CZ32997A3 - Pregnanes and cholanes as neurochemical initiators of function changes - Google Patents

Description

Předkládaný vynález se obecně vztahuje Irddrmaeéutickým prostředkům a způsobům uskutečněni změny ve funkci lidského hypothalamu, a tím pozměnění určitého fungování a fyziologie zprostředkované hypothalamem jedinců. Zvláště se předkládaný vynález týká použití určitých pregnanových a cholanových steroidů jako neurochemických činitelů fyziologie a chování.

Dosavadní stav techniky

Předkládaný vynález se vztahuje k určitým sloučeninám, jmenovitě pregnanovým a choianovým steroidům, a způsobům použití těchto sloučenin jako lidských vomeroferinů za účelem změny fynkce hypothalamu, a tím ovlivnění určitého následného chování a fyziologie, např. redukce úzkosti. Pregnanové steroidy jsou charakterizovány steroidní strukturou o čtyřech kruzích, metylací v pozici 13 a 10 a etylací v pozici 17. Pregneny jsou deriváty pregnanů a mají nejméně jednu dvojnou vazbu. Ve své práci G. Ohloff a kot (Helv. Chim. Acta (1983) 66, 192-217), která je zde uvedena jako reference, ukázali, že některé steroidy (androsteny) mají zápach lišící se podle odlišnosti izomerních, diastereomerních a enantiomerních forem. U některých členů této skupiny bylo popsáno, že působí jako feromony u některých druhů savců, např. 5a~androst- 16-en-3-on a 5a-androst-16-en-3a-ol vepřů (D.R. Melrose a kol., Br. Vet. J. (1971) 127:

497-502). Tyto 16-androsteny produkované samci indukují chování při páření u estruských prasnic (Claus a kol., Experimentia (1979) 35: 1674-1675).

Cholanové steroidy jsou charakterizovány postranním řetězcem o 5 uhlíkách, 2-pentylovou skupinou, na C-17 steroidního jádra. Některé studie zaznamenaly, že u některých druhů jsou různě charakteristiky určitých 16-androstenů (včetně 5a-androst-16-en-3-onu a 5a-androst-16-en-3a-olu). jako je koncentrace, metabolismus a lokalizace, sexuálně dimorfní (Brooksbank a kol., J. Endocr. (1972) 52: 239-251; Claus a kol., J. Endocr. (1976) 68: 483-484; Kwan a kol., Med. Sci. Res. (1987) 15: 1443-1444). Např. 5a-androst-1ó-en-3-on a 5a-androst-16-en-3a-ol stejně jako androsta-4,ló-dien-3-on, byly v různých koncentracích nalezeny v periferní krvi, slinách a sekretech podpaží mužů a žen (T.K. Kwan a kol., Med. Sci. Res. (1987) 15: 1443-1444) a byly navrženy jejich funkce coby lidského feromonu pro ovlivnění výběru o úsudku ve větší míře (viz Kwan a viz také Gower a kol., Význam vonných steroidů v podpažním pachu, v knize Perfumery, str. 68-72, Van Toller a Dodds, ed., Chapman a Halí, 1988);

D.A. Kirk-Smith a kol., Res. Comm. Psychol. Psychiat. Behav. (1978) 3: 379). Tvrdí se, že androstenol (5a-androst-16-en-3a-oi) vykazuje aktivitu podobnou feromonu v komerčních pánských kolínských a dámských parfémech (Andron™ pro muže a Andron™ pro ženy od Jóvana). Japonský patent No. 2295916, Kokai, se týká parfémových prostředků obsahujících androstenol a/nebo jejich analogy. Androstadfen-3p-ol (a pravděpodobně 3a-ol) byl také identifikován v lidském podpažním sekretu (Gower a kol., viz výše, str. 57 až 60). Na druhé straně v literatuře panuje malá shoda ohledně toho, zdali nějaký předpokládaný feromon skutečně hraje nějakou roli v sexuálním nebo reprodukčním chování savců, zvláště pak u lidí. Viz G.K. Beauchamp a kol., Pojetí feromonu v chemické komunikaci savců: Kritika v knize: Mammalian Olfaction, Reproductive Processes and Behavior, Doty, R.L., ed., Academie Press, 1976). Viztaké Gower a kol., viz výše, str. 68 až 73.

Byly popsány feromonové vlastnosti některých estrenových steroidů pro některé druhy savců. Práce R.P. Michaela a kol.. Nátuře 218, 746 (1968) se vztahuje k estrogenům (zvláště estradiolu) jako feromonovým atraktantům samců makaků rhesus. F.R. Parrot, Hormones and Behavior 7, 207-215 (1976) uvádí, že injekce benzoátu estradiolu indukuje sexuální chování u ovariektomizovaných krys; a byla popsána role určité hladiny estradiolu v krvi při vzniku sexuální odpovědi (C.H. Phoenix, Physiol. and Behavior 16, 305-310 (1976)) a samičí sexuální odpovědi (C.H. Phoenix, Hormones and Behavior 8, 356-362 (1977)) u makaků rhesus. Na druhé straně v literatuře panuje malá shoda ohledně toho, zdali nějaké předpokládané feromony skutečně hrají jakoukoliv roli v reprodukčním chování a komunikaci mezi jedinci u savců (G.K. Beauchamp a kol., Pojetí feromonu v chemické komunikaci savců: Kritika v knize: Mammalian Olfaction, Reproductive Processes and Behavior, Doty, R.L., ed.. Academie Press, 1976).

Provedení předkládaného vynálezu se týká nesystémové nazální administrace určitých pregnanových a cholanových steroidů za účelem ovlivnění specifické fyziologické odpovědi nebo odpovědi v chování lidských subjektů, např. redukci negativního vlivu, špatné nálady a povahových vlastností. Zvláště nazální administrace umožňuje kontaktování neurochemických receptorů majících předtím málo pochopené neUroendokrinní struktury, běžně známé jako vomeronazální orgán (VNO; také známé jako Jacobsonův orgán) s jedním nebo více steroidy nebo s prostředky obsahujícími tyto steroidy. Tento orgán je přístupný nozdrami většiny vyšších živočichů od hadů po lidi a byl asociován, mezi jiným, s přijímáním feromonů u určitých druhů (viz obecně Muller-Schwarze & Siiverstein, Chemical Signals, Plenům Press, New York (1980)). Axony neuroepitelia vomeronazálního orgánu, umístěné nad patrovými kůstkami, tvoří vomeronazální nerv a mají přímé šynaptické spojení na přístupový čichový kořn a nepřímý vstup odtud do kortikomediálního amygdaloidního bazálního předního mozku a hypothalamového jádra mozku. Distáiní axony terminálních nervových neuronů mohou také sloužit jako neurochemické receptory v VNG. LJ. Stensaas a kol., J. Steroid Biochem. and Molec. Biol. 39, 553 (1991). Tento nerv má přímé šynaptické spojení s hypothalamem.

A. Johnson a kol. (J. Otolaryngology: J4, 71-79 (1985)) uvádí důkaz přítomnosti vomeronazálního orgánu u většiny dospělých lidí, ale soudí, že je tento orgán pravděpodobně nefunkční. Výsledky, které toto popírají a předpokládají, že VNO je funkčním chemosenzorickým receptorem, jsou uvedeny v práci L. Stensaase a kol,, viz výše, J. Garcia-Velasca a M. Mondragona; í. Monti-Blocha a B. Grossera, všechny jsou uvedeny v J, Steroid Biochem.and Molec. Biol. 39 (1991).

Je zřejmé, že by bylo žádoucí identifikovat a syntetizovat lidské vomeroferiny a feromony a vyvinout farmaceutické prostředky a způsoby použití k ovlivnění hyptothalamové funkce. Předkládaný vynález se týká neočekávaného objevu, a to, že se při nazální administraci lidem určité neurochemické ligandy, zvláště pregnanové a cholanov steroidy a příbuzné sloučeniny nebo farmaceutické prostředky obsahující pregnany, cholany nebo příbuzné sloučeniny, specificky vážou na chemoreceptory určitých nazálních neuroepiteliálních buněk a tato vazba generuje série neurofyzioiogických odpovědí vedoucích k pozměnění hypothalamové funkce u jedince. Při vhodné administraci účinek některých z těchto sloučenin na hypothalamus postihuje funkci autonomního nervového systému a množství funkčních nebo fyziologických fenoménů, které zahrnují, ale nejsou na ně omezeny, následující; úzkost, premenstruáiní stres, strach, agresi, hlad, krevní tlak a další funkce chování a fyziologické funkce normálně regulované hypothalamem. Víz Otto Appenzeller, Autonomní nervový systém. Úvod do základních a klinických pojmů (1990); P.l, Korner, Centrální nervová kontrola autonomní kardiovaskulární funkce, a N.M. Levý a P.J. Martin, Neurální kontrola srdce, obě práce v Handbook of Physiology; část 2; Kardiovaskulární systém - srdce, vol, I, WashingtonDC, 1979, American Physiology Society; editoři A.P. Fishman a kol.. Handbook of Physiology. Část 3; Respirační systém. Vol. II, Kontrola dýchání, Bethesda MD, 1986. American Physiological Society.

V některých případech je administrován jeden pregnanový nebo cholanový steroid nebo příbuzná sloučenina, v některých případech kombinace pregnanových a/nebo cholanových steroidů a/nebo přínuzných sloučenin a v některých případech je koadministrován jeden nebo více pregnanových nebo cholanových steroidů spolu s jedním nebo více estranovými nebo estrenovými steroidy, androstanovými nebo androstenovými steroidy nebo příbuznými sloučeninami.

Podstata vynálezu

V souladu s tím je předmětem předkládaného vynálezu poskytnout farmaceutické prostředky, které obsahují lidské vomeroferiny nebo feromony a jsou vhodné k nazální amdinistraci pro jedince.

Je také předmětem předkládaného vynálezu poskytnout způsoby použití těchto prostředků k pozměnění hypothalamové funkce u jedince.

Dále je předmětem předkládaného vynálezu poskytnout způsoby použití těchto prostředků k ovlivnění fyziologických funkcí a funkcí chování jednotlivů, které jsou normálně regulovány hypothalamem.

A konečně je předmětem předkládaného vynálezu poskytnout způsoby pozměnění hypothalamové funkce, které mají následující výhody: Ό administrace přímo do chemoreceptorů v nazální oblasti a vomeronazálním orgánu, bez tablet nebo jehel - tj. neinvazivně; 2) způsob působení léčiva pomocí systému vynálezu a ne přes oběhový systém - takže mozkovou funkci lze ovlivnit bez ohledu na krevní mozkové bariréry; 3) přímý způsob ovlivňování hypothalamu - mezi feromonovými receptory a hypothalamem je pouze jedno synaptické spojení; a 4) poskytnutí vysoce specifického účinku léčiva, a tím redukce možných nežádoucích vedlejších účinků - protože smyslové nervy vysílají signály do specifických oblastí v mozku.

Další předměty, výhody a nové rysy předkládaného vynálezu budou částečně uvedeny v Provedení vynálezu, který následuje, a částečně budou zřejmé osobě obeznámené s technikou v oboru z následujících Příkladů nebo se je lze naučit praktikováním předkládaného vynálezu.

Předmětů podle předkládaného vynálezu je dosaženo poskytnutím farmaceutického prostředku vhodného k nazální administraci u jedince. Prostředek zahrnuje farmaceuticky přijatelný nosič a pregnanovýsteroid podle obecného vzorce:

kde Ρ_Ί je vybráno ze skupiny sestávající z oxo-. a-(p~)hydroxy~, a-(p~)acetoxy-, a-(p-)propionoxy-, a-(p-)metoxy-, α-(β-) nižší acyloxy-.

α-(β ) nižší aikyloxy- a a-QHbenzoyloxyskupiny; P₂ je vybráno ze skupiny sestávající z metylu, hydroxymetylu. acyloxymetylu, aikoxymetylu, nižšího alkylu, hydroxyalkylu. acyíoxyalkyiu a aikoxyalkyiu; P₃je vybráno ze skupiny sestávající z vodíku, oxo-. halogen-, hydroxy-. aikoxy- a acyloxyskupiny; P₄ až P_T2 může být každé, nezávisle, vodík, halogen, metyl nebo halogen, dihalogen- nebo perhalogenmetyl, a je-li P₂ metyl a P₃ β-hydroxyskupina, P₂ a P₃ lze spojit za vzniku cyklického éteru; P₁₃ je vodík, metyl, metylen, etyl, etylenyl, acetylenyl, metyl-metylenyl, metyl-metinyi; a ^Ma, ”b, c, d“, e, h”, i a j nebo k mohou také být trojné vazby. Haíogensubstituenty zahrnují atomy fluoru, bromu, chloru a jodu.

Jedna třída výhodných steoidů má b“ jako dvojnou vazbu, α ”c” jako dvojnou vazbu nebo pouze c” jako dvojnou vazbu. Ještě další výhodná třída zahrnuje h jako dvojnou vazbu, přičemž i a j chybí (tj. jednoduché vazby), j je dvojná vazba nebo je j trojná vazba. V jiné třídě h chybí a j” nebo “i je dvojná vazba, nebo V a “j” chybějí, nebo j a T jsou dvojné vazby, neboje j trojná vazba.

Výraz nižší alkyl, nižší alkoxy atd. je míněn tak. že zahrnuje uhlíkový řetězec s 1 až 6 uhlíkovými atomy, výhodně s 1 až 4 uhlíkovými atomy.

Předkládaný vynález je také zaměřen na nové pregnanové a cholanové deriváty padle obecného vzorce

kde P, je vybráno ze skupiny sestávající z oxo-, a-(p-)hydroxy~, a-(p~)acetoxy-, a-<p )propionoxy-, a-(p-)metoxy-. α-(β-) nižší acyloxy-, α-(β~) nižší alkyloxy- a a-(jk)benzoyloxyskupíny; P₂ je vybráno ze skupiny sestávající z metylu, hydroxymetylu, acyloxymetylu, alkoxymetylu, nižšího alkylu, hydroxyalkylu, acyloxyalkylu a alkoxyaikylu; P₃ je vybráno ze skupiny sestávající z vodíku, oxo-, halogen-, hydroxy-, alkoxy- a acyloxyskupiny; P₄ až P₁₂ může být každé, nezávisle, vodík, halogen, metyl nebo halogen-, dihalogen- nebo perhalogenmetyl; P₁₃ je vodík, metyl, metylen, etyl, metyl-metinyl; a a, b.

etylenyl, acetylenyl, metyl-metylenyl, ”c, d, e“, h, i a j nebo k jsou alternativními místy pro volitelné dvojné vazby a j nebo k mohou také být trojné vazby; a je-li P₂ metyl a P₃ β-hydroxyskupina, P₂ a P₃ lze spojit za vzniku cyklického éteru; s podmínkami, že

i) jestliže P,=oxoskupina; je přítomno b; e, a, c, d chybějí; P₂=metyl; a P₃, P₄, P₇, P₉, P₁₀, P_n a P_l3 jsou vodíky; pak jestliže je h přítomno nebo chybí, musí být přítomno P₆ a nemůže být vodík;

it) jestliže P,=OH a je přítomno c; e, a, b, d chybějí; P₂=metyl; a P₃, P₄, P₇, P₉, P₎₀, P_n, P₁₂ a P₁₃jsou vodíky; pak

a) jestliže je h přítomno, musí být přítomno P_ó a není to vodík;

b) jestliže h chybí a je přítomno P₆, P₆ nemůže být vodík;

c) jestliže h chybí a je přítomno P₆, pak je přítomno i a j;

iii) jestliže Ρ,=β-ΟΗ a je přítomno b; e, a, c, d chybějí; P₂=metyl; a P₃, P₄, P₇, P₉, P₁₀, P,] a P₁₃jsou vodíky;

a) jestliže je h přítomno, musí být přítomno i a/nebo j; nebo P₆ není vodík;

b) jestliže je h přítomno, j nemůže být trojná vazba;

iv) jestliže Ρ_Ί=α-ΟΗ, je přítomno b; e, a, c, d chybějí; P₂=metyi; a P₃, P₄, P₇, P₉, P₁₀, P_n a P₁₃jsou vodíky; pak

a) jestliže je h přítomno, i musí chybět a P₆ nemůže být vodík;

b) jestliže i a j chybějí, P₆ nemůže být vodík;

v) jestliže P,=oxoskupina; a je přítomno b a d; e, a, c chybějí; P₂=metyl; a P₃, P₄, P₇, P₉, P _l0, P_T1 a P₁₃jsou vodíky; pak jestliže chybí h a je přítomno i, P₆ musí být přítomno a nemůže být vodík;

ví) jestliže P, a P₃ jsou oxoskupiny a je přítomno b; h, e, a, c, d chybějí; P₂=metyl; a P₄, P₅, P₇, P₈, P₉, P₁₀, P„ a P₁₃jsou vodíky; pak

a) jestliže chybí P₆, j nemůže být dvojná vazba;

b) jestliže je P_ó vodík, i nebo j musí být přítomno;

vii) jestliže P^Ometyl, je přítomno a a c; a P₂=metyl; e, b, d, a h chybějí αΡ,Ρ,Ρ,Ρ,Ρ , P a P jsou vodíky; pak

a) jestliže je P₆ vodík, musí být přítomno i neboj;

b) jestliže P₆ chybí, i a j nemohou být dvojné vazby;

viii) jestliže P^oxoskupina a a, b, c, d, e chybějí;

P₂=metyl; a

P₃, P₄, P₇, P₉, P₁₀, P, _v P₁₂ a P₁₃ jsou vodíky; pak

a) jestliže h chybí a je přítomno j jako dvojná vazba; P₆ nemůže být vodík;

b) jestliže h, i a j chybějí, P₆ nemůže být vodík; a

c) jestliže je přítomno h, j nemůže být dvojná vazba;

ix) jestliže P^OH, chybějí a, b, c, d, e, h;

P₂=metyl;

P₃, P₄, P₇, P₈, P₉, P₁₀, P„ a P₁₃jsou vodíky; pak

a) jestliže je j dvojná vazba a chybí i; pak P_ó není vodík;

b) jestliže je i dvojná vazba a j chybí, pak P₆ není vodík;

c) i a j nemohou být dvojné vazby;

d) jestliže a i j chybějí, P₆ nemůže být vodík;

x) jestliže P^oxoskupina, je přítomno e a b; a chybí a, c, d;

P₂=metyl; a

P₃, P₄, P₇, P₉, P₁₀, P_n a P₁₃ jsou vodíky; pak

a) jestliže je přítomno h, j nemůže být trojná vazba;

b) jestliže chybí h a i je dvojná vazba, pak P₆ není vodík;

c) jestliže chybí h a i je dvojná vazba, pak P_ó není vodík;

d) jestliže chybí h a ani i ani j není dvojná vazba, pak P₆ není vodík;

xi) jestliže P =oxoskupina, P₃=OH, je přítomno b, chybí a, e, c, d, h, i, j, P₂=metyl a P₄, P₇, P₉, P₁₀, P_n a P₁₃ jsou vodíky; pak P_ó nemůže být vodík;

xíi) jestliže P^oxoskupina, b je přítomno, a, e, c, d, h, i chybějí, P₆ a P₂jsou metyly a

P₃, ^P4' ^P5' ^P7' ^P8' ^P9^{r p}io ^Q % i^sou vodíky; pak

a) jestliže jej dvojná vazba, P₁₃nemůže být etylenyl;

b) jestliže ani j ani k není dvojná nebo trojná vazba, pak P₁₃ nemůže být acetylenyl;

xiii) jestliže PÍ =OH, c je přítomno a a, b, e, d, h a i chybějí;

P₂a PJsou metyly; a

P₃, P₄, P₇, P₈, P₉, P₁₀, P_n a P₁₂ jsou vodíky; pak

a) jestliže j je dvojná vazba, P₁₃ neníetyl;

b) jestliže j chybí a k je dvojná vazba, P₁₃ není metyl-metylenyl;

c) jestliže j a k chybějí; P₁₃ neníetyl; a

d) jestliže k je trojná vazba, P₁₃ nemůže být metyl-metinyl.

Další předměty předkládaného vynáiezu jsou dosaženy poskytnutím způsobu pozměnění hypothalamové funkce a/nebo autonomní funkce u jedince. Ligand pro chemoreceptor vystavený na povrchu nazální neuroepiteliální buňky je poskytnut tehdy, jestliže tato buňka je součástí tkáně jiné než čichového epitelia; a tento ligand je administrován do nazální části jedince, takže se váže specificky na chemoreceptor, což vede k pozměnění hypothalamové funkce jedince.

Všechna provedení předkládaného vynálezu se vztahují k a zahrnují funkční ekivalenty steroidních struktur uvedených v těchto provedeních a takové modifikované steroidy, které demonstrují uvedené funkční ekvivalence, a to af už jsou nebo nejsou modifikované steroidy explicitně uvedené.

Shrnutí obsahu vynálezu

Předkládaný vynález se týká způsobů pozměnění hypothalamové funkce u jedince. Tento způsob zahrnuje nazální administraci lidského vomeroferinu, např. pregnanového nebo cholanového steroidu, nebo farmaceutického prostředku zahrnujícího vomeroferin, takže se vomeroferin váže na specifický neuroepiteliální receptor. Tento steroid nebo steroidy je/jsou výhodně administrovány ve formě farmaceutického prostředku obsahujícího jeden nebo více farmaceuticky přijatelných nosičů. Další provedení předkládaného , | r j « i x ii | i .I*' ** .4» „

Provedení vynálezu

Stručný popis obrázků

Obr. 1 ukazuje hodnoty z integrovaného EVG, GSR a ST pro sloučeninu Al-Pl u samečků, která byla testovány v souladu s příklady 16 a 17.

Obr. 2 ukazuje hodnoty z integrovaného EVG pro sloučeniny A1 -P1, A2-P1, A4-P1, A3-P1, A1-P4, A2-P4 u samiček.

Obr. 3 ukazuje hodnoty pro ST měření sloučenin Al-Pl, A2-P1, A4-P1, A3-P1, A1 -P4, A2-P4 u samiček.

Obr. 4 ukazuje hodnoty pro GSR měření sloučenin Al-Pl, A2-P1, A4-P1, A3-P1, A1-P4, A2-P4 u samiček.

Obr. 6 ukazuje hodnoty pro ST, GSR a EVG měření sloučeniny A1-P3 u samiček.

Obr. 6 ukazuje hodnoty pro RF a EKG měření sloučeniny A1-P3 u samiček.

Obr. 7 ukazuje hodnoty pro EEG měření sloučeniny A1-P3 u samiček.

Obr. 8 ukazuje hodnoty pro ST, GSR a EVG měření sloučeniny A1-P3 u samečků.

Obr. 9 ukazuje hodnoty pro RF a EKG měření sloučeniny A1-P3 u samečků.

Obr. 10 ukazuje hodnoty pro EEG měření sloučeniny A1-P3 u samečků.

Obr. 11 a 12 ukazují hodnoty z ST, GSR a EVG měření sloučeniny A2-P3 u samečků, respektive u samiček.

Obr. 13 o 14 ukazují hodnoty z EEG měření sloučeniny A2-P3 u samečků, respektive u samiček.

Obr. 15 a 16 ukazují hodnoty pro RF a EKG měření sloučeniny A2-P3 u samečků, respektive u samiček.

Obr. 17 a 18 ukazují hodnoty z ST, GSR a EVG měření sloučeniny A8-P1 u samečků, respektive u samiček.

Obr. 19 a 20 ukazují hodnoty z RF a EKG měření sloučeniny A8-P1 u samečků, respektive u samiček.

Obr. 21 a 22 ukazují hodnoty z EEG měření sloučeniny A8-P1 u samečků, respektive u samiček.

Obr. 23 a 24 ukazují hodnoty z ST, GSR a EVG měření sloučeniny Α6-ΡΊ u samečků, respektive u samiček.

Obr. 25 a 26 ukazují hodnoty z RF a EKG měření sloučeniny Aó-Pl u samečků, respektive u samiček.

Obr. 27 a 28 ukazují hodnoty z EEG měření sloučeniny A6-P1 u samečků, respektive u samiček.

Obr. 29, 30 α 31 ukazují hodnoty z ST, GSR, EVG, RF, EKG a EEG měření sloučeniny 20,21-dimetylpregna-5,20-dien-3p-olu u samečků.

Obr. 32, 33 a 34 ukazují hodnoty z ST, GSR, EVG, RF, EKG a EEG měření sloučeniny 20,21-dimetylpregna-5,20-dien-3p-olu u samiček.

Obr. 35, 36 a 37 ukazují hodnoty z ST, GSR, EVG, RF, EKG a EEG měření sloučeniny 20,21-dimetylpregna-5,20-dien-3-onu u samečků.

Obr. 38, 39 a 40 ukazují hodnoty z ST, GSR, EVG, RF, EKG a EEG měření sloučeniny 20,21 -dimetylpregna-5,20-dien-3-onu u samiček.

Obr. 41, 42 a 43 ukazují hodnoty z ST, GSR, EVG, RF, EKG a EEG měření sloučeniny A Ί4-Ρ2 u samečků.

Obr. 44, 45 a 46 ukazují hodnoty z ST, GSR, EVG, RF, EKG a EEG měření sloučeniny A14-P2 u samiček.

Obr. 47, 48 a 49 ukazují hodnoty z ST, GSR, EVG, RF, EKG a EEG měření sloučeniny A7-P2 u samečků.

Obr. 50, 51 a 52 ukazují hodnoty z ST, GSR, EVG, RF, EKG a EEG měření sloučeniny A7-P2 u samiček.

Obr. 53 a 54 ukazují hodnoty z ST, GSR, EVG a EEG měření sloučeniny Al 1-Pi u samečků.

Obr. 55 ukazuje hodnoty z EEG měření sloučeniny A13-P1 u samečků.

Obr. 56, 57 a 58 ukazují hodnoty z ST, GSR, EVG, RF, EKG a EEG měření sloučeniny A13-P1 u samiček.

Obr. 59 ukazuje hodnoty z EVG, EDA a BT měření sloučeniny A3/P1 uzen.

Obr. 60 ukazuje hodnoty z EVG, EDA a BT měření sloučeniny A4/P1 užeň.

Obr. 61 a 62 ukazují hodnoty z měření sloučeniny A8/P1 u mužů, respektive u žen.

Obr. 63 α 64 ukazují hodnoty z měření sloučeniny A13/P8 u mužů, respektive u žen.

Obr. 65 a 66 ukazují hodnoty z měření sloučeniny A6/P1 u mužů, respektive užeň.

Obr. 67 a 68 ukazují hodnoty z měření 20-metylderivátu sloučeniny A6/P1 u mužů, respektive u žen.

Obr. 69 a 70 ukazují hodnoty z měření 20, 21-dimetylderivátu sloučeniny A1 /P Í u mužů, respektive u žen.

Obr. 71 a 72 ukazují hodnoty z měření 20, 21-dimetylderivátu sloučeniny Aó/P 1 u mužů, respektive u žen.

Obr. 73 a 74 ukazují hodnoty z měření sloučeniny A14/P2 u mužů, respektive u žen.

Obr. 75 a 76 ukazují hodnoty z měření sloučeniny A12/P1 u mužů, respektive u žen.

Obr. 77 a 78 ukazují hodnoty z měření sloučeniny A7/P2 u mužů, respektive u žen.

Obr. 79 a 80 ukazují hodnoty z měření sloučeniny A13/P1 u mužů, respektive u žen.

Obr. 81 a 82 ukazují hodnoty z měření sloučeniny A2/P7 u mužů, respektive u žeň.

Obr. 83 a 84 ukazují hodnoty z měření sloučeniny A3/P5 u mužů, respektive u žen.

Obr. 85 až 96 se vztahují k cholanúm v tabulce II.

Obr. 85 a 86 ukazují hodnoty z měření sloučeniny A8/C1 u mužů, respektive u žen.

Obr. 87 a 88 ukazují hodnoty z měření sloučeniny A2/C1 u mužů, respektive u žen.

Obr. 89 α 90 ukazují hodnoty z měření acetátu sloučeniny A2/C1 u mužů, respektive u žen.

Obr, 91 a 92 ukazují hodnoty z měření sloučeniny A2/C1 u mužů, respektive u žen.

Obr. 93 a 94 ukazují hodnoty z měření sloučeniny A3/C1 u mužů, respektive u žen.

Obr. 95 a 96 ukazují hodnoty z měření sloučeniny A13/C1 u mužů, respektive u žen.

I. Definice

Výraz nepříznivý vliv vyjadřuje přechodný stav nálady. Typickými negativními vlivy jsou pocity nervozity, napětí, studu, úzkostlivosti, podrážděnosti, zlosti, vzteku apod. Výraz špatné nálady vyjadřuje déletrvající stavy nálady jako je pocit viny, trudnomyslnost, pocit beznaděje, méněcennosti, lítostivost, trápení se, nešťastnost apod. Výraz charakterové vlastnosti znamená dlouhodobější aspekty osobnosti jedince. Typickými negativními charakterovými vlastnostmi je přecitlivělost, lítostivost, obviňování se, umíněnost, vzteklost, zloba, váhavost a nesmělost, lenost apod.

Vomeroferiny podle předkládaného vynálezu lze použít přes kontakt s VNO ke stimulaci jedné nebo více hormonálních, funkčních a autonomních funkcí hypothalamu. Díky predominantní roli vykazované hypothalamem v široké škále vnitřních tělních funkcí a neurálnímu spojení mezi VNO a hypothalamem jsou vomeroferiny podle předkládaného vynálezu v pozici, že stimulují takové funkce jako endokrinní výstupní kontrolu, např., kontrolu vylučování vasopresinu a oxytocinu stejně jako množství dalších peptidů. Vasopresin je antidiuretický hormon díky jeho působení v ledvinách na zesílení absorpce vody a koncentrování moči. Navíc v tele pomáhá regulovat krevní tlak tím, že působí na arteriální hladké svalstvo a působí na metabolismus pomocí zesílení přeměny glykogenu na glukózu v játrech. Oxytocin, jehož receptory se nalézají na děložním hladkém svalstvu a na prsním hladkém svalstvu, může zapříčinit pokles množství mléka via kontrakci prsního hladkého svalstva a zapříčinit kontrakce dělohy během porodu. Hypothalamus také kontroluje uvolňování hormonů z ventrální hypofýzy jako je ACHT, prolaktin, LH (luteinizační hormon), GH (růstový hormon), TSH (hormon stimulující štítnou žlázu), FSH (hormon stimulující folikuly) a beta-endorfin. Takže např, schopnost kontrolovat sekreci LH může vést ke kontrole plodnosti u žen nebo produkci testosteronu u mužů. Produkci testosteronu lze využít k úpravě stavu jako je nízké libido u mužů nebo k léčbě zhoubného onemocnění svaloviny nebo vnějších projevů jako je stárnutí. Redukci testosteronu lze využít k léčbě stavů jako je rakovina prostaty.

Kontrola hypothalamových funkcí chování je také uskutečnitelná použitím vomeroferinu podle předkládaného vynálezu. Je známé, že hypothalamus kontroluje takové funkční výstupy jako je strach, vztek, potěšení a denní biorytmy, které regulují spánek a nespavost. Další funkce kontrolované hypothalamem zahrnují chuf k jídlu, žízeň, sympatické funkce jako je odvaha a bojovnost a funkce jako je kardiovaskulární kontrola, termoregulace a visceráiní funkce jako je kontrola útrobního svalstva a sekrece kyseliny ke štěpení potravy. Takže zatímco z různých částí těla směřuje mnohačetný senzorický vstup do hypothalamu, věří se, že vomeroferiny podle předkládaného vynálezu poskytují v první řadě způsob stimulace přes nosní dutinu, a to inhalací, aby došlo ke kontaktu s epiteliálními buňkami v VNO, způsob stimulace funkcí hypothalamu diskutovaných viz výše.

Pregnanové steroidy jsou alifatické polycyklické uhlovodíky charakterizované steroidní strukturou se čtyřmi kruhy s mety lácí v pozici 10 a 13 a etylací (včetně nenasycených skupin) v pozici 17. Pregnan je derivátem pregnanů běžně chápaným tak. že tato sloučenina má nejméně jednu dvojnou vazbu. Dále všechny deriváty, které mají strukturní charakteristiky popsané viz výše, jsou také obecně nazývány pregnanové steroidy.

Cholanový steroid je alifatický polycyklický uhlovodík charakterizovaný steroidní strukturou se čtyřmi kruhy s metylací v pozici 10 a 13 a s 2-pentylovou skupinou (včetně nenasycených skupin) v pozici 17.

Chemoreceptor je receptorová molekula vystavená na povrchu chemosenzorické neuroepiteliální buňky, která se stereospecificky váže na určitý ligand nebo ligandy. Tato specifická vazba iniciuje signální transdukci, která iniciuje přívodný nervový impuls. Chemoreceptory se nalézají, mj., v chufových pohárcích, čichovém epiteliu a vomeronazální tkáni.

Zde použitý výraz pregnenové steroidy’' znamená alifatické polycyklické uhlovodíky se steroidní strukturou se čtyřmi kruhy, nejméně s jednou dvojnou vazbou v kruhu A. s metylací v pozici 10 a 13, etylací (včetně nenasycených skupin) v pozici 17 a oxoskupinou, hydroxylovou skupinou nebo hydroxyderivátem jako je alkoxyl, ester, benzoát, cypionát, sulfát nebo glukuronid v pozici 3. Deriváty, které obsahují tyto strukturní charakteristiky, jsou také nazývány obecně jako pregnenové steroidy .

Následující struktura ukazuje steroidní strukturu se čtyřmi kruhy, která je běžná pro pregnanové a pregnenové steroidy. Pri popisu umístěni skupin a substituentů bude použit následující systém číslování:

Výraz sexuálně dimorfní se týká rozdílu v účinku nebo odpovědi na farmaceutické agens mezi samci a samičkami stejného druhu.

Účinné množství léčíva je rozsah množství a/nebo koncentrace, který vede k dosažení požadovaného fyziologického a/nebo psychologického účinku pri jeho administraci jedinci, který potřebuje léčivo. V tomto případě je jednotlivcem s touto pořebou jedinec s fyziologickým rysem nebo rysem chování takvým, který je normálně regulován hypothalamem a kde je žádoucí ovlivnit funkci hypothalamu nebo tohoto rysu. Účinné množství podaného léčiva se může lišit v závislosti na funkci, která má být ovlivněna, požadovaném účinku, způsobu administrace apod. Např. je-li steroid administrován jako roztok aplikovaný na pokožku obličeje pacienta, je účinná koncentrace oá 1 Mg/ml do 100 mg/ml, výhodně 10 až 50 Mg/ml a nejvýhodněji 20 až 30 gg/ml. Je-li steroid vpraven přímo do VNO, je účinné množství od 1 pikogramu do 1 nanogramu, výhodněji od 10 pg do 50 pg. Je-li steroid administrován do nazální části mastí, krémem nebo aerosolem nebo podobně, účinné množství je od 100 pg do 100 pg, výhodně od 1 ng do 10 gg, Z toho vyplývá, že některá léčiva mohou být účinná, jsou-li administrována některými cestami, ale neúčinná při administraci jinými cestami.

Hypothalamus je část diencefalonu zahrnující ventrální stěnu třetí mozkové komory pod hypothalamovou rýhou a zahrnující struktury tvořící dno mozkové komory, včetně optického chiasma, hrbolkovitěho cinerea, infundibula a prsních tělísek. Hypothalamus reguluje autonomní nervový systém a kontroluje některé fyziologické funkce a funkce chování jako jsou tzv. odpovědi bojovnosti a odvahy, sexuální motivace, rovnováha tekutin, metabolismus cukrů a tuků, hlad, regulace tělesné teploty, endokrinní sekrece a další. Hypothalamus je také zdrojem vasopresinu, který reguluje krevní tlak, a oxytocinu, který indukuje porod a uvolňování mléka. Všechny funkce hypothalamu jsou potenciálně modulovatelné vomeroferinovou terapií popsanou v předkládaném vynálezu.

Zde použitý výraz ligand znamená molekulu, která působí jako chemický signál tím, že se specificky váže na receptářovou molekulu vystavenou na povrchu receptorové buňky, a tím iniciuje přenos signálu napříč buněčným povrchem. Vazbu ligandů na chemosenzory receptorů lze měřit, Chemosenzorická tkáň, jako je vomeronazální neuroepitelium nebo čichové neuroepitelium, obsahuje množství různých neuroreceptorových buněk, přičemž každá vystavuje nejméně jeden povrchový buněčný receptor. Mnoho z receptorových molekul má identickou ligandovou specifitu. Proto je-li tkáň vystavena působení ligandů, pro který má specifitu (např. vystavení působení VNO vomeroferinu), lze měřit součet změn v potenciálu povrchového buněčného receptorů.

Zde použitý výraz nižší alkyl znamená rozvětvený nebo nevětvený nasycený uhlovodíkový řetězec mající od 1 do 4 uhlíkových atomů Jako např, metyl, etyl, n-propyl, i-butyl apod. Zde použitý výraz ''alkoxyskupina je použit v jeho běžném smyslu a je míněna skupina -OR, kde R je alkyl podle deifinice zde uvedené,

Feromon je látka, která umožňuje chemické způsoby komunikace mezi členy téhož druhu přes sekreci a periferní chemorecepci. U savců jsou feromony obvykle detegovány receptory ve vomeronazálním orgánu nosu. Běžně feromony působí na vývoj, reprodukci a podobné chování. Vomeroferin je obecnější termín, který zahrnuje feromony a popisuje látku z jakéhokoliv zdroje, která funguje jako chemosenzorický posel, váže se na specifický vomeronazální neuroepiteliální receptor a indukuje fyziologický účinek nebo účinek na chování. Fyziologický účinek vomeroferinů je zprostředkován přes vomeronazální orgán.

Pikogram (pg) odpovídá 0,001 nanogramu (ng). Nanogram odpovídá 0,001 mikrogramu (ug). Mikrogram odpovídá 0,001 mg.

li. Způsoby provedení předkládaného vynálezu

A. Pregnany použitelné podle předkládaného vynálezu

Předkládaný vynález je zaměřen na skupinu určitých pregnanových steroidů.

Věří se, že deriváty pregnanů v této skupině jsou nové. Syntézy jsou zde popsány pro následující sloučeniny, jak je vyznačeno v tabulce:

Tabulka 1 zahrnuje pregnany, na které je předkládaný vynález zaměřen, ale neomezuje jeho rozsah. Syntetická schémata, která následují, popisují syntézy meziproduktů a substruktur pro přípravu těchto pregnanů:

Tabulka I: PREGNANY

i a\	1	i 2	í 3	4	5	β	7	β
1 * ‘-ť 1 1	,ύΰ^ VMOVfa		.dS^ «Μ04Μ	jdžfi . WXM	J3$ .. «o*	<KM	.dS^ woa*	NhCM)
í 2	oo*	«w*<	MOM	j3ŽČ CM	j3$ O**	»O*	yŽ wxa.	«ťfch
3 i	jdS^ «o* a	\J3$ j «Ml	ion	*«*«	MOva.	ΚΟΜΟ.		.d$^ ««MM
4	j3$& 1 «Ml	•mmi	já^” MMCi.			1 WEL	yž «X	Λ&
5 t	CMt	IMTWkí	*Mi	y- «ML	,d5« «ML	yN «ML		.af «ML
| ί «		x$ » «X	S «0*«		<$L	. «WH.
7	.35« KM	.35« MCMft	.35«	.35« mm	X	36« ’ «ML	.a^‘
8	kno.	LdS« wwa	«X	>3*11	-d^ »oe	j3$p «ML,	dd15 «Μ3 KO·	_af ** -—«ML
0	•ΦΪ.	AŽ	<			zj5« 1 «0*8.		fí
i 10	-<	„4$^ 1 «vOMf	.4^		fL	-4^	-4^	« «ML
n 1	.a$& IQOrfl	xtíA	.dó^ «OMEL	«0«	.d6^ «*		G • «ML	jd^.
1 12!	J&r w«	-rfít	,tí£p **u	j&L	j3$ «Μ.		jdáí
13 f l	fa «ΟΑ	.dtf* fa *MJ	.a^ ·> «ml		.d^	L»o*e	ud^ ► ΚΜϊ	.d£^
14	*0*8. 1	«Μ	,oN MTV*	,ϋΝ KXV	·«£.	on 1	.d^ ... , <2Μ.	.dE^ Vt,

Syntézy substruktur

Vzhledem k předchozí tabulce jsou následující příklady syntéz meziproduktů uvedeny v řadě (A 1 ažA13) nebo sloupci (PÍ ažP8).

Syntézy substruktur: typ A

Percy L. Julian, Edwin W. Meyer and Helen C. Printy,

J. Amer. Chem. Soc,, 1948, 70, 3, 887.

Také komerčně dostupnou substrukturou je např. 17a-etinyitestosteron.

I

Toto je komerčně dostupná substruktura např.

pro dehydroepiandrosteron, pregnenolon.

David· G. Loughhead, J. Org. Chen., 1985, Vol. 50, No. 20, p. 3931.

A4:

Xt)

I.Z. Kabore,

Q. Khuong-Huu

A. Pancrazi,

Tetrahedron,fl978) Vol. 34, sin 2807.

I. Dory, G. Szabo a P. Opoczky, Acta Chia, Eung., Vol. 20, síh 67 (1959, .

Bernhard Krieger, Egbert Blanke a fenamiKašpar, German Patent 1,297,603 (1969).

Η

(Α2)

Alan Μ. Krubiner, Norman Gottfried a Eugene P. Oliveto, J. Org. Chem., 1969, 34. 11/ 3502.

Roberto Sciaky a Albero Consonni, Gazz. Chim. Ital., 92, 730 (1962).

Vladimír Petrov, Yueh-sha Wang, Leon Lack, Avery Sandberg, Nobuyuki Kadohama a Keith Kendle, J. Steroid Blochem., 1983, 19, 1491.

Steven R. Schow a 1977, Vol. 30, No

Trevor C. McMorrle, Steroids, 3, 389.

Také komerčně dostupnou substrukturou T7a-etinyldihydrotestosteron.

např.

Toto je komerčně dostupná substruktura např. pregnanolonu androsteronu.

Ataké:

J.M. Kohli, A Zaman a A.R. Kidvai, Phytochealstry, 1971, Vol. 10, sb-. 442.

All:

h'2 pč/Ú&f.

Frederick Broun a . Carl Djerassi, J, Amer. Cheia, Soc., 1980, 102, 2, 807.

(Αβ)

Syntézy substruktur: typ P

Ajay K. Bose a N.G. Steinberg, Synthesis, 1970, 595.

Steven R. Schów a Trevor C. McMorris, Steroids, 1977, vol. 30, No. 3, sin. 389.

P2:

Ronald Breslow a Louis M. Maresca, Tetrahedron Letters, 1977, No. 7, p. 623.

Braja G. <7. Chem,

Hazra, Vandana S. Póre, Padmakar L. Joshi, Soc., Perkin Trans J, 1993, (15), 1819-22.

Také komerčně dostupná 5a-pregn-l 7(20)-en-3p-olu (steraloidy):

substruktura např

P3í

Toto je komerčně dostupná substruktura pregna-5,16-dien-3p-olu (steraJoidy).

Pri komerční nedostupnosti probíhá syntéza následovně:

např.

John P. Dusza a . Werner Bergman, 3. Org. Chem., 1960, 25, 79.

C.W. Shoppee, Ruth E. Lack a. B.C. Newman,, J. Chea. Soc., 1964, p. 3388.

Také komerčně dostupná substruktura např. 5a-pregnan-3p~olu (steraloidy):

H

P5í

Ν.

NH,

Oliveto, J. Org. Chem., 1969, Vol, 34, No. 11, 3502.

Eugene P. Oliveto, Corrine Gerold a Lola Johnson, J. Aa. Chen. Soc., 1951, 73, 5073.

P7:

In·.

Pierre Crabble a Esperanzá Velarde, U.S. Patent 3,681,410, 1972.

Maya Dvolaitsky Anně M. Giroud a Jean Jacques, Btíll. Soc. Chin. France, 1963, 62.

French Patent 1,536,034, 1968.

17a-pregnany

Pro substruktury Pl, P4 α P5 je v pozici 17 normální konfigurací β. Ovšem odpovídající 17a-analog lze také připravit použitím 17a-pregnolonu jako výchozí látky. Např.:

Alan M. Krubiner, Norman GoVtfried a Eugene P.

Oliveto, J. Org. Chem., 1969, Vol. 34, No. 11,

3502.

Metylpregnany

Následující metodologie umožňuje umístit metylovou skupinu na pozici 20 vždy/když to umožní struktura, jmenovitě to platí pro Pl, P2, P3,P4aP6:

HO'

HO'

J. Bryan Jones and Keith D. Gordon, Can. «7. Chem., 1972, vol. 50, p. 2712.

1960, 25., 79.

David G. Loughead, J. Org. Chem., 50,3931 (1985).

U S. Patent 3,681,410 uvádí přípravu 6a-metylanologů:

U.S. Patent 3,492,318 uvádí přípravu 18- a 21-metylanalogů:

Určité metylované pregnenolonové prekurzory jsou komerčně dostupné, vis 6,16a(p)-metyl:

Kromě 17a-metylpregnenolonu French Patent 1,363,191:

je snadno dostupný:

Proto lze sloučeniny syntetizované z pregnenoionu připravit také s metylovými skupinami v pozicích 6, 16 nebo 17 za použití příslušných metylpregnenolonových prekurzoru.

Dimetyisioučeniny jako je popsaný 18, 21-dimetylpregna-4, 16-dien-20-in-3-on lze připravit jedním ze tří obecných způsobů:

První způsob kombinuje metylovaný prekurzor, jako jsou prekurzory s metylací v pozicích 6, 16 nebo 17, s metodologií, která zavádí metylovou skupinu, jako do pozice 20.

Druhý způsob používá dimetylovaný prekurzor jako je komerčně dostupný 6,1 óa-dimetylpregnenolon.

Syntézy dalších dimetylovaných pregnenolonových prekurzorů byly popsány jako u následujícího příkladu:

Sylvestre Julia, Colette Neuville a Pierre Simon, Bull, Soc. Chim. France, 1495(1962).

Λ, Jtb cnolorvAce&ati

E. Shapiro, T. Legatt, L. Weber, M. Steinberg, A. Watnlck, M. Eisler, M. Gilmore Hennessey, C.T. Coniglio, W. Charney a E.P. Oliveto, J. Med. Pharm. Chem. 5,975 (1962).

16d, I7ax&neťhyipregnenoíoa

J. Cairns, C.L. Hewett, R. T. Logan, G. McGarry, D.F.M. Stevenson a G.F. Woods, J.C.S. Perkin 1,1558 (1976).

, 7/-Afinity Iprtyt) € /) 0 fo ή

R. Deghenghi a R. 'Gaudry, J. Amer. Chem. Soc,, 4668 (1961).

Britieh Patent 927,515:

6/ //c< - λaCfiAšjý

R. Deghenghi a R. Gaudry, Tetrahedron Letters, No 11,489 (1962).

W-cb’*t.l}lpre.Qt>th bJvr)

W.J. Adams, D.K. Patel, V. Petrow, i. A. Stuart-Webb a 6. Sturgeon, J. Chem. Soc., 4490 (1956).

Třetí způsob vychází z nemetylovaného prekurzoru jako je pregnenolon a využívá metodologii, která zavádí dvě metylové

20,21-dimetylpregnany jsou také známé jako 24-norcholany. 24-norcholany lze alternativně připravit degradací cholanového prekurzoru jako v následujícím příkladu:

Y. Hirano, T. Eguchi, M. Ishigmo a N. Ikekawa, Chem. Pharm. Bull., 31(2),394(1983).

Halogenpregnany

D.H.R. Bartoň, G. Bashiades a J.-L. Fourrey, Tetrahedron Letters, vol. 24, 1605(1983).

Biao Jiang a Yuanyao Xu, Tetrahedron Letters, vol. 33,511 (1992).

Určité metylová né pregnenolonové prekurzory jsou komerčně dostupné, vis 6,16a(J3)-metyl:

Kromě 17a-metylpregnenolonu je French Patent 1,363.191:

snadno dostupný:

Proto lze sloučeniny syntetizované z pregnenolonu připravit také s metylovými skupinami v pozicích 6, 16 nebo 17 za použití příslušných metyl pregnenolonových prekurzorů.

Tabulka II: CHOLANY

	1	2	3	4	5	6	7
1	O*-*-’ NOVU	dX O*'**'·' NOVU	O*·'*'' NOVU	tt	d$^		ok^ WWL
2			MG*'**'' IMCMM	t
3		«χώ^Γ- NOVU	dX NO‘*''*K~' NOVU	~C$C	«d5^	tXZ	dít

6 í i	0 NOVU	.d^ o NOVU	0 NQVfL	0 HXO.	.dt 0 NOVU	dt O NOVU	dt o wa
1 ; 8 1	WCL	*° NQVCL	™ WO.	-dít		XC	-dt
1 hi	od5^/	dx 0<kA> njvu	d?^ NOVU	•dt		dt NOVU	dS^ O*'**'“'' novu
h3	OH		•dt		dt OH	dt OH	dt OH
	«ová	*KMB>	HOVIL	WB.	HOVtL	NXU	wa

Syntézy substruktur

Vzhledem k předchozí tabulce jsou následující příklady syntéz meziproduktů uvedeny v řadě (A 1 až A l 3) nebo sloupci (C1 až C7).

Syntézy substruktur: typ A

Toto je komerčně dostupná substruktura např. pregnenolonu, stigmasterolu, kyseliny cholenové.

frč pťUá.cf.

AI Ί:

D. H. R. Bartoň, J. Boivin, D. Crich a C. H. Hill, J, Chem. Soc. Perkin Trans. I, 1986, ρ. 1805.

Syntézy substruktur: typ C

J. P. Schmit, M. Piraux a J. F. Pilette, J. Org. Chem., 1975, Vol. 40, No. Π,ρ. 1586.

W. Bergmann a J. P.Dusza, J. Org. Chem., 1958, Vol. 23, p. 1245.

J. E. van Lier a L L. Smith, J. Org. Chem., 1970, Vol. 36, No. 8, 2631.

C4:

K. Burger, F. Colobert, C. Hetru a B. Luu, Tetrahedron, 1988, Vol. 44, No. 4, p. 1141.

A. B. Turner, Cbemistry a

Industry, 1979, p. 385.

1.

2. POCh

1. «Éí^MgBr 2- fOJ 3. POCf₃

G. Stoeck a H. Stein, German Patent No. 854,517, 1952.

A. Burger, J-P. Roussel, C. Hetru, J. A. Hoffmann a B. Luu, Tetrahedron, 1989, Vol. 45, No. 1, p. 155.

24-norcholany a 24-metylcholany

Struktury s postranním řetězcem kratším nebo delším o jeden uhlíkový atom v pozici 24 lze připravit za použití analogického způsobu. 23-metylcholany jsou také dostupné podobným způsobem. Příklady následují.

J. P. Schmit, M. Piraux a J. F, Pilette, J. Org. Chem., 1975, Vol. 40, No. 11, p. 1586.

Y. M. Sheikh a C. Djerassi, Steroids, 1975, Vol. 26(1), p. 129.

M. Morisaki, M. Shibata, C. Duque, N. Imamura ai . N. ikekawa, Chem. Pharm. Bull., 1980, Vol. 28(2), p. 606.

D. H. R. Bartoň, J. Boivin, D. Crich a Trans. /, 1986, p. 1805, *

C. H. Hill, J. Chem. Soc. Perkin

A. Burger, F. Colobert, C. Hetru a

44,. No. 4, p. 1141..

B. Luu, Tetrahedron, 1988, Vol.

Β. M. Trast, R. J. Kulawiec a 34, No. 4, p. 587.

A. Hammes, Tetrahedron Letters, Vol.

B. Luu,

Tetrahedron, 1989, Vol. 45, No. 1, p. 155,

C. Syntetické způsoby

1. Příprava derivátů se substitucí v 3-, 6-, 19-, 20- a 21 -pozicích .

Sloučeniny použité ve způsobech podle předkládaného vynálezu jsou pregnanové steroidy substituované v 3-, 6-, 19-, 20- a 21-pozicích. Mnoho z 3-substituovaných steroidů je známo jako sloučeniny, které lze odvodit z 3-oxosteroidů. Jak je uvedeno na obr. 1, pregna-4,20-dien-3-on (sloučenina 1) lze převést na 3, 5, 20-trien-éter (sloučenina 2) nebo 1,4, 20-trien-3-on (sloučenina 3), které jsou výchozími látkami pro přípravu 6- a 3-substituovanýchhydroxyderivátú.

Alkoxyderiváty jsou připraveny z jejich odpovídajících hydroxysteroidů reakcí s alkylačním činidlem jako je trimetyloxoniumfluoroborát, trietyloxoniumfluoroborát nebo metylfluorsulfonát v inertním chlorovaném rozpouštědle jako je metylenchlorid. Alternativními alkylačními činidly je NaH, KM nebo KOBut, oxid stříbrný nebo oxid barnatý v polárních, aprotických rozpouštědlech jako např. DMF, DMSO a hexametylfosforamid.

Obecné postupy pro syntetické reakce steroidů jsou osobě obeznámeně s technikou dobře známé. Musí-li být určen čas a teplota reakcí, lze je určit rutinně. Po přídavku požadovaných reakčních látek je směs míchána pod inertní atmosférou a v hodinových intervalech jsou odebírány aiikvóty. Aiikvóty jsou analyzovány chromatograficky a monitoruje se úbytek výchozích látek, aby se zjistilo, v kterém bodě má začít zpracování reakční směsi. Nemění-li se již výchozí látky během 24 hodin, reakční směs je zahřívána k refluxu a jsou analyzovány aiikvóty odebírané v hodinových intervalech až do vymizení výchozích látek. V takovém případě se směs ponechá před zpracováním vychladnout.

Čištění produktů se provádí chromatograficky a/nebo krystalizací, jak je osobě obeznámené s technikou známo.

2. Příprava 19-hydroxyderivátů

Syntéza 19-OH-pregna~4,17-dien-3-onu

Způsob syntézy této sloučeniny je uveden ve schématu 3.

D. Farmaceutické prostředky a způsoby jejich použití

Provedením předkládaného vynálezu je způsob pozměnění hypothalamové funkce u jedince. Jiným provedením je pozměnění autonomní funkce u jedince. Tyto autonomní funkce zahrnují, ale nejsou na ně omezeny, úroveň srdeční aktivity, rytmus dýchání, profil mozkových vln (procenta alfa kortikální aktivity), tělesná teplota. Další provedení zahrnují, ale nejsou na ně omezena, způsoby omezování negativních účinků, špatné nálady nebo negativních charakterových rysů jedince. Jiným provedením je způsob léčby premenstruálního stresu u žen. Všechna tato provedení lze provést nesystémovou nazální administrací určitých pregnanových nebo cholanových steroidů, kombinace pregnanových a cholanových steroidú a kombinace jednoho nebo více pregnanových nebo cholanových steroidů a jednoho nebo více androstanových a/nebo estrenových steroidů.

Tento zvláštní způsob administrace se liší od alternativních způsobů jako je užívání léku nebo injekčně v mnoha různých důležitých rysech, je založen na přímém kontaktu s VNO umožněném nazální administrací steroidního ligandů. V tomto způsobu podle předkládaného vynálezu je administrován příslušný ligand přímo na chemoreceptory v nazální části a vomeronazálním orgánu, bez použití tablet nebo jehel - tj. neinvazivně. Působení léčiva je zprostředkováno přes vazbu ligandů zde popdaného na specifické receptory vystavené na neuroepiteliálních buňkách v nose, výhodně ve VNO. Kromě toho je účinek léčiva zprostředkován pomocí nervového systému a ne přes oběhový systém, takže funkci mozku lze ovlivnit bez ohledu na krevní bariéry mozku. Tyto způsoby léčby poskytují přímý způsob ovlivnění hypothalamu přes nervový systém, protože mezi feromonovými receptory a hypothalamem existuje pouze jedno šynaptické spojení. Protože smyslové nervy vysílají signály do specifických oblastí mozku, vykazuje tento způsob vysoce specifický účinek léčiva a tím značné snížení možných nežádoucích vedlejších účinků.

Kontakt přes VNO je důležitý, protože VNO je asociován schemoreceptorovou/feromonovou funkcí. VNO sestává z páru slepých tubulárních divertikul, které se nalézají na vnitřním okraji nosní přepážky. VNO obsahuje neuroepitely, jejichž axony mají přímé synapsy do mandlí a odtud do hypothalamu. Existence VNO byla velmi dobře zdokumentována u většiny suchozemských obratlovců včetně lidského plodu; ovšem u dospělých lidí se obecně předpokládá, že je zakrnělý. (Viz Johnson a kol., viz výše)

Ligandy uvedené v předkládaném vynálezu nebo jejich sulfatované, cypionátové, benzoátové, propionátové nebo glukuronátové deriváty lze administrovat přímo, ale výhodně jsou administrovány jako prostředky. Jsou připraveny v kapalné dávkové formě jako jsou např. kapaliny, suspenze nebo podobně, výhodně v jednotkových dávkových formách vhodných k jednotlivé administraci přesných dávek. Kapalné dávky lze administrovat jako nosní kapky nebo aerosol. Alternativně lze aktivní sloučeninu připravit ve formě krému nebo masti a aplikovat lokálně do nusní dutiny. Navíc lze vomeroferin administrovat jako inhalační látku obsaženou ve vzdušné kuličce dopravené do nosní dutiny. Jako jiná alternativa dopravení je pomocí kontrolovaného uvolňování těchto agens, přičemž je zapouzdřena buď jeho převážná část nebo mikroskopické množství, a to za použití syntetických polymerů jako je silikon a přírodních polymerů jako je želatina nebo celulóza. Rychlost uvolňování lze kontrolovat vhodným výběrem polymerního systému použitého ke kontrole difúzní rychlosti (R.S. LAnger a N.A. Peppas, Biomaterials 2,201 (1981). Přírodní polymery jako je želatina a celulóza se pomalu rozpouštějí během několika minut až hodin, zatímco silikon zůstává intaktní po několik měsíců. Prostředky zahrnují běžný farmaceutický nosič nebo excipient, jeden nebo více aktivních pregnanových nebo cholanových sloučenin podle obecného vzorce I a prostředek dále zahrnuje nebo nezahrnuje jeden nebo více androstenových nebo estrenových steroidů. Dále prostředky zahrnují další medicínská agens, farmaceutická agens, nosiče, adjuvans atd.

Nejpříhodnějším způsobem přenosu semiochemického ligandu je inhalace přirozeně se vyskytujícího feromonu přítomného v kůži jiného jedince. Protože tyto sloučeniny jsou relativně netěkavé, je odhadováno, že během intimního kontaktu lidský jedinec inhaluje pikogramová množství přirozeně se vyskytujících steroidů z kůže druhého jedince, e odhadováno, že z inhalovaného množství pouze asi 1% dosáhne receptorů vomeronazálního orgánu.

Množství vomeroferinu administrované bude samozřejmě záviset na pacientovi podrobeném léčbě, různých nemocech, způsobu administrace, frekvence administrace a zkušenostech lékaře. Ovšem jednotlivá dávka zahrnující nejméně 10 pikogramů, doručená přímo do lumen vomeronazálního orgánu, účinně vyvolá přechodnou autonomní odpověď. Při administrací do nosní dutiny činí dávka 100 pg až 100 gg, výhodně 1 ng až 10 gg, výhodněji 10 ng až 1 gg. Je žádoucí, aby se frekvence administrace pohybovala v rozmezí dávek podávaných v hodinových až měsíčních intervalech, výhodně 8x denně až jednou denně, výhodněji lx až 3x denně. Masti obsahující jednu nebo více aktivních sloučenin a volitelných farmaceutických adjuvans v nosiči jako je např. voda, fyziologický roztok, vodný roztok dextrozy, glycerol, etanol apod. lze připravit za použití báze jako je např. vazelína z ropy, vepřové sádlo nebo lanolin.

Kapalné farmaceuticky administrovateiné prostředky lze např. připravit rozpuštěním, dispergováním atd. aktivní sloučeniny definované viz výše a volitelných farmaceutických adjuvans v nosiči jako je např. voda, fyziologický roztok, vodný roztok dextrozy, glycerol, etanol apod. za vzniku roztoku nebo suspenze. Je-li to požadováno, farmaceutický prostředek určený k administraci také obsahuje minoritní množství netoxické pomocné látky jako je zvlhčovadlo nebo emulzifikátor, činidla pufrující pH apod, např. octan sodný, monolaurát sorbitonu, octan trietanolaminu sodného, oleát trietanolaminu atd.Aktuální způsoby přípravy takových dávkových forem jsou známé nebo budou osobě obeznámené s technikou zřejmé; např. viz Remingtonů Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 15. vydání (1975). Prostředky určené k administraci budou v jakémkoliv případě obsahovat množství jedné nebo více aktivních sloučenin v množství účinně zmírňujícím symptomy léčeného pacienta.

Pro administraci aerosolu je aktivní ingredience výhodně dodávána v jemně mleté formě spolu se surf akta ntem a propelantem. Obvyklá procenta aktivní ingredience se pohybují v rozmezí od 0,001 do 2% hmotnostních, výhodně od 0,004 do 0,1%.

Surfaktanty musí být, samozřejmě, netoxické a výhodně rozpustné v propelantu. Tato činidla jsou reprezentována estery nebo parciálními estery mastných kyselin obsahujících od 6 do 22 uhlíkových atomů jako je kyselina kapronová, oktanová, turová, palmitová, stearová, linolová, oleylstearová a oleová s alifatickým alkoholem s velkým obsahem vodíků nebo jeho cyklickým anhydridem jako je např. anhydrid etyienglykolu, glycerolu, erythritolu, arabitolu, mannitolu, sorbitolu a hexitolu, které jsou odvozeny od sorbitolu (sorbitanové estery se prodávají pod obchodní značkou Spans) a polyoxyetyienové a polyoxypropylenové deriváty těchto esterů. Lze použít směsi esterů, stejně jako směsi glyceridů nebo přírodní glyceridy. Výhodnými povrchově aktivními agens jsou např. oleáty orbitanu dostupné pod obchodními značkami Ariacel C (seskvioleát sorbitanu), “Spon 80 (monooleát sorbitanu) a Spán 85 (trioleát sorbitanu). Surfaktant tvoří 0,1 až 20% hmotnostních prostředku, výhodně 0,25 až 5%.

Rovnováhou prostředku je obvykle propeiant. Kapalnými propelanty jsou obvykle plyny v ambientních podmínkách a jsou kondenzovány pod tlakem. Mezi vhodné kapalné propelanty patří nižší alkany obsahující až 5 uhlíků jako je butan a propan; fluorované nebo fluorchlorované alkany dostupné pod obchodní značkou Freon. Lze použít také směsi výše uvedených látek.

Pro přípravu aerosolu je nádobka vybavená vhodným ventilem naplněna příslušným propelantem a obsahuje jemně mletou aktivní ingredienci a surfaktant. Ingredience jsou tak udržovány při zvýšeném talku až do uvolnění čúinkem ventilu.

Ještě další způsob administrace je lokální aplikace těkavého kapalného prostředku na pokožku, výhodně obličejovou pokožku, u jedince. Prostředek obvykle obsahuje alkohol jako je etanoi nebo izopropanol. Do prostředku podle předkládaného vynálezu lze také zahrnout příjemnou vůni.

F. Měření citového rozrušení, nálady a charakterových vlastností

Pocitové stavy spojené s citovým rozrušením, špatnou náladou a charakterovými vastnostmi lze obecně měřit za použití dotazníku. Lze např, jedinci dát dotazníky zahrnující množství adjektiv, která se týkají pocitových stavů. Jedinec pak vyhodnotí svůj pocitový stav popisem pomocí adjektiv a míru intenzity pocitu na číselné stupnici. Shromáždění podobných adjektiv a statistická analýza pacientova hodnocení každého adjektiva poskytne základ pro měření různých pocitových stavů.

Alternativně lze pocitové stavy měřit autonomními změnami jako jsou změny používané při polygrafických vyhodnocováních (galvanická odpověď pokožky, puls apod.). M. Cabanac. Annuai Review of Physiology 37, 415 (1975); J.D. Hardy, Body Temperature Regulation, kap. 59. str. 1417; v knize Medical Physiology, vol. IIEd.: VB Mountcastle (1980); Wolfram Bouscein. Electrodermal Acitivity (Plenům Press 1992). Kromě toho lze vyhodnocovat neverbální projevy jako je výraz tváře a držení těla.

III. Příklady

Následující příklady jsou zde uvedeny pro ilustraci, ale neomezují vynález.

Zkratky použité v příkladech jsou následující:

aq -vodný; LT=laboratomíteplota; PE= petroléter (teplota varu 50 až 70 °C); DMF=N,N-dimetylformamid; DMSO=dímetylsulfoxid; THF=tetrahydrofuran.

Schéma 1

o o

Schéma 2

gagosatíssi

LAH7AJO,

3Ž

O

Schéma 5 - oxidace pregnanů

Schéma 6 - syntéza 21 -metylen-20(R)-metylpregnanů

O

Schéma 7 - syntéza pregnanů

Schéma 8 - syntéza cholatrienu

Ph₃P=CHC₂H₅

HO’

Schéma 9 - syntéza cholenů

Me₂C(OMe)₂ / H*

MCPBA

Příklady

Příklad 1: Pregna-4,20-dien-3a~(p-)~ol

K TM roztoku trisamylborohydridu lithného (5 ml, 5 mmol) byl při teplotě -78 °C pod atmosférou argonu přidán roztok pregna-4,20-dien-3-onu (1,1 g, 3,7 mmol) v suchém THF (14 ml) za stálého míchání a směs byla ponechána ohřát se na laboratorní teplotu. Po třech hodinách byla směs ochlazena na -78 °C a postupně byly přidány následující reagenty: voda (2 ml), etanol (óml), 12% vodný roztok KOH (10 ml) a 3% peroxid vodíku (50 ml). Směs byla za stálého míchání ponechána ohřát se na laboratorní teplotu. Po dvou hodinách byl přidán etylacetát (200 ml) a míchání pokračovalo. Organická vrstva byla oddělena a promyta nasyceným roztokem NaHSO₃, nasyceným roztokem NaHCO, a nasyceným roztokem NaCI, vysušena Na₂SO₄ a odpařena ve vakuu za výtěžku 2,1 g surového materiálu. Ten by! puntíkován flash chromatografií na 210 g silikagelu (velikost ok 230 až 400), eluován směsí etylacetát/CH₂CI₂ (5:95 až 7:93) a byly odebrány tři frakce. Frakce 1 (0,8 g) obsahovala znečištěný 3a-alkohol. Frakce 2 (0,1 g) byla směsí 3a- a 3fi-alkoholů. Frakce 3 (0,25 g) byl čistý 3p-alkohol (23%). Frakce 1 byla opět přečištěna flash chromatografií na 80 g silikagelu (velikost ok 230 až 400), eluována směsí etylacetát/hexan (10:90 až 15:85) za poskytnutí 0,15 g čistého 3a-alkoholu (14%).

Příklad 2: Pregna-3,5,20-trien-3~yl-metyléter, sloučenina 2

Tento příklad se vztahuje ke schématu 1 a sloučeniny 2, 3, 4 a 5 byly připraveny následujícím způsobem.

Roztok pregna-4,20-dien-3-onu (sloučenina 1, 1 g, 3,35mmoi) v 2,2-dimetoxypropanu (5 ml, 41 mmol), dimetylformamidu (5 ml) a metanolu (0,2 ml) byl refluxován s monohydrátem p-toluensulfonové kyseliny (26,9 mg, 0,141 mmol) jako katalyzátorem po dobu 2 hodin. Po ochlazení směsi byl do reakční směsi přidán hydrogenuhličitan sodný (153,6 mg, 1,828 mmol) a reakční směs byla rozdělena mezí 75 ml směsi hexanů a 50 ml ledové vody. Organická táze byla dvakrát promyta 50 ml vody a jednou 50 mt solanky, a potom byla zfiltrována přes kolonu silikagelu 60 o rozměrech 17 mm výšky x 30 mm šířky. Produkt byl dále eluován 100 ml směsi hexanů. Zakoncentrování spojených eluátů a rekrystalizace ze směsi aceton/metanol poskytla lesklé, velmi slabě žluté deštičky (828,7 mg, 2,652 mmol, 79%) o teplotě tánílll až 114C.

Příklad 3: Pregna~],4,20-tnen-3-on

Pregna-4,20-dien-3-on (sloučenina 1, 1,19 g, 3,99 mmol) byl refluxován po dobu 24 hodin s 2,3-dichlor-5,6-dikyan-l, 4-benzochtnonem (DDQ, 2,72 g, 12,1 mmol) ve 40 ml benzenu pod atmosférou argonu. Ochlazená suspenze byla zředěna éterem a promyta dvakrát 100 mi 5% (hmotnostní %) hydroxidu sodného, dvakrát 100 ml vody a jednou 100 ml solanky. Éter (100 ml) byl pak přidán do výsledné emulze, která byla sušena nad síranem sodným, a poté filtrována přes kolonu síranu sodného (20 g). Po promytí zbytku dvakrát 50 ml éteru byly spojené filtráty za koncentrovány za sníženého tlaku, a poté chromatografovány ffash chromatografií (25% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu) za výtěžku slabě žlutých pevných krystalků (0,26 g, 0,88 mmol, 22%).

Příklad 4: Pregna~l. 4,20-trien-3-ol, sloučenina 4

Pregna-1,4,20-trien-3-on (sloučenina 3,.0,26·g, 0,88 mmol) v 25 ml bezvodého éteru byl redukován pod atmosférou argonu lithiumaluminiumhydridem (250,5 mg, 6,601 mmol) po dobu 2 hodin, a poté byla reakce ukončena přídavkem 2,5g Gluberovy soli. Výsledná suspenze byla míchána 70 minut, zfiltrována a dvakrát promyta 50 ml éteru. Po zakoncentrování spojených filtrátů za sníženého tlaku byl zbytek puntíkován za použití preparativní tenkovrstvé chromatografie TLC (35% etylacetátu/směs hexanů na aluminé s výtěžkem bílých jehliček (26,1 mg, 87,4 μίτιοΙ, 10%) o teplotě tání 98 až 128 “C.

Příklad 5: Pregna-4,20-dien-óp-ol-3-on, sloučenina 5 m-Chlorperbenzoová kyselina (MCPBA, 77,4%, 763,4 mg,

3,42 mmol) suspendovaná ve 30 mi 1, 2-dimetoxyetanu (DME), 6 ml vody a 2,4 mi 5% (hmotnostní %) hydroxidu sodného byly přidány k roztoku pregna-5, 5, 20-trien-3-ylmetyléteru (sloučenina 2, 400,3 mg, 1,281 mmol) ve 20 ml DME + 2 ml vody, a to během 85 minut za stálého míchání. Reakce probíhala 5 hodin, a reakční směs pak byla vlita do 50 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného. Směs byla extrahována třikrát 50 ml éteru a spojené organické extrakty byly promyty 50 g 5% (hmotnostní %) pentahydrátu thiosíranu sodného a třikrát 50 ml solanky, vysušeny nad síranem hořečnatým a zfiltrovány přes křemelinu. Po promytí zbytku 10 ml éteru byly spojené filtráty zakoncentrovány ve vakuu. Flash chromatografie (35% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu) a preparativní TLC (35% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu) poskytly těžko separovatelnou směs chemických individuí v podobě bílých krystalů (95,5 mg, 0,304 mmol, 24%).

Příklad 6:20,21 -Dimetylpregna-5,20-dien-3p-ol, sloučenina 6 Tento příklad se vztahuje ke schématu 2 a sloučeniny 6, 7, 8 a 9 byly připraveny následujícím způsobem.

Etyltrifenylfosfoniumbromid (25,99 g, 70 mmol) a ř-butoxid draselný (7,86 g, 70 mmol) s 80 ml bezvodého DMSO byly míchány pod atmosférou argonu na olejové lázni při 80 °C po dobu 1 hodiny, a potom byl přidán pregn-5-en-3p-ol-20-on (4,43 g, 14 mmol) v 80 ml horkého bezvodého DMSO. Červená suspenze byla míchána po dobu 1 hodiny, pak byla odstavena z lázně a vlita do 200 ml směsi led-solanka. Směs pak byla extrahována třikrát 100 ml éteru a spojené organické extrakty byly promyty lOOmi solanky, vysušeny nad síranem sodným a přefiltrovány přes křemelinu. Po promytí zbytku 50 ml éteru byly spojené filtráty zakoncentrovány za sníženého tlaku. Žlutý zbytek byl získán z 95% etanolu po zahřátí, krátkém povaření s 1 g aktivního uhlí a filtraci přes křemelinu. Po ochlazení a filtraci zbytku byla provedena dvojí rekrystalizace z etanolu za vzniku bílých krystalů (1,746 g, 5,314 mmol, 38%) o teplotě tání 140 až 145 °C.

Příklad 7:20,2 l-Dimetylpregna-4,20-dien-3,6-dion, sloučenina 7 Do roztoku 20, 21-dimetylpregna-5, 20-dien-3p~olu (sloučenina 6,

460,1 mg, 1,4 mmol) v 50 ml acetonu bylo přidáno Jonesovo činidlo (2,67 M, 2 ml, 5,3 mmol) a reakčni směs byla míchána 45 minut. Po ukončení reakce 2-propanolem (1 ml) byla směs vlita do 100 ml vody a třikrát extrahována 50 ml etylacetátu, Spojené organické extrakty byly promyty 50 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného + 50 ml solanky, vysušeny nad síranem hořečnatým a přefiltrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 25 ml etylacetátu a spojené filtráty byly zakoncentrovány za sníženého tlaku. Flash chromatografie (25% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu) a rekrystalizace zbytku z 95% etanolu poskytla žluté jehličky (138,2 mg, 0,4059 mmol, 29%) o teplotě tání! 72 až!78°C.

Příklad 8:20,21-Dimetylpregna-4,20-dien-3-on, sloučenina 8 20, 2 l-Dimefylpregna-5, 20-dien-3p-ol (sloučenina 6, 400,3 mg,

1,218 mmol) v 5 ml metylenchioridu byl oxidován pyridiniumchlorochromátem (525,4 mg, 2,437 mmol) po dobu 42 hodin. Ke směsi byl přidán éter (3,5 ml) a suspenze byla zfiltrována přes kolonu silikagelu o rozměrech 5 mm šířky x 60 mm výšky . Kolona byla dále eluována 3,5 ml éteru a spojené filtráty byly zakoncentrovány za sníženého flaku. Flash chromatografie pryskyřice s následnou rekrystalizaci z vodného etanolu poskytla žluté krystaly (43,6 mg, 0,134 mmol, 11%) s teplotou tání 157 až 165 “C.

Příklad 9: Pregna-4,20-dien-3,6-dion, sloučenina 9

Roztok pregna-5, 20-dien-3p-olu (300,5 mg, 1 mmol) v 35 mi

Jonesova činidla byl ochlazen ve vodní lázni s ledem a bylo přidáno 2,67 M Jonesovo činidlo (0,71 ml, 1,9 mmol). Po míchání trvajícím 1,5 hodiny bylo přidáno dalších 0,71 ml Jonesova činidla a reakce probíhala 45 min. Poté byl přidán 2-propanol (1 ml) a směs byla vlita do 100 ml vody. Směs pak byla extrahována dvakrát 50 ml etylacetátu a spojené organické extrakty byly promyty 50 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného + 50 ml vody + 50 ml solanky a přefiltrovány přes kolonu silikagelu 60 o rozměrech 21 mm šířky x 22 mm výšky. Kolona byla dále eluována 25 ml etylacetátu a spojené filtráty byly zakoncentrovány za sníženého tlaku. Rekrystalizace odparku z 95% etanolu poskytla světle žlutý prášek (104,6 mg, 0,3348 mmol, 33%) o teplotě tání 114 až 120 °C.

Příklad TO: Pregna-5,17,20-trien-3p-ol, sloučenina 10

Roztok 17a-etinylandrostendiolu (439,4 mg, 1,397 mmol) v 10 ml suchého THF byl přidán do suspenze lithiumatuminiumhydridu (106,5 mg, 2 mmol) a chloridu hlinitého (122,9 mg, 0,922 mmol) v 10 ml suchého THF pod atmosférou argonu. Po refluxu trvajícím 17 hodin byla reakce ukončena mícháním 2 hodiny s deka hydrátem síranu sodného (1 g, 3,1 mmol). Reakční směs byla zfiltrována a zbytek byl promyt třikrát 10 ml THF. Za koncentrování spojených filtrátů za sníženého flaku poskytlo 0,44 g bílé pevné látky puntíkované flash chromatografií (30% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu), a poté dvojí rekrystalizací z vodného etanolu za vzniku lesklých bílých krystalů (92 mg, 0,303 mmol, 22%) o teplotě tání 144 až 149 °C.

Příklad 11: 5a-chlor-óp, 19-epoxypregn-17-en-3p-ol, sloučenina 11 Tento příklad se vztahuje ke schématu 3 a sloučeniny 11, 12, 13 a

Etyltrifenylfosfoniumbromid (3,05 g, 8,22 mmol) a f-bufoxid draselný (0,92 g, 8,2 mmol) s 9,2 ml bezvodého DMSO byly míchány pod atmosférou argonu na olejové lázni při teplotě 76 až 86 °C podobu 1 hodiny, a potom byl přidán 5(x-chlor~6p,19-epoxy-andro~ stan-3p-ol-17-on (555,9 mg, 1,64 mmol) v 9,2 ml horkého bezvodého DMSO a směs byla míchána další 1 hodinu. Reakční směs pak byla vlita do 25 ml směsi led-solanka a byla extrahována třikrát 10 ml éteru. Spojené organické extrakty byly promyty solankou, vysušeny nad síranem hořečnatým a přefiltrovány přes křemelinu. Po prornytí zbytku dvakrát 5 ml éteru byly spojené filtráty zakoncentrovány ve vakuu. Žlutý olejovitý zbytek byl puntíkován flash chromatografií (60% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu) a byla získána bílá sirupovitá pevná látka (0,34 g, 0,97 mmol, 597o).

Příklad 12: 5ct-chlor-6p, 19-epoxypregn-17-en-3-on, sloučenina 12 Roztok 5a-chlor-6p, 19-epoxypregn-17-en-3p-olu (sloučenina 11,

0,34 g, 0,97 mmol) v 35 ml acetonu byl ochlazen v lázni led-acefon a bylo přidáno 0,47 ml 2,67 M Jonesova činidla. Po míchání trvajícím 40 minut byla reakce ukončena přídavkem 0,5 ml 2-propanolu. Byla přidána voda (15 ml), těkavé složky byly odpařeny za sníženého tlaku a směs byla extrahována třikrát 15 mi metyienchloridu. Spojené organické extrakty byly promyty 15 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného + 15 ml solanky, vysušeny nad síranem hořečnatým a přefiltrovány přes křemelinu, Pa promytí zbytku dvakrát 5 ml metyienchloridu byly spojené filtráty odpařeny ve vakuu. Zbytek byl purifikován flash chromatografií na silikagelu za použití 30% etylacetátu/směs hexanů coby eluční směsi a byla získána bílá krystalická látka (0,34 g, 0,97 mmol, kvantitativní výtěžek).

Příklad 13: όβ, 19-epoxypregna-4,17-dien-3-on, sloučenina 13 5a-chlor-6p, 19-epoxypregn-17-en-3-on (sloučenina 12, 0,34 g,

0,97 mmol) byl rozpuštěn za horka v 10 ml bezvodého metanolu, byl přidán octan draselný (0,6 g, 601 mmol) a 6,5 ml rozpouštědla bylo oddestilováno za laboratorního tlaku. Zbytek byl zakoncentrován za sníženého tlaku, rozpuštěn v 25 ml vody a extrahován třikrát 10 ml metyienchloridu. Spojené organické extrakty byly vysušeny nad síranem hořečnatým a přefiltrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt ml metylenchloridu α spojené filtráty byly zakoncentrovány za sníženého tlaku za získání bílé krystalické látky (290,0 mg, 0,9281 mmol, 96%) homogenní na TLC (60% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu; R_f0,61).

Příklad 14: Pregna-4,17-dien~19-ol-3-on, sloučenina 14 Do roztoku 6β, 19-epoxypregna-4,17~dien-3-onu (290 mg,

0,9281 mmol) v 10 ml ledové kyseliny octové byl přidán zinkový prach (l,12g. 17,1 mg-atom) aktivovaný mícháním 2 minuty s 10% kyselinou chlorovodíkovou s následným promytím vodou a acetonem. Suspenze byla intenzivně míchána po dobu 10 minut při teplotě 99 až 102 °C, a pak byla zfiltrována přes křemelinu. Zbytek byl čtyřikrát promyt 10 ml kyseliny octové a spojené filtráty byly zakoncentrovány ve vakuu. Zbytek pak byl rozpuštěn v 50 mi etylacetátu, promyt 50 ml vody + 50 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného + 50 ml solanky, vysušen nad síranem hořečnatým a přefiltrován přes křemelinu. Zbytek pak byl promyt 10 ml etylacetátu a spojené filtráty byly vysušeny ve vakuu. Zbytek byl rekrystalizován z etylacetátu za vzniku bílých krystalů (46,4 mg, 0,148 mmol, 16%) o teplotě tání 192 až 195 °C.

Příklad 15: Pregn~4-en-3p-ol-20-in, sloučenina 15 Pregn-4~en~3-on-20~in (200,1 mg, 0,675 mmol) a lithiumaluminiumtri(f-butoxy)hydrid (343,8 mg, 1,352 mmol) byl suspendován v 3,6 ml bezvodého éteru. Reakce probíhala 4 hodiny, a poté bylo přidáno 343,5 mg (1,351 mmol) hydridu a reakce probíhala dalších 16 hodin. Viz schéma 4. Po ukončení reakce dekahydrátem síranu sodného (3,41 g) byla reakční směs 15 minut míchána, a pak přefiltrována přes křemelinu. Zbytek byl pětkrát extrahován 10 ml éteru a spojené filtráty byly zakoncentrovány za sníženého tlaku. Flash chromatografie zbytku (25% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu) s následnou rekrystalizací z vodného etanolu poskytla bílý prášek (85 mg, 0,285 mmol, 42%) o teplotě tání 120,5 až 123,5 °C.

Příklad 16:20,2 1-dimetylpregna~4,20-dien-3,ó-dion, sloučenina 16

Jonesovo činidlo (2,67 M, 1,75 ml, 4,67 mmol) bylo přidáno do roztoku 20,21 -dimetylpregna-S, 20E-dien-3p-olu (400 mg,

1,281 mmol) v 45 ml acetonu a reakce byla míchána 30 minut. Poté byla směs vlita do 85 ml vody a extrahována třikrát 40 ml etylaeetátu. Spojené organické extrakty byly promyty 40 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného + 40 ml solanky, vysušeny nad síranem hořečnatým a přefiltrovány přes křemeiinu. Zbytek byl promyt 10 ml etylaeetátu a spojené filtráty byly zakoncentrovány za sníženého tlaku. Flash chromatografie (20% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu) zbytku s následnou rekrystalizací z vodného etanolu poskytla světle žluté jehličky (119,1 mg, 0,3497 mmol, 29%) o teplotě tání 171 až 173°C. TLC (20% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu) ukázala hlavní složku s R_f 0,17 a minoritní kontaminaci s R_f 0,24.

Příklad 17:20-Metylpregna-4,20-dien-3,6-dion, sloučenina 17

Jonesovo činidlo (2,67 M, 1,83 ml, 4,89 mmol) bylo přidáno do roztoku 20-metylpregna-5,20-dien-3p-olu (400 mg, 1,272 mmol) v 45 ml acetonu a reakce byla míchána 20 minut. Po ukončení reakce

2-propanolem (0,91 ml) byla směs vlita do 85 ml vody a extrahována třikrát 40 ml etylaeetátu. Spojené organické extrakty byly promyty 40 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného + 40 ml solanky, vysušeny nad síranem hořečnatým a přefiltrovány přes křemeiinu.

Zbytek byl promyt 25 ml etylacetátu a spojené filtráty byly za koncentrovány za sníženého tlaku. Rekrystalizace pevného zbytku z vodného etanolu poskytla žluté krystaly (235 mg, 0,7298 mmol, 57%) o teplotě tání 148 až 150 °C. TLC (20% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu) ukázala hlavní produkt s R_f 0,24 a minoritní nečistoty $ R_f na startu.

Příklad 18: Pregna-4, 16-dien-3,6~dion, sloučenina 18 Jonesovo činidlo (2,67 M, 0,23 ml, 0,61 mmol) bylo přidáno do roztoku pregna-5,16-dien-3p-olu (45,5 mg, 0,151 mmol) v 5 ml acetonu a reakce byla míchána 20 minut. Po ukončení reakce

2-propanolem (0,11 ml) bylo přidáno 10 ml vody a směs byla extrahována třikrát 5 ml etylacetátu. Spojené organické extrakty byly promyty 5 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného + 5 ml solanky, vysušeny nad síranem hořečnatým a přefiltrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 5 ml etylacetátu a spojené filtráty byly zakoncentrovány za sníženého tlaku. Preparativní TLC (25% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu) zbytku poskytla světle žlutou pevnou látku (10,6 mg, 33,9 mmol, 22%) homogenní podle TLC (R_f 0,41, 25% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu; výchozí materiál s R, 0,30).

Příklad 19: Pregna-4,17,20-trien-3, ó-dion, sloučenina 19 Jonesovo činidlo (2,67 M, 1,03 ml, 2,75 mmol) bylo přidáno do roztoku pregna-5,17,20-trien-3p-olu (214,5 mg, 0,7187 mmol) v 25 ml acetonu a reakce byla míchána 20 minut. Po ukončení reakce 2-propanolem (0,52 ml) byla směs vlita do 50 ml vody a extrahována třikrát 25 ml etylacetátu. Spojené organické extrakty byly promyty ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného + 25 ml solanky.

vysušeny nad síranem hořečnatým a přefiltrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml etylacetátu a spojené filtráty byly za koncentrovány za sníženého tlaku. Rekrystalizace s průvodním působením aktivního uhlí z vodného etanolu poskytla světle žluté jehličky (67,7 mg, 0,218 mmol, 30%) o teplotě tání 140 až 143 C. TLC (25% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu) ukázala produkt s R_t 0,43 a minoritní nečistoty s R, 0,86,0,17,0,08 a 0,00 (pregna-5, 17-dien-3p-ol R_f0,32).

Přiklad 20:21-Metylen -20(R)-metyipregn-4-en-3-on, sloučenina 20 Izopropyloxíd hlinitý (0,39 g, 1,9 mmol) v 3,6 ml horkého toluenu byl přidán k roztoku 21-metylen -20(R)-metylpregn-5-en-3p-olu (208,2 mg, 0,6337 mmol) v cyklohexanonu (3,6 mi, 35 mmol) a 18 ml toluenu a směs byla refluxována bez přístupu vlhkosti po dobu 2 hodin. Po ochlazení v ledu bylo přidáno 0,92 ml vody a 2,2 ml 3,6 N kyseliny sírové a směs byla 1 minutu třepána. Pak byla přidána další voda (4,6 ml), směs byla třepána 5 minut a byla oddělena vodná fáze. Těkavé složky byly odstraněny azeotropickou destilací s vadní parou a výsledná vodná suspenze byla extrahována třikrát 5 ml metylenchloridu. Spojené organické extrakty byly přefiltrovány přes malou kolonu se síranem sodným na křeme lí ne , všechny byly obsaženy v Pasteurově pipetě. Zbytek byl promyt 5 ml metylenchloridu a spojené filtráty byly zakoncentrovány za sníženého tlaku. Rekrystalizace reziduálního filmu poskytla bílé jehličky (152,7 mg, 0,4677 mmol, 74%) o teplotě tání 138 až 139 “C. TLC (25% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu) ukázala hlavní produkt s R_f 0,54 se stopovým znečištěním s R_f 0,71 (výchozí materiál měl R_f 0,36).

Příklad 21:21-Metylen -20(R)-metylpregn~4-en-3p-ol, sloučenina 21 Suspenze 21-metylen -20(R)~metylpregn-4-en-3-onu (sloučenina 5,

100 mg, 0,3063 mmol) a tri-f-butoxyaluminohydridu Hthného (319,4 mg, 1,256 mmol) v 5 ml bezvodého THF byla míchána pod atmosférou argonu po dobu 6 hodin, po které byla přidána voda (48 μΙ), 15% hm. hydroxidu sodného (48 μΙ) a voda (143 μΙ). Směs byla přefiltrována přes křemelinu a zbytek byl extrahován čtyřikrát 5 ml-alikvoty THF. Zakoncentrování spojených filtrátů za sníženého tlaku a dvojnásobná rekrystalizace z vodného etanoiu poskytla bílé destičky (42,6 mg, 0,13 mmol, 42%) o teplotě tání 121 až 123 °C. TLC (25% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu) ukázala hlavní produkt s R_f 0,38 a minoritní produkt s R_f 0,43 (výchozí materiál měl R_f 0,50).

Příklad 22: 21-Metylen -20(R)-metylpregn-4-en-3,6-dion, sloučenina 22

Jonesovo činidlo (2,67 M, 0,68 ml, 1,8 mmol) bylo přidáno do roztoku 21 -metylen -20(R)-metylpregn-5-en-3p-olu (149,8 mg, 0,456 mmol) v 15 ml acetonu a reakce byla míchána 20 minut. Po ukončení reakce 2-propanalem (0,34 ml) byla směs vlita do 30 ml vody a extrahována třikrát 15 ml etylacetátu. Spojené organické extrakty byly promyty 15 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného + 15 ml solanky, vysušeny nad síranem hořečnatým a přefiltrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml etylacetátu a spojené filtráty byly zakoncentrovány za sníženého tlaku. Preparativní TLC zbytku 25% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu GF, 1000 μ) poskytla žlutou krystalickou látku (49,7 mg, 0,146 mmol, 32%) homogenní na TLC (25% etylacetátu/směs hexanů; R_f 0,47; výchozí materiál měl R_f 0,35).

Příklad 23: Pregn-4-en-3p-ol-20-in, sloučenina 23 Tri-f-butoxyaluminohydrid lithný (343,8 mg, 1,352 mmol) byl přidán k pregn-4-en-3-on-20-inu (200,1 mg, 0,6750 mmol) suspendovanému v 3,6 ml bezvodého éteru a směs byla míchána po dobu 4 hodin. Další hydrid (343,5 mg, 1,351 mmol) byl pak přidán a reakce byla míchána dalších 16 hodin. Pak byla přidána Glauberova sůl (3,41 g) a suspenze byla protřepávána 15 min. Směs byla zfiltrována přes křemelinu a zbytek byl extrahován pětkrát 10 ml éteru. Zakoncentrování spojených filtrátů za sníženého tlaku s následnou flash chromatografií (25% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu) a rekrystalizací z vodného etanolu poskytlo bílý prášek (85 mg, 0,285mmol, 42%) o teplotě tání 120,5 až 123,5 °C. TLC (25% efylacetátu/směs hexanů na silikagelu) ukázala hlavní produkt s R_t 0,23 kontaminovaný stopami patrně výchozího materiálu (R_f 0,29).

Příklad 24: Pregn-4, ló~dien-6p-ol~3-on~20-in, sloučenina 24

3-Chlorperbenzoová kyselina (290 mg, 1,68 mmol) v 9,4 ml

1,2-dimetoxyetanu + 3,6 ml vody bylo přidáno do suspenze pregna-3, 5, ló-trien-20-in-3ylmetyléteru (471 mg, 1,527 mmol) v 1,2-dimetoxyetanu (9,4 ml) a reakce byla míchána 30 minut. Směs pak byla vlita do 50 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného a extrahována třikrát 50 ml etylacetátu. Spojené organické extrakty byly promyty 50 g 5% (hm.) pentahydrátem thiosíranu sodného + třemi 50 ml aiikvóty solanky, vysušeny nad síranem hořečnatým a zfiltrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 25 ml etylacetátu a spojené filtráty byly zakoncentrovány za sníženého tlaku. Flash chromatografie (50% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu) zbytku s následnou rekrystalizaci z vodného etanolu poskytla světle žlutou pevnou látku (145,9 mg, 0,47 mmol, 31%) o teplotě tání větší než300 °C.

Příklad 25: Chola-5,16,20(22)-trien-3|3-oL sloučenina 25 Suspenze propyltrifenylfosfoniumbromidu (sloučenina 12, 13g,

31,48 mmol) a f-butyloxidu draselného (3,54 g, 31,5 mmol) v bezvodém DMSO (35 ml) pod atmosférou argonu byla umístěna do olejové lázně (o teplotě 72 až 87 ’C) a míchána 1 hodinu. Do směsi byl přidán pregna-5,16-dien-3p-ol-20~on (sloučenina 1,9807 g, 6,298 mmol) v 35 ml horkého bezvodého DMSO a reakce byla míchána 90 min. Směs pak byla vlita do 90 ml směsi led-solanka a extrahována třikrát 45 ml éteru. Spojené organické extrakty byly promyty 45 ml solanky, vysušeny nad síranem sodným a přefiltrovány. Zbytek byl promyt 10 mi éteru a spojené filtráty byly zakoncentrovány za sníženého tlaku. Flash chromatografie (20% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu) výsledného oleje poskytla jantarově žlutou pryskyřici (103,6 mg, 0,3042 mmol, 4,8%).

Příklad 26: Chola-4,20(22)E-dien-4,6-dion, sloučenina 26 Jonesovo činidlo (2,67 M. 1,26 ml, 3,36mmol) bylo přidáno do roztoku chola-5, 20(22)E-dien-3p-olu (300 mg, 0,8758 mmol) v 30 ml acetonu a reakce byla míchána 20 minut. Po ukončení reakce 2-propanolem (0,63 ml) byla směs vlita do 60 ml vody a extrahována třikrát 30 ml etylacetátu. Spojené organické extrakty byly promyty 30 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného + 30 ml solanky, vysušeny nad síranem hořečnatým a přefiltrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml etylacetátu a spojené filtráty byly zakoncentrovány za sníženého tlaku. Rekrystalizace z vodného etanolu poskytla žlutou pevnou látku (139,3 mg, 0,3929 mmol, 45%) o teplotě tání 109 až 116 °C. TLC (25% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu) ukázala hlavní složku (s R_f 0,17) s nečistotami o R_f 0,24, OJ a 0,08 (chola-4,20(22)E-dien~3-on měl R_f 0,49).

Příklad 27: Chola-4,20(22)E-dien-3-on, sloučenina 27 Izopropyloxid hlinitý (2,82 g, 13,8 mmol) v 26 ml horkého toluenu byl přidán k roztoku chola-5,20(22)E-dien~3p-olu (1,5777 g, 4,605 mmol) v cyklohexanonu (26 ml, 0,25 mmol) a 130 ml toluenu a směs byla refluxována bez přístupu vlhkosti po dobu 4 hodin. Po ochlazení bylo přidáno 6,7 ml vody a 16 ml 3,6 N kyseliny sírové a směs byla 1 minutu třepána. Pak byla přidána další voda (32 ml), směs byla třepána 5 minut a byla oddělena vodná fáze. Těkavé složky byly odstraněny azeotropickou destilací s vodní parou a výsledná vodná suspenze byla extrahována třikrát 20 ml metyienchloridu. Spojené organické extrakty byly přefiltrovány přes malou kolonu se síranem sodným na křemelině. Zbytek byl promyt 10 ml metyienchloridu a spojené filtráty byly zakoncentrovány za sníženého tlaku. Rekrystalizace z vodného etanolu s průvodním působením aktivního uhlí poskytla světle žluté krystaly (1,3317 g, 3,9104 mmol, 85%) oteplotě tání 133 až 135 0. TEC (25% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu) ukázala, že produkt byl homogenní (R_f 0,49; výchozí materiál měl R_í 0,31).

Příklad 28: Chola-4,20(22)E-dien-3ft-ol, sloučenina 28 Suspenze chola-4,20(22)E-dien-3-onu (sloučenina 3, 400 mg,

1,175 mmol) a tri-ř-butoxyaluminohydridu lithného (1,225 g, 4,8158 mmol) v 15 ml bezvodého éteru byla míchána po dobu 8 hodin. Pak byla přidána Glauberova sůl (6,07 g) a směs byla míchána 5 min.

Směs byla zfiltrována pres křemelinu a zbytek byl extrahován pětkrát 15 ml éteru. Spojené filtráty byly zakoncentrovány za sníženého tlaku. Preparativní TLC (5% etylacetátu/metylenchlorid na silikagelu, 1000 μ) zbytku poskytla žlutou pevnou látku (49,9 mg, 0,146 mmol, 12%) homogenní podle TLC (5% etylacetátu/metylen- chlorid na silikagelu, R_f 0,34 pregna-5,20-dien-3(l-ol měl R_t 0,26).

Příklad 29: Chola-3,5,20(22)E-trien-3-yl-metyléter, sloučenina 29 Směs chola-4,20(22)E-dien-3-onu (808,6 mg, 2,374 mmol),

2,2-dimetoxypropanu (3,1 ml, 25 mmol), dimetylformamidu (3,1 ml), metanolu (0,13 ml) a monohydrátu p-toluensulfonové kyseliny (28 mg, 0,147 mmol) byla refluxována 4 hodiny bez přístupu vlhkosti. Po ochlazení byl přidán hydrogenuhlíčitan sodný (0,17 g) a směs byla rozdělena mezi 30 ml vody a 50ml éteru. Organická vrstva byla promyta 30 ml solanky, vysušena nad síranem hořečnatým a zfiltrována přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml éteru a spojené filtráty byly zakoncentrovány za sníženého tlaku. Rekrystalizace výsledného odparku z acetonu poskytla světle žlutou pevnou látku (435,8 mg, 1,28 mmol, 54%) o teplotě tání 94 až 96 °C. TLC (10%etylacetátu/směs hexanů na silikagelu) ukázala produkt při R_f 0,62 se stopou výchozího materiálu (R_f 0,14),

Příklad 30: Chola-4,20(22)E-dien-6p-ol-3-on, sloučenina 30 Kyselina 3-chlorperbenzoová (183 mg, 1,06 mmol) v 5,9 ml

1,2-dimetoxyetanu + 2,3 ml vody bylo přidáno k chola-3, 5, 20(22)E-trien-3-yl-metyléteru v 5,9 ml 1,2-dimetoxyetanu během 2,5 minuty. Po míchání reakční směsi dalších 0,5 hodiny byla směs vlita do 30 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného a extrahována třikrát 30 ml etylacetátu. Spojené organické extrakty byly promyty 30 g 5% (hm.) pentahydrátu thiosíranu sodného + třikrát 30 ml solanky, vysušeny nad síranem hořečnatým a zfiltrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml etylacetátu a spojené filtráty byly zakoncentrovány za sníženého tlaku. Flash chromatografie (60% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu) výsledné pevné látky a následná preparativní TLC (50% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu, 1000 μ) poskytla bílou krystalickou látku (114,3 mg, 0,3206 mmol, 33%) sestávající ze dvou složek podle TLC (50% etylacetátu/směs hexanů na silikagelu; hlavní složka měla R_f 0,48, minoritní složka měla R_f 0,41; chola-4, 20(22)E-dien-3-on měl R_f 0,74).

Příklad 31: Měření autonomních odpovědí na stimulaci VNO Různé autonomní parametry byly monitorovány jako A1-P3 pregna-4, ló-dien-3-on

A2-P3 pregna-5,1ó-dien-3p-ol

A8-P1 3-metoxy-pregna-3,5,20-trieny

A6-P1 pregna-4,20-dien-3,6-dion

20,21 -dimetytpregna-5,20~άιθη-3β-οΙ 20,21-dimetylpregna-5,20-dien-3-on

A14-P2 6β, 19-epoxypregna-4,17-dien-3-on

A7-P2 19-hydroxy-pregna-4,17(20)-dien-3-on

A13-P1 pregna-4,20-dien-6p-ol-3-on

A11 -P1 pregna-1,4,20-trien-3-on

A1 -P1 pregna-4,20-dien-3-on

A2-P1 pregna-5,20-dien-3p-ol

A4-P1 pregna-4,20-3a-ol

A3-P i pregna-4,20-3β-οΙ

ΑΊ-Ρ4 pregn-4~en-3-on A2-P4 preg-5-en-3p-ol

Tyto látky byly administrovány 24 samičím a 24 samčím jedincům za použití procedury popsané v příkladu 32. Jako kontrola byl také administrován propylenglykol. Ve srovnání s propyienglykoiem jako kontrolou testované sloučeniny indukovaly významné změny v integrovaném receptorovém potenciálu ve VNO, galvanické odpovědi kůže (GSR), teplotě kůže (ST), procentech alfa kortikální aktivity měřených elektroencefalogramem (EEG), eiektrokardiogramem (EKG) a dechovou frekvencí (RF). Výsledky jsou uvedeny na obrázcích 2 až 58. Další testy byly prováděny na dalších pregnanových derivátech, jejichž výsledky jsou uvedeny na obrázcích 59 až 84. Výsledky testů cholanových derivátů jsou uvedeny na obrázcích 85 až 96.

Příklad 32: Elektrofyziologické studie

Následující elektrofyziologické studie byly prováděny na klinicky zdravých lidských dobrovolnících obého pohlaví, jejichž věk se pohyboval od 20 do 45 let. Nebyla použita žádná anestetika a byly vyloučeny těhotné ženy.

Stimulace a zapisovací zažřízení sestávaly z multifunkční miniproby popsané jinde (viz L. Monfi-Bloch a B.L. Grosser (1991) Účinek předpokládaných feromonů na elektrickou aktivitu lidského vomeronazálního orgánu a čichového epiteíía, J. Steroid Biochem. Molec. Biol.: 39, 573-582). Zapisovací elektroda je 0,3 mm stříbrná kulička připevněná na malý (0,1 mm) stříbrný drátek izolovaný Teflonem⁰. Povrch elektrody je nejprve podroben produkci mezivrstvy chloridu stříbrného, α poté je pokryt želatinou. Je umístěna do malého kalibračního Teflonového⁰ katétru (průměr 5 mm), takže špička elektrody vyčnívá asi 2 mm. Teflonový⁰ katétr je TO cm dlouhý a zahrnuje koncová prodloužení pro multikanálový doručovací systém, který doručuje kontinuální proud vzduchu nesoucí jednotlivé puizy chemosenzorického stimulu. Proud vzduchu proudí do malé komůrky a probublává skrz roztok obsahující bud vomeroferin nebo olfaktant v rozpouštědlu nebo samotné rozpouštědlo. Solenoid je použit k rychlému přesměrování proudu vzduchu z komůrky do směru, který kříží komůrku. To vytváří nespojité pulzy stimulans v proudu vzduchu. Druhá, vnější Teflonová⁰ nádobka o průměru 2 mm uzavírá katětrovou elektrodu a její prostřední konec je napojen na aspirátor, který poskytuje kontinuální sání 3 ml/sec. Toto koncentrické zařízení vnější sací nádobky dovoluje emitovanému chemosenzorickému stimulu lokalizovat se v ploše zvané “minipole (přibližně o průměru 1 mm) a vyloučí se tak difúze substancí buď do plochy vně zamýšleného místa stimulace nebo dovnitř dýchacího systému. Celá stimulace a zapisovací zařízení lze umístit buď na neurosenzorÍcké epitellum ve VNO nebo na povrch čichového nebo dýchacího epitelia.

Elektro-vomeronazogram (EVG): Záznamy jsou prováděny v tiché místnosti, kdy pacient leží na zádech; multifunkční miniproba je nejprve stabilizována v nosní dutině a použití nazálního refraktoru umístěného ve vestibulárním ústrojí. Referenční a měřící elektroda sestávají ze stříbrných disků (8 mm) a obě jsou umístěny na glabelu.

Vstup do VNO nebo vomeronazální jamky je identifikován prvním rozšířením nosního otvoru a vestibula. Poté je použita binokulární lupa s šestinásobným zvětšením s halogenovým osvětlením k zavedení špičky Teflonového⁰ katétru a zapisovacího elektrodového zařízení do VNO, kde se otevře a stabilizuje přibližně v hloubce 1 mm od vomeronazální části. Optimální umístění zapisovací elektrody je signalizováno po testu adekvátní depolarizace v odpovědi na testovanou látku.

Elektrické signály za zapisovací elektrody jsou vedeny do DC amplifikátoru, pak jsou digitalizovány, počítačově monitorovány a uloženy. Měří se amplituda signálu pík po píku a integruje se plocha pod depolarizační vlnou, zatímco probíhá komtinuální monitorování signálu naa obrazovce počítače a na digitálním osciloskopu. Integorvaný EVO je uveden na obrázcích Ί a 2 pro sloučeniny ΑΊ-ΡΊ, A2-PL A4-P1, A3-P1, A4-P4, A2-P4 (podle tabulky). Artefakty produkované při pohybech dýchání jsou vyrušeny tím, že se pacient trénuje, aby dýchal ústy s velofaryngeálním uzávěrem. Vzorky vomeroferinu v koncentraci 25 až 800 fmolů jsou doručovány v kontinuálním proudu vzduchu po dobu od 300 milisekund do jedné sekundy. Každou sérii krátkých testovacích pulzů obvykle oddělují intervaly od 3 do 5 minut . Všechny složky vedení provádějícího testovací stimul jsou vyrobeny z Teflonu⁰, skla nebo nerez ocelí a před každým použitím jsou opatrně čištěny a sterilizovány. Aktivita byla zaznamenávána za použití standardních encefalografických (EEO) elektrod umístěných v pozicích Cz-Al a Tz-Al podle mezinárodního 10120 systému; měřicí elektroda byla umístěna na soscovitý výběžek spánkové kosti. Teplota kůže (ST) byla zaznamenávána malou (1 mm) termistorovou probu umístěnou v pravém ušním lalůčku. Dechová frekvence (RF) byla měřena nastavitelným deformačním měřidlem umístěným podél nižšího toraxu. Všechny elektrické signály byly DC amplifikovány, digitalizovány (MP-100, Biopac systémy) a kontinuálně monitorovány za použití počítače.

Statistická analýza: EVG, změny v profilu píků a frekvenční změny dalších parametrů byly měřeny a statisticky analyzovány. Významnost výsledků byla určována buď použitím párovaných t-testú nebo analýzy rozptylu (ANOVA).

Odezva na působení vomeroferinů: Studie byly zpracovány tak, aby bylo možno určit odezvu centrální nervové soustavy (CNS) v odpovědi na stimulaci vomeroferiny VNO. Sexuálně dimorfní lokální odpovědi indukované vomeroferiny představovaly autonomní odpověď mužských a ženských pacientů.

Kortikální aktivita byla u mužů a žen během aplikace vzdušných pulzů (300 ms až 1 s) obsahujících 200 fmol vomeroferinů do VNO zaznamenávána z Cz a Tz. Existuje také předběžný důkaz, že EVO není asociováno se zakončeními trojklanného nociceptoru, protože aplikace lokálního anestetika (2% lidokainu) do respíračního epitelia nosní přepážky ani neblokuje ani neomezuje EVO (L. Monti-Bloch a B.L. Orosser (1991) Účinek předpokládaných feromonů na elektrickou aktivitu lidského vomeronazálního orgánu a čichového epitelia, J. Steroid Biochem. Molec. Bíól.: 39, 573-582), a také pacienti nehlásili pocit bolesti jako následek jakýchkoliv stimulačních procedur.

Claims (33)

1. Farmaceutický prostředek vhodný k nazální administraci jedinci, vyznačující se tím, že zahrnuje steroid a farmaceuticky přijatelný nosič, přičemž steroid má obecný vzorec kde Ρ, je vybráno ze skupiny sestávající z οχο-, a-(p-)hydroxy-, a-(p-)acetoxy-, a-(p-)propionoxy-, a-(p-)metoxy-, α-(β-) nižší acyloxy-.

α-(β-) nižší alkyloxy a a-(p-)benzoyloxyskupiny; P₂ je vybráno ze skupiny sestávající z metylu, hydroxymetylu, acyloxymetylu, alkoxymetylu, nižšího alkylu, hydroxyalkylu, acyloxyalkylu a alkoxyafkylu; P₃ je vybráno ze skupiny sestávající z vodíku, 0x0-, halogen-, hydroxy-, aikoxy- a acyloxyskupiny; P₄ až P₁₂ může být každé, nezávisle, vodík, hafogen, metyl nebo halogen-, dihalogen- nebo perhalogenmetyl; P₁₃ je vodík, metyl, metylen, halogensubstituovaný metyl nebo halogensubstituovaný metylen, etyl, metyl-metylenyl, metyl-metinyj; a a, b, c, etyl enyl, acety Ieny l, ”d, e, TT, i a T θ k mohou také být trojné vazby; a je-li P₂ metyl a P₃ β-hydroxyskupina, P₂ a P₃ lze spojit za vzniku cyklického éteru.

2. Farmaceutický prostředek podle nároku 1,vyznačující se t í m, ž e b je dvojná vazba.

3. Farmaceutický prostředek podle nároku 2, vyznačující se t í m, ž e e nebo d je dvojná vazba.

4. Farmaceutický prostředek podle nároku 1,vyznačujíc íse t í m, ž e a a c jsou dvojné vazby,

5. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyzn á č ujíc í s e t í m, že h je volitelně dvojná vazba a i a j chybějí.

6. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, v y z n a č u j íc í se t í m, ž e *'j je dvojná vazba.

7. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, v y z n a č u j í c í s e t í m, ž e 7' je trojná vazba.

8. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, v y z n a č u j ící s e t í m, ž e P,₃ je vodík, metyl, metylen, halogensubstituovaný metyl nebo halogensubstituovaný metylen.

9. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, v y z n a č u j í c í se tím, že P₁₃ je etyl, etylenyl, acetylenyl, metyl-metylenyl nebo metyl-metinyl.

10. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9, vyznačujícíse tím, že steroid je rozpuštěn v nosiči.

11. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9, vyznačujícíse t í m, ž e je v kapalné formě.

12. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9, vyznačující se tím, že dále obsahuje farmaceuticky přijatelný základ masti.

13. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9, vyznačují cíše tím,že neobsahuje více než jeden ze steroidú.

14. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoliv z nároků l až 9, v y z n a č u j í c í s e t í m, ž e obsahuje více než jeden ze steroidú.

15. Způsob pozměnění hypothalamové funkce u jedince, v y z n a č u j í c í s e t í m, ž e zahrnuje:

poskytnutí steroidú vybraného ze skupiny sestávající z pregnanů, cholanů a jejich derivátů na povrchu nazální neuroepiteliální buňky u jedince, přičemž buňka je částí tkáně jiné nežolfaktorického epitelu; a administraci steroidú v nazální části jedince, takže se pregnanový derivát specificky váže na receptor a to vede k pozměnění hypothalamové funkce u jedince.

16. Způsob pozměnění autonomní funkce u jedince, vyznačují cíše t ím, ž e zahrnuje:

poskytnutí steroidú vybraného ze skupiny sestávající z pregnanů, cholanů a jejich derivátů pro chemoreceptor nazální neuroepiteliální buňky u jedince, přičemž buňka je částí tkáně jiné než olfaktorického epitelu; a administraci steroidú v nazální části jedince, takže se ligand specificky váže na receptor a to vede k pozměnění hypothalamové funkce u jedince,

17. Způsob podle nároku 15 nebo 16, vyzna čuj ící se tím, že neuroepiteliální buňka je umístěna ve vomeronazálním orgánu jedince.

18. Způsob podle nároku 17, vyznačující se tím,že pregnan má obecný vzorec :

kde P, je vybráno ze skupiny sestávající z oxo-, a-(p-)hydroxy-, a-(p-)acetoxy-, a-(p~)propionoxy-, a-(p-)metoxy-, α-(β-) nižší acyloxy-, α-(β-) nižší alkyloxy- a a-$-)benzoyloxyskupiny; P₂ je vybráno ze skupiny sestávající z metylu, hydroxymetylu, acyioxymetylu, alkoxymetylu, nižšího alkylu, hydroxyalkylu, acyloxyalkylu a alkoxyaíkylu; P₃ je vybráno ze skupiny sestávající z vodíku, oxo-, halogen-, hydroxy-, alkoxy- a acylóxyskupiny; P₄ až P₁₂ může být každé, nezávisle, vodík, halogen, metyl nebo halogen-, dihalogen- nebo perhaiogenmetyi; P₁₃ je vodík, metyl, metylen, halogensubstituovaný metyl nebo halogensubstituovaný metylen, etyl, etylenyl, metyl-metylenyl, metyl-metinyl; a a, b, c“, d, e, h, i acetylenyl, ”j a k jsou alternativními místy pro volitelné dvojné vazby a j nebo k mohou také být trojné vazby; a je-li P₂ metyl a P₃ β-hydroxyskupina, P₂ a P₃ lze spojit za vzniku cyklického éteru.

19. Způsob podle nároku 18, v y z n a č uj í c í se tím, že b je dvojná vazba.

20. Způsob podle nároku 19, v y z n a č u j í c í s e 11 m, ž e e nebo d je dvojná vazba.

21. Způsob podle nároku 18, vy zna č uj ící se tím, že a a “c jsou dvojné vazby.

22. Způsob podle nároku 18, vyzn a č ující se tím, že h je volitelně dvojná vazba a i a j chybějí.

23. Způsob podle nároku 18, vyznačující se tím, že j je dvojná vazba.

24. Způsob podle nároku 18, vyznačující se tím, že j je trojná vazba.

25. Způsob podle nároku 17, v y z n a č u j ící s e t í m, ž e množství administrovaného pregnanového derivátu je nejméně 100 pikogramů. ale ne více než 100 mikrogramů.

26. Způsob podle nároku25, vyznačující se tím,že množství administrovaného pregnanového derivátu je nejméně 1 nanogram, ale ne více než 10 mikrogramů.

27. Způsob podle nároku 26, v y z n a č u j í c í se t í m, ž e množství administrovaného pregnanového derivátu je nejméně 10 nanogramů, ale ne více než 1 mikrogram.

28. Způsob podle nároku 15 nebo 16, v y z n a č u j í c í s e t í m, ž e dále zahrnuje jeden krok přípravy farmaceutického prostředku pregnanového derivátu rozpuštěného ve farmaceuticky přijatelném nosiči.

29. Způsob podle nároku 28, vyznačující se tím, že

30. Způsob podle nároku 28, vyznačující se tím, že

31. Způsob podle nároku 28, vyznačující se tím, že administrace je prováděna pomocí aerosolu,

32. Způsob podle nároku 15 nebo 16, vyznačující se tím, že je administrován více než jeden steroid.

33. Sloučenina podle obecného vzorce

100 kde P₁ je vybráno ze skupiny sestávající z oxo-, a-(|k)hydroxy-, a-(p-)acetoxy-, a-(p-)propionoxy-, a-(p-)metoxy-, α-(β-) nižší acyloxy-, α-(β-) nižší alkyloxy- a a,-^-)benzoyloxyskupiny; P₂ je vybráno ze skupiny sestávající z metylu, hydroxy metylu, acyloxymefylu, alkoxymetylu, nižšího alkylu, hydroxyalkylu, acyloxyalkylu a alkoxyalkylu,· P₃ je vybráno ze skupiny sestávající z vodíku, oxo~, halogen-, hydroxy-, a l koxy- a acyloxyskupiny; P₄ až P₁₂ může být každé, nezávisle, vodík, halogen, metyl nebo halogen-, dihalogen- nebo perhalogenmetyl; P₁₃ je vodík, metyl, metylen, halogensubstituovaný metyl nebo halogensubstituovaný metylen, etyl, etylenyl, acetylenyl, metyl-metylenyl, metyl-metinyl; a a, “b, c, d, “e”, h, V, j a k jsou alternativními místy pro volitelné dvojné vazby a j nebo k mohou také být trojné vazby; a je-li P₂ metyl a P₃ β-hydroxyskupina, P₂ a P₃ lze spojit za vzniku cyklického éteru; s podmínkami, že

i) jestliže P^oxoskupina; je přítomno b; e, a, c, d chybějí; P₂=metyi; a P₃, P₄, P₇, P₉, P₁₀, P_n a P_l3 jsou vodíky; pak jestliže je h přítomno nebo chybí, musíbýt přítomno P₆ a nemůže být vodík;

ii) jestliže P_}=OH a je přítomno c; e, a, b, d chybějí; P₂=metyl; a P₃, P₄, P₇, P₉, P₁₀, P_1V P₁₂ a P₁₃ jsou vodíky; pak

a) jestliže je h přítomno, musí být přítomno P₆ a není to vodík;

b) jestliže h chybí a je přítomno P₆, P_Ď nemůže být vodík;

c) jestliže h chybí a je přítomno P₆, pak je přítomno i a j;

iii) jestliže Ρ^β-ΟΗ a je přítomno b; e, a, c, d chybějí; P₂=metyl; a P₃, P₄, P₇, P₉, P₁₀, P₁, a P₁₃jsou vodíky;

a) jestliže je h přítomno, musí být přítomno i a/nebo j; nebo P₆ není vodík;

b) jestliže je h přítomno, j nemůže být trojná vazba;

101 iv) jestliže Ρ^α-ΟΗ, je přítomno b; e, a, c, d chybějí; P₂=metyl; a P₃, P₄, P₇, P₉, P₁₀, P„ a P₁₃ jsou vodíky; pak

a) jestliže je h přítomno, i musí chybět a P₆ nemůže být vodík;

b) jestliže i a j chybějí, P₆ nemůže být vodík;

v) jestliže P^oxoskupina; a je přítomno b a d; e, a, c chybějí; P₂=metyl; a P₃, P₄, P₇, P₉, P _j0, P_n a P_I3 jsou vodíky; pak jestliže chybí h a je přítomno i, P₆ musí být přítomno a nemůže být vodík;

vi) jestliže P, a P₃ jsou oxoskupiny a je přítomno b; h, e, a, c, d chybějí; P₂=metyl; a P₄, P₅, P₇, P₈, P₉, P₁₀, P_n a P₁₃ jsou vodíky; pak

a) jestliže chybí P₆, j nemůže být dvojná vazba;

b) jestliže je P₆ vodík, i nebo j musí být přítomno;

vii) jestliže P^Ometyl, je přítomno a a c; a P₂=metyl; e, b, d, a h chybějí a P₃, P₄, P₇, P₉, P₁₀, P_n a P₁₃ jsou vodíky; pak

a) jestliže je P_ó vodík, musí být přítomno i nebo j;

b) jestliže P_ó chybí, i a j nemohou být dvojné vazby;

viii) jestliže P,=oxoskupina a a, b, c, d, e chybějí;

=meTV : o

P₃, P₄, P₇, P₉, P_l0, P_n, P-,2 a P₁₃ jsou vodíky; pak

a) jestliže h chybí a je přítomno j jako dvojná vazba; P₆ nemůže být vodík;

b) jestliže h, i a j chybějí, P₆ nemůže být vodík; a

c) jestliže je přítomno h, j nemůže být dvojná vazba;

ix) jestliže P^OH, chybějí a, b, c, d, e, h;

P₂=metyl;

P₃, P₄, P₇, P₈, P₉, P₁₀, P,, a P₁₃ jsou vodíky; pak

a) jes tliže je j dvojná vazba a chybí i; pak P₆ není vodík;

b) jestliže je i dvojná vazba o j chybí, pak P₆ není vodík;

c) i a j nemohou být dvojné vazby;

102

d) jestliže a i j chybějí, P₆ nemůže být vodík;

x) jestliže P =oxoskupina, je přítomno e a b; a chybí a, c, d;

P₂=metyl; a

P₃, P₄, P₇, P₉, P₁₀, P_n a P₁₃ jsou vodíky; pak

a) jestliže je přítomno h, j nemůže být trojná vazba;

b) jestliže chybí h a i je dvojná vazba, pak P₆ není vodík;

c) jestliže chybí h a i je dvojná vazba, pak P₆ není vodík;

d) jestliže chybí h a ani i ani j není dvojná vazba, pak P₆ není vodík;

xi) jestliže P^oxoskupina, P₃=OH, je přítomno b, chybí a, e, c, d, h, i, j, P_?=metyl a P_A, P₇, P₉, P_1o, P_q, a P₁₃ jsou vodíky; pak P₆ nemůže být vodík;

xii) jestliže P ~oxoskupina, b je přítomno, a, e, c, d, h, i chybějí, P₆ a P₂ jsou metyly a

P₃, ^P6> P/' ^P8' ^P9' Pw ^a P11 i^sou vodíky; pak

a) jestliže je j dvojná vazba, P₁₃ nemůže být etylenyl;

b) jestliže ani j ani k není dvojná nebo trojná vazba, pak P₁₃ nemůže být acetylenyl;

xiii) jestliže P1=OH, cje přítomno a a, b, e, d, h a i chybějí;

P_? a P₆ jsou metyly; a

P₃, P₄, P₇, Pg, P₉, P₁₀, P_T1 a P₁₂ jsou vodíky; pak

a) jestliže j je dvojná vazba, P₁₃ není etyl;

b) jestliže j chybí a k je dvojná vazba, P₁₃ není metyl-metylenyl;

c) jestliže j a k chybějí; P₁₃ není etyl; a

d) jestliže k je trojná vazba, P₁₃ nemůže být metyl-metinyl.