DD209187A1 - Verfahren zur gewinnung von ergosterol und ubichinonen - Google Patents

Verfahren zur gewinnung von ergosterol und ubichinonen Download PDF

Info

Publication number
DD209187A1
DD209187A1 DD24307882A DD24307882A DD209187A1 DD 209187 A1 DD209187 A1 DD 209187A1 DD 24307882 A DD24307882 A DD 24307882A DD 24307882 A DD24307882 A DD 24307882A DD 209187 A1 DD209187 A1 DD 209187A1
Authority
DD
German Democratic Republic
Prior art keywords
ergosterol
lipid
extract
silica gel
acetone
Prior art date
Application number
DD24307882A
Other languages
English (en)
Inventor
Barbara Vier
Beate Voigt
Martin Worbs
Original Assignee
Adw Ddr
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Adw Ddr filed Critical Adw Ddr
Priority to DD24307882A priority Critical patent/DD209187A1/de
Publication of DD209187A1 publication Critical patent/DD209187A1/de

Links

Landscapes

  • Steroid Compounds (AREA)

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung vonErgosterol und Ubichinonen aus Lipid-KW-Extrakten mit KW-Anteilen > 10%, die bei der mikrobiellen Gewinnung von Eiweiss auf der Basis von KW anfallen. Erfindungsgemaess werden Ergosterol und Ubichinone vor ihrer Isolierung adsorptiv unter Verwendung von Silicagel aus dem Lipid-KW-Extrakt bzw. der acetonloeslichen Fraktion des Lipid-KW-Extraktes angereichert und gleichzeitig von den KW abgetrennt. Die Anreicherung erfolgt bei einem Verhaeltnis von 1 Gew.-Teil Silicagel zu 2 bis 4 Gew.-Teilen Lipid-KW-Extrakt bzw.acetonloeslicher Fraktion aus einem Kohlenwasserstoff bzw. Kohlenwasserstoffgemisch vorzugsweise der Siedelage 50 bis160 Grad C.

Description

•Titel · . '
Verfahren zur Gewinnung von Ergosterol und "übichinonen Anwendungsgebiet der Erfindung-
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung von Ergosterol und Ubichinonen aus Ldpid—Kohlenwasserstoff-Extrakten, die bei der mikrobiellen Gewinnung von Eiweiß auf der Basis von Kohlenwasserstoffen (KW) anfallen. Sie ist in die IPK C 0? C einzuordnen»
Charakteristik der bekannten technischen Lösungen
Lipid-K¥—Extrakte fallen bei der mikrobiellen Gewinnung von Eiweiß durch Extraktion der Biomasse mit niedrigsiedenden Lösungsmitteln oder LösTingsmittelgemiscben. an,: Sie sind durch einen Gehalt von 10 bis 80 $ Phosphatiden, 10 bis 80$ "Fettsäuren^ die vorwiegend in gebundener Form vorliegen, sowie weiteren biogenen Inhaltsstoffen - Sterolen, fettlöslichen Coenzymen und Vitaminen - gekennzeichnet, die im mikrobiell nicht verwerteten Anteil der K¥-Fraktion gelöst sind. Von den biogenen Inhaltsstoffen sind das Ergosterol und die XJbicfainone von besonderem Interesse» Ergosterol kann als Ausgangsprodukt für die Gewinnung von Vitamin D oder Steroidhoraionen genutzt werden. Ubichinone haben insbesondere als Coranartherapeutika Bedeutung erlangt.
Verfahren zur Gewinnung von Ergosterol und/oder Übichinonen aus Lipid-K¥-Extrakten sind bekannt. Diese Verfahren sind alle mit Stoffwandlungsprozassen verbunden. In DD-PS 115 899 wird über ein Verfahren zur gleichzeitigen Gewinnung von Ergosterol
24307
und Ubichinon-45 aus Lipidextrakten mikrobieller Herkunft berichtet. Aas dem Lipidextrakt werden nach einer alkalisch— ethanolischen Verseifung in Gegenwart eines Reduktionsmittels die unverseifbaren Bestandteile isoliert und daraus durch Kühltang Ergosterol sowie chromatographisch an Al-O,- Ubichinon-45 abgetrennt» Das angeführte Verfahren weist wesentliche Nachteile auf, wenn der Gehalt an E¥ im Lipidextrakt ^ 10 $> beträgt und sich die EW gleichzeitig aus ggf. sehr unterschiedlichen K¥-Typen, z. B» der Siedelage 2^0 bis 330 °C zusammensetzen» Verseifung, Extraktion der Seifenlösung sowie die Isolierung des Ergosterols und der Ubichinone aus dem Ohverseifbaren erfordern durch die Anwesenheit der K¥ einen wesentlich höheren Aufwand an Chemikalien, Arbeitszeit und Energie als üblicherweise für die Isolierung dieser biologisch aktiven Verbindungen aus Lipidfraktionen notwendig ist. Darüber hinaus ist bei KW-Anteilen ^- $Q % ±m Lipidextrakt und Ergosterolkonzentrationen j£ 0,5 % die Gewinnung von Ergosterol nur noch mit ungenügenden Ausbeuten oder gar nicht mehr möglich»In DD-PS 151 007 wird deshalb vorgeschlagen, zur Gewinnung des Ergosterols aus dem XÄiverselfbaren eine adsorptive Anreicherung mittels Silicagel vorzunehmen. Die nach der Desorption des Silicagels gewonnene Lipidfraktion enthält neben dem Ergosterol und anderen Ldpiden noch als weitere Haupt— komponente KF, bei denen die Aromaten dominieren«: Auf Grund der ähnlichen chemischen Strukturen werden diese Aromaten gleichzeitig mit dem Ergosterol bevorzugt am Silicagel adsorbiert (Aromatengehalt der KW-iTraktion "* 63 %f Aromatengehalt des Erdöldestillats *s 30 %), so daß für die nachfolgende Reinigung des Srgosterols ein hoher Aufwand erforderlich ist. Besonders, nachteilig ist ein KW-Gehalt ^ 10 % in der Lipidfraktion für die Isolierung des übichinons aus dem Ohverseifbaren. Eine Trennung des Übichinons von den KW kann lediglich adsorptionschromatographisch erfolgen· Die dafür benötigten Mengen an Adsorptionsmaterial!en und Lösungsmitteln sowie der zeitliche Aufwand für die EIution sind außerordentlich hoch,
In DD-PS 154 448 ist ein Verfahren beschrieben, bei dem ein Teil der K¥ destillativ entfernt wird. Nach einer 2-stufigen Dünnschichtdestillation einer acetonlöslicben Fraktion, die 63 % KW enthält, wird dabei ein Sumpfprodukt erhalten, das noch A* 30 % K¥ aufweist tmd bei der weiteren Aufarbeitung ebenfalls noch einen wesentlich, höheren Aufwand erfordert im Vergleich zur Gewinnung aus einem K¥-freien Lipidextrakt.
Ziel der Erfindung
Ziel der Erfindung ist es, ©in Verfahren zti entwickeln, das die einfache und kostengünstige Ge-winnung von Ergosterol und Ubichinonen aus Lipid-K¥-E:xtrakten mit KST-Anteilen >-10 $ . ermöglicht.
Darstellung des Wesens der Erfindung
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, Ergosterol und TJbichinone aus Lipid-K¥-E:s:trakten unter Sutzung -von Unterschieden in der Haftfestigkeit an Adsorbentien anzureichern und gleichzeitig von den EW abzutrennen, bevor die Isolierung der biologisch aktiven Verbindungen vorgenommen -wird. ErfindungsgemäB wird die Aufgabe dadurch gelöst, daß aus dem Lipid-£¥- Extrakt oder der aeetonlösliehen Fraktion des Lipid-KF-Estraktes adsorptionschromatographisch an Silicagel Ergosterol und TTbichinone angereichert und von den E¥ weitgehend getrennt werden.
Im einzelnen wird dabei wie folgt verfahren: Der Lipid-K¥~ Extrakt oder die aoetonlösliche Fraktion des Lipid-K¥-E,xtraktes werden ±m 3-fachen Volumen eines K¥ bzw. eines K¥-Gemischss vorzugsweise der Siedelage 50 bis I60 0C gelöst und mit Silicagel behandelt. Das Verhältnis von Silicagel zu LipidlÖT-Sxtrakt beträgt dabei 1 Gew.^-Tail zu 2 bis 4 Get#.-Teilen.
3.0 Hach Dekantieren wird das Silicagsl nociaiaals Hit dem gleiphan Lösungsmittel gewaschen. Die vereinigten !Traktionen weisen nach Abdestillieren des Lösungsmittels eine gegenüber des Ausgangsprodukt nur unwesentlich veränderte Zusammensetzung auf. Dia Desorption der am Silicagel adsorbierten Verbin-
düngen erfolgt mit einem polaren Lösungsmittelgeaiisch, beispielsweise einem Gemisch aus Hexan/Methanol (60 : ko) oder Hesan/Etaanol/¥asser (60 : 20 : 20).Der Rückstand enthält Ergosterol und Ubichinone in mindestens 5-facher Konzentration im "Vergleich zum Einsatzprodukt und ist -weitgehend frei von KW. Die Gewinnung des Ergosterols -and der Ubiohinone kann aus der K¥-freien Fraktion in bekannter Weise durch Kristallisation oder Adsorptionschronxatographie erfolgen«, Das Silicagel kann nach der Regenerierung erneut eingesetzt werden.
Das erfindungsgemäße Verfahren weist eine Reihe von Vorteilen auf. Ergosterol und Ubichinone werden von den 3DF, die einen Hauptbestandteil der Lipid-K¥i-Extrakte darstellen, und -weitgehend von den anderen lipophilen Bestandteilen abgetrennt
sowie auf mindestens das 5-fa-che angereichert. Dadurch wird der Aufwand an Chemikalien, Lösungsmitteln, Energie und Arbeitszeit für die Isolierung und .Reinigung des Ergosterols und der übichinone entscheidend gesenkt. Darüber hinaus ist es möglich, Ergosterol auch aus solchen Lipid-K¥-Extrakten
zu gewinnen, die Ergosterolgehalte < 0,5 i> bei gleichzeitig hohem K¥-Anteil aufweisen.;
Der nach der adsorptiven Entfernung des Ergosterols und der übichinone zurückbleibende Lipid-KF-Estrakt bzw.1 die acetonlösliche Fraktion wird keinem StoffWandlungsprozeß unterworfen und enthält im wesentlichen die gleichen Bestandteile wie vor der Abtrennung der biologisch aktiven Verbindungen und kann in bekannter ¥eise, z« B. in Trennölen oder Flotationshilfsmitteln Verwendung finden«
Das Verfahren gemäß der Erfindung wird durch folgende Beispie-Ie erläutert:
Ein Lipid—Kohlenwasserstoff-Extrakt wurde au3 einem Kohlenwasserstoff a verwertenden Stamm der Hefe LodderoEryces elongispo· rus gewonnen. Die Hefe wurde in Gegenwart eines im Bereich von ZhQ bis 380 0C siedenden, als Kohlenstoffquelle dienenden Erdöldestillat3 in kontinuierlicher Fermentation kultiviert.
Die Gewinnung des Lipid-Kohlenwasserstoff-Extraktes erfolgte nach Extraktion des Hefetrockenproduktes mit einem Benzin/ Ethanol/Wasser-Gemisch bei 4o 0C. Hach destillativer Entfernung des Lösungsmittels wurde ein Lipid-Eohlenwasserstoff-Extrakt folgender Zusammensetzung erhalten:
Kohlenwasserstoffe u.a. 35 Gew.-$ unverseifbare Bestandteile
Phosphatide 29
freie Fettsäuren und Glyceride 34
übichinon-45 0,24 Gew.-^
Ergosterol 0,8 Gew.-^ 1)
Nichtlipide 1,0 Gew.-^
1) ^
/ Ergosterolester ^10 %
Beispiel 1
30 g Extrakt werden mit 100 ml Hexan versetzt und nach Zugabe von 15 g Siücagel (Korngröße 32 bis 100 yu) 10 Minuten- geschüttelt. Es wird dekantiert und noch 3^aI rait 50 ml Hexan jeweils 5 Minuten.geschüttelt. Die Hexanfraktionen werden vereinigt und eingeengt.
Die Hexanfraktion ähnelt in ihrer Zusammensetzung, dem" Ausgangsprodukt. Zur Desorption wird das Silicagel zunächst 10 Minuten und anschließend 5 Minuten jeweils mit 100 ml Hexan/ Ethanol/Wasser {60 : 20 : 20) geschüttelt. Die Fraktionen werden vereinigt-, die wäßrige Phase abgetrennt und die organische Phase nach dem Trocknen über Natriumsulfat am Rotationsverdaiapfer eingeengt. Ausbeute: 3,2 g Die angereicherte Fraktion weist folgende Zusammensetzung auf:
Ergosterol 4,91 Gew.-^
Ubichinon 1,25 Gew.-^
Kohlenwasserstoffe 2,4 Gew.-^
Phosphatide 2,20 Gew.-^
weitere Lipide >85,O (Glyceride, Fettsäuren)
Nach Verseifung der angereicherten Fraktion wird aus dsm Unverseifbaren das Ergosterol durch Kristallisation gewonnen und das Ubichinon durch Säulenchromatographie an Silicagel isoliert.
Ausbeute! Ergosterol 117 Jag ubichinon 3k rag
Beispiel 2
Das im Beispiel 1 nach Hexanbehandlung erhalten© Silicagel wird zur Desorption sämtlicher Stoffe 2mal mit 100 ml Hexan/ Methanol (60 : 4o) versetzt und geschüttelt. Das Lösungsmittel wird am Rotationsverdampfer entfernte Ausbeute: 4,0 g Die angereicherte Fraktion setzt sich wiefolgt zusammen:
Ergosterol: 4,4 Gew.-^
Ubichinon: 1j^ Gew.-^
Kohlenwasserstoffe: 3,5 Gew.-$
Phosphatide: 5»3 Gew.-$
weitere Lipide: }&5 Gew.—% (Glyceride, Fettsäuren)
Aus der angereicherten Fraktion wird das Ergosterol direkt durch Kristallisation gewonnen. Das Ubichinon wird nach Verseifung und Säulenchromatographie des Unverseifbaren isoliert, Ausbeute: Ergosterol 115 mg Ubichinon 48 mg
Beispiel 3
Lipid-Sohlen-wasserstoff-Extrakt "wird mit der doppelten Menge Aceton 5 Minuten intensiv gerührt, Hach Beruhigung bilden sich 2 Phasen, die obere Phase wird abdekantiert und nach Entfernung des Lösungsmittels wird eine acetonlösliche Frak-) tion folgender Zusammensetzung erhalten:
24
Kohlenwasserstoffθ ti. a. unverseifbare 52 Bestandteile
Phosphatide 4,0
freie Fettsäuren und Glyceride 42 Gew.-^
Ergosterol 1,23 Gew.-%
Ubichinon 0,29 Gew. -<$
Die acetonlösliehe Fraktion wird weiterbehandelt wie es im Beispiel 1 für Extrakt beschrieben wurde. Ausbeute: 3>15 S
Die erhaltene angereicherte Fraktion hat folgende Zusammensetzung:
Ergosterol 6,22 Gew.-^
Ubichinon 1,29 Gew.'-;£
Kohlenwasserstoffe . 3,^0 Gew.-^
Phosphatide 2S5O Gew.-^
«eitere Lipide } 85 ^
Aus der angereicherten Fraktion wird XJbichinon und Ergosterol isoliert, wie es im Beispiel 1 beschrieben wurde. Ausbeute: Ergosterol 147 rag Übichinon 35 mg
Das Silicagel kommt nach Hegenerierung wieder zum Einsatz.

Claims (4)

  1. -a-
    Erfindungsanspruch
    "!.'Verfahren zur Gewinnung von Ergosterol und Ubichinonen aus Lipid-Klf-Sxtrakten, die durch Extraktion von mikrobiell auf K¥-Basis erzeugten Biomassen erhalten wurden, dadurch gekennzeichnet, daß aus dem Lipid-KW-Extrakt oder der acetonlöslichen Fraktion des Lipid-K¥-Sxtraktes Ergosterol und Ubichinone adsorptiv unter Verwendung von Silicagel angereichert und gleichzeitig von den Kohlen- ., Wasserstoffen abgetrennt werden»
  2. 2. Verfahren nach Pkt* 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Anreicherung von Ergosterol und Ubichinonen bei einem Verhältnis von 1 Gew,-sTeil Silicagel zu 2 bis k Gew,-Teilen Lipid-£if—Extrakt bzw. acetonlöslicher Fraktion erfolgt*
  3. 3« Verfahren nach Pkt» 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß Silicagel der Korngröße 30 bis 500 p, vorzugsweise 30 bis 100 u, verwendet wird.»
  4. 4. Verfahren nach Pkt. 1 bis 3» dadurch gekennzeichnet, daß die Adsorption am Silicagel aus einem KW bzw. einem K¥— Gemisch vorzugsweise der Siedelage 50 bis 16O C erfolgt*
DD24307882A 1982-09-08 1982-09-08 Verfahren zur gewinnung von ergosterol und ubichinonen DD209187A1 (de)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DD24307882A DD209187A1 (de) 1982-09-08 1982-09-08 Verfahren zur gewinnung von ergosterol und ubichinonen

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DD24307882A DD209187A1 (de) 1982-09-08 1982-09-08 Verfahren zur gewinnung von ergosterol und ubichinonen

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DD209187A1 true DD209187A1 (de) 1984-04-25

Family

ID=5541061

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DD24307882A DD209187A1 (de) 1982-09-08 1982-09-08 Verfahren zur gewinnung von ergosterol und ubichinonen

Country Status (1)

Country Link
DD (1) DD209187A1 (de)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5451660A (en) * 1993-12-13 1995-09-19 Genentech, Inc. Method for purifying polypeptides

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5451660A (en) * 1993-12-13 1995-09-19 Genentech, Inc. Method for purifying polypeptides

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE69012566T2 (de) Verfahren zur Gewinnung von Carnosäure.
DE60304658T2 (de) Verfahren zur Extration und Isolierung von geringen Komponenten aus pflanzlichem Öl
DE68902057T3 (de) Verfahren zur Elimination von steroiden Verbindungen, die in einer Substanz von biologischer Herkunft enthalten sind.
DE60218834T2 (de) Trennung von mischungen aus pflanzenöl-triglyceriden durch festbettadsorption
EP0185235B1 (de) Verfahren zur Isolierung von Lysophosphatidylcholin-freiem Phosphatidylcholin aus Ei-Pulver
EP0415287A2 (de) Verfahren zur Entfernung von Cholesterin bzw. Cholesterinestern aus Eigelb
DD202581A5 (de) Verfahren zur isolierung von sterolen oder sterolmischungen
DE2238910B2 (de) Verfahren zum Aromatisieren von Tee-Extrakten
Kokke et al. Sterols of the cultured dinoflagellate Pyrocystis lunula
DE1617680C3 (de) Verfahren zur Gewinnung von hochgereinigtem Phosphatidylcholin
DE1154706B (de) Verfahren zur Herstellung gereinigter Phosphatidprodukte
DE4029489C2 (de)
DE1493357B1 (de) Verfahren zur Herstellung von Prostaglandinen und prostaglandinartigen Verbindungen
DE3112380C2 (de) Lagerstabiles Zitrusfruchtaroma-Konzentrat
DE3615029A1 (de) Methanol-extraktion von tocopherol
DE3813805A1 (de) Verfahren zur desodorierung von fettsaeureestergemischen
EP0187931B1 (de) Verfahren zur Isolierung eines Begleitphospholipid-freien Phosphatidylcholins
DE60004810T2 (de) Verfahren zur gewinnung von sterolen aus kohlenwasserstoffextrakten durch verdampfungsfraktionierung
DE4210611C2 (de) Verfahren zur Abtrennung bzw. Anreicherung von Phosphatidylcholin (PC) aus bzw. in einer Phosphatidmischung durch Extraktion
DE3243150A1 (de) Trihydroxy-vitamin-d(pfeil abwaerts)3(pfeil abwaerts)-verbindungen
DE925064C (de) Verfahren zur Trennung der Komponenten des Actinomycins C
DE2354038B2 (de) Verfahren zur Gewinnung von ätherischen und fetten ölen u.dgl
DE2507385C3 (de) Verfahren zur Herstellung eines Räuchermittels
DD208171A1 (de) Verfahren zur gewinnung von ubichinonen
DE838642C (de) Verfahren zur Gewinnung von Sterinen aus Fettsaeuren, Fetten, OElen und Fettgemischen