DD260996A5 - Analyseelement zur bestimmung von gerinnungsparametern - Google Patents
Analyseelement zur bestimmung von gerinnungsparametern Download PDFInfo
- Publication number
- DD260996A5 DD260996A5 DD87303652A DD30365287A DD260996A5 DD 260996 A5 DD260996 A5 DD 260996A5 DD 87303652 A DD87303652 A DD 87303652A DD 30365287 A DD30365287 A DD 30365287A DD 260996 A5 DD260996 A5 DD 260996A5
- Authority
- DD
- German Democratic Republic
- Prior art keywords
- analysis element
- composite structure
- cofactor
- element according
- factor
- Prior art date
Links
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title claims abstract description 33
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims abstract description 31
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 26
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 claims abstract description 25
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 claims abstract description 25
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 25
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 15
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 9
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 8
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 claims abstract description 4
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 claims description 9
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 claims description 9
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 claims description 9
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims description 9
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 claims description 6
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims description 4
- 230000002411 adverse Effects 0.000 claims description 3
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000002759 woven fabric Substances 0.000 claims description 3
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 15
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 15
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 9
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 235000019422 polyvinyl alcohol Nutrition 0.000 description 5
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 4
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 4
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 4
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 4
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 3
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 3
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 3
- UFGRQHCDOOVYSP-UHFFFAOYSA-N (4-fluoro-n-methylanilino)methylphosphonic acid Chemical compound OP(=O)(O)CN(C)C1=CC=C(F)C=C1 UFGRQHCDOOVYSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004831 Hot glue Substances 0.000 description 2
- WVMBPWMAQDVZCM-UHFFFAOYSA-N N-methylanthranilic acid Chemical compound CNC1=CC=CC=C1C(O)=O WVMBPWMAQDVZCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000007888 film coating Substances 0.000 description 2
- 238000009501 film coating Methods 0.000 description 2
- 229920000831 ionic polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 2
- 238000005691 oxidative coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 239000004014 plasticizer Substances 0.000 description 2
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 2
- 229920002959 polymer blend Polymers 0.000 description 2
- 229920002689 polyvinyl acetate Polymers 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- 239000006173 Good's buffer Substances 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 description 1
- 229920006255 plastic film Polymers 0.000 description 1
- 229920006289 polycarbonate film Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 239000002861 polymer material Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 239000005871 repellent Substances 0.000 description 1
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Die Erfindung betrifft ein Analyseelement zur Bestimmung von Gerinnungsparametern mit Hilfe eines nachweisbaren oder eine Nachweisreaktion ausloesenden Substrats, einer Protease des Blutgerinnungssystems und mindestens eines Fektors und/oder Cofaktors des Blutgerinnungssystems und einer Puffersubstanz. Als Traegermaterial zumindest fuer den Faktor und/oder Cofaktor ist eine offene, flaechige Verbundstruktur vorgesehen, die aus einem Material besteht, das keinen stoerenden Einfluss auf den Ablauf der Gerinnungskaskade hat. Es ist mit einem wasserloeslichen nichtionogenen Polymer, das den Ablauf der Gerinnungskaskade nicht verfaelschend beeinflusst, und gegebenenfalls dem Substrat und dem Faktor und/oder Cofaktor impraegniert.
Description
Hierzu 1 Seite Zeichnung
Die Erfindung betrifft ein Analyseelement zur Bestimmung von Gerinnungsparametern mit Hilfe von einem nachweisbaren oder eine Nachweisreaktion auslösenden Substrat, einer Protease des Blutgerinnungssystems und mindestens einem Faktor und/ oder Cofaktor des Blutgerinnungssystems und einer Puffersubstanz und/oder Cofaktor zusammen mit einem wasserlöslichen, nichtionogenen Polymer, das den Ablauf der Gerinnungskaskade nicht verfälschend beeinflußt, auf einer offenen, flächigen Verbundstruktur, die aus einem Material besteht, das keinen störenden Einfluß auf den Ablauf der Gerinnungskaskade hat, imprägniert ist.
Ein derartiges Analysesystem ist in der älteren, jedoch nicht vorpublizierten, deutschen Patentanmeldung P 3516579 beschrieben. Auf diese Anmeldung wird vollinhaltlich Bezug genommen. Dort wird als Trägermaterial bevorzugt Papier oder ein Vlies eingesetzt. In einer anderen Ausführungsform des dort beschriebenen Analyseelements befindet sich das Substrat und/ oder der Cofaktor in einem wasserlöslichen, filmbildenden Polymeren. Der reagentienhaltige Film wird auf eine Basisfolie aufgebracht.
Will man mit dem in der zitierten Patentanmeldung beschriebenen Analyseelement beispielsweise die Einphasengerinnungszeit nach Quick bestimmen, so enthält es Thromboplastin als Cofaktor (gelegentlich auch als Aktivator bezeichnet), Calciumionen und ein Substrat für Thrombin (eine Protease des Blutgerinnungssystems). Wird dieses Analyseelement mit Plasma in Kontakt gebracht, indem beispielsweise ein Tropfen Plasma aufgebracht wird, so wird durch die Anwesenheit des Thromboplastin und der Calciumionen die Gerinnungskaskade gestartet. Das beim Ablauf der Gerinnungskaskade entstehende Thrombin spaltet das Substrat. Das Substrat ist so ausgewählt, daß es nach der Spaltung entweder unmittelbar nachweisbar ist oder eine Nachweisreaktion auslöst. Im allgemeinen wird eine Farbbildung verwendet. Das Substrat ist in diesem Fall entweder selbst farbbildend oder das Spaltprodukt löst indirekt eine Farbbildung über eine Folgereaktion aus. Alternativ können für die
Nachweisreaktionen beispielsweise auch solche Substrate verwendet werden, die fluoreszierende Farbstoffe erzeugen. Der Typ der Nachweisreaktion ist für die vorliegende Erfindung unwesentlich.
Das in der zitierten Patentanmeldung beschriebene Verfahren bedeutet einen erheblichen Fortschritt, weil erstmalig ein Analyseelement (das gelegentlich auch als Trockentest oder Testträger bezeichnet wird) zur Bestimmung von Parametern des Blutgerinnungssystems zur Verfügung gestellt wird. Es läßt jedoch noch bezüglich der Präzision der erhaltenen Meßergebnisse zu wünschen übrig. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung wurde erkannt, daß die bei Analyseelementen üblichen Papiere oder Vliese den Ablauf der Gerinnungskaskade in vielen Fällen so beeinflussen, daß das Meßergebnis nicht den aus medizinischer Sicht wünschenswerten Grad von Genauigkeit erreicht.
Werden die Reagentien in einen wasserlöslichen Film inkorporiert, so wird eine Beeinflussung der Gerinnungskaskade im vorerwähnten Sinn bei geeigneter Wahl der Filmbildner zwar vermieden, dennoch läßt die Präzision der Messung zu wünschen übrig. Dies läßt sich, wie ebenfalls im Rahmen der vorliegenden Erfindung erkannt wurde, darauf zurückführen, daß die Filmschicht die Reagentien verhältnismäßig langsam freisetzt. Für den Gerinnungstest müssen die Reagentien aber möglichst kurzfristig freigesetzt werden, weil die Gerinnungseigenschaften der Probe über eine Zeitmessung ermittelt werden. Der Anfangspunkt dieses Zeitraums wird durch eine verzögerte Freisetzung der Reagentien unpräzise.
Ziel der Erfindung ist die Bereitstellung eines verbesserten Analyseelements zur Bestimmung von Gerinnungsparametern, welches die Nachteile der bekannten Analyseelemente nicht aufweist.
Darlegung des Wesens der Erfindung -
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Analyseelement für Gerinnungstests zu Verfugung zu stellen, das ebenso leicht zu handhaben ist, wie das in der zitierten Patentanmeldung beschriebene, jedoch eine verbesserte Präzision aufweist.
Die Aufgabe wird gelöst durch ein Analyseelement zur Bestimmung von Gerinnungsparametern mit Hilfe von einem nachweisbaren oder eine Nachweisreaktion auslösenden Substrat, einer Protease des Blutgerinnungssystems und mindestens einem Faktor und/oder Cofaktor des Blutgerinnungssystems und einer Puffersubstanz, derart, daß der Faktor und/oder Cofaktor zusammen mit einem wasserlöslichen, nichtionogenen Polymer, das den Ablauf der Gerinnungskaskade nicht verfälschend beeinflußt, auf einer offenen, flächigen Verbundstruktur, die aus einem Material besteht, das keinen störenden Einfluß auf den Ablauf der Gerinnungskaskade hat, imprägniert ist.
Erfindungsgemäß ist das Substrat zusammen mit dem Faktor und/oder Cofaktor und dem wasserlöslichen nichtionogenen Polymer auf der offenen, flächigen Verbundstruktur imprägniert.
Insbesondere ist das Substrat zusammen mit einem wasserlöslichen nichtionogenen Polymer auf eine zweite offene, flächige Verbundstruktur imprägniert, welche von der den Faktor und/oder Cofaktor tragenden Verbundstruktur getrennt ist.
Die flächige offene Verbundstruktur ist erfindungsgemäß mit Calciumionen imprägniert. Dabei kann die flächige Verbundstruktur ein Gewebe, Gewirke oder Netz sein. Bevorzugt besteht das Gewebe, Gewirke oder Netz aus monofilen Fäden.
Bevorzugt weist die flächige Verbundstruktur eine Dicke von höchstens 0,25 mm und mindestens 20 Fäden pro cm auf.
Das nichtionogene Polymer ist ein Filmbildner, der bei Temperaturen unter 50°C in Wasser löslich ist.
Bei einem Analyseelement, bei dem als Cofaktor Thromboplastin verwendet wird, wird ein das Thromboplastin auf der fläch igen Verbundstruktur stabilisierendes Polymer angewandt, beispielsweise ein Polyethylenoxid, ein Polyacrylamid oder ein Polyvinylalkohol.
Als offene flächige Verbundstruktur ist jede Struktur zu verstehen, die flächig ausgedehnt ist, d. h. sie hat eine geringe Dicke (von bevorzugt weniger als 0,5 mm, besonders bevorzugt weniger als 0,25 mm) in Relation zu ihrer Flächenausdehnung. Die Flächenausdehnung ist durch die Testfeldfläche innerhalb des Analyseelementes bestimmt. Mit „offen" ist gemeint, daß die Struktur geeignet sein soll, einer wäßrigen Flüssigkeit, wie beispielsweise einer Plasmaprobe, ein schnelles Eindringen zu ermöglichen, wobei die Struktur eine möglichst große Oberfläche haben soll, die in Kontakt mit der Probe gebracht werden kann.
Geeignet wäre beispielsweise eine siebartige Struktur aus einem Kunststoffmaterial, d. h. eine Kunststoffolie mit sehr vielen dicht beeinander angeordneten Löchern. Besonders bevorzugt ist jedoch ein Gewebe, ein Gewirke oder ein Netz, das aus Fäden besteht. Insbesondere sind monofile Fäden geeignet.
Als Material zur Herstellung der flächigen Verbundstruktur ist im Prinzip jedes Material geeignet, das keinen störenden Einfluß auf den Ablauf der Gerinnungskaskade hat und aus dem sich fertigungstechnisch eine Struktur der beschriebenen Art herstellen läßt. Außerdem muß das Material so beschaffen sein, daß das nichtionogene Polymer mit den Reagentien darauf haftet.
Besonders bevorzugte Materialien sind Polyamid, Polyester und Mischgewebe aus diesen Fasern. Die Fadenzahl pro cm liegt bevorzugt über 20.
Die Frage, ob das für die Verbundstruktur gewählte Material den Ablauf der exogenen Gerinnungskaskade beeinflußt, läßt sich wie folgt testen: 40 mg des Materials werden mit 300 μΙ Citratplasma 60s bei 370C inkubiert. Danach wird das Plasma abzentrifugiert, die Gerinnbarkeit des Plasmas darf sich nicht statisch signifikant geändert haben.
Das nichtionogene Polymer muß die Eigenschaft haben, daß es sich bei den bei der Anwendung üblichen Temperaturen hinreichend schnell im wäßrigen Medium löst. Es wurde gefunden, daß auch Materialien, die sich bei größerer Schichtstärke erst bei oberhalb der Raumtemperatur liegenden Temperaturen in Wasser ausreichend schnell lösen, noch geeignet sind, weil sie auf der erfindungsgemäßen Verbundstruktur in dünner Schicht vorliegen.
Weiterhin muß das nichtionogene Polymer die Eigenschaft haben, auf der flächigen Verbundstruktur eine haftende, dünne Schicht zu bilden. Im Gegensatz zu einer Beschichtung, wie sie beispielsweise bei der Herstellung regenabweisender Kleidung üblich ist, bei der ein Polymermaterial auf einer Gewebeschicht dergestalt aufgebracht wird, daß die Polymerschicht im wesentlichen auf einer Seite der Gewebestruktur bleibt und deren Öffnungen überspannt, wird die erfindungsgemäße Verbundstruktur mit dem nichtionogenen Polymer imprägniert, d. h. das Polymer umgibt die Verbundstruktur allseitig.
Geeignete Polymere sind beispielsweise nichtionogene Cellulose-Derivate, Polyvinylpyrrolidone und Poiyxanthane.
Als besonders geeignet haben sich Polyethylenoxide, Polyacrylamide sowie teilweise oder vollständig zu Polyvinylalkohol verseifte Polyvinylacetate erwiesen. Innerhalb der letztgenannten Gruppe sind die teilweise verseiften Polyvinylacetate bevorzugt. Besonders bevorzugt sind Polyvinylacetate mit einem Verseifungsgrad zwischen 70 und 93Mol-%. Alle diese Polymere haben überraschenderweise den zusätzlichen Vorteil, daß sie das Thromboplastin stabilisieren. Auf diese Weise läßt sich ein Quick-Test herstellen, der sich durch ein besonders gutes Lagerverhalten auszeichnet. Gegebenenfalls können auch Gemische geeigneter nichtionogener Polymere zur Anwendung kommen. Zur Herstellu ng der erfindungsgemäßen Reagenzträger wird zu nächst eine Lösung des Faktors und/oder des Cofaktors und des nichtionogenen wasserlöslichen Polymeres hergestellt. Gegebenenfalls können noch andere Bestandteile, beispielsweise Weichmacher, zugegeben werden. Mit dieser Lösung wird die flächige Verbundstruktur bevorzugt durch Eintauchen, unter Umständen auch durch Besprühen imprägniert. Die geeignete Viskosität der Imprägnierungslösung kann nicht generell festgelegt werden, sondern ist für jedes nichtionogene Polymer bzw. Polymergemisch unterproduktionstechnischen Gesichtspunkten auf das jeweilige Gewebe abzustimmen. Gut bewährt haben sich Viskositäten zwischen 50 und 250 m Pa see. Das als Indikator wirkende Substrat kann zusammen mit dem Faktor und/oder dem Cofaktor und dem nichtionogenen wasserlöslichen Polymeren auf der flächigen Verbundstruktur imprägniert werden. Unter Umständen kann es jedoch problematisch sein, den Faktor und/oder Cofaktor zusammen mit dem Substrat zu verarbeiten. In diesem Falle hat es sich als zweckmäßig erwiesen, das Substrat auf einem separaten Trägermaterial unterzubringen. Für diesen Zweck kommen verschiedene bekannte Trägermaterialien in Betracht. Besonders bevorzugt wird jedoch auch in diesem Fall eine offene, flächige Verbundstruktur als Trägermaterial verwendet, welche analog dem vorbeschriebenen Verfahren mit einer Lösung imprägniert wird, welche neben dem Substrat ein nichtionogenes wasserlösliches Polymer enthält. Dadurch ergibt sich ein besonders gleichmäßiges Auflösungsverhalten der beiden Trägermaterialschichten, die einerseits den Faktor und/oder den Cofaktor und andererseits das als Indikator dienende Substrat enthalten.
Gemäß einer weiteren bevorzugten Ausführungsform wird die offene, flächige Verbundstruktur bzw. soweit mehrere derartige Strukturen verwendet werden, mindestens eine davon gleichzeitig mit dem bei Gerinnungstests im allgemeinen zur Recalcifizierung des Plasmas erforderlichen Calciumionen imprägniert.
Puffersubstanzen können ebenfalls zusammen mit dem Faktor und/oder Cofaktor imprägniert werden, sie können jedoch auch auf einem separaten Trägermaterial des Analyseelementes vorhanden sein.
Die Erfindung wird im folgenden anhand einiger Beispiele näher erläutert. In der beiliegenden Zeichnung zeigt: Fig. 1: ein erfindungsgemäßes Analyseelement schematisch im Querschnitt.
Man erkennt als tragenden Bestandteil des allgemein mit 10 bezeichneten Analyseelements eine Trägerfolie 1. Im dargestellten Ausführungsbeispiel hat sie eine längliche Form wie bei einem Teststreifen. Die Erfindung ist jedoch auch für andere Formen von Analyseelementen geeignet, die beispielsweise eine quadratische Form ähnlich der von fotografischen Diapositiven haben.
Auf der Trägerfolie 1 ist mit einem Streifen Schmelzkleber 2 ein Erythrozytenabtrenn-und Plasmatransportvlies befestigt.
Besonders eignet sich ein Vlies aus einem gerinnungsneutralen Glasfasermaterial, wie es in den DE-Patentanmeldungen 3523969 und 3610429 beschrieben ist. Das im folgenden kurz als Transportvlies bezeichnete Vlies 4 ist teilweise mit einem ebenfalls mit dem Kleber 2 befestigten Abdecknetz 3 überdeckt. Hierfür ist ein Nylonnetz geeignet.
Drei weitere flächenförmige Bestandteile des Analyseelements 10 sind mit einem Streifen Schmelzkleber 8 dargestellt auf der Trägerfolie 1 befestigt, daß sie das Transportvlies 4teiiweise überlappen. Da sie nur an einer ihrer Kanten aneinander und an der Trägerfolie 1 befestigt sind, haben sie über ihre verbleibende Fläche einen Abstand voneinander, solange sie nicht durch äußeren Druck aufeinander gedrückt werden. Näheres zu dieser Art des Testaufbaus ist beispielsweise der EP-Patentanmeldung mit der Publikationsnummer 45476 zu entnehmen.
Die unterste Schicht 5 kann ein Oxidationsmittelträger sein, der im folgenden auch als Oxidationsmatrix bezeichnet wird.
Darüber befindet sich der erfindungsgemäße Reagenzträger 6 in Form der imprägnierten offenen Verbundstruktur. Als oberste Schicht ist eine Abdeckfolie 7 vorgesehen.
Bevorzugt wird für die Schicht 6 ein Gewebe verwendet, das mit einer Lösung imprägniert ist, in der die Filmbildner, Puffer, Thromboplastin oder ein anderes Startreagenz für den Start der exogenen oder endogenen Gerinnungskaskade sowie ein zugleich als Indikator wirkendes Substrat für eine der beim Ablauf der Blutgerinnungenstehenden Proteasen, wie z. B. Faktor Ha, Faktor Xa usw., eventuell noch ein Kuppler, sowie Calcium-Ionen und eventuell noch ein Weichmacher für den Filmbildner im Wasser gelöst sind. Als Puffersubstanzen haben sich Tris und Verbindungen aus der Reihe der Good-Puffer bewährt. Als Substrate können alle Proteasesubstrate genommen werden, die aufgrund ihrer Aminosäuresequenz ausreichend spezifisch sind, wie z.B. Tos-gly-pro-arg-4-nitroanilid-acetat, oder Tos-gly-pro-arg-p-phenylendiamin-acetat und N-Methylanthranilsäure als Kuppler; andere Kuppler, wie N-(4-Fluorphenyl)-N-methylamino-methanphosphonsäure usw., können ebenfalls eingesetzt werden.
Bei Indikatoren, die nach Spaltung durch die Protease über eine angeschlossene oxidative Kupplung eine Farbe geben, ist es notwendig, in der Schicht 5 ein Oxidationsmittel, wie z. B. Ka[Fe(CN)6] vorzusehen. Gegebenenfalls können in der Schicht 5 auch Calciumionen untergebracht werden. Bevorzugt wird für die Schicht 5 ebenfalls ein dünnes Gewebe verwendet, das imprägniert wurde. Soweit ein Indikator verwendet wird, bei dem keine Verstärkungsreaktion über eine oxidative Kupplung erforderlich ist, entfällt die Oxidationsmatrix 5. Die Schicht 5 kann bei der oben erwähnten alternativen Ausführungsform mit separater Unterbringung des Substrats auch eine flächige Verbundstruktur sein, auf die das Substrat getrennt von dem Faktor und/oder Cofaktor imprägniert ist.
Nähere Einzelheiten über die chemische Zusammensetzung verschiedener Gerinnungstests, die auch für die vorliegende Erfindung geeignet sind, sind der eingangs zitierten deutschen Patentanmeldung 3516579 zu entnehmen.
In den folgenden Beispielen werden die Ergebnisse, wie sie mit Reagenzfilmen auf Folie gemäß der zitierten deutschen Patentanmeldung erzielt werden, verglichen mit Ergebnissen mit erfindungsgemäß imprägnierten Geweben.
Herstellung eines Analyseelements zur Bestimmung der Einphasengerinnungszeit nach Quick
Herstellung von Reagenzfilmen (Reagenzmatrix) auf Folie
Auf Polycarbonatfolien der Dicke 200 μηπ werden mit einer Naßfilmdicke von 100 pm Filme in der Tab. 1 aufgeführten Zusammensetzungen aufgerakelt und bei 45°C getrocknet. Nach dem Trocknen werden die beschichteten Folienbahnen auf eine Breite von 15mm geschnitten.
Herstellung von imprägnierten Geweben (erfindungsgemäß)
Polyamidgewebe (Typ 75 HC) werden mit Imprägnierlösungen der in Tab. 1 aufgeführten Zusammensetzungen imprägniert und bei 450C getrocknet. Nach dem Trocknen werden die imprägnierten Gewebebahnen auf eine Breite von 15 mm geschnitten.
Herstellung der Oxidationsmatrix
Ein Nylonnetz (Type NY 20 HC Super) wird mit einer wäßrigen Lösung von 50 mmol K3[Fe(CN)6] !,öOmmolCalciumchlorid/i und 0,2g/1 Polyacrylamid (Rohagit700) imprägniert und bei 450C getrocknet. Nach dem Trocknen werden von dem imprägnierten Netz 15mm breite Bahnen geschnitten.
Herstellung der Beschichtungs- bzw. Imprägniermassen
In 1 Liter destilliertes Wasser werden Hepes lOOmmol; Tos-Gly-Pro-Arg-p-phenylendiamin 1 mmol; N-(4-fluorphenyl)-N-methylamino-methanphosphonsäure 15mmol; 2,5g Thromboplastin und die Polymere entsprechend den in Tabelle 1 gemachten Angaben gelöst. Diese Lösungen werden mit Natronlauge auf einen pH von 7,5 eingestellt.
Polymere
1. Polyvinylalkohol Mowiol (26/88, Hoechst)
2. Polyvinylalkohol Mowiol (18/88, Hoechst)
3. Polyethylenoxid
(Polyox 301, Union Carbide) Polyacrylamid (Rohagit7Ö0, Röhm)
4. Polyvinylalkohol Mowiol 18/88, Hoechst) Polyacrylamid (Rohagit 700, Röhm)
Herstellen des Analyseelements
Auf eine 100 mm breite Polystyrolfolie (1 in Abb. 1) wird ein Glasfaservlies (4 in Abb. 1) gemäß der DE-Patentanmeldung 3523969 von einem Flächengewicht von 30-40g/m2in einer Breite von 15 mm gelegt, mit einem Nylonnetz (3 in Abb. 1) teilweise abgedeckt und an einem Ende mit einem Kleber (2 in Abb. 1) fixiert. Am freien Ende des Glasfaservlies werden die Oxidations- (5 in Abb. 1) und Reagenzmatrix (6 in Abb. 1) übereinandergelegt und mit einer 200 μπι dicken transparenten Polycarbonatfolie (7 in Abb. 1) von 15 mm Breite abgedeckt und mit einem Kleber 8 (2 in Abb. 1) festgeklebt. Die so hergestellten Bänder werden zu 6 mm breiten Streifen geschnitten.
Der Aufbau des Analyseelements mit einem Reagenzfilm auf Folie entspricht im wesentlichen dem beschriebenen Aufbau gemäß Abb. 1. Er unterscheidet sich jedoch dadurch, daß statt der Schichten 6 und 7 eine einzige Schicht vorgesehen ist. Diese besteht aus einer durchsichtigen Folie, die mit dem Film beschichtet ist. Sie ist so angeordnet, daß die Folie in der Figur nach oben weist.
Vergleich der mit Filmbeschichtung auf Folie und dem erfindungsgemäßen Verfahren zu erreichenden Präzisionen bei der Bestimmung der Einphasengerinnungszeit nach Quick
Dazu wird wie folgt vorgegangen:
Auf die oben beschriebenen Teststreifen werden 32 μΙ Poolplasma von einem Quickwert von 100% und einem durch Verdünnung mit physiologischer Kochsalzlösung hergestelltem Plasma von 12,5% pipettiert. Der mit den Plasmaproben beschickte Reagenzträger wird im Remissionsphotometer „Reflotron" vermessen. Es wird die Zeit gemessen, die vergeht, bis eine Remissionsabnahme von 10% stattgefunden hat, d. h. die Zeit, bis die exogene Gerinnungskaskade soweit abgelaufen ist, daß eine bestimmte Menge an Thrombin (Faktor Ha) entstanden ist.
Bei den Meßreihen wurden jeweils 25 Bestimmungen je Testvariante und % Quick durchgeführt.
Die Meßergebnisse sind in Tabelle 2 dargestellt.
Die vier Zeilen der Tabelle beziehen sich auf die vier verschiedenen Polymere bzw. Polymergemische der Tabelle 1. In den ersten beiden Spalten sind die Meßergebnisse für den zum Vergleich herangezogenen Film auf Folie dargestellt. Die letzten beiden Spalten zeigen die Meßergebnisse für die erfindungsgemäße Aüsführungsform.
Für jede der Ausführungsformen sind die gemessenen Zeiten für das 100%-Plasma und für das 12,5%-Plasma angegeben.
Wesentlich für die Beurteilung der Erfindung sind insbesondere die ebenfalls angegebenen Variatjonskoeffizienten (VK) in Prozent.
Die in der Tabelle wiedergegebenen Meßergebnisse zeigen deutlich, daß mit der erfindungsgemäßen Ausführung statistisch signifikant bessere Variationskoeffizienten erhalten werden. Im Bereich von niedrigen Quickprozenten, im wichtigen therapeutischen Bereich, tritt die verbesserte Präzision besonders deutlich hervor.
| Menge in der Beschich- tungsmasse | Menge in derlmprä gnierlösung |
| 70 g | 40g |
| 75 g | 50 g |
| 10g | ig |
| 5g | 2,5 g |
| 60g | 40 g |
| 10g | 5g |
| Polymer | 100 S | Filmbeschichtung | 12,5 S | % Quick VKin% | erfindungsgemäße Ausführung | 2,6 | 12,5 S | % Quick VKin% |
| 42,4 | % Quick VKin% | 118,0 | 9,4 | 100% Qu ick s VKin% | 1,4 | 66,1 | 3,1 | |
| 1 | 42,9 | 3,4 | 123,2 | 10,3 | 41,6 | 1,7 | 67,3 | 3,2 |
| 2 | 44,2 | 2,1 | 83,2 | 5,2 | 39,6 | 1,5 | 83,3 | 2,3 |
| 3 | 44,9 | 4,9 | 110,7 | 7,1 | 35,1 | 70,2 | 2,2 | |
| 4 | 4,1 | 38,1 | ||||||
Claims (10)
1. Analyseelement zur Bestimmung von Gerinnungsparametern mit Hilfe von einem nachweisbaren oder eine Nachweisreaktion auslösenden Substrat, einer Protease des Blutgerinnungssystems und mindestens einem Faktor und/oder Cofaktor des Blutgerinnungssystems und einer Puffersubstanz, dadurch gekennzeichnet, daß der Faktor und/oder Cofaktor zusammen mit einem wasserlöslichen, nichtionogenen Polymer, das den Ablauf der Gerinnungskaskade nicht verfälschend beeinflußt, auf einer offenen, flächigen Verbundstruktur, die aus einem Material besteht, das keinen störenden Einfluß auf den Ablauf der Gerinnungskaskade hat, imprägniert ist.
2. Analyseelement nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Substrat zusammen mit dem Faktor und/oder Cofaktor und dem wasserlöslichen nichtionogenen Polymer auf der offenen, flächigen Verbundstruktur imprägniert ist.
3. Analyseelement nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Substrat zusammen mit einem wasserlöslichen nichtionogenen Polymer auf eine zweite offene, flächige Verbundstruktur imprägniert ist, welche von der den Faktor und/oder Cofaktor tragenden Verbundstruktur getrennt ist.
4. Analyseelement nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß die flächige, offene Verbundstruktur zusätzlich mit Calciumionen imprägniert ist.
, 5. Analyseelement nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die flächige Verbundstruktur ein Gewebe, Gewirke oder Netz ist.
6. Analyseelement nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß das Gewebe, Gewirke oder Netz aus monophilen Fäden besteht.
7. Analyseelement nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß die flächige Verbundstruktur eine Dicke von höchstens 0,25mm hat und mindestens 20 Fäden pro cm aufweist.
8. Analyseelement nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das nichtionogene Polymer ein Filmbildner ist, der bei Temperaturen unter 500C in Wasser löslich ist.
9. Analyseelement nach Anspruch 1, bei dem als Cofaktor Thromboplastin verwendet wird, dadurch gekennzeichnet, daß ein das Thromboplastin auf der flächigen Verbundstruktur stabilisierendes Polymer verwendet wird.
10. Analyseelement nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß das Polymer ein Polyethylenoxid, ein Polyacrylamid oder ein Polyvinylalkohol ist.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD87303652A DD260996A5 (de) | 1986-05-16 | 1987-06-10 | Analyseelement zur bestimmung von gerinnungsparametern |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19863616496 DE3616496A1 (de) | 1986-05-16 | 1986-05-16 | Analyseelement zur bestimmung von gerinnungsparametern |
| DD87303652A DD260996A5 (de) | 1986-05-16 | 1987-06-10 | Analyseelement zur bestimmung von gerinnungsparametern |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DD260996A5 true DD260996A5 (de) | 1988-10-12 |
Family
ID=25748149
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DD87303652A DD260996A5 (de) | 1986-05-16 | 1987-06-10 | Analyseelement zur bestimmung von gerinnungsparametern |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DD (1) | DD260996A5 (de) |
-
1987
- 1987-06-10 DD DD87303652A patent/DD260996A5/de not_active IP Right Cessation
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0245802B1 (de) | Analyseelement zur Bestimmung von Gerinnungsparametern | |
| EP0182373B1 (de) | Gerinnungstest auf Teststreifen | |
| DE69110098T2 (de) | Teststreifen zur visuellen Bestimmung der Blutglucosekonzentration. | |
| DE2158124C3 (de) | Verwendung von Polyamidvlies oder -filz als saugfähiger Träger für diagnostische Mittel | |
| DE1598153C3 (de) | Diagnostisches Mittel zum Nach weis der Inhaltsstoffe von Korperflus sigkeiten | |
| EP0271854B1 (de) | Testträger für die analytische Bestimmung von Bestandteilen von Körperflüssigkeiten | |
| EP0054679B1 (de) | Verwendung von Reagenzstreifen zur Herstellung von Reagenzlösungen | |
| DE2436598A1 (de) | Stabiler teststreifen zum nachweis von inhaltsstoffen in fluessigkeiten | |
| EP0302287B1 (de) | Testträger zur Bestimmung eines Analyten aus Blut und Verfahren zu seiner Herstellung | |
| DE7611756U1 (de) | Indikationsstreifen zur kennzeichnung von sterilisiervorgaengen | |
| EP0995992B1 (de) | Spreitschichten, Netzmittel zu ihrer Herstellung und deren Verwendung in Teststreifen | |
| DE2118455B1 (de) | Teststreifen | |
| DD201388A5 (de) | Mittel zur abtrennung von plasma oder serum aus vollblut | |
| EP0457183A1 (de) | Vorrichtung und deren Verwendung zur Abtrennung von Plasma aus Vollblut | |
| EP0262445A1 (de) | Mehrschichtiger Testträger | |
| EP0353500A2 (de) | Testträger zur analytischen Bestimmung eines Bestandteils einer flüssigen Probe | |
| DE2910134A1 (de) | Diagnostisches mittel zum nachweis von bestandteilen von koerperfluessigkeiten | |
| EP0239002B1 (de) | Testträger und Verfahren zur Bestimmung von Gerinnungsparametern | |
| DE2518721A1 (de) | Vorrichtung zur analyse von loesungen und koerperfluessigkeiten | |
| DE2838675B2 (de) | Testmittel zum Nachweis von Ketonen bei alkalischem pH-Wert | |
| DE69027826T2 (de) | Hydrophile geschichtete poröse Membranen und Verfahren zu ihrer Herstellung | |
| EP0821236A2 (de) | Diagnostischer Testträger und Verfahren zur Bestimmung eines Analyts mit dessen Hilfe | |
| DE19849000A1 (de) | Funktionsschichten mit hoher Präzision, Verfahren zu ihrer Herstellung und Teststreifen enthaltend diese Funktionsschichten | |
| DE3042857A1 (de) | Mehrschichtiges chemisches analysenmaterial zur analyse waessriger fluessigkeiten | |
| DE2846967C2 (de) | Mehrphasen-Prüfmittel |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ENJ | Ceased due to non-payment of renewal fee |