DD128847B1 - Verfahren zur herstellung von tritiiertem thymidin - Google Patents
Verfahren zur herstellung von tritiiertem thymidin Download PDFInfo
- Publication number
- DD128847B1 DD128847B1 DD19289273A DD19289273A DD128847B1 DD 128847 B1 DD128847 B1 DD 128847B1 DD 19289273 A DD19289273 A DD 19289273A DD 19289273 A DD19289273 A DD 19289273A DD 128847 B1 DD128847 B1 DD 128847B1
- Authority
- DD
- German Democratic Republic
- Prior art keywords
- thymidine
- preparing
- tritled
- tritium
- tritiated thymidine
- Prior art date
Links
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 title description 10
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 5
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 5
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 title description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 3
- IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(tritiooxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO[3H])O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C)=C1 IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 0.000 claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 claims description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 4
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 3
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 3
- UKVIEHSSVKSQBA-UHFFFAOYSA-N methane;palladium Chemical compound C.[Pd] UKVIEHSSVKSQBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- IMFACGCPASFAPR-UHFFFAOYSA-N tributylamine Chemical compound CCCCN(CCCC)CCCC IMFACGCPASFAPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- TWGNOYAGHYUFFR-UHFFFAOYSA-N 5-methylpyrimidine Chemical class CC1=CN=CN=C1 TWGNOYAGHYUFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000005533 tritiation Methods 0.000 claims description 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 6
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 6
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 2
- 238000010266 Sephadex chromatography Methods 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 2
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 2
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 2
- JBLMSVBXNOLRDE-PJKMHFRUSA-N 1-[(2s,4s,5r)-4-hydroxy-2,5-bis(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]pyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)N1C(=O)NC(=O)C=C1 JBLMSVBXNOLRDE-PJKMHFRUSA-N 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical group [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N Dimethoxyethane Chemical compound COCCOC XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical group OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Chemical group BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 150000002366 halogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 1
- 230000026030 halogenation Effects 0.000 description 1
- 238000005658 halogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
Dr. D. Bärwolff Dr. D. Murawski
"Verfahren zur Herstellung von tritiiertem Thymidin"
Tritiiertes Thymidin ist für biochemische Untersuchungen von großem Interesse, u.a. in der medizinischen Diagnostik. Es wird speziell zur Messung der DNS-Synthese und zur Lösung zellkinetischer Probleme verwendet.
Bei den in den Nucleinsäuren (DNS, RNS) enthaltenen Bausteinen muß man zwischen den zugrundeliegenden Basen (u.a. Thymin, Uracil), den mit Zuckern (Ribose, Desoxyribose) verknüpften Nucleosiden (u.a. Thymidin, Uridin) und den zusätzlich mit ein bis drei Phosphorsäureresten veresterten Nucleotiden (u.a. TTP, UMP) unterscheiden. In der angegebenen Reihenfolge steigt die Temperaturempfindlichkeit und sinkt die Beständigkeit gegenüber jeder Art chemischer Veränderung (siehe dazu: J. Amer. ehem. Soc. 8_1_ (1959) S. 2521). Darin liegt die Ursache, daß für die freien Basen eine Reihe von Markierungsmethoden beschrieben werden, z.B.
- M. Winand und L. Gouverneur, Proc. Conf. on Methods of Preparing and Storing Marked Molecules, Brüssel 1963, S. 1147-1155; vgl. С. А. 63 (1965) 11 910 а):
CHlCt
Dimethoxyäthan
- C. Parkany und F. Sorm, Coll. Czech. Chem. Commun. .28 (1963) S. 2491):
о Q
1" Cu·
n +ThO ^у^ J^
die trotz scheinbar großer Ähnlichkeit auf die empfindlicheren Nucleoside und Nucleotide nicht übertragbar sind.
Für tritiummarkiertes Thymidin hatte sich daher die enzymatische Synthese aus Desoxyribosedonatoren und vorher markiertem Thymin durchgesetzt (siehe dazu: E.A. Evans "Tritium and its Compounds", London 1966). Als Nachteile dieses Verfahrens erwiesen sich die umständliche Herstellung der Ausgangsverbindung, die zusätzlichen Arbeiten zur Enzympräparation und die bei hohem Arbeitsaufwand geringen Ausbeuten der enzymatischen Synthese.
Eine direkte chemische Synthese des ( H]-Thymidins ist auch von K.V. Viswanathan et al. (Proc. of the Chemistry Symposium, Vol. I, S. 86-87, Aligarh Muslim University, Aligarh, 21.-23.Dez.1972) beschrieben worden. Die dabei benötigte Ausgangsverbindung Hydroxymethyl-2'-desoxyuridin erfordert eine 8-Stufen-Synthese, ist also schwer verfügbar. Ein bereits vorher veröffentlichter Weg, diese Verbindung in einem Schritt zu synthetisieren (J. Amer. chem. Soc. 8J[ (1959) S. 2521), konnte von uns (offenbar auch von Viswanathan) nicht reproduziert werden.
Dreifach tritiiertes Thymidin war bisher überhaupt nicht zugänglich.
Das Ziel der Erfindung besteht darin, ein einfaches und technologisch gut zu realisierendes Verfahren zur Herstellung von
tritiiertem Thymidin zu entwickeln und diese Verbindung bequem zugänglich zu machen. Außerdem besteht das Ziel darin, Thymidin mit hoher spezifischer Aktivität herzustellen.
Tritiiertes Thymidin wird aus halogenierten 5-Methylpyrimidinen der Formel I (hergestellt nach DD-WP 113 361), in welcher Hai = Cl oder Br bedeutet, in Gegenwart von Palladium-Kohle als Tritiierungskatalysator, Dioxan als Lösungsmittel und tertiären Aminen als Säurefänger hergestellt und 2-4 Stunden bei gegebenenfalls erhöhten Temperaturen behandelt. Erfindungsgemäß wird Tributylamin als Säurefänger eingesetzt, das sich durch ausreichende Basizität bei starker sterischer Hinderung auszeichnet.
Nach Abdestillieren des Lösungsmittels wird labiles Tritium mittels Methanol rückgetauscht, der Rückstand wird mit Methanol und Ammoniak entacetyliert und über eine Sephadex Chromatographiesäule von inaktiven Verunreinigungen befreit. Mit diesem Verfahren lassen sich 1-3 Halogenatome durch Tritium ersetzen, wobei je nach Halogengehalt der Ausgangsverbindung tritiiertes Thymidin unterschiedlicher spezifischer Aktivität (etwa 28 Ci/ mMol für jedes Halogen) entsteht.
1. 200 mg einer Verbindung I (1 - 3 Chlor- bzw. Bromatome), hergestellt nach DD-WP 113 361,
werden in 10 ml üioxan gelöst und in Gegenwart von 200 mg 10 ij Palladium-Kohle (Hydrierkatalysator) und 0,5 ml Tributylamin mit Tritium bei 400C tritiiert. Reaktionszeit 2 4 Stunden. Nach Abdestillieren des Lösungsmittels wird labiles Tritium mit Methanol rückgetauscht, der Rückstand mit Methanol und Ammoniak ontacetyliert und über eine Sephadex-Chromatographie-Säule von inaktiven Verunreinigungen befreit
üie spezifischen -Aktivitäten sind abhängig vom Halogenierungsgrad der eingesetzten Halogenverbindung. Die bisher besten Ergebnisse lagen bei 60 Ci/mMol.
Claims (1)
- Erf indungsanspruchVerfahren zur Herstellung von tritiiertem Thymidin aus halogenierten 5-Methylpyrimidinen der allgemeinen Formel I,in der Hal = Br oder Cl bedeutet,unter Verwendung von Palladium-Kohle als Tritiierungskatalysator, von Dioxan als Lösungsmittel/ von tertiären Aminen als Säurefänger, im Verlauf von 2 bis 4 Stunden bei gegebenenfalls erhöhten Temperaturen, dadurch gekennzeichnet, daß Tributylamin als Säurefänger eingesetzt wird.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD19289273A DD128847B1 (de) | 1973-09-21 | 1973-09-21 | Verfahren zur herstellung von tritiiertem thymidin |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD19289273A DD128847B1 (de) | 1973-09-21 | 1973-09-21 | Verfahren zur herstellung von tritiiertem thymidin |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DD128847A1 DD128847A1 (de) | 1977-12-14 |
| DD128847B1 true DD128847B1 (de) | 1984-02-01 |
Family
ID=5504547
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DD19289273A DD128847B1 (de) | 1973-09-21 | 1973-09-21 | Verfahren zur herstellung von tritiiertem thymidin |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DD (1) | DD128847B1 (de) |
-
1973
- 1973-09-21 DD DD19289273A patent/DD128847B1/de unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DD128847A1 (de) | 1977-12-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE69319336T2 (de) | N-acylierte 2'-deoxycytidine für die oligonukleotid synthese | |
| EP0490281B1 (de) | 3'- Amino- oder thiolmodifizierte, Fluoreszenzfarbstoff-gekoppelte Nukleoside, Nukleotide und Oligonukleotide sowie ein Verfahren zur Herstellung und ihre Verwendung | |
| DE69725866T2 (de) | Festphasen-synthese | |
| DE69720763T2 (de) | Sätze von, mit fluoreszierenden energieübertragungsverbindungen, markierten primern und deren verwendung in mehrkomponentenanalyse | |
| Lohrmann et al. | Studies on Polynucleotides. LI. 1 Syntheses of the 64 Possible Ribotrinucleotides Derived from the Four Major Ribomononucleotides2 | |
| DE69433811T2 (de) | Dns - sequenzierung durch massenspektronomie | |
| DE60310532T2 (de) | Bestimmung von nukleinsäuren | |
| DE69126530T2 (de) | Nuklease resistente, pyrimidin modifizierte oligonukleotide, die die gen-expression detektieren und modulieren | |
| Ralph et al. | Studies on Polynucleotides. XI. 1 Chemical Polymerization of Mononucleotides. The Synthesis and Characterization of Deoxyadenosine Polynucleotides2 | |
| DE69131164T2 (de) | Einführung selektiv spaltbarer stellen in oligonukleotidketten und reagenzien dafür | |
| EP0600965B1 (de) | Primer für matrizenabhängige enzymatische nukleinsäuresynthesen | |
| DE69116864T2 (de) | Verfahren und mittel zur synthese von oligonukleotiden | |
| DE2122529A1 (de) | Thiophosphatanaloge der Nucleosid di und tnphosphate sowie Verfahren zu ihrer Herstellung | |
| EP0195277B1 (de) | Verfahren und Mittel zur Phosphorylierung | |
| Sun et al. | Synthesis of 3'-thioribonucleosides and their incorporation into oligoribonucleotides via phosphoramidite chemistry. | |
| Gaffney et al. | Large-scale oligonucleotide synthesis by the H-phosphonate method | |
| DE1470254A1 (de) | Verfahren zur Herstellung von Purin- und Pyrimidinnucleosiden | |
| EP0927180B1 (de) | Heterocyclische verbindungen und deren verwendung in der detektion von nucleinsäuren | |
| Ohtsuka et al. | Joining of synthetic ribotrinucleotides with defined sequences catalyzed by T4 RNA ligase | |
| DE69500303T2 (de) | Methode zur sequenzierung kurzer oligonukleotide | |
| US4739045A (en) | Process for the dissolution of nucleotides and polynucleotides | |
| DD128847B1 (de) | Verfahren zur herstellung von tritiiertem thymidin | |
| DE3642939A1 (de) | Verfahren zur dna-markierung | |
| DE4239531A1 (de) | Reagenz zur Kupplung verschiedener Substanzen an Nukleinsäuren sowie Verfahren zu dessen Herstellung | |
| DE3800644A1 (de) | Verfahren zum hochspezifischen nachweis von nukleinsaeuren in loesung |