DD262583A5 - Verfahren zur herstellung von nor-statin- und nor-cyclostatin-polypeptiden - Google Patents

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Nor-Statin- und Nor-cyclostatin-Polypeptiden der Formeln (I) und (II), worin Z, Y, M, R2, X, W, Z, L, R5 und R6 die in der Beschreibung angegebene Bedeutung haben. Das Verfahren ist erfindungsgemaess gekennzeichnet durch die Bildung einer Amidbindung, C(O)N, durch dehydratisierendes Kuppeln, worin die in der Reaktion nicht beteiligten funktionellen Gruppen blockiert sein koennen, gefolgt von den fakultativen Schritten 1) selektive Entfernung der blockierenden Gruppen, 2) Oxidieren einer Sulfid-Gruppe zum Sulfoxid oder Sulfon, 3) Oxidieren von W, worin es CH OH oder CH OH ist, zu CO, 4) Acylieren von W, worin es CH OH ist, und gewuenschtenfalls Herstellung eines pharmazeutisch verwendbaren Salzes vom Produkt. Die Produkte sind bei der Hemmung der Angiotensinogen-spaltenden Wirkung des Enzyms Renin von Nutzen. Formeln (I) und (II)

Description

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P.C.(PhRe) 7145B/JMM

Verfahren zur Herstellung von Nor-Statin- und Nor-cyclostatin-Polypeptiden

Anwendungsgebiet der Erfindung

Diese Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von neue Nor-Statin und Nor-Cyclostatin enthaltende Polypeptide, die als antihypertensive Mittel nützlich sind.

Das proteolytische Enzym Renin, das ein Molekulargewicht von etwa 40 000 besitzt, wird in der Niere erzeugt und von ihr in das Blut abgeschieden. Es ist bekannt, daß es in vivo bei der Spaltung des natürlich vorkommenden Plasma-glycoproteins Angiotensinogen aktiv ist, im Falle von menschlichem Angiotensinogen an der Bindung zwischen den Leucin(10.)- und Valin (11.)-Aminosäureresten am N-terminalen Teil des Angiotensinogens:

Ο "! χ" S *->

Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe-His-Leu-Val-Ile-His-Ser-Glu-1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

Das zirkulierende N-terminale Decapeptid (Angiotensin I), das durch die obige Spaltungswirkung von Renin gebildet wird, wird in der Folge durch den Körper in ein als Angiotensin II bekanntes Octapeptid gespalten. Angiotensin II ist als starke Drucksubstanz bekannt, d.h. eine Substanz, die fähig ist, einen beachtlichen Anstieg des Blutdrucks zu induzieren, und von der angenommen wird, daß sie das Zusammenziehen der Blutgefäße und die Freisetzung des Natrium-zurückhaltenden Hormons Aldosteron aus der Nebenniere bewirkt. Deshalb wurde das Renin-Angiotensinogen-System als ursächlicher Faktor mit gewissen Formen der Hypertonie und der Stauungsinsuffizienz in Zusammenhang gebracht.

Charakteristik des bekannten Standes der Technik

Ein Mittel zur Begegnung der nachteiligen Wirkungen der Funktion des Renin-Angiotensinogen-Systems ist die Verabreichung einer Substanz, die in der Lage ist, die Wirkung von Renin auf die Angiotensinogen-Spaltung zu hemmen. Eine Reihe von solchen Substanzen sind bekannt, einschließlich Antirenin-Antikörper, Pepstatin und natürlich vorkommende Phospholipid-Verbindungen. Die Europäische Patentanmeldung Nr. 45 665 (publiziert am 2. Februar 1982) offenbart eine Reihe von Renin-hemmenden Polypeptid-Derivaten der Formel

X-Y-Pro-Phe-His-A-B-Z-W

worin X Wasserstoff oder eine Aminoschutzgruppe sein kann, Y abwesend sein kann, B ein lipophiler Aminosäurerest ist, Z ein aromatischer Aminosäurerest ist, W Hydroxyl sein kann und A unter anderem

R¹ R² 0 I I Il -NH-CH-CH-CH--CH—C-I ² OH

¹L ο ν S

sein kann, wobei jedes von R¹ und R² eine lipophile oder aromatische Seitenkette ist. Gemäß den in dieser publizierten Patentanmeldung angegebenen Definitionen, ist nicht vorgesehen, daß entweder A oder Z Statin oder daß B Lysin sein könnte.

Die Europäische Patentanmeldung Nr. 77 028A (publiziert am 20. April 1983) offenbart eine Reihe von Renin-hemmenden Polypeptid-Verbindungen, die einen nicht-terminalen Statin- oder Statinderivat-Rest aufweisen. Eingeschlossen innerhalb dieser Serien sind Verbindungen, die eine Phenylalanin-histidin-statin-Sequenz besitzen.

Die Europäische Patentanmeldung 132 304A offenbart auch die Verwendung von Statin enthaltenden Polypeptiden als Reninhemmende Antihypertensive Mittel, und die Europäische Patentanmeldung 114 993A offenbart Cyclostatin enthaltende Polypeptide, die als Renin-hemmende antihypertensive Mittel nützlich sind.

Ziel der Erfindung

Die neuen Peptide der vorliegenden Erfindung haben die Formeln

(I)

O <. H

(II)

COR,

und ein pharmazeutisch verwendbares Salz davon, worin Z Ri-(Υ)·-(A)p ist, worin Ri (Ci-Ce)Alkyl, Amino, (Ci-C4 ) Alkoxy, tCi-Co)Alkylamino, (Ci-C3)Alkoxy-(C2-C<)alkylenamino, Carboxy-(Ci-Ca )alkyl, Hydroxy-(C2-C4)alkylenamino, (C1-C3}-Alkoxy-COCH2N(CH3), Amino-(Ci-Cs)alkyl, Morpholino, Piperidyl, Hydroxypiperidino, 4-Oxopiperidino, Piperazino, 4-0xopiperidinoethylen-ketal, 4-(Ci-C3)Alkylpiperazino, Thiomorpholino, Thiomorpholino-1-oxid, Thiomorpholino-1,1-dioxid, N-(Ci-C4)Alkoxycarbonylpiperidyl, 4-(Ci-C*)Alkoxycarbonylpiperazino, 3-0xomorpholino, 3,5-Dioxomorpholino, Hydroxypyridyl, Pyridyl, (s)-Pyrrolid-2-yl, N-t-Butoxycarbonyl-(s)-pyrrolid-2-yl, 2-(Ci-C3)Alkoxycarbonyl-(s)-pyrrolid-2-yl oder 4-(Ci-C«)Alkanoylpiperazino ist; Y C=O, P(OCHs)=O oder SO2 ist; A NH, NCH3 oder 0 ist; m und ρ je die ganze Zahl 0 oder 1 sind; M Phenyl, Naphthyl, Benzyl, Thienyl, Methoxyphenyl, Hydroxyphenyl, Chlorphenyl oder (Ce-C7)Cycloalkyl ist; Q Methyl oder Wasserstoff ist; R₂ (Ci-Cs)Alkyl, (Ci-C₃)Alkylthio-(Ci-C₂)alkyl, (Ci-C₃)Alkoxy-(Ci-C₂)alkyl, Benzyloxy-(Ci-C₂)-alkyl, Benzyl, Hydroxy-(Ci-C₂)alkyl, Carboxy-(Ci-C₂)alkyl, Guanido-(Ci-C₃)alkyl, (Ci-C₃)Alkylsulfinyl-(Ci-C₂)alkyl, (Ci-C₃)Alkylsulfonyl-(Ci -C2)alkyl, 4-Benzyloxycarbonylaminobutyl, 4-Aminobutyl, Imidazol-4-ylmethyl, N-t-Butoxycarbonylimidazol-4-ylmethyl oder Carbamyl-(Ci-C₂)alkyl ist; X Cyclohexyl, i-Propyl oder Phenyl ist; W CHIhOCO-(Ci-C₃)-alkylpiperidino, CHiUOH, (Ci -C₃ ) Alkyldi- (Ci -C₂ ) alkylamino , C=O, CHmN₃, CH-* N₃, CH^a NH₂ , CHtIiNH₂, C(CH₃)UiOH, C(CH₃)-* OH, CH iM OCO-(Ci-C₂ ) alkyl oder CHm OCO-(Ci-C₂)-alkylen-CO₂H ist; Z¹ CH₂OH oder R-S-T ist, worin R C=O ist,

: ί 2 5 S S

S O, NH, N(CHe), CH2 oder eine R und T verbindende chemische Bindung ist; T (Ci-Cs)Alkyl, Hydroxy-(Ci-C< )alkyl, CONH-(Ci-C4)alkyl, Wasserstoff, Trifluorethyl, (Ce-C7)Cycloalkyl, (Ce-C7)Cycloalkylmethyl, Phenyl, Benzyl, Amino-(C2-Cu)alkyl, O-(Ci -C2)Alkyl-hydroxylamino, Morpholine 4-(Ci-C2)Alkylpiperazino oder omega-Di-(Ci-C2)alkylamino-(C3-Cs)alkyl ist; L CH oder N ist; Rs Imidazol-4-ylmethyl oder (C2-Cs)Alkyl ist; und Re (Ci -Ca ) Alkoxy oder (Ci-C4)Alkylamino ist; mit der Maßgabe, daß dann, wenn m O ist, ρ O ist; wenn A O ist, Y C=O ist; wenn T CONH-(Ci-C₄)Alkyl ist, S NH, N(CH₃) oder CH₂ ist; und wenn T (C2-Ca)Alkylamino, O-(Ci-C2)Alkyl-hydroxylamino, Morpholino oder 4-(Ci-C2)Alkylpiperazino ist, S CH2 oder eine R und T verbindende chemische Bindung ist.

Darlegung des Wesens der Erfindung

Eine bevorzugte Gruppe von Verbindungen sind jene der Formel I, worin Y C=O ist, A NH ist, Q Wasserstoff ist, X Cyclohexyl ist, W CHmOH ist, R C=O ist, T Benzyl oder (Ci-Cs)Alkyl ist und m und ρ je 1 sind. Besonders bevorzugt innerhalb dieser Gruppe sind Verbindungen, worin Ri Morpholino ist, M Phenyl ist, S O ist und R2 n-Propyl ist und T i-Propyl ist, worin R2 CH3SCH2- ist und T i-Propyl ist, worin R2 η-Butyl ist und T Methyl ist, worin R2 HOCH2 ist und T i-Propyl ist, worin R2 CH30(CH2)2- ist und T i-Propyl ist, worin R2 CH3SCH2- ist und T Benzyl ist, worin R2 Methyl ist und T i-Propyl ist, worin R2 η-Butyl ist und T i-Propyl ist, worin R2 CH3OCH2- ist und T i-Propyl ist und worin R2 CH3CH2OCH2- ist und T i-Propyl ist. Ebenfalls besonders bevorzugt innerhalb dieser Gruppe sind Verbindungen, worin M Phenyl ist, S O ist, T i-Propyl ist, R2 CH3SCH2- ist und Ri Pyrrolidyl, 4-Pyridyl, Piperazino oder 4-Hydroxypiperidino ist. Ebenfalls besonders bevorzugt innerhalb dieser Gruppe sind jene Verbindungen, worin Ri Morpholino ist, M Phenyl ist, S eine R und T verbindende chemische Bindung ist und R2 η-Butyl ist und T CH₂CH(CH₃) 2 ist, und worin R₂ CH₃SCH₂ ist und T CH₂CH(CH3)₂ ist. Ebenfalls besonders bevorzugt inner-

halb dieser Gruppe sind Verbindungen, worin Ri Morpholino ist, S O ist und worin M 2-Thienyl ist, Rz CH3SCH2 ist und T i-Propyl ist, worin M 4-Hydroxyphenyl ist, R2 CH3SCH2- ist und T i-Propyl ist und worin M 4-Methoxyphenyl ist, R2 n-Butyl ist und T Methyl ist. Ebenfalls besonders bevorzugt in dieser Gruppe ist die Verbindung, worin Ri Morpholino ist, M Phenyl ist, R₂ η-Butyl ist, S NH ist und T Methyl ist.

Eine bevorzugte Gruppe von Verbindungen sind solche der Formel I, worin M Phenyl ist, S eine R und T verbindende chemische Bindung ist, T (Ci-Cs)Alkyl ist und R C=O ist.

Die vorliegende Erfindung schließt auch eine Methode zur Behandlung der Hypertonie in Säugern ein, welches die Verabreichung einer antihypertensiv wirksamen Menge der Verbindungen der vorliegenden Erfindung an diesen Sauger umfaßt, und eine pharmazeutische Zusammensetzung, die die Verbindungen der vorliegenden Erfindung und einen Träger enthält.

Wie früher angegeben, umfaßt die vorliegende Erfindung pharmazeutisch verwendbare Salze der biologisch aktiven Verbindungen. Solche Salze sind jene, die in den verabreichten Dosierungen nicht toxisch sind. Da die Verbindungen der Erfindung basische Gruppen enthalten können, sind Säureadditionssalze möglich. Pharmazeutisch verwendbare Säureadditionssalze umfassen z.B. die Hydrochlorid-, Hydrobromid-, Hydrojodid-, Sulfat-, Bisulfat-, Phosphat-, saure Phosphat-, Acetat-, Lactat-, Maleat-, Mesylat-, Fumarat-, Citrat-, saure Citrat-, Tartrat-, Bitartrat-, Succinat-, Gluconat- und Saccharatsalze.

Im Interesse der Kürze wurden möglichst die allgemein akzeptierten Kurzbezeichnungen der einzelnen Aminosäuren und Reagentien verwendet. Zum Beispiel wird die Aminosäure Phenylalanin als Phe, Homoserin als Hse, Histidin als His, Lysin als Lys und Nie als Norleucin abgekürzt. Die Aminoschutzgruppe t-Butoxycarbonyl wird als Boc, Benzyloxycarbonyl als CBZ

-. J L D O 3

und N-t-Butoxycarbonyl am Imidazol des Histidins als imBoc abgekürzt. Andere Abkürzungen umfassen: CPBA-Chlorperbenzoesäure, DCC-Dicyclohexylcarbodiimid, DEC-Dimethylaminopropylethylcarbodiimid-HCl, DMF-Dimethylformamid, HCl-Chlorwasserstoff, HBT-Hydroxybenzotriazol, Mesyl-CH3SO2-, Thala-2-Thienylalanin, Nphala-1-Naphthylalanin, TBDMS-t-Butyldimethylsilyl, TEA-Triethylamin, S-MeCys-S-Methylcystein, S-EtCys-S-Ethylcystein, MgSO^-Magnesiumsulfat, NaOH-Natriumhydroxid, CH2CI2-Methylenchlorid, K2CO3-Kaliumcarbonat, NaHCOa-Natriumbicarbonat, O-MeTyr-0-Methyltyrosin, O-MeHse-0-Methylhomoserin, etc.

Modifiziertes Norstatin und Norcyclostatin, enthaltend ein Kohlenstoffatom weniger in der Struktur, weisen die Formeln auf

-NH .

- und

OH

Diese Strukturen werden als nor-Sta bzw. nor-C-Sta abgekürzt.

Alle in den Strukturen der vorliegenden beanspruchten Verbindungen enthaltenen Aminosäuren weisen die L-Konfiguration, die natürlich vorkommende Konfiguration auf, außer wenn es anders angegeben ist.

Als Teil der vorliegenden Erfindung werden auch Verbindungen der Formeln I und II angesehen, worin nor-Sta und nor-C-Sta durch nor-Staton und nor-C-Staton ersetzt sind.

Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung zeigen in vivo in Säugern einschließlich des Menschen antihypertensive Wirksamkeit. Mindestens ein wesentlicher Teil dieser Aktivität er-

Ϊ02583

gibt sich aus ihrer Fähigkeit, die Spaltung des Angiotensinogens durch Renin zu verhindern. Obwohl wir nicht durch die folgende Theorie des Mechanismus beschränkt werden wollen, ist es wahrscheinlich, daß der Mechanismus der Renin-hemmenden Wirksamkeit der Verbindungen der Erfindung ihre selektive Bindung an Renin (im Vergleich zu Angiotensinogen) ist. Die Verbindungen der Erfindung zeigen eine enzymhemmende Wirksamkeit, die auf Renin beschränkt ist. Wegen ihres niedrigen Molekulargewichts zeigen sie günstige Löslichkeitscharakteristika in wäßrigen Medien, wodurch die orale Verabreichung möglich gemacht wird, und sie können zu kommerziell realistischen Kosten synthetisiert werden. Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind auch gegen Stauungsinsuffizienz nützlich.

Die Verbindungen der Erfindung können erfindungsgemäß durch Methoden hergestellt werden, die dem Fachmann vertraut sind. Die Grunduntereinheit der bevorzugten chemischen Synthese ist die Acylierung der ungeschützten ot-Aminogruppe eines Aminosäurerestes mit einer Aminosäure, die eine aktivierte (für Acylierungszwecke) Carboxylfunktion und eine geeignete mit ihrem eigenen α-Stickstoffatom verbundene Schutzgruppe aufweist, um eine Peptidbindung zwischen den zwei Aminosäureresten zu bilden, gefolgt von der Entfernung dieser Schutzgruppe. Diese Syntheseuntereinheit des Kuppelns-Deblockierens wird wiederholt angewendet, um das Polypeptid aufzubauen, angefangen am C-terminalen Ende, wie hierin beschrieben. Die zur Synthese der Verbindungen der vorliegenden Erfindung zu verwendenden Aminosäuren sind im Handel erhältlich (als freie Säuren, Salze oder Ester, etc.), sowohl in a-Amino-geschützten als auch in a-Amino-ungeschützten Formen.

Die Aktivität der Verbindungen der vorliegenden Erfindung als Hemmer der Angiotensinogen-spaltenden Wirkung von Renin kann durch das Studium ihrer Fähigkeit bestimmt werden, die Angiotensinogen-spaltende Wirksamkeit von Renin in vitro zu hemmen.

Λ ~ —

Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können als antihypertensive Mittel sowohl auf dem oralen als auch dem parenteralen Wege verabreicht werden, wobei die erstere aus Gründen der Annehmlichkeit für den Patienten und der Zweckmäßigkeit bevorzugt ist. Im allgemeinen werden diese antihypertensiven Verbindungen normalerweise oral in einer Dosierung im Bereich von etwa 0.1 mg bis etwa 20 mg pro kg Körpergewicht pro Tag und, falls parenteral verabreicht, 0.1 mg bis etwa mg pro kg Körpergewicht pro Tag verabreicht; Abwandlungen werden notwendigerweise auftreten in Abhängigkeit von der Situation des zu behandelnden Patienten und der besonderen zu verabreichenden Verbindung. In typischer Weise wird die Behandlung mit einer niedrigen täglichen Dosis begonnen und durch den Arzt nur erhöht, falls es notwendig ist. Es muß beachtet werden, daß diese Verbindungen bei jeder der vorstehend angegebenen Routen in Kombination mit pharmazeutisch verwendbaren Trägern verabreicht werden können, und eine derartige Verabreichung kann sowohl in Einzeldosierungen- als auch in Mehrfachdosierungen erfolgen.

Die neuen Verbindungen der Erfindung können oral in einer Vielzahl von verschiedenen Dosierungsformen verabreicht werden, d.h. sie können mit verschiedenen pharmazeutisch verwendbaren inerten Trägern in Form von Tabletten, Kapseln, Rauten, Pastillen, Hartbonbons, Pulvern, Sprays, wäßrigen Suspensionen, Elixieren, Sirups u. dgl. formuliert werden. Solche Träger umfassen feste Verdünnungsmittel oder Füllmittel, sterile wäßrige Medien und verschiedene nicht-toxische organische Lösungsmittel, etc.. Außerdem können orale pharmazeutische Formulierungen in geeigneter Weise gesüßt und/oder mit einem Geschmack versehen werden mittels verschiedener Mitteln, die üblicherweise für derartige Zwecke verwendet werden. Im allgemeinen sind die Verbindungen dieser Erfindung in solchen oralen Dosierungsformen in einer Konzentration im Bereich von etwa 0.5 bis etwa 90 Gew.% der Gesamtzusammensetzung vorhanden, in Mengen die ausreichend sind, die gewünschte Einzeldosierung zu gewährleisten.

Mir den Zweck der oralen Verabreichung können Tabletten, die verschiedene Excipientien enthalten, wie.Natriumeitrat, CaIciumcarbonat und Calciumphosphat, verwendet werden zusammen mit verschiedenen Sprengmitteln, wie Stärke und vorzugsweise Kartoffel- oder Tapiokastärke, Alginsäure und gewisse komplexe Silikate, zusammen mit Bindemitteln, wie Polyvinylpyrrolidon, Sucrose, Gelatin und Akazie. Zusätzlich können auch Gleitmittel, wie Magnesiumstearat, Hatriumlaurylsulfat und Talk oder Zusammensetzungen ähnlicher Art als JJiillmittel in Weich- oder Hartgelatinekapseln verwendet werden; eingeschlossen Lactose oder Milchzucker wie auch Polyethylenglycole mit hohem Molekulargewicht. Palis wäßrige Suspensionen und/oder Elixiere zur oralen Verabreichung gewünscht werden, kann das wesentliche aktive LIa te rial darin kombiniert werden mit verschiedenen Süßungs- oder Geschmacksmitteln, färbenden Mitteln oder Farbstoffen und erwlinschtenfalls emulgiert werden und/oder Wasser, Ethanol, Propylenglycol, Glycerin und verschiedene derartige Kombinationen können zugesetzt werden.

Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind auch bei der Diagnose der Hypertonie und Stauungsxnsuffizienz nützlich.

Die folgenden Beispiele veranschaulichen die Erfindung, sollen aber nicht zu deren Beschränkung herangezogen werden.

Au3Jxihrung3bei spiele Allgemeines Experimentelles

Hochleistxings-Plüssigkeitschromatographie (HPIC) wurde unter den folgenden Bedingungen durchgeführt: 214 nm Bestimmung,

-' r*"t O "^

2025S3

-1Oa-

4.6 χ 250 mm Dupont Zorbax C-O Kolonne mit 1.5 ml/Hin, Die DC-Systeine waren, hier abgekürzt, wie folgt: System A = Ethylacetat bzw. Hexan, im angegebenen Verhältnis,- an Kieselgel; System B = Ether bzw. Hexan, im angegebenen Verhältnis, an Kieselgel; System C = 18/2/1 HCCl₃-EtOH-HOAc an Kieselgel; System D = 9:2:1 Chloroform-Ethanol-Sssigsäure.·

2:2533

BEISPIEL 1

BocPheHisnor-C-StaNHCHS (I, Z=t-Butoxycarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R.2 =Imidazol-4-ylmethyl; W=CHlMOH; Z¹=CONHCH₃; und X=Cyclohexyl

A. N-Methyl-(S)-S-t-Boc-amino^-cyclohexyl-(R)-2-hydroxybutyramid

(S)-S-t-Boc-amino-^-cyclohexyl-(R)-2-hydroxy-buttersäure (100 mg), U.S. 4 599 198, wurde in 0.9 ml Tetrahydrofuran mit 55 ul Triethylamin gelöst, und die Mischung wurde mit Isobutyl-chlorformiat (45 ul) bei -3O⁰C behandelt. Nach 1.5 h wurde die Mischung auf -6O⁰C gekühlt und mit 1.5 ml einer 1.6M Lösung von Methylamin in Tetrahydrofuran versetzt, und die Mischung wurde auf 25⁰C gebracht, überschüssiges Methylamin wurde durch die Reaktionsmischung durchgeleitet, die dann mit 25 ml Ether verdünnt, zweimal mit einer gesättigten Natriumbicarbonatlösung gewaschen, getrocknet und eingeengt wurde. Chromatographie mit 2:1 Ethylacetat-Hexane an Kieselgel lieferte 45 mg (42%) der Titelverbindung als farblosen Feststoff, Rf 0.16 in 2:1 Ethylacetat-Hexane, Kieselgel, und RP-HPLC 40/60 MeCN-pH 2.1 0.lM-phosphat, 3.32 Min.

B. N-Methyl- (S) -a-amino^-cyclohexyl- (R) -2-hydroxybutyramid

Das Produkt von Beispiel IA (45 mg) wurde in 2 ml 4N Chlorwasserstoff -Dioxan gelöst und bei 25⁰C während 1.5h gerührt. Die Mischung wurde eingeengt und mehrmals zusammen mit Ether eingedampft, wodurch 50 mg der Titelverbindung als farbloser Feststoff erhalten wurden, HPLC Retentionszeit 3.05 Min, 40/60 MeCN-pH 7.0 0.lM-phosphat.

C. BocPheHis(imBoc)nor-C-StaNHCH3

Eine Lösung des Produkts von Beispiel IB (49 mg) in 0.5 ml Dichlormethan wurde bei O⁰C mit 30 ul Triethylamin, 112 mg BocPheHis(imBoc), U.S. 4 599 198, 48 mg Hydroxybenzotriazol bzw. 46 mg Dicyclohexylcarbodiimid behandelt, und die Mi-

™. / Λ ι- Ο

schung wurde 6 h bei O⁰C gerührt und konnte sich dann über Nacht auf 25°C erwärmen. Die Mischung wurde filtriert, der Niederschlag wurde mit Dichlormethan gewaschen und die vereinigten Filtrate wurden eingeengt und in Ethylacetat gelöst. Nach Rühren während einiger Minuten wurde die Ethylacetatsuspension filtriert, und das Filtrat wurde mit IN Natriumhydroxidlösung (zweimal) gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt. Chromatographie an Kieselgel unter Elution mit Ethanol-Dichlormethan, wobei die Polarität stufenweise wie folgt vergrößert wurde (1%, 2%, 4%, 6% und 10% Ethanol), lieferte 57 mg der Titelverbindung als farblosen amorphen Feststoff.

D- BocPheHisnor-C-StaNHCH₃

Das Produkt von Beispiel IC wurde in 1.2 ml 80/20 (V:V) Essigsäure-Wasser gelöst und bei 25⁰C während 12 h gerührt. Die Mischung wurde eingeengt, dreimal zusammen mit Ether und zweimal zusammen mit Dichlormethan eingedampft, wodurch 47 mg eines Produkts als leicht braunes Pulver erhalten wurden.

HPLC, in 50/50 MeCN-pH 2.1 0.lM-phosphat, 3.61 Min.; IH NMR, DMSO, 300 MHz, partiell, δ ppm: 1.32 (s, 9H, Boc), 2.60 (d, 3H, NCH₃), 3.90, 4.66 und 7.9 (m, IH je), 4.18 (m, 2H), 7.12, 7.7, 8.28 (d, IH je), 7.32 (s, IH), 7.2-7.4 (m aromat.) .

BEISPIEL 2

BocPheHisnor-C-StaNHCONHCH₂CH₂CH3 (I, Z=t-Butoxy carbonylamino; R2=Imidazol-4-ylmethyl; M=Phenyl; Q=H ; W=CH IIIOH; Z¹ =CONHCONHCH₂ CH₂ CH₃ ', und X=Cyclohexyl

A. N-t-Boc-O-t-butyldimethylsilyl-nor-

C-staNHCONHCH₂ CH₂ CH₃

Eine Lösung von 415 mg (S)-3-t-Boc-amino-(R)-2-t-butyldimethylsilyloxy-4-cyclohexylbutyramid (U.S. 4 599 198) und 94 ul Propylisocyanat in 2 ml Toluol wurde während 90 h auf 100⁰C

erhitzt, gekühlt und an Kieselgel mit 15% Ethylacetat-Hexan chromatographiert, wodurch 260 mg der Titelsubstanz als farbloser öliger Schaum erhalten wurden DC Rf 0.49, 1:2-System A.

B. Nor-C-StaNHCONHCHz CH₂ CH₃-hvdrochlorid

Das Produkt von Beispiel 2C (255 mg) wurde bei 25⁰C in 3 ml einer frisch hergestellten Lösung von 5% wäßriger, 48%iger Fluorwasserstoffsäure in Acetonitril gelöst und während 2 h gerührt, überschüssiges Natriumbicarbonat wurde zur Reaktionsmischung zugesetzt zusammen mit 20 ml Wasser, und die Mischung wurde mit Ethylacetat extrahiert, das dann mit Wasser gewaschen, getrocknet (Magnesiumsulfat) und eingeengt wurde, wodurch 198 mg eines Öls erhalten wurden. Dieses wurde bei O⁰C in 4 ml 4N Chlorwasserstoff-Dioxan gelöst, 1 h bei 25⁰C gerührt, dann eingeengt, wodurch 130 mg eines farblosen wachsartigen Feststoffs erhalten wurden. Das NMR zeigte an, daß die Spaltung der Silylgruppe unvollständig war. Das DC zeigte zwei Produkte mit Rf 0.42 und 0.07 (System C), vermutlich der Aminosilylether bzw. der Aminoalkohol. Dieses Produkt wurde ohne weitere Reinigung in der folgenden Stufe verwendet .

C. BocPheHis(imBoc)nor-C-StaNHCONHCHz CH₂ CH₃

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und zur Reinigung des Produkts von Beispiel IC ergaben 119 mg des Produkts von Beispiel 2B 97 mg der Titelverbindung als farblosen amorphen Feststoff, DC Rf 0.55, System C. Die unerwünschte entsprechende O-silylierte Substanz (erhalten aus der O-Silyl-Verunreinigung in Beispiel 2B) wurde während der chromatographischen Stufe abgetrennt (eine weniger polare Substanz, Rf 0.60, System C).

D. BocPheHisnor-C-StaNHCONHCH₂ CH₂ CH₃

Das Produkt von Beispiel 2C (91 mg) wurde in 1.5 ml 80/20 Essigsäure-Wasser gelöst und bei 25⁰C während 6 h gerührt. Die Mischung wurde eingeengt, zusammen mit Ether dreimal eingedampft und über Nacht getrocknet, wodurch 80 mg des Pro-

- '- - .} Ö 14

dukts als farbloser Feststoff erhalten wurden, Rf 0.10 in System C und mit einer HPLC Retentionszeit von 2.35 Min in 70/30 MeCN.pH 2.1 0.lM-phosphat.

NMR, DMSO, 250 MHz, partiell δ, ppm: 0.86 (t, 3H), 1.32 (s, 9H, Boc), 1.47 <q, 2H), 3.14 (q, 2H), 4.06 und 4.48 (m, IH je), 4.17 (m, 2H), 6.83 (s, IH), 7.10, 7.63, 8.02 (d, IH je), 7.15-7.35 (m, aromat.),7.56 (s, IH), 8.28 (m, IH).

BEISPIEL 3

Indol-2-carbonylHisnor-C-Sta-methylester (II, Rs=Imidazol-4-ylmethyl; R₆=OCH₃; und L=CH

A. 4-Cyclohexyl-2-pentin-l-yl-tetrahydro-

pyran-1-yl-ether

Ein im Ofen getrockneter 5 1 Dreihalsrundkolben, versehen mit mechanischem Rührer, Thermometer, Tropftrichter und Stickstoffeinlaß wurde mit 192 g Propargyl-tetrahydropyranylether und 750 ml trockenem Tetrahydrofuran (Aldrich gold label) beschickt. Die gerührte Lösung wurde mit einem Trockeneis-Acetonbad bei O⁰C gehalten, während im Verlaufe von 45 Min. 604 ml 2.5M n-Butyllithium zugesetzt wurden. Zur resultierenden dunklen Lösung wurde bei 5-1O⁰C im Verlaufe von 20 Min. eine Lösung von Cyclohexylmethyl-bromid in Hexamethylphosphoramid (destilliert über Calciumhydrid unter vermindertem Druck) zugesetzt, und das Rühren wurde während 4 h bei 25°C fortgesetzt. Die Mischung wurde in eine gerührte Mischung von 2 1 Eiswasser und 2 1 Hexan gegossen. Die organische Schicht wurde mit 2 χ 500 ml 1.OM Lithiumchlorid-Lösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, eingeengt und unter Verwendung einer 8" Vigreux-Kolonne destilliert, wodurch 102 g wiedergewonnener Propargyltetrahydropyranylether erhalten wurden, Sp. 60-90⁰C bei 3 mm, gefolgt von 151 g des Titelprodukts, Sp. 125-13O⁰C bei 0.5 mm, DC Rf 0.5 in 1:4 System B.

252583

B. 4-Cyclohexyl-2-butin-l-ol

Ein 2 1 Dreihalskolben versehen mit mechanischem Rührer, Stickstoffeinlaß und Thermometer wurde mit 140 g des Produkts von Beispiel 3A und 700 ml Methanol beschickt. Die gerührte Mischung wurde auf 2-3⁰C gekühlt und mit 560 mg p-Toluolsulfonsäure versetzt, worauf das Kühlbad durch ein Bad mit warmem Wasser ersetzt wurde, das ausreichend war, die Reaktionstemperatur auf 3O⁰C zu erhöhen. Nach 4.5 h wurden 5 ml IN Natriumhydroxidlösung zugesetzt, und das meiste des Methanols wurde unter vermindertem Druck in einem Rotationsverdampfer entfernt. Der Rückstand wurde in 700 ml Hexan gelöst und die Lösung wurde mit IN Natriumhydroxidlösung (3 χ 100 ml) gewaschen, über Kaliumcarbonat getrocknet, filtriert, eingeengt und von Kaliumcarbonat unter Verwendung einer 8" Vigreux-Kolonne destilliert, wodurch 76 g des Produkts erhalten wurden, Sp. 9O⁰C bei 1 mm, als eine leicht gelbe Flüssigkeit, anhand des IH NMR verunreinigt mit 1% Methanol und 1% Hexamethylphosphoramid. Dieses Produkt wurde ohne zusätzliche Reinigung in der nächsten Stufe verwendet. DC Rf 0.5, 1:1 System B.

Anal Ber. als Ci₀Hi₆O: C, 78.90; H, 10.59. Gef. C, 78.31; H, 10.72.

C. Z-4-Cyclohexyl-2-buten-l-ol

Ein 500 ml Parr-Kolben wurde mit 35.2 g des Produkts von Beispiel 3B, 250 ml Toluol, 250 mg "Lindlar Catalyst Poison" (Fluka) beschickt. Die Lösung wurde mit Stickstoff gereinigt, und 14.08 g Lindlar-Katalysator (Aldrich) wurden zugesetzt. Die Mischung wurde während 45 Minuten unter einem Wasserstoff druck von 35 psi geschüttelt, während welcher Zeit die Reaktionstemperatur spontan auf etwa 45⁰C anstieg. Die gekühlte Suspension wurde durch Celit filtriert und wurde mit einer anderen Reaktionsmischung, die in identischer Weise aus anderen 35.2 g des gleichen Ausgangsmaterials hergestellt wurde, vereinigt. Die vereinigte Mischung wurde eingeengt durch Destillation bei Atmosphärendruck über Calciumcarbonat durch eine 12" Vigreux-Kolonne und dann in einem Rotations-

J - J

verdampfer unter Wasserstrahlendruck bei 25⁰C, gefolgt von Erhitzen auf 80⁰C bei 0.3 mm im selben Kolben, der mit einer Vigreux-Kolonne versehen war, bis ein leichter Rückfluß erreicht wurde. Die zurückbleibende Flüssigkeit, ein leicht gelbes öl, wog 77.4 g und war anhand des NMR mit 1% Methanol und 1% Hexamethylphosphoramid verunreinigt. Dieses Produkt zeigte einen einzigen Fleck im DC, Rf 0.4, 1:1, System B und zeigte gemäß NMR kein nachweisbares trans-Isomer.

D. 2(S),3(R)-Epoxv-4-cyclohexvl-l-butanol

Ein 1 1 Dreihalskolben ausgerüstet mit Thermometer, mechanischem Rührer, Stickstoffeinlaß und Kühlbad wurde mit 15 g 4 A 600-Mesh-Molekularsieb, 400 ml Dichlormethan und 7.23 ml { + )-Diisopropyl-L-tartrat (Aldrich) beschickt. Die gerührte Mischung wurde auf -5⁰C gekühlt und mit 6.75 ml Titantetraisopropoxid versetzt, gefolgt von 227 ml 3.0M t-Butylhydroperoxid in Toluol (Aldrich), wobei keines von beiden exotherm reagierte. Zu der gerührten Mischung wurde im Verlaufe von Min. bei -2O⁰C eine Lösung von 70 g des Produkts von Beispiel 3C in 30 ml Dichlormethan zugesetzt, so daß die Temperatur nicht über etwa -2O⁰C stieg. Die Mischung wurde 6 h bei -1O⁰C gerührt, dann (ohne Rühren) während 60 h in einen Kühlschrank (-1O⁰C) gegeben. Die Mischung wurde dann abermals in einem Eisbad gerührt, und 120 ml Wasser wurden zugesetzt, gefolgt von 30 ml 6N Natriumhydroxid-Lösung, und die Mischung wurde mit Natriumchlorid gesättigt. Methanol (50 ml) wurde zugesetzt, und die Mischung wurde filtriert, mit 100 ml 0.IM pH 7-phosphat-Puffer behandelt und nach lebhaftem Schütteln stehen gelassen, bis eine teilweise Trennung erfolgte. Die untere (organische) Schicht wurde abgetrennt, und die obere (wäßrige) und mittlere (Emulsion) Schichten wurden mit Dichlormethan (3 χ 200 ml) extrahiert. Die verbleibende Emulsion (mittlere Schicht) wurde durch Celit filtriert, wodurch eine vollständige Trennung in organische und wäßrige Schichten erreicht wurde. Die vereinigten organischen Schichten wurde mit pH 7-Phosphat-Puffer (3 χ 100 ml), wäßrigem Bicarbonat und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (Magnesiumsul-

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fat), filtriert und eingeengt, wodurch 85 g eines viskosen Öls erhalten wurden, das unter Verwendung einer 8" Vigreux-Kolonne destilliert wurde, wodurch 12 g, Sp. 60-122⁰C bei 0.5 mm, dann 51 g der Titelverbindung, Sp. 122-13O⁰C bei 0.45 mm, erhalten wurden, DC Rf 0.20 in 2:1, System B. Anal. Ber als Ci₀Hi₈O₂: C, 70.55; H, 10.66. Gef. C, 69.8-9; H, 10.50.

E. 2(S), 3(R)-Epoxy-4-cyclohexyl-l-butansäure

3 g des Produkts von Beispiel 3D wurde in Acetonitril (30 ml) gelöst, und 45 ml Wasser, 30 ml Kohlenstofftetrachlorid, 690 mg Rutheniumtrichlorid-trihydrat und 10.0 g Perjodsäure wurden der Reihe nach zugesetzt. Die Temperatur stieg allmählich, wurde aber durch leichtes Kühlen auf 30-35⁰C gehalten. Nach 1.5 h wurden 75 ml Kochsalzlösung und 400 ml Chloroform zugesetzt. Die organische Schicht wurde abgetrennt und die wäßrige dreimal mit Chloroform (400 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden mit 50 ml 2N Chlorwasserstoff säure, gesättigt mit Natriumchlorid gewaschen, getrocknet (Magnesiumsulfat), durch Celit filtriert und eingeengt, wodurch 2.55 g der Titelverbindung als purpurfarbener Feststoff erhalten wurden, DC Rf 0.40, System C, der ohne weitere Reinigung unmittelbar in der nächsten Stufe verwendet wurde.

F. 3(S)-Azido-2(R)-hydroxy-4-cyclohexylbuttersäure Das Produkt von Beispiel 3E (2.65 g) wurde in 10 ml absolutem Ethanol gelöst und bei 25⁰C zu einer gerührten Lösung von 2.11 g Lithiumazid und 6.43 ml Titantetraisopropoxid in 180 ml absolutem Ethanol zugesetzt. Die Mischung wurde bei 25⁰C während 20 h, dann während 5 h bei 35⁰C und 14 h bei 25°C gerührt, worauf sie eingeengt wurde, gelöst in 250 ml Ether und 75 ml l%ige Schwefelsäure, gerührt während 30 Min. und abgetrennt. Die resultierende organische Schicht wurde mit 5%iger Schwefelsäure (3 χ 20 ml) und pH 7-Phosphat-Puffer (zweimal) gewaschen, getrocknet (Magnesiumsulfat) und eingeengt, wodurch 2.82 g der Titelverbindung als leicht bräun-

liches öl erhalten wurde, das sich beim Stehen verfestigte. Das Material zeigte DC Rf 0.35 (System C) und IR (CHCl₃) 2100

G. 3(S)-Azido-2(R)-hydroxy-4-cyclohexylbuttersäure-

methylester

Diazomethan wurde durch Behandeln von 4.5 g N'-Nitroso-N-methyl-N-nitroguanidin in 75 ml Ether mit 31 ml 6N Natriumhydroxid-Lösung bei 0⁰C hergestellt, gefolgt vom Dekantieren und kurzem Trocknen der organischen Schicht über 5 g Kaliumhydroxid. Diese Lösung wurde in einen Tropftrichter gebracht und tropfenweise bei O⁰C zu einer gerührten Lösung von 2.82 g des Produkts von Beispiel 3F in 50 ml Ether zugesetzt. Nach 40 Min. wurden 20 ml Essigsäure zugesetzt, und die Mischung wurde mit gesättigtem Natriumbicarbonat (3 χ 20 ml) und Natriumhydroxid-Lösung (2 χ 20 ml) gewaschen, getrocknet (Magnesiumsulfat), filtriert und an Kieselgel mit Elution durch 1:8 Ethylacetat-Hexan chromatographiert. 2.43 g der Titelverbindung wurden durch Einengen der geeigneten Fraktionen erhalten und zeigen DC Rf 0.58, 1:1 System A, IR (CHCI3) 2100 cm-¹, [a]² _o° + 10.1, (c=1.19, CHCl₃).

H. 3(S)-Amino-2(R)-hydroxy-4-cyclohexylbuttersäure-

methylester-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 3G (2.23 g) wurde bei 25⁰C während 40 Min. mit 100 mg 10% Pd/C in 15 ml Ethanol und 0.4 ml Essigsäure unter 50 psi Wasserstoff geschüttelt. Die Mischung wurde durch Celit filtriert, eingeengt, zusammen mit Toluol (2 χ 10 ml) eingedampft, in 4 ml 3.4M Chlorwasserstoff-Dioxan gelöst, eingeengt und zusammen mit Ether mehrmals eingedampft, wodurch nach Trocknen 1.49 g eines öligen leicht gelben Schaums erhalten wurde, DC Rf 0.15 (die mit Fleck versehene Platte wurde vor der Entwicklung im System C Ammoniakdampf ausgesetzt).

2 6 2 5

I. Indol-2-carbonvlHis-methylester

5.5 g Histidin-methylester-dihydrochlorid wurden in 500 ml Dichlormethan suspendiert und bei O⁰C mit 6,92 ml Triethylamin behandelt, gefolgt der Reihe nach von 4.2 g Indol-2-carbonsäure, 5.56 g Hydroxybenzotriazol und 5.35 g Dicyclohexylcarbodiimid. Die Mischung wurde in einem Eisbad gerührt, das sich über Nacht auf 25⁰C erwärmen konnte. Die Mischung wurde filtriert, der Niederschlag mit Dichlormethan gewaschen, das Filtrat eingeengt und der Rückstand in 200 ml Chloroform gelöst und mit 4 χ 30 ml IN Natriumhydroxid-Lösung und Kochsalzlösung extrahiert, getrocknet (Natriumsulfat) und eingeengt, wodurch 7.2 g eines gelben Schaums erhalten wurden. Dieser Schaum wurde in einer Mischung von 5 ml Chloroform, 20 ml Wasser, 25 ml IN Chlorwasserstoff gelöst, die wäßrige Schicht wurde mit 5 ml Chloroform gewaschen und dann der pH mit Natriumhydroxid-Lösung auf 6 eingestellt. Die Mischung wurde eingeengt und getrocknet, wodurch 4.3 g eines leicht grünen Feststoffs erhalten wurden, der 3.46 Min. Retentionszeit in der HLPC mit 35/65 MeCN-pH 2.1 0.1M-Phosphat (85% der Gesamtabsorption) zeigte, mit kleineren Verunreinigungen bei 2.36 und 1.66 Min. DC Rf im System C war 0.07. Dieses Produkt wurde ohne zusätzliche Reinigung in der nächsten Stufe verwendet .

J . N-cr- (Indol-2-carbonyl) -N (im) -t-butoxy-

carbonyl-L-histidin

4.3 g des Produkts von Beispiel 31 wurden in 60 ml Methanol und 20 ml Wasser, gekühlt auf O⁰C, gelöst und mit 7.6 g wasserfreiem Kaliumcarbonat behandelt. Nach 1 h bei 0⁰C und 2 h bei 25⁰C wurde die Mischung gekühlt, mit 6N Chlorwasserstoffsäure auf pH 3 gebracht, eingeengt, auf O⁰C gekühlt, mit 6N Natriumhydroxid-Lösung auf pH 10.5 gebracht, mit 150 ml Dioxan behandelt, und bei O⁰C wurden 4.2 ml Di-t-butyl-dicarbonat-((Boc)²°) zugesetzt. Die Mischung wurde dann bei 25⁰C gerührt und der pH durch Zusatz von 6N Natriumhydroxid-Lösung zwischen 9 und 10.5 gehalten. Nach 75 Min. wurden weitere 2 ml (Boc)²⁰ zugesetzt, und nach weiteren 15 Min. wurde die Mi-

schung eingeengt, um das meiste Dioxan zu entfernen, 100 ml Wasser wurden zugesetzt und die erhaltene Lösung wurde dreimal mit Ether (je 25 ml) gewaschen. Die wäßrige Schicht wurde in einem Eisbad gekühlt und 500 ml Ethylacetat wurden zugesetzt und der pH der wäßrigen Schicht wurde mit 6N Chlorwasserstoff säure auf 1.3 gebracht. Die organische Schicht wurde abgetrennt, die wäßrige mit Ethylacetat extrahiert, die organischen Schichten vereinigt, mit Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (Natriumsulfat), filtriert und eingeengt, wodurch nach Trocknen 3.1 g der Titelverbindung als ein trockenes gelbes Pulver erhalten wurden, HPLC in 50/50 MeCN-pH 2.1 0.1M-Phosphat 4.57 Min. (93% der gesamten UV-Integration) und [a]² _o° + 10.5° (c=0.88, CHCl₃).

K. Indol-2-carbonylHis(imBoc)nor-C-Sta-

methylester

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC wurden 500 mg des Produkts von Beispiel 3H in 25 ml Dichlormethan mit 911 mg des Produkts von Beispiel 3J gekuppelt, und 550 mg der Titelverbindung wurden erhalten, DC Rf 0.58, System C. Eine untergeordnete Komponente, Rf 0.55, war ebenfalls vorhanden.

L. Indol-2-carbonylHisnor-C-Sta-methylester Das Produkt von Beispiel 3K (455 mg) wurde während 16 h bei 25⁰C in 10 ml 5:1 Essigsäure-Wasser gerührt, eingeengt, zusammen mit Ether mehrmals eingedampft und getrocknet, wodurch 431 mg eines leicht gelben Pulvers erhalten wurden, HPLC in 40/60 Acetonitril-pH 2.1 0.1M-Phosphat, 5.53 Min. (39%) und 6.43 (58%).

NMR, DMSO, partiell δ, ppm: 2.94 (m), 3.53 (s, 3H, OCH₃), 4.02, 4.18, 4.64 (m), 6.80 (s, IH), 6.9-7.6 (aromat. m) , 7.0 (t) , 7.4 (d) , 7.6 (d) .

BEISPIEL 4

BocPheHis(imBoc)nor-C-Sta-methylester (I, Z=tbutoxycarbonylamino; R2 =N-t-Butoxycarbonylimidazol-4-ylmethyl; W=CHiHOH; Q=H; M=Phenyl; Zi=CO₂CH₃; und X=Cyclohexyl)

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC lieferte 2.0g des Produkts von Beispiel 3H 1.8 g der Titelverbindung als farblosen Schaum, DC Rf 0.37 im System C, HPLC in 70/30 MeCN-pH 2.1 0.1M-Phosphat Eluierung 5.42 Min. Es wurden auch 125 mg einer weniger polaren Verbindung erhalten, Rf 0.43, spektroskopisch identifiziert als O-BocPheHis(imBoc)-Derivat des oben identifizierten Produkts. Eine Mischung {500 mg) des Produkts dieses Beispiels und dieser Verbindung wurde ebenfalls erhalten.

NMR, CDCI3 , 300 MHz, δ, partiell: 1.33 und 1.55 (s, 9H je, Boc), 2.72 und 2.94 (m, IH je), 3.1 (m, 2H), 3.70 (s, 3H OCH3), 4.04, 4.52 und 4.95 (m, IH je), 4.28 (m, 2H), 6.68 und 8.08 (d, IH je), 7.05-7.30 (n, aromat.), 7.88 (s, IH).

BEISPIEL 5

BocPheHisnor-C-Sta-methylester (I, Z=t-Butoxycarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R2=Imidazol-4-ylmethyl; Zi=CO₂CH₃; W=CHMiOH; und X=Cyclohexyl)

Das Produkt von Beispiel 4 {800 mg) wurde 14 h bei 25⁰C in 10 ml 4:1 Essigsäure-Wasser gerührt, eingeengt, mehrmals zusammen mit Ether eingedampft, wodurch 580 mg eines leicht gelben Schaums erhalten wurden, DC Rf 0.30 im System D, HPLC in 50/50 Acetonitril-pH 2.1 0.1M-Phosphat, 6.32 Min.

NMR, 300 MHz, CDCl₃, partiell, δ, ppm: 1.42 (s, 9H, Boc), 2.9-3.1 (m) , 3.78 (s, 3H, OCH₃), 4.20 und 4.62 (je IH), 4.38 (m, 2H), 6.89 (s, IH), 7.1-7.4 (m, aromat.), 7.78 (m, 2-3H) .

BEISPIEL 6

BocPheHisnor-C-Staton-methylester (Z= (CH₃)3COCONH; M=Phenyl; Q=H; X=Cyclohexyl; R₂=Imidazol-4-yl-methyl; W=C=O; und Zi

Eine gerührte Lösung von 157 mg Pyridinium-dichromat in 10 ml Dichlormethan wurde bei 25⁰C mit 107 uL Acetanhydrid behandelt, gefolgt von 250 mg des Produkts von Beispiel 5 in einer Portion. Nach 1.5 h wurde die Mischung mit 150 ml Dichlormethan verdünnt und diese Losung wurde mit 2 χ 10 ml IN Chlorwasserstoff säure , wäßrigem Bicarbonat, Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (Natriumsulfat) und eingeengt, wodurch 260 mg eines braunen Feststoffs erhalten wurden, DC Rf 0.2 (Großteil) und 0.27 (kleiner Teil, etwa 5%) im System D. Mit diesen DC konnte keines der polareren Produkte von Beispiel 5 entdeckt werden. Die weniger polare Verunreinigung konnte durch Chromatographie an Kieselgel in 5% Ethanol-Ethylacetat entfernt werden, aber die Ausbeute war gering: 50 mg des Rohmaterials ergaben 7 mg des Produkts, das gemäß DC rein war.

NMR, 300 MHz, CDCl₃, partiell, δ, ppm: 1.24 (s, Boc), 3.82 (s, 0OCH₃), 7.0-7.5 (m, aromat.).

BEISPIEL 7

MorpholinocarbonylPheHisnor-C-Sta-methylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂ =Imidazol-4-ylmethyl; W=CHiMOH; Zi=CO₂CH₃; und X=Cyclohexyl)

A. (S) ^-Isocyanato^-phenylpropionsäure-

benzylester

Gemäß dem Verfahren von Lombardino et al (J. Med. Chem. 1964, 7_, 97) wurden 18,0 g L-Phenylalanin-benzylester-hydrochlorid in 150 ml Toluol während 1.5 h in einer Atmosphäre von Phosgen unter Rückfluß gerührt, gekühlt und eingeengt, wodurch ein Feststoff erhalten wurde, der aus 120 ml Hexan umkristallisiert wurde und 16.1 g farblose Nadeln lieferte.

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Anal. Ber als Ci₇Hi₅NO₃: C, 72.59; H, 5.37; N, 4.98. Gef. C, 72.32; H, 5.35; N, 4.92. Schmp. 68-72⁰C. [α]^! (c=l.02, CHCl₃). IR (CHCl₃) 2250, 1750 cm"¹.

B. MorpholinocarbonylPhe-benzylester

Das Produkt von Beispiel 7A wurde in 5 ml Dichlormethan gelöst, bei 25⁰C mit 930 ul Morpholin behandelt, und nach 30 Min. wurde die Mischung zu einem wachsartigen Feststoff eingeengt, der aus heißem 4:1 Hexan-Ethylacetat umkristallisiert wurde, wodurch 1.92 g der Titelverbindung erhalten wurden, Schmp. 87-89⁰C. MS (chemische Ionisation, Isobutan) 369 (MH⁺ , Basispeak).

C. MorpholinocarbonylPhe

Das Produkt von Beispiel 7B (1.85 g) wurde in 30 ml absolutem Methanol und 5 ml Essigsäure gelöst und während 1 h mit 0.5 g 10% Pd/C unter 53 psi Wasserstoffatmosphäre geschüttelt. Die Suspension wurde filtriert, eingeengt, dreimal mit zugesetztem Toluol eingedampft und getrocknet, wodurch 1.43 g eines farblosen Schaums erhalten wurde.

D. BocHis(imBoc)nor-C-Sta-methylester

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC, mit Ausnahme, daß DiBocHis anstelle von BocPheHis(imBoc) verwendet wurde, lieferten 200 mg des Produkts von Beispiel 3H 345 mg einer etwa 1.5:1 Mischung der Titelverbindung, Rf 0.38, bzw. des entsprechenden O-BocHis(imBoc)-Derivats, Rf 0.50 (DC an Kieselgel in Ethylacetat).Die Mischung wurde ohne weitere Trennung in Beispiel 3E verwendet. Diese Mischung konnte durch präparative HPLC an einer Zorbax C-8 25 cm χ 9,8 mm-Kolonne, Eluierung mit 85/15 Acetonitril-Wasser bei 6.3 ml/Min., Bestimmung bei 254 nm, getrennt werden. Die Titalsubstanz eluierte bei 4.76 Min. und das O-acylierte Derivat bei 6.48 Min. Reine Proben von beiden wurden dabei erhalten.

E. BocHisnor-C-Sta-methylester

Die in Beispiel 7D erhaltene Mischung (895 mg) wurde bei 25°C in 20 ml Methanol gelöst und mit 30 mg wasserfreiem Kaliumcarbonat behandelt. Nach 1 h wurde die Mischung eingeengt und getrocknet, wodurch 604 mg eines gelben Schaums erhalten wurden, der ohne Reinigung in der folgenden Reaktion verwendet wurde.HPLC in 50/50 Acetonitril-pH 2.1 0.lM-Phosphat zeigte 3.15 Min. und 1.98 Min. Peaks im 2.8:1-Verhältnis. Der 1.98 Min. Peak wurde als BocHisOMe angenommen, bestätigt durch NMR der Mischung und durch die nachfolgende Umwandlung unten in ein bekanntes Derivat.

F. Hisnor-C-Sta-methylester-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 7E (595 mg) wurde bei 25⁰C in 3.4N Chlorwasserstoff-Dioxan gelöst und während 30 Min. gerührt. Die Mischung wurde eingeengt und der Rückstand wurde im Vakuum getrocknet, wodurch 555 mg eines gelben Feststoffs erhalten wurden, HPLC in 5/95 Acetonitril-pH 2.1 0.1-Phosphat 1.54 Min. Das NMR zeigte, daß die Titelverbindung vorhanden war, verunreinigt mit Histidin-methylester-dihydrochlorid.

G. MorpholinocarbonylPheHisnor-C-Sta-methylester Gemäß dem Verfahren von Beispiel IC, mit Ausnahme, daß das Produkt von Beispiel IC anstelle von BocPheHis(imBoc) verwendet wurde und daß 2.2 Äquiv. Triethylamin anstelle 1.1 Äquiv. verwendet wurden, lieferten 550 mg des Produkts von Beispiel 7F 365 mg eines leicht gelben amorphen Feststoffs, der in 3 ml Methanol gelöst, bei 25⁰C während 2 h mit 4 mg wasserfreiem Kaliumcarbonat behandelt und eingeengt wurde, wodurch 355 mg eines leicht gelben Schaums erhalten wurden. Dieser wurde in 4 ml Dichlormethan gelöst und während 5 Min. lebhaft mit 20 ml IN Chlorwasserstoffsäure gerührt. Die Schichten wurden getrennt und die wäßrige Schicht wurde mit 2 χ 2 ml Dichlormethan extrahiert. Die wäßrige Schicht wurde mit genügend 2N Natriumhydroxid-Lösung behandelt, um den pH auf 10.5 zu erhöhen und dann mit 4 χ 100 ml Dichlormethan extrahiert. Die letzteren Dichlormethanextrakte wurden getrocknet (Natri-

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umsulfat) und eingeengt, wodurch 225 mg der Titelverbindung als annähernd weißer Schaum erhalten wurden, DC Rf 0.1 im System D; HPLC 2.95 Min. in 50/50 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat (93% der gesamten UV Integration), mit einer kleinen Verunreinigung bei 1.94 Min. (5% UV Integration).

NMR, 300 MHz, CDCl₃, partiell, δ, ppm: 0.7-1.4 (m, 6-8H), 1.5-1.8 <m, 4-6H), 3.4-2.8 (m, ca. 8H), 3.6 (m, 4H), 3.73 (s, 3H, OCH₃), 4.08 und 4.54 (m, IH), 4.30 (m, 2H), 5.2 im, IH), 6.82 und 7.57 (s, IH je), 6.97 und 8.12 (d, IH je), 7.1-7.35 (m, ca. 6H, aromat.).

BEISPIEL 8

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-methylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M= Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; W=CHMiOH; Z¹ = CO₂CH₃ und X=Cyclohexyl)

A. Norleucin-benzylester

Gemäß dem in J. Med. Chem. 1986, Bd. 30, S. 3575 angegebenen allgemeinen Verfahren wurden 15 g Norleucin (Nie) mit 200 ml Benzylalkohol gemischt und auf O⁰C abgekühlt, Thionylchlorid (25 ml) wurde tropfenweise im Verlaufe von 15 Min. zugesetzt, und die Mischung wurde langsam auf 9O⁰C erhitzt, wobei bei etwa 5O⁰C eine heftige SO₂-Entwicklung eintrat. Nach 2 h bei 9O⁰C wurde die Mischung auf O⁰C abgekühlt und weitere 25 ml Thionylchlorid zugesetzt. Die Mischung wurde dann abermals 2 h auf 9O⁰C erhitzt, abgekühlt, mit 1.6 1 Ether verdünnt und über Nacht bei O⁰C stehen gelassen. Die sich bildenden Kristalle wurde filtriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet, wodurch 23.1 g eines feuchten Feststoffs erhalten wurden, der aus 1:10 Ethanol-Ether umkristallisiert wurde, wobei 23 ml Ethanol verwendet wurden. Der filtrierte und getrocknete Feststoff wog 17.1 g, DC Rf 0.25 im System C (die mit Fleck versehene Platte wurde vor der Elution Ammoniakdampf ausgesetzt und getrocknet).

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B. MorpholinocarbonvlPheNle-benzvlester

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC lieferten 2.12 g des Produkts von Beispiel 8A und 2.63 g des Produkts von Beispiel 7 C 3.30 g der Titelverbindung als einen farblosen Schaum, DC Rf 0.5 in Ethylacetat an Kieselgel, HPLC Ret. Zeit 3.27 Min. 97% der Gesamtabsorption von 25 Min. in 70/30 MeCN-pH 2.1 O.IM-Phosphat.

C. MorpholinocarbonylPheNle

Das Produkt von Beispiel 8B (3.3 g) wurde während 45 Min. in 35 ml Methanol und 7 ml Essigsäure mit 1.0 g 10% Pd/C geschüttelt, durch Celit filtriert, eingeengt, mehrmals zusammen mit Toluol und Ether eingedampft und getrocknet, wodurch 2.9 g eines farblosen Feststoffs erhalten wurden, DC Rf 0.2 im System C.

D. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-methylester Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC lieferten 300 mg des Produkts von Beispiel 3H und 700 mg des Produkts von Beispiel 8C 350 mg des gewünschten Produkts als einen leicht gelben Feststoff, DC Rf 0.33 in Ethylacetat an Kieselgel, HPLC Ret.Zeit 6.02 Min. in 75/25 MeCN-pH 2.1 0.1M-Phosphat.

NMR (CDCl₃), 300 MHz, partiell, δ: 0.86 (t, 3H, J=6-7Hz, überlappend ein 1-2H m zentriert bei 0.9), 1.04-1.36 (m, ca. 8H), 1.46 (dd, 2H), 1.46-1.90 (m, ca. 10H), 3.0 (Zentrum von dd, IH), 3.05-3.38 (m, ca. 5H), 3,58 (in, ca. 4H), 3.74 (s, 3H, OCH₃), 4.12 (d, IH, J=l-2Hz), 4.20 (q, IH), 4.32-4.50 (m, 2H), 4.92 (d, IH, J=ca. 8Hz), 5.48 (d, IH, J=9Hz), 6.54 (d, IH, J=IOHz), 7.12-7.35 (m, 5H, aromat.).

BEISPIEL 9

MorpholinocarbonylPheNlenor-Sta-i-propyl ester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M= Phenyl; Q=H; R₂ =n-Butyl ? W=CHlMOH; Z¹ = 2,· und X=Isopropyl

A. N-t-Butoxycarbonyl-(S)-3-amino-

(R,S)-^-hydroxy-S-methylcapronitril

Boc-Leucinal (119 g) (hergestellt durch Dibal -H Reduktion des Methylesters gemäß dem Verfahren von Rieh et al., J. Med. Chem. 1978, 43., 3624), wurde in 500 ml Dimethoxyethan gelöst und bei 5⁰C mit 63.8 g Natriumbisulfit in 500 ml Wasser behandelt, so daß die Temperatur 1O⁰C nicht überstieg. Das Rühren wurde während 5 h bei O⁰C fortgesetzt, und die Mischung wurde 48 h bei 25⁰C gerührt. Die Mischung wurde auf 350 ml eingeengt, mit 11 Ethylacetat versetzt, gefolgt von 39,5 g KCN in 100 ml Wasser. Nach 72 h Rühren bei 25°C wurden die Schichten getrennt, die wäßrige Schicht wurde 2 χ mit Ethylacetat extrahiert, die vereinigten organischen Schichten wurden mit Kochsalzlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt, wodurch die Titelverbindung als leicht gelbes öl erhalten wurde, 134 g, DC Rf 0.22 im 1:3 System A.

B. N-t-Butoxycarbonyl-(S)-3-amino-(R)-2-tbutyldimethylsilyloxy-5-methylcapronitril

Das Produkt von Beispiel 9A (117 g) wurde in 800 ml Dimethylformamid gelöst und in einem Eisbad gekühlt. Imidazol (82.2 g) und 102 g t-Butyldimethyl-chlorsilan wurden der Reihe nach zugesetzt, und die Mischung wurde 3 h bei 25⁰C gerührt. Die Mischung wurde eingeengt und mit 500 ml Hexan und 500 ml Ether versetzt. Die organische Schicht wurde mit gesättigter Lithiumbromid-Lösung (3 χ 50 ml), IN Chlorwasserstoffsäure und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet und eingeengt, wodurch 166 g eines gelben viskosen Öls erhalten wurden. Diese zwei Isomeren konnten durch Kolonnenchromatographie getrennt werden, wobei 1.8 kg Kieselgel mit 17 g der Mischung beladen,

gepackt und mit 1:25 Ether-Hexan (10 1), dann 10 1 1:22.5, gefolgt von 10 1 1:20 Ether-Hexan eluiert wurden. Durch Wiederholen dieser Prozedur wurden 47.2 g des weniger polaren Isomeren als farbloser wachsartiger Feststoff erhalten, zusammen mit 30.6 g des polareren Isomeren, N-t-Butoxycarbonyl-(S)-3-amino-(S)^-t-butyldimethylsilyloxy-S-methylcapronitril, und 42 g der Mischung.

C. N-t-Butoxycarbonyl-(S)-3-amino-(R)-2-tbutyldimethylsilyloxy-5-methylhexanamid

Das Produkt von Beispiel 9B (30 g) wurde in 650 ml abs. Ethanol gelöst und bei O⁰C mit 144 ml IN Natriumhydroxid-Lösung, gefolgt von 290 ml 30%igem wäßrigen Wasserstoffperoxid behandelt, so daß die Temperatur 5⁰C nicht überstieg. Nach 3.5 h bei O⁰C wurde die Mischung während 0.5 h auf 3O⁰C erwärmt, auf 0⁰C abgekühlt und mit 116 ml 30%igem H2O2 behandelt. Nach 10 Min. zeigte das DC das Verschwinden des Ausgangsmaterials an, und 200 ml 20%iges was. Natriumsulfat wurden tropfenweise bei weniger als 5°C zugesetzt. Die Mischung wurde im Vakuum auf 450 ml eingeengt und mit Ethylacetat (4 χ 250 ml) extrahiert, das mit Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet und eingeengt wurde, wodurch 36 g eines Öls erhalten wurden, das an 800 g Kieselgel mit 1:1 Ether-Hexan chromatographiert wurde. Einige unreine Fraktionen wurden neuerlich im gleichen System chromatographiert, und insgesamt 17.0 g eines farblosen Produkts wurden dabei erhalten, Rf 0.2 in 1:1 Ether-Hexan.

D. (S)-3-Amino-(R)-2-hydroxy-5-methylhexanamid-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 9C (16.9 g) wurde in 50 ml Dioxan gelöst und bei 25⁰C mit 100 ml 3.4N Chlorwasserstoff-Dioxan behandelt. Nach 2.5 h wurde die Mischung eingeengt, mit Ether zusammen eingedampft und getrocknet, wodurch 8.7 g der Titelverbindung als farbloser Feststoff erhalten wurden, HPLC Ret.Zeit 2.35 Min. in 5/95 MeCN-pH 2.1 0.1M-Phosphat.

E. (S)-3-Amino-(R)-2-hydroxy-S-methylhexansäure-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 9D (8.7 g) wurde in 150 ml 6N Chlorwasserstoff säure gelöst und 2 h auf 6O⁰C erhitzt, eingeengt und getrocknet, wodurch 10.6 g eines leicht gelben Feststoffs erhalten wurden, HPLC Ret.Zeit 5.0 Min. in 5/95 MeCN-ph 2.1 O.IM-Phosphat.

F. i-Propyl-(S)-3-amino-(R)-2-hydroxy-5-methylhexanoat-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 9E (1.25 g) wurde in 2-Propanol, das mit Chlorwasserstoff gesättigt war, gelöst und bei 25⁰C während 18 h stehen gelassen. Die Mischung wurde eingeengt, der Rückstand wurde zusammen mit Toluol und Ether eingedampft und getrocknet, wodurch 1.36 g des gewünschten Produkts als öliger gelber Schaum erhalten wurde, DC Rf 0.33 im System D (die mit Fleck versehene Platte wurde vor der Entwicklung NH3-Dampf ausgesetzt).

G. MorpholinocarbonylPheNlenor-Stai-propylester

Unter Verwendung des Verfahrens zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC lieferten 300 mg des Produkts von Beispiel 9F und 782 mg des Produkts von Beispiel 8C 209 mg des Produkts als farblosen Schaum, DC Rf 0.4 in Ethylacetat, HPLC Ret.Zeit 5.86 Min. in 75/25 MeCN-ph 2.1 0.IM-Phosphat.

IH NMR (CDCl₃), 300 MHz, partiell: δ, 0.82 (t, 3H, J=6 Hz), 0.89 (Zentrum von dd, 6H), 1.21 (Zentrum von dd, 6H), 1.3-1.6 (m, ca. 5H), 1.6-2.0 (m, 2-3H), 2.88-3.34 (Multipletten ca. 7H), 3.55 (m, 4-5H), 4.05, 4.20, 4.36 und 4.46 (m, IH je), 4.98 (m, 2H), 6.47 und 6.56 (m, IH je), 7.05-7.31 (m, 5H) .

BEISPIEL 10

MorpholinocarbonylPheLysnor-C-Sta-methylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=4-Aminobutyl; X=Cyclohexyl; W=CHtr· OH; und

Z¹ =C0₂ CH₃ ) und

MorpholinocarbonylPheLys(E-CBZ)nor-C-Sta-methylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=OCH₂OCONH(CH₂ )« -; X=Cyclohexyl; W=CHIHOH;

und Z¹ =C0₂ CH₃ )

A. BocLys(e-CBZ)nor-C-Sta-methylester

Gemäß dem allgemeinen Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC lieferten 300 mg des Produkts von Beispiel 3H und 679 mg BocLys(E-CBZ) (Chemalog Co.) 430 mg des Produkts als einen farblosen Schaum, DC Rf 0.57 in Ethylacetat, HPLC 4.83 Min. in 70/30 MeCN-pH 2.1 O.IM-Phosphat.

B. Lvs(E-CBZ)nor-C-Sta-methylester-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 1OA (400 mg) wurde bei 25⁰C in 5 ml 3.4N Chlorwasserstoff-Dioxan gelöst, 1.5 h gerührt, eingeengt, zusammen mit Ether mehrmals eingedampft und getrocknet, wodurch 366 mg des Produkts als ein leicht gelber Schaum erhalten wurden.

C. MorpholinocarbonylPheLys(E-CBZ)nor-C-Sta-methylester

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC lieferten 360 mg des Produkts von Beispiel 1OB und 311 mg des Produkts von Beispiel 7C 180 mg des Produkts als einen farblosen Schaum, DC Rf 0.64 im System D HPLC 2.86 Min. in 70/30 MeCN-pH 2.1 0.1M-Phosphat.

IH NMR, CDCI3, 300 MHz, partiell, δ: 0.72-2.0 (m, ca. 25H), 2.94 (Zentrum von dd, IH), 3.0-3.32 (m, ca. 6H), 3.50 (Zentrum von m, ca. 4H), 3.68 (s, 3H, OCH3), 5.02 (m, 2H), CH₂O, 6.52 und 6.68 (d, IH je), 7.08-7.48 (m, ca. 11H).

D. MorpholinocarbonylPheLysnor-C-Sta-

methylester-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel IOC (50 mg) wurde in 10 ml Methanol und 2 ml Essigsäure gelöst und während 45 Min. bei 25⁰C mit 20 mg 10% Pd/C unter 50 psi Wasserstoff geschüttelt. Die Mischung wurde filtriert, eingeengt und zusammen zuerst mit 3 ml 3.4N Chlorwasserstoff-Dioxan und dann mit Ether (3x) eingedampft und getrocknet, wodurch 36 mg des Produkts als schwach gelbe Plättchen erhalten wurden, HPLC 4.08 Min. in 40/60 MeCN-pH 2.1 0.1M-Phosphat, DC Rf 0.12 im System D.

IH NMR, 250 MHz, DMSO-d6, partiell, δ: 0.67-1.8 (m, ca. 25H), 2.67-3.07 (m, ca. 4H), 3.07-3.56 (m), 3.56 (s, 3H, OCH₃), 4.07 (offenbar d, IH, J=3 Hz), 4.13-4.40 (m, ca. 3H), 6.72 (d, IH, J=8Hz), 7.10-7.4 (m, ca. 5H), 7.62 (d, IH, J=9Hz), 8.08 (d, IH, J=8.5Hz).

BEISPIEL 11

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-5-aminopentylamid-hydrochlorid (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R2=n-Butyl, W=CHMiOH; Zi=CONH(CH₂)SNH₂; und X=Cyclohexyl)

A. 3-(S)-Azido-2-(R)-hydroxy^-cyclohexyl-N-(5-benzyloxycarbonylaminopentyl)amid

Unter Verwendung des allgemeinen Verfahrens zur Synthese und Reinigung des Produkts von Beispiel IC lieferten 800 mg 5-(Benzyloxycarbonylamino)-1-aminopentan und 477 mg des Produkts von Beispiel 3F 490 mg der Titelverbindung als leicht gelben Sirup, DC Rf 0.5 in Ethylacetat, IR (CHCl₃) 2100 cm"¹.

B. 3-(S)-Amino-2-(R)-hydroxy-4-cyclohexyl-N-(S-benzyloxycarbonylaminopentyl)amid

Das Produkt von Beispiel HA (410 mg) wurde in 5 ml Methanol gelöst und bei O⁰C während 1 Min. mit 525 mg wasserfreiem Stannochlorid in 5 ml Methanol behandelt. Die Mischung wurde 18 h bei 25⁰C gerührt, eingeengt, mit 3 ml Wasser und 3 ml IN

'- ^υ i- O Q 32

Natriumhydroxid-Lösung behandelt und mit 200 ml Ether extrahiert. Die wäßrige Schicht wurde mit Natriumchlorid gesättigt und mit Ether extrahiert. Die Etherschichten wurden getrocknet, filtriert und eingeengt, wodurch 200 mg eines öligen Schaums erhalten wurden. Die wäßrigen Schichten wurden weiter mit 5 ml IN Natriumhydroxid-Lösung basisch gestellt und mit g Natriumchlorid behandelt und mit 3 χ 100 ml Ethylacetat und 3 χ 100 ml Dichlormethan extrahiert, und die vereinigten organischen Schichten wurden getrocknet, filtriert und eingeengt, wodurch zusätzliche 210 mg eines leicht gelben Schaums erhalten wurden. Die vereinigten Feststoffe (410 mg) wurden an 25 g Kieselgel mit Elution mit 250 ml je von 1%, 2%, 4%, 6%, 8% und 12% Ethanol-Dichlormethan chromatographiert, wodurch 172 mg des reinen Produkts als farbloser Schaum erhalten wurden, HPLC 3.39 Min. in 50/50 MeCN-pH 0.1M-Phosphat.

C. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-

(5-CBZaminopentyl)amid

Unter Verwendung des allgemeinen Verfahrens für die Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC, mit Ausnahme, daß Triethylamin nicht verwendet wurde, ergaben 165 mg des Produkts von Beispiel HB und 246 mg des Produkts von Beispiel 8C 212 mg des Produkts als einen leicht gelben Schaum, DC Rf 0.14 in Ethylacetat, 0.80 im System D. HPLC (4.8 Min.) zeigten ungefähr 30% (UV Absorption) einer nicht identifizierten Verunreinigung, 5.03 Min. in 60/40 MeCN-pH 2.1 O.IM-Phosphat.

P. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-(5-aminopentyl)amid-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel HC (186 mg) wurde in 20 ml Methanol und 4 ml Essigsäure gelöst und 2 h bei 25⁰C mit 60 mg 10% Pd/C geschüttelt, durch Celit filtriert, eingeengt, zusammen mit Toluol eingedampft und getrocknet, wodurch 167 mg eines leicht gelben Feststoffs erhalten wurden, der zweimal zusammen mit 3.4N Chlorwasserstoff-Dioxan und Ether eingedampft

ί- 6 2 5 β ^

und getrocknet wurde, wodurch 150 mg des Produkts als ein leicht gelber Feststoff erhalten wurde, HPLC 3.72 Min. in 40/60 Acetonitril-pH 2.1 0.lM-phosphat.

IH NMR <DMSO-d6 + 10% H₂O), 300 MHz, partiell, δ: 0.82 (m, ca. 5H), 0.96-1.8 (m, ca. 25H), 2.7, 3.0, 3.2 und 3.44 (Zentren von 2-3H Multipletts), 3.76 (offenbar d, IH), 4.0-4.2 (m, 2H), 4.2-4.35 (m, 1-2H), 4.35-4.9 (br, 3-4H), 6.7 (m, IH), 7.06-7.4 (m, 5-6H), 7.63 (m, IH), 7.92 (br, ca. 2H), 8.05 (d, IH, J=9Hz).

BEISPIEL 12

l-FormylpiperazinocarbonylPheNlenor-C-Stamethylester (I, Z=4-Formylpiperazinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R2=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHiHOH; und Zi=CO₂CH₃)

A. l-FormylpiperazinocarbonylPhe-benzy!ester

Das Produkt von Beispiel 7A (3.0 g) wurde in 17 ml Dichlormethan gelöst und bei 25⁰C mit 1,7 ml N-Formylpiperazin behandelt, was eine exotherme Reaktion auf 4O⁰C verursachte. Nach 0.5 H bei 25⁰C wurde die Mischung eingeengt und an 100 g Kieselgel unter Elution mit 2 1 Ethylacetat, gefolgt von 10% Ethanol-Ethylacetat chromatographiert, wodurch 3.1 g des Produkts erhalten wurden, Rf 0.1 in Ethylacetat, HPLC 4.56 Min. in 50/50 MeCN-pH 2.1 0.1M-Phosphat.

B. l-FormvlpiperazinocarbonylPhe

Das Produkt von Beispiel*12A (3.0 g) wurde in 50 ml Methanol und 5 ml Essigsäure gelöst und 1 h bei 25⁰C mit 1.0 g 10% Pd/C unter 50 psi Wasserstoff geschüttelt, durch Celit filtriert, eingeengt, zusammen mit Toluol (3x) eingedampft und getrocknet, wodurch 2.31 g der Titelverbindung als farbloser Schaum erhalten wurden, Rf 0.17 im System D.

C. 1-FormvlpiperazinocarbonylPheNle-benzylester Unter Verwendung des allgemeinen Verfahrens zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC ergaben 750 mg des Produkts von Beispiel 3H und 1.02 g des Produkts von Beispiel 8A 1.06 g der Titelverbindung als einen farblosen Feststoff, DC Rf 0.65 im System D, HPLC 2.48 Min. in 70/30 MeCN-pH 2.1-Phosphat.

D. 1-FormylpiperazinocarbonyIPheNle

Das Produkt von Beispiel 12C (1.04 g) wurde in 30 ml Methanol mit 3 ml Essigsäure gelöst, während 1 h bei 25⁰C mit 300 mg 10% Pd/C unter 50 psi Wasserstoff geschüttelt, filtriert, eingeengt, zusammen mit Toluol (3x), Ether eingedampft und getrocknet, wodurch 870 mg der Titelverbindung als ein annähernd weißer Schaum erhalten wurden, DC Rf 0.5 im System D.

E. l-FormylpiperazinocarbonylPheNlenor-C-Sta-methylester

Unter Verwendung des allgemeinen Verfahrens zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC ergaben 200 mg des Produkts von Beispiel 3H und 465 mg des Produkts von Beispiel 12D 194 mg des Produkts als einen leicht gelben Schaum, DC Rf 0.53 im System D, HPLC 4.50 Min. in 50/50 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat.

NMR (CDCl₃), 300 MHz, partiell, δ: 0.82 (t, 3H, J=6Hz, überlappend ein 0.9 Multiplett), 1.0-1.35 (m, ca. 5H), 1.44 (Zentrum von dd, 2H), 1.44-1.9 (m, ca. 9H), 2.98 und 3.10 (je Zentrum von dd, IH je), 3.10-3.57 (m, ca. 8H), 3.57-3.72 (m, mit 3.72 s [OCH₃], insgesamt ca. 5#), 4.13 (d, IH, J=3Hz), 4.21 (q, IH), 4.39 (q, IH), 4.49 (q, IH), 5.18, 6.49 und 6.63 (d, IH je, J=6Hz), 7.08-7.36 (m, 5-6H), 8.0 (s, IH, N-CHO).

I i>± Ί 8

BEISPIEL 13

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-(0-4-piperidinobutyryl)-methylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R2=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CH tι IOCO(CH₂)3-piperidino; Z¹=C0₂ CH₃)

A. 4-Piperidinobutyryl-chlorid-hydrochlorid 4-Piperidinobuttersäure-hydrochlorid (750 mg) und 4 ml Thionylchlorid wurden vereinigt und 45 Min. unter Rückfluß gerührt, eingeengt, mit Ether verrieben und getrocknet, wodurch 700 mg eines leicht braunen Feststoffs erhalten wurden, der beim Lösen in trockenem Methanol ein Rf von 0.1 im System D ergab, deutlich verschieden von der Ausgangssäure und vermutlich der Methylester. Der Feststoff wurde ohne weitere Reinigung verwendet.

B. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-(0-4-piperidinobutyryl)-methylester

Das Produkt von Beispiel 8D (50 mg) wurde durch Zusatz und Entfernen im Vakuum von Benzol getrocknet, in 1 ml Dichlormethan gelöst und bei 25°C der Reihe nach mit 30 ul Triethylamin und mit 25 mg des Produkts von Beispiel 13A behandelt. Nach 1.5 h wurden weitere 15 ul Triethylamin und weitere 22 mg des Säurechlorids und nach weiteren 2.4 h 19 ul Triethylamin und 21 mg Säurechlorid zugesetzt. Nach einer weiteren Stunde wurden 7 ul Triethylamin und 10 mg Säurechlorid zugesetzt, und 0.5 h später wurde die Mischung mit Dichlormethan verdünnt, mit wäßrigem Bicarbonat gewaschen, getrocknet und eingeengt, wodurch 75 mg eines dunkelbraunen Öls erhalten wurden, das direkt an 3 g Kieselgel mit 3% Ethanol-Methylenchlorid chromatographiert wurde, wobei dann mit 100 ml dieses Lösungsmittels und 100 ml je von 5%, 7%, 9% und 13% Ethanol-Dichlormethan eluiert wurde. Die Titelverbindung eluierte rein und wurde als leicht brauner Feststoff erhalten, 25 mg, DC Rf 0.23 im System D, HPLC 5.09 Min. in 60/40 AcetonitrilpH 2.1-Phosphat.

IH NMR (CDCl₃), 300 MHz, partiell, δ: 0.82 (t, 3H, überlappend 1-2H m), 1.04-2.0 (m), 2.26-2.58 (m), 3.06 (m, 2H), 3.1-3.34 (m, 4-6H), 3.57 (m, ca. 4H), 3.70 (s, 3H, OCH₃), 4.18 (q, IH), 4.46 (q, IH), 4.53 (m, 1-2H), 4.94 (m, IH), 7.1-7.3 (a, 5-7H).

BEISPIEL 14

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-N-methy1-amid (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHMlOH; Z¹ =CONHCH₃ )

A. 3(S)-Azido-2(R)-t-butyldimethylsilyloxy-4-cyclohexylbuttersäure-methylester

Das Produkt von Beispiel 3G (0.60 g) wurde in 5 ml Dimethylformamid gelöst und bei O⁰C der Reihe nach mit 422 mg Imidazol und 523 mg t-Butyldimethylchlorsilan behandelt. Nach 18 Stunden bei 25°C wurde die Mischung mit 211 mg Imidazol und 255 mg t-Butyldimethylchlorsilan behandelt und bei 25⁰C 1 h gerührt. Die Mischung wurde eingeengt, und der Rückstand wurde in Ethylacetat gelöst, mit wäßriger IM Lithiumchlorid-Lösung, IN Chlorwasserstoffsäure und Kochsalzlösung behandelt, getrocknet, filtriert, eingeengt (was 900 mg eines klaren Öls ergab) und an 25 g Kieselgel mit 1 1 1:75 Ether-Hexan chromatographiert, wodurch 800 mg des reinen Produkts erhalten wurden, DC Rf 0.55 in 1:2 Ether-Hexan.

B. 3(S)-Azido-2-(R)-t-butyldimethylsilyloxy-4-cyclohexylbuttersäure-N-methylamid

Das Produkt von Beispiel 14A (725 mg) wurde in Methanol gelöst und auf O⁰C gekühlt. Diese Lösung wurde mit wasserfreiem Methylamin gesättigt und der verschlossene Kolben wurde 5 h bei 40⁰C gerührt. Die Lösung wurde eingeengt, der Rückstand wurde zusammen mit Ether eingedampft und getrocknet, wodurch 642 mg eines farblosen Feststoffs erhalten wurden, DC Rf 0.18 in 1:2 Ether-Hexan.

- - L j - 3

C. 3(S)-Amino-2(R)-t-butyldimethylsilyloxy-4-cyclohexylbuttersäure-N-methylamid

Das Produkt von Beispiel 14B (640 mg) wurde in 30 ml Methanol und 3 ml Essigsäure gelöst und während 1 h bei 25⁰C mit 200 mg 10% Pd/C unter 50 psi Wasserstoff geschüttelt. Die Mischung wurde durch Celit filtriert, das Filtrat wurde eingeengt und der Rückstand wurde in Ethylacetat gelöst. Diese Lösung wurde mit wäßrigem Natriumbicarbonat gewaschen, getrocknet, filtriert und eingeengt, wodurch 550 mg eines farblosen Öls erhalten wurden, das ohne Reinigung in der nächsten Stufe verwendet wurde.

D. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta(O-1-butyldimethylsiIylether)-N-methyIamid

Unter Verwendung des allgemeinen Verfahrens zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC, mit Ausnahme, daß kein Triethylamin verwendet wurde, lieferte das rohe Produkt von Beispiel 14C (250 mg) und 358 mg des Produkts von Beispiel 8C 206 mg der Titelverbindung als ein leicht gelber Feststoff, DC Rf 0,18 in Ethylacetat, Rf 0.7 im System D, HPLC 8.2 Min. in 70/30 MeCN-pH 2.1-Phosphat.

E. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-methylester Das Produkt von Beispiel 14D (200 mg) wurde während 30 Min. bei 25⁰C mit 3 ml 3N Chlorwasserstoff-Dioxan behandelt, eingeengt, zusammen mit Ether (3x) eingedampft und getrocknet, wodurch 155 mg eines schwach gelben Feststoffs erhalten wurden, DC Rf 0.48 im System D, HPLC 4.57 Min. in 50/50 Acetonitril-pH 2.1M-Phosphat.

IH NMR, 300 MHz, DMSO-d6, partiell, δ: 0.82 (t, 3H, J=6Hz, überlappend m 1-2H), 1.0-1.32 (m, ca. 10H), 1.4-1.9 (m), 2.54 (d, 3H, J=6Hz, NCH₃), 2.78 und 2.96 (Zentren von dd, IH je), 3.06-3.28 (m, ca. 4H), 3.42 (Zentrum von m, ca. 4H), 3.76 (offenbar d, IH, J=ca. IHz), 4.11 (m, 2H), 4.28 (m, IH), 6.62, 7.58 und 7.96 (d, IH je), 7.06-7.3 (m, 5H).

L 6 L 5 ο -38-

3eispiel

MorpholinocarbonylPhelllenor-C-Sta-N-n-butyl-amid (I, Z= Liorpholinocarbonylamino; LI=Phenyl; Q=H; R_?=n-Butyl; X= Cyclohexyl; W=CH///OH; Z^COinKCH^CH)

A. 3(S)-Azido-2(R)-t-butyldimethylsilyloxy-4-cyclohexyl~ buttersäure-ΪΤ-ii-butylamid

Das Produkt von Beispiel 14A (800 mg) wurde in 2 ml Methanol und 1 ml Butylamin gelöst und 18 h unter Rückfluß gerührt. Butylamin (1 ml) wurde zugesetzt und das Erhitzen zum Rückfluß während 2 h fortgesetzt. Die Mischung wurde eingeengt und an 25 g Kieselgel unter Elution mit 1:5 Ether-Hexan chromatographiert, wodurch 500 mg eines farblosen wachsartigen Peststoffes erhalten wurden, DC Rf 0.1 in 1:5 Ether-Hexan, zusammen mit 240 mg wiedergewonnenen Ausgangsniaterials.

B. 3(S)-Amino-2-(R)-t-butyldimethylsilylo3cy-4-cyclohexyl-

buttersäure-N-n-butylamid

Das Produkt von Beispiel 15A (450 mg) wurde in 30 ml Methanol mit 3 ml Essigsäure gelöst und 5 h mit 220 mg Pd/C in einer Wasserstoffatmosphäre bei 50 psi geschüttelt. Die Mischung wurde durch Celit filtriert, das !»"iltrat wurde eingeengt, der Rückstand wurde zusammen mit zugesetztem Toluol eingedampft, in Ethylacetat gelöst, mit drei Portionen von wäßrigem Bicarbonat gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet_ und eingeengt, wodurch 3^0 mg eines farblosen Öls erhalten wurden, das ohne Reinigung in der nächsten Stufe verwendet wurde«

-38a-

C. MorpholinocarbonylPheHlenor-C-StaCO-t-butyldimethylsilyle ther) IT-n-but yl amid

Unter Verwendung des allgemeinen Verfahrens zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel 1C, mit Ausnahme, daß kein Triethylamin verwendet wurde, ergaben 355 mg des Produkts von Beispiel 15B und 300 mg des Produkts von Beispiel

8C 313 mg des Produkts als einen farblosen Feststoff, Rf in System D, HPLC 7.5 Min. in 85/15 Acetonitril-Wasser.

D. MorpholinocarbonylPheNlenor—C-Sta-

N-n-butylamid

Das Produkt von Beispiel 15C (305 mg) wurde bei 25⁰C in 3 ml 3.4N Chlorwasserstoff-Dioxan gelöst. Nach 45 Min. wurde die Mischung eingeengt, der Rückstand wurde dreimal zusammen mit Ether eingedampft und getrocknet, wodurch 239 mg eines beigefarbigen Feststoffs erhalten wurden, DC Rf 0.6 im System D, HPLC 10.2 Min. in 50/50 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat.

IH NMR, DMSO-d6, 300 MHz, partiell, δ: 0.9 (Tripletts, 6H insgesamt, überlappend 1-2H m), 1.0-1.85 (m, ca. 20H), 2.76 (Zentrum von dd, IH), 2.9-3.5 (m) , 3.74 (offenbar d, IH, J=ca. IHz), 4.14 (m, 2H), 4.27 (m, IH), 6.60 (d, IH), 7.05-7.3 (m, 5H), 7.58 (t, IH), 7.98 (d, IH).

BEISPIEL 16

MorpholinocarbonylPheNva-nor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Propyl; X=Cyclohexyl; W=CHlMOH; und Z¹ =CO₂CH(CH₃ )2 )

A. L-Norvalin-methylester-hydrochlorid

Wasserfreier Chlorwasserstoff wurde bei O⁰C während 15 Min. durch eine Suspension von 2.0 g L-Norvalin (Chemical Dynamics) in 50 ml wasserfreiem Methanol durchgeleitet. Die resultierende Lösung wurde bei Raumtemperatur während 18 h gerührt. Die Reaktionsmischung wurde im Vakuum zu einem weißen Feststoff eingeengt, der aus Ethanol/Ether umkristallisiert 2.3 g des gewünschten Methylesters lieferte.

B. N-(Morpholinocarbonyl)-L-phenylalanin-L-norvalin-methvlester

Zu einer Lösung von 0.50 g N-(Morpholinocarbonyl)-L-phenylalanin und 0.26 g L-Norvalin-methylester in 10 ml wasser-

freiem Methylenchlorid wurden 0.22 ml Triethylamin, 0.33 g 1-Hydroxybenzotriazol und 0.38 g 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethyl-carbodiimid zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 16 h bei Raumtemperatur gerührt und danach mit 50 ml Ethylacetat verdünnt und mit 0.IN Chlorwasserstoffsäurelösung (2x25 ml) und 0.1N Natriumhydroxidlösung (2x25 ml) gewaschen. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt, wodurch 0.62 g rohes Dipeptid erhalten wurde.

C. N-{Morpholinocarbonyl)-L-phenylalanin-L-norvalin

Zu einer Lösung von 0.62 g N-(Morpholinocarbonyl)-L-phenylalanin-L-norvalin-methylester in 40 ml Methanol und 20 ml Wasser wurde 1.2 g Kaliumcarbonat zugesetzt. Die resultierende Mischung wurde 60 h bei Raumtemperatur gerührt und danach im Vakuum zu einer wäßrigen Lösung eingeengt und mit Ether (3x50 ml) gewaschen. Die wäßrige Phase wurde mit 10 ml 4N Chlorwasserstoffsäurelösung angesäuert und mit Methylenchlorid (3x25 ml) extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und eingeengt, wodurch 0.46 g rohe Säure erhalten wurde.

D. MorpholinocarbonylPheNva-nor-C-Sta-i-propyl-ester Zu einer Lösung von 0.13 g N-(Morpholinocarbonyl)-L-phenylalanin-L-norvalin und 0.10 g 2(R)-Hydroxy-3{S)-amino-4-cyclohexylbuttersäure-2-propylester (Beispiel 17A) in 5 ml wasserfreiem Methylenchlorid wurden 0.055 ml Triethylamin, 0.060 g 1-Hydroxybenzotriazol und 0.075 g 1-(3-Dimethylaminopropyl) -3-ethyl-carbodiimid zugesetzt.

Die Lösung wurde 16 h bei Raumtemperatur gerührt und danach mit 40 ml Ethylacetat verdünnt und mit 2x25 ml 0.IN Chlorwasserstof fsäure-Lösung und 2x25 ml 0.IN Natriumhydroxid-Lösung gewaschen. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde an Kieselgel (29:1, CfoClirEtOH) chromatographiert, was

L O L O O

-41-

Ο. 17 S reines Peptid lieferte, (77 55). KHR (300 MPIz, 0.86 (m, 3H), 1.27 (d, J=8 Hz, 6H), 4.09 (m, 1H), 4.25 1H), 4.46 (m, 1H), 4.51 (m, 1H), 7.25 (m, 5H).

Beispiel 17

MorpholinocarbonylPhe-S-methyl-Cysnor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; Ii=Cyclohexyl; W=CH///OH; und Z¹=CO

A. 2(R)-Hydrozy-3(3)-amino-4-cyclohexylbuttersäure-2-propanolester-hydrochlorid

Durch eine mit Eis gekühlte Lösung von 1.0 g B"-t-3utylo:cycarbonyl-2(R)-hydroxy-3(S)-amino-4-cyclohexylbuttersäure in 50 ml 2-Propanol wurde während -20 IiLn. wasserfreie Chlorwasserstoffsäure durchgeleitet. Die Lösung konnte sich auf Raumtemperatur erwärmen und wurde 16 h gerührt. Die Lösung wurde im Vakuum eingeengt und im Hochvakuum getrocknet, wodurch 0,93 g des gewünschten Amin-hydroChloridesters erhalten wurde.

B. S-Hethyl-L-cystein-methylester-hydrochlorid

Sine mit Eis gekühlte Suspension von 2.5 g S-Methyl-L-cystein (Chemical Dynamics) in 25 ml wasserfreiem Methanol wurde mit wasserfreiem Chlorwasserstoff gesättigt, wobei sich alles Material auflöste. Die Lösung konnte sich auf Raumtemperatur erwärmen und wurde 20 h gerührt. Die Lösung wurde im Vakuum su einem gelben Feststoff eingeengt, der aus Ether/Ethanol umkristallisiert 3«0 g (87 Jj) des gewünschten Methylesteramin-hydrochlοrids lieferte.

262563

-42-

C. !!-(Morpholine)carbonyl)-L-phenylalanin-S-methyl-L-cysteinmethylester

Zu einer Lösung von 0.96 g Ii-(Mo rp ho lino carbonyl ^!-phenylalanin und 0.55 g S-Methyl-L-cystein-methylester in 50 ml wasserfreiem Methylenchlorid wurden bei Raumtemperatur 0.50 ml Triethylamin, 0.51 g 1-Hydroxybenzotriazol und 0.70 g 1-(3-Dimethyl amino propyl)-3-ethyl-carbodiiraid-hydro chlorid augesetzt. Uach Rühren während 4 h wurde die Lösung mit 100 ml Ethylacetat verdünnt und 2x35 ml 0.1ΙΊ Chlorwasserstoff säure-Losung und mit 2x35 ml 0.111 Uatriumhydroxid-Lb"-sung gewaschen. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt, wodurch 1.15 g des gewünschten festen Dipeptids erhalten wurde.

D. IT-(Morpholinocarbonyl )-L-phenylalanin-S-methyl-L-cystein

Zu einer mit Eis gekühlten Lösung von 1.15 g ÜI-(Morpholinocarbonyl)-L-phenylalanin-S-methyl-L-cystein-methylester in 30 ml Wasser und 60 ml Methanol wurden 3·5 g Kaliumcarbonat zugesetzt. Die resultierende Mischung wurde 15 Min. bei 0 ⁰G und 4 h bei Raumtemperatur gerührt. Die Lösung wurde im Vakuum zu einer wäßrigen Lösung eingeengt, die mit konz. Salzsäure angesäuert und mit 3x50 ml Methylenchlorid extrahiert wurde. Die vereinigten Extrakte wurden über Magnesiumsulfat getroklcnet, filtriert und im Vakuum eingeengt, wodurch 1.0 g (89 %) der rohen Säure erhalten wurde.

E. MorpholinocarbonylPhe-S-methyl-Cysnor-C-Sta-i-propylester Zu einer Lösung von 0,43 g H-(Morpholinocarbonyl)-L-phenyl-

2 6 2 5 3

-42a-

alanin-S-methyl-L-cystein -und 0.34 g 2(R)-Hydroxy-3(S)-am±no-4-cyclohexylbuttersäure-2-propanolester in 20 ml wasserfreiem Methylenchlorid wurden 0.17 ml Triethylamin, 0.18 g Hydroxybenzotriazol und 0.23 1-(3-Mmethylaminopropyl)-3-ethyl-carbodlimid zugesetzt. Die lösung wurde 16 ta. bei Raumtemperatur gerührt, wonach sie mit 50 ml Ethylacetat verdünnt und mit ml O.UT Chlorwasserstoffsäure-Lösung und 25 ml^ 0.1TT ITatriumhydroxid-Lösung gewaschen wurde. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde an Kieselgel (29:1, CH₂Cl₂:EtOH) chromatographiert, was 0.42 g reines Peptid (62 %) lieferte. MJR (300 MHz, CDG1-):1.30 (2xd, 6H), 2.13 (s, 3H), 4.49 (m, 3H), 5.07 (m, 1H), 7.25 (m, 5H).

η

BEISPIEL 18

Benzimidazol-2-carbonylNlenor-C-Sta-methylester (II, L=N; R₃=Ii-Buty 1; und R₆=OCH₃)

A. Benzimidazol-2-carbonyl-norleucin-benzvlester Gemäß dem Verfahren zur Herstellung des Produkts von Beispiel IC lieferten 80 mg Benzimidazol-2-carbonsäure und 110 mg Norleucin-benzylester-hydrochlorid (Produkt von Beispiel 8a) nach Chromatographie an Kieselgel unter Elution mit Ethylacetat-Hexane 110 mg eines Feststoffs, der aus 1:7 Ether-Hexane umkrxstallisiert 85 mg eines farblosen Feststoffs lieferte.

B. Benzimidazol-2-carbonyl-norleucin

Das Produkt von Beispiel 18A (82 mg) wurde in 15 ml Methanol und 2 ml Essigsäure gelöst und 1 h bei 25⁰C mit 50 mg 10% Pd/C unter 50 psi Wasserstoff geschüttelt, durch Celit filtriert, eingeengt, zusammen mit 3 ml zugesetztem Toluol (5x) eingedampft und getrocknet, wodurch 48 mg eines gelblichen Feststoffs erhalten wurden, DC Rf 0.35 im System C.

C. 3(S)-Amino-2(R)-t-butyldimethylsilyloxy-4-cvclohexylbuttersäure-methylester

Unter Verwendung des Verfahrens zur Herstellung des Produkts von Beispiel 14B lieferten 750 mg des Produkts von Beispiel 18B 500 mg der Titelverbindung als gelbes öl.

D. Benzimidazol-2-carbonylNlenor-C-Stamethvl-TBDMS-ether

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung des Produkts von Beispiel IC lieferten 65 mg des Produkts von Beispiel 18C und 45 mg des Produkts von Beispiel 18B 110 mg rohes Produkt, das an Kieselgel mit Elution durch Ether-Hexan 65 mg eines farblosen Schaums ergaben, DC Rf 0.52 im 1:1 System A.

E. Benzimidazol-2-carbonylNlenor-C-Sta-methvlester Das Produkt von Beispiel 8D (60 mg) wurde in 3 ml 4N HCl-

C 5 <;;

Dioxan gelöst. Nach 45 Min. bei 25°C wurde die Mischung eingeengt, der Rückstand wurde mit Ether eingedampft, in Ethylacetat gelöst, mit wäßrigem Natriumhydroxid gewaschen, getrocknet eingeengt und an Kieselgel in Ethylacetat-Hexan (1:1) chromatographiert, wodurch 27 mg eines gelben Feststoffs erhalten wurden, der durch präparative HPLC (1 cm C-8-Kolonne) gereinigt wurde, wobei mit 7/3 Acetonitril-Wasser eluiert wurde. 10 mg der reinen Substanz wurden dabei erhalten, DC Rf 0.55 an Kieselgel in Ethylacetat, HPLC 3.17 Min. in 70/30 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat.

IH NMR, CDCl₃, 300 MHz, partiell, δ ppm: 0.83 <t, 3H), 3.80 (s, 3H), 4.10, 4.15, 4.29, 4.57 und 4.79 (m, IH je), 7.25 (m, 2H), 7.33 (m, 2-3H), 7.50, 7.77 und 8.10 (d, IH je).

BEISPIEL 19

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-Natriumsalz (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHlHOH; und Zi

Das Produkt von Beispiel 8 (25 mg) wurde in 0.5 ml Dioxan gelöst und bei 25⁰C mit 42 ul IN Natriumhydroxid-Lösung behandelt. Nach 3 h wurde die Mischung eingeengt, wodurch die Titelverbindung als leicht gelber Feststoff (17 mg) erhalten wurde, HPLC 3.06 Min. in 60/40 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat-Puffer.

IH NMR, DMSO, 300 MHz, partiell, δ ppm: 0.87 (t, 3H), 4.97, 5.07 und 5.34 (m, IH je), 6.66, 7.98 und 8.10 (d, IH je), 7.1-7.35 (m, aromat.).

BEISPIEL 20

3-(S)-MorpholinocarbonylPheNorleucylamino)-2-(R)-hydroxy-4-phenylbutyramid (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R2=n-Butyl; X=Phenyl; W=CHfMOH; und Zi=CONH₂)

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC lieferten 148 mg 3(S)-Amino-2(R)-hy-

droxy-4-phenylbutyramid-hydrochlorid {Beispiel ID von U.S. 4 668 769) und 251 mg des Produkts von Beispiel 8C 170 mg eines farblosen Pulvers, DC Rf 0.3 im System C.

IH NMR, DMSO, 250 MHz, partiell, δ ppm: 0.82 (t, 3H), 2.60 (dd, IH), 2.80 (überlappende dd, IH), 2.95 {dd, IH), 3.42 (m, 4H), 3.68 (d, IH), 4.17 (m, 2H), 4.28 (m, IH), 6.61, 7.52 und 7.91 (d, IH je), 7.05-7.35 (m, aromat.).

BEISPIEL 21

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-amid (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R2=nbutyl; X=Cyclohexyl; W=CHMiOH; und Z¹ =CONH₂ )

A. Boc-nor-C-Sta-amid-TBDMS-ether

Das Produkt von Beispiel IC, U.S. 4 668 769, (9.17 g) wurde in 200 ml Methanol gelöst und 70 h bei 25⁰C mit 1 g 10% RhC und 30 psi Wasserstoff geschüttelt, durch Celit filtriert und eingeengt, wodurch 8.25 g eines schwach gelben Schaums erhalten wurde, der an 400 g Kieselgel in Ethylacetat-Hexan (3 1 1:3, dann 2 1 100:0) chromatographiert wurde, was 7.2 g des Produkts als einen farblosen kristallinen Feststoff lieferte.

B. Nor-C-Sta-amid-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 21A (6.1 g) wurde in 15 ml 4N HCl-Dioxan gelöst und 3 h bei 25⁰C gerührt, eingeengt und zusammen mit zugesetztem Ether eingedampft, wodurch 3.00 g eines farblosen Pulvers erhalten wurden, das in einer minimalen Menge Ether gelöst, filtriert und getrocknet 2.70 g eines farblosen Feststoffs lieferte, Schmp. 236-238⁰C.

C. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-amid

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC ergaben 150 mg des Produkts von Beispiel 21B und 248 mg des Produkts von Beispiel 8C 169 mg der Titelverbindung als ein farbloses Pulver, DC Rf 0.30 im System C.

IH NMR, DMSO, 250 MHz, partiell, δ ppm: 0.85 (t, 3H), 3.44 (m, 4H), 3.73 (m, IH), 4.15 (m, 2H), 4.30 (m, IH), 5.64, 6.64 und 8.02 (d, IH), 7.10-7.35 (m, aromat.).

BEISPIEL 22

Benzimidazol-2-carbonylHisnor-C-Sta-methylester (II, L=N; Ra=Imidazol-4-ylmethyl;

R₆ =OCH₃ )

A. DiBocHisnor-C-Sta-methvlester-TBDMS-ether

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung des Produkts von Beispiel IC ergaben 750 mg des Produkts von Beispiel 18C und 1.05 g Boc-His(imBoc) 1.6 g rohes Produkt, das an Kieselgel unter Elution mit Ethylacetat-Hexan chromatographiert 932 mg der Titelverbindung ergaben, DC Rf 0.31 im 1:1 System A.

B. Hisnor-C-Sta-methylester-dihvdrochlorid ·

Das Produkt von Beispiel 22A (400 mg) wurde in 2 ml Dichlormethan gelöst, auf O⁰C gekühlt und mit 3 ml Trifluoressigsäure behandelt. Nach 30 Min. bei 0⁰C und 80 Min. bei 3O⁰C wurde die Mischung eingeengt und zusammen mit drei Portionen zugesetztem 4N HCl-Dioxan und dann mit Ether eingedampft und getrocknet, wodurch 210 mg eines schwach gelben Feststoffs erhalten wurden.

C. Benzimidazol-2-carbonylHisnor-C-Sta-methylester Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC ergaben 205 mg des Produkts von Beispiel 22B und 93 mg Benzimidazol-2-carbonsäure 27 mg eines schwach gelben Feststoffs, der abermals an 1 g Kieselgel in 6% Ethanol-Dichlormethan chromatographiert 12 mg des Produkts lieferte, DC Rf 0.44 im System D, HPLC 6.01 Min. in 60/40 Acetonitril-pH 2 .1-Phosphat.

IH NMR, CDCl₃, 300 MHz, partiell, δ ppm; 3.75 (s, 3H), 4.20 (br, IH), 3.16 (m), 6.96 (s, IH).

ί ? C i1 '5

BEISPIEL 23

4-MethylpiperazinocarbonylPheNlenor-C-Sta-N-methylamid (I, Z=4-Methylpiperazinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R2=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHIiIOH; und Zi=CONHCH₃)

A. 4-MethylpiperazinocarbonylPhe-benzylester

Das Produkt von Beispiel 7A (15.0 g) wurde in 100 ml Dichlormethan gelöst und bei 3°C mit N-Methylpiperazin behandelt. Nach 10 Min. (Temperatur stieg auf 2O⁰C) wurde die Mischung eingeengt und der Rückstand wurde an Kieselgel (unter Elution mit 5%-ll% Ethanol in Dichlormethan) gereinigt, wodurch 18.1 g eines schwach gelben Öls erhalten wurden.

B. 4-MethylpiperazinocarbonylPhe-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 23A (18 g) wurde in 150 ml Essigsäure gelöst und 45 Min.^! bei 25⁰C mit 3 g 10% Pd/C unter 50 psi Wasserstoff geschüttelt, durch Celit filtriert und eingeengt. Der Rückstand wurde zusammen mit zugesetztem Toluol (2x) und Ether (2x) eingedampft und getrocknet, wodurch 16.8 g eines farblosen hygroskopischen Schaums erhalten wurden. Dieser wurde dreimal mit 30 ml 4N HCl-Dioxan eingedampft und getrocknet, was 15.9 g farblose Kristalle ergab.

C. 4-MethylpiperazinocarbonylPheNle-benzylester Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC, mit Ausnahme, daß 2.5 Äquiv. Triethylamin verwendet wurden, lieferten 2.00 g Norleucin-benzylester (8A) und 2.54 g des Produkts von Beispiel 23B 2.34 g eines farblosen weißen Schaums, DC Rf 0.12 im System C.

D. 4-MethylpiperazinocarbonylPheNle

Das Produkt von Beispiel 23C (2.32 g) wurde in 20 ml 10:1 Methanol-Essigsäure gelöst und während 1.5 h bei 25⁰C mit 500 mg 10% Pd/C unter 50 psi Wasserstoff geschüttelt, durch Celit filtriert, dreimal je zusammen mit zugesetztem Toluol und

Ether eingedampft und getrocknet, wodurch 2.15 g farbloser Feststoff erhalten wurden.

E. 4-MethylpiperazinocarbonylPheNlenor-C-Sta-N-methylamid-TBDMS-ether ,

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC lieferten 350 mg des Produkts von Beispiel 23D und 201 mg des Produkts von Beispiel IAC 235 mg eines farblosen Feststoffs, HPLC 4.92 Min. in 70/30 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat.

F. 4-MethylpiperazinocarbonylPheNlenor-C-Sta-N-methylamid

Das Produkt von Beispiel 23E {230 mg) wurde bei 25⁰C in 5 ml 4N HCl-Dioxan gelöst. Nach 30 Min. wurde die Mischung unter vermindertem Druck eingeengt, der Rückstand wurde mehrmals mit zugesetztem Ether eingedampft, getrocknet, mit Ether verrieben und getrocknet, wodurch 175 'mg eines gelben Feststoffs erhalten wurden, HPLC 3.92 Min. in 40/60 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat, DC Rf 0.08 im System D (die mit Fleck versehene Platte wurde vor der Elution NH3-Dampf ausgesetzt).

IH NMR, CDCI3, 300 MHz, partiell, δ ppm: 0.90 (t, 3H), 2.59 (d, 3H), 3.82 (m, IH), 7.00, 7.62 und 8.08 (d, IH je).

BEISPIEL 24

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-ethyI-keton (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R2= η-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHIMOH; und Zi=COCH₂CH₃)

A. 5(S)-Bocamino-4(R)-benzyloxy-6-cyclohexyl-

3(R,S)-hexanol

Das Produkt von Beispiel 5A von U.S. 4 668 769 (700 mg) wurde in 5 ml Ether gelöst und bei O⁰C mit 1.45 ml 2.8M Ethylmagnesiumbromid in Ether behandelt. Nach 20 Min. wurden weitere 650 ul 2.8M Ethylmagnesiumbromid zugesetzt, und nach 30 Min. wurde die Lösung mit 1 ml gesättigtem wäßrigem Ammoniumchlo-

O C

ά.9

rid behandelt. Die Mischung wurde mit Ether verdünnt, mit IN Chlorwasserstoffsäure, Bicarbönat und Kochsalzlösung extrahiert, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt, wodurch 530 mg eines viskosen Öls erhalten wurden, DC Rf 0.4 und 0.25 (1:3 System A).

B. 5(S)-Bocamino-4(R)-benzyloxy-e-cyclohexyl-O-hexanon Das Produkt von Beispiel 24A (525 mg) wurde in 5 ml Ether gelöst und bei 25⁰C mit 1.0 ml Chromsäurelösung (Org. Syn. V, S 310) behandelt. Nach 1 h wurde Ether zugesetzt, und die Lösung wurde mit IN Natriumhydroxid-Lösung und Kochsalzlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wurde an Kieselgel unter Elution mit 1:7 Ether-Hexane chromatographiert, wodurch 250 mg eines farblosen Öls erhalten wurden, DC Rf 0.6 im 1:3 System A.

C . 5(S)-Amino-4(R)-benzyloxy-e-cyclohexanon-

hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 24B (245 mg) wurde in 3 ml 4N HCl-Dioxan gelöst, 45 Min. bei 25⁰C gerührt und eingeengt. Der Rückstand wurde zusammen mit zugesetztem Ether eingedampft und getrocknet, wodurch 190 mg eines schwach gelben Schaums erhalten wurden, DC Rf 0.58 im System C (die im Flecken aufgetragene Substanz wurde NH3-Dampf ausgesetzt, bevor die Platte eluiert wurde).

D. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-ethylketon-benzy lether

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC ergaben 95 mg des Produkts von Beispiel 24D und 142 mg des Produkts von Beispiel 8C 133 mg der Titelverbindung als farblosen Schaum.

E. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-ethylketon

Das Produkt von Beispiel 24D (120 mg) wurde in 3 ml 2:1 Methanol-Essigsäure gelöst und 20 h bei 25⁰C mit 75 mg 10% Pd/C unter 50 psi Wasserstoff geschüttelt. Die Mischung wurde

durch Celit filtriert, das Filtrat wurde eingeengt, 5x zusammen mit zugesetztem Toluol und 5x mit zugesetztem Ether eingedampft und getrocknet, wodurch 100 mg eines leicht beigefarbigen Feststoffs erhalten wurden.HPLC 2.96 Min. in 70/30 Acetonitril-pH 2.1-Puffer, DC Rf 0.3 (Ethylacetat, Kieselsäure) .

IH NMR, CDCl₃, 300 MHz, partiell, δ ppm: 0.88 und 1.09 (t, 3H je), 2.47 und 2.78 (dq, IH je), 3.10 (m, 2H), 3.17 und 3.64 (m, 4H je), 4.13, 4.16 und 4.98(m, IH je), 4.52 (m, 2H), 5.17 und 5.48 (d, IH je), 7.1-7.35 (m, aromat.).

BEISPIEL 25

MorpholinocarbonylPheHisnor-C-Sta-N-methylamid (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=Imidazol-4-ylmethyl; X=Cyclohexyl; W=CHJiIOH;

und Z¹=CONHCH₃

A. DiBocHis-benzvlester

DiBoc-L-Histidin (0.317 mol) wurde in 800 ml trockenem DMF gelöst, und 43.9 g wasserfreies Kaliumcarbonat wurde zugesetzt. Die Mischung wurde in einem Eisbad gerührt und mit 37.8 ml Benzylbromid versetzt. Die Mischung wurde bei O⁰C gerührt und konnte sich über Nacht auf 25°C erwärmen. Sie wurde durch Celit filtriert (Waschen mit Ether). Das Filtrat wurde eingeengt und der Rückstand wurde in 700 ml Ethylacetat gelöst. Diese Lösung wurde mit 2 χ 200 ml IM Lithiumchlorid und 2 χ 4M Lithiumchlorid, 2 χ 100 ml IN NaOH, Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und zu einem öligen Feststoff eingeengt. Dieser Feststoff wurde heftig mit 500 ml Hexan gerührt, worauf sich eine kristalline Masse bildete, die in einem Mörser pulverisiert und bei 25⁰C mit 2 χ 100 ml Hexan auf dem Filter gewaschen wurde. Der Feststoff wog nach dem Trocknen 120.5 g, Schmp. 99-99.5⁰C, DC Rf 0.35 im 1:1 System A, [or]^D - 6.4 (c=1.09, CHCl₃).

2 6 ?

B. Histidin-benzylester-dihydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 25A (92 mg) wurde in 400 ml kaltem 4N HCl-Dioxan gelöst, und die erhaltene Suspension wurde 24 h bei 25⁰C gerührt. Das meiste der Flüssigkeit wurde abdekantiert, und der Rückstand wurde eingeengt, getrocknet, 3x mit Ether gewaschen und getrocknet, wodurch die Titelverbindung als ein farbloser Feststoff in quantitativer Ausbeute erhalten wurde. Das Cot]"- stieg im Verlaufe von 24 h auf +6.4 (c=2.865, MeOH) (Org. Prep. Proc. Int ¹I., 1970, 255, berichtete unter diesen Bedingungen ein [a]^D = 6.54). Das durch diese Beispiele veranschaulichte Verfahren ist dem berichteten überlegen.

C. MorpholinocarbonylPheHis-benzylester

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung des Produkts von Beispiel IC ergaben 1.37 g des Produkts von Beispiel 7C und 1.21 g des Produkts von Beispiel 25B 1.8 g eines gelben Schaums (roh). Dieses Material mit Ether verrieben und getrocknet ergab 1.68 g eines leicht gelben Schaums (HPLC 2.92 Min. in 50/50 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat), der ohne weitere Reinigung verwendet wurde.

D. MorpholinocarbonylPheHis(imBoc)-benzylester

Das Produkt von Beispiel 25C (1.68 g) wurde in 30 ml Dioxan und 15 ml Wasser gelöst, und der pH wurde mit wäßrigem IN Natriumhydroxid auf 11 eingestellt. Di-t-butyldicarbonat (850 ul) wurde zugesetzt, und der pH wurde durch Zusatz von Natriumhydroxid zwischen 9 und 11 gehalten. Nach 45 Min. wurden 450 ul Di-t-butyldicarbonat zugesetzt (der pH wurde um 10.5 gehalten) und nach insgesamt 1.5 h wurde der pH mit IN HCl auf 5 eingestellt. Die" Lösung wurde teilweise eingeengt und dann mit 4 χ 100 ml Ethylacetat extrahiert. Diese Extrakte wurden mit wäßrigem Natriumhydroxid und Bicarbonat gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt, wodurch 1.85 g eines öligen Schaums erhalten wurde, der an Kieselgel unter Gradientelution mit Ethanol in Dichlormethan (2 bis 8% EtOH) gereinigt wurde, was 1.05 g eines schwach gelben Schaums er-

gab, HPLC 3.10 Min. in 70/30 Acetonitril-Puffer, DC Rf 0.13 (Ethylacetat, Kieselgel).

E. MorpholinocarbonylPheHis

Das Produkt von Beispiel 25D (500 mg) wurde in 25 ml Methanol und 2 ml Essigsäure gelöst und während 45 Min. bei 25⁰C mit 250 mg 10% Pd/C unter 50 psi Wasserstoff geschüttelt. Die Mischung wurde durch Celit filtriert, das Filtrat wurde eingeengt, zusammen mit zugesetztem Toluol (3x) und Ether (4x) eingedampft und getrocknet, wodurch 423 mg eines farblosen Feststoffs erhalten wurden, DC Rf 0.3 im System C.

F. MorpholinocarbonylPheHis(imBoc)nor-C-Sta-N-methylamid-TBDMS-ether

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC ergaben 140 mg des Produkts von Beispiel 14C und 285 mg des Produkts von Beispiel 25E 223 mg eines farblosen Schaums, HPLC 9.95 Min. in 70/30 AcetonitrilpH 2.1-Puffer.

G. MorpholinocarbonylPheHisnor-C-Sta-N-methylamid-TBDMS-ether

Das Produkt von Beispiel 25F (218 mg) wurde bei 25⁰C in 3 ml Methanol gelöst und mit 10 mg wasserfreiem Kaliumcarbonat behandelt. Nach 1 h wurde die Mischung eingeengt, wodurch 193 mg eines farblosen Feststoffs erhalten wurden, DC Rf 0.06 im System C.

H. MorpholinocarbonylPheHisnor-C-Sta-N-methyl-

amid-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 25G (185 mg) wurde in 3 ml 4N HCl-Dioxan gelöst, 1 h bei 25⁰C gerührt, eingeengt und zusammen mit zugesetztem Ether eingedampft, wodurch 150 mg eines farblosen Feststoffs erhalten wurden, HPLC 1.83 Min. in 1:1 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat, DC Rf 0.25 im System D (die im Fleck aufgetragene Substanz wurde vor der Elution der Platte NH3-Dampf ausgesetzt).

IH NMR, DMSO, 250 MHz, partiell, δ ppm: 2.58 (d, 3H), 3.90, 4.12, 4.27 und 4.58 (m, IH je), 6.87, 7.60, 7.82 und 8.33 (d, IH je), 7.13-7.34 (m, aromat.), 7.44 und 9.02 (s, IH je).

BEISPIEL 26

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-dimethylamid (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHInOH; und Zi=CONH(CH₃ )2 )

A. Bocnor-C-Sta-dimethylamid

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung des Produkts von Beispiel IC ergaben 350 mg Boc-nor-C-Sta (Beispiel IG, U.S. 4 668 769) und 170 mg Dimethylamin-hydrochlorid 405 mg rohes Produkt, das an Kieselgel (1:2 Ethylacetat-Hexane) gereinigt 310 mg eines farblosen Schaums ergaben.

B. Nor-C-Sta-dimethylamid-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 26B (305 mg) wurde in 4 ml HCl-Dioxan gelöst, 18 h gerührt, eingeengt, zusammen mit Ether eingedampft und getrocknet, wodurch 250 mg eines leicht gelben Feststoffs erhalten wurden, DC Rf 0.1 im System C.

C. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-dimethylamid Gemäß dem Verfahren zur Herstellung des Produkts von Beispiel IC lieferten 245 mg des Produkts von Beispiel 26B und 472 mg des Produkts von Beispiel 8C 325 mg eines farblosen Schaums, HPLC 5.36 Min. in 50/50 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat.

IH NMR, CDCl₃, 300 MHz, partiell, δ ppm: 0.86 (t, 3H), 2.91 und 3.03 (s, 3H je), 3.07 (m, 2H), 3.45 und 3.59 (m, 4H je), 4.15 (m, 2H), 4.31, 4.36 und 4.52 (m, IH je), 5.00, 6.13 und 6.49 (d, IH je), 7.08-7.26 (m, aromat.).

BEISPIEL 27

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Staton-methylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; Ra=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=C=O; Zi=CO₂CH₃

Das Produkt von Beispiel 8D (100 mg) wurde in 0.4 ml Dichlormethan gelöst und mit 48 ul Acetanhydrid und 141 mg Pyridinium-dichromat behandelt. Nach 45 Min. wurde die Mischung in einen -20°C-Gefrierschrank gebracht, wo sie 18 h gelagert wurde. Ethylacetat wurde zugesetzt, und die Lösung wurde mit IN HCl, wäßrigem Natriumbicarbonat, IN Natriumhydroxid und Kochsalzlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt, wodurch 85 mg eines farblosen Feststoffs erhalten wurden, der an Kieselgel unter Elution mit Ethanol-Dichlormethan chromatographiert wurde, was 44 mg der Titelsubstanz ergab, DC Rf 0.28 (Ethylacetat an Kieselgel).

IH NMR, CDCl₃, 300 MHz, partiell, δ ppm: 0.87 (t, 3H), 3.62 (m, 4H), 4.34, 4.51 und 5.09 (m, IH je), 4.94, 6.57 und 6.77 (d, IH je), 7.15-7.35 (m, aromat.)

BEISPIEL 28

Morpholinocarbonyl-O-MeTyrNlenor-C-Sta-ethylketon (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=p-Methoxyphenyl; Q=H; R₂=n-Butyl? X=Cyclohexyl; W=CHJMOH;

Z¹ =COCH₂ CH₃

A. Morpholinocarbonyl-O-MeTyrNlenor-C-Sta-ethylketon-benzylether

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC ergaben 150 mg Morpholinocarbonyl-O-MeTyr-Nle und 97 mg des Produkts von Beispiel 24D 140 mg eines farblosen Schaums, DC Rf 0.38 (Ethylacetat, Kieselgel),

B. Morpholinocarbonyl-O-MeTyrNlenor-C-Sta-ethylketon Das Produkt von Beispiel 28A (128 mg) wurde in 3 ml Methanol und 1 ml Essigsäure gelöst und während 18 Stunden bei 25⁰C

ff f rt mm ·**.

£. O 2 5 Ό

mit 130 mg 10% Pd/C unter 50 psi Wasserstoff geschüttelt. Die Mischung wurde durch Celit filtriert, eingeengt, und der Rückstand wurde zusammen mit zugesetztem Toluol (5x) und Ether (5x) eingedampft, wodurch nach Trocknen 115 mg eines schwach gelben Feststoffs erhalten wurden, DC Rf 0.25 (Ethylacetat-Kieselsäure), HPLC 3.64 Min. in 70/30 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat.

IH NMR, CDCl₃, 300 MHz, partiell, δ ppm: 0.90 und 1.11 (t, 3H je), 2.47 und 2.79 (dq, IH je), 3.04 (m, 2H), 3.29 und 3.64 <m, 4H je), 3.80 (s, 3H), 4.13, 4.16, 4.25 und 4.35 (m, IH je), 4.95, 6.28 und 6.43 (d, IH je), 6.84 und 7.12 (d, 2H je).

BEISPIEL 29

MorpholinocarbonylPheNle-2(R,S)-methyl-nor-C-Sta-methylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R2=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=C (CH₃ ) ι ( I OH und C (CH₃ ) -* OH; Z¹ =CO₂ CH₃ )

A. Methy1-3(S)-Boc-amino-4-cyclohexyl-2-oxo-

1-methvlthio-l-ylsulfoxid

Methyl-methylthiomethyl-sulfoxid (8.2 ml) in 78 ml trockenem THF wurde in einem Eisbad gekühlt und während 20 Min. tropfenweise mit 49 ml 1.6N Butyllithium in Hexan behandelt. Nach 45 Min. wurde die Lösung auf -25⁰C gebracht und tropfenweise mit einer Lösung von Boc-hexahydro-L-phenylalanin-methylester in 20 ml THF behandelt. Nach 30 Min. bei -25⁰C wurde die Lösung unter vermindertem Druck eingeengt, und der Rückstand wurde in 200 ml Ether gelöst. Diese Lösung wurde mit Wasser (4 χ 30 ml) und Kochsalzlösung gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Zu den wäßrigen Schichten wurde mehr Kochsalzlösung zugesetzt, und diese Mischung wurde mit Ethylacetat extrahiert, der über Magnesiumsulfat getrocknet wurde. Die organischen Schichten wurden vereinigt und zu einem orangefarbigen öl eingeengt, das an Kieselgel (Ethylacetat-

Hexane) chromatographiert 6.8 g eines leicht bernsteinfarbigen Schaums lieferte, DC RF 0.28 im 3:1 System A.

B. Boc-nor-C-Sta-methylester

Das Produkt von Beispiel 29A, 4.25 g, wurde bei O⁰C in 25 ml Methanol gelöst und mit 2.86 g Jod behandelt. Nach Rühren während 1 h bei 30⁰C wurde die Mischung in eine gerührte Mischung von Eis, 300 ml 10%iges wäßriges Natriumthiosulfat und 100 ml Ethylacetat gegossen. Die organische Schicht wurde abgetrennt, und die wäßrige Schicht wurde mit Ethylacetat (4 χ 50 ml) gewaschen. Die organischen Schichten wurden über Magnesiumsulfat getrocknet, eingeengt und an Kieselgel chromatographiert (Ethylacetat-Hexan), wodurch 980 mg eines gelben Feststoffs erhalten wurden, DC Rf 0.32 (1:2 System C). Es wurde auch 1.66 g eines Öls erhalten, DC Rf 0.45 im gleichen System, identifiziert als 3(S)-t-Bocamino-4-cyclohexyl-2-oxo-l,1-dimethylthio-l-methoxybutan.

C. Methyl-3-Bocamino-4-cyclohexyl-2(R,S)methyl-2-hydroxybutyrat

Eine Lösung von 459 mg des Rf 0.32 Produkts von Beispiel 29B in 2 ml Ether wurde bei O⁰C mit 1.92 ml Methylmagnesiumbromid (1.9M in n-Butylether) behandelt. Nach 10 Min. bei 0⁰C wurde 1 ml gesättigtes wäßriges Ammoniumchlorid zugesetzt. Die Mischung wurde mit Ether extrahiert, der mit IN HCl, wäßrigem Natriumbicarbonat und Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und eingeengt wurde. Der Rückstand wurde an Kieselgel (Ether-Hexane) chromatographiert, was 375 mg eines farblosen Feststoffs lieferte.

D. Methyl-3-amino-4-cyclohexyl-2(R,S)-methyl-2-hydroxybutyrat-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 29C wurde in 3 ml 4N HCl-Dioxan gelöst und bei 25⁰C gerührt. Nach 30 Min. wurde die Mischung eingeengt und zusammen mit Ether eingedampft, wodurch 275 mg eines gelben Schaums erhalten wurden.

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E. MorpholinocarbonylPheNle-2(R,S)-methyl-

nor-C-Sta-methvlester

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC ergaben 255 mg des Produkts von Beispiel 29E und 375 mg des Produkts von Beispiel 8C 321 mg eines farblosen Feststoffs, DC Rf 0.68 im System C, HPLC 5.24 Min. (68%) und 5.51 Min. 32% in 60/40 Acetonitril-Wasser. Die zwei Komponenten wurden durch halbpräparative HPLC (9.8 χ mm Zorbax C-8, 6.3 ml/Min., 60/40 Acetonitril-Wasser, 254 nm Bestimmung) in ca. 20 mg Einspritzungen getrennt, wodurch mg der weniger zurückgehaltenen und 97 mg der mehr zurückgehaltenen Substanz als farblose Feststoffe erhalten wurden (HPLC im obigen analytischen System 5.20 bzw. 5.53 Min. jede homogen O98%).

Die gemäß HPLC weniger zurückgehaltene Substanz: IH NMR, CDCl₃, 300 MHz, partiell, δ ppm: 0.82 (t, 3H), 1.34 (s, 3H), 3.04 und 3.13 (dd, IH je), 3.13-3.34 (m), 3.59 (m, 4-5H), 3.78 (s, 3H), 4.32 (m, 2H), 4.51 (m, IH), 5.05 (m, IH), 6.36 (m, IH), 7.71 (m, IH), 7.14-7.35 (m, aromat.). Die gemäß HPLC mehr zurückgehaltene Substanz: IH NMR, CDCI3 , 300 MHz, partiell, δ ppm: 0.89 (t, 3H), 1.39 (s, 3H), 3.04 (dd, IH), 3.60 (m, 4H), 3.76 (s, 3H), 3.92, 4.47 und 4.88 (m, IH je), 4.20-4.32 (m, 2H), 7.12-7.35 (m, aromat.).

BEISPIEL 30

MorpholinocarbonylPheN-a-MeNlenor-C-Staethylketon (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=CH₃; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CH l 11 OH; Z¹=COCH₂ CH₃ )

A. N-Boc-N-methyl-L-norleucin

N-Methyl-L-norleucin (1.0 g) (J. Chem. Soc. 1968, S. 930) wurde bei O⁰C in 11 ml DMF gelöst und mit 2.1 ml Triethylamin behandelt, gefolgt von 1.74 ml Di-t-butyl-dicarbonat. Die Mischung wurde bei O⁰C während 4 h gerührt und konnte sich dann

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über Nacht auf 2O⁰C erwärmen. Die Mischung wurde eingeengt und in einer Mischung von wäßrigem gesättigten Natriumbicarbonat und Ethylacetat gelöst. Die wäßrige Schicht wurde abgetrennt, mit Ethylacetat gewaschen und mit HCl in Anwesenheit von Ethylacetat angesäuert. Die organische Schicht wurde abgetrennt und mit den weiteren Ethylacetatextrakten der wäßrigen Schicht vereinigt, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt, wodurch 1.17 g eines gelben Öls erhalten wurde.

B. N-Boc-N-methyl-L-norleucin-benzylester

Das Produkt von Beispiel 3OA (750 mg) wurde bei O⁰C in 7.5 ml trockenem DMF gelöst und mit 423 mg wasserfreiem Kaliumcarbonat und 364 ul Benzylbromid behandelt. Die Mischung wurde in einem Kolben gerührt, der in einem Eisbad gekühlt wurde, das sich über Nacht auf 20⁰C erwärmen konnte. Die Mischung wurde mit Ether verdünnt und durch Celit filtriert. Das Filtrat wurde eingeengt und der Rückstand wurde in Ethylacetat gelöst, der mit 10%igem wäßrigen Lithiumchlorid (3x), IN Natriumhydroxid und Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt wurde, was 942 mg eines gelben Öls ergab.

C. N-Methyl-L-Norleucin-benzylester-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 3OB (915 mg) wurde in 3.5 ml 4N HCl-Dioxan gelöst und 45 Min. bei 25⁰C gerührt. Die Mischung wurde eingeengt, und 727 mg eines annähernd weißen Pulvers wurden erhalten, DC Rf 0.55 im System C.

D. MorpholinocarbonylPhe-N-MeNle-benzylester Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC ergaben 370 mg des Produkts von Beispiel 3OC und 378 mg des Produkts von Beispiel 7C 476 mg eines opaken Öls, DC Rf 0.69 im System C.

E. MorpholinocarbonylPhe-N-MeNle

Das Produkt von Beispiel 30E (468 mg) wurde in 10 ml Methanol und 1 ml Essigsäure gelöst und während 1 h bei 25⁰C mit 100

mg 10% Pd/C und 50 psi Wasserstoff geschüttelt, durch Celit filtriert, eingeengt und zusammen mit zugesetztem Toluol und dann Ether eingedampft und getrocknet, wodurch 365 mg eines annähernd weißen Pulvers erhalten wurden, DC Rf 0.6 im System C.

F. MorpholinocarbonylPheN-MeNle-nor-C-Sta-ethylketon-benzylether

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung des Produkts von Beispiel IC ergaben 78 mg des Produkts von Beispiel 24D und 93 mg des Produkts von Beispiel 3OE 148 mg eines annähernd weißen Schaums, der ohne weitere Reinigung verwendet wurde.

G. MorpholinocarbonylPhe-N-MeNlenor-C-Staethylketon

Das Produkt von Beispiel 3OF (142 mg) wurde in 10 ml Methanol und 1 ml Essigsäure gelöst und 20 h bei 25⁰C mit 150 mg 10% Pd/C und 50 psi Wasserstoff geschüttelt, filtriert, eingeengt, zusammen mit Toluol und dann Ether eingedampft und getrocknet, wodurch 120 mg eines annähernd weißen Schaums erhalten wurden. Dieses Material wurde an Kieselgel (Ethanol-Dichlormethan Gradient) chromatographiert, was 93 mg eines farblosen Feststoffs ergab, DC Rf 0.48 im System C, HPLC 5.29 Min. in 70/30 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat.

IH NMR, DMSO, 250 MHz, partiell, δ ppm: 0.80 und 0.85 (t, 3H je), 2.91 (s, NCH₃), 4.5 und 4.63 (m, IH je), 4.59 (m, 2H), 4.94, 5.39, 5.58, 6.62 und 8.00 (d, wahrscheinlich NH Resonanzen von verschiedenen Rotameren), 7.15-7.38 (m, aromat.).

BEISPIEL 31

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-methylketon (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; Rz=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHM»OH; Z¹=COCH₃)

A. 4(S)-Bocamino-3(R)-benzyloxy-S-cyclohexyl^- pentanon

3(S)-t-Butoxycarbonylamino-2(R)-benzyloxy-4-cyclohexylbutyraldehyd (315 mg) wurde bei O⁰C in 4 ml Ether gelöst und mit 530 ul 1.9M Methylmagnesiumbromid in n-Butylether behandelt. Nach 20 Min. wurden weitere 530 ul des Grignard-Reagens zugesetzt und nach 10 Min. wurde die Reaktion mit gesättigtem wäßrigen Ammoniumchlorid unterbrochen, und es wurde mit Ether extrahiert. Die Etherschichten wurden mit IN HCl, wäßrigem Natriumbicarbonat und Kochsalzlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt, wodurch 580 mg eines gelben Öls erhalten wurden. Dieses Material wurde in 5 ml Ether gelöst und mit 1 ml Chromsäurelösung behandelt (Org. Syn. Coil. Bd. 5, S. 310). Nach 30 Min. wurde die Mischung mit Ether verdünnt und mit IN Natriumhydroxid (4 χ 5 ml) gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt, wodurch 250 mg eines leicht gelben Öls erhalten wurden, das an Kieselgel (Ether-Hexane) gereinigt wurde, was 125 mg eines farblosen öl ergab, DC Rf 0.24 (1:4 System B).

B. 4(S)-Amino-3(R)-Benzyloxy-S-cyclohexyl^- pentanon-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 31A (120 mg) wurde in 3 ml 4N HCL-Dioxan gelöst und 1.2 Stunden bei 25⁰C gerührt. Die Mischung wurde eingeengt und der Rückstand wurde 3x mit zugesetztem Ether eingedampft und getrocknet, wodurch 100 mg eines farblosen Schaums erhalten wurden, DC Rf 0.22 (System C, die mit Fleck versehene Platte wurde vor der Elution Ammoniak ausgesetzt).

C. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-StamethyIketon-benzylether

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC ergaben 95 mg des Produkts von Beispiel 31B und 150 mg des Produkts von Beispiel 8C 180 mg eines schwach gelben Schaums, DC Rf 0.30 (Ethylacetat, Kieselgel).

D. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-methylketon

Das Produkt von Beispiel 31C (180 mg) wurde in 3 ml Methanol und 1 ml Essigsäure gelöst und 24 h bei 25⁰C mit 180 mg 10% Pd/C und 50 psi Wasserstoff geschüttelt. Die Mischung wurde filtriert, eingeengt, zusammen mit Toluol eingedampft und getrocknet, wodurch 160 mg eines farblosen Schaums erhalten wurde, der an Kieselgel (Ethanol-Dichlormethan Gradient) chromatographiert wurde, was 55 mg eines farblosen Feststoffs ergab, HPLC 3.37 Min. 70/30 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat.

IH NMR, CDCl₃, 300 MHz, partiell, δ ppm: 0.86, (t, 3H), 2.17 (s, 3H), 3.05 und 3.09 (dd, IH je), 3.24 und 3.59 (m, 4H je), 3.89, 4.08, 4.15, 4.47 und 4.55 (m, IH je), 4.92, 6.11 und 6.48 (d, IH je), 7.13-7.35 (m, aromat.).

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BEISPIEL 32

MorpholinocarbonylPhe-O-EtSernor-C-Sta-N-methylamid (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=C₂HsOCH₂; X=Cyclohexyl; W=CHlMOH; Z¹ =C0NHCH₃ )

A. MorpholinocarbonylPhe-O-EtSernor-C-Sta-N-methylamid-TBDMS-ether

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC ergaben 70 mg des Produkts von Beispiel 14C und 75 mg MorpholinocarbonylPhe-O-EtSer 50 mg eines farblosen Feststoffs.

B. MorpholinocarbonylPhe-O-EtSernor-C-Sta-N-methylamid

Das Produkt von Beispiel 32A (48 mg) wurde in 2 ml 4N HCl-Dioxan gelöst und 1 h bei 25⁰C gerührt. Die Mischung wurde eingeengt, und der Rückstand wurde zusammen mit Ether eingedampft und getrocknet, wodurch 40 mg eines farblosen Feststoffs erhalten wurden, HPLC 3.46 Min. in 50/50 AcetonitrilpH 2.1-Phosphat, DC Rf 0.28 im System C.

IH NMR, DMSO-D₆, 300 MHz, partiell, δ ppm: 1.12 (t, 3H), 2.57 (d, 3H), 2.81 und 3.03 (dd, IH je), 3.20 (m, 4H), 3.45 (m), 3.78 und 4.13 (m, IH je), 4.35 (m 2H), 5.74, 6.68, 7.54 und 8.08 (d, IH je), 7.12-7.35 (m, aromat.).

BEISPIEL 33

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-i-propylketon {I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CH»11 OH; und Z¹ =COCH(CH₃ )₂ )

A. 5(S)-Bocamino-4(R)-benzyloxy-6-cyclohexyl-

2-methyl-3-hexanon

3(S)-t-Butoxycarbonylamino-2(R)-benzyloxy-4-cyclohexylbutyr-

-63-

aldehyd (400 mg) wurde bei 0 ⁰G in 3 nil Ether gelöst und mit 1.17 ml Isopropylmagnesiumbromid (2.0M in Diethylether) behandelt. ITach 20 Min. wurde weitere 0*6 ml Grignardreagens zugesetzt, gefolgt 5 Min. später von 1 ml gesättigtem wäßrigen Satriumbicarbonat und Kochsalzlösung. Es wurde über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt, wodurch 350 mg eines klaren Öls erhalten wurden. Dieses Material wurde in 2 ml Ether gelöst und mit 2 ml GhromsäureIosung (Org. Syn. Coil. Bd. 7, S. 310) behandelt, und nach 30 Hin. wurde die Mischung mit Ether extrahiert, der mit wäßrigem Natriumhydroxid und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet und eingeengt wurde, wodurch 250 mg eines gelben öls erhalten wurden, das an Kieselgel (Ether-Hexane) gereinigt 125 mg eines leicht gelben öls lieferte, DC Rf 0.33 (1:4 System A).

B. 5(S)-Amino-4(R)-benzyloxy-6-cyclohexyl-2-methyl~3-hexanonhydroChlorid

Das Produkt von Beispiel 33A (120 mg) wurde in 2 ml 4 H HCl-Dioxan gelöst und bei 25 ⁰C 1.2 h gerührt und eingeengt. Der Rückstand wurde zusammen mit Ether eingedampft, wodurch 95 mg eines farblosen Peststoffs erhalten wurden, DC Rf 0.4 im System C (die mit dem Fleck versehene Platte wurde vor der EIution Ammoniak ausgesetzt).

C. IJorpholinocarbonylPheKlenor-C-Sta-isopropyl-keton-beiizylether

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel 1C ergaben 95 mg des Produkts von Beispiel 333 und 136 mg des Produkts von Beispiel 8C 1βΟ mg eines

2Ä2583

-63a-

farblosen Schaums, HPLC 3.56 Hin. in 85/15 Acetonitril-V/asser.

D. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-i-propyl-keton

Das Produkt von Beispiel 33 C (155 mg) wurde in 3 ml Methanol und 3 nil Essigsäure gelöst und 18 h bei 25 ⁰C in einer Wasserstoff atmosphäre bei 50 psi mit 155 mg 10p Pd/C geschüttelt, durch Celit filtriert und eingeengt. Der Rückstand wurde zusammen mit Toluol und Ether eingedampft und

aldehyd (400 mg) wurde bei O⁰C in 3 ml Ether gelöst und mit 1.17 ml Isopropylmagnesiumbromid (2.0M in Diethylether) behandelt. Nach 20 Min. wurde weitere 0.6 ml Grignardreagens zugesetzt, gefolgt 5 Min. später von 1 ml gesättigtem wäßrigen Natriumbicarbonat und Kochsalzlösung. Es wurde über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt, wodurch 350 mg eines klaren Öls erhalten wurden. Dieses Material wurde in 2 ml Ether gelöst und mit 2 ml Chromsäurelösung (Org. Syn. Coil. Bd. V, S. 310) behandelt, und nach 30 Min. wurde die Mischung mit Ether extrahiert, der mit wäßrigem Natriumhydroxid und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet und eingeengt wurde, wodurch 250 mg eines gelben Öls erhalten wurden, das an Kieselgel (Ether-Hexane) gereinigt 125 mg eines leicht gelben Öls lieferte, DC Rf 0.33 (1:4 System A).

B. 5(S)-Amino-4(R)-benzy1oxy-6-cyclohexyl-2-methyl-3-hexanon-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 33A (120 mg) wurde in 2 ml 4N HCl-Dioxan gelöst und bei 25⁰C 1.2 h gerührt und eingeengt. Der Rückstand wurde zusammen mit Ether eingedampft, wodurch 95 mg eines farblosen Feststoffs erhalten wurden, DC Rf 0.4 im System C (die mit dem Fleck versehene Platte wurde vor der EIution Ammoniak ausgesetzt).

C. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Staisopropyl-keton-benzylether

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC ergaben 95 mg des Produkts von Beispiel 33B und 136 mg des Produkts von Beispiel 8C 160 mg eines farblosen Schaums, HPLC 3.56 Min. in 85/15 Acetonitril-Wasser.

D. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-i-propyl-keton Das Produkt von Beispiel 33C (155 mg) wurde in 3 ml Methanol und 3 ml Essigsäure gelöst und 18 h bei 25°C mit 155 mg 10% Pd/C geschüttelt, durch Celit filtriert und eingeengt. Der Rückstand wurde zusammen mit Toluol und Ether eingedampft und

getrocknet, wodurch 100 mg eines schwach gelben Feststoffs erhalten wurden, DC Rf 0.40 (Ethylacetat-Kieselgel).

IH NMR, CDCl₃, 250 MHz, partiell, δ ppm: 0.87 (t, 3H), 1.08 und 1.12 (d, 3H je), 3.09 (m, 2H), 3.62 (m, 4H), 4.15 (m, IH), 4.32 (s, IH), 4.99, 6.38 und 6.51 {d, IH je), 7.15-7.37 (m, aromat.).

BEISPIEL 34

Morpholinocarbony1PheNlenor-C-Sta-i-butyl-keton (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHiIiOH; und Zi=COCH₂CH(CHs)₂)

A. 6(S)-Bocamino-5(R)-benzyloxy-7-cyclohexyl-2-methyl-4-hexanon

3(S)-t-Butoxycarbonylamino-2(R)-benzyloxy-4-cyclohexylbutyraldehyd (1.00 g) wurde bei O⁰C in 10 ml Ether gelöst und mit 1.6 ml 2.0M etherischem Isobutylmagnesiumchlorid behandelt. Nach 30 Min. wurden weitere 3 ml Grignardreagens zugesetzt, und die Lösung wurde auf 25⁰C erwärmt. Nach einer weiteren Stunde wurde die Reaktion mit wäßriger Ammoniumchloridlösung unterbrochen und die Reaktionsmischung mit Ether extrahiert. Der Ether wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt, wodurch 1.02 g eines klaren Öls erhalten wurden. Dieses Material wurde in 20 ml Ether gelöst und mit 5 ml Chromsäurelösung behandelt (Org. Syn. V, S. 310). Nach Rühren während 1 h bei O⁰C und 30 Min. bei 25⁰C wurde die Mischung mit Ether verdünnt und mit IN Natriumhydroxid und Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, eingeengt und das Rohprodukt an Kieselgel (Ether-Hexan) gereinigt, wodurch 440 mg eines farblosen Öls erhalten wurden, DC Rf 0.33 in 1:3 System B.

B. 6(S)-Amino-5(R)-benzyloxy-7-cyclohexyl-2-methyl-4-hexanon-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 34A (430 mg) wurde in 3 ml 4N HCl-

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Dioxan gelöst und bei 25⁰C 1.2 h gerührt, eingeengt, dreimal zusammen mit Ether eingedampft und getrocknet, wodurch 325 mg eines farblosen Feststoffs erhalten wurden, DC Rf 0.29 im System C (die mit dem Fleck versehene Platte wurde vor der EIution Ammoniak ausgesetzt).

C. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-i-butylketon-benzylester

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC ergaben 150 mg des Produkts von Beispiel 34B und 207 mg des Produkts von Beispiel 8C 280 mg eines farblosen Schaums.

D. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-i-butylketon Das Produkt von Beispiel 34C (300 mg) wurde in 10 ml 1:1 Methanol-Essigsäure gelöst und bei 25°C während 18 h mit 300 mg 10% Pd/C und 50 psi Wasserstoff geschüttelt. Die Mischung wurde durch Celit filtriert, die Filtrate wurden eingeengt und zusammen mit zugesetztem Toluol eingedampft. Der Rückstand wurde an Kieselgel (Ethanol-Dichlormethan Gradient) chromatographiert, wodurch 180 mg eines farblosen Feststoffs erhalten wurden, HPLC 4.40 Min. in 70/30 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat, DC Rf 0.31 (Ethylacetat-Kieselgel).

IH NMR, CDCl₃, 300 MHz, partiell, δ ppm: 0.84 (t, 3H), 0.90 und 0.92 (d, 3H je), 2.10 (Septett, IH), 2.38 und 2.53 (dd, IH je), 3.04 (m, 2H), 3.26 und 3.58 (m, 4H je), 4.06 (s, IH), 4.22, 4.52 und 4.60 (m, IH je), 5.26, 6.57 und 7.00 (d, IH je) 7.1-7.3 (m, aromat.).

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BEISPIEL 35

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-methoxyamid (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHInOH; und Z¹ =CONHOCH₃)

A. Boc-nor-C-Sta-methoxyamid

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung des Produkts von Beispiel IC ergaben 54 mg Methoxyamin-hydrochlorid und 98 mg Boc-nor-C-Sta (Produkt von Beispiel IG, U.S. 4 668 769) 102 mg rohes Produkt, das an Kieselgel (Ethylacetat-Hexane) gereinigt wurde, wodurch 40 mg der Titelsubstanz erhalten wurden.

B. Nor-C-Sta-methoxyamid-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 35A (38 mg) wurde bei 25⁰C während 1.2 h in 2 ml 4N HCl-Dioxan gerührt und zu einem farblosen Feststoff eingeengt, der dreimal mit Ether gewaschen 25 mg Feststoff lieferte.

C. MorpholinocarbonylPheNle-N-hydroxysuccinimid-ester Das Produkt von Beispiel 8A (1.05 g) wurde in 5 ml Dimethoxyethan gelöst und bei O⁰C mit 350 mg N-Hydroxysuccinimid und 573 mg Dicyclohexylcarbodiimid behandelt und über Nacht in einem Eisbad gerührt, das sich auf 18⁰C erwärmen konnte. Die Mischung wurde filtriert, der filtrierte Feststoff wurde mit Dimethoxyethan gewaschen, die Filtrate wurden eingeengt, und der Rückstand wurde in Ethylacetat suspendiert. Die Ethylacetatsuspension wurde mit gesättigtem wäßrigen Natriumbicarbonat und Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt, wodurch 960 mg eines farblosen Schaums erhalten wurden.

D. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-methoxyamid Das Produkt von Beispiel 35B (23 mg) wurde in 0.3 ml Dimethoxyethan gelöst und der Reihe nach bei 25⁰C mit 12 ul Triethylamin und 42 mg des Produkts von Beispiel 35C behandelt.

Weiteres Dimethoxyethan (200 ul) und 200 ul Dichlormethan wurden zugesetzt, und die Mischung wurde 22 h gerührt, in 30 ml Ethylacetat gelöst, mit 2 χ 1 ml IN HCl und 2 χ 2 ml gesättigtem wäßrigen Natriumbicarbonat gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, eingeengt und an Kieselgel (Ethanol-Dichlormethan Gradient) chromatographiert, wodurch 45 mg eines farblosen Feststoffs erhalten wurden, DC Rf 0.5 im System C, HPLC 2.84 Min. in 60/40 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat.

IH NMR, CDCl₃, 250 MHz, partiell, δ ppm: 0.89 (t, 3H), 3.02 (dd, IH), 3.14 (m), 3.62 (m, 4H), 3.77 (s, 3H), 4.35, 4.60 und 5.01 (m, IH je), 7.13-7.38 (m, aromat.), 9.57 (s, IH) .

BEISPIEL 36

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Statol (I, Z= morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R2 =nbutyl; X=Cyclohexyl; W=CHiMOH; und Zi=CH₂OH)

A. 3(S)-Amino-2(R)-benzyloxy-4-cyclohexvl-l-butanol 3(S)-t-Butoxycarbonylamino-2(R)-benzyloxy-4-cyclohexyl-l-butanol (108 mg) (U.S. 4 668 769), Beispiel IJ wurde in 0.5 ml Ether gelöst und auf O⁰C abgekühlt. In diese Lösung wurde überschüssiges wasserfreies HCl eingeführt, und die Lösung wurde 2 h bei 25⁰C gerührt und eingeengt, wodurch 88 mg eines farblosen Feststoff erhalten wurden, DC RF 0.28 im System A.

B. 3(S) -(MorpholinocarbonylPheNleamino)-2(R) benzyloxy-4-cyclohexyl-l-butanol

Das Produkt von Beispiel 36A (85mg) wurde in 500 ul Dimethoxyethan gelöst und der Reihe nach bei 0⁰C mit 38 ul Triethylamin und 132 mg des Produkts von Beispiel 35C behandelt. Nach 18 h wurde die Mischung eingeengt und an Kieselgel (Ethylacetat-Hexane) chromatographiert, wodurch 139 mg eines farblosen Feststoffs erhalten wurden, DC Rf 0.25 (Ethylacetat-Kieselsäure) .

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C. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Statol

Das Produkt von Beispiel 36B (80 mg) und 90 mg 10% Pd/C wurden mit 5 ml Methanol und 5 ml Essigsäure gemischt und bei 25⁰C während 21 h unter 48 psi Wasserstoff geschüttelt. Die Mischung wurde eingeengt und der Rückstand wurde an Kieselgel (Ethanol-Dichlormethan Gradient) chromatographiert, wodurch 64 mg eines farblosen Feststoffs erhalten wurden, DC Rf 0.5 im System C, HPLC 4.95 Min. in 50/50 Acetonitril-Wasser.

IH NMR, CDCl₃, 250 MHz, partiell, δ ppm: 0.92 (t, 3H), 2.94 (dd, IH), 3.09-3.72 (überlappende m), 4.12-4.37 (m, ca. 3H), 4.79, 6.28 und 6.93 (d, IH je), 7.20-7.48 (m, aromat.).

BEISPIEL 37

MorpholinocarbonylPhe-S-MeCysnor-C-Sta-i-butyl-keton (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂; X=Cyclohexyl; W=CHlIiOH; und Zi=COCH₂CH(CH₃ )₂ )

A. MorpholinocarbonylPhe-S-MeCysnor-C-Sta-i-buty1-keton-benzylether

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC ergaben 120 mg des Produkts von Beispiel 34B und 129 mg Mor-Phe-SMeCys 114 mg eines farblosen Pulvers, DC Rf 0.58 im System C.

B. MorpholinocarbonylPhe-S-MeCysnor-C-Stai-butyl-keton

Das Produkt von Beispiel 37A (95 mg) wurde in 1.0 ml Ameisensäure gelöst, und 100 mg Palladiumschwarz (ALFA Co.) wurden zugesetzt. Nach Rühren über Nacht wurde die Mischung durch Celit filtriert und eingeengt. Der Rückstand wurde zusammen mit Toluol eingedampft und getrocknet, wodurch 97 mg eines bräunlichen Öls erhalten wurden, das an Kieselgel (Ethanol-Dichlormethan Gradient) gereinigt wurde, wodurch 23.5 mg eines farblosen Pulvers erhalten wurde, DC Rf 0.65 im System C, 3.65 Min. bei HPLC in 70/30 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat.

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IH NMR, CDCl₃, 300 MHz, partiell, δ ppm: 0.90 und 0.92 (d, 3H je), 2.10 (s, 3H), 2.14 (Septett, IH), 2.38, 2.56, 2.65, 2.92, 3.00 und 3.14 (dd, IH je), 3.14-3.37 (m), 3.60 (m, 4H), 3.97, 4.05 und 4.65 (m, IH je), 4.41-4.56 (m, 2H), 6.76 und 6.86 (d, IH je), 7.14-7.36 (m, aromat.).

BEISPIEL 38

BocPhe-S-MeCysnor-C-Sta-i-propylester (I, Z=t-(CHa)₃COCONH; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂; X=Cyclohexyl; H=CHiUOH; und Z¹CO₂CH(CHs)₂)

A. BocPhe-S-MeCys

S-Methylcystein (6.26 g) wurde bei 25⁰C in 65 ml gesättigtem wäßrigen Natriumbicarbonat gelöst und mit 35 ml THF versetzt. Diese Lösung wurde in einer Portion mit 12.0 g N-t-Boc-L-phenylalanin-hydroxysuccinimidester behandelt. Nach 30 Min. wurde die Lösung in einen Scheidetrichter gebracht und zweimal mit Ethylacetat gewaschen. Eine frische Portion Ethylacetat wurde zugesetzt und der pH wurde mit 6N HCl auf 1.1 eingestellt. Die organische Schicht wurde abgetrennt und die wäßrige Schicht wurde mit Ethylacetat (4x) extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden zweimal mit IN HCl und Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt, wodurch 12.0 g eines farblosen Schaums erhalten wurden.

B. BocPhe-S-MeCysnor-C-Sta-i-propylester

Nor-C-Sta-isopropylester (1.0 g) wurde in 20 ml Dichlormethan gelöst und der Reihe nach mit 1.57 g (1.0 Äquiv.) des Produkts von Beispiel 38A, 945 mg (1.5 Äquiv.) Hydroxybenzotriazol-hydrat und 788 mg (1.0 Äquiv.) 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethyl-carbodiimid-hydrochlorid (DEC) behandelt. Die Reaktionsmischung wurde in einem Eisbad gerührt, das sich über Nacht auf 18⁰C erwärmen konnte. Die Mischung wurde eingeengt, der Rückstand wurde in Ethylacetat gelöst und die resultierende Lösung wurde zweimal mit IN HCl, zweimal mit IN NaOH

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und einmal mit Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt, wodurch ein farbloser Feststoff erhalten wurde, der an Kieselgel (Ethylacetat-Hexane) gereinigt wurde, was 1.85 g der Titelverbindung als farbloses Pulver lieferte. DC Rf 0.60 im System C.

IH NMR, CDCl₃, 300 MHz, partiell, δ ppm: 0.94 (m), 1.29 und 1.30 (d, 3H je), 1.39 (s, 9H), 2.13 (s, 3H), 2.64, 2.98, 3.03 und 3.15 (dd, IH je), 4.09 (d, IH), 4.30-4.50 (m, 3H), 4.90 (m, IH), 5.07 (Septett, IH), 6.66 (m, IH), 6.86 (d, IH), 7.16-7.36 (m, aromat.).

BEISPIEL 39

Phe-S-MeCysnor-C-Sta-i-propylester (I, Z=NH₂; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂; X=Cyclohexyl; W=CHJMOH;

und Z¹ =CO₂CH(CH₃ )₂ )

Das Produkt von Beispiel 38B (500 mg) wurde in 3 ml 4N HCl-Dioxan gelöst und bei 25°C während 40 Min. gerührt. Die Mischung wurde eingeengt und der Rückstand wurde zusammen mit Ether eingedampft, wodurch 460 mg eines annähernd weißen Pulvers erhalten wurde, DC Rf 0.25 im System C (Substanz wurde mit Triethylamin in Dichlormethan behandelt und dann auf die DC-Platte aufgetragen), HPLC 4.05 Min. in 50/50 AcetonitrilpH 2.1-Puffer.

IH NMR, DMSO, 250 MHz, partiell, δ ppm: 1.20 (überlappend d, 6H), 2.11 (s, 3H), 2.55, 2.82, 2.93 und 3.18 <dd, IH je) 4.01, 4.08, 4.23 und 4.57 (m, IH je), 7.30 (s, aromat.), 5.38, 7.96 und 8.89 (d, IH je), 8.18 (br, 3H).

BEISPIEL 40

4-PicolinoylPhe-S-MeCysnor-C-Sta-i-propylester (I, Z=4-Picolinoylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHMtOH; und Z¹CO₂CH(CH₃ )₂ )

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel 38B, mit Ausnahme, daß 1.05 Äquiv. Tri-

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ethylamin (54 ul) verwendet wurden, um das Ausgangsaminhydrochlorid zu neutralisieren, ergaben 200 mg des Produkts von Beispiel 39 und 45 mg Pyridin-4-carbon(picolin)säure 157 mg eines farblosen Pulvers, DC Rf 0.52 im System C, HPLC 7.10 Min. in 50/50 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat.

IH NMR, DMSO, 250 MHz, partiell, δ ppm: 1.18 und 1.20 (d, 3H je), 2.09 (s, 3H), 2.60, 2.80 und 3.14 (dd, IH je), 4.00, 4.22, 4.49 und 4.78 (m, IH je), 4.87 (Septett, IH), 5.35, 7.18, 8.42 und 8.90 (d, IH je), 7.26 (t, 2H), 7.37 (d, 2H), 7.67 (d, 2H), 8.70 (d, 2H).

BEISPIEL 41

4-t-BocpiperazinocarbonylPhe-S-MeCysnor-C-Stai-propylester (I, Z=4-t-Bocpiperazinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R2=CH3SCH2-; X=Cyclohexyl; W=CHI 11 OH; und Z¹=CO₂ CH(CH₃)2)

A. 4-t-BocpiperazinocarbonylPheS-MeCYS-methylester Gemäß dem Verfahren zur Herstellung des Produkts von Beispiel 38B, ergaben 245 mg S-Methyl-cystein-methylester und 500 mg Boc-piperazinocarbonyl-L-phenylalanin 547 mg eines farblosen Schaums, der ohne weitere Reinigung verwendet wurde.

B. 4-t-BocpiperazinocarbonylPhe-S-MeCys

Das Produkt von Beispiel 41A (467 mg) wurde bei O⁰C in 1 ml Dioxan und 0.5 ml Wasser gelöst und mit 33 mg Lithiumhydroxid behandelt. Nach 2.5 h wurde die Mischung eingeengt, der Rückstand wurde in Wasser gelöst und die resultierende Lösung wurde mit Ether extrahiert. Ethylacetat wurde zur wäßrigen Schicht zugesetzt, die mit IN HCl auf pH 1 gebracht wurde und mit Ethylacetat (4x) extrahiert wurde. Die Extrakte wurden mit Wasser gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet, wodurch 417 mg eines farblosen Feststoffs erhalten wurden.

C. 4-t-BocpiperazinocarbonylPhe-S-MeCysnor-C-Sta-

i-propylester

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel 36B ergaben 100 mg Nor-C-Sta-isopropylester und 203 mg des Produkts von Beispiel 41B 182 mg eines farblosen Feststoffs, DC Rf 0.49 (Ethylacetat/Kieselgel).

IH NMR, CDCl₃, 250 MHz, partiell, δ ppm: 1.26 und 1.27 (d, 3H je), 1.45 (s, 9H), 2.10 (s, 3H), 2.73 (dd, IH), 3.00 (m, 2H), 3.27 und 3.36 (m, 9H total), 3.77 (d, IH), 4.10 (dd, IH), 4.44 (m, IH), 4.81 (d, IH), 5.07 (Septett, IH), 6.84 und 6.93 (d, IH je), 7.18-7.39 (m, aromat.)

BEISPIEL 42

PiperazinocarbonylPhe-S-MeCysnor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Piperazinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHiMOH; und

Zi=CO₂CH(CH₃ )₂ )

Das Produkt von Beispiel 41 (33 mg) wurde in 2 ml 4N HCl-Dioxan gelöst und 50 Min. bei 25°C gerührt und eingeengt. Der Rückstand wurde zusammen mit Ether eingedampft, wodurch 31 mg eines annähernd weißen Pulvers erhalten wurden, DC Rf 0.2 im System C (mit Fleck versehene Platte wurde vor der Elution Ammoniak ausgesetzt), HPLC 2.98 Min. in 50/50 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat.

IH NMR, DMSO, 250 MHz, partiell, δ ppm: 1.18 und 1.20 (d, 3H je), 2.10 (s, 3H), 4.00 und 4.21 (m, IH je), 4.40 (m 2H), 4.85 (Septett, IH), 5.33, 6.90, 7.63 und 8.22 (d, IH je), 7.13-7.33 (m, aromat.).

BEISPIEL 43

MorpholinocarbonylhexahydroPhe-S-MeCysnor-C-Stai-propylester (I, Z= Morpholinocarbonylamino; !!»Cyclohexyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂; X=Cyclohexyl ; W=CHhIOH; und Z¹ CO₂ CH (CH₃ ) 2 )

A. Morpholinocarbonylhexahydro-L-pheny!alanin Das Produkt von Beispiel 7C (4.0g) wurde in 55 ml 10:1 Methanol-Essigsäure gelöst und 3.5 h bei 25⁰C mit 1.0 g 10% Rh/C unter 50 psi Wasserstoff geschüttelt. Die Mischung wurde durch Celit filtriert, eingeengt und zusammen mit Ether eingedampft, wodurch 4.15 g eines farblosen Schaums erhalten wurden, der an Kieselgel (gepackt und geladen mit Ethylacetat, eluiert im selben, gefolgt von Ethanol-Dichlormethan-Gradient) gereinigt wurde, was 704 mg eines farblosen Schaums ergab, DC Rf 0.4.

B. MorpholinocarbonylhexahydroPhe-hydroxysuccinimid-ester

Das Produkt von Beispiel 43A (700 mg) wurde in 5 ml Dimethoxymethan gelöst und der Reihe nach bei O⁰C mit 283 mg N-Hydroxysuccinimid und 507 mg Dicyclohexylcarbodiimid behandelt. Die Reaktionsmischung konnte sich über Nacht auf 18°C erwärmen, sie wurde filtriert, eingeengt, und der Rückstand wurde in Ethylacetat gelöst, das zweimal mit gesättigtem wäßrigen Natriumbicarbonat und Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt wurde, wodurch 704 mg eines farblosen Schaums erhalten wurden.

C. MorpholinocarbonylhexahydroPhe-S-MeCys

S-Methylcystein (442 mg) wurde in 4.6 ml gesättigtem wäßrigen Natriumbicarbonat gelöst, und 2.5 ml THF wurden zugesetzt, gefolgt von 890 mg des Produkts von Beispiel 43B. Nach Rühren während 20 Min. bei 25⁰C wurde die Mischung mit Wasser verdünnt, zweimal mit Ethylacetat gewaschen und in Anwesenheit von Ethylacetat mit IN HCl auf pH 1.1 gebracht. Die organi-

sehe Schicht wurde abgetrennt, die wäßrige Schicht wurde mit vier Portionen Ethylacetat extrahiert, die vereinigten organischen Schichten wurden zweimal mit IN HCl und Kochsalzlösung gewaschen,, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt, wodurch 796 mg eines farblosen Schaums erhalten wurden.

D· MorpholinocarbonylhexahydroPhe-S-MeCysnor-

C-Sta-i-propvlester

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel 38B ergaben 94 mg Nor-C-Sta-isopropylester und 170 mg des Produkts von Beispiel 43C 178 mg farbloses Pulver, DC Rf 0.83 im System C, HPLC 4.16 Min. 70/30 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat.

IH NMR, CDCl₃, 250 MHz, partiell, δ ppm: 0.93 (m, 4H), 1.26 und 1.27 (d, 3H je), 2.13 (s, 3H), 2.76 und 3.11 (dd, IH je), 3.39 <m, 4H), 3.70 (m, 4H), 4.08 (br, IH), 4.28 (m, IH), 4.41 (m, 2H), 4.82, 6.83 und 6.93 (d, IH je), 5.04 (Septett, IH) .

BEISPIEL 44

BocProPhe-S-MeCysnor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Bocpyrrolidyl-2-carbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHHiOH; und Z¹ =CO₂CH(CH₃ )₂ )

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel 38B, mit Ausnahme, daß 1.2 Äquiv., 71 ul Triethylamin verwendet wurden, um das Amin-hydrochlorid zu neutralisieren, ergaben 233 mg des Produkts von Beispiel 39 und 101 mg Boc-L-prolin 237 mg farbloses Pulver, DC Rf 0.66 im System C.

IH NMR, CDCl₃, 250 MHz, partiell, δ ppm: 1.27 und 1.29 (d, 3H je), 1.48 (s, 9H), 2.13 (s, 3H), 2.67 und 3.04 (dd, IH je), 4.44 (m, IH), 4.62 (m, 2H), 5.07 (Septett, IH), 6.42 und 6.60 (d, IH), 7.1-7.4 (m, aromat.).

BEISPIEL 45

ProPhe-S-MeCysnor-C-Sta-i-propylester-hydrochlorid (I, Z=(s)-2-Pyrrolidylcarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂ =CH₃ SCH₂ -; X=Cyclohexyl; W=CHiilOH; und Zi=CO₂CH(CH₃ )z )

Das Produkt von Beispiel 44 (124 mg) wurde in 3 ml 4N HCl-Dioxan gelöst und bei 25°C während 40 Min. gerührt. Die Mischung wurde eingedampft, wodurch 114 mg eines schwach gelben Pulvers erhalten wurden, DC Rf 0.39 im System C (die mit Fleck versehene Platte wurde vor der Elution Ammoniak ausgesetzt) .

IH NMR, DMSO, 250 MHz, partiell, δ ppm: 1.27 und 1.29 (d, 3H je), 2.09 (s, 3H), 2.56 (dd, IH), 4.00, 4.08, 4.22, 4.47 und 4.64 (m, IH je), 4.85 (Septett, IH), 5.37, 7.73, 8.41 und 8.78 (d, IH je), 7.13-7.33 (m, aromat.).

BEISPIEL 46

O-Succinoyl-morpholinocarbonylPhe-S-MeCysnor-C-Stai-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHHt OCO(CH₂ J₂CO₂H; und Zi=CO₂CH(CHs)₂)

Das Produkt von Beispiel 17E (101 mg) wurde in 0.8 ml Dichlormethan gelöst und mit 16 mg Bernsteinsäureanhydrid und 13 ul Pyridin behandelt. Nach Rühren während 18.5 h wurden bei 25°C 20 mg Dimethylaminopyridin zugesetzt. 4 h später wurden 40 mg Bernsteinsäureanhydrid zugesetzt. Nach Rühren während weiteren 20 Min. wurde die Mischung mit Ethylacetat verdünnt und dreimal mit IN HCl und Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, eingeengt und an Kieselgel unter Elution mit Ethylacetat und dann mit 4% Ethanol in Dichlormethan chromatographiert, wodurch 59 mg farbloses Pulver erhalten wurde, DC Rf 0.1 (Ethylacetat, Kieselgel), HPLC 2.84 Min. in 70/30 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat.

J 4.

7 b

IH NMR; CDCl₃, 300 MHz, partiell, δ ppm: 0.94 (m), 1.24 und 1.27 (d, 3H je), 2.10 (br, 3H), 2.64-3.54 (m), 3.6 (m, 4H), 4.23, 4.53 und 4.67 {m, IH je), 4.96 (br, IH), 4.98 (Septett, IH), 5.14 (br, IH), 6.65 (d, IH), 7.16-7.39 (nt, aromat.).

BEISPIEL 47

MorpholinocarbonylPhe-N-MeNlenor-C-Sta-i-propylester (I, Z= Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=CH₃; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHlUOH; und Z¹ =CO₂CH(CH₃ )₂ )

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel 38B ergaben 76 mg Nor-C-Sta-isopropylester und 126 mg des Produkts von Beispiel 3OE 117 mg farblosen Schaum, DC Rf 0.68 im System C. Das gewünschte Produkt dieser Mischung wurde durch präparative HPLC an einer 9,8 χ 250 mm Zorbax C-8 Kolonne, 6.3 ml/Min 75/25 Acetonitril-Wasser, Ret.Zeit 5.61 Min, isoliert und von einer unerwünschten inaktiven Komponente mit 6.42 Min. getrennt. Farbloser Schaum (60 mg) wurde so erhalten, analytische HPLC 4.98 Min. in 75/25 Acetonitril-Wasser.

IH NMR, CDCl₃, 250 MHz, partiell, δ ppm: 0.83 (t, 3H), 1.23 und 1.26 (d, 3H je), 2.70 (s, 3H), 2.95 und 3.09 (dd, IH je), 3.22-3.45 (m, 4H), 3.65 (m, 4H), 4.02 und 4.05 (d, IH total), 4.95 (m, 2H), 5.15 und 7.75 (d, IH je), 7.14-7.38 (m, aromat.).

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BEISPIEL 48

PiperidinocarbonylPhe-S-MeCysnor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Piperidinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHMiOH; und Z¹^COaCH(CH₃ )a )

A. PiperidinocarbonylPhe-benzylester

Das Produkt von Beispiel 7A (1.74 g) wurde in 13 ml Dichlormethan gelöst und bei O⁰C mit 0.61 ml Piperidin behandelt. Nach 15 Min. wurde 0.1 ml Piperidin zugesetzt, und die Lösung wurde eingedampft, und der Rückstand wurde an Kieselgel mit Ethylacetat-Hexane chromatographiert, wodurch 1.16 g eines farblosen Öls erhalten wurde, DC Rf 0.36 im 1:1 System A.

B. PiperidinocarbonylPhe

Das Produkt von Beispiel 48A (1.6 g) wurde in 50 ml 10:1 Methanol-Essigsäure gelöst und 30 Min. bei 25⁰C mit 0.6g 10% Pd/C unter 50 psi Wasserstoff geschüttelt. Die Mischung wurde durch Celit filtriert, das Filtrat eingedampft und der Rückstand zuerst zusammen mit zugesetztem Toluol und dann mit Ether eingedampft, wodurch 1.17 g eines farblosen Schaums erhalten wurde, DC Rf 0.50 im System C.

C. Boc-S-MeCysnor-C-Sta-i-propylester

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel 38B ergaben 900 mg Nor-C-Sta-isopropylester und 871 mg Boc-S-methyl-L-cystein 1.04 g eines farblosen Pulvers, DC Rf 0.42 im 1:1 System A.

D. S-MeCysnor-C-Sta-i-propylester-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 48C (1.03 g) wurde in 6 ml 4N HCl-Dioxan gelöst, 45 Min. bei 25⁰C gerührt und eingeengt, wodurch 998 mg eines farblosen Feststoffs erhalten wurden, DC Rf 0.48 im System C.

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E. PiperidinocarbonylPhe-S-MeCysnor-C-Sta-

i-propylester

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel 38B, mit Ausnahme, daß Triethylamin verwendet wurde, um das Amin-hydrochlorid zu neutralisieren, ergaben 130 mg des Produkts von Beispiel 48D und 90 mg des Produkts von Beispiel 48B 117 mg farblosen Feststoff, DC Rf 0.44 (Ethylacetat-Kieselgel).

IH NMR, CDCl₃, 250 MHz, partiell, δ ppm: 1.27 und 1.29 (d, 3H je), 2.08 (s, 3H), 2.75, 2.92, 3.13 und 3.31 (dd, IH je), 3.20 (m), 4.11 (s, 2H), 4.33-4.58 (m), 4.72 und 6.90 (d, IH je), 5.09 (Septett, IH), 7.19-7.4 (m, aromat.).

BEISPIEL 49

MorpholinocarbonylPhenlenor-C-Sta-2-hydroxyi-butyl-keton (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHmOH; und Z¹ =COCH₂ C(OH) (CH₃)ζ )

A. 6(S)-Bocamino-5(R)-benzyloxy-7-cyclohexyl-

2-methyl-2-hydroxy-4-hexanon

3(S)-t-Butoxycarbonylamino-2(R)-benzyloxy-4-cyclo-hexylbutyraldehyd (475 mg) wurde bei -78⁰C zu einer Lösung von 2.5 Äquiv. Lithiumethylacetat (aus 5 ml THF, 392 ul Diisopropylamin und 1.75 ml 1.6M n-Butyllithium in Hexan bei O⁰C, gefolgt von 272 ul Ethylacetat bei -78⁰C) zugesetzt und 10 Min. bei -78⁰C und 10 Min. bei O⁰C gerührt. Die Reaktion wurde mit wäßrigem Ammoniumchlorid unterbrochen. Die Produkte wurden durch Etherextraktion isoliert, wodurch 548 mg der isomeren Substanzen erhalten wurden (DC Rf 0.35 und 0.28 im 1:1 System B). Dieses Material zusammen mit 217 mg der gleichen, identisch jedoch getrennt hergestellten Substanzen wurden in 8 ml THF gelöst und bei O⁰C mit 5.9 ml 1.3M etherischem Methyllithium behandelt, 5 Min. gerührt und mit wäßriger Ammoniumchloridlösung abgeschreckt. Ein gelbliches öl (702 mg) wurde durch Etherextraktion erhalten. DC Rf 0.2 im 1:1 System B.

Dieses Material wurde in 25 ml Aceton gelöst und mit 2 ml Chromsäurelösung {Org. Syn. Coll. Bd. V, S. 310) behandelt und eingeengt, in Wasser gelöst und wiederholt mit Ethylacetat extrahiert, der über Magnesiumsulfat getrocknet, eingeengt und an Kieselgel gereinigt wurde, wodurch 172 mg farbloser Feststoff erhalten wurden, DC Rf 0.34 im 1:1 System B.

B. 6(S)-Amino-5(R)-benzyloxy-7-cyclohexyl-2-methyl-2-hydroxy-4-hexanon-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 49A (124 mg) wurde bei O⁰C in 0,5 ml Trifluoressigsäure gelöst, 20 Min. gerührt, eingeengt, und der Rückstand wurde zusammen mit Toluol, Ether und Ether, enthaltend 1.1 Äquiv. HCl (in Dioxan), eingedampft, wodurch 106 mg eines gelblichen Öls erhalten wurden.

C. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-2-hydroxy-ibuty1-keton-benzylether

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel 38B, mit Ausnahme, daß Triethylamin zugesetzt wurde, um das Amin-hydrochlorid zu neutralisieren, ergaben 104 mg des Produkts von Beispiel 49B und 106 mg des Produkts von Beispiel 8C 60 mg farblosen Feststoff, DC Rf 0.4 (Ethylacetat/Kieselgel).

D. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-2-hydroxyi-butyl-keton

Das Produkt von Beispiel 49C (58 mg) wurde in 10 ml 1:1 Essigsäure-Methanol gelöst und 20 h bei 25⁰C mit 100 mg 10% Pd/C unter 50 psi Wasserstoffdruck geschüttelt. Die Mischung wurde durch Celit filtriert, eingeengt und an Kieselgel mit Ethylacetat/Hexane gereinigt, wodurch 20 mg farbloses Pulver erhalten wurden, DC Rf 0.22 (Ethylacetat/Kieselgel).

IH NMR, CDCl₃, 250 MHz, partiell, δ ppm: 0.88 (t, 3H), 1.27 (s, 6H), 2.76 und 2.87 (d, IH je), 3.00 und 3.16 (dd, IH), 3.26 (m, 4H), 3.63 (m, 4H), 4.16 (br, IH), 4.23 (m, IH),

•ί ö ; 5 2 3

so

4.51 (m, 2H), 5.00, 6.62 und 6,73 (d, IH je), 7.13-7.36 (m, aromat.).

BEISPIEL 50

4-HydroxypiperidinocarbonylPhe-S-MeCysnor-C-Stai-propylester (I, Z=4-Hydroxypiperidinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; Ra=CH3SCH2-; X=Cyclohexyl; W=CHHlOH; und Z¹ =CO₂ CH (CH₃ ) 2 )

Eine Lösung von 150 mg des Produkts von Beispiel 39 und 40 ul Triethylamin in 0.8 ml Dichlormethan wurde bei O⁰C zu einer 0°C-Lösung von 49 mg Carbonyldiimidazol und 20 mg Imidazol in 0.3 ml Dichlormethan zugesetzt, und die resultierende Lösung wurde 1 h bei 0⁰C gerührt. Eine Lösung von 25 mg 4-Hydroxypiperidin in 0.3 ml Dichlormethan wurde zugesetzt, und die Mischung wurde 1.5 h bei O⁰C und 20 h bei 2O⁰C gerührt, mit Ethylacetat verdünnt und mit IN HCl (2x) und Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, eingeengt und an Kieselgel gereinigt, wodurch 26.1 mg eines farblosen Schaums erhalten wurden. DC Rf 0.22 (Ethylacetat/Kieselgel). HPLC 3.10 Min. in 60/40 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat.

IH NMR, CDCl₃, 250 MHz, partiell, δ ppm: 1.27 und 1.29 (d, 3H je), 2.10 (s, 3H), 2.73 und 3.30 (dd, IH je), 3.03 {m, 3-4H), 3.58 (m, 2H), 3.87 (m, IH), 4.10 (m, IH), 4.45 (m, 3H), 4.82 (d, IH), 5.08 (Septett, IH), 6.91 und 7.09 (d, IH je), 7.19-7.40 (m, aromat.).

BEISPIEL 51

Methy1-3(S) -(BocPheHisamino)-2(S)-azido-4-eyelohexylbutyrat als eine Mischung mit 3(R), 2(R)-Isomer (I, Z=Bocamino; M=Phenyl; Q=H; R2=Imidazol-4-ylmethyl; X=Cyclohexyl; W=CH-^N₃; und Z¹=CO₂CH₃)

A. Racemisches Methyl-3(S)-Bocamino-4-cyclohexyl-

2 (R)-hydroxybutyrat

10 g einer Mischung von 80% N-t-Butoxycarbonyl-(S)-3-amino-

(R) ^-hydroxy^-phenylbutyronitril und 20% des entsprechenden 2(S) Isomeren (U.S. 4 668 769) wurden 18 h in einer Mischung von 80 ml p-Dioxan, 30 ml Wasser und 30 ml konz. HCL zum Rückfluß erhitzt und eingedampft. Der Rückstand wurde in Wasser gelöst, und die Lösung wurde mit Chloroform (3x) gewaschen. Die wäßrige Lösung wurde abgekühlt und mit HCl auf pH 7.5 gebracht. Der Niederschlag wurde abfiltriert, mit Wasser und Aceton gewaschen und getrocknet, wodurch 4.10 g eines leicht grünlichen Feststoffs erhalten wurden. Dieses Material wurde in 40 ml p-Dioxan und 20'ml Wasser gelöst, die Lösung wurde mit Natriumhydroxid auf pH 11 gebracht und mit 5.85 ml Di-t-butyldicarbonat behandelt. Der pH wurde mit Natriumhydroxid zwischen 9.5 und 11.2 gehalten, und nach 1.5 h wurde die Mischung teilweise eingeengt. Die zurückbleibende wäßrige Lösung wurde 3x mit Ether gewaschen, dann in Anwesenheit von Ethylacetat auf pH 1.0 angesäuert, getrennt und mit Ethylacetat weiter extrahiert. Die Extrakte wurden über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt, wodurch 4.7 g eines leicht gelben Feststoff erhalten wurden, DC Rf 0.38 im System C. Dieses Material wurde in 100 ml Methanol, enthaltend 12 ml Essigsäure gelöst, und 5.5 h bei 25⁰C mit 1.1 g 10% Rh/C unter 58 psi Wasserstoff geschüttelt, filtriert und eingedampft, wodurch 4.58 g gelber Schaum erhalten wurden, DC Rf 0.45 im System C. Dieses Material wurde in Ether gelöst und mit überschüßigem etherischen Diazomethan behandelt und dann mit Essigsäure, um das überschüssige Diazomethan zu eliminieren, eingeengt und an Kieselgel (Ethylacetat-Hexane) gereinigt, wodurch 4.3 g eines wachsartigen Feststoffs erhalten wurden, DC Rf 0.5 (1:1 System A) [oc]*⁰ im wesentlichen Null (CHCl₃, c=l.l).

B. Racemisches Methyl-3(S)-Bocamino-4-cyclohexyl-

2 (S)-azidobutyrat

2 g des Produkts von Beispiel 51A, 4.16 g Triphenylphosphin und 12.1 ml Stickstoffwasserstoffsäure (aus Natriumazid und Schwefelsäure in Benzol/Wasser, das Benzol getrocknet über Natriumsulfat und titriert mit Standardbase) wurden bei 0⁰C in 60 ml Benzol insgesamt gelöst und mit 2.49 ml Diethylazo-

dicarboxylat behandelt. Die Mischung wurde 30 Min. gerührt, filtriert, eingeengt und an Kieselgel (Ether-Hexane) gereinigt, wodurch 1.02 g eines wachsartigen annähernd weißen Feststoff erhalten wurde, DC Rf 0.48 in 1:3 System A.

C. Racemisches Methyl-3(S)-amino-4-cyclohexyl-2(S)-azidobutyrat-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 51B (430 mg) wurde in 15 ml 4N HCL Dioxan gelöst, bei 25⁰C 1 h gerührt und eingedampft, wodurch 355 mg eines annähernd weißen Schaums erhalten wurden, DC Rf 0.22 im System C.

D. Methyl-3(S)-(BocPheHis(imBoc)amino)-2(S)-azido-4-cyclohexylbutyrat als 1:1 Mischung mit dem 3(R), 2(R)-Isomeren

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC ergaben 340 mg des Produkts von Beispiel 51C und 710 mg BocPheHis(imBoc) 620 mg der Titelsubstanzen, DC Rf 0.45 und 0.47 (5%Ethanol-Dichlormethan) als einen farblosen Schaum.

E. Methyl-3(S) -(BocPheHisamino)-2(S)-azido-4-cyclohexylbutyrat als eine Mischung mit dem 3(R), 2(R)-Isomeren

Das Produkt von Beispiel 51D (380 mg) wurde in 10 ml 5:1 Essigsäure-Wasser gelöst, 4 h bei 25°C gerührt, eingeengt, zusammen zuerst mit zugesetztem Toluol, dann Ether eingedampft und getrocknet, wodurch 280 mg eines leicht gelben Schaums erhalten wurden.

IH NMR, CDCl₃, 300 MHz, partiell, δ ppm: 1.37 (s, 9H), 3.76 und 3.78 (s, ca. 1:1 Verh. 3H total), 6.80 (s, IH), 7.53 und 7.55 (s, 1:1 IH total).

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BEISPIEL 52

Methyl-3(S) -(BocPheHisamino)-2(S)-amino-4-cyclo-hexylbutyrat als eine Mischung mit dem 3(R), 2(R)-Isomeren (I, Z=Bocamino; M=Phenyl; Q=H; Rz=Imidazol-4-ylmethyl; X=Cyclohexyl; W=CH-* NH₂; und Zi=CO₂CH₃)

Das Produkt von Beispiel 51D (275 mg) wurde in 20 ml Ethanol, enthaltend 0.5 ml Essigsäure, gelöst und 3 h bei 25⁰C mit 100 mg 10% Pd/C unter 50 psi Wasserstoff geschüttelt, filtriert und eingeengt, wodurch 240 mg eines leicht braunen Feststoffs erhalten wurden, HPLC 5.64 und 7.01 Min. in 60/40 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat.

IH NMR, CDCl₃ 300 MHz, partiell, δ ppm: 1.33 und 1.35 (s, 9H total), 3.72 (s, 3H total), 6.78 (s, IH total).

BEISPIEL 53

Methyl-3(S) -(BocPheHisamino)-2(R)-azido-4-cyclohexylbutyrat als eine Mischung mit 3(R), 2(S)-Isomer (I, Z=Bocamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=Imidazol-4-ylmethyl; X=Cyclohexyl; W= CH »ιι N₃; und Zi=CO₂CH₃)

A. Racemisches Methyl-3(S)-Bocamino-4-cyclohexyl-2(S)-benzovloxybutyrat

Eine Lösung von 600 mg des Produkts von Beispiel 51A, 700 mg Benzoesäure und 1.5 g Triphenylphosphin in 5 ml THF wurde bei 25⁰C mit 0.9 ml Diethylazodicarboxylat behandelt. Nach 1.5 h wurden 230 mg Benzoesäure, 0.5 g Triphenylphosphin und 0.3 ml Diethylazodicarboxylat zugesetzt, und 3 h später wurde die Mischung 12 h auf 0⁰C gekühlt. Die Mischung wurde an Kieselgel (Ethylacetat/Hexane) gereinigt, wodurch 509 mg farbloser Feststoff erhalten wurden, DC Rf 0.41 im 1:3 System A.

B. Racemisches Methyl-3(S)-Bocamino-4-cyclohexyl-2(S)-hydroxybutyrat

Das Produkt von Beispiel 53A (550 mg) wurde in 5 ml Methanol gelöst und bei 25⁰C mit 9 mg wasserfreiem Kaliumcarbonat be-

handelt. Nach 1.8 h wurde die Mischung eingeengt, und der Rückstand wurde an Kieselgel gereinigt, wodurch 326 mg öliger Schaum erhalten wurden, DC Rf 0.18 im 1:3 System A.

C. Racemisches Methyl-3(S)-Bocamino-4-cyclohexyl-2 (R)-azidobutyrat

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel 51B ergaben 320 mg des Produkts von Beispiel 53B 280 mg farblosen, wachsartigen Feststoff, DC Rf 0.50 im 1:3 System B.

D. Racemisches Methyl-3(S)-amino-4-cyclohexyl-2(R)-azidobutyrat-hydrochlorid

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung des Produkts von Beispiel 51C ergaben 260 mg des Produkts von Beispiel 53C 198 mg leicht gelben Feststoff.

E. Methyl-3(S)-(BocPheHis(imBoc)-amino)-2(R) azido-4-cyclohexylbutyrat als eine Mischung mit 3(R), 2(S)-Isomer

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel IC ergaben 192 mg des Produkts von Beispiel 53D und 398 mg BocPheHis(imBoc) (U.S. 4 559 198) 253 mg eines leicht gelben Schaums, DC Rf 0.5 (Ethylacetat).

F. Methyl-3(S) -(BocPheHisamino)-2(R)-azido-4-cyclohexylbutyrat als eine Mischung mit dem 3(R), 2(S)-Isomeren

Das Produkt von Beispiel 53E (211 mg) wurde 4 h bei 25⁰C in 12 ml 5:1 Essigsäure-Wasser gerührt, eingeengt und getrocknet, wodurch 210 mg leicht gelber Schaum erhalten wurden, DC Rf 0.1 im System C.

IH NMR, CDCl₃, 300 MHz, partiell, δ ppm: 1.30 und 1.34 (s, 3:2 Verh., 9H total), 3.76 und 3.81 (s, 3:2 Verh., 3H total), 6.67 und 6.78 (s, 2:3 Verh., IH total), 7.52 und 7.55 (s, 2:3 Verh., IH total).

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BEISPIEL 54

Methyl-3(S) -(BocPheHis-amino)-2(R)-amino-4-cyclohexylbutyrat als eine Mischung mit dem 3(R), 2(S)-Isomeren (I, Z=Bocamino; M=Phenyl; Q=H; R2=Imidazol-4-ylmethyl; X=Cyclohexyl; W=CHmNH₂; und Z¹ =C0₂ CH₃ )

Das Produkt von Beispiel 53F (170 mg) wurde in 15 ml Ethanol und 0.4 ml Essigsäure gelöst und 1.5 h bei 25⁰C mit 90 mg 10% Pd/C unter 50 psi Wasserstoff geschüttelt, filtriert, eingeengt, zusammen mit Ether und Toluol eingedampft und getrocknet, wodurch 170 mg leicht brauner Feststoff erhalten wurden, HPLC 5.17 und 6.17 Min. (ca 1:1) in 35/65 Acetonitril-pH 2.1-Phosphat.

IH NMR, DMSO-de, 300 MHz, partiell, δ ppm: 1.29 (s, 9H), 3.56 und 3.61 (s, 3:2 Verh., 3H total), 6.80 und 7.50 (s, IH je) .

BEISPIEL 55

MorpholinocarbonylPheLeunor-C-Sta-methylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₂CH(CH₃)Z; X=Cyclohexyl; W=CHfMOH; und Z¹ =COz CH₃ )

A. Nor-C-Sta-methylester-hydrochlorid

Eine Lösung von 0.15 g Boc-nor-C-Sta-methylester in 4 ml 4N HCl/Dioxan wurde 1 h bei RT gerührt. Die Reaktionsmischung wurde im Vakuum eingeengt, wodurch 0.15 g eines weißen Feststoffs erhalten wurde. Das Material wurde ohne weitere Reinigung verwendet. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 3.65 (s, 3H), 4.17 (m, IH), 6.47 (d, J=4Hz, IH).

B. MorpholinocarbonyPheLeu-methylester

Zu einer Lösung von 0.30 g MorpholinocarbonylPhe und 0.22 g HCl-LeuOMe in 5 ml wasserfreiem CH₂Cl₂ wurde der Reihe nach mit 0.12 g TEA, 0.18 g HBT und 0.24 g DCC zugesetzt. Nach Rühren während 20 h bei RT wurde die Lösung durch Celit fil-

triert und mit 2 χ 10 ml 0.IN Natriumhydroxid gewaschen. Die organische Phase wurde über MgSO4 getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde an SiO₂ (2:1 EtOAc:Hex) chromatographiert, wodurch 0.43 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 0.89 (d, J=7Hz, 6H), 3.71 (s, 3H), 4.48 (m, IH), 4.57 (m, IH), 6.25 (d, J=7Hz, IH) .

C. MorpholinocarbonylPheLeu

Zu einer Lösung von 0.43 g MorpholinocarbonylPheLeuOMe in ml MeOH wurde 0.1 g K2CO3 zugesetzt, und die resultierende Lösung wurde 24 h bei RT gerührt. Die Reaktionsmischung wurde im Vakuum auf ein Volumen von 10 ml eingeengt und wurde mit IN HCl angesäuert und mit 3 χ 25 ml CH2CI2 extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über MgSO^ getrocknet, filtriert und eingeengt, wodurch rohe Säure erhalten wurde, die ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 0.87 (2d, 6H), 4.45 (m, IH), 4.65 (m, IH), 5.36 (d, J=7Hz, IH) .

D. MorpholinocarbonylPheLeunor-C-Sta-methylester MorpholinocarbonylPheLeu (96 mg) wurde mit 80 mg Nor-C-StaOMe-HCl unter Verwendung des oben beschriebenen DCC-Verfahrens kondensiert. Das rohe Produkt wurde an SiO₂ (29:1 CH2CI2:EtOH) chromatographiert, wodurch 68 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 0.85 (2d, 6H), 3.72 (s, 3H), 4.28 (m, IH), 4.41 (m, 2H).

BEISPIEL 56

MorpholinocarbonylPheMetnor-C-Sta-methylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃ S(CH₂ ) 2 -; X=Cyclohexyl; W=CHiUOH; und Z¹ =CO₂ CH₃ )

A. MorpholinocarbonylPheMet-methylester MorpholinocarbonylPhe (0.30 g) wurde unter Verwendung des

DCC-Verfahrens in Beispiel 55 mit 0.24 g HCl-MethioninOMe gekuppelt. Das rohe Material wurde an S1O2 (2:1, EtOAc:Hex) chromatographiert, wodurch 0.36 g des reinen Dipeptids erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.05 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 4.57 (m, 2H).

B. MorpholinocarbonylPheMet

MorpholinocarbonylPheMet-methylester (0.36 g) wurde unter Verwendung des Verfahrens in Beispiel 55 verseift, wodurch 0.3 g rohes Produkt erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.01 (s, 3H), 2.44 (η, IH), 4.61 (η, IH).

C. MorpholinocarbonylPheMetnor-C-Sta-methylester MorpholinocarbonylPheMet (0.10 g) wurde unter Verwendung von DCC (Beispiel 1) an 0.080 g Nor-C-StaOME-HCl (Beispiel 55) gekuppelt. Das rohe Produkt wurde an S1O2 (29:1, CH2CI2:EtOH) chromatographiert, wodurch 50 mg reines Produkt und 32 mg unreines erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.98 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 4.38 (m, 2H), 4.46 In, IH).

BEISPIEL 57

MorpholinocärbonylPhePhenor-C-Sta-methylester (I, Z= Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=Benzyl? X=Cyclohexyl; W=CHlM OH; und Z¹ =CO₂ CH₃ )

A. MorpholinocarbonylPhePhe-methy!ester

MorpholinocarbonylPhe (0.30 g) wurde unter Verwendung des im Beispiel 55 beschriebenen DCC-Verfahrens mit 0.26 g PheOMe-HCl kondensiert. Das rohe Dipeptid wurde an S1O2 (1:2 EtOAc:Hex) chromatographiert, wodurch 0.37 g reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3.65 (s, 3H), 4.49 (m, IH), 4.78 (m, IH).

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B. MorpholinocarbonylPhePhe

MorpholinocarbonylPhePhe-methylester (0.37 g) wurde wie in Beispiel 55 verseift, wodurch 0.35 g rohe Säure erhalten wurde, die ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.59 (m, IH), 4.65 (m, IH), 5.10 (d, J=8Hz, IH) .

C. MorpholinocarbonvlPhePhenor-C-Sta-methylester MorpholinocarbonylPhePhe (0..10 g) wurde unter Verwendung von von DCC wie in Beispiel 55 beschrieben mit 0.080 g Nor-C-StaOMe-HCl kondensiert. Das rohe Produkt wurde an SiO₂ (29:1 CH2CI2 :EtOH) chromatographiert, wodurch 0.10 g reine Verbindung erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.74 (s, 3H), 4.26 (m, IH), 4.36 (m, IH), 4.52 (m, IH).

BEISPIEL 58

MorpholinocarbonylPhe-S-MeCysnor-C-Sta-methyI-ester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂; X=Cyclohexyl; W=CHiIiOH; und Z¹ =CO₂ CH₃ )

A. MorpholinocarbonylPhe-S-MeCys-methylester MorpholinocarbonylPhe (0.96 g) und S-MeCysOMe-HCl (0.55 g) wurden unter Verwendung des wasserlöslichen Reagens DEC zusammen mit TEA und HBT wie in Beispiel 55 gekuppelt. Die Reaktionsmischung wurde mit 100 ml EtOAc verdünnt, mit 2 χ 35 ml 0.1N HCl und 2 χ 35 ml 0.IN NaOH gewaschen. Die organische Phase wurde über MgSO< getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Das rohe Produkt (1.15 g) war rein genug, um weiterverarbeitet zu werden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.00 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 4.58 (m, IH), 4.65 (m, IH).

B. MorpholinocarbonylPhe-S-MeCys

MorpholinocarbonylPhe-S-MeCys-methylester (1.15 g) wurde wie in Beispiel 55 verseift, ausgenommen, daß die Reaktionsmischung am Anfang während 15 Min. bei 0° und dann bei RT ge-

rührt wurde. Das rohe Produkt (1.0 g) wurde ohne weitere Reinigung verwendet. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.03 (s, 3H), 4.63 (ro, IH), 4.77 (m, IH).

C. MorpholinocarbonylPhe-S-MeCysnor-Sta-methylester MorpholinocarbonylPhe-S-MeCys (130 mg) wurde unter Verwendung des im Beispiel 55 beschriebenen DCC-Verfahrens an Nor-C-StaOMe-HCl gekuppelt. Das rohe Produkt wurde an SiO₂ (19:1 CH2CI2:EtOH) chromatographiert, was 58 mg reines Produkt lieferte. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 2.06 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 4.40 In, 2H).

st

BEISPIEL 59

MorpholinocarbonylPhe-S-EtCysnor-C-Sta-methyI-ester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃CH₂SCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHHiOH; und Z¹ =C0₂ CH₃ )

A. MorpholinocarbonylPhe-S-EtCys-methylester MorpholinocarbonylPhe (0.20 g) wurde unter Verwendung von DCC wie in Beispiel 55 beschrieben mit S-EtCysOMe-HCl (0.15 g) gekuppelt. Die rohe Verbindung wurde an SiO₂ (3:1 EtOAc:Hex) chromatographiert, wodurch 0.20 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.16 (t, J=7Hz, 3H), 2.45 (q, J=7Hz, 2H), 3.73 (s, 3H), 4.64 (m, 2H).

B. MorpholinocarbonylPhe-S-EtCys

MorpholinocarbonylPhe-S-EtCys-methylester (0.20 g) wurde wie

in Beispiel 55 verseift, wodurch 0.11 g rohe Säure erhalten

wurde, die ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300

MHz, CDCl₃) δ 2.16 (t, J=7Hz, 3H), 2.50 (q, J=7Hz, 2H), 4.64 (m, IH), 4.79 (m, IH).

C. MorpholinocarbonylPhe-S-EtCysnor-C-Stamethylester

MorpholinocarbonylPhe-S-EtCys (0.11 g) wurde unter Verwendung

des in Beispiel 55 beschriebenen DCC-Verfahrens an Nor-C-StaOMe-HCl gekuppelt. Die rohe Verbindung wurde an SiO₂ (29:1 CH2 CL12 :EtOH) chromatographiert, wodurch 0.10 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.21 (t, J=7Hz, 3H), 2.50 (m, 2H), 3.75 (s, 3H), 4.40 (m, 2H).

BEISPIEL 60

MorpholinocarbonylPhe-O-BSernor-C-Sta-methylester (I, Z= Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₂OCH₂C₆H₃; X=Cyclohexyl; W=CHMlOH; und Z¹^O₂CH₃)

A. MorpholinocarbonvlPhe-O-BSer-methylester MorpholinocarbonylPhe (0.31 g) wurde unter Verwendung der in Beispiel 55 beschriebenen Standard-DCC-Reaktion an O-BSerOMe-HCl gekuppelt. Die rohe Verbindung wurde an SiO₂ (1:3 EtOAc:Hex) chromatographiert, wodurch 0.28 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3.70 (s, 3H), 4.43 (m, 2H), 4.63 (m, 2H).

B. MorpholinocarbonylPhe-O-BSer

MorpholinocarbonylPhe-O-BSer-methylester (0.28 g) wurde wie in Beispiel 55 beschrieben verseift. Die rohe Säure (0.19 g) wurde ohne weitere Reinigung verwendet. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.40 (m, 2H), 4.63 (m, IH), 4.72 (m, IH).

C. MorpholinocarbonylPhe-O-BSernor-C-Sta-methylester MorpholinocarbonylPhe-O-BSer (0.19 g) wurde unter Verwendung des in Beispiel 55 beschriebenen DCC-Verfahrens an Nor-C-StaOMe-HCl (0.14 g) gekuppelt. Das rohe Material wurde durch Chromatographie an SiO₂ (29:1 CH₂Cl₂:EtOH) gereinigt, wodurch 0.11 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3.73 (s, 3H), 4.40 (m, 2H), 4.45 (AB, 2H).

BEISPIEL 61

MorpholinocarbonylPhe-O-BThrnor-C-Sta-methylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH(CH₃)OCH₂C₆H₃; X=Cyclohexyl; W=CHHIOH; Z¹ =C0₂ CH₃ )

A. MorpholinocarbonylPhe-O-BThr-methylester

MorpholinocarbonylPhe (0.30 g) und OBThrOMe-HCl (0.35 g) wurden unter Verwendung des Standard-DCC-Verfahrens (Beispiel 55) gekuppelt. Das rohe Material (0.62 g) wurde ohne weitere Reinigung verwendet. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1.13 (d, J=6Hz, 3H), 3.63 (s, 3H), 4.38 (AB, 2H), 4.53 (m, IH), 4.64 (m, IH).

B. Morpholinocarbonyl-OBThr

MorpholinocarbonylPhe-OBThr-methylester (0.62 g) wurde wie in Beispiel 55 beschrieben verseift, wodurch 0.41 g rohe Säure erhalten wurde, die ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.17 (d, J=6Hz, 3H), 4.43 (AB, 2H), 4.62 im, IH), 4.70 (m, IH).

C. MorpholinocarbonylPhe-OBThrnor-C-Sta-methylester MorpholinocarbonylPhe-OBThr (99 mg) und Nor-C-StaOMe-HCl (44 mg) wurden unter Verwendung der Standard-DCC-Reaktion (Beispiel 55) gekuppelt. Das rohe Material wurde durch Chromatographie (29:1 CH₂Cl₂:EtOH) gereinigt, wodurch 97 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.16 (d, J=6Hz, 3H), 3.76 (s, 3H), 4.30 (m, IH), 4.41 (m, IH), 4.46 (AB, 2H).

5 ί O Γ δ >ί

'- '-¹ L ._> ν ^) 92

BEISPIEL 62

MorpholinocarbonylPheNvanor-C-Sta-methylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R2 = n-Propyl; X*Cyclohexyl; W=CHiHOH; und Z¹^CO₂CH₃)

A. MorpholinocarbonylPheNva-methvlester

MorpholinocarbonylPhe (0.20 g) und NvaOMe-HCl (0.10 g) wurden unter Verwendung des in Beispiel 55 beschriebenen DCC-Verfahrens kondensiert. Das rohe Material wurde an S1O2 chromatographiert (4:1 EtOAc:Hex), wodurch 0.22 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 0.92 (t, J=7Hz, 3H), 3.65 (s, 3H), 4.42 (m, IH), 4.54 (m, IH).

B. MorpholinocarbonylPheNva

MorpholinocarbonylPheNva-methylester (0.22 g) wurde nach dem Standardverfahren (Beispiel 55) verseift, wodurch 0.17 g rohe Säure erhalten wurde, die ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 0.89 (t, J=7Hz, 3H), 4.46 (m, IH), 4.62 (m, IH).

C. MorpholinocarbonylPheNvanor-C-Sta-methy!ester MorpholinocarbonylPheNva (0.10 g) und Nor-C-StaOme-HCl (0.075 g) wurde unter Verwendung des in Beispiel 55 beschriebenen DCC-Verfahrens gekuppelt. Das rohe Produkt wurde durch Chromatographie (29:1 CH2Cl2:EtOH) gereinigt, wodurch 0.12 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 0.97 (t, J=7Hz, 3H), 3.72 (m, 3H), 4.29 (m, IH), 4.40 (m, IH), 4.53 (m, IH).

BEISPIEL 63

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-n-propylamid (I, Z= Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R2= η-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHiHOH; und Zi=CONH(CH₂)ZCH₃)

A. Boc-nor-C-Sta-n-propylamid

Zu einer Lösung von 100 mg Boc-nor-C-Sta und 21 mg n-Propylamin in 5 ml trockenem CH2CI2 wurden 54 mg HBT und 70 mg DEC zugesetzt, und die resultierende Lösung wurde 20 h bei RT gerührt. Die Lösung wurde mit 200 ml EtOAc verdünnt und mit 2 χ 20 ml H₂0, 2 χ 20 ml 0.IN HCl, 2 χ 20 ml 0.1 NaOH gewaschen. Die organische Phase wurde über MgSO4 getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt, wodurch 142 mg rohes Amid erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 0.91 (t, J=7Hz, 3H), 1.40 (s, 9H), 3.85 (m, IH), 4.04 (d, J=3Hz, IH).

B. Nor-C-Sta-n-propylamid-hydrochlorid

Eine Mischung von 139 mg Boc-nor-C-StaNHnPr in 3 ml 4N HCl in Dioxan wurde 3 h bei RT gerührt. Die Lösung wurde in Vakuum eingeengt, wodurch 96 mg rohes Produkt erhalten wurden, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 0.85 (t, J=7Hz, 3H), 3.06 (m, 2H), 4.03 (d, J=3Hz, IH) .

C. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-n-propylamid MorpholinocarbonylPheNle (135 mg) wurde mit HCl-nor-C-StaNHnPr (96 mg) unter Verwendung des in Beispiel 58 beschriebenen DEC-Verfahrens gekuppelt. Das rohe Produkt wurde an SiO₂ (9:1 CH₂Cl₂ :MeOH) chromatographiert, wodurch 113 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 0.90 (t, J=7Hz, 3H), 4.08 (d, J=7Hz, IH), 4.32 (m, 2H), 4.80 (m, IH) .

2625 a $

BEISPIEL 64

MorpholinocarbonylPheNle-nor-C-Sta-i-propylamid (I, Z= Morpholinocarbonyiamino; M=Phenyl; Q=H; R2= η-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHlMOH; Z¹=CONHCH(CH₃)2)

A. Boc-nor-C-Sta-i-propylamid

Isopropylamin (29 mg) wurde unter Verwendung des in Beispiel 55 beschriebenen DCC-Verfahrens an Boc-nor-C-Sta (100 mg) gekuppelt. Das rohe Material wurde an S1O2 (9:1 CH2CI2) chromatographiert, wodurch 73 mg reines Amid erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1.11 (d, J=5Hz, 3H), 1.12 (d, J=5Hz, 3H), 1.37 (s, 9H), 3.82 (m, IH), 3.97 (m, IH), 4.03 (m, IH).

B. Nor-C-Sta-i-propylamid-hydrochlorid

Boc-nor-C-StaNHiPr (62 mg) wurde während 3 h durch Rühren in 2 ml 4N HCl-Dioxan von der Schutzgruppe befreit. Die Lösung wurde im Vakuum zu 52 mg eines weißen Feststoffs eingeengt. Das rohe HCl-SaIz wurde ohne weitere Reinigung verwendet. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 1.10 (m, 6H), 3.92 (m, IH), 3.98 (m,

C. MorpholinocarbonylPheNlenör-C-Sta-i-propylamid MorpholinocarbonylPheNle (48 mg) wurde unter Verwendung des in Beispiel 55 beschriebenen DCC-Verfahrens an HCl-nor-C-Sta-NHiPr (48 mg) gekuppelt. Das rohe Material wurde an SiO2 (19:1 CH2Cl2:MeOH) chromatographiert, wodurch 60 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.09 (d, J=6Hz, 6H), 4.00 (m, IH), 4.03 (m, 3H), 4.33 (m, 2H).

0 / Λ r ö

1 ^ χ- O O

BEISPIEL 65

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-i-butylamid (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHHIOH; Z¹=C0NHCH₂CH(CH₃ )z )

A. Boc-nor-C-Sta-i-butylamid

Isobutylamin (49 ml) wurde unter Verwendung des in Beispiel 55 beschriebenen DCC-Verfahrens an Boc-nor-C-StaNHiBu (100 mg) gekuppelt. Das rohe Material wurde durch Chromatographie (9:1 CH₂Cl₂IMeOH) gereinigt, wodurch 75 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 0.89 (d, J=6Hz, 6H), 1.39 (s, 9H), 3.83 (m, IH), 4.03 (m, IH).

B.Nor-C-Sta-i-butvlamid-hydrochlorid

Boc-nor-C-StaNHiBu (173 mg) wurde wie in Beispiel 64 von der Schutzgruppe befreit wodurch 170 mg rohes Salz erhalten wurden, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 0.85 (d, J=6Hz, 6H), 2.93 (m, 2H), 4.03 (m, IH) .

C. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-i-butylamid MorpholinocarbonylPheNle (235 mg) wurde unter Verwendung des DCC-Verfahrens (Beispiel 55) an HCl-nor-C-StaNHiBu (160 mg) gekuppelt. Das rohe Produkt wurde durch Chromatographie (9:1 CH₂Cl₂:Me0H) gereinigt, wodurch 152 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 0.87 (d, J=6Hz, 6H), 4.08 (d, J=3Hz, IH), 4.32 (m, 2H).

6 2 5 Ö 3

BEISPIEL 66

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-N-methyl-N-i-propylamid (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R2=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHmOH; und Zi=CON(CH₃ ) CH (CH₃ )s )

A. Boc-nor-C-Sta-N-methyl-N-i-propylamid

N-Methyl-N-isopropylamin (44 mg) wurden unter Verwendung des DCC-Verfahrens (Beispiel 55) mit Boc-nor-C-Sta (120 mg) gekuppelt. Das rohe Produkt wurde chromatographiert (39:1 CHaCI2 :MeOH), wodurch 56 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1.40 (s, 9H), 2.89 (s, 3H), 4.74 (m, IH) .

B. Nor-C-Sta-N-methyl-N-i-propylamid-hydrochlorid Boc-nor-C-StaN(Me)iPr (56 mg) wurde wie in Beispiel 64 von der Schutzgruppe befreit, wodurch 52 mg rohes Salz erhalten wurden, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 3.00 (s, 3H), 4.30 (s, IH).

C. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-N-methyl-N-i-propylamid

MorpholinocarbonylPheNle (73 mg) wurde unter Verwendung des in Beispiel 55 beschriebenen DCC-Verfahrens an HCl-nor-C-Sta(Me)iPr (52 mg) gekuppelt. Das rohe Material wurde durch Chromatographie (19:1 CH2Cl2:MeOH) gereinigt, wodurch 99 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 2.84 fs, 3H), 4.12 (m, IH), 4.40 (m, IH), 4.53 (m, IH).

V A / Γ Q

BEISPIEL 67

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-N-methyl-N-ibutylamid (I, Z=Morpholinocarbonylamino M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHiIl OH; Z¹ =CON (CH₃ ) CH₂ CH (CH₃ ) 2 )

A. Boc-nor-C-Sta-N-methyl-N-i-butylamid

N-Methyl-N-isobutylamin (56 mg) wurde unter Verwendung des in Beispiel 55 beschriebenen DCC-Verfahrens an Boc-nor-C-Sta (128 mg) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (9:1 CH₂CI2 :MeOH),wodurch 130 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1.38 (s, 9H), 3.03 (s, 3H), 4.28 (m, IH).

B Nor-C-Sta-N-methyl-N-i-butylamid-hydrochlorid Boc-nor-C-StaN(Me)iBu (123 mg) wurde wie in Beispiel 55 beschrieben von der Schutzgruppe befreit, was 118 mg rohes Salz lieferte, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMDO-de) δ 3.67 (s, 3H), 4.54 (m, IH), 4.61 (m, IH) .

C. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-N-methyl-N-

i-butylamid

MorpholinocarbonylPheNle (173 mg) wurde unter Verwendung des in Beispiel 55 beschriebenen DCC-Verfahrens an HCl-nor-C-StaN(Me)iBu (118 mg) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (19:1 CH₂CI2:MeOH), wodurch 184 mg reines Material erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3.04 (s, 3H), 4.18 (m, IH), 4.36 (m, IH), 4.43 (m, IH), 4.57 (m, IH).

i ο / κ

<· J 98

BEISPIEL 68

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-n-pentylamid (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHlHOH; und Z¹ =CONH(CH₂ J₄CH₃ )

A. Boc-nor-C-Sta-n-pentylamid

N-Pentylamin (29 mg) wurde unter Verwendung des in Beispiel 63 beschriebenen DEC-Verfahrens an Boc-nor-C-Sta (100 mg) gekuppelt. Das rohe Material (128 mg) wurde ohne weitere Reinigung verwendet. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1.41 ((s, 9H), 3.25 (m, 2H), 3.86 (m, IH), 4.05 (m, IH).

B. Nor-C-Sta-n-pentvlamid-hydrochlorid

Boc-nor-C-StaNHnPn (128 mg) wurde wie in Beispiel 63 von der Schutzgruppe befreit, wodurch 108 mg rohes Salz erhalten wurden, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 3.09 (m, 2H), 4.00 (d, J=4Hz, IH).

C. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-n-pentylamid MorpholinocarbonylPheNle (138 mg ) wurde unter Verwendung des in Beispiel 58 beschriebenen DEC-Verfahrens an HCl-nor-C-StaNHnPn (108 mg) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (19:1 CH2CI2:MeOH),wodurch 140 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.08 (m, IH), 4.32 (m, 2H), 4.74 (m, IH).

BEISPIEL 69

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-NiN-bisethylenoxyamid (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CH(HOH; und Z¹ =CON (CH₂ CH₂ )₂0)

A. Boc-nor-Sta-^N-bisethylenoxyamid Morpholin (43 mg) wurde unter Verwendung des Standard-DCC-

Q<5

Verfahrens {Beispiel 55) an Boc-nor-C-Sta (100 mg) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (4:1 EtOAc:Hex), wodurch 134 mg reines Produkt erhalten wurde, NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.36 (s, 9H), 4.06 (d, J=5Hz, IH), 4.22 (br, IH).

B. Nor-C-Sta-N.N-bisethylenoxyamid-hydrochlorid Boc-nor-C-StaMr (122 mg) wurde durch das Standardverfahren (Beispiel 63) von der Schutzgruppe befreit, wodurch 125 mg rohes Salz erhalten wurden, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 4.34 (d, J=5Hz, IH).

C. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-N,N-bisethylenoxyamid

MorpholinocarbonylPheNle (142 mg) wurde unter Verwendung des Standard-DCC-Verfahrens (Beispiel 55) an HCl-nor-C-StaMr (101 mg) gekuppelt. Das rohe Material wurde durch Chromatographie gereinigt (19:1 CH2CI2:EtOH), wodurch 72 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.16 (m, IH), 4.25 (br, IH), 4.42 (m, IH), 4.48 (m, IH), 4.97 (m, IH).

BEISPIEL 70

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-NiN-bisethylen-N'-methylazaamid (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHiHOH; und Zi=CON(CH₂CH₂ ) 2 N-CH₃ )

A. Bocnor-C-Sta-N.N-bisethylen-N'-methylazaamid 1-Methylpiperazin (50 mg) wurde unter Verwendung der Standard-DCC-Reaktion (Beispiel 55) an Boc-nor-C-Sta (100 mg) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (9:1 CH2Cl₂ :EtOH), wodurch 118 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.36 (s, 9H), 2.30 (s, 3H), 3.96 <m, IH), 4.24 (s, IH).

L C

100

B. Nor-C-Sta-NiN-bisethylen-N'-methylazaamidhvdrochlorid

Boc-nor-C-StaMePip (118 mg) wurde unter Verwendung der Standardbedingungen (Beispiel 63) von der Schutzgruppe befreit, wodurch 113 mg rohes Salz erhalten wurden, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3.48 (s, 3H), 4.22 (m, IH), 4.39 (m, 2H).

C. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-NiN-bisethylen-N'-methylazaamid

MorpholinocarbonylPheNle (133 mg ) wurde unter Verwendung der Standard-DCC-Reaktion (Beispiel 55) an HCl-nor-C-StaMePip (105 mg) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (9:1 CH2CI2 :EtOH), wodurch 110 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.33 (s, 3H), 4.17 (m, IH), 4.31 (m, 2H), 4.52 (m, IH).

BEISPIEL 71

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-i-Propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHMiOH; und Z¹ =CO₂CH(CH₃ )₂ )

A. Nor-C-Sta-i-propylester-hydrochlorid

Eine Lösung von 100 mg Boc-nor-C-Sta in 2 ml wasserfreiem Isopropanol wurde mit wasserfreiem HCl gesättigt, und die resultierende Lösung wurde über Nacht bei RT gerührt. Die Reaktionsmischung wurde im Vakuum eingeengt, wodurch 98 mg rohes Salz erhalten wurden, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 1.20 (d, J=6Hz, 6H), 3.28 (m, IH), 4.05 (d, J=5Hz, IH), 4.92 (m, IH).

B. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-i-propylester MorpholinocarbonylPheNle (142 mg) wurde unter Verwendung der Standard-DCC-Reaktion (Beispiel 55) an HCl-nor-C-StaOiPr (92 mg) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert

101

(9:1 CHiCI2 :EtOH), wodurch 60 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1.24 (d, J=7Hz, 6H), 4.06 (br, IH), 4.19 (m, IH), 4.43 (m, 2H), 5.00 (m, IH).

BEISPIEL 72

MorpholinocarbonylPheO-MeSernor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃OCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHm OH; Z¹ =C0₂CH(CH₃ )2 )

A. MorpholinocarbonylPheOMeSer-methylester MorpholinocarbonylPhe (0.5 g) wurde unter Verwendung der in Beispiel 58 beschriebenen DEC-Reaktion an DL-O-MethylserinOMe

1Ü2

(0.34 g) gekuppelt. Das rohe Material (0.37 g) wurde ohne weitere Reinigung verwendet. NMR (ein Isomeres) (300 MHz, CDCl₃) δ 3.42 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 4.65 (m, IH).

B. MorpholinocarbonylPheO-MeSer

MorpholinocarbonylPheOMSerOMe (0.37 g) wurde wie in Beispiel 55 beschrieben verseift, wodurch 0.16 g rohe Säure erhalten wurde, die ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (ein Isomeres) (300 MHz, CDCl₃) δ 3.18 (s, 3H), 4.58 (m, IH), 4.73 (m, IH).

C. MorpholinocarbonylPheO-MeSernor-C-Sta-ipropylester

MorpholinocarbonylPheOMeSer (0.15 g) wurde unter Verwendung der Standard-DEC-Reaktion (Beispiel 58) an HCl-nor-C-StaOiPr (0.10 g) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (29:1 CH2CI2:EtOH), wodurch 43 mg reines Produkt und 36 mg Serin-epimer erhalten wurden. NMR (Hauptisomeres) (300 MHz, CDCl₃) δ 3.14 (s, 3H), 4.13 (m, 2H), 4.45 (m, 2H), 4.96 (m, 2H) .

BEISPIEL 73

MorpholinocarbonylPheO-EtSernor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃CH₂OCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHIIiOH; und

Z^CO₂CH(CH₃ )₂ )

A. BocO-EtSer

Zu einer Lösung von 0.94 g BocSer in 66 ml THF wurde eine Lösung von 1.47 g NaOMe in 2.6 ml MeOH zugesetzt, gefolgt von 11.7 g EtJ. Nach 15 Min. wurde weiteres NaOMe (0.49 g) und EtJ (2 ml) zugesetzt, und die Reaktionsmischung wurde über Nacht bei RT gerührt. Weiteres NaOMe und EtJ wurden zugesetzt, und die Reaktionsmischung wurde während weiteren 6 Stunden gerührt. Die Mischung wurde im Vakuum eingeengt, in 25 ml H₂0 gelöst und mit 2 χ 25 ml Ether gewaschen. Die wäß-

103

rige Phase wurde mit konz. HCl angesäuert und mit 4 χ 25 ml CH2CI2 extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über MgS04 getrocknet, filtriert und im Vakuum zu 0.34 g rohem Produkt eingeengt, das weiter behandelt wurde. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1.19 (t, J=7Hz, 3H), 1.46 (s, 9H), 3.53 (q, J=7Hz, 2H), 4.43 (m, IH).

B. O-EtSer-methylester-hydrochlorid

Eine Lösung von 0.51 g BocOEtSer in 25 ml wasserfreiem MeOH wurde mit wasserfreiem HCl gesättigt und 18 h bei RT gerührt. Die Lösung wurde im Vakuum eingeengt und der feste Rückstand wurde umkristallisiert (EtOH/Ether), wodurch 0.31 g reines Salz erhalten wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 1.10 (t, J=8Hz, 3H), 3.48 (m, 2H), 3.75 (s, 3H), 4.28 (m, IH).

C. MorpholinocarbonyIQ-EtSer-methylester MorpholinocarbonylPhe (0.36 g) wurde unter Verwendung der Standard-DEC-Reaktion (Beispiel 58) an HCl-OEtSerOMe (0.25 g) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (19:1 CH2CI2 :EtOH), wodurch 0.22 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1.10 (t, J=7Hz, 3H), 3.41 (q, J=7Hz, 2H), 3.73 (S, 3H), 4.62 (m, 2H).

D. MorpholinocarbonylPheO-EtSer

MorpholinocarbonylPheOEtSerOMe (0.22 g) wurde wie in Beispiel 55 beschrieben verseift, wodurch 0.15 g rohe Säure erhalten wurde, die ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1.12 (2t, 3H), 4.62 (m, IH), 4.72 (m, IH).

E. MorpholinocarbonylPheO-EtSernor-C-Stai-propylester

MorpholinocarbonylPheOEtSer (75 mg) wurde unter Verwendung der Standard-DEC-Reaktion (Beispiel 58) an HCl-nor-C-StaOiPr (54 mg) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (19:1 CH2CI2:EtOH), wodurch 50 mg reines Produkt erhalten

104

wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.12 (t, J=7Hz, 3H), 3.44 (q, J=7Hz, 2H), 4.30 (m, IH), 4.43 (m, 2H), 5.04 (m, IH).

BEISPIEL 74

MorpholinocarbonylPhetetramethylenGlynor-C-Stai-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=-(CH₂ )< )-; X=Cyclohexyl; W=CHiHOH; Z¹ =CO₂CH(CH₃ )₂ )

A. Tetramethylenqlycin-methylester-hydrochlorid

Eine Lösung von 2.5 g α-TetramethylenGly in 30 ml MeOH wurde mit wasserfreiem HCl gesättigt und 60 h bei RT gerührt. Die Lösung wurde im Vakuum eingeengt, und der Rückstand wurde aus Ether/Ethanol umkristallisiert, wodurch 2.4 g reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 3.77 (s. 3H).

B. MorpholinocarbonylPheTMGly-methy!ester MorpholinocarbonylPhe (0.50 g) wurde unter Verwendung der Standard-DEC-Reaktion (Beispiel 58) an HCl-TMGIyOMe (0.36 g) gekuppelt. Das rohe Material (0.48 g) wurde ohne weitere Reinigung verwendet. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3.67 (s, 3H), 4.57 (m, 2H), 5.51 (d, J=6Hz, IH).

C. MorpholinocarbonylPheTMGly

MorpholinocarbonylPheTMGlyOMe (0.48 g) wurde wie in Beispiel 55 beschrieben verseift, wodurch 0.43 g rohe Säure erhalten wurde, die ohne Reinigung weiter bearbeitet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 4.39 (m, 2H), 6.55 (d, J=8Hz, IH).

D. MorpholinocarbonvlPheTMGlynor-C-Sta-i-propylester MorpholinocarbonylPheTMGly (0.11 g) wurde unter Verwendung der in Beispiel 58 beschriebenen Standard-DEC-Reaktion an HCl-nor-C-StaOiPr (0.10 g) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (3:1 EtOAc:Hex), wodurch 70 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.21 (m,lH), 4.47 (m, IH), 4.98 (m, 2H).

2 6 2 5 δ

105

BEISPIEL 75

MorpholinocarbonylPhePGlynor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃ (CH₂ ) 4-; X=Cyclohexyl; W=CHiMOH; und Z¹^CO₈CH(CH₃ )i )

A. PGly-ethylester

Eine Lösung von 10 g GlyOEt-Benzophenon-imin, 8 g Jodpentan und 14 g nBu₄NH-HSO₄ in 150 ml CH₂Cl₂ und 33 ml 10% NaOH wurde 16 h bei RT gerührt. Die organische Phase wurde abgetrennt, wurde über MgSO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde in 50 ml THF und 50 ml 0.IN HCl gelöst und 24 h bei RT gerührt. Die Mischung wurde zu einer wäßrigen Lösung eingeengt und mit 3 χ 50 ml Ether gewaschen. Die wäßrige Phase wurde basisch gestellt und mit 3 χ 50 ml CH₂Cl₂ extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über MgSO₄ getrocknet, filtriert und eingeengt. Der Rückstand wurde chromatographiert (1:1 EtOAc:Hex), wodurch 0.51 g reines Produkt erhalten wurde. Das entsprechende HCl-SaIz wurde durch Behandlung des obigen Amins mit wasserfreier HCl in Ether hergestellt. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 1.05 (t, J=7Hz, 3H), 1.77 (m, 2H), 3.97 (m, IH), 4.20 (m, 2H).

B. MorpholinocarbonylPhePGly-ethy!ester

MorpholinocarbonylPhe (0.40 g) wurde unter Verwendung der Standard-DEC-Reaktion (Beispiel 58) an HCl-PGIyOEt (0.33 g) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (1:3 EtOAc:Hex), wodurch 0.40 g des Produkts als Mischung der Diastereomeren am PGIy erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 4.13 (m, 2H), 4.42 (m, IH), 4.57 (m, IH).

C. MorpholinocarbonylPhePGIy

MorpholinocarbonylPhePGlyOEt wurde wie in Beispiel 55 beschrieben verseift, wodurch 0.33 g rohe Säure erhalten wurde, die ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.43 (m, 2H), 4.72 (m, IH), 4.93 (m, IH).

106

D. MorpholinocarbonylPhePGlynor-C-Sta-i-proDylester MorpholinocarbonylPhePGly (0.16 g) wurde unter Verwendung der Standard-DEC-Reaktion (Beispiel 58) an HCl-nor-C-StaOiPr (0.10 g) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (1:1 EtOAc:Hex), wodurch 0.11 g des gewünschten L-Produkts und 0.078 g des D-Isomers erhalten wurden. NMR (Hauptisomer^) (300 MHz, CDCl₃) δ 2.27 (d, J=7Hz, 6H), 4.25 (m, IH), 4.46 (m, IH), 4.53 (m, IH), 5.03 (m, 2H).

BEISPIEL 76

MorpholinocarbonylPheO-MeHSenor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃O(CH₂ ) 2-; X=Cyclohexyl; W=CHMiOH; und

)₂ )

A. Boc-Q-Methy!homoserin

Boc-Homoserin (0.51 g) wurde wie in Beispiel 73 für Boc-Serin beschrieben methyliert. Dies lieferte 0.45 g rohes Produkt, das ohne weitere Reinigung weiter behandelt wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.40 (s, 9H), 3.16 (s, 3H), 3.90 (m, 2H).

B. BocO-MeHSenor-C-Sta-i-propylester

BocOMHse (0.45 g) wurde unter Verwendung des in Beispiel 58 beschriebenen DEC-Verfahrens, mit Ausnahme, daß kein TEA verwendet wurde, an Nor-C-StaOiPr (0.5 g) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (1:1 EtOAc:Hex), wodurch 0.52 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.21 (d, J=7Hz, 6H), 1.38 (s, 9H), 3.27 (s, 3H), 4.19 (m, IH), 4.38 (m, IH), 4.96 (m, IH).

C. O-MeHSenor-C-Sta-i-propylester

BocOMeHse-nor-C-StaOiPr (0.52 g) wurde unter Verwendung der in Beispiel 63 beschriebenen Standard-HCL/Dioxan-Bedingungen von der Schutzgruppe befreit. Dies lieferte 0.66 g rohes Produkt, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300

10-7

MHz, DMSO-de) δ 1.18 (d, J=7Hz, 6H), 3.24 (s, 3H), 4.18 (m, IH), 4.80 (m, IH).

D. MorpholinocarbonylPheO-MeHSenor-C-Sta-i-

propylester

MorpholinocarbonylPhe (0.19 g) wurde unter Verwendung des in Beispiel 58 beschriebenen Standard-DEC-Verfahrens an HCl-OMeHSe-nor-C-StaOiPr (0.20 g) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (29:1 CH2CI2 :MeOH),wodurch 0.31 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.23 (d, J=7Hz, 3H), 1.25 (d, J=7Hz, 3H), 3.19 (s, 3H), 4.29 (m, IH), 4.42 (m, 2H), 5.04 <m, IH).

BEISPIEL 77

MorpholinocarbonylPheHsenor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=HO(CHz)₂-; X=Cyclohexyl; W=CHmOH; und Zi=CO₂CH(CH₃ )₂ )

A. BocO-Benzy!homoserin

BocHse (0.51 g) wurde wie in Beispiel 73 für Ser beschrieben benzyliert. Dies lieferte 0.42 g rohes Produkt, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.38 (s, 9H), 4.10 (m, IH), 4.45 (AB, 2H).

B. BocO-Benzylhomoserinnor-C-Sta-i-propylester BocO-BenzylHse (0.40 g) wurde unter Verwendung der in Beispiel 76 beschriebenen DEC-Reaktion an Nor-C-StaOiPr (0.50 g) gekuppelt. Das rohe Produkt wurde chromatographiert (1:1 EtOAc:Hex), wodurch 0.53 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1.22 (d, J=7Hz, 6H), 1.40 (s, 9H), 4.10 (m, IH), 4.40 (m, IH), 4.45 (m, 2H), 4.96 (m, IH).

108

C. O-Benzylhomoserinnor-C-Sta-i-propylesterhydrochlorid

BocO-BenzylHse-nor-C-StaOiPr (0.53 g) wurde wie in Beispiel 76 beschrieben von der Schutzgruppe befreit, wodurch 0.54 g rohes Salz erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-ds) δ 1.17 (d, J=7Hz, 3H), 1.18 (d, J=Hz, 3H), 4.21 (m, IH), 4.47 (m, 2H), 4.80 (m, IH).

D. MorpholinocarbonylPheO-benzylhomoserinnor-C-Sta-i-propylester

MorpholinocarbonylPhe (0.53 g) wurde unter Verwendung der in Beispiel 76 beschriebenen DEC-Reaktion an HCl-O-BenzylHsenor-C-StaOiPr (0.54 g) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (19:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 0.40 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.24 (d, J=7Hz, 3H), 1.27 (d, J=7Hz, 3H), 4.28 (m, IH), 4.39 (AB, 2H), 4.48 (m, 2H), 5.04 (m, IH).

E. MorpholinocarbonylPheHsenor-C-Sta-ipropylester

Eine Mischung von 0.39 g MorpholinocarbonylPheO-benzyl-Hsenor-C-StaOiPr und 1.0 g 10 Pd/C in 40 ml MeOH wurde 7 h bei 50 psi hydriert. Die Mischung wurde filtriert und im Vakuum eingeengt, und der Rückstand wurde chromatographiert (19:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 91 mg reines Produkt zusammen mit etwas nichtumgesetztem Ausgangsmaterial erhalten wurden. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 1.17 (d, J=7Hz, 3H), 1.19 (d, J=7Hz, 3H), 4.29 (m, 2H), 4.47 (m, IH), 4.83 (m, IH).

BEISPIEL 78

MorpholinocarbonylPheS-MeCys-oxidnor-C-Sta-ipropylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SOCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHmOH; und Z¹ =CO₂CH(CH₃ )₂ )

Eine Lösung von 84 mg MorpholinocarbonylPheSMeCys-nor-C-StaOiPr (Beispiel 17) und 24 mg m-CPBA in 10 ml CH₂Cl₂ wurde

/ U r-

109

30 Min. bei O⁰C gerührt. Die Lösung wurde mit 30 ml EtOAc verdünnt und mit 2 χ 15 ml 10%iger Na2SO3 und 1 χ 15 ml 0.IN NaOH gewaschen. Die organische Phase über MgSO^ getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt, und der Rückstand wurde chromatographiert (17:3 CH₂CI2:EtOH), wodurch 40 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.29 (d, J=7Hz, 6H), 2.78 (s, 3H), 4.37 (m, IH), 4.44 (m, IH), 4.77 (m, IH), 5.00 (m, IH).

BEISPIEL 79

MorpholinocarbonylPheS-MeCysdioxidnor-C-Stai-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SO₂CH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHlHOH; und Zi=CO₂CH(CHs)₂)

Eine Lösung von 20 mg MorpholinocarbonylPheSMeCys-nor-C-StaOiPr (Beispiel 17) und 16 mg m-CPBA in 3 ml CH₂Cl₂ wurde 30 Min. bei 0° gerührt. Die Reaktionsmischung wurde wie in Beispiel 78 aufgearbeitet, und der Rückstand wurde chromatographiert (19:1 CH₂Cl₂ :EtOH), wodurch 13 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.28 (d, J=7Hz, 3H), 1.30 (d, J=7Hz, 3H), 3.00 (s, 3H), 4.26 (m, IH), 4.45 (m, IH), 4.85 (m, IH), 5.06 (m, IH).

BEISPIEL 80

MorpholinocarbonylPheSernor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=HOCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHiHOH; und Z¹ =CO₂CH(CH₃ )₂ )

A. MorpholinocarbonylPheO-succinimid

Zu einer Lösung von 25 g MorpholinocarbonylPhe und 15.5 g N-Hydroxysuccinimid in 800 ml CH₂Cl₂ wurden 19 g DEC zugesetzt, Nach Rühren während 20 h bei RT wurde die Lösung mit 2 χ 200 ml gesättigtem NaHCO₃ gewaschen, über MgSO4 getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Dies lieferte 29 g rohes

110

Produkt als weißen Feststoff. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.78 (m, 4H), 4.81 (d, J=8Hz, IH), 5.09 (m, IH).

B. MorpholinocarbonylPheSer

Eine Lösung von 0.50 g MorpholinocarbonylPheOSuc in 5 ml THF wurde zu einer Lösung von 0.30 g Ser in 10 ml gesättigtem NaHC03 zugesetzt, und die erhaltene Mischung wurde während 15 Min. gerührt. Die Reaktionsmischung wurde mit 30 ml 0.IN NaOH verdünnt und mit 3 χ 40 ml CH2CI2 gewaschen. Die wäßrige Phase wurde mit konz. HCl angesäuert und wurde mit 6 χ 75 ml EtOAc extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über MgSO< getrocknet, filtriert und eingeengt, wodurch 0.40 g rohes Produkt erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3.66 (m, 2H), 4.25 (m, IH), 4.37 (m, IH).

C. MorpholinocarbonylPheSernor-C-Sta-i-propylester MorpholinocarbonylPheSer (0.39 g) wurde unter Verwendung des in Beispiel 76 beschriebenen DEC-Verfahrens an Nor-C-StaOiPr (0.33 g) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (24:1 CH2CI2:EtOH), wodurch 0.23 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.13 (d, J=7Hz, 3H), 1.15 (d, J=7Hz, 3H), 3.94 (m, IH), 4.20 (m, 2H), 4.30 (m, IH), 4.88 (m, IH) , 4.80» [o, IH) .

BEISPIEL 81

MorpholinocarbonylPheAlanor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃; X=Cyclohexyl; W=CHInOH; und Z¹ =CO₂CH(CH₃ )₂ )

A. MorpholinocarbonylPheAla

Alanin (0.24 g) und MorpholinocarbonylPheOSuc (0.50 g) konnten wie in Beispiel 80 beschrieben reagieren, wodurch 0.15 g rohes Produkt erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung ver-

111

wendet wurde. NMR {300 MHz, DMSO-ds) δ (d, J=7Hz, 3H), 4.20 (m, IH), 4.32 (ι, IH).

B. MorpholinocarbonylPheAlanor-C-Sta-i-propylester MorpholinocarbonylPheAla (0.15 g) wurde unter Verwendung von DEC wie in Beispiel 76 beschrieben mit Nor-C-StaOiPr (0.13 g) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (24:1 CH2CI2 :EtOH), wodurch 0.18 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1.26 (d, J=7Hz, 3H), 4.29 (m, IH), 4.38 (m, IH), 4.48 (m, IH), 4.96 (m, IH).

BEISPIEL 82

MorpholinocarbonylPheGlnnor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂ = (CH₂)2 CONH2; X=Cyclohexy1; W=CH ι ι ι OH; und Z¹ =CO₂CH(CH₃ )2 )

A. MorpholinocarbonylPheGln

Glutamin (0.30 g) konnte wie in Beispiel 80 beschrieben mit MorpholinocarbonylPheOSuc (0.50 g) reagieren, wodurch 0.37 g rohes Produkt erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 3.43 (m, 4H), 4.15 (m, IH), 4.31 (m, IH).

B. . MorpholinocarbonylPheGlnnor-C-Sta-i-propylester MorpholinocarbonylPhegln (0.37 g) wurde unter Verwendung von DEC wie in Beispiel 76 beschrieben an Nor-C-StaOiPr (0.24 g) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (9:1 CH₂Cl₂ :EtOH), wodurch 0.18 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 1.17 (d, J=7Hz, 6H), 3.94 fm, IH), 4.8 (m, 2H), 4.25 (m, IH), 4.80 (m, IH).

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BEISPIEL 83

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta^-methyl^ propanolester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CH I 11 OH; Z¹ =C0₂ CH {CH₃ ) CH (CH₃ ) 2 )

A. Nor-C-Sta^-Methyl^-propanolester-hydrochlorid Eine Lösung von 100 mg Boc-nor-C-Sta in 5 ml 3-Methyl-2-propanol wurde mit wasserfreiem HCl gesättigt und über Nacht gerührt. Die Lösung wurde im Vakuum eingeengt, wodurch 89 mg rohes Produkt erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung weiter verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 1.17 (d, J=7Hz, 3H), 4.10 (m, IH), 4.70 (m, IH).

B. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-3-methyl-2-propanolester

MorpholinocarbonylPheNle (113 mg, Beispiel 63) wurde unter Verwendung der in Beispiel 58 beschriebenen Standard-DEC-Reaktion an HCl-Nor-C-Sta-3-methyl-2-propanolester (89 mg) gekuppelt. Das rohe Produkt wurde chromatographiert (19:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 79 mg reines Produkt als eine Mischung der Diastereomeren am Ester-methyl erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.13 (d, J=6Hz, 3H), 4.15 (m, IH), 4.71 (m, IH) .

BEISPIEL 84

MorpholinocarbonylPheS-MeCysnor-C-Sta-i-butylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHlMOH; und Z¹ =CH₂CH(CH₃ )₂ )

A. Nor-PhenylSta-i-butylester

Eine Lösung von N-Boc-2(R)-hydroxy-3(S)-amino-4-phenylbutanitril (1.0 g) in 40 ml Isobutylalkohol wurde mit wasserfreier HCl gesättigt und wurde während 18 h bei RT gerührt. Die Lö-

113

sung wurde eingeengt, und der Rückstand wurde mit 100 ml 0.IN HCl verdünnt. Nach Rühren während 15 Minuten wurde die Lösung 2 χ mit 100 ml Ether gewaschen. Die wäßrige Phase wurde basisch gestellt und mit 2 χ 100 ml EtOAc extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über MgSO4 getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt, wodurch 0.43 g rohes Produkt erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 0.93 (d, J=6Hz, 3H), 3.34 (m, IH), 3.97 (m, 2H), 4.07 (d, J=3Hz, IH).

B. Nor-C-Sta-i-butylester

Eine Mischung von 95 mg Nor-PhStaOiBu und 190 mg 10% Rh/C in 5 ml MeOH wurde während 36 h bei 50 psi hydriert. Die Mischung wurde durch Celit filtriert und eingeengt. Der Rückstand wurde in 50 ml 0.IN HCl gelöst und mit 2 χ 50 ml Ether gewaschen. Die wäßrige Phase wurde basisch gestellt und mit 2 χ 50 ml EtOAc extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über MgSO4 getrocknet, filtriert und eingeengt, wodurch 74 mg rohes Produkt erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 0.92 (d, J=6Hz, 3H), 4.03 (m, 2H).

C. MorpholinocarbonylPheS-MeCysnor-C-Sta-i-butylester MorpholinocarbonylPheSMeCys (113 mg, Beispiel 58) wurde unter Verwendung des in Beispiel 76 beschriebenen DEC-Verfahrens an Nor-C-StaOiBu (70 mg) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (19:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 127 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 0.95 (d, J=6Hz, 3H), 2.13 (s, 3H), 3.95 (m, 2H), 4.43 (m, 2H).

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-114-

Beispiel 85

MorpholinocarbonylPheSMeCysnor-C-Sta-t-butylester (I, Z= Morpholinocarbonylamino; H=Phenyl; Q=H; R₂=CH-SGH₂-; X= Cyclohexyl; W=CH///OH; Z^COgCiCH-)-)

A* ITor-PhenylSta-t-butylester

Das Verfahren zur Herstellung von UorPhStaOiBu (Beispiel 84) wurde benutzt mit 3*0 g Hitril in 200 ml t-Butanol. Dies lieferte nach der Aufarbeitung 184 mg rohes Produkt, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. IJlIR (300 IiHIz, CDCl-. £ (s, 9HO, 3.64 (m, 1H), 3.83 (d, J=3Hz, 1H).

B. Nor-C-Sta-t-butylester

Uor-PheStaOtBu (75 mg) wurde wie in Beispiel 84 hydriert, wodurch nach der Aufarbeitung 64 mg rohes Produkt erhalten wurden. HTiR (300 IvMz, CDCl₃) f 1.32 (s, 9H), 3.47 (m, 1H), 3.18 (br, 1H).

C, MorpholinocarbonylPheS-MeCysnor-C-Sta-t-butylester

HorpholinocarbonylPheSileCys (97 mg, Beispiel 58) wurde unter Verwendung des in Beispiel 76 beschriebenen DEC-Verfahrens an 60 mg ITor^C-StaOtBu gekuppelt. Das rohe Material wurde Chromatograph!ert (19:1 CHoCl₉:HeOH), wodurch 50 mg reines

Produkt erhalten wurde. HUR (300 IvIHz, CDCl₃) cT 1.35 (s, 9H), 2.13 (s, 3H), 3-98 (m, 1H), 4-30 (m, 1H), 4.57 (m, 2H).

1 6 2 5 *

-114a-

Beispiel 86

MorpholinocarbonylPheS-MeCysnor-C-Sta-N-niethylamid (I, Z= Morpholinocarbonylamino; MüPhenyl; Q=H; R₂=GH-SCH₂; X= Cyclohexyl; W=OH///OH; und Z¹=COKHCH₃)

Ä. Boc-nor-C-Sta-li-methylamid

Boc-nor-C-Sta (0.25 g) wurde unter Vervrendung der in Beispiel 55 beschriebenen Standard-DCC-Reaktion an 57 mg Methylamin-HCl

115

gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (2:1 EtOAcrHex), wodurch 0.16 g reines Produkt erhalten wurde. NMR {300 MHz, CDCl₃) δ 1.41 (s, 9H), 2.82 (d, J=5Hz, 3H), 3.85 (m, IH).

B. Nor-C-Sta-N-methylamid

Boc-nor-C-StaNHMe (0.16 g) wurde unter Verwendung von HCl in Dioxan wie in Beispiel 63 beschrieben von der Schutzgruppe befreit, wodurch 0.13 g rohes Salz erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 2.62 (s, 3H), 3.97 (d, J=4Hz, IH).

C. MorpholinocarbonylPheS-MeCysnor-C-Sta-N-methylamid

MorpholinocarbonylPheSMeCys (98 mg, Beispiel 58) wurde unter Verwendung des in Beispiel 58 beschriebenen DEC-Verfahrens an 73 mg HCl-nor-C-StaNHMe gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (19:1 CH2CI2 :EtOH), wodurch 52 mg Produkt als eine Mischung der SMCys-Epimeren erhalten wurden. NMR (ein Isomer) (300 MHz, CDCl₃) δ 2.02 (s, 3H), 2.79 (d, J=5Hz, 3H), 4.29 (m, IH), 4.57 (m, 2H).

BEISPIEL· 87

MorpholinocarbonylPheS-MeCysnor-Ph-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂; X=Phenyl; W=CHiMOH; Z^1-=CO₂CH(CH₃ >2 )

A. Nor-Phenyl-Sta-i-propylester

Nor-Ph-StaOiPr wurde aus 118 mg des Nitrils in analoger Weise wie der Isobutylester (Beispiel 84) hergestellt. Dies ergab 89 mg rohes Produkt, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.26 (d, J=7Hz, 6H), 3.30 (m, IH), 4.01 (d, J=2Hz, IH), 5.10 (m, IH).

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B. MorpholinocarbonylPheS-MeCysnor-phenyl-Sta-

i-propylester

MorpholinocarbonylPheSMeCys (0.96 g, Beispiel 58) wurde unter Verwendung des in Beispiel 76 beschriebenen DEC-Verfahrens an 0.55 g Nor-PhStaOiPr gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (19:1 CH₂CI2 :MeOH), wodurch 0.91 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.18 (d, J=7Hz, 3H), 1,21 (d, J=7Hz, 3H), 2.00 (s, 3H), 4.41 (m, 2H), 4.49 (m, IH), 5.00 (m, IH).

BEISPIEL 88

MorpholinocarbonylO-MeTyrNlenor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinocarb'onylamino; M=p-Methoxyphenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHInOH; und Z¹ =CO₂CH(CH₃ )₂ )

A. BocO-MeTyr-methy!ester

Eine Lösung von 7.3 g BocTyr in 100 ml MeOH wurde mit einem großen Oberschuß von Diazomethan in 250 ml Ether behandelt. Nach 24 h und 48 h wurde weiteres Diazomethan zugesetzt. Nach insgesamt 72 h wurde die Reaktion mit HOAc abgebrochen, die Reaktionsmischung eingeengt, mit 100 ml EtOAc verdünnt und mit 2 χ 50 ml gesättigtem NaHCO₃ gewaschen, die organische Phase wurde über MgSO<i getrocknet, filtriert und eingeengt. Der Rückstand wurde chromatographiert (9:1 Hex:EtOAc), wodurch 6.4 g reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1.42 (s, 9H), 3.69 (s, 3H), 3.76 (m, 3H), 4.51 (m, IH) .

B. O-MeTvr-methylester-hydrochlorid.

BocO-MeTyrOMe (6.4 g) wurde unter Verwendung von HCl in Dioxan wie in Beispiel 63 beschrieben von der Schutzgruppe befreit. Dies lieferte 5.1 g rohes Produkt, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 3.76 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 4.19 (m, IH).

117

C. O-MeTyr-methylester-isocyanat

In eine Suspension von 5.1 g HCl-O-MeTyrOMe in 150 ml Toluol wurde Phosgen durchgeleitet, während die Temperatur langsam auf Rückflußtemperatur erhöht wurde. Nachdem sich alles Material aufgelöst hatte, wurde die Lösung gekühlt und im Vakuum zu 7.0 g rohem Isocyanat eingeengt. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3.85 (s, 6H), 4.27 (m, IH), 6.89 (d, J=8Hz, 2H), 7.14 (d, J=8Hz, 2H).

D. MorpholinocarbonyIQ-MeTyr-methy!ester

Zu einer Lösung von 5.0 g O-MeTyrOMe-isocyanat in 150 ml CH2CI2 wurde bei 0° 2,4 g Morpholin zugesetzt. Nach Rühren während 15 Min. wurde die Lösung eingeengt und der Rückstand wurde chromatographiert (EtOAc), wodurch 3.6 g reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3.66 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 4.67 (m, IH), 4.91 (d, J=8Hz, IH).

E. MorpholinocarbonylO-MeTyr

MorpholinocarbonylO-MeTyrOMe (3.6 g) wurde wie in Beispiel beschrieben verseift, wodurch 3.0 g rohe Säure erhalten wurde, die ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3.78 (s, 3H), 4.61 (m, IH), 6.82 (d, J=8Hz, 2H), 7.08 (d, J=8Hz, 2H).

F. MorpholinocarbonyIQ-MeTyrNle-benzy!ester

MorpholinocarbonylO-MeTyr (0.50 g) wurde unter Verwendung der Standard-DEC-Reaktion (Beispiel 58) an 0.42 g HCl-NIeOBn gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (19:1 CH2CI2:MeOH), wodurch 0.77 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3.76 (s, 3H), 4.50 (m, 2H), 5.13.

G. MorpholinocarbonylQ-MeTyrNle

Eine Mischung von 0.77 g MorpholinocarbonylO-MeTyrNleOBn und 0.38 g 10% Pd/C in 60 ml EtOH wurde 3 h unter 50 psi hydriert. Die Mischung wurde durch Celit filtriert und im Vakuum eingeengt, wodurch 0.63 rohe Säure erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3.72 (s, 3H), 4.44 (m, IH), 4.63 (m, IH).

ιιε

H. MorpholinocarbonylO-MeTyrNlenor-C-Sta-i-

propylester

MorpholinocarbonylO-MeTyrNle (74 mg) wurde unter Verwendung der in Beispiel 55 beschriebenen Standard-DCC-Reaktion an mg HCl-nor-C-StaOiPr gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (19:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 98 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3.78 (s, 3H), 4.21 (m, IH), 4.42 (m, 2H), 5.03 (m, IH).

BEISPIEL 89

MorpholinocarbonylO-MeTyrS-MeCysnor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=p-Methoxyphenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHi UOH; und Z^CO₂CH(CH₃ )₂ )

A. MorpholinocarbonylO-MeTyrS-MeCys-methylester MorpholinocarbonylO-MeTyr (0.25 g, Beispiel 36) wurde unter Verwendung der Standard-DEC-Reaktion wie in Beispiel 58 beschrieben an 0.36 g HCl-S-MeCysOMe gekuppelt. Dies lieferte 0.32 g rohes Produkt, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.01 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 4.55 (m, IH), 4.65 (m, IH).

B . MorpholinocarbonylO-MeTyrS-MeCys.

MorpholinocarbonylO-MeCysOMe (0.32 g) wurde wie in Beispiel 55 beschrieben verseift, wodurch 0.28 g rohe Säure erhalten wurde, die ohne Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.11 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 4.69 (m, IH), 4.77 (m, IH) .

C. MorpholinocarbonylO-MeTyrS-MeCysnor-C-Sta-i-

propylester

MorpholinocarbonylO-MeCys (0.17 g) wurde unter Verwendung der in Beispiel 58 beschriebenen Standard-DEC-Reaktion an 0.10 g HCl-nor-C-StaOiPr gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (19:1 CH₂Cl₂IEtOH), wodurch 0.18 g reines Produkt

erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.08 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 4.39 (m, 3H), 5.01 (m, IH).

BEISPIEL 90

MorpholinocarbonylO-MeTyrNlenor-C-Sta-methylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=p-Methoxyphenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHiIiOH; und Z¹ =CO₂ CH₃ )

MorpholinocarbonylTyrNle (100 mg, Beispiel 88) wurde unter Verwendung der Standard-DEC-Reaktion (Beispiel 58) an 65 mg HCl-nor-C-StaOMe (Beispiel 55) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (19:1 CH₂CI2 :MeOH), wodurch 121 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3.80 (s, 3H), 3.82 <s, 3H), 4.26 (m, IH), 4.45 (m 2H).

BEISPIEL 91

MorpholinocarbonylO-MeTyrNlenor-C-Sta-N-methyIamid (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=p-Methoxyphenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHNiOH; und Z¹=CONHCH₃)

MorpholinocarbonylO-MeTyrNle (132 mg, Beispiel 88) wurde unter Verwendung der in Beispiel 55 beschriebenen Standard-DCC-Reaktion an 78 mg HCl-nor-C-StaNHMe (Beispiel 86) gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (9:1 CH₂CI2:MeOH), wodurch 155 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.79 (d, J=5Hz, 3H), 3.75 (s, 3H), 4.22 (m, IH), 4.30 (m, 2H).

120

BEISPIEL 92

MorpholinocarbonylTyrS-MeCysnor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=p-Hydroxyphenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂-; X=Cyclohexyl ? W=CHiHOH; und Z¹ =CO₂CH(CH₃ )₂ )

A. BocS-MeCysnor-C-Sta-i-propylester

BocS-MeCys {1,1 g) wurde unter Verwendung von DEC wie in Beispiel 76 beschrieben an 1.0 g Nor-C-StaOiPr gekuppelt, wodurch 1.8g rohes Material erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1.25 (d, J=6Hz, 6H), 1.43 (s, 9H), 2.14 (s, 3H), 4.08 (m, IH), 4.43 (in, IH) , 4.98 (m, IH) .

B. S-MeCysnor-C-Sta-i-propylester-hydrochlorid BocS-MeCys-nor-C-StaOiPr (0.42 g) wurde unter Verwendung von HCl in Dioxan wie in Beispiel 63 beschrieben von der Schutzgruppe befreit, wodurch 0.38 g rohes Salz erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde..NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 1.19 (d, J=6Hz, 3H), 1.20 (d, J=6Hz, 3H), 2.16 (s, 3H), 3.95 (B₁ IH), 4.20 (m, IH), 4.83 (m, IH).

C. Morpholinocarbonyl-O-benzylTyr

Zu einer Lösung von 0.5 g O-BenzylTyr in 20 ml Dioxan und 5 ml 2N NaOH wurde 0.31 g Morpholinocarbonylchlorid zugesetzt, und die erhaltene Mischung wurde über Nacht bei RT gerührt. Die Lösung wurde eingeengt und der Rückstand wurde mit 200 ml H20 verdünnt und mit 2 χ 200 ml Ether gewaschen. Die wäßrige Phase wurde angesäuert und mit 2 χ 200 ml CHCI3 extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über MgSO4 getrocknet, filtriert und zu 0.18 g rohem Produkt eingeengt, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 4.13 (m, IH), 5.04 (s, 2H).

V ό

121

D. MorpholinocarbonylTvr

Eine Mischung von 0.18 g MorpholinocarbonylO-benzylTyr und 0.18 g 10% Pd/C in 20 ml MeOH wurde 18 h unter 50 psi hydriert. Die Mischung wurde durch Celit filtriert und eingeengt, wodurch 0.14 g rohe Säure erhalten wurde, die ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 4.04 (m,lH), 6.58 (d, J=8Hz, 2H), 6.95 (d, J=8Hz, 2H).

E. MorpholinocarbonylTyrS-MeCysnor-C-Sta-ipropylester

MorpholinocarbonylTyr {0.13 g) wurde unter Verwendung der Standard-DEC-Reaktion (Beispiel 58) an 0.27 g HCl-S-MeCysnor-C-StaOiPr gekuppelt. Das rohe Produkt wurde chromatographiert (9:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 0.15 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.24 (d, J=6Hz, 3H), 1.26 (d, J=6Hz, 3H), 4.41 (m, 3H), 5.02 (m, IH).

BEISPIEL 93

Morpholinocarbonyl-o-TyrS-MeCysnor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=o-Hydroxyphenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHmOH; und

Zi=CO₂CH(CH₃ )₂ )

A. Boc-oTyr

Zu einer Mischung von 1.1 g o-Tyr in 15 ml THF und 15 ml 20%ige Na₂CO₃ wurden 2.0 g Boc₂O zugesetzt, und die resultierende Mischung wurde 3 h bei RT gerührt. Die Reaktionsmischung wurde mit 30 ml H₂O verdünnt, angesäuert und mit 3 χ 50 ml CH₂Cl₂ extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über MgSO4 getrocknet, filtriert und eingeengt. Der Rückstand wurde aus Ether-Hexan umkristallisiert, wodurch 1.2 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 1.32 (s, 9H), 4.13 (m IH).

,; :, Ί 5 B

122

B. Boc-0-Benzyl-o-Tyr-benzy!ester

Eine Mischung von 1.2 Boc-oTyr, 1.1 ml Benzylbromid und 1.3 g K2CO3 in 40 ml Aceton wurde während 20 h zum Rückfluß erhitzt. Zusätzliche Reagentien (Benzylbromid 0.25 ml, K2CO3 0.36 g) wurden zugesetzt und das Erhitzen wurde während 2 h fortgesetzt. Die gekühlte Mischung wurde mit 40 ml H20 verdünnt und mit 3 χ 75 ml EtOAc extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit 3 χ 50 ml H2O gewaschen, über MgSO4 getrocknet, filtriert und eingeengt. Chromatographie (4:1 HextEtOAc) lieferte 1.25 reines Produkt. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.38 (s, 9H), 4.58 (m, IH), 5.06 (m, 4H).

ύ

C. O-Benzyl-o-Tvr-benzylester-hydrochlorid

BocO-Benzyl-o-Tyr-benzylester (1.25 g) wurde unter Verwendung von HCl in Dioxan wie in Beispiel 63 beschrieben von der Schutzgruppe befreit, wodurch 1.1 g rohes Salz erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 4.24 (m, IH), 5.02 (AB, 2H), 5.12 (s, 2H).

D. MorpholinocarbonylO-benzyl-o-Tyr-benzylester O-Benzyl-o-Tyr-benzylester (1.1 g) wurde in zum Rückfluß erhitztem Toluol wie in Beispiel 88 beschrieben mit Phosgen behandelt. Das rohe Isocyanat wurde in 15 ml CH2CI2 gelöst, auf 0° gekühlt und mit 0.35 g Morpholin behandelt. Die Lösung wurde 3 h bei RT gerührt und danach mit 50 ml EtOAc verdünnt und mit 15 ml 0.IN HCl und mit 2 χ 15 ml gesättigtem NaHCO3 gewaschen. Die organische Phase wurde über MgSO4 getrocknet, filtriert und eingeengt. Der Rückstand wurde chromatographiert (2:3 HexrEtOAc), wodurch 0.60 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.65 (m, IH), 5.06 (AB, 2H), 5.07 (s, 2H).

E. MorpholinocarbonyΙΟ-benzyl-o-Tyr

Eine Mischung von 0.60 g Morpholinocarbonyl-O-benzyl-o-Tyrbenzylester und 2 g K2CO₃ in 5 ml H2O und 15 ml MeOH wurde 18 h zum Rückfluß erhitzt. Die Lösung wurde eingeengt, und der Rückstand wurde mit 30 ml H2O verdünnt und mit 2 χ 25 ml

123

Ether gewaschen. Die wäßrige Schicht wurde angesäuert und mit 3 χ 50 ml EtOAc extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über MgSO4 getrocknet, filtriert und eingeengt, wodurch 0.35 g rohe Säure erhalten wurde. NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 4.37 (m, IH), 5.12 (s, 2H).

F. Morpholinocarbony1o-Tyr

Eine Mischung von 0.35 g MorpholinocarbonylO-benzyl-o-Tyr und 0.35 g 10% Pd/C in 30 ml MeOH wurde 18 h unter 50 psi hydriert. Die Mischung wurde durch Celit filtriert und eingeengt, wodurch 0.33 g rohes Material erhalten wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 4.16 (m, IH).

G. Morpholinocarbonyl-o-TyrS-MeCysnor-C-Sta-ipropylester

Morpholinocarbonyl-o-Tyr (0.10 g) wurde unter Verwendung von DEC wie in Beispiel 76 beschrieben an 0.12 g S-MeCys-nor-C-StaOiPr gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (9:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 0.13 g reines Produkt als eine Mischung an der o-Tyr-Position erhalten wurde. NMR (ein Isomeres) (300 MHz, CDCl₃) δ 1.98 (s, 3H), 4.36 (m, 3H), 4.97 (m, IH).

BEISPIEL 94

Morpholinocarbonyl-p-ClTyrS-MeCysnor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=p-Chlorphenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHHiOH; Z¹ =CO₂CH(CH₃ )₂ )

A. Morpholinocarbony1-p-ChlorTyr

Zu einer Lösung von 0.5 g p-ChlorTyr in 5 ml 2N NaOH und 20 ml Dioxan wurde wie in Beispiel 92 beschrieben 0.36 g Morpholinocarbonylchlorid zugesetzt, wodurch 0.26 g rohes Produkt erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 4.65 (m, IH), 6.97 (d, J=8Hz, 2H), 7.19 (d, J=8Hz, 2H).

262 S β 3

124

B. Morpholinocarbonyl-p-ClTyrS-MeCysnor-C-Sta-i-

propylester

Morpholinocarbonyl-p-ClTyr (70 mg) wurde unter Verwendung von DEC wie in Beispiel 76 beschrieben an 82 mg S-MeCysnor-C-StaOiPr gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (19:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 118 mg reines Produkt als eine Mischung der Isomeren an der pCTyr-Position erhalten wurden. NMR (ein Isomeres) (300 MHz, CDCl₃) δ 1.97 (s, 3H), 4.37 (m, 3H), 5.96 (n₍ IH).

BEISPIEL 95

2-Morpholino-3-phenylpropionylNlenor-C-Sta-ipropylester (I, Z=Morpholino; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHiMOH; und Zi=CO₂CH(CH₃ )₂ )

A. Ethyl-2-morpholino-3-phenylpropionat

Eine Lösung von 2.0 g Ethyl-2-brom-3-phenyl-propionat und 2.8 g Morpholin in 5 ml DMF wurde über Nacht bei RT gerührt. Die Mischung wurde mit 75 ml l%iger HCl verdünnt und mit 3 χ 50 ml Ether gewaschen. Die wäßrige Phase wurde basisch gestellt und mit 3 χ 100 ml EtOAc extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über MgSO4 getrocknet, filtriert und eingeengt. Der Rückstand wurde chromatographiert (35% EtOAcrHex), wodurch 0.8 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.12 (t, J=7Hz, 3H), 3.36 (m, IH), 4.04 (m, 2H).

B . 2-Morpholino-3-phenylpropionsäure

Eine Lösung von 0.65 g Ethylester von Beispiel 95A in 3.7 ml IN NaOH und 5 ml MeOH wurde 3 h zum Rückfluß erhitzt. Die Lösung wurde mit wasserfreier HCl angesäuert und eingeengt. Der Rückstand wurde vollständig im Vakuum getrocknet. NMR (300 MHz, DMSO-ds) δ 3.90 (br, 4H), 4.15 (m, IH).

ι-ίο

C. 2-Morpholino-3-phenylpropionylNle-benzylester

Das Produkt von Beispiel 95B (0.35 g) wurde unter Verwendung von DEC wie in Beispiel 58 beschrieben mit 0.33 g NleObenzylester gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (39:1 CH₂Cl₂ :MeOH), wodurch 0.45 g Produkt als eine Mischung der Isomeren an der MPP-Position erhalten wurde. NMR (ein Isomeres) (300 MHz, CDCl₃) δ 3.68 (m, 4H), 4.57 (m, IH), 5.17 (AB, 2H).

D. 2-Morpholino-3-phenylpropionylNle

Das Produkt von Beispiel 95C (0.55 g) wurde durch Hydrierung (40 psi) während 2 h mit 0.28 g 10% Pd/C in 50 ml MeOH von der Schutzgruppe befreit. Die Mischung wurde durch Celit filtriert und eingeengt, wodurch 0.41 g rohe Säure erhalten wurde, die ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 3.74 (m, 4H), 4.38 (m, IH).

E. 2-Morpholino-3-phenylpropionylNlenor-C-Sta-ipropylester

Das Produkt von Beispiel 95D (54 mg) wurde unter Verwendung von DEC wie in Beispiel 58 beschrieben an 43 mg HCl-nor-C-StaOiPr gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (19:1 CHiCI2 :MeOH), wodurch 49 mg reines Produkt und 47 mg des MPP-Diastereomeren erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 4.12 (m, IH), 4.39 (m, IH), 5.00 (m, IH).

BEISPIEL 96

2-(4-Methylpiperazino)-3-phenylNlenor-C-Sta-ipropylester (I, Z=4-Methylpiperazino; M=Phenyl; X=Cyclohexyl; Q=H; R₂=n-Butyl; W=CH)HOH; und Z^CO₂CH(CH₃ )₂ )

A. 2-(4-Methylpiperazino)-3-phenylpropionsäure-

ethylester

Ethyl-2-brom-3-phenylpropionat (1.95 g) wurde wie in Beispiel 95 beschrieben mit 3.05 g N-Methylpiperazin behandelt, wo-

- ¹J -i. J U ^ 126

durch nach Chromatographie (9:1 CH2Cl2:MeOH) 0.30 g reines Produkt erhalten wurde.NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.10 (d, J=7Hz, 3H), 2.26 (s, 3H), 3.37 (m, IH), 4.00 (m, 2H).

B. 2-(4-Methylpiperazino)-3-phenylpropionsäure

Eine Mischung von 0.56 g des Ethylesters von Beispiel 96A in 31 ml IN NaOH und 20 ml EtOH wurde 16 h zum Rückfluß erhitzt. Wasserfreie HCl wurde durch die Mischung geleitet, und die Mischung wurde eingeengt. Der Rückstand wurde in warmen iPrOH-MeOH (1:1) gelöst und filtriert, und das Filtrat wurde eingeengt, wodurch 0.55 g rohes Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) 2.72 (s, 3H), 3.80 (m, IH).

C. 2-(4-Methylpiperazino)-3-phenylpropionylNlebenzvlester

Das Produkt von Beispiel 96B (0.55 g) wurde unter Verwendung des in Beispiel 58 beschriebenen DEC-Verfahrens an 0.51 g NIeOBn gekuppelt. Das rohe. Material wurde chromatographiert (19:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 0.42 g Produkt als Mischung von MPPP-Epimeren erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.27 (s, 3H), 2.85 (m, IH), 3.26 (m, IH), 4.54 (m IH).

D. 2-(4-Methylpiperazino)-3-phenvlpropionylNle

Das Produkt von Beispiel 96C (0.42 g) wurde wie in Beispiel 95 beschrieben von der Schutzgruppe befreit, wodurch 0.31 g der rohen Säure erhalten wurde, die ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-ds) δ 2.48 (s, 3H), 4.32 (m, IH).

E. 2-(4-Methylpiperazino)-3-phenylpropionyINIenor-C-Sta-i-propylester

Das Produkt von Beispiel 96D (76 mg) wurde unter Verwendung von DEC (Beispiel 58) an 60 mg HCl-nor-C-StaOiPr gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (9:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 30 mg und 33 mg der MPPP-Epimeren erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.35 (s, 3H), 4.16 (m, IH), 4.40 (m, IH), 5.01 (m, IH).

A O K ft

12"

BEISPIEL 97

2-(3,5-Dioxomorpholino)-3-phenylpropionylNlenor-C-Sta-i-propylester (I, Z=3,5-Dioxomorpholino; M=Phenyl; Q=H; R2=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHKiOH; und Zi

A. 2-(3,5-Dioxomorpholino)-3-phenylpropionsäurebenzylester

Zu einer Lösung von 0.21 g HCl-PheO-benzylester und 0.10 ml TEA in 10 ml CH2 CI2 wurden 80 mg Glycolsaureanhydrid zugesetzt. Die Lösung wurde 2 h bei RT gerührt. Die Mischung wurde mit 200 ml EtOAc verdünnt mit 2 χ 20 ml 0.IN HCl, 20 ml H2O und 20 ml Kochsalzlösung gewaschen. Die organische Phase wurde über MgSO4 getrocknet, filtriert und zu 0.32 g rohem Produkt eingeengt. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3.14 (m, 2H), 4.12 (m, 4H), 4.95 (m, IH), 5.13 (AB, 2H).

Eine Lösung der obigen rohen Säure und 76 mg Pyridin in 5 ml Ac2O wurde 18 h auf 100⁰C erhitzt. Die Reaktionsmischung wurde zu 100 ml H2O zugesetzt und mit 2 χ 100 ml EtOAc extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit 20 ml 0.IN HCl, ml 0.IN NaOH und 20 ml H2O gewaschen. Die organische Phase wurde über MgSO4 getrocknet, filtriert und eingeengt, wodurch 0.23 g rohes Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.18 (2AB, 4H), 5.19 (AB, 2H), 5.53 (m, IH).

B. 2-(3,5-Dioxomorpholino)-3-phenylpropionsäure Das Produkt von Beispiel 97A wurde wie in Beispiel 95 beschrieben von der Schutzgruppe befreit, wodurch 0.15 g rohes Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 4.32 (AB, 4H), 5.30 (m, IH).

C. 2-(3,5-Dioxomorpholino)-3-phenylpropionylNlebenzylester

Das Produkt von Beispiel 97B (0.15 g) wurde unter Verwendung der in Beispiel 58 beschriebenen Standard-DEC-Reaktion an

- J

0.16 g HCL-NleOBenzylester gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (4:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 0.14 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.18 (AB, 4H), 4.63 (m, IH), 5.16 (AB, 2H).

D. 2-(3,5-Dioxomorpholino)-3-phenvlpropionylNle

Das Produkt von Beispiel 97C (0.14 g) wurde wie in Beispiel 95 beschrieben von der Schutzgruppe befreit, wodurch 0.12 g rohes Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 4.24 (AB, 4H), 4.62 (m, IH), 5.17 (m, IH).

E. 2-(3.5-Dioxomorpholino)-3-phenylpropionylNlenor-C-Sta-i-propylester

Das Produkt von Beispiel 97D (0.12 g) wurde unter Verwendung der in Beispiel 58 beschriebenen Standard-DEC-Reaktion an HCl-Nor-C-StaOiPr gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (19:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 88 mg reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.18 (η, IH), 4.32 (s, 4H), 4.48 (m, IH), 5.02 (m, IH).

BEISPIEL 98

2-(3-Oxomorpholino)-3-phenylpropionylNlenor-C-Stai-propylester (I, Z=3-0xomorpholino; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHMiOH; und Zi=CO₂CH(CH₃ )₂ )

A. N-GIycoloylphenyIaIanin-benzylester

Zu einer Lösung von 2.23 g des Acylierungsprodukts zwischen PheObenzylester und Glycolsaureanhydrid (Beispiel 96) in 6.6 ml THF wurde bei 0° langsam 1.1 Äqu. BH₃-DMS zugesetzt, und die erhaltene Lösung wurde 5 h gerührt. H2O (5 ml) wurde tropfenweise zugesetzt gefolgt von 5 ml 0.IN HCl. Die Mischung wurde mit 150 ml H2O versetzt, angesäuert und mit 2 χ 150 ml EtOAc extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit 2 χ 30 ml 0.IN NaOH und 30 ml H2O gewaschen. Die organische Phase wurde über MgSO4 getrocknet, filtriert und eingeengt.

129

Der Rückstand wurde chromatographiert {39:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 0.43 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3.99 (AB, 2H), 4.97 (m, IH), 5.15 (AB, 2H).

B. N-(O-Mesylqlycolyl)phenylalanin-benzylester

Zu einer Lösung von 0.41 g des obigen Alkohols und 0.41 g TEA in 10 ml CH2CI2 wurde bei 0° tropfenweise 0.11 ml Mesylchlorid zugesetzt, und die resultierende Lösung wurde 1 h bei 0° gerührt. Die Lösung wurde mit 200 ml EtOAc verdünnt und mit 30 ml 0.1N HCl und 0.IN NaOH gewaschen. Die organische Phase wurde über MgSO4 getrocknet, filtriert und eingeengt, wodurch 0.25 g rohes Mesylat erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 2.92 (s, 3H), 4.29 (m, 2H), 4.92 (m, IH), 5.13 (AB, 2H).

C. N-(Jodethoxyacetyl)phenylalanin-benzylester

Eine Mischung von 0.25 g des obigen Mesylats und 0.23 g NaJ in 20 ml Aceton wurde 6 h zum Rückfluß erhitzt. Die Reaktionsmischung wurde in 100 ml H2O gegossen und mit 2 χ 100 ml EtOAc extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit 50 ml Kochsalzlösung gewaschen, über MgSO^ getrocknet, filtriert und eingeengt. Das rohe Material wurde chromatographiert (9:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 0.35 g rohes Jodid erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3.96 (s, 2H), 4.93 (m, IH), 5.11 (AB, 2H).

D. 2-(3-Oxomorpholino)-3-phenylpropionsäurebenzylester

Zu einer Lösung von 0.16 g des obigen Jodids in 3 ml THF wurde bei -78° tropfenweise 1.1 Äqu. KNTMS2 zugesetzt, und die resultierende Lösung wurde 5 h bei -78° gerührt. NH*Cl (Im 1) wurde langsam zugesetzt, und die Mischung wurde in 100 ml H20 gegossen, angesäuert und mit 2 χ 100 ml EtOAc extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit 20 ml Kochsalzlösung gewaschen, über MgSO4 getrocknet, filtriert und eingeengt. Der Rückstand wurde chromatographiert (9:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 71 mg reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.10 (AB, 2H), 5.19 (AB, 2H), 5.27 (m, IH) .

"I 6 Z 5 Z 3

130

E. 2-(3-Oxomorpholino)-3-phenylpropionsäure

Das Produkt von Beispiel 98C (96 mg) wurde wie in Beispiel beschrieben von der Schutzgruppe befreit, wodurch 70 mg rohe Säure erhalten wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 3.92 {AB,2H), 5.04 (m, IH).

F. 2-{3-Oxomorpholino)-3-phenylpropionylNle benzylester

Das Produkt von Beispiel 98D (90 mg) wurde unter Verwendung der in Beispiel 58 beschriebenen Standard-DEC-Reaktion an 98 mg NleO-benzylester gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (39:1 CH2CI2:MeOH), wodurch 127 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.14 (s, 2H), 5.54 (m IH), 5.16 (m, 2H), 5.32 (m, IH).

G. 2-(3-Oxomorpholino)-3-phenylpropionylNle

Das Produkt von Beispiel 98E (127 mg) wurde wie in Beispiel 95 beschrieben von der Schutzgruppe befreit, wodurch 114 mg rohe Säure erhalten wurden, die ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-ds) δ 4.12 (br, 2H), 4.52 (br, IH).

H. 2-{3-Oxomorpholino)-3-phenylpropionylNlenor-C-Sta-

i-propylester

Das Produkt von Beispiel 98F (114 mg) wurde unter Verwendung der DEC-Reaktion (Beispiel 58) an 92 mg HCl-Nor-C-StaOiPr gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (19:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 13 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 4.42 (m, 2H), 5.02 (m, 2H).

131

BEISPIEL 99

3-OxomorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-i-propylester (I, Z=3-0xomorpholinocarbonylamino; Q=H; M=Phenyl; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHm OH; und Zi=CO₂CH(CH₃ )σ )

A. 3-OxomorpholinocarbonylPhe-benzylester

Zu einer Suspension von 79 mg mit Pentan gewaschenem NaH in ml THF wurde eine Lösung von 200 mg 3-Ketomorpholin in 10 ml THF zugesetzt. Die resultierende Mischung wurde 5 Min. bei RT gerührt und dann auf 0° gekühlt. Eine Lösung von 584 mg PheOBn-isocyanat in 15 ml THF wurde tropfenweise zugesetzt, und die resultierende Lösung wurde bei 0° während 1 h gerührt. Die Reaktionsmischung wurde in 100 ml H20 gegossen und mit 2 χ 100 ml EtOAc extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit 20 ml 0.IN HCl und 20 ml 0.IN NaOH gewaschen, über MgSO4 getrocknet, filtriert und eingeengt. Das rohe Material wurde chromatographiert (4:1 EtOAc: CH2CI2), wodurch 132 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.24 (s, 2H), 4.82 (m, IH), 5.18 (AB, 2H).

B. 3-OxomorpholinocarbonylPhe

Das Produkt von Beispiel 99A (0.64 g) wurde wie in Beispiel 95 beschrieben von der Schutzgruppe befreit, wodurch 0.44 g rohe Säure erhalten wurde. NMR (300 MHz, DMSO-ds) δ 4.22 (s, 2H), 4.51 (m, IH).

C. 3-OxomorpholinocarbonylPheNle-benzylester

Das Produkt von Beispiel 99B (0.44 g) wurde unter Verwendung der Standard-DEC-Reaktion (Beispiel 58) an 0.41 g NIeOBn gekuppelt, wodurch 0.73 g rohes Material erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.25 (m, 2H), 4.61 (m, IH), 4.16 (m, 2H).

13;

D. 3-OxomorpholinocarbonylPheNle

Das Produkt von Beispiel 99C (0.72 g) wurde wie in Beispiel 95 beschrieben von der Schutzgruppe befreit, wodurch 0.56 g rohes Material erhalten wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 4.19 (m, 2H), 4.65 (m, 2H).

E. S-OxomorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-ipropylester

Das Produkt von Beispiel 99D (125 mg) wurde unter Verwendung von DEC (Beispiel 58) an 91 mg HCl-Nor-C-StaOiPr gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (19:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 73 mg Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 4.20 (m, 2H), 4.39 (m, IH), 4.52 (m, IH), 5.01 (m, IH).

BEISPIEL 100

MethoxyethylaminocarbonylPheNlenor-C-Sta-i-propylester (I, Z=CH₃O(CH₂)2NHCONH; M=Phenyl; Q=H; X=Cyclohexyl; R₂=n-Butyl; W=CHMiOH; und

)₂ )

A. MethoxyethylaminocarbonylPhe-benzylester

Zu einer gerührten Lösung von 0.20 g PheOBn-isocyanat in 10 ml CH₂Cl₂ wurden 59 mg O-Me-ethanolamin zugesetzt, und die Lösung wurde 1 h gerührt. Die Reaktionsmischung wurde mit 200 ml Ether verdünnt und mit 20 ml 0.IN HCl und 20 ml 0.IN NaOH gewaschen. Die organische Phase wurde über MgSO4 getrocknet, filtriert und eingeengt, wodurch 0.20 g rohes Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3.28 (s, 3H), 4.80 (m, IH), 5.11 (m, 2H).

B. MethoxyethylaminocarbonylPhe

Eine Mischung von 0.20 g des obigen Benzylesters und 0.10 g 10% Pd/C in 50 ml MeOH wurde während 2 h unter 50 psi hydriert. Die Mischung wurde durch Celit filtriert und eingeengt, wodurch 0.19 g rohes Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, DMSO-ds) δ 3.24 (s, 3H), 4.30 (m, IH).

133

C. MethoxyethylaminocarbonylPheNle-benzylester Das obige Phe-Derivat (0.19 g) wurde unter Verwendung des Standard-DEC-Verfahrens (Beispiel 58) an 0.14 g NIeOBn gekuppelt. Dies lieferte 0.23 g rohes Material, das ohne Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3.26 (s, 3H), 4.52 (m, 2H), 5.10 (m, 2H).

D. MethoxyethylaminocarbonylPheNle

Eine Mischung von 0.23 g der obigen Verbindung und 0.12 g 10% Pd/C in 50 ml EtOH wurde 2 h unter 50 psi hydriert. Die Mischung wurde filtriert und eingeengt, wodurch 0.16 g rohes Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 3.21 (s, 3H), 4.10 (m, IH), 4.41 (m, IH).

E. MethoxyethylaminocarbonylPheNlenor-C-Sta-ipropylester

Die obige Säure (0.17 g) wurde unter Verwendung der Standard-DEC-Reaktion (Beispiel 58) an 0.13 g HCl-Nor-C-Sta-OiPr gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (19:1 CHzCI2 :MeOH),wodurch 0.18 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3.28 (s, 3H), 4.32 (m, IH), 4.45 (m IH), 4.57 (m, IH), 5.03 (m, IH).

BEISPIEL· 101

HydroxyethylaminocarbonylPheNlenor-C-Sta-i-propylester (I, Z=HO(CH₂J₂NHCONH; M=Phenyl; Q=H; R₂ =nbutyl; X=Cyclohexyl; W=CHtHOH; und Zi=CO₂CH(CH₃J₂)

A. HydroxyethylaminocarbonylPhe-benzylester Zu einer Lösung von 0.50 g PheOBn-isocyanat in 10 ml CH₂Cl₂ wurde 0.12 g Ethanolamin zugesetzt, und die resultierende Lösung wurde 4 h gerührt. Die Mischung wurde mit 200 ml EtOAc verdünnt und mit 20 ml 0.IN HCl und 20 ml 0.IN NaOH gewaschen. Die organische Phase wurde über MgSO^ getrocknet, filtriert und eingeengt, wodurch 0.44 g rohes Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.79 (m, IH), 4.12 (m, 2H).

J J ι ) T· O F9.

134

B. t-ButyldimethyIsilyloxyethylaminocarbonylPhebenzylester

Zu einer Lösung von 0.44 g des obigen Alkohols in 10 ml DMF wurde 0.24 g t-Butyldimethylsilylchlorid und 0.22 g Imidazol zugesetzt. Nach 18 h wurde die Lösung zu 150 ml H2O zugesetzt und mit 2 χ 150 ml EtOAc extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit 30 ml H2O gewaschen, über MgSO4 getrocknet, filtriert und eingeengt. Der Rückstand wurde chromatographiert (39:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 0.50 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 0.89 (s, 9H), 4.98 (m, IH), 5.13 (m, 2H).

C. t-Buty!dimethylsilyloxvethylaminaearbonylPhe

Eine Mischung des obigen Benzylesters (0.18 g) und 0,09 g 10% Pd/C in 30 ml MeOH wurde 3 h bei 50 psi hydriert. Die Mischung wurde durch Celit filtriert und eingeengt, wodurch 0.13 g rohes Material erhalten wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 0.89 (s, 3H), 4.27 (m, IH).

D. t-Butyldimethylsilyloxyethylaminocarbonyl-PheNle-benzylester

Die obige Säure (0.13 g) wurde unter Verwendung des DEC-Verfahrens (Beispiel 58) an 96 mg NIeOBn gekuppelt. Chromatographie (19:1 CH2CI2:MeOH), wodurch 0.10 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 0.91 (s, 9H), 4.50 (m, 2H), 4.72 (m, IH), 5.11 (s, 2H).

E. t-ButyldimethylsilyloxyethylaminocarbonylPheNle Das obige Produkt wurde durch Hydrierung wie in Beispiel beschrieben von der Schutzgruppe befreit, wodurch 78 mg rohes Material erhalten wurden. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 0.88 (s, 9H), 4.00 (m, IH), 4.37 (m, IH).

F. t-ButyldimethylsilyloxyethylaminocarbonylPheNlenor-C-Sta-i-propylester

Die obige Säure (73 mg) wurde an 45 mg HCl-Nor-C-StaOiPr (DEC, Beispiel 58) gekuppelt, wodurch 116 mg rohes Produkt

13;

erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 0.86 (s, 9H), 4.38 (m, IH), 4.45 (m, IH), 5.02 (m, IH).

G. HydroxyethylaminocarbonylPheNlenor-C-Sta-i-

propylester

Das obige Material (116 mg) wurde durch Behandlung mit 1.5 Äqu. Bu4NF in 5 ml THF während 2 h von der Schutzgruppe befreit. Die Lösung wurde mit 200 ml EtOAc verdünnt und wurde mit 20 ml 0.IN HCl und 20 ml 0.IN NaOH gewaschen. Die organische Phase wurde über MgSO^ getrocknet, filtriert und eingeengt und der Rückstand wurde chromatographiert (9:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 63 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.41 (m, IH), 4.50 (m, IH), 4.74 (m, IH), 5.07 (m, IH).

BEISPIEL 102

MorpholinosulfonylPheNlenor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinosulfonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHHiOH; und Z¹ =CO₂CH(CH₃ )2 )

A. MorpholinsulfonylPheNle-benzylester

Eine Lösung von 0.29 g PheNleOBn, 0.40 g Morpholinosulfonylchlorid und 0.36 g TEA in 10 ml CH2CI2 wurde 16 h zum Rückfluß erhitzt. Zusätzliche Meßeinheiten der beiden letzteren Reagentien wurden zugesetzt, und das Erhitzen wurde während h fortgesetzt. Die Lösung wurde mit 50 ml EtOAc verdünnt und mit 25 ml 0.IN HCl und 25 ml 0.IN NaOH gewaschen. Die organische Phase wurde über MgSO^ getrocknet, filtriert und eingeengt und der Rückstand wurde chromatographiert (2:1 Hex:EtOAc), wodurch 0.36 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.04 (m, IH), 4.60 (m, IH), 5.15 (m, 2H).

136

B. MorpholinosulfonvlPheNle

Das obige Material (0.36.g) wurde von der Schutzgruppe befreit (Beispiel 100), wodurch' 0.30 g rohes Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 3.95 (m, IH), 4.10 <m, IH).

C. MorpholinosulfonylPheNlenor-C-Sta-i-propvlester Das Produkt von Beispiel 102B (0.29 g) wurde unter Verwendung von DEC (Beispiel 58) an 0.12 g HCl-Nor-C-StaOiPr gekuppelt. Chromatographie (29:1 CH2Cl2:EtOH) lieferte 0.29 g reines Produkt. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.02 (m, IH), 4.41 (m, H2H), 5.06 (B₁ IH).

BEISPIEL 103

MorpholinomethylphosphinicoPheNlenor-C-Sta-ipropylester (I, Z=MorpholinoP(OCH₃)(0)amino; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHm OH; Zi=CO₂CH(CHa)₂)

A. MorpholinomethylphosphinicoPheNle-benzylester Eine Lösung von 0.30 g PheNleOBn, 0.30 g TEA und 0.44 g Morpholinomethylphosphinsäurechlorid in 10 ml CH₂Cl₂ wurde 60 h gerührt. Die Lösung wurde mit 50 ml EtOAc verdünnt und wurde mit 25 ml 0.IN HCl und 0.IN NaOH gewaschen. Die organische Phase wurde über MgSO4 getrocknet, filtriert und eingeengt. Der Rückstand wurde chromatographiert (19:1 CH₂Cl₂ :EtOH), wodurch 0.18 g Produkt als Mischung der Isomeren am Phosphor erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3.57 (d, J=IOHz, 3H), 4.50 (m, IH), 5.09 (m, 2H).

B. Morpholinomethy!phosphin!coPheNle

Das obige Material wurde wie in Beispiel 100 beschrieben von der Schutzgruppe befreit, wodurch 0.10 g rohes Material erhalten wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 3.26 (d, J=IOHz, 3H), 3.96 (m, IH).

- ».. J ν _ν.

137

C. MorpholinomethylphosphinicoPheNlenor-C-Sta-i-

propylester \

Das Produkt von Beispiel 103B (0.10 g) wurde unter Verwendung des DEC-Verfahrens (Beispiel 58) an 58 mg HCl-nor-C-StaOiPr gekuppelt. Chromatographie (19:1 CfoClitEtOH) lieferte 28 mg reines Material. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3.61 (d, J=IlHz, 3H), 4.44 (m, IH), 4.43 (m, IH), 4.99 (m, IH).

BEISPIEL 104

ThiomorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Thiomorpholinocarbonylamino; Q=H; M=Phenyl; X=Cyclohexyl; W=CHlHOH; Zi

A. ThiomorpholinocarbonylPhe-benzylester

Zu einer Lösung von 1.0 g PheoBn-isocyanat in 10 ml CHzCI2 wurde bei 0° 0.85 g Thiomorpholin zugesetzt, und die resultierende Lösung wurde 1.5 h bei RT gerührt. Die Lösung wurde mit 50 ml EtOAc verdünnt und mit 2 χ 25 ml 0.IN HCl gewaschen. Die organische Phase wurde über MgSOi getrocknet, filtriert und eingeengt, wodurch 1.26 g rohes Produkt erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.83 (m, 2H), 5.15 (AB, 2H).

B. ThiomorpholinocarbonylPhe

Eine Mischung von 1.26 g des obigen Materials und 4.5 g KzCO₃ in 15 ml H20 und 70 ml MeOH wurde 60 h bei RT gerührt und dann 16 h zum Rückfluß erhitzt. Die Mischung wurde zu einer wäßrigen Lösung eingeengt und mit 2 χ 50 ml Ether gewaschen. Die wäßrige Phase wurde angesäuert und mit 3 χ 50 ml CHCI2 extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über MgSO4 getrocknet, filtriert und eingeengt. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 3.01 (m, 2H), 4.26 (m, IH).

C. ThiomorpholinocarbonylPheNle-benzylester

Das Produkt von Beispiel 104B (0.72 g) wurde unter Verwendung der Standard-DEC-Reaktion (Beispiel 58) an 0.75 g NIeOBn ge-

13S

kuppelt, wodurch 1.1 g rohes Produkt erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde.. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 4.47 (m, IH), 4.58 (m, IH), 5.12 (m, 2H).

D. ThiomorpholinocarbonvlPheNle

Das Produkt von Beispiel 104C (1.1 g) wurde wie in Beispiel 104B beschrieben von der Schutzgruppe befreit. Dies lieferte 0.70 g rohes Produkt, das weiter verarbeitet wurde.NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 3.59 (m, 4H), 4.46 (m, IH), 4.73 (m, IH).

E. ThiomorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-ipropylester

Das Produkt von Beispiel 104D (0.70 g) wurde unter Verwendung der DEC-Reaktion (Beispiel 58) an 0.50 g HCl-Nor-C-StaOiPr gekuppelt, und das rohe Material wurde chromatographiert (29:1 CH2CI2 :EtOH), wodurch 0.65 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.28 (m, IH), 4.43 (m, IH), 4.57 (m, IH), 5.00 (m, IH).

BEISPIEL 105

l-OxothiomorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Thiomorpholinocarbonylaminosulfoxid; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHlIiOH; Z¹ =CO₂CH(CH₃ )₂ )

Zu einer Lösung von 0.10 g des Produkts von Beispiel 104E in 5 ml CH2CI2 wurde bei 0° 35 mg mCPBA zugesetzt, und die resultierende Lösung wurde 15 Min. gerührt. Die Lösung wurde mit 20 ml EtOAc verdünnt und mit 2 χ 20 ml 10%ige Na₂CO₃ und 20 ml 0.IN NaOH gewaschen. Die organische Phase wird über MgSO4 getrocknet, filtriert und eingeengt, und der Rückstand wurde chromatographiert (9:1 CH₂Cl₂ :EtOH), wodurch 82 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.29 (m, IH), 3.38 (m, IH), 4.59 (m, IH), 4.94 (m, IH).

139

BEISPIEL 106

1,l-DioxothiomorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-ipropylester (I, Z=Thiomorpholinocarbonylaminosulfon; M=Phenyl; Q=H; R2=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHiIlOH; und Z¹

A. 1,l-DioxothiomorpholinocarbonvlPhe-benzylester Zu einer Lösung von 0.64 g des Produkts von Beispiel 104A in 20 ml CH2CI2 wurde bei 0° 1.0 g mCPBA zugesetzt, und die resultierende Lösung wurde 16 h gerührt. Die Lösung wurde mit 100 ml EtOAc verdünnt und mit 3 χ 50 ml 10%iger Na2 SO3 gewaschen. Die organische Phase wurde über MgSO4 getrocknet, filtriert und eingeengt. Das rohe Material wurde chromatographiert (1:1 EtOAc-Hex), wodurch 0.47 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.79 (m, IH), 5.16 (AB, 2H) .

B . 1,l-DioxothiomorpholinocarbonvlPhe

Das Produkt von Beispiel 106A (0.47 g) wurde wie in Beispiel 100 beschrieben von der Schutzgruppe befreit, wodurch 0.30 g rohe Säure erhalten wurde, die ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 4.05 (m, IH), 4.60 (m, IH), 5.15 (AB, 2H).

C. 1,l-DioxothiomorpholinocarbonvlPheNle-benzylester Das Produkt von Beispiel 106B (0.30 g) wurde unter Verwendung der in Beispiel 58 beschriebenen DEC-Reaktion an 0.29 g NIeOBn gekuppelt, wodurch 0.46 g rohes Produkt erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 4.50 (m, 2H), 5.12 (AB, 2H).

D . 1,l-DioxothiomorpholinocarbonvlPheNle

Das Produkt von Beispiel 106C (0.46 g) wurde wie in Beispiel 100 beschrieben von der Schutzgruppe befreit, wodurch 0.36 g

140

rohe Säure erhalten wurde, die ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-ds) δ 3.97 (m, IH), 4.32 (m, IH) .

E. 1,l-DioxothiomorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-

i-propylester

Das Produkt von Beispiel 106D (0.26 g) wurde unter Verwendung von DEC (Beispiel 58) an 0.18 g HCl-Nor-C-StaOiPr gekuppelt, wodurch nach Reinigung durch Chromatographie (19:C1 CH₂Cl₂CEtOH) 0.31 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.28 (m, IH), 4.47 (m, IH), 4.60 (m, IH), 5.02 (m, IH).

BEISPIEL 107

MorpholinocarbonylPheS-MeCysnor-C-Sta-benzylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂= CH₃ SCH₂ -; X=Cyclohexy 1; W=CH mOH; und Z¹ =CO₂ CH₂ C₆ Hs )

A. Bocnor-C-Sta-benzy!ester

Bocnor-C-Sta (0.10 g) wurde mit 0.11 g Benzylalkohol unter Verwendung der Standard-DEC-Reaktion (Beispiel 58) mit 0.25 Äqu. DMAP verestert. Das rohe Material wurde chromatographiert (39:1 CH₂Cl₂ :MeOH), wodurch 0.10 g reiner Ester erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.39 (s, 9H), 4.10 (s, IH), 4.13 (s, IH), 5.14 (AB, 2H).

B. Nor-C-Sta-benzylester-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 107A (0.10 g) wurde wie in Beispiel 63 beschrieben von der Schutzgruppe befreit, wodurch 96 mg rohes Salz erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 4.16 (m, IH), 5.12 (m, 2H) .

C. MorpholinocarbonylPheS-MeCysnor-C-Sta-benzylester Das Produkt von Beispiel 107B (0.12 g) wurde unter Verwendung der Standard-DEC-Reaktion (Beispiel 58) an 84 mg HCl-Nor-C-

141

StaOBn gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (19:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 92 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.08 (s, 3H), 4.40 (m, 3H), 5.14 (AB, 2H).

BEISPIEL 108

MorpholinocarbonylPheS-MeCysnor-C-Sta-cyclohexylmethylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHmOH; und Z¹ =CO₂CH₂C6Hi 1 )

A. Bocnor-C-Sta-cyclohexy!methylester

Bocnor-C-Sta (70 mg) wurde mit 80 mg Cyclohexylmethanol wie in Beispiel 107 beschrieben verestert, wodurch nach Reinigung durch Chromatographie (39:1 CH2Cl₂:Me0H) 40 mg reines Material erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.35 (s, 9H), 3.39 (d, J=6Hz, IH), 4.08 (m, IH).

B. Nor-C-Sta-cyclohexylmethylester-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 108A (40 mg) wurde wie in Beispiel 63 beschrieben von der Schutzgruppe befreit, wodurch 37 mg rohes Salz erhalten wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 3.53 (s, IH), 4.10 (m, IH).

C. MorpholinocarbonylPheS-MeCysnor-C-Stacyclohexy!methylester

MorpholinocarbonylPheS-MeCys (42 mg) wurde unter Verwendung der DEC-Reaktion (Beispiel 58) an 34 mg des Produkts von Beispiel 108B gekuppelt. Chromatographie (19:1 CH₂Cl₂ :MeOH) lieferte 50 mg reines Produkt. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.12 (s, 3H), 4.42 (m, 3H).

- . s 3

142

BEISPIEL 109

2.(Morpholinocarbonyloxy)-3-phenylpropionylNlenor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinocarbonyloxy; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHiHOH; und Z¹ =CO₂CH(CH₃ )₂ )

A. 2-(Morpholinocarbonyloxy)-3-phenylpropionsäuremethylester

Zu einer Lösung von 0.74 g Methyl-phenylacetat in 10 ml CH2CI2 wurde 0.60 g Morpholinocarbonylchlorid und 1.1 g DMAP zugesetzt, und die resultierende Lösung wurde über Nacht bei RT gerührt. Zusätzliche 0.60 g Morpholinocarbonylchlorid wurde zugesetzt und das Rühren wurde während 2 Tagen fortgesetzt. Die Mischung wurde in 100 ml H2O gegossen und mit 2 χ 100 ml EtOAC extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit 20 ml 0.1N HCl und 20 ml 0.IN NaOH gewaschen, wurden über MgSO4 getrocknet, filtriert und eingeengt, wodurch 1.24 g rohes Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3.75 (s, 3H), 5.19 (m, IH).

B. 2-(Morpholinocarbonyloxy)-3-phenylpropionsäure Das Produkt von Beispiel 109A (1.2 g) wurde wie in Beispiel 55 beschrieben von der Schutzgruppe befreit, wodurch 1.1 g rohe Säure erhalten wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 4.22 (m IH) .

C. 2-(Morpholinocarbonyloxy)-3-phenylpropionylNlebenzylester

Das Produkt von Beispiel 109B (0.12 g) wurde unter Verwendung von DEC wie in Beispiel 58 beschrieben an 0.12 g NIeOBn gekuppelt. Dies lieferte 0.20 g rohes Produkt, das weiter behandelt wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.59 (m, IH), 5.14 (AB, 2H), 5.37 (m, IH).

143

D. 2-(Morpholinocarbonyloxy)-3-phenylpropionylNle Das Produkt von Beispiel 109C (0.20 g) wurde wie in Beispiel 100 beschrieben von der Schutzgruppe befreit, wodurch 0.16 g rohe Säure erhalten wurde, die weiter behandelt wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 4.15 (m, IH), 5.09 (n, IH).

E. 2-(Morpholinocarbonyloxy)-3-phenylpropionylNlenor-C-Sta-i-propylester

Das Produkt von Beispiel 109D (0.15 g) wurde unter Verwendung des in Beispiel 58 beschriebenen DEC-Verfahrens an 0.11 g HCl-Nor-C-StaOiPr gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (19:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 0.16 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.22 (m, IH), 4.41 (m, IH), 5.02 (m, IH), 5.28 (m, IH).

BEISPIEL 110

0-Acetyl-morpholinocarbonylPheS-MeCysnor-C-Sta_ i-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M= Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂-; W=CHnIOCOCH₃; X=Cyclohexyl; und Z¹ =CO₂CH(CH₃ )₂ )

Zu einer Lösung von 0.10 g des Produkts von Beispiel 17 in 1 ml Pyridin wurden 26 mg Ac20 zugesetzt, und die resultierende Lösung wurde über Nacht bei RT gerührt. Die Lösung wurde mit 100 ml EtOAc verdünnt und mit 2 χ 10 ml 0.IN HCl und 2 χ 10 ml 0.IN NaOH gewaschen. Die organische Phase wurde über MgSOi getrocknet, filtriert und eingeengt. Das rohe Material wurde chromatographiert (19:1 CH₂Cl₂ :MeOH), wodurch mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 2.16 (s, 6H), 4.37 (m, IH), 4.52 (m, 2H), 4.88 (d, J=3Hz, IH), 4.96 (m, IH).

144

BEISPIEL 111

MethylaminocarbonylPheNlenor-C-Sta-i-propylester (I, Z=CH₃NHCONH; M=Phenyl; Q=H; R₂»η-Butyl; X= cyclohexyl; W=CHiMOH; und Zi

A. MethylaminocarbonylPhe-benzylester

Zu einer Lösung von 0.30 g PheOBn-isocyanat in 20 ml CH₂CI2 wurde 0.51 ml einer 2.3M MeNH₂-Lösung in Benzol zugesetzt, und die resultierende Lösung wurde 4 h gerührt. Die Lösung wurde mit 200 ml EtOAc verdünnt und mit 20 ml 0.IN HCl und 20 ml 0.IN NaOH gewaschen. Die organische Phase wurde über MgSO4 getrocknet, filtriert und eingeengt, wodurch 0.30 g rohes Produkt erhalten wurde, das weiter behandelt wurde. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 2.69 (d, J=5Hz, 3H), 4.42 (m, IH), 4.83 (m, 2H).

B. MethylaminocarbonylPhe

Das Produkt von Beispiel HlA (0.30 g) wurde wie in Beispiel 100 beschrieben von der Schutzgruppe befreit, wodurch 0.23 g rohe Säure erhalten wurde, die ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 2.62 (s, 3H), 4.33 (m, IH) .

C. MethylaminocarbonylPheNle-benzylester

Das Produkt von Beispiel HlB (0.23 g) wurde unter Verwendung der Standard-DEC-Reaktion (Beispiel 58) an NIeOBn gekuppelt, wodurch 0.38 g rohes Material erhalten wurde, das ohne Reinigung weiter verarbeitet wurde. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 2.51 (br, 3H), 4.29 (m, IH), 4.46 (m, IH), 5.14 (s, 2H).

D. MethylaminocarbonylPheNle

Das Produkt von Beispiel 111C (0.37 g) wurde wie in Beispiel 100 beschrieben von der Schutzgruppe befreit, wodurch 0.29 g rohe Säure erhalten wurde, die ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 2.52 (d, J=5Hz, 3H), 4.17 (m, IH), 4.46 (m, IH).

145

E. MethlyaminocarbonylPheNlenor-C-Sta-i-propylester Das Produkt von Beispiel HlD (0.15 g) wurde unter Verwendung der Standard-DEC-Reaktion (Beispiel 58) an 0.13 g HCl-Nor-C-StaOiPr gekuppelt, wodurch nach Chromatographie (9:1 CH₂Cl₂ :MeOH) 0.13 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.77 (d, J=5Hz, 3H), 4.34 (m, 2H), 4.47 (m, IH), 4.74 (m, IH), 5.01 (m, IH).

BEISPIEL 112

MorpholinocarbonylThalaS-MeCysnor-C-Sta-ipropylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=2-Thienyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHHIOH; und Zi=CO₂CH(CH₃ )₂ )

A. MorpholinocarbonylThala

Zu einer Lösung von 100 mg 2-Thienylalanin in 15 ml DioxanrWasser (2:1; V:V), mit Natriumhydroxid auf pH 11 eingestellt, wurden 96 mg Morpholinosulfonylchlorid zugesetzt, und die Reaktionsmischung konnte sich unter Rühren über Nacht auf Raumtemperatur erwärmen. Der pH wurde abermals auf 11 eingestellt und zusätzliche 40 mg SuIfonylchlorid wurden zugesetzt. Nach Rühren während zwei Stunden wurde die wäßrige Lösung mit Methylenchlorid extrahiert, der pH auf etwa 2 eingestellt und mit Ethylacetat extrahiert. Die organische Phase wurde abgetrennnt, mit Kochsalzlösung gewaschen und getrocknet (MgSOi). Das Lösungsmittel wurde entfernt, wodurch 66 mg des Zwischenproduktes erhalten wurden.

B. MorpholinocarbonylThalaS-MeCysnor-C-Sta-ipropylester

Gemäß dem allgemeinen Verfahren von Beispiel 55 lieferten 100 mg des Produkts von Beispiel 92B, 66 mg des Produkts von Beispiel 112A, 48 mg DCC, 32 mg HBT und 20 mg N-Methylmorpholin 168 mg rohes Produkt. Chromatographie an Kieselgel ergab 59 mg reines Produkt. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.13 (m, 6H), 2.05 (s, 3H), 3.0-3.4 (m, 4H), 3.5-3.65 (m, 4H), und 6.85-7.15 (m, 3H).

Beispiel 113

MorpholinocarbonyllTphalaS-HeCysnor-C-Sta-i-propylester (I, Z =Morpholino carbonyl amino; M=1-iTaphthyl; Q=H; R₂=CHoSCH₂-; X=Cyclohexyl; "I=GE/// OH; und Z =CO₂CH(CH_)₂)

A. Morpholino carbonylUphala

Unter Verwendung des allgemeinen Verfahrens von Beispiel 112A ergaben 420 mg Morpholinosulfonylchlorid, 500 mg 1-ITa p.hthyl -alanin, 3 ml 1ΪΓ Natriumhydroxid und 200 mg iiatriumbicarbonat in 5 ml 1:1 Tetrahydrofuran-Wasser 120 mg des gewünschten Zwischenprodukts.

B. IvIorpholinocarbonylllphalaS-IieCArsnor-C-Sta-i-propylester

Unter Verwendung des üblichen Kupplungsverfahrens ergaben 145 mg des Produkts von Beispiel 93B, 131 mg des obigen Produkts, 32 mg DCC, 55mg HBT und 45 ul n-Hethylmorpholin in 15 ml Methylenchlo-rid 253 mg des Produkts, das an Kieselgel unter Vervrendung von 1-1.5 % Methanol in Chloroform chromatographiert 83 mg lieferte. HTJR (300 MHz, CDCl₃) σ^Ν 1.2 (d, J=5Hz, 6H), 2.01 (s, 3H), 3.Ο5 (m, 211), 3.41 (m, 2H), und 6.75-8.18 (m, 7H).

Beispiel 114

MorpholinocarbonylPheS-MeCysnor-C-Sta-nethylester (I, Z= Morpholinocarbonylaraino; M=Phenyl; R₀=CHoSCH₂-; Q=H; X= Cyclohexyl; VZ=CH/// OH; und Z¹=C0_oCI-L^

-U6a-

Gemäß der allgemeinen Kupplungsverfahrensstufe ergaben S-KeCyanor-C-Sta-methylester-hydrochlorid, 88.2 mg Iviorpholi nocarbonylPhe; 32.1 mg H-LIethylniorpholin, 42.9 mg HBT und 65.4 mg DCC in 20 ml MethylenChlorid 212 mg des Produkts. Chromatographie an Kieselgel unter Verwendung von Chloroform-IIethanol (99:1; V:V) lieferte 103 mg reines Produkt, identisch mit

^- ί 2 5 α 3

147

jenem in Beispiel 58 hergestellten. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 2.1 (s, 3H), 3.7 (s, 3H), 3.0-3.4 (m, 4H), 3.5-3.84 (m, 4H) und 7.3 (s, 5H).

BEISPIEL 115

MorpholinocarbonylPheS-MeCysnor-C-Sta-N-methylamid (I, Z=Morpholinocarbonylamino; Q=H; M=Phenyl; R₂=CH₃SCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHIuOH; und Z¹=C0NHCH₃)

Das Produkt von Beispiel 114 (45 mg) in 10 ml Methanol gelöst wurde bis zur Sättigung mit Methylamin behandelt, und die Reaktionsmischung wurde über Nacht bei Raumtemperatur stehen gelassen. Das Lösungsmittel wurde entfernt und der Rückstand mit Diethylether verrieben, 30 mg. Das Produkt war mit jenem von Beispiel 86 identisch. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.1 (s, 3H), 2.65 (s, 3H), 2.85 (d, J=5Hz, 2H) und 7.2 (s, 5H).

BEISPIEL 116

MorpholinocarbonylPheS-MeCysnor-C-Sta-N-trifluorethylamid (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHlMOH; Z¹ =CONHCH₂ CF₃ )

A. Bocnor-C-Sta-N-trifluorethylamid

Unter Verwendung des allgemeinen Kupplungsverfahrens ergaben 33 mg Trifluorethylamin-hydrochlorid, 75.3 mg Bocnor-C-Sta, 25 mg N-Methylmorpholin, 33 mg HBT und 51.5 mg DCC in 20 ml Methylenchlorid 121 mg des gewünschten Zwischenprodukts als Schaum.

B. Nor-C-Sta-N-trifluorethylamid-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 116A wurde unter Verwendung von HCl-Dioxan (5 ml) während 90 Min. bei Raumtemperatur von der Schutzgruppe befreit. Entfernung des Lösungsmittels lieferte 87 mg des Produkts.

S 7 - f<

·- - „ -j

14.8

C. BocS-MeCysnor-C-Sta-N-trifluorethylamid

Unter Verwendung des allgemeinen Kupplungsverfahrens ergaben 87 mg des Produkts von Beispiel 116B, 58.8 mg BocS-MeCys, 25.3 mg N-Methylmorpholin, 33.8 mg HBT und 51.5 mg DCC in 20 ml Methylenchlorid 146 mg des gewünschten Zwischenprodukts .

D. S-MeCysnor-C-Sta-N-trifluorethylamid-hvdrochlorid Das Produkt von Beispiel 116C (146 mg) wurde unter Verwendung von 5 ml Dioxan gesättigt' mit HCl während 90 Min. bei Raumtemperatur von der Schutzgruppe befreit. Entfernung des Lösungsmittels lieferte 121 mg des Produkts.

E. MorpholinocarbonylPheS-MeCysnor-C-Sta-N-trifluorethyl-amid

Abermals ergaben unter Verwendung des Kupplungsverfahrens 121 mg des Produkts von Beispiel 116D, 69.5 mg MorpholinocarbonylPhe, 25.3 mg N-Methylmorpholin, 33.8 mg HBT und 51.5 mg DCC in 20 ml Methylenchlorid 123 mg des Produkts. Chromatographie an Kieselgel unter Verwendung von Chloroform-Methanol (99:1; V:V) lieferte 57 mg reines Produkt. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3.1-3.5 (m, 4H), 3.5-3.8 (m, 4H) und 7.3 (s, 5H).

BEISPIEL 117

(2-Methoxycarbonylpyrrolid-l-yl)carbonylPheS-MeCysnor-C-Sta-i-propylester (I, Z=I-(2-Methoxycarbonylpyrrolidyl)carbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHHlOH; und Z^COCH(CH₃ )₂ )

A. (2-Methoxycarbonylpyrrolid-l-yl)carbonyl-

Phe-benzylester

Eine Lösung von 66 mg Prolinmethylester-hydrochlorid in 10 ml CH₂Cl₂ und 70 ul N,N-Diisopropylethylamin wurde bei O⁰C mit 112 mg l-Benzyloxycarbonyl-2-phenethyl-isocyanat behandelt,

I- O /_

149

und die Reaktionsmischung wurde über Nacht gerührt. Die Aufarbeitung lieferte 153 mg des gewünschten Zwischenprodukts.

B. (2-Methoxvcarbonylpvrrolid-l-yl)carbonylPhe Unter Verwendung des Verfahrens von Beispiel 18B wurde das Produkt von Beispiel 117A debenzyliert, wodurch 170 mg Zwischenprodukt erhalten wurden.

C. (2-Methoxycarbonylpyrrolid-l-yl)carbonylPhe-S-MeCysnor-C-Sta-i-propylester

Unter Verwendung des üblichen Kupplungsverfahrens ergaben das Produkt von Beispiel 92B (174 mg), das obige Zwischenprodukt (140 mg), 82 mg DCC, 55 mg HBT und 45 ul N-Methylmorpholin in 10 ml CH2CI2 230 mg rohes Produkt. Chromatographie an Kieselgel unter Verwendung von 1-1.5% Methanol in Chloroform lieferte 102 mg des Produkts. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.21 (m, 6H), 2.09 (s, 3H), 2.78-2.89 (m, 2H), 3.0-3.2 (m, 2H), 3.65 (s, 3H) und 7.12-7.32 (m, 5H).

BEISPIEL 118

N-Methyl-N-methoxycarbonylmethylaminocarbonylPheS-MeCysnor-C-Sta-i-propylester (I, Z=CH₃OCOCH₂N(Ch₃)CONH; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHmOH; Z¹ =CO₂CH(CH₃ )₂ )

A. N-(Methoxycarbonylmethyl)-N-methylaminocarbonylPhe-

benzylester

Eine Reaktionsmischung umfassend L-Phenylalanin-benzylester (171 mg), 72 mg N-Methyl-N-chlorcarbonylglycin-methylester und 47 ul N-Methylmorpholin in 15 ml CH₂Cl₂ wurde bei O⁰C und dann über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. 4-Dimethylaminopyridin (10 mg) wurde zugesetzt und das Rühren wurde während 3 h fortgesetzt. Zusätzliches Carbamylchlorid (40 mg) wurde zugesetzt, und die Reaktionsmischung wurde mehrere Tage gerührt. Das Lösungsmittel wurde entfernt, und der Rückstand wurde an Kieselgel unter Verwendung von Chloroform chromato-

150

graphiert. Das reine Zwischenprodukt (105 mg) wurde in den Fraktionen 22-30 isoliert.

B. N-(Methoxycarbonylmethyl)-N-methylaminocarbonylPhe Das Produkt von Beispiel 118A wurde gemäß dem allgemeinen Verfahren von Beispiel 18B debenzyliert, wodurch 129 mg rohes Zwischenprodukt erhalten wurden.

C. N-Methyl-N-methoxycarbonylmethylaminocarbonylPhe-S-MeCysnor-C-Sta-i-propylester

Unter Verwendung des vorher beschriebenen Kupplungsverfahrens ergaben 155 mg des Produkts von Beispiel 92B, 115 mg des obigen Produkts, 81 mg DCC, 53 mg HBT und 43 ul N-Methylmorpholin in 10 ml CH2CI2 251 mg des Produkts. Chromatographie an Kieselgel unter Verwendung von 1-2% Methanol in Chloroform lieferte 70 mg des gewünschten Produkts. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.23 (m, 6H), 2.03 (s, 3H), 2.9 (s, 3H), 3.65 (s, 3H) und 7.1-7.28 (m, 5H).

BEISPIEL 119

N-Methy1-N-methoxycarbonylmethylaminocarbonyl-PheNlenor-C-Sta-i-propylester (I, Z= CH₃OCOCh₂N(CH₃)CONH; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X= Cyclohexyl; W=CHi 11 OH; und Zi=CO₂CH(CHs)₂)

A. Nlenor-C-Sta-hydrochlorid

Unter Verwendung des üblichen Kupplungsverfahrens ergaben BocNle (78 mg), Nor-C-Sta-i-propylester-hydrochlorid, 69 mg DCC, 45 mg HBT und 37 ul N-Methylmorpholin in 10 ml CH₂Cl₂ 171 mg des Produkts.

Das Boc wurde aus dem Produkt durch Behandlung während 3 h mit 10 ml Dioxan gesättigt mit HCl entfernt. Die Aufarbeitung lieferte 155 mg des genannten Produkts.

2563

. Di

B. N-Methyl-N-methoxycarbonylmethylaminocarbonylPheNlenor-C-Sta-i-propylester

Abermals ergaben unter Verwendung des allgemeinen Kupplungsverfahrens 101 mg des Produkts von Beispiel 118B, 155 mg des obigen Produkts, 70 mg DCC, 46 mg HBT und 37 ul N-Methylmorpholin 209 mg des Produkts, das durch Chromatographie an Kieselgel unter Verwendung von 0.5-1% Methanol in Chloroform als Elutionsmittel gereinigt wurde, 51 mg. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 0.85 (t, J=5Hz, 3H), 1.12 (m, 6H), 2.77 (s, 3H), 3.09-3.19 (m, 2H), 3.62 (s, 3H) und 7.1-7.29.

ü

BEISPIEL 120

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-N-2-methylbutylamid (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R2=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHlMOH; und Z¹ = CONHCH₂CH(CH₃ ) C₂ H₃ )

A. Nor-C-Sta-N-2-methylbutylamid-hydrochlorid Ausgehend von 80.6 mg Boc-nor-C-Sta und 22.3 mg 2-Methylbutylamin und unter Verwendung des DCC-Kupplungsverfahrens von Beispiel 64A gefolgt vom Verfahren zur Entfernung der Schutzgruppe von Beispiel 64B wurden 87 mg des genannten Produkts erhalten.

B. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-N-2-methylbutylamid

MorpholinocarbonylPheNle (100 mg) wurde unter Verwendung des DCC-Verfahrens von Beispiel 55 an Nor-C-Sta-N-2-methylbutylamid gekuppelt. Das rohe Material wurde an Kieselgel (99:1 CHCI3 :Methanol und nach 80 χ 4 ml Fraktionen 97.5:2.5) chromatographiert, wodurch 80 mg des gewünschten Produkts erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 0.8-1.05 (m, 6H), 2.5 (d, J=5Hz, 2H), 3.0-3.4 (m, 4H), 3.4-3.84 (m, 4H), 5.35 (d, J=5Hz, IH) und 7.3 (s, 5H).

ν 6 ? K P ο

152

BEISPIEL 121

MorpholinocarbonylPheS-MeCysnor-C-Sta-N-2,2-dimethyl-3-dimethylaminopropylamid (I, Z= Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R2= CH₃ SCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHIhOH; und Z¹ = CONHCH₂C(CH₃ J₂CH₂N(CH₃ )₂ )

A. Nor—C-Sta-N-2 , 2-dimethyl-3-dimethylaminopropylamid-hydrochlorid

Ausgehend von 50 mg Boc-nor-C-Sta und 22 mg N,N,2,2-Tetramethyl-1,3-propandiamin und unter Verwendung des DCC-Kupplungsverfahrens von Beispiel 64A, gefolgt vom Verfahren zur Entfernung der Schutzgruppe von Beispiel 64B werden 98 mg des gewünschten Zwischenprodukt erhalten.

B. S-MeCysnor-C-Sta-2,2-dimethyl-3-dimethylaminopropylamid-hydrochlorid

Unter Verwendung von 98 mg des Produkts von Beispiel 121A und 60 mg Boc-S-MeCys und unter Benützung des DCC-Kupplungsverfahrens, gefolgt vom Verfahren zur Entfernung der Boc-Schutzgruppe werden 120 mg des Produkts erhalten.

C. MorpholinocarbonylPheS-MeCysnor-C-Sta-2,2-dimethy1-3-dimethylaminopropylamid

Das Produkt von Beispiel 121B (120 mg) und MorpholinocarbonylPhe (66 mg) wurden unter Verwendung des DCC-Verfahrens von Beispiel 55 gekuppelt, wodurch 116 mg erhalten wurden. NMR (300 MHZ, CDCl₃ + CH₃OD) δ 0.81 (s, 6H), 1.15 (s, 6H), 2.0 (s, 3H), 3.1-3.4 (m, 4H), 3.4-3.64 (m, 4H) und 7.06-7.15 (m, 5H).

153

BEISPIEL 122

MorpholinocarbonylPheS-MeCysnor-C-Sta-N-2-picolylamid (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHInOH; und Z¹ =C0NHCH₂ C₃ H₄ N

A. Nor-C-Sta-N-2-picolylamid-hydrochlorid

Unter Verwendung des Kupplungsverfahrens von Beispiel 64A ergaben 60.2 mg Boc-nor-C-Sta und 21.6 mg 2-Aminomethylpyridin 108 mg Bocnor-C-Sta-N-2-picolylamid, das unter Verwendung des Verfahrens von Beispiel 64B von der Schutzgruppe befreit wurde, wodurch 83 mg des genannten Zwischenprodukts erhalten wurden.

B. S-MeCysnor-C-Sta-N-2-picolylamid-hydrochlorid BocS-MeCys (47 mg) wurde .unter Verwendung des DCC-Verfahrens von Beispiel 55 mit 83 mg des obigen Produkts gekuppelt, wodurch 126 mg des Produkts erhalten wurden, das dann mit Chlorwasserstoff in Dioxan von der Schutzgruppe befreit wurde, wodurch 78 mg des genannten Produkts erhalten wurden.

C. MorpholinocarbonylPheS-MeCysnor-C-Sta-N-2-picolylamid

Abermals ergaben unter Verwendung des DCC-Kupplungsverfahrens von Beispiel 55 78 mg des Produkts von Beispiel 122B und 44.9 mg MorpholinocarbonylPhe 113 mg des Produkts, das an Kieselgel unter Verwendung von Chloroform-Methanol von 99:1 bis 95:5 als Elutionsmittel chromatographiert wurde, 22 mg. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.05 (s, 3H), 2.85 (J=5Hz, 2H), 3.0-3.4 (m, 4H), 3.4-3.7 (m, 4H) und 7.0-7.9 (m, 9H).

154

BEISPIEL 123

ß-Hydroxypyrid-^-ylcarbonylPhe-S-MeCysnor-C-Stai-propylester (I, Z=3-Hydroxypyrid-2-ylcarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R2=CH3SCH2-; X=Cyclohexyl; W=CHiHOH; und Z¹ =C0₂ CH (CH₃ ) 2 )

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel 38B, mit Ausnahme, daß 34 ul, 1.2 Äqu. Triethylamin verwendet wurden, um das Aminhydrochlorid zu neutralisieren, ergaben 110 mg des Produkts von Beispiel und 28 mg 3-Hydroxypicolinsäure 78 mg farbloses Pulver, DC Rf 0.42 in 2:1 Ethylacetat-Hexan.

IH NMR, CDCI3 , 250 MHz, partiell, δ ppm: 1.26 und 1.27 (d, 3H je), 2.11 (s, 3H), 2.60 und 2.85 (dd, IH je), 3.26 (m, 3H), 4.09, 4.37, 4.45, 4.79 und 5.03 (m, IH je), 6.5, 6.81 und 8.49 (d, IH je), 8.08 (m, IH).

BEISPIEL 124

MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-cyclohexylmethylketon (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHmOH; und Z¹ = -COCH₂C₆Hi 1 )

A. (S)-4-t-Butoxycarbonylamino-3(R)-benzyloxy-

1,5-dicyclohexyl-2-butanon

Eine Lösung von Cyclohexylmethylmagnesiumbromid (aus 0,78 ml Cyclohexylmethylbromid und 0.14 g Magnesium in 3 ml Ether) wurde bei 5⁰C während 2-3 Min. mit 1.00 g 3(S)-t-Butoxycarbonylamino-2(R)-benzyloxy-4-cyclohexyl-butyraldehyd (Produkt von Beispiel 5A, U.S. 4 668 769) behandelt. Nach 25 Min. wurde die Mischung mit wäßrigem Ammoniumchlorid behandelt, mit Ether extrahiert und mit IN HCl und wäßrigem Bicarbonat gewaschen, getrocknet, eingeengt und an Kieselgel unter EIution mit Ethylacetat/Hexane gereinigt, wodurch 278 mg einer Mischung der zwei Alkohol-Isomeren erhalten wurden, DC Rf 0.48 und 0.41 in 1:3 Ethylacetat/Hexane. Dieses Produkt wurde

155

in 5 ml 1:2 Ether-Aceton gelöst und bei O⁰C mit 1 ml Chromsäurelösung (Org. Syn. Coll.Bd. V, S. 310) behandelt. Nach Min. wurde die Mischung mit Ether verdünnt und mit wäßriger NaOH gewaschen, getrocknet und an Kieselgel in Ethylacetat/Hexane chromatographiert, wodurch 201 mg eines gelben Öls erhalten wurden, DC Rf 0.59 in 1:3 Ethylacetat-Hexane.

B. 4(S)-Amino-3(R)-benzyloxy-1,5-dicyclohexyl-2-butanon-hydrochlorid

Das Produkt von Beispiel 124A (195 mg) wurde in 2 ml 4N HCl-Dioxan gelöst und 1 h bei 25⁰C gerührt, eingeengt und getrocknet, wodurch 165 mg eines farblosen Pulvers erhalten wurden, DC Rf 0.56 im System C (mit Fleck versehene Platte wurde vor der Elution NH3 ausgesetzt).

C. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-cyclohexylmethy1-keton-benzylester

Gemäß dem allgemeinen Verfahren zur Herstellung des Produkts von Beispiel 38B, mit Ausnahme, daß 1.3 Äqu. Triethylamin verwendet wurde, um das Aminsalz zu neutralisieren, ergaben 158 mg des Produkts von Beispiel 124B und 152 mg des Produkts von Beispiel 7C nach Reinigung an Kieselgel in Ethylacetat-Hexane 228 mg eines farblosen Schaums, DC Rf 0.29 im 2:1 System A.

D. MorpholinocarbonylPheNlenor-C-Sta-cyclohexy!methyl-keton

Das Produkt von Beispiel 124C (220 mg) wurde in 20 ml 1:1 Methanol-Essigsäure gelöst und 22 h bei 25⁰C mit 250 mg 10% Pd/C unter 50 psi Wasserstoff geschüttelt, durch Supercel filtriert, eingeengt, zusammen mit zugesetztem Toluol und Ether eingedampft und getrocknet, wodurch 179 mg eines bernsteinfarbigen Schaums erhalten wurden, der an Kieselgel in Ethylacetat-Hexane chromatographiert wurde, wodurch 131 mg farbloses Pulver erhalten wurde, DC Rf 0.44 in Ethylacetat.

i. sj i, J W ,J

1 56

IH NMR, CDCl₃, 250 MHz, partiell, δ ppm; 0.87 (t, 3H), 2.40, 2.53, 3.05 und 3.12 (dd, IH je), 3.28 (m), 3.62 (m, 4H), 4.07 (br, IH), 4.15 (m, IH), 4.52 (m, 2H), 5.00, 6.23 und 6.51 (d, IH je).

BEISPIEL 125

4-OxopiperidinocarbonylPheS-MeCysnor-C-Sta-ipropylester-ethylenketal (I, Z=4-Oxopiperidinocarbonylamino-ethylenketal; M=Phenyl; Q=H; R₂ CH₃ SCH₂ -; X=Cyclohexyl; W=CH 111 OH; und Zi=CO₂CH(CH₃ )2 )

Gemäß dem Verfahren zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel 50 ergaben 150 mg des Produkts von Beispiel 39 und 32 ul 4-Piperidon-ethylenketal 60 mg eines farblosen Pulvers, DC Rf 0.30 in Ethylacetat, HPLC 2.76 und 3.09 Min. (ca. 2:1) in 80/20 Acetonitril-Wasser. Die Hauptkomponente wurde durch halbpräparative Umkehrphasen-HPLC an einer 9,8 χ 250 mm Zorbax C-8-Kolonne in 70/30 Acetonitril-Wasser getrennt, wobei 60 mg der Mischung 28 mg der früher eluierenden Verbindung ergaben.

IH NMR, CDCl₃, 250 MHz, partiell, δ ppm: 0.92 (m), 1.26 und 1.28 (d, 3H je), 2.09 (s, 3H), 2.72, 2.93, 3.08 und 3.29 (dd, IH je), 3.34 (m), 3.92 (s, 4H), 4.10 (br, IH), 4.35-4.53 (m, 3H), 4.87 (d, IH), 5.06 (Septett, IH), 6.95 und 7.11 (d, IH je), 7.18-7.38 (m, aromat.).

BEISPIEL 126

N-BocPiperid-4-ylcarbonylPheS-MeCysnor-C-Sta-ipropylester (I, Z=N-Bocpiperid-4-ylcarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHMiOH; Z¹ =CO₂CH(CH₃ )₂ )

Unter Verwendung des Verfahrens zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel 38B, mit Ausnahme, daß 1.3 Äqu. Triethylamin verwendet wurde, um das Amin-hydrochlorid zu neutralisieren, ergaben 230 mg des Produkts von Beispiel 39

157

und 97 mg N-Boc-piperidin-4-carbonsäure 241 mg eines farblosen Pulvers, DC Rf 0.49 in Ethylacetat.

IH NMR, CDCl₃, 250 MHz, partiell, δ ppm: 1.28 (d, 6H), 1.46 (s, 9H), 2.14 (s, 3H), 2.62, 2.91, 3.05 und 3.16 (dd, IH je), 2.70 (m), 3.39, 5.98, 6.53 und 6.75 (d, IH je), 4.35 und 4.45 (m, IH je), 5.04 (Septett, IH), 7.13-7.37 (m, aromat.).

BEISPIEL 127

Piperid-4-ylcarbonylPhe-S-MeCysnor-C-Sta-ipropylester (I, Z=Piperid-4-ylcarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CHiMOH; und Zi=CO₂CH(CHs)₂)

Das Produkt von Beispiel 126 (175 mg) wurde in 4N HCl-Dioxan während 30 Min. bei 25⁰C gelöst, eingeengt und getrocknet, wodurch 157 mg eines schwach gelben Pulvers erhalten wurden, DC Rf 0.20 im System C (die mit Fleck versehene Platte wurde vor der Elution Ammoniak ausgesetzt).

IH NMR, DMSO-de , 250 MHz, partiell, δ ppm: 1.28 und 1.29 (d, 3H je), 2.09 (s, 3H), 4.00, 4.21 und 4.45 (m, IH je), 4.86 (Septett, IH), 5.36, 7.69, 8.15 und 8.30 (d, IH je).

BEISPIEL 128

4-OxopiperidinocarbonylPhe-S-MeCysnor-C-Sta-i-propylester (I, Z=4-0xopiperidinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂-; X=Cyclohexyl; W=CH(IiOH; und Zi=CO₂CH(CH₃ )₂ )

A. 4-OxopiperidinocarbonylPhe-benzylester

4-Piperidon-hydrochlorid (819 mg) wurde in 15 ml Dichlormethan gelöst und bei O⁰C mit 740 ul Triethylamin und 1.50 g des Produkts von Beispiel 7A (IsocyanatoPheOBn) behandelt. Nach 1.5 h wurde die Mischung in Ethylacetat gelöst, mit IN HCl (3x), wäßriger NaHCO₃ und Kochsalzlösung gewaschen, über MgSOi getrocknet, eingeengt, in 10 ml heißem Ethylacetat-Hexane gelöst, gekühlt und filtriert, wodurch 0.6 g eines

15S

Feststoffs entfernt wurde, DC Rf 0.53 im 1:1 System A. Die Mutterlaugen wurden an Kieselgel in 1:1 Ethylacetat-Hexane chromatographiert, wodurch 322 mg eines klaren Öls erhalten wurden, DC Rf 0.13 im System A, dessen NMR-Spektrum in Obereinstimmung mit der Titelstruktur war.

B. 4-OxopiperidinocarbonylPhe

Das Produkt von Beispiel 128A (297 mg) wurde in 15 ml 1:10 Essigsäure-Methanol gelöst und 30 Min. bei 25⁰C und unter psi Wasserstoff mit 150 mg 10% Pd/C geschüttelt, filtriert, eingeengt und zusammen mit zugesetztem Toluol eingedampft, wodurch 227 mg eines farblosen Schaums erhalten wurden, DC Rf 0.05 in Ethylacetat.

C. 4-OxopiperidinocarbonylPhe-S-MeCysnor-C-Stai-propylester

Unter Verwendung des Verfahrens zur Herstellung und Reinigung des Produkts von Beispiel 38B, mit Ausnahme, daß Triethylamin verwendet wurde, um das Amin-hydrochlorid zu neutralisieren, ergaben 100 mg S-MeCysnor-C-Sta-isopropylester-hydrochlorid (Produkt von Beispiel 48D) und 73 mg des Produkts von Beispiel 128B 116 mg eines farblosen Feststoffs, DC Rf 0.29 in Ethylacetat.

BEISPIEL 129

CarboxylbutylcarbonylPhe-S-MeCysnor-C-Stai-propylester (I, Z=HO₂C(CH₂)^CONH-; M=Phenyl; Q=H;, R₂=CH₃SCH₂; X=Cyclohexyl; W=CH OH; und

Z¹ =CO₂CH(CH₃ )₂ )

A. (CH₃)3 CO₂ C(CH₂)4 COPhe-S-MeCysnor-C-Sta-i-

propylester

Hexandicarbonsäure-mono-tert.-butylester (0.10 g) wurde mit 0.10 g Phe-S-MeCysnor-C-Sta-i-propylester-hydrochlorid unter Verwendung von DEC wie in Beispiel 58 beschrieben kondensiert. Chromatographie an SiO₂ (1:19 MeOHiCH₂Cl₂) lieferte

Ί 6 ') λ 8 — -^ *-"

mg reines Produkt. NMR (300 MHZ, CDCl₃) δ 1.41 (s, 9H), 4.38 (m, 2H), 4.62 (η, '1H)₁ 5.01 (m, IH).

B. CarboxybutylcarbonylPhe-S-MeCysnor-C-Sta-i-

propylester

Eine Lösung von 90 mg des obigen Butylesters in 2 mg Trifluoressigsäure und 2 ml CH2CI2 wurde 1 h bei Raumtemperatur gerührt. Nach der Standard-Säure-Base-Aufarbeitung wurde das rohe Material durch Chromatographie (9:1 CH2Cl2:MeOH) gereinigt, wodurch 52 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 2.08 (s, 3H), 4.40 (m, 2H), 4.73 (m, IH), 4.97 (m, IH).

BEISPIEL 130

AminopentylcarbonylPhe-S-MeCysnor-C-Sta-ipropylester (I, Z=H₂N(CH₂)SCONH-; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH₃SCH₂; X=Cyclohexyl; W=CHInOH; und Z¹ =CO₂CH(CH₃ )z )

A. BocaminopentylcarbonylPhe-S-MeCysnor-C-Sta-i-

propylester

N-Boc-6-aminohexansäure (59 mg) wurde unter Verwendung der Standard-DEC-Reaktion (Beispiel 58) an Phe-S-MeCysnor-C-Stai-propylester-hydrochlorid (133 mg) gekuppelt, wodurch 145 mg rohes Produkt erhalten wurden, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.43 (s, 9H), 2.12 (s, 3H), 4.35 (m, IH), 4.43 (m, IH), 4.58 (m, IH), 4.62 (m, IH), 5.03 (m, IH).

C. AminopentylcarbonylPhe-S-MeCysnor-C-Sta-i-

propylester

Eine Lösung von 140 mg des Produkts von Beispiel 130A in 3 ml 4N HCl in Dioxan wurde 45 Min. gerührt und eingeengt. Säure-Base-Aufarbeitung lieferte 100 mg reines Produkt. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.07 (s, 3H), 4.36 (m, 2H), 4.64 (m, IH), 4.98 (m, IH).

IbO

BEISPIEL 131

MorpholinocarbonylPheAspnor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=HO₂CCH₂; X=Cyclohexyl; W=CH ι «»OH; und Z^CO₂CH(CH₃ )₂ )

A. MorpholinocarbonylPhe-Asp-benzylester

Asparaginsäure-ß-benzylester (0.4 g) wurde wie in Beispiel 80 beschrieben mit MorpholinocarbonylPhe-hydroxysuccinimid-ester behandelt, wodurch 0.42 g rohes Material erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 4.34 (m, IH), 4.61 (m, IH), 5.10 (s, 2H).

B. MorpholinocarbonylPhe-Asp(O-benzylester)nor-C-Sta-i-propylester

Das Produkt von Beispiel 131A (0.29 g) wurde unter Verwendung der Standard-DEC-Reaktion (Beispiel 76) an 0.12 g Nor-C-Stai-propylester gekuppelt, wodurch 0.20 g rohes Material erhalten wurde, das ohne weitere Reinigung verwendet wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.39 (m, 2H), 4.65 (m, IH), 5.02 (m, IH), 5.09 (AB, 2H).

C. MorpholinocarbonylPhe-Aspnor-C-Sta-i-propylester Eine Lösung von 0.20 g des obigen rohen Benzylesters und 0.4 g 10% Pd/C in 30 ml MeOH wurde 30 Min. unter 45 psi hydriert. Die Mischung wurde durch Celit filtriert und konzentriert. Der Rückstand wurde chromatographiert (23:1:1 CHCI3 :MeOH:AcOH), wodurch 81 mg reines Produkt erhalten wurden. NMR (300 MHz, DMSO-de) 4.17 (m IH), 4.28 (m, IH), 4.44 (m, IH), 4.84 (m, IH).

161

BEISPIEL 132

MorpholinocarbonylPhe-Asnnor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂ =H₂ NCOCH₂; X=Cyclohexyl; W=CH 11 ι OH; und

Z¹ =CO₂CH{CH₃ )₂ )

A. MorpholinocarbonylPheAsn

Asparagin (0.5 g) wurde mit 1.0 g MorpholinocarbonylPhe-hydroxy-succinimid wie in Beispiel 80 beschrieben behandelt. Das rohe Material (0.80 g) wurde ohne weitere Reinigung verwendet. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 4.10 <m, IH), 3.34 (m, IH), 4.53 (m, IH).

B. MorpholinocarbonylPhe-Asnnor-C-Sta-i-propylester Das obige Produkt (0.18 g) wurde unter Verwendung der Standard-DEC-Reaktion (Beispiel 76) an 0.10 g Nor-C-Sta-i-propylester gekuppelt, wodurch nach Chromatographie (9:1 CH₂Cl₂:MeOH) 0.17 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 4.39 (m, 2H), 4.62 (m, IH), 5.01 (m IH).

BEISPIEL 133

MorpholinocarbonylPheValnor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Phenyl; Q=H; R₂=CH(CHs)₂; X=Cyclohexyl; W=CHiMOH; und Z^CO₂CH(CH₃ )₂ )

A. MorpholinocarbonylPheVal

Valin (0.40 g) wurde mit 0.60 g MorpholinocarbonylPhe-hydroxysuccinimid-ester wie in Beispiel 80 beschrieben behandelt. Das rohe Material (0.53 g) wurde ohne weitere Reinigung verwendet. NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 0.92 (d, J=7Hz, 3H), 4.18 (m, IH), 4.43 (m, IH).

162

B. MorpholinocarbonylPheVainor-C-Sta-n-propvlester Das obige Produkt (0.17 g) wurde unter Verwendung der Standard-DEC-Reaktion (Beispiel 76) an 0.10 g Nor-C-Sta-i-propylester gekuppelt. Das rohe Material wurde chromatographiert (24:1 CH2CI2 :MeOH), wodurch 0.15 g reines Produkt erhalten wurde. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 0.77 (d, J=6Hz, 3H), 0.84 (d, J=7Hz, 3H), 4.45 (m, IH), 4.52 (m, IH), 5.OC (m, IH).

BEISPIEL 134

IsovalerylPhe-Nlenor-C-Sta-i-propylester (I, Z=(CH₃)2CHCH₂CONH; M=Phenyl; Q=H; R₂=n-Butyl; X=Cyclohexyl; W=CHiMOH; und Zi=CO₂CH(CHs)₂)

Unter Verwendung des vorerwähnten Kupplungsverfahrens von Beispiel 5B ergaben 107 mg IsovalerylPhe-Nle, 72 mg Nor-C-Sta-i-propylester, 68 mg HBT und 57 mg DEC in 1 ml CH₂Cl₂ nach Chromatographie an SiO₂ unter Verwendung von 1:1 Ethylacetat-Hexane als Elutionsmittel 121 mg des gewünschten Produkts. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 0.9 (m, 9H), 1.22 (d, 6H), 2.93-3.08 (m, 2H), 4.05 (m, IH), 4,19, 4,40, 4,66 (m, IH je), 4.98 (Septett, IH), 6.09, 6.25, 6.52 (d, IH je), und 7.1-7.24 (m, 5H).

BEISPIEL 135

MorpholinocarbonylhomoPheNlenor-C-Sta-i-propylester (I, Z=Morpholinocarbonylamino; M=Benzyl; R₂=n-Butyl; Q=H; X=Cyclohexyl; Zi=CO₂CH(CH₃J₂; und W=CH ι υ OH)

Unter Verwendung des DCC-Verfahrens von Beispiel 55 ergaben 138 mg MorpholinocarbonylhomoPheNle, 95 mg Nor-C-Sta-i-propylester-hydrochlorid, 70 mg DCC, 46 mg HBT und 38 ul N-Methylmorpholin nach Chromatographie an SiO₂ unter Verwendung von 1-2% Methanol in Chloroform 62 mg des gewünschten Produkts. NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.2 (d, 5H), 3.2 (m, 2H), 3.5 (m, 2H) und 7.2 (s, 5H).

Claims (9)

L ο 16.3 Patentansprüche

1. Verfahren zur Herstellung von Nor-Statin- und Norcyclostatin-Polypeptiden der Formeln

(I)

COR,

(ii:

worin Z Ri - (Y)m- (A)_P ist, worin Ri (Ci-Ce)Alkyl, Amino, (Ci-C₄)Alkoxy, (Ci-C₄)Alkylamino, (Ci-C₃)Alkoxy-(C₂-C₄)alkylenamino, Carboxy-(Ci-C₄)alkyl, Hydroxy-(C2-C₄)alkylenamino, (Ci-C3)AIkOXy-COCH₂N(CH3), Amino-(Ci-Cs)alkyl, Morpholino, Piperidyl, Hydroxypiperidino, 4-Oxopiperidino, Piperazino, 4-Oxopiperidinoethylen-ketal, 4-(Ci-C3)Alkylpiperazino, Thiomorpholino, Thiomorpholino-1-oxid, Thiomorpholino-1,1-dioxid, N-(Ci-C₄)Alkoxycarbonylpiperidyl, 4- (Ci-C₄ )Alkoxycarbonylpiperazino, 3-0xomorpholino, 3,5-Dioxomorpholino, Hydroxy-

V ή V ( ρ A ή, O ι., j ;_, _^i

lfc>4

pyridyl, Pyridyl, (s)-Pyrrolid-2-yl, N-t-Butoxycarbonyl-(s)-pyrrolid-2-yl, (Ci-C3)Alkoxycarbonyl-(s)-pyrrolid-2-yl oder 4-(Ci-C4)Alkanoylpiperazino ist; Y C=O, P(0CH3)=0 oder SO2 ist; A NCH3 , NH, oder 0 ist; m und ρ je die ganze Zahl 0 oder 1 sind; M Phenyl, Benzyl, Naphthyl, Thienyl, Methoxyphenyl, Hydroxyphenyl, Chlorphenyl oder (Ce-C?)Cycloalkyl ist; Q Methyl oder Wasserstoff ist; R2 (Ci-C₃)Alkyl, (Ci-C₃)-Alkylthio-(Ci-C₂)alkyl, (Ci -C₃)Alkoxy-(Ci-C₂)alkyl, Benzyloxy-(Ci-C2)alkyl, Benzyl, Hydroxy-(Ci-C₂)alkyl, Carboxy-(Ci-C₂)alkyl, Guanido-(Ci-C₃)alkyl, (Ci-C₃)Alkylsulfinyl-(Ci-C₂)alkyl, (Ci-C₃)Alkylsulfonyl-(Ci-C₂)alkyl, 4-Benzyloxycarbonylaminobutyl, 4-Aminobutyl, Imidazol-4-ylmethyl, N-t-Butoxycarbonylimidazol-4-ylmethyl oder Carbamyl-(Ci-C₂)-alkyl ist; X Cyclohexyl, i-Propyl oder Phenyl ist; W CH μ 1 OCO-(Ci-C₃)Alkyldi-(Ci-C₂)alkylamino, CH 111 OCO-(Ci-C₃ )-alkylpiperidino, CH in OH, C=O, CHcMN₃, CH^N₃, CH-^NH₂, CHMiNH₂, C(CH₃)IMOH, C(CH₃)-* OH, CH μ ι OCO-(Ci-C₂ ) alkyl oder CHi M OCO-(Ci-C₂ )alkylen-CO₂H ist; Z¹ CH₂OH oder R-S-T ist, worin R C=O ist, S 0, NH, N(CH₃), CH₂ oder eine R und T verbindende chemische Bindung ist; T (Ci -Cs)Alkyl, Hydroxy-(Ci-C₄)alkyl, CONH-(Ci-C₄)alkyl, Wasserstoff, Trifluorethyl, (Ce-C7)Cycloalkyl, (Ce-C7)Cycloalkylmethyl, Phenyl, Benzyl, Amino-(C₂-Cs)alkyl, 0-(Ci-C₂)Alkyl-hydroxylamino, Morpholino, 4-(Ci-C₂)Alkylpiperazino oder omega-Di-(Ci-C₂)alkylamino-(C₃-Cs)alkyl ist; L CH oder N ist; Rs Imidazol-4-ylmethyl oder (C₂-Cs) Alkyl ist; und R6 (Ci -C₄ ) Alkoxy oder (Ci-C₄)-Alkylamino ist; mit der Maßgabe, daß dann, wenn m 0 ist, ρ 0 ist; wenn A 0 ist, Y C=O ist; wenn T CONH-(Ci-C₄)Alkyl ist, S NH, N(CH₃) oder CH₂ ist; und wenn T (C₂-C₃)Alkylamino, 0-(Ci-C₂)Alkyl-hydroxylamino, Morpholino oder 4-(Ci-C₂)Alkylpiperazino ist, S CH₂ oder eine R und T verbindende chemische Bindung ist, gekennzeichnet durch die Bildung einer Amidbindung, C(O)N, durch dehydratisierendes Kuppeln, worin die in der Reaktion nicht beteiligten funktionellen Gruppen blockiert sein können, gefolgt von den fakultativen Schritten 1) selektive Entfernung der blockierenden Gruppen, 2) Oxidieren einer Sulfid-Gruppe zum Sulfoxid oder Sulfon,

2" - η

^R2 gebildet wird.

2. Verfahren nach Anspruch 1, Formel I, dadurch gekennzeichnet, daß die Amidbindung zwischen den Fragmenten

.M

/ Q O / Z¹

I und HN " I /

3. Verfahren nach Anspruch 1, Formel I, dadurch gekennzeichnet, daß die Amidbindung zwischen den Fragmenten

OH _und

0 R₂

gebildet wird.

3) Oxidieren von W, worin es CH ι μ OH oder CH-^IOH ist, zu

C=O, 4) Acylieren von W, worin es CH μ ι OH ist, und gewünsch-

tenfalls Herstellung eines pharmazeutisch verwendbaren Salzes vom Produkt.

4. Verfahren nach Anspruch 1, Formel II, dadurch gekennzeichnet, daß die Amidbindung zwischen den Fragmenten

und

H₂N /" ^

OH

gebildet wird.

^} < O ζ P,

16b

5. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Kupplungsreagens 1-Hydroxybenzotriazol und Dicyclohexylcarbodiimid ist.

6. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Kupplungsreagens 1-Hydroxybenzotriazol und Dimethyl^ aminopropylethyl-carbodiimid ist.

7. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der fakultative Schritt der Oxidation einer Sulfidgruppe mit m-Chlorperbenzoesäure durchgeführt wird.

8. Verfahren nach.Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der fakultative Schritt der Oxidation von CH ι 11 OH oder CH-^OH mit Pyridinium-dichromat und Acetanhydrid durchgeführt wird.

9. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der fakultative Schritt der Acylierung von CHm OH mit einer Säure und den Kupplungsreagentien von Anspruch 5 oder 6, oder einem Säurehalogenid und einem organischen tertiären Amin durchgeführt wird.