CZ48198A3 - Farmaceutický přípravek pro léčbu pacienta, trpícího astmatem, vyvolaným antigenem - Google Patents

Description

PV 481-98

Farmaceutický přípravek pro léčbu pacienta, trpícího astmatem, vyvolaným antigenem.

Oblast techniky

Vynález se týká farmaceutických přípravku k prevenci a i recidivě při léčbě symptomů a projevů astmatu, jakož i jejich použití.

Dosavadní stav technik?;

Tato aplikace zahrnuje materiál v ozřejmujícím dokumentu č. 377066, vyplněném v Úřadu pro patenty a ochranná známky 23#června 1995.

Vynález pojednává o prostředcích k prevenci s recidivě symptomů a projevů astmatu.

Chronické astma lze převážně považovat za zánětlivou chorobu se spojenou bronchospazmou. Stupen reaktivity s omezení bronchitidy v odpovědi na stimule je u astmatiků vyšší než u běžných individualit. Přetrvávající zánět je odpovědný za zvýšenou průduškovo.u reaktivitu nebo hypero-dezvu vzduchových cest Ivlukosální edém a ucpávání slozem mohou být přítomné též; plicní parenchyma je běžná. Blokování vzduchových cest se může směnit spontánně nebo pomocí terapie. Imunitní odezvy typu 1 (okamžité) mohou hrát důležitou úlohu ve vývoji astma u dětí a mnohých dospělých; avšak pokud se náběh nemoci vyskytne v dospělosti, tak je velmi těžké identifikovat alergické faktory. Vystavení se studenému vzduchu, tělesný pohyb a další přitěžující faktory mohou též vyvolat astma,

Nejběěnějšími příznaky astma jsou dusnost a svírání v hrudní koši, sípavost, dyspnoe a kašel jsou rovněž průvodními jevy. Pozorována je snížená funkce plic, projevující se spíše jako obstruktivní než jako 2

restriktvní nemoc dýchacích cest.Asymptomatické periody se často střídají s paroxysmem. ΐ

Jako nejčastější příčiny astma jsou pozorovány alergeny a tělesný pohyb. Obě formy jsou silné a přirozeně se vyskytující stimulující faktory; tělesný pohyb je potenciální faktor v denním životě každého astmatika, kdežto alergeny ovlivňují pouze některé osoby mající astma. Nicméně je stále více a více známo o vlivu antigenů.

Obecné cíle lékové terapie astma zahrnují prevenci bronchospazmu a dlouhodobou kontrolu průduškové hyperreaktivity. Protože není obvykle možné jak pro pacienta tak i pro lékaře předpovědět, kdy se bronchospazmus projeví, tak pacienti i s občasnými nebo i zcela sezónními záchvaty jsou podrobeny stálé terapii.

Beta agonisté jsou užitečnými bronchodilatátorovými činidly; stimulují beta2 adrenergické receptory, zvyšují vnitrobuněčný cAMp a mohou též inhibovat spouštění buněčných mediátorů. Další důležitá léčiva zahrnují theofyllin a příbuzný xanthin, které způsobují neznámými mechanismy bronchodilátaci; biskromom, kromolyn, které zabraňují spouštění mediátorových látek a blokují respirační neuoronové reakce a konečně kortikosteroidy, které primárně snižují zánět a edém. Léky působící cholinergicky mohou zmírnit bronchospazmu blokováním parasympatickém cholinergické impulsy na receptorové hladině. Antihistaminika občasně znemožňují nebo zastavují alergické astmatické episody, speciálně u dětí, ale mohou být proti astmatu účinné pouze částečně, protože histamin je pouze jeden z mnoha mediátorů.

Současné lékové prostředky používané při léčbě astmatu indukovaného alergií trpí řadou nedostatků. Obecně řečeno, konvenční prostředky mají relativně krátkou dobu účinku a mohou být částečně i zcela neefektivní, pokud jsou podávány po vyskytnutí antigenovém stimulu. Mimoto, kvůli vážným nepříznivým účinkům spojených s použitím Činidel · ·!#· · 3 jakými jsou beta2-adrenergičtí agonisté a kortikosteroidy, terapeutický bezpečností faktor takovýchto činidel je relativně omezený a pacienti, kteří je užívají, musí být pečlivě monitorováni.

Průdušková hyperreaktivita (nebo hypercitlivost dýchacích cest) je charakteristický znak astma a je úzce spojený s fundamentálním zánětem dýchacích cest. Zhoršení astmatu a zánětu dýchacích cest je spojené se vzrůstem průduškové hyperreaktivity, která může být indukovaná jednak antigenovými a jednak neantigenovými stimuly. Beta2-adrenergičtí agonisté jsou silnými činidly pro léčbu bronchospazmu, ale nemají žádný vliv na zánět dýchacích cest nebo průduškovou hyperreaktivitu. Ve skutečnosti může samotné chronické užití betai-adrenergických činidel tím, že způsobí sestupnou regulaci beta2-receptorů, zhoršit průduškovou hyperreaktivitu. V současnosti jsou kortikosteroidy jedinými účinnými dostupnými činidly, které zmenšují průduškovou hyperreaktivitu. Ačkoliv inhalované kortikosteroidy jsou relativně bezpečné v případě dospělých pacientů trpících astmatem, tak tato činidla jsou výrazně toxická v případě dětí projevující se v potlačování adrenalinu a zmenšené kostní hustoty a růstu. Proto hledání bezpečnějších a více účinnějších činidel, která zmenšují průduškovou hyperreaktivitu, pokračuje. V několika minulých letech bylo objeveno, že heparin podávaný vnitroprůduškově může být účinný inhibitor bronchospazmu a svíraní v průduškách a proto je ve svém důsledku hodnotný v prevenci astmatu (viz např. Ahmed et al., New Eng.J.Med.. 329: 90-95,1993; Ahmed, Resp.

Drug. Deliv., IV:55-63,1994). Dále bylo též objeveno, že hepariny o nízké molekulové váze, např. heparmy se středm molekulovou vánou 4000 až 5000 daltonů účinně zamezují svírání průdušek způsobené antigeny; tyto hepariny s malou molekulovou váhou též vykazují podstatně menší antikoagulantní aktivitu ve srovnání s komerčním heparinem, což je velmi -4- žádoucí vlastnost, pokud jsou tato činidla používána při léčbě astmatu (nspř. Ashkin a spol·, Am.Rev.Resp.Dis., 1993 Intl» Conf.Abstracts, str.A 660).

Zatím co roslíoné hepsriny se ukázaly být užitečnými jako ochranná činidla, pokud jsou podány před působením antigenu, bylo vsak zveřejněno, že jsou neúčinné, pokud se podávají po působení antigenu v modifikující odezvě na svírání průdušek a přecitlivělost dýchacích cest (Admed a spol·., J.Appl.

Physiol., 7o, 893-901 , 1994)#·

Podstata vynálezu Předmětem tohoto vynálezu jsou tedy farmaceutické přípravky pro léčbu astmatu, indukovaného antigeny, a prů-.duškové hyperreakti-vity, pokud se jedná o nedostatky, uveřejněné zde výše. Další možností je účinná prevence, jakož i zabránění recidivy, i když jsou tyto nové,látky podány po projevení se vlivu antigenu na pacienta. .

Jde tedy o vnitroprůduškove podávání farmaceutického přípravku, obsahujícího 0,05 až 1,0 mg heparinu o mimořádné nízké molekulární hmotnosti na každé kg hmotnosti těla se zřetelem. na celkovou hmotnost těla pacienta. Podávání takovýchto heparinů je možné na akutní bázi jako důsledek působení antigenu anebo na chronické bázi za účelem potlačení průduško-vé přecitlivělosti. .......... yr \ /-7h \ ·; '//k;./. ,··· \ a CÍ '> 0 £ f \ / \/ : v.

\ X

c^i ?.yvQ^AT^KAMC£LAR

y \ PARTNER! \ /áiij OG eraha 2, Hálkova\ / Česká republika N všeW^' tvoe^K kalenský \. /

Hepariny s ultranízkou molekulovou váhou použité v předkládaném vynálezu mají střední molekulové váhy menší než 3000 daltonů a mohou _ vykazovat nízkou úroveň antikoagulantní aktivity nebo v podstatě žádnou antikoagulantní aktivitu. Jsou též k dispozici nová farmaceutická složení pro inhalaci, a sice ve formě kapaliny nebo práškového rozprašovače či aerosolová složení obsahující vhodné koncentrace heparinů o ultranízké molekulové

Obr. 1 představuje sloupcový diagram, který znázorňuje vliv předběžné léčby pomocí inhalovaného heparinů o ultranízké molekulové ^vaz^^Y222) při měnících se dávkovačích hodnotách na akutní, antigenem indukované, svírání průdušek u alergických ovcí. Údaje jsou prezentovány jako antigenem indukovaná střední ± SE% změna v SRl, bez a s předběžnou léčbou pomocí CY222. SRl = specifická plicní rezistence + = významně rozdílná z antigenové kontroly (P < 0,05).

Obr. 2 představuje sloupcový diagram, který znázorňuje vliv předběžné léčby pomocí inhalovaného heparinů o ultranízké molekulové vaze (CY216) na akutní, antigenem indukované, svírání průdušek u alergických ovcí. Údaje jsou prezentovány jako antigenem indukovaná střední ± SE% změna v SRl» bez a s předběžnou léčbou pomocí CY216.

Obr. 3 představuje sloupcový diagram, který znázorňuje vliv předběžné léčby pomocí inhalovaného heparinů o molekulové váze středního stupně (Fragmin) na akutní, antigenem indukované, svírání průdušek u alergických ovcí. Údaje jsou prezentovány jako antigenem indukovaná střední ± SE% změna v SRl, bez a s léčbou pomocí Fragminu.

Obr. 4 představuje sloupcový diagram, který znázorňuje vliv předběžné léčby pomocí inhalovaného heparinů o ultranízké molekulové ^vaz£(cY222) na akutní, antigenem indukovanou, hypercitlivost dýchacích cest u alergických ovcí. Údaje jsou prezentovány jako vystavení se vlivu 6 antigenu ve formě střední ± SE PD4, jako procento základní hodnoty, bez a s předběžnou léčbou pomocí CY222. PD4 = kumulativní dávka karbacholu, zvyšující SRl až na 400 % nad základní hodnotou + = významně rozdílný z vzhledem k antigenu samotnému (P < 0,05)

Obr. 5 představuje sloupcový diagram, který znázorňuje vliv předběžné léčby pomocí inhalovaného heparinu o ultranízké molekulové /^tze^CY216) na akutní, antigenem indukovanou, hypercitlivost dýchacích cest u alergických ovcí. Údaje jsou prezentovány jako vystavení se vlivu antigenu ve formě střední ± SE PD4, jako procento základní hodnoty, bez a s předběžnou léčbou pomocí CY216.

Obr. 6 představuje sloupcový diagram, který znázorňuje vliv předběžné léčby pomocí inhalovaného heparinu o molekulové váze střední hodnoty (Fragmin) na akutní, antigenem indukovanou, hypercitlivost dýchacích cest u alergických ovcí. Údaje jsou prezentovány jako vystavení se vlivu antigenu ve formě střední ± SE PD4, jako procento základní hodnoty, bez a s předběžnou léčbou pomocí Fragminu.

Obr. 7 znázorňuje poměrné ochranné vlivy inhalovaných CY222, CY216 a Fragminu na antigenem indukovanou odezvu svírání průdušek (ABR) u alergických ovcí. Údaje jsou prezentovány jako vystavení se vlivu antigenu ve formě střední ±SE% ochrany antigenem indukované ABR. Silné horizontální sloupce představují ID50. + = významně rozdílný vzhledem k Fragminu (P < 0,05) * = významně rozdílný vzhledem kCY216 (P< 0,05)

Obr. 8 znázorňuje poměrné ochranné vlivy inhalovaných CY222, CY216 a Fragminu na antigenem indukovanou hypercitlivost dýchacích cest (AHR) u alergických ovcí. Údaje jsou prezentovány jako vystavení se vlivu antigenu ve formě střední ±SE% ochrany anti genem indukované změny v PD4. *

Obr. 9 představuje sloupcový diagram znázorňující vliv CY222 na antigenem indukovanou hypercitlivost dýchacích cest s C222 podávaným ve formě aerosolu ihned po vystavení se vlivu antigenu. + = významně rozdílný vzhledem k základní hodnotě (P < 0,05)

Obr, 10 představuje sloupcový diagram znázorňující vliv komerčního heparinu na antigenem indukovanou hypercitlivost dýchacích cest s komerčním heparinem podávaným ve formě aerosolu ihned po vystavení se vlivu antigenu.

Obr. 11 představuje sloupcový diagram znázorňující vliv Fragminu na antigenem indukovanou hypercitlivost dýchacích cest s Fragminem podávaným ve formě aerosolu ihned po vystavení se vlivu antigenu.

Heparin, sulfonovaný mukopolysacharid, je syntetizován v buňkách jako proteoglykan a specielně se hojně vyskytuje v plicích rozdílných zvířat. Heparin není specifická sloučenina s pevnou molekulovou váhou, ale ve skutečnosti je to heterogenní směs rozdílně substituovaných polysacharidových řetězců složených z opakujících se D-glukosaminových a jednak kyseliny L-iduronftové nebo kyseliny D-glukUron®ové. Střední molekulová váha heparinu izolovaného ze zvířecích tkání se mění v intervalu asi 6 000 až asi 30 000 daltonů.

Farmakologicky je heparin známý jako antikoagulant. Tato aktivita je důsledek schopnosti heparinu vázat se na některé ze sraženin antithrombinu III (AT- III), tím, že urychluje neutralizaci, pomocí AT-III, aktivovaných srážecích faktorů, a zamezuje tak konverzi protrombinu na trombin. Větší množství heparinu mohou inaktivovat trombin a dřívější srážecí faktory, čímž se zamezí konverzi fibronogenu na fibrin.

Antikoagulantní aktivita heparinu se vztahuje k molekulové váze-jeho polysacharidových jednotek; komponenty nebo fragmenty o nízké s molekulové váze-(napr. fragmenty mající molekulovou váhu menší než 6000 daltonů) mají mírné až nízké antitrombózní a protivýronové vlivy. Podobně, nízkomolekulámí hepariny izolované ze živé tkáně mají redukované antikoagulantní vlastnosti, protože se primárně skládají z nízkomolekulámích fragmentů a frakcí.

Komerční heparin, který je obecně získáván z hovězích plic nebo ze střevního vepřového slizu, má střední molekulovou vatu asi 15000 až 17500 daltonů.

Bylo ukázáno, že heparin sehrává roli jako specifická blokující látka receptorů IP3 a inhibuje uvolňování vápníku zprostředkované IP3. Dříve jsme navrhli, že heparin může blokovat receptory IP3 v buňkách a proto tím, že interferuje se signální transdukcí, může modulovat buněčnou degranulaci a uvolňování mediátoru. Studie in Vivo a in vitro tento koncept podporují a prokázali, Že inhalovaný heparin může zmenšit alergické svíraní průdušek u ovcí, zamezuje astmatu indukovaném tělesným pohybem a též inhibuje uvolňování histaminu indukované pomocí anti IgE z buněk. U Malovaného heparinu v dávkách do 1000 jednotek/kg bylo nalezeno, že nemá žádný vliv na částečný tromboplastinový čas (PTT) a tento fakt tak napovídá o „nekoagulantním" vlivu.

Bylo též publikováno, že hepariny o nízké molekulové váze (střední molekulová váha okolo 4500 daltonů), které mají sníženou aktivitu APTT, jsou účinné ve studiích na zvířatech v prevenci akutní, antigenem indikované, odezvě svírání průdušek a průduškové hyperreaktivitě, které je též nazývána jako hypercitlivost dýchacích cest (AHR). Avšak tak jak je detailně diskutováno a ilustrováno níže, ani komerční heparin, ani hepariny o střední či nízké molekulové hmotnosti, dokonce i ty s velmi nízkou antikoagulantní aktivitou, jsou účinné v zlepšování AHR, která následuje po vystavení se vlivu antigenu u testovaných subjektů. Tyto hepariny však 9 • β 9 • β

poskytují pouze ochranný, preventivní účinek a nemají žádnou hodnotu při léčbě astmatických příhod vyvolaných antigenem. V současné době bylo překvapivě objeveno, že heparinové frakce o ultranízké molekulové váze (ULMWH) nejsou pouze účinnými inhibitory anafylaxie dýchacích cest, ale jsou vysoce účinnými látkami při snižování AHR, i když jsou podány po vystavení se vlivu antigenu. Chronické, pravidelné použití ULMWH by mělo též snížit AHR a ULMWH mohou být proto použity v chronocké léčbě astmatu způsobeného specifickými (tj. antigenickými) nebo nespecifickými faktory.

Podle těchto údajů se předkládaný vynález skládá z metody léčení pacientů trpících antigenem indukovaným astmatem, kteří byli vystaveni antigenu indukujícím astma, která se skládá z vntroprůduškového podávání farmaceutického složení obsahujícího okolo 0,05 až asi 1,0 mg jedné nebo více frakce ULMWH na kilogram tělesné váhy pacienta v každé dávce daného složení, přičemž přednost je dávána asi 0,075 až 0,75 mg/kg na jednu dávku. Pro účely této aplikace lze ULMWH definovat jako heparinovou frakci mající střední molekulovou váhu-3500 daltonů nebo méně. ULMWH mající střední molekulovouvaíra^SOO daltonů nebo méně mohou být dokonce více účinnější, pokud jsou použity v metodě předkládaného vynálezu. Každá frakce ULMWH se může skládat z disacharidů, trisacharidů, tetrasacharidů a/nebo pentasacharidů, prvé tak jako z molekul delšího řetězce. V souhlase s vynálezem, pacient trpící astmatem indukovaným antigenem, který, inhaloval, vstřebal nebo přišel do kontaktu s antigenem jakoukoliv jinou cestu (tj. byl vystaven vlivu antigenu) známého typu, který vyprovokuje u pacienta astmatickou příhodu, zda-li nebo ne už pacient vykazuje symptomy ABR a/nebo AHR, tak je mu bezprostředně podána jedna dávka farmaceutického složení obsahující jednu nebo více frakce ULMWH, kumulativně přítomných ve výše popsaných koncentračních 10 intervalech. Dodatečné dávky mohou být, pokud je to nutné, podány následně, až do té doby, dokud pacient znovu získá nebo udržuje běžnou rezistenční hladinu proudění vzduchu.

Vynález též zahrnuje chronické podávám ULMWH astmatickým pacientům za účelem snížení nebo potlačení AHR. „Chronické podávání”, tak jak je použito zde, se vztahuje k podávání složení obsahující ULMWH přinejmenším jednou denně po dobu alespoň deseti následujících dnech. Chronické podávání složení obsahujícího asi 0,05 -1,0 mg/kg na dávku, přednostně však asi 0,075 - 0,75 mg/kg na dávku, lze pokračovat neurčitě, aby se docílilo potlačující léčby přinejmenším srovnatelné s kortikosteroidy, ale co je důležité, bez vedlejších účinků..

Nehledě na známá působení heparinů bez N-sulfonových skupin v ostatních biologických systémech, např. inhibitorů buněčného růstu, bylo nalezeno, že frakce ULMWH, které jsou aktivní a mohou být použity v předkládaném vynálezu pro léčbu astmatických pacientů, jsou všechny s N-sulfonovými skupinami; frakce bez N-sulfonových skupin jsou neúčinné.

Inhalační ULMWH složení použitá v předkládaném vynálezu se mohou obsahovat kapalinu nebo práškové složení obsahující ULMWH vhodné pro rozprašování a vnitroprůduškové použití nebo aerosolová složení podávaná pomocí aerosolové jednotky rozdělující odměřené jednotky.

Vhodná kapalná složení obsahují ULMWH ve vodním farmaceuticky přípustném inhalačním rozpouštědle, např. v izotonickém fyziologickém roztoku nebo bakteriostatické vodě. Roztoky jsou podávány pomocí pumpy nebo sprejového rozprašovače, nebo jakýmkoliv dalším konvenčním prostředkem, který umožňuje, aby bylo žádané dávkové množství kapalného složení inhalováno do pacientových plic. Μ

Vhodná prášková složení zahrnují, na ilustraci, prášková složení heparinu řádně promíchaného s laktosou nebo dalším inertním práškem vhodným pro vnitroprůduškové podávání. Prášková složení mohou být podávána aerosolovým rozprašovačem a nebo obalené v rozbitné kapsli, která může být vpravena pacientem do zařízení, které protrhne kapsli a prášek uniká ven při stálém proudu vhodném pro inhalaci.

Aerosolová složení použité v této metodě typicky zahrnují hnací látky na bázi fluorovaných uhlovodíků, povrchově aktivních látek a přídavných rozpouštědel, které jsou naplněny do hliníkových nebo dalších běžných aerosolových zásobníků, které jsou potom uzavřeny vhodným odměřovacím ventilem a natlakovány hnací látkou.

Celková koncentrace frakcí ULMWH v kterémkoliv nosiči vhodným pro použití v souhlasu s předkládaným vynálezem musí být dostatečně velká, aby se dosáhlo žádané dávky asi 0,05 až 1,0 mg ULMWH/kg. Tak např., pokud rozprašovač poskytuje na dávku 4 ml roztoku, tak by koncentrace ULMWH v roztoku v případě pacienta vážícího 75 kg mela přibližně být 1,0 -20,0 mg/ml.

Tak jak je známo zkušeným ve farmacii, tak je dostupno mnoho konvenčních metod a přístrojů na podávání přesně odměřených dávek vnitroprůduškových medikamentů a na regulování žádoucí dávky v souhlase s pacientovou váhou a vážností pacientova stavu. Mimoto existuje mnoho velmi oceněných kapalných, práškových a aerosolových nosičů vhodných pro vnitroprůdušková ULMWH složení předkládaného vynálezu. Vynález není omezen na nějaké speciální inertní nosiče, rozpouštědla nebo excípienty a též není omezen na nějakou speciální metodu nebo přístroj nebo vnitroprůduškové podáváni. ULMWH složení popsaná zde poskytují účinnou léčbu astma indukovaného antigenem, i když došlo k vystavení vlivu antigenu. Γ t r ' r 12

Aby se prokázala neočekávaná přednost frakcí ULMWH ve srovnání s hepariny o vyšší molekulové váze při léčbě astma indukovaného antigenem, tak byly provedeny experimenty srovnávající vlivy rozdílných heparinových typů na alergických ovcích, jednak před a jednak po vystavení vlivu antigenu. Podrobné popisy těchto experimentů a získané výsledky jsou předmětem následujících příkladů a čísel prezentovaných v obrázcích. Následující příklady, ilustrující metodu vynálezu a demonstrující její účinnost, nejsou myšleny ve smyslu zveřejnění specifických materiálů, postupů a režimů dávkování, které musí být výlučně užity, aby se vynález zavedl do praxe. Příklady provedení vynálezu Příklad 1

Podávání heparinů před vystánvCe vlivu antigenu Metody

Rezistence proti průtoku vzduchu plícemi

Pro všechny studie bylo použito šestnáct alergických ovcí s již dokumentovanou akutní odezvou svírání průdušek na antigen Ascaris suum. Ovce byly inkubovány pomocí nosoprůdušnicovou trubicí a byla měřena rezistence proti průtoku vzduchu plícemi pomocí jícnové balónové cévkové techniky, zatímco objem hrudního plynu byl měřen tělesnou pletysmografií, Údaje byly vyjádřeny jako specifické Rl (SRl, definované jako Rl krát objem hrudního plynu (Vtg).

Citlivost dýchacích cest

Aby se vyhodnotila citlivost dýchacích cest, tak byly měřeny křivky kumulativní odpovědi dávky na indukovaný kabachol, tím, že se měřily SRl hodnoty před a po inhalaci pufrovaného fyziologického roztoku a po každém podám 10 vdechů zvyšujících se koncentrací kabacholu (0,25; 0,5; - · \ 1,0; 2,0 a 4,0% hm/obj. roztoku). Citlivost dýchacích cest byla měřena určením kumulativní vyzývací dávky (PD4) karbacholu (v dechových jednotkách), která zvýšila SRl k 400 % nad základní hodnotou. Jedna dechová jednotka byla definována jako jeden vdech 1% karbacholového roztoku.

Heparinové frakce: V experimentu srovnávajícího účinnost rozdílných heparinových materiálů podávaných alergickým ovcím před vystavení se vlivu antigenu byl podáván jeden ULMWH (CY222, Sanofi, Paris, France), jeden nízkomolekulámí heparin (CY216, Sanofi) a jeden heparin o střední molekulové váze-(Fragmin, Kabivitrum, Stockholm, Sweden). Molekulová -ááha a další charakteristiky těchto heparinových frakcí jsou prezentovány v tabulce 1. 14

Tabulka 1

MOLEKULOVÁ ¥ÁHA A CHARAKTERISTIKY HEPARINOVÝCH FRAKCÍ CY222 CY216 FRAGMIN (ULMWH) (LMWH) (MMWH)

Molekulová 2355 d 4270 d 6400 d Anti-Xa aktivita 701.U,/mg 112 I.U./mg . 158 I.UVmg Anti-Ha-aktivita 12 I.U./mg 291.U./mg — ΑΡΤΙ' 28 I.U./mg 45 I.U./mg 58 Í.U./mg Poměr Anti-Xá/APTT 2,5 2,5 2,72 Obsah GAG(%) 70 60 65 % řetězců ULMW (m.v. < 2500 d) 88 27 11

Tak jak je naznačeno v tabulce, ULMWH použité v tomto experimentu nemá pouze molekulovou váhu 3000, ale kromě toho 88% X, ^ ^ heparinových řetězců použitých v této frakci má molekulovou váhu menší než 2500. 15

Experimentální protokol

Studie dýchacích cest Základní hodnota citlivosti (PD4) byla určena u každého zvířete a poté se ovce nechaly vystavit vlivu antigenu Ascaris suum v rozdílných

Te^rimentaimch dňéčnrBy iíf změ^^ po'vystavení vlivu antigenu, potom každou hodinu, dokud se SRl nevrátila na základní hodnotu. Poté byla měřena hodnota po vystavení vlivu PD4. Protokol byl opakován přinejmenším ještě 14 dní, po předběžné léčbě s aerolizovaným CY222, CY216 a Fragminem, a sice v dávkách 0,31; 0,62; 1,25; 2,5 a 5,0 mg/kg.

Analýza dat

Data byla vyjádřena (a) jako střední ± SE% změna SRl; (b) PD4 jako procento základní hodnoty; (c) ak% ochrana odezvy na utni svírání průdušek (ABR) a (d) % ochrana odezvy na hypercitlivost dýchacích cest (AHR). po vystavení vlivu SRL - zákl. hodnota SRl x 100 (a) SRl (změna, %) = ---;- základní hodnota SRl po vystavení vlivu PD4 x 100 (b) PD4 (změna, %) =- základní hodnota PD4 • i. 16 ř · r i Λ

kontrola Δ SRL% - LMWHF ASRL % x 100 (c ) ABR ochrana, % = .kontrola Δ $Rl% bMWKF· PD* (d) AHR ochrana, % = -:-:-;-— základní hodnota PD4 -kontrola antigen PD4

Srovnávací vlivy předběžné léčby ABR a AHR s testovanými materiály jsou prezentovány v tabulkách 2-6 a jsou ilustrovány graficky na obrázcích 1-8. Údaje ukazují, že předběžná léčba s aerosoly CY222, CY216 a Fragminu zmírnila akutní, antigenem. indukovanou, odezvu svírání průdušek v závislosti na podávané dávce; minimální účinné dávky byly 0,62 mg/kg, 1,25 mg/kg a 2,5 mg/kg. Předběžná léčba s aerosoly CY222, CY216 a Fragminu zmírnila antigenem indukované AHR v závislosti na podávané dávce; minimální účinné dávky byly 0,62 mg/kg, 1,25 mg/kg a 5,0 mg/kg.

Analýza srovnání jednotlivých léků ukázala, že ochranné účinky jsou nepřímo úměrné molekulové váze heparinové frakce. Frakce ULMWH a CY222 byly nejsilnějšími činidly, tak jak je ukázáno ve formě významné inhibice antigenem indukovaného svírání průdušek a AHR při dávce 0,6 mg/kg, zatímco CY216 a Fragmin byly při této dávce zcela neúčinné. Skupinové střední hodnoty I.D.50 pro CY222, CY216 a Fragmin oproti alergickému svírání průdušek byly 0,5,1,3 a 1,8 mg/kg. Obdobné skupinové střední hodnoty I.D.50 pro CY222, CY216 a Fragmin oproti alergickému svírání průdušek byly 0,51,2,5 a 4,7 mg/kg.

17 f > TABULKA 2

VLIV PŘEDBĚŽNÉ LÉČBY POMOCÍ CY222 NA ANTIGENEM INDUKOVANÉ SVÍRÁNÍ PRŮDUŠEK KONTROLA-ANTIGEN CY222 Dávka Základní Po Základní Po Po (mg/kg) hodnota vystavení vlivu hodnota aplikaci CY222 vystavení vlivu 0,31 1,15 3,27* U7 1,08 2,66* (n=7) (0,04) (0,33) (0,05) (0,06) (0,35) 0,62 1,15 3,27* 1,15 . 1.21 1,65^ (n-7) (0,04) (0,33) (0,05) (0,06) (0,06) 1,25' 1,16 3,43* 1,08 1,17 1,71+ (n=6) (0,04) (0,32) (0,06) (0,05) (0,19) 2,5 1,13 3,31* 1,04 1,06 1,33+ (n=6) (0,04) (0,39) (0,05) (0,10) (0,09) 5,0 1,13 -VI* j,j1 1,16 1,12 1,56^ (n=6) (0,04) (0,39) (0,05) (0,02) (0,12) Údaje jsou prezentovány jako střední ±SE SRl (specifická plicní rezistence) bez a po předběžné léčbě v závislosti na vzrůstajících dávkách CY222. Významně odlišné od základní hodnoty (P < 0,05) + Významně odlišné od kontroly antigenem (P < 0,05)

1S TABULKA3

VLIV PŘEDBĚŽNÉ LÉČBY POMOCÍ CY216 NA ANT1GENEM INDUKOVANÉ SVÍRÁNÍ PRŮDUŠEK KONTROLA-ANTIGEN CY216 Dávka Základní Po Základní Po Po (mg/kg) hodnota vystavení hodnota aplikaci vystavení - vlivu CY216 vlivu 0,31 0,92 2,64* . 1,12 1,08 3,21* (n=7) (0,04) (0,23) (0,07) (0,04) . (0,09) 0,62 0,92 2,64* 1,04 1,07 2,54+ (n=7) (0,04) (0,23) (0,06) (0,03) (0,31) 1,25 1,12 3,24* 1,04 1,20 2,03+ (n=8) (0,04) (0,29) (0,07) (0,13) (0,36) 2,5 '' 1,14 3,36* 1,05 1,04 1,76+ (n=5) ' (0,05) (0,48) (0,07) (0,11) (0,32) 5,0 1,09 3,35* 1,09 1,18 1,75+ (n=ó) ' (0,04) (0,14) (0,03) (0,08) (0,20) / Údaje jsou prezentovány jako střední ±SE SRl (specifická plicní rezistence) bez a po předběžné léčbě v závislosti na vzrůstajících dávkách CY216 Významně odlišné od základní hodnoty (P < 0,05) + Významně odlišné od kontroly antigenem (P < 0,05) 19

TABULKA 4

VLIV LÉČBY POMOCÍ FRAGM1NU NA ANTIGENEM INDUKOVANÉ SVÍRÁNÍ PRŮDUŠEK

KONTROLA-ANTIGEN FRAGMIN Dávka Základní Po Základní Po Po (mg/kg) hodnota vystavení vlivu hodnota aplikaci vystavení fragminu vlivu 1,25 1,04 3,37’ U1 1,07 2,71* (n=7) (0,06) (0,32) (0,05) ... (0,08) (0,42) 2,5 vo O 3,19* 1,07 1,16 1,56+ (n-6) (0,04) (0,30) (0,08) ' (0,12) (0,25) 5,0 f 1,00 3,39* 0,98 0,98 1.47+ (n=7) (0,01) (0,39) (0,03) (0,03) (0,21) Údaje jsou prezentovány jako střední ±ŠE SRl (specifická plicní rezistence) bez a po předběžné léčbě v závislosti na vzrůstajících dávkách fragminu. Významně odlišné od základní hodnoty (P < 0,05) + Významně odlišné od kontroly antígenem (P < 0,05)

ψ r Μ Γ'ΐ * na j Γ"· Α 00 00 Ο <Ν to S? 'ο cn" Ο C Ό Ο X CO W Z U 0 ££ ' c 8 s -¾ M Ϊ' 0 g ciá H , , Z : I ^ /-N i ^ Γ*-* 1 J' Λ 00 V0 A n /—s i-. A Λ a 0 • pM k J \o o # 'w' i— * w O <N 13 g fa á Ι> 00χ" ^-Γ (Λ Οσ% rn

Γ-' ot CN ΓΛ 00 Ο" <Ν m + x η (Ν + t~~ r- θ' -Γ + Ν- 'τ 2 .wA.,o. jí ·~ο 3 jí S- ό § U ,Γ -ΰ λ U ·

O Ό Ν Ο X U ο « <U ,—, ~0 Μ > 2

3 0 Ί-» Ο 3 Τ3 Ο X γν Π-Ρ·*" —’ γο ιη 00 — χ χ" ο" — οχ" θ' »λ r-co ο"

*U XI >CJ Ό

Ο CN Tř X σ\" cn" CN (ΝσΓ (Ν γπ «Λ θ' ι/Ί ο" Γ- ο Λ Λ Ό — ΟX ,ίί Ο '4J « ~1 X '« ΐ C S >Ν X >ω ^ *οQ § ’ο. ο α β3 α 3 3 ο « _C >—ι "ίΐ jí y '« s ν -£ Ό co « ^ 3 —.£ Š Ο “ο Ε Ν" _ οο" Ο + /'-ν (Λ —τ to ίοΟ η ίη ^ + r ο 00 (Ν + *“Ν θ'·, (Γ) >Λ Ο ι> χ V3 g vo' r- ^v m O \D S, * Λ o Ό w * vo" O1 * v*/ vcT * o" Γ- Ο θ' Γ*Ί ιη ‘Λ ττ χ \ο θ' ΙΛ θ" t> 1> 1/ί θ' CL, ω 00 -Η π3 *—> /-\ Ο >, 3 Ό Ρf I β Μ -ο w <U Ν )ΐ- 1) «5 χ ρ 3 υ ._ D ^ CĎ 1 f ιι <L> "5 Ν ^ 0J 5 c &, ω 3 >ο S w « ίί > 'δ4 ο 2 Α « 0) - ο u ftí « CO ^ ε 3Ίΐ £ 5 ° Ο C ν> ο ω , Ui ‘ “I w ‘g 3 3 O <U •s 1 3 - -P >|1S nj .H, -¾ « 'CO 4-»Ξ i g? '3 "Τ' Λ 'Λ 3 ěE -3a oII 3 a· U o Ό λ υ Ph i—i

Významně rozdílný vzhledem k základní hodnotě (P< 0,05) +Významně rozdílný vzhledem .k antigenové kontrole (P< 0,05) I

S~~s f—1 ΓΊ ^ V) t> Ό Ό η II νο II (N 1 >ň II o II o" 3> í-T c " 3 t-H v _ j " 3 <N O Λ Č ΙΛ O c«

-P \= S'- eN CN <N O N? O ^ οι Γ", ŮĎ oč- £ SNη Ό m ", V5’ μ*μ·^Ι o ¢50ao ** <n ιόν w

/*s + + + E ox V? ©^ X® s? --p ov v? oN 8' s? lO O m *-H >W 00 CN Ov 'T <N 1—4 v^ 00 o '«w' oT 00 TABULKA 6 'T* o" vO S? ox OJ + + vO tp θ'- ς> vO ŽN O' r- oN ř“^ cN 00 vO 00 o Ό m ΙΛ *—( i—I CN m. N-"'/ -ft 'w' * Ol LT> vo o" 04 2,5 N® θ'- r\I °N “ o « ° Ολ vn

co CO E co -P vo er- o'' ^ O oj rN * * +— '£b B H 3 ><u B 1 S O hí G v? cn ON 'v? ©^ (N OO N® ©^ oo c ΐ 2 T3 o fí 00 W o ° N rj s© '>-> _ > -n ^ + ¢50 M υ 11- < υ.

o 5* -O r-S /—*s +- * i— e 00¾ μ 0 θ'" £ s? αΝ V? ©^ N? ox N? ©^ N® cN ®N V? ox VO, rn ca »3 —" —1 o,° Ό 't ΐΛ O O o Os >, N V 1 1 Ol rH LTl CN VO c, í> *§ jg & 0Λ 0 '3 2 c^§ /'“'V * /“S # * 4— y^N * -K E ω '3 a N „U Λ ox N? ©^ "n? s? ď'- "\P s? ůN vp O' >P Q> N? cr* N? ©N 15 .i—, O fa 31 O '^-4 l/N 00 00 00 σ\ ON h· o" a " '5 CN Sw/ 'w' 'W' o- r- 3 λ g S,£ S —1 -w· ca 15 o g Z7* ό N 3 · Ό 'P íl οι i/1 rn Ό P. Ol ΙΛ <D o > 0 θ' O oT *n Vi q )—1 mO, θ' V Cl, Ό r-H Ol >*U Lij 4 22 Příklad 2

Podávání heparinu po vystavení vlivu antigenu V tomto případě byl aplikován stejný postup jako v případě příkladu 1, s výjimkou, že (a) tři heparinové preparáty podávané testovaným zvířatům byly CÝ222, komerční heparin (molekulová váha přibližně 15 000 daltonů) aFragmina . ....... ....... ] ΙιιιΙΙΓΤη ί~ΑΤ~“**" ϋ ΙΙΙ1·ΙΙΙII * **—- I—i— ...... (b) hepariny byly zvířatům podávány ve formě aerosolu ihned po vystavení vlivu antigenu Údaje z těchto testů jsou udány v tabulce 7 a jsou graficky znázorněny na obrázcích 9-11 TABULKA 7

SROVNÁVACÍ VLIVY INHALOVANÉHO KOMERČNÍHO HEPARINU (8 MG/KG), HEPARINOVÉ FRAKCE O STŘEDNÍ MOLEKULOVÉ VÁZE (FRAGMI, 5 MG/KG) A HEPARINOVÉ FRAKCE O ULTRANÍZKÉ MOLEKULOVÉ VÁZE (CY222, 0,6 MG/KG) NA ANTIGENEM INDUKOVANOU HYPERCITLIVOST DÝCHACÍCH

CEST Základní hodnota Po vystavení vlivu antigenu (kontrola) Po vystavení vlivu antigenu (heparin) Heparin 18,9±2,1 10,5+0,2* 8,9+2,2* Fragmin 22,7+3,2 13,3±2,0* 9,5±2,6* CY222 20,4±1,7 ll,7±2,ť 25,lil,1* Údaje jsou prezentovány jako střední hodnota ±SE PD40 karbacholu v dechových jednotkách (jedna dechová jednotka se rovná jednomu vdechu 1 mg/ml karbacholu). Všechna činidla byla ihned rozptýlena po vystavení vlivu antigenu. Významně rozdílné vzhledem k základní hodnotě (P < 0,05) + Významně rozdílné vzhledem k antigenové kontrole (P < 0,05)

Pouze CY222 poskytla významnou ochranu

Tak jak je naznačeno v-tabulce 7 a na obrázcích 9-11, inhalovaný CY222 podaný po vystavení vlivu antigenu podstatně modifikoval AHR po antigenu, tím že znovu nastavil hladiny AHR v testovaných objektech na základní hodnoty nebo výše. Tento vliv nebyl *

23 pozorován za použití komerčního heparinu nebo Fragminu, žádné zlepšení nevyplývalo po podání těchto heparinu po vystavení antigenového vlivu.

Takto bylo ukázáno, že existují metody a sloučeniny, které se aplikují na různé objekty které jsou dobře adaptibilní na to, aby vyhověly podmínkám praktického použití. I když lze dospět k rozdílným variacím uvedeného vynálezu, tak by mělo být dáno na «Γήτι,ιτηρηΛΐ i._ .70·^

Uj- žs'všechny pnklády^ůpšáííé^ýsě intéípretováí^'jako ilustrativní bez limitního omezení.. TO seje patentově nárokováno jako nové, je chráněno a je uvedeno v následujících nárocích.

Claims (9)

1. PV 481-98 -24-

   9 PATENT OTÍ' h/ROKY 1. Farmaceutický přípravek pro léčbu pacienta, trpícího astmatem, indukovaným antigenem, vyznačující se tím, že obsahuje na každý kg tělesné hmotnosti pacienta 0,05 až 1,0 mg heparinů. o ultra nízké molekulární limo t nos ti, tzv. ULMWH. to, 'V^kašoié^cávce*"ve”farmaceuticky přijaté 1 nám inha 1ova t e1ném vehikulu, přičemž střední molekulární hmotnost ULMWH činí 3000 daltomů a méně.
2. 2. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že použitý ULMWH má střední molekulární hmotnost 2500 daltonů či méně.
3. 3. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, obsahující od 0,075 do 0,75 mg ULMWH v dávce na kg tělesné hmotnosti.
4. 4. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje 1,0 až 20,0 mg ULMWH na každý ml přípravku.
5. .5 SUBSTITUTE SH EET (RULE 26) ii Λ f* ** vjt, * ř * - m • ***** WO 97/06783 PCTAJS?Ó/Í3I33 '

   5. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že použitý ULMWH nemá podstatnou antikoagulační účinnost,
6. 6. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že každý z použitých ULMWH obsahuje disacharidy, trisa-charidy, tetrasacharidy nebo pentasacharidy.
7. 7. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje roztok U1MWH ve vodném, farmaceuticky přijatelném vehikulu.
8. 8. Farmaceutický přípravek podle nároku 7, vyznačující se tím, že obsahuje jako vhodní vodné vehikulum izotonický fyziologický roztok nebo bekteriostatickou vodu. 9* Farmaceutický přípravek podle nároku 7, vyznačující se tím, že se vhodně podává pomocí pumpičky nebo rozprašovače.

   10. Farmaceutický přípravek podle nároku 7, vyznačující se tím, že obsahuje aerosolový nosič a je vhodný pro podávání pomocí odměrováčího aerosolového dávkovacího inhalátoru* 11. farmaceutický přípravek podle nároku 7, vyznačující se tím, že* obsahuje práškovaný UHíliíH promíchaný dobře s inertním práškem, vhodným pro vnitroprůduskové podávání. 1?. farmaceutický přípravek podle nároku 11, vyzna čující se tím, že obsahuje jako inertní prášek laktosu. -mm*· 13. farmaceutický přípravek podle nárolu 11, vyznačují* cí se tím, že se podává pomocí aerosolové nádobky. 14. ; farmaceutický přípravek podle nároku 11, vyznačující se tím, že se podává za použití rosbitelné kapsle.

   SPOLěč^á AOVOííÁTNÍ KANCELÁŘ VSETEČKA ZELcjMl SVOP^iK KALENSKÝ /PARTNEŘ i \ ' íjyto Praha 2, Málkova 1 \„ / česka republika \ WO9T/067&3 PCT/U396/Í5I33l/ll

   tipa O I** i □ KONTROLA

   DAVKA (mg/kg) SUBSTITUTE SHEET(RULE 26) •i •i wo 97/06783 PCTf^JSPíW'3133 481- 98

   *

   KONTROLA

   O LO g - g 5§ < z >řd s N 73 SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) WOJ7/W783 3/11

   * *rt f»». • I* , * ·+ * ψ -·. - , ř # * t ^ # • «» ** ψ PCT?ŮSÍál3l33

   A

   KONTROLA OBR. 3

   o a

   LO csi *Sb £ > O

   tO C*J T to CSJ O O rvi O O O O lo O v? 9n #> < Z. >w

   c« SUBSTITUTE SHEET (RULE 26)

   DÁVKA (mg/kg) WO 97/W783 PCT/*JS5É/1Í3133 481- 98 Ví C5 O PO VYSTAVliNl

   O uo u*> cv) LO cvj CJP o PO c> tc 'Sic< a> '< o Qfu, SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) WO 9:/067S3 O co ·«*· * »4* PCT7'JS5C^]3I33 481- Q8 PO VYSTAVENÍ

   DÁVKA (mg/kg) **r- O «30 o *3- O CNJ O § § > h O Z Q O X z Q < -J * '< N £ rr Q a* SUBSTITUTE 5HEET (RULE 26} OBR. 7

   Μ*

   DÁVKA (mg/kg)

   ' » . '· "Vs·
9. 9/1!

   HJ

   Í r1 0\ £ 1 !< |\ IIMjl···· li CO UO cv

   OJ OJ OJ o »

   a 4)> A 3 ao M ** a wj Qt I* S - > O 3 ÍU > O OJ

   « •M O c Ό O J3 a Ό a 3 N PD4 (Dechová jednotka) i O ΓΟ t _I_I-1-1-í-1-1-L.- ir> O Io O 1-0 O oj oj — — SUB5TTTUTE SHEET (RULE 2S) 98 r WO 97/06783

   v* _* a r r - F€T/UE?M31:k t- Γ 10/11

   A J

   o «*w> X o

   s o ► « 3 e <w 6JĎ

   PD4 (Dechová jednotka) I----1_._L S S£? 2 J_;_I__ IT> O SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) ‘-V WO 97/067S3 •«* · * -- - v - -ΓΤ f· t * ** ♦ ** · * / *·„ 1 * · * * ►**« 1 * ·* > ^ / * * %» * « řCtflJ5?6ťMU3

   i 98 11/11 h & i $

   PD4 (Dechová jednotka) L-1 l- —i_I_1 I I L- —1-1 I O u-s o trs o trs o KS ťsj oJ — —* SUBSTITUTE SHEET{RULE 26)