DD210353A1 - Verfahren zur bestimmung des einschlussvolumens von liposomen - Google Patents
Verfahren zur bestimmung des einschlussvolumens von liposomen Download PDFInfo
- Publication number
- DD210353A1 DD210353A1 DD24359382A DD24359382A DD210353A1 DD 210353 A1 DD210353 A1 DD 210353A1 DD 24359382 A DD24359382 A DD 24359382A DD 24359382 A DD24359382 A DD 24359382A DD 210353 A1 DD210353 A1 DD 210353A1
- Authority
- DD
- German Democratic Republic
- Prior art keywords
- liposomes
- copper
- liposome
- solution
- determining
- Prior art date
Links
- 239000002502 liposome Substances 0.000 title claims abstract description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 239000010949 copper Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 claims abstract description 10
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 3
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000010802 sludge Substances 0.000 claims description 3
- UOFGSWVZMUXXIY-UHFFFAOYSA-N 1,5-Diphenyl-3-thiocarbazone Chemical compound C=1C=CC=CC=1N=NC(=S)NNC1=CC=CC=C1 UOFGSWVZMUXXIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000004847 absorption spectroscopy Methods 0.000 claims 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 abstract description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 6
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 3
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001479 atomic absorption spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 2
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 2
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Chemical group 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- XGRYDJSRYGHYOO-UHFFFAOYSA-N Thesine Natural products C1=CC(O)=CC=C1C1C(C(=O)OCC2C3CCCN3CC2)C(C=2C=CC(O)=CC=2)C1C(=O)OCC1C2CCCN2CC1 XGRYDJSRYGHYOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005453 pelletization Methods 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical group 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur schnellen Bestimmung des Einschlussvolumens von Liposomen, die nach den meisten der bekannten Verfahren hergestellt werden koennen. Das Verfahren besteht darin, dass die Liposomenbildung in Kupfersulfatloesung durchgefuehrt, der Liposomenloesung Zinkstaub zugesetzt, der sich bildende Kupferniederschlag entfernt und die Menge des in der Liposomenloesung verbleibenden Kupfers bestimmt wird.
Description
Verfahren zur Bestimmung des Einschlußvolumens von Liposomen-Anwendungsgebiet der Erfindung
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur schnellen und nicht geräteintensiven Bestimmung des Einschlußvolumens von Liposomen, die nach den meisten der bekannten Verfahren hergestellt werden können.
Liposoken'.. sand-'·--künstliche Vesikel aus PhÖspholipideh» Süit" dein Begriff'werden alle sphärischen Lame11ensysteine, die.einen abgeschlossenen Innenraum umgrenzen, erfaßt - ohne Wertung in 3e-. zug auf Anzahl und Beschaffenheit der Lamellen. Eine Größe, deren Kenntnis vor allem für die nutzung von Liposomen sehr wesentlich ist, ist das Einschluß volumen· (Bezieht man den eingeschlossenen Volumenanteil nicht - wie beim Einschlußvolumen auf das:Vesikellipid, sondern auf das gesamte wäßrige Ausgangsmedium, handelt es sich um die Einschlußkapazität einer Herstellungsmethode für Liposomen)» Die direkte Bestimmung dieser Größe erfolgt über die Bestimmung der in den Liposomen einge-.schlossenen Substanzen· Die Entfernung des äußeren Mediums kann dazu durch Dialyse (J. Mol. Biol. 1_3 (1965), 238j Biophys. 3iochim. Acta _331 (1974), 390·, Chem. Phys. Lipids 1_o (1976) , 142; Proc«. Natl. Acad. Sei. USA 7_5 (1978), 4194; Biophys. Biochim. Acta 601 (1980), 559)? Gelfiltration (Ghem. Phys. Lipids Io (1976), 142), Pelletierung der Liposomen im Schwerefeld (Biophys. Biochim. Acta 649 (1981), 129; Biophys. Biochim. Acta 646
(1981), 1) oder Waschen über einem Membranfilter (Biophys. J. 28 (1979),-1; Biochemistry V7 (1978)» 3592) erfolgen. Eine direkte Bestimmung durch IMR-Spektroskopie erfordert den Einschluß signalliefernder Verbindungen in die Liposomen'mit nachfolgendem Austausch oder (magnetischer) Modifikation des äußeren Mediums (Science 197 (1977), 224; Biophys. Biochim. Acta 443 (1976) 313; 550 (1979), 201; 5_H (1978), 255; 394 (1975) 483; 375 (1975) 186).
Unter Anwendung von Kugeigleichungen kann das Einschlußvolumen indirekt bestimmt werden durch HMR-spektroskopische Sichtbarmachung funktioneller Gruppen der lipoide kleiner Liposomes (Biophys. Biochim. Acta 375. (1975), 186; 550 (1979) ·, 157; 601 (1980) 453).
Wenn organische Substanzen eingeschlossen werden, kann eine direkte Bestimmung mittels enzymatischer Methoden erfolgen (Chem. Phys. Lipids 16. (1976), 142; Int. J. Radiat. 3,iol. J8 (1980), 537). Mit Hilfe der Dialyse können: kleine Moleküle und Lösungsmittelreste entfernt werden. Dabei ist jedoch ein erheblicher Aufwand an Zeit und Pufferlösung, erforderlich. Effektiver ist die"Abtrennung der Vesikel" vom übrigen Medium durch Gelfiltration. Wegen Adsorption der Liposomes an die Gelmatrix ist das Gel vorher mit einem Vesikelaliquot zu äquilibrieren; die Abtrennung ist nicht immer vollständig.
Bei der wiederholten Pelletierung der Liposomen im -Schwerefeld zur Entfernung des äußeren Mediums haben neben dem Vesikeldurchmesser auch Dichte und Viskosität des Einschlußmediums und evtl. Lösungsmittelreste im Liposom Einfluß. Der Einsatz von. Membranfiltern ist zeitaufwendig,'; da mit sehr kleinen Porendurchmessern gearbeitet werden muß. Generell unterbieten nur die IMR-spektroskopischen und die'enzymatischem Methoden den Zeitaufwand von einer Stunde. Bei beiden sind jedoch zur Erzielung genauer Ergebnisse.entweder aufwendige Konzentrierungsschritte (Druckdialyse; Pelletierung; Membranfiltration) oder/ und Liposomen-Herstellungsverfahren mit hoher Einschlußkapazität erforderlich. Außerdem sind bei der HMR-Spektroskopie sehr empfindliche (hochfrequentige) Geräte notwendig.
3
Ziel der
Das Ziel der Erfindung ist die schnelle, genaue und schonende Bestimmung des Einschlußvolumens von Liposomen mit einfachen Mitteln.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein neues Verfahren zur Bestimmung des Einschlußvolumens von Liposomen, zu- entwickeln. .
Das erfindungsgemäße Verfahren zur Bestimmung des Einschluß-Yolumens von. Liposomen besteht darin, daß die Liposomenbildung in Kupfersulfatlösung durchgeführt, der Liposomenlösung Zinkstaub zugesetzt, der sich bildende. Kupferniederschlag entfernt und die Menge des in der Liposomenlösung /verbleibenden Kupfers bestimmt wird.
Um die quantitative Ausfällung des. im äußeren Mediums enthaltenen Kupfers zu garantieren, müssen unabhängig von der Korngröße' des Zin;fcpu'ivers' bestimmte molare Zink/Kupfe'r-Verhältnisse., z.B. von mindestens 10:1 -eingehalten werden. Dabei ist es günstig, nach Abschluß der Reaktion noch einmal eine geringe Menge Zink zuzugeben, um auch noch evtl. vorhandene Kupferreste aus der Lösung auszufällen. Die Abtrennung des Metallschlammes kann durch Filtration oder durch Zentrifugieren erfolgen. Die anschließende Kupferbestimmung ("eingeschlossenes Kupfer") ist z.B. mit Atomabsorptionsspektroskopie möglich. Der große Zinküberschuß (und auch die Anwesenheit von Lecithin) stört dabei nicht. Eine andere Möglichkeit besteht in der colorimetrischen Kupferbestimmung mit Dithizon.
Voraussetzung für die Anwendung des erfindungsgemäßen Verfahrens ist, daß das Medium im Einschlußvolumen einen pH-Wert besitzt, bei dem das Cu~+-lon stabil ist. . . .
Das Verfahren beruht auf dem Austausch von Cu~+-Ionen im nichteingeschlossenen Medium durch Zn ^+-Ionen, es besteht also nicht die Gefahr von osmotischem Streu wie beim Austausch des äußeren Mediums durch äquiosmolare Puffer.
Ein wesentlicher Vorteil der Erfindung besteht in seiner Anwendbarkeit ·auf Liposomensuspensionen niedriger Konzentration.
Es werden Liposomen nach dem Etherinjektionsverfahren (Biochem. Biophys. Äcta 443 (1976), 629; Ann. N. Y. Acad· Sei. (1978) , .1) in 0,1 M CuSO^-Lö'sung gebildet« Die Lecithinkon- ζentration in der Liposomensuspension beträgt 1nM. 5 ml dieser Suspension werden nach Abkühlung auf Raumtemperatur zu 460 mg Zink in einem wassergekühlten Gefäß gegeben (diese Zinkmenge entspricht 15 Molanteilen bezüglich des Kupfers). Nach 10 s Rühren mit einem Glasstab wird eine weitere Spatelspitze Zink dem Reaktionsgemisch zugesetzt und weitere 10s gerührt. Der sich bildende Metallschlamm wird auf einer Fritt.e abgetrennt. Die relativ schnelle Trennung kann durch gefingen Stickstoffdruck noch beschleunigt werden. Eine Probe der filtrierten Suspension wird- atomabsoptionsspektroskopiseh ausgemessen und anhand-einer vorher ermittelten Eichkurve ausgewertet. Unter Berücksichtigung der Lipidkonzentration..ergibt sich ei.ii Einschlußvolumen von 1 31/moi. Das ..entspricht den bekannten: werten für diese Strukturen, deren tatsächliches Vorliegen mit optischen und elektronenoptischen Methoden nachgewiesen wurde.
Claims (2)
- Erfindungsanspruch1. Verfahren zur Bestimmung des Einschlußvolumens von Liposomen, dadurch gekennzeichnet, daJ3 die Liposomenbildung in Kupfersuifatlösung durchgeführt, der Liposoraenlösung Zinkstaub zugesetzt, der sich bildende Metallschlamm entfernt und die Menge des in der Liposomenlösung "verbleibenden Kupfers bestimmt wird*
- 2. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, dai3 die Bestimmung des Kupfers atomabsorptionsspektroskopisch oder colorimetrisch mit Dithizon durchgeführt wird.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD24359382A DD210353A1 (de) | 1982-09-29 | 1982-09-29 | Verfahren zur bestimmung des einschlussvolumens von liposomen |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD24359382A DD210353A1 (de) | 1982-09-29 | 1982-09-29 | Verfahren zur bestimmung des einschlussvolumens von liposomen |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DD210353A1 true DD210353A1 (de) | 1984-06-06 |
Family
ID=5541465
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DD24359382A DD210353A1 (de) | 1982-09-29 | 1982-09-29 | Verfahren zur bestimmung des einschlussvolumens von liposomen |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DD (1) | DD210353A1 (de) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2677897A1 (fr) * | 1991-06-24 | 1992-12-24 | Oreal | Procede de preparation de particules submicroniques en presence de vesicules lipidiques et compositions correspondantes. |
-
1982
- 1982-09-29 DD DD24359382A patent/DD210353A1/de not_active IP Right Cessation
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2677897A1 (fr) * | 1991-06-24 | 1992-12-24 | Oreal | Procede de preparation de particules submicroniques en presence de vesicules lipidiques et compositions correspondantes. |
| WO1993000068A1 (fr) * | 1991-06-24 | 1993-01-07 | L'oreal | Procede de preparation de particules submicroniques en presence de vesicules lipidiques et compositions correspondantes |
| US5425993A (en) * | 1991-06-24 | 1995-06-20 | L'oreal | Process for preparing submicron particles in the presence of lipid vesicles, and corresponding compositions |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Cullum | Introduction to surfactant analysis | |
| DE2727730C2 (de) | ||
| DE69123519T2 (de) | Verfahren und Vorrichtung zur Bestimmung von Ionen | |
| EP0088420B1 (de) | Verfahren zur spezifischen Bestimmung des Cholesterins der LDL-Fraktion im Serum | |
| DE68924026T3 (de) | Biosensor und dessen herstellung. | |
| DE69731504T2 (de) | Reagenz und Verfahren zur Freisetzung und Bestimmung von Blei in biologischen Matrices | |
| DE1944246A1 (de) | Verfahren und Vorrichtung zur quantitativen Bestimmung von chemischen Blutsubstanzen in Blutderivaten | |
| DE1814028B2 (de) | Verfahren zur bestimmung des gehalts an freiem und gebundenem hydroxyprolin von koerperfluessigkeiten | |
| DE68922562T2 (de) | Verfahren und Vorrichtung zur Aufbereitung von Proben für die Ionenanalyse. | |
| EP0016962A1 (de) | Mittel zur Entfernung von Ascorbinsäure aus wässrigen Flüssigkeiten | |
| DD210353A1 (de) | Verfahren zur bestimmung des einschlussvolumens von liposomen | |
| DE2625028C3 (de) | Verfahren zur Herstellung von Komplexbildner in eingeschlossener Form enthaltenden Fäden | |
| EP2041281A2 (de) | Verfahren zur parallelen isolierung doppel- und einzelsträngiger nukleinsäuren sowie zur selektiven entfernung doppelsträngiger nukleinsäuren aus einem gemisch von doppel- und einzelsträngigen nukleinsäuren | |
| DE69108165T2 (de) | Verfahren zum Enteisen von Kaolin, Quartz und anderen mineralischen Konzentraten von industriellem Interesse. | |
| DE2712139A1 (de) | Natriumpercarbonat-partikel | |
| DE3886770T2 (de) | Verfahren zur abscheidung von antimon aus säurelösungen. | |
| DE2326224A1 (de) | Verfahren zum abtrennen von durch chemische oder physikalische eigenschaften ausgezeichneten ionisierten stoffen aus einer waessrigen loesung | |
| DE3526143C2 (de) | ||
| DE1583671B1 (de) | Zweiteilige probeentnahmekokille | |
| EP4438178A1 (de) | Behälter zur aufnahme einer kapillarblutprobe und kit zur gewinnung einer kapillarblutprobe | |
| Hagarová | Recent extraction techniques used for separation of silver nNanoparticles from environmental matrices: a brief review | |
| DE3873437T2 (de) | Turbidimetrisches verfahren zum nachweis von lipase in serum. | |
| DE1583671C (de) | ||
| EP0493417B1 (de) | Verfahren zur bestimmung sehr geringer mengen an herbiziden auf der basis von triazinverbindungen | |
| Nigrelli et al. | Osmiophilic and neutral-red-stainable inclusions of Arcella |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ENJ | Ceased due to non-payment of renewal fee |