DD282706C4 - METHOD FOR PRODUCING A BIOPHYSICALLY DERIVATIVED HEFEPRAEPARATE WITH A BREATHABLE ACTIVITY, THESE INGREDIENT AND PLANT GROWTH SUBSTANCES, AND THEIR USE - Google Patents
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Abstract
Description
Hierzu 2 Seiten ZeichnungenFor this 2 pages drawings
Die Erfindung betrifft Verfahren zur Herstellung eines stoffwechselaktivierenden Präparates, diese enthaltende Futtermittel und Pflanzenwuchsstoffe sowie die Verwendung der Präparate zur Hautbehandlung und zur probiotischen Aktivierung.The invention relates to processes for the preparation of a metabolism-activating preparation, to feeds and plant growth substances containing them and to the use of the preparations for skin treatment and for probiotic activation.
Es ist bekannt, daß pflanzliche und tierische Organismen den Zellstoffwechsel beeinflussen und aktiveren können. Auf dieser Grundlage sind bereits zahlreiche Methoden zur Stoffwechselaktivierung vorgeschlagen worden. Nach der DE-PS 1076888 werden atmungsfördernde Wirkstoffe aus dialysierten Blutzellen oder Blutplasmen gewonnen; sie sollen die Sauerstoffaufnahme von Rattenleberhomogenat erhöhen. Wachstumsfördernde Produkte werden nach der USPS 3 937 816 aus der roten Pulpa von Rindermilz erhalten und bewirkt bei intravenöser Injektion bei Mäusen in relativ kurzer Zeit eine Gewichtszunahme der Milz. Angaben über die Atmunsaktivität oder die Beeinflussung der Atmungskettenphosphorylierung werden nicht gemacht.It is known that plant and animal organisms can influence and activate cell metabolism. On this basis, numerous metabolic activation methods have already been proposed. According to DE-PS 1076888, respiratory active substances are obtained from dialyzed blood cells or blood plasma; they should increase the oxygen uptake of rat liver homogenate. Growth-promoting products are obtained according to USP 3,937,816 from the red pulp of bovine spleen and causes a spleen weight gain in mice after intravenous injection in a relatively short time. Information on respiratory activity or effects on respiratory chain phosphorylation is not provided.
Bekannt ist außerdem, daß therapeutisch wirksame Substanzen in einer Hefe angereichert werden können (vgl. auch DE-OS 3341840).It is also known that therapeutically active substances can be enriched in a yeast (see also DE-OS 3341840).
Das Ziel der Erfindung besteht in der Erhöhung der Stoffwechselaktivität, in der Verbesserung der Wundheilung, der positiven Beeinflussung des reticuloendotholialen Systems und in der wachstumsstimulierenden Wirkung.The object of the invention is to increase metabolic activity, to improve wound healing, to positively influence the reticuloendotholial system and to stimulate growth.
atmungssteigernder Aktivität besteht, die Im Warburg-Gefäß an standardisiertem Rattenleberhomogenat meßbar ist und als das vom Homogonat zusätzlich veratmete Sauerstoffvolumen ausgedrückt wird. In einer bevorzugten Ausführungsform derbreathable activity measurable in the Warburg tube on standardized rat liver homogenate and expressed as the additional oxygenate volume inhaled by the homogonate. In a preferred embodiment of
gleichen Versuchsbedingungen.same experimental conditions.
meßbar im Warburg-Gefäß an einer standardisierbaren Testlösung mit dem Enzym und Phenylalanin als L-Aminosäure und ausgedrückt als Verhältnis des Sauerstoffverbrauchs mit und ohne Hefepräparat. Der L-Aminosäureoxidase-Hemmfaktor hat einen Wert im Bereich von etwa 20 bis 80% und vorzugsweise einen Wert im Bereich von 30 bis 60%.measurable in Warburg vessel on a standardisable test solution with the enzyme and phenylalanine as L-amino acid and expressed as ratio of oxygen consumption with and without yeast preparation. The L-amino acid oxidase inhibitory factor has a value in the range of about 20 to 80% and preferably a value in the range of 30 to 60%.
gebildete Gase entweichen.escaped gases escape.
flüssiger Träger wird eine wäßrige Lösung oder Suspension zugesetzt, die enthältliquid carrier is added to an aqueous solution or suspension containing
1. 0,1 bis 0,6% biophysikalische derivatisierte Hefe, die entweder aus einer Hefe, die als Ausgangsmaterial dient und/oder aus einer anderen Hefe erhalten wurde, und 0,02 bis 0,4% Chondriosomen-Extrakt,1. 0.1 to 0.6% biophysical derivatized yeast obtained either from one yeast used as starting material and / or from another yeast and from 0.02 to 0.4% chondriosomes extract,
2. 0,3 bis 5% Celluloseglykolat, hochdisperse pyrogene Kieselsäure mit mehr als 99,8% SiO2und einem Durchmesser von 7 bis 25 nm, Carrageen, Trayanth oder ähnliche Füllstoffe,2. 0.3 to 5% cellulose glycolate, fumed silica with more than 99.8% SiO 2 and a diameter of 7 to 25 nm, carrageenan, trayanth or similar fillers,
3. 0,01 bis 0,3% vergärbare Mono- und/oder Disaccharide,3. 0.01 to 0.3% fermentable mono- and / or disaccharides,
4. Konservierungsmittel wie Parabene und Salze wie Kochsalz in ausreichender Konzentration,4. Preservatives such as parabens and salts such as saline in sufficient concentration,
5. Spurenelemente wie Mn, Co, Zn, Mg, vorzugsweise als Sulfate oder Glukonate.5. trace elements such as Mn, Co, Zn, Mg, preferably as sulfates or gluconates.
zusammen mit der 2· bis 4fachen Menge eines Trägers behandelt.treated with 2 x to 4 times the amount of a carrier.
derivatisierten Präparats mit atmungssteigernder Aktivität nach einem der vorgenannten Merkmale zugesetzt wird.derivatized preparation having breath-increasing activity according to one of the aforementioned features.
2Gew.-% des biophysikalisch derivatisierten Präparats nach einem der Ansprüche 1 bis 18 besteht.2Gew .-% of the biophysically derivatized preparation according to one of claims 1 to 18.
das derivatisierte Zellmaterial mit ausgewählten natürlichen Mikroorganismen wachstumsstimulierend zusammenwirkt.the derivatized cell material interacts with selected natural microorganisms in a growth-stimulating manner.
bulgaricus.bulgaricus.
atmungssteigernde Wirkung entfalten, waren bisher nicht bekannt. Die herkömmlichen Hefen, wie zum Beispiel Bierhefen,have a respiratory enhancing effect, were previously unknown. The conventional yeasts, such as brewer's yeast,
sich gegenüber einem solchen Homogenat inert. Der Atmungssteigerungsfaktor liegt im wesentlichen bei eins.inert to such a homogenate. The respiratory increase factor is essentially one.
aber auch bei Warmblütern festgestellt.but also found in warm-blooded animals.
normaler Hefen und Bakterien der Lactobacillus- und Bifidus-Arten positiv.normal yeasts and bacteria of the Lactobacillus and Bifidus species are positive.
der inhibierend auf die Oxidasen wirkt.which acts to inhibit the oxidases.
Fig. 1: ein zweidimensionales TLC-Diagramm für Lipide und andere Inhaltsstoffe einer derivatisierten Hefe, Fig. 2: Verlaufskurven für behandelte und unbehandelte Haut.Fig. 1: a two-dimensional TLC diagram for lipids and other ingredients of a derivatized yeast, Fig. 2: Traces for treated and untreated skin.
noch unDekannt ist, z. B. die Gattungen Candida und Torulopsis. „Schizomycetes" sind hefeartige Bakterien. In der Beschreibung wird der Begriff »Pilze" abkürzend für die vorgenannten Gattungen benutzt.still unknown, z. B. the genera Candida and Torulopsis. "Schizomycetes" are yeast-like bacteria In the description, the term "mushrooms" is used abbreviated for the aforementioned genera.
»Hefepräparat" bedeutet in der vorliegenden Beschreibung Hofeganzzellen, Hefelösung, Hefesuspensionen, einschließlich"Yeast preparation" in the present specification means farmyard gums, yeast solution, yeast suspensions, including
gleicher Zusammensetzung, dar.of the same composition, dar.
der Oj-Verbrauch ermittelt, nachdem bei der Atmung entstehendes CO2 quantitativ adsorbiert worden ist. Der auf Normalbedingungen umgerechnete Sauerstoffverbrauch, dividiert durch den Verbrauch einer Kontrollprobe ohne Testsubstanz, ist unmittelbar ein Maß für den Atmungssteigerungsfaktor.Oj consumption is determined after CO 2 produced by respiration has been quantitatively adsorbed. The oxygen consumption converted to standard conditions, divided by the consumption of a control sample without test substance, is a direct measure of the respiration increase factor.
Die meßbare Atmungssteigerung bei den erfindungsgemäßen Ascomycetes-, Schizomycetes- und Hefeprodukten ist dramatisch, was anhand der folgenden Tabelle I mit einem Hefeprodukt nach Beispiel 1 ersichtlich wird.The measurable increase in respiration in the Ascomycetes, Schizomycetes and yeast products of the invention is dramatic, as can be seen by the following Table I with a yeast product according to Example 1.
und Hefezellen sind die unter definierten Versuchsbedingungen erhaltenen TLC-Diagramme von Lipiden, Aminosäuren undand yeast cells are the TLC diagrams of lipids, amino acids and. obtained under defined experimental conditions
1 g derivatisierte Hefe mit 6 ml CHCI3/CH3OH (2:1) extrahiert.1 g of derivatized yeast is extracted with 6 ml of CHCl 3 / CH 3 OH (2: 1).
1. Fließmittel CHCI3=CH3OH=H2O (65:25:4)1. flow agent CHCl 3 = CH 3 OH = H 2 O (65: 25: 4)
2. Fließmittel CeHe:C4H10O:C2HeO:CH3COOH (65:40:1:0,5)Benzol:Diäthyläther:Ethanol:Essigsäure2. Solvent C e H e : C 4 H 10 O: C 2 H e O: CH 3 COOH (65: 40: 1: 0.5) Benzene: Diethyl ether: Ethanol: acetic acid
betrachtet und die Flecken werden markiert. Zum Nachweis von Lipiden v/erden die Platten mit Primulin-Reagenz besprüht und unter der UV-Analysenlampe bei 366 nm ausgewertet.considered and the spots are marked. To detect lipids, the plates are sprayed with Primulin reagent and evaluated under the UV analysis lamp at 366 nm.
zusätzlich zu der atmungssteigernden Aktivität ein Hemmfaktor vorgefunden, der inhibierend auf die Oxidasen wirkt. Alsin addition to the respiratory enhancing activity, a inhibitory factor which inhibits the oxidases is found. When
[1.4.3.2.] katalysiert ist, gehemmt bzw. verlangsamt. L-Aminosäureoxidase ist in vielen Nährstoffverwertungssystemen wie[1.4.3.2.] Is catalyzed, inhibited or slowed down. L-amino acid oxidase is common in many nutrient utilization systems
ist noch nicht gesichert.is not yet secured.
1) L-AS + H2O/Enzym-FMN -» α-Ketosäure+ NH3+Enzym-FMN-H2 1) L-AS + H 2 O / enzyme FMN - »α-keto acid + NH 3 + enzyme-FMN-H 2
2) Enzym-FMN · H2 + O2 -♦ Enzym-FMN + H2O2 2) Enzyme-FMN · H 2 + O 2 - ♦ Enzyme-FMN + H 2 O 2
Der Sauerstoffverbrauch kann unter Berücksichtigung der gebildeten H2O2-Menge gemessen werden, da H2O2 in Wasser und '/2O2 zerfällt. In Gegenwart von Katalase ist dieser Zerfall spontan und quantitativ, so daß die Gesamtreaktion der L-Aminosäureoxidation der Gleichung 3 entspricht.The oxygen consumption may be measured taking into account the formed H 2 O 2 amount, since H 2 O 2 '/ 2O 2 disintegrates in water and. In the presence of catalase, this decay is spontaneous and quantitative, so that the overall reaction of L-amino acid oxidation is Equation 3.
3) R-CH-COOH + '/2O2 -* R-CO-COOH + NH3 NH2 3) R-CH-COOH + '/ 2O 2 - * R-CO-COOH + NH 3 NH 2
verbraucht als ohne diesen Hemmfaktor, so daß hierdurch mehr Aminosäuren und Proteine verfügbar bleiben, was zu einer gesteigerten und intensiveren Nährstoffausnutzung führen kann.consumed as without this inhibitory factor, leaving more amino acids and proteins available, which can lead to increased and more intensive nutrient utilization.
von L-Aminosäureoxidase und !.-Phenylalanin als auch die Umsetzung des Enzyms mit Testlösung (ohne Phenylalanin) und desof L-amino acid oxidase and! .- Phenylalanine and the reaction of the enzyme with test solution (without phenylalanine) and the
6 N KOH getränkt sind. Die Lösungen werden bei 370C äquilibriert, dann wird die Enzymlösung in den die Testlösung bzw. eine6 N KOH are soaked. The solutions are equilibrated at 37 0 C, then the enzyme solution in the test solution or a
60min.60min.
"L-Aminosäureoxidase + Hefelösung" - der Sauerstoffbedarf ist auf die in der Hefe selbst enthaltenen Aminosäuren zurückzuführen - und setzt dann die Summonkurve, die ein Maß für die theoretisch zu erwartende Sauerstoffaufnahme ist, in"L-amino acid oxidase + yeast solution" - the oxygen demand is due to the amino acids contained in the yeast itself - and then sets the Summon curve, which is a measure of the theoretically expected oxygen uptake, in
prozentualen Hemmfaktor ausdrückt (z. B. 0,42 = 42% Hemmung bzw. weniger Sauerstoffverbrauch). Verglichen mit den jeweiligen Ausgangszellmaterialien, die praktisch den theoretischen Summenkurven entsprechend.ist der Hmf beachtlich und erreicht Werte von bis zu 70 oder sogar 80%.percent inhibitory factor (eg 0.42 = 42% inhibition or less oxygen consumption). Compared with the respective starting cell materials, which correspond practically to the theoretical cumulative curves, the Hmf is considerable and reaches values of up to 70 or even 80%.
ihre Wundheilungsaktivität, die sich bei der Heilung von Schnittwunden am Rücken von Ratten bewerten läßt. Die Spannung an der Wundstelle der behandelten Tiere war nach β Tagen deutlich größer als bei einer Kontrollgruppe. Auch bei der Prüfung am 21 .Tag war der Vorsprung der behandelten Tiere vor der Kontrollgruppe noch meßbar.their wound healing activity, which can be evaluated in the healing of cuts on the back of rats. The tension at the wound site of the treated animals was significantly greater after β days than in a control group. Also at the test on the 21st day the lead of the treated animals before the control group was still measurable.
angebracht und im Abstand von jeweils 1 cm an drei Stellen zusammengenäht. Am 6., 11., 16. und 21.Tag nach dem Eingriff wurde die Wunde geöffnet, und es wurden 3 schmale Hautscheiben Im rechten Winkel zur Wundlinie genommen, einschließlich der 1 cm Breite der Wundlinie. Anschließend wurde die Spannung gemessen, die beim Abziehen der verwendeten Partie entstand.attached and sewn together at intervals of 1 cm in three places. On the 6th, 11th, 16th and 21st day after the procedure, the wound was opened and 3 small slices of skin were taken at right angles to the wound line, including the 1 cm width of the wound line. Subsequently, the tension was measured, which resulted from the removal of the batch used.
2,5ml/kg des Zentrifugenüberstandes der Testlösung aus Beispiel 1 wurden am Tage des Wundschnittes und dann täglich verabreicht. Die Kontrollgruppe erhielt eine Applikation von 2,5 ml/kg physiologische Kochsalzlösung in ansonsten gleicher2.5 ml / kg of the centrifuge supernatant of the test solution of Example 1 were administered on the day of the wound incision and then daily. The control group received an application of 2.5 ml / kg of physiological saline in otherwise the same
gleichmäßig anstieg. Bei jeder Tagesprüfung zeigten die behandelten Tiere eine höhere Spannung der Hautpartie als dieincrease evenly. At each day test, the treated animals showed a higher tension of the skin area than the
* Testgruppe erhielt 2,5ml Testlösung/kg Körpergewicht* Test group received 2.5ml test solution / kg body weight
Die merklich verbesserte Wundheilung kann so erklärt werden, daß die erfindungsgemäßen Ascomycetes-, Schizomycetes- und Hefepräparate die G webeatmung fördern und die metabolische Funktion erhöhen, so daß das Gewebe wesentlich schneller regeneriert wird.The markedly improved wound healing can be explained so that the Ascomycetes, Schizomycetes and yeast preparations according to the invention promote tissue ventilation and increase the metabolic function so that the tissue is regenerated much more rapidly.
Nicht nur die verletzte Haut, sondern auch gesunde, unverletzte Haut wird durch das erfindungsgemäße Präparat, z. B. die derlvatisierte Hefe, günstig beeinflußt. Unter Einwirkung eines biophysikalisch derivatisierten Hefepräparates (Beispiel 1) wurde das Feuchtigkeitshaltevermögen menschlicher Haut normalisiert und vielfach verbessert. Um diese Wirkung nachzuweisen, wurde der Wassergehalt der Haut vor und nach der Behandlung über mehrere Stunden bestimmt. Präparat enthaltende Formulierungen wurden auf eine trockene Haut aufgebracht, also auf eine Haut mit schlechtem Feuchtigkeitsausgleich. Auf die gleiche Haut wurde eine Kontrollprobe ohne Präparat, aber ansonsten gleicher Zusammensetzung aufgegeben. Im Ergebnis zeigte sich, daß der Wassergehalt erhöht und das Feuchtigkeitshaltevermögen der Haut praktisch verdoppelt wurde. In Fig. 2 sind die Verlaufkurven für behandelte und unbehandelte Haut wiedergegeben. Auf der X-Achse sind die Stunden nach Behandlung und auf der Y-Achse ist die Feuchtigkeit der Haut in Prozent angegeben.Not only the injured skin, but also healthy, uninjured skin by the preparation according to the invention, for. As the dervated yeast, favorably influenced. Under the influence of a biophysically derivatized yeast preparation (Example 1), the moisture retention capacity of human skin was normalized and improved many times. To demonstrate this effect, the water content of the skin was determined before and after the treatment over several hours. Preparation containing formulations were applied to a dry skin, so on a skin with poor moisture balance. On the same skin, a control sample without preparation, but otherwise the same composition was abandoned. As a result, it was found that the water content was increased and the moisture retention capacity of the skin was practically doubled. FIG. 2 shows the progress curves for treated and untreated skin. On the X-axis are the hours after treatment and on the Y-axis is the moisture of the skin in percent.
Wie schon anhand der Wundheilung erläutert, wird die Hau'.ciastizität bzw. die Hautspannung durch Formulierungen, die ein erfindungsgemäßes Pilz· oder Hefepräparat enthalten, verbessert, was man durch Resonanzfrequenzmessungen an menschlicher Haut gut verfolgen kann.As already explained with reference to wound healing, skin elasticity or skin tension is improved by formulations containing a fungus or yeast preparation according to the invention, which can be easily followed by resonance frequency measurements on human skin.
Ein weiteres Kriterium für die gesteigerte Stoffwechselaktivität der erfindungsgemäßen Ascomytes-, Schizomycetes- und Hefepräparate ist die positive Beeinflussung des reticuloendothelialen Systems. Auf Grund ihrer Wirkung auf die durch Tryphanblau gehemmte Funktion d?s RES der Rattan nach der Kongorot-Methode kann für die neuen Präparate eine RES-aktivierende Wirkung festgestellt //erden. Hierzu wurden männliche Wistarratten mit einem Körpergewicht von 210-23Og intravenös mit 1 ml/kg einer 1%igen Kongorotlösung injiziert; nach 4 Minuten und nach 60 Minuten wurde Blut abgenommen. Der Kongorot-Koeffizient ergab sich aus dem Verhältnis der dekadischen Extinktion bei 500 nm des zehnfach verdünnten Serums. Zur Hemmung der Funktion des RES-Systems wurden 10ml/kg 1%ige Tryphanblau-Lösung intraperitoneal verabreicht. Über die Messung der dekadischen Extinktion bei 650 nm konnte die Hemmung als berichtigte dekadische Extinktion bei 500 nm errechnet werden. Die Tryphanblau-Verabreichung erfolgte 6,5 Stunden vor Untersuchung des RES-Systems mit Kongorot. Im Test wurden 5 Stunden vor dieser Untersuchung 0,5ml der Testlösung (Zentrifugenüberstand naci. Beispiel 1) intraperitoneal verabreicht. Die Kontrollgruppe erhielt eine adäquate Menyo physiologische Kochsalzlösung. Pro Gruppe wurden jeweils 25 Versuchstiere getestet.Another criterion for the increased metabolic activity of the Ascomytes-, Schizomycetes- and yeast preparations according to the invention is the positive influence on the reticuloendothelial system. Due to its effect on the inhibited by Tryphanblau function of RES rattan according to the Congo red method can be found for the new preparations, a RES-activating effect // earth. For this purpose, male Wistar rats having a body weight of 210-23 Og were injected intravenously with 1 ml / kg of a 1% Congo red solution; after 4 minutes and after 60 minutes blood was taken. The Congo red coefficient was the ratio of the absorbance at 500 nm of the tenfold diluted serum. To inhibit the function of the RES system, 10 ml / kg of 1% tryphan blue solution was administered intraperitoneally. By measuring the absorbance at 650 nm, the inhibition could be calculated as a corrected decadic absorbance at 500 nm. Tryphan Blue was administered 6.5 hours prior to examination of the RES system with Congo Red. In the test, 0.5 ml of the test solution (centrifugal supernatant naci, Example 1) was intraperitoneally administered 5 hours before this examination. The control group received adequate Menyo physiological saline. 25 animals were tested per group.
Für die behandelte Gruppe wurde im Mittel ein Kongorot-Koeffizient von 9,4 und für die Kontrollgruppe ein Kongorot-Koeffizient von 16,1 gefunden, was als ein direkter Nachweis für die steigernde Wirkung der erfindungsgemäßen Ascomycetes-, Schizomycetes- und Hefepräparate auf die Funktion des RES-Systems zu betrachten ist, da die hemmende Wirkung durch Tryphanblau aufgehoben wird.For the treated group, an average Congo red coefficient of 9.4 and for the control group a Congo red coefficient of 16.1 was found, which is a direct demonstration of the enhancing effect of the Ascomycetes, Schizomycetes and Yeast preparations of the invention on function of the RES system, since the inhibitory effect is reversed by tryphan blue.
Die für die erfindungsgemäßen Ascomycetes-, Schizomycetes· und Hefepräparate nachgewiesenen erhöhten Stoffwechselaktivitäten sind insofern völlig überraschend, als die Ascomycetes-, Schizomycetes- und Hefezellen und ihre Zellpräparate nur durch physikalische Methoden behandelt werden. Diese Behandlung wird hier allgemein „Derivatisierung" genannt. Die Ascomycetes·, Schizomycetes- und Hefezellen können durch Kälteeinwirkung, Laserbestrahlung, Sonifizierung und andere biophysikalische Methoden sowie eine relativ kurzzeitige intensive Wärmebehandlung derivatisieri werden. Hierbei kommt es offensichtlich zu einer deutlichen Verkleinerung von Zellen und der Hefezellen vorzugsweise auf das 0,5fache oder weniger, während die Zellwände stärker werden, so daß das Verhältnis von mittlerem Zelldurchmesser/Zellwandstärke um einen Faktor geändert wird, der bevorzugt im Bereich von etwa 5 bis 20 liegt.The increased metabolic activities demonstrated for the Ascomycetes, Schizomycetes and yeast preparations according to the invention are completely surprising insofar as the Ascomycetes, Schizomycetes and yeast cells and their cell preparations are treated only by physical methods. This treatment is generally called "derivatization." Ascomycetes, Schizomycetes, and yeast cells can be derivatized by exposure to cold, laser irradiation, sonification, and other biophysical methods, as well as relatively brief intense heat treatment, which obviously results in a marked reduction in size of the cells Yeast cells are preferably 0.5 times or less as the cell walls become stronger, so that the ratio of mean cell diameter / cell wall thickness is changed by a factor which is preferably in the range of about 5 to 20.
Bevorzugt enthält das Präparat der Ascomycetea- und Schizomycetes-Zellmaterialien zusätzlich eine kleinere Menge an Mitochondrienextrakt, durch den die wachsturrufördernde Aktivität des Präparates noch zusätzlich gesteigert werden kann. Der Mitochondrienextrakt wird am besten bereits vor oder während der biophysikalischen Behandlung zugesetzt. Mitochondrion (auch Chondriosomen genannt) sind formvariable, ca. 0,1 bis 1 pm breite und 1-5 pm lange Einschlüsse im Protoplasma der Zellen von Einzellern, Pflanzen und Tieren. Sie sind im Handel als pyrogenfreie Trockenpulver oder als Lösungen erhältlich, wie z. B. Mitochondyl-Pulver der Fa. Widmer AG, Schweiz, das ca. 2% Stickstoff und einen Trockensubstanzgehalt von ca. 50% aufweist. Dieses Handolsprodukt wird in den Beispielen eingesetzt. Im allgemeinen werden die Mitochrondrienextrakte hergestellt durch Zertrümmern dt· Zellen, meistens Hefezellen, und anschließende geeignete Rehydratations-, Suspendierungs-, Wasch- und Trockenschritte. Siehe z.B. P.M.Nossal, Austral. J. exp. Biol. med. Sei. 31,583 (1965); M.Merkenschläger, K.Schloßmann, W.Kurz, Biochem. Z. 329,332 (1957). Miiochondyl stellt ein Produkt aus extrahierten Hefezell-Mitochondrien, vermischt mit Puffersubstanzen, dar und wird als weißes Pulver direkt oder durch Zubereiten einer entsprechenden gepufferten Lösung, die auch Konservierungsstoffe enthält, zugesetzt. Bovorzugt wird eine Mitochondrienextraktmenge von etwa 0,05 bis 0,50Gow.-% verwendet, ausgedrückt als Trockensubstanz und bezogen auf den Trockenfeststoffanteil der zu derivatisierenden Zellen.The preparation of Ascomycetea and Schizomycetes cell materials preferably additionally contains a smaller amount of mitochondrial extract, by means of which the growth-stimulating activity of the preparation can be additionally increased. The mitochondrial extract is best added before or during the biophysical treatment. Mitochondrion (also called chondriosomes) are variable in shape, about 0.1 to 1 pm wide and 1-5 pm long inclusions in the protoplasm of cells of unicellular organisms, plants and animals. They are commercially available as pyrogen-free dry powders or as solutions, such as. B. Mitochondyl powder Fa. Widmer AG, Switzerland, which has about 2% nitrogen and a dry matter content of about 50%. This Handols product is used in the examples. In general, the mitochondrial extracts are prepared by shattering cells, mostly yeast cells, and subsequent appropriate rehydration, suspension, washing and drying steps. See, e.g. P. M. Nossal, Austral. J. exp. Biol. Med. Be. 31,583 (1965); M. Merkerschläger, K. Schlossmann, W. Kurz, Biochem. Z. 329,332 (1957). Miiochondyl is a product of extracted yeast cell mitochondria mixed with buffering agents and is added as a white powder directly or by preparation of a corresponding buffered solution which also contains preservatives. Preferably, a mitochondrial extract amount of about 0.05 to 0.50 wt% is used, expressed as dry substance and based on the dry solids content of the cells to be derivatized.
Eine Vermehrung der Ascomycetes-, Schizomycetes- und Hefezellen findet unter den gegebenen Bedingungen während der Behandlung praktisch nicht mehr statt und ist auch nicht erwünschtAn increase in the Ascomycetes, Schizomycetes and yeast cells under the given conditions during the treatment is practically no longer taking place and is not desirable
Der bevorzugt verwendete Träger 'jesteht aus: The preferred carrier used is:
a) einer geringen Menge (bevorzugt 0,2 bis 5,0Gew,-%) bereits biophysikalisch derivatisierter Hefe und/oder Chondriosomen-Extrakt (bevorzugt 0,01 bis 0,1 Gew.-%), gewonnen aus der als Ausgangsmaterial verwendeten Hefe oder einer anderen Hefe,a) a small amount (preferably 0.2 to 5.0% by weight) of already biophysically derivatized yeast and / or chondriosome extract (preferably 0.01 to 0.1% by weight), obtained from the yeast used as starting material or another yeast,
b) Celluloseglykolaten, pyrogener Kieselsäure, Tranganth und/oder Carrageenen,b) cellulose glycolates, fumed silica, tranganth and / or carrageenans,
c) zwei vergärungsfähigen Mono- und/oder Disaccharide^c) two fermentable mono- and / or disaccharides ^
d) Konservierungsmitteln,d) preservatives,
c) Spurenelementen wie Mn, Co, Zn, Mg, als Sulfate oder Giukonate.c) trace elements such as Mn, Co, Zn, Mg, as sulfates or Giukonate.
Die Starterhefe (a) dient als Anlasser für die Behandlung, der Zusatz (b) sorgt für eine bessere Verteilung der Hefe. Die Kohlenhydrate (c) schützen vor der Vergärung der zelleigenen Kohlenhydrate. Als Konservierungsmittel (d) dienen bevorzugt Parabene (4-Hydroxybenzoesäurealkylester), Kochsalz und Calciumchlorid. Sie schützen das Endprodukt von Anfang an vorder Einwirkung von Mikroorganismen. Der Zusatz von Spurenelementen (e) ermöglicht erwünschte Konzentrationsverschiebungen in der Hefezelle bzw. Hefezellsuspension.The starter yeast (a) serves as a starter for the treatment, the additive (b) ensures a better distribution of the yeast. The carbohydrates (c) protect against the fermentation of the cell's own carbohydrates. As preservative (d) are preferably used parabens (4-Hydroxybenzoesäurealkylester), saline and calcium chloride. They protect the end product from the onset of exposure to microorganisms. The addition of trace elements (e) allows for desirable concentration shifts in the yeast cell or yeast cell suspension.
Auch das Wachstum von Mikroorganismen z. B. Bifidus, Lactobacillus, Kokken, Bodenbakterien und Darmbakterien, wird durch die erfindungsgemäßen Ascomycetes·, Schizomycetes- und Hefeprodukte positiv beeinflußt.The growth of microorganisms z. B. bifidus, lactobacillus, cocci, soil bacteria and intestinal bacteria, is positively influenced by the Ascomycetes ·, Schizomycetes and yeast products of the invention.
Mit den erfindungsgemäßen biophysikalisch derivatisierten Ascomycetes·, Schizomycetes· und Hefepräparaten wird bei höheren Pflanzen eine merkliche Beeinflussung des Pflanzenwachstums, des Blütenstandes und der Fruchtbildung erzielt. Werden dem Gießwasser bis zu 1 % der flüssigen Ascomycetes·, Schizomycetes· und Hefopräparate nach den folgenden Beispielen 1 bis 6 hinzugefügt, wachsen Zierpflanzen wie Tagetes, Petunien, Lobelien, Chrysanthemen und Nelken innerhalb einer Testperiode von sechs Wochen gegenüber einer Vergleichs(Kontroll)probe mindestens doppelt so schnell mit ausgeprägter Blatt· und Blütenfülle. Ähnliche Verbesserungen werden auch bei Nutzpflanzen wie Erbsen, Sonnenblumen und Mais beobachtet, womit die hervorragende Eignung der erfindungsgemäßen Präparate als wachstumstimulierender Zusatz zu Gieß- und Bewässerungslösungen belegt wird. Diese Wirkung ist wahrscheinlich mit einer günstigen Beeinflussung der Mikroflora des Bodens zu erklären.With the biophysically derivatized Ascomycetes®, Schizomycetes® and yeast preparations according to the invention, a marked influence on plant growth, inflorescence and fruiting is achieved in higher plants. If up to 1% of the liquid Ascomycetes®, Schizomycetes® and yeast preparations according to the following Examples 1 to 6 are added to the irrigating water, ornamental plants such as Tagetes, Petunia, Lobelia, Chrysanthemums and Cloves grow over a test period of six weeks compared with a control sample at least twice as fast with pronounced leaf and flower abundance. Similar improvements are also observed in crops such as peas, sunflowers and corn, thus demonstrating the excellent suitability of the preparations according to the invention as a growth-stimulating additive to casting and irrigation solutions. This effect is likely to be explained by a favorable influence on the microflora of the soil.
30 Gewichtsteile 95%ige Trockenhefe (Saccharomyces cerevisiae) und 70 Gewichtsteile einer wäßrigen Lösung bzw. Suspension eines Trägers enthaltend (in Gewichtsprozenten) 0,5% biophysikalisch derivatisierte Hefe, 0,03% Chondriosomen-Extrakt, 0,6% Celluloseglykolate, 0,1 % Parabene, 2% Salz, insgesamt 0,1 % Glukose und Saccharose, 0,00001 % Spurenelemente, werden bei einer Temperatur von 15-25°C mit einem herkömmlichen CO2-Laser bestrahlt. Die Leistung des Lasers in der Größenordnung von 0,3 Watt ist völlig ausreichend. Seine Fokussierung erfolgt auf 0,05-5kW/cm2.30 parts by weight of 95% dry yeast (Saccharomyces cerevisiae) and 70 parts by weight of an aqueous solution or suspension of a carrier containing (by weight) 0.5% biophysically derivatized yeast, 0.03% chondriosomes extract, 0.6% cellulose glycolates, 0, 1% parabens, 2% salt, 0.1% total glucose and sucrose, 0.00001% trace elements are irradiated at a temperature of 15-25 ° C with a conventional CO 2 laser. The power of the laser in the order of 0.3 watts is quite sufficient. Its focus is 0.05-5kW / cm 2 .
Für die Aufnahme der Suspension zur Bestrahlung mit dem COrLaser findet eine Vorrichtung Anwendung, die aus zwei Gefäßen geeigneter Größe besteht, die an den unteren Enden durch ein aus Infrarotglas bestehendes P /·ίγ miteinander verbunden sind. Dieses Rohr hat eine Länge von 20-50cm und einen Innendurchmesser von 3-6mm. 2Ol der Suspension werden mit Reinststickstoff in das mit Stickstoff gespülte linke Gefäß der Vorrichtung eingedrückt. Nachdem der Laser mit dem Endoskop auf eine Punktgröße entsprechend dem Innendurchmesser des Verbindungsrohres eingestellt worden ist, wird die Suspension mit Stickstoff aus dem einen Gefäß in das andere Gefäß gedrückt, wobei auch das zweite Gefäß unter Stickstoff gesetzt wird. Bei einer Leistung von 0,3W und einer Fließgeschwindigkeit der Suspension von 20-200ml/min wird bis zur gewünschten, mikroskopisch überprüfbaren Zellverkleinerung behandelt. Anschließend wird die Suspension kurz (höchstens 25min) auf eine Temperatur über 5O0C erwärmt und unter Rühren bei der Endtemperatur gehalten. Die auf 3O0C abgekühlte Suspension wird dann zur Konservierung mit 0,1 bis 0,2Gew.-% eines Konservierungsmittels wie Sorbinsäure und/oder Nipagin versetzt. Die morphologische Untersuchung der Zellen ergab eine Verkleinerung des mittleren Zelldurchmessers auf ca. 50% und eine deutliche Verstärkung der Zellwände. Sowohl das Gesamtprodukt (Suspension) als auch die durch Zentrifugieren (lOOOOUmpm) erhältlichen Fraktionen, d.h. Zentrifugenüberstand bzw. Zentrifugenrückstand, erweisen sich im Wr.rburg-Versuch als stoffwechselaktiv (im Gegensatz zur Ausgangshefe), wenn gemäß dem beschriebenen Test auf atmungssteigernde Wirkung bei Rattenleberhomogenat geprüft wurde. Der Atmungssteigerungsfaktor für das Gesamtprodukt und für den Zentrifugenüberstand war größer als 4 (siehe Tab. I). Weitere Aktivitäten wurden im beschriebenen Wundheilungsiest (Tab. IiI) und im Test zur Aktivierung des RES-Systems nachgewiesen.For the recording of the suspension for irradiation with the CO r laser, a device is used, which consists of two vessels of suitable size, which are connected to each other at the lower ends by an existing of infrared glass P / · γ. This tube has a length of 20-50cm and an inner diameter of 3-6mm. 2Ol of the suspension are pressed with pure nitrogen into the nitrogen-flushed left vessel of the device. After the laser has been set with the endoscope to a point size corresponding to the inner diameter of the connecting tube, the suspension is pressed with nitrogen from one vessel into the other vessel, wherein the second vessel is placed under nitrogen. At a power of 0.3 W and a flow rate of the suspension of 20-200 ml / min is treated until the desired, microscopically verifiable cell reduction. Subsequently, the suspension is briefly (at most 25 min) heated to a temperature above 5O 0 C and kept under stirring at the final temperature. After cooling to 3O 0 C suspension is then added to preservation with 0.1 to 0,2Gew .-% of a preservative such as sorbic acid and / or Nipagin. The morphological examination of the cells showed a reduction of the average cell diameter to about 50% and a significant strengthening of the cell walls. Both the total product (suspension) and the fractions obtainable by centrifugation (10000 rpm), ie centrifuge supernatant or centrifuge residue, are found to be metabolically active (as opposed to starting yeast) in the Wr.burg trial when respiration-enhancing activity in rat liver homogenate has been demonstrated in the test described was tested. The respiration increase factor for the total product and for the centrifuge supernatant was greater than 4 (see Table I). Further activities were demonstrated in the described wound healing test (Table IiI) and in the test for activating the RES system.
In einer Dosierung von 2%o wurde das Gesamtprodukt bei der Vormast von 10-35kg wiegenden Ferkeln bzw. Absetzferkeln getestet (siehe Tab. IV bzw. V). Die Verbesserung der täglichen Futteraufnahme war mit ca. 5£% bzw. 42 % deutlich größer als bei Anwendung handelsgängiger Futterzusatzpräparate, so daß eine Verbesserung der Futterverwertung von 16,7 % resultierte. Die Ergebnisse sind im einzelnen in den folgenden Tab. IV und V zusammengefaßt.In a dosage of 2% o, the total product was tested in the Vormast of 10-35kg weighing piglets or weaned piglets (see Tab. IV or V). The improvement in daily feed intake was significantly higher at around 5 lb% and 42%, respectively, than when using commercial feed supplements, resulting in an improvement in feed conversion of 16.7%. The results are summarized in detail in the following Tab. IV and V.
Die Handelepräparate waren A: CTC und B: bayo-nox (ebenso in Tab.V) The trade preparations were A: CTC and B: bayo-nox (also in Tab.V)
(Absetzalter 21 Tage, Lebendgewicht 5-12,5 kg)(Weaning age 21 days, live weight 5-12.5 kg)
1001 einer Suspension von Torulopsis utilis und Saccharomyces cerevisiae (2:8-Gemisch) mit einem Trockenfeststoffgehalt von insgesamt 20% werden mit einer Mischung versetzt, die enthält:Add 1001 of a suspension of Torulopsis utilis and Saccharomyces cerevisiae (2: 8 mixture) with a total dry solids content of 20% to a mixture containing:
1 kg Produkt aus Beispiel 11 kg of product from Example 1
0,05kg Chondriosomen-Extrakt0.05kg chondriosome extract
0,1 kg Celluloseglykolat0.1 kg cellulose glycolate
0,1 kg Gummi arabicum0.1 kg of gum arabic
0,1 kg Glukose + Mannose0.1 kg of glucose + mannose
0,1 kg Parabene0.1 kg parabens
1,5kg eines Salzgemisches aus Kochsalz, MnSO4 und MgSO4 und1.5 kg of a salt mixture of common salt, MnSO 4 and MgSO 4 and
0,00001 % Spurenelemente.0.00001% trace elements.
kurzzeitig (2 min) bis auf 8O0C erhitzt.briefly (2 min) heated to 8O 0 C.
geeigneten Vorrichtung (z.B. Büchi-Apparatur) sprühgetrocknet.wobei pro Stunde ca. 1,5kg festes Produkt anfallen.suitable device (e.g., Büchi apparatus) is spray dried, with about 1.5 kg of solid product per hour.
flüssigen Produkt (vor Sprühtrocknen). Im Wundheilungsversuch wurde ein Vorsprung von ca. 100% gegenüber einerliquid product (before spray drying). In the wound healing trial, a lead of about 100% over one
demgegenüber inaktiv.In contrast, inactive.
geringe Menen des Zusatzes zum Normalfutter (Zusätze kleiner als 1 %o) bewirkten einen überraschend hohen Wachstumseffekt, was sich in einer beträchtlichen Futterersparnis manifestierte. Die Tab. Vl und VII fassen die Ergebnisse zusammen.small amounts of the addition to the normal diet (additions less than 1 %) caused a surprisingly high growth effect, which resulted in a considerable feed saving. Tables Vl and VII summarize the results.
mittleres Gewicht 1,9 3,7 4,1average weight 1.9 3.7 4.1
der Jungfische nach 47 Tagenthe young fish after 47 days
einer mittleren Beckentemperatur von 24,50C zweimal wöchentlich gefüttert. Zwei Fischgruppen erhielten 0,8 bzw. 0,95%oZusatz des Präparates aus Beispiel 2, verteilt auf 3 Gaben pro Woche.a mean pelvic temperature of 24.5 0 C fed twice a week. Two fish groups received 0.8 and 0.95%, respectively, of the preparation of Example 2, distributed over 3 doses per week.
3600 Hühnern bestehende Versuchsgruppe wurde 60 Tage unter 0,1 Gew.-% Zusatz-Anreicherung gefüttert. Eine aus 3600 Hühnern bestehende Kontrollgruppe erhielt Futter ohne Zusatzstoff. Körpergewicht von je 20 Hühnern und Sterblichkeit wurden ermittelt (Tab. VII).3600 chickens experimental group was fed 60 days under 0.1 wt% additional enrichment. A control group consisting of 3,600 chickens received feed without additive. Body weights of 20 chickens each and mortality were determined (Table VII).
Hluraus ergab sich ein Nahrungsverbrauch (kg) pro kg Körpergewicht für die Versuchsgruppe von 2,27 und für die Kontrollgruppe von 2,65. Die Sterblichkeit bei der Versuchsgruppe war 4,9%, die der Kontrollgruppe 7,7%. Die verbesserte Futterverwertung entspricht einer Futterersparnis von ca. 15%.Hluraus gave a food consumption (kg) per kg body weight for the experimental group of 2.27 and for the control group of 2.65. The mortality in the experimental group was 4.9%, that of the control group 7.7%. The improved feed conversion corresponds to a feed saving of about 15%.
10kg Preßhefe (Saccharomyces cerevisiae) werden in einer geeigneten Kühlvorrichtung auf eine Temperatur unter -130C abgekühlt und etwa 4Std. bei dieser niedrigen Temperatur konditioniert. Anschließend werden zu dem Produkt 500ml einer wäßrigen Suspension gegeben, die 15g Fructose und Saccharose, 40g feinteilige Kieselsäure (SiO2), 50g Präparat aus Beispiel 2 (Basis Feststoffprodukt), 15g Darabene und 160a Kcchsalz enthält; das Gemisch wird zunächst innig vermischt und auf10 kg pressed yeast (Saccharomyces cerevisiae) are cooled in a suitable cooling device to a temperature below -13 0 C and about 4 hours. conditioned at this low temperature. Then be added to the product 500ml of an aqueous suspension containing 15 g of fructose and sucrose, 40 g of finely divided silica (SiO 2), 50 g of preparation from example 2 (based on solid product) containing 15g D arabene and 160a Kcchsalz; the mixture is first intimately mixed and on
auf eine Temperatur zwischen 45*C und 75"C erwärmt, während ständig gerührt wird.heated to a temperature between 45 * C and 75 "C, while stirring constantly.
10kg Preßhefe (Saccharomyces cerevisiae) werden auf eine Temperatur unter -150C gebracht. Nach 24Std. werden hinzugefügt: 10g Parabene, 5g Sorbinsäure, 170g NaCI als Konservierungsmittel und 10g Saccharose, 15g SiO2, 10g Celluloseglykolat und 0,8mg Spurenelemente (Mn, Co, Zn, Mg).10kg pressed yeast (Saccharomyces cerevisiae) are brought to a temperature below -15 0 C. After 24 hours 10 g parabens, 5 g sorbic acid, 170 g NaCl as preservative and 10 g sucrose, 15 g SiO 2 , 10 g cellulose glycolate and 0.8 mg trace elements (Mn, Co, Zn, Mg) are added.
Nachdem das Gemisch Raumtemperatur (250C) erreicht hat, wird es unter Rühren in die in Beispiel 1 beschriebene Laser-Apparatur gebracht und mit Laserstrahlung solange behandelt, bis die Hefeteilchen auf mindestens 50% ihres Durchmessers vor der Lasereinwirkung geschrumpft sind. Anschließend wird unter weiterem Rühren noch kurz erwärmt (höchstens 20min), bis eine Temperatur zwischen 40°C und 8O0C erreicht ist.After the mixture has reached room temperature (25 ° C.), it is stirred into the laser apparatus described in Example 1 and treated with laser radiation until the yeast particles have shrunk to at least 50% of their diameter before the action of the laser. The mixture is then heated with continued stirring for a short time (at most 20 min) until a temperature between 40 ° C and 8O 0 C is reached.
Der Atmungssteigerungsfaktor dieses Produktes ist 5,1. Nach Konservieren der Suspension wird sprühgetrocknet. Das Produkt kann als biophysikalisch derivatisierte Starterhefe in den Beispielen 1-3 eingesetzt werden. Das erhaltene Produkt diente für Fütterungsversuche, wobei die stoffwechselsteigernde Aktivität derjenigen des Beispiels 2 vergleichbar war, wenn als Futtermittelzusatz bei Harvard-Hühnern getestet wurde. Diese Aktivität läuft in der Praxis auf eine merkliche Futterersparnis und stark verkürzte Fütterungszeit hinaus, was sich Insbesondere bei Großversuchen auszahlt.The respiratory enhancement factor of this product is 5.1. After preserving the suspension is spray-dried. The product can be used as a biophysically derivatized starter yeast in Examples 1-3. The product obtained was used for feeding experiments, where the metabolic increasing activity was comparable to that of Example 2 when tested as a feed additive in Harvard chickens. In practice, this activity amounts to a noticeable saving of feed and a much shorter feeding time, which pays off especially in large-scale experiments.
Auch bei der Fütterung von Pelztieren wie Chinchillas erwies sich das Präparat als außerordentlich nützlich. Das Haarkleid ist nach kurzer Zeit der Anwendung des Präparates glatter und glänzender. Das Fell älterer Zuchttiere ist noch verwendbar, wenn diese das aus Hefe hergestellte Präparat einige Zeit erhalten haben.Even when feeding fur animals such as chinchillas, the preparation proved to be extremely useful. The coat of hair is smoother and shinier after a short time of use of drug. The coat of older breeding animals is still usable if they have received the preparation made of yeast for some time.
500kg 20%!ge Hefe (Saccharomyces), sogenannte 20er Hefe, wurden bei 20°C mit 0,2kg Parabene, 0,03kg Sorbinsäure, 2kg NaCI, 0,2 kg Saccharose, 0.5kg SiO2,0,3kg Celluloseglykolat, 0,5kg Mitochondrienextrakt und 10mg Spurenelementen versetzt und mit einem Ultraturas als Rührer so stark gerührt, daß sich die Mischung rasch erwärmte. Bei 550C bis 6O0C wurde noch etwa 10min gerührt und dann abgekühlt. Bei Fütterungsversuchen wurden vergleichbare Testergebnisse erzielt, wie in den Beispielen 1 und 2.500kg of 20% yeast (Saccharomyces), so-called 20% yeast, were fermented at 20 ° C with 0.2kg parabens, 0.03kg sorbic acid, 2kg NaCl, 0.2kg sucrose, 0.5kg SiO 2 , 0.3kg cellulose glycolate, 0 , 5kg mitochondrial extract and 10mg of trace elements and stirred with an Ultraturas as a stirrer so strong that the mixture warmed rapidly. At 55 0 C to 6O 0 C was stirred for about 10min and then cooled. In feeding trials, comparable test results were obtained as in Examples 1 and 2.
50kg 20er Hefe (Saccharomyces) wurden bei 20°C mit 20g Glucose und Fruktose (10:1), 40g Alginat, 30g Mitochondrienextrakt, 180g NaCI, 10g Natriumascorbat als Konservierungsmittel und 1,5mg Spurenelementen versetzt und mit dem Ultraturrax unter gleichzeitiger Sonifmerung gerührt, wobei sich die Mischung ohne externe Wärmezufuhr erwärmte und bei 52-6O0C kurze Zeit, jedoch nicht länger als 20min gehalten wurde. Die abgekühlte Mischung wurde zur Steigerung der Joghurtproduktion eingesetzt, wobei den Kulturen weniger als 0,1 Gew.-%, bezogen auf das Gewicht des Gesamtmediums, hinzugefügt wurde. Das Produkt war auch für andere Belange in der Molkereiindustrie verwendbar, da es das Wachstum der entsprechenden Mikroflora beschleunigt.50kg yeast 20 (Saccharomyces) were added at 20 ° C with 20g glucose and fructose (10: 1), 40g alginate, 30g mitochondrial extract, 180g NaCl, 10g sodium ascorbate as preservative and 1.5mg trace elements and stirred with the Ultraturrax with simultaneous dusk, of which the mixture without external heat supply heated and at 52-6O 0 C short time, but was held for no longer than 20 minutes. The cooled mixture was used to increase yoghurt production with the cultures added less than 0.1% by weight based on the weight of the total medium. The product was also useful for other concerns in the dairy industry as it accelerates the growth of the corresponding microflora.
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