J = 8,1 a 7.4 Hz; H-6; 5,7), 7,13 (dd, J = 8,1 a 0,6 Hz; H-7;
1-NH, 6), 4,49 (s; H-ll; 10-OH, 19, 20, 25, 26Z, 26E, 27, 28), 1,93 (ddd, J = -13,1, 12.7 a 3,6 Hz; H-13; 13.eq, 14eq), 1,64 (ddd, J = -13,1, 3,6 a.
14eq), 1,88 (dtd, J = -12,7, 3,6 a
13eq, 14ax, 15, 17), 2,11 (qd, IJI = 13,0 a. 3,2 Hz; H-14ax; 14eq, 18, 19) 2,21 (dd, J = 12,7 a 2,3 Hz; H-15; 14eq, 17), 1,51 (s; H3-17; 5, 14eq, 15, 18), 1,21 (s;
H3-I8; 5, 14ax, 17), 1, 42 (s; H3-19; 11, 14ax, 20, 21Z), 5.94 (dd, J = 17,6 a. 10,9 Hz; H-20; 11, 19, 21Z, 21E), 5,06 (d, J = 17,6 Hz; H-212; 19, 20, 21E), 5,08 (d, J =
10,9 Hz ; H-21E; 20, 21Z), 6,36 (dd, J = 17,6 a. 10,4 Hz; H-25; 11, 26Z, 26E, 27, 28), 5.37 (dd, J = 17,6 a <1 Hz; H-262; 11, 25, 26Ξ, 27, 28), 5Z28 (dd, J = 10,4 a <1 HZ; H-26E; 11, 25, 26Z), 1,67 (s; H3 -27; 1-NH, 11, 25, 26Z, 28), 1,63 (s; H3-28; 1-NH, 11, 25,26Z, 27), 1.62 (s; 10-OH;
11) .
13C NMR (125 MHz, CDC13) δ (multiplicita’, pozice ; 1H-HMBC) : 138,5 (s, C2; 1-NH, 25, 27, 28), 112,6 (s, C3; 1-NH,10-OH, 11), 140,6 (s, C4; 5, 6, 15, 17, 18),
114,2 (d, C5; 7), 122,6 (d, C6; 5), 107,3 (d, C7; 5), 131.. 7 (s, C8; 1-NH, 5, 6), 125,7 (3, C9 ; 1-NH, 5, 7), 74,2 (s, CIO; 10-QH, 11, 14eq, 14ax, 15), 67,2 (d, Cil;· 10-QH, 15, 19, 20), 40,6 (s, C12; 11, 13eq, 14eq, 14ax, 19, 20, 21Z, 21E), 31,6 (t, C13; 11, 14eq, 14ax, 15, 19, 20), 17,7 (t, C14; 13 ax, 15/, 47,0 (d, C15; 10-QH, 11, 13 ax, 14eq, 14ax, 17, 18), 36,5 (s, C16; 5,14eq, 15,17,18), 27,0 (q, C17; 15,18), 26f6 (q, C18; 15,17), 24,1 (q, C19; 11, 13 ax, 20),
147,5 (d, C20; 11, 13 ax, 19, 21Z), 111,9 (t, C21;žádná),
157., O (s, C23; 11), 39,0 (s, C24; 25, 26Z, 26Ξ, 27, 28),
147,1 (d, C25; 26Z, -27, 28), 112,6 (s, C26; žádná), 27.8 (q, C27; 25, 28), 28.9 (q,C28, 25, 27) .
FDMS m/z 388 (M+);
FABMS m/z 389 (MH*) ;
HR FABMS m/z 389;2590 (C26H33N2O, Δ +0.3 mmU) .
23j Analýza charakteristik
Elementární složení A89271 E je podle MS C26H32N2O. NMR dokládá, že E je dechlorovaným derivátem A89271 C. Hodnoty COSY a kopulační konstanty naznačují, že C13 až C15 jsou jednotkami CH2—CH2—CH„x. Podle experimentů HMBC a NOESY je OH na CIO axiálně orientován.
5) A8 932.1.......£.
a) Charakteristiky >300°C /zs rozkladu/ [a)D -60° (MeOH,c 0,1).
CD (MeOH) λ nm [Θ]: 220 (23,200), 231 (-13,400); DV (MeOH), Xmax: nm (8): 223 (36,000), 272 (7,100), 279 (6,800);
IR (KBr) Ymax: 3691, 3618, 2976, 2130, 1604,
1448, 1046, 944, 876 cm'1 ΧΗ NMR ( 500 MHz, CDCI3 ) δ (multiplicita, J v
Hz; asignace ; NOE ): 7?99 (br s; 1-NH; 7,27,28), 7,06 (dd, J = 7,2 a 0.7 Hz; H-5; 6,17,18), 7.19 (dd, J = 8,1 a.' 7,2 Hz; H-6 ; 5, 7), 7,09 (dd, J = 8.1 a·· 0,7 Hz;
H-7; 1-NH, 6), 4.45 (dd, J = 12,7 a.·. 3,6 Hz; H-13; 14eq, :15,, 20), 2.33 (ddd, J = -12,7, 3,6 a. 2,7 Hz; Hl4eq; 13, 4ax, 15, 17), 2.52 (q, Ul = 12,7 Hz; H-14ax; 14eq, 18,
19), 2,34 (dd, J = 12.7 a. 2,7 Hz; H-15; 13, 14eq, 17), .1,5.1 (s; H3-17; 5, 14eq, 15,18), 1,40 (s; H3-I8; 5, 10-OH, 14ax, 17), 1,74 (s; H3-19; 10-OH, 14ax, 20, 21Z, 26), 6,16 (dd, J = 17,6 a. 10.9 Hz; H-20; 13, 19, 21Z, 21E, 26),
5,44 (d, J = 17,6 Hz; H-212; 19, 20, 21Z, 26), 5,,59 (d, J =
10.9 Hz; H-21E; 21Z), 3,13 (d, J = 4,5 Hz; H25; 26, 27,
28), 3,Π (d, J = 4.5 Hz; H-26; 19, 21Z, 25), 1:62 (s; H3-27; 1-NH, 25, 28), 1,67 (s; H3 28; 2-WH, 25, 27), 3,69 ís; OH on C-10;18, 19).
13C NMR (125 MHz, CDC13) δ (multiplicita·, pozice ; Ih-HMBC): 133,5 (s, C2; 1-NH, 25, 27, 28), 109,6 (s. C3; 1NH), 139.7 (s, C4; 6, 17, 18), 114.5 (d, C5; 7),
123,2 (d, C6; 5, 7), 107.0 (d, C7; 5), 133.6 (s, C8; 1-NH, 6), 124,1 (s, C9? 1-NH, 5,7), 75,0 (s, CIO, 10-OH, 14eq, 14ax, 15, 26), 68,6 (s, Cil; 19, 20, 25, 26), 50,4 (s,
C12; 13. 14eq, 14ax, 19, 20, 21Z, 21E, 26), 64,4 (d, C13; 14eq, 14ax, 15, 19, 20), 28,9 (t, C14; 13, 15), 48,4 (d, C15; 10-OH, 13, 14eq, 14ax, 17, 18), 37.8 (s, C16; 5, 14eq, ' 14ax, 15, 17, 18), 28,4 (q, C17; 15, 18), 26,5 (q, C18; 15,17), 13,1 (q, C19; 13, 20), 141,3 (d, C20; 13,19,21Z), 120,0 (t, C21;2á'dhá), 161,5 (s, C23, 36.1 (s, C24; 25, 26, 27. 28), 65,9 (d, C25; 26, 27, 28), 61,4 (d, C26; 25), 27,3 <q, C27; 25, 28), 29,8 (q, C28; 25, 27).
FDMS m/z 436/438 (3 :1 M* iontový shluk )
FABMS m/z 437/43 9 (3:1 MH* iontový aillukj HR FABMS m/z 437,1990 (C26H3oN2O2Cl, Δ +0,7 mmu)
3sj) Analýza charakteristik
Elementární složeni A89271 F je podle HR MS C26H?9N2O2C1. AB9271 má tedy o jeden atom kyslíku méně než A89271 A. Analýza iH a »3C NMR spektra, zvláště z experimentů HMBC a NOESY ukazuje, že srtx+iktura F je podobná jako A. V 3H NMR spektru A89271 F chybí však 3-OH protonový signál avšak indolový NH signál je při 7,99 ppm. Indolový systém zjištěn také podle UV spektra.
) A89271 I.
a) Charakteristiky
DV (MeOH) Xmax nm (ε) : 223 (36,700), 272 (7,600), 279 (7,300);
ÍH NMR (300 MHz, d6-aceton.): 5 10,05 (br s, 1NH), 7,04, 6,98, 6.96 (3 d, H-5, H-6, H-7), 2,4, 2.3, 1,9,
1,86 (5 m, H-13ax, H-13eq, H-14ax, H-14eq, H-15), 1.45 (s, CH3-17), 1,33 (s, CH3-I8), 1,73 (s, CH3-19), 6.22 (dd, H-20), 5,35 (d, H-21Z), 5,31 (d, H-21E), 3,3 (d, H-25),
3.71 (d, H26), 1,67 (2s, CH3-27, 28).
FABMS m/z 403 (MH+);
HR PABMS m/z 403,2394 (C2SH31N2O2, Δ + 0,8 mmu).
Absolutní stereochemie
Absolutní stereochemie· A - F a I nebyly přesně stanoveny. Stanovila se CD spektra sedmi sloučenin. Spektra B - F vykazují negativní pík při 230 až 235 nm a pozitivní pík při 220 - 225 nm, což naznačuje, že absolutní stereochemie B - F je identická. A89271 faktory pravděpodobně mají stejnou absolutní 3tereoohemii jako hapalindoly. Hapalindol G, produkovaný kulturou F. ambigua má optickou rotaci stejnou jako autentický vzorek hapalindolu G, produkovaného Hapaiosiphon fontinalis, jehož absolutní stereochemie je známa. Proto je doměnka; že absolutní konfigurace A - F a I jsou, jak bylo naznačeno.
Průmyslová využitelnost
Nové hapalíndo1ové alkaloidy, označované jakožto A89271 A F a I a B a F, použitelné jakožto antifungální a protinádorová činidla a hapalindoly G a H se připravují kultivaci modrozelené sy Fischerella ambigua ATCC a Hapaiosiphon hibernicus ATCC 55225.

Claims (1)

1. Nové
PATENTOVÉ NÁROKY alkaloidy hapalindolového typu vzorce (I) A89271 A (2) A89271 B;
(5) A89271 E?
- 4C Cl (7) A89271 I.
-4 Λ» · M O vé a i ka 1 c· i dv hapa: i ndoiové ho typu pódia nároku 1 vzor A3927.1 A. Z Nové alka i j ijy ha ca i i ndo i o ve ho tvou co d i 2 nároku 1 vz o r ce A89271 7. 4. Nové a i kal oidy hapa i i ncolové ho typu podle nároku 1 vzor
ce Α8927Ί.
5. Farmaceutický prostředek s antifungální a protinádorovou účinností, vyznačující se tím, že jako účinnou látku obsahuje alespoň jeden A89271 faktor podle nároku 1 až 4 spolu s jednou nebo s několika látkami ze souboru zahrnujícího farmaceuticky vhodný nosič, excipient něho ředidlo.
6. Způsob přípravy A89271 faktoru ze souboru zahrnujícího A89271 faktor A, C, D, E a I podle nároku 1 až 4, vyznačující se tím, že se kultivuje řasa Fischerella ambigua ATCC 55210 nebo její variant, mutant nebo rekombinant, který produkuje žádaný A89271 faktor, za submerzních aerobních podmínek ve vhodném kultivačním prostředí až do vyprodukováni získáte1ného množství zvoleného A89271 faktoru.
7. Způsob přípravy A89271 F 3, vyznačující se tím, že se kultivuje řasa ze souboru zahrnujícího Fischerella ambigua ATCC 55210 a Hapalosiphon hibernicus ATCC 55225 nebo jejich variant, mutant něho rekombinant, který produkuje A89271 faktor F, za submerzních aerobních podmínek ve vhodném kultivačním prostředí až do vyprodukování ziskatelného množství A89271 faktoru F.
8. Biologikcy čistá kultura Hapalosiphon hibernicus ATCC 55225 nebo jeji variant, mutant nebo rekombinant, který produkuje A89271 faktor ze souboru zahrnujícího A89271 faktor A, C, D, E, F a I.
9. Použiti A892\l faktoru podle nároku 1 až 4 jakožto antifunantifungálně účinná Pátky pro živočichy a rostliny.
10. Použiti A8#271 faktoru podle nároku 1 až 4 jakožto antineoplasticky účinné látky pro^živočichy.
CS923240A 1991-10-29 1992-10-27 Novel alkaloids of hapalindole type, process of their preparation and a pharmaceutical preparation in which the are comprised CZ324092A3 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US78429991A 1991-10-29 1991-10-29
US07/946,501 US5292650A (en) 1991-10-29 1992-09-16 Preparation of hapalindole-related alkaloids from blue-green algae

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ324092A3 true CZ324092A3 (en) 1993-08-11

Family

ID=27120266

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS923240A CZ324092A3 (en) 1991-10-29 1992-10-27 Novel alkaloids of hapalindole type, process of their preparation and a pharmaceutical preparation in which the are comprised

Country Status (13)

Country Link
US (3) US5292650A (cs)
EP (1) EP0543516A1 (cs)
JP (1) JPH05306271A (cs)
AU (1) AU653446B2 (cs)
BR (1) BR9204183A (cs)
CA (1) CA2081510A1 (cs)
CZ (1) CZ324092A3 (cs)
FI (1) FI924883L (cs)
HU (1) HUT65709A (cs)
IL (1) IL103572A0 (cs)
NO (1) NO924152L (cs)
NZ (1) NZ244913A (cs)
YU (1) YU94292A (cs)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6753006B1 (en) 1993-02-22 2004-06-22 American Bioscience, Inc. Paclitaxel-containing formulations
US5866150A (en) * 1996-03-20 1999-02-02 Aquaculture Technology Incorporated Antibacterially active extracts from the marine algae chaetoceros and methods of use
US20030054042A1 (en) * 2001-09-14 2003-03-20 Elaine Liversidge Stabilization of chemical compounds using nanoparticulate formulations
WO2008033024A2 (en) * 2006-09-15 2008-03-20 Echo Pharmaceuticals B.V. Dosage unit for sublingual, buccal or oral administration of water-insoluble pharmaceutically active substances

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5561736A (en) * 1978-10-28 1980-05-09 Nippon Carbide Kogyo Kk Laver breeding method and material
US4755610A (en) * 1984-08-08 1988-07-05 University Of Hawaii Hapalindoles
US4870185A (en) * 1986-09-18 1989-09-26 Eli Lilly And Company Hapalindoles
US4803217A (en) * 1986-12-24 1989-02-07 Merck & Co., Inc. Hapalindolinone compounds as vassopressin antagonists
US4879232A (en) * 1987-03-17 1989-11-07 Kimberly-Clark Corporation Multilayered structure containing immobilized blud-green algae

Also Published As

Publication number Publication date
NO924152D0 (no) 1992-10-28
AU2743092A (en) 1993-05-06
BR9204183A (pt) 1994-03-22
NO924152L (no) 1993-04-30
HUT65709A (en) 1994-07-28
FI924883A7 (fi) 1993-04-30
US5292650A (en) 1994-03-08
AU653446B2 (en) 1994-09-29
FI924883L (fi) 1993-04-30
JPH05306271A (ja) 1993-11-19
NZ244913A (en) 1994-10-26
EP0543516A1 (en) 1993-05-26
IL103572A0 (en) 1993-03-15
HU9203375D0 (en) 1993-01-28
US5366890A (en) 1994-11-22
US5457119A (en) 1995-10-10
FI924883A0 (fi) 1992-10-28
CA2081510A1 (en) 1993-04-30
YU94292A (sr) 1996-01-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU684334B2 (en) Antiparasitic pyrrolobenzoxazine compounds
US4173629A (en) Antibiotic S 31794/F-1
Padhi et al. Funiculosone, a substituted dihydroxanthene-1, 9-dione with two of its analogues produced by an endolichenic fungus Talaromyces funiculosus and their antimicrobial activity
MacKinnon et al. Components from the phytotoxic extract of Alternaria brassicicola, a black spot pathogen of canola
EP0170006A2 (en) Method and compositions for helmintic, arthropod ectoparasitic and acaridal infections with novel agents
US20020143021A1 (en) Phenylahistin and the phenylahistin analogs, a new class of anti-tumor compounds
HU221276B1 (en) Polycyclic antiparasitic agents, process and strain for their preparation and their use
DE2941080A1 (de) Neue metaboliten, ihre herstellung und verwendung
DE68909170T2 (de) Serin-Analoge von BU-3608-Antibiotika.
CN103937678B (zh) 一株海洋壳青霉、其衍生的喹啉酮类化合物及其制备和应用
WO2007038868A2 (en) Novel enediyne compound and uses thereof
JPH11507636A (ja) 新規なクリプトフィシン
CN110818728B (zh) 多硫代二酮哌嗪类化合物Secoemestrin C的制备方法及其用途
US4996229A (en) Scytophycins
CZ324092A3 (en) Novel alkaloids of hapalindole type, process of their preparation and a pharmaceutical preparation in which the are comprised
DE68903907T2 (de) Cyclisches peptid, seine herstellung und seine verwendung zur behandlung von cardiovasculaeren stoerungen.
CN109824689B (zh) 一种红树内生真菌中混元萜类化合物及其制备方法与应用
US4863955A (en) Scytophycins
JPH0832699B2 (ja) キセノクマシン
CN111808015A (zh) 一类苯丙氨酸来源的细胞松弛素及其制备方法和应用
DD252116A5 (de) Verfahren zur bekaempfung von pflanzennematoden
DE2917000A1 (de) Antibiotische neplanocine, verfahren zu ihrer herstellung und diese verbindungen enthaltende arzneimittel
EP1532129B1 (de) Sorbicillacton-a-derivate zur behandlung von tumor- und viruserkrankungen
DE3687188T2 (de) Scytophycine.
EP0205308B1 (en) Scytophycins