DD247003A1 - Verfahren zur herstellung von in 2-stellung mit amninhaltigen gruppen subst. 7 h-1,3,4-thiadiazolo(3,2-a)pyrimidinen - Google Patents

Verfahren zur herstellung von in 2-stellung mit amninhaltigen gruppen subst. 7 h-1,3,4-thiadiazolo(3,2-a)pyrimidinen Download PDF

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Hydrierwerk Rodleben Veb
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Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von 7H-1,3,4-Thiadiazolo(3,2-a)pyrimidinen, die in 2-Stellung mit aminhaltigen Gruppen substituiert sind und fuer die Therapie ischaemischer Herz-Kreislauferkrankungen bzw. als Antithrombotika Verwendung finden koennen. Erfindungsgemaess fuehrt man eine Cyclisierung der entsprechend substituierten 1-Acylamino-2-thioxo-1,2,3,4-tetrahydropyrimidine in Gegenwart von Polyphosphorsaeure bei Temperaturen von 90 bis 95C durch.

Description

Anwendungsgebiet der Erfindungv
Die Erfindung betrifft ein Herstellungsverfahren für N-substituierte oder N-substituierte 2-(Aminophenyl)-, 2-(Phenylaminomethyl)-, 2-(Phenyl-methyl-amino-methyl)-,- 2-(Älky]-amino-methyl)-, 2-(Aminophenoxy-methyl)-, 2-(Aminophenyl-methyl)-, 2-(Nitro-phenyl-amino-methyl)- und 2-(Amino-phenyl-amino-methyl)-7H-1,3,4-thiadiazolo(.3,2-a)-pyrimidirie, die für die Therapie ischämischer Herz-Kreislauferkrankungen und als Antithrombotika Verwendung finden können und als Ca-Antagonist und als cAMP-spaltende Phosphodiesterase-Hemmer wirksam sind.
Charakteristik der bekannten technischen Lösungen
1,3,4-Thiadiazolo(3,2-a)pyrimidine wurden erstmals 1959 dargestellt (C. F. H. Allen und Mitarbeiter: J. Org.Chem. 24,779 [1959]).
Unterschiedlich substituiert existieren folgende Strukturtypen:
5H-1,3,4-Thiadiazolo(3,2-a).pyrimidin-5-one beziehungsweise -thione, 7H-1,3,4-Thiadiazolo(3,2-a)pyrimidin-7-one, 1,3,4-Thiadiazolo(3,2-a)pyrimidiniumsalze, mesoionische 1,3,4-Thiadiazolo(3,2-a)pyrimidine"und 2-Alkyl-, 2-Cycloalkyl-, 2-Phenyl-, 2-(Halogenphenyl)-, 2-(Nitrophenyl)-2-(Methoxyphenyl)-,'2-Phenoxymethyl- und 2-(Halogenphenoxymethyl)-7H-1,3,4-thiadiazolo(3,2-a)pyrimidine.
Zur Synthese sind zwei Prinzipien bekannt:
— Es wird von einem 2-Amino-1,3,4-thiadiazol ausgegangen und der Pyrimidinring wird durch Umsetzung mit einem 1,3-bifunktionellen C3-Bäustein ankondensiert.
— Es wird von einem N-Amino- beziehungsweise N-Acylamino-pyrimidin-2-thion aasgegangen und der Thiadiazolring wird durch Umsetzung mit einer Carbonsäure oder einem Carbonsäurederivat beziehungsweise durch Dehydratisierung geschlossen.
Der erste Syntheseweg ist zur Herstellung von 7H-1,3,4-Thiadiazolo-(3,2-a)pyrimidinen nicht geeignet. Diese Verbindungen wurden erstmals 1978 (z. Chem. 18, 66 [1978]) durch cyclisierende Dehydratisierung von 4,4,6-trialky!substituierten 1-Acylamino-2-thioxo-1,2,3,4-tetrahydro-pyrimidinen hergestellt. Ein verbessertes Verfahren (DD-WP 200741/0, C07 D513/04, 08.06.1983) verwendet H2SO4 als Kondensationsmittel, wobei es aber leicht zur Sulfonierung der 5-Methylgruppe und des eventuell vorhandenen Arylsubstituenten in 2-Steliung kommen kann.
Ziel der Erfindung
Ziel der Erfindung ist es, ein Verfahren zur Herstellung von in 2-Stellung mit aminhaltigen Gruppen substituierten 7 H-1,3,4-Thiadiazolo(3,2-a)pyrimidinen zu entwickeln.
Darlegung des Wesens der Erfindung
Diese Aufgabe, 7 H-1,3,4-Thiadiazolo(3,2-a)pyrimidine der allgemeinen Formel:
in der R eine Aminophenyl- Dimethylaminophenyl-, Aminophenylmethyl-, Phenylaminomethyl-, Diethylaminomethyl-, Phenylmethyl-methylaminomethyl-, Am inophen oxy methyl- oder Aminophenylaminomethyl-Gruppe bedeuten kann, wird erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß man die Cyclisierung der entsprechenden 1-Acylamino-2-thioxo-1,2,3,4-tetrahydropyrimdine mittels Polyphosphorsäure bei 90 bis 95°C durchführt.
Ausführungsbeispiel <.
Die in 2-Stellung mit aminhaltigen Gruppen substituierten 7 H-1,3,4-Thiadiazolo(3,2-a)pyrimidine werden nach folgender. allgemeiner Herstellungsvorschrift dargestellt:
0,02mol des entsprechenden 1 -Acylamino-1,2,3,4-tetrahydropyrimidins werden feinpulverisiert mit 40 mol Polyphosphorsäure verrieben und unter Feuchtigkeitsausschluß und öfterem Umschütteln solange auf 950C erhitzt, bis eine klare, farblose Lösung entsteht (etwa 2 Stunden'). Sie wird unter Rühren und Kühlen (T < 25°C) in 200ml Wasser aufgenommen. Das sich beim· Zutropfen von konz. Ammoniak (T < 250C) bis pH 8 abscheidende Thiadiazolo-pyrimidin wird mit Ether oder Methyienchlorid extrahiert, der Extrakt mit Wasser gewaschen und das Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Der Rückstand wird durch Umkristallisation bzw. Vakuumdestillation gereinigt.
Tabelle 1
In 2-Steliung mit aminhaltigen Gruppen substituierte 7H-1,3,4-Thiadiazolo(3,2-a)pyrimidine (I)
I R Fp/|mmlKp.°C Ausbeute in %
a 0-NH2C6H4 255,5-258 58
b 'm-NH2-C6H4 . 161-164 - 71
c P-NH2-C6H4 173,5-177,5 67
'd P-(CH3J2N-C6H4 ' 109-111,5 83
e" P-NH2-C6H4-CH2 98-101,5 63
f C6H5-NH-CH2 Harz 96
g (C2H5J2N-CH2 125-128 · ' 61
h C6H5-CH2-N(CH3J-CH2 (2)214 ' 31
i P-NH2-C6H4-O-CH2 100-105,5 11
j m-N H2-C6H4-N H-CH2 Harz 51
Anwendungsmöglichkeiten
Die neuen Verbindungen (I) zeichnen sich durch ein breites Spektrum interessanter pharmakodynamischer Wirkungen aus, die siefür die Therapie ischämischer Herz-Kreislauferkrankungen bzw. als Antithrombotika geeignet erscheinen lassen.
In tierexperimentellen Untersuchungen wurden neben koronardilatierenden und positiv inotropen Wirkungen eine ausgeprägte, bekannten Verbindungen mit gleicher Wirkungsweise deutlich überlegene Hemmung der Thrombozytenaggregation sowohl in vitro als auch unter in-vivo-Bedingungen nachgewiesen. Die neuen Verbindungen erwiesen sich als Ca-Antagonisten und starke Hemmer der cAMP-spaltenden Phosphodiesterase.
Am Beispiel des 2-p-Amino-phenyl-5,7,7-trimethyl-7 H-1,3,4-thiadiazolo-(3,2-a)pyrimidins (Ic) wird dargestellt, welche Wirkungen die neuen Verbindungen erzielen:
1. Hemmung der Thrombozytenaggregation in vitro
Plättchen der Ratte wurden separiert und in Michaelis-Puffer (pH7,4) und defibriniertem homologem Plasma (1:1) suspendiert.
Zu 1,2 ml dieser Plättchensuspendion wurden 10/xl Präparatlösung in Ethanol zugegeben und nach 2min. Vorinkubation bei 370C die Aggregation durch Zugabe von Arachidonsäure (2mmol/l Endkonzentration in der Küvette) gestartet. Die Messung der Thrombozytenaggregation erfolgte nephelometrisch nach der Methode von BORN (Born, V. R. u. Gross U. J.: J. Physiol. 186,178
Zur Charakterisierung der Wirksamkeit wurde der negative Logarithmus der mittleren molaren Hemmkonzentration (plC50) ermittelt.
PlC50
Ic 4,75
Trapidil 2,49
Im Vergleich zu dem bekannten Arzneimittel Trapidil erweist sich die neue Verbindung Ic als etwa 10Ofach wirksamer.
2. Hemmung der Thrombozytenaggregation in vivo . ·
Intravenöse Applikation von Arachidonsäure verursacht beim Kaninchen über eine intravasale Thrombozytenaggregation, insbesondere in den Lungengefäßen, Erstickungssymptome und letale Effekte.
Bereits in niederen, symptomlos tolerierten Konzentrationen kann die aggregatorische Wirkung der Arachidonsäure auf Grund einer transienten, unmittelbar nach der Injektion nachweisbaren Verminderung der Zahl frei zirkulierender Thrombozyten im peripheren Blut quantitativ ermittelt und die Wirksamkeit vorher verabreichter Wirkstoffe nachgewiesen werden. An nicht narkotisierten Kaninchen wurde nach Blutentnahme aus der Ohrvene die Zahl der Blutplättchen mittels Phasenkontrastmikroskopie ermittelt. Anschließend wurde Arachididonsäure-Na in einer Dosis von 0,1 mg/kg i. v. injiziert und dieThrombozytenzahl V2,1,2,3, 5 und 10 min. danach erneut bestimmt. Als quantitatives Kriterium für die Ararchidonsäureinduzierte thrombozytopenie wurde die von der prozentualen Senkung der Plättchenzahl umschlossene Fläche planimetrisch ausgewertet und deren Wert für die Kontrollgruppe gleich 100% gesetzt.
Zur Prüfung der in-vivo-Wirksamkeit der Verbindung Ic wurde diese nach Ermittlung der individuellen unbeeinflußten Arachidonsäure-Reaktion als Suspension in Ultraquellzellulose mittels flexibler Schlundsonde per oral verabreicht und in der oben dargelegten Weise das Ausmaß der Thrombozytopenie 1,2,4,6 und 24 h nach Präparatgabe erneut bestimmt.
Es wurden die Dosen des Ic bzw. der bekannten Vergleichspräparate Trapidil und Acetylsalicylsäure ermittelt, durch die eine 50%ige Hemmung der Arachidonsäure-induzierten Thrombozytopenie erreicht wurde (ED50).
ED50
mg/kg p.o.
Ic 3,7
Trapidil 21,5
Acetylsalicylsäure 33,0
Die neue Verbindung Ic bestätigte auch unter in-vivo-Bedigungen und insbesondere nach peroraler Applikation ihre hohe Wirksamkeit gegenüber einer Thrombozytenaggregation und zeigte sich bekannten Vergleichspräparaten gegenüber deutlich überlegen.
3. Korornardilatation ,
Die Untersuchungen wurden am isolierten nach LANGENDORFF perfundiertem Herzen des Meerschweinchens durchgeführt.
Die Herzen wurden in einer thermostatierten Kammer bei 37°C und einem Druck von 8 kPa mit Sauerstoff-begasterTyrodelösung (pH7,4) durchströmt. Die Messung der Kontraktionen erfolgte mit einem Dehnungsmeßstreifen, der Koronarfluß wurde mittels Staurohr und Druckmesser erfaßt die Verabreichung der Testverbindung erfolgte in Einzeldosen unmittelbar vor Eintritt der
Perfusionslösung in das Herz. .
Ic erhöht am isolierten Herzen den koronaren Durchfluß, wobei dieser Effekt ausgeprägter ist im Vergleich zum Trap'idil.
Durchflußerhöhung
Dosis Dl
mg in
Ic 0,05 48
Trapidil 0,10 43
Die Herzfrequenz wird durch Ic nicht signifikant beeinflußt, während die Herzkontraktionskraft (dp/dt) in etwa gleichem Ausmaß wie beim Vergleichspräparat Trapidil erhöht wird
4. Ca2+-antagonistischeWirkung
Bekannte Ca2+-antagonistisch wirksame Verbindungen hemmen die durch BaCI2-Induzierten Spasmen isolierter Heumpräparate. Zum Nachweis relevanter Wirkungen der neuen Verbindung Ic wurde am Meerschweinchen-Ileum in vitro in der Anordnung nach MAGNUS der Einfluß auf die BaCI2 (3 x 10"3M/l) ausgelösten Kontraktionen-untersucht. 3cm lange, aus dem terminalen Teil des lleums entnommene Organpräparate wurden in Tyrodelösung bei 35°C unter Sauerstoffbegasung suspendiert und die Kontraktionen mittels HLW-Wegaufnehmer erfaßt und registriert. Als ED50 wurde jene Präparatdosis ermittelt, die die BACI2-Wirkung auf 50% reduzierte.
-log ED50
Ic 5,02
Trapidil 2,84
Die hohe Wirksamkeit des Ic im Vergleich zum Trapidil läßt diese neue Verbindung auch hinsichtlich einer möglichen Caantagonistischen Wirksamkeit als interessant erscheinen.
5. Phosphödiesterase-Hemmung
Die Bestimmung der Aktivität der cAMP-spaltenden Phosphodiesterase (PDE) erfolgte nach BUTCHER u. SUTHERLAND (Butcher, R.W. u. E.W.Sutherland: J.biol.Chem. 237,1 244 [1962]).
Der Ansatz (0,9ml) hatte folgende Zusammensetzung:
1,8mM MgSO4, 36 mM TRIS, 0,5 mM cAMP (Fa. Boehringer, Mannheim). Die Reaktion verlief bei pH 8,0 und 37°C und wurde nach 10min durch Erhitzen 1 min im siedenden Wasserbad gestoppt. Danach wurde 0,1 ml Nucleotidase-Lösung (Crotaius atrox, Sigma USA) zugegeben und weitere 10min bei 370C inkubiert. Zur Bestimmung des abgespaltenen Orthophosphats wurde die Inkubation durch Zugabe von 0,1 ml 5 η HCIO4 gestoppt und nach Zentrifugation das Phosphat nach ALLEN (Allen, R. I. L.:
Biochem. J. 38, 858 [1940]) erfaßt.
Die neue Verbindung Ic erwies sich in diesen Untersuchungen als starker Hemmer der cAMP-spaltenden Ph osphieste rase, wobei folgende Hemmkonstanten ermittelt wurden:
Hemmkonstante Κ; •ic' 1,2 x 10"5M
Trapidil . 1,3 χ 10""3M

Claims (1)

  1. Erfindungsanspruch:
    Verfahren zur Herstellung von in.2-StelIung mitaminhaltigen Gruppen substituierten 7H-1,3-4-Thiadiazolo(3,2-a)pyrimidinen der allgemeinen Formel
    Λ,
    in der R eine Aminophenyl-, Dimethylaminophenyl-, Aminophenylmethyl-, Aminophenylaminomethyl-, Phenylaminomethyl-, Phenylmethyl-methylaminomethyl-, Aminophenoxymethyl und Diethylamino-methyl-Gruppe bedeuten kann, gekennzeichnet dadurch, daß man die Cyclisierung der entsprechenden 1-Acylamino-2-thioxo-1,2,3,4-tetrahydropyrimidine in Gegenwart von Polyphosphorsäure bei Temperaturen von 90 bis 95°C durchführt.
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