DE60309342T2

DE60309342T2 - Benzimidazole und benzothiazole als inhibitoren der map-kinase

Info

Publication number: DE60309342T2
Application number: DE60309342T
Authority: DE
Inventors: Rosanne Zionsville BONJOUKLIAN; Eugenio Lilly Jose DE DIEGO GOMEZ; S. A. Alfonso Lilly DE DIOS; Hamdouchi Chafiq Carmel HAMDOUCHI; Tiechao Fishers LI; S. A. Beatriz Lilly LOPEZ DE URALDE GARMENDIA; Michal Carmel VIETH; Schulenburg Jeremy Noblesville YORK; Dean Robert Indianapolis DALLY; Filadelfa Lilly Miriam DEL PRADO CATALINA; S. A. Carlos Lilly JARAMILLO; Maria Lilly Luisa MARTIN CABREJAS; S. A. Carlos Lilly MONTERO SALGADO; S. A. Sheila Lilly PLEITE; S. A. Concepcion Lilly SANCHEZ-MARTINEZ; Alan Timothy Indianapolis SHEPHERD; Howard James Greenwood WIKEL
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2002-08-09
Filing date: 2003-07-31
Publication date: 2007-05-16
Anticipated expiration: 2023-08-01
Also published as: AU2003256297A1; ATE343572T1; US20050272791A1; US7320995B2; EP1554272A1; WO2004014900A1; EP1554272B1; AR040770A1; ES2274302T3; DE60309342D1; TW200404799A

Description

Hintergrund der Erfindung
Die p38 Kinase ist eine durch Mitogen aktivierte Proteinkinase (MAP), die zur Serin/Threoninkinasesuperfamilie gehört. Diese Kinase wird durch extrazellulären Stress, wie Hitze, UV Licht und osmotischen Stress, wie auch entzündliche Stimuli, wie Lipopolysaccharid aktiviert. Bei einer Aktivierung phosphoryliert die p38 Kinase intrazelluläre Proteinsubstrate, die die Biosynthese der proinflammatorischen Cytokine Tumornekrosefaktor α (TNF-α) und Interleukin 1β (IL-1β) reguliert. Diese Cytokine sind bei der Pathologie von mehreren chronischen entzündlichen Störungen (Lee et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 696, 149-170 (1993), Muller-Ladner, Curr. Opin. Rheumatol., 8, 210-220 (1996)), kardiovaskulären Störungen und Störungen des zentralen Nervensystems (Salituro et al., Current Medicinal Chemistry, 6, 807-823 (1999)) und Autoimmunstörungen (Pargellis et al., Nature Structural Biology, 9 (4), 268-272 (2002)) beteiligt.
Es wurden mehrere Verbindungen innerhalb der Strukturplattformen der Pyridinylimidazole (WO 96 21 452 A, WO 96 40 143 A, WO 97 25 045 A, US 5 656 644 A , US 5 686 455 A , US 5 717 100 A , WO 97 12 876 A, WO 98 21 957 A, WO 98 47 892 A, WO 99 903 837 A, WO 99 01 449 A, WO 00 61 576 A, WO 00 10 563 A, WO 01 72 737 A, Revesz et al., Bioorganic and Med. Chem. Lett. 10, 1261-1264 (2000)) und der Pyrimidinylimidazole (WO 97 25 048 A, WO 99 01 452 A, WO 97 25 046 A, WO 99 32 121 A, WO 99 01 131 A, WO 99 01 130 A, WO 99 01 136 A, WO 98 07 452 A, WO 97 47 618 A, WO 98 56 788 A, WO 98 57 996 A) als Inhibitoren der p38 Kinase oder als Cytokininhibitoren identifiziert. Die WO 02 072 576 A (vom 19. September 2002) identifiziert ebenfalls eine Reihe an Verbindungen, die als p38 Kinaseinhibitoren identifiziert werden. Von selektiven Inhibitoren der p38 Kinase ist bekannt, dass sie die Expression von TNF-α und IL-1β unterdrücken (McKenna et al., J. Med. Chem 45 (11), 2173-2184 (2002)). Es wurde eine antiinflammatorische Aktivität für Verbindungen innerhalb der Pyrimidinylimidazolstrukturplattform berichtet (Lantos et al., J. Med. Chem, 27, 72-75 (1984)) und es ist eine Vielzahl an Inhibitoren der p38 Kinase zur Behandlung einer Vielzahl an Störungen in Untersuchung (Boehm und Adams, Exp. Opin. Ther. Patents, 10 (1), 25-37 (2000)). Es bleibt ein Bedarf in diesem Behandlungsgebiet für Verbindungen, die Cytokin-suppressiv sind, das heißt Verbindungen, die zur Hemmung der p38 Kinase fähig sind.
Die vorliegende Erfindung liefert neue Inhibitoren der p38 Kinase, die zur Behandlung von Zuständen brauchbar sind, welche aus einer übermäßigen Cytokinbildung resultieren.
Kurze Zusammenfassung der Erfindung
Die vorliegende Erfindung liefert Verbindungen der Formel I
worin
W steht für
X für N(R⁴) oder S steht,
R⁰ ist

(a) ausgewählt aus der Gruppe, die besteht aus Wasserstoff, C₁-C₆ Alkyl, Cyano, C₁-C₄ Alkylen-R¹¹, 3-Hydroxyprop-2-yl, (1-Phenyl)-2-hydroxyeth-1-yl, (1-Cyclohexyl)-3-hydroxyprop-2-yl, 4-Methoxybenzyl, 1,4-Dioxoaspiro[4,5]dec-8-yl, Tetrahydropyran, 2,2,6,6-Tetramethylpiperidin-4-yl und Cyclohexan-1-on-4-yl,
(b) Phenyl, das optional mit einem Substituenten substituiert ist, der aus der Gruppe ausgewählt ist, welche besteht aus Nitro und Amino,
(c) Piperidin-4-yl, das optional mit einem Substituenten substituiert ist, der aus der Gruppe ausgewählt ist, welche besteht aus C₁-C₄ Alkyl, C₁-C₄ Alkoxycarbonyl und Benzyl oder
(d) C₃-C₆ Cycloalkyl, das optional mit einem Substituenten substituiert ist, der aus der Gruppe ausgewählt ist, welche besteht aus C₁-C₄ Alkoxycarbonylamino, Amino, Hydroxy und C₁-C₄ Alkylen-OH, R¹ ist
(a) ausgewählt aus der Gruppe, die besteht aus Wasserstoff, C₁-C₆ Alkyl, C₂-C₄ Alkinyl, Halogen, Amino, Azido, Formyl, 1-(C₁-C₄ Alkoxycarbonyl)ethen-2-yl, 1-(C₁-C₄ Alkoxycarbonyl)ethyl, 1-(C₁-C₄ Carboxy)ethyl, (C₁-C₄ Alkylen)benzyloxy, Trifluormethyl, Trimethylsilylethinyl, But-3-in-1-ol, C₃-C₆ Cycloalkyl, Tetrahydropyran-4-yl, Hydroxymethyl, 2-(Piperidin-1-yl)methyl, N,N',N'-[Trimethyl]-2-(aminoethylamino) methyl, (Morpholin-4-yl)methyl, Dimethylaminomethyl, N-[2-(Piperidin-1-yl)eth-1-yl]aminomethyl, N',N'-Dimethyl-2-(aminoethylamino)methyl, Pyridinyl, Thiazolyl, Triazolyl, Benzo(1,3)dioxolan-5-yl und Imidazol-2-yl,
(b) Phenyl, das optional mit einem bis drei Substituenten substituiert ist, die unabhängig aus der Gruppe ausgewählt sind, die besteht aus C₁-C₄ Alkyl, Halogen, Nitro, Amino, C₁-C₄ Alkoxy, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Trifluormethylsulfanyl, Methylsulfonyl, Methylsulfonamidyl, Pyrrolidin-1-yl, Morpholin-4-yl, 4-(C₁-C₄ Alkyl)piperazin-1-yl, -NR⁶R⁷ und C₁-C₄ Alkoxy, das optional mit einem Substituenten substituiert ist, der aus der Gruppe ausgewählt ist, welche besteht aus Piperidin-1-yl, Pyrrolidin-1-yl, Morpholin-4-yl, Azepin-4-yl und Di(C₁-C₄ alkyl)amino,
(c) Thienyl, das optional mit einem Substituenten substituiert ist, der aus der Gruppe ausgewählt ist, die besteht aus Halogen, Nitro, Amino und C₁-C₄ Alkyl oder
(d) Piperidin-4-yl, das optional an der Position 1 aus der Gruppe substituiert ist, die aus C₁-C₄ Alkyl, C₁-C₄ Alkoxycarbonyl, Benzyloxycarbonyl und (C₁-C₄ Alkylen)-R⁸ besteht.

Alternativ dazu können R und R unter Bildung einer vollkommen gesättigten C₃-C₄ Kohlenstoffkette oder einer vollkommen ungesättigten C₃-C₄ Kohlenstoffkette zusammengenommen werden, die optional mit Halogen oder C₁-C₄ Alkyl substituiert ist,
R² steht für Wasserstoff, C₁-C₄ Alkyl oder Benzyl,
R³ steht für Thienyl oder Phenyl, das wahlweise mit einem bis zwei Substituenten substituiert ist, die unabhängig aus der Gruppe ausgewählt sind, welche besteht aus Halogen, C₁-C₄ Alkyl, C₁-C₄ Alkoxy und Trifluormethyl,
R⁴ steht für Wasserstoff, (C₁-C₄ Alkyl)sulfonyl oder (C₃-C₆ Cycloalkyl)sulfonyl oder (C₁-C₄ Alkyl)₂-N-sulfonyl,
R⁵ steht für Halogen, Wasserstoff oder -NR⁹R¹⁰,
R⁶ und R⁷ sind jeweils einzeln aus Wasserstoff, Carbonyl oder C₁-C₄ Alkyl ausgewählt, mit der Maßgabe, dass zumindest eines von R⁶ und R⁷ für Wasserstoff steht,
R⁸ steht für Hydroxy, Trifluormethyl, Dimethylamino, Phenyl, Pyridinyl oder 1-Methylimidazol-2-yl,
R⁹ steht jeweils unabhängig für Wasserstoff oder C₁-C₄ Alkyl,
R¹⁰ steht für Wasserstoff, C₁-C₄ Alkyl oder Benzyl,
R¹¹ steht für C₁-C₄ Alkoxy, Hydroxy, C₁-C₄ Alkoxycarbonyl, C₁-C₄ Alkoxycarbonylamino, C₃-C₆ Cycloalkyl, Phenyl, das optional mit einem oder zwei Substituenten substituiert ist, die unabhängig aus der Gruppe ausgewählt sind, die aus C₁-C₄ Alkoxy und Halogen besteht, für Morpholin-4-yl oder Pyridinyl, mit der Maßgabe, dass wenn W für
steht, dann folgendes gilt

(a) zumindest eines von R⁰ und R¹ für Wasserstoff oder C₁-C₆ Alkyl steht, oder
(b) R und R unter Bildung einer vollkommen gesättigten C₃-C₄ Kohlenstoffkette oder einer vollkommen ungesättigten C₃-C₄ Kohlenstoffkette zusammen genommen werden können, die optional mit Halogen oder C₁-C₄ Alkyl substituiert ist, und ebenfalls mit der Maßgabe, dass wenn X für S steht, W dann steht für
oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder ein pharmazeutisch annehmbares Solvat hiervon.

Die vorliegende Erfindung liefert ein Verfahren zur Hemmung der p38 Kinase bei einem Säuger, das die Verabreichung einer wirksamen Menge einer Verbindung der Formel I oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder eines pharmazeutisch annehmbaren Solvats hiervon an einen Säuger umfasst, der einer solchen Behandlung bedarf.
Die vorliegende Erfindung liefert auch ein Verfahren zur Unterdrückung der Bildung des Tumornekrosefaktors α (TNF-α) bei einem Säuger, das die Verabreichung einer wirksamen Menge einer Verbindung der Formel I oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes hiervon oder eines pharmazeutisch annehmbaren Solvats hiervon an einen Säuger umfasst, der einer solchen Behandlung bedarf.
Die vorliegende Erfindung liefert auch ein Verfahren zur Suppression der Bildung von Interleukin-1β (IL-1β) bei einem Säuger, das die Verabreichung einer wirksamen Menge einer Verbindung der Formel I oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder eines pharmazeutisch annehmbaren Solvats hiervon an einen Säuger umfasst, der einer solchen Behandlung bedarf.
Die vorliegende Erfindung liefert ferner ein Verfahren zur Behandlung von Zuständen, die aus einer überschüssigen Cytokinbildung resultieren, bei einem Säuger, das die Verabreichung einer Cytokinunterdrückenden Menge einer Verbindung der Formel I oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder eines pharmazeutisch annehmbaren Solvats hiervon an einen Säuger umfasst, der einer solchen Behandlung bedarf.
Die vorliegende Erfindung liefert auch ein Verfahren zur Hemmung des Wachstums eines empfindlichen Neoplasmas bei einem Säuger, das die Verabreichung einer p38 hemmenden Menge einer Verbindung der Formel I oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder eines pharmazeutisch annehmbaren Solvats hiervon an einen Säuger umfasst, der einer solchen Behandlung bedarf.
Die vorliegende Erfindung liefert auch ein Verfahren zur Hemmung der Metastasierung bei einem Säuger, das die Verabreichung einer p38 hemmenden Menge einer Verbindung der Formel I oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder eines pharmazeutisch annehmbaren Solvats hiervon an einen Säuger umfasst, der einer solchen Behandlung bedarf.
Die vorliegende Erfindung liefert auch ein Verfahren zur Behandlung der rheumatoiden Arthritis bei einem Säuger, das die Verabreichung einer p38 hemmenden Menge einer Verbindung der Formel I oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder eines pharmazeutisch annehmbaren Solvats hiervon an einen Säuger umfasst, der einer solchen Behandlung bedarf.
Die vorliegende Erfindung liefert auch eine pharmazeutische Formulierung, die eine Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder ein pharmazeutisch annehmbares Solvat hiervon in Kombination mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger, Verdünnungsmittel oder Hilfsstoff umfasst.
Die Erfindung liefert auch die Verwendung einer Verbindung der Formel I oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder eines pharmazeutisch annehmbaren Solvats hiervon zur Herstellung eines Arzneimittels zur Hemmung der p38 Kinase. Zusätzlich liefert die Erfindung eine Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder ein pharmazeutisch annehmbares Solvat hiervon zur Verwendung bei der Hemmung der p38 Kinase bei Säugern. Ferner liefert die Erfindung eine pharmazeutische Zusammensetzung, die zur Hemmung der p38 Kinase angepasst ist, welche eine Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon oder ein pharmazeutisch annehmbares Solvat hiervon in Kombination mit einem oder mehreren pharmazeutisch annehmbaren Hilfsstoffen, Trägern oder Verdünnungsmitteln umfasst.
Die Erfindung liefert auch die Verwendung einer Verbindung der Formel I oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder pharmazeutisch annehmbaren Solvats hiervon zur Herstellung eines Arzneimittels zur Unterdrückung der Bildung des Tumornekrosefaktors α (TNF-α). Zusätzlich liefert die Erfindung eine Verbindung der Formel I oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder eines pharmazeutisch annehmbaren Solvats hiervon zur Verwendung bei der Unterdrückung der Bildung des Tumornekrosefaktors α (TNF-α) bei Säugern. Ferner liefert die Erfindung eine pharmazeutische Zusammensetzung, die zur Unterdrückung der Bildung des Tumronekrosefaktors α (TNF-α) angepasst ist, die eine Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder ein pharmazeutisch annehmbares Solvat hiervon in Kombination mit einem oder mehreren pharmazeutisch annehmbaren Hilfsstoffen, Trägern oder Verdünnungsmitteln umfasst.
Die Erfindung liefert auch die Verwendung einer Verbindung der Formel I oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder eines pharmazeutisch annehmbaren Solvats hiervon zur Herstellung eines Arzneimittels zur Unterdrückung der Bildung von Interleukin 1β (IL-1β). Zusätzlich liefert die Erfindung eine Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder ein pharmazeutisch annehmbares Solvat hiervon zur Verwendung bei der Unterdrückung der Bildung von Interleukin 1β (IL-1β) bei Säugern. Ferner liefert die Erfindung eine pharmazeutische Zusammensetzung, die zur Unterdrückung der Bildung von Interleukin 1β (IL-1β) angepasst ist, die eine Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder ein pharmazeutisch annehmbares Solvat hiervon in Kombination mit einem oder mehreren pharmazeutisch annehmbaren Hilfsstoffen, Trägern oder Verdünnungsmitteln umfasst.
Die Erfindung liefert auch die Verwendung einer Verbindung der Formel I oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder eines pharmazeutisch annehmbaren Solvats hiervon zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Zuständen, die aus einer übermäßigen Cytokinbildung resultieren. Zusätzlich liefert die Erfindung eine Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder ein pharmazeutisch annehmbares Solvat hiervon zur Verwendung bei der Behandlung von Zuständen, die aus einer übermäßigen Cytokinbildung resultieren, bei Säugern. Ferner liefert die Erfindung eine pharmazeutische Zusammensetzung, die zur Behandlung von Zuständen angepasst ist, welche aus einer übermäßigen Cytokinbildung resultieren, die eine Verbindung der Formel I oder ein phar mazeutisch annehmbares Salz oder ein pharmazeutisch annehmbares Solvat hiervon in Kombination mit einem oder mehreren pharmazeutisch annehmbaren Hilfsstoffen, Trägern oder Verdünnungsmitteln umfasst.
Die Erfindung liefert auch die Verwendung einer Verbindung der Formel I oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder eines pharmazeutisch annehmbaren Solvats hiervon zur Herstellung eines Arzneimittels zur Wachstumshemmung eines empfindlichen Neoplasmas. Zusätzlich liefert die Erfindung eine Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder ein pharmazeutisch annehmbares Solvat hiervon zur Verwendung bei der Wachstumshemmung eines empfindlichen Neoplasmas bei Säugern. Ferner liefert die Erfindung eine pharmazeutische Zusammensetzung, die zur Wachstumshemmung eines empfindlichen Neoplasmas angepasst ist, die eine Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder ein pharmazeutisch annehmbares Solvat hiervon in Kombination mit einem oder mehreren pharmazeutisch annehmbaren Hilfsstoffen, Trägern oder Verdünnungsmitteln umfasst.
Die Erfindung liefert auch die Verwendung einer Verbindung der Formel I oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder eines pharmazeutisch annehmbaren Solvats hiervon zur Herstellung eines Arzneimittels zur Hemmung der Metastasierung. Zusätzlich liefert die Erfindung eine Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder ein pharmazeutisch annehmbares Solvat hiervon zur Verwendung bei der Hemmung der Metastasierung bei Säugern. Ferner liefert die Erfindung eine pharmazeutische Zusammensetzung, die zur Hemmung der Metastasierung angepasst ist, die eine Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder ein pharmazeutisch annehmbares Solvat hiervon in Kombination mit einem oder mehreren pharmazeutisch annehmbaren Hilfsstoffen, Trägern oder Verdünnungsmitteln umfasst.
Die Erfindung liefert auch die Verwendung einer Verbindung der Formel I oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes oder eines pharmazeutisch annehmbaren Solvats hiervon zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung der rheumatoiden Arthritis. Zusätzlich liefert die Erfindung eine Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder ein pharmazeutisch annehmbares Solvat hiervon zur Verwendung bei der Behandlung der rheumatoiden Arthritis bei Säugern. Ferner liefert die Erfindung eine pharmazeutische Zusammensetzung, die zur Behandlung der rheumatoiden Arthritis angepasst ist, die eine Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder ein pharmazeutisch annehmbares Solvat hiervon in Kombination mit einem oder mehreren pharmazeutisch annehmbaren Hilfsstoffen, Trägern oder Verdünnungsmitteln umfasst.
Detaillierte Beschreibung der Erfindung
Die allgemeinen chemischen Ausdrücke, die in den obigen Formeln verwendet werden, haben ihre allgemeinen Bedeutungen. Beispielsweise umfasst der Ausdruck "C₁-C₆ Alkyl" Methyl-, Ethyl-, Propyl-, Isopropyl-, Butyl-, Isobutyl-, sek-Butyl-, tert-Butyl-, Pentyl- und Hexylreste. Der Ausdruck "C₁-C₄ Alkyl" ist innerhalb der Bedeutung von "C₁-C₆ Alkyl" enthalten und umfasst Methyl-, Ethyl-, Propyl-, Isopropyl-, Butyl-, Isobutyl-, sek-Butyl- und tert-Butylreste. Der Ausdruck "C₁-C₄ Alkoxy" soll eine C₁-C₄ Alkylgruppe bezeichnen, die an das Ausgangsmolekül über ein Sauerstoffatom gebunden ist und umfasst die Gruppen Methoxy, Ethoxy, Isopropoxy und dergleichen. Der Ausdruck "C₃-C₆ Cycloalkyl" umfasst Cyclopropyl-, Cyclobutyl-, Cyclopentyl- und Cyclohexylreste. Der Ausdruck "Halogen" umfasst Fluor-, Chlor-, Brom- und Iod.
Der Ausdruck "C₁-C₄ Alkylen-R⁸" wird verwendet, um eine lineare oder verzweigte Alkylenkette zu bezeichnen, die an einem beliebigen Kohlenstoffatom mit der Variablen R⁸ substituiert ist und umfasst beispielsweise lineare oder verzweigte Alkylketten, Benzyl- und α-Methylbenzylreste. Ähnlich soll der Ausdruck "C₁-C₄ Alkylen-R¹²" eine lineare oder verzweigte Alkylenkette bezeichnen, die an einem beliebigen Kohlenstoffatom mit der Variablen R¹² substituiert ist und umfasst beispielsweise lineare oder verzweigte Alkylketten, Benzyl- und α-Methylbenzylreste.
Der Ausdruck "C₁-C₄ Alkylen-OH" soll eine lineare oder verzweigte Alkylenkette bezeichnen, die an einem beliebigen Kohlenstoffatom mit einer Hydroxygruppe substituiert ist.
Der Ausdruck "1,4-Dioxaspiro[4.5]dec-8-yl" soll die folgende Formel aufweisen:
Der Ausdruck "vollkommen gesättigte C₃-C₄ Kohlenstoffkette" soll eine Kette mit 3 oder 4 Methylengruppen bezeichnen. Der Ausdruck "vollkommen unsubstituierte C₃-C₄ Kohlenstoffkette" soll eine Kette mit 3 Kohlenstoffatomen, die eine Kohlenstoff-Kohlenstoff-Doppelbindung enthält oder eine Kette mit 4 Kohlenstoffen bezeichnen, die zwei Kohlenstoff-Kohlenstoff-Doppelbindungen enthält.
Der Ausdruck "p-38 Kinase" soll die p-38α und/oder p38β Kinaseisoformen umfassen.
Der Ausdruck "Unterdrückung der Bildung von TNF-α (IL-1β, Cytokin)" wird verwendet, um überschüssige in vivo Mengen an TNF-α, IL-1β oder einem anderen Cytokin in einem Säuger auf normale oder sub-normale Mengen zu verringern. Dies kann durch die Hemmung der in vivo Freisetzung von TNF-α, IL-1β oder einem anderen Cytokin durch alle Zellen, einschließlich Makrophagen, durch Herunterregulierung der überschüssigen in vivo Mengen von TNF-α, IL-1β oder einem anderen Cytokin bei einem Säuger auf normale oder sub-normale Mengen auf Genomebene, durch Hemmung der Synthese von TNF-α, IL-1β oder einem anderen Cytokin als posttranslationales Ereignis oder durch eine Herabregulierung von TNF-α, IL-1β oder einem anderen Cytokin auf Transkriptions- oder Translationsebene erreicht werden.
Der Fachmann erkennt, dass bestimmte Verbindungen der Formel I zumindest ein chirales Zentrum enthalten. Die vorliegende Erfindung umfasst alle einzelnen Enantiomere oder Diastereomere wie auch Gemische aus Enantiomeren und Diastereomeren dieser Verbindungen einschließlich Razemate. Es ist bevorzugt, dass die Verbindungen der Formel I, die zumindest ein chirales Zentrum enthalten, als einzelne Enantiomere oder Diastereomere existieren. Die einzelnen Enantiomere oder Diastereomere können ausgehend von chiralen Reagenzien oder durch stereoselektive oder stereospezifische Synthesetechniken hergestellt werden. Alternativ dazu können die einzelnen Enatiomere oder Diastereomere aus Gemischen durch chirale Standardchromatographie oder Standardkristallisationstechniken isoliert werden. Der Fachmann erkennt auch, dass die Verbindungen der vorliegenden Erfindung als Tautomere existieren können. Die vorliegende Erfindung umfasst alle tautomeren Formen.
Ferner können bestimmte Verbindungen der Formel Ials geometrische cis- und trans-Isomere existieren. Die vorliegende Erfindung umfasst alle einzelnen geometrischen Isomere, wie auch Gemische der geometrischen Isomere dieser Verbindungen. Es ist bevorzugt, dass die Verbindungen der Formel I als einzelne geometrische Isomere existieren. Die einzelnen Isomere können selektiv durch Verfahren hergestellt werden, die dem Fachmann bekannt sind, oder die Gemische der Isomere können durch Standardchromatograpie- oder Standardkristallisationstechniken getrennt werden.
Der geschulte Leser versteht, dass die meisten oder alle Verbindungen der vorliegenden Erfindung zur Bildung von Salzen fähig sind. In allen Fällen sind die pharmazeutisch annehmbaren Salze aller Verbindungen in deren Namen enthalten. Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind Amine und reagieren demnach mit vielen anorganischen und organischen Säuren unter Bildung von pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalzen. Bevorzugte pharmazeutisch annehmbare Salze sind jene, die mit Chlorwasserstoffsäure, Maleinsäure oder Methansulfonsäure gebildet werden.
Der geschulte Leser versteht ebenfalls, dass pharmazeutisch annehmbare Solvate der Verbindungen der Formel I als Teil der Erfindung betrachtet werden und durch herkömmliche Verfahren hergestellt werden können, wie Auflösen der Verbindungen der Formel I in Lösemitteln, wie Wasser, Methanol, Ethanol, usw. und Umkristallisierung unter Verwendung unterschiedlicher Kristallisationstechniken.
Während alle Verbindungen der Formel I brauchbare Inhibitoren der p38 Kinase sind, sind bestimmte Verbindungsklassen bevorzugt. Die folgenden Absätze beschreiben solche bevorzugten Klassen:

a) R⁰ steht für Wasserstoff,
b) R⁰ steht für Methyl,
c) R⁰ steht für Cyclopropyl,
d) R⁰ steht für Cyclohexyl,
e) R¹ steht für Phenyl, das optional mit einem oder zwei Substituenten substituiert ist, die individuell aus der Gruppe ausgewählt sind, die aus Halogen und Trifluormethyl besteht,
f) R¹ steht für Phenyl, das mit Chlor substituiert ist,
g) R¹ steht für Phenyl, das mit zwei Chloratomen substituiert ist,
h) R¹ steht für Phenyl, das mit zwei Fluoratomen substituiert ist,
i) R¹ steht für Phenyl, das mit Fluor und Chlor substituiert ist,
j) R¹ steht für Phenyl, das mit Trifluormethyl substituiert ist,
k) R¹ steht für 4-Chlorphenyl,
l) R¹ steht für 2,6-Dichlorphenyl,
m) R¹ steht für 2,6-Difluorphenyl,
n) R¹ steht für 2-Chlor-6-fluorphenyl,
o) R¹ steht für 2-Fluor-6-trifluormethyl,
p) R¹ steht für Methyl,
q) R¹ steht für Ethyl,
r) R¹ steht für tert-Butyl,
s) R¹ steht für Isopropyl,
t) R¹ steht für 2,2-Dimethylpropyl,
u) R¹ steht für Cycylopropyl,
v) R¹ steht für Cyclohexyl,
w) R¹ steht für Wasserstoff,
x) R² steht für Wasserstoff,
y) R³ steht für Phenyl,
z) R³ steht für Phenyl, das mit einem Fluor substituiert ist,
aa) R³ steht für Phenyl, das mit zwei Fluoratomen substituiert ist,
bb) R³ steht für 4-Fluorphenyl,
cc) R³ steht für 2,4-Difluorphenyl,
dd) R⁴ steht für C₁-C₄ Alkylsulfonyl,
ee) R⁴ steht für Isopropylsulfonyl,
ff) R⁴ steht für tert-Butylsulfonyl,
gg) R⁴ steht für C₃-C₆ Cycloalkylsulfonyl,
hh) R⁴ steht für Cyclopentylsulfonyl,
ii) R⁴ steht für Cyclohexylsulfonyl,
jj) R⁴ steht für Dimethylaminosulfonyl,
kk) R⁵ steht für NR⁹R¹⁰,
ll) R⁵ steht für -NH₂,
mm) R⁵ steht für Wasserstoff,
nn) W steht für
oo) W steht für
pp) W steht für
qq) W steht für
rr) X steht für N(R⁴),
ss) X steht für N-Isopropylsulfonyl, R⁵ steht für NH₂, W steht für
R³ steht für Phenyl und R¹ steht für Phenyl, das wahlweise mit einem oder zwei Halogenatomen oder C₁-C₄ Alkyl substitiuiert,
tt) Die Verbindung der Formel I ist eine freie Base,
uu) Die Verbindung der Formel I ist ein Solvat,
vv) Die Verbindung der Formel I ist ein pharmazeutisch annehmbares Salz,
ww) Die Verbindung der Formel I ist das Hydrochloridsalz,
xx) Die Verbindung der Formel I ist das Napadysilatsalz,
yy) Die Verbindung der Formel I ist das Dimaleatsalz,
zz) Die Verbindung der Formel I ist das Methansulfonatsalz.

Bevorzugte Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung umfassen alle Kombinationen von a) bis zz).
Die Verbindungen der Formel I sind Inhibitoren der p38 Kinase. Daher liefert die Erfindung auch ein Verfahren zur Hemmung der p38 Kinase bei einem Säuger, das die Verabreichung einer p38 Kinasehemmenden Menge einer Verbindung der Formel I umfasst. Es ist bevorzugt dass der durch die Verabreichung der Verbindung der Formel I zu behandelnde Säuger ein Mensch ist.
Als Inhibitoren der p38 Kinase sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Suppression der Bildung der proinflammatorischen Cytokine, des Tumornekrosefaktors α (TNF-α) und des Interleukins 1β (IL-1β) und daher zur Behandlung von Störungen brauchbar, die aus einer exzessiven Cytokinbildung resultieren. Die vorliegenden Verbindungen sind daher bei der Behandlung von entzündlichen Störungen, einschließlich Ekzem, atoper Dermatitis, rheumatoider Arthritis, Osteoarthritis, entzündlicher Darmerkrankung und toxischem Schocksyndrom brauchbar. Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung dürften auch bei der Behandlung von kardiovaskulären Störungen, wie akutem Myokardinfarkt, chronischem Herzversagen, Atherosklerose, viraler Myokarditis, kardialer Allotransplantatabstoßung und Sepsisassoziierter kardialer Dysfunktion brauchbar sein. Ferner sind die Verbindungen der vorliegenden Erfindung auch zur Behandlung der zentralen Nervensystemstörungen, wie Meningokokkenmeningitis, Alzheimerscher Erkrankung, Parkinsonscher Erkrankung und multipler Sklerose brauchbar.
Die meisten soliden Tumoren nehmen an Masse durch die Proliferation von malignen Zellen und Stromazellen, einschließlich Endothelzellen zu. Um einen Tumor auf mehr als 2-3 Zentimeter Durchmesser wachsen zu lassen, muss er Gefäße bilden, ein Prozess, der als Angiogenese bekannt ist. Von einer Unterdrückung der durch Tumoren induzierten Angiogenese durch Angiostatin und Endostatin wurde berichtet, dass sie zu einer Antitumoraktivität führt (O'Reilly et al., Cell. 88, 277-285 (1997)). Vom selektiven p38 Kinaseinhibitor SB22025 wurde gezeigt, dass er die Angiogenese hemmt (J.R. Jackson, et al., J. Pharmacol. Exp. Therapeutics, 284, 687 (1998)). Da die Angiogenese eine kritische Komponente der Massenexpansion der meisten soliden Tumoren ist, stellt die Entwicklung von p38 Kinaseinhibitoren zur Hemmung dieses Prozesses einen vielversprechenden Ansatz für die Antitumortherapie dar. Diesem Ansatz zur Antitumortherapie könnten die toxischen Nebenwirkungen oder Arzneimittelresistenz induzierenden Eigenschaften der herkömmlichen Chemotherapie fehlen (Judah Folkman, Endogenous Inhibitors of Angiogenesis, The Harvey Lectures, Reihe 92, Seiten 65-82, Wiley-Liss Inc. (1998)).
Als Inhibitoren der p38 Kinase sind die erfindungsgemäßen Verbindungen daher auch zur Hemmung des Wachstums von sensitiven Neoplasmen brauchbar. R.M. Schultz, Potential von p38 MAP Kinaseinhibitoren der Behandlung von Krebs. In: E. Jucker (Herausgeber), Progress in Drug Research, 60, 59-92 (2003). Ein sensitives Neoplasma wird als Neoplasma definiert, das von der p38 Kinase für dessen Überleben, Wachstum oder Metastase abhängt. Empfindliche Neoplasmen, einschließlich Tumoren des Gehirns, des Genitourinaltrakts, des lymphatischen Systems, des Magens, des Larynx und der Lunge ( US 5 717 100 A ). Vorzugsweise umfasst der Ausdruck "empfindliche Neoplasmen", wie er in der vorliegenden Beschreibung verwendet wird, die humanen Krebsarten, einschließlich kleinzelliges Lungencarzi nom (A. Greeberg et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 26, 558 (2002)), Brustcarzinom (J. Chen et al., J. Biol. Chem. 276, 47901 (2001), B. Salh et al., Int. J. Cancer, 98, 148 (2002) und S. Xiong et al., Cancer Res., 61, 1727 (2001), Magencarzinom (Y.D. Jung et al., Proc. Am. Assoc. Cancer Res., 43, 9 (2002)), Colorektalcarzinome (S. Xiong et al., Cancer Res., 61, 1727 (2001)) und maligne Melanome (C. Denkert et al., Clin. Exp. Metastasis, 19, 79 (2002)).
Die Hemmung der Angiogenese durch die Suppression von TNF-α wurde als brauchbar bei der Hemmung oder Prävention der Metastase beschrieben ( US 6 414 150 A , US 6 335 336 A ). Ferner ist die Suppression von TNF-α zur Behandlung der Prävention von Kachexie indiziert, einem Zerstörungssyndrom, das bei etwa der Hälfte aller Krebspatienten vorkommt (T. Yoneda et al., J. Clin. Invest., 87, 977 (1991)).
Ferner kann die Hemmung der p38 Kinase durch die Behandlung von bestimmten viralen Zuständen wirksam sein, wie Influenza (K. Kujime et al., J. Immunology, 164, 3222-3228 (2000)), Rhinovirus (S. Griego et al., J. Immunology, 165, 5211-5220 (2000)), und HIV (L. Shapiro et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95, 7422-7426 (1998)).
Verbindungen der Formel I, worin W für Imidazol (i) oder (ii) steht und R⁵ für -NH₂ steht, können hergestellt werden, wie dies im folgenden Schema dargestellt wird, worin "TBS" als tert-Butyldimethylsilyl definiert ist und alle anderen Variablen wie vorher definiert sind. Im folgenden Schema ist nur W = Imidazol (i) dargestellt. Dies soll den Umfang der Erfindung in keiner Weise beschränken.
Schema I
Ein Gemisch des α-Ketosilylethers (a) wird mit einem geeigneten Aldehyd in Gegenwart von Kupfer-(II)-acetat und Ammoniumacetat in einem geeigneten Lösemittel, typischerweise Essigsäure erhitzt. Die Säure wird neutralisiert und das gewünschte Imidazol (Ia) wird durch Standardextraktions- und Standardchromatographietechniken isoliert.
Der erforderliche α-Ketosilylether (a) kann hergestellt werden, wie dies im folgenden Schema beschrieben ist, worin "TBS" für tert-Butyldimethylsilyl steht, R⁵ für -NH₂ steht und alle anderen Variablen wie vorher definiert sind.
Schema II
Eine geeignete α-Hydroxysäure (b) wird in das entsprechende Weinrebamid (c) unter Standardbedingungen umgewandelt. Kurz gesagt wird die α-Hydroxysäure (b) in den entsprechenden Methylester umgewandelt und der Ester wird dann mit N-Methyl-O-methylhydoxylaminhydrochlorid in Gegenwart von Trimethylaluminium in einem geeigneten Lösemittel umgesetzt. Das α-Hydroxyamid (c) wird dann mit tert-Butyldimethylsilyltriflat in Gegenwart einer Base unter Standardbedingungen unter Bildung des α-Silyletheramids (d) behandelt (Tius et al. (Tetrahedron, 56, 3339-3351 (2000)). Die Verbindung (d) wird dann mit 6-Iodbenzamid oder 6-Iodbenzothiazol (e) in Gegenwart von Isopropylmagnesiumchlorid unter Bildung der gewünschten Verbindung (a) gekuppelt. Das erforderliche Iodbenzimidazol (e) kann aus 2-Aminobenzimidazol hergestellt werden, wie dies von Mitchell et al beschrieben ist (Journal of Organic Chemistry, 63, 5050-5058 (1998)).
Alternativ dazu kann 3,4-Dinitrobenzoesäure (f) in das entsprechende Weinrebamid (g) durch Umwandlung der Benzoesäure in das entsprechende Benzoylhalogenid, vorzugsweise durch Umsetzung mit Oxalylchlorid und anschließender Umsetzung des Benzoylchlorids mit N-Methyl-O-methylhydroxylamin in Gegenwart einer geeigneten Base, typischerweise Pyridin unter Bildung des entsprechenden Amids umgewandelt werden. Das Amid (g) wird dann katalytischen Hydrierungsbedingungen unter Bildung des entsprechenden Diamins unterzogen, das dann mit einem geeigneten Sulfonylhalogenid in Gegenwart einer Base, typischerweise Pyridin unter Bildung des entsprechenden Sulfonamids (h) behandelt wird. Dieses Sulfonamid wird zuerst mit einer Base und dann mit Cyanogenbromid in einem geeigneten Lösemittel unter Bildung des Aminobenzimidazols (j) umgesetzt. Das Aminobenzimidazol (j) wird mit dem aus dem Silylether (k) erzeugten Anion und tert-Butyllithium unter Bildung des gewünschten Zwischenprodukts (a) umgesetzt. Der erforderliche Silylether kann aus dem entsprechenden Alkohol unter Standardbedingungen hergestellt werden (siehe Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, Herausgeber John Wiley and Sons, 1981).
Schema III
Alternativ dazu können Verbindungen der Formel I, worin W für Imidazol (i) steht, hergestellt werden, wie dies im folgenden Schema erläutert ist, worin R⁵ für -NH₂ steht, R² für Wasserstoff steht und alle anderen Variablen wie vorher definiert sind.
Schema IV
Das Diketon (I) wird mit Ammoniumacetat und einem geeigneten Aldehyd in einem geeigneten Lösemittel, vorzugsweise Essigsäure, unter Bildung des entsprechenden Imidazolylbenzimidazols oder Imidazolylbenzothiazols umgesetzt. Die erforderlichen Diketone (I) können wie im folgenden Schema beschrieben hergestellt werden, worin alle Variablen wie vorher definiert sind.
Schema V
Das geeignete Alkinyl wird mit 6-Iodbenzimidazol oder 6-Iodbenzothiazol (e) gekuppelt und dann unter Bildung der gewünschten Diketonverbindung (I) durch das Verfahren von Khan et al. oxidiert (JOC, 17, 1063-1065 (1952)).
Alternativ dazu kann die gewünschte Diketonverbindung ausgehend von α-Ketosilylether (a) hergestellt werden, wobei die Silylgruppe gefolgt von einer Oxidation hydrolysiert wird.
Die Verbindungen der Formel I, worin W für Imidazol (ii) steht, können hergestellt werden, wie dies im folgenden Schema beschrieben ist, worin R⁵ für -NH₂ steht und alle anderen Variablen wie vorher definiert sind.
Schema VI
Das Heteroaryliodid (e) wird mit Phenyllithium, gefolgt von tert-Butyllithium bei niedriger Temperatur umgesetzt. Die Dianion wird mit Dimethylformamid abgefangen und das entsprechende Aldehyd (m) wird unter Standardbedingungen isoliert. Das Aldehyd wird dann mit einem geeigneten Amin (n) in einem geeigneten Lösemittel, typischerweise Dimethylformamid, unter Bildung des entsprechenden Imins (o) umgesetzt. Dieses Imin wird dann mit einem geeignet substituierten p-Toluolsulfonylisocyanat (p) in Methanol mit einem primären Alkylamin bei Rückfluss unter Bildung der gewünschten Verbindung (Ib) umgesetzt. Die erforderlichen Amine (n) sind entweder im Handel erhältlich oder können durch dem Fachmann gut bekannte Verfahren hergestellt werden. Die erforderlichen p-Toluolsulfonylmethylisocyanate (p) können hergestellt werden, wie dies in dem folgenden Schema beschrieben ist, worin alle Variablen wie vorher definiert sind.
Schema VII
Ein Gemisch aus p-Toluolsulfinsäure, Formamid und einem geeigneten Aldehyd wird vereinigt und zusammen in Gegenwart einer geeigneten Säure unter Bildung des N-Formyl-p-toluolsulfonylmethylamins (q) erhitzt. Das Zwischenprodukt (q) wird mit einem geeigneten Dehydrierungsmittel, typischerweise Phosphoroxychlorid unter Bildung des Isocyanids (p) umgesetzt. Die erforderlichen Aldehyde sind entweder im Handel erhältlich oder können durch in der Technik gut bekannte Standardverfahren hergestellt werden.
Die Verbindungen der Formel I, worin W für Thiazol (vii) steht, können hergestellt werden, wie dies im folgenden Schema gezeigt ist, worin R⁵ für -NH₂ steht und alle anderen Variablen wie vorher definiert sind.
Schema VIII
Ein geeignetes α-Halogenketon (r) wird mit einem geeigneten Thioamid (s) in einem geeigneten Lösemittel unter Bildung des Thiazols (t) umgesetzt. Dieses Thiazol wird dann mit n-Butyllithium behandelt und das entstehende Anion wird mit Tributylzinnchlorid unter Bildung des Zinnderivats (u) umgesetzt. Dieses Zwischenprodukt wird mit 1-(Isopropylsulfonyl)-2-amino-6-iodbenzimidazol oder 2-Amino-6-iodbenzothiazol (e) in Gegenwart eines Palladiumkatalysators unter Standardbedingungen unter Bildung der gewünschten Verbindung (Ic) gekuppelt.
Die erforderlichen α-Halogenketone sind entweder im Handel erhältlich oder können durch Standardbedingungen aus der entsprechenden Carbonylverbindung hergestellt werden, wie dies beispielsweise beschrieben ist von House (H.O. House, Modern Synthetic Reactions, W.A. Benjamin, Inc. Menlo Park, California (1972), Seiten 459-478) und Larock (R.C. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, Inc. New York, New York (1989), Seiten 369-471, 755). Die erforderlichen Thioamide sind entweder im Handel erhältlich oder können durch Standardverfahren, die dem Fachmann bekannt sind, hergestellt werden, beispielsweise durch Behandlung eines geeigneten Amids mit [2,4-Bis-(4-methoxyphenyl)-1,3-dithia-2,4-diphosphetan-2,4-disulfid] (Lawesson's Reagent).
Die Verbindungen der Formel I, worin W für das Pyrazol (v) steht, können hergestellt werden, wie dies im folgenden Schema beschrieben ist, worin R⁵ für -NH₂ steht und alle anderen Variablen wie vorher definiert sind.
Schema IX
Das geeignete Pyrazol-5-on wird mit einem geeigneten Bromierungsmittel, wie Phosphoroxybromid, unter Bildung des geeigneten 5-Brom-1H-pyrazols bromiert. Das Pyrazol wird dann mit der geeigneten Benzimidazol-6-borsäure umgesetzt, um beim geeigneten Pyrazolylbenzimidazol anzukommen.
Alternativ dazu können Verbindungen, worin W = (iv) steht, hergestellt werden, wie dies im folgenden Schema erläutert ist, worin R⁵ für -NN₂ steht und alle anderen Variablen wie vorher definiert sind.
Schema X
Ein geeignetes Alkinyl wird mit einer geeigneten Chloridverbindung gekuppelt und dann unter Bildung des Ketons oxidiert. Das Keton wird mit wasserfreiem Hydrazin und einem geeigneten Aldehyd in einem geeigneten Lösemittel unter Bildung des Pyrazols umgesetzt. Die Nitrogruppe wird reduziert und der Ringschluss wird bewirkt, um beim geeigneten Pyrazolylbenzamidazol anzukommen.
Die Verbindungen der Formel I, worin W für das Pyrazolon (vi) steht, können hergestellt werden, wie dies im folgenden Schema beschrieben ist, worin R⁵ für -NH₂ steht und alle anderen Variablen wie vorher definiert sind.
Schema XI
Die Dianion von 6-Iodbenzimidazol (c) wird durch sequenzielle Behandlung mit Phenyllithium, gefolgt von tert-Butyllithium bei niedriger Temperatur hergestellt. Das Anion wird mit Dimethylformamid abgefangen und das entsprechende Aldehyd (m) wird unter Standardbedingungen isoliert. Dieses Aldehyd wird dann mit einem geeigneten Ethylacetat, gefolgt von einer Oxidation unter Bildung des Diketobenzamidazols umgesetzt. Das Diketobenzimidazol wird mit der geeigneten Hydrazinverbindung umgesetzt und in Gegenwart von Toluol unter Bildung des gewünschten Pyrazolonbenzimidazols am Rückfluss erhitzt.
Die Verbindungen der Formel I, worin W für ein Imidazol (viii) steht und X für N(R⁴) steht, können hergestellt werden, wie dies im folgenden Schema gezeigt ist, worin alle Variablen wie vorher definiert sind. Es sollte bemerkt werden, dass das am Imidazol gebundene 2-Phenyl unsubstituiert gezeigt ist, aber auch substituiert sein kann.
Schema XII
Paramethoxybenzylmethylamin wird mit einem geeigenten Sulfonylchlorid gekuppelt. Das Amin wird dann geschützt und die entstehende Verbindung wird mit 2-Phenylimidazol-3-yl gekuppelt. Das Amin wird von den Schutzgruppen befreit und das benzimidazol wird wie in Scehma III konstruiert.
Verbindungen der Formel I, worin W für ein Triazol (ix) steht, können hergestellt werden, wie dies im folgenden Schema gezeigt ist, worin R⁵ für -NH₂ steht und 11 Variablen wie vorher definiert sind.
Schema XIII
Das Dibrombenzol wird gefolgt von der Aminierung nitriert. Das entstehende Nitroanilin wird mit einem geeigneten Phenylacetylen unter Bildung des Diphenylacetylens gekuppelt. Das Sulfonamid wird durch die Zugabe eines geeigneten Sulfonylhalogenids gebildet und das Triazol wird durch die Zugabe einer Azidquelle, typischerweise Natriumazid gebildet.
Viele der erfindungsgemäßen Verbindungen sind nicht nur Inhibitoren von p38 Kinase, aber sind auch brauchbare Zwischenprodukte zur Herstellung von zusätzlichen Verbindungen der vorliegenden Erfindung. Beispielsweise können primäre und sekundäre Amine acyliert, alkyliert oder mit Carbonsäuren oder Aminosäuren unter Standardpeptidkupplungsbedingungen gekuppelt werden. Ferner können Esterreste zu den entsprechenden Alkoholen reduziert oder unter Standardbedingungen zu Amiden umgewandelt werden. Alkohole können durch mehrere Nukleophile unter Bildung der erfindungsgemäßen Verbindungen aktiviert und verdrängt werden.
Präparation 1
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-formylbenzimidazol
Phenyllithium (750 ml, 1,8 M in Cyclohexan/Ether, 70/30) wird über 1 Stunde zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-iodbenzimidazol (150 g, 0,41 mol) in Tetrahydrofuran (5,6 l) bei –76°C gegeben. Es wird für 15 Minuten gerührt und dann wird tert-Butyllithium (750 ml, 1,7 M in Pentan) zugegeben. Nach 1 Stunde wird Dimethylformamid (250 ml) langsam über eine Stunde zugegeben und dann auf 0°C erwärmt. Es wird durch Gießen des Reaktionsgemisches in ein Gemisch aus kaltem gesättigtem wässrigem Ammoniumchlorid (500 g, 5 l) und konzentrierter Chlorwasserstoffsäure (300 ml) gestoppt. Die Phasen werden getrennt und die organische Phase wird mit Wasser gewaschen und dann unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird in Methanol (500 ml) aufgeschlämmt, der gelbe Niederschlag wird filtriert und unter Bildung von 85 g (76%) der Titelverbindung getrocknet.
¹H NMR (DMSO-d₆): δ 9,89 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,76 (d, 1H), 7,43 (s, 2H), 7,37 (d, 1H), 3,98 (m, 1H), 1,35 (m, 6H).
Präparation 2
α-(p-Toluolsulfonyl)benzylisocyanid
Schritt A: N-[Formyl]-α-(p-toluolsulfonyl)benzylamin
Verfahren A
Konzentrierte Chlorwasserstoffsäure (3 ml) wird tropfenweise zu einer Lösung aus p-Toluolsulfinsäurenatriumsalz in Wasser (20 ml) und tert-Butylmethylether (10 ml) gegeben. Es wird für 10 Minuten gerührt und dann werden die Phasen getrennt. Die organische Phase wird mit gesättigtem wässrigem Natriumchlorid gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck unter Bildung von 5 g an p-Toluolsulfinsäure konzentriert. Diese Säure wird mit Benzaldehyd (4,75 g, 44,8 mmol), Formamid (4,9 g, 0,11 mol) und Camphersulfonsäure (0,86 g, 3,7 mmol) vereinigt und für 18 Stunden auf 60°C erhitzt. Die Reaktion wird aus der Hitze entfernt und der weiße Feststoff wird in 3 : 1 Hexan : Methanol aufgeschlämmt. Die Aufschlämmung wird unter Bildung von 7,6 g (82%) des gewünschten Produkts als weißer Feststoff filtriert.
¹H NMR (DMSO-d₆): δ 9,75 (d, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,53 (d, 2H), 7,39 (m, 5H), 6,36 (d, 1H), 2,38 (s, 1H).
Verfahren B
Eine Lösung aus p-Toluolsulfinsäurenatriumsalz (6,0 g, 33,7 mmol) in H₂O (20 ml) und tert-Butylmethylether (10 ml) wird tropfenweise mit konzentriertem HCl (3 ml) behandelt und für 10 Minuten gerührt. Die Lösung wird in einem Trenntrichter getrennt und die organische Phase wird mit gesättigtem wässrigem Natriumchlorid gewaschen. Die organische Phase wird über Na₂SO₄ getrocknet, filtriert und das Lösemittel wird unter Bildung von 5,2 g (quantitativ) an p-Toluolsulfinsäure entfernt. Die Säure wird mit Benzaldehyd (2,4 g, 22,5 mmol), Formamid (3,8 g, 84,2 mmol) und Trimethylsilylchlorid (TMSCI) (4,0 g, 37,0 mmol) in 30 ml einer 1 : 1 Lösung aus Toluol/Acetonitril vereinigt. Die Reaktion wird auf 50°C erhitzt und für 5 Stunden gerührt. Die Reaktion wird gekühlt und in H₂O (100 ml) und tert-Butylmethylether (TBME) (30 ml) verdünnt. Die Lösung wird in einem Eisbad gekühlt und dann unter Bildung von 4,5 g (70%) des gewünschten Produkts filtriert. Der Feststoff wird unter Vakuum über Nacht unter Entfernung des restlichen Wassers getrocknet.
¹H NMR (DMSO-d₆): 9,75 (d, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,53 (d, 2H), 7,39 (m, 5H), 6,36 (d, 1H), 2,38 (s, 1H).
Schritt B: Dehydratation
Eine Lösung aus N-[Formyl]-α-(p-toluolsulfonyl)benzylamin (7,0 g, 0,024 mol) in Dimethoxyethan (200 ml) wird auf –10°C gekühlt. Phosphoroxychlorid (5,6 ml, 0,56 mmol) wird gefolgt von der tropfenweisen Zugabe von Triethylamin (16,8 ml, 0,12 mol) in Dimethoxyethan (10 ml) zugegeben, während die Reaktionstemperatur unter –5°C gehalten wird. Das Reaktionsgemisch wird schrittweise über 1 Stunde erwärmt, Wasser wird zugegeben und es wird mit Ethylacetat extrahiert. Die Phasen werden getrennt, die organische Phase wird mit gesättigtem wässrigem Natriumbicarbonat gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck unter Bildung von 6,5 g der Titelverbindung konzentriert. MS (ES^–) m/z = 270,1 (M–H)^–.
Die Verbindungen der Präparationen 3-4 werden im wesentlichen wie in Präparation 2 beschrieben mittels des Verfahrens A aus dem ersten Schritt, hergestellt.
Die Verbindungen der Präparationen 5-8 werden im wesentlichen wie in Präparation 2 beschrieben mittels des Verfahrens B aus dem ersten Schritt, hergestellt.
Präparation 9
N-[1-(Ethoxycarbonyl)piperidin-4-yl]((1-isopropylsulfonyl-2-amino-6-formyl)-benzimidazol)imin
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-formylbenzimidazol (10 g, 3,7 mmol) und 1-(Ethoxycarbonyl)-4-aminopiperidin (0,64 g, 3,7 mmol) in Dimethylformamid (5 ml) werden vereinigt und bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Das Reaktionsgemisch wird mit Ethylacetat (50 ml) verdünnt und nacheinander mit Wasser (2 × 10 ml) und gesättigtem wässrigem Natriumchlorid (2 × 10 ml) gewaschen. Die verbleibende organische Phase wird über Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck unter Bildung von 1,5 g (95%) der Titelverbindung konzentriert. MS (ES^–): m/z = 422,2 (M–H)^–.
Die Verbindungen der Präparationen 10-41 werden im wesentlichen wie in Präparation 9 beschrieben, hergestellt. In einigen Beispielen ist die Zugabe von einem Äquivalent an Triethylamin nötig, um die Umwandlung in das Iminderivat zu vervollständigen.
Präparation 42
N-[Methyl]-N-[methoxy]-1-(isopropylsulfonyl)-2-aminobenzimidazol-6-carboxamid
A. N-[Methyl]-N-[methoxy]-3,4-dinitrobenzamid
Ein Gemisch aus 3,4-Dinitrobenzoesäure (195 g, 0,92 mol), 1,3 l trockenem Dichlormethan und 2 ml Dimethylformamid wird auf –12°C unter einer Stickstoffatmosphäre gekühlt. Oxalylchlorid (134 mg, 1,54 mol) wird tropfenweise mittels eines Zugabetrichters über 35 Minuten zugegeben und das Reaktionsgemisch wird bei Raumtemperatur unter einer Stickstoffatmosphäre über Nacht gerührt. Das überschüssige Oxalylchlorid wird aus dem Reaktionsgemisch durch wiederholte Cyclen der Konzentration einer Dichlormethanlösung des Reaktonsgemisches unter verringertem Druck entfernt. Ein Gemisch des Rückstands in 1 l Dichlormethan wird unter einer Stickstoffatmosphäre auf –5°C gekühlt und N,O-Dimethylhydroxylaminhydrochlorid (98,7 g, 1,01 mol) wird zugegeben, gefolgt von der vorsichtigen portionsweisen Zugabe von 209 ml (2,62 mol) an trockenem Pyridin. Das Gemisch wird bei Raumtemperatur für 4 Stunden gerührt und dann unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird in 500 ml Dichlormethan suspendiert und unter verringertem Druck zweimal konzentriert. Der Rückstand wird in 500 ml Dichlormethan suspendiert und filtriert. Das Filtrat wird bei –13°C für 3 Tage gelagert, der Feststoff wird filtriert und mit kaltem Dichlormethan gewaschen. Das Filtrat wird mit Wasser (40 ml) gewaschen und bei –13°C unter Bildung eines zweiten Kristallisats gelagert. Die vereinigten Kristallisate werden unter verringertem Druck unter Bildung von 182 g (77%) der gewünschten Verbindung getrocknet.
B. N-[Methyl]-N-[methoxy]-3,4-diaminobenzamid
18,0 g an 10 Gewichtsprozent Pd/C Katalysator werden zu einer Lösung aus N-[Methyl]-N-[methoxy]-3,4-dinitrobenzamid (182 g, 0,712 mol) in 900 ml Tetrahydrofuran und 900 ml Ethanol unter einer Stickstoffatmosphäre gegeben. Es wird bei Raumtemperatur für 6 Stunden und unter 60 psi hydriert. Das Gemisch wird durch Celite^® filtriert und das Filtrat wird unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird in 500 ml Dichlormethan suspendiert, unter verringertem Druck konzentriert und der Rückstand wird unter verringertem Druck unter Bildung von 135 g (97%) der gewünschten Verbindung konzentriert.
C. N-[Methyl]-N-[methoxy]-3-(isopropylsulfonyl)amino-4-aminobenzamid
Trockenes Pyridin (234 ml, 2,94 mol) wird zu einer kalten (0°C) Lösung aus N-[Methyl9-N-[methoxy]-3,4-diaminobenzamid (135 g, 0,69 mol) in 1 Liter trockenem Dichlormethan unter einer Stickstoffatmosphäre gegeben. Isopropylsulfonylchlorid (85,4 ml, 0,76 mol) wird bei 0°C über 30 Minuten zugegeben, das Gemisch wird bei 0°C für weitere 30 Minuten und dann bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Das Reaktionsgemisch wird unter verringertem Druck konzentriert und der Rückstand wird mit Diethylether (1 l) und 5 N Chlorwasserstoffsäure (1 l) aufgeteilt. Die Phasen werden getrennt, die Diethyletherphase wird verworfen, Ethylacetat (1,5 l) wird zu der wässrigen Phase gegeben und gerührt, während festes Natriumcarbonat bis pH 6,5 zugegeben wird. Die wässrige Phase wird mittels Ethylacetat extrahiert, die vereinigten organischen Phasen werden gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird unter Elution mit einem Gradienten an Ethylacetat : Hexan 65 : 3 bis 100% Ethylacetat unter Bildung einer 40% Ausbeute der gewünschten Verbindung einer Silicagelchromatographie unterzogen.
D. Imidazolringbildung
Es wird 5 N Natriumhydroxid (55 ml) über 1 Stunde zu einer Suspension aus N-[Methyl]-N-[methoxy]-3-(isopropylsulfonyl)amino-4-aminobenzamid (83 g, 0,28 mol) in 550 ml Isopropylalkohol und 28 ml Wasser gegeben. Das Reaktionsgemisch wird für eine weitere Stunde gerührt und dann auf 3°C gekühlt. Cyanogenbromid (29,0 g, 0,27 mol) wird portionsweise zugegeben und bei Raumtemperatur über Nacht und am Rückfluss für 5 Stunden gerührt und dann bei Raumtemperatur über Nacht. Ethylacetat (1,5 l) wird zugegeben, kräftig gerührt und dann wird die entstehende Suspension filtriert. Das Filtrat wird mit gesättigtem wässrigem Natrtiumchlorid gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und dann auf etwa 1/4 Volumen konzentriert. Die Suspension wird filtriert und der Feststoff wird mit kaltem Ethylacetat gewaschen. Das Filtrat wird unter verringertem Druck konzentriert und der Rückstand wird aus Ethylacetat unter Bildung eines zweiten Kristallisats kristallisiert. Die vereinigten Kristallisats ergeben 60% Ausbeute der Titelverbindung. MS (FD⁺): m/z = 326 (M+H)⁺.
Präparation 43
N-[Methyl]-N-[methoxy]-2-(tert-butyldimethylsilyl)oxy-2-(4-fluorphenyl)acetamid
A. Methyl-p-fluormandelat
Kaliumcarbonat (12 g, 87 mmol) gefolgt von Iodmethan (7,37 ml, 118 mmol) wird zu einer 0°C Lösung aus p-Fluormandelsäure (79 mmol, 13,4 g) in 160 ml trockenem Dimethylformamid unter einer Stickstoffatmosphäre gegeben. Das entstehende Gemisch wird bei 0°C für 1 Stunde und bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Das Reaktionsgemisch wird über Eis gegossen, mit Wasser und Ethylacetat verdünnt und die wässrige Phase wird dreimal mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit kaltem Wasser und gesättigtem wässrigem Natriumchlorid vereinigt, über Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck unter Bildung von 12,7 g (87%) der gewünschten Verbindung als hellgelbes Öl konzentriert.
B. N-[Methyl]-N-[methoxy]-2-hydroxy-2-(4-fluorphenyl)acetamid
Ein Gemisch aus N-Methyl-O-methylhydroxylaminhydrochlorid (118 mmol) und Toluol (125 ml) wird auf –5°C gekühlt. Trimethylaluminium (2 M in Heptan, 59,2 ml, 118 mmol) wird langsam zu dem Gemisch über 20 Minuten gegeben, während die Reaktionstemperatur von –1 bis 8°C gehalten wird. Nach etwa 5 Minuten wird das Gemisch langsam auf Raumtemperatur erwärmt und für 1,5 Stunden gerührt. Eine Lösung aus Methyl-p-fluormandelat (11,1 g, 60 mmol) in 75 ml Toluol wird über 30 min ohne externes Kühlen zugegeben. Die Reaktion wird auf 0°C gekühlt und mit 10% Chlorwasserstoffsäure gestoppt. Es wird mit Ethylacetat (4 × 250 ml) extrahiert. Die vereinigten Ethylacetatphasen werden nacheinander mit Wasser und gesättigtem wässrigem Natriumchlorid gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck unter Bildung von 12,1 g (82%) der gewünschten Verbindung konzentriert.
C. O-Silylierung
Triethylamin (17,2 ml, 123 mmol) wird gefolgt von tert-Butyldimethylsilyltriflat (20,8 ml, 90 mmol) zu einer 0°C Lösung aus N-[Methyl]-N-[methoxy]-2-hydroxy-2-(4-fluorphenyl)acetamid (12,1 g, 62 mmol) in 180 ml Dichlormethan unter einer Stickstoffatmosphäre gegeben. Das Reaktionsgemisch wird bei 0°C für 1 Stunde und bei Raumtemperatur für 4 Stunden gerührt. Eine gesättigte wässrige Lösung aus Ammoniumchlorid wird zugegeben und mit Diethylether verdünnt. Die organische Phase wird nacheinander mit Wasser und gesättigtem Natriumchlorid gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird durch Silicagelchromatographie unter Elution mit 9 : 1 Hexan : Ethylacetat unter Bildung der Titelverbindung als gelbes Öl mit 55% Ausbeute gereinigt.
Präparation 44
N-[Methyl]-N-[methoxy]-2-(tert-butyldimethylsilyl)oxy-2-(4-(trifluormethyl)phenyl)acetamid
Ausgehend von p-(Trifluormethyl)mandelsäure wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Präparation 43 beschrieben, hergestellt.
Präparation 45
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-α-(phenyl)acetyl)-benzimidazol
Isopropylmagnesiumchlorid (2,0 M in THF, 235 ml, 470 mmol) wird über 15 Minuten zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-iodbenzimidazol (42,9 g, 118 mmol) in Tetrahydrofuran (850 ml) bei –70°C unter einer Stickstoffatmosphäre gegeben. Es wird für 1 Stunde bei 0°C gerührt und dann wird eine Lösung aus N-[Methyl]-N-[methoxy]-2-(tert-butyldimethylsilyl)oxy-2-(phenyl)acetamid (90,0 g, 294 mmol) (Tius et al. Tetrahedron, 56, 3339-3351 (2000)) in Tetrahydrofuran (150 ml) mittels einer Kanüle zugegeben. Die entstehende Aufschlämmung wird bei 0-5°C für 1 Stunde und dann bei Raumtemperatur für 1,5 Stunden gerührt. Das Gemisch wird auf 10°C gekühlt und dann wird gesättigtes wässriges Ammoniumchlorid zugegeben. Das Gemisch wird für 15 Minuten gerührt und die Phasen werden getrennt. Die wässrige Phase wird mit Ethylacetat (400 ml) extrahiert, die vereinigten organischen Phasen werden über Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird durch Silicagelchromatographie unter Elution mit 1-10% Acetonitril in Dichlormethan, das 0,5% Triethylamin enthält, unter Bildung von 50% Ausbeute der Titelverbindung als weißer Feststoff gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 488,1 (M+H)⁺
Die Verbindungen der Präparationen 46-47 werden im wesentlichen wie in Präparation 45 beschrieben, hergestellt.
Präparation 48
Alternative Synthese von 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-α-(phenyl)acetyl)benzimidazol
Tert-Butyllithium (1,5 M Lösung, 5,8 ml, 8,65 mmol) wird langsam zu einer Lösung aus O-(tert-Butyldimethyl)silylbenzylalkohol (1,9 g, 8,54 mmol) in 40 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran bei –78°C unter einer Stickstoffatmosphäre gegeben. Die Lösung wird für 3,5 Stunden gerührt wobei sich die Reaktion auf –25°C erwärmen kann. Es wird auf –35°C gekühlt und eine Lösung aus N-[Methyl]-N-[methoxy]-1-isopropylsulfonyl-2-aminobenzimidazol-6-carboxamid (0,7 g, 2,13 mmol) in 24 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran wird zugegeben. Die Reaktion wird für 1 Stunde gerührt während sie sich langsam auf 0°C erwärmen kann. Gesättigtes wässriges Ammoniumchlorid wird zugegeben und mit Ethylacetat verdünnt. Die wässrige Phase wird mit Ethylacetat extrahiert, die vereinigten organischen Phasen werden nacheinander mit Wasser und gesättigtem wässrigem Natriumchlorid gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird durch Silicagelchromatographie unter Elution mit 5 : 1 Dichlormethan : Acetonitril unter Bildung von 730 mg (70%) der Titelverbindung gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 488,1 (M+H)⁺.
Präparation 49
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-α-(3-(trifluormethyl)phenyl)acetyl)benzimidazol
Ausgehend von O-(tert-Butyldimethyl)silyl-3-(trifluormethyl)benzylalkohol wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Präparation 48 (83% Ausbeute) beschrieben, hergestellt. MS (ES⁺): m/z = 556,2 (M+H)⁺.
Präparation 50
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-hydroxy)-α-(4-fluorphenyl)acetyl)benzimidazol
Fluorwasserstoffsäure (48% wässrig, 14,6 ml) wird zu einer Suspension aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-α-(4-phenyl)acetyl)benzimidazol (7,3 g, 14,4 mmol) in Acetonitril (60 ml) bei Raumtemperatur gegeben. Die klare Lösung wird für 2,5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Der entstehende weiße Feststoff wird durch Filtration gesammelt und mit zusätzlichem Acetonitril (25 ml) gewaschen. Der weiße Feststoff wird unter Vakuum unter Bildung von 5,49 g (97%) der Titelverbindung getrocknet. MS (ES⁺): m/z = 392 (M+H)⁺.
Präparation 51
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(4-fluorphenyl)ethan-1,2-dion)benzimidazol
1-Hydroxy-1,2-benzoiodoxol-3(1H)-on-1-oxid (IBX) (2,83 g, 10,11 mmol) wird zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-hydroxy)-α-(4-fluorphenyl)acetyl)benzimidazol (3,16 g, 8,08 mmol) in wasserfreiem Dimethylsulfoxid (25 ml) gegeben. Nach 2 Stunden wird Natriumthiosulfat (gesättigte wässrige Lösung, 50 ml) zugegeben und bei Raumtemperatur für 5 Minuten gerührt. Wasser wird zugegeben und mit Ethylacetat extrahiert. Die organische Phase wird mit wässrigem gesättigtem Natriumchlorid gewaschen und getrocknet (MgSO₄). Nach der Eindampfung des Lösemittels wird das rohe Produkt durch Säulenchromatographie unter Bildung von 2,08 g (74% Ausbeute) der Titelverbindung als blassgelber Feststoff gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 390 (M+H)⁺.
Präparation 52
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(phenylethinyl)benzimidazol
Unter einer Stickstoffatmosphäre werden 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-iod-benzimidazol (400 g, 1,095 mol), Bis(triphenylphosphin)palladium(II)acetat (32,8 g, 0,044 mol) und Cul (41,7 g, 0,219 mol) gefolgt von DMSO (8,4 l) und Triethylamin (317 g, 3,133 mol) vereinigt. Das Rühren des entstehenden Gemisches bei 20 bis 25°C für 15 Minuten, gefolgt von der Zugabe von Phenylacetylen (168 g, 1,645 mol) über 30 Minuten ergibt einen Temperaturanstieg auf 34°C. Die Reaktion wird langsam auf 20-25°C gekühlt und nach 15 Stunden wird ein Aliquot der Reaktion in Wasser gestoppt und mit CH₃CN zur HPLC Analyse verdünnt. Das HPLC Chromatogramm (Säule: Zorbax SB-C8, 4,6 × 250 mm, 5 Micron UV = 218 nm, Gradienten Acetonitril/Puffer) zeigt den vollständigen Verbrauch des Iodids mit der Bildung von zwei neuen weniger polaren Produkten (gewünschtes Produkt und Phenylacetylendimer). Wasser (4 l) wird zu der Reaktion über 1 Stunde gegeben, wobei sich die Temperatur auf 40°C erhöht und sich ein dunkler Niederschlag bildet (hauptsächlich Katalysator). Die Reaktion wird durch eine dünne Phase auf Celite^® (24 cm Durchmesser) filtriert wobei der Katalysatorabfallkuchen nicht gewaschen wird. Das Filtrat wird in den Reaktor zurückgegeben und zusätzliche 4 l Wasser werden über 1 Stunde unter Bildung einer Endtemperatur von 45°C und einer gelben Aufschlämmung zugegeben. Das Gemisch kann sich über Nacht auf 20 bis 25°C unter Rühren abkühlen. Die Feststoffe werden durch Vakuumfiltration gesammelt und mit Wasser (4 l) gewaschen. Die Feststoffe werden bei 60°C unter Vakuum auf ein konstantes Gewicht getrocknet. Ausbeute: 319 g (86%) des hellgelben granulären Feststoffs. MS (ES⁺) m/z = 340,2 (M+H)⁺.
Präparation 53
1-Cyclopentylsulfonyl-2-amino-6-(phenylethinyl)benzimidazol
Ausgehend von 1-Cyclopentylsulfonyl-2-amino-6-iodbenzimidazol wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Präparation 52 beschrieben (44% Ausbeute) hergestellt. MS (APC⁺): m/z = 366,2 (M+H)⁺.
Präparation 54
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-phenylethan-1,2-dion)benzimidazol
Wasser (4 l), NaHCO₃ (30 g, 0,357 mol) und MgSO₄ (145 g, 1,205 mol) werden bei 20-25°C vereinigt und bis zur Homogenität (exotherm bis 30,5°C) gerührt. Aceton (4 l) wird unter Bildung eines trüben Gemisches zu der Reaktion gegeben, gefolgt von 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(phenylethinyl)benzimidazol (200 g, 0,590 mol). Die entstehende Aufschlämmung wird mit KMnO₄ (360 g, 2,278 mol) unter Bildung einer schrittweisen Exothermie bis 40°C über 1 Stunde behandelt. Nach einer weiteren Stunde (35°C) wird ein Aliquot des Reaktionsgemisches mit CH₃CN zur HPLC Analyse verdünnt. Das HPLC Chromatogramm zeigt den vollständigen Verbrauch des Ausgangsmaterials mit einer reinen Bildung eines leicht stärker polaren Produkts. Na₂SO₃ (400 g) wird zu dem Reaktionsgemisch gefolgt von EtOAc (3 l) gegeben. Es wird 20% H₂SO₄ in Wasser (300 ml) zu dem Reaktionsgemisch über 25 Minuten (Temperaturbereich 30 bis 40°C. Eine große Menge an festem MnO₂ wird gebildet) gegeben. Die Phasen können sich trennen und ein Aliquot der oberen organischen Phase zur HPLC Analyse (HPLC Chromatogramm zeigt ein reines Produkt) wird gesammelt. Die organische Phase wird abgetrennt und durch Filtration durch Celite^® gereinigt. Die wässrige Phase (schwarz und dick) wird mit EtOAc (2 l) rückextrahiert und die entstehende organische Phase wird durch Filtration durch Celite^® geklärt. EtOAc (1 l) wird zum Waschen der Celite^® verwendet. Die organischen Phasen werden vereinigt und bei 40°C unter Vakuum konzentriert (7 l werden entfernt), wobei sich zwei Phasen bilden. EtOAc (2 l) wird zu dem Gemisch gegeben, gefolgt von Wasser (0,5 l) und NaCl (30 g). Die Phasen werden getrennt und die wässrige Phase wird mit EtOAc (0,5 l) rückextrahiert. Die organischen Phasen werden vereinigt, mit MgSO₄ getrocknet und EtOAc (2 l) wird zum Waschen des MgSO₄ zugegeben. Das Lösemittel wird unter Vakuum bei 40°C unter Bildung von 189 g der gelben Feststoffe entfernt. Die Feststoffe werden unter Vakuum bei 60°C bis zu einem konstanten Gewicht unter Bildung eines Endgewichts von 182 g (83%) getrocknet. Das analytisch reine Endprodukt wird mittels Umkristallisation aus EtOAc erhalten. MS (ES⁺) m/z = 372,2 (M+H)⁺.
Präparation 55
1-Cyclopentylsulfonyl-2-amino-6-(2-phenylethan-1,2-dion)benzimidazol
Ausgehend von 1-Cyclopentylsulfonyl-2-amino-6-(phenylethinyl)benzimidazol wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Präparation 54 beschrieben, als gelber Feststoff mit 1,29 g (99% Ausbeute) hergestellt. MS (APC⁺): m/z = 398,8 (M+H)⁺.
Präparation 56
1-Isopropylsulfonyl-2-aminobenzimidazol-6-borsäure
Ein 5 l Bodenkolben, der mit einem Trockeneis/Acetonbad, einer Stickstoffatmosphäre, einem mechanischen Rührer, einem Thermoelement und einem Zugabetrichter mit einem Septum mit 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-iodbenzimidazol (125 g, 342 mmol) und THF (1,2 l) ausgestattet ist, wird auf –77°C gekühlt (es entsteht eine Aufschlämmung). Zu dieser Aufschlämmung wird PhLi (1,8 M in c-Hexan/Ether, 599 ml, 1078 mmol) über 25 Minuten gegeben. wobei die Temperatur unter –67°C gehalten wird. Nach dem Rühren der entstehenden grünen Aufschlämmung für 20 Minuten unter Kühlen auf –77°C wird t-BuLi (1,7 M in Pentan, 503 ml, 856 mmol) über 25 Minuten zugegeben, wobei die Temperatur der Reaktion unter –67°C gehalten wird. Das Gemisch wird bei –75°C für 40 Minuten gerührt und dann wird Triisopropylborat (276 ml, 1198 mmol) über 15 Minuten zugegeben, wobei die Temperatur unter –65°C gehalten wird. Die entstehende Aufschlämmung wird langsam über 2 Stunden auf 0°C gekühlt, dann wird ein Gemisch aus konzentriertem HCl (wässrig) und Wasser (400 ml) zugegeben, bis pH 2 erreicht ist. Das Gemisch wird für 1 Stunde gerührt und dann mit 5 N NaOH auf pH > 12 eingestellt, während die Temperatur < 10°C beträgt. Wasser (1 l) wird zugegeben und die Phasen werden getrennt. Die wässrige Phase wird mit EtOAc (300 ml) gewaschen und dann mit konzentriertem HCl (wässrig) auf pH 6 eingestellt. Das Gemisch wird mit EtOAc (2 × 700 ml) extrahiert und die vereinigten Extrakte (Na₂SO₄) werden getrocknet, filtriert und im Vakuum zu einer orangen Paste (116 g) konzentriert. Die Paste wird in warmem (–60°C) 2-Propanol (360 ml) gelöst und dann Wasser (1,4 l) zugegeben. Die Lösung wird für 3 Stunden auf 0°C gekühlt. Der entstehende Feststoff wird durch Filtration gesammelt, mit Wasser gewaschen und dann unter konstantem Gewicht unter Bildung der Titelverbindung (34,9 g, 36% Ausbeute) als hellbraune Kristalle luftgetrocknet. Es wird ein zweites Kristallisat aus dem Filtrat (4,95 g, 41% Gesamtausbeute) erhalten. MS (ES⁺): m/z = 284 (M+H)⁺.
Präparation 57
2,4-(Dibrom)-5-(phenyl)imidazol
Zu einer Suspension aus 4-Phenylimidazol (51,0 g, 354 mol) in AcOH (450 ml) wird tropfenweise Brom (39,9 ml, 778 mmol) bei Raumtemperatur unter Stickstoff bei einer derartigen Geschwindigkeit so gegeben, dass die innere Temperatur < 30°C beträgt, wobei ein Eisbad zur Kühlung verwendet wird. Das Gemisch wird bei Raumtemperatur für 22 Stunden gerührt (zu welcher Zeit die Analyse gemäß LC-MS anzeigt, dass das Monobromzwischenprodukt noch vorhanden ist). Zusätzliches Brom (12 ml) wird zugegeben und die Reaktion wird für 24 Stunden gerührt und dann mit Wasser (1600 ml) verdünnt. Das Gemisch wird mit Ether (800 dann 400 ml) verdünnt und die vereinigten organischen Phasen werden mit NaHCO₃ (5%, 1000 ml), Wasser (2 × 1000 ml) und dann NaHCO₃ (500 ml) gewaschen. Die organische Phase (Na₂SO₄) wird getrocknet, filtriert und im Vakuum teilweise konzentriert. Hexan (500 ml) wird zugegeben und das Gemisch wird wieder teilweise im Vakuum zu etwa 600-700 ml konzentriert. Der Feststoff wird durch Filtration gesammelt und unter Bildung der Titelverbindungen (70,9 g, 66% Ausbeute) als blassgelbes Pulver luftgetrocknet. MS (ES⁺): m/z = 301 (M+H)⁺.
Präparation 58
1-(Trimethylsilylethoxymethyl)-2,5-(dibrom)-4-(phenyl)imidazol
Zu einer Lösung aus 2,4-(Dibrom)-5-(phenyl)imidazol (73,86 g, 244,6 mmol) in trockenem THF (800 ml) die unter Stickstoff auf 1°C gekühlt ist, wird portionsweise NaH (60% ungewaschen in Mineralöl, 11,25 g, 281 mmol) gegeben, wobei die Reaktionstemperatur bei < 10°C gehalten wird. Das Gemisch wird auf –7°C gekühlt und dann wird Silylethoxymethylchlorid (SEMCI) (42,0 g, 252 mmol) tropfenweise (2°C) zugegeben. Das Gemisch wird für 2,5 Stunden (10°C) gerührt und dann mit Wasser (1400 ml) verdünnt und mit Ether (2 × 600 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden getrocknet (Na₂SO₄), filtriert und im Vakuum konzentriert. Das rohe Material wird durch ein Kissen aus Silicagel (700 g) filtriert, mit Hexan (3 l), dann 10% (3 l) und 20% (3 l) EtOAc/Hexan unter Bildung des Materials eluiert, das aus heißem Isopropylalkohol (500 ml) umkristallisiert ist, der über 2 Stunden auf Raumtemperatur und dann für 30 Minuten auf 5°C gekühlt wird. Der Feststoff wird durch Filtration gesammelt, mit kaltem Isopropylalkohol gewaschen und dann unter Bildung von 54,2 g (51% Ausbeute) als weiße Kristalle luftgetrocknet. MS (ES⁺): m/z = 431 (M+H)⁺.
Präparation 59
1-(Trimethylsilylethoxymethyl)-2-(formyl)-5-(brom)-4-(phenyl)imidazol
Zu einer Lösung aus 1-(Trimethylsilylethoxy)-2,5-(dibrom)-4-(phenyl)imidazol (60,3 g, 140 mmol) in trockenem THF (600 ml), die unter Stickstoff auf –11°C gekühlt ist, wird tropfenweise eine Lösung aus Isopropylmagnesiumchlorid (2 M THF, 87,2 ml, 174 mmol) gegeben, wobei sich eine Exothermie auf 1°C entwickelt. Das Gemisch wird bei dieser Temperatur für 30 Minuten gerührt und dann wird trockenes DMF (32,4 ml, 419 mmol) (8°C) zugegeben und für 45 Minuten gerührt. Eine gesättigte wässrige Lösung aus NH₄Cl (500 ml) und Wasser (100 ml) wird zugegeben, die Phasen werden getrennt und die wässrige Phase wird mit Ethylacetat (300 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden getrocknet (Na₂SO₄), filtriert und im Vakuum konzentriert und der Rückstand wird durch Chromatographie (Biotage 75 lang, eluiert mit 5% EtOAc/Hexan) unter Bildung von 33,6 g (63% Ausbeute) als gelbes Öl gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 323 (M+H)⁺.
Präparation 60
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(trimethylsilylethoxymethyl)-2-(formyl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol
Zu einer Lösung aus 1-(Trimethylsilylethoxymethyl)-2-(formyl)-5-(brom)-4-(phenyl)-imidazol (532 mg, 1,39 mmol) in trockenem Toluol (9 ml), das vorher mit einem Stickstoffstrom gespült wurde, wird PdCl₂ (PPh₃)₂ (49 mg, 0,0697 mmol) in einer Portion gegeben. Nach 5 Minuten wird eine Suspension aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-borsäurebenzimidazol (472 mg, 1,67 mmol) in Ethanol (6 ml) des vorher mit einem Stickstoffstrom gespült wurde, gefolgt von Natriumcarbonat (2 M in Wasser, 3,4 ml, 6,95 mmol) zugegeben. Das Gemisch wird für 2,5 Stunden bei 90°C gerührt, auf Raumtemperatur gekühlt und mit Wasser (20 ml) verdünnt. Das Gemisch wird mit EtOAc (3 × 30 ml) extrahiert und die vereinigten organischen Phasen werden mit gesättigtem wässrigem Natriumchlorid (30 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird durch Blitzchromatographie (SiO₂, Eluent Hexan/EtOAc 1 : 1 bis 1 : 3) unter Bildung eines braunen Feststoffs, 384 mg, 51% Ausbeute, gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 540,2 (M+H)⁺.
Präparation 61
1-Benzyl-2,4,5-tribromimidazol
Es werden 2,4,5-Tribromimidazol (15,29 g, 0,050 mol), Cäsiumcarbonat (18,0 g, 0,055 mol), Benzylbromid (6,3 ml, 0,053 mol) und Dimethylformamid (100 ml) vereinigt und bei 20°C für 18 Stunden gerührt. Die Feststoffe werden filtriert und unter verringertem Druck konzentriert. Es wird in Dichlor methan suspendiert, durch ein 2 cm Silicagelkissen filtriert und mit Dichlormethan (1 l) gewaschen. Die Filtrate werden unter verringertem Druck konzentriert. Sie werden in Dichlormethan (15 ml) rückgelöst, 4 M HCl in Dioxan (12,5 ml, 0,050 mol) wird zugegeben, auf –20°C gekühlt und die Feststoffe werden filtriert. Das Filtrat wird konzentriert, in Ethylether gelöst, 1 M HCl/Ether (20 ml) und Hexan (40 ml) werden zugegeben, auf –20°C gekühlt und filtriert. Die Feststoffe werden vereinigt und unter verringertem Druck unter Bildung von 19,6 g (90%, 0,045 mol) der Titelverbindung getrocknet. MS (ES⁺): m/z = 393,0 (M+H)⁺.
Beispiel 62
1-Benzyl-4,5-dibrom-2-(2,4-difluorphenyl)imidazol
Ein Gemisch aus 1-Benzyl-2,4,5-tribromimidazol (1,043 g, 2,42 mmol), 2,4-Difluorphenylborsäure (0,682 g, 4,32 mmol), Palladiumacetat (0,027 g, 0,12 mmol), R(+)-2,2'-Bis(di-p-tolylphosphino)-1,1'-binaphthyl (0,098 g, 0,14 mmol), 2 M Natriumcarbonat (3,6 ml, 4,83 mmol), Methanol (3,6 ml) und Toluol (36 ml) wird für 18 Stunden am Rückfluss erhitzt. Es wird auf Umgebungstemperatur gekühlt und mit Ethylacetat verdünnt. Es wird mit gesättigtem Natriumcarbonat und gesättigtem Natriumchlorid gewaschen, mit Magnesiumsulfat getrocknet und der Rückstand wird auf Silicagel unter Elution mit Hexan/Ethylacetatgemischen unter Bildung von 1-Benzyl-4,5-dibrom-2-(2,4-difluorphenyl)-1H-imidazol (0,39 g) gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 461,1 (M+H)⁺.
Präparation 63
1-Benzyl-4-brom-5-(3,5-difluorphenyl)-2-(2,4-difluorphenyl)imidazol
Ein Gemisch aus 1-Benzyl-4,5-dibrom-2-(2,4-difluorphenyl)imidazol (0,386 g, 0,90 mmol), 3,5-Difluorphenyloborsäure (0,15 g, 0,945 mmol), trans-Dichlorbis(triphenylphosphin)palladium(II) (0,065 g, 0,09 mmol), 2 M Natriumcarbonat (0,90 ml), Methanol (1,5 ml) und Toluol (10 ml) wird für 18 Stunden am Rückfluss erhitzt und dann auf Umgebungstemperatur gekühlt. Es wird mit Ethylacetat verdünnt und mit gesättigtem Natriumbicarbonat, gesättigtem Natriumchlorid gewaschen, mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und die Lösemittel werden unter verringertem Druck entfernt. Eine Reinigung des Rückstands auf Silicagel unter Elution mit Hexan/Ethylacetatgemischen ergibt 1-Benzyl-4-brom-5-(3,5-difluorphenyl)-2-(2,4-difluorphenyl)-1H-imidazol (0,19 g). MS (ES⁺): m/z = 461,0 (M+H)⁺.
Präparation 64
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(benzyl)-5-(3,5-difluorphenyl)-2-(2,4-difluorphenyl)-imidazol-4-ylbenzimidazol
Ein Gemisch aus 1-Benzyl-4-brom-5-(3,5-difluorphenyl)-2-(2,4-difluorphenyl)imidazol (0,061 g, 0,13 mmol), 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-benzimidazol-6-borsäure (0,113 g, 0,40 mmol) (beschrieben in Präparation 56), trans-Dichlorbis(triphenylphosphin)palladium (II) (0,009 g, 0,013 mmol), 2 M Natriumcarbonat (0,20 ml) und 1,2-Dimethoxyethan (5 ml) wird für 18 Stunden am Rückfluss erhitzt. Es wird auf Umgebungstemperatur gekühlt, mit Ethylacetat verdünnt und mit gesättigtem Natriumbicarbonat, gesättigtem Natriumchlorid gewaschen, mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und die Lösemittel werden unter verringertem Druck entfernt. Eine Reinigung aus Silicagel mit Dichlormethan/Methanolgemisch ergibt die Titelverbindung (0,084 g). MS (ES⁺): m/z = 620,1 (M+H)⁺.
Präparation 65
1-Benzyl-4,5-dibrom-2-methylimidazol
Zu einer Lösung aus 4,5-Dibrom-2-methylimidazol (3,0 g, 12,5 mmol) in 25 ml DMF werden Natriumcarbonat (2,0 g, 18,8 mmol) und Benzylbromid (1,64 ml, 13,8 mmol) gegeben. Die Lösung wird bei Raumtemperatur für 72 Stunden gerührt. Die Reaktion wird in Wasser gegossen und mit EtOAc extrahiert. Die organische Phase wird mit Wasser und gesättigtem wässrigem Natriumchlorid gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Das Gemisch wird filtriert und zu 3,8 g rohem Öl konzentriert. Das Öl wird durch Radialchromatographie unter Elution mit 40% EtOAc in Hexan gereinigt. Die geeigneten Fraktionen werden zu 3,1 g (75%) der Titelverbindung als farbloses Öl konzentriert. MS (ES⁺): m/z = 331,0 (M+H)⁺.
Präparation 66
1-Benzyl-4-brom-5-(2,4-difluorphenyl)-2-methylimidazol
Zu einer Lösung aus 1-(Benzyl)-4,5-(dibrom)-2-(methyl)imidazol (1,71 g, 5,18 mmol) in 8 ml DME wird 2,4-Difluorphenylborsäure (0,90 g, 5,70 mmol) gegeben. Natriumcarbonat (1,65 g, 15,5 mmol) gelöst in 1 ml Wasser und trans-Dichlorbis(triphenylphosphin)palladium (II) (1,09 g, 1,55 mmol) wird zugegeben. Das Gemisch wird unter Rühren unter Stickstoff auf 100°C erhitzt. Nach 3 Stunden wird die Lösung gekühlt und über ein Kissen aus Celite^® und Natriumsulfat filtriert. Das rohe Produkt wird durch Radialchromatographie unter Elution mit 35% EtOAc, 1% CH₂Cl₂ in Hexan unter Bildung von 1,12 g (60%) der Titelverbindung als gelbes Öl gereinigt. Diese Verbindung wird direkt ohne weitere Reinigung verwendet. MS (ES⁺): m/z = 364,0 (M+H)⁺.
Präparation 67
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(benzyl)-5-(2,4-difluorphenyl)-2-(methyl)imidazol-4-yl)benzimidazol
Zu einer Lösung aus 1-(Benzyl)-4-(brom)-5-(2,4-difluorphenyl)-2-(methyl)imidazol (1,12 g, 3,08 mmol) in 8 ml DME wird 1-Isopropylsulfonyl-2-aminobenzimidazol-6-borsäure (2,62 g, 9,25 mmol) (beschrieben in Präparation 58) gegeben. Natriumcarbonat (0,98 g, 9,25 mmol), das in Wasser (1 ml) gelöst ist, und trans-Dichlorbis(triphenylphosphin)palladium (II) (0,65 g, 0,93 mmol) werden zugegeben. Das Gemisch wird unter Rühren unter Stickstoff auf 100°C erhitzt. Nach 3 Stunden wird die Lösung gekühlt und über ein Kissen aus Celite und Natriumsulfat filtriert. Der Rückstand wird durch Radialchromatographie unter Elution mit 3% Methanol in CH₂Cl₂ mit einem Gradienten bis 10% Methanol gereinigt. Eine zweite Reinigung durch Radialchromatographie unter Elution mit 4% Methanol in CH₂Cl₂ mit einem Gradienten bis 6% Methanol wird unter Bildung von 390 mg (24%) der Titelverbindung als gelber Feststoff ausgeführt. MS (ES⁺): m/z = 522,0 (M+H)⁺.
Präparation 68
5-Brom-3-methyl-1-phenylpyrazol
Zu einer Lösung aus 3-Methyl-1-phenyl-2-pyrazol-5-on (2,0 g, 11,5 mmol) in 5 ml wasserfreiem Acetonitril wird Phosphoroxybromid (9,9 g, 34,5 mmol) gegeben. Das Gemisch wird am Rückfluss für 3 Stunden unter Stickstoff erhitzt. Die Reaktion wird auf 0°C gekühlt und mit Ethylacetat und Wasser verdünnt. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und zu einem rohen gelben Öl gegeben, das ein 1 : 1 Gemisch der mono- bis dibromierten Produkte enthält. Eine Reinigung des Rückstands durch Radialchromatographie unter Elution mit Methylenchlorid ergibt 677 mg (25%) eines farblosen Öls. Es werden 925 mg des weniger polar dibromierten Produkts als weißer Feststoff isoliert. MS (ES⁺): m/z = 238,0 (M+H)⁺.
Präparation 69
5-Brom-3-tert-butyl-1-phenylpyrazol
Zu einer Lösung aus 3-tert-Butyl-1-phenyl-2-pyrazol-5-on (1,0 g, 4,6 mmol) in 6 ml wasserfreiem Acetonitril wird Phosphoroxybromid (2,0 g, 6,9 mmol) gegeben. Das Gemisch wird für 3 Stunden unter Stickstoff am Rückfluss erhitzt. Die Reaktion wird auf 0°C gekühlt und mit Ethylacetat und Wasser verdünnt. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und zu einem rohen farblosen Öl konzentriert. Die Titelverbindung wird durch Radialchromatographie unter Elution mit 70 : 30 Methylenchlorid : Hexan unter Bildung von 1,1 g (86%) als farbloses Öl gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 280,0 (M+H)⁺.
Präparation 70
2-Phenylimidazo[1,2-a]pyridin
Es wird eine Lösung aus 2-Bromacetophenon (1 g, 5,024 mmol) und 2-Aminopyridin (591 mg, 6,280 mmol) in Ethanol (4 ml), die NaHCO₃ (658 mg, 7,837 mmol) enthält, bei Raumtemperatur für 6 Stunden gerührt. Das Gemisch wird mit Wasser (15 ml) verdünnt und mit Ether (3 × 20 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit gesättigtem wässrigem Natriumchlorid (25 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum konzentriert. Eine Reinigung des Rückstands durch Blitzchromatographie (SiO₂, Eluent : Hexan/EtOAc 4 : 1) ergibt einen weißen Feststoff mit 79% Ausbeute. MS (ES⁺): m/z = 195,1 (M+H)⁺.
Präparation 71
8-Methyl-2-phenylimidazo[1,2-a]pyridin
Ausgehend von 2-Amino-3-methylpyridin wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Präparation 70 beschrieben, mit 73% Ausbeute hergestellt. MS (ES⁺): m/z = 195,1 (M+H)⁺.
Präparation 72
3-Iod-2-phenylimidazo[1,2-a]pyridin
Eine Lösung aus 2-Phenylimidazo[1,2-a]pyridin (50 mg, 0,257 mmol) in Acetonitril (1,25 ml) wird mit N-Iodsuccinimid (NIS) (69 mg, 0,309 mmol) bei Raumtemperatur für 5 Stunden behandelt. Das Gemisch wird mit Ether (10 ml) verdünnt, mit einer gesättigten wässrigen Lösung aus NaHCO₃ (15 ml) und NaHSO₃ (40%, 15 ml) gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) und im Vakuum konzentriert. Es wird ein gelber Feststoff mit 80 mg, 97% Ausbeute erhalten. MS (ES⁺): m/z = 321,0 (M+H)⁺.
Präparation 73
3-Iod-8-methyl-2-phenylimidazo[1,2-a]pyridin
Ausgehend von 8-Methyl-2-phenylimidazo[1,2-a]pyridin wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Präparation 72 beschrieben, mit 65% Ausbeute hergestellt. MS (ES⁺): m/z = 335,0 (M+H)⁺.
Präparation 74
2-Phenyl-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-a]imidazol
Es wird 2-Iminopyrrolidinhydrochlorid (6,98 g, 57,8 mmol) gemäß Callahan, et al., J. Med. Chem. 2002, 45, 999-1001) hergestellt und 2-Bromacetophenon (3,8 g, 19,3 mmol) wird mit Na₂CO₃ (8,2 g, 77,2 mmol) in trockenem DMF (25 ml) vereinigt und bei 80°C für 18 Stunden erhitzt. Dann wird das Gemisch auf Raumtemperatur gekühlt, Wasser (60 ml) wird zugegeben und mit EtOAc (3 × 100 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden im Vakuum konzentriert, der Rückstand wird mit Ether (100 ml) verdünnt und mit gekühltem Wasser (3 × 80 ml) gewaschen. Die organische Phase wird im Vakuum unter Bildung eines weißen Feststoffs mit 3,2 g, 89% Ausbeute, konzentriert. MS (ES⁺): m/z = 185,1 (M+H)⁺.
Präparation 75
2-(4-Fluorphenyl)-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-a]imidazol
Ausgehend von 2-Iminopyrrolidinhydrochlorid und 2-Fluoracetophenon wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Präparation 74 beschrieben, mit 99% Ausbeute hergestellt.
Präparation 76
3-Brom-2-phenyl-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-a]imidazol
Zu einer Lösung aus 2-Phenyl-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-a]imidazol (3,38 g, 18,3 mmol) in trockenem CH₂Cl₂ (113 ml) wird langsam Brom (1,0 ml, 20,2 mmol) gegeben und das Gemisch wird bei Raumtemperatur für 1,5 Stunden gerührt. Eine gesättigte wässrige Lösung aus NaHCO₃ (100 ml) wird zugegeben und mit CH₂Cl₂ (3 × 100 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit NaHSO₃ (40%, 30 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird durch Blitzchromatographie (SiO₂, Eluent: CH₂Cl₂ zu CH₂Cl₂/MeOH 20 : 1) unter Bildung eines roten Feststoffs mit 3,54 g, 73% Ausbeute, gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 263,0 (M+H)⁺.
Präparation 77
3-Brom-2-(4-fluorphenyl)-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-a]imidazol
Ausgehend von 2-(4-Fluorphenyl)-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[1,2-a]imidazol wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Präparation 76 beschrieben, mit 95% Ausbeute hergestellt.
Präparation 78
2-Phenyl-5,6,7,8-tetrahydroimidazo[1,2-a]pyridin
2-Iminopiperidinhydrochlorid (4,9 g, 36,4 mmol, 3 Äquivalente) und 2-Bromacetophenon (2,4 g, 12,1 mmol) werden mit Na₂CO₃ (5,1 g, 48,4 mmol) in trockenem DMF (15 ml) vereinigt und das Gemisch wird bei 80°C für 16 Stunden erhitzt. Dann wird das Gemisch auf Raumtemperatur gekühlt, Wasser (200 ml) wird zugegeben und mit Ether (3 × 100 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit Wasser (2 × 50 ml) gewaschen und die wässrige Phase wird mit Ether (2 × 50 ml) rückextrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit gesättigtem wässrigem Natriumchlorid (100 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird durch Blitzchromatographie (SiO₂ : Eluent: CH₂Cl₂ bis CH₂Cl₂ : MeOH 50 : 1) unter Bildung eines braunen Feststoffs mit 1,7 g, 71% Ausbeute, gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 199,1 (M+H)⁺.
Präparation 79
3-Brom-2-phenyl-5,6,7,8-tetrahydroimidazo[1,2-a]pyridin
Zu einer Lösung aus 2-Phenyl-5,6,7,8-tetrahydroimidazo[1,2-a]pyridin (1,7 g, 8,9 mmol) in trockenem CH₂Cl₂ (55 ml) wird langsam Brom (0,5 ml, 9,8 mmol) gegeben und das Gemisch wird bei Raumtemperatur für 3 Stunden gerührt. Eine gesättigte wässrige Lösung aus NaHCO₃ (100 ml) wird dann zugegeben und mit CH₂Cl₂ (3 × 100 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit NaHSO₃ (40%, 30 ml), gefolgt von gesättigtem wässrigem Natriumchlorid (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird durch Blitzchromatographie (SiO₂, Eluent: CH₂Cl₂ bis CH₂Cl₂/MeOH 20 : 1) unter Bildung eines braunen Feststoffs mit 2,0 g, 82% Ausbeute, gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 277,0 (M+H)⁺.
Präparation 80
3-Ethoxycarbonyl-2-phenyl-5,6-dihydro-4H-pyrrolo[1,2-b]pyrazol
Zu einer Lösung aus 1-Aminopyrrolidin-2-onhydrochlorid (3,8 g, 27,8 mmol) (WO 02/094833) wird Ethylbenzoylacetat (4,3 ml, 25 mmol) gefolgt von Pyridin (10 ml) bei Raumtemperatur unter Stickstoff gegeben. Das Gemisch wird bei Raumtemperatur für 20 Stunden gerührt und dann mit Wasser (50 ml) verdünnt und mit Toluol (2 × 50 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen (MgSO₄) werden getrocknet und im Vakuum unter Bildung eines braunen Öls mit 6,23 g, 82% Ausbeute, konzentriert und mit NaOEt (frisch hergestellt, 3,1 g, 45,4 mmol, 2 Äquivalente) in Toluol bei 120°C für 8 Stunden behandelt. Das Gemisch wird auf Raumtemperatur gekühlt und Wasser (100 ml) und konzentrierte HCl werden zugegeben, bis ein pH von 4 erreicht ist. Das Gemisch wird mit EtOAc (3 × 200 ml) extrahiert und getrocknet (MgSO₄) und die vereinigten organischen Phasen werden im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird in ein Biotagesystem (Eluent: CH₂Cl₂/MeOH 40 : 1) unter Bildung eines gelben Feststoffs, 1,8 g, 36% Ausbeute, gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 257,1 (M+H)⁺.
Präparation 81
3-Brom-2-phenyl-5,6-dihydro-4H-pyrrolo[1,2-b]pyrazol
A. 3-Carboxy-2-phenyl-5,6-dihydro-4H-pyrrolo[1,2-b]pyrazol
Zu einer Lösung aus 3-Ethoxycarbonyl-2-phenyl-5,6-dihydro-4H-pyrrolo[1,2-b]pyrazol (2,1 g, 8,2 mmol) in MeOH (20 ml) wird eine Lösung aus NaOH (15%, 40 ml) gefolgt von Acetonitril (5 ml) gegeben und bei 50°C für 3 Stunden gerührt. Das Gemisch wird auf Raumtemperatur gekühlt und HCl (10%) wird zugegeben, bis ein pH von 3 erreicht ist. Das Gemisch wird mit EtOAc (3 × 100 ml) extrahiert und mit gesättigtem wässrigem Natriumchlorid (100 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum unter Bildung eines gelben Feststoffs mit 1,82 g 97% Ausbeute, konzentriert. MS (ES⁺): m/z = 229,1 (M+H)⁺.
B. 3-Brom-2-phenyl-5,6-dihydro-4H-pyrrolo[1,2-b]pyrazol
Zu einer Lösung aus 3-Carboxy-2-phenyl-5,6-dihydro-4H-pyrrolo[1,2-b]pyrazol (820 mg, 3,59 mmol) in trockenem DMF (15 ml), die vorher entgast wurde, wird N-Bromsuccinimid (NBS) (702 mg, 3,95 mmol) gegeben und bei Raumtemperatur für 18 Stunden gerührt. Dann wird sie mit EtOAc (80 ml) verdünnt und mit gekühltem Wasser (5 × 10 ml) gewaschen. Die organische Phase (MgSO₄) wird getrocknet und im Vakuum zu einem gelben Feststoff mit 1,0 g, konzentriert. MS (ES⁺): m/z = 263,0 (M+H)⁺.
Präparation 82
1-(4-Methoxybenzyl)-4-phenylimidazol
Zu einer Lösung aus 4-Phenylimidazol (7,49 g, 51,9 mmol) in DMF (30 ml), die unter Stickstoff auf 0°C gekühlt ist, wird portionsweise NaH (95%, 2,56 g, 101 mmol) gegeben. Nach 10 Minuten wird p-Methoxybenzylchlorid (PMBCI) (7,50 ml, 55,3 mmol) tropfenweise zugegeben. Es wird für 5 Stunden gerührt, mit MeOH (5 ml) gestoppt, mit Wasser (100 ml) verdünnt und mit CH₂Cl₂ (2 × 100 ml) verdünnt. Die vereinigten organischen Phasen (Na₂SO₄) werden getrocknet und im Vakuum zu einem Volumen von 80 ml unter Bildung von 12,2 g (89% Ausbeute) nach der Kristallisation konzentriert. MS (ES⁺): m/z = 265 (M+H)⁺.
Präparation 83
1-(4-Methoxybenzyl)-2-formyl-4-phenylimidazol
Zu einer Lösung aus 1-(4-Methoxybenzyl)-4-phenylimidazol (2,00 g, 7,56 mmol) in THF (20 ml), die unter Stickstoff auf –78°C gekühlt ist, wird tropfenweise eine Lösung aus n-Butyllithium (1,6 M Hexan, 5,60 ml, 8,96 mmol) gegeben. Das Gemisch wird bei dieser Temperatur für 10 Minuten gerührt und dann wird DMF (1,43 ml, 18,5 mmol) tropfenweise zugegeben und das Rühren wird für 30 Minuten fortgesetzt. Eine gesättigte wässrige Lösung aus NH₄Cl (50 ml) wird zugegeben, die Temperatur wird auf Raumtemperatur erhöht und die wässrige Phase wird mit CH₂Cl₂ (150 ml) extrahiert, getrocknet (Na₂SO₄) und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird durch Blitzchromatographie (SiO₂, Hexan/EtOAc 9 : 1) unter Bildung von 1,75 g (79% Ausbeute) gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 293 (M+H)⁺.
Präparation 84
1-(4-Methoxybenzyl)-2-hydroxymethyl-4-phenylimidazol
Eine Lösung aus 1-(4-Methoxybenzyl)-2-formyl-4-phenylimidazol (1,75 g, 5,99 mmol) in CH₂Cl₂/MeOH (1:1, 60 ml) wird mit NaBH₄ (480 mg, 12,7 mmol) bei Raumtemperatur für 15 Minuten behandelt. Sie wird mit H₂O (50 ml) gestoppt, mit CH₂Cl₂ (2 × 100 ml) extrahiert, getrocknet (Na₂SO₄) und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird durch Blitzchromatographie (SiO₂, CH₂Cl₂/MeOH 20 : 1 → 7 : 1) unter Bildung von 1,69 g (96% Ausbeute) gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 295 (M+H)⁺.
Präparation 85
1-(4-Methoxybenzyl)-2-tert-butyldimethylsilyloxymethyl-4-phenylimidazol
Die Lösung aus 1-(4-Methoxybenzyl)-2hydroxymethyl-4-phenylimidazol (1,68 g, 5,71 mmol) in CH₂Cl₂ (35 ml) mit N,N-Diisopropylethylamin (3,2 ml, 18,4 mmol) und tert-Butyldimethylsilylchlorid (TBSCI) (1,46 g, 9,69 mmol) wird bei Raumtemperatur für 60 Stunden behandelt. Es wird mit H₂O (40 ml) gestoppt, mit CH₂Cl₂ (100 ml) extrahiert, getrocknet (Na₂SO₄) und im Vakuum konzentriert. Man reinigt den Rückstand durch Blitzchromatographie (SiO₂, Hexan/EtOAc 20 : 1 → 9 : 1) unter Bildung von 2,09 g (90% Ausbeute gereinigt. MS(ES⁺): m/z = 409 (M+H)⁺.
Präparation 86
1-(4-Methoxybenzyl)-2-tert-butyldimethylsilyloxymethyl-4-phenyl-5-iodimidazol
Eine Lösung aus 1-(4-Methoxybenzyl)-2-tert-biutyldimethylsilyloxymethyl-4-phenylimidazol (2,08 g, 5,09 mmol) in MeCN (25 ml) mit N-Iodsuccinimid (NIS) (1,35 g, 6,00 mmol) wird bei Raumtemperatur für 24 Stunden behandelt. Das gemisch wird mit Et₂O (100 ml) verdünnt, mit gesättigten NaHCO₃ (25 ml) gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird durch Blitzchromatographie (SiO₂, Hexan/EtOAc 20 : 1 → 9 : 1) unter Bildung von 2,30 g (85% Ausbeute) gereinigt. MS (ES⁺): m/z 535 (M+H)⁺.
Präparation 87
1-(Benzyloxycarbonyl)-4-formylpiperidin
Diisobutylaluminiumhydrid (1 M in Toluol, 30 ml, 30 mmol) wird über 5 Minuten zu einer Lösung aus 1-(Benzyloxycarbonyl)-4-(ethoxycarbonyl)piperidin (7 g, 24 mmol) in wasserfreiem Dichlormethan (150 ml) bei –78°C unter einer Stickstoffatmosphäre gegeben. Das Reaktionsgemisch wird bei dieser Temperatur für 30 Minuten gerührt und dann werden 10% wässriges Natriumtartrat (100 ml) gefolgt von Dichlormethan zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Die Phasen werden getrennt und die wässrige Phase wird mit Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden nacheinander mit 10% wässrigem Natriumtartrat, Wasser und gesättigtem wässrigem Natriumchlorid gewaschen. Sie werden über Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird unter Elution mit 3 : 1 Hexan : Ethylacetat unter Bildung von 3,15 g (53%) der Titelverbindung einer Silicagelchromatographie unterzogen.
Präparation 88
1-(tert-Butoxycarbonyl)-4-formylpiperidin
Ausgehend von 1-(tert-Butoxycarbonyl)-4-(ethoxycarbonyl)piperidin wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Präparation 51 beschrieben, hergestellt.
Präparation 89
4-Formyltetrahydropyran
Ausgehend von 4-(Methoxycarbonyl)tetrahydropyran wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Präparation 87 beschrieben, hergestellt.
Präparation 90
4-(N-tert-Butoxycarbonyl-N-ethylamino)benzaldehyd
A. N-Boc-Schutzgruppenanbringung
Zu einer Lösung aus 4-Aminobenzoesäuremethylester (4 g, 26,4 mmol), (Boc)₂O (8,67 g, 39,6 mmol) und DMAP (0,322 mg, 2,64 mmol) in 50 ml Acetonitril wird Triethylamin (7,345 ml, 52,8 ml) tropfenweise gegeben und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Der Niederschlag wird in Ethylacetat gelöst und mit 3% HCl behandelt, mit Ethylacetat extrahiert und die organischen Phasen werden mit einer gesättigten Lösung aus Natriumbicarbonat und gesättigtem wässrigem Natriumchlorid gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter Bildung von 5,3 g des Produkts konzentriert. Ausbeute: 80%.
¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz): 8,07 (d, 2H, J = 8,8), 7,53 (d, 2H, J = 8,8), 6,78 (s, 1H), 4,00 (s, 3H), 1,64 (s, 9H).
B. N-Alkylierung
Zu einer Suspension aus 60% Natriumhydrid (595 mg, 1,1 Äquivalente) in trockenem DMF und unter Argonatmosphäre werden langsam 4-tert-Butoxycarbonylaminobenzoesäuremethylester (3,24 g, 12,9 mmol) und Ethyliodid (1,206 ml, 1,1 mmol) mittels einer Spritze gegeben und über Nacht gerührt. Ethylacetat wird zugegeben und die entstehende Lösung wird mit gesättigtem Ammoniumchlorid und gesättigtem wässrigem Natriumchlorid gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und konzentriert. Eine Reinigung des Rückstands durch Chromatographie unter Elution mit Hexan/16% Ethylacetat ergibt 2,85 g des reinen Produkts. Ausbeute: 79%.
¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz): 8,11 (dd, J = 8,5, 2,0 Hz, 2H), 7,40 (dd, J = 8,5, 2,0 Hz, 2H), 4,02 (s, 3H), 3,84 (q, J = 6,9 Hz, 2H), 1,56 (s, 9H), 1,28 (t, J = 6,9 Hz, 3H).
C. Esterreduktion
Zu einer Lösung aus 4-(N-tert-Butoxycarbonyl-N-ethylamino)benzoesäuremethylester (2,85 g, 10,2 mmol) in 65 ml trockenem Toluol unter Argonatmosphäre und bei –78°C wird tropfenweise Diisobutylaluminiumhydrid (DIBAL-H) 1 M in Toluol (12,77 ml, 12,77 mmol) gegeben. Das Gemisch wird für 1 Stunde gerührt. Natriumtartrat wird zugegeben, das Bad wird entfernt und das Gemisch wird über Nacht gerührt. Die organische Phase wird mit Ethylacetat extrahiert und die organischen Phasen werden mit gesättigtem wässrigem Natriumchlorid gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und konzentriert. Der Rückstand wird durch Chromatographie unter Elution mit Hexan/Acetat (16%) unter Bildung von 1,24 g des reinen Alkohols gereinigt. Ausbeute: 54%.
¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz): 7,45 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,30 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 4,80 (d, J = 6,1 Hz, 2H), 3,78 (q, J = 7,3 Hz, 2H), 1,78 (t, J = 6,1 Hz, 1H), 1,55 (s, 9H), 1,25 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
D. Alkoholoxidation
4-(N-tert-Butoxycarbonyl-N-ethylamino)benzylalkohol (1,24 g, 5,52 mmol) wird in 50 ml Acetonitril gelöst. Zu dieser Lösung wird Mangandioxid gegeben und das Gemisch wird für zwei Tage bei Raumtemperatur gerührt. Der Rückstand wird durch Celite^® filtriert und das Lösemittel wird unter Bildung von 632 mg an 4-(N-tert-Butoxycarbonyl-N-ethylamino)benzaldehyd konzentriert. Ausbeute: 52%.
¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz): 9,95 (s, 1H), 7,83 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,39 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 3,74 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,18 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
Präparation 91
2,6-Difluor-4-(pyrrolidin-1-yl-ethoxy)benzaldehyd
A. 1-(3,5-Difluorphenoxymethyl)pyrrolidin
Pyrrolidin-1-yl-ethanolhydrochlorid (1,5 g) wird zu einem Gemisch aus 3,5-Difluorphenol (1,0 g), Cäsiumcarbonat (8,78 g), Natriumiodid (1,15 g) in trockenem Dimethylformamid (20 ml) gegeben. Es wird bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Es wird unter verringertem Druck konzentriert und der Rückstand wird durch Chromatographie unter Elution mit Ethylacetat : Hexan (1 : 1) unter Bildung eines Öls (0,8 g, 50%) gereinigt.
B. 2,6-Difluor-4-(pyrrolidin-1-yl-ethoxy)benzaldehyd
Ein Gemisch aus 1-(3,5-Difluorphenoxymethyl)pyrrolidin (0,1 g) und trockenem Tetrahydrofuran (5 ml) wird unter einer Stickstoffatmosphäre auf –78°C gekühlt. Butyllithium (0,29 ml, 1,6 M in Tetrahydrofuran) und N,N,N',N'-Tetramethylethylendiamin (0,5 ml) werden zugegeben und für 30 Minuten gerührt. Dann wird Dimethylformamid (0,07 ml) zugegeben und bei Raumtemperatur für 60 Minuten gerührt. Es wird durch Gießen des Reaktionsgemisches in ein Gemisch aus kaltem gesättigtem wässrigem Ammoniumchlorid und Ethylacetat gestoppt. Die Phasen werden getrennt, die organische Phase wird mit Wasser gewaschen und dann unter verringertem Druck unter Bildung der Titelverbindung als Öl (0,10 g, 94%) konzentriert.
Präparation 92
2-Fluor-4-nitrobenzaldehyd
Ein Bortetrahydrofurankomplex (16,21 ml, 1 M) wird zu einem Gemisch aus 2-Fluor-4-nitrobenzoesäure (1,2 g) und Tetrahydrofuran (10 ml) bei 0°C gegeben. Es wird für 3 Stunden auf 80°C erhitzt. Dann wird auf Raumtemperatur gekühlt und 1 N wässrige Chlorwasserstoffsäure (20 ml) wird zugegeben und es wird mit Ethylacetat extrahiert. Es wird mit gesättigtem wässrigem Natriumbicarbonat gewaschen und die verbleibende organische Phase wird über Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck unter Bildung eines Öls (0,92 g, 83%) konzentriert. (2-Fluor-4-nitrophenyl)methanol (0,91 g) wird zu einem Gemisch aus Mangandioxid (1,1 g) in 20 ml Dichlormethan gegeben. Es wird bei Raumtemperatur über Nacht gerührt und über Celite^® filtriert. Es wird unter verringertem Druck unter Bildung der Titelverbindung als Öl (0,27 g, 30%) konzentriert.
Präparation 93
4-Formyl-N-methylbenzolsulfonamid
A. 4-Hydroxymethyl-N-methylbenzolsulfonamid
Methylamin (4,5 ml, 2 M in Dichlormethan) wird zu einem Gemisch aus 4-Chlorsulfonylbenzoesäure (0,5 g) und Dichlormethan (20 ml) gegeben. Es wird bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Es wird durch Gießen des Reaktionsgemisches in ein Gemisch aus gesättigtem wässrigem Ammoniumchlorid und Ethylacetat gestoppt. Die Phasen werden getrennt, die organische Phase wird mit Wasser gewaschen und die verbleibende Phase wird über Natriumsulfat getrocknet und dann unter verringertem Druck unter Bildung eines Öls (0,40 g, 82%) konzentriert. Ein Borantetrahydrofurankomplex (7,44 ml, 1 M) wird zu einem Gemisch aus 4-Methylsulfamoylbenzoesäure (0,4 g) und Tetrahydrofuran (10 ml) bei 0°C gegeben. Es wird für 3 Stunden auf 80°C erhitzt. Dann wird bei Raumtemperatur gekühlt und 1 N wässrige Chlorwasserstoffsäure (20 ml) wird zugegeben und mit Ethylacetat extrahiert. Es wird mit gesättigtem wässrigem Natriumbicarbonat gewaschen und die verbleibende organische Phase wird über Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck unter Bildung eines Öls (0,28 g, 75%) konzentriert.
B. 4-Formyl-N-methylbenzolsulfonamid
4-Hydroxymethyl-N-methylbenzolsulfonamid (0,28 g) wird zu einem Gemisch aus Mangandioxid (2,8 g) in 20 ml Dichlormethan gegeben. Es wird bei Raumtemperatur über Nacht gerührt und über Celite^® filtriert. Es wird unter verringertem Druck unter Bildung der Titelverbindung als Öl (0,11 g, 40%) konzentriert.
Präparation 94
2-Fluor-4-methylaminobezaldehyd
Diazomethan (22,3 ml, 2 M in Ether) wird zu einem Gemisch aus 2-Fluor-4-nitrobenzoesäure (4,14 g) und Ether (50 ml) gegeben. Es wird bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Dann wird unter verringertem Druck unter Bildung eines Öls (4,08 g, 92%) konzentriert.
Das Gemisch aus 2-Fluor-4-nitrobenzoesäuremethylester (0,85 g), Ammoniumformiat (1,1 g) und Pd/C (10%, 0,32 g) in Ethanol (20 ml) wird bei 95°C für 6 Stunden am Rückfluss erhitzt. Es wird über Celite^® filtriert und unter Bildung eines grauen Feststoffs (0,64 g, 89%) konzentriert.
Formaldehyd (0,15 g) wird zu einem Gemisch aus 2-Fluor-4-aminobenzosäuremethylester (0,62 g), Essigsäure (2,1 ml) und 1,2-Dichlorethan (20 ml) gegeben. Es wird bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Natriumtriacetoxyborhydrid (1,15 g) wird zugegeben und bei Raumtemperatur für 2 Stunden gerührt. Dann wird durch Gießen des Reaktionsgemisches in ein Gemisch aus gesättigtem wässrigem Natriumbicarbonat und Ethylacetat gestoppt. Die Phasen werden getrennt, die organische Phase wird mit Wasser gewaschen und die verbleibende Phase wird über Natriumsulfat getrocknet und dann unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird durch Chromatographie unter Elution mit Ethylacetat : Hexan (1 : 4) unter Bildung von 2-Fluor-4-methylaminobenzoesäuremethylester (0,10 g, 15%) als Öl gereinigt.
Diisobutylaluminiumhydrid (1,0 ml, 1 M in Toluol) wird tropfenweise zu einem Gemisch aus 2-Fluor-4-methylaminobenzolsäuremethylester (0,09 g) und trockenem Toluol (7 ml) bei –78°C unter einer Stickstoffatmosphäre gegeben. Das Gemisch wird für 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Es wird durch Gießen des Reaktionsgemisches in ein Gemisch aus gesättigtem wässrigem Natriumtartrat (20 ml) und Ethylacetat (20 ml) gestoppt. Die Phasen werden getrennt, die organische Phase wird mit Wasser gewaschen und die verbleibende Phase wird über Natriumsulfat getrocknet und dann unter verringertem Druck unter Bildung eines Öls (0,07 g, 88%) konzentriert.
Tetrapropylammoniumperruthenat (0,35 g) wird zu einem Gemisch aus (2-Fluor-4-methylaminophenyl)methanol (0,18 g), 4-Methylmorpholin-N-oxid (0,38 g) und frisch aktivierten pulverisierten Molekularsieben (0,30 g) in trockenem Dichlormethan (10 ml) bei Raumtemperatur unter einer Stickstoffatmosphäre gegeben. Es wird für 30 Minuten gerührt und dann wird weiteres Dichlormethan zugegeben und durch ein Florisil-Celite^® Kissen filtriert. Eine Konzentration unter verringertem Druck ergibt die Titelverbindung (0,25 g, 76%) als Öl.
Präparation 95
1-Isopropylsulfonyl-2-chlor-6-iodbenzimidazol
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-iodbenzimidazol (0,20 g, 0,55 mmol) wird in drei Portionen über 5 Minuten zu einer Suspension aus Kupfer(II)chlorid (0,089 mg, 0,66 mmol) und tert-Butylnitrit (0,085 g, 0,1 ml, 0,82 mmol) in 2 ml Acetonitril bei 65°C gegeben. Nach 30 Minuten wird die entstehende grüne Lösung in Wasser gegossen und die wässrige Phase wird mit Ethylacetat (3 × 25 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden nacheinander mit Wasser (2 × 15 ml) und gesättigtem wässrigem Natriumchlorid (15 ml) gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter verringertem Druck unter Bildung der Titelverbindung (0,18 g, 85%) konzentriert.
Präparation 96
2-(tert-Butyldimethylsilyloxy)-1-[2-chlor-3-(isopropylsulfonyl)-3H-benzimidazol-5-yl]-2-phenylethanon
Unter einer Stickstoffatmosphäre wird tert-Butylnitrit (2,44 ml, 18,45 mmol, 1,5 Äquivalente) tropfenweise zu einer gerührten Suspension aus CuCl₂ (2,20 g, 14,76 mmol) in 43 ml CH₃CN gegeben. Das entstehende Gemisch wird bei 65°C erhitzt und langsam wird 1-[2-Amino-3-(propan-2-sulfonyl)-3H-benzoimidazol-5-yl]-2-(tert-butyldimethylsilyloxy)-2-phenylethanon (6 g, 12,3 mmol), 1 Äquivalent) portionsweise über einen Gesamtzeitraum von 10 Minuten zugegeben. Das Gemisch wird für 30 Minuten gerührt, auf Raumtemperatur gekühlt, über 200 ml Wasser gegossen und mit 200 ml EtOAc verdünnt. Die Phasen werden getrennt und die organische wird mit weiterem EtOAc (dreimal) rückextrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden über MgSO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum unter Bildung des rohen Produkts konzentriert, das durch Chromatographie mittels CH₂Cl₂ als Eluent gereinigt wird. 42% Ausbeute. MS (ES⁺): m/z = 507,1 (M+H)⁺.
Präparation 97
1-[2-Benzylamino-3-(propan-2-sulfonyl)-3H-benzimidazol-5-yl]-2-(tert-butyldimethylsilyloxy)-2-phenylethanon
Zu einer gerührten Lösung des anfänglichen 2-(tert-Butyldimethylsilyloxy)-1-[2-chlor-3-(propan-2-sulfonyl)-3H-benzimidazol-5-yl]-2-phenylethanons (588 mg, 1,16 mmol, 1 Äquivalent) in 2 ml trockenem THF wird Benzylamin (0,4 ml, 3,48 mmol, 3 Äquivalente) tropfenweise gegeben. Die entstehende gelbe Lösung wird bei 40°C für 30 Minuten erhitzt, auf Raumtemperatur gekühlt und Wasser und CH₂Cl₂ werden zugegeben. Die Phasen werden getrennt und die organische wird mit weiterem CH₂Cl₂ (dreimal) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden über MgSO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum unter Bildung eines rohen Produkts konzentriert. Eine Reinigung durch Chromatographie mittels CH₂Cl₂ Hexan (3 : 1) ergibt die Titelverbindung (80% Ausbeute). MS (ES⁺): m/z = 578,2 (M+H)⁺.
Präparation 98
2-(tert-Butyldimethylsilyloxy)-1-[2-ethylamino-3-(propan-2-sulfonyl)-3H-benzoimidazol-5-yl]-2-phenylethanon
Die Herstellung erfolgt wie in der vorherigen Präparation (Präparation 97) beschrieben, ausgehend von 2-(tert-Butyldimethylsilyloxy)-1-[2-chlor-3-(propan-2-sulfonyl)-3H-benzimidazol-5-yl]-2-phenylethanon (760 mg, 1,50 mmol) und Ethylamin (0,25 ml, 4,50 mmol, 3 Äquivalente) in 2 ml THF. Ausbeute: 84%. MS (ES⁺): m/z = 516,3 (M+H)⁺.
Präparation 99
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-ethoxycarbonyl)-1-hydroxy-2-phenylethyl)benzimidazol
Zu einer gerührten Lösung aus Ethylphenylacetat (18,5 mmol, 5 Äquivalente) in trockenem THF (20 ml) wird Lithiumhexamethyldisilazan (LHMDS) (0,5 M in THF, 22,2 mmol, 6 Äquivalente) bei –78°C gegeben. Das Gemisch wird unter Stickstoff für 30 Minuten gerührt und dann zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-formylbenzimidazol (Präparation 1,1 g, 3,7 mmol) in THF (60 ml) gegeben. Die Reaktion wird bei –78°C gerührt, gefolgt von TLC. Dann werden gesättigtes NH₄Cl (20 ml) und Ethylacetat (100 ml) zugegeben. Die Phasen werden getrennt und die wässrige Phase wird mit Ethylacetat (3 × 50 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen (Na₂SO₄) werden getrocknet und im Vakuum konzentriert. Das rohe Produkt wird mit Hexan gewaschen und der verbleibende Feststoff wird durch Dichlormethan unter Bildung der entsprechen Verbindung (0,75 g, 62% Ausbeute) gewaschen.
Präparation 100
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-((1-hydroxy)-α-(phenyl)acetyl)benzimidazol
Zu einer gerührten Lösung aus IBX (3,48 mmol) in DMSO (5 ml) wird 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-ethoxycarbonyl)-1-hydroxy-2-phenylethyl)benzimidazol (2,32 mmol, 1,5 Äquivalente) bei Raumtemperatur gegeben und das Gemisch wird über Nacht (16 Stunden) gerührt. Dann wird eine gesättigte Lösung aus NaCl (50 ml) gefolgt von Ethylacetat (100 ml) zugegeben. Die Phasen werden getrennt und der Extrakt der wässrigen Phase wird mit Ethylacetat (3 × 50 ml) extrahiert. Die organische Phase wird mit Na₂S₂O₃ (25 ml) gewaschen und die vereinigten organischen Phasen (Na₂SO₄) werden getrocknet. Eine Chromatographie mittels Hexan : Ethylacetat 1 : 4 ergibt die entsprechende Verbindung (90% Ausbeute).
Präparation 101
N-[Isopropylsulfonyl]-4-methoxybenzylamin
4-Methoxybenzylamin (11,7 ml, 89,5 mmol) wird zu einer Lösung aus Isopropylsulfonylchlorid (5,0 ml, 44,74 mmol) in Dichlormethan (100 ml) gegeben und für 18 Stunden bei Umgebungstemperatur gerührt. Die Lösung wird mit 1 N Chlorwasserstoffsäure (3 × 100 ml) gewaschen, mit Magnesiumsulfat getrocknet und konzentriert. Eine Reinigung auf Silicagel mittels Hexan/Ethylacetatgemischen ergibt 4,73 g (43%) der Titelverbindung als weißen Feststoff. MS (ES^–): m/z = 242,1 (M–H)^–.
Präparation 102
N-[Isopropylsulfonyl]-N-[5-fluor-2-nitrophenyl]-4-methoxybenzylamin
Natriumhydrid (60% in Mineralöl, 9,85 g, 21,2 mmol) wird in Tetrahydrofuran (100 ml) suspendiert. 1-N-[Isopropylsulfonyl)]-4-methoxybenzylamin (4,73 g, 19,45 mmol) wird in Tetrahydrofuran (400 ml) gegeben und auf 70°C erhitzt. Es wird für 10 Minuten gerührt, dann wird 2,4-Difluornitrobenzol (3,2 ml, 29,2 mmol) in einer Portion zugegeben und für 18 Stunden bei 70°C gerührt. Es wird auf Umgebungstemperatur gekühlt und die Lösemittel werden unter verringertem Druck entfernt. Es wird in Ethylacetat gelöst und zweimal mit wässrigem 1 N HCl, dreimal mit gesättigtem Natriumhydrogencarbonat, gesättigtem Natriumcarbonat, 1 N wässrigem HCl gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und die Lösemittel werden unter verringertem Druck entfernt. Eine Reinigung auf Silicagel mit Dichlormethan/Hexan ergibt 5,395 g (72%) der Titelverbindung.
Präparation 103
N-[Isopropylsulfonyl]-N-[5-(2-phenylimidazol-1-yl)-2-nitrophenyl]-4-methoxybenzylamin
Es werden N-[Isopropylsulfonyl]-N-[5-fluor-2-nitrophenyl-4-methoxybenzylamin (0,36 g, 0,94 mmol) und 2-Phenylimidazol (0,20 g, 1,41 mmol) in N,N-Dimethylformamid (4 ml) gelöst. Natriumhydrid (60% in Mineralöl, 0,056 g, 1,41 mmol) wird zugegeben und für 30 Minuten auf 90°C erhitzt. Es wird auf Umgebungstemperatur gekühlt und die Lösemittel werden unter verringertem Druck entfernt. Eine Reinigung auf Silicagel mit Dichlormethan/Ethylacetatgemischen ergibt 0,31 g (65%) der Titelverbindung.
Präparation 104
N-[Isopropylsulfonyl]-N-[5-(2-phenylimidazol-1-yl)-2-nitrophenyl]amin
Ein Kolben der N-[Isopropylsulfonyl]-N-[5-(2-phenylimidazol-1-yl)-2-nitrophenyl]-4-methoxybenzylamin (0,30 g, 0,58 mmol) enthält, wird in einem Eisbad gekühlt und eiskalte Trifluoressigsäure (5 ml) wird zugegeben und dann auf Umgebungstemperatur erwärmt und für 18 Stunden gerührt. Das Lösemittel wird unter verringertem Druck entfernt. Es wird in Dichlormethan gelöst und mit gesättigtem Natriumhydrogencarbonat gewaschen, mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und auf Silicagel mit Dichlormethan/Ethylacetatgemischen unter Bildung von 0,21 g (92%) an 1-Isopropylsulfonyl-[2-nitro-5-(2-phenylimidazol-1-yl)phenyl]amid gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 387,1 (M+H)⁺.
Präparation 105
N-[Isopropylsulfonyl]-N-[2-amino-5-(2-phenylimidazol-1-yl)phenyl]amid
N-[Isopropylsulfonyl]-N-[5-(2-phenylimidazol-1-yl)-2-nitrophenyl]amin (0,20 g, 0,52 mmol), 10% Palladium auf Kohle (0,02 g), Methanol (10 ml) und Hydrogenat werden unter einem Ballon aus Wasserstoff für 2 Stunden zugegeben. Es wird filtriert und die Lösemittel werden unter verringertem Druck entfernt. Eine Reinigung auf Silicagel mit Dichlormethan/Ethylacetatgemischen ergibt 0,12 g (63%) der Titelverbindung. MS (ES⁺): m/z = 357,1 (M+H)⁺.
Präparation 106
2-Aminobenzothiazol-6-carboxaldehyd
Unter einer Stickstoffatmosphäre wird langsam Phenyllithium (5 ml, 9,16 mmol, 2,1 Äquivalente aus einer 1,8 M Lösung in Cyclohexan/Ether, 70/30) zu einer kalten (–78°C) Lösung aus kommerziell erhältlichem 2-Brombenzothiazol in 30 ml trockenem THF gegeben. Nachdem die Zugabe vollständig ist, wird das Gemisch für 5 Minuten gerührt und t-Butyllithium (5,6 ml, 9,16 mmol, 2,1 Äquivalente aus einer 1,7 M Lösung in Pentan) wird zugegeben. Das Gemisch verändert sich während einer Stunde von einer cremeweißen Farbe zu einer grünen Farbe. An diesem Punkt wird schnell Formylpiperidin (2,4 ml, 21,8 mmol, 5 Äquivalente) tropfenweise zugegeben und das Gemisch wird langsam auf 0°C (> 1 Stunde) erwärmt. Die Reaktion wird in einem Gemisch aus kaltem gesättigem NH₄Cl gestoppt und mit EtOAc extrahiert. Die Phasen werden getrennt und die organische wird mit weiterem EtOAc (dreimal) rückextrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden über MgSO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum unter Bildung des Aldehyds (50% Ausbeute) konzentriert.
Präparation 107
2,4-Dibromnitrobenzol
1,3-Dibrombenzol (25 g) wird über rauchender Schwefelsäure (20 ml) zugegeben. Es wird für 5 Stunden gerührt und dann in Eiswasser gegossen, mit Ethylacetat extrahiert, mit gesättigtem wässrigem Natriumchlorid gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird mit Methanol unter Bildung des gewünschten Produkts als hellgelber Feststoff (26,8 g, 90%) kristallisiert. MS (ES⁺): 281,90 (M+H)⁺.
Präparation 108
(5-Brom-2-nitrophenyl)amin
In ein verschlossenes Reaktionsröhrchen werden vorsichtig 6 ml einer wässrigen Lösung aus Ammoniak (32%) zu einer Lösung aus 2,4-Dibromnitrobenzol (1,6 g) in 2 ml DMSO gegeben. Es wird für 18 Stunden bei 100°C gerührt und auf Raumtemperatur gekühlt. Das heterogene Gemisch wird in Wasser gegossen und die Titelverbindung wird als gelber Feststoff (1,1 g, 92%) filtriert.
Präparation 109
3-Amino-4-nitro-1-phenylethinylphenyl
Pd(OAc)₂ (31 mg), Cul (43 mg) und PPh₃ (48 mg) werden zu einem Gemisch aus 5-Brom-2-nitrophenylamin (0,5 g) in 6 ml Et₃N gegeben. Stickstoff wird für 5 Minuten durchgeblasen und Phenylacetylen (0,37 ml) wird zugegeben. Das Gemisch wird bei 90°C für 1 Stunde gerührt und auf Raumtemperatur gekühlt. Triethylamin wird im Vakuum entfernt und der Rückstand wird zwischen gesättigtem wässrigem Natriumchlorid und EtOAc aufgeteilt. Die Phasen werden getrennt, die organische wird über MgSO₄ getrocknet, filtriert und eingedampft. Der Rückstand wird durch Chromatographie unter Elution mit einem 8 : 1 Gemisch aus Hexan : EtOAc unter Bildung der Titelverbindung (0,49 g, 90%) als gelber Feststoff gereinigt.
Präparation 110
3-Isopropylsulfonamidyl-4-nitro-1-phenylethinylphenyl
Es werden Isopropylsulfonylchlorid (0,93 ml) und 1,8-Diazabicyclo(5,4,0)undec-7-en (DBU) (2,48 ml) zu einer Lösung aus 3-Amino-4-nitro-1-phenylethinylphenyl (1 g) in 40 ml CH₂Cl₂ gegeben. Es wird für 17 Stunden bei 45°C gerührt und auf Raumtemperatur gekühlt. Dann wird mit weiterem CH₂Cl₂ verdünnt und mit wässriger 10% HCl Lösung und Wasser gewaschen. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird durch Silicagelchromatographie unter Elution mit 1 : 1 Hexan : CH₂Cl₂ unter Bildung der Titelverbindung (0,76 g, 53%) als gelber Feststoff gereinigt.
Präparation 111
3-Isopropylsulfonamidyl-4-nitro-1-(phenylethanon)phenyl
Es werden 30 ml einer wässrigen Lösung aus HgO (624 mg) in 100 ml an 4% H₂SO₄ zu einer Lösung aus 3-Ispropylsulfonamidyl-4-nitro-1-phenylethinylphenyl (1,48 g) in 40 ml Methanol gegeben. Es wird bei 100°C für 17 Stunden gerührt und auf Raumtemperatur gekühlt. Das Gemisch wird mit einer gesättigten wässrigen Lösung aus NaHCO₃ neutralisiert und mit CH₂Cl₂ (zweimal) extrahiert. Die Phasen werden getrennt, die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird durch Silicagelchromatographie unter Elution mit 1 : 2 Hexan CH₂Cl₂ unter Bildung der Titelverbindung (1,2 g, 79%) als gelber Feststoff gereinigt. MS (ES^–): m/z = 361,3 (M–H)^–.
Präparation 112
3-Isopropylsulfonamidyl-4-nitro-1-(5-phenyl)pyrazol-4-yl
Dimethylformamid (DMF)-Dimethylacetal (0,9 ml) wird zu einer gerührten Lösung aus 3-Isopropylsulfonamidyl-4-nitro-1-(phenylethanon)phenyl (0,5 g) in 1,5 ml trockenem DMF gegeben. Das Gemisch wird bei 80°C für 1 h und 45 min erhitzt, auf Raumtemperatur gekühlt und die Lösemittel werden im Vakuum entfernt. Der Rückstand wird in 8 ml EtOH gelöst und 0,5 ml wasserfreies Hydrazin werden zugegeben. Es wird für 17 Stunden gerührt und unter verringertem Druck konzentriert. Eine Reinigung des Rückstands durch Silicagelchromatographie unter Elution mit 5% CH₂Cl₂ : MeOH ergibt die Titelverbindung (0,5 g, 86%) als roten Feststoff. MS (ES⁺) m/z = 387,4 (M+H)⁺.
Präparation 113
3-Isopropylsulfonamidyl-4-amino-1-(5-phenyl)pyrazol-4-yl-phenyl
Es werden 10 Gewichtsprozent an Pd/C Katalysator (250 mg) zu einer gerührten Suspension aus Nitroanilin (0,5 g) in 10 ml EtOH gegeben. Die Suspension wird mit Wasserstoff für 5 Minuten gewaschen und das Gemisch wird unter einer Wasserstoffatmosphäre (1 atm) für 3 Stunden gerührt. Es wird unter verringertem Druck konzentriert und der Rückstand wird unter Elution mit 5% CH₂Cl₂ : MeOH unter Bildung der Titelverbindung (0,3 g, 70%) als Feststoff einer Silicagelchromatographie unterzogen. MS (ES⁺): m/z = 357,1 (M+H)⁺.
Präparation 114
3-Isopropylsulfonamidyl-4-nitro-1-(5-phenyl)-1,2,3-triazol-4-yl
Natriumazid (0,033 g) wird zu einer Lösung aus 2-Isopropylsulfonamidyl-4-nitro-1-phenylethinyl (0,173 g) in 5 ml Dimethoxyethan gegeben. Es wird am Rückfluss (80°C) für 2 Stunden erhitzt und dann auf Raumtemperatur gekühlt. Es werden 10 ml an 1 N Chlorwasserstoffsäure zugegeben und mit Ethylacetat (20 ml) extrahiert und mit gesättigtem wässrigem Natriumchlorid (2 × 10 ml) gewaschen. Die verbleibende organische Phase wird über Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird durch Chromatographie unter Elution mit Ethylacetat : Hexan (1 : 1) unter Bildung der Titelverbindung als gelber Feststoff (0,10 g, 50%) gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 388,42 M+H)⁺.
Präparation 115
3-Isopropylsulfonamidyl-4-amino-1-(5-phenyl)-1,2,3-triazol-4-yl
Zinn(II)chloriddihydrat (0,350 g) wird zu einem Gemisch aus 3-Isopropylsulfonamidyl-4-nitro-1-(5-phenyl)-1,2,3-triazol-4-yl (0,10 g), Ethanol (5 ml) und Ethylacetat (10 ml) gegeben. Das Gemisch wird für 3 Stunden bei 70°C erhitzt. Das Gemisch wird in Eiswasser gegossen. Gesättigtes wässriges Natriumbicarbonat wird zugegeben und mit Ethylacetat extrahiert. Die Phasen werden getrennt, über Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird unter Elution mit 1 : 1 Ethylacetat : Hexan unter Bildung der Titelverbindung als weißer Feststoff (0,084 g, 92%) einer Silicagelchromatographie unterzogen. MS (ES⁺): m/z = 358,4 (M+H)⁺.
Präparation 116
1-Dimethylaminosulfonyl-2-aminobenzimidazol
Zu einer Lösung aus Natriumhydroxid (1,8 g) in Wasser (9 ml) wird Acetonitril (44 ml) gegeben. Zu dieser Lösung werden 2-Aminobenzimidazol (3,0 g, 22,5 mmol) und Dimethylsulfamoylchlorid (2,4 ml, 22,5 mmol) gegeben. Das Reaktionsgemisch wird bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Dann wird das Gemisch bei 0°C gekühlt und das Produkt wird aus der Lösung kristallisiert. Das Produkt wird filtriert und im Vakuum unter Bildung von 5,0 g (90% Ausbeute) der Titelverbindung als weißer Feststoff getrocknet. MS (ES⁺): m/z = 241,1 (M+H)⁺.
Präparation 117
1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-iodbenzimidazol
Dimethylaminosulfonyl-2-aminobenzimidazol (1,0 g, 4,2 mmol) wird zu Essigsäure (10 ml) unter Bildung einer Lösung gegeben. Zu dieser Lösung wird N-Iodsuccinimid (0,945 g, 4,2 mmol) gegeben und das Reaktionsgemisch wird bei 55°C über Nacht erhitzt. Das Gemisch wird bei 0°C gekühlt und Wasser wird zugegeben. Das Produkt wird aus der Lösung kristallisiert. Der Feststoff wird filtriert und im Vakuum unter Bildung von 1,5 g (99%) der Titelverbindung getrocknet. MS (ES⁺): m/z = 366,9 (M+H)⁺.
Präparation 118
1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-(phenylethinyl)benzimidazol
Ausgehend von 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-iodbenzimidazol wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Präparation 52 beschrieben hergestellt (88% Ausbeute). MS (ES⁺): m/z = 341,0 (M+H)⁺.
Präparation 119
1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-(2-phenylethan-1,2-dionel)benzimidazol
Ausgehend von 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-(phenylethinyl)benzimidazol wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Präparation 54 beschrieben hergestellt (72% Ausbeute). MS (ES⁺): m/z = 373,0 (M+H)⁺.
Beispiel 1
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(thien-2-yl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazolmethansulfonat
Thiophen-2-carboxaldehyd (3,16 ml, 33,8 mmol) wird zu einem gerührten Gemisch aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-α-(phenyl)acetyl)benzimidazol (15,0 g, 30,8 mmol), Kupfer(II)acetat (11,2 g, 61,5 mmol) und Ammoniumacetat (23,7 g, 308 mmol) in Essigsäure (300 ml) gegeben. Das Gemisch wird bei 95-100°C erhitzt und für 2 Stunden kräftig gerührt. Das Gemisch wird auf 15°C gekühlt, in ein Gemisch aus 750 ml gesättigtem wässrigem Ammoniumchlorid und 250 ml konzentriertem Ammoniumhydroxid gegossen. Das Gemisch wird mit Ammoniumhydroxid, das auf 5°C vorgekühlt ist, auf pH 10 eingestellt und dann werden 4 l an 4 : 1 Ethylacetat : Methanol zugegeben. Die Phasen werden getrennt und die organische Phase wird mit gesättigtem wässrigem Ammoniumchlorid (500 ml) gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird unter Elution mit Dichlormethan, das 15-50% Acetonitril und 0,5% Triethylamin enthält, einer Silicagelchromatographie unterzogen. Das gewonnene Material wird in Ethanol (75 ml) suspendiert, auf 55-60°C für 30 Minuten erwärmt, für 30 Minuten auf –10°C gekühlt, filtriert und nacheinander mit kaltem Ethanol gefolgt von Diethylether gewaschen. Es wird unter verringertem Druck unter Bildung der Titelverbindung mit 40% Ausbeute als dunkelgelbes Pulver getrocknet. MS (ES⁺): m/z = 464,1 (M+H)⁺.
Zu einer homogenen Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(thien-2-yl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol (0,4 g, 0,86 mmol) in 10% Methanol/Dichlormethan (10 ml) wird eine 1 N Lösung der Methansulfonsäure in demselben Reaktionsgemisch (10% Methanol/Dichlormethan) (0,86 ml, 1 Äquivalent) gegeben. Das Gemisch wird bei Raumtemperatur für 2 Stunden gerührt, die Lösemittel werden unter verringertem Druck entfernt und der Rückstand wird mit Diethylether (80 ml) für 3 Stunden gerührt. Der Feststoff wird filtriert und unter Vakuum unter Bildung eines blasscremefarbenen Feststoffs getrocknet (97% Ausbeute). MS (ES⁺): m/z = 464,1 (M+H)⁺.
Die Verbindungen der Beispiele 2-62 können im wesentlichen wie in Beispiel 1 beschrieben als entweder freie Base oder Methansulfonatsalz hergestellt werden. Das Dimethansulfonatsalz kann auch mittels im wesentlichen demselben Verfahren, wie in Beispiel 1 beschrieben, mit 2,0 Äquivalenten Methansulfonsäure, hergestellt werden.
Beispiel 63
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(2-fluor-4-aminophenyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol
Ein Gemisch aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(2-fluor-4-nitrophenyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol (0,59 g), Ammoniumformiat (0,29 g) und Pd/C 10%, 0,12 g) in Ethanol (20 ml) wird bei 95°C für 6 Stunden am Rückfluss erhitzt. Es wird über Celite^® filtriert und das Filtrat wird unter verringertem Druck unter Bildung der Titelverbindung (0,41 g, 75%) konzentriert. MS (ES⁺): m/z = 491,2 (M+H)⁺.
Beispiel 64
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-((4-ethylamino)phenyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol
Zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-α-(phenyl)acetyl)benzimidazol (1,16 g, 2,37 mmol) in 20 ml Eisessig werden Kupfer(II)acetat (861 mg, 4,74 mmol), Ammoniumacetat (2,92 g, 28,44 mmol) und 4-(N-tert-Butoxycarbonyl-N-ethylamino)benzaldehyd (630 mg, 2,84 mmol) gegeben. Das Reaktionsgemisch wird bei 80°C für 3 Stunden gerührt. Das Lösemittel wird konzentriert und der Rückstand wird in Ethylacetat/Methanol (20%) gelöst, in 3 : 1 gesättigte wässrige Ammoniumchloridlösung/Ammoniak 30% gegossen, in 3 : 1 gesättigter wässriger Ammoniumchloridlösung/Ammoniak 30% gegossen und mit Ethylacetat extrahiert, die organischen Phasen werden mit gesättigtem Ammoniumchlorid, gesättigtem wässrigem Natriumchlorid gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und konzentriert. Es werden 1,43 g des Rückstands in 40 ml Dichlormethan gelöst und 1,82 ml Trifluoressigsäure (TFA) werden zugegeben. Das Gemisch wird bei Raumtemperatur unter Argonatmosphäre für 3 Stunden gerührt. Dann wird das Lösemittel konzentriert, der Rückstand wird in Ethylacetat/Methanol (20%) gelöst und mit gesättigtem Natriumbicarbonat und gesättigtem wässrigem Natriumchlorid gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und konzentriert. Der erhaltene Feststoff wird durch Chromatographie unter Elution mit Dichlormethan/Methanol (2%) unter Bildung von 273 mg der Titelverbindung gereinigt. Ausbeute: 27%. MS (ES⁺): m/z = 501,2 (M+H)⁺.
Beispiel 65
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(4-(2-(piperidin-1-yl)ethoxy)phenyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazoltrifluoracetat
Zu einer Lösung aus 4-(2-Piperidin-1-yl)ethoxybenzaldehyd (0,42 g, 1,8 mmol) in Essigsäure (18 ml) (G. Kaliappa, Tetrahedron Letter, 34(35), 5631-5634, (1993)) wird 1-(Isopropylsulfonyl)-2-amino-6-((α-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-α-(phenyl)acetyl)benzimidazol (0,88 g, 1,8 mmol), Ammoniumacetat (1,39 g, 18 mmol) Kupfer(II)acetat (0,65 g, 3,6 mmol) unter Stickstoff gegeben. Das entstehende Reaktionsgemisch wird bei 100°C erhitzt und für 2 Stunden gerührt. Es wird auf Raumtemperatur gekühlt und dann wird die Essigsäure konzentriert. Der Rückstand wird in Methanol gelöst, die Methanollösung wird durch eine SCX Säule gegeben, mit Methanol und dann 2 N Ammoniak in Methanol gewaschen. Das Lösemittel wird konzentriert. Der Rückstand wird durch HPLC unter Bildung der Titelverbindung als Trifluoressigsäuresalz (0,17 g, 23%) gereinigt. MS (ES⁺) m/z = 585,3 (M+H)⁺.
Die Verbindungen der Beispiele 66-75 werden im wesentlichen wie in Beispiel 65 beschrieben, hergestellt.
Beispiel 76
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(2,6-difluorphenyl)-5-(phenyl)oxazol-4-yl)benzimidazol
Zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-α-(phenyl)acetyl)benzimidazol (5,84 g, 12,0 mmol) in Essigsäure (Eisessig, 100 ml) werden Ammoniumacetat (9,26 g, 120 mmol) und Kupfer(I)acetat (4,31 g, 23,7 mmol), gefolgt von 2,6-Difluorbenzaldehyd (1,41 ml, 13,1 mmol) gegeben und das Gemisch wird bei 100°C für 4 Stunden gerührt. Das Gemisch wird auf 0°C gekühlt und langsam über ein Gemisch aus NH₄Cl/NH₄OH 3 : 1, pH = 9 gegossen. Das Gemisch wird mit H₂O (200 ml) verdünnt, mit EtOAc (3 × 200 ml) extrahiert, mit gesättigtem wässrigem NaCl (150 ml) gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird in einem Biotagesystem (Eluent: CH₂Cl₂/MeCN 5 : 1) und dann durch HPLC unter Bildung eines gelben Feststoffs, 675 mg, 11% Ausbeute, gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 495,0 (M+H)⁺.
Beispiel 77
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(2,6-difluorphenyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol und 1- Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(2,6-difluorphenyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazolethanolat
Unter einer Stickstoffatmosphäre werden 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(diketo(2-phenyl)ethyl)benzimidazol (225 g, 0,606 mol), NH₄OAc (700,4 g, 9,08 mol), Butanol (4,5 l) und 2,6-Difluorbenzaldehyd (172,2 g, 1,212 mol) vereinigt. Das entstehende Gemisch wird unter Bildung einer gelben Aufschlämmung auf 55°C erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird auf 15°C gekühlt und Wasser (2,5 l) wird zugegeben. Nach dem Mischen für 15 Minuten werden die Phasen getrennt und die organische Phase wird mit Wasser (2,5 l) rückextrahiert. Die organische Phase wird abgetrennt und unter Vakuum bei 55°C unter Bildung von 513 g eines schwarzen Öls konzentriert. Das Öl wird in MeOH (505 ml) bei 5°C gelöst und dann wird Methyl-tert-butylether (MTBE) (2,25 l) über 1,5 Stunden zu dem Gemisch gegeben. Die entstehende Aufschlämmung wird langsam auf 22°C gekühlt und über Nacht gerührt. Die hellbraunen Feststoffe werden filtriert und mit MTBE (750 ml) gewaschen. Die Feststoffe werden für 1,5 Stunden unter Bildung von 239 g des Feststoffs einem Hausvakuum unterzogen. Die Feststoffe werden in EtOAc (3,85 l) bei 50°C gelöst und Silicagel (250 g) wird zu dem Gemisch gegeben. Nach 0,5 Stunden wird das Gemisch auf 35°C gekühlt, im Vakuum über Silicagel (250 g nass mit EtOAc) filtriert und mit EtOAc (6 l) durchgewaschen. Das entstehende Gemisch wird unter Vakuum bei 50°C unter Bildung eines hellbraunen Feststoffs konzentriert (233,6 g, 78%, HPLC > 99 Flächenprozent, ¹H NMR zeigt daß EtOAc im Feststoff eingeschlossen ist. DSC Beginn 106,65°C, Maximum 116,79°C, 18,67 J/g).
Die Ethanolatverbindung wird folgendermaßen hergestellt: Es werden 395 g der Verbindung in EtOH (2 l) bei 53°C gelöst und zur Trockne im Vakuum destilliert (dieses Verfahren kann zur Entfernung des restlichen EtOAc aus der Verbindung wiederholt werden und kann gemäß ¹H NMR bestätigt werden). Die entstehenden Feststoffe werden in EtOH (1,185 l) bei 50°C für wenige Minuten aufgeschlämmt und langsam über Nacht auf 22°C gekühlt. Die entstehende Aufschlämmung wird auf –3 bis 0°C gekühlt und für 1 Stunde gehalten. Die entstehenden Kristalle werden filtriert, mit EtOH (395 ml, 0°C) gewaschen und unter Vakuum bei 50°C zu einem konstanten Gewicht getrocknet. Das Ethanolsolvat (324 g, 84%) wird als hellpinkfarbener Feststoff isoliert. Die HPLC zeigt dass das Produkt eine Reinheit von 99,5 Flächenprozent aufweist. MS (ES⁺) m/z = 492,3 (M+H)⁺.
Beispiel 78
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(2,6-difluorphenyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol-1,5-naphthalindisulfonat
Es werden 247 mg der freien Base ausgewogen und in 4 ml an 95% EtOH suspendiert. Davon getrennt werden 181 mg an 1,5-Naphthalindisulfonsäuretetrahydrat in 2 ml an 95% EtOH gelöst. Die saure Lösung wird zu der Suspension in 0,2 ml Anteilen über einen 5 Minutenintervall unter Mischen zwischen den Zugaben gegeben. Die Lösung mit den Kristallen angeimpft, die aus einem kürzlichen Lauf mit Salzselektionssieb erhalten werden und innerhalb weniger Minuten zeigt sich ein Niederschlag. Das Gefäß kann für 2 Stunden unter gelegentlichem Schütteln stehen bleiben. Der Niederschlag wird filtriert und unter Bildung von 325 mg an nicht ganz weißen Kristallen luftgetrocknet.
Impfkristalle für das Napadisylat werden auf folgende Weise hergestellt:
Eine Salzscreenmatrix aus 24 Gegenionen und 4 Lösemitteln wird mittels Library Design^TM Software, die von Symyx Technologies, Inc. entwickelt wurde, aufgebaut. Die Lösung der freien Base und die Lösungen der Gegenionen werden mittels einer Cavro^TM Flüssigkeitsvorrichtung zugegeben. Die Flüssigkeiten werden dann mittels einer Genvac^TM Vakuumzentrifuge entfernt. Die Feststoffe werden dann auf eine Symyx automatisierte Kristallisationsausstattung gegeben, die: 1) Lösemittel in die Vertiefungen gibt, 2) erhitzt, 3) filtriert und 4) das Filtrat zugibt, um die Kristallisationsstationen zu trennen (Eindampfung, Ausfällung und Kühlen). Bei diesen getrennten Verfahrensschritten zeigt sich, dass kleine Mengen (< 2 mg) des kristallinen Materials an Napadisylatsalz auf den Glasplatten vorhanden sind. Die Lösemittelsysteme, die das kristalline Material ergeben, bestehen aus 95% Ethanol und Ethylacetat.
Beispiel 79
1-Cyclopentylsulfonyl-2-amino-6-(2-(2,6-difluorphenyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol
Ausgehend von 1-Cyclopentylsulfonyl-2-amino-6-(diketo-(2-phenylethyl))benzimidazol (1,29 g) werden im wesentlichen wie in Beispiel 77 beschrieben, 0,46 g (28% Ausbeute) als gelber Feststoff erhalten. MS (APC⁺), m/z = 520,2 (M+H)⁺. Das Dimethansulfonat wird aus 0,23 g der freien Base unter Bildung von 0,25 g (78% Ausbeute) als weißer Feststoff erhalten. MS (Ionenfalle/ES⁺): m/z = 520,1 (M+H)⁺.
Die Verbindungen der Beispiele 80-84 werden im wesentlichen wie in Beispiel 77 beschrieben als freie Base hergestellt. Das Methansulfonat oder Dimethansulfonatsalz kann auch unter Verwendung derselben Verfahren von Beispiel 1 und 1,0 oder 2,0 Äquivalenten der Methansulfonsäure hergestellt werden.
Beispiel 85
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(isopropyl)-5-(4-fluorphenyl)imidazol-4-yl)benzimidazolmethansulfonat
Isobutyraldehyd (0,25 ml, 3,3 mmol) wird zu einer gerührten Lösung aus 1-(6-(1-Isopropylsulfonyl)-2-aminobenzimidazol)-2-(4-fluor)phenylethan-1,2-dion (0,5 g, 1,28 mmol) und Ammoniumacetat (1,48 g, 19,2 mmol) in n-BuOH (10 ml) gegeben. Das Gemisch wird bei 80-90°C erhitzt und für 2 Stunden in einem verschlossenen Röhrchen kräftig gerührt. Das Gemisch wird auf Raumtemperatur gekühlt und unter verringertem Druck konzentriert. Ethylacetat wird zugegeben und mit Wasser gewaschen. Die Phasen werden getrennt und die organische Phase wird mit gesättigtem wässrigem Natriumchlorid (50 ml) gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird unter Elution mit 40 : 1 bis 20 : 1 Dichlormethan : Methanol unter Bildung von 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(isopropyl)-5-(4-fluorphenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol einer Silicagelchromatographie (Biotage) unterzogen. MS (ES⁺): m/z = 442,1 (M+H)⁺.
Das erhaltene 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(isopropyl)-5-(4-fluorphenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol wird in Diethylether suspendiert, filtriert und mit kaltem Diethylether gewaschen. Es wird unter verringertem Druck, unter Bildung der Titelverbindung mit 59% Ausbeute als weißes Pulver getrocknet. MS (ES⁺): m/z = 442,1 (M+H)⁺.
Methansulfonsäure (0,68 ml, 1 M in Dichlormethan : Methanol 95 : 5 frisch hergestellt) wird sofort zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(isopropyl)-5-(4-fluorphenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol (0,299 g, 0,68 mmol) in Dichlormethan : Methanol 10 ml, 95 : 5) gegeben. Nach 5 Minuten wird das Lösemittel durch Stickstoffdampf entfernt und unter Vakuum endgetrocknet. Das rohe Material wird mit Diethylether (20 ml) über Nacht behandelt. Das Salz wird durch Filtration gesammelt und mit zusätzlichem Diethylether (20 ml) unter Bildung von 0,353 mg (97% Ausbeute) der Titelverbindung gewaschen. MS (ES⁺): m/z = 442,1 (M+H)⁺.
Beispiel 86
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(isopropyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazolmethansulfonat
Isobutyraldehyd (0,73 ml, 8,1 mmol) wird zu einem gerührten Gemisch aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(diketo-(2-phenyl)ethyl))benzimidazol (1,5 g, 4,04 mmol) gegeben und Ammoniumacetat (3 g, 40,4 mmol) in Essigsäure (20 ml) wird gegeben. Das Gemisch wird bei 80-90°C erhitzt und für 2 Stunden in einem verschlossenen Röhrchen kräftig gerührt. Das Gemisch wird auf Raumtemperatur gekühlt und unter verringertem Druck konzentriert. Eis wird zugegeben und das Gemisch wird für 15 Minuten kräftig gerührt. Ein vorgekühltes (Eisbad) Gemisch 4/1 (V/V) aus gesättigtem wässrigem Ammoniumchlorid/konzentriertem Ammoniumhydroxid (50 ml) wird zugegeben. Es werden 125 ml an 4 : 1 Ethylacetat : Methanol zugegeben. Die Phasen werden getrennt und die organische Phase wird mit gesättigtem wässri gem Ammoniumchlorid (50 ml) gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird unter Elution mit 25 : 1 Dichlormethan : Methanol unter Bildung von 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(isopropyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol einer Silicagelchromatographie unterzogen. MS (ES⁺): m/z = 424,1 (M+H)⁺.
Das erhaltene 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(isopropyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol wird in Diethylether suspendiert, filtriert und mit kaltem Diethylether gewaschen. Es wird unter verringertem Druck unter Bildung der freien Base mit 28% als weißes Pulver getrocknet. MS (ES⁺): m/z = 424,1 (M+H)⁺.
Methansulfonsäure (0,2 ml, 1 M in CH₂Cl₂ : MeOH 95 : 5 kurz vorher hergestellt) wird auf einmal zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(isopropyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol (90 mg, 0,2 mmol) in CH₂Cl₂ : MeOH 8 : 10 ml, 95 : 5) gegeben. Nach 5 Minuten wird das Lösemittel durch Stickstoffdampf entfernt und unter Vakuum endgetrocknet. Das rohe Material wird mit Diethylether (20 ml) über Nacht behandelt. Das Salz wird durch Filtration gesammelt und mit zusätzlichem Diethylether unter Bildung von 88 mg (81% Ausbeute) der Titelverbindung gewaschen.
Die Verbindungen der Beispiele 87-93 werden im wesentlichen wie in den Beispielen 85 und 86 beschrieben, hergestellt.
Beispiel 94
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(formyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol
Zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(trimethylsilylethoxymethyl)-2-(formyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol (100 mg, 0,185 mmol) in Ethanol (4 ml) wird HCl (37%, 4 ml) gegeben und bei Raumtemperatur für 4 Stunden gerührt. Das Gemisch wird mit Wasser (20 ml) verdünnt und mit EtOAc (3 × 10 ml) gewaschen. NaOH (15%) wird zu der wässrigen Phase gegeben, bis der pH = 6,7 ist und das Gemisch wird mit EtOAc (3 × 20 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird in einer Festphasenextraktionskartusche (SPE) (Oasis^TM) und dann mittels HPLC unter Bildung eines weißen Feststoffs, 8 mg, 10% Ausbeute, gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 410 (M+H)⁺.
Beispiel 95
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(2-(piperidin-1-yl)methyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol
A. Reduktive Aminierung
Zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-trimethylsilylethoxymethyl)-2-(formyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol (200 mg, 0,37 mmol) und Piperidin (0,037 ml, 0,37 mmol) in 1,2-Dichlorethan (5 ml) wird Natriumtriacetoxyborhydrid (110 mg, 0,53 mmol) in einer Portion gegeben und bei Raumtemperatur für 5 Stunden gerührt. Dann wird Wasser (50 ml) zugegeben und mit EtOAc (3 × 50 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit gesättigtem wässrigem Natriumchlorid (50 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum unter Bildung eines gelben Feststoffs, 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-trimethylsilylethoxymethyl)-2-((2-piperidin-1-yl)methyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol, 251 mg, konzentriert. MS (ES⁺) m/z = 609,2 (M+H)⁺.
B. Schutzgruppenabspaltung
Zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-trimethylsilylethoxymethyl-2-((2-piperidin-1-yl)methyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol (0,37 mmol) in Acetonitril (0,1 M) wird Fluorwasserstoffsäure (HF) (48%, 53,7 mmol) gegeben und bei 50°C für 3 Stunden gerührt. Dann wird das Gemisch aus Raumtemperatur gekühlt und eine gesättigte wässrige Lösung aus NaHCO₃ wird zugegeben, bis der pH = 8 beträgt. Das Gemisch wird mit EtOAc (3 × 20 ml) extrahiert und die vereinigten organischen Phasen werden getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird durch eine SCX Säule gereinigt und dann durch HPLC unter Bildung eines gelben Feststoffs, 46 mg, 28% Ausbeute, gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 479,2 (M+H)⁺.
Die Herstellung des Methansulfonatsalzes der Titelverbindung wird wie vorher beschrieben, ausgeführt (89% Ausbeute). MS (ES⁺): m/z = 479,2 (M+H)⁺.
Die Verbindungen der Beispiele 96-98 können im wesentlichen wie in Beispiel 95 beschrieben, hergestellt werden.
Beispiel 99
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(N-[2-(piperidin-1-yl)eth-1-yl]aminomethyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol
A. Reduktive Aminierung
Zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(trimethylsilylethoxymethyl)-2-(formyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol (200 mg, 0,37 mmol) in Methanol (8 ml) werden 4 Å Molekularsiebe und 2-(N-Piperidinyl)ethylamin (0,37 mmol, 1 Äquivalent) gegeben und über Nacht gerührt. Dann wird Natriumborhydrid (70 mg, 1,85 mmol, 5 Äquivalente) in zwei Portionen zugegeben und bei Raumtemperatur für 1 Stunde gerührt. Das Gemisch wird mit Methanol (20 ml) verdünnt und durch ein Kissen aus Celite^® und SiO₂ filtriert. Die Filtrate werden im Vakuum konzentriert und der Rückstand wird durch eine SCX Säule unter Bildung eines gelben Feststoffs mit 97% Ausbeute gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 652,3 (M+H)⁺.
B. Schutzgruppenabspaltung
Die Ausführung erfolgt gemäß dem Verfahren für Beispiel 95. MS (ES⁺): m/z = 522 (M+H)⁺. Die Verbindung in Beispiel 100 kann im wesentlichen wie in Beispiel 99 beschrieben, hergestellt werden.
Beispiele 101 und 102
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(1-(ethoxycarbonyl)ethen-2-yl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol und 1-Isopropylsulfonyl-6-(2-(2-carboxyethyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol
A. Horner-Emmonds Kondensation
Zu einer Lösung aus Triethylphosphonoacetat (0,081 ml, 0,407 mmol) in trockenem THF (0,8 ml) wird tropfenweise eine Lösung aus Kaliumbis(trimethylsilyl)amid (KHMDS) (0,5 M in Toluol, 0,85 ml) bei –78°C unter Stickstoff gegeben. Das Gemisch wird für 30 Minuten gerührt und das Bad wird entfernt. Nach 5 Minuten wird das Gemisch auf –78°C während der Zugabe einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(trimethylsilylethoxymethyl)-2-(formyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol (100 mg, 0,185 mmol) in trockenem THF (1 ml) gekühlt und langsam auf 0°C für 2 Stunden erwärmt. Dann wird eine gesättigte wässrige Lösung aus NH₄Cl (10 ml) zugegeben und das Gemisch wird mit EtOAc (3 × 15 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird durch Blitzchromatographie (SiO₂, Eluent: Hexan/EtOAc 1 : 2) unter Bildung eines gelben Feststoffs, 97 mg, 86% Ausbeute, gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 610 (M+H)⁺.
B. Reduktion
Zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(trimethylsilylethoxymethyl)-2-(2-(ethoxycarbonyl)ethen-2-yl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol (97 mg, 0,159 mmol) in MeOH (5 ml) wird Pd/C (20 Gewichtsprozent, 19,4 mg) gegeben. Es wird Wasserstoff bei Raumtemperatur für 5 Minuten durch geblasen. Dann wird bei Raumtemperatur für 20 Stunden unter Wasserstoff gerührt und durch ein Kissen aus Celite^® filtriert. Die Filtrate werden im Vakuum unter Bildung eines gelben Feststoffs konzentriert (91 mg, 93% Ausbeute). MS (ES⁺): m/z = 612 (M+H)⁺.
C. Schutzgruppenabspaltung
Zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-trimethylsilylethoxymethyl)-2-(1-(ethoxycarbonyl)ethyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol (91 mg, 0,14 mmol) in Ethanol (3 ml) wird HCl (37%, 3 ml) gegeben und bei Raumtemperatur für 24 Stunden gerührt. Dann wird das Gemisch mit Wasser (10 ml) verdünnt und eine Lösung aus NaOH (15%) wird zugegeben, bis der pH = 6–7 beträgt. Das Gemisch wird mit EtOAc (3 × 30 ml) extrahiert, getrocknet (MgSO₄) und die vereinigten organischen Phasen werden im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird durch HPLC unter Bildung von 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(trimethylsilylethoxymethyl)-2-(ethoxycarbonylethyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol als weißer Feststoff, 11 mg, 16% Ausbeute, gereinigt. FIA MS (ES⁺): m/z = 482 (M+H)⁺. 1-Isopropylsulfonyl-6-(2-(2-carboxyethyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol wird als weißer Feststoff, 3 mg, 5% Ausbeute, ebenfalls erhalten. MS (ES⁺): m/z = 454 (M+H)⁺.
Die Verbindungen in den Beispielen 103-108 können im wesentlichen wie in Beispiel 102 beschrieben hergestellt werden.
Beispiel 109
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(4-methoxybenzyl)-2-(hydroxymethyl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol
Zu einer Lösung aus 1-(4-Methoxybenzyl)-2-tert-butyldimethylsilyloxymethyl-4-(phenyl)-5-iodimidazol (50 mg, 0,0935 mmol) in trockenem Toluol (0,8 ml), die vorher mit einem Stickstoffstrom gespült wurde, wird PdCl₂(PPh₃)₂ (4,5 mg, 0,00641 mmol) in einer Portion gegeben. Nach 5 Minuten wird eine Suspension aus 1-Isopropylsulfonyl-2-aminobenzimidazol-6-borsäure (40 mg, 0,141 mmol) in Ethanol (0,8 ml), die vorher mit einem Stickstoffstrom gespült wurde, gefolgt von Natriumcarbonat (2 M in Wasser, 0,32 ml, 0,640 mmol) zugegeben. Das Gemisch wird für 2,5 Stunden bei 100°C gerührt, auf Raumtemperatur gekühlt, mit 10% HCl (5 ml) verdünnt, mit EtOAc (15 ml) extrahiert, getrocknet (Na₂SO₄) und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird durch Blitzchromatographie (SiO₂, CH₂Cl₂/MeOH 19 : 1 → 5 : 1) gereinigt, das erhaltene Material wird in MeCN (0,5 ml) gelöst und mit HF (48% in H₂O, 0,12 ml, 3,31 mmol) bei Raumtemperatur für 4 Stunden behandelt. Das Gemisch wird mit EtOAc (15 ml) verdünnt, mit gesättigtem NaHCO₃ (5 ml) gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird durch Blitzchromatographie (SiO₂, CH₂Cl₂/MeCN/MeOH 85 : 15 : 5) unter Bildung von 18 mg (36% Ausbeute) gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 532 (M+H)⁺.
Beispiel 110
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol
tert-Butylamin (0,125 g, 1,7 mmol) wird zu einer Lösung aus N-[1-(Ethoxycarbonyl)piperidin-4-yl](1-isopropylsulfonyl-2-amino-6-formylbenzimidazol)imin (0,36 g, 0,86 mmol) und α-(p-Toluolsulfonyl)benzylisocyanid (0,463 g, 1,7 mmol) in Methanol (10 ml) gegeben. Das Reaktionsgemisch wird auf Rückfluss erhitzt und über Nacht gerührt. Es wird auf Raumtemperatur gekühlt, unter verringertem Druck konzentriert und der Rückstand wird zwischen Dichlormethan (50 ml) und Wasser (50 ml) aufgeteilt. Die Phasen werden getrennt, die organische Phase wird mit gesättigtem wässrigem Natriumchlorid (2 × 15 ml) gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird unter Elution mit 9 : 1 Ethylacetat : Hexan unter Bildung von 0,130 g (28%) der Titelverbindung einer Silicagelchromatographie unterzogen. MS (ES⁺): m/z = 537,2 (M+H)⁺.
Die Verbindungen der Beispiele 111-171 können im wesentlichen wie in Beispiel 110 beschrieben, hergestellt werden.
Beispiel 172
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(cyclopropyl)-4-(2-fluorphenyl))imidazol-5-yl)benzimidazolmethansulfonat
Methansulfonsäure (0,029 ml, 0,455 mmol) wird zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(cyclopropyl)-4-(2-fluorphenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol (0,200 g, 0,455 mmol), die gemäß dem Verfahren von Beispiel 110 in 10% Methanol/Dichlormethan (3 ml) hergestellt wurde, gegeben. Die Lösemittel werden unter verringertem Druck zu 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(cyclopropyl)-4-(2-fluorphenyl)imidazol-5-yl)benzimidazolmethansulfonat (0,25 g) entfernt. MS (ES⁺): m/z = 440,1 (M+H)⁺.
Beispiel 173
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(5-(3-fluorphenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-formylbenzimidazol (0,3 g, 1,1 mmol) in THF (5 ml) wird mit Ammoniumhydroxid (0,39 ml, 3,4 mmol) behandelt und für 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktion wird mit 3-Fluorphenyltolylsulfonomethylisocyanid (0,23 g, 0,8 mmol) und Piperazin (0,096 g, 1,1 mmol) behandelt. Die Reaktion wird für 5 Stunden gerührt und dann in EtOAc verdünnt. Die organische Phase wird mit Wasser und gesättigtem wässrigem Natriumchlorid gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und das Lösemittel wird im Vakuum entfernt. Der Rückstand wird in kaltem EtOAc aufgeschlämmt und unter Bildung von 0,195 g (44%) des gewünschten Produkts filtriert. MS (ES⁺) m/z = 400,2 (M+H)⁺.
Die Verbindungen der Beispiele 174-176 können im wesentlichen wie in Beispiel 173 beschrieben, hergestellt werden.
Beispiel 177
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-p-nitrophenyl-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol
Zu dem Reaktionsröhrchen werden p-Nitroanilin (0,138 g, 1 mmol), 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-formylbenzimidazol (Präparation 1, 0,267 g, 1 mmol), Essigsäure (10 μl) und Toluol (2 ml) gegeben. Das Reaktionsgefäß wird verschlossen und die Suspension wird für 24 Stunden auf 120°C erhitzt. Das rohe Imin wird mit CHCl₃ gewaschen und im Vakuum unter Bildung von 300 mg eines gelben Pulvers getrocknet. MS (ES)⁺: m/z = 388,1 (M+H)⁺.
NaH (65 mg, 60% Mineralöl) wird in Dimethoxyethan (DME) (2 ml) bei Raumtemperatur suspendiert. α-(p-Toluolsulfonyl)benzylisocyanid (Präparation 2, 0,135 g, 0,5 mmol) wird zu der Suspension gegeben, für 5 Minuten gerührt und das Imin (0,116 g, 0,3 mmol) wird zugegeben. Nach 2 Stunden werden Wasser und EtOAc in die Reaktion gegeben und der Inhalt wird für 1-2 Minuten schnell gerührt, in einen Trenntrichter überführt, die organische Phase wird mit Wasser und dann mit gesättigtem wässrigem Natriumchlorid gewaschen. Die organische Phase wird über Na₂SO₄ getrocknet, filtriert und unter Bildung des gewünschten Produkts konzentriert. Es wird durch Chromatographietrennung über einer kleinen Silicasäule mittels 3 : 2 MeCl₂/MeCN + 10% MeOH unter Bildung von 138 mg des gewünschten Produkts gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 503,3 (M+H)⁺.
Beispiel 178
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(4-amino)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol
Zu 0,025 g (0,05 mmol) an 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-p-nitrophenyl-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol in EtOH (1 ml) bei Raumtemperatur wird SnCl₂dihydrat (50 mg, 0,22 mmol) gegeben. Nach 3 Stunden wird die rohe Reaktion mit H₂O (1 ml) behandelt, weitere 25 Minuten gerührt und dann wird Na₂CO₃ zugegeben, um den pH auf etwa 10 zu bringen. Das Reaktionsgemisch wird in einen Trenntrichter überführt und mit EtOAc und Wasser verdünnt. Die wässrige Phase wird dreimal mit EtOAc rückextrahiert, die vereinigten Phasen werden mit gesättigtem wässrigem Natriumchlorid gewaschen, über Na₂SO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum unter Bildung des rohen Produkts konzentriert. Es wird durch Chromatographie mittels präparativer TLC (Silica, 20 × 20 cm × 1 mm, 20 : 1 MeCl₂/MeOH) unter Bildung von 6 mg des gewünschten Produkts gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 473,2 (M+H)⁺.
Beispiel 179
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(methyl)-4-(phenyl)thiazol-5-yl)benzimidazol
A. 2-Methyl-4-phenylthiazol
Thioacetamid (0,09 g, 1,2 mmol) wird zu einer Lösung aus 2-Bromacetophenon (0,2 g, 1,0 mmol) in 30 ml Dioxan gegeben. Diese wird bei Raumtemperatur für 4 Stunden gerührt, mit Ethylacetat verdünnt und nacheinander mit wässrigem Natriumcarbonat (3 × 15 ml) und Wasser (3 × 20 ml) gewaschen. Die organische Phase wird über Natriumsulfat getrocknet, unter verringertem Druck konzentriert und der Rückstand wird unter Elution mit Hexan, das 10% Ethylacetat enthält unter Bildung der gewünschten Verbindung mit 78% Ausbeute, einer Silicagelchromatographie unterzogen. MS (ES⁺): m/z = 176,1 (M+H)⁺.
B. 2-Methyl-4-phenyl-5-(tributylstannyl)thiazol
n-Butyllithium (0,46 ml, 0,74 mmol, 1,6 M in Tetrahydrofuran) wird zu einer Lösung aus 2-Methyl-4-phenylthiazol (0,13 g, 0,74 mmol) in Tetrahydrofuran (7 ml), die auf –78°C gekühlt ist, unter einer Stickstoffatmosphäre gegeben. Es wird bei –78°c für 45 Minuten gerührt, Tributylzinnchlorid (0,2 ml, 0,74 mmol) wird zugegeben und es wird für 2 Stunden gerührt, wobei sich das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur erwärmt. Wässriges Ammoniumchlorid wird zugegeben und dann wird das Gemisch zwischen Ethylacetat und Wasser aufgeteilt. Die wässrige Phase wird mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden nacheinander mit Wasser und gesättigtem wässrigem Natriumchlorid gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird unter Elution mit Hexan, das 10% Ethylacetat enthält unter Bildung der gewünschten Verbindung mit 68% Ausbeute einer Silicagelchromatographie unterzogen. MS (ES⁺): m/z = 466,1 (M+H)⁺.
C. Kupplung
Ein Gemisch aus 2-Methyl-4-phenyl-5-(tributylstannyl)thiazol (0,1 g, 0,21 mmol), 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-iodbenzimidazol (0,07 g, 0,21 mmol) und (Acetonitril)palladium(II)chlorid (0,021 mmol) in trockenem Dimethylformamid (2 ml) wird bei 100°C für 4 Stunden unter einer Stickstoffatmosphäre gerührt. Es wird auf Raumtemperatur gekühlt und mit Ethylacetat (20 ml) verdünnt. Dann wird nacheinander mit Wasser (3 × 5 ml) und gesättigtem wässrigem Natriumchlorid (3 × 5 ml) gewaschen, über Natriumsul fat getrocknet und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird unter Elution mit 7 : 1 Dichlormethan : Acetonitril unter Bildung der Titelverbindung als weißer Feststoff mit 2% Ausbeute einer Silicagelchromatgraphie unterzogen. MS (ES⁺): m/z = 413,0 (M+H)⁺.
Beispiel 180
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2,4-diphenylthiazol-5-yl)benzimidazol
Ausgehend von Thiobenzamid und 2-Bromacetophenenon wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Beispiel 179 beschrieben, mit 12% Ausbeute hergestellt. MS (ES⁺): m/z = 474,8 (M+H)⁺.
Beispiel 181
2-Amino-6-(2-(2,6-difluorphenyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol
Es wird ein Gemisch aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(2,6-difluorphenyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol (0,07 g, 0,142 mmol) und 1,42 ml an 1 N Natriumhydroxid in 1 : 1 Wasser : Acetonitril bei 60°C für 1 Stunde gerührt. Das Gemisch wird bei Raumtemperatur gekühlt und mit Wasser und Ethylacetat verdünnt. Die wässrige Phase wird mit Ethylacetat (dreimal) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden nacheinander mit Wasser und gesättigem wässrigem Natriumchlorid gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird unter Elution mit 2 : 1 Dichlormethan : Methanol unter Bildung der Titelverbindung mit 93% Ausbeute einer Silicagelchromatographie unterzogen. MS (ES⁺): m/z = 388,0 (M+H)⁺.
Die Verbindungen der Beispiele 182-183 werden im wesentlichen wie in Beispiel 181 beschrieben, hergestellt.
Beispiel 184
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(4-aminophenyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol
Eine Suspension aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(4-nitrophenyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol (0,149 g, 0,3 mmol) und 10% Palladium auf Kohle (0,03 mmol) in Methanol wird mit Wasserstoff für 10 Minuten gespült und dann unter einer Wasserstoffatmosphäre für 6 Stunden gerührt. Dann wird durch ein Bett aus Celite^® filtriert und der Rückstand wird unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird unter Elution mit 4% Methanol in Dichlormethan unter Bildung der Titelverbindung mit 28% Ausbeute einer Silicagelchromatographie unterzogen. MS (ES⁺): m/z = 473,0 (M+H)⁺.
Beispiel 185
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(2-aminothien-5-yl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol
Ausgehend von 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(2-nitrothien-5-yl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Beispiel 184 beschrieben, mit 22% Ausbeute hergestellt. MS (ES⁺): m/z = 479,0 (M+H)⁺.
Beispiele 186 und 187
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(methyl)-2-(2,6-difluorphenyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol und 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-methyl)-2-(2,6-difluorphenyl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol
Cäsiumcarbonat (0,134 mmol) und Methyliodid (0,134 mmol) werden zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(2,6-difluorphenyl)-5-(phenyl)imidazol-4-ylbenzimidazol (0,12 mmol) in trockenem Dimethylformamid (2,5 ml) bei 0°C gegeben. Das Gemisch wird bei Raumtemperatur für 16 Stunden gerührt, mit Wasser und Ethylacetat verdünnt und die Phasen werden getrennt. Die wässrige Phase wird mit Ethylacetat (dreimal) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden nacheinander mit kaltem Wasser (fünfmal) und gesättigtem wässrigem Natriumchlorid gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird einer Silicagelchromatographie unterzogen. Das Isomergemisch wird in Dichlormethan gelöst und dieses Gemisch wird unter Elution mit Dichlormethan, das 4% Methanol (100 ml/min) enthält unter Bildung von 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-methyl)-2-(2,6-difluorphenyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol (11,1 Minuten) mit 22% Ausbeute, MS (ES⁺): m/z = 508,2 (M+H)⁺ und 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-methyl)-2-(2,6-difluorphenyl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol (16,1 min) mit 33% Ausbeute, MS (ES⁺): m/z = 508,2 (M+H)⁺, einer präparativen HPLC (Kromasil Si60, 7 μm, 20 × 250 mm ID) unterzogen.
Beispiele 188 und 189
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-methyl)-2-(thien-2-yl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol und 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(methyl)-2-(thien-2-yl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol
Ausgehend von 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(thien-2-yl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol und 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-methyl)-2-(thien-2-yl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol und 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-((1-methyl-2-(thien-2-yl)-4-phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Beispiel 187 beschrieben, hergestellt. MS (ES⁺): m/z 478,2 (M+H)⁺.
Beispiel 190
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(piperidin-4-yl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol
Ein Gemisch aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(1-(benzyloxycarbonyl)piperidin-4-yl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol (0,74 g, 1,24 mmol), Ammoniumformiat (4,94 mmol) und 10% Palladium auf Kohle (0,12 mmol) in 30 ml absolutem Ethanol wird für 5 Stunden am Rückfluss kräftig gerührt. Das Reaktionsgemisch wird auf Raumtemperatur gekühlt, durch ein Bett aus Celite^® filtriert und das Filtrat wird unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird unter Elution mit 19 : 1 Dichlormethan : Methanol unter Bildung der Titelverbindung einer Silicagelchromatographie unterzogen. MS (ES⁺): m/z = 465,2 (M+H)⁺.
Beispiel 191
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(piperidin-4-yl)-5-(4-fluorphenyl)imidazol-4-yl)benzimidazolditrifluoracetat
Chlorwasserstoff in Ethylacetat wird zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-((2-1-(tert-butoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-5-(4-fluorphenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol (0,05 mmol) in Ethylacetat (2 ml) gegeben und das Gemisch wird bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Die entstehende Suspension wird filtriert und mit Diethylether unter Bildung der Titelverbindung mit 25% Ausbeute gewaschen. Der Feststoff wird in 1 : 1 Dimethylsulfoxid : Acetonitril gelöst und unter Elution mit einem Gradienten aus Wasser + 0,05% Trifluoressigsäure : Acetonitril + 0,05% Trifluoressigsäure aus 90 : 10 bis 45 : 55 in 15 Minuten (9 ml/min) unter Bildung der Titelverbindung (25%, 9,33 min) einer HPLC (YMC C18, 5 mm, 20 × 50 mm ID) unterzogen. MS (ES⁺): m/z = 483,2 (M+H)⁺.
Beispiel 192
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol
Ein Gemisch aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(1-ethoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol (55 mg) in konzentrierter Chlorwasserstoffsäure wird für 24 Stunden am Rückfluss erhitzt. Das Gemisch wird bei Raumtemperatur gekühlt, 5 N Natriumhydroxid wird zugegeben, bis das Gemisch basisch ist und es wird mit Dichlormethan extrahiert. Die organische Phase wird unter verringertem Druck konzentriert und der Rückstand wird unter Elution mit Dichlormethan gefolgt von 1 : 1 Dichlormethan : Methanol unter Bildung von 20 mg (43%) der Titelverbindung einer Silicagelchromatographie unterzogen. MS (ES⁺): m/z = 465,0 (M+H)⁺.
Beispiel 193
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-4-(4-fluorphenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol
Ausgehend von 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(1-(ethoxycarbonyl)piperidin-4-yl)-4-(4-fluorphenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Beispiel 192 beschrieben, hergestellt. MS (ES⁺): m/z = 483,0 (M+H)⁺.
Beispiel 194
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(1-ethyl)piperidin-4-yl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol
Ein Gemisch aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(piperidin-4-yl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol (0,574 g, 1,23 mmol), Triethylamin (3,1 mmol) und Iodethan (1,54 mmol) in wasserfreiem Dimethylformamid (5 ml) wird bei Raumtemperatur für 6 Stunden gerührt. Das Gemisch wird zwischen Ethylacetat und Wasser aufgeteilt. Die wässrige Phase wird mit Ethylacetat (dreimal) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit kaltem Wasser (fünfmal) und gesättigtem wässrigem Natriumchlorid gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird unter Bildung der Titelverbindung mit 76% Ausbeute einer Silicagelchromatographie unterzogen. MS (ES⁺): m/z = 493,2 (M+H)⁺.
Die Verbindungen der Beispiele 195-203 können im wesentlichen wie in Beispiel 194 beschrieben, hergestellt werden.
Beispiel 204
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(1-(methyl)piperidin-4-yl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol
Wässriges Formaldehyd (37 Gewichtsprozent, 0,15 mmol) wird zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(piperidin-4-yl)-4-(phenyl)mimidazol-5-yl)benzimidazol (75 mg) in Methanol (10 ml) gegeben. Das Gemisch wird bei Raumtemperatur für 30 Minuten gerührt und dann auf 0°C gekühlt. Essigsäure (0,3 ml) gefolgt von Natriumcyanoborhydrid (18 mg) wird zugegeben und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Gemisch wird unter verringertem Druck konzentriert und dann wird der Rückstand in Ethylacetat gelöst. Die Lösung wird zweimal mit 1 N Natriumhydroxid gewaschen und die organische Phase wird unter verringertem Druck unter Bildung von 60 mg (79%) der Titelverbindung konzentriert. MS (ES⁺): m/z = 479,6 (M+H)⁺.
Die Verbindungen der Beispiele 205-206 können im wesentlichen wie in Beispiel 204 beschrieben, hergestellt werden.
Beispiel 207
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-((1-(cyclohexan-1-on-4-yl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol
Eine Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(1,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-yl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol (0,05 g, 0,1 mmol) in 3 N Chlorwasserstoffsäure (5 ml) wird für 3 Tage bei Raumtemperatur gerührt. 5 N Natriumhydroxid wird zur Neutralisierung des Gemisches zugegeben und mit Dichlormethan (3 × 10 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden über Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck unter Bildung von 0,038 g (83%) der Titelverbindung konzentriert. MS (ES⁺): m/z = 478,2 (M+H)⁺.
Beispiel 208
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(4-hydroxycyclohex-1-yl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol
Eine Lösung aus Natriumborhydrid (0,28 g) in Methanol (5 ml) wird zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(cyclohexan-1-on-4-yl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol (0,35 g, 0,7 mmol) in 10 ml Tetrahydrofuran und 10 ml Methanol gegeben. Das Reaktionsgemisch wird für 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt, mit Wasser (50 ml) verdünnt und mit Ethylacetat (2 × 15 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte werden mit gesättigtem wässrigem Natriumchlorid gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck unter Bildung von 0,345 g (98%) der Titelverbindung konzentriert. MS (ES⁺): m/z = 480,2 (M+H)⁺.
Beispiel 209
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(4-aminocyclohex-1-yl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazolhydrochlorid
Eine Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(4-(N-[tert-butoxycarbonyl]amino)cyclohex-1-yl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol (0,14 g, 0,2 mmol) in 1 M Chlorwasserstoff wird in Essigsäure (5 ml) bei Raumtemperatur für 1 Stunde gerührt. Die Suspension wird filtriert und der Feststoff wird unter Bildung von 0,017 g (15%) der Titelverbindung getrocknet. MS (ES⁺): m/z = 479,0 (M+H)⁺.
Beispiel 210
1-Isopropylsulfonyl-2-aminobenzyl-6-(4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol
Ausgehend von 1-Isopropylsulfonyl-2-aminobenzyl-6-(α-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-α-(phenyl)acetyl)benzimidazol wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Beispiel 1 beschrieben, hergestellt. Ausbeute 12%. MS (ES⁺): m/z = 472,1 (M+H)⁺.
Beispiel 211
2-Aminobenzyl-6-(4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol
Ausgehend von 1-Isopropylsulfonyl-2-aminobenzyl-6-(4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Beispiel 181 beschrieben, hergestellt. Ausbeute 91%. MS (ES⁺): m/z = 366,1 (M+H)⁺.
Beispiele 212 und 213
1-Isopropylsulfonyl-2-aminoethyl-6-(2-(2,6-(difluor)phenyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol und 2-Aminoethyl-6-(2-(2,6-(difluor)phenyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol
Ausgehend von 1-Isopropylsulfonyl-2-aminoethyl-6-(α-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-α-(phenyl)acetyl))benzimidazol wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Beispiel 1 beschrieben, hergestellt. Ausbeute 42%. MS (ES⁺): m/z = 522,1 (M+H)⁺. Gemeinsam mit dem gewünschten Produkt wird das zu 12% desulfonylierte Produkt 2-Aminoethyl-6-(2-(2,6-(difluor)phenyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol isoliert. MS (ES⁺): m/z = 416,2 (M+H)⁺
Beispiel 214
1-Isopropylsulfonyl-6-(1-(4-(methoxy)benzyl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol
A. 1-Isopropylsulfonyl-2-chlor-6-(1-(4-methoxybenzyl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol
Ausgehend von 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(4-methoxybenzyl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Präparation 100 beschrieben, hergestellt. Ausbeute: 14%. MS (ES⁺): m/z = 521,2 (M+H)⁺.
B. Reduktion
Zu einer gerührten Suspension des anfänglichen 2-Chlorbenzimidazolderivats (30 mg, 0,057 mmol, 1 Äquivalent) in 3 ml MeOH wird Et₃N (0,04 ml) tropfenweise gefolgt von der Zugaber von 10 Gewichtsprozent Pd/C Katalysator (100 Molprozent) gegeben. Die Suspension wird mit Wasserstoff für 5 Minuten gespült. Das Gemisch wird unter Wasserstoffatmosphäre (1 atm) über Nacht gerührt. Der Katalysator wird durch ein Kissen aus Celite^® filtriert und mehrere Male mit EtOAc gewaschen. Die Lösemittel werden im Vakuum konzentriert und der Rückstand wird durch Silicagelchromatographie unter Elution mit 3% CH₂Cl₂ : MeOH unter Bildung der Titelverbindung (44% Ausbeute) gereinigt. MS (ES): m/z = 487,1 (M+H)⁺.
Beispiel 215
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(cyclopropyl)-2-(brom)-4-(2-fluorphenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol
Brom (0,34 ml, 6,545 mmol) wird tropfenweise über 5 Minuten zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(cyclopropyl)-4-(2-fluorphenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol (2,61 g, 5,95 mmol) in Chloroform (0,7 l) gegeben und für 18 Stunden gerührt. Es wird mit Wasser, gesättigtem Bicarbonat gewaschen, mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und die Lösemittel werden unter verringertem Druck entfernt. Der Rückstand wird auf Silicagel unter Elution mit Ethylacetat/Dichlormethangemischen unter Bildung der Titelverbindung (2,41 g) gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 518,0 (M+H)⁺.
Beispiel 216
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(cyclopropyl)-2-(4-chlorphenyl)-4-(2-fluorphenyl)imidazol-5-yl)benzimidazolmethansulfonat
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(cyclopropyl)-2-(brom)-4-(2-fluorphenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol (0,214 g, 0,41 mmol), 4-Chlorphenylborsäure (0,077 g, 0,50 mmol), Tetrakis(triphenylphosphin)palladium (0,234 g, 0,021 mmol), 2 M Natriumcarbonat (0,62 ml), Methanol (2,0 ml) und Toluol (20 ml) werden am Rückfluss für 3 Stunden erhitzt. Es wird auf Umgebungstemperatur gekühlt, mit Ethylacetat verdünnt, mit Wasser, gesättigtem Natriumcarbonat und gesättigtem Natriumchlorid gewaschen, mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und die Feststoffe werden unter verringertem Druck entfernt. Der Rückstand wird auf Silicagel unter Elution mit Dichlormethan/Methanolgemischen unter Bildung von 0,196 g der freien Base gereinigt. Es wird mit Methansulfonsäure wie vorher beschrieben, unter Bildung der Titelverbindung (0,232 g) behandelt. MS (ES⁺): m/z = 550,2 (M+H)⁺.
Beispiel 217
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(cyclopropyl)-2-(2,4-difluorphenyl)-4-(2-fluorphenyl))imidazol-5-yl)benzimidazolmethansulfonat
Ausgehend von 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(cyclopropyl)-2-(brom)-4-(2-fluorphenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Beispiel 216 beschrieben (0,179 g) hergestellt. MS (ES⁺): m/z = 552,2 (M+H)⁺.
Beispiel 218
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(cyclopropyl)-2-(trimethylsilylethinyl)-4-(2-fluorphenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(cyclopropyl)-2-(brom)-4-(2-fluorphenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol (0,332 g, 0,64 mmol), Trimethylsilylacetylen (0,36 ml, 2,56 mmol), Tetrakis(triphenylphosphin)palladium (0,150 g, 0,128 mmol), Triethylamin (2 ml) und Dimethylformamid (4 ml) werden vereinigt und für 18 Stunden auf 70°C erhitzt. Es wird auf Umgebungstemperatur gekühlt und die Lösemittel werden unter verringertem Druck entfernt. Der Rückstand wird auf Silicagel unter Elution mit Acetonitril/Dichlormethangemischen unter Bildung der Titelverbindung (0,295 g) gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 536,2 (M+H)⁺.
Beispiel 219
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-cyclopropyl)-(2-but-3-in-1-ol)-4-(2-fluorphenyl)imidazol-5-yl)benzimidazolmethansulfonat
Ausgehend von 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(cyclopropyl)-2-(brom)-4-(2-fluorphenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol wird die freie Base im wesentlichen wie in Beispiel 218 beschrieben, hergestellt. Die Methansulfonsäure wird wie vorher beschrieben unter Bildung der Titelverbindung (0,096 g) behandelt. MS (ES⁺): m/z = 508,4 (M+H)⁺.
Beispiel 220
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(cyclopropyl)-2-(ethinyl)-4-(2-fluorphenyl)imidazol-5-yl)benzimidazolmethansulfonat
1 M Tetra-n-butylammoniumfluorid (0,15 ml, 0,15 mmol) wird zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-cyclopropyl)-2-(trimethylsilylethinyl)-4-(2-fluorphenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol (0,054 g, 0,101 mmol) in Tetrahydrofuran (4 ml) gegeben und für 5 Minuten gerührt. Es wird mit Ethylacetat verdünnt, mit Wasser, 50% gesättigtem Natriumchlorid gewaschen, mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und die Lösemittel werden unter verringertem Druck entfernt. Der Rückstand wird auf Silicagel unter Elution mit Hexan/Ethylacetatgemischen unter Bildung der freien Base (0,037 g) gereinigt. Es wird mit Methansulfonsäure wie vorher beschrieben unter Bildung der Titelverbindung (0,045 g) behandelt. MS (ES⁺): m/z = 464,1 (M+H)⁺.
Beispiel 221
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(cyclopropyl)-2-(ethyl)-4-(2-fluorphenyl)imidazol-5-yl)benzimidazolmethansulfonat
Es werden 10% Palladium auf Kohle (0,010 g) zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(cyclopropyl)-2-(ethinyl)-4-(2-fluorphenyl))imidazol-5-yl)benzimidazol (0,074 g, 0,16 mmol) in Methanol (15 ml) gegeben und unter 1 Atmosphäre an Wasserstoffgas für 1,5 Stunden hydriert. Es wird filtriert und die Lösemittel werden unter verringertem Druck entfernt. Der Rückstand wird auf Silicagel gereinigt. Es wird mit Methansulfonsäure wie vorher beschrieben unter Bildung der Titelverbindung (0,087 g) behandelt. MS (ES⁺): m/z = 468,1 (M+H)⁺.
Beispiel 222
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(cyclopropyl)-2-(1,2,3-triazol-4-yl)-4-(2-fluorphenyl)imidazol-5-yl)benzimidazolmethansulfonat
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(cyclopropyl)-2-(ethinyl)-4-(2-fluorphenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol (0,114 g, 0,247 mmol), Trimethylsilylazid (0,165 ml, 1,23 mmol) und 1,4-Dioxan (2 ml) werden vereinigt und unter Mikrowellenbestrahlung bei 140°C für 1 Stunde erhitzt. Es wird auf Umgebungstemperatur gekühlt, Methanol (5 ml) wird zugegeben und die Lösemittel werden unter verringertem Druck entfernt. Der Rückstand wird auf Silicagel unter Elution mit Dichlormethan/Methanolgemischen gereinigt. Es wird mit Methansulfonsäure wie vorher beschrieben unter Bildung der Titelverbindung (0,088 g) behandelt. MS (ES⁺): m/z = 507,1 (M+H)⁺.
Beispiel 223
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-cyclopropyl)-2-azido-4-(2-fluorphenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol
Es wird 1,9 M Phenyllithium (0,42 ml, 0,80 mmol) tropfenweise mit einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(cyclopropyl)-2-(brom)-4-(2-fluorphenyl))imidazol-5-yl)benzimidazol (0,103 g, 0,20 mmol) in Tetrahydrofuran (3 ml) bei –78°C vereinigt und für 20 Minuten gerührt. 1,7 M tert-Butyllithium (0,28 ml, 0,48 mmol) wird tropfenweise über 5 Minuten zugegeben und für 60 Minuten gerührt. p-Toluolsulfonylazid (0,064 g, 0,323 mmol) in Tetrahydrofuran (0,4 ml) wird tropfenweise über 2 Minuten zugegeben und bei –78°C für 1 Stunde gerührt. Es wird auf 0°C erwärmt, mit Ethylacetat ver dünnt und mit gesättigtem Natriumchlorid gewaschen. Das wässrige Natriumchlorid wird neutralisiert, mit wässriger 1 N Chlorwasserstoffsäure gewaschen und mit Ethylacetat rückextrahiert. Die organischen Phasen werden vereinigt und mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und die Lösemittel werden unter verringertem Druck entfernt. Der Rückstand wird auf Silicagel unter Elution mit Acetonitril/Dichlormethangemischen unter Bildung der Titelverbindung (0,035 g) gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 481,1 (M+H)⁺.
Beispiel 224
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(cyclopropyl)-2-(amino)-4-(2-fluorphenyl)imidazol-5-yl)benzimidazolmethansulfonat
Ausgehend von 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-cyclopropyl)-2-(nitro)-4-(2-fluorphenyl))imidazol-5-yl)benzimidazol wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Beispiel 221 (0,031 g) beschrieben hergestellt. MS (ES⁺): m/z = 455,1 (M+H)⁺.
Beispiel 225
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-cyclohexyl-2-(brom)-4)-2-fluorphenyl))imidazol-5-yl)benzimidazol
Ausgehend von 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-cyclohexylphenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Beispiel 215 beschrieben, hergestellt. MS (ES⁺): m/z = 543,9 (M+H)⁺.
Beispiel 226
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-cyclohexyl)-2-(ethinyl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol
Ausgehend von 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(cyclohexyl)-2-(brom)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzimidazol wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Beispiel 218 und 220 beschrieben, hergestellt. MS (ES⁺): m/z = 488,1 (M+H)⁺.
Beispiel 227
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(2,4-difluorphenyl)-5-(3,5-difluorphenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol
Ein Gemisch aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(benzyl)-2-(2,4-difluorphenyl)-5-(3,5-dilfluorphenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol (0,084 g, 0,778 mmol), Palladiumschwarz (0,084 g) und Methanol (50 ml) wird bei 50°C unter Wasserstoffgas (55 psi) für 18 Stunden hydriert. Die Reaktion wird auf Umgebungstemperatur gekühlt, filtriert und das Lösemittel wird unter verringertem Druck entfernt. Der Rückstand wird auf Silicagel unter Elution mit Dichlormethan/Methanolgemischen unter Bildung der Titelverbindung (0,025 g) gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 530,0 (M+H)⁺.
Die freie Base der Beispiele 228-231 wird im wesentlichen wie in Präparation 66-67 und Beispiel 227 beschrieben, hergestellt. Die Methansulfonatsalze werden durch Lösen der freien Base in 10% Methanol/Dichlormethan unter Zugabe von 1,0 Äquivalenten Methansulfonsäure gelöst und die Lösemittel werden unter verringertem Druck unter Bildung der Methansulfonatsalze entfernt.
Die freie Base der Beispiele 232-235 wird im wesentlichen wie in Präparation 67 und Beispiel 227 beschrieben, hergestellt. Die Methansulfonatsalze werden durch Lösen der freien Base in 10% Methanol/Dichlormethan unter Zugabe von 1,0 Äquivalenten Methansulfonsäure hergestellt und die Lösemittel werden unter verringertem Druck unter Bildung der Monomethansulfonatsalze zugegeben.
Beispiel 236
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(methyl)-5-(2,4-difluorphenyl)imidazol-4-yl)benzimidazolmethansulfonat
Zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(benzyl)-2-(methyl)-5-(2,4-difluorphenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol (390 mg, 0,75 mmol) in 100 ml Methanol werden Palladiumschwarz (390 mg) und Wasserstoffgas bei 50°C über Nacht bei 60 psi gegeben. Die Lösung wird filtriert und durch Radialchromatographie unter Elution mit 8% Methanol in Methylenchlorid unter Bildung von 152 mg (47%) der Titelverbindung als nicht ganz weißer Feststoff gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 432,0 (M+H)⁺.
Zu einer Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(methyl)-5-(2,4-difluorphenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol (152 mg, 0,35 mmol) in 5 ml Methylenchlorid mit 3% Methanol wird ein Äquivalent an Methansulfonsäure (23 μl) gegeben und unter Bildung von 186 mg (100%) der Titelverbindung als hellbrauner Feststoff getrocknet. MS (ES⁺): m/z = 432,0 (M+H)⁺.
Die Verbindung von Beispiel 237 kann im wesentlichen wie in Beispiel 236 beschrieben, hergestellt werden.
Beispiel 238
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(3-(methyl)-1-(phenyl)pyrazol-S-yl)benzimidazol
Zu einer Lösung aus 5-(Brom-3-(methyl)-1-(phenyl)pyrazol (264 mg, 1,11 mmol) in 6 ml DME wird 1-Isopropylsulfonyl-2-aminobenzimidazol-6-borsäure (694 mg, 2,45 mmol) gegeben. Natriumcarbonat (354 mg, 3,34 mmol) wird in 0,5 ml Wasser gelöst und trans-Dichlorbis(triphenylphosphin)palladium(II) (234 mg, 0,33 mmol) wird zugegeben. Das Gemisch wird unter Rühren unter Stickstoff auf 100°C erhitzt. Nach 2 Stunden wird sie gekühlt und über ein Kissen aus Celite^® und Natriumsulfat filtriert. Das rohe Produkt wird durch Radialchromatographie unter Elution mit 4% Methanol in CH₂Cl₂ unter Bildung von 201 mg (46%) der Titelverbindung gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 396,0 (M+H)⁺.
Die Verbindungen der Beispiele 239-240 werden im wesentlichen wie in Beispiel 238 beschrieben, hergestellt.
Beispiel 241
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2,4-(diphenyl)-1,2-dihydropyrazol-3-on-5-yl)benzimidazol
Zu einer gerührten Lösung aus 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-((1-hydroxy)-α-(phenyl)acetyl)benzimidazol (0,25 mmol, 1 Äquivalent) in trockenem Toluol (3 ml) wird Phenylhydrazin (0,27 mmol, 1,1 Äquivalente) gegeben und das Gemisch wird am Rückfluss unter Stickstoff gefolgt von einer TLC erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird konzentriert und mittels Dichlormethan : Methanol 30 : 1 unter Bildung der Titelverbindung (24% Ausbeute) konzentriert. MS (ACP⁺): m/z = 474,2 (M+H)⁺.
Die Verbindungen der Beispiele 242-245 können im wesentlichen wie in Beispiel 241 beschrieben, hergestellt werden.
Beispiel 246
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(1-(benzyl)-2-(methyl)-5-(2,4-difluorphenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol
Zu einer Lösung aus 1-(Benzyl)-4-(brom)-5-(2,4-difluorphenyl)-2-(methyl)imidazol (1,12 g, 3,08 mmol) in 8 ml DME wird 1-Isopropylsulfonyl-2-aminobenzimidazol-6-borsäure (2,62 g, 0,25 mmol) gegeben. Natriumcarbonat (0,98 g, 9,25 mmol) gelöst in 1 ml Wasser und trans-Dichlorbis(triphenylphosphin)palladium(II) (0,65 g, 0,93 mmol) werden zugegeben. Das Gemisch wird unter Rühren unter Stickstoff auf 100°C erhitzt. Nach 3 Stunden wird die Lösung gekühlt und über ein Kissen aus Celite^® und Natriumsulfat filtriert. Der Rückstand wird durch Radialchromatographie unter Elution mit 3% Methanol in CH₂Cl₂ mit einem Gradienten aus 10% Methanol gereinigt. Eine zweite Reinigung durch Radialchromatographie wird unter Elution mit 4% Methanol in CH₂Cl₂ mit einem Gradienten aus 6% Methanol unter Bildung von 390 mg (24%) der Titelverbindung als gelber Feststoff durchgeführt. MS (ES⁺): m/z = 522,0 (M+H)⁺.
Beispiel 247
2-Amino-6-(5-phenylimidazol-4-yl)benzothiazol
Ausgehend von 2-Aminobenzothiazol-6-carboxaldehyd wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Beispiel 182 beschrieben, hergestellt. Ausbeute (16%). MS (ES⁺): m/z = 293,0 (M+H)⁺.
Beispiel 248
2-Amino-6-(1-(cyclohexyl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzothiazol
Ausgehend von 2-Aminobenzothiazol-6-carboxaldehyd und Cyclohexylamin wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in Beispiel 247 beschrieben, hergestellt. Ausbeute (68%). MS (ES⁺): m/z = 375,1 (M+H)⁺.
Allgemeines Verfahren A. Sandmeyer Reaktion:
Ein Äquivalent Benzothiazol wird in drei Portionen über 5 Minuten zu einer Suspension aus einem Äquivalent Kupfer(II)chlorid und 1,5 Äquivalenten tert-Butylnitrit in 1 ml Acetonitril bei 65°C gegeben. 0,1 ml Ethylendiamin wird zugegeben, das Reaktionsgemisch wird in Wasser gegossen und mit Ethylacetat (3 × 25 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden nacheinander mit Wasser (2 × 15 ml) gefolgt von gesättigtem wässrigem Natriumchlorid (15 ml) gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird durch Silicagelchromatographie unter Elution mit einem Gradienten aus Hexan, der 25-50% Ethylacetat enthält, gereinigt.
Beispiel 249
2-Chlor-6-(1-(cyclohexyl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzothiazol
Ausgehend von 2-Amino-6-(1-(cyclohexyl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzothiazol wird die Titelverbindung im wesentlichen wie in dem Allgemeinen Verfahren A: Sandmeyer Reaktion, beschrieben hergestellt. Ausbeute (24%). MS (ES⁺): m/z = 394,1 (M+H)⁺.
Allgemeines Verfahren B
Ein Äquivalent des Amins wird zu der Lösung aus drei Äquivalenten an Benzothiazol in 1 ml Tetrahydrofuran gegeben. Nach 24 Stunden wird das Reaktionsgemisch unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird durch Silicagelchromatographie unter Elution mit Hexan, das 25% Ethylacetat enthält, gereinigt.
Beispiel 250
2-Aminoethyl-6-(1-(cyclohexyl)-4-(phenyl)imidazol-5-yl)benzothiazol
Ausgehend von 2-Chlor-6-(1-(cyclohexyl)-4-((phenyl)imidazol-5-yl)benzothiazol und Ethylamin wird die Titelverbindung im wesentlichen wie im allgemeinen Verfahren B beschrieben, hergestellt. MS (ES⁺): m/z = 403,1 (M+H)⁺.
Beispiel 251
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(5-(phenyl)-1,2,3-(triazol-4-yl))benzimidazol
Ein Gemisch aus 3-Isopropylsulfonamidyl-4-amino-1-(5-phenyl)-1,2,3-triazol-4-yl) (0,060 g), Lithiummethoxid (0,013 g) und Cyanogenbromid (0,053 g) in Dichlormethan (5 ml) wird unter Stickstoff für 48 Stunden vereinigt und gerührt. Der Rückstand wird durch eine Oasis^® HLB Extraktionskartusche 60 μM (LP) unter Bildung eines weißen Feststoffs (0,050 g, 30%) gereinigt. MS (ES⁺): m/z = 382,44 (M+H)⁺.
Beispiel 252
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(5-(phenyl)pyrazol-4-yl)benzimidazol
Lithiummethoxid (21 mg) und Cyanogenbromid (89 mg) werden zu einer Lösung aus 3-Isopropylsulfonamidyl-4-amino-1-(5-phenyl)pyrazol-4-yl-phenyl in 4,5 ml CH₂Cl₂ gegeben. Es wird unter Stickstoff für 18 Stunden gerührt. Es wird mit 2 ml THF verdünnt und 0,25 ml MeOH werden zum Lösen der Feststoffe zugegeben und mit 5% NaHCO₃ gewaschen. Die wässrige Phase wird mit einer 9 : 1 Lösung aus CH₂Cl₂ : MeOH rückextrahiert. Die Phasen werden getrennt und die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird unter Elution mit einem Gradienten von 2-3,5% CH₂Cl₂ : MeOH unter Bildung eines weißen Feststoffs (34 mg, 31%) einer Silicagelchromatographie unterzogen. MS (ES⁺): m/z = 382,5 (M+H)⁺.
Beispiel 253
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(2,6-difluorphenyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazoldimaleat
Es werden 2,50 g (5,0 mmol) in 15 ml Methanol gelöst und 1,20 g (10,0 mmol) Maleinsäure werden zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird bei 40°C unter Rühren für 10 Minuten erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird filtriert. Das Filtrat wird auf 40-4°C erhitzt, während 35 ml Ethylacetat zugegeben wer den. Das Gemisch wird unter kontinuierlichem Rühren auf Raumtemperatur gekühlt. Das ausgefallene Produkt bildet sich langsam. Man sammelt das feste Produkt durch Filtration, wäscht mit Ethylacetat und trocknet bei 50°C in einem Vakuumofen, 3,25 g, 92,8%.
¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ 7,775 (m, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,54 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 7,48 (s, 1H), 7,46 (d, J = 7,00 Hz, 2H), 7,38 (d, J = 7,00 Hz, 1H), 7,38 (dd, J = 7,00 Hz, 2H), 6,29 (s, 4H), 3,60 (m, 1H), 1,26 (d, J = 7,00 Hz, 6H).
Die Fähigkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Hemmung der p38 Kinase wird durch Standardtests gezeigt, die dem Fachmann gut bekannt sind und ist kurz in den folgenden Abschnitten beschrieben.
Hemmung der p38 Kinase
Standardlösungspräparationen
Die Kinasepufferlösung wird durch Kombination von 2,5 ml an 1 M Tris-HCl (pH 7,5), 0,1 ml an 1 M Dithiothreit, 1,0 ml an 1 M Magnesiumchlorid und 300 μl 1% Triton X-100 und einer Verdünnung auf 100 ml mit Wasser hergestellt. 84 ml dieser Kinasepufferlösung werden mit 16 ml Dimethylsulfoxid unter Bildung der 16% DMSO Lösung kombiniert.
Die 200 μM ATP Lösung wird durch Zugabe von 102,6 μl an 10 mM wässrigem ATP, 25 μl an ³³P-ATP und 163,5 μl an 4 mM wässrigem epidermalen Wachstumsfaktorpeptid 661-668 (Biomol, Katalognummer P-121) in 5 ml Kinasepufferlösungen hergestellt.
Die p38 Kinaseenzymlösung wird durch Lösen von 9,5 μl an konzentrierter Enzymlösung (250 ng an p38 Enzym/μl Kinasepufferlösung) in 1536 μl Kinasepufferlösung hergestellt.
Probenherstellung
Eine 80 μM Lösung jeder Testverbindung und der Kontrollverbindung werden durch Lösen von 2 μl einer 10 mM Stammlösung der jeweiligen Verbindungen in Dimethylsulfoxid in 248 ml der 16% DMSO Lösung in einer Costar Mikrotiterplatte mit 96 Vertiefungen hergestellt. Die Platte wird auf den automatisierten Tecan Genesis Flüssigkeitsroboter für 1 : 3 Verdünnungen gestellt.
Test
10 μl seriell verdünnte Verbindung werden mit einem automatisierten Beckman Multimek Flüssigkeitsrobotor für 96 Vertiefungen in die Platte gegeben. 20 μl an 200 μM ATP Lösung werden mit einem Titertek Multidrop 8-Kanalflüssigkeitsrobotor zugegeben. 10 μl an p38 Kinaseenzymlösung wird mittels des Multimek zur Testplatte gegeben. Das Gemisch kann für 40 Minuten bei 30°C reagieren und dann wird die Reaktion durch die Zugabe von 60 μl eines frisch hergestellten 5% Eisessig mit Multidrop gestoppt. 80 μl dieser Lösung werden in eine "MAPH" Platte mittels des Multimek gegeben. Die Platten können sich für 30 Minuten auf Raumtemperatur einstellen und dann auf einem Titertek MAP Extraktionsgerät mit frisch hergestelltem 0,5% Eisessig gewaschen/abgesaugt (1 × 300 μl, 2 × 200 μl). Die Vertiefungen werden geblottet und es werden 100 μl MicroScint 20 Scintillationsflüssigkeit (Packard Bioscience) mit dem Multidrop zugegeben. Die Platten können für 30 Minuten stehen und werden auf einem PE/Wallac Microbeta Trilux Scintillationszähler auf das ³³P-Isotop gezählt.
Alle beispielhaft dargestellten Verbindungen werden anfänglich mit 10 Konzentrationen getestet (20 μM – 1 nM mittels 1 : 3 Reihenverdünnungen). Verbindungen mit HK₅₀ Werten von weniger als 25 nM werden bei der Ausgangskonzentration von 2 μM bis 0,1 nM (1 : 3 Reihenverdünnungen) erneut getestet. Die HK₅₀ Werte werden für jede Verbindung mittels einer nicht-linearen Regression berechnet (IDBS Activity Base Software). Alle beispielhaft dargestellten Verbindungen werden getestet, wie dies im wesentlichen oben beschrieben ist und hemmen das p38 Kinaseenzym mit einer HK₅₀ von mindestens 5 μM.
Hemmung von THF-α in vitro
Peritoneale Mausmakrophagen
1 ml Thioglycolatmedium (5,0 g Hefeextrakt, 15,0 Casiton oder Trypticase, 5,0 g Dextrose, 2,5 g Natriumchlorid, 0,75 g L-Cystein, 0,5 g Natriumthioglycolat, 1,0 mg Resazurin und 0,75 g Agar in 1,0 l destilliertem Wasser) wird in den Peritonealraum jeder weiblichen Balb/C Maus injiziert. Am Tag 4 oder 5 nach der Injektion werden die Mäuse getötet und dann mit 4 ml Dulbecco's phosphat-gepufferter Kochsalzlösung (BioWhittaker) injiziert und die Peritonealmakrophagen werden mit einer Spritze entnommen.
Cytokinbildung
Peritoneale Mausmakrophagen werden mit einem Hämocytometer gezählt und auf 2,5 × 10⁶ Zellen/ml Vollmedium eingestellt (RPMI-1640 Medium, das 10% fetales Rinderserum enthält). Die Zellen werden in Flachbodenplatten mit 96 Vertiefungen mit 5 × 10⁵ Zellen pro 200 μl pro Vertiefung ausplattiert und können sich absetzen und am Boden der Vertiefung für mindestens 3 Stunden haften. Die Zellen werden mit der Testverbindung oder dem Standard p38 Kinaseinhibitor mittels einer Reihe an 8 Konzentrationen für 1 Stunde bei 37°C (20 μl/Vertiefung) vorbehandelt. Die Zellen werden dann mit einem Gemisch aus 50 ng/ml Lipopolysaccharid (LPS) und 10 E/ml Interferon γ für 18 Stunden bei 37°C behandelt (20 μl/Vertiefung). Das konditionierte Medium wird geerntet und auf eine TNF-α Bildung mittels des Luminex-Verfahrens getestet.
TNF-α/Luminexdetektionstest zur Hemmung von TNF-α in vitro (Bio Rad Bio Plex Kit – Katalog Nr. 171-G12221)
Der lyophilisierte, vorgemischte TNF-α Standard (1 Standardröhrchen/zwei Platten mit 96 Vertiefungen) wird mit 50 ml sterilem Wasser rekonstituiert (500 000 pg/ml). Die Proben werden für 5 Sekunden gevortext, für 30 Minuten auf Eis inkubiert und vor der Verwendung für 5 Sekunden gevortext. Ein Satz aus zwölf 1,5 ml Röhrchen wird mit Nr. 1 bis Nr. 12 beschriftet und dann werden die im folgenden gezeigten Mengen an Zellmedien zu den geeigneten Röhrchen gegeben (Standardkonzentration wie folgt: 50 000, 25 000, 12 500, 6 250, 3 125, 1 562,5, 781,3, 390,6, 195,3, 97,7, 48,8 und 24,4 pg/ml). Die vorgemischten Anti-Cytokin konjugierten Kügelchen werden stark für 30 Sekunden gevortext (25 ×). Die Anti-Cytokin konjugierten Kügelchen werden auf eine 1 × Konzentration mittels 1 × Bio-Plex Testpuffer verdünnt. Für jede Platte werden 240 μl der vorgemischten Kügelchen zu 5760 μl Bio-Plex Testpuffer gegeben. Eine Milliporeplatte mit 96 Vertiefungen wird mit 100 μl/Vertiefung an Blockierungspuffer blockiert. Der Blockierungspuffer wird durch ein Millipore Filtrationssystem filtriert und dann getrocknet. Es werden zwei Waschschritte auf der Filterplatte mit 100 μl/Vertiefung an Bio-Plex Testpuffer ausgeführt und getrocknet. Die 1 × Anti-Cytokin-konjugierten Kügelchen werden für 15 Sekunden gevortext und es werden 50 μl zu jeder Vertiefung gegeben. Es wird erneut durchfiltriert und getrocknet. Es werden zwei Waschschrite auf den Platten mit 100 μl/Vertiefung an Bioplexwaschpuffer ausgeführt. Es wird erneut durchfiltriert und getrocknet. 50 μl Probe oder Standard wird zu jeder Probenvertiefung gegeben. Dies wird für 60 Sekunden bei Raumtemperatur auf einem Schüttler bei der Einstellung 6 inkubiert, der vor Licht geschützt ist, und dann für 30 Minuten bei der Einstellung 3 und dann über Nacht in den Kühlschrank gestellt. Es werden 3 Waschschritte mit dem Bio-Plex Waschpuffer ausgeführt und dann filtriert und getrocknet. Der Cytokinantikörper wird für jede Platte hergestellt (~10 Minuten vor der Verwendung) und 60 μl der vorgemischten Cytokindetektionsantikörperstammlösung wird zu 5940 μl Bio-Plex Detection Antibody Diluent gegeben. 50 μl des Cytokindetektionsantikörpers werden zugegeben und bei Raumtemperatur für 60 Sekunden bei der Einstellung 6 und dann für 30 Minuten bei der Einstellung 3 auf einem Schüttler inkubiert, der vor Licht geschützt ist. Es werden 3 Waschschritte mit dem Bio-Plex Waschpuffer ausgeführt. Dies wird durchfiltriert und getrocknet. Strept-PE (~10 Minuten vor der Verwendung) wird für jede Platte hergestellt und 60 μl bis 5940 μl Bio-Plex Testpuffer werden zugegeben. 50 μl Streptavidin-PE werden zu jeder Vertiefung gegeben und für 60 Sekunden bei Raumtemperatur bei Einstellung 6 und dann für 10 Minuten bei Einstellung 3 auf einem Schüttler inkubiert, der vor Licht geschützt ist. Es werden 3 Waschschritte mit Bio-Plex Waschpuffer ausgeführt. Dies wird durchfiltriert. Die Kügelchen werden in 100 μl/Vertiefung an Bio Plex Testpuffer resuspendiert. Standards und Proben werden auf einem Luminexgerät ausgelesen. Diese Intensitätsauswertungen werden dann auf Picogramm/Milliliter Einheiten basierend auf einer Standardkurve mit 12 Punkten umgewandelt, die zweifach mittels einer logischen Regressionsmethode mit 4 Parametern erzeugt wird (Bio Plex Manager, Versionen 2.0 und 3.0, Bio Rad) und es wird die HK50 berechnet.
Die Verbindungen der Beispiele 1, 6, 16 und 17 werden getestet, wie dies im wesentlichen oben beschrieben ist und unterdrücken TNF-α in vitro mit einer HK₅₀ von weniger als 100 nM.
Hemmung von TNF-α in vivo
Die Verbindungen werden p.o. (100, 30, 10 und 3 mg/kg) an weibliche Balb/c Mäuse (5 Mäuse/Dosis) verabreicht. Nach 2 Stunden wird Lipopolysaccharid (LPS, E. coli Serotyp 0111:B4, 5 mg/kg) i.v. in die Schwanzvene jeder Maus verabreicht. Eine Stunde nach der LPS Verabreichung werden die Mäuse durch CO₂ Inhalation getötet und das Blut wird über eine Herzpunktion gewonnen. Das Serum wird auf TNF-α Spiegel durch das Luminexverfahren analysiert.
TNF-α/Luminexdetektionstest zur Hemmung von TNF-α in vivo (Bio-Rad Bio-Plex Kit Katalog Nr. 171-G12221)
Es wird der lyophilisierte vorgemischte TNF-α Standard (1 Standardröhrchen/zwei Platten mit 96 Vertiefungen) mit 50 μl sterilem Wasser (500 000 pg/ml) rekonstituiert. Man vortext sanft für 5 Sekunden, inkubiert für 30 Minuten auf Eis und vortext für 5 Sekunden vor der Verwendung. Ein Satz aus zwölf 1,5 ml Röhrchen wird mit Nr. 1 bis Nr. 12 beschriftet und dann werden die im folgenden gezeigten Mengen an Mausserumstandardverdünnung zu den geeigneten Röhrchen gegeben (Standardkonzentration wie folgt: 50 000, 25 000, 12 500, 6 250, 3 125, 1 562,5, 781,3, 390,6, 195,3, 97,7, 48,8 und 24,4 pg/ml). Die vorgemischten Anti-Cytokin konjugierten Kügelchen werden stark für 30 Sekunden gevortext (25 ×). Die Anti-Cytokin konjugierten Kügelchen werden auf eine 1 × Konzentration mittels 1 × Bio-Plex Testpuffer verdünnt. Für jede Platte werden 240 μl der vorgemischten Kügelchen zu 5760 μl Bio-Plex Testpuffer gegeben. Eine Milliporeplatte mit 96 Vertiefungen wird mit 100 μl/Vertiefung an Blockierungspuffer blockiert. Der Blockierungspuffer wird durch ein Millipore Filtrationssystem filtriert und dann getrocknet. Es werden zwei Waschschritte auf der Filterplatte mit 100 μl/Vertiefung an Bio-Plex Testpuffer ausgeführt und getrocknet. Es werden 1 × Anti-Cytokin konjugierte Kügelchen für 15 Sekunden gevortext und 50 μl werden zu jeder Vertiefung gegeben. Es wird erneut durchfiltriert und getrocknet. Es werden 25 μl Serumprobe und 25 μl Verdünnungsmittel (Bio Rad) oder 50 μl Standard zu jeder Probenvertiefung gegeben. Es wird bei Raumtemperatur für 60 Sekunden bei der Einstellung 6 und dann für 30 Minuten bei der Einstellung 3 auf einem Schüttler inkubiert, der vor Licht geschützt ist, und über Nacht in den Kühlschrank gestellt. Es werden 3 Waschschritte mit Bio Plex Waschpuffer ausgeführt. Es wird durchfiltriert und getrocknet. Es wird Cytokindetektionsantikörper (~10 Minuten vor der Verwendung) für jede Platte hergestellt und man gibt 60 μl der vorgemischten Cytokindetektionsantikörperstammlösung zu 5940 μl Bio-Plex Detection Antibody Diluent. Es werden 50 μl Cytokindetektionsantikörper zugegeben und für 60 Sekunden bei Raumtemperatur bei einer Einstellung von 6 und dann für 30 Minuten bei einer Einstellung von 3 auf einem Schüttler inkubiert, der vor Licht geschützt ist. Man führt 3 Waschschritte mit Bio-Plex Waschpuffer aus. Man filtriert und trocknet. Strept-PE (–10 Minuten vor der Verwendung) wird für jede Platte hergestellt und 60 μl bis 5940 μl Bio-Plex Testpuffer werden zugegeben. 50 μl Streptavidin-PE werden zu jeder Vertiefung gegeben und für 60 Sekunden bei Raumtemperatur bei Einstellung 6 und dann für 10 Minuten bei Einstellung 3 auf einem Schüttler inkubiert, der vor Licht geschützt ist. Es werden 3 Waschschritte mit Bio-Plex Waschpuffer ausgeführt. Dies wird durchfiltriert. Die Kügelchen werden in 100 μl/Vertiefung an Bio Plex Testpuffer resuspendiert. Standards und Proben werden auf einem Luminexgerät ausgelesen. Diese Intensitätsauswertungen werden dann auf Picogramm/Milliliter Einheiten basierend auf einer Standardkurve mit 12 Punkten umgewandelt, die zweifach mittels einer logischen Regressionsmethode mit 4 Parametern erzeugt wird (Bio Plex Manager 2.0, Bio Rad) und es wird die HK50 berechnet.
Die Verbindungen der Beispiele 1, 6 und 16 werden getestet, wie dies im wesentlichen oben beschrieben ist und unterdrücken TNF-α in vivo mit einer HK₅₀ von weniger als 100 mg/kg.
Wirkung TNF-α, das durch intraartikuläres LPS induziert wird
Die intraartikuläre Injektion von LPS in die Rattengelenke induziert die Synthese von TNF-α, das in der Synovialflüssigkeit gemessen werden kann. Es sind innerhalb von 2 Stunden hohe Mengen an TNF-α detektierbar. Da das Gelenk die Stelle ist, an der sich die Arthritis entwickelt, kann dieses Modell schnell bestimmen, ob eine oral verabreichte Verbindung einen Effekt auf die Entzündungsreaktion im Synovium hat.
Sechs weibliche Lewis-Ratten (150-200 g) werden in jede Behandlungsgruppe gegeben. Den Tieren werden Träger (1% Natriumcarboxymethylcellulose – 0,25% Tween 80) oder die Verbindung von Beispiel 77 (freie Base) (1 mg/kg, 3 mg/kg, 10 mg/kg und 30 mg/kg) oral verabreicht. Eine Stunde später werden 10 μl LPS (10 μg) intraartikulär in das rechte Gelenk jeder Ratte verabreicht, während das linke Gelenk 10 μl Kochsalzlösung erhält. Nach 2 Stunden wird jedes Gelenk mit 100 ml Kochsalzlösung gewaschen. Die Lavage wird gewonnen und bei –80°C gelagert.

Gruppe Nr. 1: Träger (1% Na-CMC – 0,25% Tween 80, 1 ml, PO)
Gruppe Nr. 2: Beispiel 77 (freie Base) (1 mg/kg, 1 ml PO)
Gruppe Nr. 3: Beispiel 77 (freie Base) (3 mg/kg, 1 ml, PO)
Gruppe Nr. 4: Beispiel 77 (freie Base) (10 mg/kg, 1 ml PO)
Gruppe Nr. 5: Beispiel 77 (freie Base) (30 mg/kg, 1 ml, PO)

TNF-α wird mit einem im Handel erhältlichen ELISA Kit (R&D, RTA00) gemessen. Die Behandlung mit der Verbindung von Beispiel 77 ruft eine Dosis-abhängige Hemmung der TNF-α Synthese hervor, wie dies in der Synoviallavageflüssigkeit gemessen wird. Die TMED50 beträgt 10 mg/kg für Beispiel 77 in diesem Test.
B16F10 Melanomziel (MAPKAP-K2 Phosphorylierung) und B16F10 Melanommetastaseeffizienzmodell Hemmung der B16F10 Melanomlungenmetastasen
Die B16F10 Melanomzelllinie erhält man von der American Type Culture Collection, Rockville, MD. Die Zellen werden in RPMI-1640 Medium kultiviert, das mit 10% fetalem Kälberserum supplementiert ist. Die Zellen werden in vitro angezogen und werden während ihrer exponentiellen Wachstumsphase durch sanfte Trypsinisierung geerntet, zweimal in Medium gewaschen und in serumfreiem RPMI-1640 Medium resuspendiert. Die Anzahl an monodispers lebensfähigen Zellen wird mittels eines Hämocytometers bestimmt und auf 1 × 10⁶ Zellen/ml eingestellt. Die Tumorzellen werden intravenös in die Schwanzvene von normalen C57B16 Mäusen mit einem Inokulumvolumen von 0,2 ml injiziert, worin 200 000 Zellen enthalten sind. Die Mäuse werden mit Testverbindung oder Trägerkontrolle ausgehend vom Tag 1 vor der i.v. Tumorinokulation behandelt. Die Verbindung von Beispiel 77 (freie Base) wird als Suspensionsformulierung in 1% Na-CMC/0,25% Polysorbat 80 hergestellt und die Sonde wird in einem Injektionsvolumen von 1% Körpergewicht ultrabeschallt (beispielsweise wird die 30 mg/kg Dosismenge mit 3 mg/ml hergestellt und 0,2 cm³ pro 20 g Maus verabreicht). Die Mäuse werden dreimal am Tag oral mit der Verbindung mit 30, 10 und 3 mg/kg (90, 30 und 9 mg/kg/Tag) von den Tagen –1 bis 16 nach der Tumorzellbeimpfung behandelt. Die Kontrollmäuse erhalten den Träger alleine auf identische Weise. Am Tag 16 werden die Mäuse getötet und die Lungen werden geerntet und in 3% Paraformaldehyd fixiert. Die Lungenläsionen werden durch eine manuelle Zählung unter dem Sektionsmikroskop quantifiziert.
Die Testverbindung wird im B16F10 Melanomlungenmetastasemodell oral mit 3, 10 und 30 mg/kg dreimal am Tag von 1 Tag vorher bis 16 Tage nach der i.v. Tumorbeimpfung getestet (Gesamtdosis 9, 30 und 90 mg/kg/Tag). Die Lungen werden am Tag 16 geerntet und die Lungenläsionen werden quantifiziert. Die Testverbindung verursacht jeweils 54%, 73% und 95% Hemmung der Lungenmetastasenbildung für die 3, 10 und 30 mg/kg Dosismengen (p < 0,001 bei allen 3 Dosismengen).
B16F10 Zielstudien (phosphorylierte MAPKAPK-2)
Die B16F10 Melanomzelllinie erhält man von der American Type Culture Collection, Rockville, MD. Die Zellen werden in RPMI-1640 Medium kultiviert, das mit 10% fetalem Kälberserum supplementiert ist. Die in vitro angezogenen Zellen werden während ihrer exponentiellen Wachstumsphase durch sanfte Trypsinierung geerntet, zweimal in Medium gewaschen und in serumfreiem RPMI 1640 Medium resuspendiert. Die Anzahl an lebensfähigen Zellen wird mittels eines Hämocytometers bestimmt und auf 1 × 10⁷/ml eingestellt. Die Tumorzellen werden subkutan in normale C57B16 Mäuse injiziert. Das Inoku lumvolumen pro Maus beträgt 0,2 ml (2 000 000 Zellen). Wenn die Tumoren 300 bis 500 mg erreichen, werden die Mäuse für Zielhemmstudien entweder zu einer fixierten Zeit (2,5 Stunden) nach der p.o. Behandlung mit der Verbindung oder für pharmakodynamische Studien verwendet, worin die Tumoren zu verschiedenen Zeitpunkten (beispielsweise 3, 6, 9, 12, 15 und 18 Stunden) nach der p.o. Behandlung mit der Verbindung gewonnen werden.
Proteinextraktion und Immunblotanalyse
Die wie oben beschrieben gewonnen Tumoren werden unmittelbar in flüssigem Stickstoff schockgefroren und bei –80°C gelagert. Die Tumorgewebe werden auf Eis mittels eines Daunce Homogenisiergeräts in einem Extraktionspuffer homogenisiert (25 mM Tris pH 7,5, worin die folgenden Proteaseinhibitoren enthalten sind: 10 μg/ml Leupeptin, 10 μg/ml Sojabohnen Tryp-Chymotrypsininhibitor, 10 mg/ml N-Tosyl-L-Phenylalaninchlormethylketon, 10 μg/ml Aprotinin, N-α-p-Tosyl-L-Argininmethylester, 7 mM Benzamidin, 0,3 mM Phenylmethylsulfonylfluorid und zwei Tabletten vollständiger Proteaseinhibitorcocktail von Roche, gefolgt von Phosphataseinhibitoren: 60 mM β-Glycerophosphat, 1 mM Natriumvanadat, 10 mM Natriumfluorid, 20 mM p-Nitrophenylphosphat, 1 μM Okadainsäure, 1 μM Mikrocystin, 2,5 mM Natriumpyrophosphat und 1 mM Dithiothreit, 15 mM EDTA, 5 mM EGTA, 1% Triton × 100 und 150 mM Natriumchlorid). Die Gewebelysate werden durch Zentrifugation in einer gekühlten Mirkozentrifuge bei 14 000 Upm und bei 1°C für 20 Minuten geklärt. Die Überstände werden in frische Mikrofugenröhrchen überführt, die auf Eis vorgekühlt sind und in flüssigem Stickstoff oder Trockeneis schockgefroren. Nach einem schnellen Auftauen bis etwa 80% Vollständigkeit in lauwarmem Wasser werden die Proben bis zum vollständigen Auftauen auf Eis gestellt. Die Proben werden erneut bei 14 000 Upm und bei 1°C für 15 Minuten zentrifugiert. Der Überstand wird in frisch vorgekühlte Mikrofugenröhrchen überführt und die Proteinkonzentrationen werden mittels Bio-Rad Proteintestreagenzien mittels Rinderserumalbumin als Proteinstandard gemessen.
Die Proteinextrakte werden mit dem Extraktionspuffer ausgeglichen. Es wird ein gleiches Volumen an 2 × SDS Probenpuffer zu den Proteinextrakten gegeben und in einem Wasserbad für 5 Minuten gekocht. Es werden 100 μg Proteinextrakt pro Probe für die Elektrophorese auf einem 4-20% Gradienten SDS-PAGE Gel verwendet und auf Nitrozellulosemembranen (NC Membranen) überführt. Die NC Membranen werden in 5% BSA in TBST (20 mM Tris pH 7,5, 500 mM Natriumchlorid, 0,05% Tween 20 und 0,02% Natriumazid) für mindestens 1 Stunde blockiert. Die Membranen werden dann in primärem Antikörper bei 1 : 1 000 mit 5% BSA in TBST über Nacht in einem Schüttler mit 80 Upm bei 4°C inkubiert. Die Membranen werden 4 × jeweils 10 Minuten mit TBST gewaschen. Die Membranen werden dann für 40 Minuten mit einem sekundären Antikörper-HRP (Meerrettichperoxidase) Konjugat mit einer 1 : 10 000 Verdünnung in 3% Magermilch in TBST inkubiert und erneut viermal mit TBST für jeweils 10 Minuten gewaschen. Die Immunblots werden dann durch verstärkte Chemoluminszenz (ECL, Amersham) gemäß den Anleitungen des Herstellers sichtbar gemacht. Alle primären Antikörper werden von Cell Signaling bezogen und sekundäre Antikörper HRP Konjugate werden von Amersham bezogen. Gele, Membranen und das Gerät, die zur Elektrophorese und zum Western Blot verwendet werden, werden von Invitrogen bezogen. Proteinbanden von Interesse werden von Filmen mittels Kodak Image Station 1000 quantifiziert.
Die Verbindung von Beispiel 77 zeigt ausgezeichnete Dosis-abhängige Aktivitäten gegen p38 MAPK in Tumoren, die 2,5 Stunden nach der Dosierung geerntet werden, wie dies als Dosis-abhängige Hemmung der MAPKAPK-2 Phosphorylierung beobachtet wird. MAPKAPK-2 ist ein physiologisches Substrat der p38 MAPK. Eine beträchtliche Hemmung der MAPKAPK-2 Phosphorylierung durch die Verbindung von Beispiel 77 wird in Dosen bis zu 0,3 mg/kg beobachtet und die ANOVA TMED 50 wird mit 3 mg/kg bestimmt. Die Verbindung von Beispiel 77 verringert den Phosphorylierungsgrad von MAPKAPK-2 in den Tumoren um > 80% (P < 0,001) bei Dosen von 30 mg/kg. Im Zeitverlauf der Studie wird die Verbindung von Beispiel 77 mit 30 mg/kg verabreicht und die Tumoren werden zu verschiedenen Zeitintervallen nach einer Dosierung für bis zu 18 Stunden herausgeschnitten. Eine Western Blot Analyse der MAPKAPK-2 Phosphorylierung zeigt, dass die Verbindung von Beispiel 77 die p38 MAPK Aktivität für bis zu 9 Stunden hemmt. 12 Stunden nach der Dosierung geht das Maß der MAPKAPK-2 Phosphorylierung in den behandelten Tumoren auf ein ähnliches Maß wie in der Trägerkontrolle zurück.
Die Verbindung von Beispiel 77 wird im B16F10 Melanom Lungenmetastasemodell oral mit 3, 10 und 30 mg/kg dreimal am Tag von 1 Tag vor bis 16 Tage nach der i.v. Tumorinjektion getestet (Gesamtdosis 9, 30 und 90 mg/kg/Tag). Die Lungen werden am Tag 16 entnommen und die Lungenläsionen werden quantifiziert. Die Verbindung von Beispiel 77 verursacht jeweils 54%, 73% und 95% Hemmung der Lungenmetastasenbildung jeweils für die 3, 10 und 30 mg/kg Dosismengen (p < 0,001 bei allen drei Dosismengen).
P815 Tumormodell
Weibliche (6-8 Wochen alte) DBA/2 Mäuse (Taconic) werden subkutan in die hintere Flankenregion am Tag 0 mit P815 Zellen (0,5 × 10⁶ Zellen in 200 μl RPMI 1640) implantiert. P815 Tumorzellen werden von der ATCC bezogen und in RPMI 1640 Medium, das mit Glutamin und 10% Rinderserumalbumin supplementiert ist, bei 37°C und in einem 5% CO₂ Zellkulturinkubator inkubiert. Tumortragende Tiere werden durch die orale Verabreichung der Verbindung von Beispiel 77 (freie Base) bei unterschiedlichen Dosen oder Trägern mit einer Häufigkeit von dreimal am Tag beginnend am Tag der Implantierung behandelt. Das Tumorwachstum wird alle 2 Tage durch Messung der senkrechten Durchmesser gemessen. Das in Milligramm (mg) ausgedrückte Tumorvolumen wird als Produkt des größten Durchmessers (a) und dessen Senkrechte (b) gemäß der Formel [Tumorvolumen = a × b² × 0,536] bestimmt.
In vivo Zielhemmungsstudie im P815 Mastocytommodell
Die in vivo Zielhemmung wird durch Messen des Effekts der Inhibitorbehandlung auf die Phosphorylierung von MAPKAP-K2 bestimmt, das in P815 Tumorgeweben exprimiert wird. Tumoren in DBA/2 Mäusen erhalten eine subkutane Implantierung mit P815 Zellen und können ohne Behandlung bis auf eine Größe von 300-500 mg wachsen. Den Tumor-tragenden Mäusen wird dann eine orale Verabreichung der Verbindung von Beispiel 77 (freie Base) oder eines Trägers gegeben. Um die zeitabhängige Zielhemmung durch die Verbindung von Beispiel 77 (freie Base) zu untersuchen, werden die Tumoren aus CO₂ getöteten Tieren zu den angegebenen Zeiten (3 Stunden, 6 Stunden, 12 Stunden und 18 Stunden) nach der Dosierung der Verbindung mit 30 mg/kg entnommen. Die Dosis-abhängige Zielhemmung durch die Verbindung von Beispiel 77 (freie Base) wird durch die Entnahme der Tumoren 3 Stunden nach der oralen Gabe von verschiedenen Dosen der Verbindung von Beispiel 77 (freie Base) oder des Trägers untersucht. Die entnommenen Tumoren werden unmittelbar auf Trockeneis schockgefroren, pulverisiert, homogenisiert und in gekühltem Lysepuffer lysiert, der Proteinase- und Phosphataseinhibitoren enthält. Nach der Zentrifugation zur Entfernung des Zelldebris werden die Überstände, die 100 μg Gesamtproteine enthalten, in 2 × Tris-Glycin Auftragepuffer resuspendiert und einer Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamidgelelektrophorese (10% Tris-Glycin) unter reduzierenden Bedingungen unterzogen. Die Proteine werden anschließend auf eine PDVF Membran geblottet und werden dann in 5% Milch PBS, worin 0,1% Tween 20 enthalten sind, für 1 Stunde bei Raumtemperatur blockiert. Die Membran wird dann mit primärem Antikörper (anti-Phospho-MAPKAP-K2, Cell Signalliing) bei 4°C über Nacht, gefolgt von einer Inkubation mit sekundärem Antikörper (anti-Kaninchen HRP-konjugiertes IgG) bei Raumtemperatur für 1 Stunde inkubiert.
Das Phospho-MAPKAP-K2 Expressionsniveau wird durch das Phospho-Image Detektionssystem visualisiert, nachdem die verstärkte Chemilumineszenz (ECL) Detektion verwendet wurde, um das Vorkommen der Proteine auf den PVDF Blots zu reflektieren. Das Expressionsniveau der Phospho-p38 MAP Kinase und der Gesamt p38 MAP Kinase wird auch durch ein ähnliches Westernblotverfahren verfolgt.
Zeit- und dosisabhängige Hemmung der MAPKAP-K2 Phsophorylierung druch die Verbindung von Beispiel 77 (freie Base) bei P815 Tumoren in vivo
Die Wirkung der oralen Verabreichung einer Einzeldosis der Verbindung von Beispiel 77 (freie Base) auf die MAPKAP-K2 Phosphorylierung wird in DBA/2 Mäusen evaluiert, die P815 Tumoren tragen. Die Verabreichung von Beispiel 77 (freie Base) mit 30 mg/kg verursacht eine zeitabhängige Hemmung der MAPKAP-K2 Phosphorylierung. Der hemmende Effekt der Verbindung tritt schon 3 Stunden nach der Dosierung der Tiere auf und erstreckt sich über 12 Stunden. Es ist auch ersichtlich, dass die Phosphorylierung von MAPKAP-K2 18 Stunden nach der Dosierung vollständig wiederhergestellt ist. Wenn den P815 Tumor tragenden Tieren die Verbindung von Beispiel 77 (freie Base) in verschiedenen Dosen (3, 10 und 30 mg/kg) verabreicht wird und ihre Tumoren zur Messung der Proteinexpression 3 Stunden nach der Dosierung entnommen werden, wird eine signifikante Dosis-abhängige Hemmung der MAPKAP-K2 Phosphorylierung gezeigt. In den Tierversuchen verändert die Verbindung von Beispiel 77 (freie Base) weder die p28 MAP Kinasephosphorylierung noch die p38 MAP Kinaseexpression in vivo.
Hemmung des P815 Tumorwachstums in vivo
Die in vivo Aktivität der Verbindung von Beispiel 77 (freie Base) wird auf das Wachstum von P815 Tumoren untersucht, die subkutan in DBA/2 Mäuse transplantiert werden. Eine orale Verabreichung der Verbindung von Beispiel 77 (freie Base) dreimal am Tag mit Dosen zwischen 0,1 und 30 mg/kg führt zu einer Dosis-abhängigen Hemmung des P815 Tumorwachstums mit einer 67% Hemmung des Tumorvolumens bei 30 mg/kg (p < 0,01, drei unabhängige Studien), 55% Hemmung bei 3 mg/kg (p < 0,05, 2 unabhängige Studien) und 30 bis 14% Hemmung bei geringeren Dosen.
Kollagen-induziertes Arthritiswirksamkeitsmodell der Ratte
Weibliche Lewis Ratten (etwa 190 g, Charles River Labs) werden mit Rinderkollagen vom Typ II (2 mg/ml) immunisiert, das mit einem gleichen Volumen Adjuvans (Aluminiumhydroxid) emulgiert ist. Die Ratten werden mit etwa 0,3 mg der Emulsion intradermal am Rücken nahe der Schwanzbasis immuni siert. Alle Tiere werden 7 Tage später gemäß demselben Protokoll immunisiert. Die Ratten beginnen eine Arthritis (gekennzeichnet durch Schwellung und Rötung eines oder beider Knöchel) 12 bis 14 Tage nach der ersten Immunisierung zu entwickeln. Die Ratten werden gleichmäßig in 5 Behandlungsgruppen bei den ersten Anzeichen von Arthritis eingeteilt und die Behandlung wird initiiert, wobei jede Ratte zweimal am Tag für 14 Tage die Dosis erhält.
Behandlungsgruppen:

Gruppe 1: Träger (1% Na-Carboxymethylcellulose + 0,25% Tween 80) 1 ml, PO, zweimal täglich für 14 Tage
Gruppe 2: Beispiel 77 (freie Base), 5 mg/kg, 1 ml, PO, zweimal täglich für 14 Tage
Gruppe 3: Beispiel 77 (freie Base), 15 mg/kg, 1 ml, PO, zweimal täglich für 14 Tage
Gruppe 4: Beispiel 77 (freie Base), 30 mg/kg, 1 ml, PO, zweimal täglich für 14 Tage
Gruppe 5: Prednisolon 10 mg/kg, 1 ml, PO, zweimal täglich für 14 Tage

Der Gelenkdurchmesser wird mit Schublehren 5 Tage pro Woche gemessen und aufgezeichnet. Die Daten werden als Fläche unter der Kurve (AUC) exprimiert, die von den gesammelten Entzündungsbewertungen erzeugt wird und es wird eine statistische Analyse ausgeführt. Bei allen Dosen der Verbindung von Beispiel 77 zeigt sich eine signifikante Verringerung im Gelenkdurchmesser mit einer maximalen Verringerung von 46% bei 30 mg/kg (p < 0,0001). Prednisolon verringert die Entzündung auf das Niveau vor der Arthritis.
Am Ende der Studie werden die Tiere getötet und die Gelenke werden einer histologischen Evaluierung unterzogen. Die Histologiebewertung basiert auf einer 0 bis 5 Skala für jeden der 4 Parameter (Entzündung, Pannus, Knorpelschädigung, Knochenresorption). Bei Tieren, die mit der Verbindung von Beispiel 77 behandelt wurden, wird eine Dosis-abhängige Hemmung der Gelenkspathologie beobachtet. Es wird eine signifikante Reduktion in den Gesamtgelenksbewertungen bei Tieren erhalten, die mit der Verbindung von Beispiel 77 mit 15 und 30 mg/kg behandelt wurden (jeweils p < 0,03 und p = 0,0031).
Die orale Verabreichung der erfindungsgemäßen Verbindungen ist bevorzugt. Jedoch ist die orale Verabreichung nicht der einzige Weg oder der einzig bevorzugte Weg. Beispielsweise kann eine transdermale Verabreichung für Patienten sehr erwünscht sein, die bezüglich der Einnahme von oralen Arzneimitteln vergesslich oder verärgert sind und der intravenöse Weg kann aus Komfort oder zur Vermeidung von Komplikationen, die mit einer oralen Verabreichung verbunden sind, bevorzugt sein. Die Verbindungen der Formel I können auch unter bestimmten Umständen durch den perkutanen, intramuskulären, intranasalen oder intrarektalen Weg verabreicht werden. Der Verabreichungsweg kann auf jede Weise variiert werden, eingeschränkt durch die physikalischen Eigenschaften der Arzneimittel, den Komfort des Patienten und des Pflegepersonals und anderer relevanter Umstände (Remington's Pharmaceutical Sciences, 18. Ausgabe, Mack Publishing Co. (1990)).
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen werden auf eine in der pharmazeutischen Technik gut bekannte Weise hergestellt. Der Träger oder der Hilfsstoff kann ein festes, halbfestes oder flüssiges Material sein, das als Vehikel oder Medium für den Wirkstoff dient. Geeignete Träger oder Hilfsstoffe sind in der Technik gut bekannt. Die pharmazeutische Zusammensetzung kann zur oralen, inhalativen, parenteralen oder topischen Verwendung angepasst werden und kann in Form von Tabletten, Kapseln, Aero solen, Inhalationsmitteln, Zäpfchen, Lösungen, Suspensionen oder dergleichen an den Patienten verabreicht werden.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können oral verabreicht werden, beispielsweise mit einem inerten Verdünnungsmittel für Kapseln oder zu Tabletten verpresst werden. Zum Zweck der oralen therapeutischen Verabreichung können die Verbindungen mit Hilfsstoffen eingearbeitet werden und in Form von Tabletten, Dragees, Kapseln, Elixieren, Suspensionen, Sirupen, Obladen, Kaugummis und dergleichen verwendet werden. Diese Präparationen sollten mindestens 4% der erfindungsgemäßen Verbindung, dem Wirkstoff enthalten, aber dies kann in Abhängigkeit der bestimmten Form variieren und kann zwischen 4% bis etwa 70% des Gewichts der Einheit betragen. Die Menge der in den Zusammensetzungen vorhandenen Verbindung ist so groß, dass eine geeignete Dosierung erhalten wird. Bevorzugte Zusammensetzungen und Präparationen gemäß der vorliegenden Erfindung können durch den Fachmann bestimmt werden.
Die Tabletten, Pillen, Kapseln, Dragees und dergleichen können auch einen oder mehrere der folgenden Hilfsstoffe enthalten: Bindemittel, wie Povidon, Hydroxypropylcellulose, mikrokristalline Cellulose oder Gelatine, Hilfsstoffe oder Verdünnungsmittel wie: Stärke, Lactose, mikrokristalline Cellulose oder Dicalciumphosphat, Zerfallshilfsstoffe, wie: Croscarmellose, Crospovidon, Natriumstärkeglycolat, Maisstärke und dergleichen, Schmiermittel, wie: Magnesiumstearat, Stearinsäure, Talkum oder hydriertes Pflanzenöl: Gleitmittel, wie kolloidales Siliziumdioxid, Netzmittel, wie: Natriumlaurylsulfat und Polysorbat 80 und Süßstoffe, wie Saccharose, Aspartam oder Saccharin können zugegeben werden oder ein Geschmacksstoff, wie: Pfefferminze, Methylsalicylat oder Orangenaroma. Wenn die Dosierungsform eine Kapsel ist, kann sie zusätzlich zu Materialien des obigen Typs einen flüssigen Träger, wie Polyethylenglycol oder ein fettes Öl enthalten. Andere Einheitsdosierungsformen können andere verschiedene Materialien enthalten, die die physikalische Form der Dosierungseinheit modifizieren, wie beispielsweise als Beschichtungen. Daher können Tabletten oder Pillen mit Zucker, Hydroxypropylmethylcellulose, Polymethacrylaten oder anderen Beschichtungsmitteln beschichtet werden. Sirupe können zusätzlich zu den vorliegenden Verbindungen Saccharose als Süßstoff und bestimmte Konservierungsstoffe, Farbstoffe und Färbungen und Geschmacksstoffe enthalten. Materialien, die zur Herstellung dieser verschiedenen Zusammensetzungen verwendet werden, sollten pharmazeutisch rein und in den verwendeten Mengen nicht toxisch sein.
Die Verbindungen der Formel I sind im allgemeinen über einen weiten Dosierungsbereich wirksam. Beispielsweise fallen Tagesdosierungen normalerweise in den Bereich von etwa 0,0001 bis etwa 30 mg/kg Körpergewicht. In einigen Fällen können Dosierungsmengen, die unter der unteren Grenze des vorher erwähnten Bereichs liegen, passender sein, während in anderen Fällen höhere Dosen ohne eine Verursachung von schädlichen Nebenwirkungen verwendet werden können und daher soll der obige Dosierungsbereich den Umfang der Erfindung in keiner Weise beschränken. Es ist verständlich, dass die Menge an tatsächlich verabreichter Verbindung vom Arzt in Anbetracht der relevanten Umstände bestimmt wird, einschließlich des zu behandelnden Zustands, des gewählten Verabreichungswegs, der im einzelnen verabreichten Verbindung oder Verbindungen, dem Alter, dem Gewicht und der Reaktion des individuellen Patienten und der Schwere der Symptome des Patienten.

Claims

Verbindung der Formel I
worin W steht für
X für N(R⁴) oder S steht, R⁰ ist (a) ausgewählt aus der Gruppe, die besteht aus Wasserstoff, C₁-C₆ Alkyl, Cyano, C₁-C₄ Alkylen-R¹¹, 3-Hydroxyprop-2-yl, (1-Phenyl)-2-hydroxyeth-1-yl, (1-Cyclohexyl)-3-hydroxyprop-2-yl, 4-Methoxybenzyl, 1,4-Dioxoaspiro[4,5]dec-8-yl, Tetrahydropyran, 2,2,6,6-Tetramethylpiperidin-4-yl und Cyclohexan-1-on-4-yl, (b) Phenyl, das optional mit einem Substituenten substituiert ist, der aus der Gruppe ausgewählt ist, welche besteht aus Nitro und Amino, (c) Piperidin-4-yl, das optional mit einem Substituenten substituiert ist, der aus der Gruppe ausgewählt ist, welche besteht aus C₁-C₄ Alkyl, C₁-C₄ Alkoxycarbonyl und Benzyl oder (d) C₃-C₆ Cycloalkyl, das optional mit einem Substituenten substituiert ist, der aus der Gruppe ausgewählt ist, welche besteht aus C₁-C₄ Alkoxycarbonylamino, Amino, Hydroxy und C₁-C₄ Alkylen-OH, R¹ ist (a) ausgewählt aus der Gruppe, die besteht aus Wasserstoff, C₁-C₆ Alkyl, C₂-C₄ Alkinyl, Halogen, Amino, Azido, Formyl, 1-(C₁-C₄ Alkoxycarbonyl)ethen-2-yl, 1-(C₁-C₄ Alkoxycarbonyl)ethyl, 1-(C₁-C₄ Carboxy)ethyl, (C₁-C₄ Alkylen)benzyloxy, Trifluormethyl, Trimethylsilylethinyl, But-3-in-1-ol, C₃-C₆ Cycloalkyl, Tetrahydropyran-4-yl, Hydroxymethyl, 2-(Piperidin-1-yl)methyl, N,N',N'-[Trimethyl]-2-(aminoethylamino)methyl, (Morpholin-4-yl)methyl, Dimethylaminomethyl, N-[2-(Piperidin-1-yl)eth-1-yl]aminomethyl, N',N'-Dimethyl-2-(aminoethylamino)methyl, Pyridinyl, Thiazolyl, Triazolyl, Benzo(1,3)dioxolan-5-yl und Imidazol-2-yl, (b) Phenyl, das optional mit einem bis drei Substituenten substituiert ist, die unabhängig aus der Gruppe ausgewählt sind, die besteht aus C₁-C₄ Alkyl, Halogen, Nitro, Amino, C₁-C₄ Alkoxy, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Trifluormethylsulfanyl, Methylsulfonyl, Methylsulfonamidyl, Pyrrolidin-1-yl, Morpholin-4-yl, 4-(C₁-C₄ Alkyl)piperazin-1-yl, -NR⁶R⁷ und C₁-C₄ Alkoxy, das optional mit einem Substituenten substituiert ist, der aus der Gruppe ausgewählt ist, welche besteht aus Piperidin-1-yl, Pyrrolidin-1-yl, Morpholin-4-yl, Azepin-4-yl und Di(C₁-C₄ alkyl)amino, (c) Thienyl, das optional mit einem Substituenten substituiert ist, der aus der Gruppe ausgewählt ist, die besteht aus Halogen, Nitro, Amino und C₁-C₄ Alkyl oder (d) Piperidin-4-yl, das optional an der Position 1 aus der Gruppe substituiert ist, die aus C₁-C₄ Alkyl, C₁-C₄ Alkoxycarbonyl, Benzyloxycarbonyl und (C₁-C₄ Alkylen)-R⁸ besteht, wobei alternativ dazu R⁰ und R¹ unter Bildung einer vollkommen gesättigten C₃-C₄ Kohlenstoffkette oder einer vollkommen ungesättigten C₃-C₄ Kohlenstoffkette zusammengenommen werden können, die optional mit Halogen oder C₁-C₄ Alkyl substituiert ist, R² für Wasserstoff, C₁-C₄ Alkyl oder Benzyl steht, R³ für Thienyl oder Phenyl steht, das wahlweise mit einem bis zwei Substituenten substituiert ist, die unabhängig aus der Gruppe ausgewählt sind, welche besteht aus Halogen, C₁-C₄ Alkyl, C₁-C₄ Alkoxy und Trifluormethyl, R⁴ für Wasserstoff, (C₁-C₄ Alkyl)sulfonyl oder (C₃-C₆ Cycloalkyl)sulfonyl oder (C₁-C₄ Alkyl)₂-N-sulfonyl steht, R⁵ für Halogen, Wasserstoff oder -NR⁹R¹⁰ steht, R⁶ und R⁷ jeweils einzeln aus Wasserstoff, Carbonyl oder C₁-C₄ Alkyl ausgewählt sind, mit der Maßgabe, dass zumindest eines von R⁶ und R⁷ für Wasserstoff steht, R⁸ für Hydroxy, Trifluormethyl, Dimethylamino, Phenyl, Pyridinyl oder 1-Methylimidazol-2-yl steht, R⁹ jeweils unabhängig für Wasserstoff oder C₁-C₄ Alkyl steht, R¹⁰ für Wasserstoff, C₁-C₄ Alkyl oder Benzyl steht, R¹¹ für C₁-C₄ Alkoxy, Hydroxy, C₁-C₄ Alkoxycarbonyl, C₁-C₄ Alkoxycarbonylamino, C₃-C₆ Cycloalkyl, Phenyl, das optional mit einem oder zwei Substituenten substituiert ist, die unabhängig aus der Gruppe ausgewählt sind, die aus C₁-C₄ Alkoxy und Halogen besteht, für Morpholin-4-yl oder Pyridinyl steht, mit der Maßgabe, dass wenn W für
steht, dann folgendes gilt (a) zumindest eines von R⁰ und R¹ für Wasserstoff oder C₁-C₆ Alkyl steht, oder (b) R⁰ und R¹ unter Bildung einer vollkommen gesättigten C₃-C₄ Kohlenstoffkette oder einer vollkommen ungesättigten C₃-C₄ Kohlenstoffkette zusammen genommen werden können, die optional mit Halogen oder C₁-C₄ Alkyl substituiert ist, und ebenfalls mit der Maßgabe, dass wenn X für S steht, W dann steht für
oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder ein pharmazeutisch annehmbares Solvat hiervon.
Verbindung nach Anspruch 1, worin W steht für entweder
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 oder 2, worin X für N-(Isopropylsulfonyl) steht und R⁵ für -NH₂ steht.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 oder 2, worin R⁴ für tert-Butylsulfonyl steht.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, worin R¹ für tert-Butyl steht.
Verbindung nach Anspruch 1, die 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(2-(2,6-difluorphenyl)-5-(phenyl)imidazol-4-yl)benzimidazol oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder ein pharmazeutisch annehmbares Solvat hiervon ist.
Pharmazeutische Formulierung, die eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 6 und einen pharmazeutisch annehmbaren Träger, Verdünnungsmittel oder Hilfsstoff enthält.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 6 oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes hiervon zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Zuständen, die aus einer überschüssigen Cytokinbildung resultieren.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 6 oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes hiervon zur Herstellung eines Arzneimittels zur Hemmung des Wachstums eines empfindlichen Neoplasmas.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 6 oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes hiervon zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von rheumatoider Arthritis.