DE2463143C2 - Polyvalente Rindervirus-Lebendimpfstoffe - Google Patents
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Description
Im wesentlichen wird die in vitro Vermehrungsfahlgkeit bzw. Replikation eines temperaturempfindlichen (is)
Virus-Mutantenstammes durch die Temperatur begrenzt, die unterhalb des Temperaturwertes (Hemmiemperatür)
liegt, bei der die Infektiosltat wesentlich vermindert ist. Obwohl In vitro erhaltene Ergebnisse nicht ohne
weiteres auf in vivo Bedingungen übertragen werden können, wird in einigen Veröffentlichungen angedeutet.
daß ts-Mutanten sich In vivo anders verhalten als Wildvlren; vgl. B. R. Murphy. E. G. Chalhud. S. R. Nusinoff
und R. M. Cbanock. J. of Inf. Dis., Bd. 126, Nr. 2 (1972), Selten 170 bis 178.
Atmungswege angewendet. Unter besten ts-Bedingungen sollte eine ts-Mutante mit einer Hemmtemperatur Im
Bereich der normalen Körpertemperatur fähig sein, sich In der Schleimhaut der oberen Atmungswege (in denen
die Temperatur mehrere C° niedriger Ist als In den unteren Atmungswegen und im Körper) zu vermehren,
während ihre Vermehrung teilweise oder völlig In den unteren Atmungswegen und Im Körper Inhibien würde.
Versuche mit Labortieren und mit Menschen haben gezeigt, daß - wenigstens für einige Viren, die für die
.*» Erkrankung der Atemwege verantwortlich sind - diese theoretische Überlegung durch Versuche bestätigt
wurden: vgl. z. B. N. Zygralch, M. Lobmann und C. Huygelen, J. Hyg. Camb.. Bd. 70 (1972). Seilen 229 bis
234. Trcizdem und Insbesondere wegen der hohen Spezlflzltät, die auf diesem Gebiet existiert, war es keineswegs
naheliegend, daß das gleiche Prinzip auch auf andere Viren angewendet werden könnte. Insbesondere für
Rlnder-Adeno-Viren, wie Adeno-3-Virus, um Mutanten-Stflmme zu bilden, die für die Herstellung von Immu-
js nogenen und nichtpathogenen Rinder-Adeno-Virus-Lebendlmpfstoffen von Wichtigkeil sind.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, polyvalente Rlndervirus-Lebendlmpfstoffe zur Intranasalen Verabreichung
zu entwickeln, bei denen als Ausgangsmaterial temperaturempfindliche, nicht pathogene Mutantenstämme
eingesetzt werden, die ihrerseits aus pathogenen Rlnder-Adeno-Vlrussiämmen durch Behandlung mit
salpetriger Säure unter bestimmten Bedingungen erhalten werden. Mit diesen Impfstoffen ist es möglich, die
■»η Nebenwirkungen der bekannten Rinder-Adeno-Virus-Lebendlmpfstoffe zu vermeiden, die durch die Rlnder-Adeno-Viren
In den Atmungswegen und im Verdauungstrakt oder im Auge hervorgerufen werden.
Die Lösung dieser Aufgabe beruht auf dem überraschenden Befund, daß durch mutagene Behandlung von
pathogenen Rinder-Adeno-Viren, beispielsweise Rlnder-Adeno-3-Vlrus. mit salpetriger Saure unter sehr spezifischen
Bedingungen temperaturempfindliche, nicht-pathogene Rlnder-Adeno-Viren-Mutantenstämme mit einer
Hemmtemperatur von 39 bis 40° C Isoliert werden können, die für die erfindungsgemäßen polyvalenten Rlndervirus-Lebendlmpfstoffe
zur intranasalen Verabreichung geeignet sind, da sie nicht nur genetisch stabil. Immunogen
und nlchtpathogen sind, sondern bei Verabreichung an empfindliche Tiere auch keine nachweisbaren
Nebeneffekte auftreten. Die Erfindung betrifft somit den in den Patentansprüchen 1 bis 3 gekennzeichneten
Gegenstand.
Vi Der erflndungsgcmäß verwendete temperaturempfindliche, nicht-pathogene Stamm von Rlnder-Adeno-Virus
mit einer Hemmtemperatur von 39 bis 40° C Ist erhältlich i*urch Behandlung eines pathogenen Rlnder-Adeno-Vlrusstammes
bei Raumtemperatur mit einer wäßrigen Lösung von salp?:rlger Säure In Acetatpuffer, in der die
Konzentration der salpetrigen Säure 1 normal und der Acetationen im Reaktionsmedium 0.25 normal Ist.
während eines Zeitraumes von 2 bis 5 ± I Minuten bei einem pH-Wert von 4,2 ± 0,1 bis 15 bis 25 ± 1 Minu-
i< ten bei einem pH-Wert von 5 ± 0.1 und Isolieren des temperaturempfindlichen Stammes aus der Lösung durch
wenigstens eine Endverdünnungspassage In einer üblichen Gewebekultur, die sowohl für das Wachstum des
Virus als auch als Substrat für die Impfstoffherstellung geeignet Ist, Vermehrung In einer üblichen Gewebekultur,
die für das Wachstum von Rlnder-Adeno-Virus geeignet Ist, bei einer Temperatur von höchstens 37 ~ I3C
und Ernten des erhaltenen Virusmaterials. Vorzugsweise wird als Gewebekultur eine primäre Rlndernlerenzell-
Die verwendeten Rinder-Adeno-Vlrus-Stämme vermehren sich nur lokal In den oberen Atmungswegen der
Tiere, ohne daß eine nachweisbare Virusvermehrung Im Organismus In den wärmeren Temperaturbereichen,
d. h. In den Inneren Organen der Tiere auftritt.
Zur Herstellung der nlcht-pathogenen Mutantenstämme, wird entweder ein Rlnder-Adeno-Vlrusstamm. wie
Zur Herstellung der nlcht-pathogenen Mutantenstämme, wird entweder ein Rlnder-Adeno-Vlrusstamm. wie
fö ein Rlnder-Adeno-3-Virusstamm, direkt aus einem klinischen Material Isoliert oder es kann ein Rlnder-Adeno-Virusstamm
verwendet werden, der am Ende von Serienpassagen In Gewebekulturen von beispielsweise primären
Rindernieren (PBK)-Zellkulturen. z. B. dem WBR I-Stamm, der von J. H. Derbyshire et al.. Nature. Bd. 208
). S. 307 bis 308. beschrieben Ist. oder primären foetalen Rindernieren (PFBK)-Zellkulturcn als Ausuanüs-
material erhalten wird.
Die zur Induktion der lemperaturempflndlichen Mutantenstämme erforderliche mutagene Behandlung wird so
durchgeführt, daß man einen Rlnder-Adeno-Vlrus, wie einen Adeno-3-Vlrusstamm, bei Raumtemperatur mit
der aceiatgepufferten wäßrigen Lösung von salpetriger Saure behandelt. Vorzugswelse betragt die Behandlung 15
+ 1 Minuten bei einem pH-Wert von 4,6 ±0,1. v S
Es Ist offensichtlich, daß die pH-Werte und Temperaturbedingungen voneinander abhangen, aber die Grenzen
der vorgenannten Bedingungen sind so, daß eine anfängliche Vlruspopulation von etwa 10* auf etwa 102 nach
der muiagenen Behandlung vermindert wird und daß die Induktion der temperaturempfindlichen Mutantensiämme
mit einer Hemmtemperatur von 39 bis 40° C eintritt.
Die so erhaltenen temperaturempfindlichen Os) Mutantenstamme werden durch wenigstens eine Endverdün- iq
nungspassage in einer üblichen Gewebekultur isoliert, die sowohl das Wachstum des Virus als auch als Substrat
für die Impfstoffherstellung geeignet ist, wie beispielsweise Rindernleren-Zelllculturen.
Beispielsweise kann die Isolierung durch wenigstens eine Endverdünnungspassage In primären foetalen
Rindernieren (PFBK))-Zellkulturen bei 30 ± TC wahrend sines Zeltraums von 10 bis 20 Tagen, vorzugsweise
während 14 ± 1 Tagen durchgeführt werden.
Die isolierten temperaturempfindlichen Mutantenstämme werden zweckmäßig noch in einer üblichen Gewebekultur,
die das Wachstum des Rinder-Adeno-Vlrus begünstigt, wie beispielsweise Rindernieren-Zellkulturen
und insbesondere primäre foetale Rlnderaleren-Zellkulturen, beispielsweise 2- oder 3mal in primären foetalen
Rindernieren (PFBK)-Zellkulturen welter passagiert (kionlert) um dabei eine wesentliche Menge der temperaturempfindlichen
.V.utantenstämme zu erhalten.
Als Ausgangsnsateris! eignet sich beispielsweise ein pathogener Stamm von Rlüder-Adep.o-3-Yirus, der aus
dem WBR I-Stamm nach 7 Reihenpassagen in primären foetalen Rindernieren-Zellkulturen erhalten wurde und
der nachstehend als Ausgangsstamm bezeichnet wird. Ein genetisch stabiler nlcht-pathogener, temperaturempfindlicher
Stamm von Rinder-Adeno-3-Vlras, der nach diesem Verfahren erhalten wurde, hat die Kurzbezeichnung
Eunice-Stamm erhalten.
Die temperaturempfindlichen Rinder-Adeno-Vlrusstämme, die auf die vorstehend beschriebene Weise erhalten
werden, zeigen keinen wesentlichen Verlust an Immunogenltät gegenüber dem als Ausgangsmaterial
verwendeten Rinder-Adeno-Vlrusstamm; sie sind temperaturempfindlich und nlcht-pathogen.
Vorzugswelse werden zur Vermehrung der temperaturempfindlichen Rinder-Adeno-Vlrusstämme primäre
foetale Rindernieren (PFBK)-Zellkulturen verwendet, und die Vermehrung wird vorzugsweise bei 35 ± I0C
durchgeführt.
Um die Herstellung der Lebendimpfstoffe In industriellem Umfange und in vielen Ansätzen durchzuführen,
kann der Verfahrensschritt zur Herstellung einer großen Menge des Virusmaterials offensichtlich mehr als eine
Passage umfassen, wobei eine oder mehrere Zwischenstufen durchgeführt werden, um die Herstellung von
Virus-Elnsaatmaterial zur Herstellung von Impfstoffansätzen durchzuführen.
Zur Herstellung von Impfstoff wird das Virusmaterial vorzugsweise In lyophlllslerter Form aufbewahrt. Aus
dem lyophillslerten Virusmaterial erfolgt die Wiederherstellung der Lebendimpfstoffe unter Zugabe von Wasser
oder jedem anderen bekannten pharmakologlsch verträglichen Verdünnungsmittel, das zur Herstellung von In
die Nase verabreichbaren Präparaten, wie Sprühmittel, verwendet werden kann.
A. und B. erläutert die Herstellung eines erfindungsgemäß verwendeten, temperaturempfindilchen, nichtpathogenen
Stammes von Rlnder-Adeno-Virus.
A.
Rlnder-Adeno-3-Vlrus wird in Gewebekulturen In Eagle-Minlmalerhaltungsmedlum (MEM) zu einer Virussuspension
suspendiert, die ΙΟ6·5 TCIDs0 enthält. Der Ausgangsstamm wurde aus dem bekannten WBR I-Stamm
durch 7 Reihenpassagen in primären, foetalen Rindernieren-Zellkulturen erhalten.
1 ml dieser Virussuspension wird mit 0,5 ml einer 4molaren wäßrigen Natriumnitritlösung In 0,5 ml einer
1 molaren Esslgsäure/Natriumacetatpufferlösung vermischt. Dieser Puffer wurde durch Vermischen von 6 g
Eisessig mit destilliertem Wasser bis zu einem Volumen von 100 ml und 3 Volumina einer Lösung von 13,6 g
Natriumacetat In 100 ml destilliertem Wasser hergestellt. Beide Losungen wurden 30 Minuten bei 121° C sterilisiert.
Der End-pH-Wert beträgt 4,6.
Das Gemisch wird 15 Minuten bei Raumtemperatur umgesetzt. Die Reaktion wird dann durch tropfenweise
Zugabe von 1 η-Natronlauge unter Rühren bis zu einem pH-Wert von 7,5 ± 0,5 beendet. Die pH-Einstellung
wird mit Hilfe der Farbänderung des In der Virussuspension enthaltenen Phenolrot-Indlkators verfolgt.
Das Medium wird dann sofort 5 Stunden bei + 4 ± Γ C gegen phosphatgepufferte physiologische Kochsalzlösung
dlalysiert. [Diese Lösung besteht aus 8 g NaCl, 0,2 g KCl, 1,15 g Na2HPO4, 0,2 g KH2PO* in destilliertem
Wasser (bis auf 800 ml), vermischt mit einer Lösung von MgCI2 · 6H2O in 100 ml destilliertem Wasser und
anschließend mit einer Lösung von 0,1 g CaCl2 In 100 ml destilliertem Wasser. Die so erhaltene Lösung wird
durch Filtration sterilisiert; der End-pH-Wert liegt bei 7,2 bis 7,4.] Die phosphatgepufferte physiologische Koch-Salzlösung
wird mehrmals bis zur Entfernung der Nitritionen erneuert. Eine Probe wird titriert und das Vlrusmaterlal
bei -70°C aufbewahrt. Die Titration wird mittels der Röhrchen-Endpunkt-Verdünnungsmethode in
primären foetalen Rindernieren-Gewebekulturen bei 39 ± I0C unter Verwendung von 2 Röhrchen pro Verdünnung
durchgeführt.
Nach 2wöchiger Inkubation wird der Titer bestimmt und die bei -700C aufbewahrte Probe wird soweit
verdünnt, bis sie 1 TCIDjo/0.2 ml enthält. Diese verdünnte Probe wird In 28 Röhrchen mit primären foetalen
Rindernieren-Gewebekulturen unter Verwendung von 0,1 ml Inoculum/Röhrchen beimpft. Die Röhrchen
werden bei 30 ± 1°C Inkubiert. Nach verschiedenen Inkubationszeiten von 7 bis 17 Tagen zeigen 10 beimpfte
Röhrchen einen typischen Rlnder-Adeno-S-Virus-cytcpathogenen Effekt; diese Röhrchen werden mit den
Nummern 1 bis IO markiert und bei -70° C aufbewahrt. Es werden Paralleltltrationen dieser 10 positiven Proben
bei 30° C und bei 39° C durchgeführt. Die Proben, die einen signifikanten Unterschied im Titer zwischen diesen
beiden Temperaturen aufweisen, werden durch Grenzverdünnungs-Passagen zwei Mal weiter geklont.
Das so erhaltene Virusmaterial wird dann durch 2 Passagen in primären foetalen Rindemieren (PFBK) Zellkulturen
wie folgt vermehrt: Rlnderfoeten werden als Nierenspender verwendet. Die Nieren werden unter aseptischen
Bedingungen entfernt. Zerkleinertes Nierengewebe wird mit phosphatgepufferter physiologischer Kochsalzlösung
gewaschen [diese Lösung besteht aus 8 g NaCl, 0,2 g KCl, 1,15 g Na1HPO4, 0,2 g KH2PO4, 0.2 g
KH2PO4 !r. destilliertem Wasser (bis auf 800 ml), vermischt mit einer Lösung von MgCl2 · 6H2O in 100 ml
ίο destilliertem Wasser und anschließend mit einer Lösung von 0,1 g CaCl2 in 100 ml destilliertem Wasser. Die so
erhaltene Lösung wird durch Filtration sterilisiert; der End-pH-Wert liegt zwischen 7,2 und 7,4]. Anschließend
wird das Nierengewebe mit einer gepufferten physiologischen Kochsalzlösung von Trypsin (2,5 g/Liter) trypsiniert.
Das Gemisch wird dann 10 Minuten ohne Unterbrechung bei 37° C gerührt. Sodann wird die Flüssigkeit
abgegossen und duich dasselbe Volumen an frischer Trypsinlösung ersetzt. Die Trypsinbehandlung wird dann
is unter Rühren bis zur Erschöpfung des Gewebes fortgesetzt. Die In der Flüssigkeit suspendierten Zellen werden
von Zeit zu Zeit entfeint und dann bei 1000 UpM zentrifugiert. Das Zellsediment wird in einem Wachstumsmedium
(Eagle's Basalmedium, das mit 10 Prozent auf Virus geprüftes Kalbsseram versetzt Ist und pro ml 100
Einheiten Penicillin G-Natrium und 100 γ Streptomycin-sulfat enthalt) suspendiert, daß auf 1 ml etwa 200 000
Zellen kommen.
Μ 1 ml Proben der Zellsuspension werden In sterile Röhrchen gegeben und 4 bis 5 Tage bei V C inkubiert. Am
Ende dieser ersten Inkubaticnspcricdc wird das V/achsturnsniediurr. entfernt und pro Röhrchen durch 1.5 rnl
Eagle's Basalmedium ersetzt, das ledig.'ish 2 Prozent Gammaglobulin-freles, auf Virus geprüftes Kalbsserum
enthält, 10 Röhrchen werden mit 0,2 ml der vorstehend erhaltenen Virussuspension beimpft und bei 353C
während 7 bis 14 Tagen Inkubiert. Das Wachstum des Virus zeigt sich an dem typischen cytopathogenen Effekt.
Die Passage des Virus auf eine zweite primäre foetale Rlnderr\Ieren-(PFBK)-Gewebekultur wird durchgeführt,
wenn etwa 50 Prozent der Zellen den cytophatogenen Effekt aufweisen. Die überstehende Flüssigkeit wird dann
geerntet; eine 0,2 ml Probe des Überstands wird als Inoculum für die nächste Passage verwendet.
Die überstehenden Flüssigkeiten der zweiten Passage werden geerntet, vereinigt und Im Volumenverhältnis
1 :2 mit einer Stabilisierlösung verdünnt, die aus 60 g Casiton, 100 g Rohrzucker, 75 ml (m/15) dlbaslsches
Natriumphosphat. 25 ml (m/15) monobasischem Kailumphosphat, 20 g Monokaliumglutamat und einer zur
Herstellung von 4,25 Liter ausreichenden Menge an destilliertem Wasser besteht. Das Gemisch wird lyophillsiert,
wobei ein temperaturempfindlicher, nlcht-pathogener Rlnder-Adeno-3-Virusstamm erhalten wird, der
nachstehend kurz mit Eunice-Stamm bezeichnet wird.
/s-Charakter des Eunlce-Stammes
der Tabelle 1 zusammengefaßt, aus der hervorgeht, daß die Hemmtemperatur, also die Temperatui. bei velcher
die Infektlosltät auf etwa 3 logio reduziert wird, 39,5 ± 0,5° C beträgt. Die Ausbeutedlfferenz zwischen dem
<to Eunlce-jtamm und dem Ausgangsstamm ist ebenfalls In Tabelle I angegeben und zeigt die geringe Vermehrbarkeit
des Eunice-Stammes.
(ausgedrückt in log10/0,l ml) bei 39.5° C und 35° C
35° C 39.50C
Eunice 4,5 1,7 2,8
Die Stabilität des /s-Charakters des Eunlce-Stammes wird lr>. vitro, wie nachstehend beschrieben, gezeigt:
Der Eunlce-Stamm wird In primären foetalen Rindernieren (PFBK)-Zellkulturen bei 30 bis 350C passagiert. Die In Tabelle II zusammengefaßten Ergebnisse zeigen, daß der «-Charakter während 7 Passagen bei 30 bis 350C stabil bleibt, während das Wachstum des Stammes bei 39,5° C beträchtlich vermindert Ist.
Der Eunlce-Stamm wird In primären foetalen Rindernieren (PFBK)-Zellkulturen bei 30 bis 350C passagiert. Die In Tabelle II zusammengefaßten Ergebnisse zeigen, daß der «-Charakter während 7 Passagen bei 30 bis 350C stabil bleibt, während das Wachstum des Stammes bei 39,5° C beträchtlich vermindert Ist.
| Passage | Virusliter TCID56, | ml | bei 39,5° C |
| ausgedrückt in Ioglo/0,l | 0.5 | ||
| bei 3O-35°C | 1.5 | ||
| I | 5 | 1,5 | |
| 4 | 6,25 | ||
| 7 | 6,3 | ||
Außerdem wurde der fs-Charakler des Virus, das bei 39,5° C hergestellt wurde, getestet. Wie aus Tabelle Ii
ersichtlich Ist, zeigt der Eunlce-Siamm bei dieser Temperatur ein schlechtes Wachstum und die In Tabelle III
zusammengefaßten Ergebnisse zeigen, daß das so hergestellte Virus seinen rs-Charakter beibehalten hat.
des Virus, das hei 39,5° C hergestellt wurde
350C 3
39,5° C <0,5
B.
physiologischer Kochsalzlösung gewaschen. [Diese Lösung besteht aus 8 κ NaCl. 0,2 r KCI. 1.15 g NaiHPO4,
0.2 g KH~jPO4 In destilliertem Wasser (bis auf 800 ml), vermischt mit einer Lösung von MgCI2 ■ 6HjO In 100 ml
destilliertem Wasser und anschließend mit einer Lösung von 0,1 g CaCI2 In 100 ml destilliertem Wasser. Die so
erhaltene Lösung wird durch Filtration sterilisiert; der End-pH-Wert liegt bei 7,2 bis 7,4|. Die gewaschenen,
zerkleinerten Nieren werden mit einer Lösung von Trypsin (2,5 g/Llter) In gepufferter physiologischer Kochsalzlösung
behandelt. Das Gemisch wird 10 Minuten bei 37° C ohne Unterbrechung gerührt. Die Flüssigkeit wird
dann abgegossen und durch das gleiche Volumen an frischer Trypslnlösung enetzt. Die Trypslnbehandlung wird
unter Rühren bis zur Erschöpfung des Gewebes fortgesetzt. Die In der Flüssigkeit suspendierten Zellen werden
von Zelt zu Zelt entfernt und dann 5 Minuten bei 1000 UpM zentrifugiert. Das Zellsediment wird In einem
Wachstumsmedium (Hank's basischer Salzlösung, die mit 10 Prozent "irus geprüftem Kalbsserum, 0,5 Prozent
Lacialbumlnhydrolysat, 0,1 Prozent Hefeextrakt und 50 γ Neomycln-sulfat/ml versetzt ist) so suspendiert, daß
auf 1 ml etwa 200 ÖOfl Zellen kommen. w
Aliquoitelle von 1 ml der Zellsuspenslon werden In Roux-Kolben (500 cm1) gegeben und 4 bis 5 Tage bei
37° C Inkubiert. Am Ende dieser ersten Inkubationsperiode wird das Wachstumsmedium entfernt und die ZeIlmonoschlcht
zweimal mit einem Erhaltungsmedium gewaschen, das aus Earle's basischer Salzlösung besteht,
die 0.5 Prozent Lactalbuminhydrolysat, 0,1 Prozent Hefeextrakt, 0,1 Prozent Tryptosephosphat-Brühe und 50 γ :
Neomycln-sulfat/ml enthält. }i '
Jeder Kolben mit foetaler Rindernieren-Zellkultur wird mit 1 ml einer Suspension des gemäß A. erhaltenen
Eunlce-Stammes In destilliertem Wasser bdmpft. Die Suspension enthält etwa 2,10' TClD,0/ml (d. h. beim
Multlpllzitätslndex von 0,1). Jeder Kolben wird mit Erhaltungsmedlum mit der gleichen Zusammensetzung wie
das vorstehend zum Waschen verwendete Medium versetzt. Die Kultur wird bei 35° C während einer solchen
Zeitspanne Inkubiert, die zum Waschen einer großen Virusmenge ausreichend ist, d. h. mindestens 5 bis 10
Tage, wie sich mittels des typischen cytopathogenen Effektes des Rinder-Adeno-3-Virus nachv/elsen läßt.
Die überstehenden Flüssigkelten werden dann geerntet, vereinigt und im Volumenverhältnis von 1 : 2 mit
einer Stablllslerlösung verdünnt. Diese Lösung besteht aus 60 g Caslton, 100 g Rohrzucker, 75 ml (m/15) dlbaslschem
Natriumphosphat, 25 ml (m/15) monobasischem Kaliumphosphat, 20 g Monokallumglutamat und einer
zur Herstellung einer Lösung von 1 Liter ausreichenden Menge an destilliertem Wasser. ·>5
Das Präparat wird in Glasampullen abgefüllt, die wenigstens 2.10' TCID50 oder ein Vielfaches davon enthalten.
Der Inhalt der Ampullen wird lyophlllslert. Die Ampullen werden abgeschmolzen.
Es wird die in B. beschriebene Methode angewendet, wobei jedoch die geernteten Oberstehenden Flüssigkeiten,
die mit der Stabilisierlösung verdünnt werden, mit dem RLB 103 temperaturempflndlichen Mutantenstamm
von Rlnder-Parainfiuenza 3 (Plj)-Vlrus, beschrieben von N. Zygraich, M. Lobmann und C. Huygelen in j. Hyg.
Camp.. Bd. 70 (1972), 229-234 und dem RLB 106 temperaturempfindlichen Mutantenstamm des Infektionösen
Rinder-Rhinotracheitis (IBR)-Vlrus (beschrisben in Research In Veterinary Science) ergänzt werden. Das Gemisch
wird in Glasampullen abgefüllt, die ΙΟ65 TClD50 an Rlnder-Ader.oO-Vlrus-Eunice-Stamm, 10"TCIDs0 an
Rinder-PIj-Virus und 1068TCID50 an IBR-Virus oder ein vielfaches jeder dieser Dosen enthalten. Der Inhalt
dieser Ampullen wird Iyophilisiert, und die Ampullen werden abgeschmolzen. Auf diese Weise werden entweder ,
Einfach- oder Vielfachdosen erhalten. Nach der Wiederherstellung durch Zugabe von 4 bis 5 ml Wasser/Dosis μ
wird der polyvalente Impfstoff dem Tier Intranasal als Nasenspray verabreicht.
| Serologische | 24 | nach der Impfung |
63 143 | nach der Impfung |
Haemagglulinations- Hemmungstiter für |
nach der Impfung |
I | |
| Tabelle IV | 16 | 2 | Plj-Virus | 128 | 1 | |||
| Nummer | Reaktion, ausgedrückt | 32 | in | 2 | vor der Impfung |
32 | !"* | |
| des Tieres 5 |
Seroneutralisations-Antikörpertiter | 32 | ur | 8 | < 8 | 128 | Πι | |
| Adeno-3-Virus | 64 | IBR-Virus | 1 | 8 | 32 | I | ||
| vor der Impfung |
vor der Impfung |
< 8 | f. | |||||
| O 1 |
< 4 | 0 | 32 | |||||
| 2 | <16 | 0 | I | |||||
| 3 | < 4 | 0 | I * |
|||||
| 5 4 | 8 | 0 | ||||||
Die zusätzlichen Rlnder-PIj- und IBR-Vlren störten die Impfung mit Adeno-3-Impfstoffen nicht; umgekehrt
stöne das Adeno-3-Virus nicht die Serokonversion der Tiere für die Rlnder-PIj- und IBR-Vlren.
Claims (3)
1. Polyvalenter Rindervirus-Lebendimpfstoff zur Intranasalen Verabreichung, enthaltend
a) einen temperaturempflndüchen, nichtpathogenen Stamm von Rinder-Adeno-Virus mit einer Hemmtemperatur
von 39 bis 40° C und
b) wenigstens einen weiteren intranasal verabreichbaren Rindervirus-Lebendimpfstoff für die Behandlung
von Erkrankungen der Atemwege.
2. Polyvalenter Lebendimpfstoff nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Komponente b) ein
infektiöser Rinder-Rhinotracheitls-Virus-Lebendimpfstoff und/oder ein Rinder-ParaInfluenza-Lebendimpfstoff
Ist.
3. Polyvalenter Lebendimpfstoff nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß der Rinder-Parainfluenza-Lebendimpfstoff
ein Rlnder-Parainfluenza-3-Virus-Lebendimpfstoff ist.
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Non-Patent Citations (1)
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| Mayr et. al: Virologische Arbeitsmethoden, Stuttgart 1974, S.263 u. 266 * |
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