CZ607390A3 - Oktapeptidové analogy somatostatinu, mající threonin v poloze šest - Google Patents

Abstract

Sloučenina obecného vzorce, kde každý ze substituentů Ai a A2 znamená nezávisle na druhém H, Cj.nalkyl, C7. lofenylalkyl, RiCO, kde R] znamená C].20alkyl, C3.20alkenyl, C3.20alkinyl, fenyl, naftyl nebo C7_iofenylalkyl, nebo R2OCO, kde R2 znamená Cμ10alkyl nebo C7_10fenylalkyl s tou podmínkou, že když jeden ze substituentů A! nebo A2 je RiCO nebo R2OCO, musí druhý znamenat H, každý substituent Xi a X2 nezávisle na druhém znamená H, F, Cl, Br, OH, CH3 nebo CF3 s tou podmínkou, že alespoň jeden ze substituentů Xi a X2 musí být H, A3 znamená Phe nebo Tyr a A) znamená OH, NH2 nebo NH-R3, kde R3 je nasycený alifatický Cpsalkyl, nebo farmaceuticky přijatelné soli této sloučeniny; terapeutická kompozice, obsahující tyto sloučeniny a způsob použití těchto sloučenin.

Description

Oblast techniky

Předložený vynález se týká terapeuticky účinných pep1 * '

Dosavadní stav techniky

V literatuře je popsán značný počet analogů somato^tati-<o

V * nu, vykazujících aktivitu inhibice uvolňování růstových Mi

nů, zahrnujících analogy, obsahující nejméně čtrnáct aminokyselin přírodního původu. Například Coy a spol. v US patentu č. 4485101 popisuje dodekapeptidy, mající aminoterminální acetylovou skupinu, karboxy-terminální aminoskupinu, D-Trp v poloze 6 a p-Cl-Phe v poloze 4. (Každá aminokyselina je zde označena svoji standardní třípísmenovou zkratkou, stereoisomerní označení každé aminokyseliny je L pokud není uvedeno jinak).

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu jsou sloučeniny následu-jícího obecného vzorce

X,

CH-C-Cys-Ao-D-Trp-Lys-Thr-C.ys-/3 Nal-A « 2

-2kde každý a Ag, nezávisle na druhém, je H, C^^galkyl,

Cy-iQfenylalkyl, R^CO (kde R·^ je ’ ^C3-2O^alkenyl> ^C3-2O^alkinyl’ ^fenyl> ^naftvl, nebo C7_iQfenylalkyl), nebo RgOCO (kde Rg je C^_^Qalkyl nebo Ογ_^θί en.y laiky 1), s tou podmiň kou, že když jeden ze substituentů A^ nebo Ag je R^CO nebo RgOCO, musí druhý z-.nameíiat H;

každý X^ a Xg, nezávisle na druhém, je H, F, Cl, Br, OH, CH^ nebo CF-j s tou podmínkou, že alespoň jeden z X^ a Xg musí být H;

ky je Phe nebo T.yr; a

A^ je OH, NHg nebo NH-Rj (kde R^ znamená nasycený alifatický ^ci-8^alkyi>>

nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli. Aminokyseliny přírodního původu jsou označeny svými obecně používanými třípísmenovými symboly; pokud pokud není označen D-stereoisomer aminokyseliny (jiné nežNal), je použita L-forma. ”/3 Nal” znamená D- nebo L--naftylalanin, pokud není specifikován D- nebo L-stereoisomer.

Ve výhodném provedení, každý A^ a Ag nezávisle na druhém, znamená H nebo nasyceny alifatický C^_^alkyl; každý X^ a Xg nezávisle na druhém, znamená H, F, Cl nebo OH s tou podmínkou, že alespoň jeden z Xy a Xg musí být H; a R^ je nasyce ný alifatický C^^alkyl;

výhodněji má sloučenina následující vzorec:

D -P h e -Cy s -P h e -D -T r p-Ly s -T hr -Cy s - fb Na 1 -NH , nebo

D-Phe-Cys-Tyr-L-Trp-Lys-Thr-Cys-^2 Nal-NHg

-3Z dalšího hlediska se předložený vynález týká sloučenin vzorce:

D- β Nal-Cys -Phe-D-Trp-Lys -Thr-Cys -Thr-NH

L - /ČNal-Cys -Tyr -D -Tr p-Lys -T hr -Cys -T hr -Nř^ i nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí.

Předložený vvnález se také týká kombinace jedné z výše uvedených sloučenin a farmaceuticky přijatelného nosiče subv

Stance v terapeutickém přípravku schopném inhibovat uvolňování růstového hormonu (”GH”), epidermálního růstového faktoru, inzulínu, glukayonu, pankreatických exokrinních sekrecí nebo substance P a výhodné GH.

Ve výhodných provedeních je přípravek ve formě pilulek, tablet, kapslí nebo kapalných přípravků pro orální podání; krému, gelu, lotionu, spreje nebo masti pro aplikaci na kůži pacienta; kapaliny, kterou je možno podávat nasálně jako kap ky nebo ^re j ; nebo kapaliny vhodné pro entravenozní, subkutánní, parenterální nebo intraperitoneální podání. Terapeutický přípravek může být také ve formě olejové emulze nebo nebo disperze spolu s lipofilní solí jako je sůl pamoové kyseliny,nebo ve formě biodegradabilního přípravku s rovnoměrným uvolňováním pro subkutánní nebo intrámuskulární podání. Pro maximální účinnost je žádoucí nulový řád uvolňování. Ten to řád může být získán za použití implantátu nebo vnější pumpy pro podání terapeutického přípravku.

-4Sloučeniny podle vynálezu vykazují v Širokém rozsahu biologické aktivity vzhledem k jejich antisekretorním a antiproliferním vlastnostem . Sloučeniny potlačují sekreci některých endokrinních hormonů, zahrnujících inzulin, glukagon a zejména růstový hormon (GH). Sloučeniny podle vynálezu také potlačují pankreatické a gastrické exokrinní sekrece a potlačují nebo modulují uvolňování určitých neurotransmitérů, zahrnujících substanci P a acetylcholin.

Analogy somatostatinu mohou působit multiplikaci tumorové buňky prevencí uvolňování mitotických faktorů (jako je inzulínu podobný růstový faktor 1 (IGF-1), gastrin uvolňující peptidy atd.), a mohou interferovat s intracelulárním transdukčním mechanismem jako například v případě enidermálního růstového faktoru (EGF)- vyvolávajícího buněčnou proliferaci.

Aromatické lipofilní N-terminální zakončení může poskytnout dlouhotrvající in vivo aktivitu.

Další rysy a výhody předloženého vynálezu budou zřejmé z následujícího popisu výhodných provedení a z patentových nároků.

Sloučeniny podle vynálezu, které jsou peptidovými analogy somatostatinu, mají výše uvedený vzorec.

Sloučeniny mohou být ve formě farmaceuticky přijatelných solí nebo komplexů. V textu použitý výraz farmaceuticky přijatelné soli nebo komplexy” se týká solí nebo komplexů, které si udržují biologickou aktivitu původních sloučenin a nevyvolávají žádné nežádoucí toxikologické účinky.Příklady takových solí jsou a) adiční soli s kyselinami, kterými jsou kyseliny anorganické (například kyselina chlorovodíková, bromovodíková, sírová, fosforečná, dusičná a podobně), a soli vytvořené s organickými kyselinami jako je kyselina octová,

-5štavelová, vinná, jantarová, jablečná, askorbová, benzoová, tanin, kyselina pamoová, kyselina alginová, polyglutamová, naftalensulfonové kyseliny, naftalendisulfonové kyseliny a polygalakturonová kyselina;

b) adiční soli s bázemi, vytvořené s polyvalentními kovovými kationty jako jsou kationty zinku, vápníku, vismutu, barya, hořčíku, hliníku, mědi, kobaltu, niklu, kadmia a podobných kovů, nebo s organickými kationty odvozenými od Ν,Ν-diben» z.ylethylendiaminu nebo ethylendiaminu; nebo

c) kombinace a) a b): např. zinečnatá sůl s taninem nebo podobné soli.

Příklady provedení

Dále je uvedena syntéza oktapeptidů. Jiné sloučeniny podle vynálezu mohou být připraveny za použití vhodných modifikací, které budou zřejmé odborníkům, následující syntetické metody.

První stupeň při přípravě

D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Val-Cys-/iNal-NH2 je příprava meziproduktu terc.butyloxykarbonyl-D-Phe-S-methylbenzyl-Cysc

Phe-D-Trp-N -b enzy1oxy karb ony1-Lys-Thr-S-methylb enzy1-Cys— Nal-NI^-benz hydry lamino v é pryskyřice následujícím způsobem.

Methyl-benzhydrylamin-polyst.yrenová pryskyřice (Advanced Chem-Tech, lne.) v chloridové iontové formě se umístí do reakční nádoby svntetizátoru peptidů Beckman 99OB programovaného pro provádění následujících reakčních cyklů:

a) methylenchlorid; b) 33% trifluoroctová kyselina v methylen chloridu ( 2 krát vždy po 2 a 25 minutách); c) methylenchlorid; d) ethanol; e) methylenchlorid; f) 10% triethylamin ve chloroformu.

-6Neutralizovaná pryskyřice se míchá s Boc-/3Nal a diisopropylkarhodiimidem (vždy 1,5 mmol) v methylenchloridu po dobu 1 hodiny a pak se výsledná aminokyselinová pryskyřice cykluje stupni a) až f) výše uvedeného promývacího programu. Stejným způsobem se pak kopulují postupně následující aminokyseliny (1,5 mmol): Boc-S-methylbenzyl-Cys, Boc-Thr, Boc-N^ -benzyloxykarbonyl-lysin, Boc-D-Trp, Boc-Phe, Boc-Smethylbenzyl-Cys, Boc-D-Phe.

Pryskyřice se promyje a suší a pak 3e smísí s anisolem (4 ml) a bezvodým fluorovodíkem (36 ml) při O °C, míchá se pak 45 min.Je možno také použít thioanisol, kyselinu trifluoroctovou a trifluormethansulfonovou kyselinu v poměru 1:90:9 po dobu 6 hodin. Přebytek fluorovodíku se odpaří rychle proudem suchého dusíku a volý peptid se vysráží a promyje etherem. Surový peptid se pak rozpustí v 800 ml 90% kyseliny octové, ke které se pak přidává I? v methanolu tak dlouho, dokud se nedosáhne trvalého hnědého zabarvení. Roztok se pak míchá 1 hodinu před odstraněním rozpouštědla ve vakuu. Výsled ný olej se rozpustí v minimálním objemu 50% kyseliny octové a eluuje se na sloupci (2,5 x 100 mm) Sephadexu G-25. Frakce, které obsahují podle UV absorbce a chromatografie na tenké vrstvě hlavní složku se potom spojí, odpaří na malý objem a zavedou na sloupec (2,5 x 50 cm) Vydac oktadecylsilanu (1015 /uM).

Sloupec se eluuje lineárním gradientem 10 až 50 % acetonitrilu v 0,1% kyselině trifluoroctové ve vodě. Frakce se ana lyžují chromatografií na tenké vrstvě a vysokotlakovou kapalinovou chromatografií, maximálně čisté se spojí a je-li to žádoucí, připraví se různé soli, např. acetát nebo fosfát. Opakovanou lyofilizací roztoku z vody se získá 120 mg produktu ve formě bílého, chmýřovitého prášku.

Produkt byl shledán homogenním podle výsledků vysokotlakové kapalinové chromatografie a chromatografie na tenké vrst

-7vě. Analýza aminokyselin v kyselém hydrolyzátu dokládá, že se jedná o oktadekapeptid.

Sloučeniny podle vynálezu, mající vzorce

je možno připravit metodami analogickými s metodami uvedenými výše.

Využitelnost

Při podání savcům, zejména lidem (např. orálně, topicky, intravenozně, parenterálně s udržovaným uvolňováním biodegradabilní formy, nasálně nebo čípky), mohou tyto sloučeniny účin ně inhibovat sekreci různých hormonů a trofických faktorů. Mohou být použity k potlačení některých endokrinních sekrecí, jako je GH, inzulín, glukagon a prolaktin, při léčení, například akromegalie, endokrinní tumory jako karcinoidy, vipomů, inzulinomů a glúkagonomů, nebo diabetů a diabetem vyvolaných chorob, nefropatie, syndromu únavy a diabetů typu 2. Sloučeniny mohou být také použity k potlačení exokrinních sekrecí v pankreatu, žaludku a střevech při léčení například pankreatitidy, pištěli, krvácejícími vředy a diarrhejz spojenými s takovými chorobami jako je AIDS nebo cholera. Poruchy související s autokrinní nebo parakrinní sekrecí trofických faktorů jako je IGF-1 (jakož i některými endokrinními faktory), které mohou být léčeny podáváním těchto sloučenin zahrnují rakoviny prsů, prostaty a plic ( epidermoidů jak malých buněk tak ne-malých buněk), jakož i hepatomy, neuroblastomy,

-8adenokarcinomy střeva a pankreatu (duktálního typu), chondrosarkomy a melanomy a také atheroskleroza spojená s vaskulárními transplantáty a restenozou následující angioplastie.

Sloučeniny podle vynálezu jsou také vhodné pro potlačení mediátorCjbeurogenního zánětu (např. substance P nebo tachy kininů) a mohou být použity pro léčení takových patologických stavů jako je reumatoidní artritida, psoriasis, záněty kůže jako jsou záněty spojené se slunečními spáleninami, ekzémy nebi jinými zdroji svědění; a alergie, včetně asthma. Sloučeniny mohou také působit jako neuromodulátory v centrálním nervovém systému, je možno je použít při léčení Alzheimerovy choroby a jiných forem demence, bolestí (jako spinální analgéze) a bolestí hlavy. Dále mohou sloučeniny podle vynálezu poskytovat ochranu buněk při poruchách souvisejících s útrobním krevním tokem, zahrnujícím cirrhozu, jícnové varixy,a některými případy otrav houbami.

Sloučeniny mohou být podány savcům, např.lidem, v dávce 0,01 až 50 mg/kg/den, výhodně 0,1 až 5 mg/kg/den.

Jiná provedení jsou v rozsahu následujících nároků.

Claims (13)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   Sloučenina obecného vzorce

   CH, a 6 o « ^{0 0} f-5

   N - CH-C-Cys-A^-D-Trp-Lys-Thr-Gys-^Nal-A^ O kde každý substituent A-^ a Ag nezávisle na druhém znamená H, alkyl s 1 až 12 atomy uhlíku, fenylalkyl se 7 až 10 atomy uhlíku, R^CO, kde R^ je alkyl s 1 až 20 atomy uhlíku, alkinyl se 3 až 20 atomy uhlíku, fenyl, naftyl nebo fenylalkyl se 7 až 10 atomy uhlíku, nebo R
2. 2OCO, kde R2 je alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku nebo fenylalkyl se 7 až 10 atomy uhlíku, s tou podmínkou, že když jeden ze substituentú A^ nebo Ag je skupina R^CO nebo R2OCO, znamená druhý H, každý substituent a nezávisle na druhém znamená H, F, Cl, Br, OH, CH^ nebo CF^ s tou podmínkou, že alespoň jeden ze substituentú X^ a X₂ musí být H, znamená Phe nebo Tyr a

   A^ znamená OH, NHg nebo NH-R^, kde R^ je nasycený alifatický alkyl s 1 až 8 atomy uhlíku, nebo její farmaceuticky přijatelné sole.

   -lo2. Sloučenina podle nároku 1, kde každý ze substituentů q nezávisle na druhém znamená H, nebo nasycený alifatický alkyl s 1 až 3 atomy uhlíku, každý substituent Xýa ^X2 ^nezávisle na druhém znamená H, F, Cl nebo OH s tou podmínkou, že alespoň jeden ze substituentů X^ a X^ musí znamenat H a znamená alifatický alkyl s 1 až 3 atomy uhlíku, nebo její farmaceuticky přijatelné sole.
3. 3. Sloučenina podle nároku 2, mající vzorec

   D-Phe-Cys -Phe-D-Trp-Lys -Thr-Cys - /jjNal-N^ nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.
4. 4. Sloučenina podle nároku 2, mající vzorec

   D-Phe-Cys -Tyr-D-Trp-Lys -Thr-Cys- /^-Nal-NH^ nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.
5. 5. Sloučenina vzorce

   D-/3 Nal-Cys -Phe-D-Trp-Lys -Thr-Cys -Thr-NH₂ nebo

   D - Na 1 -Cys -Tyr-D-Trp-Lys -Thr-Cys -T hr -N^ nebo její farmaceuticky přijatelná sůl

   -116. Terapeutická kompozice schopná inhibice uvolňování GH, epidermálního růstového faktoru, inzulinu, glukagonu, prolaktinu, exokrinních sekrecí z pankreatu, žaludku nebo střev, tachykiningu a substance P, vyznačující se t í m, že obsahuje terapeuticky účinné množství slouče niny podle nároku 1 nebo 5, spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem substance.
6. 7. Terapeutická kompozice podle nároku 6, vyzná ču jící se t í m, že je schopná inhibice uvolňování GH.
7. 8. Terapeutická kompozice podle nároku 6, vyzná ču jící se t í m, že je ve formě kapaliny, pilulek, tablet nebo kapslí pro orální podání této kompozice v případě potřeby lidským pacientům.
8. 9. Terapeutická kompozice podle nároku 6, vyznač jící se t í m, že je ve formě krému, gelu, lotionu, spreje nebo masti pro aplikaci na kůži lidským pacientům v případě potřeby.
9. 10. Terapeutická kompozice podle nároku 6, vyzná ču jící se t í m, že je ve formě kapaliny vhodné pro nasální podání jako kapky nebo sprej lidským pacientům v případě potřeby.
10. 11. Terapeutická kompozice podle nároku 6, vyznaču jící se t í m, že je ve formě kapaliny pro intravenoz ní, subkutánní, parenterální nebo intraperitoneální podání lidským pacientům v případě potřeby.
11. 12. Terapeutická kompozice podle nároku 6, vyznaču jíl c í se t í m, že je ve formě biodegradabilního přípravku s udržovaným uvolňováním pro intrámuskulární podání lidským pacientům v případě potřeby.

    -12*
12. 13. Terapeutická kompozice podle nároku 6, v y z n a č uj í c í se tím, že obsahuje lipofilní sůl a je vhodná pro podání ve formě olejové emulze nebo disperze lidským pacientům v případě potřeby.
13. 14. Způsob léčení savců v případě potřeby redukce GN, epidermálního růstového faktoru, inzulinu, glukagonu, prolaktinu, exokrinních sekrecí z pankreatu, žaludku nebo střev, tachykiningu a substance P, vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinného množství sloučeniny podle nároku 1 nebo nároku 5 těmto savcům.