CZ456599A3 - Kompaktní replikony viru Epstein-barr - Google Patents
Kompaktní replikony viru Epstein-barr Download PDFInfo
- Publication number
- CZ456599A3 CZ456599A3 CZ19994565A CZ456599A CZ456599A3 CZ 456599 A3 CZ456599 A3 CZ 456599A3 CZ 19994565 A CZ19994565 A CZ 19994565A CZ 456599 A CZ456599 A CZ 456599A CZ 456599 A3 CZ456599 A3 CZ 456599A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- nucleic acid
- acid sequence
- sequence
- compact
- orip
- Prior art date
Links
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 title description 12
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims abstract description 22
- 230000010502 episomal replication Effects 0.000 claims abstract description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 16
- 108010031111 EBV-encoded nuclear antigen 1 Proteins 0.000 claims description 9
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 8
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 claims description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 3
- AEMBWNDIEFEPTH-UHFFFAOYSA-N n-tert-butyl-n-ethylnitrous amide Chemical group CCN(N=O)C(C)(C)C AEMBWNDIEFEPTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 claims 1
- 101150059079 EBNA1 gene Proteins 0.000 abstract 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 4
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 101710150114 Protein rep Proteins 0.000 description 1
- 101710152114 Replication protein Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Toto řešení v podstatě popisuje sekvence nukleových kyselin,
které podporují epizomální replikaci v savčích buňkách. Tyto
sekvence nukleových kyselin zahrnují za a) deletovanou
sekvenci OriP a za b) deletovanou sekvenci EBNA1
operativně napojenou na promotor.
Description
Oblast techniky
Epstein-barr virus (EB V) je lidský oparový virus s latentní fází, který je používaný v genové terapii vektorů.
Dosavadní stav techniky
Epstein-barr virus (EBV) je lidský oparový virus s latentní fází charakterizovaný stabilní epizomální propagací cirkulární formy virové DNA. Pro latentní replikaci fází jsou požadovány' dva přerušované prvky DNA, cis-actingový zdroj replikace OriP a Epstein-barr nukleární antigen 1 (EBNA 1), samotný virově kódovaný protein pro replikaci (Yates et al,. Proč, Nati. Acad. Sci. USA 81 : 3806-10. 1984: Yates et al.. Nátuře 313: 812-5. 1985. Většina EBV vektorů jsou velnu velké vektory jako 10 kb nebo více (bez inzertu), vzhledem k velké velikosti EBNA 1 a OriP segmentů. Velikost většiny existujících EBV EBNA 1 a OriP segmentů byla. interferována s rozvojem zlepšené exprese vektorů a tvorbou kompaktní genové exprese a stálostí kazet, které mohou být uložené v jiných vehikulech dodávajících geny jako jsou relrovirv nebo adenovirv.
Podstata vynálezu
Tento vynález v podstatě označuje sekvence nukleových kyselin které podporují epizomální replikaci v savčích buňkách. Tylo sekvence nukleových kyselin zahrnují za a) deletovanou sekvenci OriP a za b) deletovanou sevkenci EBNA 1 operativně napojenou na promotor a sekvence nukleových kyselin má délku alespoň menší než 3 kb výhodně menší než 2 kb a nejvýhodněji menší než 1.8
- 2 kb.
Ve výhodných provedeních sekvenci OriP zahrnuje přibližně zbytky 1-495 SEQ ID NO: 1, sevkence EBNA 1 zahrnuje přibližně zbytky 627-1718 SEQ ID NO: 1, a sekvence nukleových kyselin dále zahrnují sekvenci shodnou polyadenylaci (například přibližně sekvenci SEQ ID NO: 2) a promotorem je virový' promotor.
Ve spojených ohledech tento vynález uvádí vektory a buňky (například savci buňky a výhodněji lidské buňky), které zahrnují tyto sekvence nukleových kvselin.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázek 1 popisuje sekvenci zkrácený EBV OriP a kazetu EBNA 1.
Obrázek 2 popisuje sekvenci kompaktní syntetické dvousměrné polyadenylace, která může být použitá v konjukci s kompaktním EBV replikonem.
Příklad provedení vynálezu
Příklad 1
Po rozsáhlé deleci a mutagenezi byla zjištěna možnost vložit cis- a trans-actingové funkce nezbytné pro epizomální replikaci EBV do fragmentu o délce alespoň 2 kb. Ve zvláštním případě ukázkový fragment o délce 1748 párů bází, který reaguje jako kompaktní EBV replikou je ukázán na obrázku 1 (SEQ ID NO: 1). Tento fragment obsahuje všechny sekvence potřebné pro účinnou expresi proteinu EBNA-1 s výjimkou sekvence shodné polyadenylaci. Fragment je Bgl2 až BamHl segment, který obsahuje prvek OriP mezi zbytky 1 a 495. modifikovaný promotor z thymidin kinázového genu viru Elerplex simplex 1 mezi zbytky 496 až 616 a kódující sekvenci pro vypuštěný a modifikovaný EBNA 1 gen mezi zbytky 627 a 1718. Plasmidové vektory založené na této sekvenci replikují jako epizomy v jádru transtektovanýeh buněk nchlodavčíbo původu fYates et alk. 1985. viz výše).
Abv byla celkové minimalizována délka sekvence, fragment uvedeny' výše byl označen, aby mohl být vložen do proti směru exprese genu sekvence
- 3 • · « · » · · ·
I · · · • · · · · · • · • · ·« dvousměrné polyadenylace ve vhodném vektoru.
Příklad sekvence kompaktní syntetické dvousměrné polyadenylace je ukázán na obrázku 2 (SEQ ID NO: 2),
Průmyslové použití
Kompaktní replikony viru Epstein-barr (EBV) nalézají použití v genové terapii vektorů například ve vehikulech dodávajících geny jako jsou expresní vektory. Ostatní provedení jsou uvnitř nároků.
Claims (10)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Sekvence nukleové kyseliny která podporuje epizomální replikaci v savčí buňce, přičemž uvedená sekvence nukleové kyseliny obsahuje za a) sekvenci OriP a za b) sekvenci EBNA 1 operativně napojenou na promotor, sekvence nukleové kyseliny má délku menší než 3 kb .
- 2. Sekvence nukleové kyseliny podle nároku 1, kde uvedená sekvence nukleové kvselinv má délku menší než 2 kb .
- 3. Sekvence nukleové kyseliny podle nároku I, kde uvedená sekvence nukleové kyseliny má délku menší než 1,8 kb .
- 4. Sekvence nukleové kyseliny podle nároku 1, kde sekvence OriP obsahuje přibližně zbytky 1-495 SEQ ID NO: 1,
- 5. Sekvence nukleové kyseliny podle nároku 1, kde sevkence EBNA 1 obsahuje přibližně zbytky 627-1718 SEQ ID NO: 1.
- 6. Sekvence nukleové kyseliny podle nároku 1, kde uvedená sekvence nukleové kyseliny dále obsahují sekvenci shodnou polyadenylaci.
- 7. Sekvence nukleové kyseliny podle nároku 5, kde uvedená sekvence shodné polyadenyla.ee obsahuje přibližně sekvenci SEQ ID NO: 2.
- 8. Sekvence nukleové kyseliny podle nároku 1. kde uvedeným promotorem je virový promotor.
- 9. Vektor obsahující sekvenci nukleové kyseliny podle nároku 1. kde uvedený vek tor je schopný replikování jako episom v jádru transfektované buňky.
- 10. Buňka obsahující sekvenci nukleové kyseliny podle nároku 1.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ19994565A CZ456599A3 (cs) | 1998-04-14 | 1998-04-14 | Kompaktní replikony viru Epstein-barr |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ19994565A CZ456599A3 (cs) | 1998-04-14 | 1998-04-14 | Kompaktní replikony viru Epstein-barr |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ456599A3 true CZ456599A3 (cs) | 2000-06-14 |
Family
ID=5468201
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19994565A CZ456599A3 (cs) | 1998-04-14 | 1998-04-14 | Kompaktní replikony viru Epstein-barr |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ456599A3 (cs) |
-
1998
- 1998-04-14 CZ CZ19994565A patent/CZ456599A3/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Tanaka et al. | Construction of an excisable bacterial artificial chromosome containing a full-length infectious clone of herpes simplex virus type 1: viruses reconstituted from the clone exhibit wild-type properties in vitro and in vivo | |
| Smith et al. | A self-recombining bacterial artificial chromosome and its application for analysis of herpesvirus pathogenesis | |
| Summers et al. | Stable expression in mouse cells of nuclear neoantigen after transfer of a 3.4-megadalton cloned fragment of Epstein-Barr virus DNA. | |
| Lee et al. | BHRF1 of Epstein-Barr virus, which is homologous to human proto-oncogene bcl2, is not essential for transformation of B cells or for virus replication in vitro | |
| IL132463A0 (en) | Lentivirus - based gene transfer vectors | |
| EP0772690A1 (en) | Recombinant virus vectors | |
| Hirai et al. | Use of EBV-based vector/HVJ-liposome complex vector for targeted gene therapy of EBV-associated neoplasms | |
| Sclimenti et al. | Epstein-Barr virus vectors for gene expression and transfer | |
| CZ456599A3 (cs) | Kompaktní replikony viru Epstein-barr | |
| Cameron et al. | Biolistic-mediated interleukin 4 gene transfer prevents the onset of type 1 diabetes | |
| EP1032418B1 (en) | Compact epstein-barr virus replicons | |
| Vos | The simplicity of complex MACs | |
| Nilsson et al. | Viral and cellular factors influence the activity of the Epstein-Barr virus BCR2 and BWR1 promoters in cells of different phenotype | |
| McGregor et al. | Recent advances in herpesvirus genetics using bacterial artificial chromosomes | |
| CA2508204A1 (en) | Treatment of hsv-related pathologies using ssdna | |
| US5716845A (en) | Immortalized lymphocytes for production of viral-free proteins | |
| MXPA99011726A (es) | Replicones de virus de epstein-barr compactos | |
| Min et al. | Prolonged gene expression in primary porcine pancreatic cells using an Epstein–Barr virus-based episomal vector | |
| Sugden et al. | Transforming functions associated with Epstein-Barr virus | |
| HK1033430A (en) | Compact epstein-barr virus replicons | |
| Cooke | Mammalian artificial chromosomes as vectors: progress and prospects | |
| AU9137498A (en) | DNA virus vectors and methods for their preparation | |
| CA2154854C (en) | Immortalized lymphocytes for production of viral-free proteins | |
| Bartsch et al. | Transfection of human lymphocytes with cloned Epstein-Barr virus (EBV) DNA | |
| AU9137598A (en) | Method for helper virus-free packaging of a gene vector DNA |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic |