CZ69497A3

CZ69497A3 - Contrast agent

Info

Publication number: CZ69497A3
Application number: CZ97694A
Authority: CZ
Inventors: Jo Klaveness; Pal Rongved; Per Strande
Original assignee: Nycomed Imaging As
Priority date: 1994-09-06
Filing date: 1995-09-06
Publication date: 1997-10-15
Also published as: AU3396695A; DE69526093D1; NO970995D0; CN1157573A; NO313270B1; IL115181A; ATE214948T1; JPH10505082A; HUT77368A; BR9508888A; AU701907B2; WO1996007434A1; CA2199047A1; EP0779821A1; ES2174958T3; ZA957471B; NO970995L; DE69526093T2; US5990263A; CN1079266C

Description

Kontrastní prostředek

Oblast techniky

Vynález se týká nových kontrastních prostředků, zvláště nových 5 kontrastních prostředků, založených na polymerech s obsahem plynu pro použití při diagnostickém zobrazování, a jejich nových polymerních součástí.

Dosavadní stav techniky

Publikovaná mezinárodní patentová přihláška WO 93/17718, jejíž obsah se zde uvádí jako reference, popisuje kontrastní prostředky, obsahující polymerní mikročástice a/nebo mikrobalónky obsahující plyn nebo vytvářející plyn, vyznačené tím, že polymerem je biodegradovatelný polymer, obsahující jednotky vzorce

-(0)m-C0-0-C(R¹R²)-0-C0-(0)_n- (I) is kde R¹ a R² každý představují atom vodíku nebo uhlíkem připojenou jednovaznou organickou skupinu nebo R¹ a R² spolu tvoří uhlíkem připojenou dvojvaznou organickou skupinu, a m a n každé znamenají 0 nebo 1. Takové kontrastní prostředky, které mohou být použity v diagnostických aplikacích jako je zobrazení ultrazvukem a

MR, vykazují dobrou stabilitu při skladování, spojenou s dobrou stabilitou a kontrastním účinkem in vivo po podání, často v průběhu několika oběhů. Kontrastní prostředky jsou však snadno in vivo biodegradovatelné díky náchylnosti jednotek vzorce (I) k degradaci běžnými esterázovými enzymy.

2s Předkládaný vynález se týká kontrastních prostředků, které spadají do celkového rámce výše uvedené WO 93/17718, ale které tam nejsou specificky popsány. Tato nová třída kontrastních prostředků je

-2zvláště výhodná pro svou vynikající stabilitu a kontrastní účinek in vivo a pro skutečnost, že se prostředky v těle degradují na produkty, které jsou dobře tolerovány a ve většině případů jsou endogenní.

Podstata vynálezu

Podle jednoho aspektu předkládaného vynálezu se poskytují kontrastní prostředky, zahrnující polymerní mikročástice a/nebo mikrobalónky s obsahem plynu, vyznačující se tím, že polymerem je biodegradovatelný polymer, sestávající z opakujících se jednotek vzorce (II).

CH₃

I

-O-(CH₂)_a-CO-O-CH-O-CO-(CH₂)_a-O-CO-(CH₂)_b-CO- (II) kde a představuje celé číslo v rozmezí 9-19, např. 13 - 17, a b představuje celé číslo v rozmezí 1 - 8, např. 3-6. Bylo zjištěno, že takové kontrastní prostředky mají při testech na zvířatech velmi ostrý kontrastní účinek při ultrazvukovém zobrazování, např. poskytnutím jak zvýšení kontrastu myokardu u psů ve všech částech ventrikulární stěny, tak i vynikající zvýšení kontrastu ledviny. Echogenicita také může být zachována po pohlcení kontrastních prostředků retikuloendoteliálním systémem, což dovoluje použití prostředků pro zobrazování makrofágů.

Kontrastní prostředky podle vynálezu mají vynikající stabilitu při skladování, zachovávají např. svou echogenicitu ve vodné suspenzi osm týdnů při 25 °C. Jsou však po podání rychle degradovány a vylučovány z těla, např. v játrech mají poločas 1-2 dny.

Bude výhodné, že hlavní in vivo degradační produkty polymerů, obsahujících opakující se jednotky vzorce (II) budou ω-hydroxykyseliny vzorce H0.(CH₂)_a.C00H (kde a je jak definováno výše), dikyseliny vzorce H00C.(CH₂)_b.C00H (kde b je jak definováno výše) a acetaldehyd. Acetaldehyd je endogenní substance, která se bude in vivo oxidovat na kyselinu octovou, jak je tomu u metabolismu

-3 ethanolu. Celá čísla a a b mohou být s výhodou zvolena tak, aby vznikly endogenní ω-hydroxykyseliny a dikyselíny; tedy např. polymery, ve kterých a = 15ab = 4se budou degradovat na kyselinu 16-hydroxypalmitovou a kyselinu adipovou, které jsou obě endogenní.

Kontrastních prostředků podle vynálezu je možno použít v řadě diagnostických zobrazovacích technik, včetně ultrazvukového, MR (magnetická rezonance) á rentgenového zobrazování. Jejich použití v diagnostickém ultrazvukovém zobrazování a zobrazování MR, např. jako susceptíbilitní kontrastní prostředky, tvoří hlavní rysy tohoto vynálezu.

V kontrastních prostředcích podle vynálezu je možno použít jakéhokoliv biokompatibilního plynu, např. vzduchu, dusíku, kyslíku, vodíku, oxidu dusného, oxidu uhličitého, helia, argonu, hexafluoriďu síry, nízkomolekulárních popř. fluorovaných uhlovodíků jako je methan, acetylen, tetrafluorid uhličitý, a jiné perfluoroalkany, jako je perfluoropropan, perfluorobutan a perfluoropentan a směsí kterýchkoli z předcházejících plynů. Plyn může být uvnitř mikrobublin volně nebo může být pohlcen nebo stržen látkou, kterou částice obsahují. Termín „plyn“, jak se zde používá, zahrnuje jakékoliv látky v

2o plynném (včetně par) stavu od 37 °C.

Pro ultrazvukové aplikace jako je echokardiografie může být výhodné použít mikrobublinky s průměrnou velikostí 0,1 -10 pm, např. 1 - 7 pm, aby byl umožněn volný prostup pulmonárním systémem a aby bylo dosaženo rezonance s výhodnou zobrazovací frekvencí přibližně 0,1 - 15 MHz. V jiných aplikacích, např. gastrointestinálním zobrazování nebo vyšetřeních uteru nebo Fallopianových trubic může být výhodné použití podstatně větších bublin, např. s průměrnou velikostí až do 500 pm.

Kontrastní prostředky podle vynálezu mohou obsahovat

3o přídavné látky, jako jsou emulgační prostředky, povlékací prostředky, plastifikátory, objemotvorné prostředky, kryoprotektivní látky a/nebo

-4antioxidanty, např, pro modifikaci jejich stability, dispergovatelnosti, sklonům k agregaci, biologických vlastností atd. nebo pro modifikaci pružnosti a /nebo polarity membrány.

’ Představiteli emulgačních prostředků jsou mastné kyseliny (např, mastné kyseliny s přímým řetězcem, nasycené nebo nenasycené, obsahující např. 10 - 20 atomů uhlíku) a jejich uhlovodíkové a triglyceridové estery; proteiny jako je želatina nebo lépe lidský sérový albumin; fosfolipidy, např. lecithin; polysacharidy jako škrob, modifikovaný (např. lipofilizovaný) škrob nebo arabská jo guma; a povrchově aktivní polymery jako polyvinylalkoholy, polyethylenglykoly a blokové kopolymery (včetně prodloužených polymerů), např. blokové kopolymery poly(oxyethylen)poiy(oxypropylen)-poly(oxyethylen), jako jsou látky. Pluronic........

Pokud se použije povrchově aktivních látek na bázi blokových kopolymerú (včetně prodloužených polymerů), mohou obsahovat biodegradovatelná spojení vzorce (I), jak je definováno výše, např. ve kterých R¹ a R² (pokud jsou různé od vodíku) mohou každý představovat uhlíkem připojenou hydrokarbylovou nebo heterocyklickou skupinu, např. s až 20 atomy uhlíku, např. alifatickou skupinu jako je alkylové nebo alkenylová skupina (s výhodou s až 10 atomy uhlíku), cykloalkylová skupina (s výhodou s až 10 atomy uhlíku), aralifatická skupina jako je aralkylová skupina (s výhodou s až 20 atomy uhlíku), arylová skupina (s výhodou s až 20 atomy uhlíku) nebo heterocyklická skupina obsahující až 20 atomů uhlíku a jeden nebo více heteroatomů zvolených z kyslíku, síry a dusíku. Takové hydrokarbylové nebo heterocyklické seskupení může nést jednu nebo více funkčních skupin jako je atom halogenu nebo skupiny vzorců NR³R⁴, -CONR³R⁴, -OR^S, -SR⁵ a -C00R⁶, kde R³ a R⁴ každý znamenají atom vodíku, acylové skupiny nebo hydrokarbylové skupiny

3o jak je definováno pro R¹ a R²; R⁵ je atom vodíku, acylová skupina nebo skupina jak je definována pro R¹ nebo R²; a R⁶ je atom vodíku

-5 nebo skupina jak je definována pro R¹ nebo R². Kde R¹ nebo R²znamenají dvojvazné seskupení, může jím být např. alkyiidenová, aikenylidenová, alkyienová nebo alkenylenová skupina (s výhodou s až 10 atomy uhlíku), která může nést jednu nebo více funkčních skupin, jak jsou definovány výše.

Přítomnost jednotek vzorce (I), ve kterých R^{1 a} R² jsou zvoleny z atomů vodíků a methylových skupin, např. kde R¹ představuje atom vodíku a R² představuje methylovou skupinu může být v takových blokových kopolymerech výhodná; může také být výhodné zvolit io jednotky, ve kterých man znamenají nulu.

Smáčedla na bázi blokových kopolymerů mohou obsahovat dva nebo více bloků s rozdílnou lyofilicitou, např. v lineárním diblokových, triblokových nebo muitiblokových oblastech, např. typu A-B, A-B-A, BA-B nebo Α-ΒΆ-Β-Α, kde A a B znamenají polymerní bloky s rozdílnou lyofilicitou, s výhodou bloky hydrofiiní, popřípadě hydrofobní. Mohou být také použity větvené struktury, např. typu

a makrocyklické struktury, např. typu ^AZZ?

Hydrofiiní bloky v takových povrchově aktivních látkách na bázi blokových kopolymerů mohou být například odvozeny z polymerů jako jsou polysacharidy, polyalkoholy (např. polyvinylalkohol), polyvinylpyrrolidony, polyethylenglykoly a polyaminokyseliny. Polymery jako polyorthoestery, polyacetaly, polyanhydridy, polyglykolové kyseliny, poly(meth)akrylové kyseliny a jejich deriváty, jako jsou estery, substituované podle nutnosti hydrofilními skupinami, mohou být užitečné rovněž. Hydrofiiní bloky mohou s výhodou χ sestávat v podstatě z polyethylenglykolových jednotek.

-6Hydrofobní bloky v takových povrchově aktivních látkách na bázi blokových kopolymeru mohou být např. odvozeny z v oleji rozpustných kondenzačních, iontově nebo pomocí volných radikálů generovaných polymerů, např. esterů, poly(meth)akrylátu, s polyorthoesterů, vinylových a styrenových polymerů, polyacetalů, polyanhydridů, polyglykolových kyselin a jejich etherů a esterů a kopolymerů kyselin polymléčné/polygiykolové; takové polymery mohou např. obsahovat nebo být substituovány pro zvýšení jejich hydrofobicity hydrofobními skupinami, jako jsou skupiny aíkylové, aralkylové nebo arylové. Hydrofobní bloky mohou s výhodou obsahovat polyesterový řetězec obsahující jednu nebo více alifatických skupin s dlouhým řetězcem (např. C10-20 polymethylenové skupiny) spojené jednotkami a/nebo obsahující jednotky vzorce (I). Takové hydrofobní bloky mohou být oligomerní nebo kvazipolymerní, jak je tomu v prodloužených polymerech a jako takové mohou zahrnovat monomerní skupiny, které mohou např. vykazovat vlastnosti polymerů (např. jako výsledek přítomnosti jednotek s dlouhým řetězcem) a přitom nemít přísně definované opakující se jednotky.

Jedna z výhodných tříd povrchově aktivních látek na bázi blokových kopolymerů tedy zahrnuje kopolymery, obsahující jako hydrofilní bloky jednotky poiyethylenglykolu, v hydrofobní části, jako prodlužující skupinu nebo jako skupinu v olígomerním nebo polymerním bloku jednotky vzorce

-R^a-(CH₂)_a-CO-O-CH(CH₃)-O-CO-(CH₂)_a-R^b- (III) kde a je jak definováno výše a R^a a R^b každý představují valenční vazby nebo spojovací skupiny, jako jsou karbonylové skupiny nebo zbytky dikyselin vzorce -O-C0-(CH₂)b-C0-O-, kde b je jak definováno výše.

Jiné výhodné třídy povrchově aktivních látek zahrnují polyethylenglykoly acylované mastnými kyselinami, jako je MYRJ® a prodloužené polymery, obsahující methoxylem zakončený

-7polyeíhylenglykolový hydrofilní blok, acylovaný hydrofobní skupinou, obsahující řetěz dvou nebo více mastných kyselin, např. skupinu acyloxyacylovou, jako je 16-hexadekanoyloxyhexadekanoyl.

Představiteli objemotvorných prostředků a kryoprotektivních 5 látek jsou alkoholy, např. alifatické alkoholy, jako t-butanol, polyoly jako glycerol, cukry jako sacharóza, mannitol, trehalóza nebo cyklodextriny a polyglykoly, jako je..po.ly.ethylengl.ykoL

Představiteli ochranných látek jsou antioxidanty.

Kontrastní prostředky podle vynálezu je možno připravit řadou 10 způsobů, např. jak se popisuje v WO 93/17718, např. vnesením plynu do biodegradovatelného polymeru obsahujícího opakující se jednotky vzorce (II), aby došlo k vytvoření polymerních mikročástic a/nebo mikrobaiónků.

Jedna z použitelných metod odpovídá technice is mezipovrchového ukládání, popisované v EP-A-0398935 a EP-A0458745 a zahrnuje rozpouštění nebo suspendování polymeru ve s vodou nemísitelném organickém rozpouštědle, emulgaci (např. vysokorychlostním mícháním nebo mixováním s vysokými střižnými silami) vzniklého roztoku nebo suspenze ve vodné fázi, s výhodou v

2o přítomnosti povrchově aktivní látky pro stabilizaci výsledné emulze oleje ve vodě, a popřípadě odstranění alespoň jedné organické fáze, s výhodou obou fází (např. odpařením nebo lyofilizací, s výhodou v atmosféře plynu, který má být vnesen, např. za sníženého tlaku), přičemž polymer vytvoří membránu na rozhraní mezi vodou a organickou fází.

Organická rozpouštědla, použitelná u těchto způsobů, zahrnují alifatické, cykloalifatické a aralífatické uhlovodíky, obsahující např. až 10 atomů uhlíku, např. n-oktan, cyklooktan, cyklohexan, dimethylcyklohexan, ethylcyklohexan, methylheptan, ethylhexan,

3o toluen, xylen nebo terpen, terpenoid nebo izoprenoid, jako je kamfen nebo límonen; halogenalkany, jako jsou dichlormethan, chloroform,

-8chíorid uhličitý, methylbromid nebo Freon; estery, jako je ethyl nebo propylacetát, butylformát nebo propyl nebo izopropylbutyrát nebo izobutyrát; a vhodné ethery a jiná lipofilní rozpouštědla. Výhodná jsou rozpouštědla jako je kamfen, protože jsou biologicky tolerována, takže není nutné odstranit před podáním kontrastního prostředku všechny zbytky rozpouštědla. Taková rozpouštědla s vysokou teplotou tání mohou být také výhodná ve způsobech, ve kterých je emulze zmrazená a lyofilizována, protože za těchto podmínek rychle tuhnou a tak mohou zvýšit strukturní integritu vznikajícího kontrastního prostředku na bázi mikročástic.

Jak je uvedeno výše, postup emulgace je s výhodou ovlivňován přítomností povrchově aktivní látky. Takové emulgační prostředky a/nebo jiné přídavné: látky, např: jak se popisují výše, mohou být s výhodou předem rozpuštěny ve vodné fázi.

Před odstraněním fáze může být výhodné podrobit emulzi filtraci a/nebo vytlačování (extruzi), např. tryskou nebo jednou nebo více membránami s vhodnou velikostí pórů, aby se zvýšila uniformita distribuce velikostí mikročástic a/nebo mikrobalónkú, která se v konečné fázi získá.

2o Kontrastní prostředky podle vynálezu mohou být skladovány a přepravovány v suchém stavu, kdy budou normálně dlouhodobě stabilní, a před podáním smíseny s vhodným kapalným nosičem (např. sterilní voda pro injekce, fyziologický roztok nebo fosfátový pufr). Tímto způsobem může být v závislosti na přesné povaze aplikace měněna koncentrace injikované nebo jinak podávané kontrastní látky. Prostředky mohou také být skladovány v suspenzi v takových nosičích, kde jsou ve vodném médiu v nepřítomnosti esterázových enzymů prakticky úplně stabilní.

Polymery, obsahující opakující se jednotky vzorce (II), jak je

3o definováno výše, jsou produkty samy o sobě nové a vytvářejí další předmět vynálezu. Stejně jako jsou užitečné jako výchozí materiály

-9 pro přípravu kontrastních látek podle vynálezu, mohou být takové polymery použity jako nebo v např. chirurgické implantáty jako jsou nitě, měkké tkáňové náhrady, houby, filmy (např. umělá kůže), povlaky na rány (např. hydrogelové vrstvy), pružné vrstvené materiály a s předměty, jako jsou z nich vytvořené nádoby, prostředky se zpožděným uvolňováním pro léčiva a zemědělské chemikálie,

- částicové zobrazovací prostředky nebo plastifikátory.

Nové polymery mohou být připraveny jakýmkoliv vhodným způsobem, např. reakcí reaktivního derivátu jako dihalogenid nebo dikyselina vzorce

H00C.(CH₂)_b.C00H i

. kde.b je jak definováno výše, s diolem vzorce

HO.(CH₂)_a.CO.O.CH(CH₃).O.CO.(CH₂)_a.OH kde a je jak definováno výše, např. ve vhodném organickém is rozpouštědle. Samotný diol může být připraven reakcí ethylidenhalogenidu, jako je jodíd, se dvěma moly ω-hydroxykyseliny

H0(CH₂)₃.C00H, např. v přítomnosti báze.

Následující neomezující příklady slouží pro ilustraci tohoto vynálezu.

	Příklady provedení vynálezu
........5·	PŘÍKLAD 1 - Příprava meziproduktů a) Ethvliden-bis-(16-hvdroxvhexadekanoát) 1,8-diazabicyclo [5,4,0]undec-7-en (1,5-5) (DBU) (2,74 g, 0,018
ΐ	mo!) bylo přidáno ke kyselině 16-hydroxyhexadekanové (4,90 g, 0,018 mol) v dimethylformamidu (150 ml). Po 5 min byl přidán na míchání ethylidenjodid (2,54 g, 0,009 mol) a směs byla za míchání ponechána při 40 °C po dobu 3 dnů. Reakční směs byla ochlazena na 20 °C a
10	když bylo srážené u konce (2 hod), vysrážený monomer byl izolován filtrací. Monomer byl čištěn-aktivním uhlím za poskytnutí 1,03 g (20 %) v názvu uvedeného produktu. Diferenciální skanovací kalorimetrie
15	(DSC) ukázala, že počáteční teplota tání je 88,93 °C. ¹H NMR (200 MHz, CDCI₃) : δ 1,25 (s, 44 H, CH₂), 1,45 (d, 3 H, CH3CH), 1,56 (m, 8 H, CH₂), 2,30 (t, 4 H, CH₂CO), 3,63 (t, 4 H, 2 X CH₂O), 6,86 (q, 1 H, CHCH3). ¹³C NMR (50 MHz CDCI3) δ 20,86, 25,91, 26,98, 30,22, 30,44, 30,67, 30,84, 34,00, 35,30, 64,00, 89,00, 171,77 (C=O).
20	b) Ethvliden-bis-(16-hvdroxvhexadekanoát) Do tříhrdlé baňky s kulatým dnem, opatřené zpětným chladičem, skleněnou trubicí pro vstup plynu a přikapávací nálevkou pro
2S	vyrovnání tlaku byl vložen čerstvě destilovaný adipoylchlorid (2,60 ml, 17,50. mmol), rozpuštěný v absolutním chloroformuu (15 ml). Teplota byla zvýšena na přibližně 50 °C a za mírného proudu dusíku skrz roztok byl po kapkách přidáván roztok ethyliden-bis-(16hydroxyhexadekanoátu) (1,0 g, 1,75 mmol) y absolutním chloroformu (30 ml) a směs byla při této teplotě ponechána ještě další tři hodiny po přídavku. Směs byla poté ochlazena na pokojovou teplotu a rychle

-11 převedena do 50 ml kulaté baňky, vybavené pro destilaci za sníženého tlaku. Chloroform byl nejprve oddestilován při normálním tlaku, potom byla uvedena do činností olejová pumpa a přebytečný adipoylchlorid oddestilován při teplotě přibližně 75 °C, a tlaku 500 Pa za vzniku (1,56g) v názvu uvedené sloučeniny.

c) 16-Hydroxyhexadekanová kyselina

I

16-Hydroxyhexadekanová kyselina (5,43g, 19,9 mmol) byla rozpuštěna v tetrahydrofuranu (190 ml) a byl přidán pyridin (2,36 g, 29,9 mmol). Paimitoylchlorid (5,48 g, 19,9 mmol) byl rozpuštěn v tetrahydrofuranu (10 ml) a po kapkách přidáván při pokojové teplotě. Po 16 hodinovém míchání při pokojové teplotě byla směs zfiltrována a filtrát odpařen za sníženého tlaku. Zbytek byl rozpuštěn v chloroformu, promyt vodou (3 x 50 ml), a organická fáze byla sušena (MgSOzt). Po odpaření za sníženého tlaku byl zbytek čištěn na koloně silikagelu, eluován chloroformem se stoupající koncentrací methanolu (od 1 % do 2 % methanolu v chloroformu) za vzniku 8,41 g (83 %) v názvu uvedené sloučeniny. ¹H NMR (300 MHz, CDCI3) : 8 0,85 (t, 3 H, CH3), 1,20-1,35 (s, 46 H, -CH₂-), 1,55-1,70 m, 6 H, -CH₂-), 2,25 (t, 2 H, CH₂-C(O)-O), 2,45 (t, 2 H, CH₂-COOH), 4,05 (t, 2 H, -O-CH₂). ¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): 8 14,01, 22,57, 24,10, 24,91, 25,82, 28,53,

28,75, 28,94, 29,08, 29,15, 29,25, 29,36, 29,54, 31,81, 34,29, 35,16, 64,27, 76,48, 76,90, 77,10, 77,32, 169,50, 173,91.

d) Chlorid kyseliny 16-hexadekanoyloxvhexadekanové

Kyselina 16-hexadekanoyloxyhexadekanová (7,73g, 15,13 mmol), připravená podle odst, (c) výše byla rozpuštěna v tetrahydrofuranu (140 ml) a po kapkách byl přidáván oxalylchlorid (4,80 g, 37,83 mmol). Směs byla míchána 3 dny při pokojové teplotě a

-12potom bylo rozpouštědlo a nezreagovaný oxalylchlorid odpařeny za sníženého tlaku za poskytnutí 8,0 g (100 %) v názvu uvedené sloučeniny.

e) 1 -f16-( 16-hexadekanoyloxyhexadekanoyloxv)hexadekanovloxvlethyl-16-hvdroxvhexadekanoát

Ethyliden bis(16-hydroxyhexadekanoát) (4,38 g, 7,67 mmol) byl rozpuštěn v tetrahydrofuranu (80 ml) a byl přidán pyridin (0,61 g, 7,71 mmol). 16-hexadekanoyloxyhexadekanoylchloríd (4,18 g, 7,90 mmol) byl rozpuštěn v tetrahydrofuranu (20 ml) a po kapkách přidáván. Směs, byla po třech dnech při pokojové teplotě zfiltrována a filtrát byl ponechán při teplotě - 20 °C po dobu 2 hod. Vysrážený produkt byl zfiltrován a čištěn bleskovou chromatografií (silikagel, chloroform) za poskytnutí 2,4 g (29 %) v názvu uvedené sloučeniny. ¹H NMR.(300 MHz, CDCI₃) : S 0,85 (t, 3 H, CH₃), 1,2-1,4 (s, 90 H, -CH₂-), 1,45 (d, 3H, -O-CH(CH₃)-O-), 1,5-1,7 (m, 14 H, -CH₂-), 2,25 (m, 8 H, -CH₂C(O)-O-), 3,60 (t, 2 H, -CH₂-OH), 4,05 (t, 4 H, -C(O)-O-CH₂-), 6,85 (q,

H, -O-CH(CH₃) -O-). ¹³C NMR (75 MHz, CDCI₃) : δ 13,7, 19,1, 22,2,

24,2

33,7

24,6, 25,2, 25,5, 28,2, 28,5, 28,7, 28,8, 29,0, 29,2, 31,5, 32,3, 34,0, 62,5, 64,0, 88,0, 171,5, 173,5.

f) Příprava methoxylem zakončených polyethylenglvkolů (PEG)

Příprava polymeru (Tyical Polymer, MeO-PEG 2000)

Roztok iniciátoru byl připraven opatrným přidáváním kovového 25 draslíku (0,400 g, 10,23 mmol) k methanolu (1,300g, 40,57 mmol) v inertní atmosféře. Část tohoto iniciačního roztoku (0,220 g, 1,32 mmol methoxidu draselného) byla nastříknuta do ampule s ethylenoxidem (10,000 g, 227,00 mmol). Zatavená ampule byla ponechána stát při pokojové teplotě přes noc. Teplota byla pak zvýšena na 60 °C a

- 13 reakce ponechána probíhat 72 hod. Po odstranění nezreagovaného monomeru byl obsah ampule rozpuštěn v díchlormethanu a roztok neutralizován zředěným roztokem kyseliny chlorovodíkové. Roztok polymeru byl promyt třikrát destilovanou vodou, odpařen na rotační odparce a usušen ve vakuu. Hodnoty pro polymery MeO-PEG: 'HNMR: δ 2,7 (OH), 3,2 (OCH3 ), 3. 5 ( -CH₂ - main chain), 3,4 (CH₂OCH₃ ). ¹³NMR: g 58,5 (-OCH3 ), 61,2 (-CH₂OH), 70,5 (-CH₂main chain), 71,3 (-CH₂OCH₃ ),72,2 (-CH₂CH₂OH). Byla provedena GPC v THF a kalibrace molekulových hmotností standardy PEG. GPC data pro typický vzorek: Mp: 2679, Mn: 2012, Mw: 2283. Polydisperzita: 1,135.

g) Obecný způsob přípravy methoxy-PEG-chloroformátu

PEG 2000 monomethylether (6,00 g, 3,00 mmol) byl rozpuštěn v toluenu (50 ml) a sušen refluxováním v přístroji Dean Stark. Byl přidán pyridin (0,24 g, 3,00 mmol) při teplotě místnosti. Trichloromethylchloroformát (difosgen) (0,60 g, 3,00 mmol) byl rozpuštěn v toluenu (10 ml) a po kapkách přidáván. Směs byla míchána při pokojové teplotě 12 hod a zfiltrována. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny v kvantitativním výtěžku.

Příklad 2 - Příprava polymerů a emulgátorů

a) Polymer z ethyliden bis(16-hydroxyhexadekanoátu) a adipoylchloridu

Roztok adipoylchloridu (0,48 g, 2,6 mmol) v xylenu/trichloroethylenu (80:20 v/v, 5ml) byl přidán k roztoku ethyliden bis(16-hydroxyhexadekanoátu) (1,48 g, 2,6 mmol) z příkladu 1(a) výše v xylenu/ trichloroethylenu (80:20 v/v, 100 ml) při 60 °C. Po 2 dnech

- 14 při 60 °C za sníženého tlaku (14 700 Pa), 20 °C. Rozpouštědlo bylo za sníženého tlaku odpařeno, vzniklý polymer byl rozpuštěn v chloroformu, reprecipitován v hexanu a zfiltrován za poskytnutí 1,05 g (60 %) v názvu uvedené sloučeniny jako bílého prášku. Size Exclusion s Chromatography (SEC): Mw=39068, Mn=9442, Mp-48536,

Mw/Mn=4,138 (s použitím polystyrenu jako standardu). Diferenciální skanovací kalorimetrie (DSC) ukázala, že počáteční bod tání je 48,61 °C. ¹H NMR (200 MHz, CDCI3 ) : δ 1,2 8 (s, 44 H, CH₂), 1,45 (d, 3 H, CH3CH), 1,62 (m, 12 H, CH₂), 2 ,32 (m, 8 H, CH₂CO), 4,02 (t, 4 H, 2

X CH₂O), 6,88 (q, 1 H, CHCH3). ¹³C NMR (50 MHz, CDCI3) : δ 20,85,

25,64, 25,68, 25,89, 27,16, 29,84, 30,15, 30,21, 30,44, 30,81- 35,08,

35,12, 35,27, 65,45, 88,98, 171,77 (C=O), 173,41 (C=O).

b) Prodlouženy polymer PEG 1500, adipoylchloridu a ethvliden15 bÍs-(16-hydroxvhexadekanoátuKQ,37 : 1,85 : 1,75) s náhodným řetězcem, multiblok

K suspenzi ethyliden- bis-(16-hydroxyhexadekanoátu) (1,0 g, 1,75 mmol) v dimethoxyethanu (10 ml) byl při pokojové teplotě přidán čerstvě destilovaný adipoylchlorid (270 μΙ, 1,85 mmol): Teplota směsi byla postupně zvyšována až na 60 °C, a byl získán bezbarvý roztok. Po 5 hod při této teplotě byl přidán PEG 1500 (0,55 g, 0,37 mmol) a v zahřívání bylo pokračováno dalších 17 hod, kdy byla směs ochlazena na pokojovou teplotu, rozpouštědlo odpařeno a pevný zbytek míchán 15 min v petroletheru (teplota varu 40 - 60 °C) a zfiltrován za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (1,30 g) jako bílé pevné látky.

c) Prodloužený polymer z PEG 1500 a ethvliden-bis-f16-(5chlorokarbonvlpentanoyloxv)-hexadekanoát1

-15Ethyliden-bis-[16-(5-ch!orokarbonyipentanoy!oxy)hexadekanoát], připravený v příkladu 1b) (0,88 g, 1,02 mmoi) byl rozpuštěn v toluenu (15 ml) ve 100 ml 3-hrdlé kulaté baňce, opatřené skleněnou trubicí pro přívod plynu a zpětným chladičem. Byl přidán s PEG 1500 (3,06 g, 2,04 mmol) a směs byla zahřívána na 60 °C po dobu 22 hod, ochlazena na pokojovou teplotu a rozpouštědlo bylo odstraněno za sníženého tlaku za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (4,12 g) jako bílého vosku.

io d) Prodloužený polymer PEG 1500 a ethyliden-bis-f16-(5chlorokarbonvlpentanoyloxv)-hexadekanoátu1 (multiblok)

Reakce byla provedena jako v příkladu 2 c), ale s ethyliden-bis16-(5-čhlorokarbonylpehtanoyloxy)hexadekanoátem (1,02 g, 1,18 mmol) v toluenu (20 ml) a PEG 1500 (1,77 g, 1,18 mmol) za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny (2,29 g) jako bílého vosku.

e-h) Prodloužený polymer PEG, kyseliny adipové a ethylidenbis-(16-hydroxyhexadekanoátu) (náhodný multiblok)

Roztok PEG se vhodnou molekulovou hmotností (A) (2,07 mmol) 20 v uvedeném rozpouštědle (26 ml) byl pomoci stříkačky přidán do kulaté baňky, obsahující ethyliden-bis(16-hydroxyhexadekanoát) (B) (118 mg, 0,207 mmol), v atmosféře dusíku. Výsledná směs byla ohřátá na 60 ’C, a když byl získán čirý roztok, pomocí stříkačky byl přidán adipoylchlorid (C) (417 mg, 2,277 mmol). Tlak byl snížen na 25 kPa a roztok byl míchán po uvedenou dobu při 60 °C. Přebytečný chlorovodík, který vznikal při reakci a rozpouštědlo byly odstraněny na rotační odparce za sníženého tlaku při 60 °C po dobu 3 hod a poté pod vakuem (> 13,3 Pa) při 60 °C po dobu 24 hod. Nakonec byl polymer vysrážen z acetonového roztoku přídavkem petroletheru a

-16chlazením na vodní lázni po dobu 2 hod. Filtrace poskytla 3,5 g polymeru jako bílé voskovité látky.

Touto metodou byly připraveny celkem čtyři rozdílné blokové kopolymery, odlišující se molekulovou hmotností výchozích PEG; ₅ podmínky specifické pro každou polymeraci jsou udány v tab. 1 níže, 1*0 NMR- and 1h NMR-spektra polymerů byla ve shodě s očekávanými produkty.

Tabulka 1

Vstup	M.h. výchozího PEG	Molární poměr ' ' A:3:C¹ '	Rozpouš- tědlo	Reakční doba (hod)
e	400 /	10:1:11	diglym-xylen	21
f	600	10:1:11	diglym	24
9	1500	10:1:11	dimethoxy- ethan	21
h	2000	10:1:11	1,1,2-trichlor ethylen	92

ίο -¹) písmena označují reaktanty, jak jsou specifikovány v textu výše.

i) PEG 2300 methviether-16-hexadekanoyloxvhexadekanoát

PEG 2300 methylether (10,000 g, 4,35 mmol) byl rozpuštěn v 15 tetrahydrofuranu (90 ml) a byl přidán pyridin (0,413 g, 5,22 mmol). Po kapkách byl přidáván 16-hexadekanoyloxyhexadekanoylchlorid (2,301 g, 4,35 mmol), rozpuštěný v tetrahydrofuranu (10 ml). Po míchání po dobu 3 dnů při pokojové teplotě byla směs zfiltrována a rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku. Zbytek (12,08 g) byl

-17čištěn na koloně silikagelu, eluován chloroformem se stoupající koncentrací methanolu (od 1 % do 3 % methanolu v chloroformu) za poskytnutí 5,20 g (43 %) v názvu uvedené sloučeniny. NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,80-0,87 (m, CH₃), 1,21 (s, (br), CH₂), 1,53-1,62 (m,

CH₂), 2,20-2,35 (m, CH₂CO), 3 ,34 (s, CH3O), 3,61 (s, OCH₂CH₂O ),

4,02 ( t, COOCH₂CH₂O ), 4,19 ( t, COOCH₂CH₂O ). ¹³C NMR (75

MHz, CDCI₃) : δ 13,95, 22,49, 24,71, 24,83, 25,74, 28,45, 28,95, 29,07, 29,16, 29,28, 29,34, 29,40, 29,46, 31,72, 34,05, 34,21, 58,85, 63,15, 64,19, 69,01, 70,37, 71,73, 173,64, 173,82.

j) PEG 5000 methvlether 16-hexadekanoyloxyhexadekanoátu)

PEG 500Ó methylether (7,500 g, 1,50 mmol) byl rozpuštěn v toluenu (90 ml) a pod zpětným chladičem sušen v přístroji Dean Stark. Byl přidán pyridin (0,143 g, 1,80 mmol) a potom byl po kapkách přidáván 16-hexadekanoyloxyhexadekanoylchlorid (1,191 g, 2,25 mmol), rozpuštěný v toluenu (10 ml). Směs byla pod zpětným chladičem zahřívána za míchání po dobu 3 dnů, poté byla ochlazena na pokojovou teplotu a vysrážena do hexanu. Po filtraci byla sraženina promyta hexanem a sušena (MgSO₄). Po odpaření za sníženého tlaku byl zbytek čištěn na koloně silikagelu s elucí chloroformem se vzrůstající koncentrací methanolu (od 1 % do 3. % methanolu v chloroformu) za poskytnutí 5,93 g (72 %) v názvu uvedené sloučeniny. ^H NMR (300 MHz, CDCI3) : δ 0,82-0,86 (m, CH₃), 1,22 (s, (br), CH₂), 1,53-1,62 (m, CH₂), 2,20-2,35 (m, CH₂CO),

3,34 (s, CH3O), 3,61 ( s, OCH₂CH₂O ), 4,01 (t, COOCH₂CH₂O ), 4,18 (t, COOCH₂O).¹³C NMR (75 NBíz, CDCI3) : δ13,66, 22,21, 24,43,

24,54, 25,46, 28,17, 28,67, 28,79, 28,87, 28,99, 29,06, 29,11, 29,17, 31,44, 33,73, 33,93, 58,57, 62,87, 63,90, 68,72, 69,62, 69,86, 70,09, 71,45,76,85,173,35,173,53.

- 18k ) PEG 10 000 methylether 16-hexadekanovloxyhexadekanoát

PEG 10 000 methylether (7,500 g, 0,75 mmol) byl rozpuštěn v toluenu (140 ml) a byl přidán pyridin (0,107 g, 1,35 mmol). Roztok byl s zahříván na 60 ’C a po kapkách byl přidán 16hexadekanoyloxyhexadekanoylchlorid (0,595 g, 1,12 mmol) rozpuštěný v toluenu (10 ml). Směs byla pod zpětným chladičem zahřívána za míchání a po 3 dnech byla směs ochlazena na pokojovou teplotu a vysrážena do hexanu. Po zfiltrování byla sraženina promyta ió hexanem a usušena. Blesková chromatografie na koloně silikagelu s elucí 5 % methanolem v chloroformu poskytla 5,39 g (68 %) v názvu uvedené sloučeniny. ¹H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,84 (t, CH3), 1,21 (s, (br), CH₂), 1,55-1,60 (m, CH₂), 2,20-2,35 (m, CH₂CO), 3,34 (s, CH3O), 3,61 (s, OCH₂CH₂O), 4,01 (t, COOH₂CH₂O), 4,18 (t,

COOCH₂CH₂O ). ¹³C NMR (75 MHz, CDCI3): δ 13,94, 22,48, 24,70,

24.82, 25,73; 28,94, 29,05, 29,14, 29,26, 29,33, 29,39, 29,45, 31,71, 34,00, 58,84, 63,14, 68,99, 69,36, 69,86, 69,97, 70,01, 70,36, 70,74,

70.82, 70,86, 71,72, 77,10, 173,62, 173,80.

I) 1416-(16-hexadekanovloxvhexadekanovloxv)hexadekanovloxvl ethylester kyseliny 16-íťú-methoxy-PEG 2000karbonvloxvlhexadekanové

Methoxy PEG 2000 chloroformát (1,90 g, 0,95 mmol) byl rozpuštěn v toluenu (90 ml), a byl přidán pyridin (0,09 g, 1,13 mmol).

1[[16-(16-hexadekanoyloxyhexadekanoyloxy)hexadekanoyloxy]ethyl 16-hydroxyhexadekanoát (1,00 g, 0,95 mmol) byi rozpuštěn v toluenu (10 ml) a po kapkách přidáván. Směs byla zahřívána pod zpětným chladičem a po 10 hod míchání pod zpětným chladičem byla ochlazena na pokojovou teplotu a zfiltrována. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku. Zbytek byl čištěn na koloně silikagelu s

- 19elucí chloroformem se dvouprocentním methanolem za poskytnutí 1,00 g (35 %) v názvu uvedené sloučeninyJH-NMR (300 MHz, CDCI3 ) : δ 0,85 (t, CH3 ), 1,20-1,33 (m, CH₂), 1,45 (d, -O-CH(CH₃)-O), 1,5-1,7 (m, CH₂), 2,0 (H₂0), 2,2-2,3 (m, -CH₂-C(O)-O), 3,35 (s, CH₃-O-), 3,55 3,7 (s, -OCH₂CH₂O-), 4,03 (t, -C(O) -O-CH₂-), 4,10 (t, -CH₂-O-C(O) O-), 4,26 (m, -O-C(O)-O-CH₂-CH₂-O-), 6,8-6,9 (q, -O-CH(CH₃)-O).

¹³C-NMR (75 MHz, CDCI₃) : δ 13,7, 19,2, 22,1, 24,2, 24,6, 25,2,. 25,5,

28,2-29,2, 31,5, 33,9, 34,0, 58,7, 64,0, 66,3, 67,9, 68,5, 70,0, 71,5, 87,9,171,5,173,7.

. . ·

m) 1416-(16-hexadekanoyloxvhexadekanoyloxv)hexadekanoyloxvl ethylester kyseliny 16-foj-methoxy-PEG 5000karbonvloxvlhexadekanové

Methoxy PEG 5000 chloroformát (8,50 g, 1,70 mmol) byl rozpuštěn v toluenu (90 ml) a byl přidán pyridin (0,146 g, 1,85 mmol). 1 -[16-( 16-hexadekanoyloxyhexadekanoyloxy)hexaděkanoyloxy)ethyl 16-hydroxyhexadekanoát (1,79 g, 1,70 mmol) byl rozpuštěn v toluenu (10 ml) a po kapkách přidáván. Směs byla zahřívána a míchána pod zpětným chladičem, po třech dnech byla ochlazena na pokojovou teplotu a zfiltrována. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku a zbytek byl čištěn na koloně silikagelu, eluován chloroformem se stoupající koncentrací methanolu (od 3 % do 5 % methanolu v chloroformu) za poskytnutí 3,90 g (38 %) v názvu uvedené sloučeniny. ¹H-NMR (300 MHz, CDCI 3) : δ 0,85 (t, CH₃ ), 1,20-1,33 (m, CH₂),

1,45 (d, -O-CH(CH₃)-O), 1,5-1,7 (m, CH₂), 1,8 (H₂O), 2,2-2,3 (m, CH₂-C(O)-O), 3 ,35 (s, CH3-O-), 3,5-3,7 (s, -OCH₂CH₂O-), 4,03 (t, C(O)-O-CH₂-), 4,10 (t, CH₂-0-C(0)-0-), 4,26 (m, -O-C(O)-O-CH₂CH₂-O-), 6,8-6,9 (q, -O-CH₃)-O).

-20 η) 1-116-(16-hexadekanoyloxvhexadekanoyloxv)hexadekanovloxvl ethvlester kyseliny 16-fo)-methoxvPEG 10 QOO-karbonyloxvlhexadekanové

Methoxy PEG 10 000 chloroformát (7,50 g, 0,75 mmol) byl rozpuštěn v toluenu (90 ml) a byl přidán pyridin (0,063 g, 0,80 mmol). 1 -[16-(16-hexadekanoyloxyhexadékahoyEoxy)hexaděkanóyloxy)éthyí 16-hydroxyhexadekanoát (0,79 g, 0,75 mmol) byl rozpuštěn v toluenu (10 ml) a po kapkách přidáván. Směs byla zahřívána a míchána pod io zpětným chladičem, po třech dnech byla ochlazena na pokojovou teplotu a zfiltrována. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku a zbytek byl čištěn na koloně silikagelu, eluován chloroformem se stoupající koncentrací hnethánólu (od 3 % do 5 % methanolu v chloroformu) za poskytnutí 1,60 g (19 %) v názvu uvedené sloučeniny.

¹H-NMR (300 MHz, CDCI3 ) : δ 0,85 ( t, CH3 ), 1,20-1,33 (m, CH₂), 1,45 (d, -O-CH(CH₃) -O), 1,5-1,7 (m, CH₂), 2,2-2,3 (m, -CH₂-C(O)-O), 3,35 (s, CH3-O-), 3,5-3,7 (s, -OCH₂CH₂O-), 4,03 (t, -C(O)^O-CH₂), 4,10 (t, -CH₂-0-C(0)-0-), 4,26 (m, -0-C(0)-0-CH₂-CH₂-0-), 6,8-6,9 (q,-O-CH(CH₃)-O).

Příklad 3 - Příprava polvmerních částic

a) Polymemí částice, vyrobené z ethyliden-bis-(16hvdroxyhexadekanoátu) a adipoylchloridu ml roztoku 5 % hmotnost /objem polymeru z příkladu 2 a) v toluenu bylo přidáno ke 30 ml roztoku 5 % hmotnostních lidského sérového albuminu ve vodě. Tyto dvě fáze byly mixovány 1 min mixérem Ultra Turax® T25 při 20 000 ot/min, zmrazen v lázni suchý led/methanol a lyofilizovány 18 hod za poskytnutí nažloutlého prášku. Světelná mikroskopie ukázala vytvoření mikročástic.

-21 b) Polymerní částice, vyrobené z ethyliden-bis-(16hydroxyhexadekanoátu) a adipoylchloridu ml roztoku 10 % hmotnost /objem polymeru z příkladu 2 a) v s p-xylenu bylo přidáno ke 30 ml roztoku 5 % hmotnostních lidského sérového albuminu ve vodě. Směs byla mixována 1 min mixérem Ultra Turax® T25 při 20 0Ó0 ot/min, zmrazená v lázni suchý led/methanol a lyofilizována 18 hod za poskytnutí bílého prášku.

Světelná mikroskopie ukázala.vytvoření mikročástic.

c) Polymerní částice, /vyrobené z ethyliden-bis-(16- hydroxvhexadekanoátu) a adipoylchloridu - .

ml roztoku 5 % hmotnost /objem polymeru z příkladu 2 a) v pxylenu bylo přidáno ke 30 ml roztoku 5 % hmotnostních modifikovaného škrobu (Lyckeby, Švédsko, PU-24 000) ve vodě. Směs byla 1,5 min mixována mixérem Ultra Turax® T25 při 20 000 ot/min, zmrazená v lázni suchý led/methanol a lyofilizována 18 hod za? poskytnutí bílého prášku. Světelná mikroskopie ukázala vytvoření mikročástic.

d) Polymerní částice, vyrobené z ethyliden-bis-(16hydroxyhexadekanoátu) a adipoylchloridu ml roztoku 5 % hmotnost /objem polymeru z příkladu 2 a) v pxylenu bylo přidáno ke 30 ml roztoku 0,8 % hmotnostních polyvyinylalkoholu ve vodě. Směs byla 1 min mixována mixérem Ultra Turax® T25 při 20 000 ot/min, zmrazená v lázni suchý led/methanol a lyofilizována 18 hod za poskytnutí bílého prášku. Světelná mikroskopie ukázala vytvoření mikročástic. ,

-22e) Polymerní částice, vyrobené z ethyliden-bis-(16hvdroxyhexadekanoátu) a adipoylchloridu ml roztoku 5 % hmotnost /objem polymeru z příkladu 2 a) v pxylenu bylo přidáno ke 30 ml roztoku 1 % hmotnostních želatiny ve s vodě. Směs byla 1 min mixována mixérem Ultra Turax® T25 při

000 ot/min, zmrazená v lázni suchý led/methanol a lyofilizována 18 hod za poskytnutí bílého prášku- Světelná mikroskopie ukázala vytvoření mikročástic.

^x io f) Polymerní částice, vyrobené z ethyliden-bis-(16hydroxyhexadekanoátu) a adipoylchloridu

..... . 5 ml roztoku 5 % hmotnost /objem polymeru z příkladu 2 a) v .

- kamfenu, udržovaného při 60 °C, bylo přidáno k 15 ml roztoku 5 % lidského sérového albuminu ve vodě. Směs byla 1 min mixována mixérem Ultra Turax® T25 při 20 000 ot/min, zmrazená v lázni suchý led/methanol a lyofilizována 48 hod za poskytnutí bílého prášku. Světelná mikroskopie ukázala vytvoření mikročástic.

g-n) Částice polymeru, vyrobené z ethyliden-bis-(162o hydroxyhexadekanoátu) a adipoylchloridu, stabilizované v disperzi s blokovým kopolymerem.

Obecný popis ml 5 % hmotnost/objem roztoku polymeru z příkladu 2a) (-)kamfenu, udržovaného na 60 °C, bylo přidáno do 30 ml vodného roztoku blokového kopolymerů z příkladu 2 výše (viz tab. 2) při stejné teplotě a se stejnou koncentrací jak je udáno v tab. 2. Směs byla mixována rotor-statorovým mixérem (Ultra Turax® T 25) při pomalé rychlosti několik minut, zmrazená v lázni suchý led/methanol a lyofilizována 48 hod za poskytnutí bílého prášku.

-23Tabulka 2

Příklad 3	Blokový kopolymer z příkladu 2	Koncentrace [% hmotnostní]
g	2d	1
h	2d	2
i	2h	. 1
j	2h	2
k	2j	1
I	2k	1
m	2I	2
n	2n	2

o) Částice polymeru, vyrobené z ethyliden-bis-(16hydroxvhexadekanoátu) a adipoylchloridu.

16 ml 3 % roztoku hmotnost/objem polymeru z příkladu 2a) v (-)kamfenu, udržovaného při 70 °C bylo přidáno k 64 ml vodného roztoku s obsahem 1 % hmotnost/objem blokového kopolymerú z příkladu 2k) a 5 % hmotnost/objem PEG 3000 při stejné teplotě. Směs byla mixována rotor-statorovým mixérem při mírné rychlosti po dobu io až 5 min, zmrazená v lázni suchý led/methanol a lyofilizována 48 hod za poskytnutí bílého prášku. Suchý produkt byl dispergován v roztoku soli na laboratorní třepačce 16 hod při koncentraci 10 mg suchého materiálu/ml.

p) Částice polymeru vyrobené z ethyliden-bis-(16hydroxyhexadekanoátu) a adipoylchloridu

-24Způsob z příkl. 3o) byl opakován, ale jako organické rozpouštědlo byl použit namísto (-)-kamfenu cyklooktan.

q) Částice polymeru vyrobené z ethvliden-bis-(16s hydroxvhexadekanoátu) a adipoylchloridu

Způsob z příkl. 3o) byl opakován, ale jako organické rozpouštědlo byl použit namísto (-)-kamfenu cyklohexan.

r) Polvmerní částice, vyrobené z ethyliden-bis-(16w hydroxvhexadekanoátu) a adipoylchloridu

Způsob z příkladu 3o) byl opakován s tím. rozdílem, že emulgace byla prováděna při 60 °C s použitím 28 mi 7,5 % hmotnost/objem

I roztoku polymeru z příkladu 2a) v (-)-kamfenu a 62 ml vodného roztoku s obsahem 2 % hmotnost/objem polymeru z příkladu 2k).

¹⁵

Příklad 4 - Akustické charakterizace

Obecný postup

Suché prášky polymerních částic, připravených podle příkl. 3 výše byly třepáním na laboratorní třepačce po dobu 12 - 16 hod redispergovány na koncentraci 10 mg/ml suchého materiálu ve vodě MilliQ.Sledování světelným mikroskopem ukázalo tvorbu disperzí částic. Částice snadno vystupovaly k povrchu (flotovaly), jak je očekáváno pro částice s obsahem plynu.

Akustické účinky in vitro

Akustický účinek suspenzí, připravených jak je uvedeno výše byl měřen průchodem ultrazvuku skrze roztoky rozdílných koncentrací (mg/ml) ve vodné nosné kapalině s použitím širokopásmového

-25převodníku 3,5 MHz v pulzně-reflexním režimu. Jako reference byla použita nosná kapalina a měření bylo prováděno při sériových ředěních nosnou kapalinou, dokud signál nebyl snížen na přibližně 3 5 db/cm. Koncentrace, potřebná k zeslabení 8 db/cm byla s zaznamenána (tab. 3); přičemž nízké hodnoty označují dobrý kontrastní účinek. Získané akustické účinky jsou takového stupně, že naznačují možnou vhodnost produktů jako ultrazvukových kontrastních prostředků. Podle teoretických předpokladů by měla poskytnout pevná látka (jako protějšek ke plyn obsahujícím částicím stejné velikosti a ve io stejném ředění) akustické zeslabení menší než 0,1 db/cm.

Tabulka 3

Akustická měření částic z příkl. 3 výše. Akustická měření jsou uvedena ve sloupci tři jako koncentrace, poskytující kontrastní účinek

8 db/cm,,tj. polovinu saturovaného signálu. Při vyšších koncentracích stoupala intenzita signálu, dokud nebyla pozorována saturace.

Příklad 4	Částice z příkladu :	Koncentrace částic pro 8 db/cm [mg/ml]
a	3a	1,0
b	3b	0,12
c	3c	0,03
d	3d	0,16
e	3e	0,35
f	3f	0,15
g	3g	0,04
h	3h	0,02
i	3i	0,02

j	3j	0,02
k	3k	0,03
I	3I	0,01
m	3m	0,09
n	3n	0,08

Přiklad 5 - Charakterizace in vivo

Prášky polymerních částic, připravených jak je popsáno v příkl. 3a-f) výše byly třepáním na laboratorní třepačce po dobu 12-16 hod redispergovány ve sterilním 0,9 % (hmotnost/objem) NaCl vodném roztoku. Disperze byly vstříknuty do cév na noze psa a použitím ultrazvukového scanneru Vingmed Sound CFM 570 byly při 5 MHz získány echokardiální obrazy v krátké ose thoraxu. Snímky byly uchovány na videozáznamu. Disperze částic způsobily všechny velmi io ostré zvýšení kontrastu obou komor a rovněž způsobily výrazné zvýšení myokardiálního kontrastu (MCE), viditelné na živých videosekvencích. MCE bylo demonstrováno na přední a zadní stěně. Trvání kontrastního účinku závisí na tom, že disperce částic cirkulovaly in vivo několik minut po injekci. Přítomnost kontrastu myokardu a dlouhé trvání kontrastu ukazuje, že stabilita in vivo je velmi dobrá.

Zastupuje:

^z

JUDr. ZDEŇKA KOREJZOVÁ

ADVOKÁTKA.

CO. ¹ CZ!

:<

n<

σ o

CTÍ

ΙΟ) cc iC

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY s 1. Kontrastní prostředek obsahující polymerní mikročástice a/nebo míkrobaíónky, vyznačující se’ tím , že polymerem je biodegradovatelný polymer, který se skládá z opakujících se jednotek vzorce (II)

CH₃

I

10 -O-(CH₂)a-CO-O-CH-O-CO-(CH₂)_a-O-CO-(CH₂)_b-CO- (II) kde a představuje celé číslo v rozmezí 9 - 19 a b představuje celé číslo v rozmezí 1-8.
2. Kontrastní prostředek podle nároku 1, kde uvedené a

15 představuje celé číslo v rozmezí 13 - 17 a b představuje celé číslo v rozmezí 3-6.
3. Kontrastní prostředek podle nároku 1, kde uvedené a je 15 a bje4.
4. Kontrastní prostředek podle některého z nároků 1 - 3, vyznačující se tím, že obsahuje jednu nebo více dalších látek, zvolených z emulgátorů, potahovacích prostředků, plastifikátorů, objemotvorných prostředků, kryoprotektivních

25 prostředků a antioxidantů.

-285. Kontrastní prostředek podle nároku 4, vyznačující se tím, že obsahuje emulgační prostředek, zvolený z mastných kyselin, uhlohydrátových esterů mastných kyselin, triglyceridových esterů mastných kyselin, proteinů, s fosfolipidů, polysacharidů a povrchově aktivních polymerů.

6. Kontrastní prostředek podle nároku 5, vyznačující se tím,

*. že emulgačním prostředkem je lidský sérový albumin, modifikovaný škrob nebo želatina.

7. Kontrastní prostředek podle nároku 5, vyznačující se tím, ........ že emulgačním prostředkem je polyvinylalkohol neboblokový kopolymer/prodloužený polymer.

15 8. Kontrastní prostředek podle nároku 7, vyznačující se tím, že blokový kopolymer/prodloužený polymer obsahuje jako hydroftlní bloky jednotky polyethylenglykolu a jako prodlužující skupinu nebo jako skupinu v oligomerním nebo polymerním bloku v hydrofóbní části jednotky vzorce (III)

2o -R^a-(CH₂)_a-CO-O-CH(CH₃)-O-CO-(CH₂)_a-R_b- (III) kde a je jak definováno v nároku 1 a R^a a R^b každé představují valenční vazby nebo spojovací skupiny.

9. Kontrastní prostředek podle nároku 8, vyznačující se tím,

25 že R^a a R^b jsou každý zvolen ze skupin karbonylových a skupin vzorce -0-C0-(CH₂)_b-C0-0- kde b je jak definováno v nároku 1.

-2910. Kontrastní prostředek podle nároku 7, vyznačující se tím, že emulgačním prostředkem je prodloužený polymer obsahující methoxylem zakončený polylethylenglykolový hydrofilní blok, acylovaný hydrofobní skupinou, obsahující
5 řetězec dvou nebo více mastných kyselin.

11. Kontrastní prostředek podle nároku 10, vyznačující se tím, že hydrofobní skupinou je acyloxyacylová skupina.

io 12. Kontrastní prostředek podle nároku 11, vyznačující se tím, že hydrofobní skupinou je 16hexadekanoyloxyhexadekanoyl.

13. Použití kontrastního prostředku podle některého z nároků 1 is 12 při diagnostickém zobrazování.

14. Použití kontrastního prostředku podle některého z nároků 1 12 pří diagnostickém ultrazvukovém zobrazování.

2o 15. Použití kontrastního prostředku podle některého z nároků 1 12 pro zobrazování pomocí magnetické rezonance.

16. Způsob vytváření zlepšených obrazů lidského nebo zvířecího těla, který zahrnuje podávání kontrastního prostředku podle

25 některého z nároků 1-12 uvedenému organismu a vytváření zobrazení alespoň části uvedeného těla pomocí ultrazvuku nebo magnetické rezonance.

-3017. Způsob přípravy kontrastního prostředku podle nároku 1, vyznačující se tím, že zahrnuje uvedení plynu do biodegradovatelného polymeru, obsahujícího opakující se jednotky vzorce (II), podle nároku 1, takže dojde k vytvoření

5 polymerních mikročástic a/nebo mikrobalónků.

18. Způsob podle nároku 17, vyznačující se tím, že zahrnuje emulgaci roztoku polymeru v organickém rozpouštědle ve ¹ vodě nemísitelném ve vodné fázi a poté odstranění alespoň •io organické fáze v atmosféře plynu, který má být do polymeru uveden.

19. Způsob podle nároku 18, vyznačující se tím, že vodná fáze obsahuje emulgační prostředek podle nároků 5 -12.

20. Způsob podle nároku 18 nebo 19, vyznačující se tím, že emulze je před odstraněním fáze filtrována a/nebo vytlačována (extrudována).

20 21. Biodegřadovatelné polymery obsahující opakující se jednotky vzorce (II) podle nároku 1.

22. Biodegřadovatelné polymery podle nároku 21, kde uvedené a je celé číslo v rozmezí od 13 - 17 a b představuje celé

25 číslo v rozmezí 3-6.

23. Biodegradovatélné polymery podle nároku 21, kde uvedené a je 15 a b je 4.

-31 24. Chirurgický implantát, měkká tkáňová náhrada, houba, film, povlak na ránu, pružný list, nádoba, lékařský nebo zemědělský prostředek se zpožděným uvolňováním, s zobrazovací prostředek ve formě částic nebo plastifikátor, obsahující polymer podle některého z nároků 21 - 23.

25. Způsob přípravy polymeru podle nároku 21, vyznačující se tím, že zahrnuje reakci reaktivního derivátu dikyseliny io vzorce

H00C.(CH₂)_b.C00H ' kde b jě ják definováno v nároku ΐ š diolem vzórcé HO.(CH₂)_a.CO.O.CH(CH₃).O.CO,(CH₂)_a.OH kde a je jak definováno v nároku 1.