DE69230314T2

DE69230314T2 - Cytokinhemmer

Info

Publication number: DE69230314T2
Application number: DE69230314T
Authority: DE
Inventors: Alison Badger; Wanda High
Original assignee: Anormed Inc
Current assignee: Anormed Inc
Priority date: 1991-02-19
Filing date: 1992-02-18
Publication date: 2000-02-24
Anticipated expiration: 2012-02-19
Also published as: WO1992014462A1; ZA921120B; JPH06505483A; US5900430A; ES2138595T3; KR930702975A; DK0572537T3; GR3032612T3; EP0572537A4; AU657745B2; IE920508A1; EP0572537A1; EP0572537B1; JP3162071B2; AU1463392A; DE69230314D1; ATE186641T1; US5602166A; CA2104214A1; CA2104214C

Description

HINTERGRUND DER ERFINDUNG

Diese Erfindung betrifft die Herstellung eines Medikaments zur Verwendung in der Hemmung der Produktion von Zytokinen, insbesondere der Hemmung der Produktion von Interleukin-1 und der Hemmung der Produktion des Tumor-Nekrose- Faktors, bei einem Säuger, einschließlich eines Menschen.
Badger et al., US-Patentschrift Nr. 4.963.557, erteilt am 16. Oktober 1990, beschreiben Verbindungen der Formel
worin: n 3-7 ist; m 1 oder 2 ist; R&sub1; und R&sub2; gleich oder verschieden sind und gewählt sind aus Wasserstoff oder geradkettigem, verzweigtkettigem oder zyklischem Alkyl, vorausgesetzt, daß die Gesamtzahl der in R&sub1; und R&sub2; enthaltenen Kohlenstoffatome zusammengenommen 5-10 ist; oder R&sub1; und R&sub2; zusammengefügt sind zum Erhalt einer zyklischen Alkylgruppe mit 3-7 Kohlenstoffatomen; R&sub3; und R&sub4; gleich oder verschieden sind und gewählt sind aus Wasserstoff oder geradkettigem Alkyl mit 1-3 Kohlenstoffatomen; oder R&sub3; und R&sub4; mit dem Stickstoffatom zusammengefügt sind zum Erhalt einer heterozyklischen Gruppe mit 5-8 Atomen; oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz oder Hydrat oder Solvat davon. Badger et al., beschreiben auch, daß diese Verbindungen im Induzieren der Immunsuppression über eine Induktion der Suppressorzell-artigen Aktivität von Nutzen sind, basierend auf ihrer Aktivität im Adjuvans-induzierten Arthritistest bei Ratten und ihrer Aktivität im Suppressorzell- Assay. Der Adjuvans-induzierte Arthritistest ist zum Nachweis von Verbindungen nützlich, die Inhibitoren der Prostanoid-Synthese sind, doch von keinem Nutzen zum Beschreiben oder Vorschlagen von Verbindungen sind, die Inhibitoren der Zytokinproduktion sind, und insbesondere von Verbindungen, die Inhibitoren von lnterleukin-1 (IL-1) und/oder Tumor-Nekrose-Faktor (TNF) sind. Der Suppressorzell- Assay ist zum Nachweis immunsuppressiver Verbindungen nützlich, doch von keinem Nutzen zum Beschreiben oder Vorschlagen von Verbindungen, die Inhibitoren der Zytokinproduktion sind, insbesondere von Verbindungen, die Inhibitoren der IL-1 und/oder TNF-Produktion sind.
Bei Zytokinen handelt es sich um biologische Substanzen, die von einer Vielzahl von Zellen erzeugt werden, z. B. Monozyten oder Makrophagen. Zytokine nehmen auf eine breite Vielfalt von Zellen und Geweben Einfluß und sind wichtige und entscheidende Entzündungsmediatoren bei einer breiten Vielfalt von Erkrankungszuständen und Bedingungen. Die Hemmung dieser Zytokine ist zur Eindämmung, Linderung und Milderung vieler dieser Erkrankungszustände von Nutzen.

Zusammenfassung der Erfindung

Diese Erfindung betrifft die Herstellung von Medikamenten zur Verwendung in der Hemmung der Produktion von Interleukin-1 (IL-1) und der Hemmung der Produktion des Tumor-Nekrose-Faktors (TNF), bei einem Säuger, einschließlich eines Menschen, unter Verwendung einer wirksamen, die Zytokinproduktion hemmenden Menge einer Verbindung der Formel
worin:
n 3-7 ist;
m 1 oder 2 ist;
R&sub1; und R&sub2; gleich oder verschieden sind und gewählt sind aus Wasserstoff der geradkettigem, verzweigtkettigem oder zyklischem Alkyl, vorausgesetzt, daß die Gesamtzahl der in R&sub1; und R&sub2; enthaltenen Kohlenstoffatome zusammengenommen 5-10 ist; oder R&sub1; und R&sub2; zusammengefügt sind zum Erhalt einer zyklischen Alkylgruppe mit 3-7 Kohlenstoffatomen;
R&sub3; und R&sub4; gleich oder verschieden sind und gewählt sind aus Wasserstoff oder geradkettigem Alkyl mit 1-3 Kohlenstoffatomen; oder R&sub3; und R&sub4; mit dem Stickstoffatom zusammengefügt sind zum Erhalt einer heterozyklischen Gruppe mit 5-8 Atomen;
oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz oder Hydrat oder Solvat davon.
Die Entdeckung einer Verbindung, die die Zytokinproduktion hemmt, eröffnet einen therapeutischen Ansatz zur Behandlung von Erkrankungen, bei denen eine übermäßige oder unregulierte Zytokinproduktion impliziert ist.

Ausführliche Beschreibung der Erfindung

Die Herstellung aller Verbindungen der Formel (I) und deren pharmazeutisch geeigneter Salze, Hydrate und Solvate ist beschrieben in US-Patentschrift Nr. 4.963.557, erteilt an Badger et al. am 16. Oktober 1990, wobei diese gesamte Beschreibung hierin durch Bezugnahme mitaufgenommen ist.
Mit dem Begriff "Zytokin", wie hierin verwendet, ist jegliches sekretierte Polypeptid gemeint, das die Funktionen anderer Zellen beeinflußt und ein Molekül ist, das die Wechselwirkungen zwischen Zellen in der Immun- oder Entzündungsreaktion moduliert. Ein Zytokin umfaßt, ohne darauf beschränkt zu sein, Monokine und Lymphokine, und zwar unabhängig davon, welche Zellen sie produzieren. So wird beispielsweise allgemein auf ein Monokin als durch eine mononukleare Zelle, z. B. einen Makrophagen und/oder Monozyten, produziert und sekretiert Bezug genommen, doch produzieren auch viele andere Zellen Monokine, wie z. B. natürliche Killerzellen, Fibroplasten, Basophile, Neutrophile, Endothelzellen, Hirnastrozyten, Knochenmarkstromazellen, epidermale Keratinozyten und β- Lympozyten. Lymphokine werden allgemein als von Lymphozyt-Zellen produziert behandelt. Beispiele der Zytokine umfassen, ohne darauf beschränkt zu sein, Interleukin-1 (IL-1), Tumor-Nekrose-Faktor-Alpha (TNFα) und Tumor-Nekrose- Faktor-Beta (TNFß).
Mit dem Begriff "Zytokinproduktions-hemmende Menge" ist eine wirksame Menge einer Verbindung der Formel (I) gemeint, die, wenn zur prophylaktischen oder therapeutischen Behandlung eines Erkrankungszustandes verabreicht, der verschärft oder durch eine übermäßige oder unregulierte Zytokinproduktion verursacht ist, eine Abnahme der in vivo-Mengen des Zytokins auf normale oder subnormale Niveaus bewirkt.
Mit dem Begriff "Hemmung der Produktion von Zytokinen" ist gemeint:
a) eine Senkung übermäßiger in vivo-Zytokin-Mengen bei einem Säuger, einschließlich eines Menschen, auf normale Niveaus oder subnormale Niveaus durch Hemmung der in vivo-Freisetzung von Zytokinen aller Zellen, einschließlich, doch nicht beschränkt auf Monozyten oder Makrophagen;
b) eine Herabregulierung, auf der Ebene der Transkription oder Translation, übermäßiger in vivo-Zytokin-Mengen in einem Säuger, einschließlich eines Menschen, auf normale Niveaus oder subnormale Niveaus; oder
c) eine Herabregulierung durch Hemmung der direkten Synthese eines Zytokins als ein posttranslationales Ereignis.
Mit dem Begriff "Hemmung der Produktion von IL-1" ist gemeint:
a) eine Senkung übermäßiger in vivo-IL-1-Mengen bei einem Säuger, einschließlich eines Menschen, auf normale Niveaus oder subnormale Niveaus durch Hemmung der in vivo-Freisetzung von IL-1 aller Zellen, einschließlich, doch nicht beschränkt auf Monozyten oder Makrophagen;
b) eine Herabregulierung, auf der Ebene der Transkription oder Translation, übermäßiger in vivo-IL-1-Mengen in einem Säuger, einschließlich eines Menschen, auf normale Niveaus oder subnormale Niveaus; oder
c) eine Herabregulierung durch Hemmung der direkten Synthese von IL-1 als ein posttranslationales Ereignis.
Mit dem Begriff "Hemmung der Produktion von TNF" ist gemeint:
a) eine Senkung übermäßiger in vivo-TNF-Mengen in einem Säuger, einschließlich eines Menschen, auf normale Niveaus oder subnormale Niveaus, durch Hemmung der in vivo-Freisetzung von TNF aller Zellen, einschließlich, doch nicht beschränkt auf Monozyten oder Makrophagen;
b) eine Herabregulierung, auf der Ebene der Transkription oder Translation, übermäßiger in vivo-TNF-Mengen in einem Säuger, einschließlich eines Menschen, auf normale Niveaus oder subnormale Niveaus; oder
c) eine Herabregulierung durch Hemmung der direkten Synthese von TNF als ein posttranslationales Ereignis.
Da TNF-β (auch bekannt als Lymphotoxin) eine enge strukturelle Homologie mit TNF-α (auch bekannt als Cachectin) aufweist und da beide ähnliche biologische Reaktionen hervorrufen und an einen ähnlichen zellulären Rezeptor binden, werden sowohl TNF-α als auch TNF-β durch die Verbindungen der vorliegenden Erfindung gehemmt und werden deshalb hierin kollektiv als "TNFu bezeichnet, sofern nicht spezifisch anders gekennzeichnet.
Studien haben ergeben, daß TNF ein Serumglykoprotein ist und daß seine Aktivität mit Komponenten eines hohen Molekulargewichts assoziiert ist. Mäuse- und Kaninchen-TNF wurde isoliert, ebenso wie humane TNF, deren Sequenz in US- Patentschrift Nr. 4.879.226, erteilt am 7. November 1989, gelehrt wird. TNF wird als ein Prohormon synthetisiert und anschließend an verschiedenen Stellen zum Erhalt eines reifen Hormons gespalten. Obschon das aktive Polypeptid selbst aufgrund seiner früher berichteten anitneoplastischen Aktivität für die Behandlung von Tumoren ausgewertet wurde, ergab seine Verabreichung zahlreiche schwere toxische Wirkungen. Eine Überproduktion von TNF war ferner in der Pathogenese von Endotoxin/septischem Schock impliziert. Siehe z. B. Carswell et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 72, 3666-3670 (1975). Endotoxin umfaßt die Lipopolysaccharid- Komponente der Zellwand Gram-negativer Bakterien und ist ein Makrophagen- Aktivator, was die Synthese und Sekretion von Zytokinen und anderen biologisch aktiven Moleküle wie TNF induziert. Bei der Sepsis führt die TNF-Produktion zu Hypotonie, vaskulärer Endothelpermeabilität und Organschädigung, d. h. einigen der Folgen eines endotoxischen Schocks. Eine akute respiratorische Insuffizienz (adult respiratory distress syndrome -ARDS) ist häufig mit Sepsis und multiplem Organversagen verbunden, was zu der Vermutung geführt hat, daß TNF in der Pathogenese von ARDS eine Rolle spielt. Bei TNF handelt es sich auch um das für den Gewichtsverlust (Kachexie) verantwortliche Agens, wie mit chronischen katabolischen Erkrankungszuständen wie langfristigen parasitären und viralen Infektionen und mit bösartigen Geschwulsten einhergehend. Dieser Gewichtsverlust behindert die Genesung und kann sogar tödlich sein.
TNF scheint auch als ein Frühprodukt der Entzündungsreaktion eine Rolle zu spielen. Siehe z. B. Old, Nature, 330, 602-03 (1987). Es scheint außerdem so zu sein, daß unter den Zytokinen, während die TNF-Produktion vorangeht und die Funktion von IL-1 und anderen Zytokinen verstärkt, keine eindeutigen Daten darüber vorliegen, wie die Beziehung zwischen diesen Molekülen zum mit einer Entzündung verbundenen Erkrankungszustand beitragen. TNF aktiviert Makrophagen und erhöht deren zytotoxisches Potential in vitro. TNF wurde als für Monozyten chemotaktisch nachgewiesen, was annehmen läßt, daß die Produktion von TNF an geschädigten Stellen darauf abzielt, zusätzliche Makrophagen abzustellen und bereits vorhandene Makrophagen zu aktivieren.
Zu den verschiedenen Zuständen bei Säugern, für die TNF bei der Vermittlung oder Verstärkung impliziert ist, zählen rheumatoide Arthritis, Morbus Bechterew, Osteoarthrose, Gichtarthritis und andere arthritische Zustände; Sepsis, septischer Schock, endotoxischer Schock, Gram-negative Sepsis, toxisches Schocksyndrom, "adult respiratory distress syndrome", Malaria, Lungenentzündung, Knochenresorptions-Erkrankungen, Reperfusionsschäden, Transplantat-Wirt- Reaktion, Fieber und Myalgien aufgrund einer Infektion, wie etwa Grippe, Kachexie als Sekundärerkrankung auf eine Infektion oder Malignität hin, Kachexie als Sekundärerkrankung auf das erworbene Immundefektsyndrom (AIDS), AIDS, Keloidbildung, Narbengewebebildung, Crohn'-Krankheit, Colitis ulcerosa oder Pyrese.
Das humane erworbene Immundefektsyndrom (AIDS) resultiert aus einer Infektion der Lymphozyten, und vielleicht Makrophagen, mit dem "Human Immunodeficiency Virus" (HIV). Zumindest drei Typen oder Stämme des HIV wurden bisher identifiziert, d. h. HIV-1, HIV-2 und HIV-3. Als Folge der HIV-Infektion ist die T-Zell-vermittelte Immunität beeinträchtigt und zeigen infizierte Personen schwere opportunistische Infektionen und/oder ungewöhnliche Neoplasmen. Es besteht ein fortgesetzter Bedarf an Agentien, die zur Hemmung des Fortschreitens der Erkrankung bei einem bereits infizierten Menschen nützlich sind. TNF wurde in verschiedenen Rollen mit dem AIDS-Virus in Verbindung gebracht, wie unten beschrieben.
Clouse et al., J. Immunol., 142, 431 (1989) erörtern, daß durch aktivierte humane Monozyten sekretierte Monokine zu erhöhten Mengen der HIV-Expression bei einem chronisch infizierten humanen T-Zell-Klon führten. Das an diesem Prozeß beteiligte Monokin wurde als TNFα identifiziert.
Gowda et al., J. Immunol 142, 773 (1989) erörtern, daß die T-Zell-Aktivierung für den HIV-Eintritt und die HIV-abhängige Zelifusion erforderlich ist.
Zagury et al., Science, 231, 850 (1986) erörtern, daß die T-Zeli-Aktivierung für die HIV-Genexpression erforderlich ist.
Wright et al., J. Immunol 141, 99 (1988) erörtern, daß Monozyten aus HIVinfizierten Patienten große Mengen an TNFα und lnterleukin-1 (im folgenden IL-1) bei in vitro-Züchtung produzierten.
Beutler et al., Nature (London), 316, 552-554 (1985) erörtern die Rolle von TNFα bei Kachexie.
Chiebowski et al., Nutr. Cancer, 1, 85 (1985) erörtern HIV-assozierte Stadien von Kachexie und Muskeldegeneration.
Lahdevirta et al., The American J. Med., 85, 289 (1988) erörtern, daß TNFα in die HIV-assoziierten Stadien der Kachexie und Muskeldegeneration involviert ist.
Wright et al., J. Immunol., 141(1): 99-104 (1988) schlagen eine mögliche Rolle von TNF in der AIDS-Kachexie durch erhöhte Serum-TNF und höhere Mengen der spontanen TNF-Produktion in peripheren Blutmonozyten von Patienten vor.
Folks et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86: 2365-2368 (1989) schlagen vor, daß TNF in die Stimulation der viralen Replikation des latenten HIV in T-Zell- und Makrophagenlinien verwickelt ist, indem sie durch TNF ausgelöst werden kann. Osborn et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86: 2336-2340 (1989) schlagen vor, daß ein molekularer Mechanismus für die Virusinduzierte Aktivität von TNF auf die Fähigkeit von TNF zur Aktivierung eines Genregulator-Proteins (NF-kB) zurückzuführen ist, das im Zytoplasma von Zellen zu finden ist, die die HIV- Replikation durch Bindung an eine virale regulatorische Gensequenz (LTR) fördern. Yale University, Europäische Patentanmeldung, Veröffentlichungs-Nr. 0.230.574 A2, veröffentlicht am 6. August 1987, beansprucht ein Verfahren zur Herstellung pharmazeutischer Zusammensetzungen zur Behandlung von mit LAV/HTLV III-Virus infizierten Patienten, wobei diese Zusammensetzung eine Verbindung enthält, die die Produktion und/oder die Aktivität der von mononuklearen Zellen abgeleiteten zytotoxischen Faktoren, wie z. B. Lymphotoxin, Tumor-Nekrose-Faktor, Leukoregulin und den natürlichen Killerzell-zytotischen Faktor hemmt.
Aus obigen Literaturstellen wird gefolgert, daß Verbindungen, die die Produktion von TNF hemmen, eine therapeutische Wirkung bei der Behandlung des erworbenen Immundefektsyndroms (AIDS) und/oder der Behandlung von mit AIDS zusammenhängenden Komplikationen zeigen.
Es wurde gezeigt, daß lnterleukin-1 (IL-1) eine Vielzahl biologischer Aktivitäten vermittelt, die bei der Immunregulation und anderen physiologischen Bedingungen wie der Entzündung als wichtig erachtet werden [Siehe z. B. Dinarello et al., Rev. Infect Disease, 6, 51 (1984)]. Zu den unzähligen bekannten biologischen Aktivitäten des II-1 zählt die Aktivierung von T-Helferzellen, die Induktion von Fieber, die Stimulierung der Prostaglandin- oder Collagenase-Produktion, die neutrophile Chemotaxis, die Induktion von Akute-Phase-Proteinen und die Suppression der Eisenmengen im Plasma. Spezfisch gesagt gibt es verschiedene Erkrankungszustände, bei denen eine übermäßige oder unregulierte IL-1-Produktion durch Monozyten und/oder Makrophagen in der Verschärfung und/oder Verursachung der Erkrankung impliziert ist. Zu diesen zählen die rheumatoide Arthritis [Siehe z. B. Fontana et al., Arthritis Rheum 22, 49-53 (1982)]; Osteoarthrose [Siehe z. B. Wood et al., Arthritis Rheum. 26, 975 (1983)]; toxisches Schocksyndrom [Siehe z. B. lkejima und Dinarello, J. Leukocvte Biology, 37, 714 (1985)]; andere akute oder chronische entzündliche Erkrankungszustände, wie z. B. die durch Endotoxin hervorgerufene Entzündungsreaktion [Siehe z. B. Habicht und Beck, J. Leukocvte Biology, 37, 709 (1985)]; und weitere chronische entzündliche Erkrankungszustände wie Tuberkulose. [Siehe z. B. Chesque et al., J. Leukocyte Biolo, 37, 690 (1985)]. Benjamin et al., "Annual Reports in Medicinal Chemistiv, 20", Kapitel 18, Seiten 173-183 (1985), Academic Press, Inc., beschreiben, daß eine übermäßige IL-1-Produktion impliziert ist bei: psoriatischer Arthritis, Reiter'- Krankheit, rheumatoider Arthritis, Osteoarthrose, Gicht, posttraumatischer Arthrose, Rubella-Arthritis und akuter Synovitis.
Dinarello, J. Clinical Immunology, 5, (5), 287-297 (1985) gibt einen Überblick über die biologischen Aktivitäten, die dem IL-1 zugeschrieben wurden, welche Aktivitäten in Tabelle A zusammengefaßt sind.

TABELLE A

IL-1 zugeschriebene biologische Aktivitäten
Fieber (bei Kaninchen, Mäusen und Ratten)
Hypoferrämie
Hypozinkämie
Kuprämie
Erhöhte(r)
Blutneutrophile
hepatische Akute-Phase-Proteine
Knochenresorption, einschließlich: Osteoporose und Morbus Paget
Knorpelabbau
Muskelproteolyse
non-REM-Schlaf
Endothel-Prokoagulans
Chondrozytproteasen
Synovialcollagenase
Endotheliale Neutrophilen-Adhärenz
Neutrophilen-Degranulierung
Neutrophilen-Superoxid
Interferonproduktion
Wucherung von
Fibroplasten
Gliazellen
Mesangialzellen
Synovial-Fibroplasten
EBV-B-Zellinien
Chemotaxis von
Monozyten
Neutrophilen
Lymphozyten
Stimulierung von PGE&sub2; im
Hypothalamus
Cortex
Skelettmuskel
Haut-Fibroplast
Chondrozyt
Makrophagen/Monozyt
Endothel (PGl&sub2;)
Verminderte(r)
Leberalbumin-Synthese
Appetit
Hirnbindung von Opiolden
Verstärkung der
T-Zell-Antworten
B-Zell-Antworten
NK-Aktivität
IL-2-Produktion
Lymphokinproduktion.
Die Entdeckung einer Verbindung, die die IL-1-Produktion hemmt, eröffnet einen therapeutischen Zugang zu Erkrankungen, bei denen eine übermäßige oder unregulierte IL-1-Produktion impliziert ist.
Es wurde nun entdeckt, daß Verbindungen der Formel (I) und pharmazeutisch geeignete Salze oder Hydrate oder Solvate davon nützlich sind zur Hemmung der Zytokinproduktion bei Säugern, einschließlich des Menschen, bei denen eine solche Hemmung erforderlich ist.
Eine wirksame, die Zytokinproduktion hemmende Menge einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch geeigneten Salzes oder Hydrats oder Solvats davon ist zur prophylaktischen oder therapeutischen Behandlung eines jeden Erkrankungszustandes bei einem Säuger, einschließlich eines Menschen, nützlich, der durch eine übermäßige oder unregulierte Zytokinproduktion verschärft oder verursacht ist. Vorzugsweise sind die inhibierten Zytokine IL-1 oder TNF. Vorzugsweise ist der Erkrankungszustand gewählt aus: erhöhter Knochenresorption, endotoxischer Schock, Kachexie als Sekundärerkrankung auf das erworbene Immundefektsyndrom (AIDS) hin, AIDS oder Malaria. Besonders bevorzugt ist der Erkrankungszustand eine erhöhten Knochenresorption einschließlich Osteoporose und Morbus Paget.
Diese Erfindung betrifft ein Verfahren zur Hemmung der Produktion von Zytokinen, insbesondere zur Hemmung der Produktion von IL-1 und TNF, bei einem Säuger, einschließlich eines Menschen, der dessen bedarf, was die Verabreichung einer wirksamen, die Zytokinproduktion hemmenden Menge einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch geeigneten Salzes oder Hydrats oder Solvats davon umfaßt. Eine Verbindung der Formel (I) oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz oder Hydrat oder Solvat davon kann dem Säuger, einschließlich eines Menschen, in einer herkömmlichen Dosierungsform verabreicht werden, wie durch Kombinieren einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch geeigneten Salzes oder Hydrats oder Solvats davon mit einem herkömmlichen, pharmazeutisch geeigneten Träger oder Verdünnungsmittel gemäß bekannter Methoden hergestellt und beschrieben in Badger et al., US-Patentschrift Nr. 4.963.557, erteilt am 16. Oktober 1990.
Für einen Fachmann des Bereichs wird erkennbar sein, daß Form und Charakter des pharmazeutisch geeigneten Trägers oder Verdünnungsmittels durch die Menge an Wirkstoff, mit dem er kombiniert werden soll, dem Verabreichungsweg und anderen wohlbekannten Variablen vorgegeben ist. Eine Verbindung der Formel (I) oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz oder Hydrat oder Solvat davon wird einem Säuger, einschließlich eines Menschen, bei dem die Hemmung der Zytokinproduktion erforderlich ist, in ausreichender Menge zur Hemmung einer solchen übermäßigen Zytokinproduktion in dem Umfang verabreicht werden, daß sie auf normale Niveaus herabreguliert wird. Der Verabreichungsweg kann ein oraler, parenteraler oder topischer sein. Die Bezeichnung parenteral, wie hierin verwendet, umfaßt eine intravenöse, intramuskuläre, subkutane, intranasale, intrarektale, intravaginale oder intraperitoneale Verabreichung. Die subkutanen und intramuskulären Formen der parenteralen Verabreichung sind allgemein bevorzugt. Das tägliche orale Dosierungsschema beträgt vorzugsweise etwa 0,1 bis 1000 mg/Kilogramm Gesamtkörpergewicht. Das tägliche parenterale Dosierungsschema beträgt vorzugsweise etwa 0,1 bis 800 mg pro Kilogramm (kg) Gesamtkörpergewicht, am bevorzugtesten etwa 1 bis etwa 100 mg/kg. Das tägliche topische Dosierungsschema beträgt vorzugsweise etwa 1 mg bis etwa 100 mg pro Verabreichungsstelle. Von einem Fachmann der Bereichs wird erkannt werden, daß die optimale Menge und Plazierung der individuellen Dosen einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch geeigneten Salzes oder Hydrats oder Solvats davon durch die Natur und den Umfang des zu behandelnden Zustandes, der Form, dem Weg und der Stelle der Verabreichung, und darüber hinaus dem speziell zu behandelnden Patienten abhängen und daß solche Optima mittels herkömmlicher Methoden bestimmt werden können. Für einen Fachmann des Bereichs wird auch erkennbar sein, daß der optimale Behandlungsablauf, das heißt die Anzahl der Dosen einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch geeigneten Salzes oder Hydrats oder Solvats davon, verabreicht pro Tag über eine definierte Anzahl von Tagen hinweg, durch Fachleute des Bereichs unter Anwendung herkömmlicher Tests zur Bestimmung des Behandlungsablaufs ermittelt werden kann.
Ohne weitere Ausführung wird davon ausgegangen, daß ein Fachmann des Bereichs unter Anwendung der vorausgegangenen Beschreibung die vorliegende Erfindung in ihrem vollsten Umfang nutzen kann.
Wie hierin verwendet, bezieht sich der Begriff "Verbindung 1" auf eine Verbindung der Formel (I), worin Rund R&sub2; Propyl sind, R&sub3; und R&sub4; Methyl sind, m 1 ist und n 3 ist, die N,N-Dimethyl-8,8-dipropyl-2-azaspiro[4, 5]decan-2-propanamin ist.

MESSUNG DER IN VIVO-ZYTOKIN-AKTIVITÄT

Die Gehalte an TNF wurden unter Anwendung einer Modifikation des grundlegenden Sandwich-ELISA-Methode gemessen, wie beschrieben bei Winston et al., Current Protocols in Molecular Bioloay, S. 11.2.1, AUsubel et al., Hsg. (1987) John Wiley and Sons, New York, USA. Der ELISA verwendete einen Hamster-monoklonalen Anti- Maus-TNF (Genzyme, Boston, MA, USA) als deM Einfang-Antikörper und einen polyklonalen Kaninchen-Anti-Murin-TNF (Genzyme, Boston, MA, USA) als dem Nachweis-Antikörper. Die TNF-Gehalte in den Mäuseproben wurden aus der mit rekombinantem murinem TNF (Genzyme, Boston, MA, USA) erzeugten Standardkurve errechnet. Die mittels ELISA bestimmten TNF-Gehalte korrelierten mit den durch den L929-Bioassay von Ruff et al., J. Immunol. 125: 1671-1677 (1980) nachgewiesenen Gehalten, wobei 1 Einheit Aktivität im Bioassay 70 Pikogramm (pg) TNF im ELISA entsprach. Der ELISA wies Gehalte an TNF bis hinunter zu 25 pg/ml nach.
Mit Lipopolysacchariden stimulierte Makrophagen aus Adjuvans-induziert arthritischen Ratten, behandelt mit Verbindung 1, produzierten 50% weniger TNF als die unbehandelten Kontrollen.
Die Gehalte an II-1 wurden unter Anwendung der bei Simon, P. L. et al., J. Immunol. Methods 84: 85-94, 1985, beschriebenen Methode gemessen. Diese Methode basiert auf der Produktion von Interleukin-2 aus der EL-4-murinen T-Zellymphom-Zellinie in Gegenwart von 2-5 · 10&supmin;&sup7; M Calcium-Ionophor A23187.
Verbindung 1 ergab eine positive in vivo-Reaktion in Form einer etwa 75%igen Verminderung der Gehalte an IL-1 im obigen Assay.

Claims

1. Verwendung einer Verbindung der Formel (I)

worin:

n 3-7 ist;

m 1 oder 2 ist;

R&sub1; und R&sub2; gleich oder verschieden sind und gewählt sind aus Wasserstoff oder geradkettigem, verzweigtkettigem oder zyklischem Alkyl, vorausgesetzt, daß die Gesamtzahl der in R, und R&sub2; enthaltenen Kohlenstoffatome zusammengenommen 5-10 ist; oder R&sub1; und R&sub2; zusammengefügt sind zum Erhalt einer zyklischen Alkylgruppe mit 3-7 Kohlenstoffatomen;

R&sub3; und R&sub4; gleich oder verschieden sind und gewählt sind aus Wasserstoff oder geradkettigem Alkyl mit 1-3 Kohlenstoffatomen; oder R&sub3; und R&sub4; mit dem Stickstoff zusammengefügt sind zum Erhalt einer heterozyklischen Gruppe mit 5-8 Atomen;

oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz oder Hydrat oder Solvat davon; in der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei der Hemmung der Produktion von Cytokinen in einem Säuger, einschließlich des Menschen.

2. Verwendung nach Anspruch 1, wobei die Verbindung N,N-Dimethyl-8,8-dipropyl- 2-azaspiro[4,5]decan-2-propanamindihydrochlorid ist.

3. Verwendung nach Anspruch 1, wobei die Verbindung N,N-Diethyl-8,8-dipropyl-2- azaspiro[4,5]decan-2-propanamindihydrochlorid ist.

4. Verwendung nach Anspruch 1, wobei die Verbindung oral verabreicht wird.

5. Verwendung nach Anspruch 4, wobei etwa 1 bis etwa 2000 mg der Verbindung pro Tag verabreicht werden.

6. Verwendung nach Anspruch 1, wobei die Verbindung parenteral verabreicht wird.

7. Verwendung nach Anspruch 1, wobei die Verbindung N,N-Diethyl-8,8-dipropyl-2- azaspiro[4,5]decan-2-propanamin ist; oder ein pharmazeutisch geeignetes Salz oder Hydrat oder Solvat davon.

8. Verwendung nach Anspruch 1, wobei der Säuger an einer Knochenresorptions- Erkrankung leidet.

9. Verwendung nach Anspruch 1, wobei die Knochenresorptions-Erkrankung Osteoporose ist.

10. Verwendung nach Anspruch 1, wobei die gewünschte therapeutische Wirkung die Hemmung der Prostaglandin-Produktion ist.