DE3789633T2 - HTLV-III(LAV)Decke-Peptide. - Google Patents

Description

• Die Erfindung betrifft als HTLV-III env bezeichnete synthetische Peptide, deren Sequenz eine konservierte Region des viralen Hüllproteins des ethiologischen Agens für das Erworbene-Immunschwächesyndrom (AIDS) darstellt, Derivate solcher Peptide und die Verwendung solcher Peptide und/oder Derivate in Methoden zur Detektion der Anwesenheit von AIDS Antikörpern in humanem Blut. Von der Region des Hüllproteins, aus der solche Peptide ausgewählt worden sind, wird angenommen, daß sie Sequenzen enthält, die für die immunsupressiven Eigenschaften des Virus verantwortlich sind. Solche Peptide können in immunogenen Zusammensetzungen genutzt werden, die als Vakzine oder zur Erzeugung von Antikörpern in Wirtstieren verwendbar sind, und diese Antikörper wiederum können zur Detektion des HTLV-III Virus in biologischen flüssigen Proben verwendet werden.
• Die hierin offenbarten Resultate basieren zum Teil auf Techniken und Konzepten aus dem Gebiet der Immunologie. Zur Erleichterung werden einige der im Stand der Technik verwendeten allgemeinen Begriffe näher definiert. Der Begriff "immunchemische Reaktion" wird verwendet, um die spezifische Interaktion zwischen einem Antigen und seinem korrespondierenden Antikörper zu bezeichnen, unabhängig von der Meßmethode. Solch eine Reaktion ist durch eine nicht-kovalente Bindung von einem oder mehreren Antikörpermolekülen an ein oder mehrere Antigenmoleküle gekennzeichnet. Die immunchemische Reaktion kann durch eine Vielzahl im Stand der Technik bekannter Immunoassays detektiert werden. Die Begriffe "immunogen" oder "antigenisch" werden hier verwendet, um die Fähigkeit einer gegebenen Substanz zur Stimulierung der Produktion von Antikörpern zu beschreiben, die spezifisch immunreaktiv mit der Substanz sind, wenn diese Substanz einem geeigneten Testtier unter bekannten Bedingungen zur Auslösung einer Antikörperproduktion verabreicht wird. Der Begriff "schützendes Antigen" bezieht sich auf die Fähigkeit eines gegebenen Immunogens, in einer geeigneten Wirtszelle eine Resistenz gegen ein gegebenes Patogen zu verleihen. Der Begriff "Epitop" bezieht sich auf eine spezifische Antikörper-Bindestelle auf einem Antigen. Makromolekulare Antigene wie etwa Proteine haben typischerweise verschiedene Epitope mit unterschiedlichen Antikörperbindungsspezifitäten. Verschiedene Epitope des gleichen Antigens sind mit der Hilfe von monoklonalen Antikörpern unterscheidbar die, bedingt durch ihren hohen Grad an Spezifität, gegen einzelne Epitope gerichtet sind. Zwei verschiedene monoklonale Antikörper, die gegen verschiedene Epitope des gleichen Antigens gerichtet sind, können jeder für sich das Antigen ohne gegenseitige Beeinflussung binden, solange nicht die Epitope so dicht beieinander sind, daß die Bindung des einen die Bindung des anderen verhindert. Der Begriff "immunodominante Region" bezeichnet ein Gebiet auf dem Antigenmolekül, das hauptsächlich für seine Antigenität verantwortlich ist.
• Von 1981 bis heute sind über achtzehntausend (18,000) Menschen diagnostiziert worden, die das Erworbene-Immunschwächesyndrom (AIDS) haben. AIDS ist durch das Auftreten von schweren opportunistischen Infektion charakterisiert worden, die sekundär zu dem Effekt auf das Immunsystem des Körpers auftreten. [Gottlieb, M.S. et al., "Pneumocystis Carinic Pneumonia and Mucosal Candidisis in previously healthy homosexual men: evidence of a new acquired cellular immuno-deficiency", N. Eng. J. Med. 305, 1426-1431 (1981)]. Die Krankheit ist bei männlichen Homosexuellen, Patienten die Blutprodukte erhalten, intravenösen Drogenabhängigen und Individuen, die von Haiti oder Zentralafrika abstammen, gefunden worden [Piot, P. et al., "Acquired immuno-deficiency syndrome in a heterosexual population in Zaire", Lancet 11, 66-69 (1984)]. Vom verursachenden Agens wurde vermutet, daß es viralen Ursprungs ist, da die epidemiologischen Daten von AIDS mit einer übertragbaren Krankheit übereinstimmten. Mindestens drei (3) Retroviren sind aus kultivierten T-Zellen von verschiedenen Patienten mit AIDS, oder aus weißen Blutzellen von Personen mit einem Risiko für die Krankheit, isoliert worden. Ein neues, humanes Retrovirus, genannt Lymphoadenopathie-Assoziiertes-Virus (LAV), wurde entdeckt und seine Eigenschaften waren in Übereinstimmung mit seiner ethiologischen Rolle bei AIDS. Das Virus wurde von einem Patienten mit Lymphoadenopathie isoliert und hat daher seinen Namen [Montagnier, L. et al., "A New Human t-lymphotropic retrovirus: Characterization and possible role in lymphadenopathy and acquired immune deficiency syndromes", in Human T-Cell Leukemia/Lymphoma Virus; R.C. Gallo, M. Essex and L. Gross, eds. (Cold spring Harbor, N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory 1984) 363-370]. Andere humane Retroviren, insbesondere zwei Subgruppen des humanen T-Zell Leukämie/Lymphoma/Lymphotropischen Virus, Typ I [HTTLV-I: Poiesz, B.J. et al. PNAS (USA) 77, 7415-7419 (1980)] und III [Popovic, M. et al., "Detection, isolation and continuous production of cytopathic retroviruses (HTLV-III) from patients with AIDS and pre-AIDS", Science 224, 497-500 (1984)] sind ebenfalls isoliert worden. Noch ein anderes Virus, das AIDS-assoziierte Retrovirus (ARV), wurde als verursachendes Agens vorgeschlagen [Levy, J.A. et al., "Isolation of lymphocytopathic retroviruses from San Francisco patients with AIDS", Science 225 840-842 (1984)]. Die beiden Retroviren HTLV-III und ARV zeigen die gleichen biologischen und sero-epidemiologischen Eigenschaften wie LAV (Levy et al., supra, Popovic et al. supra]. Aus dem obigen zeigt sich, daß mindestens drei (3) Retroviren als das ethiologische Agens von AIDS postuliert worden sind: LAV; ARV; und die HTLV Subtypen I und III.
• LAV, HTLV-III und ARV-II Genome sind molekular kloniert worden [Schüpbach, J. et al., "Serological analysis of a subgroup of human T-lymphotropic retroviruses (HTLV-III) associated with AIDS", Science 224, 503-505 (1984); Mizon, M. et al., "Molecular Cloning of lymphadenopathyassociated virus", Nature 312, 757-760 (1984)]. Die vollständige Nukleotidsequenz des proviralen Genoms von LAV, ARV und HTLV-III ist bestimmt worden [Ratner, L. et al., "Complete nucleotide sequence of the AIDS virus, HTLV III", Nature 313, 277-284 (1985); Sanchez-Pescador, R. et al., "Nucleotide sequence and expression of an AIDS-associated retrovirus (ARV-2)", Science 227, 484-492 (1985); Wain-Hobson, S. et al., "Nucleotide sequence of the AIDS virus, LAV", Cell 40, 9-17 (1985)].
• Ein Grund für die Schwierigkeit bei der Bestimmung des ethiologischen Agens von AIDS war durch die Reaktivität von verschiedenen retroviralen Antigenen mit Serumproben von AIDS-Patienten bedingt. So wurde zum Beispiel gezeigt, daß Serumproben von AIDS-Patienten mit Antigenen von HTLV-I [Essex, M., et al., "Antibodies to Cell Membrane Antigens Associated with Human T-Cell Leukemia Virus in Patients with AIDS", Science 220, 859-862 (1983)] und HTLV-III [Sarngadharan, M.G. et al., "Antibodies Reactive With Human T-Lymphotropic Retroviruses (HTLV-III) in the Serum of Patients With AIDS", Science 224 506-508 (1984)] reagierten. Hüllgenprodukte von HTLV zeigten kreuzreaktive Antigenität mit Antikörpern in Seren von erwachsenen T-Zell Leukämie Patienten [Kiyokawa, T. et al., "Envelope proteins of human T-cell leukemia virus: Expression in Escherichia coli and its application to studies of env gene fimctions", PNAS (USA) 81, 6202-6206 (1984)]. T-Zell Leukämien von Erwachsenen unterscheiden sich vom Erworbenen-Immunschwächesyndrom (AIDS) dadurch, daß HTLV-I T-Zell Malignitäten verursacht, die durch unkontrolliertes Wachstum von T-Zellen charakterisiert sind. Bei AIDS ist es Zelltod statt Zellwachstum. Diese zytopathische Charakteristik von HTLV-III war kritisch bei der endgültigen Bestimmung des spezifisch retroviralen Ursprungs dieser Krankheit. Daher wurde das ethiologische Agens von AIDS durch die Verwendung von immortalisierten humanen neoplastischen T-Zellinien (HT) isoliert, die mit dem für AIDS charakteristischen zytopathischen Retrovirus infiziert waren, das aus AIDS-kranken Patienten isoliert worden war. Die Verwendung dieses Virus in sero-epidemiologischen Assays zeigte eine vollständige Korrelation zwischen AIDS und der Anwesenheit von Antikörpern gegen HTLV-III Antigene [Sarngadharan et al., supra; Schüpbach et al., supra]. Außerdem wurde bei fast 85% der Patienten mit Lymphoadenopathie-Syndrom und bei einem bedeutenden Anteil von asymptomatischen homosexuellen Männern in AIDS-endemischen Gebieten gefunden, daß sie zirkulierende Antikörper für HTLV-III tragen. Zusammengenommen zeigen alle diese Daten, daß HTLV-III das ethiologische Agens für AIDS ist.
• Bis zur erfolgreichen Kultivierung des AIDS Virus unter Verwendung der H-9 Zellinie, war das env AIDS Protein des AIDS Virus nicht isoliert, charakterisiert oder synthetisiert worden. Dies ist zu einem großen Teil dadurch bedingt, daß das Virus zytopathisch ist und daher die Isolierung des Virus nicht möglich war [Popovic, M. et al., supra]. Ms die für den zytopathischen Effekt des Virus resistente humane T-Zellinie entdeckt war, konnte ein molekularer Klon von proviraler DNA erhalten werden.
• Die Notwendigkeit für eine sensitive und schnelle Methode für die Diagnose von AIDS in humanem Blut und dessen Prävention durch Impfung ist sehr groß. Nahezu alle derzeit erhältlichen Assays/Tests sind mit Fehlern behaftet. In der Tat hat das Center for Disease Control (CDC) angezeigt, daß derzeitig erhältliche Tests einzig zum Screenen von Bluteinheiten auf Antikörper gegen HTLV-III verwendet werden. Das CDC ging weiter mit der Mitteilung, daß die derzeit erhältlichen ELISA Tests nicht für das generelle Screening von Hochrisikopopulationen oder als ein diagnostischer Test für AIDS verwendet werden können [Federal Register 50(48), 9909, 12. März 1985]. Die Fehler sind dem Versäumnis, ein spezifisch antigenes Protein des ethiologischen Agens für AIDS zu benutzen, zugeschrieben worden. Die vorher verwendeten Proteine wurden aus viralen Lysaten erhalten. Da die Lysate aus mit dem Virus infizierten humanen Zellen gemacht werden, d. h. die Zellen werden zum Wachstum des Virus verwendet, enthält das Lysat humane wie auch virale Proteine. Daher ist die Präparation eines reinen Antigens eines viralen Proteins sehr schwierig. Das verwendete Antigen produziert sowohl falsch-positive wie falsch-negative Resultate [Budiansky, S., AIDS Screening, False Test Results Raise Doubts, Nature 313 583 (1984)].
• Die durch die Verwendung von solchen Lysatproteinen/-peptiden verursachten Fehler können durch die Verwendung einer Zusammensetzung zum Binden von AIDS-Antikörpern vermieden werden, die weitestgehend frei von nicht-AIDS-spezifischen Proteinen ist. Zusammensetzungen, die weitestgehend reine HTLV-III env Peptidiragmente der vorliegenden Erfindung sind, können als Antigene verwendet werden. Die HTLV-III env Peptide der vorliegenden Erfindung umfassen eine als HTLV-III env (578-608) bezeichnete hochkonservierte Epitopsequenz, die ihre Verwendung zum Screenen, Diagnostizieren und/oder Abwehren des AIDS-Virus durch Impfung erlauben.
• Chang T.W. et al. beschreiben die rekombinante Herstellung eines 82 Aminosäure enthaltenden Polypeptids, das zu einer Subsequenz des p41 Hüllproteins von HTLV-III korrespondiert, sowie dessen Verwendung in der Detektion von HTLV-III Antikörpern in humanen Seren (BioTechnology 3, 905-905 (1985)).
Beschreibung der Erfindung
• Die Peptide der vorliegenden Erfindung können durch die folgende Formel dargestellt werden:
• W-X-Ala-Arg-Ile-Leu-Ala-Val-Glu-Arg-Tyr-Leu-Lys-Asp-Gln-Gln-Leu-Leu-- Gly-Ile-Trp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ile-Cys-Thr-Thr-Ala-Val-Y-Z (1)
• worin W H-, Cys- oder Tyr-; X eine Bindung, Y eine Bindung und Z -OH, -NH&sub2; oder Cys-NH2 ist.
• Die Derivate des Peptids der Formel I, die Cysteine entweder am Amino- oder Carboxy-Terminus haben, werden dazu verwendet, eine verbesserte Kopplung des Peptids an immunogene Trägermaterialien zu ermöglichen, wenn das Peptid als ein Immunogen zur Erzeugung von Antikörpern verwendet wird. Die Derivate der Formel I worin W Tyrosin ist, stellen ein bevorzugtes Substrat zur Radiojodierung dar und erlauben dadurch, daß diese Verbindungen als radiomarkierte Liganden in einem Radio-Immunoassay für HTLV-III Antikörper in Testflüssigkeiten eingesetzt werden können.
• Eine besonders bevorzugte Spezies dieser Erfindung ist HTLV-III env (578-608), d. h. eine Verbindung der Formel I worin W und Z H- und -NH2 und X und Y jedes für sich eine Bindung sind.
• Verbindungen der vorliegenden Erfindung von Formel I können in geeigneter Weise durch die Verwendung von im Stand der Technik bekannten konventionellen Peptidsynthesemethoden hergestellt werden. Solche Verfahren schließen die Flüssigphasensynthese und Festphasensynthese, unter Anwendung der Methodologie wie sie von R.B. Merrifield entwickelt wurde, ein [J. Am. Chem. Soc. 85, 2149-2154 (1963)]. Bei der Festphasensynthesemethode, die die bevorzugte Methode zum Herstellen der Verbindungen der vorliegenden Erfindung gemäß Formel I darstellt, wird ein polymerer Festphasenträger verwendet, an den die carboxyterminale Aminosäure kovalent gebunden ist und in Sequenz die anderen Aminosäuren über Peptidbindungen angehängt werden. Automatische Festphasen-Peptidsynthesizer, die für die Ausführung dieser Methodologie geeignet sind, sind kommerziell erhältlich und die Synthese wird gemäß den Instruktionen der Hersteller ausgeführt. Für den Fall, daß eine Amidgruppe am Carboxylterminus der Verbindungen der Formel I gewünscht wird, wird als Harz ein Benzylhydrylamin-Harz verwendet, das ein kommerzieller Artikel ist. Abspaltung der Peptidkette von solch einem Harz resultiert in der Bildung einer Amidgruppe, wie sie am Carboxylterminus gewünscht ist.
• Nach Vervollständigung der automatischen Peptidsynthese werden die gewünschten Peptide vom Harz mittels im Stand der Technik bekannter Methoden, wie z. B. wasserfreiem flüssigem Wasserstoffnuorid (HF), entfernt. Diese Behandlung spaltet ebenfalls jegliche Seitenkettenschutzgruppen ab. Die Peptide können dann in konventioneller Weise, wie z. B. durch die Verwendung von Hochauflösender-Flüssigkeitschromatographie, bevorzugt mit einer Umkehrphasensäule vom C&sub1;&sub8; Typ, gereinigt werden.
Detaillierte Beschreibung der Erfindung
• In Übereinstimmung mit der vorliegenden Erfindung, hat die Suche nach dem env Protein des ethiologischen Agens für das Erworbene-Immunschwächesyndrom (AIDS) zur Isolierung und Sequenzierung und Expression des proviralen Gens des AIDS Virus geführt. Es ist nun entdeckt worden, daß die postulierten ethiologischen Agentien von AIDS, Lymphoadnopathie-assoziiertes Virus (LAV), AIDS-assoziiertes-Retrovirus (ARV) und humanes T-Zell Leukämie/Lymphoma/Lymphotropisches Virus, HTLV-III, tatsächlich Varianten des gleichen Virus sind. Für die Zwecke der vorliegenden Erfindung und Ansprüche wird im folgenden das AIDS verursachende Virus als AIDS Virus bezeichnet. Unter AIDS Virus wird auch der Einschluß der Varianten, die als verursachendes Agens von AIDS postuliert worden sind, nämlich LAV, ARV und HTLV-III, verstanden. Das env Protein des AIDS Virus (env AIDS) ist ein 97,200 Dalton Protein mit 32 potentiellen N-Glykosylierungsstellen. Die Nukleotidsequenzanalyse des AIDS env Gens des mutmaßlichen ethiologischen Agens von AIDS demonstriert, daß alle Viren Varianten des gleichen Virus sind. Eine um ungefähr 1-20% abweichende Variation der Sequenz des env Gens von HTLV-III von den Sequenzen der env Gene der anderen Viren LAV und ARV-II ist gefunden worden.
• Das integrierte provirale Genom von HTLV-III wurde aus der genomlschen DNA von mit HTLV-III infizierten H9 Zellen kloniert [siehe Shaw et al., Science 226, 1165-1171 (1984)]. Die vergleichenden Nukleotisequenzen von LAV, ARV-II und HTLV-III sind durch Ratner, Nature 313, 277-284 (1985); Sanchez-Pescador et al., Science 227, 484-492 (1985); und Wain-Hobson et al., Cell 40, 9-17 (1985) bestimmt worden.
• Eine der konservierten Regionen in diesen verschiedenen viralen env Gensequenzen ist die den Aminosäuren 558-628 entsprechende Region, die die wichtige Epitopstelle um 578-608 enthält. Es wird daher angenommen, daß diese Region eine bevorzugte antigene Stelle zur Verwendung in der Detektion der Anwesenheit von AIDS Viren oder dagegen gerichteten Antikörpern darstellt, die in den Seren von humanen Subjekten enthalten sind.
• In einer diagnostischen Ausführungsform der vorliegenden Erfindung können die Peptide der Formel I in einem Sandwichtyp Enzym-Immunoassay verwendet werden, um direkt die Gegenwart von Antikörpern für das AIDS Virus in Serumproben zu bestimmen. Solch ein Assay kann sehr einfach durch Belegen von Mikrotiterplatten mit einer verdünnten Lösung eines Peptids der Formel I, bevorzugt worin W gleich H und Z gleich -NH2 oder Cys-NH&sub2; ist, ausgeführt werden. Die mit Peptid überzogenen Mikrotiterplatten können dann mit der Testprobe für eine ausreichend lange Zeit inkubiert werden, um jeglichen anwesenden Antikörpern die Komplexierung mit dem Peptid zu ermöglichen. Nachdem die Inkubationsperiode abgeschlossen ist, wird die Serumprobe entfernt, die Platten gewaschen und dann mit anti-human IgG behandelt, das an ein Enzym wie etwa Meerettichperoxidase gekoppelt ist. Solche Reagenzien sind kommerziell erhältlich. Falls ein Antikörper gegen das AIDS Virus in der Serumprobe vorhanden ist, wird es durch das Peptid gebunden und von dem anti-human IgG komplexiert, das das Enzymlabel trägt. Nach Entfernung des Reagenzes, wird das Substrat für das Enzym hinzugegeben und die Inkubation in der Mikrotiterplatte erlaubt. Wenn Antikörper in der Probe anwesend sind, wird eine Farbreaktion in der Mikrotiterplatte beobachtet.
• In einer alternativen diagnostischen Ausführungsform werden Verbindungen der Formel I, worin W Tyrosin ist, in konventioneller Weise, wie etwa z. B. durch die Verwendung von Chloramin-T mit 125I als radioaktivem Liganden, radiojodiert.
• Spezifische Antikörper für das AIDS Virus können durch die Verwendung von Verbindungen der Formel I als Hapten erhalten werden, worin entweder W oder Z Cystein bei der Herstellung einer immunogenen Zusammensetzung ist. Solch eine immunogene Zusammensetzung wird durch die Bindung der vorgenannten Haptene mittels der angegebenen Cysteineinheit an ein konventionelles immunogenes Trägermaterial hergestellt. Wie hierin verwendet, bedeutet der Begriff "immunogenes Trägermaterial" den Einschluß solcher Materialien, die die Eigenschaft haben, unabhängig eine immunogene Antwort in einem Wirtstier hervorzurufen, und die kovalent an die oben beschriebenen Haptene, bevorzugt durch die besagte Cysteineinheit, gekoppelt werden können. Geeignete Trägermaterialien beinhalten z. B. Proteine; natürliche oder synthetische polymere Verbindungen wie etwa Polypeptide z. B. Polylysine oder Copolymere von Aminosäuren, Polysaccharide; und dergleichen. Besonders bevorzugte Trägermaterialien sind Proteine und Polypeptide, insbesondere Proteine.
• Die Identität des Proteinmaterials, das in der Herstellung für ein in der vorliegenden Erfindung geeignetes Immunogen verwendet wird, ist nicht kritisch. Beispiele für geeignete Proteine, die für die Anwendung der Erfindung geeignet sind, beinhalten Säugerserumproteine wie z. B. Thyroglobulin, humanes gamma-Globulin, humanes Serumalbumin, Rinder-Serumalbumin, methyliertes Rinder-Serumalbumin, Hasen-Serumalbumin und Rinder gamma-Globulin und Napfschnecken Hemocyanin. Ein besonders bevorzugtes Protein für diesen Zweck ist Thyroglobulin.
• Die kovalente Kopplung des Peptidhaptens an das immunogene Trägermaterial kann mittels im Stand der Technik bekannter Methoden ausgeführt werden. Geeignete Reagenzien für diesen Zweck umfassen N-Succinimidester, Carbodiimide, EEDQ (N-Ethoxycarbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydroquinolin) und dergleichen. Ein besonders bevorzugtes Reagenz zur Verwendung in der Kupplung des Peptidhaptens an das Thyroglobulin in der bevorzugten Ausführungsform ist m-Maleinimidobenzoyl-N-succinimidester.
• Das vorgenannte Immunogen kann zum Induzieren einer Bildung für AIDS-Virus-spezifische Antikörper in Wirtszellen durch Injizierung des Immunogens in solch einen Wirt, bevorzugt unter Verwendung eines im Stand der Technik bekannten Adjuvants, wie z. B. des vollständigen oder unvollständigen Freund's Adjuvants, benutzt werden. Erhöhte Titer können durch wiederholte Injektionen über eine Zeitperiode erhalten werden. Geeignete Wirtstiere für diese Zwecke umfassen Säuger wie etwa Hasen, Pferde, Ziegen, Meerschweinchen, Ratten, Kühe, Schafe etc. Das resultierende Antiserum wird Antikörper enthalten, die selektiv mit dem AIDS Virus, z. B. mit HTLV-III Präparationen, die das env (578-608) Epitop enthalten, komplexieren. Das Antiserum kann in bekannter Weise affinitätsgereinigt werden indem dieses Antiserum über eine Affinitätssäule gegeben wird, die aus einem Peptid der Formel I, worin W bevorzugterweise Cys ist, hergestellt ist, das an eine feste Trägermatrix wie etwa Sepharose gekoppelt ist.
• In einem weiteren Aspekt dieser Erfindung ist es möglich monoklonale Antikörper spezifisch für das vorgenannte 578-608 Epitop des env Gens von HTLV-III zu produzieren. Die Herstellung von monoklonalen Antikörpern kann gemäß des von Köhler und Milstein [Nature 256, 495-597 (1975)] allgemein beschriebenen Verfahrens ausgeführt werden. Die durch diese Methode resultierenden Hybridzellen haben die Eigenschaft, einen Antikörper von vordefinierter Spezifität zu sekretieren. Die Spezifität ist die von den in der Fusion involvierten Lymphozyten produzierten Antikörpern. Die Hybridzellen können kloniert und stabil in Kultur gehalten werden, um in dem Kulturüberstand Antikörper für eine spezifische Determinante oder Epitop zu produzieren.
• Die generelle Methode zur Produktion von Hybrid-Zellinien des oben beschriebenen Typs umfaßt die Schritte der Immunisierung eines Tieres (gewöhnlich einer Ratte oder Maus, aber nicht nötigerweise eine von diesen) mit dem beschriebenen Immunogen, d. h. eines Peptides der Formel I worin W oder Z Cystein ist, das kovalent an ein immunogenes Trägermaterial gebunden ist. Nachdem dem Immunsystem Zeit gegeben worden ist, Lymphozyten, die den Antikörper gegen das Immunogen sekretieren, zu erzeugen, wird das Tier getötet und eine Suspension der Milz hergestellt. Fusion zwischen diesen Zellen und Myelomazellen wird durch in Kontaktbringen in Gegenwart eines Fusionspromotors (z. B. Polyethylenglykol) erreicht. Ein kleiner Prozentsatz der Zellen fusioniert und produziert Hybrid-Myelomazellen. Die Immunisierung resultiert in einer Vielzahl von verschiedenen Lymphozyten, die jeder für sich Antikörper gegen eine unterschiedliche antigene Determinante sekretieren, und diese Charakteristik wird auch genetisch auf die Hybridzelle übertragen. Es ist bei vorsichtigem Screenen möglich, aus einer Kultur von Hybridzellen eine Zelle zu isolieren, die die gewünschte Spezifität für das 578-608 Epitop der env Region des HTLV-III Virus hat. Solche Zellen können durch im Stand der Technik bekannte Methoden kloniert und kultiviert werden, so daß sie eine kontinuierliche Quelle des gewünschten monoklonalen Antikörpers darstellen.
• Jede im Stand der Technik bekannte konventionelle Immunoassay-Methode kann unter Anwendung der Antikörper der vorliegenden Erfindung verwendet werden. Eine geeignete Radio-Immunoassay Methode unter Verwendung der oben beschriebenen Reagenzien kann z. B. ausgeführt werden indem man eine Probe, die das HTLV-III Virus enthält, mit einer bekannten Menge des markierten Thyrosinanalogs von Formel I und dem HTLV- III (578-608) env Protein spezifischen monoklonalen oder polyklonalen Antikörper mischt, den Bindungsgrad des markierten Analogs mißt und die Menge von AIDS Viren, die in der Probe anwesend ist, durch Vergleich dieses Bindungsgrades mit einer Standardkurve bestimmt, die durch Mischen bekannter Mengen von AIDS Viren mit festen Mengen von markiertem Analog und besagtem Antikörper und Bestimmen des Bindungsgrades für jede bekannte Menge von Virus oder viralem Protein erhalten wurde.
• Eine andere diagnostische Ausführungsform der Erfindung ermöglicht einen Radio-Immunoassay zur Detektion der Gegenwart von AIDS Antikörpern in Seren. In solch einem Assay werden Serumproben seriell in Puffer verdünnt und mit einem radiojodierten Analog eines Peptides der Formel I, worin W Tyr ist, gemischt. Nach Inkubation wird antihuman IgG hinzugegeben und die Mischung erneut inkubiert. Nach Zentrifugation wird die an den präzipitierten Antikörperkomplex gebundene Radioaktivität gemessen. Die Gegenwart von AIDS Antikörpern wird durch die Zählwerte bestimmt, die als Überschuß über den Hintergrundwerten von normalen Patientenseren beobachtet werden.
• In einem weiteren diagnostischen Aspekt der Erfindung kann ein immunometrisches Assayverfahren unter Verwendung der wie oben produzierten Antikörper der vorliegenden Erfindung durchgeführt werden. In einer repräsentativen Ausführungsform einer solchen Assaymethode werden duplizierte Proben gefahren. Das Verfahren benutzt 100 ul einer Suspension von an Agarosepartikeln immobilisierten Antikörpern gemischt mit 100 ul Serum und 100 ul löslichem ¹²&sup5;I-markiertem Antikörper. Diese Mischung wird für eine Zeitperiode inkubiert, die von einer viertel Stunde bis 24 Stunden reicht. Nachfolgend zu dieser Inkubation werden die Agarosepartikel durch Zugabe von Puffer gewaschen und dann zentrifugiert. Nach Entfernung der Waschflüssigkeit durch Absaugen wird das resultierende Pellet der Agarosepartikel dann auf gebundene ¹²&sup5;-I-markierte Antikörper gezählt. Die so für jeden der Komplexe erhaltenen Zahlen können dann mit Kontrollen verglichen werden.
• In einer weiteren diagnostischen Ausführungsform kann das Antigen (chemisch synthetisierte Peptide gemäß Formel I) auf Polystyrol-Mikrotiterplatten aufgebracht werden. Ein Überschuß an Antigen wird durch Waschen entfernt und die Platten werden zur Verhinderung von unspezifischen Bindungen blockiert. Zu den beschichteten und blockierten Antigenplatten werden Patientenproben sowie positive und negative Kontrollen hinzugegeben und bei 37º C für 30 Minuten inkubiert. Die Platten werden zur Entfernung ungebundener Antikörper gewaschen und dann Ziegen-Antihuman.Immunglobuline, die an Meerettichperoxidase (HRP) gekoppelt sind, zugegeben. Dem HRP Konjugat wird eine Reaktion bei 37º C von 30 Minuten gestattet und dann werden die Platten zur Entfernung von unbehandeltem HRP Konjugat gewaschen. Als HRP Substrat wird Orthopenylendiamindihydrochlorid (OPD) zu der Platte zugegeben und für 15 Minuten bei Raumtemperatur reagiert. Die Enzymreaktion ist durch Addition von H&sub2;SO4 beendet und die resultierende gelbbraune Farbe, die durch das HRP produziert wird, wird in einem Spektrophotometer abgelesen. Die bei 490 nm abgelesene optische Dichte zeigt die Gegenwart von HRP Konjugat, das an das human IgG gebunden ist, welches wiederum an das Antigen auf der Platte gebunden ist.
• In einem weiteren Aspekt der vorliegenden Erfindung können Peptide der Formel I, insbesondere solche die als W oder Z Cystein haben, in Vakzine eingefügt werden, die in der Lage sind eine schützende Immunität gegen das AIDS Virus zu induzieren. Bekannte Techniken können zur Verstärkung der Antigenität von solchen Peptid-Vakzinpräparationen eingesetzt werden, wie z. B. durch Kopplung solcher Peptide durch die Cysteineinheit an ein Toxin wie etwa das Diphteriatoxin oder das Tetanustoxin. Es ist ebenfalls möglich solche Peptide an anorganische Trägermaterialien zu koppeln, die die Immunogenität verstärken indem solche Peptide dem Wirtssubjekt in einer Weise präsentiert werden, die dem normalen Antigen auf der viralen Oberfläche entspricht. Solche anorganischen Trägermaterialien beinhalten Muminiumhydroxid. Es ist innerhalb des Wissens der Technik, solche Vakzinzusammensetzungen in Kombination mit Adjuvantien oder anderen Verstärkern der Immunantwort, wie etwa Immuninterferon, Interleukin-2, Thymosin-alpha 1 und dergleichen, zu verwenden. Zusätzlich kann die Vakzinzusammensetzung auch andere Antigene wie z. B. Hepatitis Kern- oder Oberflächenantigen beinhalten, um eine Immunität für andere Krankheiten zusätzlich zu AIDS zu ergeben. Es ist ebenfalls innerhalb des Wissens der Technik Vakzinzusammensetzungen herzustellen, die die Peptide der vorliegenden Erfindung in Liposomen einfügen, als ein Mittel, um die Peptide in einer gewünschten Orientierung zum Induzieren der Immunität in einem Wirt zu bewahren.
• Wege der Darreichung, der Antigendosierung, der Anzahl und Häufigkeit von Injektionen sind alle Gegenstand der Optimierung innerhalb des Umfangs der gewöhnlichen Fachkenntnisse, insbesondere im Hinblick auf die Tatsache, daß es Erfahrungen in der Technik gibt, durch Injektion von anderen ähnlichen Antigenen, Immunität gegen andere virale Infektionen zu erhalten. Es wird erwartet, daß eine zur Verfügung gestellte Immunität gegen AIDS Infektionen für solche Individuen von besonderer Bedeutung ist, die noch nicht vorher AIDS ausgesetzt waren, wie z. B. Individuen die in einer Hochrisikopopulation sind, wie etwa Homosexuelle, Drogenabhängige, Haitianer und Zentralamerikaner und Individuen, die Bluttransfusionen erhalten könnten. Es wird ebenfalls erwartet, daß durch Immunisierung der Mütter während der Schwangerschaft eine einstweilige Immunität für Säuglinge erhalten wird.
• In weiteren Experimenten wurde gefunden, daß polyklonale Antikörper, die in Hasen durch die gleichen an Napfschnecken-Hemocyanin gekoppelten Peptide erzeugt wurden, mit rekombinantem HTLV-III env Protein immunoblotten.
• Die obigen Resultate zeigen, daß Peptide der Formel I, wie oben beschrieben, für die Verwendung in den beschriebenen diagnostischen Assays und Vakzinzusammensetzungen geeignet sind.
• Die vorliegende Erfindung ist durch die folgenden Beispiele weiter illustriert. In diesen Beispielen bedeutet die Abkürzung Tos Tosylat, 2-Cz bedeutet 2-Chlorocarbobenzoky, OBzl bedeutet O-Benzyl, Dmb bedeutet Dimethylbenzyl, BOC bedeutet tert-Butyloxycarbonyl, Dcb bedeutet 2,6-Dichlorobenzyl und For bedeutet Formyl.
Beispiel 1 Herstellung von Boc-Val-Benzhydrylamin Harz (1)
• Benzhydrylamin-Harz (BHA) (5,0 g, 0,5-0,7 meg/g) wurden mit Boc-Val- OH (3,04 g, 14 mmol) in CH&sub2;Cl&sub2; (25 ml) mit Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) (2,88 g) für 18 Stunden gekoppelt. Das resultierende Boc-Val-BHA-Harz wurde mit CH&sub2;Cl&sub2; (2·75 ml), N,N-Dimethylformamid (DMF) (1·75 ml), MeOH (2·75 ml), CH&sub2;Cl&sub2; (2·75 ml) gewaschen und getrocknet. Ein Miquot wurde hydrolysiert (1 ml 6M propionische-HCL bei 130º C für 2 Stunden). Die Aminosäureanalyse zeigte eine Substitution von 0,33 mmol Val pro Gramm des Harzes. Die verbleibenden Aminogruppen wurden mit Ac2O/Pyridin acetyliert. Ausbeute: 5,36 g
Beispiel 2 Herstellung von HTLV-III env (578-608)-NH2 (2)
• BOC-Val-BHA-Harz (5,0 g, 1,65 mmol) aus Beispiel 1 wurde in ein Reaktionsgemäss gegeben, das mit einem Model S-500 Schüttler verklammert ist, welches mit einem RD-20 Schüttelkopf (Kraft Apparatus, Inc., Minneola, NY) ausgerüstet war. Festphasensynthese wurde unter Anwendung eines manuellen Verfahrens für insgesamt 30 Zyklen mit den folgenden Nα-BOC Aminosäuren ausgeführt:
• BOC-Ma, BOC-Thr(Bzl), BOC-Thr(Bzl), BOC-Cys(Dmb), BOC-Ile, BOC-Leu, BOC-Lys(2-Cz), BOC-Gly, BOC-Ser(OBzl), BOC-Cys(Dmb), BOC-Gly, BOC-Trp(For), BOC-Ile, BOC-Gly, BOC-Leu, BOC-Leu, BOC-Gln, BOC-Gln, BOC-Asp(OBzl), BOC-Lys(2-Cz), BOC-Leu, BOC-Tyr(Dmb), BOC-Arg(Tos), BOC-Glu(OBzl), BOC-Val, BOC-Ala, BOC-Leu, BOC-Ile, BOC-Arg(Tos) und BOC-Ala und ergaben 8,66 g an geschütztem Peptidharz. Das geschützte Peptidharz (1 g) wurde mit wasserfreier flüssiger HF, die 10% Dithioethan enthielt, bei 0º C für eine Stunde behandelt. Die HF wurde bei 0º C evaporiert (Hochvakuum, CaO Falle) und das rohe Peptid- und Harzgemisch mit EtOAc erfolgreich trituriert, mit TFA extrahiert, evaporiert und der Rückstand mit Ether trituriert und getrocknet. Ausbeute: 545 mg. Das Rohprodukt wurde in 10 ml Wasser, das 0,25% Trifluoressigsäure (TFA) enthielt, aufgelöst, filtriert (über 0,45 u HA Milliporefilter) und auf eine Synchropak RP-P Säule (2·50 cm) geladen.
• Die Säule wurde mit einem Lösungsmittelsystem, das aus (A) H&sub2;O (enthaltend 0.025% TFA) und (B) CH&sub3;CN (enthaltend 0,025% TFA) bestand, mit einem linearen Gradienten von 20%-45% (B) in 150 Minuten eluiert (4 ml/min). Fraktionen wurden gesammelt (1 min/Fraktion) und Aliquots durch das analytische HPLC System analysiert. Die Produkte, die in den Fraktionen 99-104 auftauchten, wurden zusammengegeben, evaporiert und lyophilisiert und ergaben reines HTLV-III env (578-608) -NH2. Ausbeute: 22 mg. Mittels analytischer HPLC wurde gezeigt, daß das Produkt homogen ist und es ergab die erwartete Aminosäurezusammensetzung (Hydrolysierung in 6N HCl; 1% Thioglykolsäure (TGA); 150ºC; 1 Stunde): Thr, 2,05; Ser, 1,05; Tyr, 0,90; Trp, 0,60* (110ºC; 24 Stunden); Asp, 1,04; Glu, 2,70; Gly, 3,00; Ma, 2,85; Val, 1,95; Lys, 1,95 (72ºC; 110 Stunden); Ile, 2,65; Leu, 5,37; Arg, 1,98. *Trp teilweise zerstört.
Beispiel 3 Konjugation von HTLV-III env (578-608) -NH2 mit Thyroglobulin (3)
• Thyroglobulin (TG), (Rind, Sigmatyp, 1,5 mg) wurde in 0,250 ul 0,01M NaH2 PO&sub4; (pH 7,3) aufgelöst und eine Lösung von m-Maleinimidobenzoyl-N- succinimidester (MBS), (0,7 mg in 100 ul DMF) wurde bei 25º zugegeben und die Reaktionsmischung für 30 Minuten gerührt (magnetisch). Die Reaktionsmischung wurde auf eine Sephadex G-25 Säule (1,5·25 cm) gegeben, die vorher mit 0,05M NaH2PO4 (pH 6,0) equilibriert worden war. Fraktionen (1 ml/min.) wurden gesammelt und die erste große Spitze (280 nm Detektion) wurde vereinigt (MB-TG Komplex). Das HTLV-III env (578-608) -NH&sub2; Peptid (5 mg) in 1 ml 0,05M NaH&sub2;PO&sub4; (pH 6,0) wurde zu der den MB-TG Komplex enthaltenden Lösung zugegeben. Der pH wurde auf 7-7,5 durch Zugabe von 1,0N NaOH (ul Mengen) eingestellt und Rühren erfolgte bei 25º für drei Stunden. Die heterogene Mischung wurde gegen Dulbecco's Phosphat-gepufferte Salzlösung unter wiederholten Wechseln bei 4ºC über eine 72 stündige Periode dialysiert (MW Absperrung 3500). Die dialysierte Lösung (10 ml) wurde direkt für die Immunisierung von Hasen verwendet.
Beispiel 4 ELISA (Enzyme-linked immunosorbance assay) Beschichtungs-Verfahren
• Das synthetische Peptid HTLV-II env (578-608) -NH2 wurde in 0,05M Carbonat-Bicarbonat-Puffer, pH 9,6, in einer Konzentration von 1 mg/ml suspendiert. Diese Stammlösung wurde weiter verdünnt, um eine Endkonzentration von 25 ug(ml zu erhalten. Einhundert Mikroliter dieser Lösung wurden in jede Vertiefung einer Falcon "Pro-bind" Polystyrol Mikrotiterplatte gegeben (Falcon 3915). Die Platten wurden bei 37ºC für 16-18 Stunden inkubiert. Die Platten wurden dann fünfmal mit dionisiertem Wasser unter Verwendung eines automatischen Plattenwaschers gewaschen. Um eine unspezifische Bindung auf der Platte zu reduzieren, wurden 200 Mikroliter eines 0,1M Tris-Acetatpuffers, pH 8,6, enthaltend 1,0% Rinderserumalbumin (BSA) und 0,01% Thimerosal in jede Vertiefung gegeben. Die Platten wurden bei 37ºC für im Minimum eine Stunde inkubiert und fünfmal mit deionisiertem Wasser gewaschen. Diese Platten sind dann fertig zur Verwendung.
ELISA Verfahren
• Alle Reagenzien wurden vor Ihrer Verwendung auf Raumtemperatur gebracht. Proben wurden bei einer 1 : 100 Verdünnung gefahren. Ein ml der verdünnten Probe, enthaltend 50% normales Ziegenserum (hitzeinaktiviert bei 56ºC für 30 Minuten und dann steril filtriert) in Phosphat-gepufferter Salzlösung mit 0,05% Tween 20 und 0,01% Thimerosal, werden zu jedem Teströhrchen für jede zu untersuchende Probe gegeben. Zehn Mikroliter von den zu testenden Serum-/Plasma-Proben wird dazugegeben und durch Verwirbeln gemischt und während 5 Minuten ins Gleichgewicht gebracht. Einhundert ul der verdünnten Proben, positive Kontrolle und negative Kontrolle werden doppelt zu der Platte gegeben. Die positiven und negativen Kontrollen sind vorverdünnte positive (enthalten Antikörper für HTLV-III) und negative (keine Antikörper für HTLV-III) Proben. Die Proben werden für 30 Minuten bei 37ºC inkubiert. Die Platten werden dann in 2 Zyklen auf einen automatischen Wascher (Skatro) unter Verwendung von deionisiertem Wasser gewaschen. Ein Mikroliter des HRP-Konjugats, Tris-Acetatpuffer enthaltend 20% fötales Kälberserum, 0,05% Tween 2,0, 0,01% Thimerosal und Ziegen anti-human Immunglobuline gekoppelt an HRP (Boehringer- Mannheim), werden zu jeder Vertiefung unter Verwendung eines Vielkanalpipettors zugegeben. Die Platten werden bei 37ºC für 30 Minuten inkubiert und wie vorher gewaschen. Während der HRP Konjugatinkubation wird eine Enzym-Substratlösung unter Verwendung einer o-Phenylendiamin Tablette (200 umol/Tablette) in 5 ml Puffersubstratlösung (6 mM Wasserstoffperoxyd in 100 mM Citrat, pH 5,2) hergestellt. Dieses Reagenz ist lichtempfindlich und muß vor Licht geschützt werden. Einhundert Mikroliter der Enzym-Substratlösung werden zu jeder Vertiefung gegeben und die Platten werden bei Raumtemperatur im Dunkeln für 15 Minuten inkubiert. Einhundertfünfzig Mikroliter Stoplösung (1N N&sub2;SO&sub4;) wird in jede Vertiefung zur Beendigung der Reaktion gegeben. Die Platten werden bei 490 nm abgetastet, um die optische Dichte jeder einzelnen Vertiefung zu bestimmen.
• Negative Kontrollen ergaben eine optische Dichte zwischen 0,05-0,100 OD Einheiten. Die positiven Kontrollen ergaben ODs zwischen 0,900-1,000 OD Einheiten. Proben mit ODs über 0,200 wurden als positiv in diesem Elisa angesehen.
• Fünfundvierzig positive HTLV-III Seren (diese Proben waren positiv in einem kommerziellen Elisa und durch Western-Blotting bestätigt) und fünfundvierzig negative Seren (in kommerziellen Elisas negativ) wurden in dem Peptid Elisa gefahren. Der Elisa detektierte 45/45 positive (ODs von 0,352 bis > 1,5 OD Einheiten) und 0/45 negative (ODs reichten von 0,000 bis 0,163 OD Einheiten) und ergiebt damit eine Sensitivität und Spezifität von 100%.

Claims (24)

1. Ein Peptid mit der Formel

W-X-Ala-Mg-Ile-Leu-Ala-Val-Glu-Mg-Tyr-Leu-Lys-Asp- Gln-Gln-Leu-Leu-Gly-Ile-Trp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu- Ile-Cys-Thr-Thr-Ala-Val-Y-Z (I)

worin W H-, Cys- oder Tyr; X eine Bindung, Y eine Bindung und Z -OH, -NH2 oder -Cys-NH2 ist.

2. Das Peptid gemäß Anspruch 1, welches HTLV-III env (578-608) -NH2 ist.

3. Eine Immunogen-Zusammensetzung enthaltend ein Peptid gemäß Anspruch 1, worin einer von W und Z Cystein ist, das kovalent an einen immunogenen Träger gebunden ist.

4. Die Zusammensetzung von Anspruch 3, worin das immunogene Trägermaterial Thyroglobulin ist.

5. Ein Peptid gemäß Anspruch 1 oder 2 als Bestandteil eines Vakzins.

6. Ein Peptid gemäß Anspruch 1 oder 2 als Bestandteil einer immunogenen Zusammensetzung.

7. Ein Verfahren zur Herstellung eines Peptides gemäß Anspruch 1 oder 2, dadurch charakterisiert, daß herkömmliche Methoden der Peptidsynthese verwendet werden.

8. Ein Verfahren gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß Methoden der Festphasensynthese verwendet werden.

9. Ein Verfahren für die Herstellung einer immunogenen Zusammensetzung gemäß Anspruch 3 oder 4, dadurch gekennzeichnet, daß ein Peptid gemäß Anspruch 1, worin eines von W und Z Cys ist, kovalent an ein immunogenes Trägermaterial gebunden wird.

10. Ein Verfahren gemäß Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß als immunogenes Trägermaterial Thyroglobulin verwendet wird.

11. Ein Verfahren zum Testen von humanem Blut auf die Anwesenheit von Antikörpern für den viralen Verursacher von AIDS, beinhaltend das in Kontakt bringen eines Peptides gemäß Anspruch 1 oder 2, das an einen festen Träger gebunden ist, mit einer Testprobe von humanem Blut, wobei etwaige in der Testprobe anwesenden Antikörper für den viralen Verursacher von AIDS an die Peptide binden, Entfernen der Testprobe, Waschen des festen Trägers zum Entfernen von ungebundenen Antikörpern und Untersuchen des festen Trägers mit einem Reagenz, daß zum selektiven Detektieren geeignet ist.

12. Das Verfahren gemäß Anspruch 11, worin das feste Trägermaterial eine Mikrotiterplatte aus Plastik ist und das Reagenz, welches zur Detektion von humanen Antikörpern fähig ist, mit Merrettich- Peroxidase markiertes anti-human IgG ist, das mit einem Substrat umgesetzt wird, das einen Farbwechselendpunkt in Gegenwart von dieser Peroxidase ergibt.

13. Das Verfahren gemäß Anspruch 11, worin das Peptid von Anspruch 1 oder 2 HTLV-III env (578-608) -NH2 ist.

14. Ein Verfahren zur Herstellung eines Vakzins, das das Mischen eines Peptides gemäß Anspruch 1 oder 2 mit einem physiologisch akzeptablen Träger umfaßt.

15. Ein Verfahren gemäß Anspruch 14, worin das Peptid an ein Toxin gekoppelt ist, welches zur Verleihung von Immunität im Menschen genutzt wird.

16. Ein Verfahren zur Herstellung von Antikörpern gegen das AIDS Virus, welches Injizieren einer ausreichenden Menge eines Immunogens gemäß Anspruch 3 oder 4 in einen Wirt und Rückgewinnen der Antikörper aus dem Serum des Wirts umfaßt.

17. Ein Vakzin gegen AIDS enthaltend ein Peptid gemäß Anspruch 1 oder 2 in einem physiologisch akzeptablen Medium.

18. Das Vakzin gemäß Anspruch 17, worin das Peptid an ein Toxin gekoppelt ist, das zur Verleihung von Immunität in Menschen genutzt wird.

19. Ein Antikörper erzeugt durch Immunisieren eines Wirts mit einem Immunogen gemäß Anspruch 3 oder 4, das selektiv an eine Verbindung von Anspruch 1 oder 2, HTLV-III env Protein oder ein AIDS-Virus bindet.

20. Der Antikörper von Anspruch 19, welcher ein polyklonaler Antikörper ist.

21. Der Antikörper von Anspruch 19, welcher ein monoklonaler Antikörper spezifisch für das HTLV-III env (578-608) Epitop ist.

22. Die Verwendung eines Peptides gemäß Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung eines schützenden immunisierenden Vakzins.

23. Die Verwendung eines Peptides gemäß Anspruch 2 zum Testen humanen Bluts auf die Anwesenheit von Antikörpern für das AIDS-Virus.

24. Die Verwendung einer immunogenen Zusammensetzung gemäß Anspruch 3 oder 4 für die Herstellung von Antikörpern, die selektiv an eine Verbindung gemäß Anspruch 1 oder 2, HTLV-III env Protein oder ein AIDS-Virus binden.