DD285920A5

DD285920A5 - Verfahren zur herstellung antidotumtragender makroorganismen, welche zur verminderung der die kulturpflanzen schaedigenden wirkung von thiolcarbamaten und chloracetaniliden geeignet sind

Info

Publication number: DD285920A5
Application number: DD89331043A
Authority: DD
Inventors: Jozsef Nagy; Istvan Nagy; Mihaly Kecskes; Karoly Balogh; Erzsebet Mile; Gyula Tarpai; Katalin Sellei; Karoly Fodor; Erzsebet Toth; Zsuzsanna Horvath
Original assignee: ��@��k��
Priority date: 1987-10-02
Filing date: 1989-07-21
Publication date: 1991-01-10
Also published as: DE3902822A1; GB2227251A; AT393935B; US5186723A; FR2642613A1; HUT49985A; BE1002829A3; LU87440A1; ATA12289A; NL8900335A; HU202058B; GB8901463D0; DD292831A5; BR8901189A; DD281948A5; FR2642613B1

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung antidotumtragender Makroorganismen, welche zur Verminderung der die Kulturpflanzen schaedigenden Wirkung von Thiolcarbamaten und Chloracetaniliden geeignet sind. Das Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, dasz man irgendeine Art von in oder auf Feldboeden lebenden oder unter Laborbedingungen in einem fluessigen oder festen physiologischen Medium gezuechteten, natuerlichen oder genmanipulierten Makroorganismen, bevorzugt genmanipulierten Pflanzen hoeherer Ordnung oder deren Organ-Gewebe- oder Zellkultur mit bestimmten Verbindungen oder deren Gemischen untereinander oder mit anderen Pestiziden, Regulatoren, Antidota usw. in solchen Mengen, die 5 bis 50 000 g/ha Wirkstoff bzw. 0,002 bis 5 000 ppm Wirkstoff entsprechen, behandelt, dann die derart antidotumtragend gewordenen Makroorganismen innerhalb von 30 Tagen nach der Behandlung erntet und erforderlichenfalls konserviert und/oder durch Zerkleinern, Pulverisieren, Extrahieren, Trocknen oder in anderer Weise aufarbeitet.{Herstellung; antidotumtragende Makroorganismen; Kulturpflanzen; Thiolcarbamate; Chloracetanilide; Makroorganismen, natuerliche, genmanipulierte; Zellkultur; Pestizide; Regulatoren; Antidota}

Description

oder von Chloracetaniliden der allgemeinen Formel (VIII), worin

R₄ und R₅ gleich oder verschieden sind, und für Wasserstoff oder eine C^-Alkylgruppe stehen; und R₈ eine Ci_6-Alkyl-, C^-Alkenyl-, (C^-AlkoxyMC^-alkyD- oder Pyrazolyl· (C^-alkyO-Gruppe

bedeutet,

geeignet sind, dadurch gekennzeichnet, daß man irgendeine Art der in bzw. auf Feldböden lebenden oder unter Laborbedingungen in einem flüssigen oder feston physiologischen Medium gezüchteten, natürlichen oder genmanipulierten Makroorganismen, bevorzugt genmanipulierten Pflanzen höherer Ordnung oder deren Organ-, Gewebe- oder Zellkultur mit irgendeiner der Verbindungen der allgemeinen Formeln (I) bis (VII), worin R₁, R₂ und R₃ wie oben definiert sind, oder mit deren aeylierten oder esterifizierten Derivaten, oder mit deren 0,0001 bis 99 Masseanteilen - in % - Gemischen untereinander oder mit anderen Pestiziden, Regulatoren, Antidota, Kunstdüngern oder anderen organischen oder anorganischen, natürlichen oder synthetischen Stoffen in solchen Mengen, die 5 bis 50000g/ha Wirkstoff, bzw. 0,002 bis 5000 ppm Wirkstoff entsprechen, behandelt, dann die derart antidotumtragend gewordenen Makroorganismen innerhalb von 30 Tagen nach der Behandlung erntet und erforderlichenfalls konserviert und/oder durch Zerkleinern, Pulverisieren, Extrahieren, Trocknen oder in anderer Weise aufarbeitet.

Hierzu 2 Seiten Formeln

Anwendungsgebiet der Erfindung

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung antidotumtragerider Makroorganismen, welche zur Verminderung der die Kulturpflanzen schädigenden Wirkung von Thiolcarbamaten der allgemeinen Formel (I), worin

Ri und R₂ gleich oder verschieden sind, und für eine Ci-e-Alkyl- oder Cj-e-Cycloalkylgruppe stehen; oder worin Ri und R₂ mit dem Stickstoffatom, an das sio gebunden sind, eine Hexamethylenimino-Gruppe bildon; und

R₃ eine C,_<,-Alky !gruppe bedeutet,

oder von Chloracetaniliden der allgemeinen Formel (VIII), worin

R₄ und R₆ gleich oder verschieden sind und für Wasserstoff oder eine C^-Alkylgruppe stehon; und

R₆ eine C,_₄-Alkyl-,C2.(,-Alkenyl-,(C,-₃-Alkoxy)-(C,_3-alkyl)· oder Pyra2olyI-(Ci_3-alkyl)-Gruppe bedeutet.

Charakteristik des bekannten Standes der Technik

Aus der Praxis des Pflanzenschutzes ist es allgemein bekannt, daß Thiocarbamate der allgemeinen Formel (I), besonders EPTC [S-Ethyl-N,N-di(n-propyl)-th!olcarbamat], Butylat (S-Ethyl-N,N-di(isobutyl)thiolcarbamat), Vernolat [S-Propyl-N,N-di(npropyllthiolcarbamat), Ethiolat |S-Ethyl-N,N-diothyl-thiolcarbamat), Cycloat (S-Ethyl-N-ethyl-N-cyclohexyl-thiolcarbamat), Molinat (S-ethyl-N.N-hexamethylen-thiolcarhamat). sowie Chloracetanilide der allgemeinen Formel (VIII), besonders Alachlor (2-Chlor-2',6'-diethyl-N-methoxymethyk-Acetanilid), Acetochlor (2-Chlor-2'-ethyl-6-methyl-N-ethoxymethyl-acetanilid)und Propachlor (2-Chlor-N-isopropyl-acetanilid) sehr wirksame Herbizide sind. Ein gemeinsamer Nachteil beider herbiziden Wirkstoffklassen besteht darin, daß diese eine verhältnismäßig niedrige Selektivität gegen einige Kulturpflanzen, z. B. gegen Mals, aufweisen.

Vor etwa 2C· Jahren hatte Hoffmann erkannt, daß es Verbindungen - z. B. 1,8-Napthalsäureanhydrid-Derivate - gibt, dio den phytotoxischan Effekt verringern. Von diesfirtvZeitpunkt wurde die Erforschung solcher synthetischen Verbindungen begonnen, die den auf die Kulturpflanzen ausgeübten schädigenden Effekte der Herbizide antagonisieren können.

In den folgenden HU-PS werden Antidota verschiedener Typen beschrieben:

Nr. 165736; Verbindungen in Form von Dichloracetamid-Derivaton, z. B. N,N-Diallyl-2,2-dichloracetamid (Kodenummer R-25788) als Antidota gegen Thiocarbamate;

Nr. 168977; Antidota in Form von Oxazolidinen und Thiazolidinen, die besonders bei Thiolcarbamaten anwendbar sind;

Nr. 170214; Gegengifte (Antidota) in Form von Thiazolidinsulfoxiden und Thiazolidinsulfonen, die bei Thiolcarbamaten und Chloracetaniliden anwendbar sind; Nr. 173775; Gegengifte (Antidote) in Form von Sulfiden zum Antidotieren von Thiclcartamaten; Nr. 176867; Oxazolidinderivate zum Antidotieren von Thiolcarbamaten; Nr. 179643; N-Benzoylsulfonyl-carbamate zum Antidotieren von Thiolcarbamaten; Nr. 180069; N-Benzoylsulfonyl-thiolcarbamate zum Antidotieren von Thiolcarbamaten; Nr. 180068; 2,3-Dibrompropionamid-Derivate zum Antidotieren von Thiolcarbamaien; Nr. 174487,176784,280422,181621,183997,185400 und 188135: Antidote in Form von substituierten Acetaroiden gegen Thiocarbamate und Chlorecetanilide. Nr. 176669,176796,178892 und 178895: Antidotierende Wirkuno von Dicarbonsäurederivaten mit den von den obigen

abweichenden Strukturen gegen Thiolcarbamate und/oder Chloracetanilide; sowie

Nr. 178883,179092 und 179093: Naphthalincarbonsäure-Derivate als Antidote gegen Thiolcarbamate und/oder Chloracetanilide. Ein Ergebnis der zur Erhöhung der Selektivität von Thiolcarbamaten dienenden Forschungen wurde von J. E.Casida und Mitarbeitern in 1974 mit dem Titel .Thiolcarbamate sulfoxide herbicides' mitgeteilt. Das Wesen diesor Mitteilung besteht darin,

daß das Sulfoxid von EPTC, das ein Zersetzungsprodukt von EPTC ist, eine gute herbizide Wirkung ausübt, aber den Mais nichtschädigt. Diese Erkenntnis hat sich aber nur bis zur selbständigen Verwendung des EPTC-Sulfoxides erstreckt, das in der Praxiswegen einiger nachteiliger Eigenschaften (z. B. kann es nicht in allen Böden verwendet werden) nicht angewendet wird.

Trotz der hohen Anzahl der Patentschriften, in welchen die Forschungsergebnisse bekanntgemacht wurden, fet as nicht

gelungen, eine Verbindung zu finden, mit deren Hilfe der allgemeine Schuü der Kulturpflanzen gegen die schädigende Wirkungder verschiedenen Herbizide erreicht werden konnte. Diese Tatsache wird auch dadurch unterstützt, daß die auf die Aufklärungder antidotierenden Wirkung gerichteten Forschungen keinen einheitlichen Standpunkt hinsichtlich der biochemischen

Prozesse, die sich nach der Zugabe von Antidote abspielen, bzw. hinsichtlich der Einflüsse dieser Verbindungen auf die in den Kulturpflanzen durch die herbiziden Wirkstoffe hervorgerufenen Prozesse ergeben konnten. Ziel der Erfindung Mit der Erfindung sollen die Nachteile des Standes der Technik beseitigt werden. Darlegung des Wesens der Erfindung

Im Laufe von Untersuchungen zur Verminderung der die Kulturpflanzen schädigenden Wirkung von Herbiziden der Typen Thiolcarbamato der allgemeinen Formel (I) und der Chloracetanilide der allgemeinen Formel (VIII) wurde gefunden, daß die in dem mit den Thiolcarbamaten der allgemeinen Formel (I) vorbehandelten Boden, weiterhin in Makroorganismen entstehenden Verbindungen der allgemeinen Formeln (II) bis (VII), worin

Ri und R₂ gleich oder verschieden sind, und für eine Ci-e-Alkyl- oder C^-Cycloalkylgruppe stehen; oder Ri und R₂ mit dem

Stickstoffetom, an das sie gebunden sind, eine Hexamethylens.nino-Gruppo bilden; R) eine d^-Alkylgruppe bedeutet;

R₄ und R( gleich oder verschieden sind, und Wasserstoff oder eine C'n-Alkylgruppe bedeuten; R₆ für eine C-t-Alkyl-, C^-Alkenyl-, (C^-AlkoxyMCi-j-alkyl)- oder PyrazolyMCt.j-alkyD-Gruppe steht,

oder deren acylierte oder esterifizierte Derivate für den Schutz gegen die Phytotoxizität beider obigen herbiziden Wirkstoffe erfolgreich verwendet werden können, wenn man die Verbindungen der allgemeinen Formeln (I) bis (VII) vor der Behandlung oder gleichzeitig mit dei Behandlung oder nach der Behandlung mit den herbiziden Wirkstoffen auf den Boden ausbringt. Erfindungsgemäß geht man so vor, daß man irgendeine Art der in bzw. auf Feldböden lebenden oder unter Laborbedingungen in einem flüssigen oder festen physiologischen Medium gezüchteten, natürlichen oder genmanipulierten Makroorganismen, bevorzi 'gt genmanipulierten Pflanzen höherer Ordnung oder deren Organ-, Gewebe- oder Zellkultur mit irgendeiner der Verbindungen der allgemeinen Formeln (I) bis (VII) oder mit deren acylierten oder esterifizierten Derivaten, oder mit deren 0,0001 bis 99 Massenanteilen - in % - Gemischen untereinander oder mit anderen Pestiziden, Regulatoren, Antidote, Kunstdüngern oder anderen organischen oder anorganischen, natürlichen oder synthetischen Stoffen in solchen Mengen, die 5 bis 50000g/ha Wirkstoff, bzw. 0,002 bis 5000ppm Wirkstoff entsprechen, behandelt, dann die derart antidotumtragend gewordenen Makroorganismen innerhalb von 30 Tagen nach der Behandlung erntet und erforderlichenfalls konserviert und/oder durch Zerkleinern, Pulverisieren, Extrahieren, Trocknen oder in anderer Weise aufarbeitet.

Im Laufe dos Behandlungsverfahrens über die aus den Verbindungen der ellgemeinen Formeln (I) bis (VII) entstehenden Zersetzungsprodukte, bevorzugt irgendeine der Verbindungen der allgemeinen Formeln (II) bis (VII), oder deren Gemisch, oder irgendeines deren esterifiziorter oder aeylierter Derivate eine herbizid-antidotierende Wirkung aus, wobei sie sich an die Makroorganismen binden. So werden als Endresultat antidotumtragende, lebende Organismen erhalten.

Ausführungsbelsplele Die Erfindung wird anhand der folgenden Beispiele näher erläutert, ist jedoch nicht auf diese Beispiele beschränkt. Beispiel 1

Prüfung des mit dem zu den herbiziden Wirkstoffen der allgemeinen Formel (I) gehörenden EPTC vorbehandelten Bodens, als eines Trägers der antidotierenden Stoffwechselprodukte mikrobieller Ursprungs, Feldboden, mit einem pH-KC1-Wert von 5,7 und Gebundenheit von 46AK, der insgesamt 0,03% Salz, 1,9% Humus, 14,8ppm NO₁ + NO₂,735ppm P₂O₆,853pprn K₂O,

246ppm Mg, 60ppm Na, 2,1 ppm Zn, 3,2 ppm Cu und 151 ppm Mn enthielt, wurJe niit einer Dosis von 8 l/ha des 72% Wirkstoffenthaltenden Witox 72 EC (als einer Formulierung des herbiziden Wirkstoffes EPTC), bzw. mit einer Dosis von 81/ha des 72%

EPTC und 8% AD-67 [N-(2,2-Dichloracetyl)-1-oxa-4-aza-bicyclo[4,5]decan] als Antidotum enthaltenden Alirox 80 EC

vorbehandelt.

Von diesem Boden wurden je 600g in Zuchtgefäße eingewogen, und darin wurde je 10 Körner verschiedener Typen von Hybridmais, sowie je 20 Körner von Mohrenhirse als Unkraut gesät. Am 11 .Tag nach dem Aussäen wurden die Grünmasse und die Spr oßlänge der unter HGMIP-400/D Tageslichtlampen mit einer Beleuchtungsperiode von 16 Stunden gezüchteten und täglich bis zur Wasserkapazität des Bodens berieselten Pflanzen

gemessen und das Außenbild des Maices mittels der folgenden Skala bonitiert;

4: starke Deformation, Torsion;

3: mittelmäßige Deformation, Torsion;

2: schwache Phytotoxizität;1: intakte, gesunde Pflanze.

Anschließend wurden die Pflanzen am 14.Tag nach dem ersten Säen wieder in die Zuchtgefäße eingesät, dann wurde der Boden

mit einer Dosis von 8l/ha, bzw. 20l/ha des 72% EPTC enthaltenden Witox 72 EC behandelt. Am 11.Tag nach dem zweiten Säenwurden die Grünmasse und die Sproßlänge des Maises gemessen.

Aus den Angaben der Tabelle I ist ersichtlich, daß die verschiedenen Typen der in den mit EPTC, sowie mit durch AD-67

antidotierten EPTC vorbehandelten Boden gesäten Hybridmaispflanzen sowohl die Dosis von 8l/ha als auch von 20l/ha günstigertrugen, während die als Unkraut gesäte Mohrenhirse vernichtet wurde.

Tabelle I Gestaltung der Sproßlänge, der Grünmasse und des äußeren Bildes von Hybridmais, sowie Veränderung der Grünmasse von Mohrenhirse unter Einwirkung der Behandlung mit EPTC Sproßlänge des Maises

(cm/Einzelpflanze)

Erstes Säen Zweites Säen Grünmasse des Maises

(cm/Einzelpflanze)

Erstes Säen Zweites Säen Bonitierung(Mais) Erstes Säen Zweites Säen Grünmasse der Mohrenhirse

(g/Gafäß)

Erstes Säen Zweites Säen Beispiel 2

Ein Versuch wurde in Laboretoriums-Zuchtgefäßen ausgeführt, um die aufeinander ausgeübte synergistische, antagonistische Wirkung von verschiedenen Typen der Thiocarbamate und antidotumtragender Bakterien (Bakteriumsuspension NI-86/21 EPTC 250) zu prüfen.

1. Materialien, Geräte und Methode

1.1. Herstellung der Bakteriumsuspension NI-86/21

Reine Stammkultur des aus dem Boden isolierten, EPTC-abbauenden Bakteriums NI-86/21 wurde auf 5 ml schräges Nutrient- Nährmedium mit der folgenden Zusammensetzung geimpft:

Unbehandelte Kontrolle	8 l/ha	Dosis von EPTC 20 l/ha
21 19	8 19	19
0,56 0,5	0,49 0,59	0,63
2,0 2,0	1,2 2,0	2,0
0,15 0,14	0 0	0

Fleischauszug	ig
Hefe	2g
Pepton	5g
NaCI	5g
Agar	20 g
Destilliortes Wasser	1000 ml
pH-Wert	7,4

Es wurden solche Kulturen angewandt, die älter als 3 bis 4 Tage, aber jünger als 120 Tage waren. Danach wurden im Reagenzglas vermehrte Bakterien In 10ml sterilisiertem, destilliertem Wasser gewaschen. Die derart gewonnene Suspension enthielt etwa 10*/ml Bakterien. In Erlenmeyerkolben von 500ml Inhalt wurden je 200ml physiologische Nährsalzlösungen gemessen, deren Zusammensetzung die folgende war:

NK₄NO₃	0,5 g
KH₂PO₄	0,4 g
K₂HPO₄	1,6g
NaCI	0,1g
MgSO₄ -2 H₂O	0,2 g
CeCI₂-2 H₂O	0,5 mg
CuSO₄-5 H₂O	0,5 mg
FeSOi-7 H₂O	0,5 mg
ZnCI₂	0,5 mg.

Dazu wurde der Wirkstoff EPTC bis auf eine Konzentration von 250 ppm gegeben. Danach wurden je 2 ml der Bakteriumsuspension in die Kolben eingemischt, die dann 24 Stunden lang auf einer Maschine geschüttelt wurden, um

antidotumtragende Bakterien zu erhalten.

Anschließend wurde die Selektivität der in den einzelnen Behandlungen verwendeten Herbizide (EPTC, Butylat, Vernolat, Molinat) allein, sowie in Kombinationen mit je 10ml der antidolumtragenden Bakteriumsuspension NI-86/21 EPTC 250

untersucht.

Zuchtgofißversuch

Als Zuchtgefäße wurden mit PVC-Folien bekleidete Kunststoffgefäße mit einer Aufnahmefähigkeit von jeweils etwa 800g Boden, mit einer Oberfläche von 0,8 dm' angewandt. In diese Gefäße wurden zuerst je 400g lufttrockner, oberflächlicher Feldboden mit einem pH-Wert von 5,7, einem Humusgehalt von 1,95% und einer Gebundenheit (nach Arany) von 46 eingewogen. Darin wurden je 10 Körner des Hybridmaises Pioneer 3707, je 20 Körner der gezüchteten Mohrenhirseart „Alföldi I" und je 0,5g der roten Rispenhirse gesät. Die Aussaat wurde mit je 10g Boden bedeckt und eine 6l/ha Dosis von EPTC, bzw. Ernolat, bzw. Molinat Wirkstoff, oder eine 24 l/ha Dosis von Butylat aus den Fabriksformuliorungen von f:MV (Chemische Werke von Nord-Ungarn) ausgebracht. Die behandelte Bodenoberfläche wurde mit je 100g Boden bedeckt und je 10ml des Biopräparates NI-86/21 EPTC 260 wurden gemäß der folgenden Behandlungsliste auf die Bodenoberfläche aufgebracht.

Behandlungsliste

0 Unbehandelte Kontrolle

1 EPTC β l/ha

2 EPTC 6 l/he+ NI-86/21 EPTC 250 10 ml

3 Butylat 24 I/ha

4 Butylat 2 I/ha+ NI-86/21 EPTC 250 10 ml

5 Vernolat 6 I/ha

6 Vernolat 6l/ha + NI-86/21 EPTC250 10ml

7 Molinat 6I/ha

8 Molinat 6I/ha + NI-86/21 EPTC250 10ml

Ergebnisse des Zuchtgeftßversuches Die Ergebnisse dieses Versuches sind in den Tabellen II, III und IV zusammengefaßt. Aus der Tabelle Il ist ersichtlich, daß die Sproßlänge des Maises in der unbehandelten Kontrolle 22cm betrug. Wurden EPTC bzw. Vernolat, bzw. Molinat in einer Dosis von 61/ha, bzw. Butylat in einer Dosis von 241/ha angewandt, so wurden die Sproßlängen

bedeutend vermindert (9,11,13 bzw. 12cm). Wurden dagegen je 10ml des Biopräparates NI-86/21 EPTC 250 zu den obenangeführten Herbiziden gegeben, wurde die die Sproßlänge vermindernde Wirkung von EPTC, Butylat und Vernolat aufgehoben(21,23, bzw. 21 cm), wohingegen die Phytotoxizität von Molinat unverändert blieb (17cm).

Die in der Tabelle III zusammengefaßten Angaben, die die Veränderung der Grünmasse des Maises betreffen, zeigen ein der Sproßlänge ähnliches Bild. Durch Verwendung von NI-86/21 EPTC 250 in einer Dosis von je 10ml/Zuchtgefäß wurde der Mais gegen den schädigenden Effekt der Herbizide EPTC, Butylat und Vernolat völlig geschützt. Dies wird auch durch die Tabelle IV klar veranschaulicht, wobei der ausgezeichnete Antidotumeffekt dieses Biopräparates durch

die äußere Erscheinung des Maises beurteilt werden konnte.

Die als Unkraut gesäte rote Rispenhirse und Mohrenhirse wurden in allen Behandlungen vernichtet, d. h. diese Pflanzen wurden

durch das Biopräparat NI-86/21 EPTC 250 nicht geschützt.

Tabelle II

Verminderung der durch die Herbizide EPTC, Butylat, Vernoiat und Molinat auf die Sproßlänge des Maises ausgeübten PhytotoxlzltSt mitdem Biopräparat NI-86/21 EPTC 250

Herbizide	Dosis	Sproßlänge	9	des Maises (cm/Einzel
	l/ha		12	pflanze)
		•	11	Biopräparat NI-86/21
			13	EPTC 250
EPTC	β	21
Butylat	24	23
Vernoiat	β	21
Molinat	β	17

Die Sproßlänge des unbehandelten Kontrollmaises betrug 22cm.

Tabelle III

Wirkung der Kombinationen der Herbizide EPTC, Butylat, Vernoiat und Molinat mit dem Biopräparat NI-86/21 EPTC 250 auf der Grünmasse von Mais

Herbizide	Dosis	Grünmasse	des Maises (10~² Einzel
	l/ha	-	pflanze)
			Biopräparat NI-86/21
			EPTC250
EPTC	6	51	86
Butylat	24	60	83
Vernoiat	β	54	88
Molinat	β	57	64

Die Grünmasse des unbehandelten Kontrollmaises betrug 82 x 10 g/Einzelpflanze.

Tabelle IV

Wirkung der Kombinationen der Herbizide EPTC, Butylat, Vernoiat und Molinat mit dem Biopräparat NI-86/21 EPTC 250 auf das äußere Bild von Mais

Herbizide	Dosis	äußeres Bild	des Maises (%)
	l/ha	-	Biopräparat NI-88/21
			EPTC250
EPTC	β	55	100
Butylat	24	61	100
Vernoiat	6	63	100
Molinat	6	58	61

Das äußere Bild des unbehandeltcr. Kontrollmaises wurde als 100% angenommen.

Bonltlerungcskala

100%: intakter, sich normal entwickelnder Mais

99-87 %: schwache Phytotoxizität, Sproßdeformation 86-75 %: mittelmäßige Sproßdeformation, Torsion 7b£1 %: starke Sproßdeformation, Vernichtung

5CVo: der Mais wurde vernichtet, blieb in der Keimscheide.

Beispiel 3

Die Wirkung von verschiedenen Mengen der Suspension des gemäß dem Beispiel 2 hergestellten antidotumtragenden Bakteriums NI-86/21 EPTC 250 auf die Selektivität von EPTC wurde geprüft.

Während des Zuchtgefäßversuches wurden mit PVC-Folie bekleidete Kunststoffzuchtgefäße mit einer Oberfläche von 0,8 dm², mit einer Aufnahmefähigkeit von 800 g lufttrockenem Boden angewandt, in weiche zuerst je 400 g Boden eingewogen wurden.

Dieser mittelmäßig gebundene obere Peldboden hatte einen Humusgehalt von 1,95% und einen pH-Wert von 5,7. Als Testpflarizen wurden je 10 Körner des Hybridmaises Pioneer 3707,20 Körner von Mohrenhirse und 0,5g Rispenhirse eingesät.

Die Aussaat wurde durch je 100g Boden bedeckt, dann wurden die Behandlungen mit Thiolcarbamat, bzw. mit dem Biopräparat NI-86/21 EPTC 250 wie folgt ausgeführt.

Behandlungen

0 Unbehandelte Kontrolle

1 EPTC 6 l/ha (Wirkstoff)

2 EPTC 6 l/ha + NI-86/21 EPT C 250 1000 l/ha

3 EPTC 6 l/ha + NI-86/21 EPTC 250 5 000 l/ha 4EPTC6l/ha + NI-86/21 EPTC 250 100001/ha 5 EPTC β l/ha + NI-86/21 EPTC 250 20 000 l/ha

Die behandelte Bodenoberfläche wurde wiederholt mit je 100g Boden bedeckt. Der Versuch wurde am 10.Tag nach der Behandlung bonitiert, wenn die Sproßlänge und die Grünmasse des Maises, sowie die Grünmasse der Mohrenhirse und Rispenhirse gemessen wurden. Aus der Tabelle V ergibt sich der Vorteil der Kombinationen von ETPC und NI-86/21 EPTC 250. Tabelle V Wirkung des Biopräparates NI-86/21 EPTC 250 auf die Phytotoxizita't von EPTC in Maiskulturen (Angaben als

% der unbehandelten Kontrolle)

Behandlungen	Mais	Grünmasse	Sproßlänge	Mohrenhirse	Rispen
	%	%	Grünmasse	hirse
	74	41	%	Grünmasse
1 EPTC 6 l/ha			0	0
2 EPTC β l/ha
+ NI-80/21
EPTC 250	117	115
1000 l/ha			0	0
3 EPTC 6 l/ha
+ NI-86/21
EPTC 250	113	112
5 000 l/ha			0	0
4 EPTC β l/ha
+ NI-86/21
EPTC 260	95	113
10000 l/ha			0	0
5 EPTC β l/ha
+ NI-86/21
EPTC 250	118	113
20000 l/ha		0	0

Beispiel 4

Es wurden Zuchtgefäßversuche durchgeführt, um die antidotierende Wirkung des Bakteriums NI-86/21 und die der lyophilisierten Formen des antidotumtragenden Bakteriums NI-86/21 EPTC 250 gegen EPTC, Butylat, Vernolat und Acetochlor zu vergleichen.

1. Materlallen, Gerate und Methode

1.1. Herstellung der Proben des lyop'iillslerten NI-86/21 undNI-86/21 EPTC 250

Eine reine Stammkultur von NI-86/21 wurde auf ein schräges Nutrient-Nährmedium (Zusammensetzung siehe Beispiel 2) in fünf Reagenzgläsern geimpft. Die 3 Tage lang bei Raumtemperatur gezüchtete ßakteriummasse wurde in Je 5ml physiologische Lösung (Zusammensetzung siehe Beispiel 2) gewaschen. Mengen von je 0,1 ml der derart vorbereiteten Bakteriumsuspension wurden in 100 Petri-Schalen an Nutrien'.platten versprüht. Nach einer Inkubation von 4 Tagen bei 25°C wurde die Bakte.'iumkolonie in je 3 ml physiologischer Lösung suspendiert, die dann zu zehnen in 10 Erlenmeyer-Kolben mit 100ml Volumen eingetragen wurden, um 1Ox 30ml Bakteriumsuspension zu gewinnen. Von denen wurden 3x 30ml mit 3x 8μΙ EPTC behandelt und dann bis zur an dem von diesem Zeitpunkt berechneten 5. Tag ausgeführten Lyophilisierung bei - 1O⁰C gehalten. Die Lyophilisierung wurde bei -4O⁰C in einem .Labor MIM" Gerät ohne Anwendung von Schutzkolloid durchgeführt. Bei der Anwendung wurden die lyophilisierten Produkte NI-86/21 und NI-86/21 EPTC 250 in je 60ml Leitungswasser in einer jeden Flasche resuspendiert und dann gleichzeitig mit don Behandlungen mit dem Herbizidenpräemergont (vor Auflauf) oder presowing (vor dem Säen) verbraucht.

1.2. Zuchtgefaßversuch

Es wurden mit PVC-Folie bekleidete Kunststoffzuchtgefäße mit einer Oberfläche von 0,8dm', mit einer Aufnahmefähigkeit von je 800g Boden angewandt.

In diese Gefäße wurden zuerst je 400g lufttrockener Feldboden mit einem Humusgehalt von 1,95%, einem pH-Wert von 5,7 und einer Gebundenheit (nach Arany) von 46 eingewogen. Dann wurden je 10 Körner von Mais, Sorte Pioneer 3909 sowie je 20 Körner von Mohrenhirse HIBAR eingesät. Die Aussaat wurde mit jeweils 100g Boden bedeckt, und dann wurde eine 6 l/ha Dosis von EPTC, bzw. 12 l/ha Dosis von Butylat, bzw. eine 6l/ha Dosis von Vernolat, oder eine 31/ha Dosis von Acetochlor ausgebracht. Auf diese behandelte Oberfläche wurden die aus dem Lyophylisat des Bakteriums NI-86/21 gewonnene Suspension in einer Dosis von 0,05 χ 10^s, 0,5 χ 10^J, 10⁵ oder 2,5 χ 10'l/ha,sowie das Biopräparat NI-86/21 EPTC25Oin denselben Dosen gesondert ausgebracht. Schließlich wurde die Bodenoberfläche nochmals mit je 100g Boden bedeckt.

Behandlungen ·

EPTC6l/ha

EPTC6l/ha + NI-86/21 0,05 - 0,5 - 1,0 - 2,5 χ 10³l/ha EPTC 61/ha + NI-86/21 EPTC 250 0,05 - 0,5 - 1,0 - 2,5 x 10'1/ha Butylat 12 l/ha Butylal 121/ha + NI-86/21 0,05 - 0,5 - 1,0 - 2,5 x 10³l/ha Butylat 121/ha - NI-86/21 EPTC 250 0,05 - 0,5 - 1,0 - 2,5 x 10^Jl/ha Vernolatei/ha Vernolat6l/ha + NI-86/21 0,05 - 0,5 - 1,0 - 2,5 x 10³l/ha Vernolatei/ha + NI-86/21 EPTC 260 0,05 - 0,5 - 1,0 - 2,5 x ΙθΊ/ha Acetochlor3l/ha Acetoch!or3l/ha + NI-86/21 0,05 - 0,5 - 1,0 - 2,5 χ 10³l/ha AcetochlorSI/ha + NI-86/21 EPTC 250 0,05 - 0,5 - 1,0 - 2,5 x 10³ I/ha Jede Behandlung wurde in fünf Wiederholungen durchgeführt. Die Pflanzen wurden bis zum 10.Tag nach der Behandlung unter Tageslichtlampen von HgMIF/400 W mit einer Lichtstärke von etwa 15 KLX und Beleuchtungsperioden von 1 β Stunden gezüchtet. Das Wasser wurde tfiglich bis zur Wasserkapazität des Bodens von oben ergänzt. Es wurden die Grünmasse der Pflanzen und die Sproßlänge des Maises gemessen. Der Grad der Torsion des Maises wurde auf Grund"der im Beispiel 1 beschriebenen Skala bewertet.

2. Ergebnisse und Folgerungen

Aus den Ergebnissen, die in Tabellen Vl bis XIII zusammengefaßt sind, ist ersichtlich, daß das Lyophilisat, welches aus dem auf einem 230ppm enthaltenden Boden gezüchteten Bakterium NI-86/21 hergestellt wurde, eine bedeutende Antidotumwirkung ausübt. Eine Dosis von 500, bzw. 1000, bzw. 2 600 l/ha des hergestellten Lyophilisates NI-S6/21 EPTC 250 beseitigt die auf den Mais ausgeübte phytotoxisch« Wirkung von βΙ/ha EPTC, bzw. 12l/ha Butylat, bzw. βΙ/ha Vernolat oder 3l/ha Acetochlor. Ohne eine Vorbehandlung mit EPTC weist das Bakterium NI-86/21 keinen antidotierenden Effekt auf.

Tabelle Vl Herbizid-anitdotierende Wirkung zunehmender Dosen der Bakteriumsuspension NI-86/21 bei einer Dosis von βΙ/ha des Herbizids EPTC in Mais

Dosis	NI-86/21	Mais	Sproßlänge	Grünmasse	Bonitierungswert
von	10³ l/ha	cm/Einzel	g/Gefäß
EPTC		pflanze
l/ha	0	4,4	2,1	4
6	0,05	4,8	2,8	4
6	0,5	5,0	3,4	4
6	1,0	5,3	3,4	4
β	2,5	7,6	3,9	3
β	Unbehandelte Kontrolle	18,9	5,0	1
	SZD_6%	1,7	0,8

Tabelle VII Herbizid-antidotierende Wirkung zunehmender Dosen des Biopräparates NI-86/21 EPTC 250 bei

einer Dosis von βΙ/ha des Herbizids EPTC in Mais

Dosis	NI-86/21	Mais	Sproßlänge	Grünmasse	Bonitierungswert
von	EPCT 250	cm/Einzel	g/Gefäß
EPTC	K^l/ha	pflanze
1/ha	0	4,4	2,1	4
β	0.05	5,9	3,1	3
6	0,5	18,6	5,1	1
β	1,0	20,9	5,7	1
β	2,5	22,5	5,8	1
6	Unbehandelte Kontrolle	18,9	5,0	1
	SZD_SS	1,7	0,8

Tabelle VIII Herbizid-antidotierende Wirkung zunehmender Dosen der Bakteriumsuspension NI-86/21 bei einer Dosis von 12 l/ha des Herbizids Butylat in Mais

Dosis	NI-86/21	Mais	Sproßlänge	Grünmasse	Bonitierungswert
von	10³l/ha	cm/Einzel	g/Gefäß
Butylat		pflanze
l/ha	0	16,1	4,6	3
12	0,05	16,3	4,6	3
12	0,5	17,4	4,8	2
12	1,0	16,7	4,6	2
12	2,5	15,5	4,1	2
12	Unbehandelte Kontrolle	18,9	5,0	1
	SZO_6x	1,7	0,8

Tabelle IX

Herbizid-antidotierende Wirkung zunehmender Mengen des Biopräparates NI-86/21 EPTC 250 bei einer Dosis von 121/ha des Herbizids Butylat in Mais

Dosis von	NI-86/21	Mais	Sproßlänge	Grünmasse	Bonitierungswert
Butylat	EPTC 250	cm/Einzelpflanze	g/Gefäß
l/ha	ΙθΊ/ha	16,1	5,6	3
12	0	16,0	5,0	2
12	0,05	18,1	5,1	2
12	0,5	18,6	5,0	1
12	1,0	18,7	5,0	1
12	2,5	18,9	5,0	1
Unbehandelie Kontrolle	1,7	0,8
SZD₆S

Tabelle X

Herbizid-antidotierende Wirkung zunehmender Dosen der Bakteriumsuspension NI-86/21 bei einer Dosis von 61/ha von Vernolat in Mais

Dosis von	NI-86/21	Mais	Grünmasse g/Gefäß	Bonitierungswert
Vernolat l/ha	10¹ l/ha	Sproßlänge cm/Einzelpflanze	4,1 3,7 4,0 4,1 4,6 5,0	4 4 4 4 3 1
6 0 6 0,05 6 0,5 6 1,0 6 2,5 Unbehandelte Kontrolle	7,5 6,3 8,1 7,7 12,2 18,9	0,8
SZD_e%	1,7

Tabelle Xl

Herbizid-antidotierende Wirkung zunehmender Dosen des Biopräparates ΝΙ-8Θ/21 EPTC 250 bei einer Dosis von β l/ha de« Herbizids Vernolat in Mais

Dosis von	NI-86/21	Mais	Grünmasse g/Gefäß	Bonitierungswert
Vernolat l/ha	EPTC250 10¹ l/ha	Sproßlänge cm/Einzelpflanze	4,1 4,3 4,6 5,1 5,0 5,0	4 4 3 2 1 1
6 0 6 0,05 6 0,5 6 1,0 β 2,5 Unbehandolto Kontrolle	7,5 8,8 16,6 18,7 19,0 18,9	0,8
SZD_6%	1,7

TabelloXII

Herbizid-antidotierende Wirkung zunehmender Dosen der Bakteriensuspension NI-86/21 bei einer Dosis von 31/ha des Herbizids Acetochlor in Mais

Dosis von	NI-86/21	Mais	Grünmasse g/Gefäß	Bonitierungswert
Acetochlor l/ha	10^Jl/ha	Sproßlänge cm/Einzelpflanze	3,9 4,1 4,8 4,8 4,7 5,0	3 3 2 2 2 1
3 0 3 0,05 3 0,5 3 1,0 3 2,5 Unbehandelte Kontrolle	16,0 16,4 16,6 17,3 17,9 18,9	0,8
SZD_i%	1,7

Tabelle XlIl Herbizid-antidotinrende Wirkung zunehmender Dosen des Biopräparates NI-86/21 EPTC 250 bei

einer Dosis von 3 l/ha des Herbizids Acetochlor in Mais

Dosis von	NI-86/21	Mais	Grünmasse g/Gefäß	Bonitierungswert
Acetochlor l/ha	EPTC250 itfl/ha	Sproßlänge cm/Einzelpflanze	3.9 5,1 5,4 5,5 6.0 5,0	3 2 1 1 1 1
3 0 3 0,0 3 . 0,5 3 1,0 3 2.5 Unbehandelte Kontrolle	16,0 18,9 19,1 20,8 21.4 18,9	0,8
SZD_S%	1,7

Beispiel 5

Es wurde ein Labor-Zuchtgefäßversuch durchgeführt, um die EPTC-antagonisierende Wirkung von aus den Sprossen und den Wurzoln von mit EPTC vorbehandelten Maispflänzchen gewonnenen acetonischen und wäßrigen Filtrate, sowie der zurückbleibenden faserigen Stoffe in Maiskulturen zu prüfen.

1. Materialien, Geräte, Methode

1.1. Verfahren zur Herstellung eines antldotumtragenden Maises

Es wurden mit PVC-Folie bekleidete Kunststotfgefäße mit einer Oberfläche von 4dm², mit einer Aufnahmefähigkeit von je 6000g

lufttrockenem Boden verwendet. In diese wurden zuerst je 4000g oberer Feldboden mit einem Humusgehalt von 1,95%, einempH-Wert von 5,7 und einer Gebundenheit (nach Arany) von 46 eingewogen. Danach wurden je 50 Körner Mais der Sorte Pioneer3707 eingesät, die dann durch je 1000g Boden bedeckt wurden. Danach wurden diu Behandlungen der mit (E) markierten

Zuchtgefäße mit je einer 61/ha-Dosis von EPTC durchgeführt. Die derart behandelte Bodenoberfläche wurde wiederholt mit je

1000g Boden bedeck..

Die Maispflanzen, weiche die Behandlung (E) bekamen, wurden bis zum 14.Tag nach der Behandlung unter Tageslichtlampen

von HGMIF/400W, mit einer Lichtstärke von etwa 11 KLX mit einer täglichen Beleuchtungsperiode von 16 Stunden bei einer

Temperatur von 26 ± 4⁰C gezüchtet. D"szum Berieseln gebrauchte Wasser wurde täglich biszur Wasserkapazität von oben ergänzt. Am 14.Tag wurde der Sproß der P, lanzen in jedem Zuchtgefäß gesondert abgeschnitten, bzw. wurden die Wurzeln au j dem Boden herausgewaschen.

1.2. Gewinnung der Filtrate und der faserigen Stoffe aus dam Mais

1.2.1. Aufarbeitung des Sprosses des mit EPTC vorbehandelten /Behandlung (E)/ Maises

55g von dem Sproß des mit EPTC vorbehandelten /Behandlung (E)/ Maises wurden sofort nach dom Abschneiden in einer Turmixmaschine in 50ml Wasser zerkleinert. Der so erhalten» Grus wurde halbiert, 250ml wurden durch ein Laboratoriums-Vakuumfilter filtriert und davon wurde ein wäßriges Filtrat (Sz) gewonnen, welches mit der Kode E-Ha-Vi-Sz bezeichnet wurde. Der auf dem Filter verbliebene faserige Stoff wurde in einem Scheidetrichter mit 500ml Aceton geschüttelt, und die Acetonphase wurde abgelassen. Diese Phase wurde mit der Kode E-Ha-Ac-Sz bezeichnet.

Die zurückbleibenden 250 ml von wäßrigem Grus wurden durch ein Vakuumfilter filtriert und der auf dem Filter gebliebene faserige Stoff wurde als selbständige Probe behandelt, welches mit dem Kode E-Ha-Vi-R bezeichnet wurde.

1.2.2. Aufarbeitung der Wurzeln des mit EPTC vorbehandelten Maises

Man arbeitete wie oben beschrieben, mit der Ausnahme, daß 28g mit einem Messer zerkleinerte Wurzeln in einer Turmixmaschine mit 400ml Leitungswalser behandelt wurden. Aus 200ml Grus wurden das wäßrige und dann das acetonischo Filtrat gewonnen bzw. wurde der faserige Stoff aus den anderen 200ml erhalten. Die Kodebezeichnungen der derart gewonnenen Materialien sind die folgenden:

E-Gyö-Vi-Sz

E-Gyö-Vi-R

E-Gyö-AC-Sz.

1.3. Prüfung der EPTC-ant*gonlsierenden Wirkung der aus dem Mals gewonnenen Filtrate und Fasern Im Zuchtgofaß 1. Anordnung des Versuches

F s wurden mit PVC-Folie bekleidete Kunststoffgefä.ie mit einer Oberfläche von 0,8 dm² und einer Aufnahmefähigkeil von je 800g Boden angewandt. In diese Gefäße wurden zuerst j« 400g oberer Feldboden mit den unter 1.1. beschriebenen Eigenschaften eingewogen. Danach wurden je 10 Körner des Maises Pioneer 3707 eingesät. Diese Aussaat wurde mit je 100g Boden bedeckt, dann wurde EPTC in einer Dosis von 6l/ha ausgebracht. Die derart behandelte Bodsnoborfläche und die unbehandelten Gefäße wurden wiederholt mit je 10g Boden bedeckt, und auf diese Bodenober flächen wurden je 100 ml wäßriges Filtrat, bzw. je 100 g faserige Substanz, bzw. je 5ml acetonisches Filtrat appliziert.

Die Pflanzen wurden bis zum 7. Tag nach dem Säen unter den unter 1.1. beschriebenen Bedingungen gezüchtet, dann wurden die Sproßlänge und die Grünmasse des Maises gemessen, und das äußere Bild des Maises wurde mittels der im Beispiel 1 beschriebenen Bonitierungsskala bewortel.

Tabelle XIV

Wirkung der aus den Sprossen (Ha) des mit EPTC (βΙ/ha) vorbehandelten (E) Maises gewonnenen wSßrigen (Vi) und acetonischen (Ac) Filtrate (Sz), sowie der zurückbleibenden faserigen Substanzen (R) auf die Seiaktivität des Herbizids EPTC (βΙ/ha) im Mais

	Sproßlänge	Mais	Bonitierungswert
Behandlungen	cm/Einzel	Grünmasse
	pflanze	10"^lg/Einze!-
	1Θ	pflanzo	2,0
Unbehandelte Kontrolle	9	72	1,2
EPTC	19	66	1,8
EPTC+ (E-Ha-Vi-Sz)	19	62 '	2,0
EPTC+ (E-Ha-Vi R)	20	72	2,0
EPTC+ (E-He-Ac-Sz)	20	70	2.0
E-Ha-Vi-Sz	20	72	2,0
E-Ha-ViR	18	79	2,0
E-Ha-Ac-Sz	68

Aus den Angaben derTabelle XIV geht hervor, daß die aus den Sprossen der mit einer Dosis von β l/ha von EPTC vorbehandeiton Maispflänzchen gewonnenen Extrakte, sowie der zurückbleibende faserige Stoff den phytotoxtschen Effekt des Herbizides (6 l/ha EPTC) völlig beseitigt hat. Das Ergebnis der Antidotumwirkung dieser Biopräparate besteht darin, daß die Sproßlänge und das Äußere der Kulturpflanze ebenso intakt und gesund, wie die der unbehandelten Kontrolle, sind.

Tabelle XV Wirkung der aus der Wurzel (Gyö) der mit EPTC (βΙ/ha) vorbehandelten (E) Maises

gewonnenen wäßrigen (Vi) und acetonischen (Ac) Filtrate (S:i, sowie der

zurückbleibenden faserigen Stoffe (R) auf die Selektivität des Herbizids EPTC (6l/ha) im

Behandlungen	Sproßlänge	Grünmasse	Bnnitierungswert
	cm/Einzel	!O-'g/Einzel-
	pflanze	pflanze
Unbehandelte Kontrolle	19	72	2,0
EPTC	9	56	1,2
EPTC + (E-Gyö-Vi-Sz)	6	16	1,0
EPTC + (E-Gyö-Vi-R)	19	72	2,0
EPTC + (E-Gyö-Ac-Sz)	18	70	2,0
E-Gyö-Vi-Sz	7	22	1,4
E-Gyö-Vi-R	20	73	2,0
E-Gyö-Ac-Sz	19	68	2,0

Aus den Angaben der Tabelle XV geht klar hervor, daß das acetonische Filtrat, sowie der faserige Sioff, die aus der Wurzel der mit einer Dosis von βΙ/ha EPTC vorbehandelten Maispflänzchen gewonnen wurden, eino ausgezeichnete Antidotumwirkung ausüben.

O ZfS 9 ZO

Ri )N- C-S-glutathion

N-C-S-CH-CH-COOH I

² ο ο

^N-C-S-CHo-CH-COOH (Y)

l \ I

O NH,

NH- C - CH₂ ~ COOH W O

-41-

ZfSSZO

1-CH₂-CH-COOH

0-C-CH₂-COOH 0

(H)

R/

-R₆ ·

C—

I!

OTJ

Claims

Verfahren zur Herstellung antidotumtragender Makroorganismen, welche zur Verminderung der die Kulturpflanzen schädigenden Wirkung von Thiolcarbamaten der allgemeinen Formel (I) /vorin

R₁ und R₂ gleich oder verschieden sind, und für eine C^-Alkyl- oder C3_e-Cycloalkylgruppe stehen; oder Ri und R₂ mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, eine

Hexameihylenimino-Gruppe bilden; und
R₃ · eineC₁_₆-Alkyigruppebedoutet,