DE69522012T2 - Karzinombehandlung - Google Patents

Description

• Diese Erfindung bezieht sich hauptsächlich auf Karzinombehandlung und bezieht sich insbesondere auf die Behandlung von Karzinomen in Epithelzellsystemen, obwohl die gegenwärtige Erfindung in ihrem breitesten Aspekt sich allgemein auf die Verhütung von Epithelzellproliferation bezieht.
• Es ist bekannt, Karzinome in Epithelzellsystemen unter Verwenden von anti-neoplastischen Mitteln zu behandeln, die Apoptosis induzieren sollen. Beispiele derartiger Mittel umfassen Cytokine und Wachstumsfaktoren, wie Transformationswachstumsfaktor β&sub1; (TGF-β&sub1;), anti-Fas und Tumornekrosisfaktorα (TNF-α) und andere antineoplastische Mittei, wie Interferon-γ (IFN-γ), Cisplatin, Mitomycin C, Cyclophosphamid, Actinomycin D, Doxorubicin, Vincristin, Etoposid, 5-Fluoruracil, Methotrexat und Bestrahlungsmittel. Jedoch besteht ein andauerndes Verlangen nach anderen Arzneimitteln zur Behandlung von Karzinomen in Epithelzellsystemen und/oder zum Erhöhen der Wirkung von bestehenden antineoplastischen Mitteln.
• EP-A-0585943 offenbart die Verwendung von löslichem gp39 (ein CD40 Rezeptorligand) zusammen mit costimuüerenden Mitteln unter Fördern der Proliferation von B-Zellen, wo beispielsweise derartige Proliferation bei der Behandlung von Bedingungen, die aus einer erhöhten Immunreaktion Nutzen ziehen, wünschenswert sein kann.
• In einem ersten Aspekt beruht die gegenwärtige Erfindung auf der Verwendung eines CD40 Rezeptorbindemittels für die Herstellung eines Arzneimittels für die Verhütung von Epithelzellproliferation oder für die Behandlung von Karzinomen in Epithelzellsystemen.
• In einem zweiten Aspekt beruht die gegenwärtige Erfindung auf der Verwendung eines CD40 Rezeptorbindemittels bei der Herstellung eines Arzneimittels zum Erhöhen der Suszeptibilität von neoplastischen Epithelzellen gegenüber anti-neoplastischer Arzneimittel induzierter Apoptosis.
• In einem dritten Aspekt beruht die gegenwärtige Erfindung auf der Verwendung eines CD40 Rezeptorbindemittels in Kombination mit einem CD40 Inducer für die Verhütung von Epithelzellproliferation oder für die Behandlung von Karzinomen in Epithelzellsystemen.
• In einem vierten Aspekt beruht die gegenwärtige Erfindung auf der Verwendung eines CD40 Rezeptorbindemittels in Kombination mit einem anti-neoplastischen Arzneimittel für die Behandlung von Karzinomen in Epithelzellsystemen.
• In einem fünften Aspekt beruht die gegenwärtige Erfindung auf einem Verfahren zum Verhüten von Epithelzellproliferation, umfassend Verabreichen eines CD40 Rezeptorbindemittels an einen menschlichen oder tierischen Patienten.
• In einem sechsten Aspekt beruht die gegenwärtige Erfindung auf einem Verfahren zum Behandeln eines Epithelzellkarzinoms in einem menschlichen oder tierischen Patienten, umfassend Verabreichen eines CD40 Rezeptorbindemittels an den Patienten.
• Vorzugsweise wird derartige Verabreichung in Verbindung mit Verabreichung von mindestens einem anti-neoplastischen Mittel und/oder einem CD40 Inducer bewirkt.
• Das anti-neoplastische Mittel kann aus bekannten Cytokinen und Wachstumsfaktoren, wie beispielsweise Transformationswachstumsfaktor β&sub1; (TGF-β&sub1;), anti-Fas und Tumornekrosisfaktor-α (TNF- α) und anderen bekannten antineoplastischen Mitteln, wie Interferon-γ (IFN-γ), Cisplatin, Mitomycin C, Cyclophosphamid, Actinomycin D, Doxorubicin, Vincristin, Etoposid, 5-Fluoruracil, Methotrexat und Bestrahlungsmitteln ausgewählt sein. Derartiges anti-neoplastische Mittel wird normalerweise in einer Dosisrate, übereinstimmend mit der für jenes besondere Mittel empfohlenen, verwendet.
• Der CD40 Inducer kann Interferon-γ (IFNγ), Tumomecrosisfaktor-α (TNF-α) oder irgendein anderer bekannter Inducer von CD40 Expression sein. Derartiger CD40 Inducer wird normalerweise in einer Dosisrate verwendet, die mit der für jenen besonderen Inducer empfohlenen übereinstimmend ist.
• CD40 ist ein 50-kDa Typ 1 Glycoprotein, zu der Nervenwachstumsfaktorrezeptor/Tumornekrosisfaktorrezeptor (NGF-R/TNF-R) Familie gehörend, und wird auf der Oberfläche von B-Lymphozyten exprimiert (siehe Noelle et al., Immunol. Today, 13, 431-433, 1992; und Smith et al., Cell, 76, 959-962, 1994). Für sowohl normale wie neoplastische B Zellen, geneigt, in Apoptosis einzutreten oder getrieben zu werden, liefert Ligasierung von CD40 ein potentes Rettungs(Überlebens)signal, das teilweise durch die Hochregulierung von Bcl-2 Expression (siehe Liu et al., Nature, 342, 929-931, 1989) vermittelt wird. Diese Wirkung wurde anfänglich unter Verwenden von Ligand mimetischen monoklonalen Antikörpern (mAb) gezeigt und kürzlich mit rekombinantem Liganden (CD40L) (siehe Noelle et al., supra) bestätigt.
• Es ist auch bekannt, daß Expression von sowohl CD40 wie Bcl-2 in normalen, basalen Epithelzellen und in einer Zähl von verschiedenen Karzinomen auftritt, einschließlich derjenigen des Ovariums, Nasenrachenraums, Lunge und Brust (siehe Young et al., Int. J. Cancer, 43, 786-794, 1989; und Hockenbery et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, 6961-6965, 1991). Diese Untersuchungen schlagen vor, daß der CD40 Weg in Karzinomen aktiv sein kann, und daß die sich ergebende Expression von Bcl-2 diese Tumoren vor apoptotischen Zelltod schützen kann, einschließlich demjenigen, der durch die zytotoxischen Arzneimittel induziert wird, die in herkömmlicher Krebschemotherapie verwendet werden (siehe Dive et al., Semin. Cancer Biol., 3, 417-427, 1992). Ferner gibt die beschränkte Expression von CD40 und Bcl-2 gegenüber dem basalen Vermehrungsraum von geschichtetem, schuppigem Epithel eine mögliche Rolle für diesen Weg beim Regulieren von normalem Wachstum und dem apoptotischen Verfahren von Epitheldifferenzierung an.
• Im Hinblick auf das zuvor Angeführte war es überraschend, festzustellen, daß im Unterschied zu den Untersuchungen in B Zellen CD40 Stimulierung in Epithelzellen von entweder normalem oder neoplastischem Ursprung zu Wachstumshemmung und erhöhter Suszeptibilität gegenüber durch antineoplastisches Mittel-induzierter Apoptosis führt.
• Als Beispiele von CD40 Bindemitteln können Ligand-mimetische monoklonale Antikörper, beispielsweise G28,5 (ein unter der Hinterlegungsnummer HB-9110 von der American Type Tissue Culture Collection, Rockville, Maryland, USA verfügbares Hybridom), S2C6 (wie von Paulie et al. Cancer Immunology and Immunotherapy, 20, 23-28,1985 offenbart) und natürlich vorkommende oder entwickelte Formen von CD40 Liganden verwendet werden, von denen CD40L ein Beipiel ist. CD40L ist ein integrales Membranprotein vom 39-kDa Typ II mit Homologie gegenüber TNF, das auf T Zellen induziert werden kann folgend ihrer Aktivierung über den T Zell Rezeptor (siehe Clark & Ledbetter, Nature, 367, 425-428, 1994). Das CD40-CD40L Paar sind Teil einer sich ausdehnenden Familie von sich in Wechselwirkung befindenden Rezeptor-Ligand Molekülen, basierend auf den TNF-R/TNF Familien, die in Zellaktivierung und Regulierung von Apoptosis in Zielzellen verwickelt sind (Smith et al., supra).
• Die CD40 Bindemittel können durch intravenöse, subkutane oder intraperitoneale Injektion oder Infusion oder durch direkte Injektion in die Tumorstelle in gereinigter oder humanisierter Form verabreicht S werden. Die Dosisrate für das CD40 in Abhängigkeit davon, ob es ein monolklonaler Antikörper oder CD40L ist, kann in dem Mikrogramm zu Milligramm Bereich liegen.
• Pharmazeutisch geeignete Träger (Verdünnungsmittel, Vehikel, etc.), die mit dem CD40 Bindemittel verwendet werden, können aus irgendeinem der bekannten Trälger für diese Arten von Arzneimittel ausgewählt werden und hängen unter anderem von der Verabreichungsart ab. Beipielsweise kann zum Herstellen einer injizierbaren Zusammensetzung der Träger aus einfachen Herstellungen, wie beispielsweise Phosphat gepufferte physiologische Kochsalzlösung, enthaltend Humanserumalbumin, bis komplexere Lösungen, wie Zellkulturmedien, ausgewählt sein.
• Die gegenwärtige Erfindung wird jetzt in weiterem Detail in den folgenden Beispielen und unter Bezugnahme auf die Begleitfiguren beschrieben, in denen:
• Fig. 1 ist ein Diagramm, das die Wirkung von 48 Stunden Behandlung mit anti-CD40 mAb G28,S auf das Wachstum von Ovariumkarzinomzelllinie A2780 zeigt; wobei die Daten den Durchschnitt aus Dreifachbestimmungen von drei unabhängigen Experimenten zeigen und dargestellt sind als % Abnahme an Überleben relativ zu unbehandelten Kontrollen,
• Fig. 2 ist ein Diagramm, das zeigt, daß Vorinkubation von 2780CP Zelllinie mit 150 E/ml IFN-γ für 24 h eine 26% Abnahme an Zellwachstum in der Anwesenheit von 2 ug/ml G28,5 mAb induziert,
• Fig. 3 ist ein Diagramm, das die Wirkung von Zeit und Konzentration von G28,5 mAb auf das Zellwachstum einer EJ Blasenkarzinomzelllinie zeigt,
• Fig. 4 ist ein Diagramm, das die Wirkung von anti-CD40 mAb auf das Wachstum von Ratten- 1/CD40 Transfektante (C1.8) zeigt,
• Fig. 5 ist ein Diagramm, das die Verstärkung von Zytotoxizität durch die Kombination von G28,5 mAb und 5 uM Cisplatin in der Ovariumkarzinomzelllinie A2780 zeigt, wobei Zytotoxizität in einem 48 Stunden MTT Assay gemessen wird, wobei die Daten den Durchschnitt aus Dreifachbestimmungen von drei unabhängigen Experimenten zeigen und als % Überlebensabnahme relativ zu unbehandelten Kontrollen dargestellt sind,
• Fig. 6 ist ein Diagramm, das die Erhöhung von Cisplatin induzierter Zytotoxizität in einer EJ Blasenkarzinomzelllinie durch Inkubation 48 Stunden lang mit 2 ug/ml G28,5 mAb zeigt,
• Fig. 7 ist ein Diagramm, das die Wirkung der Inkubation von Ratten-1/CD40 C1.8 Zellen mit 1 ug/ml G28,5 mAb auf verschiedene Konzentrationen von Cisplatin zeigt, wobei die Daten den Durchschnitt aus Dreifachbestimmungen von drei unabhängigen Experimenten darstellen,
• Fig. 8 ist ein Diagramm, das die Wirkung von 48 Stunden Behandlung mit CD40L auf das Wachstum der Ovariumkarzinomzelllinie A2780 zeigt, wobei die Daten den Durchschnitt aus Dreifachbestimmungen von drei unabhängigen Experimenten darstellen und als % Abnahme an Überleben relativ zu unbehandelten Kontrollen gezeigt sind,
• Fig. 9 ist ein Diagramm, das die Wirkung von Zeit und Konzentration von CD40L auf das Zellwachstum einer EJ Blasenadenokarzinomzelllinie zeigt,
• Fig. 10 ist ein Diagramm, das die Wirkung von CD40L auf das Wachstum einer Ratten-1/CD40 Transfektante (C1.8) zeigt,
• Fig. 11 ist ein Diagramm, das die Erhöhung von Cisplatin induzierter Zytotoxizität in der EJ Blasenkarzinomzelllinie durch 48 Stunden Inkubation mit 100 E/ml CD40L zeigt.
BEISPIEL 1 ZELLKULTUR
• Eine Humanovariumkarzinomzelllinie A2780 und Cisplatin-resistentes Derivat 2780CP (siehe Masuda et al., Cancer Res., 50, 1863-1866, 1990), eine EJ Blasenkarzinomzelllinie (Hinterlegungsnummer 85061108, European Collection of Animal Cell Cultures, Porton Down, UK) und Ratten-1 Fibroblasten (Lania et al., Virology, 101, 217-232, 1980) wurden kontinuierlich in RPMI 1640 Medium (GIBCOBRL, Life Technologies Ltd., Paisley, Schottland), ergänzt mit 10% FCS (fötales Kalbsserum - ICN Flow, Thane, Oxfordshire, England), 2 mM Glutamin und den Antibiotika Penicillin (1000 E/ml) und Streptomycin (1 mg/ml) (Sigma Co. Ltd., Poole, Dorset, England) bei 37ºC in einer 5% CO&sub2; Atmosphäre gehalten.
• Ratten-1 Fibroblasten, die CD40 exprimieren, wurden durch Elektroporation des CD40 Expressionsvektors (unter Verfolgen des von Stamenkovic et al., EMBO J., 8, 1403-1410, 1989 beschriebenen Verfahrens) mit einem geeigneten Arzneimittel resistentem Plasmid, pUC LTR neo, bei einem Verhältnis von 10 : 1 erzeugt. Stabile Transfektanten von Ratten 1 Zellen, die CD40 exprimieren, wurden nach verlängertem Geneticin G418 Antibiotikum Aussetzen isoliert, wobei zu dieser Zeit individuelle Kolonien von Arzneimittel resistenten Zellen geerntet und getrennt als individuelle Kolonien kultiviert wurden. Beispiele derartiger Transfektanten sind unter den Bedingungen des Budapester Vertrages mit European Collection of Cell Cultures, Centre for Applied Microbiology and Research, Salisbury, Wiltshire SP4 OJG, Great Britain, am 10. November 1995 unter der Hinterlegungsnummer 951110100 hinterlegt worden.
• Expression des CD40 in den zuvor genannten Zelllinien wurde mit FACS Analyse unter Verwenden des anti-CD40 Antikörpers, G28,5 mAb, bestätigt. Kürz, Zellen wurden nach Trypsinierung geerntet, in Phosphat gepufferter physiologischer Kochsalzlösung (PBS) gewaschen und in 0,5 ug/ml G28,5 mAb resuspendiert. Nach 1 Stunde Inkubation bei 4ºC wurden die Zellen in PBS gewaschen und in 150 Verdünnung von FITC-konjugiertem Ziegen anti-Maus IgG (Sigma Chemical Co. Ltd., Poole, Dorset, England) resuspendiert. Nach einer weiteren 30 Minuten Inkubation bei 4ºC wurden die Zellen gewaschen und letztendlich in 1% Paraformaldehyd vor Standard FACS Analyse resuspendiert.
BEHANDLUNG VON ZELLEN UND ASSAY FÜR ZELLWACHSTUM
• Inhibierung von Zellproliferation wurde unter Verwenden des Kolorimetrieassays von Mossman (siehe Mossman, J. Immunol. Meth., 65, 55-63, 1983) bewertet. In Kürze, Zellen wurden auf einer Platte mit 96 Vertiefungen über Nacht plattiert, in den normalen Zellzyklus einzutreten. Verschiedene Konzentrationen von G28,5 mAb wurden dann hinzugegeben, und ihre Wirkung auf Zellwachstum wurde nach einer angemessenen Zeitperiode (48, 72 oder 96 Stunden) durch die Zugabe von 20 ul 5 mg/ml (MTT (3-(4,4-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid), erhalten von Sigma, in PBS untersucht. Die Zellen wurden ferner 5 Stunden bei 37ºC inkubiert, auf diese Weise gebildete Formazan Kristalle wurden in DMSO gelöst, und die optische Dichte (O. D.) wurde bei 550 nm auf einem Becton Dickinson Multiscan aufgezeichnet. In einer weiteren Serie von Experimenten wurden Zellen 2 Stunden lang mit verschiedenen Cisplatin-Konzentrationen mit oder ohne G28,5 mAb behandelt. Die Zellen wurden dann zweimal in PBS und 200 ul frischem Medium, enthaltend G28,5 mAb, gewaschen. Nach 48 Stunden wurde Zellwachstum unter Verwenden des MTT Assays, wie zuvor beschrieben, untersucht.
WIRKUNG VON ANTI-CD40 mAb AUF KARZINOMZELLWACHSTUM
• Die Wirkung des anti-CD40 mAb G28,5 auf das Zellwachstum der A2780, 2780CP und EJ Karzinomzelllinien wie auch eine CD40 Ratten-1 Transfektante (Ratten-1/CD40 C1.8) wurde untersucht. G28,5 mAb bei der optimalen Konzentration von 10 ug/ml induzierte eine 29% Abnahme an Überleben der Ovarium A2780 Zelllinie relativ zur Kontrolle nach 48 Stunden Behandlung (Fig. 1).
• Als die Cisplatin-resistente 2780CP Zelllinie unter ähnlichen Bedingungen mit G28,5 mAb behandelt wurde, wurde keine Wirkung beobachtet. Dieses beruhte wahrscheinlich auf dem geringen Spiegel von CD40 Expression in dieser Zelllinie. Jedoch induzierte Behandlung der 2780CP Zelllinie mit 150 E/ml Interferon-γ (IFNγ) 24 Stunden lang und anschließende Inkubation mit 10 ug/ml G28,5 eine annähernd 22% Abnahme an Überleben, übereinstimmend mit der Induktion von CD40 durch IFNγ (Fig. 2). Ähnliche Wirkungen von CD40 Aktivierung wurden mit EJ Blasenkarzinomzelllinie (Fig. 3) beobachtet. Die Wirkung von G28,5 mAb auf die EJ Zelllinie ist sowohl von Zeit wie Konzentration abhängig, mit maximaler Wirkung bei 96 Stunden, wo Behandlung mit 2 ug/ml G28,5 eine 27% Abnahme an Überleben induzierte (Fig. 3).
• Die Spezifität der CD40 Wirkung wurde unter Verwenden von Ratten-1 Fibroblasten, die ein transfektioniertes CD40 exprimieren, untersucht. Wie in Fig. 4 gezeigt, inhibiente Stimulierung von CD40 durch das G28,4 mAb Zellwachstum. In der untersuchten Transfektante (Klon 8) induziert Inkubation 48 Stunden lang mit 2 ug/ml G28,5 mAb eine 22% Abnahme an Zellwachstum (Fig. 4).
ERHÖHUNG VON CISPLATIN-INDUZIERTEM ZELLTOD DURCH CD40 AKTIVIERUNG
• Behandlung der zuvor angegebenen Zelllinien mit G28,5 mAb erhöhte die zytotoxische Wirkung von Anti-Krebs Arzneimitteln wie Cisplatin. In der A2780 Zelllinie erhöhte Aussetzen gegen 10 ug/ml G28,5 mAb die Zelltötungswirkung von 5 uM Cisplatin von 46% auf 61% (Fig. 5), das einen statistisch wirksamen Effekt darstellt. Ähnliche Eregbnisse wurden mit der EJ Linie, behandelt mit 5 uM Cisplatin in der Anwesenheit von 2 ug/ml G28,5 mAb, erhalten (Fig. 6).
• Behandlung der Ratten-1/CD40 C1.8 Zelllinie mit 1 ug/ml G28,5 mAb erhöhte auch die zytotoxische Wirkung von Cisplatin durch Verschieben des ICSO Wertes von 6 uM (+/-0,9) auf 4,2 uM (+/- 0,3), einen 1,6-1,8 fachen Anstieg an Arzneimittelempfindlichkeit (Fig. 7) darstellend. Keine Wirkung wurde in parenteralen nicht transfektionierten Ratten-1 Zellen festgestellt.
BEISPIEL 2 ZELLKULTUR
• Die hier zuvor in Beispiel 1 beschriebenen Zellkulturtechniken wurden verwendet.
BEHANDLUNG VON ZELLEN UND ASSAY FÜR ZELLWACHSTUM
• Inhibierung von Zellproliferation wurde unter Verwenden des Kolorimetrieassays von Mossman (Mossman, J. Immunol. Meth. 65, 55-63, 1983) untersucht. In Kürze, Zellen wurden auf einer Platte mit 96 Vertiefungen über Nacht plattiert unter Eintreten in normalen Zellzyklus. Verschiedene Konzentrationen von CD40L (eine verarbeitete lösliche Form eines CD40 Bindungsliganden (Inimunex Research and Development Corporation, 51 University Street, Seattle, Washington, USA) wurden dann hinzugegeben, und ihre Wirkung auf Zellwachstum wurde nach der angemessenen Zeitdauer (48, 72 oder 96 Stunden) durch die Zugabe von 20 ul 5 mg/ml MTT (3-(4,4-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid), erhalten von Sigma, in PBS untersucht. Die Zellen wurden ferner 5 Stunden lang bei 37ºC inkubiert, auf diese Weise gebildete Formazan Kristalle wurden in DMSO gelöst, und die optische Dichte (O. D) wurde bei 550 nm auf einem Becton Dickinson Multiscan aufgezeichnet. In einer anderem Serie von Experimenten wurden Zellen 2 Stunden lang mit verschiedenen Cisplatin Konzentrationen mit oder ohne CD40L behandelt. Die Zellen wurden dann zweimal in PBS und 200 ul frischem Medium, enthaltend CD40L, gewaschen. Nach 48 Stunden wurde Zellwachstum unter Verwenden des MTT Assays, wie zuvor beschrieben, untersucht.
WIRKUNG VON CD40L AUF KARZINOMZELLWACHSTUM
• Die Wirkung des CD40L auf das Zellwachstum der A2780, 2780CP und EJ Karzinomzelllinien wie auch einer CD40 Ratten-1 Transfektante (Ratte-1/CD40 C1.8) wurde untersucht. 100 E/ml von CD40L induzierte eine 36% Abnahme an Überleben der Eierstock A2780 Zellinie relativ zur Kontrolle nach 48 Stunden Behandlung (Fig. 8). Die Wirkung von CD40L auf die EJ Zelllinie ist sowohl von Zeit wie Konzentration abhängig mit maximaler Wirkung bei 96 Stunden, wo Behandlung mit 100 E/ml CD40L eine 43% Abnahme an Überleben induzierte (Fig. 9).
• Die Spezifität der CD40 Wirkung wurde unter Verwenden von Ratten-1 Fibroblasten, die ein transfektioniertes CD40 exprimieren, untersucht. Wie in Fig. 10 gezeigt, inhibierte Stimulierung von CD40 durch CD40L Zellwachstum. Bei der untersuchten Transfektante (Klon 8) induzierte Inkubation 48 Stunden lang mit 100 E/ml CD40L eine 28% Abnahme (Fig. 10).
ERHÖHUNG VON CISPLATIN-INDUZIERTEM ZELLTOD DURCH CD40 AKTIVIERUNG
• Behandlung der EJ Karzinomzelllinie mit 7,5 um Cisplatin in der Anwesenheit von 100 E/ml CD40L zeigte Erhöhung von Zelltod (Fig. 11).

Claims (10)

1. Verwendung eines CD40 Rezeptorbindemittels für die Herstellung eines Arzneimittels für die Verhütung von Epithelzellproliferation.

2. Verwendung eines CD40 Rezeptorbindemittels für die Herstellung eines Arzneimittels für die Behandlung von Karzinomen in Epithelzellsystemen.

3. Verwendung nach Anspruch 1 oder Anspruch 2 in Kombination mit einem CD40 Inducer.

4. Verwendung nach Anspruch 3, wobei der CD40 Inducer aus der Gruppe, bestehend aus IFN-γ und TNF-α, ausgewählt ist.

5. Verwendung eines CD40 Rezeptorbindemittels bei der Herstellung eines Arzneimittels zum Erhöhen der Suszeptibilität von neoplastischen Epithelzellen gegenüber durch anti-neoplastisches Arzneimittel induzierter Apoptosis.

6. Verwendung nach Anspruch 2 oder Anspruch 5 in Kombination mit einem anti-neoplastischen Mittel.

7. Verwendung eines CD40 Rezeptorbindemittels bei der Herstellung eines Arzneimittels zum Erhöhen der Suszeptibilität von neoplastischen Epithelzellen, die Resistenz gegenüber einem antineoplastischen Mittel, gegenüber durch anti-neoplastisches Arzneimittel induzierter Apoptosis, in Kombination mit dem anti-neoplastischen Mittel zeigen.

8. Verwendung nach Anspruch 6 oder Anspruch 7, wobei das anti-neoplastische Mittel aus der Gruppe, bestehend aus Transformationswachstumsfaktor β&sub1;, anti-Fas, Tumornekrosis Faktor-α, Interferon- γ, Cisplatin, Mitomycin C, Cyclophosphamid, Actinomycin D, Doxorubicin, Vincristin, Etoposid, 5- Fluoruracil und Methotrexat, ausgewählt ist.

9. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das CD40 Rezeptorbindemittel aus Ligand mimetischen monoklonalen Antikörpern und natürlich vorkommenden oder entwickelten Formen von CD40 Liganden ausgewählt ist.

10. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das CD40 Rezeptorbindemittel aus G28.5 (ATCC HB-9110) und CD40L ausgewählt ist.