DD228974A3 - Verfahren zur herstellung von carnitindehydrogenase - Google Patents
Verfahren zur herstellung von carnitindehydrogenase Download PDFInfo
- Publication number
- DD228974A3 DD228974A3 DD24909083A DD24909083A DD228974A3 DD 228974 A3 DD228974 A3 DD 228974A3 DD 24909083 A DD24909083 A DD 24909083A DD 24909083 A DD24909083 A DD 24909083A DD 228974 A3 DD228974 A3 DD 228974A3
- Authority
- DD
- German Democratic Republic
- Prior art keywords
- carnitine
- enzyme
- dehydrogenase
- activity
- carnitine dehydrogenase
- Prior art date
Links
- 108010029922 carnitine dehydrogenase Proteins 0.000 title claims abstract description 23
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 18
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 241000589776 Pseudomonas putida Species 0.000 claims abstract description 7
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract 4
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 claims abstract 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims abstract 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 5
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 4
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims description 4
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 claims description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 3
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 2
- PHIQHXFUZVPYII-ZCFIWIBFSA-N (R)-carnitine Chemical compound C[N+](C)(C)C[C@H](O)CC([O-])=O PHIQHXFUZVPYII-ZCFIWIBFSA-N 0.000 claims 6
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims 4
- 108010066477 Carnitine O-acetyltransferase Proteins 0.000 claims 2
- 102100036357 Carnitine O-acetyltransferase Human genes 0.000 claims 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims 2
- 229960004203 carnitine Drugs 0.000 claims 2
- DIOQZVSQGTUSAI-UHFFFAOYSA-N decane Chemical compound CCCCCCCCCC DIOQZVSQGTUSAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims 2
- KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dithiobis(6-nitrobenzoic acid) Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)O)=CC(SSC=2C=C(C(=CC=2)[N+]([O-])=O)C(O)=O)=C1 KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 102100026024 Acyl-coenzyme A synthetase ACSM3, mitochondrial Human genes 0.000 claims 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims 1
- 102000005870 Coenzyme A Ligases Human genes 0.000 claims 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 claims 1
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 claims 1
- 108010011449 Long-chain-fatty-acid-CoA ligase Proteins 0.000 claims 1
- 102000013460 Malate Dehydrogenase Human genes 0.000 claims 1
- 108010026217 Malate Dehydrogenase Proteins 0.000 claims 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 claims 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 claims 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 claims 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 claims 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 claims 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- PHIQHXFUZVPYII-UHFFFAOYSA-N carnitine Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)CC([O-])=O PHIQHXFUZVPYII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 229910016876 Fe(NH4)2(SO4)2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000004537 pulping Methods 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Carnitindehydrogenase. Die Erfindung hat das Ziel, ein Verfahren zur Herstellung von Carnitindehydrogenase anzugeben, in dessen Verlauf nach einem einfachen Zellaufschlussverfahren eine Aktivitaet des Enzyms bereits im Proteinrohextrakt von mindestens 3 U/mg erzielt wird. Die Erfindung hat die Aufgabe, durch Einsatz einer mikrobiellen Enzymquelle im Zusammenwirken mit einer effektiven Reinigungstechnologie das gewuenschte Enzym mit hoher spezifischer Aktivitaet zur Verfuegung zu stellen. Die Aufgabe wird dadurch geloest, dass das Enzym Carnitindehydrogenase aus dem Stamm Pseudomonas putida ATCC 17633 hergestellt wird.
Description
- 2 - 249 090
erfindungsgemäß hergestellte Enzym ist gut lagerfähig. Bei spezifischen Aktivitäten von 10-20 U/mg sind maximal folgende Fremdaktivitäten nachweisbar:
MDH, LDH jeweils <0,1%
Die Erfindung soll nachstehend an einem Ausführungsbeispiel näher erläutert werden.
Ausführungsbeispiel
Die Kultivierung von Pseudomonas putida ATCC 17633 wird in einem Medium durchgeführt, das pro 1 folgende Bestandteile enthält:
K2HPO,, 7,46 g; NaH2PO4, 0,54 g; MgSO4 · 7H2O, 20 mg;
CaCI2 2H2O, 20 mg; Fe(NH4)2(SO4)2 · 6H20,10 mg;
Als N-Quelle dient (NH4J2SO4 (1 g/l), als C-Quelle D, L-Carnitin HCI (5 g/l).
Die Bakterien werden auf dem gleichen Medium unter Verwendung von gasförmigem Hexan als C-Quelle (0,015% in der zugeführten Luft) vorkultiviert. Das Überimpfen erfolgt im Verlaufe der logarithmischen Wachstumsphase, die Animpfdichten liegen bei Ejoom ~ 0,1. Die Kultivierung erfolgt in einem 10 I-Fermentationsgefäß mit einem Füllinhalt von 7 I unter intensivem Rühren und einem Lufteintrag von 2-10 l/h. Nach einer Kultivierungszeit von 20-30 h bei 300C- die Trübung der Kultur beträgt danach Ej0J"1 = 1,5-2,5 — werden die Bakterien durch Zentrifugation geerntet und anschließend in 0,05 mol/l Phosphatpuffer pH 8 resuspendiert
100 ml-Portionen dieser Suspension werden bei -800C eingefroren und 60 min bei dieser Temperatur belassen. Anschließend werden die Proben für 4 h bei 300C gehalten. Nach Zentrifugation bei 10000 xg für 30 min befinden sich mindestens 75% der Aktivität an Carnitindehydrogenase im zellfreien Überstand. Die spezifische Aktivität des Enzyms liegt unter diesen Bedingungen bei Werten zwischen 2-4 U/mg, der Proteingehalt beträgt etwa 5 mg/ml.
Aus dieser Lösung wird bei 40C durch Zugabe von Ammoniumsulfat bis zu einer Endkonzentration von 70% Sättigung der überwiegende Teil des Proteins gefällt. Die gesamte Aktivität der Carnitindehydrogenase befindet sich im Präzipität. Nach Zentrifugieren wird das Sediment in Ammoniumsulfatlösungen (abnehmende Konzentrationen in jeweils 0,05 mol/l Na2HPO4) bei 00C resuspendiert und erneut zentrifugiert. Auf diese Weise lassen sich im Konzentrationsbereich zwischen 50 und 45% Sättigung 90% der Gesamtaktivität an Carnitindehydrogenase im Überstand nachweisen (siehe Tabelle 2). Das Enzym (spezifische Aktivität 5-10 U/mg) kann durch Zugabe von Ammoniumsulfat auf eine Endkonzentration von 70% Sättigung wieder ausgefällt werden. Trägt man den durch Ammoniumsulfatextraktion gewonnenen Überstand (Ü 45) auf eine Säule, die 10-Carboxy-decylsepharose enthält, auf und eluiert bei 22°C mit Ammoniumsulfatlösungen (Sättigung 40, 35, 30%), wird die Carnitindehydrogenase bis zu einer spezifischen Aktivität von etwa 25 U/mg angereichert (Tabelle 3).
Gewinnung von Carnitindehydrogenase aus Ps putida bei Anwendung verschiedener Aufschlußverfahren Die Bakterien werden nach Kultivierung auf D, L-Carnitin durch Zentrifugation geerntet, in 0,05 mol/l Phosphatpuffer pH 8 resuspendiert (Ejojj"1 ~ 20) und jeweils 20 ml davon anschließend durch Ultraschallbehandlung (4min bei 50 W/cm2) bzw. Einfrieren (30 min; -80°C)/Wiederauftauen (1 h; 30°C) aufgeschlossen.
| Aufschluß- | Gesamtakti | Gesamtaktivi | Gesamt | ing) | spez. Akt. |
| verfahren | vität nach | tät im Über | protein | Überstand | |
| Zellaufschluß | stand nach Auf | im Über | (U/mg) | ||
| (U) | schluß und Zentrifu-stand | ||||
| gation bei | |||||
| 15 000 xg (U) |
| Ultraschall | 180 | 177 | 120 | 1,5 |
| Einfrieren/ Wiederauf tauen | 177 | 183 | 80 | 2,3 |
Fraktionierte Ammoniumsulfatextraktion der Carnitindehydrogenase
Die Angaben beziehen sich auf 320 ml eines Proteinextraktes (4,5 mg Protein/ml), der durch Einfrieren/Wiederauftauen gewonnen wurde.
| (NH4J2SO4 | Volumen | Aktivität | Protein | spez. Aktivität | Ausbeute |
| (%-Sättigung) | (ml) | (U) | (mg) | (U/mg) | (%) |
| 60 (Sediment) | 3 950 | 1 700 | 2,3 | ||
| 60 (Überstand) | 50 | ||||
| 55 (LI 1) | 57 | 35 | 0,8 | ||
| 55 (Ü 2) | 50 | 105 | 2,6 | ||
| 55 (Ü 3) | 50 | 40 | 120 | 0,3 | 1,0 |
| 45 (Ü 1) | 54 | 1 144 | 178 | 6,4 | 29 |
| 45 (Ü 2) | 52 | 1 548 | 210 | 7,4 | 39 |
| 45 (Ü 3) | 42 | 670 | 110 | 6,1 | 17 |
| 35 (Ü 1) | 48 | 220 | 585 | 0,4 | 5,5 |
Reinigung der Carnitindehydrogenase an 10-Carboxydecylsepharose
Auf eine Säule, die 18 ml 10-Carboxydecyl-Sepharose enthält und mit einer (NH4)2 SO4-Lösung (45% Sättigung) äquilibiert ist, werden 106 ml einer Carnitindehydrogenase-Lösung in 45% gesättigter Ammoniumsulfatlösung aufgetragen. Die Lösung enthält 2 080 U des Enzyms und.329 mg Protein. Die Elution wird bei 22°C durchgeführt.
- 3 - 249 090 O
Fraktion
(Nr.)
ml
(NH4I2SCX1 (% Sättigung)
Aktivität
(U)
| Protein | spez. Akt. | Aus |
| beute | ||
| (mg) | (U/mg) | (%) |
| 1. | 106 | 45 |
| 2. | 25 | 45 |
| 3. · | 25 | 45 |
| 4. | 25 | 40 |
| CJl | 25 | 40 |
| 6. | 25 | 35 |
| 7. | 25 | 35 |
| 8. | 25 | 35 |
| 9. | 25 | 35 |
| 10. | 25 | 30 |
| 11. | 20 | 30 |
| 12. | 25 | 30 |
22 2,2 0,6 1,3 1,9 43
177
225
167
386
546
520
| 25 | 7 | 8,5 |
| 18 | 12,5 | 11 |
| 17,5 | 9,5 | 8 |
| 19 | 20 | 18,5 |
| 22 | 25 | 26 |
| 46 | 11 | 25 |
Claims (3)
1. Verfahren zur Herstellung von Carnitindehydrogenase durch Kultivieren von Pseudomonas putida in Submerskultur und flüssigem Minimalmedium, dadurch gekennzeichnet, daß der Stamm ATCC 17633 bei eingeschränkter Sauerstoffversorgung gezüchtet wird.
- 1 - 248 090
Erfindungsanspruch:
2. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß 0,3 bis 1,5 I Luft pro Stunde und Liter Nährmedium eingeleitet werden.
3. Verfahren nach Punkt 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß der Zellaufschluß durch Einfrieren und Wiederauftauen erfolgt.
Anwendungsgebiet der Erfindung
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Carnitindehydrogenase, die in der klinisch-chemischen Diagnostik zur Bestimmung von L-Camitin eingesetzt werden kann.
Charakteristik der bekannten technischen Lösungen
Carnitindehydrogenase wird kommerziell bisher nicht hergestellt. Untersuchungen bezüglich eines Einsatzes zur quantitativen Carnitinbestimmung liegen nicht vor. L-Carnitin wird quantitativ auf enzymatischem Wege z. Z. mit Hilfe von Carnitin-Acetyltransferase (EC 2.3.1.7.) in Kombination mit Acyl-CoA Synthetase (EC 6.2.1.2.) oder DTNB bestimmt (Pearson, D. J., Tubbs, P. K. and Chase, J. F. A. in Methoden der enzymatischen Analyse [H. U. Bergmeyer, Hrsg.] Akademie-Verlag Berlin 1970, S. 1710-1723). Beide Methoden weisen eine Reihe von Nachteilen auf, von denen neben den erheblichen Kosten die relativ komplizierte Handhabung und eine hohe Störanfälligkeit genannt werden müssen. Nachdem Möglichkeiten für die quantitative Bestimmung von L-Carnitin mit Hilfe des optischen Testes geschaffen wurden (Schöpp, W., Analyt. Biochem., in Vorbereitung), ist auch mit dem breiten Einsatz von Carnitindehydrogenase zu rechnen. Das Enzym wird von verschiedenen Pseudomonas-Spezies gebildet (Aurich, H., Kleber, H.-P., und Schöpp, W., Biochem. Biophys. Acta, 139, 505 (1976); Kleber, H.-P., Seim, H., Aurich, H. und Strack, E., Arch. Microbiol. 116, 213 [1978]). Die ermittelten spezifischen Aktivitäten liegen in den zellfreien Extrakten zwischen 1 und 1,5 U/mg.
Die US-PS 4 221 869 beschreibt ein Verfahren zur Herstellung von Carnitindehydrogenase durch Kultivieren des Pseudomonas-Stammes CIP 52 191 unter üblichen Züchtungsbedingungen bei 30°C über 24 Stunden. Es wird Enzym mit einer Aktivität von 0,55 U/mg erhalten. Es ist ersichtlich, daß ein Produkt derart geringer Aktivität kommerziell nicht interessant ist. Ein wirksames Anreicherungsverfahren für das Enzym wird in der zitierten Patentschrift nicht angegeben.
Ziel der Erfindung
Die Erfindung hat das Ziel, ein Verfahren zur Herstellung von Carnitindehydrogenase anzugeben, in dessen Verlauf nach einem einfachen Zellaufschlußverfahren eine Aktivität des Enzyms bereits im Proteinrohextrakt von mindestens 3 U/mg erzielt wird und eine Anreicherung mit Hilfe weniger, jedoch effektiv wirkender TrennteOhniken auf Werte bis zu 25 U/mg kostengünstig möglich
Darüber hinaus soll ein Präparat gewonnen werden, das praktisch frei von Malat- und Laktatdehydrogenase ist. Das ist von wesentlicher Bedeutung, weil dadurch die erheblichen Vorteile der L-Carnitinbestimmung mit Carnitindehydrogenase nach dem optischen Test von W. Schöpp voll zur Geltung kommen.
Darlegung des Wesens der Erfindung
Die Erfindung hat die Aufgabe, durch Auswahl einer mikrowellen Enzymqueile sowie durch Anwenden neuer Kultivierungsbedingungen im Zusammenwirken mit einer effektiven Reinigungstechnologie das gewünschte Enzym mit hoher spezifischer Aktivität, frei von störenden Fremdaktivitäten, zur Verfügung zu stellen.
Die Aufgabe wird erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß das EnzymCaTnitindehydrogenase~durch-K-ultivieretvdes Stammes Pseudomonas putida ATCC 17633 hergestellt wird. Dieser Stamm, der auch in der Sammlung des Jenaer Zentralen Instituts für Mikrobiologie und Experimentelle Therapie hinterlegt worden ist und dort die Bezeichnung ZIMET 10947 erhalten hat, wird erfindungsgemäß bei eingeschränkter Sauerstoffversorgung kultiviert. Im einzelnen werden folgende Verfahrensschritte absolviert.
Die Stammhaltung geschieht bevorzugt auf 2%igem Agar bei 4°C im Dunkeln unter Verwendung von Decan als C-Üuelle und (NH4)2SO4 als N-Quelle. Die Kultivierung von Pseudomonas putida auf Carnitin erfolgt durch Beimpfen aus einer Vorkultur, die unter Verwendung von z. B. gasförmigem Hexan gewonnen wurde. Kultiviert wird bei 20-40"C, in Submerskultur in einem flüssigen Minimalmedium. Die Züchtung wird erfindungsgemäß unter Belüftungsbedingungen durchgeführt, die einer stark eingeschränkten Sauerstoffversorgung der Mikroorganismen entsprechen. Unter diesen Bedingungen erreicht auch die Aktivität der Carnitindehydrogenase maximale Werte. Als N-Quelle werden (NH4J2SO4, NH4CI oder dgl. verwendet. Nach einer Wachstumszeit von 5-40 h - je nach physiologischem Zustand und Menge des Impfmaterials - werden die Bakterien geerntet (z. B. durch Zentrifugation) und anschließend ohne Zwischenschaltung eines Waschprozesses in Phosphatpuffer resuspendiert. Die Gewinnung des zellfreien Rohextraktes erfolgt vorzugsweise durch Einfrieren der Suspension und Wiederauftauen sowie anschließender Zentrifugation. Die hohe Leistungsfähigkeit dieses einfachen Aufschlußverfahrens kann besonders bei Vergleich mit einer Ultraschallbehandlung demonstriett werden (Tab. 1).
Aus den zellfreien Proteinextrakten kann Carnitindehydrogenase durch fraktionierte Salzfällung bzw. -extraktion, z. B. mit Ammoniumsulfat auf das 3- bis 5fache angereichert werden. Hierzu wird dem Proteinrohextrakt festes Ammoniumsulfat bis zu einer Endkonzentration von 70% Sättigung zugesetzt, wobei die gesamte Aktivität in das Sediment gelangt. Zur weiteren Anreicherung der Carnitindehydrogenase wird der Rückstand mit Ammoniumsulfatlösung, die jeweils 0,05 mol/l Na2HPO4 enthält, bei 00C und sinkender Konzentration an (NH4J2SO4 für jeweils 5 min gerührt. Das Enzym wird dabei in zunehmendem Maße gelöst. Die Hauptmenge löst sich im Konzentrationsbereich zwischen 50 und 45% gesättigter Ammoniumsulfatlösung, Carnitindehydrogenase kann direkt aus diesen Lösungen durch Anwendung der hydrophoben Chromatographie z. B. an 10-Carboxydecyl-Sepharose bis auf spezifische Aktivitäten von etwa 25 U/mg angereichert werden.
Die technisch-ökonomischen Vorteile der vorgeschlagenen Verfahrensweise bestehen darin, daß der Stamm Pseudomonas putida ATCC 17633 bereits primär im Vergleich zu bekannten Stämmen ein Vielfaches an Enzymaktivität produziert. Das ist sowohl der Eigenheit des eingesetzten Stammes geschuldet, der sich darin von allen anderen untersuchten Pseudomonas putida-Stämmen unterscheidet, als auch den speziellen Belüftungsbedingungen, d. h. der eingeschränkten Sauerstoffversorgung. Weitere Vorteile bringen das Aufschlußverfahren durch Einfrieren und die Anreicherung des Enzyms an 10-Carboxydecylsepharose. Das
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD24909083A DD228974A3 (de) | 1983-03-23 | 1983-03-23 | Verfahren zur herstellung von carnitindehydrogenase |
| BG6423684A BG49226A1 (en) | 1983-03-23 | 1984-02-13 | Method for preparing carnitindehydrogenase |
| CS225284A CS254131B1 (en) | 1983-03-23 | 1984-03-28 | Method of carnitine dehydrogenase production |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD24909083A DD228974A3 (de) | 1983-03-23 | 1983-03-23 | Verfahren zur herstellung von carnitindehydrogenase |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DD228974A3 true DD228974A3 (de) | 1985-10-23 |
Family
ID=5545844
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DD24909083A DD228974A3 (de) | 1983-03-23 | 1983-03-23 | Verfahren zur herstellung von carnitindehydrogenase |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| BG (1) | BG49226A1 (de) |
| CS (1) | CS254131B1 (de) |
| DD (1) | DD228974A3 (de) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5156966A (en) * | 1989-10-13 | 1992-10-20 | Toyo Jozo Kabushiki Kaisha | L-carnitine dehydrogenase and process for its production |
-
1983
- 1983-03-23 DD DD24909083A patent/DD228974A3/de not_active IP Right Cessation
-
1984
- 1984-02-13 BG BG6423684A patent/BG49226A1/xx unknown
- 1984-03-28 CS CS225284A patent/CS254131B1/cs unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5156966A (en) * | 1989-10-13 | 1992-10-20 | Toyo Jozo Kabushiki Kaisha | L-carnitine dehydrogenase and process for its production |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BG49226A1 (en) | 1991-09-16 |
| CS254131B1 (en) | 1988-01-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE2161164B2 (de) | Verfahren zur mikrobiologischen Erzeugung von Proteinmassen und Verwendung des proteinhaltigen Produkts | |
| DE3048612A1 (de) | "verfahren zur enzymatischen herstellung von l-2-amino-4-methylphosphinobuttersaeure" | |
| DE3307607C2 (de) | ||
| DE69110386T2 (de) | Glukose Dehydrogenase und Verfahren zu deren Herstellung. | |
| EP0164573B1 (de) | Verfahren zur Herstellung von Cyclopropancarbonsäuren | |
| EP0135070B1 (de) | Sarcosin-Oxidase | |
| DE3600563C2 (de) | ||
| DE3127979A1 (de) | Verfahren zur erzeugung von cholesterase und deren anwendung | |
| DE3402504C2 (de) | Verfahren zur Gewinnung von Bilirubinoxidase | |
| DE2637671C3 (de) | Verfahren zur Herstellung von Kreatinin-Desimidase auf mikrobiologischem Wege | |
| DD228974A3 (de) | Verfahren zur herstellung von carnitindehydrogenase | |
| DE4032287C2 (de) | ||
| DE3024915A1 (de) | Verfahren zur gewinnung von kreatinase | |
| DE3888989T2 (de) | Stamm des Genus Thermus, neue Beta-galaktosidase und Verfahren zu dessen Herstellung. | |
| DE2917891C2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Acyl-CoA-Synthetase | |
| DE2164018A1 (de) | Verfahren zur biotechnischen Herstellung von Uricase | |
| DE3025424C2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Galactoseoxidase | |
| DE2659878C3 (de) | Verfahren zur Herstellung von Kreatinamidinohydrolase | |
| DE3728321A1 (de) | Verfahren zur herstellung von carnitin, l-carnitinamid-hydrolase und verfahren zu ihrer gewinnung | |
| DE2517941A1 (de) | Verfahren zur herstellung von d-weinsaeure | |
| DE2358496A1 (de) | Verfahren zur herstellung von l-serin | |
| DE3018584A1 (de) | Verfahren zur herstellung von d- alpha -aminosaeuren | |
| DE3781179T2 (de) | Acyl-coa-synthetase. | |
| EP0031553B1 (de) | Verfahren zur Gewinnung von Glycerin-dehydrogenase | |
| EP0024345A1 (de) | Verfahren zur Gewinnung von Cholesterinesterase |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ENJ | Ceased due to non-payment of renewal fee |