DD236400A1 - Verfahren zum beschichten fester phasen fuer den immunoassay - Google Patents
Verfahren zum beschichten fester phasen fuer den immunoassay Download PDFInfo
- Publication number
- DD236400A1 DD236400A1 DD27540885A DD27540885A DD236400A1 DD 236400 A1 DD236400 A1 DD 236400A1 DD 27540885 A DD27540885 A DD 27540885A DD 27540885 A DD27540885 A DD 27540885A DD 236400 A1 DD236400 A1 DD 236400A1
- Authority
- DD
- German Democratic Republic
- Prior art keywords
- immunoassay
- adsorption
- solid
- antigens
- solid phases
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 title claims description 7
- 238000000576 coating method Methods 0.000 title claims description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 26
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims abstract description 22
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims abstract description 22
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 22
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims abstract description 16
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000010409 thin film Substances 0.000 claims abstract description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 claims description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims 2
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 claims 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- -1 antigens Chemical class 0.000 abstract 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 abstract 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 10
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 9
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 7
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 3
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000003263 anti-adenoviral effect Effects 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589567 Brucella abortus Species 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000701109 Human adenovirus 2 Species 0.000 description 1
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 230000000274 adsorptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 229940056450 brucella abortus Drugs 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000011243 crosslinked material Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000010408 film Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000010137 moulding (plastic) Methods 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- IBUIVNCCBFLEJL-UHFFFAOYSA-M sodium;phosphoric acid;chloride Chemical compound [Na+].[Cl-].OP(O)(O)=O IBUIVNCCBFLEJL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000000954 titration curve Methods 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Die vorgestellte Erfindung bezieht sich auf die Verbesserung der in medizinischer und biologischer Diagnostik weit verbreiteten Verfahren des Festphasen-Immunoassays. Ihr Ziel ist eine Steigerung der Effektivitaet der in diesem Verfahren notwendigen physikalischen Adsorption eines Partners der biologisch aktiven Verbindungen, wie Antigene, Antikoerper usw., an feste Phasen (Traeger), wie zum Beispiel Reaktionstraeger aus Polystyrol, Polyvinylchlorid u. a. Die Aufgabe wird erfindungsgemaess dadurch geloest, dass auf die Oberflaeche dieser festen Phasen ein duenner Film von in Loesungsmitteln geloester nitrierter Zellulose aufgebracht wird. Die Erfindung kann in der Produktion entsprechender diagnostischer Testsaetze durch Betriebe fuer immundiagnostische Praeparate eingesetzt werden.
Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Beschichten fester Phasen (Träger) für den Immunoassay. Dieses dient der Verbesserung der Adsorption von Antigenen oder Immunglobulinen und anderen organischen Verbindungen an feste Phasen, wie zum Beispiel Mikrotestplatten aus Polystyrol, Polyvinylchlorid und anderen Materialien. Es läßt sich in immunologischen Techniken einsetzen, die vorwiegend in der medizinischen, veterinärmedizinischen und biologischen Diagnostik und Forschung zur Darstellung von Antigenen, Antikörpern oder Immunkomplexen genutzt werden. Diese dienen dem Nachweis von Krankheitserregern oder Stoffwechselprodukten unterschiedlichster Genese im Zusammenhang mit pathologischen Prozessen sowie von Antikörpern gegen diese und, meist in Siebtests, der Analyse von Immunreagenten, wie zum Beispiel monoklonalen Antikörpern oder mikrobiellen Antigenen.
Charakteristik der bekannten technischen Lösungen
Die Mehrzahl der beschriebenen Verfahren des Immunoassay (Radioimmunoassay, RIA, Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA, u. a.) erfordert die Trennung von in die Reaktion eingegangenen Immunkomplexen und nicht reagierenden Immunreaktanden. Diese Trennung wurde durch Binden von Antikörpern oder anderen proteinhaltigen Verbindungen (Antigene) an eine feste Phase erreicht (Catt u. Mitarb., Biochem. J. 100, 1966, 31C-33C; Wide und Porath, Biochim. Biophys. Acta 130, 1966, 257-260).
Das Verfahren nutzt die Tatsache aus, daß sich Proteine und andere Reagenten offensichtlich über hydrophobe Wechselwirkungen als praktisch monomolekularen Film an verschiedene Kunststoffe binden können. Die Menge des adsorptiv gebundenen Proteins ist proportional der Konzentration der Proteine in den Lösungen.
Die Bindungsfähigkeit für Proteine ist bei Mikrotestplatten verschiedener Firmen und Chargen nicht gleich. Außerdem lassen sich nicht alle Eiweißkörper gleich gut absorbieren und zeigen diese Träger in unterschiedlichem Maße unspezifische Adsorptionen während der auf die Bindung folgenden immunologischen Reaktionsschritte, die die Ergebnisse wesentlich beeinträchtigen können. (Kenny und Dunsmoor, J. Clin. Microbiol. 17, 1983, 655-665; Shekarchi u. Mitarb., J. Clin. Microbiol. 19,1984, 89-96). Um diesen Nachteil zu beheben, ist verschiedentlich versucht worden, dem Kunststoffträger durch Behandeln der Oberflächen mit organischen Lösungsmitteln bessere adsorptive Eigenschaften zu verleihen (siehe Patente DE 2 509 895 [GB 52653-76] oder DT 2 509 895 u. a.). Auch das Aufbringen von vernetzten Materialien auf Kunststoff-Formkörper wird angeboten (OS 2 337 095 [JP 72577-72]). Ebenso sind kovalente Bindungen über reaktive Gruppen an verschiedenartige feste Phasen (Träger) häufig beschrieben worden, haben jedoch wegen des größeren technischen Aufwandes in Verfahren des Immunoassay nur begrenzt Anwendung gefunden. Die uns bekannten Verfahren sind damit in der Regel mit einem höheren technischen Aufwand verbunden und haben deshalb nach unseren Kenntnissen bisher keine weitere Verbreitung erlangt.
Das Ziel der Erfindung ist, immunologisch aktive biologische Substanzen, das sind Antigene oder Antikörper, wirkungsvoller und besser reproduzierbar adsorptiv an feste Phasen (Träger), vorzugsweise aus Polystyrol, Polyvinylchlorid und anderen Kunststoffen sowie Glas usw., zu binden. Die sich innerhalb der industriellen Fertigung weiter entwickelnde Produktion von Testbestecken für Verfahren des Festphasen-Immunoassay soll effektiver und gegebenenfalls kostengünstiger gestaltet werden, indem die oft teuren biologischen Substanzen in geringeren Konzentrationen eingesetzt werden können. Weiterhin soll durch die bessere Bindung der Reagenten an die Träger die Produktion eine größere Stabilität im Vergleich zum derzeitigen Stand erreichen.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zu entwickeln, daß eine verbesserte Adsorption von Antigenen und Antikörpern an feste Phasen (Träger) erlaubt.
Erfindungsgemäß wird sie dadurch gelöst, daß ein Träger mit einer Lösung von nitrierter Zellulose, vorzugsweise 0,1 bis 0,001 Prozent, in einem für ihn unschädlichen Lösungsmittel, vorzugsweise Methanol, beschickt und anschließend das Lösungsmittel verdampft wird. Bei Verwendung gebräuchlicher Mikrotestplatten kann diese Beschichtung durch ein Tauchverfahren
-2- 754
oder durch Einfüllen von 0,050 bis 0,250 ml dieser Lösungen in die einzelnen Vertiefungen (Becher) mit anschließendem Verdampfen bei Temperaturen erfolgen, die für die benutzten Materialien unschädlich sind, vorzugsweise zwischen 150C und 500C. Die auf solche Weise vorbehandelten Mikrotestplatten werden in den bekannten Verfahren des ELISA als feste Phasen (Träger) eingesetzt. Wir beschreiben benutzte immunologische Testsysteme und Verfahren unter Ausführungsbeispiel.
2 Mikrotestplatten aus Polystyrol (Scopyrol), glasklar, Flachbodenform (VEB MLW Polyplast Halberstadt, DDR - 3600 Halberstadt).
Platte 1 wie oben angegeben mit 0,1 % nitrierter Zellulose in Methanol vorbehandelt (0,100 ml je Vertiefung). Platte 2 nicht vorbehandelt.
Auf beiden Mikrotestplatten (feste Phase) wurde der ELISA in folgender gleicher Weise durchgeführt:
1. Adsorption von 0,025 mg pro ml Immunglobulin Anti-Adenovirus Typ 2 in Adsorptionspuffer-Lösung, pH 9,6, 16 Stdn. bei 4°C. In jede der jeweils 96 Vertiefungen wurden 0,100 ml eingefüllt (0,0025 mg).
2. Dreimaliges Spülen mit Natriumchlorid-Phosphatpuffer-Lösung unter Zusatz von 0,05% Tween 20 und 0,02% Natriumazid (PBST), pH 7,2.
3. Einfüllen von je 0,100 ml Antigen Adenovirus Typ 2 Hexon (0,010 mg/ml) in PBST und 2 Stdn. Inkubation bei 30°C.
4. Fünfmaliges Spülen wie unter 2.
5. Einfüllen von je 0,100 ml Globulin Anti-Adenovirus Typ 2, markiert mit dem Enzym Alkalische Phosphatase (AP) und 2 Stdn. Inkubation bei 30 °C.
6. Spülen wie unter 4.
7. Einfüllen von je 0,250 ml 4-Nitrophenylphosphat (4-NPP) in Diäthanolaminpuffer-Lösung, pH 9,8, und Inkubation 1 Std. bei 3O0C.
8. Zufügen von je 0,025 ml 3N Natronlauge zum Stoppen der Enzymreaktion.
9. Messen der Extinktion der einzelnen Proben bei λ = 400 nm (E400 nm) im Spektralkolorimeter Spekol (Kombinat VEB Carl Zeiss JENA, DDR - 6900 Jena) unter Verwendung des Extinktionsmeßansatzes EKA und Mikroabsaugküvette.
10. Errechnen der mittleren Extinktionen der Proben und ihrer Standardabweichungen. Ergebnis:
Mit nitrierter Zellulose vorbehandelter Träger:
E400 nm = 1,06 ± 0,14 (VK = 13,4%) Träger nicht vorbehandelt (Kontrolle):
E400nm = 0,542 ±0,081 (VK =14,9%).
Durch das vorangehende Beschichten der festen Phase (Träger) mit nitrierter Zellulose läßt sich die meßbare Extinktion als Folge verbesserter Adsorption des Immunglobulins auf etwa 200% (195,6%) im dargestellten Beispiel steigern.
Die Träger wie in Beispiel 1 wurden parallel mit 0,1 %; 0,01 % und 0,001 % nitrierter Zellulose in Methanol beschichtet. Die Kontrolle ist nicht beschichtet worden.
Vergleiche Figur 1.
Der ELISA wurde wie unter Beispiel 1 in folgenden Schritten ausgeführt (Waschprozesse und Nachweisreaktion mit 4-NPP sind nicht nochmals aufgeführt):
1. Adsorption von Antigen Influenzavirus A/PR/8/34 (H1N1) in den Konzentrationen 0,024 mg/ml; 0,012 mg/ml; 0,006 mg/ml und 0,003 mg/ml (das entspricht den Ziffern 1, 2, 3 bzw. 4 der Figur 1).
2. Inkubation von Serum Anti-Influenzavirus A/PR/8/34 (H1N1) in der stets gleichen Gebrauchsverdünnung 10~3.
3. Inkubation von Globulin Anti-Kaninchenglobulin (IgG), markiert mit dem Enzym AP. Ergebnis (Figur 1):
Die Steigerung der Adsorption des Antigens nach dem Beschichten kann selbst bei Einsatz von 0,001 % nitrierte Zellulose noch etwa 200% erreichen und liegt bei Verwendung höherer Konzentrationen darüber. Die Höhe der Extinktionen E400 nm ist von der Menge des eingesetzten Antigens abhängig und zeigt die gleichen Tendenzen wie in der nicht vorbehandelten Kontrolle.
Die Träger wurden parallel mit zwei verschiedenen Mustern nitrierter Zellulose zu 0,1 % in Methanol beschichtet. Die Kontrollen sind nicht beschichtet worden. Der ELISA wurde wie unter Beispiel 1 in folgenden Schritten ausgeführt (Waschprozesse und Nachweisreaktion mit 4-NPP sind nicht nochmals aufgeführt):
1. Adsorption von Influenzavirus A/PR/8/34 (H1N1) in einer Gebrauchsverdünnung.
2. Inkubation von Serum Anti-Influenzavirus A/PR/8/34 (H1N1) vom Kaninchen in den Verdünnungsstufen 10~3, 5 · 10~3, 2,5 10~4 und 7,5· 10"4.
3. Inkubation von Globulin Anti-Kaninchenglobulin (IgG), markiert mit dem Enzym AP. Ergebnis:
Die Tabelle 1 zeigt die gemessenen Extinktionen E400 nm. Es sind Mittelwert M und Standardabweichung s angegeben.
-з- 754
| Serum | Kontrolle | S | Muster I | S | Muster I | I | S |
| verdünnung | M | 0,030 | M | 0,08 | M | 0,14 | |
| 10-3 | 0,457 | 0,034 | 2,34 | 0,14 | 2,31 | 0,18 | |
| 5· 10"3 | 0,366 | 0,015 | 1,55 | 0,087 | 1,50 | 0,026 | |
| 2,5· Ю-4 | 0,189 | 0,005 | 0,476 | 0,030 | 0,473 | 0,030 | |
| 7,5· Ю-4 | 0,100 | 0,214 | 0,226 | ||||
Zwischen Proben nitrierter Zellulose unterschiedlicher Herkunft sind keine signifikanten Differenzen festzustellen.
Die Träger wurden wie in Beispiel 1 mit 0,1 % nitrierter Zellulose beschichtet. Die Kontrollen sind nicht beschichtet worden. Der ELISA wurde wie unter Beispiel 1 in folgenden Schritten ausgeführt (Waschprozesse und Nachweisreaktion mit 4-NPP sind nicht nochmals aufgeführt):
1. Adsorption von Influenzavirus A/PR/8/34 (H1N1) in Konzentrationen von 100; 25; 6,25 und 3,13 цд/ті.
2. Inkubation von Serum Anti-Influenzavirus A/PR/8/34 (H1N1) vom Kaninchen in den Verdünnungsstufen 10"3 bis 5 · Ю"4.
3. Inkubation von Globulin Anti-Kaninchenglobulin (IgG), markiert mit dem Enzym AP. Ergebnis (Figur 2):
Es sind die für verschiedene Konzentrationen von Antigen Influenzavirus auf der festen Phase (Träger) erhaltenen Extinktionen E400 nm gegen die Serumverdünnungen des 2. Inkubationsschrittes aufgetragen und die erhaltenen Punkte durch Linien verbunden worden. Die Schnittpunkte der Horizontalen, die bei E400 nm = 0,300 gezogen wurden, mit den erhaltenen Kurven sind durch vertikale Linien auf die die Serumverdünnungen darstellende Achse (X) projiziert worden. Der obere Teil der Figur 2 zeigt die Titrationskurven des Antiserums auf den verschiedenen Konzentrationen Antigen, das nach Beschichten der Träger mit nitrierter Zellulose adsorbiert wurde. Im unteren Teil sind die Parallelen auf vorher nicht beschichteten Trägern dargestellt. Es ist deutlich zu erkennen, daß auch geringe Konzentrationen des Antigens auf vorher mit nitrierter Zellulose beschichteten festen Phasen ausreichend hohe Extinktionen ergeben. Die Neigung der Kurven hängt von der Konzentration des Antigens ab. Die erhaltenen Serumtiter (Schnittpunkte der vertikalen Linien) sind weitgehend unabhängig von der Konzentration des eingesetzten Antigens und betragen etwa 3 · 10"4. Die Titrationskurven auf den als Kontrolle dienenden Trägern, die vorher nicht mit nitrierter Zellulose beschichtet wurden, sind bedeutend flacher. Dazu kommt in den höheren Konzentrationen des Antigens ein deutlicher Prozoneneffekt, der störend wirkt; möglicherweise zurückzuführen auf die geringere Adsorptionsfähigkeit, so daß während der Wasch prozesse Immunkomplexe abgelöst werden. Der Serumtiter von etwa 3 · 104 ist ebenfalls zu ermitteln; allerdings müssen höhere Konzentrationen des Antigens (mindestens 25 мд/ті) eingesetzt werden.
Es reicht folglich bei vorhergehendem Beladen mit nitrierter Zellulose eine etwa 10fach geringere Menge Antigen aus, um reproduzierbare Werte zu erhalten.
Analoge Ergebnisse werden erhalten, wenn Immunglobuline (Antikörper) an die feste Phase (Träger) gebunden werden und der Titer von Antigen-Lösungen auf diesen zu bestimmen ist.
Es wurde der Einfluß unspezifischer Adsorptionsreaktionen in den immunologischen Reaktionsschritten an den Trägern vergleichend untersucht (Figur 3).
Die Träger wurden wie in Beispiel 1 mit 0,1 % nitrierter Zellulose beschichtet. Die Kontrollen sind nicht beschichtet worden. Der ELISA wurde wie in Beispiel 1 in folgenden Schritten ausgeführt (Waschprozesse sind nicht nochmals aufgeführt):
1. An die Träger wurden parallel nachfolgend genannte Antigene adsorbiert: (1) - Influenzavirus A/PR/8/34 (H1N1); (2) Lipopolysaccharid-Extrakt (LPS) aus Brucella abortus; (3) - 1%ige Lösung von humanem Serumalbumin; (4) - 1%ige Lösung von Kälberserum; (5) - reine Adsorptionspuffer-Lösung, pH 9,6, d. h. kein Antigen.
2. Inkubation eines humanen Serums, das Antikörper gegen Influenzavirus A enthält, in einer Konzentration von 5 · 10"' auf allen Antigenen.
3. Inkubation von Globulin Anti-Humanglobulin, markiert mit den Enzymen Alkalische Phosphatase (AP-AHuG) oder Meerrettich-Peroxidase (POD-AHuG).
4. Nachweis der enzymatischen Aktivität von AP wie unter Versuch 1 beschrieben; Nachweis der enzymatischen Aktivität von Peroxidase mit o-Phenylendiamin (OPD) und Wasserstoffperoxid sowie Stoppen der Reaktion mit 4N Schwefelsäure und Messen der Extinktion bei einer Wellenlänge von 492 nm.
Ergebnis:
Die Figur 3 zeigt deutlich, daß die sogenannten unspezifischen Reaktionen auf heterologen Antigenen besonders hervortreten, wenn die Träger vorher nicht mit nitrierter Zellulose beschichtet wurden (Kontrollen; rechts in Figur 3). Sie können praktisch vernachlässigt werden, wenn die feste Phase einen dünnen Film von nitrierter Zellulose trägt (nitrierte Zellulose; links in Figur 3).
Mit nitrierter Zellulose beladene Träger, an die Antigene oder Antikörper adsorbiert wurden, lassen sich ohne Verlust an Aktivität mindestens 3 Monate in trockenem Zustand verpackt bei +40C (sehr kühl) aufbewahren.
Ähnliche Ergebnisse wie in den unter Beispiel 1 bis 6 beschriebenen lassen sich auch auf Mikrotestplatten anderer Herkunft erzielen. Versuche wurden durchgeführt mit Mikrotestplatten des VEB MLW Polyplast Halberstadt, der Flow Laboratories sowie mit Testplatten Dynatech-Microelisa.
Claims (3)
- -1- 754 08Erfindungsanspruch:1. Verfahren zum Beschichten fester Phasen*für den Immunoassay zur Adsorption von Antigenen, Antikörpern oder anderen biologisch aktiven Substanzen an Oberflächen-von Festphasen (Trägern) aus unterschiedlichen Materialien, wie zum Beispiel Polystyrol, Polyvinylchlorid und andere Produkte, gekennzeichnet dadurch, daß die Oberflächen der Träger vor der Adsorption der Substanzen mit einem dünnen Film von nitrierter Zellulose versehen werden.
- 2. Verfahren nach Punkt 1 gekennzeichnet dadurch, daß die nitrierte Zellulose in einem die Oberfläche der Festphasen nicht angreifenden Lösungsmittel, vorzugsweise Methanol, gelöst wird und in Konzentrationen von 0,1 und weniger Prozent auf diese Oberflächen, im Festphasen-Immunoassay vorzugsweise Mikrotestplatten oderTeströhrchen, durch Einfüllen oder Eintauchen aufgetragen wird.
- 3. Verfahren nach Punkt 1 und 2 gekennzeichnet dadurch, daß das Lösungsmittel bei Temperaturbedingungen, die für das jeweilige Trägermaterial unbedenklich sind, vorzugsweise zwischen 150C und 500C, abgedampft wird und ein dünner Film nitrierter Zellulose auf der Festphase zurückbleibt, an dem biologisch aktive Substanzen adsorptiv gebunden werden können.Hierzu 3 Seiten Zeichnungen
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD27540885A DD236400A1 (de) | 1985-04-22 | 1985-04-22 | Verfahren zum beschichten fester phasen fuer den immunoassay |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD27540885A DD236400A1 (de) | 1985-04-22 | 1985-04-22 | Verfahren zum beschichten fester phasen fuer den immunoassay |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DD236400A1 true DD236400A1 (de) | 1986-06-04 |
Family
ID=5567064
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DD27540885A DD236400A1 (de) | 1985-04-22 | 1985-04-22 | Verfahren zum beschichten fester phasen fuer den immunoassay |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DD (1) | DD236400A1 (de) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0211229A3 (en) * | 1985-07-09 | 1987-12-16 | Behringwerke Aktiengesellschaft | Coated carriers for the binding of bio-affinative substances, method for their preparation as well as their use |
| WO1994015216A1 (fr) * | 1992-12-23 | 1994-07-07 | Niyazmatov Agzamdzhan Akhtamov | Procede d'obtention d'un reactif de diagnostic destine a detecter des antigenes et des anticorps de maladies infectieuses et autres |
| DE19853640A1 (de) * | 1998-11-20 | 2000-06-08 | Molecular Machines & Ind Gmbh | Mehrgefäßanordnung mit verbesserter Empfindlichkeit für die optische Analytik |
-
1985
- 1985-04-22 DD DD27540885A patent/DD236400A1/de not_active IP Right Cessation
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0211229A3 (en) * | 1985-07-09 | 1987-12-16 | Behringwerke Aktiengesellschaft | Coated carriers for the binding of bio-affinative substances, method for their preparation as well as their use |
| WO1994015216A1 (fr) * | 1992-12-23 | 1994-07-07 | Niyazmatov Agzamdzhan Akhtamov | Procede d'obtention d'un reactif de diagnostic destine a detecter des antigenes et des anticorps de maladies infectieuses et autres |
| DE19853640A1 (de) * | 1998-11-20 | 2000-06-08 | Molecular Machines & Ind Gmbh | Mehrgefäßanordnung mit verbesserter Empfindlichkeit für die optische Analytik |
| DE19853640C2 (de) * | 1998-11-20 | 2002-01-31 | Molecular Machines & Ind Gmbh | Mehrgefäßanordnung mit verbesserter Empfindlichkeit für die optische Analytik, Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung in optischen Analyseverfahren |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE3705686C2 (de) | Verfahren zur Bestimmung von Antikörpern | |
| DE68924914T2 (de) | Immuntest und testanordnung. | |
| DE3687589T2 (de) | Festkoerpersystem zur verwendung in ligand-rezeptoruntersuchungen. | |
| US4273867A (en) | Method and reagent for counteracting lipemic interference | |
| DE3136579C2 (de) | ||
| DE69021529T2 (de) | Reaktionsgefäss. | |
| DE69114394T2 (de) | Analytisches Element mit biologisch aktivem Reagens und Verfahren zur Verwendung des Reagens. | |
| EP0849595B1 (de) | Synthetische Partikel als Agglutinationsreagenzien | |
| DD245727A5 (de) | Ein verfahren zum nachweis und/oder messen klinischer parameter beim immunisierungsprozess von enzymen | |
| DE3021208C2 (de) | Verfahren zur Bestimmung eines Antigens, Antikörpers oder Antigen-Antikörperkomplexes und Verwendung eines in einer Verpackungseinheit konfektionierten Mittels zur Durchführung des Verfahrens | |
| DK158481B (da) | Fremgangsmaade til analyse af antistoffer samt reagens dertil | |
| DE69106002T2 (de) | Testverfahren und reagenziensatz dafür. | |
| EP0483512B1 (de) | Immunologisches Präzipitationsverfahren zur Bestimmung eines bindefähigen Analyten sowie Reagenz zur Durchführung dieses Verfahrens | |
| DE68918643T2 (de) | Artikel zur Durchführung von Immuntests unter Verwendung von organischen Farbstoffen sowie Methoden zu seiner Herstellung und seiner Verwendung. | |
| DE3346795A1 (de) | Enzymimmunoassay und entsprechendes diagnostikum | |
| AT395076B (de) | Vorrichtung und verfahren fuer die diagnostische bestimmung klinischer parameter | |
| EP0211229B2 (de) | Mit Überzügen versehene Formkörper zur Bindung von bioaffinen Substanzen | |
| DE3048884A1 (de) | Verfahren zur enzymimmunobestimmung in heterogener phase | |
| EP0366092B1 (de) | Verfahren zur Bestimmung von für ein Antigen klassenspezifischen Antikörpern und dazu geeignetes Reagenz | |
| EP0331127B1 (de) | Verfahren zur Herstellung einer Festphasenmatrix | |
| DE2755689A1 (de) | Verfahren zur bestimmung der anwesenheit einer komponente einer immunchemischen reaktion und diagnostisches immunchemisches testmaterial zur durchfuehrung des verfahrens | |
| DE3804244A1 (de) | Verfahren zur bestimmung einer immunologisch aktiven substanz | |
| DE2907228A1 (de) | Immunochemische bestimmung | |
| DE69019326T2 (de) | Reaktionskit. | |
| DE3854603T2 (de) | Teststreifen für diagnose durch multi-immunoassay system. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ENJ | Ceased due to non-payment of renewal fee |