DE3226332C2

DE3226332C2 - Analyseverfahren

Info

Publication number: DE3226332C2
Application number: DE3226332A
Authority: DE
Inventors: Fred H Deindoerfer; James R Gangwer
Original assignee: International Remote Imaging Systems Inc
Current assignee: Iris International Inc
Priority date: 1981-07-22
Filing date: 1982-07-14
Publication date: 1996-02-29
Anticipated expiration: 2002-07-15
Also published as: DE3226332A1; JPH0526143B2; CA1182746A; AU8608782A; GB2103362B; AU554208B2; FR2510258B1; JPS5826268A; GB2103362A; US4476231A; FR2510258A1

Description

Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Bestimmung der anteiligen Menge eines Analyseobjektes, das in einer Lösung zugegen ist, mittels eines Reagens, das eine Markierung mit einer feststellbaren spektralen Charakteristik aufweist und in einer Flüssigkeit gelöst ist, wobei eine Reaktion mit dem Reagens stattfindet, sich Teilchen in Suspension in der Lösung bilden und die umgesetzten Anteile des Reagens von den nicht umgesetzten Anteilen geschieden werden.

Nachfolgend sollen einige Ausdrücke in ihrer in der vorliegenden Beschreibung verwendeten Bedeutung näher erläutert werden:

Analyseobjekt: Der Stoff in einer Lösung, der der Analyse unterliegt, dessen Konzentration unbekannt ist und mit dem Bestimmungsverfahren festgestellt werden soll.

Reagens: Ein Stoff, der speziell so gewählt ist, daß er bei der Bestimmungsmethode nur mit dem Analyseobjekt reagiert.

Markierung: Ein am Reagens haftender Bestandteil desselben, der die Feststellung des Reagens mittels einer Meßeinrichtung ermöglicht.

Aufteilung der Markierung: Die Klassierung des Reagens in umgesetzte und nichtumgesetzte Anteile.

Segregation der Markierung: Die meistens mit chemischen Mitteln verursachte Unterteilung zwischen einer festen und einer flüssigen Phase.

Suspension: Ein Gemisch aus Teilen (feste Phase) und Flüssigkeit. Trennung der Markierung: Die tatsächliche Abtrennung von Teilchen und Flüssigkeit mittels physikalischer Mittel.

Die Aufteilung eines Reagens, nach dessen Umsetzung, auf Teilchen und Flüssigkeiten in einer Suspension ist in der klinischen Chemie üblich. Beispiele für derartige Verteilungen ergeben sich bei Radioimmun- und Fluorimmun-Bestimmungsmethoden. Bei diesen beiden Methoden muß die Konzentration eines Analyseobjekts in einer Lösung festgestellt werden.

Es wird ein Reagens mit einer ihm anhaftenden Markierung so ausgewählte daß es speziell mit dem Analyseobjekt umgesetzt wird. Im Anschluß an die Umsetzung des Reagens mit der Lö sung bleibt ein Teil des Reagens unumgesetzt, während ein anderer Teil des Reagens mit dem Analyseobjekt umgesetzt wurde. Das umgesetzte Reagens wird vom nichtumgesetzten Reagens abgeteilt, so daß sich eine Aufteilung ergibt, was meistens dadurch erfolgt, daß einer der Anteile des Rea gens (der umgesetzte oder nichtumgesetzte) veranlaßt wird, in die feste Phase überzugehen, während der andere Anteil in der flüssigen Phase verbleibt. Das kann z. B. dadurch geschehen, daß entweder das umgesetzte oder das nichtumgesetzte Reagens an einer Substanz in fester Phase, beispielsweise mit Anti körpern beschichteten Perlen oder Holzkohle, adsorbiert wird, oder daß das umgesetzte Reagens durch Hinzufügen eines Ausfällungsmittels ausgefällt wird, z. B. Polyäthylen glykol oder zweite Antikörper. Dabei entsteht eine Suspension aus umgesetztem und nichtumgesetztem Rea gens. Diese Suspension muß körperlich in feste Phase und flüssige Phase getrennt werden, was eine Trennung des umgesetzten Reagenzanteils vom nichtumgesetzten Anteil bewirkt. Sobald die Trennung erfolgt ist, kann jeder einzel ne abgetrennte Teil gemessen werden. Die dem Reagens zuge ordnete Markierung ist typischerweise ein radioaktives Iso top im Fall einer Radioimmunbestimmung und ein fluoreszie render Stoff im Fall einer Fluorimmunbestimmung. Es können aber auch andere Markierungen verwendet werden. Das Reagens wird so gewählt, daß seine Umsetzung und anschließende Auf teilung nur von einem bestimmten Analyseobjekt verursacht wird, dessen Konzentration bestimmt werden soll. Das Rea gens wird mit Markierung versehen, damit seine Aufteilung gemessen werden kann, und zwar meistens mittels einer Strah lung wahrnehmenden Einrichtung. Der Teil des Reagens, der sich, wie durch Messen seiner Markierung festgestellt, auf teilt, ist ein Anzeichen für das quantitative Ausmaß der Konzentration des Analyseobjektes, die mit der Bestimmungs methode festgestellt wird. Sowohl bei der Radioimmun- als auch bei der Fluorimmun-Bestimmungsmethode werden die umge setzten und die nichtumgesetzten Anteile des Reagens zur Trennung zwischen zwei Phasen veranlaßt, von denen dann die eine oder die andere, nach einer Trennung mittels physikali scher Mittel, gemessen werden kann. Der Teilchenteil oder der flüssige Teil der Suspension wird analysiert, um das quantitative Maß der darin enthaltenen Markierung zu bestim men. Auf diese Weise kann die unbekannte Konzentration, d. h. das quantitative Ausmaß des jeweiligen Analyseobjekts er rechnet werden. Bei der Radioimmun-Bestimmungsmethode werden die getrennten Teilchen oder die Flüssigkeit dadurch analy siert, daß die von der Markierung abgegebene nukleare Strah lung mittels eines Szintillationskristalls in sichtbares Licht umgewandelt wird, welches dann von einem Photoelektro nenvervielfacher festgestellt wird. Im Fall der Fluorimmun- Bestimmungsmethode werden die abgetrennten Teilchen oder die Flüssigkeit mit einem Strahl elektromagnetischer Strahlen, typischerweise UV-Licht bestrahlt. Die Menge an innerhalb der abgetrennten Teilchen oder der abgetrennten Flüssigkeit vorhandener Markierung wird dadurch zur Fluoreszenz veran laßt. Das Ausmaß der Fluoreszenz wird von einem Photoelektro nenvervielfacher festgestellt. Bei einer Immunbestimmungs methode kommt es also zu einer Umsetzung, an der ein Rea gens mit einer Markierung beteiligt ist, wobei anschließend eine Verteilung und Aufteilung der umgesetzten und nichtum gesetzten Anteile des Reagens in eine feste und eine flüssi ge Phase erfolgt. Die Trennung und das Auswaschen dieser Phasen erfordern intensive menschliche Behandlung und sind eine Quelle von Ungenauigkeiten und Fehlern bei der Bestim mungsmethode.

Bei MIA-Verfahren, d. h. bei der mikroskopischen Bildanaly se muß eine Suspension, die interessierende Teilchen ent hält, unter dem Mikroskop untersucht werden. Es werden Bil der der Suspension unter dem Mikroskop gemacht, digital umge wandelt und mittels Bildverarbeitungstechniken weiterverarbei tet, um Daten herauszuziehen, die sich auf ausgewählte, interessierende Komponenten des Bildes beziehen. Eine solche Vorrichtung ist zur Analyse von Teilchen in einer Suspension, wie Blut, vorgeschlagen worden. Eine derartige MIA-Vorrichtung geht aus der DE-PS 31 46 423 hervor.

Die Bildverarbeitung hat bereits Eingang in die chemische Analysetechnik gefunden (GB-PS 2 040 441). Dabei wird die immunoreaktive Komponente einer biologischen Probe dadurch qualitativ bestimmt, daß die Probe und das Reagens in eine Reaktionszone verbracht, diese durchleuchtet und ein Schattenbild auf einen Bildsensor geworfen wird, wobei dunkle Bereiche agglutinierten Partikeln in der Reaktionszone entsprechen. Die gesamte Dunkelfläche auf der Oberfläche des Bildsensors wird gemessen und mit einer Referenzprobe verglichen. Agglutinierte Partikel müssen dabei von nicht agglutinierten Teilen unterschieden werden.

Es ist ferner bekannt (US-PS 4 075 462), Partikel zu zählen und ihre Größe sowie Gestalt zu bestimmen. Dabei werden die Partikel in der Probe beleuchtet und auf einer lichtempfindlichen Anordnung abgebildet, woraus sich eine elektrische Signaldarstellung des Bildes der Partikel gewinnen läßt. Diese elektrische Signaldarstellung wird in elektronischen Einrichtungen verarbeitet. Die Messung und Bildverarbeitung von Markierungen, die in Flüssigkeiten gelöst sind, ist nicht vorgesehen.

Bei einem weiteren bekannten radioimmunologischen Prüfungsverfahren (US-PS 4 000 252) wird unlöslich gemachtes, phosphorisierendes Material und ein Bindemittel, beispielsweise ein Antikörper, zur Bildung einer festen szintilierenden immunoabsorbierenden Zelle einander zugeordnet. Damit können radioaktiv markierte Antigene gebunden und radioaktive Energie dem phosphorisierenden Material zugeführt werden. Die daraufhin emittierte Lumineszenz wird von einem Szintillationszähler gemessen und ist direkt proportional der von der Markierung abgegebenen radioaktiven Energie. Die Messung freier, nicht an Partikel gebundener Radioaktivität ist nicht vorgesehen.

Ein dem Oberbegriff des Anspruchs 1 entsprechendes Verfahren zur quantitativen Bestimmung einer Komponente eines spezifisch bindenden Paares von Substanzen mit einer gegenseitigen spezifischen Bindungsaffinität ist in der DE-OS 24 48 411 beschrieben. Es erfolgt jedoch eine physikalische Trennung zwischen festen Partikeln und in Lösung gehenden markierten Komponenten, und zwar durch Eluieren.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein immunologisches Bestimmungsverfahren, bei dem ein Analyseobjekt an Teilchen gebunden wird, durchführen zu können, ohne daß die Teilchen und die Flüssigkeit voneinander abgetrennt werden müssen.

Die Lösung der gestellten Aufgabe ergibt sich aus den Ansprüchen.

Im Folgenden ist die Erfindung mit weiteren vorteilhaften Einzelheiten anhand eines schematisch dargestellten Ausführungsbeispiels näher erläutert. In den Zeichnungen zeigt

Fig. 1 eine perspektivische Ansicht einer Vorrichtung zum Durchführen des erfindungsgemäßen Verfahrens;

Fig. 2 eine Draufsicht auf eine Strömungszelle der in Fig. 1 gezeigten Vorrichtung;

Fig. 3 einen Querschnitt durch die Strömungszelle gemäß Fig. 2 in der mit 3-3 angedeuteten Ebene;

Fig. 4 ein Schema der in der Vorrichtung gemäß Fig. 1 verwendeten elektronischen Datenverarbeitungsanlage.

In der Praxis wird das erfindungsgemäße Verfahren wie folgt angewandt. Ein mit Markierung versehenes Reagens wird in einer Immunbestimmungsmethode verwendet, welches so gewählt ist, daß es nur mit einem bestimmten Analyseobjekt reagiert, dessen quantitatives Ausmaß zu bestimmen ist. Die umgesetz ten und nichtumgesetzten Teile des Reagens werden zu einer Aufteilung auf Teilchen und Flüssigkeit veranlaßt. Die Teilchen und Flüssigkeit aufweisende Suspension, d. h. die das umgesetzte und nichtumgesetzte Reagens enthaltende Suspension der Immunbestimmungsmethode wird dann unter ei nem Mikroskop untersucht. Wenn die Abbildung im Gesichts feld in Augenschein genommen wird, kann die Anzahl Teilchen gezählt werden. Ausgehend von der Kenntnis der für die Immun bestimmungsmethode verwendeten Menge an Reagens kann die Menge des Reagens in flüssiger Form errechnet werden. Da die Teilchen und Flüssigkeit physikalische Anzeichen des Reagens in zwei verschiedenen Formen sind, d. h. in einer um gesetzten und in einer nichtumgesetzten Form, kann die Menge des mit dem Reagens umgesetzten Analyseobjektes errechnet werden. Auf diese Weise kann die Konzentration des Analyse objektes bestimmt werden.

Eine zum Durchführen des erfindungsgemäßen Verfahrens ge eignete Vorrichtung ist in Fig. 1 gezeigt. Zu der Vorrich tung gehört ein Gehäuse 10 mit einer Küvette bzw. Strö mungszelle, die einen Einlaß 12 für eine Suspension und ei nen Auslaß 14 aufweist, zwischen denen sich ein Kanal 16 erstreckt, der an einem Abbildungs- bzw. Prüfbereich 18 vorbeiführt. Der Kanal 16 ist an seinem Einlaß mit einer Leitung 20 versehen, die an einen Behälter 22 anschließbar ist, welcher Trägerlösung enthält. Wie aus Fig. 2 und 3 her vorgeht, hat der Einlaß 12 für die Suspension im Kanal 16 stromabwärts von der Leitung 20 eine Nadel 24, die an einen Behälter 26 für die zu analysierende Suspension angeschlos sen ist.

Auf den Prüfbereich 18 ist ein Mikroskop 30 fokussiert, und der Prüfbereich selbst wird von unten mittels eines Strobe lichts 32 beleuchtet, als das vorzugsweise das Modell 3018 der US Scientific Instrument Corporation vorgesehen ist, welches eine 2UP1.5 Lampe enthält. Der Ausgang des Mikroskops 30 ist auf eine Ladungskopplungs-(CCD-)Kamera 34 fokussiert, als die vorzugsweise eine Kamera des Modells Nr. TC1160BD der Firma RCA vorgesehen ist. Der Ausgang der Ladungsgekopplungs-Kamera wird in eine Serie von Stehbil dern umgewandelt, die von geeigneten elektronischen Verar beitungseinheiten ausgewertet werden. Als solche eignet sich z. B. die als Bildanalysesystem, Modell C-1285 von Hamamatsu Systems, Inc., Waltham, Massachusetts, vertrie bene Einrichtung. Vorzugsweise ist der Ausgang der Ladungs kopplungs-Kamera 34 an eine elektronische Verarbeitungs einheit 36 angeschlossen, die im einzelnen in Fig. 4 darge stellt ist und zu der ein Schwarz-Weiß-Fernsehmonitor 38 und ein Bilderfasser 40 gehört, der Stehbilder des von der Ladungskopplungs-Kamera beobachteten Objekts speichert. Der Bilderfasser ist vorzugsweise ein Bilderfasser des Mo dells FG08 der Matrox Corporation, Montreal, dessen Ausgang an einen Bildwiederholspeicher 42 des Modells RGB 256 der Matrox Corporation angeschlossen ist, wobei diese beiden Geräte mit einem Multibus 44 der Zentraleinheit (CPU) 46 verbunden sind, bei der es sich vorzugsweise um einen Intel 80/20 Rechner handelt. Dieser Multibus ist ferner mit einem 48K-Speicher 48 mit direktem Zugriff (RAM) der Electronic Solutions Inc. und mit einem 16K-Dual-Port- Speicher 50 mit direktem Zugriff, Modell 117 der Data Corporation verbunden. Der Ausgang des Bildwieder holspeichers ist ferner mit einem Farb-Monitor 52 ver bunden, der dazu benutzt werden kann, digital aufbe reitete Videobilder einzelner Stehbilder zur menschlichen Überprüfung zur Verfügung zu stellen.

Der zweite Ausgang des Dual-Port-Speichers 50 ist an einen Multibus 54 angeschlossen, der mit einer Zentraleinheit 56 der Advanced Micro Devices, 48K-Speicher 58 mit direktem Zugriff (RAM) der Electro nics Solutions und einem entnehmbaren Speicher in Form eines Floppy-Disc-Controllers 60 verbunden ist, z. B. dem Mo dell 8/8 der Advanced Micro Devices sowie mit zwei Einhei ten 62 eines Shugart Floppy-Disc-Speichers.

Bei Verwendung der in Fig. 1 gezeigten Vorrichtung wird die Suspension aus Teilchen und Flüssigkeit der Immunbestim mungsmethode vom Behälter 26 über den Einlaß 12 in die Strö mungszelle geleitet. Wenn die Suspension den Prüfbereich 18 durchläuft, wird ein Bild von der Suspension gemacht. Aus Fig. 2 und 3 ist ersichtlich, daß die Strömungszelle eine Breite und eine Dicke hat, wobei die Abbildung im Prüfbe reich 18 in Richtung im wesentlichen parallel zur Dicke ge bildet wird. Die Abbildung wird von der Ladungskopplungs- Kamera 34 in ein elektrisches Signal umgewandelt. Die La dungskopplungs-Kamera 34 unterteilt das elektrische Signal in eine Vielzahl von Bildelementen. Die Amplitude jedes ein zelnen Bildelements wird in digitale Form gebracht und im 48K Speicher 48 gespeichert. In der Zentraleinheit wird die Abbildung durch Lokalisieren und Quantifizieren der innerhalb des Bildes gesehenen Markierungen der Reagenzien in digitale Form verarbeitet. Die Analyse der Verteilung von Markierungen gibt die Aufteilung des umgesetzten und nichtumgesetzten Reagens wieder. Die Bestimmung erfolgt durch digitale Abbildungs-Mustererkennungstechniken. Derar tige Techniken sind allgemein bekannt, siehe z. B. US-PS 4 097 845.

Die Trägerlösung aus dem Behälter 22 nimmt die Suspension aus dem Behälter 26 zwischen zwei Hüllschichten im Prüfbe reich 18 mit. Durch Einstellen des Durchsatzes an Trägerlö sung kann die Dicke der Suspension aus dem Behälter 26 im Prüfbereich 18 eingestellt werden. Hierdurch wird wiederum die von der Ladungskopplungs-Kamera 34 gesehene Menge Sus pension aus dem Behälter 26 eingestellt, die das Verhältnis von Teilchen zu Flüssigkeit bewirkt, wodurch wiederum der Rauschabstand eingestellt wird.

Nachfolgend soll ein Beispiel der Anwendung des erfindungs gemäßen Verfahrens betrachtet werden, bei dem die Menge an Thyroxin I¹²⁵ in einem zweiten Antikörperpräzipitat, Ziegen- Antikaninchenglobulin-Antikörper bestimmt wird, bei dem das Kaninchenglobulin mit dem radioaktiven Thyroxin umgesetzt worden war. Das Reagens ist mit einem radioaktiven Isotopen material markiert, welches zur Abgabe von Gammastrahlen ge eignet ist. Die umgesetztes und nichtumgesetztes Reagens in fester und flüssiger Phase enthaltende Lösung gibt Gamma strahlen ab. Die radioaktiven Gammastrahlen der Markierung des Reagens prallen auf ein Szintillationskristall, z. B. mit 1% Thallium aktiviertem Natriumjodid auf, was Lichtimpulse erzeugt. Eine Ladungskopplungs-Kamera macht eine Aufnahme dieser Lichtimpulse, die für den Ort und die Menge an Mar kierungen innerhalb des Bildes repräsentativ ist. Lokali sierung und Quantifizierung der Markierungen sind ihrerseits repräsentativ für die Menge und den Ort der Reagenzien. Gleichzeitig kann mit einem Mikroskop und der Ladungskopp lungs-Kamera eine Abbildung der Teilchen innerhalb der Suspension gemacht werden. Ort und Zahl der Teilchen sowie Ort und Zahl der Reagenzien in der gleichen Abbil dung bestimmt dann den Anteil des Reagens, der mit den Teilchen abgeschieden wurde. Die Verteilung der Reagenzien kann dann errechnet und zur Bestimmung der Konzentration des Ana lyseobjektes benutzt werden.

Bei einem weiteren Beispiel zur Ausführung des erfindungs gemäßen Verfahrens wird zur Fluorimmunbestimmung ein Rea gens aus Ziegen-Antihumanimmunglobulin-G-Antikörper mit ei ner Markierung aus Fluoreszeinisothiocyanat an Mikroperlen aus Kunststoff zur Akkumulation veranlaßt, um die Konzen tration von Immunglobulin G in Serum zu bestimmen. Die Sus pension, die umgesetztes und nichtumgesetztes Reagens, ge trennt in feste Form (Teilchen) und flüssige Form enthält, wird durch den Einlaß 12 in den Prüfbereich 18 der Strö mungszelle geleitet. Ein Bild der Suspension mit einer An zeige der Anzahl und des Ortes der darin enthaltenen Teil chen wird mit Hilfe des Mikroskopes 30 von der Ladungs kopplungs-Kamera 34 aufgezeichnet. Da es sich hierbei um eine Fluorimmunbestimmung handelt, wird die Suspension ei ner solchen Bestrahlung ausgesetzt, daß die Markierungen fluoreszieren, d. h. in Abhängigkeit von der auftreffenden Strahlung, typischerweise UV-Licht, sichtbares Licht erzeu gen. Die Fluoreszenz der Markierung wird auch vom Mikroskop 30 wahrgenommen und von der Ladungskopplungs-Kamera abge bildet. Es werden die bei einem Fluoreszenzmikroskop übli chen Filter verwendet. Die Anzahl und der Ort der Markierun gen, wie durch die Fluoreszenz bestimmt, die ein Anzeichen für die Anzahl und den Ort des Reagens ist, trägt gemeinsam mit der Abbildung der Anzahl und des Ortes der interessie renden Teilchen dazu bei, die Aufteilung des Einwirkens der Reagenzien auf das Analyseobjekt zu bestimmen.

Gemäß dem Stand der Technik erfolgt die Trennung der nicht umgesetzten Reagenzien von den umgesetzten Reagenzien da durch, daß zunächst eine Verteilung der beiden Phasen be wirkt wird und dann die feste Phase (Teilchen) von der flüs sigen Phase getrennt wird, ehe die Menge an Reagenzien ent weder in der festen Phase oder in der Flüssigkeit quantifi ziert wird. Es zeigt sich, daß bei dem erfindungsgemäßen Ver fahren keine Notwendigkeit für eine Abtrennung der Teilchen von der Flüssigkeit der die interessierenden Reagenzien ent haltenden Suspension nötig ist. Die Quantifizierung beider Reagenzien innerhalb der Flüssigkeit in der Suspension bzw. der nichtumgesetzten Reagenzien und der an die Teilchen ge bundenen Reagenzien kann gemäß den Techniken der mikroskopi schen Bildanalyse vorgenommen werden, und eine Bestimmung der Aufteilung der Reagenzien, die umgesetzt wurden, und derjenigen, die nicht umgesetzt wurden, kann erfolgen, ohne daß die Teilchen von der Flüssigkeit getrennt werden. Folg lich bietet das Verfahren gemäß der Erfindung insofern Vor teilen als die menschliche Behandlung und die daraus resul tierende Ungenauigkeit und mögliche Fehlerhaftigkeit redu ziert wird. Außerdem wird mit dem erfindungsgemäßen Verfah ren natürlich beim Analyseprozeß selbst Zeit gespart und die von potentiell infektiösen und manchmal radioaktiven Teilchen ausgehende Gefahr auf ein Minimum eingeschränkt.

Es sei besonders hervorgehoben, daß das Bild der Suspension auf einem mikroskopischen Objektträger oder in einer Strö mungszelle gemäß Fig. 1 gemacht werden kann. Die Verwendung einer Küvette oder Strömungszelle erhöht natürlich den Rauschabstand. Ferner kann als Markierung ein leicht z. B. visuell oder mittels optischer Einrichtungen erkennbarer Stoff verwendet werden.

Claims

1. Verfahren zur Bestimmung der anteiligen Menge eines Analyseobjektes, das in einer Lösung zugegen ist, mittels eines Reagens, das eine Markierung mit einer feststellbaren spektralen Charakteristik aufweist und in einer Flüssigkeit gelöst ist, wobei eine Reaktion mit dem Reagens stattfindet, sich Teilchen in Suspension in der Lösung bilden und die umgesetzten Anteile des Reagens von den nicht-umgesetzten Anteilen durch folgende Schritte unterschieden werden:

a) die Suspension mit den darin befindlichen Teilchen wird bildmäßig abgetastet;
b) die Abtastung wird in Form von elektrischen Signalen dargeboten,
c) die elektrischen Signale werden in digitaler Form gespeichert und
d) verarbeitet, wobei die Signale für die Bildstellen, an denen sich Teilchen befinden, und die Signale für die Bildstellen, an denen sich Flüssigkeit befindet, erfaßt werden, und diesen beiden Gruppen von Signalen, welche jeweils "Teilchen" und "Flüssigkeit" repräsentieren, werden Messungen der Intensität der Markierungen, getrennt für "Teilchen" und "Flüssigkeit" zugeordnet,
e) der auf die Teilchen entfallende Anteil der festgestellten Intensität der Markierungen und der auf die Flüssigkeit entfallende Anteil werden gebildet und
f) die anteilige Menge des Analyseobjekts wird aus den ermittelten Anteilen des Schrittes e) errechnet.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Reagens immunspezifisch ist und die Teilchen sich auf Reaktion mit dem Analyseobjekt bilden.

3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Suspension durch eine Strömungszelle geleitet wird, und daß das Bild an dieser Strömungszelle gebildet wird.

4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Markierung visuell wahrnehmbar ist.

5. Verfahren nach Anspruch 3 oder 4, dadurch gekennzeichnet, daß der Suspensionskörper in der Strömungszelle eine Breite und eine Dicke hat, und daß das Bild in Breitenausdehnung des Suspensionskörpers gewonnen wird.

6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß die Dicke des Suspensionskörpers in der Strömungszelle zum Einstellen des Verhältnisses von Teilchen zu Flüssigkeit dort eingestellt wird, wo das Bild gewonnen wird.

7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß der Schritt b) die Segmentierung der elektrischen Signaldarstellung in eine Vielzahl von Bildelementen (Pixel) und die Digitalisierung der Amplitude jedes Bildelements umfaßt.

8. Verfahren nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß als Markierung ein Stoff verwendet wird, der zur Fluoreszenz geeignet ist.

9. Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß das umgesetzte Fluid bestrahlt wird, um die Markierung zur Fluoreszenz anzuregen.

10. Verfahren nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß als Markierung ein Material verwendet wird, welches zur Abgabe von radioaktiver Strahlung geeignet ist.

11. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß die radioaktive in elektromagnetische Strahlung umgewandelt wird.

12. Verfahren nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß die elektromagnetische Strahlung sichtbares Licht ist.