CZ32478U1 - Biologický prostředek pro posklizňovou ochranu ovoce a/nebo zeleniny - Google Patents

Description

Úřad průmyslového vlastnictví v zápisném řízení nezjišťuje, zda předmět užitného vzoru splňuje podmínky způsobilosti k ochraně podle § 1 zák. ě. 478/1992 Sb.

Biologický prostředek pro posklizňovou ochranu ovoce a/nebo zeleniny

Oblast techniky

Technické řešení se týká biologického prostředku pro posklizňovou ochranu ovoce a/nebo zeleniny

Dosavadní stav techniky

Technologie skladování ovoce a zeleniny a jejich ochrany před mikrobiálními škůdci v posledních letech ve svém vývoji značně pokročily. Dnes jsou založené na kombinovaném použití fýzikálních, chemických a biologických faktorů. Mezi nejčastěji užívané fýzikální faktory patří snížená teplota (většinou kolem 2 až 4 °C) a regulovaná, často snížená úroveň vlhkosti aplikovaná ve velkoskladech. V chemické protiplísňové ochraně lze uvést použití dusíkové inertní atmosféry bez kyslíku (dusíkové generátory ve velkoskladech), použití dalších těkavých látek aplikovaných současně s dusíkovou atmosférou (těkavé regulátory dozrávání) a v neposlední řadě potom chemické fungicidy, zajišťující stále primární ochranu proti plísňovým škůdcům pro ovoce a zeleninu během jejich skladování. Jde o obavy veřejnosti z možnosti kontaminace ovoce a zeleniny chemickými residui stejné jako z možnosti vyšlechtění kmenů plísní odolných na použité chemické látky.

V podmínkách ES je zavedena obzvláště přísná legislativa vedoucí dokonce až k zákazu používání určitých chemických látek, pokud se objeví podezření na jejich negativní účinky na kvalitu potravin nebo lidské zdraví.

Z výše uvedených důvodů byla pro konzervaci ovoce a zeleniny při skladování navržena řada nechemických postupů s použitím přírodních látek, jako jsou chuťově aktivní látky (například „pálivé“), kyselina octová, kyselina fosforečná, jasmonáty, glykosinoláty, propolis, fusapyron, deoxyfusapyron, chitosan, esenciální oleje nebo rostlinné extrakty. Nevýhodou těchto přírodních látek při konzervaci ovoce a zeleniny během skladování je jejich variabilní účinek, který až doposud bránil jejich většímu rozšíření ve skladovacích technologiích (Tripathy P., Dubey NK /2004/ Postharvest Biol Technol 32, 235-245).

Další možnost pro přirozenou ochranu ovoce a zeleniny během skladování představují prostředky biologické kontroly ve formě bakteriálních nebo plísňových antagonistů hospodářsky významných plísní. Působení těchto mikroorganismů je nejčastěji založené na biologickém antagonismu, produkci látek typu antibiotik, prostorové a nutriční kompetici nebo v poslední době intenzivně studovaném procesu indukce rostlinné imunity. V praxi je již dnes používáno kolem padesáti různých druhů mikroorganismů, jmenovat lze například Acremonium brevae, Aureobasidiiim pullulans, Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus pumilus, Biirkholderia cepacia, Brevundimonas diminuta, Candida guilliermondii, Candida membranifaciens, Candida oleophila, Candida saké a mnoho dalších druhů (Sharma RR, Singh D, Singh R /2009/ Biol Control 50, 205-221). Uvést lze i konkrétní na trh již uvedené a prodávané přípravky tohoto druhu, jako je AQ-10 biofůngicid firmy Ecogen lne. obsahující Ampelomyces quisqualis pro ochranu jablek, hroznů, jahod, rajčat a okurek, přípravek Aspire téže firmy založený na mikroorganismu Candida oleophila kmene 1-182, přípravek Biosave 10 LP firmy Eco Science Corp., obsahující bakterii Pseudomonas syringae a mnoho dalších. I když se zdá počet prakticky používaných mikroorganismů takřka nepřeberný, kritéria pro vhodného kandidáta vytyčená profesionálními firmami jsou ve skutečnosti docela striktní. Patří mezi ně zejména (a) genetická stabilita, (b) dobrá účinnost i při nízkých koncentracích, (c) velmi selektivní nutriční požadavky, (d) schopnost přežít v prostředí za nepříznivých podmínek, (e) účinnost oproti co nej širšímu spektru patogenů na velkém množství různých zemědělských komodit, (f) odolnost vůči běžným chemickým pesticidům, (g) nesmí docházet k produkci

- 1 CZ 32478 U1 metabolitů škodlivých nebo potencionálně škodlivých pro člověka, (h) nesmí být patogenní vůči hostiteli (chráněné plodině), (i) snadná příprava v podobě vhodné pro skladování a aplikaci, (j) kompatibilní s širokým spektrem používaných fyzikálních a chemických podmínek. V prakticky aplikovaných formulacích jsou podávána mikrobiologická činidla ve formě různých kompozic, přičemž je známo, že pomocné chemické látky v těchto kompozicích mohou v některých případech ovlivňovat i účinnost biologického přípravku.

Posklizňová ochrana ovoce a zeleniny je též předmětem většího množství patentů a patentových přihlášek, i když jejich počet zdaleka nedosahuje počtu patentů na biopesticidní přípravky pro rostlinnou ochranu jako takovou. I v patentové oblasti se tak odráží výše zmiňovaná situace, kde směsi chemických látek mají většinou širší záběr škůdců i chráněných plodin ve srovnáni s biologickými pesticidy. Jako příklad několika set podaných patentů na sklizňovou ochranu je možno uvést patent EP 2245934 Bl, majitele BAYER CROPSIENCE AG na směsný fungicid, účinný na 28 druhů plísní, reprezentující spektrum nejběžnějších původců posklizňových plísňových chorob, kde předložené testy účinnosti byly provedeny na 22 druzích ovoce a zeleniny. GB 2541907 A přihlašovatele AGRONATURALIS Ltd. popisuje fungicidní přípravek pro eliminaci houbových patogenů produkujících mykotoxiny. Další patenty popisují zařízení vhodná pro použití pro posklizňovou ochranu ovoce a zeleniny nebo jde o kombinaci popisující činidla a metody aplikace pro posklizňovou ochranu. Jako příklad způsobu, zařízení a použití pro posklizňovou ochranu je možno uvést US 7449206 B2 popisující zařízení vhodné pro posklizňovou ochranu fazolí, nebo JP 2017/165654 A popisující činidlo a metodu aplikace pro kontrolu posklizňových chorob. Významný je též EP 2503892 Bl, přihlašovatele tohoto technického řešení, zaměřený na použití mikroorganismu Pythium oligandrum jako účinného činidla v kombinaci s anorganickým nebo organickým nosičem pro prevenci a eliminaci výskytu původců mikrobiálních onemocnění způsobujících posklizňové ztráty s aplikací po sklizni nebo během skladování kulturních plodin, přičemž chráněné kulturní plodiny zahrnují jmenovitě ovoce, zeleninu, ořechy, obiloviny a jiné kulturní plodiny.

Podstata technického řešení

Uvedené nevýhody se odstraní nebo podstatně omezí u biologického prostředku pro posklizňovou ochranu ovoce a/nebo zeleniny fumigací (zamlžováním) podle tohoto technického řešení, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje směs 2,0 až 4,0 % hmotn. biologického fungicidu; 3,34 až 6,6 % hmotn. glycerolu; 0,06 až 0,14 % hmotn. dihydrátu chloridu vápenatého; a zbytek do 100 % hmot. vody. Biologický fungicid obsahuje až 90 % hmotn. oxidu křemičitého a zbytek do 100 % hmotn. biologického substrátu s mikroorganismem Pythium oligandrum Ml, přičemž mikroorganismus Pythium oligandrum Ml vykazuje obsah oospór (1,0 ± 0,1) x 10⁶ na 1 g biologického fungicidu. Požadovaný obsah oospór se standardizuje pomocí oxidu křemičitého a během aplikace dochází na substrátu k nárůstu mikroorganismu Pythium oligandrum. Rozemletým substrátem může být proso a/nebo kukuřice, představující zbytkové reziduum při výrobě Pythium oligandrum. Rozemletý substrát usnadňuje aplikaci biologické směsi v posklizňové aplikaci.

Pro vyšší kvalitu biologického prostředku lze využít glycerol potravinářské kvality a destilovanou vodu. Glycerol představuje ve směsi disperzní činidlo. Množství vody ve směsi bylo odzkoušeno jako optimální pro aplikaci biologického prostředku pro posklizňovou aplikaci na ovoce a zeleninu.

Je výhodné, když biologický prostředek s obsahem 100 až 200 g biologického fungicidu definovaného shora je smíchaný s vodou na objem 5 litrů aplikačního biologického prostředku. Vytvoří se tak vodná suspenze vhodná pro aplikaci na 500 m³ skladovaného prostoru s ovocem a/nebo zeleninou.

-2CZ 32478 U1

Hlavní výhodou biologického prostředku podle předloženého technického řešení je překvapivé zjištění, že aplikaci na ochranu ovoce a/nebo zeleniny po sklizni a při jejich uskladnění je možno provádět běžnou metodou fumigace (zamlžování) při využití velmi nízké koncentrace biologického fungicidu s mikroorganismem Pythium oligandrum. Použití tohoto biologického prostředku podle technického řešení po sklizni a při uskladnění ovoce a/nebo zeleniny vede k velmi účinné ochraně proti plísním, spojené též s možností prodlouženého skladování ovoce a zeleniny, které může být prováděno při snížené, a dokonce i při běžné teplotě bez použití dusíkové nebo jiné ochranné inertní atmosféry. Stupeň ochrany s použitím tohoto biologického prostředku je závislý na stavu plodů v době jejich sklizně s tím, že plody významně zasažené plísní již v době sklizně ochráněny být nemohou. Zároveň však bylo u několika druhů ovoce a zeleniny pozorováno, že z takto zasažených jednotlivých plodů nedochází k dalšímu šíření plísňové infekce na sousední plody, které jsou tak před zasažením plísní chráněné. Tento aspekt je velmi významný, protože zasažené plody lze jednoduchým způsobem od ostatních plodů oddělit a zlikvidovat, zatímco fyzicky sousedící plody nejsou poškozeny.

Zvláštní předností biologického prostředku podle tohoto technického řešení aplikovaného běžnou technologií fumigace je možnost jeho účinné aplikace ve velkém prostoru pomocí fůmigováných ochlazených mikročástic, kdy je běžně možné s jedním naplněním zásobníku biologického fumigátoru účinně ošetřit až 70 tun skladovaného ovoce nebo zeleniny ve velkoskladech o objemu až 500 m³. Tím je předložený biologický prostředek podle tohoto technického řešení aplikovatelný i v průmyslovém měřítku pro moderní velkosklady, v nichž se může stát součástí jiných používaných technologií. Aplikace nárokovaných biologických prostředků ve velkoskladech s použitím technologie zamlžování, resp. jiných technologií pracujících v parách, je preferovaným postupem (malá technická náročnost a vysoká účinnost).

V aplikaci po sklizni může nyní být tento biologický prostředek velmi výhodně aplikován po uskladnění ovoce v chladicích komorách skladů nebo velkoskladů metodou fumigace, při niž je pomocí speciálních zařízení - biofumigátorů - prostředek dispergován ve formě mlhy, která se následně rozptýlí do celého objemu skladovací komory a umožní velmi účinnou aplikaci biologického prostředku na jednotlivé chráněné plody. Tato metodika se též označuje jako tzv. zamlžování. Důležitou podmínkou přitom je nejen obecná podmínka ochlazeni ústí fumigátoru vodou na teplotu kompatibilní s aplikací biologického prostředku, ale též podmínka, aby byly v aplikační směsi přítomny všechny látky potřebné pro náležitou dispergaci a následné fungování biologického prostředku.

U ovoce a zeleniny, přicházející ze skladů přímo na stoly spotřebitelů, není možné z toxikologických a regulačních důvodů aplikovat většinu chemických přípravků posklizňové ochrany, zatímco definovaný biologický fungicid použitý v popisované kompozici biologického prostředku je považován za zcela netoxický a bezpečný. Výhodou je jeho bezpečnost i aplikace relativně velmi malých množství biologického prostředku.

Další výhodou biologického prostředku podle technického řešení je flexibilita definovaného biologického fungicidu z hlediska aplikace. Po mnoha letech vývoje byla příprava definovaného biologického fungicidu zdokonalena natolik, že je možné jej nyní vyrobit ve formě velmi jemného prášku, z něhož lze snadno připravit rozmícháním ve vodném prostředí suspenzi o velmi malé velikosti částic (největší částice jsou tvořeny škrobovými zrny rozemletého prosa, na němž dochází k biotechnologické kultivaci mikroorganismu Pythium oligandrum. Takto vytvořené suspenze, zejména u směsí používajících glycerol jako disperzní činidlo, obsahují částice o velikosti umožňující aplikaci pomocí většiny rozprašovacích zařízení s běžnými filtry o velikosti ok 0,2 mm a větší.

-3 CZ 32478 U1

Příklady uskutečnění technického řešení

V rámci spolupráce přihlašovatelů tohoto technického řešení s polským partnerem firmou BioAgris a zejména v důsledku nezávislé výzkumné činnosti obou přihlašovatelů bylo nejprve optimalizováno množství definovaného biologického fungicidu Polyversum s obsahem mikroorganismu Pythium oligandrum v aplikačním biologickém prostředku podle tohoto technického řešení, které bylo stanoveno na 100 až 200 g biologického fungicidu, s výhodou 150 g, smíchaného s vodou na objem 5 litrů vody, a aplikovaném na 500 m³ skladovací plochy s ovocem a/nebo zeleninou.

Dalším detailním výzkumem přihlašovatelů bylo odhaleno, že pro jednotlivé plodiny může být výhodné připravit aplikační směsi poněkud odlišného složení a dávkování, jak je dále zřejmé z Tabulky 1.

V případě měkkých plodin jako jsou jahody a višně se ukazovalo jako výhodné množství biologického fungicidu ve směsi biologického prostředku poněkud snížit (a proporcionálním způsobem též snížit množství pomocných komponent - chloridu vápenatého a glycerolu), protože v případě těchto měkkých plodin je lépe aplikovat relativně menší množství oxidu křemičitého (komponenty biofungicidu) a glycerolu, jejichž přítomnost na plodech může způsobovat problémy při jejich skladování a následném prodeji.

Naopak v případě plodin, u nichž se před prodejem povrchové vrstvy olupují (například zelí), je možné pro zvýšení účinnosti použít i vyšší koncentrace biologického fungicidu oproti počáteční referenční hodnotě.

Stanovení obsahu destilované vody a dihydrátu chloridu vápenatého bylo stanoveno jako optimální a výhodné; zejména pokud se nepoužije destilovaná voda, vzhledem kne vždy dobře definovanému složení vodovodní vody.

V Tabulce 1 je obsah složek, tj. vody, biofungicidu, dihydrátu chloridu vápenatého a glycerolu, vždy uveden v % hmotn.

V Tabulce 1 v posledním sloupci, představujícím množství biofungicidu na 500 m³ skladovací plochy, je uvedeno v g.

Ve všech příkladných provedeních mikroorganismus Pythium oligandrum Ml byl standardizován na obsah oospór na hodnotu (1,0 ± 0,1) x 10⁶ na 1 g definovaného biologického fungicidu Polyversum.

V příkladných neomezujících provedeních je podrobně popsán biologický prostředek pro posklizňovou ochranu jablek, jahod, višní a zelí.

-4CZ 32478 U1

Tabulka 1

Souhrn procentního zastoupení komponent v biologickém prostředku a celkové množství biologického fungicidu aplikované do skladových prostor o objemu 500 m³

Plodina	Destilovaná voda	Biofungicid s obsahem Pythium oligandrum	Dihydrát chloridu vápenatého	Glycerol potravinářské kvality	Množství biofungicidu na 500 m3 skladovací plochy
Jablka	91,9 %	3,0%	0,1 %	5 %	150 g
Jahody	94,6 %	2,0%	0,06 %	3,34 %	100 g
Višně	93,52 %	2,4%	0,08 %	4,0%	120 g
Zelí	89,26 %	4,0%	0,14%	6,6 %	200 g

Příklad 1

Kombinované předsklizňové a posklizňové ošetřeni jablek

Ve spolupráci s polskou firmou BioAgris, obchodním partnerem firmy Biopreparáty spol. s r. o., byly v koordinaci se sadaři v Polsku a v České republice provedeny experimenty s kombinovanou předsklizňovou a posklizňovou ochranou jablek s použitím definovaného biologického fungicidu Polyversum.

Tento přípravek Polyversum byl aplikován v předsklizňovém režimu v souladu s patentem EP 2503892 B1 majitele Biopreparáty spol. s r. o., na základě postupu uvedeného v návodu k registrovanému přípravku v množství 100 g na 1 ha.

Poté byl v posklizňové ochraně aplikován běžnou metodou fumigace aplikačního biologického prostředku podle tohoto technického řešení v množství 150 g v 5 litrech na 500 m³ skladovací plochy. Předsklizňová aplikace byla provedena pomocí standardního polního postřikovače s velikostí ok filtračního systému 0,2 mm (90 mesh v technickém značení).

V posklizňovém režimu byla následně provedena aplikace biologickým prostředkem podle technického řešení pomocí fůmigátorů Pulsfog Bio K22.

V ochlazovací nádobce byla použita destilovaná voda a v nádobce s biologickým prostředkem bylo použito složení uvedené v Tabulce 1 vhmotn. %; a to konkrétně: 150 g biologického fungicidu bylo smícháno s 250 g glycerolu potravinářské kvality, se 4595 g destilované vody a s 5 g dihydrátu chloridu vápenatého.

Kontrolní jablka byla získána od místních pěstitelů nebo z trhů (při běžném postřiku chemickým protiplísňovým prostředkem 4 týdny a 2 týdny před sklizní) a byla ošetřena ve standardním režimu podle používané metodiky. Všechny vzorky byly během prvého dne po získání umístěny do oddělených chladicích boxů udržujících teplotu 4 °C, u vzorků byla provedena fumigace a poté odebrána prvá sada vzorků. Následně byly vzorky odebírány po 1, 2 a 3 měsících skladování a bylo provedeno visuální hodnocení stavu 100 jablek a mikrobiologické hodnocení kultivačně u 100 vybraných vzorků.

Výsledky ukázaly, že předsklizňové ošetření i posklizňová fumigace měly významný vliv na úroveň plísňové infekce zjišťované kultivační mikrobiologií: zatímco u kontrolních jablek byla po 4 týdnech skladování plíseň nalezena u 42 % analyzovaných jablek, po fumigaci biologickým prostředkem se tato hodnota snížila na 10 %.

Pokud byla současně jablka ošetřena i předsklizňově postřikem, činily tyto hodnoty 9 % a 3 %. Výsledky také ukázaly prakticky významný výsledek hodnocení stavu jablek na vzorku 1000 plodů.

Pokud byla jablka postřikována biologickým prostředkem s přípravkem Polyversum s obsahem 75 až 90% hmotnosti oxidu křemičitého a 10 až 25% hmotnosti rozemletého substrátu s nárůstem mikroorganismu Pythium oligandrum Ml předsklizňově i posklizňově, bylo po 3 měsících jejich skladování v lednici při 4 °C pouze 2 procenta zkažených plodů, zatímco u neošetřené kontroly se jednalo v této době v podstatě o zkažení nejméně 30 % plodů. Navíc byl získán velmi zajímavý poznatek, že u ošetřených jablek nedocházelo k šíření plísně z postižených na ošetřené, a dokonce ani mírně postižené plody (drobné odřeniny během transportu) nepodléhaly hnilobě ani další zkáze.

Příklad 2

Kombinované předsklizňové a posklizňové ošetření jahod

Ve spolupráci s firmou BioAgris, obchodním partnerem firmy Biopreparáty spol. s r. o., byly na jahodových plantážích v Polsku a v České republice provedeny experimenty s kombinovanou předsklizňovou a posklizňovou ochranou jahod s použitím biologického fungicidu Polyversum. Tento přípravek byl aplikován v předsklizňovém režimu v souladu s patentem EP 2503892 B1 majitele Biopreparáty spol. s r. o., na základě postupu uvedeného v návodu k registrovanému přípravku v množství 100 g na 1 ha. Předsklizňová aplikace byla provedena pomocí standardního polního postřikovače s velikostí ok filtračního systému 0,2 mm (90 mesh v technickém značení).

V posklizňové ochraně byla jablka ošetřena fumigaci aplikačního biologického prostředku potom v množství 150 g v 5 litrech vodné suspenze na 500 m³ skladovací plochy. V posklizňovém režimu byla provedena aplikace biologického prostředku podle předloženého technického řešení pomocí fumigátorů Pulsfog Bio K22 nebo Pulsfog Bio K30 s tím, že v sekundární ochlazovací nádobce byla použita destilovaná voda. V terciární nádobce byl použit biologický prostředek o složení v hmotn. % podle Tabulky 1. V konkrétním případě bylo smícháno: 100 g biologického fungicidu Polyversum se 167 g glycerolu potravinářské kvality, se 4730 g destilované vody a se 3 g dihydrátu chloridu vápenatého.

Kontrolní jahody byly získány od místních pěstitelů nebo z trhů a byly ošetřeny ve standardním režimu podle používaných metodik (postřik chemickým protiplísňovým prostředkem 4 týdny a 2 týdny před sklizní). Všechny vzorky byly během prvého dne po získání umístěny do oddělených chladicích boxů udržujících teplotu 4 °C au vzorků byla provedena fůmigace a odebrána prvá sada vzorků. Následně byly vzorky odebírány po 4, 7, 11 a 18 dnech skladování a bylo provedeno visuální hodnocení stavu 1000 jahod a mikrobiologické hodnocení kultivačně u 100 vybraných vzorků.

Výsledky ukázaly, že předsklizňové ošetření i posklizňová fůmigace měly významný vliv na úroveň plísňové infekce zjišťované kultivační mikrobiologií. Zatímco u běžných kontrolních jahod byla po 4 dnech skladování plíseň nalezena u 37 % analyzovaných jahod, po fumigaci se tato hodnota snížila na 14 %. Pokud byly ovšem současně jahody ošetřeny i předsklizňově postřikem, činily tyto hodnoty 11 % a 4 %.

Výsledky v Tabulce 2 pak ukazují prakticky významný výsledek hodnocení stavu jahod na vzorku 1000 plodů. Pokud byly jahody postřikovány biologickým prostředkem předsklizňové i posklizňově, bylo po 18 dnech jejich skladování v lednici při 4 °C pouze 3 procenta zkažených plodů, zatímco u neošetřené kontroly se jednalo v této době v podstatě o úplně zkažení úrody

-6CZ 32478 U1 shnitím. Navíc byl získán velmi zajímavý poznatek, že u ošetřených jahod nedocházelo k šíření plísně z postižených na ošetřené plody - proto bylo možné před uvedením do prodeje zkažené plody snadno vybrat a zbytek intaktních plodů uvést do prodeje.

Tabulka 2

Hodnocení procent zkažených jahod z řádově tisíce hodnocených za různých podmínek posklizňové ochrany

Podmínky	1. den (uskladnění) (%)	4. den (%)	7. den (%)	11. den (%)	18. den (%)
1. Kontrola	5,2	11,6	20,7	n.a.	n.a.
2. Kontrola+Fumigace	1,4	3,5	11,0	n.a.	n.a.
3. Ošetření	0	0,3	1,9	4,9	9,8
4.Ošetření+Fumigace	0	0,1	0,9	1,8	3,0

V Tabulce 2 jsou uvedena procentická hodnocení zkažených jahod vzhledem k době jejich uskladnění ve dnech: po 1, 4, 7, 11 a 18 dnech. V prvním sloupci uvedeny „podmínky“ ošetření jahod:

„1. Kontrola“ - pro jahody, ošetřené pouze chemickým postřikem;

„2. Kontrola+Fumigace“ - pro jahody, ošetřené posklizňové fumigací;

„3. Ošetření“ - pro jahody, ošetřené biologickým prostředkem předsklizňově;

„4 Ošetření+Fumigace“ - pro jahody, ošetřené předsklizňově i posklizňové.

Zkratka „n.a.“ znamená, že nelze analyzovat z důvodu špatného stavu vzorku.

Příklad 3

Kombinované předsklizňové a posklizňové ošetření višní

Ve spolupráci se sadaři sídlícími v regionu působení firmy Biopreparáty spol. s r. o. v České republice byly provedeny experimenty s kombinovanou předsklizňovou a posklizňovou ochranou višní s použitím přípravku Polyversum. Tento přípravek byl aplikován v předsklizňovém režimu v množství 100 g na 1 ha ve vodné suspenzi postřikovačem, v posklizňové ochraně fumigací aplikačního biologického prostředku v množství 150 g v 5 litrech vodné suspenze na 500 m³ skladovací plochy.

Předsklizňová aplikace byla provedena v souladu s patentem EP 2503892 B1 majitele Biopreparáty spol. s r. o.

V posklizňovém režimu bylo provedeno ošetření potom pomocí fůmigátorů Pulsfog Bio K22 s tím, že v sekundární ochlazovací nádobce byla použita destilovaná voda a v terciární nádobce byl aplikován biologický prostředek dle Tabulky 1 v hmotn. %. V konkrétním případě bylo smícháno: 120 g biologického fungicidu Polyversum s 200 g glycerolu potravinářské kvality, se 4676 g destilované vody a s 4 g dihydrátu chloridu vápenatého.

-7 CZ 32478 U1

Kontrolní višně byly získány od místních pěstitelů nebo z trhů (běžný postřik chemickým protiplísňovým prostředkem 4 týdny a 2 týdny před sklizní), byly ošetřeny ve standardním režimu podle používaného shora uvedeného postupu. Všechny vzorky byly během prvého dne po získání umístěny do oddělených prostor v chladnici při teplotě 10 °C a u vzorků byla provedena fumigace a odebrána prvá sada vzorků. Následně byly vzorky odebírány po 4, 7, 11 a 20 dnech skladování a bylo provedeno visuální hodnocení stavu 50 višní a mikrobiologické hodnocení kultivačně u vybraných vzorků.

Výsledky ukázaly, že předsklizňové ošetření i posklizňová fumigace měly významný vliv na úroveň plísňové infekce zjišťované kultivační mikrobiologií: zatímco u kontrolních višní byla po 4 dnech skladování plíseň nalezena u 27 % analyzovaných višní, po fůmigaci se tato hodnota snížila na 13 %. Pokud byly ovšem současně višně ošetřeny i předsklizňové postřikem, činily tyto hodnoty 10 % a 4 %.

Výsledky v Tabulce 3 pak ukazují prakticky významný výsledek snížení výskytu Colletotrichos u višní způsobujících svraštění a praskání plodu a ztrátu barvy. Pokud byly višně postřikovány biologickým prostředkem podle technického řešení předsklizňové i posklizňově, bylo po 20 dnech jejich skladování v lednici při 10 °C pouze 4 procenta plodů zasaženo Colletotrichosou, zatímco uneošetřené kontroly se jednalo v této době o zasažení až z 35 %. Navíc byl získán velmi zajímavý poznatek, že u ošetřených višní nedocházelo k šíření plísně z postižených na ošetřené plody - proto bylo možné před uvedením do prodeje zkažené plody snadno vybrat a zbytek intaktních plodů uvést do prodeje.

Tabulka 3

Hodnocení procent ošetřených višní, napadených plísní Colletotrichos a/nebo plísní Penicilium

Podmínky	Zdravé (%)	Colletotrichos (%)	Penicilium (%)	Colletotrichos+Penicilium (%)
1. Kontrola	29	35	13	23
2. Kontrola+Fumigace	32	29	35	13
3. Ošetření	31	9	55	7
4.Ošetření+Fumigace	30	4	59	5

Tabulka 3 uvádí prvním sloupci čtyři „podmínky“ ošetření višní, a to:

„1. Kontrola“ - pro višně, ošetřené pouze chemickým postřikem;

„2. Kontroly+Fumigace“ - pro višně, ošetřené posklizňově fůmigaci;

„3. Ošetření“ - pro višně, ošetřené biologickým prostředkem předsklizňové;

„4 Ošetření+Fumigace“ - pro višně, ošetřené předsklizňové i posklizňově.

Tabulka 3 se v dalších sloupcích týká procentického hodnocení višní, napadených šedozelenými plísněmi Colletotrichos a/nebo Penicilium.

Popis procentického zasažení jednotlivými plísňovými chorobami je následující: „Zdravé“: u višní nebyl pozorován výskyt žádného onemocnění.

“Colletotrichos“: u višní byl pozorován výskyt plísně Colletotrichos.

„Penicilium“: u višní byl pozorován výskyt plísně Penicilium.

„ Colletotrichos+Penicilium u višní byl pozorován výskyt plísně Colletotrichos a Penicilium.

Příklad 4

Kombinované předsklizňové a posklizňové ošetření čínského zelí

Ve spolupráci s polskou firmou BioAgris, obchodním partnerem firmy Biopreparáty spol. s r. o., byly na polích v Polsku a v České republice provedeny experimenty s kombinovanou předsklizňovou a posklizňovou ochranou zelí s použitím biologického fungicidu Polyversum. Tento přípravek byl aplikován v předsklizňovém režimu v množství 100 g na 1 ha, v posklizňové ochraně potom fůmigací aplikačního biologického prostředku podle technického řešení v množství 150 g v 5 litrech vodné suspenze na 500 m³ skladovací plochy. Předsklizňová aplikace byla provedena v souladu s patentem přihlašovatele Biopreparáty spol. s r. o. EP 2503892 Bl; v posklizňovém režimu potom pomocí fumigátorů Pulsfog Bio K22 nebo Pulsfog Bio K30 s tím, že v sekundární ochlazovací nádobce byla použita destilovaná voda a v terciární nádobce s biologickým prostředkem podle tohoto technického řešení bylo použito % složení biologického prostředku uvedeného v Tabulce 1. V konkrétním příkladném provedení bylo smícháno 200 g biologického fungicidu Polyversum s 330 g glycerolu potravinářské nebo farmaceutické kvality, se 4463 g destilované vody a se 7 g dihydrátu chloridu vápenatého.

Kontrolní zelí bylo získáno od místních pěstitelů nebo z trhů (běžný postřik chemickým protiplísňovým prostředkem 4 týdny a 2 týdny před sklizní) a byly ošetřeny ve standardním režimu podle používané metodiky shora uvedené. Všechny vzorky byly během prvého dne po získání umístěny do oddělených chladicích boxů udržujících teplotu 4 °C, au vzorků byla provedena fumigace a odebrána prvá sada vzorků. Následně byly vzorky odebírány po 6 měsících skladování a bylo provedeno visuální hodnocení stavu 100 hlávek a mikrobiologické hodnocení kultivačně u 100 vybraných vzorků.

Výsledky ukázaly, že předsklizňové ošetření i posklizňové fumigace měly významný vliv na úroveň plísňové infekce zjišťované kultivační mikrobiologií: zatímco u kontrolních hlávek zelí byla po 4 měsících skladování plíseň nalezena u 57 % analyzovaných hlávek, po fumigaci se tato hodnota snížila na 34 %. Pokud bylo zelí současně ošetřeno i předsklizňové postřikem, činily tyto hodnoty 24 % a 14 %. Pěstitelé zelí dále jasně ukazovali, že zasažené hlávky u ošetřené varianty byly plísní zasažené pouze na místě řezu hlávky vzniklém při sklizni, toto místo zasažené plísní tak bylo možno snadno odstranit a hlávku po 4 měsících skladování uvést do prodeje. Naopak u neošetřené varianty úrody docházelo u více než poloviny hlávek zelí k jejich hlubšímu zasažení plísňovou infekcí, což vyžadovalo buď úplnou likvidaci takto zasažené hlávky, nebo její značné mechanické ořezání na celém povrchu spojené se značnými ztrátami hmotnosti takto upraveného plodu.

Průmyslová využitelnost

Technické řešení se týká posklizňové ochrany ovoce a/nebo zeleniny s použitím nových formulací mikroorganismu Pythium oligandrum. Nové řešení může být použito nejen individuálními zahrádkáři a pěstiteli, ale v kombinaci s fůmigačními technologiemi aplikace je vhodné i pro zahrnutí do průmyslových technologií posklizňové ochrany ovoce a/nebo zeleniny ve velkoskladech.

Claims (3)

1. Biologický prostředek pro posklizňovou ochranu ovoce a/nebo zeleniny, vyznačující se tím, že zahrnuje

2,0 až 4,0 % hmota, biologického fungicidu, obsahujícího

10 až 25 % hmota, rozemletého substrátu s mikroorganismem

Pythium oligandrum Ml, který vykazuje obsah oospór (1,0 ± 0,1) x 10⁶ na 1 g biologického fungicidu a

75 až 90 % hmota, oxidu křemičitého;

a dále biologický prostředek zahrnuje

3,34 až 6,60 % hmota, glycerolu;

0,06 až 0,14 % hmota, dihydrátu chloridu vápenatého; a zbytek do 100 % hmotn. je voda.

2. Biologický prostředek podle nároku 1 obsahující množství tohoto prostředku odpovídající obsahu 100 až 200 g biologického fungicidu definovaného v nároku 1 smíchaného s vodou na objem 5 litrů pro aplikaci na 500 m³ skladového prostoru s ovocem a/nebo zeleninou.