DD298410A5

DD298410A5 - Renininhibitorische peptide, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung in arzneimitteln

Info

Publication number: DD298410A5
Application number: DD34140890A
Authority: DD
Inventors: Wolfgang Bender; Gunter Schmidt; Andreas Knorr; Johannes-Peter Stasch
Original assignee: Bayer Aktiengesellschaft,De
Priority date: 1989-06-09
Filing date: 1990-06-07
Publication date: 1992-02-20
Also published as: ZA904433B

Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft neue renininhibitorische Peptide der allgemeinen Formel * in welcher R1, R2, R3, A und X die in der Beschreibung angegebene Bedeutung haben, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung in Arzneimitteln, insbesondere in kreislaufbeeinflussenden Arzneimitteln. Formel (I)

Description

in welcher

A die oben angegebene Bedeutung hat,

mit Aminoschutzgruppen einführenden Reagenzien nach üblichen Methoden in inerten Lösungsmitteln in Gegenwart einer Base bei Temperaturen zwischen 0⁰C und 15O⁰C umsetzt.

Die vorliegende Erfindung betrifft neue renininhibitorische Peptide, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung in Arzneimitteln, insbesondere in kreislaufbeeinflussenden Arzneimitteln.

Renin ist ein proteolytisches Enzym, das überwiegend von den Nieren produziert und ins Plasma sezerniert wird. Es ist bekannt, daß Renin in vivo vom Angiotensinogen das Dekapeptid Angictensin I abspaltet. Angiotensin I wiederum wird in der Lunge, den Nieren oder anderen Geweben zu dem blutdruckwirksamen Oktapeptid Angiotensin Il abgebaut. Die verschiedenen Effekte des Angiotensin Il wie Vasokonstriktion, Na⁺-Retention in der Niere, Aldosteronfreisetzung in der Nebenniere und Tonuserhöhung des sympathischen Nervensystems wirken synergistisch im Sinne einer Blutdruckerhöhung.

Die Aktivität des Renin-Angiotensin-Systems kann durch die Hemmung der Aktivität von Renin oder dem Angiotensin· Konversionsenzym (ACE) sowie durch Blockade von Angiotensin-Il-Rezeptoren pharmakologisch manipuliert werden. Die Entwicklung von oral einsetzbaren ACE-Hemmern hat somit zu neuen Antihypertensiva geführt (vgl. DOS 3 628650, Am. J. Med.

77,690,1984).

Ein neuerer Ansatz ist, in die Renin-Angiotensin-Kaskade zu einem früheren Zeitpunkt einzugreifen, nämlich durch Inhibition der hochspezifischen Peptidase Renin.

Bisher wurden verschiedene Arten von Renininhibitoren entwickelt: Reninspezifische Antikörper, Phospholipide, Peptide mit der N-terminalen Sequenz des Prorenins, synthetische Peptide als Substratanaloga und modifizierte Peptide.

In der EP-A 20273696, EP-A 20278158 und in der PCTWO 86/04901 werden renininhibitorische Peptide beschrieben, bei denen der Bedeutungsumfang von R^J (siehe erfindungsgemäße Verbindungen) auch heterocyclische Reste erfaßt, ohne jedoch einen Hinweis auf die spezielle 1,3-Dithialan- oder 1,3-Dithiongruppe oder einen konkreten Vertreter dieser Stoffklasse zu geben. Es wurden nun Peptide gefunden, bei denen der übliche Aminosäurerest -His (Histidin) durch einen 1,3-Dithiolan- oder 1,3-Dithionrest ersetzt wurde und die überraschenderweise eine gute renininhibitorische Wirkung besitzen.

Die Erfindung betrifft Peptide der allgemeinen Formel (I)

JL ι ι ^(|)

in welcher

R* - fürWasserstoffoder

- für Alkoxycarbonyl mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen oder Benzyloxycarbonyl steht oder

- für eine Gruppe der Formel R³-CO- steht worin

RT⁹- Morpholine) oder die Reste (CH₃J₃C-SO₂-CH₂-CH-

CH₂-C₆H₈

oder (CH₃J₃C-CO-CHj-CH- bedeutet

CH₂C₆H₆

oder

— eine Gruppe der Formel -NR⁴R⁵ bedeutet worin

R⁴ und R⁵ gleich oder verschieden sinü und Wasserstoff, geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen ode· Phenyl bedeuten oder

N λ

- denRest(' -^-(CHo)_r -bedeutet \ — / * ^L

worin

L-die Zahl 0,1 oder 2 bedeutet B - für eine direkte Bindung oder - füreineAminosäuregruppierungderFormel

_3n3 oder -NH^CH₂-CO- steht

R⁶ - geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen bedeutet, das gegebenenfalls durch Hydroxy,

Carboxy, Alkoxy oder Alkoxycarbonyl mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen oder Benzyloxy substituiert ist oder

- für Prolin steht

in ihrer L-Form, D-Form oder als D,L-Isomerengemisch R² - für Aryl mit 6 bis 10 Kohlenstoffatomen steht, das gegebenenfalls bis zu 3fach gleich oder verschieden durch Halogen, Nitro, Cyano, Hydroxy, geradkettiges oder verzweigtes Alkoxy mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen, Acetoxy, Benzyloxy oder durch eine Gruppe der Formel 0-CO-R⁷ substituiert ist

R⁷ geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen bedeutet w - eine Zahl O oder 1 bedeutet A - für eine-CHj-oder für eine CH₂-CH₂-GrUpPe steht, D und E gleich oder verschieden sind und

- für eine direkte Bindung oder

- für eine Aminosäuregruppierung der Formel

R⁶'

Λ stehen :o-

R⁸' die oben angegebene Bedeutung von R⁶ hat und mit dieser gleich oder verschieden ist in ihrer L-Form, D-Form oder als D,L-Isomerengemisch X - für Hydroxy, Benzyloxy oder Alkoxy mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen oder Morpholino steht oder

- für eine Gruppe der Formel -NHR⁸ steht worin R⁸ - Wasserstoff oder

- geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit biszu 10 Kohlenstoffatomen bedeutet, das gegebenenfalls durch Hydroxy, Phenyl, Pyridyl oder durch den Rest der Formel

NH₂

substituiert ist

oder - für einen Rest der Formel

N N-CH₂-C₆H₅ steht

und deren physiologisch unbedenklichen Salze.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel (I), haben mehrere asymmetrische Kohlenstoffatome. Sie können unabhängig voneinander in der D- oder der L-Form vorliegen. Die Erfindung umfaßt die optischen Antipoden ebenso wie die Isomerengemische oder Racemate. Bevorzugt liefen die Aminosäurereste unabhängig voneinander in der optisch reinen, bevorzugt in der L-Form vor.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) können In Form ihrer Salze vorliegon. Dies können Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen mit anorganischen oder organischen Säuren oder Basen sein. Zu den Säureadditionsprodukten gehören bevorzugt Salze mit Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, lodwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure oder mit Carbonsäuren wie Essigsäure, Propionsäure, Oxalsäure, Glycolsäure, Bernsteinsäure, Maleinsäure, HydroxymaleinsSure, Methylmaleinsäure, Fumarsäure, Adipinsäure, Äpfelsäure, Weinsäure, Zitronensäure, Benzoesäure, Zimtsäure, Milchsäure, Ascorbinsäure, Salicylsäure. 2-Acetoxybenzoesäure, Nicotinsäure, Isonicotinsäure, oder Sulfonsäuren wie Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure, Benzolsulfonsäure, Toluolsulfonsäuro, Naphthalin-2-sulfonsäure oder Naphthalindisulfonsäure.

Bevorzugte Verbindungen der allgemeinen Formel (I) sind solche, in denen R¹ - fürWasserstoffoder

- für Alkoxycarbonyl mit bis zu S! ohlenstoffatomen oder Benzyloxycarbonyl steht oder

- für eine Gruppe dci Formel R³-CO- steht worin

R³ - Morpholino oder die Reste (CH₁J₃C-SOr-CH₁-CH-

C H 2~ΟβΠ5

oder (CHj)₃C-CO-CHr-CH- bedeutet

CH2C5H5

oder

- eine Gruppe der Formel-NR⁴F⁵ bedeutet worinR⁴ und R⁶ gleich oder verschic den sind und Wasserstoff, geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit bis zu β Kohlenstoffatomen oder Phenyl bedeuten oder

N \

-denRest (^ -7—(CHj)^- bedeutet

worin

L-dieZahlO,1 oder2bedeutet B - für eine direkte Bindung oder

- für eine Aminosäuregruppierung der Formel

R⁶

I steht

R⁶ - geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen bedeutet, das gegebenenfalls durch Hydroxy,

Alkoxy mit bis zu 4 Kohlenstoffatomen oder Benzyloxy substituiert ist oder

- für Prolin steht

in ihrer L-Form, D-Form oder als D,L-Isomerengemisch

R² - für Phenyl oder Napht,.. steht, das gegebenenfalls bis zu 3fach gleich oder verschieden durch Fluor, Chlor, Brom, Jod, Hydroxy, Nitro, Cyano, geradkettiges oder verzweigtes Alkoxy mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen, Acetoxy, Benzyloxy oder

Benzyloxy substituiert ist w - eine Zahl 0 oder 1 bedeutet A - füreine-CHj-oderfüreineCHr-CHj-Gruppesteht, D und E gleich oder verschieden sind und

- für eine direkte Bindung oder

- füreineAminosäuregruppierung der Formel

R^6>

stehen

R⁸' die oben angegebene Bedeutung von R^s hat und mit dieser gleich oder verschieden ist, in ihrer L-Form, D-Form oder als D,L-Isomerengemisch

X - für Hydroxy, Benzyloxy oder Alkoxy mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen oder Morpholino steht oder - für eine Gruppe der Formel -NHR⁸ steht worin

R⁸ - Wasserstoff oder geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen bedeutet, das gegebenenfalls durch Hydroxy, Phenyl, Pyridyl oder durch den Rest der Formel

substituiert ist oder

- für einen Rest der Formel

N N-CH₂-C₆H₅ steht

und deren physiologisch unbedenkliche Salze.

Besonders bevorzugt sind Verbindungen der allgemeinen Formel (I),

in welcher

R¹ - für Wasserstoff oder

- für Alkoxycarbonyl mit bis zu 4 Kohlenstoffatomen od&r Benzyloxycarbonyl steht oder

- für eine Gruppe der Formel R³-CO- steht worin

R³ - Morpholino oder eine Gruppe der Formel

(CH₃J₃C-SO₂-CH₂-CH-CH₂ C₆H₆

oder-NR⁴R⁵ bedeutetworin

R⁴ und R⁶ gleich oder verschieden sind und Wasserstoff oder geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit bis zu

4 Kohlenstoffatomen oder Phenyl bedeutenoder

K -den Rest ^ -y—(CH₂)L" ^bedeutat

worin

L-die Zahl 0,1 oder 2 bedeutet B - für eine direkte Bindung oder- für eine Aminosäuregruppierung der FormelF⁶

Ac

steht

R^e - geradkottiges oder verzweigtes Alkyl mit bis zu 46 Kohlenstoffatomen bedeutet, das gegebenenfalls durch Hydroxy substituiert ist

-für Prolin steht

in ihrer L-Form, D-Form oder als D.L-Isomerengemisch R² - für Phenyl oder Naphthyl steht, das gegebenenfalls bis zu 3fach gleich oder verschieden durch Fl'jor, Chlor, Jod, Hydroxy,

Methoxy, Ethoxy, Propoxy, tert. Butoxy, Benzyloxy oder Acetoxy substituiert ist, w - eine Zahl 0 oder 1 bedeutet A - füreine-CHr-oderfüreine-CHj-CH₂-Gruppesteht, D und E gleich oder verschieden sind und

- für eine direkte Bindung oder

- füreineAminosäuregruppierungderFormel

stehen

R⁶' die oben angegebene Bedeutung von R⁶ hat und mit dieser gleich oder verschieden ist, in ihrer L-Form, D-Foi m oder als D,L-Isomerengemisch X - für Hydroxy, Benzyloxy oder Alkoxy mit bis zu 4 Kohlenstoffatomen oder Morpholino steht oder

- für eine Gruppe der Formel-NHR⁸ steht worin

R⁸ - Wasserstoff oder

- geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen bedeutet, das gegbebenenfalls durch Hydroxy, Phenyl, Pyridyl oder durch den Rest der Formel

NH₂

substituiert ist

oder - für einen Rest der Formel

N N-CH₂-C₆H₅ steht

und deren physiologisch unbedenklichen Salze.

Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen mit salzbildenden Gruppen können in an sich bekannter Weise hergestellt werden, zum Beispiel durch Umsetzung der erfindungsgemäßen Verbindungen, die saure Gruppen enthalten, mit entsprechenden Basen oder durch Umsetzung dor erfindungsgemäßen Verbindungen, die basische Gruppen enthalten mit entsprechenden Säuren, jeweils bevorzugt mit den oben aufgeführten Basen bzw. Säuren.

Stereolsomerengemischo, insbesondere Diasterreomerengemische, können in an sich bekannter Weise, z. B. durch fraktionierte Kristallisation oder Chromatographie in die einzelnen Isomere getrennt werden.

Racemate können in an sich bekannter Wei o, z.B. durch Überführung der optischen Antipoden in Diastereomere, gespalten werden.

Die Gruppe der Formel

NH'^CO-NH 5 4

OH

besitzt drei asymmetrische Kohlenstoffatome, die unabhängig voneinander in der R- oder S-Konfiguration vorliegen können. Bevorzugt liegt diese Gruppierung in der 5 R, 3 S, 4S-Konfiguration, 5R,3R,4S-Konfiguration,6S,3S,4S-Konfigurationoder5S, 3 R, 4 S-Konfiguration vor, besonders bevorzugt in der 5 R, 3 S, 4S- oder 5 S, 3 S, 4 S-Konfiguration vor. Ebenso* wird die Gruppierung als Isomerengemisch eingesetzt

Die erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel (I)

I Ί

R^X -B- (NH'^^CO) _w-NH'^CO-NH

0-D-E-X

B, D, E, A, R¹, R², w und X die oben angegebene Bedeutung haben, erhält man, indem man [A) Verbindungen der allgemeinen Formel (II)

Z-NH

0-D-E-X

in welcher

D, E und X die oben angegebene Bedeutung haben und

Z-für eine Aminoschutzgruppe steht, zunächst durch Abspaltung die Gruppe Z nach üblichen Methoden in Amine überführt und diese anschließend mit Verbindungen der allgemeinen Formel (III)

t-i

(III),

in welcher

A die oben angegebene Bedeutung hat, und

Z' die oben angegebene Bedeutung von Z hat und mit dieser gleich oder verschieden ist, unter Aktivierung der Carbonsäure nach üblichen Methoden in inerten Lösemitteln zu Verbindungen der allgemeinen Formel (la)

sys

-n-c-v

UE. Λ

in welcher Z', A, D, E und X die oben angegebene Bedeutung haben, umsetzt, die Schutzgruppe Z' nach üblicher Methode abspaltet und in einem weiteren Schritt mit Verbindungen der allgemeinen Formel (IV)

(IV), R¹-B-(NH'^COOH)_W

in welcher R¹, B, w und R² die oben angegebene Bedeutung haben, gegebenenfalls unter der oben erwähnter Carbonsäureaktivierung kondensiert, und gegebenenfalls die entsprechenden Ester nach üblicher Methode verseift, oder zunächst dio Verbindungen der allgemeinen Formeln (III) und (IV) nach der oben angegebenen Methode umsetzt und anschließend mit den Verbindungen der allgemeinen Formel (il) eine weitere Peptidknüpfung anschließt oder indem man (B] Verbindungen der allgemeinen Formel (Ib)

Γ T I ^llb)<

R¹-B-^

OH

in welcher A, B, R¹, R², w, D und E die oben angegebene Bedeutung haben, und Q - für Alkoxycarbonyl mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen steht, nach üblicher Methode zunächst zu den entsprechenden Säuren verseift und in einem weiteren Schritt in Anwesenheit von Hilfsstoffen mit Aminen der allgemeinen Formel (V), oder Morpholin der Formel (Vl) oder N-Benzylpiperazin der Formel (VII)

H₂N-R⁸ (V), O NH (VI) oder HN N-CH₂C₆H₅ (VII)

in welcher R⁸ die oben angegebene Bedeutung hat, kondensiert, oder indem man [C] entweder Verbindungen der allgemeinen Formel (I c)

CO,

r¹-b-(nH''^am:o:

OH

in welcher A, B, R¹, w und R² die oben angegebene Bedeutung haben, und X' - für Alkoxy mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen odor Benzyloxy steht, oder Verbindungen der allgemeinen Formel (I d)

(ld),

OH

in welcher T₁ A und X' die oben angegebene Bedeutung haben, zunächst zu den entsprechenden Säuren nach üblicher Methode verseift und t-ischließend mit dem Bruchstück der allgemeinen Formel (VIII)

D-E-X (VIII),

in welcher D, E und X die oben angegebene Bedeutung haben, in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls in Anwesenheit von Hilfsstoffen, umsetzt, und im Fall der Verbindungen der allgemeinen Formel (Id) in einem nächsten Schritt nach der unter Verfahren |A] beschriebenen Methode unter schrittweiser Abspaltung der jeweiligen Schutzgruppe Z' mit Verbindungen der allgemeinen Formel (IV) oder (IVa)

² /R²

(IV) oder R^B- (NH'^COOH)^

in welcher

R¹, B, w und R² die oben angegebene Bedeutung haben, umsetzt, Das Syntheseschema kann durch folgendes Reaktionsschema beispielhaft belegt werden:

- NH'^XIO

Η··

1. +HCl

- Boc

OH

2.

ΓΊ

0OH

+ HCl - Boc

4.

Boc-1

ΓΊ

ONH'^CONH'^^vv_Y<?NN EtOC-NlK^COOH

EtOC-N

+ H₂O/OH

EtOC-N H

•NH'^NZOOH

OH

EtOC-NH·

NH'^^CO-NH'^^v^^nCONH

OH + ΟΗ^Θ/Η₂Ο

0OC₂H₅

EtOC-NH

NH₂ -H₂O

EtOC-NH

EtOC-NH·

Etoc-NH

OH

OCH

nH COOH

+ NH₂-CH₂

OCH

ONH-CH-

Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen ist auch nach weiteren üblichen Varianten des beschriebenen Verfahrens durchgeführt worden (vgl. z.B. Houben-Weyls „Methoden der organischen Chemie" XV/1 und 2; M. Bodanszky, A, Bodanszky in "The Practice of Peptide Synthesis", Springer Verlag, Berlin, 1984; George R. Pettit in „Synthetic Peptides", Volume 4, Elsevier Scientific Publishing Company, Amsterdam-Oxford-New York, 1976; E. Gross und J.Meionhofer (Editors) in „The Peptides", Vol. 1-3, Academic Press, New York-London-Toronto-Sydney-San Francisco, 1981; M. Bodanszky in „Principles of Peptide Synthesis", SpringerVerlag, Berlin-Heidelberg-New York-Tokyo, 1984; R.Uhmann undK.Radscheit, Offenlegungsschrift, DE 3411244 A1) oder auch nach der „Solid-Phase-Methode", wie sie beispielsweise von M.Bodanszky, A.Bodanszky in „The Practice of Peptide Synthesis", Springer-Verlag, Berlin, 1984, oder G. Barany, R. B. Merrifield in „Solid-Phase Peptide Synthesis" aus „The Peptides", Vol.2, S.3-254, edited by E.Gross, J. Meienhofer, Academic Press, New York-London-Toronto-Sydney-San Francisco (1980) beschrieben wird.

Als Lösemittel eignen sich bei den Verfahrensvarianten (A], IB] und (C] die üblichen inerten Lösemittel, die sich unter den jeweils gewählten Reaktionsbedingungen nicht verändern. Hierzu gehören Wasser oder organische Lösemittel wie Diethylether, Glykolmono- oder -dimethylether, Dioxan oder Tetrahydrofuran, oder Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Toluol, Xylol, Cyclohexan oder Erdölfraktionen oder Halogenkohlenwasserstoffe wie Methylenchlorid, Chloroform, Tetrachlorkohlenwasserstoffe oder Aceton, Dimethylsulfoxid, Dimethylformamid, Hexamethylphosphorsäuretriamid, Essigester, Pyridin, Triethylamin oder Picolin. Ebenso ist es möglich, Gemische der genannten Lösemittel zu verwenden

Bevorzugt sind Tetrahydrofuran, Methylenchlorid, Dimethylformamid und Essigester.

Üblicherweise werden die Verfahrensvarianten (A), [B] und (C] in Gegenwart geeigneter Löse- bzw. Verdünnungsmittel, gegebenenfalls in Anwesenheit eines Hilfsstoffes oder Katalysators in einem Temperaturbereich von -80⁰C bis 300"C, bevorzugt von -30"C bis +30'C bei normalem Druck durchgeführt. Ebenso ist es möglich, bei erhöhtem oder erniedrigtem Druck zu arbeiten.

Als aktivierte Carboxylgruppe eignen sich bei den Verfahrensvarianten (A), (B] und [Cl beispielsweise Carbonsäureazide (erhätlich z. B. durch Umsetzung von geschützten oder ungeschützten Carbonsäurehydraziden mit salpetriger Säure, deren Salzen oder Alkylnitriten (z. B. Isoamylnitrit),

oder ungesättigte Ester, insbesondere Vinylester, (erhältlich z. B. durch Umsetzung eines entsprechenden Esters mit Vinylacvetat), Carbamoylvinylester (erhältlich z.B, durch Umsetzung einer entsprechenden Säure mit einem Isoxazoliumreagenz), Alkoxyvinylester (erhältlich z. B. durch Umsetzung der entsprechenden Säuren mit Alkoxyacetylenen, bevorzugt Ethoxyacetylen),

oder Amidinoester z.B. N,N'-bzw. Ν,Ν-disubstituierteAmidinoester (erhältlich z.B. durch Umsetzung der entsprechenden Säure mit einem Ν,Ν'-disubstituierten Carbodiimid (bevorzugt Dicyclohexylcarbodiimid, Diisopropylcarbodiimid oder N-(3-Dimethylaminopropyh-N'-ethylcarbodiimidhydrochlorid) oder mit einem Ν,Ν-disubstituierten Cyanamid, oder Arylester, insbesondere durch elektronenziehende Substituenten substituierte Phenylester, z. B. 4-Nitrophenyl-, 4-Methylsulfonylphenyl-, 2,4,5-Trichlorphenyl-, 2,3,4,5,6-Pentachlorphenyl-, 4-Phenyldiazophenylester (erhältlich z.B. durch Umsetzung der entsprechenden Säure mit einem entsprechend substituierten Phenol, gegebenenfalls in Anwesenheit eines Kondensationsmittels wie z. B. Ν,Ν'-Dicyclohexylcarbodiimid, Diisopropylcarbodiimid, N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-Hydrochlorid, Isobutylchloroformat, Propanphosphonsäureanhydrid, Benzotriazolyloxytris(dimethylamino)-phosphoniumhexafluorphosph it

oder Cyanmethylester (erhältlic . z. B. durch Umsetzung der entsprechenden Säure mit Chloracetonitril in Gegenwart einer Base), oder Thioester, insbesondere Nitrophenylthioester (erhältlich z. B. durch Umsetzung der entsprechenden Säure mit Nitrothiophenolen, gegebenenfalls in Gegenwart von Kondensationsmitteln wie N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid, Diisopropylcarbodiimid, N-O-DimethylaminopropyD-N'-ethylcarbodiimid-Hydrochlorid, Isobutylchloroformat, Propanphosphonsäureanhydrid, Benzotriazolyloxytris(dimethylamino)phosphoniumhexafluorphosphat), oder Amino- bzw. Amidoester (erhältlich z. B. durch Umsetzung der entsprechenden Säure mit einer N-Hydroxyamino- bzw. N-Hydroxyamido-Verbindung, insbesondere N-Hydroxy-succinimid, N-Hydroxypiperidin, N-Hydroxy-phthalimid, N-Hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarbonsäureimid oder 1 -Hydroxybenzotriazol, gegebenenfalls in Anwesenheit von Kondensationsmitteln wie Ν,Ν'-Dicyclohexylcarbodiimid, Diisopropylcarbodiimid oder N-O-DimethylaminopropyD-N'-ethylcarbodiimid-Hydrochlorid, Isobutylchlorcformat oder n-Propanphosphon«äureanhydrid),

oder Anhydride von Säuren, bevorzugt symmetrische oder unsymmetrische Anhydride der entsprechenden Säuren, insbesondere Anhydride mit anorganischen Säuren (erhältlich z.B. durch Umsetzung der entsprechenden Säure mit Thionylchlorid, Phosphorpentoxid oder Oxalylchlorid), oder Anhydride mit Kohlensäurehalbderivaten, z. B. Kohlensäureniederalkylhalbester (erhältlich z.B. durch Umsetzung der entsprechenden Säure mit Halogenameisensäureniedrigalkylestern, z.B. Chlorameisensäuremethylester, -ethylester, -propylester, -isopropylester, -butylester oder -isobutylester oder mit 1 -Niedrigalkoxycarbonyl-2-niedrigalkoxy-i ,2-dihydro-chinolin, z. B. 1 -Metnoxycarbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydrochinolin),

oder Anhydride mit Dihalogenphosphorsäuren (erhältlich z. B. durch Umsetzung der entsprechenden Säure mit Phosphoroxychlorid),

oder Anhydride mit Phosphorsäurederivaten oder Phosphorigsäurederivaten, (z. B. Propanphosphonsäureanhydrid, H.Wissmann und H. J.Kleiner, Angew. Chem. Int. Ed. 19,133 [1980])

oder Anhydride mit organischen Carbonsäuren (erhältlich z. B. durch Umsetzung der entsprechenden Säuren mit einem gegebenenfalls substituierten Niederalkan- oder Phenylalkancarbonsäurehalogenid, insbesondere Phenylessigsäure-, Pivalinsäure- oder Trifluoressigsäurechlorid),

oder Anhydride mit organischen Sulfonsäuren (erhältlich z.B. durch Umsetzung eines Alkalisalzes einer entsprechenden Säure mit einem Sulfonsäurehalogenid, insbesondere Methan-, Ethan-, Benzol- oderToluolsulfonsäurechlorid), oder symmetrische Anhydride (erhältlich z. B. durch Kondensation entsprechender Säuren, gegebenenfalls in Gegenwart von Kondensationsmitteln wie N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid, Diisopropylcarbodiimid, N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimid-Hydrochlorid, Isobutylchloroformat, Propanphosphonsäureanhydrid oder Benzotriazolyloxytris(dimethylamino)phosphoniumhexafluorphosphat).

Reaktionsfähige cyclische Amide sind insbesondere Amide mit fünfgliedrigen Heterocyclen mit 2 Stickstoffatomen und gegebenenfalls aromatischem Charakter, bevorzugt Amide mit Imidazolen oder Pyrazolen (erhältlich z.B. durch Umsetzung der entsprechenden Säuren mit Ν,Ν'-Carbonyldiimidazol oder- gegebenenfalls in Gegenwart von Kondensationsmitteln wie z. B. N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid, Ν,Ν'-Diisopropylcarbodiimid, N-O-Dimethylaminopropyij-N'-ethyicarbodiimid-Hydrochlorid,

Isobutylchloroformat, Propanphosphonsäureanhydrid, Benzotriazolyloxy-tris(dimethylamino)phosphonium· hexafluorphosphat - mit ζ. B. 3,5-Dimethyl-pyrazol, 1,2,4-Triazol oder Tetrazol. Als Aminoschutzgruppe eignen sich die in der Peptidchemie gebräuchlichen Aminoschutzgruppen. Hierzu gehören bevorzugt: Benzyloxycarbonyl, 4-Brombenzyloxycarbonyl, 2-Chlorbenzyloxycarbonyl, 3-Chlorbenzyloxycarbonyl, Dichlorbenzyloxycarbonyl, 3,4-Dimethoxybenzyloxycarbonyl, 3,5-Dimethoxybenzyloxycarbonyl, 2,4-Dimethoxybβnzyloxycarbonyl,4-Mβthoxybθnzyloxycarbonyl,4-Nitrobenzyloxycarbonyl,2-Nitrobθnzyloxycarbonyl, 2-Nitro·4,5-dimethoxybenzyloxycarbonyl,3,4₁5-Trimetnoxybenzyloxycarbonyl_/Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, Propoxycarbonyl, Isopropoxycarbonyl, Butoxycarbonyl, Isobutoxycarbonyl, tert.-Butoxycarbonyl, Pentoxycarbonyl, Isopentoxycarbonyl, Hexoxycarbonyl, Cyclohexoxycarbonyl, Octoxycarbonyl, 2-Ethylhexoxycarbonyl, 2-lodhexoxycarbonyl, 2-Bromethoxycarbonyl, 2-Chlorethoxycarbonyl, 2,2,2-Trichlorethoxycarbonyl, 2,2,2-Trichlor-tert.-butoxycarbonyl, Benzhydryloxycarbonyl, Bis-(4-methoxyphenyl)methoxycarbonyl, Phenacyloxycarbonyl, 2-Trimethylsilylethoxycarbonyl, 2-(Di-n-butyl-methyl-silyl)ethoxycarbonyl, 2-Triphenylsilylethoxycarbonyl, 2-(Dimethyl-tert.-butylsilyl)ethoxycarbonyl, Menthyloxycarbonyl, Vinyloxycarbonyl, Allyloxycarbonyl, Phenoxycarbonyl, Tolyloxycarbonyl, 2,4-Dinitrophenoxycarbonyl, 4-Nitrophenoxycarbonyl, 2,4,5-Trichlorphenoxycarbonyl, Naphthyloxycarbonyl, Fluorenyl-9-methoxycarbonyl, Ethylthiocarbonyl, Methylthiocarbonyl, Butylthiocarbonyl.Tert.-Butylthiocarbonyl, Phenylthiocarbonyl, Benzylthiocarbonyl, Methylaminocarbonyl, Ethylaminocarbonyl, Methylthiocarbonyl, Butylthiocarbonyl, tert.-Butylthiocarbünyl, Phenylthiocarbonyl, Benzyithiocarbonyl, Methylaminocarbonyl, Ethylaminocarbonyl, Propylaminocarbonyl, iso-Propylaminocarbonyl, Formyl, Acetyl, Propionyl, Pivaloyl, 2· Chloracetyl, 2-Bromacetyl, 2-lodacetyl, 2,2,2-Trifluoracetyl, 2,2,2-Trichloracetyl, Benzoyl, 4-Chlorbenzoyl, 4-Methoxybenzoyl, 4-Nitrobenzyl, 4-Nitrobenzoyl, Naphthylcarbonyl, Phenoxyacetyl, Adamantylcarbonyl, Dicyclohexylphosphoryl, Diphenylphosphoryl, Diberuylphosphoryl, Di-(4-nitrobenzyl)phosphoryl, Phenoxyphenylphpsphoryl, Disthylphosphinyl, Diphenylphosphinyl, Phthaloyl oder Phthallmido. Besonders bevorzugte Aminoschutzgruppen sind Benzyloxycarbonyl, 3,4-Dimethoxybenzyloxycarbonyl, 3,5-Dimethoxybenzyloxycarbonyl, 4-Methoxybenzyloxycarbonyl, 4-Nitrobenzyloxycarbonyl,2-Nitrobenzyloxycarbonyl, 3,4,5-Trimethoxybenzyloxycarbonyl, Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, Propoxycarbonyl, Isopropoxycarbonyl, Butoxycarbonyl, Isobutoxycarbonyl, tert.-Butoxycarbonyl, Cyclohexoxycarbonyl, Hexoxycarbonyl, Octoxycarbonyl, 2-Bromethoxycarbonyl, 2-Chlorethoxycarbonyl, Phenoxyacetyl, Naphthylcarbonyl, Adamatylcarbonyl, Phthaloyl, 2,2,2-Trichlorethoxycarbonyl, 2,2,2-Trichlor-tert.-butoxycarbonyl, Methyloxycarbonyl, Vinyloxycarbonyl, Allyloxycarbonyl, Phenoxycarbonyl, 4-Nitrophenoxycarbonyl, Fluorenyl-9-methoxycarbonyl, Formyl, Acetyl, Propionyl, Pivaloyl, 2-Chloracetyl, 2-Bromacetyl, 2,2,2-Trifluoracetyl, 2,2,2-Trichloracetyl, Benzoyl, 4-Chlorbenzoyl, 4-Brombenzoyl, 4-Nitrobenzoyl, Phthalimido oder Isovaleroyl [vgl. Th. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesi, John Wiley & Sons, New York 1981). Als HilfsStoffe werden bevorzugt Kondensationsmittel eingesetzt, die auch Basen sein können, insbesondere wenn die Carboxylgruppe als Anhydrid aktiviert vorliegt.

Bevorzugt werden hier di6 üblichen Kondensationsmittel wie Carbodiimide z. B. Ν,Ν'-Diethyl-, N,N'-Dipropy I-, N.N'-Diisopropyl-, N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid, N-O-DimethylaminoisopropyD-N'-ethylcarbodiimid-Hydrochlorid, oderCarbonylverbindungen wie Carbonyldiimidazol, oder 1,2-Oxazoliumverbindungen wie ü-Fthyl-5-phenyl-1,2-oxazolium-3-sulfat oder 2-tert.-Butyl-5-methyl-isoxazolium-perchlorat, oder Acylaminoverbindungen wie 2-Ethoxy-1-ethoxycarbonyl-1,2-dihydrochinolin, oder Propanphosphonsäureanhydrid, oder Isobutylchloroformat, oder Benzotriazolyloxy-tris(dimethylamino)phosphoniumhexafluorophosphat, und als Basen Alkalicarbonate z.B. Natrium· oder Kaliumcarbonat oder -hydrogencarbonat, oder organische Basen wie Trialkylamine, z. B. Triethylamin, N-Ethylmorpholin, N-Methylpiperidin oder Diisopropylethylamin eingesetzt.

Die Abspaltung der Aminoschutzgruppe erfolgt in an sich bekannter Weise unter sauren oder basischen Bedingungen, oder reduktiv durch katalytische Hydrierung beispielsweise mit Pd/C in organischen Lösemitteln wie Ethern, z. B. Tetrahydrofuran oder Dioxan, oder Alkoholen z. B. Methanol, Ethanol oder Isopropanol.

Die Verseifung der Carbonsäureester erfolgt nach üblichen Methoden in einem der oben aufgeführten Lösemittel, indem man die Ester mit üblichen Basen behandelt, wobei die zunächst entstehenden Salze durch Behandeln mit Säure in die freien Carbonsäuren überführt werden können.

Als Basen eignen sich für die Verseifung die üblichen anorganischen Basen. Hierzu gehören bevorzugt Alkalihydroxide oder Etdaikalihydroxide wie beispielsweise Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid oder Bariumhydroxid, oder Alkalicarbonate wie Natrium- oder Kaliumcarbonat oder Natriumhydrogencarbonat, oder Alkalialkoholate wie Natriumethanolat, Natriummethanolat, Kaliumethanolat, Kaliummethanolat oder Kalium-tert.butanolat. Besonders bevorzugt werden Natriumhydroxid oder Kaliumhydroxid eingesetzt.

Die Verseifung wird im allgemeinen in einem Temperaturbereich von O⁰C bis +100⁰C, bevorzugt von +20⁰C bis +8O⁰C durchgeführt.

Im allgemeinen wird die Verseifung bei Normaldruck durchgeführt. Es ist aber auch möglich, bei Unterdruck oder bei Überdruck zu arbeiten (z.B. von 0,5 bis 5bar).

Bei der Durchführung der Verseifung wird die Base im allgemeinen in einer Menge von 1 bis 3mol, bevorzugt von 1 bis 1,5mol bezogen auf 1 mol des Esters eingesetzt. Besonders bevo/zugt verwendet man molare Mengen der Reaktanden. Die Abspaltung der Ester kann ebenfalls nach üblicher Methode mit Säuren, wie beispielsweise Chlorwasserstoffsäure oder Trifluoressigsäure im Fall der tert.-Butylester oder durch Hydrogenolyse im Fall von Benzylestern erfolgen. Die Verbindungen der allgemeinen Formeln (II), (IV), (IVa) und (VIII) sind an sich bekannt oder können nach üblichen Methoden der Peptidchemie aufgebaut werden, indem man durch Umsetzung eines entsprechenden Bruchstücks bestehend aus einer oder mehreren Aminosäuregruppierungen, mit einer freien, gegebenenfalls in aktivierter Form vorliegenden Carboxylgruppe mit einem komplementierenden Bruchstück, bestehend aus einer oder mehreren Aminosäuregruppierungen, mit einer Aminogruppe, gegebenenfalls in aktivierter Form, herstellt, und diesen Vorgang gegebenenfalls so oft mit entsprechenden Bruchstücken wiederholt, bis man die gewünschten Peptide der allgemeinen Formeln (II), (IV) und (IVa) hergbstellt hat, anschließend gegebenenfalls Schutzgruppen abspaltet oder gegen andere Schutzgruppen austauscht. Hierbei können zusätzliche reaktive Gruppen, wie z. B. Amino- oder Hydroxygruppen, in den Seitenketten der Bruchstücke gegebenenfalls durch übliche Schutzgruppen geschützt werden (vgl. Houben-Weyl, Eugen Müller, Methoden der organischen Chemie, Band XV/1 und Band XV/2, Georg Th.ieme Verlag, Stuttgart, 19741. Die Umsetzung mit Morpholin (Vl) und N-Benzylpiperazin (VII) oder mit Aminen der Formol (V) erfolgt im allgemeinen in einem

der oben aufgeführten inerten Lösemitteln, in Anwesenheit einer der oben aufgeführten Basen, bevorzugt in Triethylamin und Methylenchlorid bei einer Temperatur von -40°C bis O⁰C, bevorzugt bei -2O⁰C und Normaldruck.

Im allgemeinen setzt man 1 bis 5, bevorzugt 1,5 bis 1 mol Amin, bezogen auf 1 mol des Reaktionspartners, ein.

Die Verbindungen der allgemeinen Formel (III)

y (III),

Z'-N^

in welcher

A und Z' die oben angegebene Bedeutung heben, sind neu und können hergestellt werden, indem man Verbindungen der allgemeinen Formel (IX)

Ϊ-Ί

^SY^S (ix),

In welcher

A die oben angegebene Bedeutung hat, mit einem einführenden Reagenz, wie beispielsweise (Z'-O-CO)jO, 7.'-0-CO-CI oder (Z'-O-COhO-N-succinimid, die Aminoschuügruppe Z' nach der oben beschriebenen Methode (A) in inerten Lösemitteln in Anwesenheit einer Base, bevorzugt im Gemisch Dioxan/Wassor mit Natriumhydroxid oder In Dioxan mit Triethylamin in einem Temperaturbereich von 0°C bis +5O⁰C, bevorzugt bei Raumtemperatur und Normaldruck, umsetzt.

Die Verbindungen der allgemeinen Formeln (la) und (Ib) sind neu und werden nach der unter Verfahren [A] und [B] beschriebenen Methode dargestellt.

Die Verbindungen der allgemeinen Formel (I d) sind ebenfalls neu und können hergestellt werden, indem man Verbindungen der allgemeinen Formel (III)

(III),

in welcher

Z' und A die oben angegebene Bedeutung haben, mit Verbindungen der allgemeinen Formel (X)

OH

in welcher

Z und X' die oben angegebene Bodeutung haben, unter Abspaltung der Schutzgruppe Z, umsetzt.

Die Verbindungen der allgemeinen Formel (X) sind bekannt [vgl. Boger et al., J. Med. Chem. 28,1779-1790 (1985)].

Die Verbindungen der allgemeinen Formel (IX) sind bekannt oder können nach bekannten Methoden hergestellt werden [M. P.

Mertes, A.A. Ramsey, J. Med. Chem. 12,342 (1969)].

Die Verbindungen der allgemeinen Formel (Ic) sind ebenfalls neu und werden durch Umsetzung der Verbindungen der Formel (III), (IV) und (X) nach der unter Verfahren [Al beschriebenen üblichen Peptidkupplungsmethode hergestellt.

Die Amine der allgemeinen Formel (V), (VIII) und (IX) sind bekannt [vgl. G. C. Barrett, Chemistry of the Amino Acids, Chapman and Hall, New York, London, 1988 und EP-A2 0278158].

Morpholin und N-Benzylpiperazin sind bekannt.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen besitzen eine kreislaufbeeinflussende Wirkung und können deshalb in Arzneimittel zur Behandlung des Blutdrucks und der Herzinsuffizienz eingesetzt werden.

In-vltro-Test

Die inhibitorische Stärke der erfindungsgemäßen Peptide gegen endogenes Renin vom Humanplasma wird in vitro bestimmt. Gepooltes Humanplasma wird unter Zusatz von Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) als Antikoagulanz erhalten und bei -2O⁰C gelagert. Die Plasmareninaktivität (PRA) wird als Bildungsrate von Angiotensin I aus endogenem Angiotensinogen und Renin nach Inkubation bei 37⁰C bestimmt. Die Reaktionslösung enthält 150μΙ Plasma, 3 μΙ 6,6%ige 8-Hydroxychlnolinsulfatlösung, 3μΙ 10%ige Dimercaprollösung und 144 μΙ Natriumphosphatpuffer (0,2 M; 0,1% EDTA; pH 5,6! mit oder ohne den erfindungsgemäßen Stoffen in verschiedenen Konzentrationen. Das pro Zeiteinheit gebildete Angiotensin I wird mit einem Radioimmunoessay (Sorin Biomedica, Italien) bestimmt. Die prozentuale Inhibition der Plasmareninaktivität wird berechnet durch Vergleich der hier beanspruchten Substanzen. Der Konzentrationsbereich, in dem die hier beanspruchten Substanzen eine 50% Inhibition der Plasmareninaktivität zeigen, liegen zwischen 10"⁷ bis 10"'⁰M.

Beispiel-Nr.	IC₆₀(M)
IV	1,1 · 10"⁷
V	7,0-10-'°
XII	7,4-10"'
XIII	1,4-10-'°
XVI	2,4-10"⁸
XVII	1,9 · 10"'°
XXXII	1,5-10-"
XXXIII	2,2 · ΙΟ"¹⁰

Die neuen Wirkstoffe können in bekannter Weise in die üblichen Formulierungen überführt werden, wie Tabletten, Dragees, Pillen, Granulate, Aerosole, Sirupe, Emulsionen, Suspensionen und Lösungen, unter Verwendung inerter, nicht-toxischer, pharmazeutisch geeigneter Trägerstoffe oder Lösungsmittel. Hierbei soll die therapeutisch wirksame Verbindung jeweils in einer Konzentration von etwa 0,5 bis 90 Gew.-% der Gesamtmischung vorhanden sein, d. h. in Mengen, die ausreichend sind, um den angegebenen, Dosierungsspiel zu erreichen.

Die Formulierungen werden beispielsweise hergestellt durch Verstrecken der Wirkstoffe mit Lösungsmitteln und/oder Trägerstoffen, gegebenenfalls unter Verwendung von Emulgiermitteln und/oder Dispergiermitteln, wobei z.B. im Fall der Benutzung von Wasser als Verdünnungsmittel gegebenenfalls organische Lösungsmittel als Hilfslösungsmittel verwendet werden können.

Als Hllfsstoffe selen beispielsweise aufgeführt:

Wasser, nicht-toxische organische Lösungsmittel, wie Paraffine (z. B. Erdölfraktionen), pflanzliche Öle (z. B. Erdnuß/Sesamöl), Alkohole (z.B.: Ethylalkohol, Glycerin),Trägerstoffe, wie z. B. natürliche Gesteinsmehle (z. B. Kaoline,Tonerden, Talkum, Kreide), synthetische Gesteinsmehle (z.B. hochdisperse Kieselsäure, Silikate), Zucker (z. B. Rohr-, Milch- und Traubenzucker), Emulgiermittel (z.B. Polyoxyethylen-Fettsäure-Ester), Polyoxyethylen-Fettalkohol-Ether (z.B. Lignin-Sulfitablaugen, Methylcellulose, Stärke und Polyvinylpyrrolidon) und Gleitmittel (z. B. Magnesiumstearat, Talkum, Stearinsäure und Natriumsulfat).

Die Applikation erfolgt in üblicher Weise, vorzugsweise oral oder parenteral, insbesondere perlingual oder intravenös. Im Falle der oralen Anwendung können Tabletten selbstverständlich außer den genannten Trägerstoffen auch Zusätze, wie Natriumeitrat, Calciumcarbonat und Dicalciumphosphat zusammen mit verschiedenen Zuschlagstoffen, wie Stärke, vorzugsweise Kartoffelstärke, Gelatine und dergleichen enthalten. Weiterhin können Gleitmittel, wie Magnesiumstearat, Natriumlaurylsulfat und Talkum zum Tablettieren mitverwendet werden. Im Falle wäßriger Suspensionen können die Wirkstoffe außer den obengenannten Hilfsstoffen mit verschiedenen Geschmacksaufbesserern oder Farbstoffen versetzt werden.

Für den Fall der parenteralen Anwendung können Lösungen der Wirkstoffe unter Verwendung geeigneter flüssiger Trägermaterialien eingesetzt werden.

Im allgemeinen hat es sich als vorteilhaft erwiesen, bei intravenöser Applikation Mengen von etwa 0,001 bis 1 mg/kg, vorzugsweise etwa 0,01 bis 0,5mg/kg Körpergewicht zur Erzielung wirksamer Ergebnisse zu verabreichen, und bei oraler Applikation beträgt die Dosierung etwa 0,01 bis 30mg/kg, vorzugsweise 0,1 bis 10mg/kg Körpergewicht.

Trotzdem kann es gegebenenfalls erforderlich sein, von den genannten Mengen abzuweichen, und zwar in Abhängigkeit vom Körpergewicht des Versuchstieres bzw. der Art der Applikation, aber auch aufgrund der Tierart und deren individuellem Verhalten gegenüber dem Medikament bzw. deren Art von dessen Formulierung und dem Zeitpunkt bzw. Intervall, zu welchem die Verabreichung erfolgt. So kann es in einigen Fällen ausreichend sein, mit weniger als der vorgenannten Mindestmenge auszukommen, während in anderen Fällen die genannte obere Grenze überschritten werden muß. Im Falle der Applikation größerer Mengen kann es empfehlenswert sein, diese in mehrere Einzelgaben über den Tag zu verteilen. Für die Applikation in der Humanmedizin ist der gleiche Dosierungsspielraum vorgesehen. Sinngemäß gelten hierbei auch die obigen Ausführungen.

Ausgangsverbindungen

8elsplel 1 (Formel VIII Aminofunktion durch Schutzgruppe Boc geschützt N-tert.-Butoxycarbonyl-L-isoleucin-(2-picolyl)amid

Zu einer Lösung von 100g (0,432mol) N-tert.-Butoxycarbonyl-L-lsoleucin und 46,72g (0,432 mol) 2-Picolylamin in 11 Methylenchlorid gibt man bei O⁰C419,3ml (3,024mol) Triethylamin. Man läßt 10 Minuten rühren, kühlt auf -2O⁰C (Trockeneis/ Aceton) und tropft bei dieser Temperatur 365ml (0,561 mol) einer 50%igen Lösung von Propanphosphonsäureanhydrid in Mothylenchlorid (Hoechst AG) hinzu. Dor Ansatz wird 1 Stunde bei -2O⁰C weitergerührt und über Nacht auf Raumtemperatur gebracht. Die Reaktionsmischung wird nacheinander 3mal mi! je 300ml 5%igo Natriumhydrogencarbonatlösung, 3mal mit je 300ml Pufferlösung pH 4 (Merck, Art.-Nr. 9435) und schließlich 2mal mit je 300 ml gesättigter Kochsalzlösung ausgeschüttelt. Die organische Phase wird über Natriumsulfat getrockr.e; und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wird durch Verrühren mit Diethylether kristallisiert, abgesaugt und dann aus Diisoprc^ykiner/n-Hexan umkristallisiert. Ausbeute: 85,9g (61,8%der Theorie)

DC-Systemll: R, = 0,35 DC-Systemlll: R₁ = 0,49 DC-SystemlV: R₍ = 0,57

-21- 2S8

Beispiel 2 (Formel VIII) L-lsoleucin-(2-picolyl)nmid-Dihydrochlorid

HCl χ HoN-^-CONH''^^^ X HCl

40g (0,1 i:4 mol; der Verbindung aus Beispiel 1 werden mit 250 ml 4 N Salzsäure (Gas) in Dioxan versetzt und unter Eiskühlung gerührt. Oie Suspension wird durch Zugabe von 10ml Methanol in Lösung gebracht. Nach Abreaktion (DC-Kontrolle) engt man am Rotationsverdampfer ein. Nach mehrmaliger Koevaporation mit Diethylether wird das Rohprodukt mit Diethylether verrührt, abgesaugt und im Exsikkator über Kaliumhydroxid getrocknet

Ausbeute: ü7,2g(100%der Theorie)

DC-Systemlll: R, = 0,30

Beispiel 3 (Formel II) N-tert.-Butoxycarbonyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexyl-pentanoyl-L-isoleucin-(2-picolyl)amid

13,2g (41,8mmol) N-tert.-Butoxycarbonyl^S-amino-SS-hydroxy-ö-cyclohexyl-pentansäure [J. Boger et al., J. Med. Chem. 28, 1779 (198?)] und 13,5g (46mmol) der Verbindung aus Beispiel 2 werden mit 420ml Methylenchlorid versetzt. Die Suspension wird durch Zugabe von 31 ml (230mmol) Triethylamin in Lösung gebracht und auf -20°C gekühlt (Aceton/Trockeneis). Unter Rühren tropft man bei dieser Temperatur 39 ml einer 50%igen Lösung von Propanphosphonsäureanhydrid in Methylenchlorid hinzu und läßt den Ansatz über Nacht auf Raumtemperatur kommen. Das Methylenchlorid wird am Rotationsverdampfer abgezogen und der Rückstand in 400ml Essigester aufgenommen. Die organische Phase wird nacheinander 1 mal mit 200ml gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung, 2ma! mit je 200 ml Pufferlösung pH 7 (Merck, Art.-Nr. 9439) und 4mal mit je 200 ml vollentsalztem Wasser gewaschen. Die Pufferlösungen werden mit je 100ml Essigester zurückextrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden 2mal mit je 500 m' gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und am Rotationsverdampfer auf ein Volumen von et» a 125ml eingeengt. Die Lösung wird mit 125 ml n-Hoxan versetzt und über Nacht in den Kühlschrank (5⁰C) gestellt. Das auskri· allisierte Produkt wird abgesaugt, mit wenig kaltem Essigester/n-Hexan 1:1 nachgewaschen und im Vakuum getrockne*.

Ausbeute: 17,2g (79%derTheor^!a)

MS-DCI: m/z519(M + H)

DC-Systemlll: R₁ = 0,48 DC-System IV: R, = 0,63 DC-SystemV: R₍ = 0,48 HPLC-Systemll: R₁ = 6,02 Min.

Beispiel 4 (Formel II) 4S-Amino-3S-hydroxy-5-cyclohexyl-pentanoyl-L-isoleucin-(2-picolyl)amid Dihydrochlorid

r r

HCl χ NHo^V^^CO-NH'^CO-NH'^v^N-x, χ HCl

\3

16g (30,8mmol) der Verbindung aus Beispiel 3 werden unter Eiskühlung mit 160 ml 4 N Salzsäure (Gas) in Dioxan versetzt. Die Suspension wird durch Zugabe von 5ml Methanol in Lösung gebracht. Nach Abreaktion (DC-Kontrolle) engt man am Rotationsverdampfer ein. Nach mehrmaliger Koevaporation mit Diethylether wird das Rohprodukt mit Diethylether verrührt, abgesaugt und im Exsikkator über Kaliumhydroxid getrocknet

Ausbeute: 16,56 g (95 % der Theorie)

MS-DCI: m/z419(M + H)

DC-Systemlll: R₁ = 0,35

Beispiel 5 (Formel III) N-tert.-Butoxycarbonyl-2-R,S-amino-2-[2-(1,3-dithiolano))essigsäure

R₁S

19,9g (0,11 mol)2-Amino-2-R,S-2-[2-(1,3-dithiolano)lessigsäure (M.P. Merles, A.A. Ramsey, J. Med Chem. 12,342 (1969)] werden in 100ml Dioxan gelöst und mit 6,6g (0,16mol) Natriumhydroxid und 29g (0,13mol) Di-tert.-Butylcarbonat versetzt. Man läßt über Nacht bei Raumtempertur rühren und zieht das Dioxan am Rotationsverdampfer ab. Die Mischung wird mit 200ml Wasser aufgefüllt und mit Ether mehrmals extrahiert. Die basische wäßrige Phase wird mit Salzsäure auf pH 3 gasteilt und mehrmals mit Methyienchlorid extrahiert. Die vereinigten organischen Phasan werden mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Ausbeute: 18,1g(60,6%derTheorie)

MS-DCI: m/z280(M + H);m/z(M + NH,) DC-System IV: R, = 0,55

Beispiel 6 (Formel II) N-tert.-Butoxycarbonyl^S-amino-SS-hydroxy-ö-cyclohexylpentanoyl-L-leucinethylester

Die Titelverbindung wird analog Beispiel 3 durch Propanphosphonsäurehydridkupplung von 4,8g (15,2mmol) N-tert.-Butoxycarbonyl^S-amino-SS-hydroxy-ö-cyclohexylpentansäure [J. Boger et al., J. Med. Chem. 28,1779 (1985)1 und 3,3g (16,7 mmol) L-Ieucinmethylester Hydrochlorid erhalten. Ausbeute: 6,4g (92% der Theorie)

DC-SystemVI: Ri = 0,85 DC-SystemVII: R₍ = 0,13 DC-SystemVIII: ¹R, = 0,55 DC-System IX: R₍ = 0,24

Beispiel 7 (Formel H) 4S-Amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-leucinethylester Hydrochlorid

HCl χ

Die Titelverbindung wird analog Beispiel 4 durch Abspaltung der N-tert.-Butoxycarbonylschutzgruppe aus 6,1 g (13,3 mmol) der Verbindung aus Beispiel 6 erhalten. Ausbeute: 5,1 g (98% der Theorie)

(+) FAB-MS: m/z 357 (M + H); m/z 379 (M + Na).

DC-Systemlll: R₍ = 0,37 DC-SystemlV: R₍ = 0,29 DC-SystemVI: Ri = 0,85 DC-SystemVII: R₍ = 0,13 DC-SystemVIII: R_f = 0,55 DC-System IX: R, = 0,24

Beispiel 8 N-tert.-Butoxycarbonyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-(2S-methyl)butylamid

Die Titelverbindung wird analog Beispiel 3 durch Propanphosphonsäureanhydridkupplung von 4,8g (15,2 mmol) N-tert,-Butoxvcarbonyl^S-amino-SS-hydroxy-ö-cyclohexylpentansäurelJ.Bogeretal^J. Med.Chem. 28,1779 (1985)1 und 1,9ml (16,7 mmol) (2-S-Methyl)butylamin erhalten.

Ausbeute: 5,4g (92,4%der Theorie)

DC-SystemlV: R₁= 0,72 HPLC-System II: R₁ = 13,51 Min.

(+JFAB-MS: m/z 385 (M + H); m/z 391 (M + Li)

Beispiel 9 4S-Amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-(2S-methyl)-butylamidHydrochlorid

HCl

Die Titelverbindung wird analog Beispiel 4 durch Abspaltung der Boc-Schutzgruppe aus 5,4g (14mrnol) der Verbindung aus Beispiel 8 erhalten.

Ausbeute: 5g (> 100%derTheorie, HCI-hältig)

DC-Systemlll: R₍ = 0,26 (+) FAB-MS: m/z285(M + H)

Seispiel 10 N-Phthaloyl-2-R,S-amino-2-[2-(1,3-dithiano)]essigsäureethylester

*R,S

Die Titelverbindung wird nach der in der Lite ratur für die entsprechende Dithiolanoverbindung beschriebenen Weise (M. P. Mertes, A.A. Ramsey, J. Med. Chem. 12,342 (1969)] ausgehend von 77,8g (0,3mo!) a-Phthalimidomalonaldehydethylester und 90ml (0,9mol) 1,3-Dimercaptopropan dargestellt. Das Rohprodukt wird durch Kieselgelchromatographie mit Dichlormethan als Eluens gereinigt.

Ausbeute: 74g(70%derTheorie)

DC-Systemll: R₍ = 0,89

DC-SystemXI: R, = 0,44

MS < HPLC-System II: R₁ = 6,63 min HPLC-DCI: m/z352(M + H), m/z 204; m/z

¹H-NMR(250MHz,DMSO): δ = 7,92 (m,4H); 5,25 (d, 1 H); 4,62 (d, 1 H); 4,15 (q, 2H); 3,03 (m, 1 H); 2,72 (m, 2H);

2,57 (m, 1 H); 1,95 (m, 1 H); 1,78 (m, 1 H); 1,14 (t, 3H).

Beispiel 11 2-R,S-Amino-2-(2-(1,3-dithiano)]essigsäureethylester

R,S

Die Titelverbindung wird nach der in der Literatur für die entsprechende Dithiolanverbindung beschriebenen Weise (M. P.

Mertes, A.A. Ramsey, J. Med. Chem. 12,342 (1969)] ausgehend von 74g (0,21 mol) der Verbindung aus Beispiel 10 und 17 ml (0,35mol) Hydrazinhydrat hergestellt.

Ausbeute: 30g (64%der Theorie)

DC-Systemll: Ri = 0,80

{+)FAB-MS: m/z222(M + H);m/z228(M + Li);m/z244(M + Na).

¹H-NMR(250MHz,DMSO): δ = 4,10(m, 3H); 3,65 (d, 1 H); 2,80 (m,4H); 1,92 (m, 3H); 1,78 (m, 1 H); 1,18 (t, 3H).

Beispiel 12 2-R,S-Amino-2-[2-(1,3-dithiano)]essigsgure

₂₂ * R,S

Die Titelverbindung wird nach der in der Literatur für die entsprechende Dithiolanverbindung beschriebenen Waise (M. P. Mertes, A.A. Ramsey, J. Med. Chem. 12,342 (1969)) durch Kochen der Verbindung aus Beispiel 11 in Ethanol/KOH dargestellt. DC-Systemlll: R₁ = 0,05 DC-System V: R₍ = 0,35

Beispiel 13 N-tert.-Butoxycarbonyl-2-R,S-amino-2-(2-("i,3-dithiano)]essigsäure

R₁S

Die Titelverbindung wird analog Beispiel 5 durch Umsetzung der Verbindung aus dem Beispiel 12 mit Di-tert.-Butylcarbonat erhalten.

DC-Systeml: R_f = 0,19 DC-Systemll: Ri = 0,12 DC-System IV: R| = 0,55 DC-SystemV: R₍ = 0,86

MS-DCI: m/z 294 (M + H); m/z 311 (M + NH₄); m/z

¹H-NMR(250MHz, DMSO): δ = 12,88 (breit, 1 H); 7,0 (d, 1 H); 4,44 (m, 1 H); 4,11 (d, 1 H); 2,90 (m, 2H);

2,70 (m, 2H); 1,80 (m, 2H); 1,38 (s, 9H).

Beispiel 14 N-Acetyl-2-R,S-amino-2-[2-(1,3-dithiano)]essigsäureethylester

₃₂₅ * R,S

20g (90,5mmol) der Verbindung aus Beispiel 11 werden in 400ml Dioxan gelöst, mit 10ml (69m:nol) Triethylamin und schließlich 7,7ml (81,3mrnol) Acetanhydrid versetzt. Die Mischung wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt, vom Dioxan

abgezogen und mit Ether/Bicarbonatlösung verrieben. Der Rückstand wird isoliert, erneut mit Diethylether verrieben, abgesaugtund getrocknet.

Ausbeute: 20,9g (87,8% der Theorie) DC-SystemlV: R₁ = 0,76 DC-SystemV: Ri = 0,89 HPLC-System II: R, = 1,78 Min.

MS-DCI: m/z264(M + H)

Beispiel 15 N-Acetyt-2-R,S-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)]essigsäureethylester

*R,S

Die Titelverbindung wird analog Beispiel 14 ausgehend von 2-R,S-Amino-2-[2-(1,3-dithiolano)]essigsäureethylester [M. P. Mertes, A.A. Ramsey, J. Med. Chem. 12,342 (1969)] erhalten. DC-Systeml: R, = 0,75 DC-Systemll: R₁ = 0,67 HPLC-System II: R, = 1,73 Min.

MS-DCI: m/z250(M + H)

Beispiel 16 N-Ethoxycarbonyl-L-phenylalanyl-{2-R,S-amino-2-(2-(1,3-diathiano)]}essigsäureethylester

R,S

Die Titelverbindung wird analog Beispiel I durch Propanphosphonsäureanhydridkupplung der Verbindung aus Beispiel 11 (3g; 13mmol) und N-Ethoxycarbonyl-L-phenylalanin erhalten. Ausbeute: 5g (87,4%der Theorie)

CpirT? „ ρ !Sm- ) beideStereoisomere HPLC-System II: R_t = 4,58Min J

R_t (+IFAB-MS: m/z 441 (M + H);m/z463(M + Na)

Belsplol 17 N-Ethoxycarbonyl-L-phenylalanyl-{2-R,S-amino-2-I2-(1,3-dithiano))}essigsäure

EtOC-NH

Die Titelverbindung wird analog Beispiel X oder Beispiel Xl durch basische Verseifung der Verbindung aus Beispiel 16 (4 g; 9,1 mmol) und Standardaufarbeitung erhalten. Ausbeute: 3,7g (974 der Theorie)

DC-System IV: R, = 0,63 (Isomer A) Ri = 0,54 (Isomer B)

{+IFAB-MS: m/z413(M + H);m/z419(M + Li).

Herstellungsbeispiele (allgemeine Formeln I, I a, I b, Ic und I d)

Beispiel 18 N-tert.-Butoxycarbonyl-L-fS.S-diiodo^-methoxyJphenylalanin-methylester

Boc-NH'-^COOCHg

Boc-L-3,5-diiodotyrosin (1 ,Og, 1,87mmol; Bissendorf Biochemicals) wurde mit Methyljodid (352μΙ, 5,61 mmol) und Kaliumcarbonat (0,78g, 5,61 mmol) 3 Tage in 10ml DMF unter Feuchtigkeitsausschluß (Trockenrohr) gerührt. Nach dem Einengen wurde die Reaktionsmischung mit Wasser (150 ml) verdünnt und dreimal mit Ether (je 50 ml) extrahiert. Die vereinigte organische Phase wurde über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft. Ausbeute: 1,12g (> 100% derTheorie, enthält DMF)

DC-System IV: R₁ = 0,89

¹H-NMR (250MHz, DMSO): δ = 7,7 (s, 2H); 7,28 (d, 1 H); 4,15 (m, 1 H); 3,71 (s, 3H); 3,62 (s, 3H); 2,95 (dd, 1 H); 2,74 (dd, 1 H); 1,33 (s, 9 H).

Beispiel 19 N-tert.-Butoxycarbonyl-L-(3,5-diiodo-4-methoxy)-phenylalanine

Die Titelverbindung wird analog Beispiel X oder Beispiel Xl durch basische Verseifung aus der Verbindung des Beispiels (0,45g, 0,80mml) und Standardaufarbeitung erhalten. Ausbeute: 0,33 g (75% der Theorie)

DC-System IV: R₍ = 0,56 'H-NMR(250MHz, DMSO): δ = 12,65 (breit, I H); 7,71 (s, 2H); 7,09 (d, TH); 4,08 (m, 1 H); 3,70 (s, 3H); 2,96

(dd, 1 H); 2,69 (dd, 1 H); 1,32 (s, 9H).

Beispiel I

N-tert.-Butoxycarbonyl-2-R,S-amino-2 [2 (1,3·dϊthiolano))-acetyl·4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexyl·pentanoyl-L·isoleucin-(2-picolyDamid

4,4g (15,7 mmol) der Verbindung aus Beispiel 5 und 7,3g (15 mmol) der Verbindung aus Beispiel 4 werden mit 20ml Methylenchlorid und 18,3ml (105mmol) Diisopropylethylamin versetzt. Die Lösung wird gerührt und auf -20°C gekühlt (Trockeneis/Aceton). Man tropft bei dieser Temperatur 11,7ml einer 50%igen Lösung von Propanphosphorsäureanhydrid in Methylenchlorid (Hoechst AG) hinzu und läßt den Ansatz über Nacht auf Raumtemperatur kommen. Das Methylenchlorid wird am Rotationsverdampfer abgezogen und der Rückstand in Essigester aufgenommen. Die organische Phase wird je 3mal mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung, Pufferlösung pH 4 (Merck, Artikel-Nr. 9435) und gesättigter Kochsalzlösung ausgeschüttelt, über Natriumsulfat getrocknet, eingeengt und am Hochvakuum getrocknet. Ausbeute: 9g(79,8%derTheorie)

(+IFAB-MS: m/z680(M + H);m/z686(M + Li)

DC-Systemlll: R, = 0,59 DC-System IV: R, = 0,67 HPLC-Systemll: R, = 6,16 Min.

Beispiel II

2-R,S-Amino-2-(2-(1,3-dithiolano))-acetyl-4s-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexyl-pentanoyl-L-isoleucin-(2-picolyl)-amid Dihydrochlorid

HCl χ

R₁S

χ HCl

9g (13,24mmol) der Verbindung aus Beispiel I werden unter Eiskühlung mit 150ml 4N Salzsäure in Dioxan ver jetzt und 4 Stunden gerührt. Das Dioxan/Salzsäure-uemisch wird am Rotationsverdampfer abdestilliert. Das nach mehrmaliger Koevaporation mit Diethylether erhaltene Produkt wird abgesaugt, mit Diethylether nachgewaschen und im Exsikkator über Kaliumhydroxid getrocknet. Ausbeute: 8,6 g (100% der Theorie)

DC-Systemlll: R₍ = 0,38 (Isomer A) Ri = 0,33 (Isomer B) DC-System IV: R_f = 0,21 (+IFAB-MS: m/z580(M + H);m/z602(M + Na).

Beispiel III

N-tert.-Butoxycarbonyl-L-Phenylalanyl-{2-R,S-amino-2-I2-(1,3-dithiolano)]}-acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-isoleucin-(2-picolyl)amid

Boc -NH^^CO—NH^^CO-

5,7g (9mmol) der Verbindung aus Beispiel Il und 3,1g (11,7 mmol) N-tert.-Butoxycarbonyl-L-Phenylalanin werden mit 50ml Methylenchlorid und 11 ml (63 mmol) Diisopropylethylamin versetzt. Die Lösung wird gerührt und auf -20°C gekühlt (Trockeneis/Aceton). Man tropft bei dieser Temperatur 8,2ml (12,6 mmol) einer 50%igen Lösung von Propanphosphonsäureanhydrid in Methylenchlorid (Hoechst AG) hinzu und läßt den Ansatz über Nacht auf Raumtemperatur kommen. Man gibt 100ml Methylenchlorid hinzu und schüttelt 3mal mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung,3mal mit Pufferlösung pH 7 (Merck, Artikel-Nr. 9439) und einmal mit halbgesättigter Kochsalzlösung aus. Die organische Phase wird über Natriumsulfat getrocknet, eingeengt und am Hochvakuum getrocknet. Ausbeute: 7,2 g (96% der Theorie)

DC-Systeml: R₍ = 0,42 (Isomer A)

Ri= 0,38 (Isomer B) DC-Systemlll: Ri= 0,60(lsomerA)

R,= 0,56 (Isomer B) HPLC-Systemll: R,= 14,34 min (Isomer A)

R₁= 12,59 min (Isomer B) (+) FAB-MS: m/z827(M + H)

Beispiel IV und Beispiel V N-tert.-Butoxycarbonyl-L-phenylalanyl{2-S-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)l}-acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclo-hexylpentanoyl-L-isoleucin-(2-picolyl)amid (Beispiel IV) N-tert.-Butoxycarbonyl-L-phenylalanyl{2-R-amino-2-|2-(1,3-dithiolano)]}-acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-isoleucin-(2-picolyl)amid (Beispiel V)

Boc-NK

* S = Beispiel 9 (Isomer A) 'R = Beispiel 10 (Isomer 8)

7,2 g der Verbindung aus Beispiel III werden an Kieselgel 60 (Merck, Art.-Nr. 9385) 0,040-0,063 mm (230-400mesh) mit einem Stufengradienten aus Methylenchlorid/Methanol (100/0; 99/1; 98/2; 97/3; 95/5; 9/1) getrennt. Die Detektion erfolgt bei 214 nm,

die Fraktionskontrolle dünnschicht- und hochdruckflüssigkeitschromatographisch. Nach Vereinigung und Abrotieren der Lösemittel erhält man:

3,1 g der Verbindung aus Beispiel IV (Isomer AsS) 0,6 g der Verbindung aus Beispiel IV und Beispiel V (Mischfraktion aus A und B) 2,91 g der Verbindung aus Beispiel V (Isomer BsR)

Analytische Daten Isomer A (Beispiel IV) DC-Systemlll: R₁= 0,60 HPLC-Systemll: R₁= 14,34min (+JFAB-MS: m/z827(M + H)

Analytische Daten Isomer B (Beispiel V) DC-Systemlll: Rf= 0,56 HPLC-Systemll: R₁= 12,59min (+) FAB-MS: m/z827(M + H)

Beispiel Vl

N-tert.-Butoxycarbonyl-2-R,S-amino-2-I2-(1,3-dithiolano)l-acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-leucinethylester

0-NHy^COOC₂H₅

Die Titelverbindung wird analog Beispiel I durch Propanphosphonsäureanhydridkopplung aus4g (14,3mmol) derVerbindung aus Beispiel 5 und 4,6g (13mmol) derVerbindung aus Beispiel 7 erhalten. Das Rohprodukt (8,6g) wird mit einem Stufengradienten aus Methylenchlorid/Methanol (100/0; 98/2; 95/5) über 400g Kieselgel 60 (Merck, Artikel-Nr. 9385; 0,040-0,063 mm) filtriert. Die produktenthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingeengt.

Ausbeute: 5,7 g (66% der Theorie)

DC-SystemlV: R₍ = 0,85 HPLC-Systemll: R₁ = 17,91 min

(+)FAB-MS: m/z618(M + H);m/z640(M + Na)

Beispiel VII 2-R,S-Amino-2-[2-(1,3-dithiolano)l-acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-leucinethylesterHydrochlorid

HCl χ

OH

Die Titelverbindung wird analog Beispiel Il durch Abspaltung der N-tert.-Butoxycarbonylschutzgruppe aus 5,3g (8,6mmol) der Verbindung aus Beispiel Vl erhalten. Ausbeute: 4,7g(85%derTheorie)

DC-System III: R₍ = 0,71 (Isomer A) Ri = 0,64 (Isomer B) (+JFAB-MS: m/z518 (M + H); m/z 540(M + Na)

Beispiel VIII

N-tert.-Butoxycarbonyl-L-phenylalanyl-{2-R,S-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)]}-acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-leucinethylester

R₁S

Die Titelverbindung wird analog Beispiel III durch Propanphosphonsäureanhydrid-Kopplung aus 1,7 g (6,6mmol) N-tert. Butoxycarbonyl-L-phenylalanin und 2,8g (5mmol) der Verbindung aus Beispiel VII erhalten.

Ausbeute: 3 g (78% der Theorie)

DC-Systeml: R,= 0,65 (Isomer A)

Ri= 0,57 (Isomer B) HPLC-Systemll: R, = 35,58 min (Isomer A)

R₁ = 31,64 min (Isomer B) (+JFAB-MS: m/z765(M + H);m/z787(M + Na)

Beispiel IX

N-Ethoxycarbonyl-L-phenylalanyl-(2-R,S-amino-2-I2-(1,3-dithiolano)]}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexyl-pentanoyl-L-leucinethylester

R,S

Die Titelverbindung wird analog Beispiel III aus 1,6g (6,6mmo!) N-Ethoxycarbonyl-L-Phenylalanin und 2,8g (5mmol) der Verbindung aus Beispiel VII erhalten. Ausbeute: 2,3 g (62% der Theorie)

DC-Systeml: H₁ = 0,60 (beide Isomere A + B)

HPLC-Systemll: R, = 18,66 (Isomer A) R₁= 15,31 (Isomer B) (+IFAB-MS: m/z 737 (M + H); m/z 759(M + Na)

Beispiel X

N-tert.-Butoxycarbonyl-L-phenylalanyl-{2-R,S-amino-2-[2-(1,3-dithiolano))}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-leucin

3g (3,9 mmol) der Verbindung aus Beispiel VIII werden bei Raumtemperatur in 30 ml Dioxan gelöst und mit 4,3 ml einer wäßrigen 1N Natriumhydroxid-Lösung versetzt. Der Ansatz wird 2 Tage bei Raumtemperatur gerührt und dann mit 1 N wäßriger Salzsäure sauer gestellt. Das organische Lösemittel wird am Rotationsverdampfer abgezogen, der Rückstand wird abfiltriert, in Wasser/ Acetonitril 95/5 resuspendiert, eingefroren und lyophilisiert.

Ausbeute: 2,9 g (90% der Theorie)

(+JFAB-MS: m/z803(M + 2Na-H); m/z819(M + Na + K - H).

Beispiel Xl

N-Ethoxycarbonyl-L-phenylalanyl-{2-R,S-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)]}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexyl-phenanoyl-L-leucin

-ΝΗ·

Die Titelverbindung wird analog Beispiel X durch basische Verseifung von 2,3g (3,1 mmol) der Verbindung aus Beispiel IX erhalten.

Ausbeute: 2,5 g (87% der Theorie)

(+)FAB-MS: m/z775(M + 3Na - 2H);m/z791 (M + 2Na + K - 2H)

Beispiel XII und Beispiel XIII N-Ethoxy-carbonyl·L-phenylalanyl-{2-S·amino-2-[2-(1,3-dithiolano))}acetyl-4S-amino-3S·hydroxy-5·cyclohexyl·pθntanoyl-L-isoleucin-(2-picolyl)amid (Beispiel XII) N-Ethoxy-carbonyl-L-phenylalanyl-{2-R-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)]}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexyl-pentanoyl-L-isoleucin-(2-picolyl)amid (Beispiel XIII)

S = Beispiel XII (Isomer A) ' ' R = Beispiel XIII (Isomer B)

Die Titelverbindungen wurden durch chromatographische Trennung (analog Beispiel IV und Beispiel V) des analog Beispiel III aus N-Ethoxycarbonyl-L-phenylalanin und der Verbindung aus Beispiel Il synthetisierten Isomerengemisches erhalten. Zuerst eluiert das Beispiel XII (Isomer A, S-Isomer), dann das Beispiel XIII (Isomer B, R-Isomer).

Analytische Daten zu Beispiel XII (Isomer A)

DC-Systemlll: R_f = 0,51 HPLC-System II: R₁= 7,35 min

(+JFAB-MS: m/z 799 (M + H); m/z 821 (M + Na)

Analytische Daten zu Beispiel XIII (Isomer B)

DC-System III: R₁ = 0,47 HPLC-System II: R₁ = 5,81 min

(+JFAB-MS: m/z 799(M + H); m/z821 (M + Na)

Beispiel XIV und Beispiel XV

N-tert.-Buto\/carbonyl-L-(1-Naphthyl)analyl-{2-S,-amino-2-[2-(1,3-dithiolano))}acetyi-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-isoleucin-(2-picolyl)amid (Beispiel XIV) N-tert.-Butoxycarbonyl-L-(1-Naphthyl)alanyl-{2-R-amino-2-l2-(1,3-dithiolano)]}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-isoleucin-(2-picolyl)amid (Beispiel XV)

• S = Beispiel XIV (Isomer A)

* R = Beispiel XV (Isomer B)

Die Titelverbindungen wurden durch chromatographische Trennng (analog Beispiel IV und Beispiel V) des analog Beispiel III aus N-tert.-Butoxycarbonyl-L-(1 -Naphthyll-alanin und der Verbindung aus Beispiel Il synthetisierten Isomerengemisches erhalten. Zuerst eluiert das Beispiel XIV (Isomer A, S'-Isomer), dann das Beispiel XV (Isomer B, R-Isomer).

Analytische Daten zu Beispiel XIV (isomer A)

DC-Systeml: R₁= 0,59

HPLC-System II: R₁ = 24,34min '

(+) FAB-MS: m/z 877 (M + H); m/z 899 (M + Na)

Analytische Daten zu Beispiel XV (Isomer B)

DC-Systeml: R,= 0,55

HPLC-System II: R, = 20,49 min

(+JFAB-MS: m/z877(M + H);m/z899(M + Na)

Beispiel XVI und Beispiel XVII N-tert.-Butoxycarbonyl-L-(4-Methoxy)phenylalanyl-{2-S-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)]}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-isoleucin-(2-picolyl)amid (Beispiel XVI) N-tert.-Butoxycarbonyl-L-(4-Methoxy)phenylalanyl-{2-R-amino-2-[2-(1,3-dithiolano))}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-isoleucin-(2-picolyl)amid (Beispiel XVII)

OCH 3

S = Be)SpIeIXVKiSOmSrA¹ R = Beispiel XVII (Isorrv, B)

Die Titelverbindungen werden durch chromatographische Trennung (analog Beispiel Vl und Beispiel V) des analog Beispiel III aus N-tert.-Butoxycarbonyl-L-(4-Methoxy)-phenylalanin und der Verbindung aus Beispiel Il synthetisierten Isomerengemisches erhalten. Zuerst eluiert das Beispiel XVI (Isomer A, S-Isomer), dann das Beispiel XVII (Isomer B, R-Isomer).

Analytische Daten zu Beispiel XVI (Isomer A)

DC-Sy stem I: R₍ = 0,59

HPLC-System II: R, = 11,77 min

(+) FAB-MS: m/z 857 (M + H); m/z 879 (M + Na)

Analytische Daten zu Beispiel XVII (Isomer B)

DC-Systeml: R₁= 0,56

HPLC-System II: R₁= 10,49min

(+JFAB-MS: m/z857(M + H);m/z879(M + Na)

Beispiel XVIII N-tert.-Butoxycarbonyl-2-R,S-amino-2-|2-(1,3-dithiolano)]-acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentansäuremethylester

Boc -

*R,S

Die Titelverbindung wird analog Beispiel I durch Propanphosphonsäureanhydridkopplung aus 2,2 g (7,8mmol) der Verbindung aus Beispiel 5 und 2,4g (6,5mmol) 4-S-Amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentansäuremethylester Hydrochlorid [erhältlich durch Veresterung der 4S-Amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentansäure (J. Boger et al., J. Med. Chem. 28,1779 (1985) bzw. P. F. Schuda et al., J. Org. Chem. 1988,53,873-875) mit Diazomethan und Fällung als Hydrochlorid) und nachfolgender Kieselgelchromatographie rein erhalten

Ausbeute: 3,6 g (88% der Theorie)

I: }

(+IFAB-MS: m/z497(M + Li); m/z441; m/z397

Beispiel XIX 2-R,S-Amino-2-I2-(1,3-dithiolano)]-acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentansäuremethylester Hydrochlorid

HCl χ

Die Titelverbindung wird analog Beispiel Il durch Abspaltung der Boc-Schutzgruppe aus 3,5g (7,1 mmol) der Verbindung aus Beispiel XVIII erhalten

Ausbeute: 3,0 g (100% der Theorie)

DC-Systemlll: R₍ = 0,40 (Isomer A) Rl = 0,34 (Isomer B) (+) FAB-MS: m/z391 (M + H);m/z397(M + Li)

Beispiel XX und Beispiel XXI

N-Ethoxycarbonyl-L-phenylalanyl-{2-S-amino-[2-(1,3-dithiolano)]}-acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentansäuremethylester (Beispiel XX)

N-Ethoxycarbonyl-L-phenylalanyl-{2-R-amino-[2-(1,3-dithiolano))}-acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentansäuremethylester (Beispiel XXI)

S = Baispiel XX (Isomer A) R = Beispiel XKI (Isomer B)

Die Titelverbindungen werden durch chromatographischc Trennung (analog Beispiel IV und Beispiel V) des analog Beispiel III aus 1,3g (5,5mmol) N-Ethoxycarbonyl-L-phenylalanin und 1,8g (4,6mmol) der Verbindung aus Beispiel XIX erhaltenen Isomerengemisches erhalten. Zuerst eluiert das Beispiel XX (Isomer A, S-Isomer), dann das Beispiel XXI (Isomer B, R-Isomer).

Analytische Daten Isomer A (Beispiel XX):

DC-Systeml: R₁ = 0,90

HPLC-System II: R, = 7,64 min

(+) FAB-MS: m/z 616 (M + Li); m/z 632 (M + Na)

Analytische Daten Isomer B (3elspiel XXI)

DC-Systeml: R, = 0,86

HPLC-System II: R₁ = 6,63min

(+)FAB-MS: m/z616(M + Li);m/z632(M + Na)

Beispiel XXII und Beispiel XXIII

N-tert.-Butoxycarbonyl-L-(4-methoxy)phenylalanyl-{2-S-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)|}-acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentansäuremethylester (Beispiel XXII)

N-tert.-Butoxycarbonyl-L-(4-methoxy)phenylalanyl-(2-R-amino-2-[2-(1,3-dithlolano))}-acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentamäuremethyloster (Beispiel XXII)

Boc-N

* S = Beispiel XXII (Isomer A)

• R = Beispiel XXIII (Isomer B)

Die Titelverbindungen werden analog Beispiel XX und Beispiel XXI ausgehend von 1,9g (6,3mmol) N-tert.-Butoxycarbonyl-L-(4-mothoxylphenylalanin und 2,4g (5,7 mmol) der Verbindung aus Beispiel XIX erhalten.

Analytische Daten Isomer A (Beispiel XXII) DC-Systemll: Rf= 0,58 HPLC-System II: R₁ = 12,33min (+) FAB-MS: m/z668(M + H)

Analytische Daten Isomer B (Beispiel XXIII) DC-Systemll: R₍ = 0,56 HPLC-System II: R, = 11,25 min (+JFAB-MS: m/z668(M + H)

Beispiel XXiV

N-Ethoxycarbonyl-L-phenylalanyl-{-2-R,S-amino-2-(2-(1,3-dithiolano)|}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentansäure

460mg (0,754mmol) eines Gemisches der Verbindungen aus Beispiel XX und Beispiel XXI werden in 20ml Dioxan/Wasser 1/1 gelöst, mit 180μΙ (1,4eq) 6N NaOH versetzt und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Der Ansatz wird mit 1 N HCI auf pH3 gestellt und vom Dioxan abrotiert. Der Niederschlag wird abgesaugt, mit wenig Wasser gewaschen und über KOH im Exsiccator getrocknet.

Ausbeute: 330mg (73,5%derTheorie)

DC-Systeml: R₁ = 0,34

DC-System IV: R₍ = 0,74

(+)FAB-MS: m/z634 (M + K); m/z672 (M + 2K - H).

Beispiel XXV

N-tert.-Butoxycarbonyl-L-(4-methoxy)phenylalanyl-(2-R,S-amino-2-[2-(1,3-dithiolano))}acetyl-4S-amino-3S-hydroxyi-cyclohexylpentansäure

Boc-N

Die Titelverbindung wird analog Beispiel XXIV aus 790mg (1,18mmol) eines Gemisches aus den Verbindungen aus Beispiel XXII und Beispiel XXIII erhalten.

Ausbeute: 560 mg (73% der Theorie)

DC-Systeml: R₁ = 0,18

DC-Systemlll: R, = 0,05 DC-SystemlV: R, = 0,82

(+IFAB-MS: m/z 660 (M + Li); m/z 676 (M + Na).

Beispiel XXVI N-tert.-Butoxycarbonyl-2-R,S-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)l-acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexyl-pentanoyl-(2S-methyl)butylamid

Die Titelverbindung wird analog Beispiel I durch Propanphosphonsäureanhydridkopplung aus 3,8g (12mmol) der Verbindung aus Beispiel 9 und 4g (14,4mmol) der Verbindung aus Beispiel 5 erhalten. Ausbeute: 5,5 g (82,5 % der Theorie)

DC-Systeml: Ri= 0,52 \ . . . ....

..„.'. . „ ' ,_' „ . ( somere nicht unterscheidbar

HPLC-Systemll: R,= 13,38min J

(+JFAB-MS: m/z 545 (M + H); m/z 552 (M + Li); m/z 564 (M + Na)

Beispiel XXVII 2-R,S-Amino-2-(2-(1,3-dithiolano)]-acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentarioyl-(2S-methyl)-butylamidHydrochlorid

HCl χ

*R,S

OH

Die Titelverbindung wird analog Beispiel Il durch Abspaltung der Boc-Schutzgruppe aus 5,4g (9,9mmol) der Verbindung aus Beispiel XXVI erhalten. Ausbeute: 4,2 g (95% der Theorie)

DC-System III: R, = 0,41 (Isomer A) R, = 0,35 (Isomer B)

Beispiel XXVIII und Beispiel XXIX

N-Ethoxy-carbonyl-L-phenylalanyl-{2-S-amino-2-[2-(1,3-dithiotano)]}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cvclohexvlpentanoyl· (2S-methyl)-butylamid (Beispiel XXVIII) N-Ethoxy-carbonyl-L-phenylalanyl-{2-R-amino-2-(2-(1,3-dithiolano)l}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-(2S-methyl)-butylamid (Beispiel XXIX)

• S = Beispiel (XXVlIl) (Isomer A)

• R = Beispiel (XXIX) (Isomer B)

Die Titelverbindungen wurden durch chromatographische Trennung (analog Beispiel IV und Beispiel V) des analog Beispiel I aus 2,1 g (4,7rtimol) derVerbindung aus Beispiel XXVII und 1,3g (5,5mmol) N-Ethoxycarbonyl-L-phenylalanin erhaltenen Isomerengemisches erhalten. Zuerst eluiert das Beispiel XXVIII (Isomer A, S-Isomer), dann das Beispiel XXIX (Isomer B, R-Isomer). Außerdem wird eine Mischfraktion aus Beispiel XXVIII und Beispiel XXIX erhalten.

Analytische Daten Isomer A (Beispiel XXVIII)

DC-System I: R₁= 0,68

HPlC-Systemll: R, = 13,27 min

(+)FA8-MS: m/z 671 (M + Li); m/z 687 (M + Na).

Analytische Daten Isomer B (Beispiel XXIX) DC-Systeml: R₁= 0,65 HPLC-Systemll: R, = 11,61 min

(+IFAB-MS: m/z 671 (M + Li); m/z 687 (M + Na).

Beispiel XXX und Beispiel XXXI

N-tert.-Butoxycarbonyl-L-(4-methoxy)phenylalanyl-{2-S-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)]}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-

5-cyclohexylpentanoyl-(2S-methyl)butylamid (Beispiel XXX)

N-tert.-Butoxycarbonyl-L-(4-methoxy)phenylalanyl-{2-R-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)]}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-

5-cyclohexylpentanoyl-(2S-methyl)butylamid (Beispiel XXXI)

Boc-N

• S = Beispiel XXX (Isomer A)

* R = Beispiel XXXI (Isomer B)

Die Titelverbindungen werden analog Beispiel XXVIII und Beispiel XXIX ausgehend von derVerbindung aus Beispiel XXVII und N-tert.-Butoxycarbonyl-L-(4-methoxy)phenylalanin erhalten. Es tritt ebenfalls eine große Mischfraktion auf.

Analytische Daten Beispiel XXX DC-Systemll: R₍ = 0,38 HPLC-Systemll: R, = 13,63 min (+)FAB-MS: m/z729(M

Analytische Daten Beispiel XXXI DC-Systemll: R₁= 0,34 HPLC-Systemll: R₁= 11,91min (+JFAB-MS: m/z 729 (M + Li)

Beispiel XXXII und Beispiel XXXIII

N-Ethoxycarbonyl-L-(4-methoxy)phenylalanyl-{2-S-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)]}acetyl-4S-amiiio-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-isoleucin-(2-picolyl)amid (Beispiel XXXII)

N-Ethoxycarbonyl-L-(4-methoxy' henylalanyl-{2-R-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)l}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-

5-cyclohexylpentanoyl-L-isoleucin-(2-picolyl)amid (Beispiel XXXIIt)

CONH-^NZONH

* 4

' "S = Beispiel XXXII (Isomer A) • R = Bslspiel XXXIII (Isomer B)

Die Titelverbindungen v/erden durch chromatographische Trennung (analog Beispiel IV und Beispiel V) des analog Beispiel III aus N-Ethoxycarbonyl-L-(4-methoxy)-phenylalanin und der Verbindung aus Beispiel Il synthetisierten Isomerengemisches erhalten. Zuerst eluiert das Beispiel XXXII (Isomer A, S-Isomer), dann das Beispiel XXXIII (Isomer B, R-Isomor).

Analytische Daten Isomer A (Beispiel XXXII) DC-Systemlll: R₁ = 0,72 DC-SystemlV: R₍ = 0,79 HPLC-System II: R₁ = 7,62 min

(+)FAB-MS: m/z829(M + H);m/z851 (M +Na).

Analytische Daten Isomer B (Beispiel XXXIII) DC-Systemlll: R₁ = 0,69 DC-SystemlV: R, = 0,73 HPLC-System II: R, = 6,10 min

(+IFAB-MS: m/z 829 (M + H); m/z 851 (M + Na).

Beispiel XXXIV

L-Phenylalanyl-{2-R,S-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)|}-acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-isoleucin-(2-picolyl)amid Dihydrochlorid

HCl X NH₂

C ONH

Die Titelverbindung wird analog Beispiel Il durch Abspaltung der Boc-Schutzgruppe aus der Verbindung des Beispiels III bzw. eines Gemisches der Verbindungen aus Beispiel IV und Beispiel V erhalten.

Analytische Daten:

DC-System IV: R₁ = 0,43 (Isomer A, S-Isomer) Ri = 0,40 (Isomer B, R-Isomer)

Beispiel XXXV

N-tert.-Butoxycarbonyl-L-servl-L-phenylalanyl-{2-R,S-amino-2-[2-(l,3-dithiolano))}-acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-isoleucin-(2-picoly Hamid

X)

XOH I

CONhT CONH^NZONH

R,S

Die Titelverbindung wird analog Beispiel III aus N-tert.-Butoxycarbonyl-L-Serin und der Verbindung aus Beispiel XXXIV erhalten.

Analytische Daten:

DC-Systemll: R₍ = 0,16(lsomerA)

R₁ = 0,14 (Isomer B) HPLC-System Il: R, ~ 5,04 (Isomer B)

R,= 5,70 (Isomer A) (+IFAB-MS: m/z 914 (M+ H); m/z 936 (M+ Na).

Beispiel XXXVI

N-lS-tö-Pyridyllpropionyll-L-phenylalanyl-^-R-amino^-U-U.S-dithiolanolO-acetyl^S-amino-SS-hydroxy-5-cyclohexylpontanoyl-L-isoleucin-(2-pico1yl)amid

HK CONH

2 1

Die Titelverbindung wird analog Beispiel XXXV durch Propanphosphonsäureanhydridkupplung von 3-(3-Pyridyl)-propionsäure mit dem durch Abspaltung der Boc-Schutzyruppe analog Beispiel XXXIV aus der R-Verbindung des Beispiels V zugänglichen Dihydrochlorids erhalten.

Analytische Daten:

DC-Systemlll: R₁ = 0,47

HPLC-Systemll: R₁ = 6,36min

{+1FAB-MS: m/z8,60(M + H);m/z882(M + Na)

Beispiel XXXVII

N-tert.-Butoxycarbonyl-L-phenylalanyl-{2-R,S-amino-2-l2-(1,3-dithiolano)l}-acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-S-cyclohexylpentanoyl-L-leucinmethyfester

Die Titelverbindung wird analog Beispiel VIII erhalten, wobei zur Synthese der entsprechenden Verbindungen der Beispiele 6,7, Vl und VII der L-Leucinmothyl- statt des Ethylesters verwendet wird.

Analytische Daten:

DC-Systeml: R₍ = 0,85 (Isomer A, S-Isomer) R( = 0,78 (Isomer B, R-Isomer) (+JFAB-MS: m/z751 (M + H); m/z773(M + Na); ni/zCül.

Beispiel XXXViII

N-Ethoxycarbonyl-L-pKenylalanyl-{2-R,S-amino-2l2-(1,3-dithiolano)]}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-Ieucinmethylester

Die Titelverbindung wird analog Beispiel XXXI erhalten, wobei zur Synthese der entsprechenden Ausgangsverbindungen der Beispiele 6,7, Vl und VII der L-Leucinmethyl- statt des Ethylesters verwendet wird.

Analytische Daten:

DC-Systeml: Rf = 0,81 (Isomer A, S-Isomer)

Ri= 0,73 (Isomer B, R-Isomer) HPLC-Systemll: R, = 11,66min(lsomerB)

Ri= 14,08 min (Isomer A) (+IFAB-MS: m/z 723 (M + H); m/z 745 (M + Na).

Beispiel XXXIX und Beispiel XL N-tert.-Butoxycarbonyl-L-phenv!alanyl-{2-S-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)]}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-leucin-(3-aminomethyl)benzylamid (Beispiel XXXIX)

N-tert.-Butoxycarbonyl-L-phenylalanyl-{2-R-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)])acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-leucin-O-aminomethyDbenzylamid (Beispiel XL)

Boc-N

CONH^^CONH

CONH

• S = Beispiel XXXIX (Isomer A)

• R = Beispiel XL (Isomer B)

0,95g (1,29mmol) der Verbindung aus Beispiel X und 2,50ml (19,35mmol) 1,3-Bisaminomethylbenzol werden in 30ml CH₂CI₂ gelöst. Der Ansatz wird auf -20°C gekühlt υηΊ mit 1,1 ml einer 50%igen Lösung von n-Propylphosphonsäureanhydrid in CH₂CI₂ (Hoechst AG) versetzt. Die Mischung wird üb ' icht bei Raumtemperatur gerührt, mit 300 ml Diethylether versetzt und abgesaugt. Der Rückstand wird nochmals mit 300ml Diethylether verrührt, abgesaugt und getrocknet. Das Rohprodukt (1,86g) wird an 300g Kieselgel 60 (Merck, Art.-Nr. 9385) 0,040-0,063mm (230-400mesh) mit einem Stufengradienten aus Methylenchlorid/Methanol/wäßriger NH₃-Lösurig (25%) 100/0/0; 99/1/0,2; 98/2/0,2; 97/3/0,2 und 95/5/0,2 (je 0,5I) getrennt. Zuerst eluiert das Beispiel XXXIX (Isomer A, S-Isomer), dann das Beispiel XL (Isomer B, R-Isomer).

Analytische Daten Isomer A (Beispiel XXXIX) DC-Systemlll: R₍ = 0,32 HPLC-System II: keine Elution bzw. sehr breiter Peak (+)FAB-MS: m/z855(M + H);m/z755

Analytische Daten Isomer B (Beispiel XL) DC-Systemlll: R| = 0,29 HPLC-System II: keine Elution bzw. sehr breiter Peak (+)FAB-MS: m/z 855 (M + H); m/z 7Ö5

Beispiel XLI und Beispiel XLII N-Ethoxycarbonyl-L-phenylalanyl-{2-S-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)]}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-leucin-O-aminomethyD-bouzylamid (Beispiel XLI)

N-Ethoxycarbonyl-L-phenylalanyl-{2-R-amino-2-[2-(1,3-dithiolano))}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-leucin-ß-aminomethyO-benzylamid (Beispiel XLII)

ONH

• S = Beispiel XLI (Isomer A) ' R = Beispiel XLII (Isomer B)

DieTitelverbindungenwerden analog Beispiel XXXIX und Beispiel XL ausgehend von der Verbindung aus Beispiel Xl erhalten.

Analytische Daten Isomer A (Beispiel XLI) DC-Systemlll: R₍ = 0,26 HPLC-System Il: R, - 126 min

(+IFAB-MS: m/z 827 (M + H); m/z 849 (M + Na).

Analytische Daten Isomer B (Beispiel XLII) DC-Systemlll: R, = 0,23 HPLC-System II: R, = 106 min

(+IFAB-MS: m/z 827 (M + H); m/z 849 (M + Na)

Beispiel XLIII und Beispiel XLIV N-Ethoxycarbonyl-L-phenylalanyl-{2-S-anino-2Ii!-(1,3-dithiolano)]}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-isoleucinol (Beispiel XLIII) NrEthoxycarbonyi-L-phenylalanyl-{2-R-amino-2-[2-(1,3-dithiolano))}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-isoleucinol (Beispiel XLIV)

• · S = Isomer A (Beispiel XLIII) • R = Isomer B (Beispiel XLIV)

Die Titelverbindungen werden analog Beispiel 3 oder Beispiel I durch n-Propanphosphonsäureanhydridkopplung der Verbindung aus Beispiel XXIV mit L-Isoleucinol Hydrochlorid als Aminkomponente erhalten. Die Reindarstellung der Stereoisomeren erfolgt durch Kieselgelchromatographie (analog Beispiel IV und V) bzw. wahlweise auch durch reversed-Phase HPLC an C₈-P'iasen (Säule z.B. Merck Hibar, Cat.-Nr. 51441, LiChrosorb, RP-8 (7pm). Größe 250-25) mit Acetonitril/Wasser-Ge aischen. Pi iduktenthaltende Fraktionen der Kieselgelchromatographie werden vereinigt und einrotiert, bzw. bei der reversed-Phase Chromatographie vom Acetonitril abrotiert und lyophillsiert.

Analytische Daten Isomer A (S-Isomer, Beispiel XUII):

DC-System I: R₁ = 0,54 DC-System II: R₁ = 0,44 DC-System IV: R, = 0,64 HPLC-System: R₁ = 7,10min

(+)FAB-MS: m/z 695 (M + H); m/z 717 (M + Na)

Analytische Daten Isomer B (R-Isomer, Beispiel XLIV):

DC-System I: R, = 0,54

DC-System II: R_f = 0,42 DC-System IV: R, = 0,64 HPLC-System II: R, = 5,71 min

(+IFAB-MS: m/z 695 (M + H); m/z 717 (M + Na)

Beispiel XLV und Beispiel XLVI

N-Eihoxycarbonyl-L-phenylalanyl-^-S-amino^-^-li.S-dithiolsnolOacetyl^S-amino^S-hydroxy-S-cyclohexylpentanoyl-L-isoleucin-isopropylester (Beispiel XLV)

N-Ethoxycarbonl-L-phenylalanyl-{2-R-amino-2-(2-(1,3dithiolano)l}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-isoleucin-isopropylester (Beispiel XLVI)

EtOC

< S = Isomer A (Beispiel XLV) • R = Isomer B (Beispiel XLVI)

Die Titelverbindungen werden analog Beispiel 3 oder I durch n-Propanphosphonsäureanhydridkopplung der Verbindung aus Beispiel XXIV mit L-lsoleucin-isopropylesier Hydrochlorid als Aminkomponente hergestellt. Die Reindarstellung der Stereoisomeren erfolgt durch Chromatographie (wie in Beispiel XLIII und XLIV beschrieben).

Analytische Daten Isomer A (S-Isomer, Beispiel XLV):

DC-System I: R₍ = 0,68 DC-System II: R, = 0,57 HPLC-System II: R₁ = 27,61 min

(+)FAB-MS: m/z 751 (M + H); m/z 773(M + Na)

Analytische Daten Isomer B (R-Isomer, Beispiel XLVI):

DC-System I: R, = 0,68

DC-System II: R₁ = 0,57 HPLC-System II: R₁ - 22,51 min

(+IFAB-MS: m/z 751 (M + H); m/z 773 (M + Na)

Beispiel XLVII und Beispiel XLVIII

N-Ethoxycarbonyl-L-phenylalanyl-{2-S-amino-2-|2-(1,3-dithiolano))}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-isoleucin-L-valin-(2-picolyl)amid (Beispiel XLVII)

N Ethoxycarbΰnyl-L-phenylalanyl-{2-R-amino-2-[2 (1,3-dithiolano)]}acetyl·4S-amino-3S-hydroxy·5-cyclohexylpentanoyl·L· isoleucin-L-valin-(2-pico!yl)amid (Beispiel XLVIII)

• S = Isomer A (Beispiel XLVlI)

• R = Isomer B (Beispiel XLVIII)

Die Titeiverbindungen werden analog Beispiel 3 oder I durch n-Propanphosphonsäureanhydridkopplung der Verbindung aus Beispiel XXIV mit L-lsoleucyl-L-valin-(2-picolyl)amid Dihydrochlorid als Aminkomponente hergestellt. Die Redndarstellung der Stereoisomeren erfolgt durch Chromatographie (wie in Beispiel XLIII und XLIV beschrieben).

Analytische Daten Isomer A (S-Isomer, Beispiel XLVII): DC-Systeml: R₍ = 0,52 DC-System II: R₍ = 0,40 HPLC-Systemll: R, = 9,48 min (+IFAB-MS: m/z 898 (M+ H)

Analytische Daten Isomer A (R-Isomer, Beispiel XLVIII): DC-System I: R₁ = 0,52 DC-System II: R₍ = 0,40 HPLC-Systemll: R, = 8,0- min (+)FAB-MS: m/z898(M + H)

BeIf )l XLIX und Beispiel L

N-F ,oxycarbonyl-L-phenylalanyl-{2-S-amino-2-(2-(1,3-dithiolano)]}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentansäure-(2-methy!)propylamid (Beispiel XLIX)

N-Ethoxycarbonyl-L-phenylalarιyl-{2-R-amino-2-l2-(1,3-dithiolano))}acθtyl·4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpθntansäure-(2-methyDpropylamid (Beispiel L)

• S = Isomer A ι Beispiel XLlX) 'R = Isomer B (Beispiel L)

Die Titelverbindungen werden analog Beispiel 3 oder I durch n-Propanphosphonsäureanhydridkopplung der Verbindung aus Beispiel XXIV mit (2-Methyl)-propylamin als Aminkomponente hergestellt. Die Reindarstellung der Stereoisomeren erfolgt durch Chromatographie (wie in Beispiel XLIII und XLIV beschrieben).

Analytische Daten Isomer A (S-Isomer, Beispiel XLIX): DC-System I: R₍ = 0,66 HPLC-System II: R₁ = 8,84 min (+JFAB-MS: m/z 657 (M+ Li)

Analytische Daten Isomer B (R-Isomer, Beispiel L): DC-System I: R₍ = 0,66 HPLC-System II: R₁ = 7,74 min (+JFAB-MS: m/z 657 (M+ Li)

Beispiel LI

N-EthoxYcarbonyl-L-phenylalanyl-{2-R,S-amino-2-t2-(1,3-dithiolano)l}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexvlpentanoyl-L-

isoleucin-(2-picolyl)amid

*R,S

Die Titelverbindung wird analog Beispiel 3 oder I durch n-Propanphosphonsäureanhydridkopplung der Verbindung aus Beispiel 17 mit der Verbindung aus Beispiel 3 als Aminkomponente hergestellt.

Analytische Daten;

DC-SystemII: R₍ = 0,32 |. ,

nin J ''

beide Isomere ununterscheidbar

HPLC-System II: R₁ = 8,34 min

(+)FAB-MS: m/z 813 (M + H);m/z835(M + Na)

Beispiel LII und Beispiel Uli

N-tert.-Butoxycarbonyl-L-(4-methoxy)phenylalanyl-{2-S-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentansäure-(morpholin)amid (Beispiel LII)

N-tert.-Butoxycarbonyl-L-(4-methoxy)phenylalanyl-{2-R-amino-2-(2-(1,3-dithiolano)l}acetyl-4S-arpino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentansäure-lmorpholinlamid (Beispiel Uli)

Boc-N

• S = Isomer A (Beispiel Ul)

• R = Isomer B (Beispiel Uli)

Die Titelverbindungen werden analog Beispiel 3 oder I durch n-Propanphosphonsäureanhydridkopplung der Verbindung aus Beispiel XXV mit Morpholin als Aminkomponente hergestellt. Die Reindarstellung der Stereoisomeren erfolgt durch Chromatographie (wie in Beispiel XLIII und XLIV beschrieben).

Analytische Daten Isomer A (S-Isomer, Beispiel LII): DC-System II: R₁ = 0,39 HPLC-System II: R, = 7,78 min

(+IFAB-MS: m/z 723 (M + H); m/z 729 (M + Li); m/z = 745(M + Na)

Analytische Daten Isomer B (R-Isomer, Beispiel LIII): DC-System II: Ri = 0,36 HPLC-System II: R, = 7,07 min

(+IFAB-MS: m/z 723 (M + H); m/z 729 (M + Li); m/z 745 (M + Na)

Beispiel LIV und Beispiel LV

Ntert.-Butoxycarbonyl-L-(4-methoxy)phenylalanyl-{2-S-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)]}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentansäure-(4-methyl)butylamid (Beispiel LIV)

N-tert.-Butoxycarbonyl-L-(4-methoxy)phenylalanyl-{2-R-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)]}acetyl-4S-amino-3S-liydroxy-5-cyclohexylpentansäure-(4-methyl)butylamid (Beispiel LV)

'OCH

Boc-N

S = Isomer A (Beispiel UV) R = Isomer B (Beispiel LV)

Die Titelverbindungen werden analog Beispiel 3 oder I durch n-Propanphosphonsäureanhydridkopplung der Verbindung aus Beispiel XXV mit 3-Methylbutylamin als Aminkomponente hergestellt. Die Reindarstellung der Stereoisomeren erfolgt durch Chromatographie (wie in Beispiel XUII und XLIV beschrieben).

Analytische Daten Isomer A (S-Isomer, Beispiel LIV): DC-System II: R₍ = 0,38 HPLC-System II: R, = 21,14min (+)FAB-MS: m/z 729(M+ Li)

Analytische Daten Isomer B (R-Isomer, Beispiel LV): DC-System II: R_f = 0,35 HPLC-Systam II: R, = 21,14min (+)FAB-MS: m/z 729 (M + Li)

Beispiel LVI und Beispiel LVII N-tert.-Butoxycarbonyl-L-(4-methoxy)phenylaιanyl·{2·S·amino·2-I2·(1,3·dithiolano)])acetyl-4S·amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentansäure-n-hexylamid (Beispiel LVI) N-tert.-Butoxycarbonyl-L-(4-methoxy)phenylalanyl-{2-R-amino-2-[2-(1_l3-dithiolano))}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentansäure-n-hexylamid (Beispiel LVII)

Boc-N

• S = Isomer A (Beispiel LVI) 'R = Isomer B (Beispiel LVII)

Die Titelverbindungen werden analog Beispiel 3 oder I durch n-Propanphospho isäureanhydridkopplung der Verbindung aus Beispiel XXV mit n-Hexylamin-Hydrochlorid als Aminkomponente hergestellt. Die Reindarstellung der Stereoisomeren erfolgt durch Chromatographie (wie in Beispiel XLIII und XLlV beschrieben).

Analytische Daten Isomer A (S-Isomer, Beispiel LVI):

DC-System II: R₁ = 0/5 HPLC-System II: R, = 34,11 min

(+IFAB-MS: m/z 737 (M + H); m/z 743 (M + Li); m/z 759 (M + Na)

Analytische Daten Isomer B (R-Isomer, Bei'piel LVII):

DC-System II: R₁ = 0,41 HPLC-System II: R₁ = 34,11 min

(+)FAB-MS: m/z 737(M + H); m/z 743(M + Li); m/z 759(M + Na)

Beispiel LVIII und Beispiel LIX N-tert.-Butoxycarbonyl-L-(4-methoxy)phenylalanyl-{2-S-amino-2-I2-(1,3-dithiolano)l}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentansäure-(N-benzylpiperazin)amid (Beispiel LVIII) N-tert.-Butoxycarbonyl-L-(4-methoxy)phenylalanyl-{2-R-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)]}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentansäure-(N-benzylpiperazin)amid (Beispiel LIX)

Boc

AJ ΓΊ

I, s

-NrT CON

CONH'^CONH

* 4

'S = Isomer A (Beispiel LVIII) • R = Isomer B (Beispiel LIX)

Die Titelverbindungen werden analog Beispiel 3 oder I durch n-Ptopanphosphonsäureanhydridkopplung der Verbindung aus Beispiel XXV mit N-Benzylpiperazin als Aminkomponente hergestellt. Die Reindarstellung der Sterecisomeren erfolgt durch Chromatographie (wie in Beispiel XLIII und XLIV beschrieben).

Analytische Daten Isomer A (S-Isomer, Beispiel LVIII): DC-System II: Rf = 0,44 HPLC-System II: R, = 31,46mln (+JFAB-MS: m/z 818 (M + Li)

Analytische Daten isomer B (R-Isomer, Beispiel LIX): DC-System II: R₁- = 0,44 HPLC-System II: R₁ = 29,07 min (+)FAB_:MS: m/z818(M + Li)

Beispiel LX Methyl-2-R-amino-2-l2-(1,3-dithiolano)l-acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoate

Die Titelverbindung wird durch chromatographische Trennung der Isomerenmischung (freie Base) aus dem Beispiel XIX an Kieselgel mit einem Stufengradienten aus Methylenchlorid/Methanol/25%iger wäßriger Ammoniaklösung (wie in Beispiel XXXIX und XL beschrieben) erhalten. Zuerst eluiert das S-Isomere, dann das Beispiel LX (R-Isomeres).

Analytische Daten:

DC-System III: R₁ = 0,34

(+IFAB-MS: m/z 391 (M + H); m/z 397 (M + Li)

Beispiel LXI Methyl-N-tert.-butoxycarbonyl-2-R-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)]-acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoate

COOCH-

Die Titelverbindung wird analog Beispiel 5 durch Umsetzung der Verbindung aus dem Beispiel LX mit Di-tert.-butylcarbonat mit Triethylamin als Hilfsbase und Dioxan als Lösungsmittel (analog Beispiel 14) erhalten. Die Reaktionsmischung wird mit Wasser und 1 N Salzsäure verdünnt und mit Methylenchlorid extrahiert. Die organische Phase wird abgetrennt, über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Das Produkt wird durch Flash-Chromatographie (Kieselgel/Dichlo-methan) gereinigt.

Analytische Da'.en: DC-System IV: R, = 0,88 HPLC-System II: R₁= 7,06 min (+IFAB-MS: m/z 497 (M+ Li)

Beispiel LXII N-tert.-Butoxycarbonyl-2-R-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)]acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexyl-pentansäure

Boc -

Die Titelverbindung wird durch basische Verseifung analog Beispiel X oder Beispiel Xl aus 2,1 g (4,28 mmol) der Verbindung aus

dem Beispiel LXI und Standardaufarbeitung erhalten.

Ausbeute: 1,95g (95,6% derTheorie)

DC-System IV: R, = 0,57

(+)FAB-MS: m/z 477 (M + H); m/z 421; m/z

Beispiel LXIII N^ert.-Butoxycarbonyl^-R-amino^-tf-O.S-dithiolanoll-acetyl^S-amino-SS-hydroxy-S-cyclohexyl-pentanoyl-L-leucinol

Γ~Ι

Boc-NH'^CONH

ONH

Die Titelverbindung wird analog Beispiel 3 oder I durch Propanphosphonsäureanhydridkupplung der Verbindung aus Beispiel LXII und L-Leucinol-hydrochlorid als Aminkomponente erhalten. Das Produkt wird chromatographisch gereinigt (analog Beispiel IV und Beispiel V)

Analytische Daten des Beispiels LXIII: DC-Systom III: R₁ = 0,65 HPLC-System II: R₁= 6,58 min (+)FAB-MS: m/z 582 (M + Li)

Beispiel LXIV

N-tert.-Butoxycarbonyl-L-(4-methoxy)phenylalanyl-{2-R-amino-2-l2-(1,3-dithiolano)]}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-

cyclohexylpentanoyl-L-leucinol

OCH

0—NH-^-CONH

R 4

OH

Die Titelverbindung wird, ausgehend von der Verbindung des Beispiels LXIII, durch a) Entfernen der Boc-Schutzgruppe (analog Beispiel 4) und b) Umsetzung des erhaltenen Hydrochlorids mit Boc-L-(4-Methoxy)phenyl-alanin (analog Beispiel XVI und XVII) hergestellt. Das Produkt wird durch Chromatographie gereinigt.

Analytische Daten: DC-System IV: R₍ = 0,59 HPLC-System II: R, - 12,85 min (+IFAB-MS: m/z 759(M+ Li)

Beispiel LXV 2-R-Amino-|2-(1,3-dithiolano)-acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexyl-pentanoyl-L-isoleucine-(2-picolyl)amid

DiT Titelverbindung wird analog Beispiel LX, ausgehend vom R,S-Gemisch der Verbindung, aus dem Beispiel Il durch Chromatographie erhalten. Zuerst eluiert das S-, dann das R-Isomer (Beispiel LXV).

Analytische Daten:

DC-System III: R₁ = 0,33

(+IFAB-MS: m/z 580 (M + H); m/z 602 (M + Na)

Beispiel LXVI

L-(4-Methoxy)phenylalanyl-{2-R-amlno-2-[2-(1,3-dithiolano)Hacetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-isoleucine-(2-picolyl)amid-dihydrochlorid

OCH I

HCl *

Die Titelverbindung wird analog Beispiel XXXIV durch Abspaltung der Boc-Schutzgruppe aus der Verbindung des Beispiels XVII erhalten.

Analytische Daten: DC-Systemlll:Rf = 0,38

Beispiel LXVII L-(4-Methoxy))phenylalanyl-{2-R,S-amino-2-[2-(1,3-dithiolano)]}acetyl-4S-amino-3S-hydroxy-5-cyclohexylpentanoyl-L-isoleucine-(2-picolyl)amid-dihydrochlorid

OCH 3

HCl * NHo

*HC1

DieTitelverbindung wird analog Beispiel XXXIVdurch Abspaltung der Boc-Schutzgruppe aus einer Mischung der Verbindungen der Beispiele XVI und XVII erhalten.

Analytische Daten: DC-System III: R₍ = 0,42 R, = 0,38

Beispiele LXVIII bis LXXVI (Tabelle 1) Die in Tabelle 1 aufgeführten Beispiele werden analog Beispiel 3 oder I durch Propanphosphorsäureanhydridkopplung der Verbindung aus dem Beispiel XXV mit den jeweiligen Aminkomponenten analog zu den Beispielen LII bis LIX hergestellt. Die Reinigung und/oder Trennung der Steroisomeren erfolgt durch Chromatographie (wie in den Beispielen XLIII und XLIV bfischrieberi).

ι O

Q.I

υ ο CO

Λ (D H

(

X

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X

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χ χ

X χ

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χ

X

χ

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J

Φ

CO

Beispiele LXXVII bis LXXXI (Tabelle 2)

Die in Tabelle 2 aufgeführten Beispiele werden analog Beispiel XXXVI durch Umsetzen der Dihydrochloride aus den Beispielen LXVI und/oder LXVII mit den entsprechenden Säuren unter Verwendung von Propanphosphonsäureanhydrld als Kopplungsgreagenz erhalten. Die Reinigung wird durch Chromatogrophie durchgeführt.

Tabelle 2

OCH

OH

Beispiel	X	Konfi- gurat ion*
LXXVII	ο-	R
LXXVIII		R
LXXIX		R
LXXX	(3-co-	R .
LXXXl		R

DC-Systcm R_f-Werl

Ii 0,51

Ii 0,47

Ii 0,50

III: 0,37

IIi 0,26

HPLC-System II R_L-Wert	(	)FAD-MS	(M»H)
4,03 min	ml z	862	IM»H)
6,37 min	m/z	876	(M»H)
9,85 min	m/ ζ	890	<M»H)
5,11 min	m/z	876	(M«H)
5,34 min	m/z	876

Beispiele LXXXII bis LXXXVI (Tabelle 3)

Die in Tabelle 3 aufgeführten Beispiele werden durch Propanphosphonsäurcanhydridkopplung der entsprechenden Bocgeschützten Aminosäuren (Bissendorf Biochemicals GmbH) mit der Verbindung aus dem Beispiel LXV (analog Beispiel XVI und XVIII) und chromatographischer Reinigung erhalten.

Tabelle 3

Beispiel	•	LXXXIII	X	CH₃	CH₃	DC-System R_f-WerL	0,73	HPLC-System II R_t-Wert	⁽*	)FAB-MS
		LXXXIV	CH₃		O Il CH₃-C-
LXXXII	LXXXV			H₅C₂-	IV:		26,35 min	m/ 2	905 (M+Li)
LXXXVI			0,68
H-		0,74
	IV:	0,75	10,36 min	m/ 2	891 (M+Li)
IV:	0,69	17,63 min	m/ 2	877 (M+Li)
IV:	38,91 min	m/2 m/2	933 (M+H); 939 (M+Li)
I :	5,31 min

Beispiele LXXXVII bis XIC (Tabelle 4)

Die in Tabelle 4 aufgeführten Po'-^slft worden entweder durch Kopplung der entsprechenden Säuron (Beispielo LXXXVII bis

IXC) mit der Verbindung d··· >,.„, ι osispH LXV unter Verwendung von n-Propanphosphonsäureanhydrid oder durch Umsetzung der Verbindung aus dem ~..;..->^:: ^aV mit 'Z-OSO' in Gegenwart von Triethylamin (Beispiel XC) hergestellt. Nach

Standardaufarbeitung werdon alle Verbindungen durch Chromatographie gereinigt.

Die Säuren werden nach bekannton Synthesemethoden hergestellt. Die Synthese der Säure, die für die Herstellung des Beispiels

LXXXVII verwendet wird, ist im Beispiel 19 beschrieben.

Die Synthesen der Säuren für die Beispiele LXXXVIII und IXC sind woanders beschrieben (LXXXVIII: JJ. Plattner et. al., J. Med.

Chem. 1988,31,2277-2288; IXC: P.Buehlmayeret.al., J. Med.Chem. 1988,31,1839^ 1846); Z-OSO' ((N-Benzyloxycarbonyloxy)-

succinimid) ist kommerziell erhältlich (Aldrich Chemicals).

Tabelle 4 Beispiel

LXXXVII

LXXXVIII

OCH-;

H₁C R₁S

O Il

:h₂-o-c-

DC-Sy3lem R_f-Wert	0,53
I !	= 0,63
iv:	0,56 J 0,51
III!	O,/O
I :

HPLC-Syslem II R_L-Wert

38,58 min

4,79 min

7,95 min: 12,14 min

7,95 min

(x)FAB-MS

m/z 1115 (M«Li)

m/z 840 <M»H) m/z 862 (M*Na)

m/z ί-'ό (M*H); m/z 81B (M«Na)

-49- 298 410 Erklärungen zum experimentellen Teil:

DC-Systeme:

Stationäre Phase

Merk DC-Fertigplatten Kieselgel 60 F-254,5 χ 10cm, Schichtdicke 0,25mm, Art.-Nr.5719.

Mobile Phasen (im Test als „DC-System")

I: CH₂CI₂/Me0H	9:1
II: CH₂(VMeOH	95:5
III: NHj/CHjClj/MeOH	0,2:9:1
IV: HOAc/CHjCI₂/MeOH	0,2:9:1
V: Eisessig/n-Butanol/H]O	1:3:1
Vl: EtOAc/n-Hexan	2:1
VII: EtOAc/n-Hexan	1:3
VIII: EtOAc/n-Hexan	1:1
IX: CHjClj/MeOH	98:2
X: CH₂CI₂/Me0H	7:3
Xl: CH₂CI₂

HPLC-Systeme:

HPLC-Systeml; Säule MerckLichrosorb^eRP-8,250-4,10Mm, Kat.-No. 50318 HPLC-System II: Säule Merck Lichrosorb« RP-18,250-4,10 μιη, Kat.-No. 50334

Eluens bei System I und Il A: pH7,00 Phosphatpuffer, Merck, Art.-Nr. 9439/H₂01:50 B: Acetonitril A/B wie 1/1, Fluß: 2ml/min, isokratisch, Detektion: 254nm

Verzeichnis der benutzten Abkürzungen

1. allgemeine analytische Methoden

DC Dünnschichtchromatographie

PDC präparative Dickschichtchromatographie

GC Gaschromatographie

HPLC Hochdruckflüssigkeitschromatographie

SC Säulenchromatographie

NMR Kernspinresonanzspektroskopie (Protonen)

MS Massenspektrometrie (Elektronenstoßionisation)

(+IFAB-MS Fast-atomic-brombardement-Massenspektrometrie, positive Ionen, Matrixsubstanz:

m-Nitrobenzylalkohol

MS-DCI Massenspektrometrie, chemische Ionisation

2. Schutzgruppen

Boc Tert-Butoxycarbonyl

Z Benzyloxycarbonyl

DNP Dinitrophenyl

Fmoc 9-Fluorenylmethoxycarbonyl

OEt Ethylester

OMe Methylester

EtOC Ethoxycarbonyl

Claims

1. Peptide der allgemeinen Formel (I)

OH

in welcher R¹ - fürWasserstcffoder

- für eine Gruppe der Formel R³-CO- steht worin R³ - Morpholino oder die Reste

(CH₃)IC-SO₂-CH₂-CH-

CH₂-CgHe

oder (CHa)₃C-CO-CH₂-CH- bedeutet CH₂CgHs

oder

- eine Gruppe der Formel-NR⁴R⁵ bedeutet worin

R" und R⁵ gleich oder verschieden sind und Wasserstoff, geradkettiges oder verzweigtes

Alkyl mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen oder Phenyl bedeuten

oder

Ν—κ

- den Rest /' —V-(CH-,)r~ bedeutet \ / ^ό ^

worin

L die Zahl 0,1 oder 2 bedeutet B - für eine direkte Bindung oder - für eine Aminosäuregruppierung der Formel

CO- oder -NH'^^CH₂-CO- steht

worin

R⁶ - geradkettigesoderverzweigtesAlkylmitbiszu8 Kohlenstoffatomen bedeutet, das gegebenenfalls durch Hydroxy, Carboxy, Alkoxy oder Alkoxycarbonyl mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen oder Benzyloxy substituiert ist

oder

- für Prolin steht

in ihrer L-Form, D-Form oder als D,L-Isomerengemisch
R² - für Aryl mit 6 bis 10 Kohlenstoffatomen steht, das gegebenenfalls bis zu 3fach gleich oder verschieden durch Halogen, Nitro, Cyano, Hydroxy, geradkettiges oder verzweigtes Alkoxy mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen, Acetoxy, Benzyloxy oder durch eine Gruppe der Formel

0-CO-R⁷ substituiert ist worin

R⁷ geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen bedeutet w - eine Zahl 0 oder 1 bedeutet
A - füreine-CH₂-oderfüreineCH₂-CH₂-Gruppesteht, D und E gleich oder verschieden sind und

für eine direkte Bindung oder für eine Aminosäuregruppierung der Formel

O- stehen

worin

R⁶' die oben angegebene Bedeutung von R⁶ hat und mit dieser gleich oder verschieden ist in ihrer L-Form, D-Form oder als D,L-Isomerengemisch
X - für Hydroxy, Benzyloxy oder Alkoxy mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen oder Morpholino steht

oder

- für eine Gruppe der Formel-NHR⁸steht worin R⁸ - Wasserstoff,

- gyradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit bis zu 10 Kohlenstoffatomen bedeutet, das gegebenenfalls durch Hydroxy, Phenyl, Pyridyl oder durch den Rest der Formel

substituiert ist

oder

- für einen Rest der Formel

N^ ^N-CH₂-C₆H₅ steht

und deren physiologisch unbedenklichen Salze.

2. Verbindungen der allgemeinen Formel (I) gemäß Anspruch 1, in welcher R¹ - für Wasserstoff oder

- für Alkoxycarbonyl mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen oder Benzyloxycarbonyl steht oder

(CHa)₃C-SO₂-CH₂-CH-

oder (CHa)₃C-CO-CH₂-CH- bedeutet CH₂CgHs

oder

- eine Gruppe der Formel -NR⁴R⁵ bedeutet worin

R⁴ und R⁵ gleich oder verschieden sind und Wasserstoff, geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen oder Phenyl bedeuten oder

N—\

- den Rest C -4— (CH₂) _L- bedeutet

worin

L die Zahl 0,1 oder2 bedeutet B - füreinedirekteBindungoder - für eine Aminosäuregruppierung der Formel

steht

worin

R⁶ - geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen bedeutet, das gegebenenfalls durch Hydroxy, Alkoxy mit bis zu 4 Kohlenstoffatomen oder Benzyloxy substituiert ist

oder

- für Prolin steht

in ihrer L-Form, D-Form oder als D,L-Isomerengemisch

R² - für Phenyl oder Naphthyl steht, das gegebenenfalls bis zu 3fach gleich oder verschieden durch Fluor, Chlor, Brom, Jod, Hydroxy, Nitro, Cyano, Alkoxy, mit geradkettiges oder verzweigtec mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen, Acetoxy oder Benzyloxy substituiert ist

w - eine Zahl 0 oder 1 bedeutet A - füreine-CHrOderfüreine-CHr-CHrGruppesteht, D und E gleich oder verschieden sind und

- für eine direkte Verbindung oder

- für eine Aminosäuregruppierung der Formel

stehen -NH' '

worin

R⁶' die oben angegebene Bedeutung von R⁶ hat und mit dieser gleich oder verschieden ist in ihrer L-Form, D-Form oder als D,L-Isomerengemisch
X - für Hydroxy, Benzyloxy oder Alkoxy mit bis zu ö Kohlonstoffatomen oder Morpholino steht

oder

- für eine Gruppe der Formel-NHR⁸ steht worin R⁸ - Wasserstoff

- geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen bedeutet, das gegebenenfalls durch Hydroxy, Phenyl, Pyridyl oder durch den Rest der Formel

substituiert ist

oder

- für einen Rest der Formel

,N-CH₂-C₆H₅ steht

und deren physiologisch unbedenklichen Salze. 3. Verbindungen der allgemeinen Formel (I) gemäß Anspruch 1, in welcher R¹ - für Wasserstoff oder

- fürAlkoxycarbonyl mit bis zu 4 Kohlenstoffatomen oder Benzyloxycarbonyl steht,

— für eine Gruppe der Formel R³-CO- steht worin R³ - Morpholino oder eine Gruppe der Formel

(CHa)₃C-SO₂-CH₂-CH-CH₂

oder-NR⁴R⁶ bedeutet

worin

R⁴ und R⁵ gleich oder verschieden sind und Wasserstoff oder geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit bis zu 4 Kohlenstoffatoma oder Phenyl bedeuten

oder

N—χ

- den Rest Cj7"CCH₂)_L- bedeutet

worin

L - die Zahl 0,1oder2 bedeutet B - für eine direkte Bindung oder

- für eine Aminosäuregruppierung der Formel

steht CO-

worin

R⁶ - geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit bis zu 4 Kohlenstoffatomen bedeutet, das

gegebenenfalls durch Hydroxy substituiert ist oder

- für Prolin steht

in ihrer L-Form, D-Form oder als D.L-Isomerengemisch

R² - für Phenyl oder Naphthyl steht, das gebebenenfalls durch Hydroxy, Methoxy,€thoxy oder

Propoxy, tert.-Butoxy, Benzyloxy oder Acetoxy substituiert ist, w - eineZahl0oder 1 bedeutet A - füreine-CH₂-oderfür6InB-CH₂-CH₂-GrUpPesteht, D und E gleich oder verschieden sind und

- für eine direkte Bindung oder

- für eine Aminosäuregruppierung der Formel

stehen

worin

R⁶ die oben angegebene Bedeutung von R⁶ hat und mit dieser gleich oder verschieden ist in ihrer L-Form, D-Form oder als D,L-Isomerengemisch
X - für Hydroxy oder Alkoxy mit bis zu 4 Kohlenstoffatomen oder Morpholino steht oder

- für eine Gruppe der Formel -NHR⁸ steht worin R⁸ - Wasserstoff oder

- geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen bedeutet, das gegebenenfalls durch Hydroxy, Phenyl, Pyridyl oder durch den Rest der Formel

substituiert ist

oder

- für einen Rest der Formel

N N-CH₂-C₆H₅ steht

und deren physiologisch unbedenklichen Salze.

4. Verfahren zur Herstellung von Peptiden der allgemeinen Formel (I), in welcher R¹ - für Wasserstoff oder

- für eine Gruppe der Forme! R³-CO- stsht worin R³ - MorpholinooderdieReste

(CHa)₃C-SO₂-CH₂-CH-

oder (CHa)₃C-CO-CH₂-CH- bedeutet

oder

- eine Gruppe der Formel -NR⁴R⁶ bedeutet worin

R⁴ und R⁵gleich oder verschieden sind und Wasserstoff, geradkettiges oder
verzweites Alkyl mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen oder Phenyl bedeuten
oder

N\ - den Rest ^ -7-(CH₂)L" bedeutet

worin

L - die Zahl 0,1 oder 2 bedeutet B - für eine direkte Bindung oder - für eine Aminnosäuregruppierung der Formel

oder -NH^MIH₂-CO- steht

worin je

R - geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen bedeutet, das gegebenenfalls durch Hydroxy, Carboxy, Alkoxy oder Aikoxycarbonyl mit bis zu
6 Kohlenstoffatomen oder Benzyioxy substituiert ist

oder

- für Prolin steht

in ihrer L-Form, D-Form oder als D,L-Isomerengemisch

R² - für Aryl mit 6 bis 10 Kohlenstoffatomen steht, das gegebenenfalls bis zu 3fach gleich oder verschieden durch Halogen, Nitro, Cyano, Hydroxy, geradkettiges oder verzweigtes Alkoxy mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen, Acetoxy, Benzyioxy oder durch eine Gruppe der Formel

O-CO-R⁷ substituiert ist worin

R⁷ geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen bedeutet
w - eine Zahl 0 oder 1 bedeutet
A - füreine-CH₂-oderfüreineCH2-CH₂-Gruppesteht,
D und E gleich oder verschieden sind und

- für eine direkte Bindung oder

- für eine Aminosäuregruppierung der Formel

F⁶'

j stehen

-NH'^CO-

worin

R⁶ die oben angegebene Bedeutung von R⁶ hat und mit dieser gleich oder verschieden ist in ihrer L-Form, D-Form oder als D,L-Isomerengemisch
X - für Hydroxy, Benzyioxy oder Alkoxy mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen oder Morpholino steht

oder

- für eine Gruppe der Formel -NHR⁸ steht worin R⁸ Wasserstoff oder geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit bis zu

10 Kohlenstoffatomen bedeutet, das gegebenenfalls durch Hydroxy, Phenyl, Pyridyl oder durch den Rest der Formel

substituiert ist

oder - für einen Rest der Formel

^N-CH₂-C₆H₅ und deren physiologisch unbedenkliche Salze,

dadurch gekennzeichnet, daß man

[A] Verbindungen der allgemeinen Formel (II)

(ID,

OH

in welcher

D₁ E und X die oben angegebene Bedeutung haben

Z - für eine Aminoschutzgruppe steht,

zunächst durch Abspaltung die Gruppe Z nach üblichen Methoden in Amine überführt und diese anschließend mit Verbindungen der allgemeinen Formel

(Hl), Z'-NH'^^COOH

in welcher

A die obenangegebene Bedeutung hat,

(la), 0-D-E-X

in welcher

Z', A, D, E und X die obon angegebene Bedeutung haben,

umsetzt, die Schutzgruppe Z' nach üblicher Methode abspaltet und in einem weiteren Schritt mit Verbindungen der allgemeinen Formel (IV)

(NH'^Xs-Ci

(IV), w

in welcher

R¹, B, w und R² die oben angegebene Bedeutung haben,

gegebenenfalls unter der oben erwähnten Carbonsäureaktivierung kondensiert, und gegebenenfalls die entsprechenden Ester nach üblicher Methode verseift, oder zunächst die Verbindungen der allgemeinen Formel (III) und (IV) nach der oben angegebenen Methode umsetzt undanschließend mit den Verbindungen der allgemeinen Formel (II) «ine weitere Peptidknüpfung anschließt

oder indem man

[B] Verbindungen der allgemeinen Formel (I b)

(Ib) 0-D-E-G

in welcher A, B, R¹, R², w, D und E die oben angegebene Bedeutung haben,

G - fürAlkoxycarbonyl mit bis zu 8 Kohlenstoffatomen steht,

nach üblicher Methode zunächst zu den entsprechenden Säuren verseift und in einem weiteren Schritt in Anwesenheit von Hilfsstoffen mit Aminen der allgemeinen Formel (V) oder Morpholin

der Formel (Vl) oder N-Benzylpiperazin der Formel (VII)

H₂N-R^r (V), O NH (VI) oder HN^^N-CH₂C₆H₅

in welcher R⁸ die oben angegebene Bedeutung hat, kondensiert, oder indem man (C] entweder Verbindungen der allgemeinen Formel (Ic)

A—

f* ι ι no,

in welcher A, B, R¹, w und R² die oben angegebene Bedeutung haben, und X' - für Alkoxy mit bis zu 6 Kohlenstoffatomen oder Benzyloxy steht, oder Verbindungen der allgemeinen Formel (I d)

JL 1 ^ ^(ld)'

in welcher Z', A und X' die oben angegebene Bedeutung haben,

zunächst zu den entsprechenden Säuren nach üblicher Methode verseift und anschließend mit

dem Bruchstück der allgemeinen Formel (VIII)

D-E-X (VIII),

in welcher D, E und X die oben angegebene Bedeutung haben,

in inerten Lösemitteln, gegebenenfalls in Anwesenheit von Hilfsstoffen, umsetzt, und im Fall der Verbindungen der allgemeinen Formel (Id) in einem nächsten Schritt nach der unter Verfahren [A] beschriebenen Methode unterschrittweiser Abspaltung der jeweiligen

Schutzgruppe Z' mit Verbindungen der allgemeinen Formel (IV) oder (IVa)

XR² f^R² [ (IVa) COOH (IV) oder R^B-(NH^-COOH)_w

in welcher R¹, B, w und R² die oben angegebene Bedeutung haben, umsetzt.

5. Verbindungen der allgemeinen Formel (I) gemäß Anspruch 1 zur Verwendung bei der Bekämpfung von Krankheiten.

6. Arzneimittel, enthaltend mindestens eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) gemäß Anspruch 1.

7. Verfahren zur Herstellung von Arzneimitteln, dadurch gekennzeichnet, daß man Verbindungen der allgemeinen Formel (I) gemäß Anspruch 1, gegebenenfalls unter Verwendung von üblichen Hilfs- und Trägerstoffen in eine geeignete Appliliationsform überführt.

8. Verbindungen der allgemeinen Formel (I) gemäß Anspruch 1 bei der Herstellung von kreislaufwirksamen Arzneimitteln.

9. Verbindungen der allgemeinen Formel (III)

ΐ"Ί

sys (in),

Z'-NH' ^COOH

in welcer

A - füreine-CHi-oderfüreine-CHz-C^-Gruppestehtund Z' - für eine Aminoschutzgruppe steht.

10. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel (III) gemäß Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß man Verbindungen der allgemeinen Formel (IX) Ϊ~Ί

(ix),